BE714088A

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Info

Publication number: BE714088A
Authority: BE
Priority date: 1968-04-24
Filing date: 1968-04-24
Publication date: 1968-10-24

Description


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  "Procède d'ext!'acrtion <3t de purification d!antibiotique3 tei< a aaR 
La présente invention se rapporte à un perfectionnement apporté à l'isolement et à la récupération d'un antibiotique   tetraène   provenant   de   bières de fermentation, Plus par- 
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 ticulièx'ement, l'invention concerne un procède d'isolement et de récupération qui est réalisable   économiqueinent   et le te-      traène, diversement connu sous la dénomination Pimaricin ou 
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 Tennecetin, est récup6ré avec un excellent nendem-ant. 



   Le nouvel antibiotique tetraène, auquel se rapporte en général la présente invention, est mentionné par Burns et 

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 iir.1'zna>1 de 2.'Université de ','Eâtil$t3 dans Antihiotics and :'s ct$ vala 9, p-àzos 398"405 (1959). Il est aaractéris" H3 !:es autours co:snû tstracne et est d6x'ivë de la '?4a.S.w:wisâxl.'' ..'V: \lu ::':t!'C1"'1tO%1.vcea Ch'ttD.no(1.nrdh organismo Uroixsant dans un ;il1til!J nutritif.. Les auteurs ont 4 rjGnâ.! Tennea..etin gaz antibiotique ;3n?iòngu<au>;, Le 1>rcvoG- ang;i.air :-1" !-1ltl. 289, publia le 10 aoclt 1,flJ, ...:i ,4,, v#. oï fI5P ww ,.:.4 l'antibiotiquo 4.n4.hss ri",é''s pimariain E':'.  "v .. tli > t.:' ;:1.'6:: natlensi6 ter, e);\ta5","ns ?PopPi6té- . 



  "": -:;.:.'1\.1.'';\:; et ,>2."'.:.r;::l.q..ilOS '. Q!) études 3."'E..'ki',',i entreprisse en u.tif,i.c<xn# A.. "'11r'< les ., -1 ppesentenent applicables, ont contre '-iu"? le Tennec'3tin Cit le Pin3.ricin peuvent Stre identiques ou en '".:.:r :c'.'.'3't. s' w'2tis'G:ß,sc3 :.3.'s,'>$'::"'L?9û a.w o r^nt aux réfél:'encl3c de Burns et lioltnan, 'actiit6 antibiotique est cxtraito de bières do fermentation@ 'l;nf :!..c:qJl('.lQ\'.;,\ cl1c <3l"3t 63.abop6epap 1'o=-¯aniswe, par.' azn procédé c':tro twon au solvant au cours duquel lez bières clarifiées ou 'l,wxE:a=: (examptes de tissus cellulaires) sont mises en contact avec un alcanol'non miscible dans l'eau,, Conformément ces !?roc6âé 1> le butanol, qui est lou? alcanol pr6fér6, est utilise cornue oset:aot.nt en quantités de l'ordre de 25 à 90% du 
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 volume original des bières de. fermentation.

   Ce grand volume 
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 de solvant est ensuite évapore pour oonc ntre;1 l'antibiotique '.*ü, peut 4tre purifié et récupéré sans inconvénient ; 
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 Puisque l'antibiotique est élaboré dans les bières 
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 sous dilution extrême, la fermentation conmercial.e implique des ccxitaine3 et des milliers de gallons de bières et par conséquent, 
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 conformément à la technique connue,, de très grandes quantités 
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 d'alcanol comme extractant, La marlinulation, 3.16vaporation et 
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 la récupération de ces volumes considérables de solvant extractant sont coateuses et augmentent considérablement le coût final de l'antibiotique pur. 

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   Le brevet anglais précité divulgue en outre la précipi-   tation   de l'activité antibiotique dans et sur le   mycellia   et 
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 l*extraction à partir de celui-ci avec du mthanol contenant jusqu'à 5'J de chlorure de calcium, Ce dernier est ajouté pour s.ucnter la solubilité de l'antibiotique dans le. méthanol. 



