BE1004457A3 - Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. - Google Patents
Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. Download PDFInfo
- Publication number
- BE1004457A3 BE1004457A3 BE9100117A BE9100117A BE1004457A3 BE 1004457 A3 BE1004457 A3 BE 1004457A3 BE 9100117 A BE9100117 A BE 9100117A BE 9100117 A BE9100117 A BE 9100117A BE 1004457 A3 BE1004457 A3 BE 1004457A3
- Authority
- BE
- Belgium
- Prior art keywords
- screening
- wells
- well
- serum
- coating
- Prior art date
Links
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 90
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 43
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 39
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 25
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 18
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 claims description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 5
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N Hidralazin Chemical compound C1=CC=C2C(NN)=NN=CC2=C1 RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 201000004997 drug-induced lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010050551 Lupus-like syndrome Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000034943 Primary Sjögren syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000009339 Proliferating Cell Nuclear Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000003476 anti-centromere Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960002474 hydralazine Drugs 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6875—Nucleoproteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Trousse de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums, comprenant des réactifs appropriés pour réaliser un test ELISA, et un support comportant un groupe de puits par sérum à examiner, chaque groupe de puits comprenant plusieurs puits de dépistage prévus chacun pour réaliser un test ELISA, le revêtement du fond de chaque puits de dépistage d'un sgroupe contenant un ou plusieurs antigènes nucléaires différents de celui ou ceux conenus dans le revêtement des autres puits de dépistage de ce groupe, et un puits de contrôle, dont le fond est dépourvu de revêtement, pour un essai à blanc.
Description
<Desc/Clms Page number 1> Trousse de dépistage d'anticorps antinucléaires et procédé de dépistage de tels anticorps La présente invention est relative à une trousse de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums, comprenant un support dans lequel sont disposés plusieurs puits présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins un antigène nucléaire, des réactifs appropriés pour réaliser un test ELISA ainsi qu'éventuellement un sérum témoin positif et un sérum témoin négatif. Elle concerne également un procédé de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums. Les anticorps antinucléaires sont, dans certaines circonstances, développés par l'organisme humain vis-à-vis d'antigènes nucléaires. On peut distinguer plusieurs antigènes nucléaires : - les antigènes nucléaires chromosomiques : l'acide désoxyribonucléique natif ou double brin (ADNds), l'acide désoxyribonucléique dénaturé ou monobrin (ADNss), diverses histones (Hl, H2a, H2b, H3, H4) ; - les antigènes nucléaires extractibles (ENA), parmi lesquels on peut citer les antigènes Sm, RNP (ribonucléoprotéines), SSA, SSB, Scl-70, JO-1, RANA, PCNA, etc.... Les anticorps antinucléaires (AN A) réagissant à de l'ADNds sont présents dans 60 à 70 % des patients souffrant de lupus érythémateux disséminé (LED). Ces anticorps sont moins fréquemment détectés ( < . 5 %) chez des patients montrant d'autres types de pathologies autoimmunes, en particulier de l'arthrite juvénile ou des troubles hépatiques. Cette spécificité des ANA est pratiquement toujours négative dans le cas de lupus induit par un médicament. Etant donné leur très haut degré de spécificité (95 %), les ANA réagissant à l'ADNds apparaissent parmi les critères essentiels du diagnostic du LED. La présence de ces anticorps peut servir soit à confirmer le diagnostic du LED chez les patients où cette maladie est cliniquement suspectée, soit à détecter les patients asymptomatiques. <Desc/Clms Page number 2> Des titres élevés en ANA anti-ADNds sont observés dans 60 à 70 % de LED actifs, spécialement avec complication rénale. Au contraire, de faibles titres indiquent plutôt des LED non actifs ou d'autres troubles. Les anticorps antinucléaires réagissant à de l'ADNss sont relativement peu spécifiques ; ils sont détectés dans la polyarthrite chronique évolutive (8 %), le syndrome primaire de Sjögren (13 %) et la sclérodermie (14 %). Les fréquences les plus élevées de test positif sont observées dans le LED (70 %), la polydermatomyosite (43 %) et le