BE1027232B1 - Procédé de détection d'au moins un variant de protéine et/ou d'au moins un peptide propre aux chaînes alpha et/ou bêta et/ou delta d'hémoglobine - Google Patents
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Abstract
La présente invention porte sur un procédé de détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un variant de protéine connu et/ou d'au moins un peptide propre aux chaînes α et/ou β et/ou δ d’hémoglobine. La présente invention concerne également un système et un kit pour la mise en œuvre du procédé.
Description
+ BE2019/5561 Procede de detection d’au moins un variant de proteine et/ou d’au moins un peptide propre aux chaines alpha et/ou beta et/ou delta d’hemoglobine La présente invention porte sur un procédé de détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un variant de protéine connu et/ou d'au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine. La présente invention concerne également un système et un kit pour la mise en œuvre du procédé.
La spectrométrie de masse est une technique physico-chimique d'analyse permettant de détecter et d'identifier des molécules d'intérêt et de caractériser leur structure chimique. En particulier, la spectrométrie de masse permet de déterminer les structures moléculaires de nombreuses espèces en mélange (dont des biomolécules). Le principe général de cette technique d'analyse réside dans la séparation en phase gazeuse de molécules chargées (ions) en fonction de leur rapport masse/charge (m/z). En pratique, les espèces moléculaires examinées sont vaporisées et ionisées au sein d’une source d'ionisation puis les ions formés sont transférés vers l’analyseur qui va mesurer leur rapport masse/charge avant que le détecteur ne mesure le nombre d'ions d’un rapport masse/charge spécifique l’atteignant. Au cours de l’analyse, une étape de fragmentation peut avoir lieu. Le résultat d’une analyse par spectrométrie de masse est un spectre de masse, qui est une représentation graphique dont l’axe des abscisses correspond aux rapports m/z et [axe des ordonnées à l'intensité du signal. Parmi les techniques d'ionisation, la technique « Electrospray » donne bien lieu à une ionisation mais ne provoque pas principalement une fragmentation des molécules : il s’agit d’une technique d'ionisation dite « douce » et particulièrement utile pour la production de protéines et de peptides à charges multiples. En termes de fragmentation, une fragmentation induite par collision peut être utilisée : il s'agit d’une fragmentation permettant de casser les liaisons moléculaires, en particulier les liaisons peptidiques, et de produire des "ions fils". Les spectres de masse complexes ainsi produits sont classiquement convertis en un spectre déconvolué généré par ordinateur ayant un seul pic de masse pour chaque (poly)peptide.
La spectrométrie de masse est notamment utilisée pour la détection de variants de protéines et de (poly)peptides impliqués dans différentes maladies dont diverses formes d'anémie et diverses formes de troubles métaboliques héréditaires. Chez l’'Humain, les hémoglobinopathies désignent l'ensemble des maladies provoquées par une anomalie génétique de l'hémoglobine, protéine sanguine assurant le transport de l'oxygène dans l'organisme, via les globules rouges. Les variants d'hémoglobine sont généralement détectés à la suite d'un dépistage pré-anesthésique ou de programmes de dépistage néonatal et prénatal, ces programmes ayant notamment pour objectif de détecter la présence d’au moins un des variants de l'hémoglobine, par exemple Hb S, Hb C, Hb DPnieb, Hb OA, Hb Lepore et/ou Hb E. Ces variants correspondent à des mutations d’acides aminés sur la chaîne B de Phémoglobine : on parle alors d’anomalies qualitatives. Les programmes de dépistage néonatal et prénatal portent aussi sur la mise en évidence d’anomalies dites quantitatives comme l’a-thalassémie et la B-thalassémie.
Par définition, un variant de protéine correspond à l’expression (transcription et traduction) d’un gène présentant une ou plusieurs mutations par rapport au gène natif. Le variant protéique dispose donc d’une séquence primaire en acides aminés différente de celle de la protéine native, pouvant aller d’un seul acide aminé différent (comme c'est le cas pour la chaine B de l’'hémoglobine) à plusieurs dizaines d’acides aminés modifiés. Du point de vue fonctionnel, un variant peut tout à fait conserver l’activité de la protéine native ou, par exemple, perdre sa structure tridimensionnelle (tertiaire), ce qui peut conduire à une perte partielle ou totale de la fonction protéique initiale.
Les thalassémies, encore appelées dans leur forme majeure anémie ou maladie de Cooley, sont des formes d'anémies héréditaires, faisant partie des hémoglobinopathies (déficiences dans la synthèse de l'hémoglobine). Il existe deux formes majeures de thalassémie : l’a-thalassémie et la B- thalassémie comme indiqué ci-dessus. La forme 5 est plus rare. Classiquement, la «détection des thalassémies s’effectue par diverses techniques d’électrophorèse (sur gel, sur acétate de cellulose ou capillaire), par la focalisation isoélectrique (une autre forme d'électrophorèse) ou par chromatographie liquide.
