BE564575A

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Publication number: BE564575A
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Description

La présente invention concerne les vaccins pour animaux domésti- ques et les méthodes pour leur préparation.

Il est bien connu de préparer les vaccins donnant un certain degré d'immunité aux maladies produites par certains micro-organismes en atté- nuant ou réduisant la virulence des organismes d'infèction. Par exemple, le bacille Calmette-Guerin (B.C.G.), qui est employé pour produire une ré- sistance à la tuberculose, est préparé de cultures de bacilles vivantes qui ont été atténués, et le vaccin de la fièvre jaune est un exemple de vaccin préparé d'un virus atténué. Jusqu'à présent cependant, il n'a pas été pos- sible de produire des vaccine qui donnent un certain degré d'immunité aux maladies produites par les parasites métazoaires.

Les maladies produites par ces parasites sont difficiles à guérir chez les animaux domestiques et présentent une importance économique considérable, non seulement à cause de la perte des animaux infectés mais également à cause de la nécessité de désinfestation des terres sur lesquelles ces animaux vivent,
L'un des objets de la présente invention est de former des vac- cins convenant pour l'administration orale qui donnent un certain degré d'immunité aux maladies produites par les endoparasites métazoaires qui sont pathogènes pour les animaux domestiques et ont une ou plusieurs formes larvaires migratoires.

Les nouveaux vaccins selon la présente invention conviennent pour l'administration orale aux animaux domestiques et comprennent un véhicule aqueux contenant un endoparasite métazoaire vivant mais atténué qui est pathogène pour les animaux domestiques et est un nématode, trématode ou cestode sous forme d'oeufs ou bien sous une forme pré-migratoire ou migra- toire insuffisamment mûre.

La présente invention fournit également une méthode pour la pro- duction de vaccins convenant pour l'administration orale aux animaux do- mestiques, dans laquelle un endoparasite métazoaire qui est pathogène peur les animaux domestiques et est un nématode, trématode ou cestode, sous for- me d'oeufs ou sous une forme pré-migratoire, ou migratoire insuffisamment mûre, est soumis à un rayonnement ionisant dans des conditions tèlles qu'il soit atténué.

Les organismes irradiés peuvent alors être mis en suspension dans un véhicule aqueux tel qu'une solution saline physiologique, devant servir de vaccin.

De préférence, on emploie des rayons X comme source du rayonne- ment ionisant. Cependant, d'autres sources de rayonnement ionisant peuvent être employées, telle que le cobalt 60. De préférence, le parasite est le Dictyocaulus viviparus.

Dans certains cas il peut être désirable de recueillir les para- sites dans une phase de leur cycle de vie qui n'est pas la phase désirée pour l'irradiation, et dans ce cas ils peuvent être conservés dans des con- ditions appropriées jusqu'à ce que la maturation en la phase 'désirée se soit produite.

Les exemples qui suivent illustrent l'invention.

Exemple 1.

On a recueilli des matières fécales contenant des larves de pre- mière phase de veaux infectés avec le Dictyocaulus viviparus et mis en culture pendant 8 jours en couches minces à la température ambiante en at- mosphère humide. Les larves ont alors atteint la troisième phase ou phase

infectieuse et ont été lavées de la surface avec de l'eau. La suspension ainsi obtenue fut filtrer à travers un tamis ayant 20 mailles au cm. et fut alors centrifugée à 1550 révolutions par minute pendant trois minutes. Le liquide surnageant fut enlevé par décantation et le.résidu fut dilué pour donner une suspension contenant environ 10.000 larves par ml.

Cette suspen- sion fut transférée dans une capsule Petri sur une épaisseur- de 1 cm. et soumise à l'irradiation dans le faisceau d'une machine à rayons X, en em- ployant des filtres externes consistant en 0,25 mm. de cuivre et 1,0 mm. d'aluminium (couche de mi-valeur- de 8 mm. en aluminium: environ 200 roent- gens par minute). L'irradiation fut continuée jusqu'à une dose de 40.000 roentgens mesurés à la surface de la suspension ait été rendue. La suspen- sion fut ensuite diluée avec de l'eau jusqu'à ce que chaque ml. renferme environ 250 larves par ml.

Il a été trouvé qu'un veau auquel une suspension de 1000 à 4000 larves atténuées préparée comme décrit ci-dessus a été administrée oralement montrait un dégré élevé de résistance à une dose jusque 4000 larves infec- tieuses de Dictyocaulus 50 à 60 jours après administration du vaccin.

Exemple 2a
L'exemple 1, fut répété, mais en supprimant les filtres de cuivre et aluminium. Des résultats similaires à ceux de l'exemple 1 furent obtenus.

Exemple 3.

