BE503300A - - Google Patents

Description

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  PERFECTIONNEMENTS   AUX   PROCEDES DE PRODUCTION DE COMPOSITIONS A BASE 
DE SULFATE   D'ACIDE   ALGINIQUE. 



   La présente invention se rapporte à la production de sulfate d'a- cide alginique., 
On a proposé antérieurement un procédé de production de sulfate d'acide alginique et de ses sels en vue de leur utilisation comme   anti-coa-   gulants du sang, Ce procédé comporte la précipitation et le séchage de l'aci- de alginique commercial, sa sulfatation sous des conditions excluant sensi- blement la présence d'eau avec un agent de   sulfatation,   telle que la chlorhy- drine   sulfurique,   en présence d'un produit   absorbant   l'acide tel que la py-   ridine,   et la récupération du sel désirée par exemple- du sel de sodium,   à   partir du mélange de   sulfatation.,   
L'acide alginique et ses dérivés sont des produits polymères,

   et comme la plupart de ces   produits,   contiennent des molécules d'un degré   dif-   férent de polymérisation,, Un produit d'un poids   moléculaire   moyen donné con- tient des constituants à poids   moléculaires   inférieur et supérieur qui sont présents en des rapports variables selon le produit de départ et selon les conditions de   ;sulfatation,,   Aussi, les termes-."acide alginique","sulfate   d'acide   alginique" ou leurs sels utilisés dans la présente   description,   com- prennent les assemblages de constituants moléculaires d'un degré variable de polymérisation. 



   Etant donné que des molécules de poids   moléculaires   différents semblent avoir des effets physiologiques différents des variations dans   la   répartition des poids moléculaires des lots obtenus se traduisent de temps à autre, par l'impossibilité d'utiliser ces lots lorsqu' on procède aux es- sais d'activité et de toxicité ce qui provient   d'un   contenu trop élevé en produit fortement polymérisé relativement plus toxique et en produit insuf-   fisamment   polymérisé relativement inactif. 



   La demanderesse a découvert que 13 on peut obtenir une constance 

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 grandement améliorée d'un produit ayant un rapport de dose thérapeutique par rapport   à   la dose toxique suffisant en mettant en oeuvre le procédé perfec- tionné conformeà l'invention,procédé qui permet la limitation et le con-   trôle   de la répartition des poids moléculaires. 



   Conformément à la présente invention, on intercale dans le pro- cédé une phase de dépolymérisation ou de dégradation partielle au moyen de la viscosité ou d'autres déterminations du poids moléculaire, par exemple par le taux de sédimentation ou la réduction du cuivre, et de préférence, le frac-   tionnement   du produit partiellement dépolymérisé par extraction sélective ou par précipitation au moyen de solvants appropriés;

   la demanderesse a également trouvé qu'il est avantageux d'intercaler une phase de dialyse dans le procé- dé, après la sulfatation, en vue d'éliminer les sels inorganiques solubles et le sulfate d'acide alginique de poids moléculaire   faible.   Dans un but de sim-   plification,   on utilise le terme "sulfate diacide alginique" dans le sens le plus large pour désigner à la fois l'ester sulfurique et ses sels solubles, sauf indication contraire. 



   On peut procéder à la   dépolymérisation   partielle avant ou après la sulfatation. 



   Bien que certains avantages de la présente invention peuvent être réalisés sans que l'on mette en oeuvre l'extraction, le fractionnement et la dialyse, on obtient les meilleurs résultats lorsqu'on met en oeuvre ces opérations. Le procédé préféré peut comprendre par conséquent les phases suivantes: 1 ) dépolymérisation partielle de l'acide alginique, 2 )   sulfa-   tation du produit dégradé ; 3 ) extraction;   4 )   dialyse; 5 ) fractionnement du sulfate d'acide alginique obtenu. 



   A titre de variante, on peut comme il est dit ci-dessus sulfa- ter   d' abord   l'acide alginique et   dépolymériser   partiellement ensuite le sul- fate d'acide alginique obtenu. 



