BE625519A

BE625519A -

Info

Publication number: BE625519A
Authority: BE
Original assignee: Kostocanellis Demetre Jean
Priority date: 1962-11-30
Filing date: 1962-11-30
Publication date: 1963-05-30
Also published as: FR4050M; ES294081A1; NL301101A; BE640531A

Description


   <Desc/Clms Page number 1> 
 
 EMI1.1 
 



  PROCEDE POUR LA PREPAUT10t; D'UN PR08MT A USAGE ' 
 EMI1.2 
 la présente Invention as rapporte 4 vin progd" la préparation d'un produit à usage mar=ceuiffl 4$$tl< ê la th4rapobtie lïumtne et aèiraale par culture 4#s im sJJtott artifice ou naturel ou mixte'des wycètfls attaquant 1* rmit, des agrume* et preyoquaat .Mr po rri1 trv8  Le brevet belge 595.929 du 12. 4 , décrit l'obtention d'un corps métabolique par 14 culture d'un bzz IE3ollsot'ivhuai lososprf,od4s "i j appartenant à l' ordre des champignons, imparfaite ot A la taw4llo' de  Mea m<;

  $. été observo M liai 6 on ivec 1** 6tu4o4,l%47v" à liotoagion de or 'rer ue le $WA&Ut 'potw&ît, pçoff  fr .4#, /### 1* culture de deux eapàce? de Pe?)l6tUi a ("d"u p4n asymétrique et drurt''iicti.l. iaaovactci aur "U0 oili ru / . /nutritif s7n préaenee 

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 de Colletotricbum Gloloepor1otde. Pen.s. Le demandeur a ruintenant étudia davantage le problème de la souche et a pu constater que l'espèce de      
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 mycltte qui ne développe le plus danoce mélange de trois espèces de spores et même à une majorité presque totale est 
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 une certaine espèce de Pénicillium .novertic1l1'. 



   Descultures purea de chaque espèce ont été   effec-   tuée* et cela séparément sur chaque espèce. Après une longue 
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 étude, il a été constata que le Callatotri,chuat Glooosportoldet Pena et le Pénicillium Asymétrique, donnent un produit presque   semblable,   mais moins actif sur la   thérapeutie,   moins actif peur les tests biologiques reconnus comme tests pour les médi- caments anti-inflammatoires, et   avec 'certaines   différences physic o-chimique s. 



   Au contraire des autres espèces, il a été constaté 
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 que cette espèce précise de Pénicillium Monoverticl11 fournit un produit anti-inflammatoire très actif duquel l'action anti- phlogistique était prouvée et donnait entière satisfaction sur des cas   cliniques ,   
Les  testa   biologiques caractéristiques en labora- 
 EMI2.6 
 toire, pour des médicaments anti-rhumatismaux, ont également été positifs en utilisant le mime produit, cest-à-dire le produit provenant de ce Pénicillium J1onoverticillé.. 



   On exposera ci-après   les-   différents   effets     biolo-   giques du produit : 
 EMI2.7 
 ç:ritêr.. ' frpduitf. 



  Diminution dt 50 1 6Q # 10linopblle 1 ch<n 1. lapin  6 1. rat. 



  HalUton1da.. Bl$qu< la 4ilp.rlio 4u mélange bltu dvsra.Hy 7.un3daae traitement 4h aVànt injection LM. vrwrrwwr.,rr.w...rwW d<t 4 à 10 n. 

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 EMI3.1 
 



  "r-tèct (suite) Produit jouit*) - ....'" 
 EMI3.2 
 
<tb> Acide <SEP> ascorbique <SEP> diminue <SEP> .la <SEP> teneur <SEP> en
<tb> 
 
 EMI3.3 
 surrénal le n acide ascorbique dans la proportion de 44 "'., .. à la dose de 3Q mg/k. in. 



  ------.--"W¯-----"¯W¯---¯¯-.4¯-....¯--¯. , . , Analgésie ne possède pas chez le rat d'effet analgésique (Test * Woolt .MacD011aLIU., \ . ,..- .------.----------.¯---------41...-¯-.-..- Pouvoir amti- Accélèr* Xa disparition . Y ', f lf<" , phlogistique, de Itérythèm6e entraîné ,'. par tnjeet10n lJous...cuta.. '1 née de (:<)litoxi.... :' . -; ;1 . 



