BE742209A - Pure maltose - Google Patents

Pure maltose

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BE742209A
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BE
Belgium
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starch
sep
solution
maltose
temperature
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English (en)
Inventor
M Hirao
J Ogasawara
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Hayashibara Co
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/22Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a beta-amylase, e.g. maltose

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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description


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    PROCEDE   DE FARRICATION DE MALTOSE
DE GRANDE PURETE. 



   La présente invention concerne un procédé de fabrication de maltose très purs à concentrations élevées, à partir de différentes bouillies d'amidon très concentrées, par chauffage de ces bouillies avec ou sans addition d'enzymes de liquéfaction ou d'acide pour liquéfier et dissoudre entièrement l'amidon, suivi d'un refroidissement rapide du liquide gélifié, qui est   immédiatement   soumis à l'action de   1' -1,6-   glucosidase et de la ss-amylsae. 



   Il est connu de fabriquer des maltoses à partir d' amidons, par liquéfaction de l'amidon suivie d'une   saccharifi-   cation du liquide obtenu par addition de malt (c'est-à-dire un mélange d'a- et   0-amylase).   La teneur en maltose des produits ainsi saccharifiés est au plus égale à   50-60     %.   Les 

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 produits obtenus contiennent habituellement de grandes   quan-   tités de protéines et de dextrines limites. En raison de leur faible teneur en maltose et de leur teneur élevée en impuretés, il est très difficile de purifier ces produits simplement par recristallisation. 



   C'est la présence de dextrines limites comportant des liaisons Ó-1,6-glucosidiques qui empêcha l'amylolyse complète de l'amidon en maltose dans les procédés classiques. 



   La présente invention obvie à cet inconvénient. Elle se rap- porte plus précisément à la fabrication, avec des rendements élevés, de maltoses très purs, à partir   d'amidon,   par décom- position sélective des liaisons Ó-1,5-glucosidiques contenues dans l'amylopectine, un constituant de l'amidon ; pour réa- liser cette décomposition on profite de la spécificité de 1' Ó-1,6=glucosidase qui, agissant sur les liaisons Ó-1,6-gluco- sidiques qui forment les ramifications de la structure molé- culaire ramifiée de l'amylopectine, donne un produit unique- ment constitué par des liaisons    -1,4-glucosidiques   en chai- ne linéaire, ce qui facilite l'action de la   (3-amylase.   



   Puisque la 0-amylase est un enzyme capable de   dé-   composer sélectivement les liaisons Ó-1,4-glucosidiques qui constituent la majorité des liaisons de la chaîne linéaire des molécules d'amidon, elle peut entièrement décomposer l'amylose formé uniquement par un enchaînement linéaire de Haisons Ó-1,4-glucosidiques des   molécules/d'amidon.   Cependant, pour   l'amylopectine,   il est à remarquer que si, dans sa structure moléculaire ramifiée, les ramifications formées par des liaisons Ó-1,4-glucosidiques sont décomposables par la   p-amy-'   lase, les ramifications formées par des liaisons de    -1,6-   glucosidiques résistent à cette décomposition et arrêtent la réaction. C'est la dextrine limite.

   La présente invention est caractérisée en ce que les liaisons    -1,6-glucosidiques   de la solution d'amidon sont décomposées sélectivement par addition de Ó-1,6-glucosidase pendant ou avant la réaction avec la °-amylase de façon que celle-ci agisse sans interruption. 



   Les a-1,6-glucosidases utilisées conformémconformément à 1. invention sont des enzymes qui proviennent de   levure:,   et de sources végétales et que l'on appelle isoamylase ou enzme -R, mais sous cette forme elles présentent trop peu   d'activi;   pour l'utilisation pratique. La pullulanas [ Bicochem z.33 

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79   (1961)]   extraite en 1961 par   BENDER   et coll., présente une activité légèrement supérieure et a été utilisée pour   déter-     miner les constitutions des amidons ; ce rapport ne con-   cerne que ses actions et efficacités sur des solutions très finement diluées d'amidon, de l'ordre de 1% ou moins ; on n' y   tr@@ve   aucune donnée utile concernant des applications in- dustrielles.