   L'acide alginique peut être de la qualité   commestible   d'alginate de soude et ou être obtenu par dissolution dans environ 75 parties d'eau et par précipitation avec environ 1,6 partie d'acide chlorhydrique 1:1 suivi d'un lavage à   l'eau pour   réaliser   -un   pH de 2,5 à 3,0   -et-d'un   -séchage à   l'air-   
On peut   dépolymériser   cet acide au degré désiré par différents moyens, par exemple, en chauffant l'acide alginique commercial humide; en traitant les solutions aqueuses d'alginate de soude par de l'acide   ascorbi-   que et'en ajoutant lentement de l'eau oxygénée;

   en chauffant la suspension d'acide alginique dans l'acide formique à 90 % ou encore en chauffant au reflux de l'acide alginique humide en suspension dans la pyridine. Le pro- cédé préféré le plus simple consiste, cependant, à chauffer une suspension d'acide alginique dans l'eau (contenant de préférence une faible quantité de chlorure de calcium ou d'un autre agent d'activation dissous tel que l'acide chlorhydrique'ou l'acide borique) à l'ébullition ou à une tempéra- ture voisine, jusqu'à ce que la diminution désirée de la viscosité soit   obte-   nue.

   Une viscosité terminale satisfaisante est, par exemple comprise entre 1,3 et 1,6 centipoises pour une solution d'acide alginiqueà 1 % dans la soude caustique à   0,1   N à 30 C, 
Conformément à   l'invention,   on procède ensuite à la sulfatation de l'acide alginique partiellement   dépolymérisé.   On peut la réaliser en trai- tant une suspension d'acide alginique sec dans du méthanol, de préférence à une température inférieure,   c'est-à-dire   comprise entre -15  et   -35 C   avec de l'acide sulfurique concentré et en isolant le sulfate d'acide alginique, par exemple sous forme de sel de   sodium,   du mélange de sulfatation.

   On peut aussi introduire de   l'acide   alginique partiellement dépolymérisé dans un mélange refroidi de chlorhydrine sulfurique et de pyridine sèche, et isoler le sulfate d'acide alginique du mélange de sulfatation sous forme du sel soluble   désiré.   On peut, par exemple précipiter le sel   pyridinium   brut des   @   solutions aqueuses au moyen d'éthanol, et le dissoudre dans l'acétone   aqueu-   se; on peut ensuite ajuster la solution à un pH compris entre 7 et   9,   de préférence   8,5,  avec de la soude caustique, et précipiter le sel de sodium 

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 de l'ester sulfurique avec de l'éthanol.

   Les sels   d'ammonium   et de potassium sont solubles dans l'eau comme le sel de sodium, tandis que le sel de cal- cium est cependant moins   soluble.   Les sels de métaux lourds sont encore moins solubles. On peut préparer ces sels par une neutralisation appropriée ou par des procédés de double décomposition. 



   Le sel de sodium ainsi préparé contient un pourcentage plus fai- ble de molécules de poids moléculaire trop élevé et devient plus -uniforme de lot en lot qu'un produit qui est préparé 'sans que   l'on   ait recours à la dépolymérisation partielle. On peut,, cependant, améliorer encore l'uniformi- té, la répartition des poids moléculaires et des propriétés physiologiques en effectuant un fractionnement, par exemple par extraction fractionnée, ou par   précipitation     fractionnée.   On peut exécuter ces opérations de différentes manières.

   On peut,, par exemple, procéder à 1,9 extraction fractionnée en opé- rant la   digestion   du sel   pyridinium   brut à la température ambiante avec un solvant sélectif, tel que l'acétone aqueuseo Le produit désiré se dissout tandis qu'une certaine quantité diacide alginique non sulfaté et un peu de produit hautement polymérisé restent dans le résidu que   la on     élimine,,   Lors de la précipitation fractionnée, on peut ajouter de   l'acétone   par portions à une solution aqueuse diluée du sel de sodium du sulfate diacide alginique con- tenant de préférence du sel marin en dissolution; le premier précipité formé que   l'on   recueille séparément est plus toxique que les précipités ultérieurs. 



  On peut mélanger   1-'ester   sulfurique ou son sel de sodium avec une solution d'un sel approprié, telle qu'une solution à moitié saturée de phosphate diso- dique; une   fraction   plus toxique reste non dissoute et 1-'on peut récupérer la fraction désirée à partir de la solution. On a cependant constaté que le fractionnement le plus efficace est obtenu au moyen d'éthylène glycol aqueux, par exemple d'une solution d'éthylène glycol dans l'eau en proportion 9:1 contenant un sel dissous tel que le chlorure de sodium.

