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Procédé de purification et de récupération de préparation d'amylases fongueuses.
La présente invention a pour objet un procédé de purifica- tion et de récupération d'amylases fongueuses.
Les préparations d'amylases, dérivant d'organismes des
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groupes 4 ore rplll= np:er et Aspergillus flavus-oryzae.sont d'un emploi très large dans l'industrie, par exemple dans la sacchari- fication enzymatique d'amidon partiellement hydrolysé, pour
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former des sirops contenant de la dextrose. Toutefci3,l'expé- rience a démontré que la formation de polymères de dextrose non- fermentables était suffisante pour limiter l'utilité de ces
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préparations, en particulier dans les procédés de préparation de dextrose cristalline pure, ainsi qu'on le constatera d'après la description ci-après.
Les préparations d'amylases d'origine microbiologique, en particulier celles dérivant d'organismes des groupes Asper- gillus niger et Aspergillus flavus-oryzae de l'espèce Aspergillus renferment trois types principaux d'activité enzymatique à propos de l'hydrolyse des polymères de glucose à ramification alpha-1,4. Ces trois types d'activité peuvent être classés comme suit : l'activité d'alpha-amylase, l'activité de glucamylase (maltase) et l'activité de transglucosidase.
L'activité d'alpha-amylase sur les pâtes d'amidon entraîne une importante réduction de la viscosité. En absence de fortes quantités d'activité de glucamylase (maltase), d'importantes quantités de maltose sont produites par l'activité d'alpha-amy- lase.
L'activité de glucamylase sur l'amidon et/ou la maltose donne lieu à la formation de dextrose. Ce type d'activité est également connu sous le nom d'activité de maltase, d'activité d'amyloglucosidase, d'activité glucogénique ou d'activité d'ami- donglucogenase.
L'activité de transglucosidase don:e lieu à la formation, en particulier à partir de maltc-se, de polynères dextrose non-fermentables, contenant des liaisons alpha-1, 6-glucosidi- ques. Pan et al (Arch, Biochem. Biophys. 42, 421-434 (1953) ont examiné l'activité de transglucosidase de différentes prépara- tions enzymatiques de laboratoire et industrielles et ils ont trouvé que les préparations d'amylases fongueuses avaient une forte action de transglucosidase. Pazur et French (J. Biol.
Chem. 196, 265-272(1952) ont montré que l'action la plus pro- bable de la transglucosidase était de transférer un radical
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glucosylique de la maltose à la position 6 d'une molécule de glucose ou à la position 6. de l'extrémité non-réductrice d'une molécule de maltose, ce qui donne lieu à la formation d'iso- maltose (6-(a-D-glucopyranosyl) -D-glucose) et de panose (4-(6-)
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a-D-glucopyranosyl)-4ha-D-gliacopyranosyl)-D-glucose) respec- tivement.
D'après la description ci-despu-- de l'activité de trans- glucosidase, on constate facilement que, parmi les facteurs limitant le rendement de dextrose pouvant être obtenue par saccharification d'amylase fongueuse de produits amylacés, il y a la resynthèse enzymatique de carbohydrates qui ne sont pas fermentables et qui ne sont pas hydrolysés en dextrose à un taux important par les enzymes présents dans la préparation enzymatique.
Comme décrit dans le brevet ? 567.859, la transglucosi- dase peut être retirée des préparations d'amylases fongueuses en milieu aqueux en l'adsorbant sur des minéraux argileux et en séparant le milieu du minéral argileux. Comme décrit dans ce brevet, lorsque la transglucosidase a été adsorbée sur le minéral argileux, il faut séparer la combinaison minéral agri- leux-transglucosidase du milieu contenant les amylasès fongueu- ses désirées. Sinon, lorsqu'on ajoute la préparation à un substrat d'amidon, la transglucosidase est libérée du minéral argileux, ce qui donne des rendements en dextrose aussi faibles ajouté que si le minéral argileux n'avait pas été/en premier lieu.
On sait que les enzymes sont adsorbés par de nombreux adsorbants. La pierre a adsorbé les enzymes d'hydrolyse d'amidon sur du carbone et des adsorbants argileux, dans des conditions telles que les enzymes d'hydrolyse d'amidon n'étaient plus hydrosolubles et ne pouvaient plus être élués des adsor- bants (voir brevet américain N 2. 717.852).
