<Desc/Clms Page number 1>
Appareil pour la culture de cellules.
La présente invention n pour objet un appareil pour la culture de cellules indien à partir de tissus animaux.
La culture de cellules isolées à partir do tissus humains ou animaux est connue. @ cet effet on charge des récipients, ayant la forme (le, @uvettes de Houx, avec des suspensions de cellules. Comme agent de nusponaion on utilise une solution nutritive isotonique appropriée, qua l'on chauffe à une température ajustée aux conditions (le vie optimales pour les cellules. Dan:! les cuvettes l'état stable lea cellules se déposent au fond du récipient;
elles s'y développent dans les conditions données et forcent après renouvellement répété de la solution nutritive une couche mince et dense de cellules, dite culture en couche unique ou "mono-layer" culture.
Ces cultures en couche unique (ou "mono-layer") sont utilisées pour la production de vaccins, et on en obtient les
<Desc/Clms Page number 2>
quantités nécessaires dans les installations de laboratoire usuelles qu'avec une trop rande dépense de main-d'oeuvre, de temps et d'espace. Pour préparer par exemple 150 litres d'une suspension de virus de la fièvre aphteuse au titre de 10-7/ml on utilise environ 30 m2 de couche de cellules, que l'on doit cultiver dans environ 1500 cavcttes stériles de Roux ou d'une forme similaire, chargéos de la suspension de cellules.
En plus il serait nécessaire de r3enouveller la solution nutritive dans chacune des cuvettes tout en évitant une infection par des corps étrangers. Les différences iné- vitables entre les temps requis pour réaliser la culture dans les cuvettes provoqueraient - sans' compter d'autres incidents - des inégalités dans la multiplication et la qualité des cellules, ce qui pour le traitement ultérieur et particulière- ment pour la production d'un vaccin de qualité égale, serait tout a fait indésirable.
Four remédier à ces inconvénients la demanderesse a construit un appareil pour cultivor des cellules à partir de suspensions de cellules de tissu isolées, apparoil qui est pourvu d'un récipient obturablo ayant au moins deux tubu- lures et une série de cuvettes disposéoa l'une au-dessus do l'autre dans le récipient.
Cet appareil isole la culture introduite de toutes les influences extérieures,il n'utilise qu'un seul joint d'étanchéité. Un volume relativement petit peut ainsi contenir du grandes surfaces do culture. Une série de 40 cuvettes par exemple ayant chacune un diamètre do 80 cm donne une surface do culture de 20 m2 environ. Le volume nécessaire est d'un peu plus d'un demi-mètre cube.
Il est possible do cultiver
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
et dt; trnit'.r 61001),1 tnm1ull:nt . ,t dans les m0mcàNconditions 20 mi de cellule dann un ml-pareil di la diml-nsion soifiée ci- d03AUO, laqu11 n'est pns 3 liuiLutivc; du Aorte \10 les candi- ,
EMI3.2
tiono propres à la prc.;)I1T'ilt ion df rfindus olrisaos 'io vaccins uniform!1, difficiles x-'f"1::,.r à cc 1e:gré jusqu'ici, peuvent Otru considér4cs mFJ.1ttt nU1Jt cO:!Jr,(; rumpli<;x un principe. iour chariti r c,,t ni,j.areil on nu rempliï<\ pas chaque cuvette ind 1. v1 dll.d hn:\.,!l1t, v,a13 on chargera 10 récipient avec la t1uspenflion ou lu 11 qui (l,> nutritif par unu tubulure d'admis-
EMI3.3
:;ion. a.n:ui.t.- ou àrrlÈV:xnc 1 1 i I}'J id,: qui s'écoule par la tubu- luru de d('C'hru','"': :3.t;t.
T, 1 y I,rr- tu inféricurn du récipient. l..:, cuv c.tfi.:; rt!rtti,4. t.!;.1'.'j .jusqu'au bord. On ronouvcllcra d, l'i xam.; fnqoi, 1.r- milieu nutritif uprua avoir rsrnursé la J i qu 1. (l,: .
