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La présente invention a pour objet la préparation de mélanges d'ami- no-acides pouvant être utilisés comme matières nutritives pour le corps humain .
Au cours des dernières années, l'emploi des amino-acides en théra- peutie n'a cessé de croître. Les amino-acides ont été administrés, en clini- que, pratiquement sous forme de préparations contenant tous les amino-aci- des essentiels. Les préparations d'amino-acides sont particulièrement emplo- yées lorsque, pour certaines raisons, toute administration par voie enté- raie ou perorale est exclue, les amino-acides étant alors administrés par voie parentérale. La protéine du corps peut être synthétisée si les amino- acides sont injectés par voie parentérale, ce qui équivaut au procédé normal, avec toutefois cette différence que, dans le premier cas, les amino-aoides pénètrent dans le sang en venant des intestins et que, dans le second cas, ils sont administrés directement par injection intraveineuse.
En thérapeutie, on utilise différents types d'amino-acides. On peut utiliser un mélange d'amino-acides purs, mais il est très coûteux d'i- soler, individuellement, les amino-acides purs, à tel point que ce type de préparation a été très limité. Habituellement, on utilise des préparations d'amino-acides, obtenues par hydrolyse de protéines telles¯ que la caséine.
On peut effectuer l'hydrolyse au moyen d'acides minéraux ou d'enzymes. Les amino-acides libres sont obtenus par hydrolyse acide, mais cette méthode présente des inconvénients, car l'amino-acide essentiel ou important au point de vue vital, le tryptophane, est détruit. Par conséquent, il doit être ajou- té au produit d'hydrolyse et le facteur de croissance, la strépogénine, est détruite. De plus, il est techniquement très difficile de retirer, du pro- duit, l'acide utilisé pour l'hydrolyse.
Par conséquent, il est préférable d'effectuer l'hydrolyse enzymique, qui permet d'obenir une préparation contenant des amino-acides libres et qui, en outre, donne toujours une certaine quantité de peptides, étant donné que l'hydrolyse enzymique n'est pas aussi complète que l'hydrolyse acide. Aucun amino-acide n'est détruit au cours de l'hydrolyse enzymique et le facteur de croissance, la strépogénine,reste intact. Il y a plusieurs types différents de préparations d'amino-acides, obtenues par hydrolyse enzymique. La plus grande différence qui existe entre ces différents types réside dans le degré d'hydrolyse, c'est-à-dire leurs teneurs en amino-acides libres. Plusieurs préparations d'amino-acides contiennent moins.de 50% d'amino-acides sous for- me libre, les amino-acides étant présents, en majeure partie, sous forme de peptides.
Parmi les préparations d'amino-acides disponibles et contenant moins de 50% d'amine-acides sous forme libre,-il existe certaines différences en ce qui concerne les teneurs en amino-acides libres ainsi que le degré de pureté. Certains porduits d'hydrolyse enzymiques de caséine sont utilisés sans purification complémentaire.
Dans d'autres cas, les préparations d'ami- no-acides obtenues par hydrolyse enzymique ', ont été soumises à un dialyse pour éliminer les constituants inopportuns à poids moléculaire élevé.' On a montré que, pour réduire les réactions secondaires, qui se produisent fré- quemment, il était important de procéder à cette élimination de matières pyrogènes àpoids moléculaire élevé, de protéine, non digérée et de pepti- des à poids moléculaire ' élevé, pouvant provoquer des réactions allergiques ou anaphylactiques.
On a observé qu'en chauffant une solution d'amino-acides et de pep- tides, préparée à partir des protéines obtenues dans le commerce, comme par exemple la caséine, la solution devenait plus sombre et l'on a constaté qui certains amino-acides importants au point de vue vital, par exemple le tryp- étaient détruits. On a trouvé que l'on pouvait éliminer ou ré- duire sensiblement cet assombrissement et cette destruction d'amino-acides
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utiles, en appliquant une méthode spéciale de purification pour les proté- ines employées comme produits de départ.
En conséquence, suivant la présente.invention, un procédé de pré- para'-ion d'un mélange d'amino-acides pouvant être utilisé comme matière nu= tritive, consiste à soumettre la protéine brute à une purification prélimi-- naire pour en retirer les graisses, les carbohydrates et autres produits de contamination. Le produit est soumis à une hydrolyse enzymique et le mélange d'amino-acides ainsi obtenu est ensuite soumis à une dialyse à température élevée. On peut effectuer la dialyse entre 70 C et le point d'ébullition du milieu, par exemple 82-90 C. Toutefois, on peut également l'effectuer à une température plus basse.
