BE695213A

BE695213A -

Info

Publication number: BE695213A
Authority: BE
Priority date: 1966-03-10
Filing date: 1967-03-08
Publication date: 1967-09-08
Also published as: NL6703460A; ES337728A2

Description


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  Procédé micro biologique. 



   Le   brevet   belge N  636. 716 décrit un procédé   d'obtent::!.on   de composés du type encline,, procédé selon lequel on effectue 
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 m0 "')'ül ;'U1'G ?px ojihyftg. souche mycétienne, formant des coni'dl",,:) :Hl i:à. l;/o  de 1>espéce Claviceps paspali Stevens et Balle en évà#'i:zTe iiJUbmel[ée 01::. en culture dans un fermen,beur, puis on exëï'ait les composés lu typa e:=m,go].in= du filtrat de culture. Cette souche a il té Q.épg3ê au. Uni tl:'l1 States Department of Agriculture (%o+liian= Utilisation Researen and Development Division) , Peoria., iÀi:L-fl>4 z, f)Ù, elle a reçu le numéro de dépôt NRRL 3027. 

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  Gr, la Demanderesse a trouvé qu'on pAt1.t, pax :J,x':!:'mi1:t:1. tion de cette souche mycétienne par les rayons et/ou par len rayons ultrbv101ets et/ou traitement par le6t-iylène-îmino eftü0- , tue de manière connue o'/)ten:1,' des mutants capables de produire davantage de composés du (Jpe alza,e, surtout l'amide de l'acide lysergique et l l1.!,;';,de de lucide i5:..;lysergiq12.-:?:,7 que la souche initiale. un de ces nnt:;ll'!.l;, 3.' écé dépose au United States Départent of Agriculture (81 0 r-  xhe i ;H;!1.zat1on !i.u;':;&:rzh -d Development Division)"  ew. ?a, I.Ü:i!1,oÜo> '.la il a :rl.l}l le ni>mé+o de dépôt RUZ, 3166. 



  On peut obtenir les mutants p:::. exemple de la manière 
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 suivante 
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 On met en suspension dans 5 ea. des conidies de la solche mycétienne NRRL 3027 et on réparÉi'u cette suspension à la 
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 surface d'une gélose au malt coulée dans des boites de Pétrie de telle manière que chaque boite reçoive environ 1000 spores. 



  On irradie ensuite la surface de la gélose avec de la lumière 
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 ultra-violette; jusqu'à ce que, dans chacune des bÔ0S da. 



  .Pétrie seulement 6e 5 à 10 nidLw v s2:.s¯  :.t à. g ß ,4, e qui correspond à un t8.u.'c de s'optait te de 4->ry. La distance de la source lumineuse (par exemple 1.1."le 7 fn de hanau) et la durée de i>exposition à la lumière sont déterminées empi?i-  q,uement dans des essais préliminaires, es spores sÎ.':X"}'5W.i'l1t,3B donnent naissamce, après un temps de 10 à 1-4 jours à 2C é des colonies visibles à l,' examen macroscopique. 3? . ; sont isolées et repiquéess de façon à obtenll". de la uan.;I.h:Y"1 4(é;sj,lao dans le brevet cité plus haut; des cultures portant des f;ol1.2J:::H:h'5" Parmi les mutante ainsi obtenus; on sélect4 ci-1#;## ;1;1. 



  Moyen d'essais de culture (par exemple dans une des (;t(U1.U:0S indiquées dans le brevet cité plus haut), les souches q#1 se 

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 signalent par une aptitude particulièrement grande à la forma- tion de   composés   du type ergoline, et on soumet ces souches à un nouveau traitement mutagène au moyen d'éthylène-imine. A cette fin,, on met en suspension les conidies pendant 2 heures à 24 C dans une solution à 0,1 % d'éthylène-imine, on sépare   les     sporec   de la solution à l'aide d'un filtre à   membrane,   on les lave sur le filtre avec de l'eau' stérile et on les   ensemen-   ce sur des plaques de gélose. Ce traitement entraîne un taux de mortalité d'environ   99%.   



   Parmi les souches survivantes, on   sélectionne à   nouveau, de la manière décrite plus haut, les mutants présentant la plus grande aptitude à la formation de composés du type   ergoline..   et   on.   les soument encoreéventuellement, à un   traitement   mutagène par l'éthylène-imine, répété de 5 à 10 fois. On obtient ainsi., par exemple en répétant 8 fois ce traitement, une souche ayant une aptitude particulièrement élevée à la production d'alca- loîdes, souche qui a reçu au United States Department of   Agricul-   ture (Northern Utilization Research and Development Division),. 



  Peoria,   Illinois,   le numéro de dépôt NRRL 3166. 



   Lorsqu'on cultive les mutants NRRL 3166 en culture avec secousses, de la manière décrite dans le brevet cité plus haut., on obtient au total,, après traitement du filtrat de Cul- Cure,   2210     mg/litre   de composés du type   ergoline,   parmi les- quels 85% d'amides de l'acide lysergique et de l'acide iso- lysergique. Quand   on   effectue la culture en fermenteur.,   de   la manière décrite dans le   brevet   cité plus haut, on obtient au total avec ces mutants 1320   mg/litre   de composés du type erge- line, dont 87% d'amildes de l'acide lysergique et de   lucide   isolysergique. 



   Si, au lieu de la   solution   nutritive utilisée selon Ici brevet   site   plus haut pour la préparation   de   la culture   prin-   

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 cipale, on utilise un milieu nutritif contenant,, dans un litre d'eau distillée sorbitol 100 g acide succinique 36 g
KH2PO4 2 g 
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 MgSO 4. 4,3 g Fe64. 7H20 1 mg Znso 4. i20 10 mg et dont le pH est réglé à   5,4   au moyen de NH4OH, on   obtient, .   par culture avec secousses, au total   2630     mg/litre   de composés du type   ergoline,   dont 85% sont représentés par des amides de l'acide lysergique et isolysergique.

   Coand on effectue   la,   culture en fermenteur, la quantité totale de composés du type ergoline est de 2270   mg/litre,   dont 87%   d'amides   de l'acide lyser-   g3.que   et de l'acide   isolysergique.

Claims

RESUME. EMI4.2

------------ La présente invention comprend notamment : 1.- Un précède d'obtention de composés du type ergoline, procédé selon lequel on produit des mutants de la souche 'NRRL 3027 de l'espaça Claviceps paspali Stevens et Hall, aptes à produire des conidies in vitro on cultive ces souches en culture saprophyte et on isole du filtrat de culture le mélange de composés du type ergoline ainsi obtenu, lequel mélange contient surtout l'amide de l'acide lysergique et l'amide de l'acide isolysergique.

2.- Des modes d'exécution du procédé spécifié sous 1 , présentant'les particularités suivantes, prises séparément ou selon leurs diverses combinaisons possibles <Desc/Clms Page number 5> EMI5.1 .':1 OÙ 't9"t¯ß 'â: J en' ses mutants la souche NRRL 3027 en h-.. '';;.,.''. tant rs5 des rayons X et/ou des rayons ultraviolets ., ',l.g>éi J..;'; ÔtJ:::t?Í:.0I"l1J1.J:le !r b) on utilise les conidies pour la culture saprophytes bzz on i;t;=3.iz:? cs3r>n mutant la souche .NRRL 3166.