   Une telle solution ajoutée en quantités appropriées à une solution aqueuse   dun   sel soluble de le ester sulfurique précipite d'abord une fraction de poids moléculaire plus élevé et plus toxique, soit environ 10   %. du   total, que l'on isole et que   1?on   élimine;   1-'addition   ultérieure de   l'éthylène   glycol de précipitation préci- pite une fraction moyenne, soit environ 50 à 60 % du total que l'on   recueille,   le reste étant éliminée La fraction recueille possède le rapport anti-coagu-   lantg   toxicité désirable et contient extrêmement peu de produit de poids mo-   léculaire   très élevé ou très faible.

   On peut utiliser d'autres réactifs pour le   fractionnement,   Ces réactifs sont les composés aliphatiques inférieurs contenant de   1?oxygène,  tels que les alcools, les cétones et les éthers très solubles dans   3.'eau   et possédant un faible pouvoir dissolvant pour le   sulfate   d'acide alginique, On cite,   à   titre   d'exemples,   le   méthanol,   le   cellosolvee   le méthyl-cellosolve, le butanol et l'isopropanol. 



     A   titre de variante,   on   peut sulfater   d'abord   l'acide alginique et le   dépolymériser   ensuite   partiellement,,   ou dégrader l'ester sulfurique obtenu qui se présente généralement sous la forme d'un sel soluble, tel que le sel de sodium.

   On peut réaliser ceci en traitant une solution diluée aqueu- se par de   1-'acide   ascorbique et de   l'eau   oxygénée, ou en chauffant à l'auto- clave une solution diluée, par exemple de 1 à 2 % environ, à   120 C   pendant 1/2 heure à deux heures 
On fait avantageusement suivre l'opération de dégradation ci-des- sus   d'une   opération de fractionnement, comme il est dit   ci-dessus.  Au cours de la préparation, l'éthanol constitue l'agent de précipitation préféré des sels de l'ester sulfurique à partir de leurs solutions aqueuses, bien que l'on puisse utiliser d'autres alcools inférieurs,   1-acétone,   la   méthyl-éthyl   cétone., le dioxane et des corps analogues.

   On peut éliminer un excès des sels minéraux solubles   jusque degré   approprié par la dialyse. 



   Le produit final constitué par le sel de sodium du sulfate d'aci- de alginique est soumis à   l'essai   de son effet   anti-coagulant   sur des lapins et de son effet toxique sur des souris. Un produit satisfaisant répond à tous les tests imposés à "l'Héparine" par le Registre américain "New and Non-Offi- cial Remedies, de l'année 1949y page 620", sauf qu'il ne donne pas de réac- tion de   l'azote,   celui-ci ne faisant pas partie de la molécule.La viscosité 

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 du produit en solution aqueuse à 1 % est comprise de préférence entre 1,04 et 1,12 centipoises (mesurée avec une pipette de   Ostwald-Fenske  à 30 C). 



   La constitution chimique du produit préféré pour la mise en   oeu-   vre de la présente invention est celle du sel sodique d'un ester sulfurique de l'acide polyanhydro-mannuronique contenant au moins un reste d'acide sul- furique pour un reste diacide   mannuronique.   Sa teneur en soufre est approxi- mativement de 11 à   13 %   et sa teneur en sodium approximativement de   11,6   à 12,6 % lorsqu'on   1-'isole   d'une solution aqueuse ayant un pH d'environ 7,5;

   ainsi, par exemple, l'analyse d'un échantillon isolé ayant un pH de   7,5   est la suivantes 
Soufre 11,82 % 
Sodium g 11,63 % 
Ce taux d'analyse permet de supposer que le produit préféré que   l'on     isole   sous   un pH de 7,5     ou un pH   voisin, est constitué de manière pré- dominante par des molécules contenant des ponts lactoniques dans des restes d'aride mannuronique alternants, tels que par exemples 
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Cette formule correspond à une teneur de   Soufre :

   11,45 %    
Sodium g 12,32 % 
Lorsqu'on augmente   l'alcalinité   de la solution dont on a isolé le sel de l'ester sulfurique, par exemple par précipitation avec de l'éthanol ou par   congélation   et séchagela teneur en sodium du produit augmenter à un pH de 11,6,la teneur en sodium est   approximativement   de 15,5 %, ce qui cor- respond étroitement à celle   d'un   sel   disodique   dans lequel les ponts lacto- niques sont rompuso 
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 La teneur calculée en sodium pour cette formule est de   15,32   %.

