BE677918A

BE677918A -

Info

Publication number: BE677918A
Authority: BE
Priority date: 1965-04-22
Filing date: 1966-03-16
Publication date: 1966-09-01
Also published as: FR4396M

Description

LABORATOIRES LAROCHE NAVARRON, Levallois (Seine) France.

La présente invention a pour objet un médicament utilisable en particulier,pour le traitement de l'insuffisance surrénalienne; aiguë, et la maladie d'Addison, et la réanimation des états de choc.

Ce mé1'cament est remarquable notamment en ce au'il con- tient, à titre de principe actif, une association de cortine, d'insuline et de glucose, formulée pour l'administration en perfusion.

Les trois constituants de l'association sont des produits connus, préparés selon des méthodes classiques.

La cortine, en particulier, est un extrait cortico-surré- nal naturel obtenu h partir de glandes fraîches de mammi fères.

Il a été découvert, selon l'invention, que l'associa- tion de ces trois constituants présente une synergie d'action qui en fait un médicament de choix pour le traite- ment des insuffisances surrénaliennes aigües, de la maladie d'Addison, et la réanimation durant les états de choc.

Cela découle de l'expérimentation pharmacologique qui sers rapportée ci-dessous.

Pour cette expérimentation, on a effectué, au niveau cellulaire une étude du syndrome général d'insuffisance surrénalien Cette investigation a été entreprise grâce aux technicues microélectrophysiologiques qui per- mettent, dans une certaine mesure, d'apprécier le chimisme et le comportement dynamique de la cellule.

Toute cellule vivante, présenteen effet, une différence de potentiel qui s'établit de part et d'autre de sa membrane, de telle sorte que le cytoplasme est né- gatif par rapport aux liquides extracellulaires. Il a été montré que l'amplitude de cette différence de potentiel, ou potentiel de membrane de repos (PM) est liée en grande partie au rapport des concentrations en potassium dans les mLlieux intra et extracellulaires. Le potentiel de membrane. de repos représente un facteur très important dans l'orien- tation et le contrôle des différentes manifestations cel- lulaires, en particulier c'est lui qui détermine l'excita- bilité de la cellule. Expérimentalement, ce potentiel de

membrane se mesure en introduisant une microélectrode à l'intérieur d'une cellule.

Les fibres musculaires sque.letti- ques et myocardiques se prêtent facilement à cette investi- gatioh et les valeurs trouvées sont, pour ces tissus, de l'ordre de 80 à 90 mV.

Etant donné l'importance des phénomènes ioniques sur les manifestations électriques membranaires, on conçoit aisément que les troubles du métabolisme hydrominéral qui caractérisent l'état d'insuffisance surrénalienne vont se traduire par une riche symptomatologie électrophysiologique.

Effectivement, chez le rat Wistar surrénalectromisé, dès l'intervention, le PM diminue brusquement pour atteindre en 6 à 7 jours une amplitude de dépolarisation d'environ 15 mV* Parallèlement, le plasma présente les modifications caractéristiques de l'insuffisance surrénalienne aiguë hyperkaliémie et hyponatrémie. Si l'on administre alors à l'animal divers corticoïdes, on note que les minéral cor- ticoïdes n'entrainent qu'une restauration partielle, alors que'les glucorticlîdes sont pratiquement inactifs.

Par contre, la cortine s'avère très efficace et restaure complètement la polarisation membranaire des fibres musculaires squelettiques
Ces résultats montrent clairement que le potentiel de membrane enregistré au niveau d'une cellule apparaît très sen- sible au degré d'imprégnation en hormones conrticosurrénaliennes Cependant il demeure difficile d'identifier l'effet rénal et l'effet extra-rénal proprement dit. Les phénomènes crue l'on vient de décrire peuvent en effet s'interpréter en inveouant uniquement l'action rénale des hormones corticoïdes. L'aug- mentation du potapsium plasmatique due à la rétention rénale pourrait expliquer la déoolarisation cellulaire de l'animal surrénalectomisé. C'est pourquoi, pour s'affranchir du récepteur rénale, il a été expérimenté ensuite sur l'animal surrénalectomisé et néphrectomisé.

La brève survie d'une telle préparation ne permet que l'expérimentation aigüe; les

résultats sont comparés à ceux obtenus chez l'animal ayant con- servé ses reins.

Expérimentation sur l'animal surrénalectomisé et nephrectomisé
Etant donné les résultats précédents, cette expérimentation a porté uniquement sur la cortine en tant oue corticoïde, et les pro-- priétés de cette dernière ont été comparées à celles de l'associa- tion selon l'invention et des autres constituants de celle-ci.

