BE1032538B1 - Composition détergente alcaline à base de bactéries probiotiques pour la dégradation de salissures - Google Patents

Abstract

L’invention concerne une composition détergente alcaline, comprenant : entre 10e4 et 10e10 UFC /ml d’au moins une souche de Bacillus spp. sous forme sporulée, de 0.1 à 10% en masse de tensio-actif et de 60 à 100% en masse d’eau. La composition a un pH compris de 8 à 14. La composition détergente alcaline permet de réduire d’au moins 10% une salissure. L’invention porte également sur l’utilisation d’une telle composition détergente, ainsi qu’une méthode de dégraissage comprenant l’élimination de salissures.

Description

Composition détergente alcaline à base de bactéries probiotiques pour la dégradation de salissures

L’invention concerne le domaine du nettoyage durable, comprenant en particulier le nettoyage de surface, notamment des salissures grasses, à base de détergent alcalin contenant des micro-organismes dit probiotiques. Il s’agit ici de dégraisser, c’est-à-dire de nettoyer des surfaces sur lesquelles il y a des salissures à base par exemple de graisses, d’huiles.

Solution de l’invention

Les termes suivants utilisés pour décrire l’invention sont définis comme suit :

Une salissure est une substance indésirable qui est déposée sur une surface en altérant par exemple l’aspect ou la propreté de la surface.

Il existe différents types de salissures comme par exemple les salissures biologiques comme les moisissures, les salissures incrustées comme la rouille, les salissures dites non grasses comme les taches de vin ou encore les salissures dites grasses.

Les salissures grasses sont d’origine animale, végétale, minérale ou synthétique. Elles ont une nature hydrophobe et ont tendance à adhérer fortement aux surfaces, ce qui les rend difficiles à éliminer avec des méthodes de nettoyage standard utilisant une charge tensioactive classique.

On entend par surface, toute zone qui peut être nettoyée ou traitée pour éliminer les salissures. Elle se réfère à une surface solide comme par exemple, le verre, le métal, le plastique, le béton ou encore le marbre. Elle peut inclure des surfaces physiques telles que les sols comme les planchers, le linoléum, le vinyle, les carrelages, la surface de mobilier, les objets comme les murs, les portes, les surfaces vitrées comme les fenêtres, les surfaces comprenant des fibres textiles comme les vêtements, les tapis, la literie, les moguettes, les rideaux … qui peuvent présenter des salissures.

Nettoyer une surface vise à éliminer des salissures sur cette surface.

Le dégraissage est le nettoyage spécifique de salissures grasses. Le dégraissage est couramment utilisé dans différents environnements comme par exemple, les cuisines, les industries, l’hôtellerie, les ateliers mécaniques, les pièces à vivres, et d’autres domaines où des résidus gras peuvent s’accumuler comme par exemples les pièces mécaniques automobiles. Il est possible de dégraisser une surface avec par exemple des détergents.

Un détergent est une formulation conçue pour éliminer différents types de salissures tels que les huiles, les graisses, ou encore tout autres résidus sur une surface dure donnée. Il contribue ainsi à maintenir la propreté ou à préparer une surface. La plupart des détergents sont formulés à partir de tensio-actifs, de solvants, d’agents séquestrant, d’agents alcalins, de colorants, de parfums, ... Le choix du détergent dépend du type de salissures à éliminer. Le pH du détergent exerce une influence significative sur sa puissance nettoyante. Les détergents neutres ont généralement un pH compris entre 6 et 8. Ies détergents alcalins ou à pH alcalin possèdent un pH supérieur à 8.

Un détergent neutre est utilisé pour éliminer les salissures courantes légères à modérées comme par exemple les graisses déposées sur la vaisselle quotidienne.

Un détergent à pH alcalin agit en combinant des mécanismes chimiques et physiques, par exemple en rompant les liaisons esters des graisses ou des huiles afin de les rendre solubles dans l'eau ou d'autres solvants, facilitant ainsi leur élimination des surfaces à nettoyer.