   La teneur en soufre du produit isolé de cette solution plus alcaline   s'abaisse   légè- rement;ainsi, par exemple, un   échantillon   contient   Il,40 %   de   soufre.   Ce chiffre correspond à environ   0,7 %   de soufre de plus que la quantité cal- culée de 10,68 % correspondant   à   la   formule   ci-dessus.

   Dans le cas des sels mono et   disodiques   à la fois, la teneur en soufre trouvé est légèrement plus élevée que les teneurs calculées   d'après   les formules   ci-dessus.   On 

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 peut attribuer cette particularité à la présence probable d'un groupe de sulfate supplémentaire à l'une des extrémités   d'une   telle chaîne   polyméri-   sée. 



   On a représenté sur la Fig. 1 un schéma de circulation correspon- dant à un mode de mise en oeuvre du procédé, et sur   la.Fige 2   un schéma ana- logue correspondant   à   un autre mode de réalisation du procédé conforme à   l'invention.   Les deux schémas sont suffisamment explicites. Les cases rectan- gulaires représentent des produits et les cases arrondies des opérations. 



  Les traits pleins munis de flèches indiquent la circulation des différents matériaux. Les matériaux de départ pour la réalisation du procédé sont re- présentés à droite, et les matériaux produits sont représentés à gauche.Les pointillés représentent des variantes possibles du procédé. Les lignes en pointillés 1 et la représentent la dépolymérisation effectuée au moyen de l'acide ascorbique au lieu d'utiliser la chaleur; de même, les lignes en 
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 pointillés 2 et à représentent la dépolymérisation an-moyen d'acide formi-   quee   Les lignes en pointillés 3a et 3b représentent une variante possible d'après laquelle la   dépolymérisation   est effectuée après la sulfatation, d'autres détails étant représentés sur la Figo 2.

   Les lignes en pointillés 4 et 5 indiquent des variantes du procédé de fractionnement. 
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  V économie générale de la présente invention et l'essai des pro= duits obtenus seront mieux compris encore à   l'aide   des exemples de mise en oeuvre du procédé donnés ci-après à titre non limitatif de la portée de l'in- vent ion 
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 EXErviPLE 10- 
On soumet à   l'essai   de   l'acide   alginique obtenu à partir d'algi- ne,   comme   il est dit   ci-dessus,   pour déterminer s'il est approprié à être utilisé dans le procédé conforme à l'invention.

   Il doit contenir moins de 15 % de matière volatile et moins de 3 % de cendreso Sa solubilité doit être telle   qu'une   solution   à 1 % à un pH de 7,5   doit rester claire, ce qui prou- 
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 ve l'absence de polysaccharides non carboy.éeso On met en suspension des échantillons de l'acide alginique dans de   l'eau   et on les chauffe pendant des temps variables à   100 C   afin de déterminer le temps de chauffe nécessai- 
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 re pour réduire la viscosité à environ 1,3 centipoises pour une solution à 1 % dans NaOH 0, l N à 30C. 



   Dans la description qui va suivre, les parties sont exprimées en unités du système métrique. 



   En vue de la   dépolymérisation   partielle de 1-'acide alginique pour abaisser le poids   moléculaire   au taux désirée on met en suspension une partie en poids   diacide   alginique dans 7 parties en volume   d'eau   contenant 0905 parties en poids de chlorure de calcium et on agite le mélange à 100 C pendant le temps déterminé au préalable. On refroidit le mélange; on lui incorpore un même volume d'alcool éthylique dénaturé à 95 % et on récupère l'acide alginique par filtration. On le lave avec de l'acétone et on le chauffe dans une étuve à une température inférieure à 60 C.

   La teneur en humidité doit être inférieure   à     10 %   et la viscosité doit être de 1,3 à 
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 1,4 centipoiassdans une solution à 1 % de NAOH 0,1 N (évaluée en poids sec) et déterminée à l'aide de la pipette de Jsta71 ens7e à 30 C sous un pi de 7,0 
On place 19 parties en volume de pyridine (d'une qualité conte- 
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 nant moins de D9. d'eau) dans un récipient chemisé et ventilé avec de .9aote sec et on introduit 1e6 prîtes en volume de chlorhydrine sulfuri- que en refroidissant. La température étant infériemea 65 Cg on ajoute une partie en poids diacide alginique dégradé et on agite le mélange pendant 
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 une heure à 77C (? 1 ) 0 On verse le mélange chaud sur 35 parties en volu- me de glace pilée et on agite jusqu'à l'obtention d'une solution   claire.   