Des matières fécales obtenues de vaches ou moutons infectés avec l'espèce Nematodirus et contenant les oeufs de telles espèces furent humi- difiées et mélangées avec du charbon de bois. Cette culture fut maintenue en atmosphère humide jusqu'à développement de larves infectieuses ét celles- ci furent ensuite séparées et irradiées avec des rayons X comme dans l'exemple 1 pour produire le degré d'atténuation requis. Les larves irradiées furent mises en suspension dans une solution saline physiologique.

Exemple 4
Des oeufs de Fasciola hepatica furent obtenus de la bile de vaches ou moutons et les miraoidia qui en furent obtenus furent utilisés pour infec- ter les escargots de l'espèce Limnaea truncatula. Les cercariae qui furent ensuite libérées des escargots furent recueillies et soumises à l'irradia- tion avec des rayons X comme dans l'exemple 1 pour produire le degré d'atté- nuation requis. Les cercariae atténuées furent mises en suspension dans une solution saline physiologique.

Exemple 5.

Des uterus d'Ascaris lumbricoides femelles furent macérés et le produit fut mélangé avec une solution saturée de sucrose. Les oeufs qui flottaient à la surface furent enlevés et mis en suspension dans une solu- tion aqueuse à 2% de formaline et incubés pendant 45 jours à une température de 30 Co Les oeufs furent exposés aux rayons X comme dans l'exemple 1 et furent ensuite mis en suspension dans l'eau pour l'administration orale.

Exemple 6.

Des matières fécales contenant des larves de première phase furent recueillies de veaux infectés avec le Dictyocaulus viviparus et mis en cul- ture pendant huit jours en couches minces à la température ambiante en at- mosphère humide. Les larves avaient alors atteint la troisième phase ou pha- se infectieuse et furent lavées de la surface avec de l'eau. La suspension ainsi obtenue fut filtrée à travers un tamis à 20 mailles par cm. et fut ensuite centrifugée à 1500 r.p.m. pendant trois minutes.

Le liquide surna-

geant fut enlevé par décantation et le résidu fut dilué,pour donner une sus- pension contenant environ 10.000 larves par ml Cette suspension fut soumi- se à l'irradiation dans un faisceau de cobalt 60 radic-actif et l'irradia- tion fut continuée jusqu'à obtention d'une dose de 40000 roentgens. La suspension fut ensuite diluée avec de l'eau jusqu'à ce que chaque ml. ren- fermât environ 20 larves.

Exemple 7.

Des escargots infectés avec Fasciola gigantica furent placés dans l'eau dans un récipient qui était revêtu de papier transparent cellulosique connu dans le commerce sous la marque de fabrique "cellophane" et une feuil- le de Cellophane fut placée sur la surface de l'eau. Des cercariae furent enlevées des escargots et enkystées sur la Cellophane. La Cellophane fut ensuite enlevée et conservée en atmosphère humide, dans l'obscurité, pendant quelques jours jusqu'à ce que les cercariae aient atteint la phase infec- tieuse. Ils furent ensuite soumis à l'irradiation dans le faisceau d'une machine à rayons X jusqu'à obtention d'une dose de 5000 roentgens. Les cer- cariae irradiées furent ensuite mises en suspension dans l'eau de telle manière que chaque ml. renfermât 10 cercariae.

Exemple 8.

De petits morceaux de segments gravides de Taenia saginata furent mis en solution saline physiologique afin de libérer les oeufs. Les oeufs. furent recueillis en faisant passer la suspension à travers un fin tamis qui permettait aux oeufs de passer à travers, mais retenait d'autres ma- tières solides. La suspension d'oeufs ainsi obtenue fut concentrée par cen- trifugation. La suspension concentrée fut soumis à l'irradiation dans le faisceau d'une machine à rayons X jusqu'à obtention d'une dose de 60.000 roentgens. La solution fut diluée avec de l'eau jusqu'à ce que chaque ml. renfermât environ 20.000 oeufs irradiés. Le produit était un vaccin conve- nant pour L'immunisation du bétail à l'égard de la cysticercose.

Exemple 9.

Des matières fécales obtenues de moutons infeotés avec Haemonchus contortus furent conservées pendant 14 jours à la température ambiante. On ajouta alors de l'eau aux matières fécales et le mélange fut laissé au re- pos pendant trois heures. Les larves présentes dans les matières fécales passèrent dans l'eau qui fut ensuite séparée' et centrifugée à 1500 r.p.m. pendant trois minutes. Le liquide surnageant fut enlevé par décantation et le résidu fut dilué pour donner une suspension renfermant environ 10.000 larves par ml. Les larves furent exposées aux rayons X comme dans l'exemple 1 et la suspension fut ensuite diluée avec de l'eau.

Le vaccin préparé selon l'exemple 1 a été administré à plus de mille veaux sans mauvais résultats. Les essais suivants montrent son emploi et ses avantages.

Essai 1.