Un détergent à pH alcalin, ou composition détergente alcaline, a tendance à être plus efficace pour éliminer les salissures grasses comme par exemple la graisse et les huiles par rapport à un détergent neutre. Ce type de détergent est généralement utilisé pour éliminer les salissures organiques et inorganiques qui adhèrent fortement à la surface comme par exemple les graisses cuites et les huiles de cuisson.

Les graisses et les huiles sont des composés lipophiles, comprenant généralement des liaisons esters. Lorsque l’on applique une composition détergente alcaline à une surface comprenant des composés lipophiles, les bases fortes de la composition peuvent notamment réagir avec la fonction ester du composé hydrophile. Contrairement à un composé neutre, une base forte peut rompre les liaisons esters d’un composé lipophile. L’hydrolyse des liaisons esters va permettre la formation de produits plus solubles dans l’eau et ainsi faciliter le nettoyage.

Les détergents à pH alcalin sont plus efficaces pour le dégraissage de salissures grasses et agissent plus rapidement. Cependant, ils peuvent être plus agressifs pour les surfaces et matériaux, et peuvent irriter la peau et/ ou les yeux.

Il est de plus en plus répandu d’utiliser des micro-organismes dit probiotiques dans les détergents. Dans le domaine de l’hygiène, les probiotiques sont des micro-organismes vivants utilisés dans les détergents pour favoriser l'équilibre microbiologique de l'environnement et une action durable/continue du nettoyant. Les micro- organismes probiotiques, appliqués sur des surfaces solides, ont la capacité de coloniser efficacement cette surface, créant ainsi une barrière protectrice en favorisant un équilibre microbien sain. Cette barrière tend ainsi à limiter la croissance de micro-organismes indésirables tels que les bactéries pathogènes.

Les micro-organismes probiotiques sont généralement sensibles aux changements de pH. Un environnement alcalin, rencontré dans les produits détergents à pH basique, peut compromettre leur survie et leur activité. Ia stabilisation des probiotiques dans des compositions détergentes alcalines représente un défi majeur. La structure, l'activité métabolique et la viabilité des probiotiques peuvent être altérées à pH élevé, limitant leur efficacité et leur utilisation dans ce domaine.

La demanderesse a imaginé une autre façon de nettoyer des surfaces dures afin d’éliminer des salissures en utilisant une composition détergente basique comprenant des spores de Bacillus non altérés par un pH alcalin, revivifiables lorsqu’ils sont déposés sur une surface, et notamment plus respectueux de l’utilisateur et de l’environnement.

La composition fonctionne dans des environnements alcalins,

contrairement aux détergents classiques utilisant des micro-organismes probiotiques, élargissant son champ d'application.

L’invention concerne une composition détergente alcaline, comprenant : - Entre 10° et 1020 UFC /ml de spore Bacillus spp., — de 0.1 à 10% en masse de tensio-actif, — au moins un agent alcalin, - de 60 à 100% en masse d’eau la composition ayant un pH compris de 8 à 14.

La composition a de préférence un pH compris de 8 à 14, de préférence de 8.5 à 13, de préférence encore de 9 à 12, ou de 10 à 14, ou 10.5 à 14. Le ou les agents alcalins permettent d’atteindre cette plage de pH.

De préférence, sous réserve que le pH soit égal ou inférieur à 10.5, la composition ne comprend pas plus de 25% (p/p) de carbonate de sodium ou de formes dissoutes de celui-ci.

On entend par agent tensio-actif, une substance amphiphile, c'est-à- dire qu'elle possède une partie hydrophile (attirant l'eau) et une partie hydrophobe (rejetant l'eau), qui réduit les tensions superficielles entre l’eau et une salissure permettant la formation de micelles. Cette structure lui permet d’être à l'interface entre l'eau et les salissures, les solubilisant et les dispersant dans l'eau. Ainsi, en augmentant la compatibilité eau-salissure, le nettoyage est facilité. Un agent tensio-actif peut être de différente nature comme par exemple un agent tensio-actif cationique, amphotère, anionique ou encore non ionique.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend au moins un agent tensio-actif non ionique.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend au moins un agent tensio-actif anionique.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend au moins un agent tensio-actif cationique.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend au moins un agent tensio-actif amphotère.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend au moins un 5 mélange d’agents tensio-actifs de nature différente.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio-actif anionique.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio-actif cationique.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio-actif amphotère.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif anionique et un agent tensio-actif cationique.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif anionique et un agent tensio-actif amphotère.