!" 1,: n<>,y, nn ':1rdl/'1irus aimpluf3 on stérilisora f fi 0 11 1. , j, ,:d,U ")\11, , ' t,."T'11o 1'ill)l)nruil mulon la lsr;::,f, invention iii tit il 1-1 %il (11'1J op;l.ntn aonnus. Il ., a "t 'J > i, ',<ig+ 1; conotruir'l: 1, 1 1, rit un formez ct 1 nutoclavu pour i-oiivoir lu nuttoy' ii, ,'i 11,i,.n oit dr..:o "t'ti ut) du etillules ltdhérl1nt 1\ l,'ir:t.r1'jir '1' l"q î',r\;j1 1 npr?-ti unu oulturo ou pour lu st.l:ri 1.1 !.Ic!' :1O'W fi' l'l" :lu1onn do V1Jpour au-dcasua de l'atmosphère. tour la COllnt,I'l1et.ion '11... l'nt'pnruil oolon In prbsonte invention, on choir;ir:\ J1'll'rj tout< a léo ml.1tiôrùs p08oiblof'J la oiit:ié:ri rJ :t'1t.1qu,.:, Il. v<'r! ou du pref6runcu la métal, on 4.Jlt;iq ('\1 P t1l1rlHt t D'Ut:' JI.' 11 n:r' l,'u pr'jscriptiono orriciullol8 l' e¯r:iploi du t'u:! V!'\' Iii 11orh 4t clliu%"rva métaux, fortumunt donn-urH fillonu <1.àT>11 1;;
L;>tuiiticrm donné<;fi , ou de ml'ltlèrcs d.'re.,: chsit. , puur r:xc)U!'\' toute inf1uûncl. défavorable sur In t>oluti<.)f. rmtri tiv ou unr Jcu culturl:8.
<Desc/Clms Page number 4>
Pour la c@@ture de cellules on pout utilisur des cuvettes de forme quiconque, par exemple des cuvettes poly- fonale, ou ovales, @ préférence dos cuvettes rondes. On a une couche particuli/rement uniforme et cohérente, si les cuvettes ont un fon@ plat et un bord montant à angle droit par rapport au fond Ces dispositions permettent en même tumps une meilleure exploitation de la suspension dos cellules et des nolutions nutritives.
Une autre amélioration à cet égard est réalisée
EMI4.1
qu'tUd Ion cuvettes .')ont munies d'un trop-plein ajustable en ::w.t;ur et disposés A l'opposé l'un do l'autre. Ainsi il 6!Bt facile d'ajuster le niveau du liquide aux concentrations particulières. En plus il est possible avec cette variante dt la pr:ocnte invention de remplir les cuvette à partir du t;-1ut, snns risque d'immersion en économisant lu liquide 1*: '.n po3Jibl>o l'our faciliter et accélérer la manipulation on 1"Rt. i nstF\l1.ol' 1. cuvettus pnrnllôlomont à leur fond do f'\\;'1n rtt.;.)vlblv d<in un support égalumunt nmoviblo. Lo support " ,.! v,ttc: peuvent (3tr'u rôtiras du réoipiunt ut y 8tre. r - yt.
L aêriu du cuvutto5 diaposéus aF\ns l'appareil décrit ci-! il, ut ninas Ctrc nettoyer momu à l' uxt6riour du f':'" J.} j, ,j ! + 1"0 Cuvat4â p'-'uvont ûtru préparées on ré Innt n'. .:< ,,1.\ 1, 1(3:3 trop-pleins* Chaque récipient peut comporter -; 'id. :,1!': ,ilil,c)rtt3 fic CUVettes intorchnngcabluSt l'nur dcl1.ut(jr l'ngvnt du suspension ou la solution r.".ri*-.iv tilis<1.i pundant le procésous du in culture et ;; >.#r t'incir ho culluloa ut rustoa do collulus aprt'a l'addition ' ¯. ,ni,- et traitumcnt ultériour il faut basculer lus w ,-; Cillfl 'st ficilité, si 10 récipient (.et disposé
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
do façon z pouvoir tourne - ;i,itour d'un arbro horizontal.
