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u Procédé de stabilisation de matières biologiquament active M L
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La pr43ente invention a pour objet un procédé de stabi- !t lotion de matières biologïquement actives par exemple, les b4C- taries les produits du métabolîsme des bactéries, les viruoi les :3ÓrUWJ et les ensyraes.
Un gri:lnd nombre de matières biologiquoment actives per- dent leur l1Ctivlt6, partiellement ou totalement si on les lyophi- Ilie eu lors du ator:!ta±-3, même ai on les stocke à l'état sec* C'est pourquoi, pour améliorer la stabilité et la stookobilité de ces
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r,4-ti%>irtal on a essayé l'addition de stabilisants. C*Éndant* jusqu'à
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présent on neonnatt pas de stabilisant qui puisse être généra- lement utilisa pour la stabilisation de bactéries de produite du f:t6tub(,l11ame de bactéries, de virus de agrume ot dtenzymes et
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qui, et! outre, pu la, 10 rester dans la solution de la substance bio-
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ioiquyifteaît activât même si colle-ci eat appliquée par voie in" truveinousc.
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Tour 1* évaluation de la valeur des vaccinât en particu-
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lier, il est ncoa!3aire do disposer de préparations standard con- servant une efficacité constante pendant des durées prolongées. iï3. aussi la stabilité des substances biologiquement actives doit Être aussi assurée pendant la préparation du vaccin. Jusqu'à pré-
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sent on a, par exemple, lors de la préparation de vaccina antipo-
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Iioray<5!itique3, congelé les suspensions contenant les virus polio-
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Mimiques et on lea a conservées au réfr1gÓrnteur h trll8 basse tenpuraturc.
Lais, cette méthode de stabilisation entra les dit- férenta atadea de préparation est très codteunes La atllbil1t6 est auaui un facteur importnnt pvur les 8&%rnU contenant des anti-
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corps ainsi que pour les enzymes , surtout quand on les applique, sous forme de solution, par perfusion intraveineuse continue à
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environ 20 0.
La streptokinase, produit du métabolisme de plusieurs
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souches de streptocoques, qui peut, comme biocatalyseur, dissoudre
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les caillots do fibrine par transformation du plasminogône en pltl:3::1inc dtn3 le sans et qui joue, n..ur cette raison un grand rôle dans la traitement es thromboses veineuses et artérielles, des tlirorbol)hl4bites et des embolies pulmonaires perd son activi. tsé lors du stockage, nône si elle est stockée & une température de 4*Cp matis surtout A des te'1pt}rntures élevées, corune par exemple
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quand elle est envoyée dans les régions tropicales, L'envoi de ces
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produits dans cou régions a, jusqu'à présent, toujours dtd aso- cié à de crndes parto3 d'activité.
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Or, la demanderesse a trouvé que l'on peut stabiliser
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des matières biologiqueient actives comme1, par exemple, les bac tir Us, les produite du m6tlbol1.me d b o- ###-# #
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t4.rio3) lea viruae les sérums et les enzymes, en ajoutant & lu subatance bioloe:1ru$l11ont active O5 ,,0 Í: d'un cellogène, de rr66rence in gélatine, obtenu selon le procède décrit dans le brevet allemand li" 1.116.732 ,.'et réticulé avec un diisoeyanote.- .
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jusque un poids moléculaire compris entre environ 15.000 et
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60tUCOj préalablement dorade hydrolytiquement ù un poids mol4eu- làiro compris entre .t)c;t7 et 20.000, de préférence z un poids .;.ultaz:la.ra compris entre $.000 et lû.OCO, ou d'un collagène, Cq pr\:f0rence la gélatine, obtenu selon le procédé décrit dans ,la demande de brevet belge n 575#OC4 puur :
If Succédanés de plasma
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sanguin et leur procédé de préparation" , préalablement réticule
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par un diisocianato et ensuite dégrada par voie hydrolytiquo il un p.iids tuoldculairo compris aussi entre} par exemple, 15.000 et 6U.U00, de préférence en combinaison avec 0,5 5 ,0 ,0 ;: de I<"glut<"
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mate de sodium.