De préférence, la composition détergente comprend au moins un agent tensio-actif cationique et un agent tensio-actif amphotère.

On entend par agent alcalin, un composé ayant des propriétés basiques susceptibles de libérer des ions hydroxydes. Il permet ainsi de neutraliser les acides présents dans les salissures après saponification des liaisons esters. On entend par saponification des liaisons esters, le processus chimique par lequel les esters, composés chimiques courants dans les graisses et huiles, sont hydrolysés en présence d’une base forte.

Leur dissolution étant facilitée, il améliore l’efficacité du nettoyage. L’agent alcalin peut être par exemple une base conjuguée d’un acide organique ou inorganique, un phosphate, un polyphosphate et/ou une amine. Cet agent améliore l’action dégraissante de la composition. De préférence, la composition détergente alcaline selon l’invention comprend de 0.1 à 13% en masse d’au moins un agent alcalin.

Des exemples de bases conjuguées d’un acide sont le bicarbonate de sodium, le carbonate de sodium, citrate de sodium.

Des exemples de phosphates ou polyphosphates sont le tripolyphospate de sodium ou de potassium.

Des exemples d’amines sont la monoéthanolamine, la diéthanolamine ou la triéthanolamine.

La composition détergente alcaline contient des spores, c’est-à-dire des bactéries sous forme dormante. Seuls certains genres de bactéries ont la faculté de former des spores et notamment les bactéries du genre

Bacillus. Les spores bactériennes sont des structures de survie hautement résistantes qui se forment lorsque les conditions environnementales deviennent défavorables, telles que le manque de nutriments ou des températures trop chaudes ou trop froides. Bien que les spores soient résistantes à des conditions extrêmes, leur stabilité et donc leur activité métabolique peut varier en fonction du pH de leur milieu. Il est connu que les spores en milieu alcalin ont une faible stabilité.

De préférence, la composition détergente alcaline de l’invention comprend au moins une spore bactérienne Bacillus spp. non pathogène.

De préférence, les spores de Bacillus spp. sont sélectionnées parmi

B.subtilis, B.atrophaeus, B.thuringiensis, B.licheniformis,

B.paralicheniformis, B.megaterium, B.pumilus, B. halodurans, B. lentus,

B. coagulans, B.clausii, B.velezensis, Bacillus mojavensis et

B.amyloliquefaciens, afin de produire une large variété d’enzymes.

Les personnes qualifiées dans l’art apprécieront que de nombreuses variantes de réalisations, incluant toute espèce du genre Bacillus, sont applicables sans s’écarter des principes de l’invention, comme par exemple toute souche provenant des listes connues GRAS (Generally

Regarded As Safe) et/ou QPS (Qualified Presumption of Safety).

De préférence, la souche de spores de Bacillus est au moins l’une des souches de la liste comprenant Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus megaterium,

Bacillus velezensis et Bacillus pumilus.

La combinaison de deux Bacillus ou plus permet de maximiser la distribution dans le temps et la diversité des enzymes extra- cellulaires.

La sélection des spores se fait en fonction de besoins spécifiques et des applications prévues. Cette sélection de spores repose sur des critères tels que l’espèce, l’activité souhaitée, la stabilité, la résistance et la sécurité. Il est important de bien comprendre les besoins et les objectifs spécifiques de l'application pour choisir les spores appropriées.

La composition doit assurer la stabilité, i.e. la survie sans dégradation, de la spore durant plusieurs mois (stockage) tout en conservant toutes ses propriétés de germination lors de son utilisation.