   La demanderesse, en vue de ces   applications'pos-   sibledes Ó-1,6-glucosideses dans l'industrie, a recueilli de façon extensive, des échantillons de   cultures..type   et de bactéries du sol en de nombreux endroits différents,et après des opérations répétées de triage, a trouvé plusieurs variétés de bactéries capables de donner des enzymes très actifs à partir de souches des genres Escherichia, Pseudomonas, Lactobacillus, Micrococcus,   Nocardia,   etc. Parmi les bactéries retenues lors des triages, celles du genre Pseudomonas et Lactobacillus ont été adoptées pour la réalisation de 1' invention. Les enzymes ainsi obtenus diffèrent quelque peu l'un de l'autre quant à la spécificité du substrat et les   pro-   priétés enzymatiques.

   On a étudié l'intérêt qu'il y aurait à utiliser ces enzymes soit isolément, soit en mélange, et l'on a constaté que   1'utilisation   combinée de pullulanase et d'en-   zyme   provenant d'une souche du genre Pseudomonas donne un bon résultat. 



   Les amidons utilisés couramment, y compris l'amidon de maïs, de pomme de terre, de patate douce et 1'amidon cireux de mais, peuvent être utilisés confo=mément à l'invention. 



  La dissolution de   l'amidon   s'effectue par chauffage de la   bouil-   lie d'amidon à 100-180 C. ou par addition   d'a-amylase   et liquéfaction du mélange par chauffage, ou bien par acidification Légère de la bouillie suivie de liquéfaction par la chaleur. 



  Dans tous les cas, la liquéfaction ou la dissolution thermique décompose les molécules d'amidon en molécules plus fines et c'est pourquoi, même lorsque l'amidon a été entièrement hy-   lrolysé   par la -amylase, les molécules formées d'un nombre .mpair d'unités de glucose sont décomposées en molécules de   taltose de 2 unités de glucose chacune, et laissent 1 molécu-   e de maltotriose ou de glucose par molécule d'amidon liquéié. Puisque, plus. fines sont les molécules   d'amidon   après   a-   ylolyse, plus faible est la teneur en maltose de l'amidon arfaitement amylolysé, il est préférable que l'amidon après 

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 EMI4.1 
 dissolution présente w .: équivalÓ!iI'1; de. : ; ;.. faible. 



  D'autre part4 i ,"", .¯¯  >::: <1> 0 'c- l cx-1.6-g1ucos1dase se :-G""''5;J'1,.."er(i; "an';0r "¯ I# # / .=. '".z= vancement de l f amyloly'!:f la fluidiL a¯¯ t . ¯ ;#.un d'amidon. Cela signifie .:r..a :"5amylolyse 110 .' .. 1 ¯.c bzz tre interrompue au point minlmum 03. la 5(JC::c,< * :..ca't:1,..;'1 <1 lieu. C'est pourquoi ;''. i do l'amidon 4 : d; la ai-ssolution na doit pas :;'e s:;::,eur 3, gaz '7:';. -: .:,ié:'(:ti1J compris entre 1 et 3. >ô--ns ié .;,as où le 1J'J\.,':'i,,- c'a.n.on es liquéfiée par la chaleur sens intervenfioK..,l.-<.. -=¯ .;=<%1é liqué<;<; fiant, elle doit être ;î AF,f e de fagon c3r se 'i:..:IDp6.." rature égale ou inf4=îe;-.? à ;.'"C 5clci"iJ '"iJ .': de ù.. ,ju±S- :action sous agitati'.::n<r. 'j .  ,. à.-uée d0 ;;'QC';,.' 1>ùS:1 3t#.*$.