Contrairement à ces résultats, la présente invention
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prévoit un procédé de préparation d'un complexe enzyme d'hydro- lyse d'amidon-minéral argileux, dans lequel les enzymes désirés d'hydrolyse d'amidon (glucamylse et alcha-amylase) sont hydrosolubles et dans lequel un enzyme délétère (transglucosida empêchant d'obtenir des rendements élevés en dextrose, est rendu inactif. Ce procédé permet d'effectuer simultanément la purification des amylases fongueuses et de rendre sa trans- glucosidase inactive.
Les préparations d'amylases fongueuses peuvent être libérées de leur activité de transglucosidase par traitement avec un minéral argileux en solution aqueuse et les amylases fongueuses désirées, à savoir la glucamylase et l'alpha-amylase, peuvent être purifiées et récupérées par précipitation avec un solvant organique miscible à l'eau par un procédé ne nécessi- tant qu'une filtration, donnant ainsi un procédé de loin plus économique que ceux connus jusqu'à présent.
Plus particulière- ment, la présente invention prévoit un procédé de purification et de récupération de préparations d'amylases fongueuses, ce procédé consistant à mélanger ces préparations dans des milieux aqueux avec un minéral argileux, puis ajouter un solvant miscible à l'eau pour précipiter les enzymes d'hydrolyse d'amidon sur le minéral argileux sous forme hydrosoluble et enfin, séparer le mélange minéral argileux-enzyme obtenu du liquide.
La présente invention prévoit également un procédé d'hydrolyse d'amidon en dextrose, ce procédé consistant à traiter un amidon partiellement hydrolysé avec le produit récupéré du procédé défini ci-dessus.
Le procédé de la présente invention consiste tout d'abord à traiter une solution aqueuse d'amylases fongueuses avec un minéral argileux pour adsorber la transglucosidase, ensuite '(sans retirer le minéral argileux), ajouter un solvant organique miscible à l'eau pour précipiter les amylases fongueuses désirées
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et finalement, séparer la phase solide de la phase liquide, par exemple par filtration.
Le produit solide contient les amylases . fongueuses désirées ainsi que la transglucosidase rendue inactive*
On a trouvé, de façon étonnante, que la transglucosidase adsorbée sur un minéral argileux, pouvait être rendue inactive en la mettant en contact avec une solution aqueuse d'un solvant organique miscible à l'eau, alors que la cransglucosidaee est toujours adsorbée sur le minéral argileux, tandis que s'il n'est pas mis en contact avec le solvant, l'enzyme ne sera pas rendu inactif, mais il sera libéré sous forme active si la combinaison minéral argileux-transglucosidase est ajoutée à un substrat d'amidon.
C'est là ce qu'il y a de plus surprenant, car, lorsque la transglucosidase est précipitée avec les autres enzymes d'une préparation d'amylase fongueuse par addition d'un solvant miscible l'eau, aucun minéral argileux n'ayant été ajouté, la trans- glucosidase n'est pas rendue inctive par contact avec le sol- vant.
Le fit d'avoir trouvé que la transglucosidase pouvait être rendue inactive de la sorte, a conduit à un procédé très simplifié et beaucoup plus économique que ceux connus jusqu'à présent pour préparer un produit d'amylase fongueuse exempt d'activité de transglucosidase et capable de transformer l'amidon en dextrose avec des rendements sensiblement supérieurs à ceux obtenus par la préparation d'enzymes non-traités.
Lorsqu'on effectue la réaction, il faut d'abord mélanger le minéral argileux et la préparation enzymatique eu milieu aqueux, puis ajouter le soldant miscible à l'eau. Après avoir séparé la préparation amylase fongueuse-minéral argileux du li- quide, la préparation enzymatique peut être utilisée telle quelle ou sécnée d'une manière habituelle.
La préparation enzymatique peut être constituée, par exemple, de toute la liqueur de culture obtenue d'une croissance
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submergée d'an microorganisme formateur d'anylase, de la liqueur purifiée obtenue de la culture submergée, d'une suspension d'une préparation séchée eu. partiellement séchée, pouvant contenir du son, de l'amidon ou différents autres agents adultérants, utilisés dans la standardisation de la préparation d'amylase, ou d'une solution d'une préparation enzymatique complètement soluble.