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Le produit réticulé par le diisocyanate 9 l'avantage de ne pas posséder des propriétés sntién3,ques.
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Les exemples suivants, qui ne limitent nullement la portée du présent procédé démontrent que les matières biologique- ment actives stabilisées selon le procédé de la présente inven- tion conservent leur activité biologique en solution et aussi
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après lyophilit;ntion et stockage.
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LO:3 exemples oonoemwnt Ici stabilisation do préparations buatÓ1<il\Unel1 parGu;:"df 1300Ule Oalmstt6 Quérir l3Cc)j doo pfe" '
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duita du métabolisme de bactéries (lea anatoxines diphtérique et
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tutanique, la tuberculine), dea virus (poliovirus des 3 typel,\), ; des sérums (aérumo antiréckottsiens), et des onzyices (plasnincs, stroptokntiae). Comv il ressort des exemples (anatoxines diphté- rique ot tétanique), les substances uti1i::Jes.co;Ir:\o vaccins pouvent contenir, de manière connue, un adjuvant, par exemple, lthy, dn,ycFu d'almdnima, en vue d'augmenter leurs propriétés anti;::6. 1 n1quoa.
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HottorMlus' purtuo.Az Oscille de Iii coqueluche) .
Cn ajoute 5(.,U .1 d'es iù!!ôn''1ttt'f'lP"rrodui.t...... dégradation do la gélatine, réticulé avec ITïi eVa ci 6 thyièneVdiftM&PT J " cyanate) obtenu selon l'exenpie 1 du brevet allemand ut 1.11b.792, à 500 :.il d'une suspension de bacilles de la coqueluche ajustée à un titre de 30 x IL) - cernes par cmet donnant, dans le test de
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protection t.:e le souris (4ve;t de une Moyenn. de 2C unités de protection (UP) per ni, et on lyophilise le produit obtenu.
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Go.1 :..(.: solution de contrôle, on lYOI,j1J 1iJO une fiu.9pari. sion corrcîijom1' nte de tCnncB de la coqueluche.
Ui l'on examine li-,,5 'induits lyophilisés, à ur)rè.9 \11:100.. lution dans des vclunea (Sijnux d'eau diatillée, dans le test de protection de la souris, on obtient avec le produit la préparation
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ne contenant pas de produit de rdticulation de la gélatine dégra- dée avec le diisocyanate, en moyenne 4,5 UP, tandis que la prépa- ration avec l'addition mentionnée donne une moyenne de 18 UP.
EXEMPLE 2 :
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Bacille Calnette Guérin (8CG) (avec stabilisant combiné). a) fin ajoute U,5 ' du stabilisant utilisa dans l'exem- ple 1 et 2 1' de L-glutom1ntJto de fJod1U1a à 5QQ ml d'une euepencion contenant du LOO# on filet en amrçèulofit on lyophiliew Ob on ocelle sous pression réduite Le nombre de ,.-emua V1Varttd déterminé z ce moment est 17,0 x 10 par me de substance obehoo
On stocke à 37 C les ampoules obtenus! de 1a manière décrite ci-haut. Apres deux mois, on détermine encore une fois le
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nombre de germes viables, qui est alors de 2p7 2 10 6 rermes par Ing: donc 15 )'- de la quantité initiale.
Le vaccin BCG sec ainsi obtenu est facilement soluble,
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.IV elle A Manipuler et possède encore après etoclulr.8 .pendant #nuls K />? G un nombre de L;armOD BCG suffisant pour une vaccination ïrvuntivet b) Uii vaccin nec# BCG préparé suivant lea procédé son- nua '{ titra de témoin contenant 15 de lactose et 1#3 / de t- lutowlnte de sodium, ne rojsùde Gprèu un stockage de 2 mois A J7"U uc w 2 x IL 1:0rt:: 3 jo HCO vitibles par ma de'vaccin sec.