    justée de façon à oi:e-:1 # - .';c3. co:np;5 =5 'i" , ., ."..;i la méi:1e raison, tr"nk== # i.-.' lfl.J? un enzyuà j :1.".>.# 1.li#, l'amidon doit Gtre li ---¯... :'J0 t"J8ûiè::rc f;.'i¯¯ :'"- - <1? 95"Ct du fait que 1¯ â;#-¯ ,35é!ç;ii'.Jc.' ¯.. -- , ciur6e do 1E.."-as ' ¯ ',ï.¯"-=' 1. i-= . - - bzz =aison de l'E.D< Dani -" J,",-;"J 'L"':'3.- .- ., i3.iLë il tendanca à si .?.;..:1= ,> t, ¯¯Y4¯ ¯,c-o¯¯ ¯ ¯ ' "3 l 'ar.1idon Vv:6, "sS. 1±>ç:=,:=:"- ''',} ¯..¯-¯ >':! 1: , - :=: Le = 1=  arc 4 et 3,5 onvir..; Une soluti21. i:? j9::::'!.. t.7 .: .> L¯ ¯' :):-.-- ¯ -:¯¯7::, décrits ci-dessus, i,.î,='" 1::....7àicoi=1.E± '-:::--< -::'J'':::, . une concentration "' '::"'}"{\:'4Z ¯v i3 û 1 ±µµ, .

    ,¯¯ ¯ ¯¯. = ;- ',= fi,  Cté.7.;t'.re:.:','it avant<:.gcu.5'JS .;;..-,<,r 1,os .<..'r''3'¯,r<< ¯¯.rr¯t?...' cette solution devient ,.j:...'J{.:;l::G:.1.3o pé'...: ;Q';'v....;,:}Z:::::?:1; et la rétrogradation des mc2''-il'}3 'J Eüylosc q=1 on wW la ?C3sc<quence, inhibe la rcactiCK ,:.:; ! 3 : do ;.e'''-'.'.ifie3Hcn: Même une solution ne i3bic3r.::::: pas duo ;;';tr'.i:Jli:c "2Q" .,,""'n; E1C doi'!;, pas être utilisée à Ul!.e -a:¯3bc v<Jl ') c'ji #-1.> 3rioe à 30%, car l'action de la ;"?-2:::::it:C..} 4.¯?.' :3'rW: im :....1hi:Ji"tcuZ', du substrat. En ccnsp>¯ce 1 ;::1J1\.Ji/;:;:; P0,-- .'3.-, '':;1'':''::",:;'.::nt3 ultérieurs que ,la t,': ¯ ¯ 4:':: 'GIi10' 0:::' ¯¯¯<.¯: '::(':.::::ri;:\. entre 10 et 20%. 



  Ceigne à'awi;1#-: lLi=J i¯.:# ;.'it j:.L''':jr' 1n.1 ±3iX:1= gT2datiaéa, il est prii:5:.iia.: . , lli -'iL.3? :::.¯. ,";;:.1, a'\'n''t que la viscosité ne ci':';:;.1..nuG ".: 'nÉ? de ¯, . ¯ ¯ ' dc à ,-j J'" dition d'un enzyme de sacc?10..:;..o;'::'52-;s.,C'iJ "=::.::,;-'.:-:..-=:" et "a;-hi... 

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 glucosidase, et de la maintenir à une température aussi   éle-   vée que possible. Ainsi, une solution gélifiée d'amidon doit   être   refroidie instantanément et de façon continue par un   réirigérant-éclairavant   qu'on y ajoute un enzyme.

   Il est bon pour cela d'ajouter initialement une portion de ss-amylase ou d'un enzyme relativement très résistant à la chaleur, obte- nu à partir d'une souche du genre Lactobacillus (par exemple,
Lactobacillus gayomii (ATOC 8289) ou Lactobacillus pantarun   (ATCC     8006)   à une température relativement élevée comprise entre 60 et 70 C, et puis d'ajouts le reste de   l'enzyme   lors- que la viscosité baisse* Un mélange de 2 variétés ou plus d' enzyme ayant une activité d'Ó-1,6-glucosidase entraîne de meilleurs résultats pour la liquéfaction et la saccharifica- tion.

   Parmi ces enzymes, on compte par exemple l'isomérase, la   pullulanase.   Il est également important, selon les proprié - tés des enzymes utilisés, d'effectuer la   préconversion   primai- re pendant une durée de 20 à   60   minutes, puis de refroidir la solution à   45 -50 C,   et après addition et mélange du reste des enzymes, de transférer le mélange dans un bac à   saccharifica-   tion. Comme la viscosité est encore élevée à ce stade, on con- duit de préférence la présaccharification secondaire avec une durée de contact de l'ordre de   1 à   4 heures.

