BE1026780B1 - Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie - Google Patents

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, welches das Gebiet der Tiefenverarbeitung von Tee betrifft. Das Verfahren umfasst die folgenden Schritte:1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer wässrigen Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen;2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule;3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit dem Elutionslösungsmittel;4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin-Monomeren des Polyester- Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten. Mit der vorliegenden Erfindung kann nach Bedarf ein Polyester-Catechin-Monomer von irgendeiner Sorte selektiv hergestellt werden, um die Erfordernisse der Entwicklung verschiedener Produkte in den Bereichen von Medizin, Lebensmittel, chemischer Industrie usw. zu erfüllen; zugleich kann die Nutzung des Polyester- Catechin-Extrakts erheblich verbessert werden, so dass er für die Entwicklung einer Vielzahl von Gesundheitsprodukten verwendet werden kann; dieses Verfahren eignet sich sehr gut für die Serienproduktion.

Description

Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie
TECHNISCHES GEBIET Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Tiefenverarbeitung von Tee, insbesondere ein Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie.
STAND DER TECHNIK Die Polyester-Catechin sind pflanzliche Phenolpigmente, weisen antioxidative, antivirale, bakteriostatische und krebsbekämpfende Wirkungen auf und haben bessere Präventions- und Behandlungseffekte für Arteriosklerose, Hirninfarkt, Thrombozytenaggregation, Bluthochdruck, Hyperlipidämie und Fettstoffwechselstörungen und andere kardiovaskuläre und zerebrovaskuläre Erkrankungen, unter den Funktionskomponenten von Tee stellen die Polyester- Catechin die Verbindungen mit signifikanten Effekten und einem Potenzial für die Entwicklung und Anwendung in dieser Stufe dar. Bisher wurden schon acht Arten von Polyester-Catechin aus Schwarztee oder Catechinoxiden abgeschieden und identifiziert, von denen drei den höchsten Gehalt in Schwarztee aufweisen, die jeweils der Polyester-Catechin A (Theasinensins A, als TSA abgekürzt), der Polyester-Catechin B (als TSB abgekürzt) und der Polyester-Catechin C (Theasinensine C, als TSC abgekürzt) sind. Die Monomerkomponenten von unterschiedlichen Polyester-Catechin verfügen über ihre einzigartigen Eigenschaften und weisen an verschiedenen Aspekten unterschiedliche biologische Aktivitäten auf. Mit dem bestehenden Flüssigphasenchromatographie-Analyseverfahren kann das Gemisch verschiedener Arten von Polyester-Catechin abgeschieden werden, allerdings wird es vor allem für die Analyse und Quantifizierung von Substanzen verwendet, wodurch der Polyester-Catechin nicht chargenweise abgeschieden und hergestellt werden.
INHALT DER ERFINDUNG Hinsichtlich der oben geschilderten Problem aus dem Stand der Technik stellt die vorliegende Erfindung eine technische Lösung eines Verfahrens zur chargenweisen
Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie zur Verfügung. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es die folgenden Schritte umfasst: 1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer wässrigen Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen; 2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule; 3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit einem Elutionslösungsmittel, wobei es sich bei dem Elutionslösungsmittel um ein durch Alkohole, anorganische Säuren und reines Wasser gebildetes Lösungsmittelgemisch handelt, jeweiliges Sammeln von drei Sorten von Eluaten, die nacheinander den Monomer des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester- Catechins C enthalten; 4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomeren des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten.
Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 2) bei dem Gelfüllstoff um ein vernetztes Dextrangel mit der PartikelgrôBe von 30-100 mesh handelt, bevorzugt 40-80 mesh, bevorzugter 50-70 mesh; wobei der Füllstoff des vernetzten Dextrangels in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800-1000 mm geladen wird, und wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300-450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 3) bei dem Alkohol in dem Elutionslösungsmittel um Methanol, Ethanol oder Aceton handelt, wobei der Alkohol eine Konzentration 30-90% aufweist; und wobei die Fliebgeschwindigkeit der chromatographischen Behandlung 0,5-5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt, bevorzugt 2-4 Säulenbettvolumen/Stunde, bevorzugter 3-3,5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt.
Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine Gradientenelution mit einer Alkohollôsung von 20-30%, 50-60% und 80-90% bei der Raumtemperatur durchgeführt wird, wobei gemäß dem Säulenbettvolumen von 1/10- 1/20 die Eluate jeweils gesammelt werden, und wobei durch die Hochleistungsflüssigkeitsphasenchromatographie-Analyse die eluierten Komponenten kombiniert werden. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine anorganische Säure zu einer Alkohollôsung zugegeben wird, wobei es sich bei dem Alkohol um Methanol und Essigsäure handelt, und wobei bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 50-60% die zugegebene Säuremenge 0,01-0,08% beträgt, während bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 80-90% die zugegebene Säuremenge 0,1-0,6% beträgt, und wobei die zugegebene Menge im Übereinstimmung mit dem Volumenverhältnis berechnet wird. Die vorliegende Erfindung hat folgende Vorteile: aus den Polyester-Catechin- Extrakten können gleichzeitig ein Monomer des Polyester-Catechins A, ein Monomer des Polyester-Catechins B und ein Monomer des Polyester-Catechins C hoher Reinheit abgeschieden werden, wodurch nach Bedarf ein Polyester-Catechin- Monomer von irgendeiner Sorte selektiv hergestellt werden kann, um die Erfordernisse der Entwicklung verschiedener Produkte in den Bereichen von Medizin, Lebensmittel, chemischer Industrie usw. zu erfüllen; zugleich kann die Nutzung des Polyester-Catechin-Extrakts erheblich verbessert werden, so dass er für die Entwicklung einer Vielzahl von Gesundheitsprodukten verwendet werden kann; dieses Verfahren eignet sich sehr gut für die Serienproduktion.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN Figur 1 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins A. Figur 2 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins B. Figur 3 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins C.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG Im Zusammenhang mit Figuren und Ausführungsformen wird die vorliegende Erfindung im Folgenden näher erläutert. Ausführungsbeispiel 1 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 38% beträgt. 3 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst; 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 30-50 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen; 3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser = 30%:70%, Methanol:Wasser:Essigsäure = 50%:49,98%:0,02% und Methanol: Wasser:Essigsäure =80%:18,8%:0,2%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Fliebgeschwindigkeit von 4 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/10 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 95%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit ovn 98% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 98% aufweist.
Ausführungsbeispiel 2 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 40% beträgt. 5 g von Polyester-
Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst; 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 40-60 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 5 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 400 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen; 3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser= 25%:75%, Methanol:Wasser:Essigsäure=50%:49,96%:0,04% und Methanol:Wasser:Essigsäure=80%:18,5%:0,5%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Fliebgeschwindigkeit von 3 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/12 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 96%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit ovn 98% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 97% aufweist.
Ausführungsbeispiel 3 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst. 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 50-70 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen;
3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser= 20%:80%, Methanol:Wasser:Essigsäure= 55%:44,96%:0,04% und Methanol:Wasser:Essigsäure= 85%:14,5%:0,5%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Flie%geschwindigkeit von 2 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/15 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 94%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit von 97% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 99% aufweist.
Vergleichsbeispiel 1 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst. 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrölBe von 100-110 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen. 3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton:Wasser=80%:20%, wobei die ElutionsflieBgeschwindigkeit 4 BVh (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/10 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, des
Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 68% beträgt. Vergleichsbeispiel 2 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst.
2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgröBe von 120-140 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.
3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton:Wasser= 85%:15%, wobei die ElutionsflieBgeschwindigkeit 3 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/12 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 72% beträgt.
Vergleichsbeispiel 3 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst.
2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrölBe von 120-140 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist,
aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.
3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton: Wasser= 90%:10%, wobei die ElutionsflieRgeschwindigkeit 2BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/15 Säulenbettvolumen werden die Eluate Jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 73% beträgt. Der Schutzumfang der vorliegenden Erfindung ist nicht nur auf die obigen Ausführungsformen beschränkt, alle Inhalte, die mit den technischen Linien und Lösungen der vorliegenden Erfindung identisch oder äquivalent sind, sollen als von dem Schutzumfang der vorliegenden Erfindung gedeckt angesehen werden.