Le document EP1844338 B1 décrit un procédé de détection, dans un échantillon, d'au moins un variant de protéine connu, le procédé comprenant les étapes suivantes : ( digestion de la protéine pour produire une série définie de peptides ; (ii) ionisation des peptides produits à l’étape (i) et sélection par spectrométrie de masse d’un peptide ionisé de rapport masse/charge connu et indicatif dudit au moins un variant de protéine ; (it) fragmentation induite par collision du peptide ionisé et sélectionné à l'étape (ii) ; (iv) détection d’un ou de plusieurs fragments de rapport masse/charge connu obtenu(s) à l’étape (iii) pour confirmer la présence dudit au moins un variant de protéine dans l'échantillon.
Malheureusement, avec un tel procédé selon le document EP1844338 B1, il subsiste une incertitude considérable qui est de savoir si à issue d’un test ou d’une batterie de tests, ledit au moins un variant de protéine n’est pas détecté dans l'échantillon non pas parce qu’il n’y est pas présent mais tout simplement parce que le procédé lui-même n’est pas à même de détecter ledit au moins un variant de protéine pourtant bien présent dans l'échantillon. Un tel cas peut se présenter dès le moment où l’une des étapes du procédé échoue.
Par exemple, si l’étape de digestion ne donne pas lieu à une obtention correcte des peptides attendus, les résultats obtenus au terme de l’ensemble des étapes du procédé peuvent être totalement erronés, avec le risque considérable de ne pas détecter une maladie/pathologie alors que le patient en souffre bel et bien. Il se pourrait également que l’une ou plusieurs des étapes (ii) à (iv) ne se déroule pas de la façon attendue, par exemple parce que l’appareillage utilisé n’est pas calibré et/ou paramétré correctement.
Pour résoudre au moins en partie ces problèmes de l’état de la technique, il est prévu suivant l'invention, un procédé de détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un variant de protéine connu et/ou d'au moins un peptide connu propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine, le procédé comprenant les étapes suivantes : ( digestion de la protéine et/ou de l'hémoglobine pour produire une série définie de peptides ;
(ii) ionisation des peptides produits à l’étape (i) et sélection par spectrométrie de masse d’au moins un peptide ionisé de rapport masse/charge connu et indicatif dudit au moins un variant de protéine et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine ; (ii) fragmentation induite par collision dudit au moins un peptide ionisé et sélectionné à l’étape (ii) ; (iv) détection d’un ou de plusieurs fragments de rapport masse/charge connu obtenu(s) à l’étape (iii) pour confirmer la présence dudit au moins un variant de protéine dans l'échantillon et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine dans l’échantillon ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu’il comprend au moins une des étapes suivantes : a) une étape de validation de la détection dudit au moins un variant et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine par mise en œuvre des étapes (ii) à (iv) au départ d’un échantillon comprenant au moins un peptide connu caractéristique dudit au moins un variant et/ou comprenant au moins un peptide connu caractéristique des chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine; ou b) une étape de validation de ladite étape (i) de digestion et de validation de la détection dudit au moins un variant et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine par mise en œuvre des étapes (i) à (iv) au départ d’un échantillon comprenant au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue et/ou comprenant au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine et dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue.
Par les termes « un échantillon comprenant une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant », il est entendu au sens de la présente invention, que l’échantillon comprend une protéine dont on sait qu’elle porte ledit
> BE2019/5561 au moins un variant. Il s’agit donc d’une protéine connue portant ledit au moins un variant, lequel est également connu.
Par les termes « un échantillon comprenant au moins une protéine- contrôle porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou © d'hémoglobine », il est entendu au sens de la présente invention, que l'échantillon comprend une protéine dont on sait qu’elle porte ledit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine. Il s’agit donc d’une protéine connue portant ledit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine, lequel est également connu.
De préférence, selon l'invention, lesdites étapes a) et b) sont des étapes préalables aux étapes i) et/ou ii) et/ou iii) et/ou iv).