Cn peut faire tourner lu r6ClpiLnt nvuo lùs aasiottoo diraatomenb à lx miinq si l'arbre PI\[W,.: r.>r le contre Au gravité du récipient ou si non iid., i.;;t équilibré d'une autro manière; on pout 6J:l\lcr.li.:nt 'Lnr.t:1l1\,r a; cctte fin soit un lI1écI'1.n1smo de tl'/;J.n.,miatl 1011 ou un n,a..,ur, :; \.1 dus ayatèmos pneumatiques ot hydrauliquqso ?je mouv... m\:n.t: 4.; 1'l.:tournemont n'Il aucune influenoe d4favornbl<: sur In cult.,r, d.. cullulos, paroo quo les oellulos quand Q 11",,,. et} lv? c t t f'rih0T'unt fort..'munt aux surfaoos do culture. Tout nu <,ont ni "1., c>n 11. rumarquô, qu'un faible mouvl.:mt.nt 4 baigne- ,nt c'j 'm d{.pl1'\c()mont dos ouvottos fivorisçc .Li.: dHV'1op{-.tr)(.'nt; d" ,; c,J11uh:6. On pout tenir compte à cc fait :rA cskot,xuL;n d: ,.iistalintions additionnolles, l'1.U mùcnn:l t;ti...1 r,,urn.m:ru;.
' ' ,# il'.f1t bon que lu récipient soit pourvu d'un dispont:....î de chl'1.urfrw:\ , l'l'Ir <>xcmplt= d'une double on- veloppc conduisant dl.'r, \'0h1 ('1.11u:: du chl1.1uur liquidas ou à 1'>stat do vapeur. Le chufrn0 puut égal<>munt 6tro effectué par un dispositif 6h'ct1'lrjU\. 11 ra I1vlJ.nl;n.p;13 à co que J.a.:, ,.
Chnuffages Boiunt r<'1<Inlil<># pour I1juster In tompôrûturo à la valeur la plus i ppropri>Ji pour la culturo dos call' i013 dans ,'i . w t plupart dos cils 37 C, ut; pour 1n mnintenir à Ogt 'v6iour 1 }'ù.:'r'tl'1.nt 1..' tcmpn nc:;:air:. Un,- étuve d'incubation Mt 6\,1';- 'T'flU(J.
1)'1n8 biun d(;r. c-i; il puut Ùtrc avantageux d'adapter à l'l'1.pp.1,,,','i1 du In prôs.:ntc invuut10n un dispositif permQ'tïtMt
EMI5.2
de prélever dos 0chnntillons..
La manipulation de I'cLpp,truil do la. présent invontion em extrêmement simple, 5r!':co à sa construction pou compliquée et au dômontmge simplv lors d'un éventuel nettoyage général.
<Desc/Clms Page number 6>
Le dessin unique annexa donné à titre d'exemple, illustre la présente invention.
Figure donne la coupe verticale de 1'appareil*
EMI6.1
lli:z;uT'c .2 nat une coupe dans un plan 11 tu4 entre les cuvettes.
Le récipient 1 qui peut être formé par des vis ou agrafes. cet pourvu d'une tubulure d'admission 2 et d'une
EMI6.2
tubulure de ctW irrr 31 ainsi quo d'une série do ouvettea 4, Ct?3 cuvettes 4 ont des fonds plats 5 ot 1.' '\' dl:1 e montant à angle dirK5it. Ch'1q\.1e fond a un trop-plein 7. ,ne cuvettes 4 sont enfilas wuc leur fond parallèle dnnn un pupport 8t les trop-plçinn mont d0clés l'un par rapport l'artro d'un angle de 180 ou mains. Le récipient pourvu d'un dispositif de chauffage 10 peut pivotur autour d'un arbre harizontal 9.
EMI6.3
L'js vis ou agrafes sorvrnt fixer le couvercle ne sont paa ruprésutit,oi3 sur le dessin. Lo cas échéante los trop-plcinn 7, .nscrr3e dans los fonds 5 des cuvettes 4, pl'uv'nt ûtrc nju,.it6u à la hauteur dôsirée, 1'''1' uxomple au moyen d'un gbrit, par pression à partir du hnut ou du bas ou nu moy('n d'un filubn;co. Le aupport 8 cet suspendu à un anneau 11 à section formant un nnf51e outre les brides 12 et 1.
Lui) cuvottuu rant mobiloo ot mnintunuos par des languettes fla entre dus oruillol3 '15 et 1fa du support z.