  En raison du caractère oellulaire et cellulosique du mycellia# un temps conzict6rable et une quantité êlevee de solvant sont n.csssairss à l'sxtraotion propre de toute l'activité d'un sub- atrat de   @@     type.,  
Un but de la   présente   invention est de simplifier les   procèdes     d'isolement   et de purification aboutissant à la récup6ration de   Inactivité   antibiotique avec un bon rendement. 
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  Un autre but encore de l'invention consinte a pr6voir un procédé pour la concentration de l'antibiotique provenant de bières,   exigeant   une quantité minimum de solvant et un temps réduit,
Un autre but de l'invention est de prévoir un procédé pour la récupération et la purification avec un bon   rondement   de l'antibiotique tetraène mentionné ci-avant, en utilisant des solvants économiques qui peuvent être   récupérés   aisément,
Les buts Mentionnes ci-dessus sent   a.tteinta   par la présente invention, dont les différents stades consistent à   re-@   
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 larguer l'antibiotique de la solution acidifiée de bièrese à ré-, cupérer l'antibiotique précipite sous une forme solide   concentrée;,     5. :

  purifier'   l'antibiotique par le lavage de l'antibiotique préci- 
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 avec des solutiomde bicarbonate et des solvants qui' ne dissolvent pas l'an-4ibiotique, à dissoudre le concentrat antî- biotiqua dans un alcanoi inférieur pour le débarrasser du sel, et einaiercnt à récupérer l'antibiotique purifie da sa solution d'alcanol inf''i'3UX' La fornentation de ses antibiotiques est puatiaës dans d<3? solutions nutritives contenant des souy-oes de cè1t'hcmes assi- 

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 fle pn6f61%ci;c<ù dao, hydratée if dus sources d'azote Qrzaniqu ou .inorganique, c* des sels sunuraux sous forme de traces.

   Le taux de croissance de l'organisme et le 
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 rendement de l'activité antibiotique, oast-5.-dire le Tennecetin, ou le Pimarioint peuvent Être contrôlas en variant les propor- j tions des !'mtieres mentionnées ci-avant, ainsi que la temrra- ! ture,   l'agitation   et l'aération du milieu   lui-Maffia   au cours de la période de croissance. 
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 Les 1cres entièrement ferments contiennent en        gênerai     approximativement   600 à 750   d'antibiotique        
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 par millilitre.

   Il est souvent plus t.'çonom.4--ue de rëcupcrey les bières lorsque la concentration antibiotique est à un niveau   inférieur;   puisque les temps de fermentation nécessites pour l'obtention de niveaux plus élevés augmentent les charges sur        l'appareillage,   qui ne sont pas en proportion avec les rendements !   augmentes.   



   Les bières de fermentation d'un pH 6,5-7,5 sont fil-   tressa En   raison de la nature mucilagineuse du mycellia, la filtration est accéléréo par l'addition de jusqu'à 1% d'un 
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 agent de filtration aw.:ÎI44aÎrc, Le mat de mycallia est lavé avee une petite =luantit4 d'eau et cl-aire et les Isvages sont <?mbl-n6s> tJn sel nincral :jou--,ee à ce n61ange, de pr6fêpensa du ohlorurs de sodiun.< j.iL#juà ce que la solution contienne g5 ± 3S'';. Bn poiJs dg oa zclr. 



  'La haute concentration en sel assure le "re3artuagal, an substance de toute l'activit6 .antibiotique Cette solution de se?, est >6ziô.z à un pi# de :2 t 5.. 0 avec un acide minéral. 



  L'acide ehlorhydrique est préfér, mais d'autres acides, comme l'acide phosphorique, peuvent être utilises.   L'acent   de filtra- 
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 tion-auxiliaire résultant, l'antibiotique et la pâte de sel sont filtres. Le gâteau humide est recueilli et le filtrat est éliminé.