U.n "duv'nt1 ut1113l ne atabiliaent le vaccin BCG '1nsutr15am- Ir1.:/lt, le *.porto quo le vaccin ne peut plus Être utilisa aprlJo 2 rjçéur une vaccination préventive. c) J.. deasicotion des germe:} DCa sans aucune addition n'cjt ;.3 -jjz;iblet car après s6cliaCo les germes ne peuvent plus Sire 'iu en auspcnsion.
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Anatoxines diphtérique et tétanique.
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Ln ajoute 100 ml d'une solution à ,5 d'un produit de dégradation do la ;'élat1ne rêticOÔ avec l'hexaMethylene- dU.:.vcY\notc, CO'T.'ao indiqué dans l'exemple 1, à 100 ml d'un vaccin c(.,r.îtl nl contre la diphtérie ot le tétanos, contenant 0,2 de de ..1{{ ). ; pu!::> on dilue encore 1UO ml du même vaooin avèoc 100 ml d'une solution à u,/.;5 > do chlorure de sodium. On lyophiliae dlars loa solutions et on dÓtonh1ne les unifia protectrices (Ul') contre 1'! drtrie et le tétanos aprea diaaolution des produits l '"I,h:!..li3 0$ .
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Les valeurs obtenues dont données dans ,le tableau sui-
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vant, 1:3 valeurs entre parenthèses montrant le largeur de dia- jerdion #
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PU c. la d1pht4. PU e. 1. te. fie tanso 1 voc le prvdul t réticulé # X'iQ lU uv. c dUaueyunato 11u <1G. ri-uiatlon ,io la ..!lat1no (IL'O 1$ (10C 150) :. '/t;(1 :.1Cl 5c:. 26 .
(44 73) (20 . t}
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Il. roB.;ort de ce t\J1QUH que lea voleur ovlio Nfldl dont forUr.,- r.t 1':rlult'H';, Lea valeurs obtenues rvec le stabilisant selon l t im.\.:.t1,n prouvont l'action supérieure do ce stabilisant via-A- vi.. ,H) ,.. tv:-.llC8 dirlri'1uc et tt.nâ.;,ue.
! L<j # Virus poliomyélitique du type i%...tzoriy, à 2û*G '..11 .,.;...tt: 4'Ô d'un soluté physiologique A O t>5 ;' de . =-;À. 11, ,:,d.u du :tbi3.i.;t décrit dan l'exemple 1| A 100' 'il ",'11:1<; ,:n;I,W1:11{ Il contenant du po11ovlrua du type ï/ilehoney ...'J 1:,1" u.. i.itru Je 1(., ,VI 1,I5(.,inl, on atoo'({' 1^ 1101ution tlinoi ult .\uc 'rt,....Ylt ï :t :,i;.;1G';: ft a?.4(Î et on 4i(tEli#>Ij.:ll9 nouveau son titru, .1 était de lUú,lJ'IJ5Jml.
Ut. échantillon \:(.1 la f'.C!.'.e solution, oiois sans ttub111... u i.t, u'joc'.:4 i oncl.'.nt v 3e:.ainej A 2L*C ne poaaède qu'un titre de 1U"'(.; JX5u/nl* ... .;....n.i 5 : Virus poliomyélitique du type 1/, :honoy A *57*C en stocke une suspension de virus !olyolny61it1que cor- r('/'1\1(,l.tlnr.t '. (:o11e do l'exemple prc6t1cntJ pondant 21 jours A i4. Prûzz et; dûifci, lrc;,t4rit.iln contumuit le atobilisant a un titre de lu J J ' tendis que la titre d'un échantillon do contrôle 4tsit çl;:; le l6t:.Je jour tonvbd h une valeur non susceptible de
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Mesure-,
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1:......- lJl 6 : Virus po.i.or^yL11t3. lue :1u type ij.:ahoney lA 4*C.