En règle générale, ou peut utiliser n'importe quel minéral argileux comme adsorbant inactivateur de transglucosidase. Parmi un groupe de minéraux argileux, il y a les "silicates d'alumine".
Les minéraux argileux sont des silicates d'aluminium essentielle- ment aqueux, le magnésium ou le fer remplaçant entièrement ou partiellement l'aluminium dans certains minéraux, tandis que les alcalis ou alcalino-terreux sont présents comme constituants principaux dans d'autres. Parmi certains autres, il y a la terre foulon, la floridine, la sub-bentonite, l'argile réfractaire, le kaolin et l'argile figuline. Leur composition peut se situer entre le silicate de magnésium presque pur et le silicate d'aluminium; elle peut être également synthétisée à partir des oxydes ou sels composants ou par réaction de minéraux cristallins avec des réactifs chimiques. Pour de plus amples détails, on se référera au tableau ? 204, American Colloid Company (1945) et Industrial MInerals & Rocks, Amer.
Inst. Mining & Met.Eng.
(194S ed.) et Clay Mineralogy (R.E. Grim, McGraw Hill (1953)p. @ 18,19). La quantité de minéral argileux utilisé comme adsorbant pour l'enzyme dépend, dans une certaine mesure, du type de minéral; argileux utilisé, de la quantité de transglucosidase présente et de la quantité de matière étrangère présente. Pour la plupart des préparations enzymatiques, la quantité utilisée doit être d'au moins environ 1,0g/100 ml de préparation enzymatique.
La. teneur comparative en transglucosidase de certains complexes amylase fongueuse-minéral argileux, déterminée par la teneur en dextrose du produit d'hydrolyse d'amidon, est indiquée
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dans le tableau suivant :
Teneur comparative en transglucosidase de la
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<tb> Adsorbant <SEP> Quantité, <SEP> préparation <SEP> enzymatique.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
1. <SEP> Aucun <SEP> -- <SEP> 100
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 2. <SEP> VOLCLAY <SEP> (bento- <SEP> 1,0 <SEP> 60
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nite)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> . <SEP> VOLCIAY <SEP> 2,0 <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 4 <SEP> . <SEP> VOLCLAY <SEP> 5,0 <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 5. <SEP> FILTROL <SEP> (montmo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rillite) <SEP> 5,0 <SEP> 60
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 6. <SEP> TIXOTON <SEP> (montmo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rillite) <SEP> 5,0 <SEP> 40
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 7. <SEP> FLOREX <SEP> (flori-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> dine) <SEP> 2,0 <SEP> 60
<tb>
EMI7.2
6.
GRUTDITE (illite) 5,0 20
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<tb> S. <SEP> AICCO-SOL <SEP> (silicate
<tb>
<tb> de <SEP> magnésium)5,0 <SEP> 60
<tb>
EMI7.4
10.IilAG:ÓSOL (silicate de
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<tb> magnésium) <SEP> 2,0 <SEP> 40
<tb>
Les solvants miscibles à l'eau , pouvant être utilisés pour rendre la transglucosidase inactive dans le complexe trans- glucosidase-minéral argileux, sont ceux généralement utilisés pour précipiter les amylases d'une solution, comme par exemple l'acétone, l'éthanol ou le 2-propanol. Ces solvants donnent des préparations enzymes-minéral argileux, ayant les teneurs com- paratives suivantes en transglucosidase, lorsqu'on précipite des
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amylases fongueuses sur 2e," de VOIlJ:";'Y.
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<tb>
Teneur <SEP> comparative <SEP> en
<tb> transglucosidase <SEP> de <SEP> la
<tb> Solvant <SEP> Quantité <SEP> ,: <SEP> préparation <SEP> enzymatique.
<tb>
<tb>
1. <SEP> Aucun <SEP> -- <SEP> 100
<tb>
<tb> ,-. <SEP> Acétone <SEP> 60 <SEP> 60
<tb>
<tb> 3. <SEP> Ethanol <SEP> 60 <SEP> 40
<tb>
<tb> 4. <SEP> -propanol <SEP> 50 <SEP> 20
<tb>
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I.. 2-,-i-cpanol 60 0
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Bien qu'une certaine partie du solvant puisse être ajoutée avant ou en même temps que l'argile, il importe que le minéral argileux entre en contact aveo la préparation enzymatique avant le moment auquel la concentration de solvant précipite la trans- glucosidase. Le rapport solvant/eau doit être compris entre 1:1 et 2 :1, depréférence 1,5:1.