  - L ? -¯..---------¯.¯.¯¯......----..¯----.¯..¯ t ,, r'" t, 42'.t5I Ulcères gastrique. N'entraîne aucun ph'nG- -' ) ;. ' expérimentaux mène "lcérat1t:Jlu'trlue aux dosea 4e 5i f3 0/1, i.. , . ., bzz Mg/kg par Jour, pttn-  y* dant 6 goura. i # .*.,> (Voie intraveineuse)* '**"''  '-<f- w.r.mwaw.rrr.......,..,w.wnmr..nYwwtlwttlnwlwwsVwwrwwwwwww.wwrwrrTwll , r Toxicité *' Très peu çarquie "Ccae " h >,, , lafltr.llef Cg qbltll le co" 'Aii/ -.5,- baye; 1 450 Il'. par voie' . 3'z. intraveineuse. , '''vaf #;, il t'l"(1 ""h 
 EMI3.4 
 , I.)t ).1; Un* aut... conclusion do l"étiQ4t d4 'ai.1111uabt xyz:. 



  \ '1ït;I-.-"" )lono'hrtiQ1116 *et qu'on peut 1  cultiver 4% qu'on peut J.V9}4 " son *04u1t métt1 ol1<iUt ln1S 1* oo-*4stenoo 4u pénicillium . rdu aiicu ' oien 'éni,ai * t -1 4"'que tut 4 1 4Uçf:o""J'k." P'IU,.. .t ,> Sur l'étui  mm 4. ... 1 J.'.$pt.oi de et Pê11i1:4Ui- ' fi" ' . 



  } '.'..'''' ' - ' f '' "=#r , )(o110¯"'t18111' <ï 4 fowpifc l  pi*< || f#4s* t p4rt1."1 dtt .';,:.. 



  804al; brevet, 91 * pu constater !.tt', 4. +1:1Il.'Jf"'. â.' 'sPO'4 d. Pfn1c1111u My$ctt9$U. '4 4tI!,w> 4u l)  t ; : dt vu* formes m.lcG1oLU.'h ###';# te produit stto34<;tM de 9.,. 4utr'es tspèc<t<f  t \ pttu intéressant du point. 4', v\w \<htri4pu.ÍtqJj. d#9 *fftcti*snf , rhumatismales di oit laboratoire, 1 zttÍllu1t3.to des tebtç. ' sont pas très concluant a, On donnera ci-après :m;i1nt.nant ,la proscription ' a,'t0i,qul1 du P1.4' .. .'tl n0y,rtto UJ,,- %ut 'ki."r , ,"'. prô* j -duit'.faisant ltobjet du p.r6t;ent ,''\Tttf 4 ,i 

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Colonie étendue, veloutée, verte, vert-jaune terne. 



   Revers rouge brun léger de couleur chair. 



  Conidiophores issus directement dû-milieu, lisses, généralement moins de 100 microns de long, en moyenne 60-70 microns, 2,5à 3 microns de diamètre, le plus souvent avec deux cloisons. 



  Il est terminé par une vésicule relativement importante pour un Pénicillium, on général sphérique, de 7 à 8 microns de dia-   mètre,   exceptionnellement ovale :10 x 8 microns. 
 EMI4.1 
 



  Il ny a pas de fovt-cell. StricteJ1JElnt l11onovrticUl.. 



    Phialides   très nombreuses en pinceau compact, parallèles, de e à 10 microns de long. 
 EMI4.2 
 



  Cc.niJiea sphériques de 2 A 3 microns de diamètre, finement ru- guou3es, en longues cl!nA8 en colonne. 