31 l'on stocke les suspensions de po11o.,..vlrus de 1' O.Í". pie prûctdent à 4*C, on obtient les valeurs suivantes j\o11oviru:.1 ovec stabilisant après n lAi 'Y ,xr, 1t,; 10' .U15V ml ; ., zcv k n,; 3i u: ntaù1l1:nnt rlf'rU . , l , . 10"' , ;,lUI /""
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±..¯.l± 7- Virus poliomyélitique du type III/Leon 12 a1b (Sabin) à 20 C.
Cn ajoute 2,6 % du stabilisant selon l'exemple 1 (1,3 g)
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&5Q ml de polioviru3 3abin du type III/Leon 12 Albi et on stocke le tout pendant 6 semaines à 20 C. Après et délai la détermina tien du titre donne les valeurs suivantes
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Poliovirus Jabin avec 2,6 ;.' de e '?< stabilisant 10' PI,oIml Poliûvirua Jabin aprèa 8 semaines lOS.962DISolml Pcliovirus Sabin sans stabilisant ' ,lO',74DI501ml après 6 semaines lo3,66DI,oIml.
Vaccin antipollomyélitique types Il II et III h 37*0..
Un aboies 100 inl d'un vaccin antipoliomy61i tique conte- nant les trois types do virus pendant 14 jours A 3,/ 0 et on meoure ltl.1ctivltJ antigúnique (DI 50 du sérum) dons l'épreuve sur le j cobaye. A 100 m1 de ce vaccin antipoliomyélitique, on ajoute 2,6 n du stabilisant utilisa dans l'exemple 1 et on truite le vaccin do la môme manière.
On obtient les valeurs suivantes :
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<tb> Type <SEP> I <SEP> Type <SEP> II <SEP> Type <SEP> III
<tb>
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polio-vaccin 16320 49152 44eO
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<tb> polio--vaccin <SEP> avec <SEP> 2,6 <SEP> %
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de <SEP> stabilisant <SEP> après
<tb>
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14 jours 7052<J 164UO lU9?6d polïo-vaccîn sana
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<tb> stabilisant <SEP> après
<tb>
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14 jvUI':J . 0 0
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iiérum antl-JCiôvi'e Q.
Un ajoute 1100 ml d'uno aolution A 1,75 /,do tQbil1!)l\nt aolou l'cxumplo 1, dizooua dans une solution z O,t>5 i de chloruro - do sodium, à 100 ml d'un a4rum anti-fièvre Q ayant un, titre d' unticorpa fixant le cor1plément 6e,,%l à 111tiC. Aprèa dilution, cette solution a un titra d'environ lllLC. Un lyophilise ensuite cotte solution. Après rodienolutlon d.,n:3 de l'eau dititilldes on
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obtient une solution ayant un titre d'anticorps fixant le com-
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picntcnt 1 A. liBO.
Une autre solution de aôrufe anti-fievro Q préparée à l'aide d'une solution t 0,1..5 / do chlorure de sodium) n'à qu'un titre d Anticorps 'ia.rtt le eonj4unient h h 11v apr6a lypphi lisation.
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iXJ 1U fl±.1s::rl.ne. a) Une quantité de plasmine contenue dans 10 ml d'une solution à 0,85 % de chlorure de sodium et ayant, après dissolu-
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tisons 6\"t. unit6s/ml, obtenue par l'octio;. do lu treptokinall8 sur le pl3minor;(.:no, subit pendant un f;.1our n U.C une perte u'nctivitl; cO!:J.I!1e indiqua ci-dessous, une unité inté do plaarine t±1l1t actinie pr lu quantité do plu3:nine apte à dissoudre en 15 minutes un caillot de fibrine standard dnn3 1 ml d'une solution à 0,1 ,. de ìbrinolj0ne bovin.