  On précipite ensuite le sel pyridinium brut du sulfate de l'acide   algini-   que en versant cette solution tout en agitant dans quatre fois son volume d'alcool éthylique dénaturéà 95%. On lave ensuite le précipité avec   1,5   
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 fois le volume de la solution aqueuse dét.anal et avec une quantité d'a- 

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 cétone correspondant à trois fois le volume de la solution aqueuse. On éli- mine l'excès d'acétone et le précipité humide est conservé en vase clos jus- qu'à ce que l'on ait déterminé la teneur en eau (teneur que l'on détermine par distillation avec du xylène) et la teneur en acétone (obtenue en dédui- sant la teneur en eau de la teneur totale en matière volatile).

   On procède ensuite à l'extraction du précipité avec 12 parties en volume pour 1 par- tie en poids de solides secs d'acétone diluée par   l'eau   à raison de 1:1 (volume/volume), en tenant compte des quantités d'acétone et d'eau déjà con- tenues dans le précipité. On effectue cette extraction en agitant vigoureuse- ment pendant deux heures à la température ambiante et en vase clos. 



   On soumet ensuite le résidu à l'essorage et on ajuste la solution qui surnage à un pH de   8,5,d9abord   avec des solutions de soude caustique à 50 %, et finalement des solutions à 5 %, en convertissant ainsi le sel pyri- dinium   en   sel de sodium. On mélange ensuite la solution avec quatre fois son volume d'un mélange éthanol-acétone en proportion 1:1   (volume/volume).   On filtre le précipité obtenu et on le dissout dans l'eau pour réaliser une so- lution à 10 %, approximativement. On dialyse cette solution pendant 16 heures dans un dialyseur à courant contraire, puis on la concentre à nouveau sous vide à une température inférieure à 50 C pour réaliser une concentration de 10 % environ.

   On agite cette solution pendant 30 minutes avec 250 gr par li- tre de carbone activé   ("Norit"   A) et on filtre le carbone en se servant d'un accélérateur de filtration, comme par exemple le "Super Cel". 



   On fait passer un échantillon de cette solution à travers un fil- tre bactériologique et on détermine la teneur en matières solides   à.     105 C.   



  On soumet la solution, selon son contenu en matières solides, à des essais d'activité d'anti-coagulation sur des lapins et de toxicité sur des souris. 



  Selon le résultat de ces essais, le lot de   produitsest   alors fractionné de la manière suivante. On agite la solution et on ajoute lentement une solution d'éthylène glycol dans l'eau à 9:1 (en volumes) saturée par le chlorure de sodium (teneur en NaCl 7,4 %). Pour déterminer la quantité de précipité, on prélève à des intervalles réguliers des échantillons; on les essore, on lave le précipité avec de l'éthanol et de   1-acétone   et on les sèche. On précipi- te d'abord environ la % des solides, c'est-à-dire le produit correspondant à un poids moléculaire trop élevé, et on les élimine. On précipite ensuite 50 % à 60 % de produits solides représentant la fraction intéressante, et le reste, qui correspond à du produit de poids moléculaire plus bas, est   éga-   lement éliminé.

   On dissout la fraction moyenne après 1?avoir recueillie par filtration dans de l'eau distillée pour constituer une solution à 10   %   en-   viron   et on la filtre sur des cartouches d'amiante extrêmement fines afin d'éliminer toutes les matières finement divisées, puis on précipite le sel de sodium du sulfate d'acide alginique par l'addition de 4 volumes d'alcool éthylique dénaturé à 95 %. On lave le précipité avec deux fois son volume d'éthanol aqueux et quatre fois avec chaque fois un volume d'acétone. On filtre l'acétone et on sèche le, produit dans une étuve à vapeur à 50  C pendant 16 heures. Le rendement est d'environ 35 gr pour 100 gr d'acide al- ginique dégradé. La teneur en humidité déterminée à 105  pendant 16 heures varie de 5 % à 12%.

   La teneur des échantillons que l'on utilise pour les es- sais d'activité, de toxicité et d'autres   essa,   est calculée en produit sec. 



   En utilisant ce procédé conforme à la présente invention, on peut produire le sel sodique du sulfate d'acide alginique présentant une régula- rité et une constance satisfaisantes dont la dose léthale à 50 % (LD50) est de 1200 à   1400   mg/kg de souris et qui présente un temps de coagulation élevé de 4 à 5 heures lorsqu'on l'utilise à des doses de 5mg/kg de lapins. 