   Puis, la   sacchari..     fication   se développe considérablement, et la viscosité baisse, permettant ainsi de verser une solution très   visquecse   en mê- me temps que l'enzyme, dans une grande quantité de solution moins visqueuse. On évite ainsi la rétrogradation et la solu- tion est conservée à une tempe rature convenable par le   réfri-   gérant dans le bac de présaccharification.Le mélange des   en-     zymes   et de la   section   liquéfiée s'effectue ainsi de façon adéquate, et la viscosité de la solution est diminuée sans qu'il y ait rétrogradation ; puis la solution est pompée jusqu'au bac de saccarificatin pour une saccnarificati0n en discontinu.

   Comme la saccharification dure 2 à 3 jours, la solution est maintenue à une température convenable comprise entre 45  et 50 C et le pH est ajusté avec-les enzymes entre 3 et 6. De cette façon la saccharification peut être terminée. 



   La solution ainsi préparée est une solution   amy-   lolysée ayant une teneur en maltose pur de 92 à   95%, et   contenant également du glucose, maltotriose,   etc.,   pour une quan-   tité   globale voisine de   5%.   Cette solution est ensuite   fil,-   

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 zrée et facilement purifiées et coRne après des traitements ultérieurs classiques, une solution de sucre claire et incolore. 



   Lorsque la solution obtenue plus haut ne peut être 
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 facilement filtrée en raison de la acéseaace de petites quantités de dextrine polymérisée, ceci, =GXne une diminution de la tenaur en maltose dans la 5lutlc ztésultante bien que la liquéfaction de l'amidon ait ::0 m y aussi basse que possible ; la solution peut filtre .f:=?àx.=#nt .rés addï tion dta-amylase au cours de la 5::C,,:', '..3ieasi'3[:: fi'ômidon contenant de la dextrine hydrolysée " 3 On a utilisé, pour les , ¯ ¯ ..:l % à?1;ce.entison, un appareillage de réaction f\ "  ¯ 0 ::: :2'" 5tij-:a... tiquement illustré à la figure 1. 1n ' - =1. :..,''':'ê:;::'' -:".1 ":'-;'C è' alimentation de bouillie <i'a.i1idon" dcr :,:-:'.'2!, ;::c-;:; "jMstés la concentration et loe pH de la  a < .':1 --:2 12 :::u::mtité fn' >nsa .3* 1:l'!.:1fL":'::ion à 3j':;:.:;

   >J:"2 L;2.1''-. ;8amidon est :e:^ée da 2*c àans un - ':L2 ,jamiGn 2 muni d'un 33itate plusieurs ra:G o2,e 2ièon, sous forte agitation est chauffée =, "< '..':2:rO ecnstante au moyen de vapeur vi..,.2:; et est ain:}; ¯j¯ ¯=' gélifiée* Plusieurs bouilleurs 3 d retenus ou 1: . - = r? 0 'JS pour iqAé.ìer 1.'-rà.<: " ...-K'#.s ±1.-; '. --- .. ,,i ±= ..' tenant à température é4."'' Gdn'c: a .s,, à ,'.. "0 d.#'.:3G5., Lssi# don liquéfié projeté par un dutende<jp -'z-.zs #n êrant rez clair 4 à pression normale et :refrG4-i -a 1µù 'G zirons est immédiatement injecté dans un éfri3rEJt eclai? à vide et est refroidi à une température déteânrine à !*avance.

   Le liquide refroidi y est prélevé par pompage et est dirigé vers un premier bac de mélange 6< L'enzyme est .r trc.tr en son+- nu dans le   liquida soit   à la partie inférieure du réfrigérant 5, soit directement dans le bac de mélange   6.   Lorsque la   quan-   tité totale d'enzyme doit être ajoutée en une seule fois, la solution saccharifiée mixte est prélevée   au   fond du bac 6 et 
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 est retenue dans un bac de saccharifieation 3, oÜ cette der- nière est achevée.Lorsque l'enzyme doit être ajouté en 2 fois, le liquide est retenu dans le bac 6 pour une durée déterminée à   l'avance,   puis est prélevé en continu du fend de ce rétlpient dans un bac de séjour de brossage 7, dans lequel est versé en continu la seconde portion d'enzyme.