Pour effecteur cette expérimentation, les rats pesant environ 250 g sont surrénalectomisés 4 à 10 jours avant 1'expérimentation , proprement dite. La néphrectomie bilatérale est effectuée des le début de la préparation de l'animal, c'est-à-dire quelques minutes ,, avant les premières mesures oui constituent le PM de référence du rat testé. Puis le traitement est aussitôt instauré.

La cortine employée est un extrait non alcoolique concentré par ébullition sous faible température et titrant 1250 U.L.N. (unités Laroche-
Navarron) par ml
L'unité Laroche-Navarron de cortine est basée sur la Quantité minima nécessaire de cortine permette une prolongation de survie du rat surrénalectomisé soumis au froid par rapport à un témoin*
C'est ainsi qu'en opérant selon la méthode de Dorfman (Ann N.Y.

Acad. Sc1 1949.50 556-575 et Endocrin. 1946,38 189-196) la quantité de cortine permettant une prolongation de 13 % au minimum des temps de survie du rat mâle de 30 g surrénalectomisé représente
5 U.L.N. Une U.L.N. équivaut approxjimativemetn à un gramme de glande fraîche.

Les perfusions des différents produits sont effectuées par la veine du penis avec une pompe à débit constant..

Les résultats sont orésentés sur la Fige 1 du dessin oui illustre l'évolution du potentiel de membrane (PM) en millivolts en fonction du temps T en heures.

Les temps sont comptés à partir de l'anesthésie et la zone. hachurée correspond à la préparation de l'animal. Sur cette figure, la courbe n 7 représente l'évolution du PM chez des animaux normaux.

Cette courbe est pratiquement horizontale et indique la par- faite stabilité des muscles disséqués et recouverts d'huile de paraffine.

Les autres courbes représentent l'évolution du potentiel de membrane:
1 Chez le témoin ne recevant aucun traitement ;
2 Chez les animaux recevant une perfusion de 5 ml de glucose isotonique avec 0,06 u d'insuline;
3 Chez les animaux recevant une perfusion de 5 ml de glucose isotonique;
4 Chez les animaux recevant une perfusion de
5 ml de glucose isotonique avec 200 U.L.N. de cortine;
5 Chez les animaux recevant une perfusion de
5 ml de glucose isotonique avec 0,06 u d'insuline et 200 U.L.N. de cortine;
6 Chez les animaux recevant une perfusion de 200
U. L.N. de cortine concentrée.

Une comparaison de ces différentes courbes met en évidence une le glucose et l'insuline peuvent entraîner une certaine repolarisation chez le rat surrénalectomisé et néphrectomisé.

En effet, ces perfusions, d'un volume de 5 ml, améliorent l'hémodynamique déficiente de l'animal surrénalectomisé, elles diluent les espaces extracellulaires et abaissent la concen- tration en potassium. De plus le glucose et l'insuline en- richissent le' milieu intracellulaire en potassium. Tous ces phénomènes tendent à repolariser la cellule.

Toutefois, l'association glucose-insuline-cortine, de par la synergie d'action de ces constituants, est beaucoup plus efficace et entraîne une forte repolarisation et un allongement de la durée de survie. En comparant la courbe 5 à la courbe 1 relative aux témoins, dont le mort'survient

en moins de 3 heures, on voit que l'association est efficace et d'action assez rapide pour repolariser les animaux sous un tel état de choc. '
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Les résultats ci-dessus montrent que l'association peut intervenir au niveau de l'électrogénèse cellulaire,. Après q'étude sur l'animal sans rein, l'expérimentation in vitro s'imposait.

Malheureusement, le muscle de Mammifère se prête assez mal à une telle investigation en/dehors de l'organisme. C'est pourquoi il. a été fait appel au muscle de Grenouille, matériel particulièrement,
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robuste. Au lieu d'étudier les phénomènes.électrioues cellulaires à l'aide de micro-électrodes, on a utilisé la technique du sucrose-gap. Introduite par Stampfli, cette méthode permet d'étudier, à l'aide d'électrodes externes, les variations de PM et de résistance membranaire au niveau d'une fibre isolée. La figure 2 représente le montage schématique. La fibre musculaire F isolée, ou un faisceau de quelques fibres, traverse successivement 5 compartiments lavés par un courant de Ringer Ri ou de saccharose isotonique S.

La stimulation St et l'enregistrement E s'effectuent respectivement de part et d'autre d'un compartiment de saccharose.