De préférence, les spores sont sélectionnées pour leur capacité à générer des métabolites, de préférence des enzymes capables de dégrader des salissures. Ces enzymes sont par exemple des estérases, estérases lipases, lipases, capables de dégrader différentes sources de graisses pouvant être à l’origine de mauvaises odeurs, des hydroxylases (telles des alcanes, hydroxylases), des oxygénases (telles des dioxygénases, monooxygénases), des déshydrogénases (telles des alcools déshydrogénases, aldéhydes déshydrogénases) capables de dégrader les composés comme les hydrocarbures ou des structures moléculaires aromatiques ou aliphatiques par exemple. Contrairement à l’action d’enzymes isolées, les spores vont générer des enzymes en continu et avoir une efficacité sur le long terme.

On entend par métabolites, des molécules produites par le métabolisme cellulaire d’un organisme pour maintenir la vie. Les métabolites jouent un rôle essentiel dans les processus biologique de la spore, comme par exemple la croissance, la régulation de la germination.

De préférence, la composition détergente alcaline a une concentration en spore entre 104 et 1010 UFC/mL de spores, de préférence entre 10° et 10° UFC/mL de spores, encore de préférence entre 10° et 108 UFC/mL de spores.

La composition détergente alcaline permet de réduire une salissure d’au moins 10%, de préférence 20%, de préférence 30%, de préférence 40%, de préférence 50%, de préférence 60%, de préférence 70%, de préférence 80% ou de préférence 90% de salissures. Cette méthode de sélection peut être appliquée à un type de spores ou à un mélange. Différentes souches peuvent être utilisées. En effet des souches peuvent avoir une activité synergique.

On entend par réduction d’une salissure, la capacité de diminuer ou d’éliminer l’adhérence d’une salissure sur une surface. La réduction d’une salissure implique généralement la dissolution ou l’émulsion d’une salissure comme par exemple en formant des micelles avec des tensio-actifs. La réduction d’une salissure peut également impliquer la séparation de la surface de la salissure en réduisant son adhérence à ladite surface.

De préférence, dans les conditions favorables (présence de salissures), les spores de Bacillus vont s’activer pour devenir des formes végétatives capables de produire des enzymes lorsque la composition détergente alcaline est appliquée sur la surface.

De préférence, la composition détergente alcaline comprend en outre au moins un agent chélatant, et/ou un correcteur de pH, et/ou un conservateur, et/ou un parfum, et/ou un antimousse, et/ou un colorant, et/ou un solvant.

Par exemple une composition détergente alcaline, selon l’invention, peut comprendre en outre au moins : un agent alcalin et un parfum et un solvant. Une autre composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins : un agent chélatant, un correcteur pH, un agent alcalin, un conservateur, un parfum et un solvant. De préférence, la composition ne comprend pas plus de 25% (p/p) de carbonate de sodium ou de formes dissoutes de celui-ci, moins de 20%, moins de 10%, moins de 5%, pas de de carbonate de sodium ou de formes dissoutes de celui-ci.

Alternativement, sous réserve que le pH soit égal ou inférieur à 10.5, la composition ne comprend pas de sel de phosphate.

On entend par agent chélatant, un composé capable de fixer les ions présents dans les salissures. Ainsi, l’adhérence à la surface de la salissure est réduite, facilitant son nettoyage. Exemples d’agents chélatants : le diacétate de glutamate tétrasodique GLDA.

On entend par correcteur de pH, un composé ajouté afin d’ajuster ou maintenir le niveau pH de la composition détergente alcaline à un niveau optimal comme par exemple l’acide chlorhydrique, l’acide citrique, l’hydroxyde de sodium.

On entend par conservateur, un composé ajouté afin de contribuer à prévenir la croissance de micro-organismes indésirables dans la composition détergente alcaline. Il garantit la sécurité et la qualité de ladite composition.

On entend par antimousse, un composé ajouté afin d’empêcher la formation et le développement de mousse indésirable.

On entend par solvant, un liquide capable de dissoudre d’autres substances pour former une solution homogène. Le solvant participe à la dissolution des salissures et facilite la dispersion de la composition à travers la salissure. Le solvant peut être choisi pour sa capacité à dissoudre certaines salissures, comme par exemple des éthers de glycol ou des alcools.

De préférence, la composition détergente alcaline ne comprend pas de source de borate.