    EXEMPLE   11.- un prépare à 25 C une solution contenant 0,25 % d'alginate de so- dium, du phosphate de soude N/15 comme tampon, de l'acide ascorbique N/100 et de l'eau oxygénée à 0,0017 N, dont les viscosités déterminées pour une série d'intervalles de temps sont les suivantes: 

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<tb> Temps <SEP> en <SEP> minutes <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 10
<tb> 
<tb> Viscosité <SEP> en <SEP> centipoises <SEP> 2,25 <SEP> 1,13 <SEP> 1,05
<tb> 
<tb> (approxi-
<tb> 
<tb> matir)
<tb> 
 Ces viscosités sont inférieures aux viscosités critiques données ci-dessus en raison de la plus faible concentration en acide alginique. L'acide al- ginique ainsi partiellement   dépolymérisé   est approprié à être sulfaté et traité ultérieurement selon le procédé de   l'exemple   1. 



    EXEMPLE   III 
On met en suspension 425 gr diacide alginique d'une viscosité correspondant à 3,9 centipoises (en solution à 0,4 % à un pH de 8 à 30 C) dans   2400   cm3 diacide formique à 90 % et on chauffe la suspension à 80 C pendant 90 minutes.On refroidit le mélange et on le soumet à l'essorage. 



  On lave le résidu deux fois avec de l'éthanol dénaturé à 50% et trois fois avec de l'éthanol dénaturé à 95 %, une fois avec de l'acétone et deux fois avec de l'éther. On le sèche sous vide à 60 C; sa viscosité à 0,4 % dans le phosphate de soude tampon N/15 (à un pH de 7 à 30 C) est de 1,15   centipoises.   



  Cet indice est compris dans les limites préférées indiquées ci-dessus pour une solution à 1 % dans NaOH 0,1 N. Ce produit est approprié pour la sulfa- tation et le traitement ultérieur selon le procédé de   :L'exemple   1. 



  EXEMPLE IV. - 
En vue   dessayer     .l'effet   anti-coagulant des produits conformes à l'invention obtenus selon l'exemple 1, on pratique sur des lapins des injec- tions intra-veineuses de 5 mg/kg vif après avoir déterminé les temps normaux de   coagulation   du sang de chaque animale On pratique ensuite des prélève- ments de sang de chaque animal à des intervalles successifs de 30 minutes et on note le temps nécessaire pour que la   coagulation   revienne au taux nor- mal.

   Pour déterminer   la-   toxicité en pratique des injections sur des souris à une dose correspondant à   1000,   1200 et 1400 mg/kg vif et on note la dose mortelle pour la moitié des animauxo 
Dans un essai type, la durée moyenne d'élévation du temps de   coa-   gulation, déterminée sur trois lapins est de 300 minutes; la dose léthale pour   50 %   de souris est de 1200 mg/kg vif.Dans un autre essai, la durée d'élévation du temps de.coagulation est de 270 minutes et la dose léthale pour 50 % est de   1400   mg/kg vif.

Claims (1)

1. RESUME.

   La présente invention est relative à un procédé de production d'une composition de sulfate diacide alginique, procédé comportant la sulfatation de l'acide alginique et caractérisé par les particularités suivantes prises isolément ou en combinaison: ' a) on intercale une phase de dépolymérisation partielle afin de limiter et de régler la répartition des poids moléculaires dans le produit; b) avant de procéder à la sulfatation on dépolymérise partielle- ment l'acide alginique à un point auquel une solution diluée aqueuse d'un de ses sels solubles présente une viscosité désirée, déterminée à l'avance, et on procède à la sulfatation de l'acide alginique partiellement dépolyméri- se;