lupus érythémateux induit par un médicament (60 %). Les anticorps contre l'ADNss sont parfois les seuls ANA positifs dans le cas de lupus cutané photosensible. Les anticorps antinucléaires réagissant aux histones sont plus fréquents dans le LED ( > 90 %) que dans d'autres types de connectivités ( < 20 %) où ils sont présents à faibles titres. Le lupus érythémateux induit ainsi que le lupus idiopathique ont une haute fréquence en ANA réagissant aux histones mais avec une spécificité différente pour les différentes classes d'histone. Les anticorps présents dans le LED réagissent à la fois au sous-groupe libre (Hl) des histones et aux sous-groupes complexés (H2a/H2b, H3/H4). Au contraire, les anticorps présents dans le lupus induit par le procalna- mide sont essentiellement dirigés contre le complexe H2a/H2b. Dans le lupus induit par de l'hydralazine, les anticorps montrent une spécificité seulement pour le complexe H3/H4. Les ANA vis-à-vis des ENA sont trouvés dans un grand nombre de troubles rhumatismaux. Certains d'entre eux sont considérés comme des marqueurs diagnostiques (Sm, SSA, Jo-l, Scl-70). Ainsi qu'il ressort de ce qui précède, il est souvent important, pour poser un diagnostic, d'ajouter aux observations cliniques les résultats d'un test de dépistage permettant de déterminer la spécificité exacte des anticorps antinucléaires présents dans le sérum du patient examiné. Plusieurs méthodes sont à l'heure actuelle appliquées pour détecter la présence d'anticorps antinucléaires dans des sérums. <Desc/Clms Page number 3> On peut citer entre autres les essais par im. llunofluorescence indirecte ou les procédés d'immunoprécipitation comme la double immunodiffusion selon Ouchterlony (v. B. T. NGUYEN et A. MARKOVITS, ANA Atlas, Bruxelles, 1990, p. 14-30). On connaît également la technologie de transfert électrophorétique de protéines, dite de Western Blot. Enfin pour certains antigènes nucléaires, comme par exemple l'ADN, il est connu de pratiquer des techniques im'11unoenzymatiques, comme le test à immunosorbant lié à une enzyme (test ELISA). Certaines de ces méthodes sont très coûteuses, certaines aussi peu sensibles. D'autres demandent beaucoup de temps. Enfin il est obligatoire d'appliquer plusieurs méthodes différentes devant être effectuées en succession. On doit compter généralement sur un délai de 72 h. pour une détermination précise des antigènes nucléaires concernés. D'une manière générale, afin que les examens soient rentabilisés on attend qu'il y ait environ 5 patients à tester. Il peut parfois être très long d'obtenir 5 patients pour lesquels on doive par exemple déterminer quels antigènes nucléaires extractibles sont présents dans leur organisme. La présente invention a pour but d'éviter les inconvénients précités et de mettre au point une trousse de dépistage qui soit aisée à mettre en oeuvre et qui permette d'obtenir rapidement une détection sélective des anticorps antinucléaires recherchés. De préférence cette trousse sera d'un coût peu élevé et elle pourra être mise en oeuvre de manière rentable même s'il n'y a qu'un sérum de patient à tester. Cette trousse permettra avantageusement une plus grande sensibilité de test, notamment avec possibilité de détection des anticorps dès le début de la maladie. On résout ces problèmes, suivant l'invention, par une trousse telle que décrite au début, dans laquelle le support comporte, par sérum à examiner, un groupe de puits, chaque groupe de puits comprenant plusieurs puits de dépistage prévus chacun pour réaliser un test ELISA, le revêtement du fond de chaque puits de dépistage d'un groupe de puits contenant un ou plusieurs antigènes nucléaires différents de celui ou ceux contenus dans le revêtement des autres puits de dépistage de ce groupe, et un puits de contrôle, <Desc/Clms Page number 4> dont le fond est dépourvu de revêtement, pour un essai à blanc. Suivant une forme de réalisation de l'invention, le support comporte au moins une barrette dans chacune desquelles les puits d'un groupe de puits sont disposés l'un derrière l'autre. On connaît des barrettes qui sont rangées sur un support et dans lesquelles sont disposés l'un derrière l'autre des puits prévus pour réaliser des tests ELISA. De telles barrettes sont par exemple mises sur le marché par la firme Nunc A/S, Roskilde, Danemark, sous la dénomination de Nunc-Immuno-Module. Dans les trousses de dépistage connues, les fonds des puits d'une barrette sont tous recouverts d'un revêtement contenant un ou plusieurs antigènes identiques. Chaque puits d'une barrette est donc destiné à recevoir le sérum d'un patient différent et, pour des raisons de rentabilité, on doit alors attendre qu'il y ait suffisamment de patients à examiner, cinq par exemple, pour entamer l'essai. Selon