   Le gâteau humide peut être lave avec de petites quanti- 

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 tl>#, -.lv snlu%io:i5 :xcncùnt=<ies ou :>atur4cc de bicarbonate de ::.(";r'H1J! (\'.t u-ecc de l' a(l6tone ou encore avec cec doux composés pour éliminer les   impuretés   et les colorants non actifs, Le est   ensuite   extrait (il est acidifia en   premier   lieu si un lavage au bicarbonate est utilisé) avec du   méthanol   
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 0=-u de l'ëthanol ou encore avec un mélange de ceux-si,

   en agi" tant le 3t?au avec 1 alaanol et en éliminant ensuite par fil-   tration   la solution alcoolique de   l'activité   antibiotique Cotte solution est   concentrer   et séchée par pulvérisation pour 
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 donner un produit d'une pureté de 85 à 95t La r6cui)6ration est de   l'ordre de   40 à   70@   de   l'activité   antibiotique Présente dans   les   biàros   brutes   par essai microbiologique. L'antibiotique 
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 r<Jciàpé 6 ert d'une pureté d'environ 950 iiicrograniries par mini" ; gramme. 



   Le   procède   conforme à la présents invention est décrit dans les exemples   ci-après,   Ses exemples sont donnes uniquement titre explicatif et ne limitent en aucune façon la   portée   de la   présenta   invontion. Il est bien évident que chacune des   variantes   rantrant dans le cadre   de l'invention     présente   cer- 
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 teins avantages nour e-%Crta4ne buts spécifiques et que l'intentics', n'ûst :;M d'indiqué? une m6hode r=emnercl-ale proférés. 



  EXEMPLE ùt;s biEmes blutes titx'ant 590 mic ognanunes ?an milliU2 Dr-CS bliute-âc -tîtra%t SIO m1cogvaromes par 11tre sont m6'anG4-#s avec 2fi en poids dfIngen,à t-e fîltration nuxs,liùi,r<: llijrìc) e.t filtrées, L- bièro clairs est traitée avec ,5. >upp14=r;>-i;tnije d'aset rie filtration lu;;i1îaiT? et une qus.ntitc de sel Qtst ajoutée !,ou!' donner une solution de sel à J2 en poids dans la bière claira, Au cours du mélange,. le pli est r4glé 9-es avec de l'acide chlorhydrique.

   Le mélange est ensuite filtré et le gâteau de filtration est   pressé.   Le   gâteau   brut est réduit en une pâte épaisse avec de l'eau dis-   tillée et   du bicarbonate de sodium (NaHCO3)est   ajouté   jusqu'à 

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 une concentration de 36% (en poids) de la pâte   aqueuse.   Cette 
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 patç est réglée au nil 7,5-7,8 avec une solution d'hydroxyde de sodium et est filtrée, Le gâteau   @@c   est lave avec 7% en poids   d'une   solution de bicarbonate de   sodium,   ensuite avec de l'acé- 
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 tone et est finalement 35ché Le gâteau sec est réduit avec 'de 1 alcool 3A ('thanoi- dénatura pas'' du rôtô?anol) à une ooncen" trsticn de ?;O'l 9!'1 poids du gâteau dans 1'alcool.

   Cette. poste est ensuite rsglêe ê un ni! de 2,8-3,o avec de Taeide chlorhy- drique, et filtrée. Le gâteau   est lave.avec   d'autres quantités   d'alcool,  Le filtrat contenant   Inactivité   antibiotique est con- 
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 centré à un dixi%tn du volume original et Ileirll est règle à ' 7O702. Le eoncentrat est séclii6 par pulv2risation jusqu'à l'obtention d'une poudre 16gèreroent jaune. L'antibiotique est récupéré à une pureté de 900 micrograrmes par milligramme. 



   EXEMPLE 2
Dès bières brutes titrant 675 microgrammes par millilitre sont   mélangeas   avec 2% en poids d'un agent de filtration auxiliaire   (Dicalite)   et filtrées. Les bières claires résultan- tes sont traitées avec 0,5% supplémentaire d'agent de   filtration   auxiliaire et du sel est ajoute en suffisance pour prévoir une solution de sel à 30% en poids dans la bière claire. Le pH de ce   mélange   sel-bière est   régis   à 2,5 avec de l'acide   chlorhy-     drique,   Le mélange est   filtre   et le gâteau est presse. Le gâteau est lavé avec de petites parties successives d'acétone 
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 et la gâteau brut contenant appnoximativement 'V0'ô d'eau.est réduit dans deux parties en poids d'alcool 3A.