  Cette souche tient des caractères des séries 'R:;ilNT:.t3 oc Il.:PI,!CA T1J:l., 
Le milieu nutritif   artificiel,   en surface ou en profondeur   (cathode   industrielle) peut être celui mentionné dans le brevet belge   595.929.   
 EMI4.3 
 aaccharost, . o # * e e * 46,- 
 EMI4.4 
 
<tb> acide <SEP> tartrique <SEP> . <SEP> 2,6
<tb> nitrate <SEP> d'amonium <SEP> 2,6
<tb> 
 
 EMI4.5 
 phosphate dlmmonium., t .. 0,4 
 EMI4.6 
 
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 0,4 <SEP> g
<tb> 
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 0,25 <SEP> g <SEP> 
<tb> 
<tb> sulfate <SEP> d'amonium <SEP> 0,17 <SEP> g
<tb> 
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> zinc <SEP> ...... <SEP> 0,025 <SEP> g
<tb> sulfate <SEP> ferreux <SEP> 0,025
<tb> 
<tb> 
<tb> silicate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> , <SEP> .

   <SEP> , <SEP> 0,025 <SEP> g
<tb> 
<tb> acide <SEP> ascorbique <SEP> , <SEP> ... <SEP> , <SEP> 0,10 <SEP> g
<tb> 
 
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 eau distillée .. .,, i.000,- g 
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 Un tel milieu peut 4tre préparé par simple àbaolu - tion de ses composants et être stér111ê ivant son utilisation# On peut évidemment apporter plusieurs petits changements A 

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 cette 008po.1t1¯. \kA respectant t=jour4 sa base et son caractère acide* La culture en surface  Effectue dans des grand   loott.. 'de Rouep où on peut étudier le syo4te.

   On * déjà donné la description microscopie-* du cyobt,* on va   maintenant     donner   sa description   pendant   l'évo- 
 EMI5.2 
 , lotion de la culture an surface *> la méthode d'extraction du produit .'tabo1qu., dont l'obtention *et, 4 la base du prisant.,. brevet* 
On   place   le milieu   nutritif     (dans     les     bottes   de 
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 Roux at4ril ) t une prodondeur de 2 ce environ,, Puis on 1noc1A'" le la   souche   sur le milieu   stérilisé*   Deux A trois Jours   après   environ, on   remarque   des petites pointes   ouatées     réparties     sur.

   '   la   surface   du   ailieu   nutritif. Après   quelques     jour.,     ces   poin- 
 EMI5.4 
 tes ouat'..... t.Uarg1auntf et finissent par former un tissu blanc,   Quelques   jours après encore,

     sur   ce   tissu   qui    et     devenu .   
 EMI5.5 
 plus épais f on remarque le commencement de la tporifieation parc* qu '0* peut distinguer den parties vertes qui f1nalecNn1f   forment   un vrai-'tapie vert qui   recouvre   toute la   surface   du   stroma..     Cette     évolution   du   mycète est     suivi    d'un   changement   
 EMI5.6 
 du Ph.

   L'act,'du r imr9t en Ph acide, reste plus ou moins   blanc ;    quand   le Ph a atteint sa valeur la plus   approchant*   du 
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 neutre, ou la neutre 1U14.., ou 'N'il. passé la phase alca- lino alors le   revers   prend une couleur jaunâtre ou Jaune parfois   presque brun   clair et cela sur   culture     en     surface   dans le milieu   tout noue     avons   parlé   ci-dessus*   Au   moment ou   l'ex- 
 EMI5.8 
 milieu nutritif eat presque neutre (pi o - 61/2), on le filtre, on le M61ahît A du charbon et de la terre tnfuaoire en l'.oi41. , fiant (d'habitude par de l'acide  hlorhydr|qu*î pour reteny le colorant etc ).t<   ' -;

   i t> ' ' -' .\;:,. 4.-;''.1 Apr4a une attente de quelques heure* on filtre 1.; .':t,;   nouveau mélange.    



   Le liquida   filtre, sort   pur et   décolore ;     on   le 
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 réduit par ébullition pour le concentrer, de préférence à vide   . 

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 d'a peu près 6 fois sou volume. On.obtient la précipitation du produit métabolique, faisant l'objet du présent brevet, en ajoutant une quantité de   solvant   miscible à   l'eau,   égale à deux fois le volume de l'ex-milies Nutritif concentré. 