De préférence, la composition détergente alcaline est une solution aqueuse.

De préférence, la composition détergente alcaline est sous forme de gel.

L’invention également concerne une composition détergente alcaline, conditionnée sous forme sèche, comprenant : — Entre 10°5 et 2.10°11 UFC /g d’une souche de spore Bacillus spp., - de 0.1 à 10% en masse de tensio-acti£.

De préférence, la composition détergente alcaline sèche est sous forme de poudre ou de pastille à remettre en solution avant son utilisation.

L’invention est également relative à l’utilisation de la composition de l’invention pour réduire les salissures sur une surface, telle qu’une surface solide, comme par exemple une surface composée de verre, de métal, de plastique, de marbre et/ou une surface physique visible telle que les sols comme les planchers, les carrelages, la surface de mobiliers, les murs, les portes, les surfaces vitrées comme les fenêtres, les surfaces comprenant des fibres textiles comme les vêtements, les tapis, la literie, les moquettes, les rideaux.

Avantageusement, la composition détergente alcaline est également appliquée pour prévenir la contamination d’une surface par des micro- organismes indésirables.

On entend par micro-organismes indésirables, des micro-organismes considérés comme nuisibles, pathogènes ou potentiellement préjudiciables à la santé humaine ou à l’environnement. Ces micro- organismes sont ceux que l’on souhaite éliminer ou réduire sur une surface donnée pour des raisons d’hygiène et de sécurité.

Certaines souches de Bacillus produisent des enzymes qui dégradent les composés responsables des mauvaises odeurs comme par exemple les composés soufrés, les composés azotés ou encore les acides gras. Ainsi,

les protéases issues des Bacillus spp décomposent les protéines en peptides et acides aminés plus petits, moins odorants. Ou encore les lipases issues des Bacillus spp dégradent les lipides en acides gras et glycérol, réduisant l'odeur rance. L'efficacité des Bacillus spp pour la réduction des odeurs peut dépendre de la souche, de la quantité de spore utilisé et de l'application. Par exemple, la composition détergente est également appliquée sur une surface pour prévenir les mauvaises odeurs.

De préférence, la composition détergente alcaline est une composition aqueuse appliquée par pulvérisation ou par essuyage humide ou par application mécanisée.

On entend par essuyage humide, la répartition homogène d’une composition détergente sur une surface, par exemple lors du nettoyage d’une surface présentant des salissures. Un essuyage humide peut se faire manuellement comme par exemple à l’aide d’un chiffon, d’une éponge ou d’une lingette imprégnée.

On entend par application mécanisée, la répartition homogène d’une composition détergente alcaline sur une surface, par exemple lors du nettoyage d’une surface présentant des salissures. Une application mécanisée est automatisée comme par exemple en utilisant une auto- laveuse. Ces applications permettent de propager la composition détergente alcaline afin de couvrir l'ensemble des salissures de manière relativement homogène.

L’invention concerne également une méthode de nettoyage comprenant l’élimination de salissures, selon laquelle : on applique la composition de l’invention sur une salissure présente sur une surface.

De préférence, après application sur la surface à nettoyer, on laisse agir pendant un temps d’action défini afin de maximiser l’efficacité de l’élimination de la salissure, puis on essuie ou racle ou rince la surface.

On entend par racler une surface, l’action de retirer les résidus, les salissures ou les particules adhérentes à une surface à l’aide d’un outil spécifique ayant un bord lisse et/ou tranchant comme par exemple un outil muni d’une lame ou un racloir.

On entend par rincer une surface, l’action de retirer les résidus, les salissures ou les particules adhérentes à l’aide d’un liquide, comme par exemple de l’eau ou un solvant.

On entend par temps d’action défini, la durée pendant laquelle la composition détergente alcaline est laissée en contact avec la surface ou la salissure avant d’être rincée, essuyée ou raclée. Ce temps permet d’optimiser l’efficacité globale de la composition. Il ne s'agit pas nécessairement du temps nécessaire pour obtenir l'effet désiré, mais plutôt du temps requis pour maximiser l'efficacité globale de la composition.