Dans cet essai, 45 veaux Ayrshire qui avaient été élevés sans pa- rasites furent employés. Quinze veaux furent employés comme porteurs, 15 furent vaccinés avec le vaccin préparé comme décrit dans l'exemple 1, et 15 furent employés comme contrôles, mais 3 de ce dernier groupe furent éli- minés, par accident. Chaque animal d'un sous-groupe de 5 animaux porteurs reçut une dose de 4000 larves.infectieuses de Dictyocaulus viviparues et on les laissa paître dans un pâturage de 1,2 hectare pendant 35 jours. En dé- terminant les larves présentes dans les matières fécales de ces animaux on a estimé qu'il y avait une population larvaire minimum de pâturage de 140

par dmo carré. Le groupe d'animaux vaccinés reçut une dose du vaccin conte- nant 1000 larves atténuées 50 jours avant d'être mis en pâture.

Les animaux vaccinés, les contrôles et un autre sous-groupe de 10 porteurs, traités de la même manière que le premier sous-groupe, furent mis simultanément en pâture 35 jours après que le premier sous-groupe de porteurs avait été mis en pâtureo Dix des animaux de contrôle sont morts de bronchite parasitique entre le 27e et le 73e jour après exposition au pâturage infecté, mais 3 seulement des 15 animaux vaccinés sont morts. Quatre du groupeporteur sôntmorts également. Les conditions sévères auxquelles ces animaux furent soumis sont considérées comme étant fortement en excès par rapport à tout ce qui pour- rait être rencontré dans les conditions ordinaires d'élevage.

Essai 2.

On a employé 91 veaux répartis sur 5 fermes dont toutes étaient atteintes d'une sévère épidémie de bronchite parasitique. De ces animaux, 48 furent vaccinés et 43 furent laissés non-traités pour servir de contrôles.

Trois seulement des animaux vaccinés montrèrent des symptômes de bronchite parasitique, tandis que 27 des animaux non-traités contractaient la maladie.

L'essai 3 qui suit montre l'utilisation et les avantages du vaccin de l'exemple 8.

Essai 3.

Chaque animal d'un groupe de 8 veaux fut infecté avec 100.000 oeufs non-traités de Taenia saginata et le nombre de kystes de Cysticerous bovis trouvés à l'autopsie fut noté; la moyenne par animal était de 13,8.

Deux veaux furent traités avec le vaccin décrit dans l'exemple 8. Dans 1-'un des veaux on ne trouva à l'autopsie aucun kyste et dans l'autre on n'a trou- vé qu'un petit amas fibreux contenant un kyste dégénéré. Un anti-oorps pré- cipitant contre le cysticercus bovis put être détecté dans les sérùm des veaux auxquels le vaccin avait été administré.

Essai 4
Chaque mouton d'un group de cinq moutons a reçu une suspension contenant 10.000 larves de Haemonchus contortus. Après 35 jours les animaux furent tués et furent examinés quant à la présence des parasites. On trouva une moyenne de 3000 parasites adultes par animal. Chacun des deux animaux dans trois autres groupes reçut des suspensions de 10.000 larves qui avaient été atténuées par irradiation avec 40.000, 60. 000 et 100. 000 roentgens res- pectivement, et après les avoir tués l'examen montrait ce qui suit : 40.000 roentgens 250 parasites
600000 roentgens 250 parasites
1000000 roentgens 50 parasites
Tous les parasites trouvés dans les animaux qui avaient reçu des larves irradiées étaient insuffisamment mûrs.

Claims

REVENDICATIONS OU RESUME.

1. Vaccin convenant pour l'administration orale aux animaux domes- tiques, comprenant un véhicule aqueux contenant en endoparasite métazoaire vivant mais atténué qui est pathogène pour les animaux domestiques et est un nématode, trématode ou cestode sous forme d'oeufs ou bien sous une forme pré-migratoire ou migratoire insuffisamment mûre.

2. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est le Dictyocaulus vivîparus. <Desc/Clms Page number 5>

3. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est le Faciola gigantica 4. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est le Taenia saginata sous forme d'oeufs.

5. Vaccin tel que revendiqué sous la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est l'Ascaris lumbricoides.

6. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est le Fasciola hepatica.

7. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel. l'endoparasite métazoaire est le Nematodirus.

8. Vaccin tel que revendiqué dans la revendication 1, dans lequel l'endoparasite métazoaire est le Haemonchus contortus.

9. Méthode pour la production des vaccins revendiqués dans n'im- porte laquelle des revendications précédentes, dans laquelle l'endopara- site métazoaire sous forme d'oeufs ou une forme insuffisamment-mûre pré- migratoire ou migratoire est soumise à un rayonnement ionisant dans des con- ditions effectuant son atténuation.

10. Méthode telle que revendiquée dans la revendication 9, dans laquelle le rayonnement ionisant est constitué par des rayons X.

11. Méthode telle que revendiquée dans la revendication 9, dans laquelle le rayonnement ionisant est constitué par un rayonnement de cobalt 60.

12. Vaccin préparé par la méthode revendiquée dans n'importe la- quelle des revendications 9 à 11.