   La pâte est i mé3.angée, filtz-6e et avec de petites parties successives Ct'alcool SA. Le filtrat est ensuite concen+-r6 l un dixième du volume oX'iginal et le P19. ef!t rég16 :t 7 ,0.."1 2 Le concentrat est ensuite s6cÊé par pulvérisation jurzqu'h l'obtention d'une poudre légèrement jaune, titrant 900 mic=oL=aù=<: p3.r r4Àl,ig#n>.ù;no# dé pureté. 

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   EXEMPLE   3. ' 
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 Des bières brutes titrant 700 microgrammes par me.iii- litre sont filtrées en présence d'une petite quantité d'agent de filtration auxiliaire, La bière claire est traitée avec une quantité supplémentaire d'agent de filtration auxiliaire et 30% en poids de sel sont ajoutés à la bière claire qui est réglée à un pll de 2,5 avec de l'acide chlorhydrique, Le mélange sel-bière est filtré et le gâteau est pressé.

   Le gâteau est   lavé'   avec quatre parties successives d'une solution de bicarbonate de sodium à 7% et est ensuite pressa après le lavage final. 
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  Ultf'-4-ieurem,ent, il est lavé avec deux parties d'acétone. Le gâteau est   éliminé   du filtre, réduit dans de l'alcool 3A pour former une pâte à 40t en poids de gâteau dans l'alcool et le pH de   la.   pâte est   règle   à 2,8. Cette pâte est ensuite filtrée, 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims

EMI7.3 le filtrat est conc')ntré à un dixië'M du volume original, le pli du concentrât sst >6g16 h> 7,,0-7e2 et la Matière est s6Ch6c par ion, Une activité antibiotique titrant 950 mi1t'rojr<mlmos pex. ;=il,lizra1-,taz. de purefé mrt obtenue, z±gµCA Iot13, 1,- oc6d6 d'ntraction "'': de purification des t'!.nt5.... biet3.u'3S tetaene choisie dans groupe composant Pirîs.ri"' bi<tig>.1#E 'ttt;:,'a.'he C.:'1':)2.SJ.6 dans le: groupec se composant- du 1'!'Q.rJ.'" dn .#, du zan;.i<ace.ci#1, apactëx'isp par les stades suivants son- 3i3":Sts 1::'" ;;;. 7:,elal'guer VOC des sels inorganiques leact4-- 4o,Jo '!..& des bièr*F,, claires vité antibiotique bute des bières claires asidifiees b) à =c=uii13.1.r le précipité .o) -i nuyifier par lavage l'activité antibiotique F..1;e' ':

">,gi:;m,a.i <¯ans ;;,iqui l'activité est rela- '.;i<''?.o<'ît lnscl:nôl,e d) Ilant:P,,.4.otl-n,ue purifie dans un =j¯,,.=qj¯ x¯=.i¯i#jj>1,.j,g s) 9i: r---up6rer 1'activité antibiotique par êva- <Desc/Clms Page number 8> poration de l'alcanol.

2,,-' Procède suivant la revendication 1, caractérise en c@ que le sel inorganique est du chlorure de sodium, 3.- Procède suivant la revendication 1 ou 2, caractéris6 en ce que le solvant est de l'acétone ou est choisi parmi des solutions aqueuses concentrées de bicarbonate de sodium.

4.- Procédé suivant la revendication 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que l'alcanol inférieur est miscible dans l'eau.

5.- Procédé suivant la revendication 4.caractérise en ce que l'alcanol inférieur est de l'éthanol.du méthanol ou un EMI8.1 mélange d'éthanol et de m6thanol 6,.. l'rocdc suivant l'une des revendications précédentes, narôct60fiisé en ce que Ilévanorat4-on de l'alcanol comprend un stade do par yl.F.#Fr.a9C's.J:,g '1... Procôd6 d q '.:'.S,-wc3n â. de purification d'anti"' biotiques tetraene en ." .-..â.S''i3t'.s COffir8 d6cit ci-avant.