la présente invention, par contre, les fonds de chacun des puits de dépistage d'une barrette sont recouverts d'un revêtement contenant un ou des antigènes différents et tous les puits de dépistage d'une barrette sont destinés à recevoir le sérum du même patient. Il en résulte la possibilité d'entamer immédiatement l'examen, lequel peut être terminé 2 heures plus tard. Suivant une forme de réalisation avantageuse de l'invention, chaque groupe de puits comprend au moins trois puits de dépistage, le revêtement d'un premier puits de dépistage contenant au moins un acide désoxyribonucléique (ADN), le revêtement d'un deuxième puits de dépistage contenant au moins un antigène nucléaire extractible et le revêtement d'un troisième puits de dépistage contenant au moins une histone. Le revêtement du premier puits peut avantageusement contenir de l'ADNds et le revêtement d'un puits de dépistage supplémentaire peut alors contenir de l'ADNss. Suivant une autre forme de réalisation de l'invention, chaque groupe de puits comprend plusieurs puits de dépistage présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins une histone et le revêtement du fond de chacun de ceux-ci contient une ou plusieurs histones différentes de celle ou celles contenues dans les autres <Desc/Clms Page number 5> puits de dépistage contenant au moins une histone. Par exemple le revêtement d'un puits contiendra au moins une histone Hl riche en lysine tandis que le revêtement d'un autre puits contiendra un mélange d'histones H2a, H2b, H3 et H4. Suivant une forme particulière de réalisation de l'invention, chaque groupe de puits comprend plusieurs puits de dépistage présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins un antigène nucléaire extractible et le revêtement du fond de chacun de ceux-ci contient un ou plusieurs antigènes nucléaires extractibles différents de celui ou ceux contenus dans les autres puits de dépistage contenant au moins un antigène nucléaire extractible. Suivant une forme préférée de réalisation de l'invention, la trousse comprend en outre un puits témoin pour le sérum témoin positif, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant un mélange des antigènes contenus dans les revêtements d'au moins deux puits de dépistage distincts d'un groupe de puits, et le sérum témoin positif est un mélange de sérums positifs vis-à-vis des antigènes de ce mélange d'antigènes. Avantageusement, la trousse comprend aussi un puits témoin pour le sérum témoin négatif, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant ledit mélange d'antigènes et le sérum témoin négatif est un sérum ou un mélange de sérums qui est négatif vis-à-vis de tous les antigènes dudit mélange. La trousse peut éventuellement contenir un puits témoin pour le sérum à examiner, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant ledit mélange. De préférence, ledit mélange d'antigènes contient tous les antigènes présents dans les puits de dépistage, de préférence en parts égales. Il est avantageux de prévoir dans la trousse suivant l'invention, comme réactif, une immunoglobuline IgG anti-humaine de type (H + L). Cette immunoglobuline anti-humaine permet de détecter la présence dans le sérum aussi bien d'immunoglobuline IgM que IgG, c'est-à-dire qu'une détection très précoce de l'apparition des anticorps antinucléaires devient possible. Cela n'est pas réalisable, selon l'état de la technique. La trousse de dépistage suivant l'invention peut <Desc/Clms Page number 6> comprendre en outre un tableau d'interprétation des densités optiques obtenues dans chaque puits d'un groupe à la fin du test ELISA, ce tableau d'interprétation présentant des valeurs maximales de sérum négatif et des valeurs minimales de sérum positif pour chacun des puits de dépistage, les valeurs ayant été établies en fonction des résultats obtenus sur une grande série de sérums positifs et négatifs, ainsi qu'éventuellement des valeurs de témoin positif et de témoin négatif établies en fonction des sérums positif et négatif contenus dans la trousse utilisée. L'invention a également pour objet un procédé de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums, qui permette en une seule opération la détection sélective de ces anticorps et cela en un temps minimal et avec une sécurité poussée du résultat. Pour résoudre ce problème on a prévu suivant l'invention un procédé de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums comprenant, pour chaque sérum, plusieurs dépistages par test ELISA, effectués simultanément, chacun des dépistages simultanés permettant de détecter de manière sélective la présence dans le sérum examiné d'un ou de plusieurs anticorps antinucléaires qui sont différents de celui ou de ceux détectables dans les autres dépistages simultanés, un