   Exemples de solvants pouvant être employés ; acétone (diméthy-   lique),   alcool éthylique, alcool méthylique, On peut utiliser tout autre solvant à condition qu'il soit miscible à léau et dans lequel le produit soit insoluble. 



   On recueille le produit et on le lave à l'acétone sec anhydre jusqu'à ce que toute trace d'eau suit   disparue ;   on obtient de cette façon un produit sec qui ne forme pas de masses   collantes.   



   On peut également extraire un produit de   Il*%-     Milieu   nutritif (décoloré, purifié, concentrée en l'alcalini- sant ; on remarque alors la précipitation de flocons ouateux qui donnent un sédiment épais. Ce produit provient de la dé- composition du produit original quf fait partie du présent brevet. Ce produit a tout 4 fait d'autres caractéristiques} par exemple  il   est insoluble dans   l'eau,     il :1  lire couleur légèrement brune, il   n'est   pas collant, etc.

   Cependant ce produit, même   ccame   décomposant, possède des qualités   antiph-     logistiques.     :.rais   beauccup   moins   que le produit   original*   
Industriellement,   la   méthode est plus   intéressant*     lorsqu'on   cultive la aouche en profondeur et presque en anaérobie avec le mélangeur tournant, par exemple, à une vitesse par   exem-   ple de 300 à 500 t M environ , en   général   cette vitesse est fonction   de   la forme et des dimensions de la cuve et de la quanti- té du milieu nutritif.

   La température peut être considérée   ces -   me convenable à une chaleur d'environ 22  c., sans dire qu'une température beaucoup plus élevée ou plus   basse   empécherait le développement du mycète et son métabolisme. ' 
Dans la méthode de   culture   en profondeur on en remarque certainement pas la formation du stromas comme en      

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 aurface. 
 EMI7.1 
 



  Tous les caractères mycologiquoa du mycète sent repartis en-yot:J.$ea particules dana la masse liquide du milieu nutritif, suite au mouvement continuel du   mélangeur,     , Dans   la méthode en   profondeur,   l'extraction du produit   Métabolique   est la   mime   que celle   qui a   été déjà   donné   plus Maut, à propos de la culture en surface. 



   -- Le produit faisant l'objet du présent brevet, est obtenu à   l'état     d'une   poudre   blanchâtre.   



     -/Il   est soluble dans   'eau.   
 EMI7.2 
 



  II est insoluble dans tous les solvants orr,an1 'lU1$ qui ont été étudies ; par exemple i acétone diméUtylique-, al- cool éthylique, alcool méthylique, alcool buthyl iqua, ither chloroformes êther pétrolique. 



  ##  Sa solution aqueuse a un aspect co11 :1!1 t moU3S& par agitation. 



  "*' L86.,olut1ons aqueuses d  produit sont in3tubi*3 nr1;.prt. quel jPht 4près Ma ",rt<\1n temps, on N#rqu.., tou- jours la   formation   d'un dépôt blanc. 



   -- Le produit est   hydrophile.   
 EMI7.3 
 



  -* ïl n'est pas byp'o$sopiqu.e. l'état humide! il donne une casne 'o2t& gosi¯ ftettse  C.1t. maN" devient dure et transparente coassa du ver-' re lorsqu'elle <tè.. 



  1.. produit est uae ratière reduatric-Q, 11 tUcoia presque 1-'4utüumt uno solution de permanganate da poçssî; 94 faisant bouillir Hae solution de PNdu1;,;; ti<:' Ph aloalin (par hydroxyde de soude), on remarque uns dcaspg?.. tion du produit en   solution,   par la formation d'un sédiment qui précipite dans le tube   d'esaai,     .ou.   la forme de   flocons   ouateux. 

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   -- L'autre réaction caractéristique que l'on   remarque.        en faisant bouillir une solution. du produit avec de l'hydroxyde (hydroxyde de soude), est la coloration de la solution en   jaune,   et même en jaune foncé presque brun, si   nous   maintenons   l'ébul-   lition.