Un tel procédé selon l'invention permet avantageusement de s'affranchir de l'incertitude mentionnée ci-dessus tant pour la détection d’un variant de protéine que pour la détection d’un peptide propre aux chaînes a et/ou Bet/ou 5 d’'hémoglobine. En effet, lorsque l’étape a) de validation de la détection dudit au moins un variant, par mise en œuvre des étapes (ii) à (iv) au départ d’un échantillon comprenant au moins un peptide connu caractéristique dudit au moins un variant, est positive, elle constitue un contrôle positif garantissant que les étapes (ii) à (iv) du procédé donnent inévitablement lieu à une détection dudit au moins un variant si ce dernier est présent dans l’échantillon biologique. Lorsque l’étape b) de validation de la détection dudit au moins un variant, par mise en œuvre des étapes (i) à (iv) au départ d’un échantillon comprenant une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant, est positive, elle constitue un contrôle positif garantissant que les étapes (i) à (iv) donnent inévitablement lieu à une détection dudit au moins un variant si ce dernier est présent dans l'échantillon biologique. A la différence de l’étape a) permettant de valider les étapes (ii) à (iv), l'étape b) permet également de valider l’étape (i) de digestion puisque c’est une protéine qui est mise en œuvre et non pas directement au moins un peptide.
S'assurer en amont d’un test ou d’une batterie de tests qu’au moins les étapes d'ionisation, de fragmentation et de détection (étapes ii à iv) voire en plus que l'étape de digestion de la protéine (étape i) fonctionnent comme attendu permet d'éviter la réalisation de tests sur des échantillons biologiques issus de
© BE2019/5561 patients sans être certains que le procédé donnera bien lieu à une détection dudit au moins un variant recherché si ce dernier est présent dans l’échantillon. Il est évident que ceci permet d’éviter le gaspillage d'échantillons mais aussi d’optimiser le rendement et la fiabilité du procédé selon l'invention, notamment en écartant tout risque de faux négatifs.
Il en va bien entendu de même lorsqu'il s’agit de mettre en évidence une thalassémie par détection d’au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B etfou D d'hémoglobine : élimination d’une incertitude similaire à celle mentionnée ci-avant, pas de gaspillage des échantillons, optimisation du rendement et de l’efficacité du procédé, élimination du risque de faux négatifs.
Notons que, selon la présente invention, une détection simultanée d’au moins un variant de protéine et d’au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine peut être réalisée.
Par ailleurs, pouvoir déduire au travers de l’une des étapes de validation a) ou b) qu’une ou plusieurs étapes du procédé a/ont échoué permet de directement prendre les mesures nécessaires pour corriger et adapter le procédé de telle sorte qu’il puisse rapidement assurer à nouveau une détection fiable dudit au moins un variant recherché.
Avantageusement, selon l'invention, l’étape a) est effectuée au départ d’un échantillon dans lequel ledit au moins un peptide connu caractéristique dudit au moins un variant et/ou ledit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine est un peptide synthétique.
De préférence, selon l’invention, l’étape b) est effectuée au départ d’un échantillon dans lequel ladite au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et/ou porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine est une protéine synthétique.
Une utilisation d’un peptide synthétique et/ou d’une protéine synthétique, c'est-à-dire d’un peptide et/ou d’une protéine obtenue par voie de synthèse, permet de travailler avec du matériel de qualité toujours égale et contrôlée pour la fabrication de l’échantillons permettant la réalisation des étapes a) et b). La reproductibilité des échantillons contrôle et donc celle des résultats obtenus lors des étapes a) et b) sont de ce fait assurées.
Préférentiellement, le procédé suivant l'invention comprend en outre une étape additionnelle de validation de ladite étape (i) de digestion de la protéine, ladite étape de validation additionnelle consistant en une digestion d’une protéine de référence dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue, ladite protéine de référence étant une protéine différente de ladite protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et/ou porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine lorsque ladite étape b) est mise en œuvre. Cette étape additionnelle permet de valider que l’étape de digestion est efficace, notamment que l’enzyme de type protéase utilisée permet bien d’obtenir la série de peptides attendue, ce qui conditionne évidemment le bon déroulement de l’ensemble des autres étapes subséquentes du procédé selon l'invention.
Avantageusement, selon l'invention, la protéine de référence est de l'hémoglobine native ou de Phémoglobine synthétique.
De préférence, selon l'invention, ledit au moins un variant de protéine connu est un variant d’hémoglobine.
Avantageusement, selon l'invention, ledit variant d’'hémoglobine est Hb S, Hb C, Hb DPyriab, Hb O/rab, Hb Lepore ou Hb E.
Préférentiellement, selon l’invention, l’échantillon biologique est un échantillon de sang, d'urine, de liquide céphalo-rachidien ou de tissu.
De préférence, selon linvention, l’étape de digestion de la protéine est effectuée en utilisant une protéase, en particulier de la trypsine.