essai à blanc, une lecture simultanée des densités optiques des dépistages et de l'essai à blanc et, sur base de résultats de ladite lecture, une détermination de l'absence d'anticorps antinucléaires ou de la présence d'un ou de plusieurs des anticorps antinucléaires recherchés. L'invention offre donc l'avantage d'effectuer un test ELISA simultanément sur plusieurs échantillons du sérum d'un même patient. Cet examen peut avantageusement être précédé d'une détection d'anticorps antinucléaires courante par immunofluorescence indirecte, ce qui permet d'éliminer déjà certains sérums, par exemple ceux contenant des anti-centromères. L'invention va être décrite de manière plus détaillée dans la suite, à l'aide d'un exemple de réalisation non limitatif. On prévoit une trousse de dépistage comprenant un cadre supportant plusieurs barrettes, par exemple du type mis sur le marché sous la dénomination de Nunc-Immuno-Module. Chaque <Desc/Clms Page number 7> barrette comporte 8 puits : cinq puits de dépistage, deux puits témoins et un puits de contrôle. On met au point les puits de dépistage de la manière suivante. En premier lieu, on prépare cinq solutions d'antigènes antinucléaires : Solution 1 : histones autres que Hl (Sigma N 7755). On conserve, comme solution mère, 10mg de Sigma N 7755 dans EMI7.1 10 ml de tampon carbonate (3, 18g de Na2C03'5, 86g de NaHC03' 0, 20 g de NaN3 et H20 distillée en quantité suffisante pour 1 litre), à une température de-20 C. Pour l'emploi, on dilue à 1/10 dans du tampon carbonate. Solution 2 : histones Hl (Sigma H 5880). Comme solution mère, on conserve à-20 C 2mg de Sigma H 5880 dans 1 ml de tampon carbonate. Pour l'emploi, on dilue à 1/10 dans ce même tampon. Solution 3 : ADNds (Sigma D 3636-sel de sodium de thymus de veau de type II, hautement polymérisé). Comme solution mère, on conserve 10 mg de ce produit dans 1 ml de tampon carbonate. Pour l'emploi, on dilue à 1/10 dans ce même tampon. Solution 4 : ADNss. On chauffe 1 ml de la solution mère de la solution 3 à 1000C au bain-marie, pendant 10 minutes, et on la refroidit dans un bain de glace. Cette solution contient alors de l'ADN dénaturé monobrin. On la dilue à 1/20 dans le tampon carbonate, pour l'emploi. Solution 5 : Antigènes nucléaires extractibles. On mélange deux extraits contenant de tels antigènes : de l'extrait de thymus de veau (CTE) et de l'extrait de rate de primate (PSE), et on dilue 50 fois, dans du tampon carbonate, après reconstitution des extraits lyophilisés, selon les recommandations du fabricant (par exemple la firme Mardx Diagnostics Inc., Scotch Plains, New Jersey, Etats-Unis d'Amérique). Ces solutions sont employées pour la sensibilisation des puits de dépistage des barrettes d'une trousse suivant l'invention. On distribue 100 ul des différentes solutions 1 à 5 dans leurs puits <Desc/Clms Page number 8> EMI8.1 correspondants et on couvre ceux-ci. On laisse alors incuber pendant 3 h à une température comprise entre 00C et 40 C, de préférence entre la température ambiante et 40 C, et avantageusement à 37 C. On évacue les résidus de solution, hors des puits, par exemple par aspiration ou centrifugation. On distribue alors dans les puits 125 111 de tampon carbonate additionné de 1% d'albumine bovine, et on couvre les puits. On laisse à nouveau incuber pendant 1 heure à une température comprise entre 00C et 40 C, de préférence de 37 C. On lave à quatre reprises avec un tampon PBS Tween à 0, 05 % (76, 5 g de NaCl, 9, 025 g de Na2HPOl/.'2H20, 2,1 g de KHPO., F-LO distillée en quantité suffisante pour obtenir 10 1, 0, 05 % de Tween 20 FLUKA), qui est additionné de 1 % d'albumine bovine. On distribue ensuite dans les puits 125 ul d'un réactif fixateur à base de tampon PBS Tween à 0, 05 %, additionné de 10 % de glycérol. On attend environ 15 minutes et on élimine les résidus liquides, par exemple par aspiration ou centrifugation. On sèche ensuite pendant 1 h à 37 C, on couvre les puits et on les conserve à 4 C, ou de préférence à-20 C. Les barrettes sont à présent sensibilisées et prêtes à l'emploi. Pour la préparation des deux puits témoins on a mélangé les solutions 1 à 5, mentionnées précédemment, en parts égales et c'est ce mélange qui est distribué dans ces deux puits au début de la sensibilisation des puits des barrettes. Le processus de sensibilisation est poursuivi de la même manière que celle décrite ci-dessus pour les puits de dépistage, et simultanément à celui-ci. Le dépistage peut s'effectuer dès que le sérum d'un seul patient doit être examiné. On lave les puits à 4 reprises, avant l'emploi, avec une solution de lavage formée du tampon PBS Tween à 0, 05 %. On dilue le sérum à examiner à 1/100 dans ce même tampon, additionné de 1% d'albumine bovine. On distribue 100 pl dans