Par exemple, la composition détergente alcaline est laissée sur la surface pendant au moins 1 seconde, de préférence 1 seconde à 1 minute, de préférence 10 secondes à 50 secondes, de préférence 20 secondes à 40 secondes.

Les personnes qualifiées dans l’art apprécieront que de nombreuses variantes de réalisations peuvent être mises en œuvre sans s’écarter des principes de l’invention.

Description détaillée

L’invention sera mieux comprise à l’aide de la description d’un mode de réalisation détaillé ci-dessous.

La figure 1 est un graphique de l’efficacité de l’action dégraissante de la composition détergente alcaline suivant les formulations 1 et 2.

La figure 2 est un graphique de la stabilité microbienne de la formulation 1 sur une période de 12 mois.

La figure 3 est un graphique de la stabilité microbienne de la formulation 2 sur une période de 12 mois.

La figure 4 est une photographie de quatre cultures microbiennes démontrant la colonisation des surfaces par des micro-organismes probiotiques de la composition selon l’invention.

Exemple 1 : Efficacité de dégraissage

L’efficacité de l’action dégraissante de compositions selon l’invention est mesurée à l’aide du protocole IKW « Recommendation for the Quality

Assessment of the Product Performance of Degreasing Power Cleaners (2017)». SOFW Journal 7+8/18. Vol. 144.

Deux compositions comprenant des spores de souches Bacillus spp., à une concentration de 107 UFC/mL, ont été préparées en mélangeant les ingrédients tels que repris dans le tableau 1.

FORMULE 1 FORMULE 2 ee mem a = eee alcali (base conjuguée d'acides a qe aem Te

EE

Tensio-actif (non ionique type alcool gras 1.9 me] 4 | 7

Tensio-actif (anionique type alkyl ether 1.9 me LT renom wep ee Ie ee

Tableau 1

L’efficacité des formules 1 et 2 a été testée comparativement à l’eau selon le protocole suivant :

un rouleau à peinture a été pré-sali avec 10 mL de salissure. Puis, à l’aide du rouleau, 2 ml de salissure ont été déposés et étendus de façon homogène, par croisement (2 fois), sur une surface propre de 8cmx26cm. 2ml de la formule considérée ont été déposés au centre de la surface salie. La composition a été laissée agir 5 minutes. La surface a été ensuite nettoyée à raison de 20 allers-retours par minute avec une éponge.

Le nombre d’aller-retour a été compté jusqu’à ce que la propreté du carreau soit entre 90% et 100%, en se basant sur une comparaison avec un nuancier. Même si le seuil de nettoyage de 90% n’est pas atteint, un maximum de 100 allers-retours est effectué. Le nombre d’allers- retours est consigné. Plus le nombre d’allers-retours est faible, plus le produit est performant. Les éponges, utilisées pour nettoyer, ont été lavées à la machine à laver trois fois sans détergent.

L’essai a été reproduit 5 fois pour chacune des formules. Le nombre de passage d’éponge nécessaire pour éliminer la salissure pour chaque essai a été détaillé dans le Tableau 2 ci-dessous ainsi que sur la figure 1.

Eau Formule 1 (F1) (nb | Formule 2 (F2) (nb me mes

Essai 1 100 (0% | 75 (nettoyage >90%) 15 (nettoyage >90%) bl

Essai 2 100 (0% | 75 (nettoyage >90%) 15 (nettoyage >90%) ee

Essai 3 100 (0% | 70 (nettoyage >90%) 15 (nettoyage >90%) (anse | ET EE

Essai 4 100 (0% | 75 (nettoyage >90%) 15 (nettoyage >90%) ee EEE

Essai 5 100 (0% | 75 (nettoyage >90%) 15 (nettoyage >90%)

Lana) EL

Tableau 2.

Exemple 2 : Stabilite microbienne

La stabilité microbienne des formules 1 et 2 a été établie par un dénombrement mensuel du nombre de micro-organismes présents dans les formules. La méthode de dénombrement suit la norme ISO 4833-1.