   Après une cem- 

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 taine durée de séjour, la solution est envoyée vers le bac de saccharification 8. Le brossage avec l'enzyme et le réglage de la température dans les récipients 6 et 7 sont réalisés à l'aide de puissants agitateurs et   échangeurs de     chaleur.   s'y trouvant. 



   Le fonctionnement de l'appareillage décrit ci-dessus s'opère de telle manière que l'eau d'apport s'écoule à une vitesse déterminée à l'avance et que les températures des unités d'élément sont ajustées à des valeurs données par des régulateurs automatises de température ; l'enzyme est ajouté et ensuite l'eau est remplacée par de la bouillie d'emi- 
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 don, puis la saecnarification s'effectue* 
Les enzymes   'utilisés   pour   ces   expériences sont pour   l'enzyme   de liquéfaction une variété   d'a-amylase   d'origine   bactérienne   utilisée dans   l'industrie !   et pour la ss- 
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 amylase un encx-ne :.rait du b14 (décrit dans le brevet an" glas ...,;;

  . ' t30 39". 4""O -. - ',-"" . ...,..,..." de ft¯-my1- "''''' on' peut utiliser les li9urS octenues par broyage, compression et extradiez e-e ù5te douce brute et de cassava. Différentes en cela de!: Illueurs d'extraits de soja, ces solutions d'enzyme na "n\ie.!"-1.'}t que dés quantités négligeables d'amy... lase nuisibla ccn-7e 1'*-amylase ou in charase, ou d'impurel.!;;3 t1.:e$ que P±Qteîî.,-2 kiydnosolubie. On obtient ainsi des solutions   J'enzyme   pur, et les extraits de son de blé/de patate douce constituent des produits enzymatiques avantageux 
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 à l'échelle ina.a..i.e.l3.e, puisque leur activité de p-amyissa est très élevée.

   Ccsne a-196-glucosidases 3 enzymes ont été adoptés, à savoir, la pullulanase P produite par Aerobacter aerogenes [Biochem, Z 334, 79 (1961)J ' un enzyme ercduit par Pseudomonas amyloderamosa (ATCC 21 262) et un enzyme t. , ¯ oroduit par Lactobacillus plantarum (ATCC 8(08)" Vn- obtient également à partir de souches de Escherichia, Micrococcus, kgrcbacterium, Azotobacter, Bacillus, Eryvir3a, Leuconostoc, Myeobacterium, Pediococcus, Sarcina, Serratia' Staphylococcus, ;treptococcuss Nocardia, Actinomyces, Streptomyces, 14îcromoiospora et Cermonospera, qui présentent de fortes activités anryyaatigues, d'autres  -1,6-glucosidasex utilisables. L'activité de chaque enzyme utilisé est déterminée 
 EMI7.4 
 le la façon suivante.

   Dans le cas de 1' -emylase, une solu- tion mixte   comprenant   1 g. d'amidon de pomme   de   terre anhydre, 

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 EMI8.1 
 1 ml de solution tsmpoa l'acide acétique lij' ' ' ::"1... x :.3é.? est introduite Gans p\'&e'-,,=3 tubes à essai:..::.. . ... ¯" -:8 mm cie 4-intérieur , des 50lutiGt4s ua ' ; Î, d'*.f*férentes concen4qraticns sont également i1trûfh'.:. .s '-:. {î..}s' de 1 nl dans ces tubes respectifs que l'on c si#. ,'',?l':D\.:2.te sous agitation énergique dans de l'eau biuill.' - f;t. >:: 3' on maintient à f C pendant 15 minutes, après );:'i31f: eu tel de l'amidon: on les place ensuite à nouveau d;-.;

   l'ca'j mutilante pendant iti ainutes afin de désactive:::- 1*fnzi=ne, ir=és refroidissement dans l'eau à 1?" C pendant 2 xi ;i.m " in joute dcns chaque tube lai d'une solution à G. .r uc:.z ne, et l'on retourne 2 fois ces tubes, orifice ho ' ..'armi ces solutions ainsi u.^.i >a:ânnt colorées ?sons ;;.'[' . '0', c0=-1..e qui contient la plus faille eoneentraticR en bzz o,t -... levée et son activité choisie cossie unité. 