Claims (5)

Patentansprüche
1. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren die folgenden Schritte umfasst: 1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen; 2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule; 3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit einem Elutionslösungsmittel, wobei es sich bei dem Elutionslösungsmittel um ein durch Alkohole, anorganische Säuren und reines Wasser gebildetes Lösungsmittelgemisch handelt, jeweiliges Sammeln von drei Sorten von Eluaten, die nacheinander den Monomer des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester- Catechins C enthalten; 4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomeren des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten.
2. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 2) bei dem Gelfüllstoff um ein vernetztes Dextrangel mit der Partikelgröle von 30-100 mesh handelt, bevorzugt 40-80 mesh, bevorzugter 50-70 mesh; wobei der Füllstoff des vernetzten Dextrangels in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800-1000 mm geladen wird, und wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300-450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.
3. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 3) bei dem Alkohol in dem Elutionslösungsmittel um Methanol, Ethanol oder Aceton handelt, wobei der Alkohol eine Konzentration 30-90% aufweist;
und wobei die FlieRgeschwindigkeit der chromatographischen Behandlung 0,5-5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt, bevorzugt 2-4 Säulenbettvolumen/Stunde, bevorzugter 3-3,5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt.
4. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine Gradientenelution mit einer Alkohollösung von 20- 30%, 50-60% und 80-90% bei der Raumtemperatur durchgeführt wird, wobei gemäß dem Säulenbettvolumen von 1/10-1/20 die Eluate jeweils gesammelt werden, und wobei durch die Hochleistungsflüssigkeitsphasenchromatographie-Analyse die eluierten Komponenten kombiniert werden.
5. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine anorganische Säure zu einer Alkohollösung zugegeben wird, wobei es sich bei dem Alkohol um Methanol und Essigsäure handelt, und wobei bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 50-60% die zugegebene Säuremenge 0,01-0,08% beträgt, während bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 80-90% die zugegebene Säuremenge 0,1- 0,6% beträgt, und wobei die zugebene Menge im Übereinstimmung mit dem Volumenverhältnis berechnet wird.
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