Les figures 2 et 3 illustrent la stabilité microbienne des formulations l et 2 sur 12 mois. Les formulations 1 et 2 utilisées sont celles définies dans l’exemple 1. Pour chaque formulation, le type de Bacillus et sa concentration varient.

Les 3 courbes représentent des compositions microbiennes différentes : - Bacillus amyloliquefaciens ; - Bacillus licheniformis ; — Blend de différentes souches de Bacillus parmi : B.subtilis,

B.atrophaeus, B.thuringiensis, B.licheniformis,

B.paralicheniformis, B.megaterium, B.pumilus, B. halodurans, B. lentus, B.coagulans, B.clausii, B.velezensis, Bacillus mojavensis et B.amyloliquefaciens.

Les différentes concentrations en spore de Bacillus spp utilisées dans ces exemples ne sont pas limitantes de l’invention. Les personnes qualifiées dans l’art apprécieront que de nombreuses variantes de réalisations peuvent être mises en œuvre sans s’écarter des principes de l’invention.

Comme illustré sur la figure 2 et 3, après 12 mois, la population microbienne des formulations 1 et 2 restent stables en UFC/mL. Malgré un milieu basique, la population en micro-organismes dans les formulations 1 et 2 est stable dans le temps.

Afin de calculer la stabilité des formules, une différence logarithmique en UFC/ml a été réalisée entre le dénombrement effectuée à 12 mois par rapport au dénombrement initial à TO : (log UFC/ml T12 mois | Formulation 1 Formulation 2

Bacillus 0.29 0.44 a

Bacillus 0.14 pe (OO

La faible variabilité retrouvée correspond à la reproductibilité de la méthode décrite au chapitre 10.1 de la norme ISO 4833-1 démontrant ainsi le caractère stable de la population microbienne au sein des formulations détergentes alcalines.

Exemple 3 : Colonisation des surfaces par les micro-organismes probiotiques contenus dans les compositions détergentes alcalines

La capacité des compositions de l’invention à coloniser une surface durablement après application a été testée selon le protocole suivant.

Deux zones de 30 cm x 30 cm ont été délimitées sur une surface plane.

La flore environnementale de ces deux zones a été prélevée. Ces prélèvements (I et II) ont été mis en culture dans un milieu nutritif type gélose TSA (Trypticase Soy Agar) avec neutralisants TLHTh (Tween®,

Lécithine, Histidine, Thiosulfate), connu de l’homme de l’art (VWR® ref 271114TI), et laissés incubés 24h à 37°C.

Puis, 2 mL de la composition selon l’invention ont été pulvérisés puis essuyés à l’aide d’un tissu microfibre sur chacune de ces deux zones.

Pour chaque zone, une formulation différente a été pulvérisée. La formule 1 a été pulvérisée sur la zone dont est issu le prélèvement de la flore environnementale I. La formule 2 a été pulvérisée sur la zone dont est issu le prélèvement de la flore environnementale II.

Respectivement, les compositions sont laissées agir 10 secondes sur les zones délimitées. Ensuite, la flore environnementale de chacune de ces zones nettoyées est à nouveau prélevée et mise en culture dans un milieu nutritif type gélose de contact (VWR ref 271114TI) et laissée incubée 24h à 37°C (III et IV).

Comme illustrée par la figure 4, la flore environnementale I et IT, après application de la composition suivant le protocole, est différente de la flore environnementale III et IV : la nature de la flore environnementale a changé. Les colonies de micro-organismes entre

I versus III et II versus IV ne sont pas les mêmes. Des colonies sont réduites voir ont été éliminées. Aussi, III et IV permettent de démontrer la viabilité cellulaire de la composition après son utilisation en montrant la formation d’une couche microbienne uniforme.

La composition de l’invention participe à la formation d’une barrière microbienne protectrice luttant contre la croissance de micro- organismes indésirables sur une surface ciblée.