En règle générale, le pH de l'enzyme pendant le contact avec le minéral argileux doit être de 3,0 - 5,5 ou de la valeur de pH , à laquelle la transglucosidase est adsorbée par le minéral argileux. Pour la plupart des préparations d'amylases fongueuses, un pH de 3,8 -4,2 donnera la meilleure inactivation de trans- glucosidase aveo la récupération maximum de glucamylase et d'alpha -amylase.
Le procédé est particulièrement applicable aux préparation enzymatiques dérivant de membres du groupe Aspergillus niger (voir "A Manual of the Aspergilli" par Thom & Raper, Williams & Wilkins Company, 1945), comme par exemple de l'Aspergillus awamori, l'Aspergillus niger, l'Aspergillus phoenicia, l'Asper- gillus fonsecaeus,, l'Aspergillus carbonarius et l'Aspergillus luchuensis. Il est également applicable aux préparations enzymatiques dérivant d'organismes de l'espèce Rhizopus,comme par exemple le Rhizopus delemar.
Avant de donner les exemples, on décrira la détermination de la glucamylase.
Détermination de l'activité De glucamylaer: Le substrat est un produit d'hydrolyse acide d'un équivalent de dextrose de 15-18, séché par pulvérisation, de la fécule de céréales. On dissout ce produit dans de l'eau et on le dilue à 4,0 g de produit sec par 100 ml de solution. Avec une pipette, on introduit exac- tement 50 ml de la solution dans un ballon de 100 ml. On ajoute au ballon, 5,0 ml d'agent tampon 1,0 molaire d'acétate de sodium- un acide acétique à/pH de 4,3. On place le ballon dans un bain-
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marie à 60 C et après 10 minutes, on ajoute la quantité voulue de préparation enzymatique. 120 minutes exactement après l'ad- dition de la préparation enzymatique, on règle la solution à un point final de phénol-phtaléine avec de l'hydroxyde de sodium ln.
Ensuite, on refroidit la solution à la température ambiante et on la dilue au volume. On détermine une valeur de sucre ré- ducteur, calculée sous forme de dextrose, sur l'échantillon di- @ lué et sur un échantillon de contrôle, auquel on n'a pas ajouté de préparation enzymatique. L'activité de glucamylase est calculée comme suit :
S - B A = ¯¯¯¯
2 x E où A = Activité de glucamylase, unités par ml ou par gramme de préparation enzymatique.
S = Sucres réducteurs dans l'échantillon transformé d'en- zymes, grammes par 100 ml.
B = Sucres réduits dans l'échantillon de contrôle, grammes par 100 ml.
E = Quantité de préparation enzymatique utilisée, ml ou grammes.
La concentration de sucre réducteur dans l'échantillon transformé d'enzymes ne doit pas dépasser 1,0 g/ 100 ml.
Les exemples suivants sont donnas à titre d'illustrations.
EXEMPLE 1
Dans 1 litre de préparation aqueuse d'Aspergillus niger à un pH de 4,0, on a dispersé 20 g de VOLCLAY par agitation pendant environ 30 -minutes. Tout en continuant à agiter pendant environ 10 minutes, on a ajouté une proportion de 1,5 litre de 2-propanol à la dispersion. Les solides en suspension d'amylase fongueuse sur le minéral argileux ont été recueillis dans un filtre et l'on a écarté le produit de filtration. On a séché la
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préparation enzymatique à 25 C pendant 24 heures sous un vide de 25" (635 mm). La préparation enzymatique sécbée a été utilisée pour tranformer, en dextrose, un produit d'Lydrolyse de fécule de céréales, ayant un équivalent de dextrose de 16%, comme susdit.