Les exemples suivants illustreront la présente invention.
EXEMPLE I.
A 1. 000 litres de lait écrémé, on ajoute de l'acide chlorhydrique 10 N, jusqu'à ce que l'on obtienne un degré pH de 4,7. On sépare le produit de précipitation obtenu, par filtration, puis on le lave avec 400 litres d' eau distillée. On dissout ensuite la caséine polluée dans 1.000 litres d'eau distillée en ajoutant de l'hydroxyde de sodium 10 N jusqu'à ce que l'on obtienne un degré pH de 8. Après filtratiun, on précipite à nouveau la ca- séine avec de l'acide chlorhydrique comme indiqué ci-avant et on lave le pro- 'duit de précipitation séparé par filtration, avec 400 litres d'eau distillée.
On répète deux fois ces opérations de dissolution et de précipitation. Pour obtenir un bon résultat, ces opérations doivent être effectuées dans des con- ditions aseptiques. On lave ensuite trois fois le produit de précipitation humide de la caséine avec de l'alcool éthylique absolu, en quantité de 200 litres, puis, on extrait la caséine en la faisant bouillir dans 200 litres d'alcool éthylique absolu. Après filtration, on répète à nouveau deux fois le procédé. Après avoir séché la préparation, on effectue une extrac- tion en faisant bouillir de l'éther diéthylique en quantités de 150 litres.
Après filtration, on répète à nouveau deux fois l'extraction à l'éther diéthy- lique. On obtient ainsi une caséine exempte de carbohydrates et de graisses, pouvant être utilisée pour la fabrication de ces préparations d'amino-acides.
Les préparations enzymiques devant être utilisées pour l'hydrolyse enzymique, sont purifiées par précipitation à l'acétone.
On effectue l'hydrolyse et la dialyse de la manière suivante :
On ajoute 50 kg de caséine purifiée à 1.000 litres d'eau distillée ; on ajoute de l'hydroxyde de sodium 10 N jusqu'à ce que l'on atteigne un pH de 7-8,5, puis, on ajoute 0,3 kg de pancréas en poudre traité à l'acétone et 0,1 kg d'une préparation de polypeptidase de la membrane muqueuse de l'in- testin, précipitée à l'acétone. On utilise du toluène comme agent de préser- vation. On laisse reposer le mélange à 37 C jusqu'à ce qu'il n'y ait plus d'accroissement d'azote du groupe amino.
On concentre la solution à environ 200 litres et on la soumet à une dialyse par une membrane semi-perméable à l'eau distillée, par exemple une membrane de cellulose régénérée, à une tem- pérature comprise entre 70 C et le point d'ébullition,, de préférence 83-90 C.
Le produit de dialyse est dilué à une concentration appropriée et il est filtré dans des conditions stériles. Après un essai biologique, la prépara- tion d'amino-acides obtenue peut être administrée au corps humain, comme ma- tière nutritive, par injection intraveineuse.
EXEMPLE II.
On dilue 500 litres de sérum ou de plasma.sanguin avec un volume égal d'eau, puis on ajoute de l'acide acétique jusqu'à ce que l'on obtienne un pH de 5. Tout en agitant, on chauffe la solution à 80 C. La protéine précipitée
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est séparée par filtration puis lavée avec d'importantes quantités d'eau distil- lée à 50 C. On effectue chaque ôpération de lavage en mettant la protéine en suspension dans quatre volumes d'eau distillée. On maintient la tempéra- ture à 50 C, toùt en agitant pendant deux heures. Après filtration, on dis- stout le produit de précipitation avec de l'hydroxyde de sodium comme décrit à l'exemple 1, puis on répète cinq fois les opérations de précipitation et de lavage.
On effectue ensuite l'extraction à l'alcool et à l'éther dié- thylique de la manière décrite à l'exemple I; puis on effectue l'hydrolyse et la dialyse comme décrit à l'exemple I également.
REVENDICATIONS.
1. Procédé de préparation d'un mélange d'amino-acides pouvant être utilisé comme matière nutritive, caractérisé en ce que l'on soumet la pro- téine brute à un traitement préliminaire pour en retirer les graisses, les carbohydrates et autres produits de contamination, on soumet la protéine purifiée ainsi obtenue à une hydrolyse enzymique, puis l'on soumet le pro- duit à une dialyse à température élevée.