Claims (31)

Revendications BE2024/5211

1. Composition détergente alcaline pour éliminer des salissures, comprenant : - Entre 10e et 10210 UFC /ml de spores Bacillus spp., — de 0.1 à 10% en masse de tensio-actif, - au moins un agent alcalin, — de 60 à 100% en masse d’eau, la composition ayant un pH compris de 9 à 14 ; ladite masse de tensio-actif comprenant au moins un agent tensio-actif non- jonique et un agent tensio-actif anionique ou comprenant au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio- actif amphotère ou comprenant au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio-actif cationique.

2. Composition détergente selon la revendication 1, dont le pH est compris de 9 à 12, ou de 10 à 14, ou de 10.5 à 14.

3. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif anionique.

4. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif cationique.

5. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif amphotère.

6. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio- actif anionique.

7. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio- actif cationique.

8. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif non-ionique et un agent tensio- actif amphotère.

9. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif anionique et un agent tensio-actif cationique.

10. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif anionique et un agent tensio-actif amphotère.

11. Composition détergente selon la revendication 1 ou 2, comprenant au moins un agent tensio-actif cationique et un agent tensio- actif amphotère.

12. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 11, laquelle permet de réduire au moins 10% d’une salissure.

13. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 12, dans laquelle la concentration en spores de Bacillus est entre 105 et 10° UFC/mL de spores, de préférence entre 10° et 10° UFC/mL de spores.

14. Composition détergente, selon l’une des revendications 1 à 13, dans laquelle les spores de Bacillus spp. sont sélectionnés parmi

B.subtilis, B.atrophaeus, B.thuringiensis, B.licheniformis,

B.paralicheniformis, B.megaterium, B.pumilus, B. halodurans, B. lentus, B.coagulans, B.clausii, B. velezensis, Bacillus mojavensis et/ou B.amyloliguefaciens.

15. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 14, dans laquelle les spores de Bacillus sont sélectionnés pour leur capacité à générer des enzymes capables de dégrader des salissures, telles due des lipases, des hydroxylases, des oxygénases et/ou des déshydrogénases.

16. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 15, comprenant en outre au moins un agent chélatant, un correcteur de pH, un conservateur, un parfum, un antimousse, un colorant et/ou un solvant.

17. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 16, comprenant de 0.1 à 13% en masse d’au moins un agent alcalin.

18. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 17, sous réserve que le pH soit égal ou inférieur à 10.5, ladite composition ne comprend pas plus de 25% (p/p) de carbonate de sodium ou de formes dissoutes de celui-ci.

19. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 18, ladite composition ne comprend pas plus de 25% (p/p) de sels de phosphate.

20. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 19, ne comprenant pas de de source de borate.

21. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 20, sous forme d’une solution aqueuse.

22. Composition détergente selon l’une des revendications 1 à 21, sous forme de gel.

23. Composition détergente, selon l’une des revendications 1 à 22, laquelle est conditionnée sous forme sèche.

24. Composition détergente selon la revendication 23, comprenant : - Entre 10°5 et 2.106811 UFC /g d’une souche de spore Bacillus SPP-, - De 0.1% à 10% en masse de tensio-actif.

25. Composition détergente selon l’une des revendications 23 à 24, laquelle est sous forme de poudre ou de pastille à remettre en solution avant son utilisation.

26. Utilisation d’une composition détergente alcaline selon l’une des revendications 1 à 25, pour réduire les salissures sur une surface, telle qu’une surface solide.

27. Utilisation d’une composition détergente alcaline selon l’une des revendications 1 à 25, pour prévenir la contamination d’une surface par des micro-organismes indésirables.

28. Utilisation selon l’une des revendications 26 à 27, où la composition détergente alcaline est une composition aqueuse appliquée par pulvérisation ou par essuyage humide ou par application mécanisée.

29. Méthode de nettoyage comprenant l’élimination de salissures, selon laquelle : on applique une composition détergente alcaline selon l’une des revendications 1 à 25 sur une salissure présente sur une surface.

30. Méthode de nettoyage selon la revendication 29, selon laquelle la composition détergente alcaline est laissée au contact avec la surface pendant un temps d’action défini, puis on essuie la surface ou on racle ou rince la surface.

31. Méthode de nettoyage selon la revendication 30, selon laquelle le temps d’action est d’au moins 1 seconde.