Avantageusement, selon l'invention, l’étape d'ionisation des peptides et de sélection d’au moins un peptide ionisé est effectuée en utilisant un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro-pulvérisation (électro-spray).
Préférentiellement, selon l'invention, l’étape de fragmentation induite par collision est effectuée en utilisant un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro-pulvérisation (électro-spray).
De préférence, selon l'invention, l’étape de détection d’un ou de plusieurs fragments de rapport masse/charge connu est effectuée en utilisant un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro-pulvérisation (électro-spray).
La présente invention porte également sur un système pour mettre en œuvre le procédé suivant la présente invention, ledit système comprenant une machine pour effectuer une spectrométrie de masse en tandem, en particulier avec un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d'ionisation par électro-pulvérisation (électro-spray).
La présente invention porte encore sur un kit pour mettre en œuvre le procédé suivant la présente invention, ledit kit comprenant : - des tampons et des réactifs pour la préparation de l'échantillon biologique comprenant au moins un variant de protéine connu et/ou au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine ; - une protéase pour digérer la protéine et/ou l’'hémoglobine en une série définie de peptides ; - un système pour introduire l'échantillon au sein d’une source d'ionisation d’un instrument permettant d’effectuer des analyses par spectrométrie de masse en tandem, en particulier avec un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source ionisation par électro-pulvérisation (électro- spray).
Le kit peut en outre comprendre un logiciel approprié pour configurer la machine afin de mettre en œuvre le procédé de la présente invention.
Le procédé de la présente invention permet la détection précise et spécifique d'un variant de protéine et/ou d’au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine. En particulier, en digérant la protéine pour produire une série définie de peptides et en soumettant les peptides ionisés sélectionnés à une dissociation induite par collision, le risque de détection d’un faux positif est très significativement réduit.
Le variant de protéine à détecter peut être n'importe quelle protéine, y compris une glycoprotéine. Le variant de protéine à détecter peut être n'importe quelle protéine indiquant un trouble ou une maladie.
Le procédé selon l'invention peut être utilisé pour détecter un variant de protéine connu et/ou un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5
? BE2019/5561 d’hémoglobine. En conséquence, la séquence du variant de protéine à détecter doit être connue. Le procédé selon l'invention nécessite donc la sélection d’au moins un peptide ionisé de rapport masse/charge connu dérivé de la protéine. Si le variant détecté n'est pas connu, il n'est pas possible de déterminer le rapport masse/charge des peptides ionisés dérivés de la protéine. Ceci est également d'application lorsque le procédé selon l'invention porte simultanément ou non sur la détection d’au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou © d’'hémoglobine.
En sélectionnant au moins un peptide ionisé dont le rapport masse/charge est connu, seule une fenêtre limitée de rapports masse/charge doit être balayée. Ceci permet de réduire significativement la quantité de travail et d'analyse que l'opérateur doit effectuer. En particulier, en sélectionnant un seul peptide ionisé dont le rapport masse/charge est connu, il n’est pas nécessaire de déterminer un large spectre de particules ionisées présentant des rapports masse/charge différents et il n’est pas nécessaire de réaliser l’étape complexe et longue de l’analyse de déconvolution.
L'échantillon dans lequel le variant protéique est détecté peut être tout échantillon approprié, tel que des échantillons de sang, d'urine, de liquide céphalo-rachidien et de tissus. Le type d’échantillon dépendra du variant de protéine à détecter et/ou du peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine à détecter. Si le variant de protéine est un variant d'hémoglobine, l'échantillon est de préférence du sang. L'échantillon peut être traité par des méthodes standard pour éliminer tout contaminant indésirable, pour concentrer le variant de protéine à détecter, pour dénaturer la protéine et/ou pour placer l'échantillon sous une forme adaptée à la digestion des protéines.
La série définie de peptides est ionisée et au moins un peptide ionisé de rapport masse/charge connu caractéristique du variant de protéine et/ou du peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine est sélectionné. Les peptides peuvent être ionisés et les peptides ionisés peuvent être sélectionnés en utilisant n'importe quel procédé de spectrométrie de masse connu. Dans un mode de réalisation préféré, la spectrométrie de masse quadripolaire par ionisation par électro-spray est utilisée pour ioniser les peptides
LO BE2019/5561 et pour sélectionner les peptides ionisés.
La méthode d'ionisation par désorption laser assistée par matrice (MALDI) peut par exemple être utilisée.
La présente invention a été décrite en relation avec des modes de réalisations spécifiques, qui ont une valeur purement illustrative et ne doivent pas être considérés comme limitatifs.
D'une manière générale, il apparaîtra évident pour l’homme du métier que la présente invention n’est pas limitée aux exemples illustrés et/ou décrits ci-dessus.