   ') on effectue la dépolymérisation partielle en chauffant l'aci- de alginique en suspension aqueuse; d) on effectue la dépolymérisation partielle en traitant une so- <Desc/Clms Page number 8> lution aqueuse d'un sel métallique soluble d'acide alginique avec de l'aci de ascorbique et de l'eau oxygénée ; e) on effectue la dépolymérisation partielle en chauffant de l'a- cide alginique en suspension dans de l'acide formique concentré; f) avant la sulfatation, on dépolymérise partiellement l'acide alginique à un point auquel un de ses sels solubles présente en solution aqueuse diluée une viscosité désirée déterminée à l'avance; on isole l'aci- de alginique partiellement dépolymérisé; on sulfate l'acide alginique ain- si isolé pour le transformer en ester sulfurique;

   on forme un sel soluble dans l'eau de cet ester et on soumet ce sel à un fractionnement par préci- pitation sélective de sa solution aqueuse au moyen d'un liquide organique neutre de précipitation contenant de l'oxygène et miscible avec l'eau;on élimine une première fraction du précipité et on recueille une fraction mo- yenne, ce qui permet d'obtenir un sel qui ne contient que des quantités li- mitées de molécules constituées par un polymère hautement polymérisé et un autre très faiblement polymérisé; g) le sel ci-dessus est le sel de sodium et le liquide de préci- pitation sélectif est l'éthylène glycol aqueux contenant du chlorure de so- dium en dissolution; h) on met en suspension l'acide alginique dans l'eau;

   on chauffe la suspension obtenue jusqu'à ce qu'un échantillon d'acide alginique préle- vé présente la viscosité désirée déterminée d'avance sous la forme d'un sel soluble en solution aqueuse diluée ; onrefroidit la suspension; on sépare de cette suspension l'acide alginique-ainsi dépolymérisé partiellement ; on procède à la sulfatation de l'acide alginique séparé et on convertit le produit sulfaté en un sel soluble dans l'eau du sulfate d'acide alginique, grâce à quoi ledit sel contient des quantités limitées de molécules de po- lymère hautement polymérisé; i) on fractionne le sel soluble dans l'eau de l'ester sulfuri- que en le dissolvant dans l'eau ;

   onprécipite sélectivement des fractions successives de la solution aqùeuse par l'addition d'un liquide organique de précipitation miscible avec l'eau et contenant de l'oxygène en plusieurs portions ; on sépare et rejette une première fraction moins importante for- tement polymérisée et on recueille ensuite séparément une fraction inter- médiaire du sel soluble, grâce à quoi la fraction intermédiaire contient au maximum une faible quantité demolécules de polymère hautement polymérisé et de polymère faiblement polymérisé ; j) on effectue la sulfatation au moyen de chlorhydrine sulfuri- que en présence de pyridine, on précipite le sel pyridinium du sulfate d'a- cide alginique obtenu et on ¯1.'extrait sélectivement avec une quantité lui- mitée d'acétone aqueuse ;

   k) on suspend l'acide alginique dans environ 7 parties d'eau con- tenant 5 % de chlorure de calcium ; onchauffe la suspension au voisinage de 100 C jusqu'à ce qu'un échantillon de l'acide alginique prélevé de la sus- pension présente la. même viscosité que le sel de sodium (dans une solution aqueuse neutre à 1 % à 30 G) d'approximativementl,3 à 1,4 centipoises;

   on refroidit la suspension, on la mélange avec un volume égal d'éthanol, on filtre l'acide alginique précipité, on le lave avec de l'acétone et on le sèche on sulfate l'acide alginique séché en l'agitant dans un mélange con- stitué par de la pyridine sèche et de la chlorhydrine sulfurique à une tem- pérature comprise approximativement entre 65 et 80 C, on verse le mélange de sulfatation - dans de la glace pilée;on précipite et on sépare le sel pyridinium brut de l'ester sulfurique en ajoutant de l'éthanol à la solu- tion.aqueuse obtenue; on extrait le sel précipité avec de l'acétone aqueuse et on convertit le sel pyridinium dissous en sel de sodium en ajoutant de la soude caustique aqueuse à l'extrait, jusqu'à ce qu'il accuse un pH voi- <Desc/Clms Page number 9> sin de 8,5;

   on précipite et on sépare le sel de sodium au moyen d'un mélan- ge d'acétone et déthanol, on redissout le sel de sodium dans l'eau et on dialyse la solution; on concentre à nouveau la solution dialysée et on pré- cipite par fractionnement de la solution une faible fraction de produit hautement polymérisé en ajoutant à la solution une portion d'éthylène gly- col aqueux contenant du chlorure de sodium dissous, on précipite enfin par fractionnement de la solution et on recueille séparément en quantité majeure une fraction de produit ne contenant que des quantités restreintes de polymères élevés et de polymères inférieurs en ajoutant-a la solution une nouvelle portion dudit éthylène glycol de précipitation.