   Cette solution exposée à la lumière de la lampe de 
Wood, donne une   fluorescence     tout à   fait verte le phénomène est net, On suppose que suite à la décomposition du produit en solution, par hydroxyde   dessoude,   un (mono) sucre se libère et forme un sel sodique avec le cation de   l'hydroxyde ;   une telle solution brune, pour pouvoir donner sa fluorescence, doit être diluée dans l'eau   distilla   jusqu'à ce qu'elle atteigne une teinte jaune, phénomène que .nous avons remarqué sur le glucose (glucosonate sodique). 



   -- Une petite quantité de produit dans le tube d'es- 
Baie avec 2 à 3 gouttes d'acide chlorhydrique concentré devient immédiatoment très jaune ;le tube   exposé     sous   les radiations de la lampe de Wood, donne une fluorescence vert foncé. 



   -- Le   atome   test que   ci-dessus   avec de l'acide   sulfu-     rique   concentre, ne donne pas la coloration jaune caractéris- tique, mais le produit devient brun au bout de quelques minute et finalement noir (carbonisation), 
Le produit ne présente pas de point de   fusion ;   lorsqu'on le chauffe, 11 se décompose et se   carbonise.,

Claims

REVENDICATIONS 1) Procède pour la préparation d'un produit $ usage EMI9.1 . pharmaceutique destiné à la therapeutie humain et animal , culture -dans un milieu artificiel, naturel pu Mixte de* cycèted attaquant le fruit des agrumes U.uran1i1adta' et provo- quant -tour pourriture caractérisé en 00 que ce cycète est exclu- .1v.me&t1i ou'on substance exclusivement une espèce de P<nicil<" lima Monoverticillé.

2) Procède suivant la revendication 1 caractérisé en '.. ce que l'on .cultive sur un milieu auditif deux espèces de EMI9.2 Pénicillium {Pénicillium Asymétrique et Pénicillium 1(ct),Qv,rt1.. , cille) en présence de Oolletotriehua Olceoeporioïdes Pens, 3) Procédé suivant la revendication 1 caractérisé par l'obtention. partir de 1* espèce de Pénicillium Monoverticillé EMI9.3 d'un produit anti-inflammatoire très actif 4 action aati-pMLo*' gistique et diminuant la teneur en acide ascorbique au cortex . surrenalien.

41 procédé suivant la revendication 2 caractérisé en ce que.le Pénicillium monoverticillé peut être cultivé sans la coexistence du Pénicillium Asymétrique ou du Colletotrichum EMI9.4 Glo"oriold.1S Fons.

5) Procédé *vivant la revendication 4 caractérisé en . ce que la souche est inoculée sur le milieu nutritif par exemple à une profondeur de 2 cm après formation d'un tissu blanc, commencement de la soporification et formation d'un tapie vert qui recouvre toute la surface du stromas, l'évolution du mycite EMI9.5 est suivie d'un changement de el4# en ce que quand leex-r4ltt4 nutritif est presque neutre iph 6-61/2) on le filtre,

a mélangl à de la terre d'infusoire et on l'acidifie j après #;, attente de quelques heures le nouveau mélange est filtre le .. ' v liquide est concentré et le produit métabolique précipite EMI9.6 en ajoutaut,u quantité de solvant I81!Hib1, . l'eau (acétone, <Desc/Clms Page number 10> alcool éthylique, alcool méthylique).

6) Procédé suivant la revendication 5 caractérisé en ce que l'extraction du produit de l'ex-milieu nutritif a lieu EMI10.1 par une alcalinisation donnant lieu a une précipitation de flocons ouateux et à une sédimentation épaisse.

?) Procédé suivant la revendication 6 caractérisé en ce que le produit obtenu provenant'de la décomposition du produit original a d'autres caractéristiques (insoluble dans l'eau, couleur légèrement brune, pas collant) mais possède des qualités anti-phlogistiquea à un degré moindre que le produit original.

8) Procédé suivant la revendication 4 caractérisé en en ce que la souche est cultivée en profondeur'et presque anaéro- bie au moyen d'un mélangeur rotatif (vitesse moyenne de 300 à 500 t.m.) à une température d'environ 22 C., tous les carac- tères. mycologiques du mycète étant répartis en petites parti- cules dans la masse liquide du milieu nutritif.