1..' rn'br'J horizontnl du récipiunt ost monté dans un chevalet 'i8 roulant, qui puut être ajusté pnr des via 19. On fait basculer le récipient au moyen d'un volant 20, qui transmet la mouve- mcnt sur l'arbre par l'intermédiaire d'un système de trans- mission 21 à freinage automatique* Le chauffage 10 se fait pr une enveloppe pourvu do tubulures 22 et 23 d'admission et de décharge du véhicule de chaleur ajusté à la température
<Desc/Clms Page number 7>
EMI7.1
tr)tviraxralc:, Ian r><f j>,;, ,< < irnliquu uni; bouteille trans- p;ce=<,ai>;
La "'1P.' , ;'i,;1.ii><i 2, montru vue par le hnut 1< f;>,çon dM1.t, 11.:; ru;(.t;t , .:nr,t ins<jrr6cs <1n.ns le support 6.. h t,f'o;"""r1in <i,; 1 ; cuv t¯ .1', pr0f!\Jntéo ici ost tournéQt1e ')0<1 p'ir l"!J1f.o:rt 3 ï - i' : r-' r. '1. uur i,,".l 1 r 1' "u1tu:r{. on introduit pAn la i;i:;! 1 at, ,1 ' '111::.1 ,., i 01. :' 1 '\}.>1 ,;nl3ion du collulos prÓpl1réo par <,x<-mi>1>; 1\ r=rt.9. u. ni:. ':,,'111 I)t contllnf\nt 5010 oellules/ml d.'Ut.. u;,<; ;(J1111:1<>., !.ut.riLiv. zou go iô I,mvolumo d'une solution Il;';:\rh:1I i'iui,; t "U) i =1>,j ii d'h;ydrol;ynat do laotialbumine) :, d,. iil µ- ,le ;;:.!, :' " '-'.. ho ';oitt'3t quo la liquide ost 'J:"ihl.' 'd', 1 ... ..'. i < '; .;,:1r':1l'o,:ut;\ ;2/1, onbouoho los : 1'11 'i;' !.. u ::
:.>',-<ij;1.>iil à une tClnpÓr"buro de 1?"'" 4.= t¯ l' '.11':' , 1 , .U im ,y ,:n du chnurrl1p,'o 10, soit ,i \P, :..,j<.>:ir \:1:1, ,u, : 1: " ri 1 lncubntion. Au coure do oetto i<";.l ;1< uth 'OU('lI' .",' '1. , .;()hr"7',:lIt-.: nu , Vi 1(., On. onlève <1 wi>i ; 1 . ll'1"i!. ,11,," 1. t.4 c 1 j> 1 o=ii l , puio on 10 rudraaBo t, < <>ii :ta!.t'.i.i. !w.. . 1' . ,>. 1 . <'=,llUlv:l1 un couohu unique, ;p1i n...''=:.t. j..'. l,,! , 'J"r r.t1l'r'Ir.,:J du culture, on i!.r'!ui.'".t. ,i;. 1 ;1-"!L 1,: ;"11 uUon dite VM3A oontonant "1"!::rU1, 1<> 1 i i 'J\I :'.1 :'1.. JI' h ricvr' nphtuuxv. 24 houros :. ;v" 1,,>: ;.r=;. l' 1).:', e' \ "n 1 ('VI! In lJunponsion du virus ,h , fi ''''/1'\' -.t.hl' \1: , ';11 \. '\ ,ill t 1 trI, du 107 ID50 ml onviron.
,ii.i>..<. tl,'O)',' -'11: t-"cij>1>;nt on lu stérilise avoo 1=. l' v;.q,;.r ,11..., ':f \:,' ...;,lrIrL::;icn dû 1 atmoaphèro, par ''.:.':!<1 . !IIl.1. <0 ::.111ut, ,;. c..; qui r=c:r.^.u;t d'utiliaor le rdoi- ,1' :.' i ir t! .R t. y ('V.d1 lÎ.' ,. i n't'/lt 1''' n4cioxairo do :'/'1 .i"': " t' J,: 1",'''t 11.-
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
De la même rxç, in est possible de cultiver des . cellules isolées de pouwoi , , do rates ot d'autres tissus et de les trniter '\fin d'obt.:ir des suspwsions de virus à partir desquelles on prépl1l" les vaccina. On réalise la culture dts cellules dans -lapparuil du la présente invention par une méthode connue ,'.1. tennnt compte, cependant des propriétés do la couch.' du pullules, dus virus etc.
Ce procédé a d.:s avintng s particuliers r n ce qui concerne les éconornica de plicu, 4,o temps ut du mnin d'oeuvre.
Les cxcRplus suivants illustrant la présente invention 13IIU3 oucuncmunt en l1m1 ter In portéo.