les puits de dépistage et le puits de contrôle. On procède de même avec les sérums positif et négatif dans les puits témoins, mais en distribuant là le sérum positif et le sérum négatif. On laisse alors incuber pendant 30 minutes à 37 C. <Desc/Clms Page number 9> EMI9.1 Après un lavage à 4 reprises avec la solution de lavage, on distribue dans tous les puits 100 pi d'un anticorps antihumain, par exemple de l'anti-immunoglobuline IgG humaine, de préférence de type H + L (par exemple celle produite par la firme SERA-LAB Ltd, Sussex, Grande-Bretagne, sous le code : SDL-2515), cet anticorps anti-humain étant conjugué à une enzyme, notamment de la phosphatase alcaline (à la dilution de 1/200 dans le tampon PBS Tween à 0, 05 %, additionné de 1% d'albumine bovine). On laisse incuber, par exemple pendant 60 minutes à 37 C. Après un lavage à 4 reprises avec la solution de lavage, on distribue dans les puits 100 111 d'un substrat pour l'enzyme, par exemple du phosphate de paranitrophényle, qui a été dilué dans un tampon de substrat, par exemple de la diéthanolamine. On couvre ensuite les puits, et on laisse incuber à l'obscurité pendant 30 minutes à 37 C. On bloque alors la réaction par 50 111 de NaOH 3N. L'absorbance des échantillons peut ensuite être lue sur un lecteur de plaque de microtitrage courant, à 405 nm. Lors de cette lecture, de la valeur de densité optique observée dans les puits de dépistage doit être soustraite la valeur observée dans le puits de contrôle. Dans la trousse de cet exemple, la densité optique observée pour le témoin négatif doit avantageusement être inférieure à 0,317 et celle pour le témoin positif supérieure à 1,246. Com-ne il est compliqué d'obtenir un sérum positif standard et un sérum négatif standard, étant donné qu'il s'agit de mélanges de plusieurs sérums devant être réactifs ou non à plusieurs antigènes à la fois, il est préférable qu'un tableau d'interprétation des résultats tel que donné ci-dessous à titre d'exemple accompagne chaque trousse, avec des valeurs correspondant aux sérums témoins réellement présents dans la trousse. <Desc/Clms Page number 10> TABLEAU Résultat EMI10.1 <tb> <tb> Antigène <SEP> nucléaire <SEP> Négatif <SEP> Douteux <SEP> Positif <tb> ADN <SEP> ds <SEP> 90, <SEP> 200 <SEP> 0, <SEP> 200-0, <SEP> 300 <SEP> 0, <SEP> 300 <tb> ADNss <SEP> < 0, <SEP> 300 <SEP> 0, <SEP> 300 <SEP> - <SEP> 0, <SEP> 500) <SEP> 0, <SEP> 500 <tb> Hl <SEP> < <SEP> 0, <SEP> 350 <SEP> 0, <SEP> 350 <SEP> - <SEP> 0, <SEP> 500) <SEP> 0, <SEP> 500 <tb> H2a, <SEP> H2b, <SEP> H3, <SEP> H4 <SEP> (0, <SEP> 150 <SEP> 0, <SEP> 150 <SEP> - <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> > <SEP> 0, <SEP> 250 <tb> ENA <SEP> < <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> 0, <SEP> 250 <SEP> - <SEP> 0, <SEP> 400 <SEP> > <SEP> 0, <SEP> 400 <tb> Il doit être entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée à la forme de réalisation décrite ci-dessus et que bien des modifications pourraient y être apportées sans sortir de son cadre. On pourrait par exemple prévoir des trousses où chaque barrette contient un nombre de puits supérieur à 8. Cela permettrait une détection sélective plus poussée, notamment des antigènes nucléaires extractibles. On pourrait aussi imaginer que, dans certains cas, le test tel que décrit ci-dessus avec 5 puits de dépistage ne soit pas suffisant pour dépister l'anticorps présent. C'est le cas notamment de troubles rhumatismaux induits par certains ENA. On peut alors prévoir une seconde trousse semblable à la première, mais dans laquelle les cinq puits de dépistage contiennent cette fois chacun un ou plusieurs ENA différents de celui ou de ceux contenus dans les autres puits. Après le premier dépistage (durée d'environ 2 heures), on effectue immédiatement le second de même durée et un diagnostic très sensible peut être posé en un temps très court par rapport à ce qui existe dans la pratique. Il est évident que les tests ELISA sont connus en soi et que divers réactifs équivalents à ceux décrits ci-dessus peuvent être utilisés dans ce but. On pourrait aussi prévoir de ne pas avoir de puits témoins, ou uniquement un puits témoin pour le sérum positif ou pour le sérum négatif. On pourrait par ailleurs prévoir un puits témoin, <Desc/Clms Page number 11> non plus pour un sérum positif ou négatif, mais pour le sérum à examiner. Un tel puits témoin recouvert d'un revêtement contenant avantageusement tous les antigènes prévus dans les puits de dépistage permettrait un contrôle comparatif. Si le sérum à examiner est négatif, il doit l'être également dans le puits témoin. S'il est positif pour un des puits de dépistage, il doit également l'être dans le puits témoin. La présence de cette concordance permet de vérifier la validité du test.