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's3,:s d'incu- Activité de plosrnine Activité en
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<tb> bation. <SEP> en <SEP> heures <SEP> en. <SEP> unité <SEP> int./ml <SEP> 'il
<tb> à <SEP> 20 C.
<tb>
<tb>
0 <SEP> 9600 <SEP> 100 <SEP>
<tb>
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2 66Co '(±,6 :
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<tb> 5 <SEP> 5500 <SEP> 57,3 <SEP> %
<tb>
Il ressort de ces valeurs, que l'activité de la plasmine est tombée au bout de 5 heures après de la moitié de sa valeur initiale.
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La n:t::1e quantité de pll1omino di330ute dans une solution '1 1)7$ / du stabilisant utilio6 dans l'exemple 1, ne subit qu' une moindro l,orte d'activité si elle est réponde à 2ü C, comme est <}6rsiun#ù pur 10:; valeurs donn6os ci-dessuua. Oeo valeurs prou- vont aunsi, que le stabilisant exerce une activité stabilisante dbe la d1DolutionJ car l'activité de la planniino après dissolu- dans la solution tion/à ut,5 i* dcr chlorura de sodium n'.jst que de 96uno unitde/mi.
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<tb> Activité <SEP> de <SEP> la <SEP> Activité.. <SEP> Activité <SEP> de
<tb>
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plasmino en uni* en on plasmine en t S3 int./50 ml, " solution units ist./ on Dolut1on de do Hf.lCl 50 ml, en oo- f,u01 1\.&1on de .tlJb11hQnt avant distSvlutlon u0 100 95UÛ aproa dinaolution i!>'4$0 ù7 9$CO heurt 3 Ilp2':3 ;...a.ra . 5v ,5, 9OO 5 Í1!JUl'ú:; yr::::
::i.:ulutirat ;54(.J 76, a 9500
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La pï'6petin ubit une porto de son activité des la j di:5.K*lutior. dtuis la solution do 30I}' cct+.e réduction d., l*6ctlvit{ ! ":n,,'ntc, oncore. pendant le séjour A 20'0 A un de#ré plus fort que ! duriu l'ensui de comparaison précèdent, effoctuô avec une concûn- tration plue 'ri mIe. Apl'Qa 5 heureui on no retrouve qu'un tiers do Itnctivit4 initiale.
Cependant, l'activité ne cane;. pne en dit Cti..1Y3eu't' uelott 1* exemple 1, malgré la forte dilution, r en,: '. nt. toute cette durée* trepto1nuse : disroutea
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U< dissout 100*000 unités into de streptc\ë1nae dan? 5UC, ml d'une solution à :5,5 du stabilisant utilisé dans l'oxem-' plu 1. pi-4pare une solution correspondante comme solution te- ,;oin (tvoc une solution à 0 85 Il! de chlorure de sodium. ,Aussitôt aprt-3 dio501ut:.1on, pinsi qu'après 2 et 6,5 heures dé sdjour à iit*0} on prélève des échantillons sur lesquels on détermine flac- tivltl1 atreptokinase.
On obtient les valeurs suivantes
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<tb> Activité
<tb>
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après diso- 2 heures après 6,5 'heures lution dissolution oprèo disso- lvtion strer tokin&3e :.;.vcc' 3tubilicant 98 I 9S ]l 9 3trpalno9o aat.s stabilisant 7tJ :: 70 '1, 1:
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fi iiCG, la solution roite stable pendant au moins 6,5 . heures, ce qui out Io temps nécessaire pour une perfusion goutte A 1i.lI!t.tU. la di.f.N1'onco pur rapport, A la quantité rilhe un jeu, dúJ:\ <;(,IHCjt'.t.o 11}rQ ttisoolutione poste dans le domoirie de pro1.' bicn du In ruîthodo de mesure omployde. jtrcptokln. sa : che.