2XEl>i'LE 1 Daiin un ruoipiunt du culture de cellules E1;yn.nt une caprzci.trS de zozo 1 ut qui peut portur 50 ouvuttue dont chl"l.c\lnC' ". utic nuri'c(, d'utilisation dt; 2000. ON ) on remplit luaditus cuvette:' pnr lac tubulure 1' n<ii.>iiiuiofi située sur le couvercle,'""* nver. 100 1 due li auui><;n6ion dû oullulost, ;.ttcf u^p,nsi,caz-r conticJl1t environ 80'"10' cclluloe de ruin du sinr'; / ri.l r1nrm une nclution !lutritiv'J do 99 do In solution "H'mkn" (h un.) t'jnuur dt. 0, J ;J d'hydrolysat do 1'>Ct'ilb.amiii<,) c. t dw > ',5 \,;0 volume d,: nérun de Vunu. Dés que 1'0';1 C'1V.,tt,.: jiotit r...:r.1pli03, In nUrJp(;Inion CJl cxoé6 sort par 1" tubulure '1'. rit'ch'1r\! nu fond 4lu r'Jcip1.vnt dans unu boutoillo L1 ':nJi>.ir>:i t<.> lt ri1=: rnccord4c. Luc tIJhulUl"l.'f1 4'admission et du d."ch'1!'f':-; ';ont ..n:uit:. bouchas.
On l'ti!1t!{! séjourner le râC.lt:r4t p-nd-'nt '7 .iourr. Il 5'?OC rir1rlD unu 6tuvo d'incubation, 1\:h(hnt G.tt. j>"rio,1<; urm couche d.J c(:11u1l.,;9 de densité régu..
I18r!: nI: for!:;, fur ch'!cunu d. fi ciii,>ti,, ,;. ,>ipr-1;n ces 7 jours (lit t<J!.11'h-. 1. r.o.i;2i.trrt ci fl>30 pour i: t ï c:i rv.r la miliou nutritif p''r lr t.ubulux.: d "1'.blut1i.on. Ou r{. tOl.1rnt; 1-.: récipient ot lus nltzr::> '1.. c,.!11ul',1 .....11 c"uch" uni-quc qui sc lont d;vo7.opfict
<Desc/Clms Page number 9>
EMI9.1
nur 1"0 C1J.\'wtt.,a, 1"- ;<;1 1.;,1: j;,<1- 1'\ tubulure d'ndm1saion de 1 ml1.11irv d'ariti ci-.:, ssuu ,:t sont in!'octées avec '100 1, d'une. sro] Ut1.OIJ t'1",q., r fi':,} pnr du b.ierrbonftc; du sodium, cprnant 25 µ1, d<- Hid} ,1. culture d\1 tissus, plus 75 % ri.; la solution "li 71," zut ,,,>i>t;;nfint environ 103,6 11>50 ml .i, viruii p<>lioitià i,1. i t,iqii.; tu v;tpt: 1 v.nhonuy.
Environ 50 licurua '\1)"">0 l'infuctiou 'Jn Pt)!! ;;l.".'.r r ;)'11' In tubulure d'admission, 'P1.';3 nvuir tourna 1'.: i,,ic i ;;1,,int , (Jnvi1'oll 100 1 du suspension <1 < , vi i'us j polÍ(myvli.tit1 ,1' l'lt, un t 1 t roa du '10'1,5 1 D ml.
,'Q1"\ ;<J'JI' <Jlol>5 1"<jij, ;1< 11 on lu nt.'.ril1:!t.' :1VOC do la <: :1>;.u= <1',;iii t 1,\Y><,'; .( ;:i,1;..j.o>iià int C'J\Vtron à In p1'oooion -t 1 k,"/CIO"). On ..>t, ,1.>:i ',: i11.n\'1' 1<. récipient pour ri' ',IÁ1'r,1 cu'Hur"f ::'''11.> ,,> ,. ,', <i >'>ni< >iit, ,>t, i ' iij >piir;1 1 , t. 6oh:mFjor ..3,; \"I/'!d(n1.n, 'n'lüI 1.:: ,i::i:, . d'('V\!Jch,:lt6 ut à los démonter. rt< i<'1.* i 3 ) .." ; 1";1':['111 1' ,1 ",jIJ. t,t,,;ci dil3j1om:,..:D dano lu rÍc1..