On a ajouté une portion de la préparation enzymatique séchéem contenant 49 unités de glucamylase, à une portion de 1000 g de produit d'nydrolyse d'amidon à 35% de produit sec et à un équivalent de dextrose de 16. La transformation du produit d'hydrolyse à un équivalent de dextrose de 16 a été effectuée à 60 C, à un pH de 4,2-4,5, pendant 72 heuies. Après la transformation, on a analysé la produit d'hydrolyse sacchari- fié d'enzymes pour la teneur en dextrose.
On a répété le pro- cédé en utilisant des quantités variables de VOLCLAY. Les teneurs suivantes en dextrose des produits d'hydrolyse sont indiquées pour les préparations d'enzymes-VOLCIAY, préparées en utilisant 1 à 5% de VOLCLAY, caluclés sur le volume de la préparation aqueuse d'amylase fonceuse.
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<tb>
Teneur <SEP> en <SEP> dextrose <SEP> du
<tb>
<tb> Absorbant <SEP> Quantité, <SEP> % <SEP> produit <SEP> d'bydrolyse,% <SEP> de
<tb>
<tb>
<tb> 1. <SEP> Aucun <SEP> -- <SEP> 86
<tb>
<tb> 2. <SEP> VOLCLAY <SEP> 1,0 <SEP> 88
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> . <SEP> VOLCLAY <SEP> 2 <SEP> , <SEP> 0 <SEP> 91
<tb>
<tb>
<tb> 4 <SEP> . <SEP> VOLCLAY <SEP> 5 <SEP> , <SEP> 0 <SEP> 91
<tb>
EXEMPLE II
Dans 1 litre d'une préparation aqueuse d'Aspergillus niger à un pH de 4,0, on a disperé 20 g de Grundite en agitant pendant environ 30 minutes. On a ajouté une portion de 1,5 litre de 2-propanol à la dispersion, tout en continuant à agiter pendant 10 minutes. L'enzyme solide en suspension sur le minéral argi- lux a été recueilli dans un filtre et l'on a écarté le pro- duit de filtration.
On a séché la préparation enzymatique à 25 C pendant 24 heures, sous vide. On a utilisé la préparation : enzymatique séc@ée pour transformer, en dextrose, le produit
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d'hydrolyse de fécule de céréales à un équivalent de dextrose de 16, comme décrit dans le procédé de l'exemple précédent. @ D'autres minéraux argileux ont été utilisés dans le procédé ci-dessus. Les résultats de ces préparations pour transformer le produit d'hydrolyse de fécule de céréales en dextrose sont indiqués dans le tableau ci-après.
EMI11.1
<tb>
Teneur <SEP> en <SEP> dextrose
<tb>
<tb> du <SEP> produit <SEP> d'hydrro-
<tb>
<tb>
<tb> Minéral <SEP> argileux <SEP> Quantité.% <SEP> lyse.% <SEP> de <SEP> produit <SEP> sec
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 1 <SEP> . <SEP> Aucun <SEP> -- <SEP> 86
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 2. <SEP> GRUNDITE <SEP> 5,- <SEP> 90
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3. <SEP> MAGNESOL <SEP> 2,0 <SEP> 89
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 4. <SEP> TIXOTON <SEP> 5,0 <SEP> 89
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 5 <SEP> . <SEP> FILTROI <SEP> 5 <SEP> , <SEP> 0 <SEP> 88
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 6 <SEP> . <SEP> AICCO-SCL <SEP> 5 <SEP> , <SEP> 0 <SEP> 88
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 7 <SEP> .
<SEP> FICREX <SEP> 2,0 <SEP> 88
<tb>
EXEMPIE III
Dans 1 litre d'une préparation aqueuse d'Aspergillus niger à un pH de 4,0, on a dispersé 20 g de VOLCLAY en agitant pendant environ 30 minutes. On a ajouté une portion de 1,5 litre d'éthanol à la dispersion, tout en continuant à agiter pendant 10 minutes. On a recueilli les solides en suspension dans un filtre et on les a séchés comte décrit pour les autres préparations enzymatiques. On a obtenu une autre préparation enzymatique comme décrit ci-dessus, avec cette exception que l'on a employé de l'acétone comme solvant. On a utilisé ces prépara- tions pour transformer, en dextrcse, le produit d'hydrolyse de fécule de céréales à un équivalent de dextrose de 16, comme dé- crit pour le procédé de l'exemple I.