L’usage des verbes « comprendre », « inclure », « comporter », ou toute autre variante, ainsi que leurs conjugaisons, ne peut en aucune façon exclure la présence d’éléments autres que ceux mentionnés.
L’usage de l’article indéfini « un », «une », ou de l’article défini «le», «la» ou « l’ », pour introduire un élément n’exclut pas la présence d’une pluralité de ces éléments.
Claims (12)
1. Procédé de détection, dans un échantillon biologique, d'au moins un variant de protéine connu et/ou d'au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine, le procédé comprenant les étapes suivantes : ( digestion de la protéine et/ou de l’'hémoglobine pour produire une série définie de peptides ; (ii) ionisation des peptides produits à l’étape (i) et sélection par spectrométrie de masse d’au moins un peptide ionisé de rapport masse/charge connu et indicatif dudit au moins un variant de protéine et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine ; (ii) fragmentation induite par collision dudit au moins un peptide ionisé et sélectionné à l’étape (ii) ; (iv) détection d’un ou de plusieurs fragments de rapport masse/charge connu obtenu(s) à l’étape (iii) pour confirmer la présence dudit aumoins un variant de protéine dans l'échantillon et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’'hémoglobine dans l'échantillon ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu’il comprend au moins une des étapes suivantes : a) une étape de validation de la détection dudit au moins un variant et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou © d'hémoglobine par mise en œuvre des étapes (ii) à (iv) au départ dun échantillon comprenant au moins un peptide connu caractéristique dudit au moins un variant et/ou comprenant au moins un peptide connu caractéristique des chaînes a et/ou B et/ou © d’'hémoglobine; ou b) une étape de validation de ladite étape (i) de digestion et de validation de la détection dudit au moins un variant et/ou dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou © d'hémoglobine par mise en œuvre des étapes (i) à (iv) au départ d’un échantillon comprenant au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue et/ou comprenant au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine et dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue.
2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ladite étape a) est effectuée au départ d’un échantillon dans lequel ledit au moins un peptide connu caractéristique dudit au moins un variant et/ou ledit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d’hémoglobine est un peptide synthétique.
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel ladite étape b) est effectuée au départ d’un échantillon dans lequel ladite au moins une protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et/ou porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 5 d'hémoglobine est une protéine synthétique.
4. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu’il comprend en outre une étape additionnelle de validation de ladite étape (i) de digestion de la protéine, ladite étape de validation additionnelle consistant en une digestion d’une protéine de référence dont la série de peptides à obtenir par digestion est préalablement connue, ladite protéine de référence étant une protéine différente de ladite protéine-contrôle porteuse dudit au moins un variant et/ou porteuse dudit au moins un peptide propre aux chaînes a et/ou B et/ou 6 d’'hémoglobine lorsque ladite étape b) est mise en œuvre.
5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel ladite protéine de référence est de l'hémoglobine native ou de l’'hémoglobine synthétique.
6. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit au moins un variant de protéine connu est un variant d’'hémoglobine.
7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel ledit variant d’hémoglobine est Hb S, Hb C, Hb DPuniab Hb OA, Hb Lepore ou Hb E.
8. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit échantillon biologique est un échantillon de sang, d’urine, de liquide céphalo-rachidien ou de tissu.
9. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite étape de digestion de la protéine est effectuée en utilisant une protéase, en particulier de la trypsine.
10.Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite étape d’ionisation des peptides et de sélection d’au moins un peptide ionisé est effectuée en utilisant un spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro-pulvérisation.
11.Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite étape de fragmentation induite par collision est effectuée en utilisant spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro-pulvérisation.
12.Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite étape de détection d’un ou de plusieurs fragments de rapport masse/charge connu est effectuée en utilisant spectromètre de masse de type triple quadripôle équipé d’une source d’ionisation par électro- pulvérisation.
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023089533A1 (fr) * | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Neuberg Anand Academy Of Laboratory Medicine Private Limited | Procédé de criblage et de confirmation basé sur un spectromètre de masse en tandem triple quadripôle pour analyser une protéine et ses variants |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| EP1844338A1 (fr) * | 2005-02-01 | 2007-10-17 | King's College London | Procédé de criblage |
| US8030089B2 (en) * | 2001-12-08 | 2011-10-04 | Micromass Uk Limited | Method of analyzing differential expression of proteins in proteomes by mass spectrometry |
| US8361740B2 (en) * | 2007-05-02 | 2013-01-29 | King's College London | Peptide standards |
-
2019
- 2019-08-28 BE BE20195561A patent/BE1027232B1/fr not_active IP Right Cessation
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