1'1.. nt :.;r::l..l1'X' (1 )', x, :"',1. '' Y ()':r 1 tlll>ulurc d'ndmiaaion ;>1.'.<;J<; imr lu\couvurc .'.ipiut; ;IV,:C 100 1 du In xun- 1., rz;;i.rza du c(.;11\ 1\ f'l C. .', .\11::'I;nninI1 ÙI cu11u1c:H contient ;.aav.rori }OOCi10" c.1t;1.; ,. rn Lu dv ehil'n pnr millilitro <'i'''n3 unu sol.utàin '"'.'11 t'i', 11,'. du 0 pOUI'Cl'ut ijn Volumi do la noiution IIlh;.1{f.1" (li ura. :.. \\1' du O,) 5:' d'hyc1rolysC\t de 'l'ict'lli?ut>iini:1 -t 10 !>(,111 . ;.l n v<)lur,,' 1. oérum do venu. lé:: qu.. i." ou,..tt,i.: :;u;.' " .;,11',0, l'exclu du la sutp<:neiaz3 f1<, c: b 'kul, :;ttx ,'"'1:' :.' !')1]'l!' (it. :liC!W rKa "lU fond du 1',('lT'i. â; ri i; U1L: t),,r ,'1. tr.'\IIC1nl" ntl,.: stérile r/"1ccordÓo..
Apr''j quoi ex. f"1'r;;., 1 v -t''i!I1!'c lt^,t.irir,rin ot de c3Cohrr[U.
0;;, :4,>7wt4 s..jGj.\'.\'J" 1, :.<'ci ;.i , i>1 p,.nd:1nt:1 jours à 37"C #';.i"1, un. t.ilv: '\':;1Ü1.'t\.., . ;ra.cs c<.;a 4 jours on tourne la , :;, it l' ..t -1<.. 1r'(J" r".'" ' .: a,t : i. 1:11. 111. U nutritif par la
<Desc/Clms Page number 10>
EMI10.1
tubulure d' '1.<lmisf;ion.
On r,r'::'JRC 1" récipi...r.t que 1 ' <>1; remplit nouveau "lVl1C la s<;lut±1>n n;<.ntionnée ci-dessus, ,kpiéàJ un am ,0au séjour do JL jouru dans l'étuvu d'incubnt1o!1 à ,16> C , ine couche d(' c<-'llulus d'une densité régulière i '<.:xt t'v née sur lus cuvútt. G. On tourne le récipiunt do lbol fjt on r...,tourlk -tvoir vnlové le milieu nut l' i t 1.(. Aux \11 turus
EMI10.2
du culluh's -n couché unique qui si sont at,:vwlcy,I>1. r sur ha cuvA;t::,! on ... joute ut on in recto d'j 1q m:Ulif1rt.: écrite ci-d:):;U:1 p'\!' li tubulure d'adminnion 10C' 1 ri'm,, s"cution tanipon-M'h- ;"l,r du bicarbonate doe nodiu)n, cc,!lt.;,!1<\U1; 2' % d'un mi li. 1; 't culture de tissus + 75 % ni L" .''luL.1 'n "ilJnkB" , '11n01 qU(. ii>" 1]))0 / ml du vira h;pr<tii.1;. <io>i,t <iit,1<, .
C'1niB (cnladit d ùarr > , Environ 4 jours nprt''''. 1'lc:f olti ii on tourne 1. ré<%ij<1<,iii ut. on obtient p"1.r In tubulurl ,J, l '\d:\;,1iun environ 100 1 du :nwI>\Jl1f1iou de viruo hep;ttiti: COd! :\1', LOf;:), ciiiiix nynnt un t 1 t >,, de 107.6 ID 50 /mi.
EX ;:.:..1-'1± ; : On remplit lus cuv4ttt,Aa cïirp:,;ïsA ; bzz 11; 1(' récipient décrit fi ,'t.:r4r ;.l.c. 1 pur 1" tubulure <1"1(\:;1'. ,;:',l'!I aituéc sur lu oouv(,rcl:. du 't'\;cipiunt avec 100 1 ciL !'1.lG.!H;ndon cdluln11"9 contun;ant jlfl!it'on 50(10) collulun do r....ln I, ',1.1',1 par ml dnnc unu ;.<lului; llutritivu du 90 pour C'<:'" s: v,).unn.: du la solution. !li'\T'1.j;" Ch une teneur du 0.5 5, ,I\-.vI:r,,,,'1Yd'\t de 1I'lctl'1,lb\lmil.d I.!t 10 pour cent n volu:;:.. (l, f1':'T'1U' r1,. venu.