9) Produit à usage pharmaceutique caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir d'un mycte qui est exclusivement ou en substance exclusivement une espèce de Pénicillium Monoverti- cillé.

10) Produit suivant la revendication 9 caractérisé par EMI10.2 la prescription 3Iycologique du Pénicillium monovertici31é Colonie étendue, veloutée, verte, vert-jaune terne, Revers rouge brun léger de couleur-chair.

Conidiophores issus directetnent du milieu, lisses, généralement moins de 100 microns de long, en moyenne 60-70 microns, 2,5 à 3 microns de diamètre, le plus souvent avec deux cloisons, Il est terminé par une vésicule relativement importante pour i un Pénicillium, en général sphérique, de 7 6 6 microns de diamè- tre, exceptionnellement ovale : 10 x 8 microns. EMI10.3

Il n'y a pas de foot-cell. Strictement monoverticili7., Phialides très nombreuses en pinceau compact, parallèle , de Û à 10 microns de long. <Desc/Clms Page number 11> EMI11.1 Conidie .phfr1ques do 2 à 3 microns de diamètre finement ru- gutttses, $n longues chaînes en colonne, Cette souche tient des caractères uel5 séries PREGUENTAU$ ÏMPJ.I - CltUK.

11) Produit suivant la rùvendioation 9 caractérisé par EMI11.2 les effets biologiques suivants EMI11.3 firitëre. Produit, . ", BoziaophUes Diminution de 50 à 60' % c3i# lt lapin et le rat, J Hy,.19nida,e Bloque la dispersion du mélangea bleu dtEvalls..Hya.luron:1dase ... traiteq."t 4, h. avant injection 1.1-1, dw 4 à 10 g.(' //# ' .,..... W"'-"''' w.,-...- -..............-........-........ --- ....,.....-- -....---.. ""'..-- ..,........,..........,...;... --.-'... #f**1 Wfmmm T'111 #* * p vw v >p* wvi-vw B v l "-- v >v WW" kride ascorbique Diminue la teneur en ao1lte a.oo1qu. : *urr4nalien dans la proportion de 44 ?i à 1. dos* de 20 mg./1t& 1.)1, I , '" , ",,{<'.>. {.

........ -... -....... 'IIf"'" -'11'*' 'fi! ""....- .......-...-. 1""'."'" 1 .1nalth1t Ne ponaède pas çhet le rat d4'e'r t,;s analgésique (Tesfe WlI1$lt OD-t4),ß;::'' ' y "- \! - ww.W wwYY,rwrwwwtwww,n,MwwrwwarrwYeW..ww'IYS.,ri.bt"rYWar"rHxtu'rv'f!"eP.rYa.w.,.n.t..wwn,warwwf.t Pouvoir $nti- Aocél4r. la dllpar1tioa le 3.'eï'ytc phloe1t;iqu..ntratnti par inj.4ti oue*Cm4e ,f. de col11;ox1!M. " ,..f.<l- '''1:1 woYa,....Y.r..r,..,wswrwwrrw.f.rmww.rw.w.w.wwlYwrrmY.wyna.e.WnrsYn.,eistr,wyw4ir'brlF.tlrrr .

Ulcèref ga'Hr1q,\MI" 1 Ia,i!! ?' .ISàr ule 6;igt4:,f expérimentaux gaetriqtte aux 4oft1l de 58 20 et. ;"0' ,.,' Kg p4r j oe ptjMnt 6 ur af,.'','' ,int.rl1;ni.61... -# . , , wr..rw ...Y n. w ...... w. .. rrar w iYe w w.,n YY w Y. r . w w a. Y. w iY r ww:.h i w,r.w 5 m..Y W>rr:r i YfM'l,wtlUw4i .

Toxicité frès P\1 **ré* - D. 1IQ11./J$ < / le :. 4'0 <a, p4ï' "R.4t iFttt'a'C..eW,i ¯.-----.¯-----------"-.----w..w..--..- .

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