Un ajoute JUG m;; du stabilisant utilisé dans l'exemple i h -i ul u'unc solution de atropto:d.n:'J±lo contenant 2504000 unités int.< 2:' ,4à !l1et la solution ainsi obtenue et une autre solution de 3troptokii1lHla ayant la môme concentration, Mais sans le stabilisant acntiunndt dcna àt-o onpoulos de 1 rul, on lyophilise ot en stocke A 4V C Le tableau suivant donne les résultats de la d4tur.inatiuri de l'activité*
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Activité
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<tb> sans <SEP> stabilisant <SEP> avec <SEP> stabilisant
<tb>
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après dissolution 100 j 100 1- apr;;: lyophilisation 86 97 % ûrr, .3 3eaaines à 3'1 C b3 ,! 88 J? apr':'::; 7 scnaineo à ;3't C 70 :
80 ÇÎ âpres 26 sereines à J7.C <52 ' 0 z
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Lea valeurs obtenues contrent que la atreptokinD34 est stabilises par le stabilisant 4 l'état, lyophilisa ainai' que pon- dant un stockage de plus de 6 sois à 37 C. Sans stabilisant, on ne trouve aprJ.3 26 semaines à ,j'7 C qu'un thr1!S de Itactivité, male avoc le stabilisant, il reste oô / de l'activité du produit ini-
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tial.
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:.,rLE,. lu : JtrFtckina3ç : ùche {avec stabilisant combind).
Un dissout 1 r. de L"Clut.r;1[tfJ de sodium at 1 g du ata- b111:J.cnt utilisa dans 1 exemple 1, dinu 1UO ml d'une solution aqueuse du 3trertoinaDc ayant une activité do 150,OOG wiit43 int. p r 1 Us rpt cette solution C!:la deu 4t:1pt;ule. de 1 mlt on lys
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philise et on stocke les ampoulé à 4*0 et 11 370-, un obtient une préparation de atreptokinase qui est stalle à 4 C pendant au moins un an. *-.8nje z la température de 9l'loi la préparation conserve son activité pendant des mgiso comme le l'activit4 strol)tolcïnoee présenta dans le tableau
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suivant Activité
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atreptoldnase sans stabilisant avec 'stabilisant en solution 100 l 100 après lyophilisation 86 98 iJ pria 15 ..Ie:.1I.tino:
J t .1""0 8 1 98 -' aprîa ii acmaines à 3Î Q 6) 96 0-,
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Ces r'3ultitq prouvent que la atreptokinase avec ata- bilisunt) stockée à ft7"C pendant' 8 soiraines) a Conserva son acti- vité. të.jfri.i Lft.,ii4,i Virus de Hewcastle (IIDV)
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(Virus de la peste aviaire atypique).
Un centrifuge pendant 1 heure à 17*500 tours/minute,
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, lc;U ml d'un liquide d'oeuf contenant du virus de Hewcaatle et on reprend le virui de Newcastle, que l'on obtient sous la forme d'un
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du produit
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sédiment, dans 100 ml d'une solution à 4,5 i/de dégradation de gélutine réticulé au noyen do l'hoxam6thylene-diiaocyanuto est obtenu selon'l'exemple 1 du brevet allenond nl 1,.7..v.7;z.
Un dilue 1 inl de cette suspension de virus avec 255 ml d'un soluté physiologique de chlorure de sodium et en atocke les deux nueponuionn de virue pcndnnt lu se eino3 A 4*0.