Dès qui Im CUV(tt.,) Hont pleines 11 JXCi"3 ri. 1.; fu;púns1on acaï.u7.nir.: ,Ic)rt pvr In tubulure de d.3ctmr..t. =u fond du récipient 'Í.UH' un 1.:outl.illw tI"'.n6P?ri'?1' 3t''i. raccordée.
Les tubulure.:' et l 'ulmicnion ,-t de djchn,T'I.:" l;0)Jt, ';:1rmi tu f-rm4<jBt (In 1;>ixn<. séjourner lu rt.'CTt?"1t !,..-adf\nt jours
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
I.h11 un Xtu,J<: 1'incur.'lt1"L J'.7"C. l('llr1rlJ)t Ct3 t;fAj7 uno ;:.>ii12h,; .,1.; cu3.laxt.:; c' ;:: t,-, :, 7.t'' bil.Il 02(.0',1\; uu formu attt Gh:,1:!;! 41 :* (uv,;t\,....'1. Au 1,<.iit (1,; ) JOUI':> on tourne 10 r-.'-'ipict d0 160" }.{-jr .:":1 i::.ln ,r 1 mllh:u nutritif vn.r la !.ubuh1'1, d't,d:rIi:wLo!..
Il 1':,:" pos:>1blc do; r,;Ixouvc;lt:r plusieurs f-'-ia 1>1 solution ru. t3.v, ,v;:r.t. d' ilst.^c5ciuiru les virus puis ,. "Wk'sirl2v..'l': it'G1,(5 t.rit.s --1:": t^11.i.',lrvG de cûl1ull!8 in couohu ".11l1.()\l :..}\11 SL no.t ri..'It.J.t)ç,J'..., on o..iout\.. <:t on ihfoctc pr'r 1"' '.;tst;tz¯i: .il.a3::i.:::viu:c d; 1,: nnièru déci,itu ci-dessus, "1<=.1 1 ," 1,., , '1nlutip:J. '1ih. ''..jA c(ntc.rmrt environ 10 ID50/ml dl. '/iru; it 1.'< fi".,ti "1 ht,:;1.: ('11 tj'pu C.
Environ 24 huuroe -.j's'' 1'1 ction t::, \;o'1!"!1' 1:: r''cinic.Ilt J'ou!' obtenir par 1:: i.al3ultzx'¯."t d:..1!::;i;, '(vh-un 100 1 du ctu^p.:nnion do virus do J l'É-"V1" ' 1'"- ) 1µ1 $1"1±(> ur. 1.ïtTo: .1 10/ '7 ÎDjQ/fll* , ...- v.'ir <,>1 1<' .1 - r''-cti'i'nt on le fitt'i..t3(? avec .1,; 1.: %*"i>< ..' ."t.'iu a 1'C <);r. :.T;UIIflnt, (nviron à uno (\ ..;1Ç,1;. d,, 1 k,:cr.l'<). 1 <. ; " .> 1 j. i unt st n7 orc prût pour ::vi:r,;x proc<. zrà,it. : i n 1 1 - 1 1 .: , :.';s;; :; .> 'J< , 1 i- A d01:1Ontc,Jr] 7 tap- i'.1. lt 6chn;.':r '.'1, t .":?3t¯ : lt '"v ;i', <1<:x '.' '1' ':rn'ntlJ, tel qui, des jointn à'\t.t'1.Ich!'it:., .. ,, rtcclxt:r. a1'..;1' 1. t,t'l 1)1 t4t.., 1 ,,',J, , 1.1/iTi 001:11' r, .cI 14()t,IMMunt 8 '1") ;in , ; ..1-:.ii j, i>1 1'1 cuur'- de.. cullulca, #1<;,.p<..rt:;i:t Ul. i.t'l.j âu;.t. t.. 1\ .llI'::
1.:. ..,y,>i,t t,Il motno duux =,,.E;.,;.,,,. , it ut,. r.w".:iw i, ;",',',1',1,.0 clin!Jon('1 (1 ,,no lu réci...
;>i .:.1.. z.sL'. t 1"i.^ l,;a; (1 i .t 'n.::" ,1'tt. 'lll-(1<,;:U:.i 40J l'iutru.
"' ) #-" V"!'.l. t' 1 .., i":1" i )''ciri< nous 10 u r1,. l". l "' rtil"1,11.'ul"'l'1# "'. :'11VflJtLU
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.