Cette solution de saccharose, non conductrice, permet d'annuler pratiquement les shunts externes et d'enregistrer un phénomène reflétant fièlemtn celui que 1'on purrait enregistrer avec une microélectrode intracellulaire. De plus, en envoyant un courant d'intensité connue, il est possible de calculer la résistance membranaire de la fibre musculaire et d'apprécier ses propriétés rectificatrices.

L'expérimentation est réslisée, à partir de fibres isolées du muscle semi-tendineux de Rana esculenta Trois types de solutions sont successivement essayées: (a) Ringer-glucose-in- suline, (b) Ringer-glucose-co@tine et (c) Ringer-glucose-insuline cortine. Les concentrations sont telles que le mélange expérimente précédemment sur le rat surrénalectomisé et néphrectomisé se

trouve dilué a 90% dans du Ringer normal. On a par exemple, pour 1 litre de solution type c)
Ringer normal 900 ml
Glucose à50% 100 ml - Insuline 1,3 u - cortine concentrée 4000 U.L.N...

Déterminée d'après les enregistrements des courbes courant-tension, la résistance membranaire de la fibre ne se trouve changée que dans une des trois solutions testées, la solution Ringer-glucose-insuline-cortine (c). Eneffet, après 30 minutes d'action de cette solution, la résistance est aug- mentée de 10 à 15 %.

Ce résultat est mis en évidence sur la Fig. 3 ou A illustre , la résistance membranaire calculée d'après les courbes courant (¯1)-tension (AV) en milieu normal et B cette même résistance après 30 minutes d'action de la solution (c).

Ce phénomène est lentement réversible ; iltraduit vrai- semblablement une modification du flux ionique qui traverse la membrane.

De plus, lorsqu'une fibre est soumise à une stimulation- répétitive passant brusquement d'un rythme lent (1 par seconde) a un rythme élevé (10 par se), il y a normalement apparition d'une dépolarisation importante, de l'ordre de !5 à 20 mV. En milieu précédemment défini (c), l'amplitude de la dépolarisation est plus faible, de l'ordre de 8 à 12 mV seulement. Ces dépolarisations.disparaissant lentement lorsque le rythme de stimulation devient moins rapide.

L'ensemble des résultats expérimentaux rapportés ci-dessus, permet de mettre en évidence que l'insuffisance surrénalienne se traduit par une profonde diminution du potentiel de membrane . de la fibre musculaire squelettique. Ils montrent de plus crue l'association cortine-insuline-glucose peut intervenir directe- ment au niveau de la cellule pour contrôler ces échanges ioni-
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ques, partic iper ainsi, en dehors du rein, au métabolisme

hydrominéral de l'ensemble de l'organisme et restaurer la polarisation membranaire.

Si, dans cette association, la cortine est l'élément* le plus actif, il se manifeste entre elle et les autres constituants une synergie d'action particulièrement intéressante.

De cette étude, il découle ainsi oue cette association constitue un médicament efficace pour le traitement des in- suffisances surrénaliennes aiguës, de la maladie d'Addison,. et durant la réanimation des états de choc.
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Dans ces indications, le médicament est formulé pur la perfusion* Pour faciliter les prescriptions, il est avantageux
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de prévoir deux formulations correspondant respectivement à une' dose forte et à une dose faible de principe actif, dont on
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donnera ci-dessous un exen.ile h5 a) formulation pour dose forte
Cortine 40.000 U.L.N.

Insuline 12 unités
Glucose isotonique 1. 000 ml, b) formulation pour dose faible- ;
Cortine 4.000 U.L.N.

Insuline 1,3 unité
Liquide de Ringer normal 900 ml
Glucose à 50 % 100 ml
On notera que dans ces deux formulations, la cortine et 1'intsuline évaulées dans leurs unités respectives sont dans un rapport d'environ 3100 à 3350/1.

Claims

RESUME L'invention a pour objet un médicament utilisable en particulier pour le traitement d'urgence de l'insuffisance surrénalienne aiguë, de la maladie d'Addison et des états de choc, remarquable notamment par les caractéristiques suivantes 1 il contient, à titre de principe actif, une associa- <Desc/Clms Page number 9> tion de cortine, d'insuine et de glucose, formulée pour l'administration en perfusion; 2 le médicament a la composition suivante: Cortine 40.000 U.L.N, Insuline 12 unités Glucose.isotonique 1.000 ml 3 le médicament a la composition suivantes Cortine 4.000 U.L.N.

Insuline 1,3 unité Liquide de Ringer normale 900 ml , , Glucose à 50% 100 ml