Claims (16)
- REVENDICATIONS 1. Trousse de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums, comprenant un support dans lequel sont disposés plusieurs puits présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins un antigène nucléaire, des réactifs appropriés pour réaliser un test ELISA, ainsi qu'éventuellement un sérum témoin positif et un sérum témoin négatif, caractérisée en ce que le support comporte un groupe de puits par sérum à examiner, et en ce que chaque groupe de puits comprend plusieurs puits de dépistage prévus chacun pour réaliser un test ELISA, le revêtement du fond de chaque puits de dépistage d'un groupe de puits contenant un ou plusieurs antigènes nucléaires différents de celui ou ceux contenus dans le revêtement des autres puits de dépistage de ce groupe, et un puits de contrôle, dont le fond est dépourvu de revêtement,pour un essai à blanc.
- 2. Trousse de dépistage suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le support comporte au moins une barrette dans chacune desquelles les puits d'un groupe de puits sont disposés l'un derrière l'autre.
- 3. Trousse de dépistage suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que chaque groupe de puits comprend au l10ins trois puits de dépistage, le revêtement d'un premier puits de dépistage contenant au moins un acide désoxyribonucléique (ADN), le revêtement d'un deuxième puits de dépistage contenant au moins un antigène nucléaire extractible et le revêtement d'un troisième puits de dépistage contenant au moins une histone.
- 4. Trousse de dépistage suivant la revendication 3, caractérisée en ce que le revêtement du premier puits de dépistage contient de l'acide désoxyribonucléique natif ou double brin (ADNds) et en ce qu'un puits de dépistage supplémentaire contient de l'acide désoxyribonucléique dénaturé ou monobrin (ADNss). <Desc/Clms Page number 13>
- 5. Trousse de dépistage suivant l'une ou l'autre des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que chaque groupe de puits comprend plusieurs puits de dépistage présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins une histone et en ce que le revêtement du fond de chacun de ceux-ci contient une ou plusieurs histones différentes de celle ou celles contenues dans les autres puits de dépistage contenant au moins une histone.
- 6. Trousse de dépistage suivant l'une ou l'autre des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que chaque groupe de puits comprend plusieurs puits de dépistage présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant au moins un antigène nucléaire extractible et en ce que le revêtement du fond de chacun de ceux-ci contient un ou plusieurs antigènes nucléaires extractibles différents de celui ou ceux contenus dans les autres puits de dépistage contenant au moins un antigène nucléaire extractible.
- 7. Trousse de dépistage suivant l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un puits témoin pour le sérum témoin positif, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant un mélange des antigènes contenus dans les revêtements d'au moins deux puits de dépistage distincts d'un groupe de puits, et en ce que le sérum témoin positif est un mélange de sérums positifs vis-à-vis des antigènes de ce mélange d'antigènes.
- 8. Trousse de dépistage suivant l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un puits témoin pour le sérum témoin négatif, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant un mélange des antigènes contenus dans les revêtements d'au moins deux puits distincts d'un groupe de puits et en ce que le sérum témoin négatif est un sérum ou un mélange de sérums qui est négatif vis-à-vis de tous les antigènes dudit mélange.
- 9. Trousse de dépistage suivant l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un puits témoin pour le sérum à examiner, ce puits témoin présentant un fond recouvert d'un revêtement contenant un mélange <Desc/Clms Page number 14> des antigènes contenues dans les revêtements d'au moins deux puits distincts d'un groupe de puits.