D'une mohiùru anolonuo, on otocke pendant 10 se-Lnea 4'U tici fiCÎldixltl.lai'z:i c1u liquide d'oeuf contenant du virua do Uowcuatlo dans un ca4 h l'état non dilu4 l' et( doua loutre oatit dïlu6 , 1 .$6 dans un soluté physiologique de chlorure de go" dlun. '
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. des intervalles d'une serine, oh préleva un échantil- Ion de chacune d 4 suspensions et on d'tstr,.rio les unité! dr h6:no-ar,':latin±jtion selon le t:3t d t ij6:11(J-glut1nation. Le taux d' .rr.aw,^Iutination indique la plus forte dilution 'de virus qui f-r",vo(1.u:: encore une rlutii:r:ttraz des h;,5rat3.a de pouleti La di- luti0 1:,6 correspond le. solution utilisée polir le test d'inhibition de l'h6o-Dlutin.tion, contenant 4 Unités hrn..
8i::±:hltinL.ntcs; ce test est Zn4raleir-nt utilisa corariie mdthode dé d.terra3.rmt,ur, Cra.o.t:s pour lu diagnostic de 1<? maladie de .,srrcawt.s. Il, U1' ebttu raison, cette solution devrait pouvoir être stocke pendant dct tcr.po 1;1"olvo(:,10, pcrticuliài'emont pour les
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test,-* comparatifs.
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Lo tableau suivant donne les r<' ultato de ces toistgo les valeurs des suspensions ::;tocl5e:; à l'état dilud étant rnulti.. plî4c.s par Z56.
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Durc de sans stabilisant avec etabilisunt 9toc;a;e" non diluA. dl1u<1 l,: 56 ro1'\ d1lu. d:lur:,;t" 259 .
1 1024 ls1v 1J1U24 . 1 s 1a4 2 1:1024 1:1024 1:1024 l!lù24 J 1:1024 1:51 1:1U24 1:1024 4 11U24 1:512 ltl024 1:'1024 5 1:512 1:51 1:1024 .1:1024 6 1:512 1:512 1:1024 !rlO24 7 1 256 1:1024 1:1024 pas d'a,;7.u-. pas 1:1024 1:512 9 tination net- d' ;wr;lu- ltlO24 Z s 5xz toaent visible e t.nL3.on J.îi4 J. lu 1:1024 1:512
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Les résultats montrent, quo lrh,;o-rzp,7.uinr:tiort de la suspension non diluée, contenant du virus de Newcastle et le otub11isnt, reste inchangée pondant 10 semaines, et que/au8 pension dtlu6 r deno un rapport de 1& 5( ruate inchung6e pendant '1 3')'Min<ja< l'tir opuHunf ltkwuu;4;Iu.taion du liquide cxcuu,t' 111./11 dilué oontommt du vtxuo do newoûatlai se réduit aH bout do 5 semaine? à le moitié et apr63 ii Qemairle8 on na peut
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plus nettre an évidence d'agglutination..
Le liquida d'oeuf dilué dans un rapport de Ii<d56 ne préserve son titre d'agglutination que tjont)inot)t '.J #ft'&WfrîS ' ,',#.##, L'invention cuuprend notamment ,'# -#'' 10) Un proé6d6' do stabilisation de m;:, tiM:'tJ8 biologique- lacrit Lt'CtiV6H J cO:/11V par exemple, les bactéries ia9 produits du m6tu 1?tinr.lO La.: t.1r1 on, lea viiiie, lçd sérums et les enzymes, pro i acian lequel on ajoute 'À la substance biologiquel')1ènt active, *"ti> * 5# tltuit QollucùJl, rljt1Qu6 avue un ,d1U4rQrU1t h un poiJa l.(,l(l\ldlrfl oo(,1pr1a entre environ 1!!<0(.0 et 6Q#OQÔr c1lrdG , 1,,tr hydrolyao A un rc1da Compris outre i et tf.cou, 4o prf''!ï'afice 50U <' 1U,UCC) où d'un oollagtne .l'.:,.1.liJloll!fJnt. r(;ticu16 par un dl1avoyan"te et enouïte dGr:rHd,1 par hyuulyau ,\ Un 1)(,iUj Ino16culr! 11"0 compris entre cuwirÓ'n l5 ûUi uL.t .':<:
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