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<tb>
Teneur <SEP> en <SEP> dextrose <SEP> du
<tb> produit <SEP> d'hydrolyse,
<tb> Minéral <SEP> argileux <SEP> Solvant. <SEP> de <SEP> produit <SEP> sec.
<tb>
<tb>
1. <SEP> Aucun <SEP> -- <SEP> 86
<tb>
<tb> 2. <SEP> VOLCLAY <SEP> Ethanol <SEP> 89
<tb>
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<tb> 3. <SEP> VOLCLAY <SEP> Acétone <SEP> 88
<tb>
<tb> 4. <SEP> VOLCLAY <SEP> 2-propanol <SEP> 91
<tb>
EXEMPLE IV
Dans 1 litre de préparation aqueuse d'Aspergillus niger à un pH de 4,0, on a dispersé 20 g de VOLCLAY en agitant pendant environ 50 minutes. On a utilisé un volume égal de 2-propanol pour précipiter les amylases fongueuses sur le minéral argileux.
Après 10 minutes d'agitation continue, on a recueilli le solide d'enzymes-VOLCLAY dans un filtre et l'on a écarté le produit de filtration. On a séché la préparation et on l'a utilisée pour transformer, en dextrose à 90%, le produit d'hydrolyse de fécule de céréales à un équivalent de dextrose de 16.
EXEMPLE V
Dans 1 litre d'une préparation aqueuse d'Aspergillus de niger à un pH de 4,0, on a dispersé 20 g/VCLCLAY en agitant pendant environ 30 minutes. Tout en continuant à agiter pendant 10 minutes, on a ajouté une portion de 1,5 litre de 2-propanol.
On a recueilli le solide enzymes-VOLCLAY dans un filtre et l'on a écarté le produit de filtration. Le gâteau humide a été mis en suspension dans 1 litre d'eau, tout en agitant. On a recueilli le VOLCLAY dans un filtre et on l'a écarté. Le produit de filtration, contenant les enzymes d'hydrolyse d'amidon, a été analysé pour la glucamylase et l'on a trouvé qu'il comportait pratiquement toute l'activité initiale de glucamylase. On a utilisé une partie du produit de filtration, égale à 49 unités de glucamylase, pour transormer, en dextrose à 92% (base séche),le produit d'hydrolyse de fécule de céréales à un équivalent de dextrose de 16, par le procédé décrit à l'exemple I.
EXEMPLE VI
Dans 1 litre de préparation aqueuse d'Aspergillus niger (2000 unités de glucamylases) à un pH de 4,0, on a dispersé 20 g de VOLCLAY en agitant pendant environ 30 minutes. Tout en
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continuant à agiter pendant 10 minutes, on a ajouté une portion de 1,5 litre de 2-propanol à la dispersion.Cn a recueilli l'en- zyme en suspension sur du VCICIAY dans un filtre et on l'a séché à 25 C pendant 24 heures,sous un vide de 25 pouces (635 mm),pour obtenir 28 g d'une préparation enzymatique,ayant 1840 unités de glucamylase.
L'échantillon de 28 g de VOICIAY-enzyme a été mis en sus- pension dans 1 litre d'eau.On a réglé le pH à 4,0 et l'on a agi- té le mélange pendant 10 minutes. On a recueilli le produit in- soluble dans un filtre et on l'a écarté. Le produit de filtrati contenait 1800 unités d'activité de glucamylase,ce qui représente' une récupération de 90% de glucamylase de la préparation initiale aqueuse d'amylase fongueuse. Cette préparation enzymatique a transformé le produit d'hydrolyse d'amidon à un équivalent de dextrose de 16 en une dextrose à 92% (base sèche).
Les exemples V et VI montrent que De s enzymes provoquant l'hydrolyse de l'amidon en dextrose dans les complexes minéral- argileux-amylase fongueuse, sont présents sous forme hydroso- luble.
REVENDICATIONS
1.- Procédé de purification et de récupération de pré- parations d'amylases fongueuses,caractérisé en ce qu'on mélange ces préparations dans des milieux aqueux avec un minéral argi- leux,puis on ajoute un solvant miscible à l'eau, pour préci- piter les enzymes d'hydrolyse d'amidon sur le minéral argileux sous forme hydrosoluble et l'on sépare le mélange minéral argi- leux-enzymes obtenu du liquide.