- 10. Trousse de dépistage suivant l'une ou l'autre des revendications 7 à 9, caractérisée en ce que ledit mélange d'antigènes contient tous les antigènes présents dans les puits de dépistage, de préférence en parts égales.
- 11. Trousse de dépistage suivant l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme réactifs, un produit de conjugaison d'une immunoglobuline IgG anti-humaine et de phosphatase alcaline ainsi que du phosphate de paranitrophényle.
- 12. Trousse de dépistage suivant la revendication 11, caractérisée en ce que le produit de conjugaison comprend une immunoglobuline IgG anti-humaine de type (H + L).
- 13. Trousse de dépistage suivant l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un tableau d'interprétation des densités optiques obtenues dans chaque puits d'un groupe à la fin du test ELISA, ce tableau d'interprétation présentant des valeurs maximales de sérum négatif pour chacun des puits de dépistage et des valeurs minimales de sérum positif pour chacun d'eux, ces valeurs ayant été établies en fonction des résultats obtenus sur une grande série de sérums positifs et négatifs, ainsi qu'éventuellement des valeurs de témoin positif et de témoin négatif établies en fonction des sérums positif et négatif contenus dans la trousse utilisée.
- 14. Procédé de dépistage d'anticorps antinucléaires dans des sérums comprenant, pour chaque sérum, plusieurs dépistages par test ELISA, effectués simultanément, chacun des dépistages simultanés permettant de détecter de manière sélective la présence dans le sérum examiné d'un ou de plusieurs anticorps antinucléaires qui sont différents de celui ou de ceux détectables dans les autres dépistages simultanés, un essai à blanc, une lecture simultanée des densités optiques des <Desc/Clms Page number 15> dépistages et de l'essai à blanc et, sur base de résultats de ladite lecture, une détermination de l'absence d'anticorps antinucléaires ou de la présence d'un ou de plusieurs des anticorps antinucléaires recherchés.
- 15. Procédé de dépistage suivant la revendication 14, caractérisé en ce qu'il comprend simultanément, pour chaque sérum, au moins un dépistage d'acide désoxyribonucléique, au moins un dépistage d'histone et au moins un dépistage d'antigène nucléaire extractible.
- 16. Procédé de dépistage suivant l'une ou l'autre des revendications 14 et 15, caractérisé en ce qu'il comprend, avant lesdits dépistages, une détection d'anticorps antinucléaires par immunofluorescence indirecte.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9100117A BE1004457A3 (fr) | 1991-02-08 | 1991-02-08 | Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. |
| EP19920903750 EP0579609A1 (fr) | 1991-02-08 | 1992-02-07 | Trousse de dépistage d'anticorps antinucléaires |
| PCT/BE1992/000002 WO1992014148A1 (fr) | 1991-02-08 | 1992-02-07 | Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9100117A BE1004457A3 (fr) | 1991-02-08 | 1991-02-08 | Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BE1004457A3 true BE1004457A3 (fr) | 1992-11-24 |
Family
ID=3885329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BE9100117A BE1004457A3 (fr) | 1991-02-08 | 1991-02-08 | Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0579609A1 (fr) |
| BE (1) | BE1004457A3 (fr) |
| WO (1) | WO1992014148A1 (fr) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5573911A (en) * | 1994-10-03 | 1996-11-12 | Lifecodes Corp. | Methods and materials for detecting autoimmune antibodies |
| FI5099U1 (fi) * | 2000-12-22 | 2001-10-16 | Orgenium Lab | Seulontatestikuoppaliuskasarja tai -levysarja |
| CN110346576A (zh) * | 2018-04-01 | 2019-10-18 | 英诺诊断有限公司 | 一种抗原固定化基质膜及包含其的用于检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及其用途 |
| CN113281498A (zh) * | 2021-05-10 | 2021-08-20 | 海茵生物科技(北京)有限公司 | 一种抗核抗体化学发光定量检测的试剂盒及其检测方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1980000026A1 (fr) * | 1978-06-02 | 1980-01-10 | American Hospital Supply Corp | Conjuges d'albumine methyles insolubilises pour test fluoro-immuno sur les maladies auto-immunes |
| EP0206779A1 (fr) * | 1985-06-21 | 1986-12-30 | Modern Diagnostics, Inc. | Détection des anticorps antinucléaires |
| WO1988009932A1 (fr) * | 1987-06-03 | 1988-12-15 | Amrad Corporation Limited | ANTIGENE NUCLEAIRE La |
-
1991
- 1991-02-08 BE BE9100117A patent/BE1004457A3/fr not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-02-07 EP EP19920903750 patent/EP0579609A1/fr not_active Withdrawn
- 1992-02-07 WO PCT/BE1992/000002 patent/WO1992014148A1/fr not_active Ceased
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1980000026A1 (fr) * | 1978-06-02 | 1980-01-10 | American Hospital Supply Corp | Conjuges d'albumine methyles insolubilises pour test fluoro-immuno sur les maladies auto-immunes |
| EP0206779A1 (fr) * | 1985-06-21 | 1986-12-30 | Modern Diagnostics, Inc. | Détection des anticorps antinucléaires |
| WO1988009932A1 (fr) * | 1987-06-03 | 1988-12-15 | Amrad Corporation Limited | ANTIGENE NUCLEAIRE La |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ARTHRITIS AND RHEUMATISM, vol. 32, no. 4, avril 1989, (US), J.L. SUBIZA et al.: "DNA-anti-DNA complexes account for part of the antihistone activity found in patients with systemic lupus erythematosus", pages 406-412, voir colonne 1, ligne 17 - colonne 2, ligne 32 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0579609A1 (fr) | 1994-01-26 |
| WO1992014148A1 (fr) | 1992-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Väänänen et al. | Non-endoscopic diagnosis of atrophic gastritis with a blood test. Correlation between gastric histology and serum levels of gastrin-17 and pepsinogen I: a multicentre study | |
| Summerton et al. | Faecal calprotectin: a marker of inflammation throughout the intestinal tract | |
| Sah et al. | Serologic issues in IgG4-related systemic disease and autoimmune pancreatitis | |
| BE1004994A5 (fr) | Trousse de diagnostic pour diagnostiquer et distinguer une douleur thoracique lors de sa premiere apparition. | |
| EP0116793A1 (fr) | Procédé de détection immunobactériologique de germes pathogènes dans des milieux biologiques contaminés | |
| EP1399743A2 (fr) | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives | |
| FR2997194A1 (fr) | Dispositif pour la determination d'au moins un analyte susceptible d'etre contenu dans un echantillon liquide | |
| BE1004457A3 (fr) | Trousse de depistage d'anticorps antinucleaires et procede de depistage de tels anticorps. | |
| CA2024731A1 (fr) | Moyens pour le diagnostic de neuropathies demyelinisantes, en particulier de la sclerose en plaques | |
| EP0311492A2 (fr) | Trousse et méthode de dosage immunométrique applicables à des cellules entières | |
| FR2579757A1 (fr) | Procede de determination de l'hemoglobine dans les matieres fecales | |
| Yokoyama et al. | Associations among liver disease, serum lipid profile, body mass index, ketonuria, meal skipping, and the alcohol dehydrogenase‐1B and aldehyde dehydrogenase‐2 genotypes in Japanese men with alcohol dependence | |
| EP1040353A1 (fr) | Procede de depistage d'analyte et trousse | |
| US20060269968A1 (en) | Method of assessing the effectiveness of a treatment regimen | |
| Shahbazkhani et al. | Coeliac disease is the most common cause of chronic diarrhoea in Iran | |
| WO2005121805A2 (fr) | Utilisation de ferrofluides pour le phenotypage sanguin et applications derivees | |
| JP4791866B2 (ja) | 下痢原性大腸菌感染症の判別に用いられる固相等 | |
| Lindberg et al. | Serum IgA and IgG gliadin antibodies and small intestinal mucosal damage in children | |
| Carroccio et al. | Pancreatitis-associated protein in patients with celiac disease: serum levels and immunocytochemical localization in small intestine | |
| JP3425149B2 (ja) | 無症候性患者における糖尿病可能性評価方法 | |
| FR2709492A1 (fr) | Méthode d'immunodosage spécifique de la glutathion peroxydase plasmatique humaine, kit pour sa mise en Óoeuvre, oligopeptides et anticorps spécifiques de la méthode . | |
| Hankard et al. | Increased TIA1‐expressing intraepithelial lymphocytes in cow's milk protein intolerance | |
| EP3641938A1 (fr) | Procédé d'application, sur un support solide, d'au moins un partenaire de liaison à une molécule | |
| FR2640143A1 (fr) | Anticorps polymerises, diriges contre des immunoglobulines - leur utilisation dans des tests de diagnostic | |
| Gorgun et al. | Tissue transglutaminase expression in celiac mucosa: an immunohistochemical study |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RE | Patent lapsed |
Owner name: S.A. BIO-LINE Effective date: 19990228 |