  L'activité de la )-amylase est à461  t.3 c:;=:c suit, 4 ra de solution :' :.:.xon soluble à 1;;'51 n. 2.3 *.32'. tion 'cTc#rn d'acide â ü:i,s'3 !.1'îJ i g3 f ,,' ,.:.,1:': A1 â'vzc'e"e,r me à différentes vnw'.' .ûi, m.6..,9:'-âv ..'ßt r1 4b 1.j .is . 't =:L 5 1 =. :ùgzb à bzz, pendant 30 f1Ü:',::;;,<] '" Le sucre ¯^'.:ns:$' -:'.':.:.:. obtf est dopé en fonction du ":<1 ;"''Je" y â çS'": ' 0>::

   loe '¯" ,1 :'" enzymatique qui donne 'C :-n,7, de r;:Ü :;,o6# dctej...- :-- gaz o.oc.) fez çon est choisie   ceinte   unité, 
 EMI8.2 
 L'activit5 ce l' %-1,-2Iucosidase est iJèrninée de la manière suivante, 1 nl d'une solution ds snes 5 rml d'une solution d'amidon ce riz   glutincux   soluble à 1% et 1 ml de solution tampon d'acide acétique 0,5 A   (pH     6),   sont   mélan-   gés et la réaction s'effectue à 40 C pendant 30 minutes.   le/2   ml de la solution réactive estversé dans une solution mixte 
 EMI8.3 
 (Átpnant 0,5 ml d'une solution 0,01 M d'iodure de potassium îojé et 'E ml d'acide culfurique 0,0 N.

   Le mélange vire ima mcdiatcsfnt du bleu au rouge* Au coût de 15 nî;utes, le coefficient d'extinction -le la coloration est m5ur4 dans une lu- *iii> de 620 4: e .Q.I ii :âx: :i' d'vn1e, et l'on zçtc '.1 < m::.. s 1 4' e i'"e ce entre la valeur de .k,'' ;e::l.:i:'i) et r:p l.,a qt<1 .a ét4 Jbt:rn,a U$S1tt après la réaction. L'activité d"une ,lu1on 3-' tique qui donne le cC.::1plJ!Ilent 3e 0!,0 ost choisie CCDm -.'1iIité. 



  Après la saccharification, la solution sucrés est chauffée et l'enzyme d6sactivé. Cette solution est alors déco- lorée et débarrassée de ses sels par filtration décolorante sur du charbon actif et purification par résine échangeuse d' 

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 ions. Elle est concentrée et le rendement en produit sec est 
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 dLLpinn. La composition saccharide est déterminée par fractionnement et dosée par chromatographie sur papier. 



   Les amidons utilisés comme matière première sont sur les expériences I à III l'amidon de patate douce, pour les expériences IV à VI l'amidon de mais. L'amidon de patate douce est liquéfiée de façon continue à 90 C avec addition de 
 EMI9.2 
 10 unités d'a-amylase/g. d'amidon. Avec une durée de contact de 1 à 2 minutes environ, le liquide est décomposé à un E.D. voisin de 1 à   2%.   Puis.la température est portée à 120 C pour désactiver l'enzyme. La liquéfaction de l'amidon de mais s'effectue à pH 6 par chauffage à   160-1650C.   Dans l'expérience   VI,   on ajoute une quantité a'accide oxalique équivalente à 
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 Cip5; c= ., quantité dTw:.^.idon et on chauffe ce mélange à 120cC pendant uncourt laps de temps. L'E.D. est invariablement fixé entre 0,5 et 2. 



  Lorsque la présaccharification est réalisée par addition d'une c-; , é.-g 1 :cosidçse et de -amy1ase en 2 étapes 3ifférentés, on utilise p*i± le 1er stade de présaccharificatien une twpratt#c de 70 et 60 C et une s-1,6-glucosidase L résistant à la chaleur. Po# r:iminuer aussi rapidement que possible la viscosité de l'csidon, 1'enzyme est versé en continu dans le r8frigérn-: c.i;;dr sous vide 5. Le second stade cie préswccharâficaao:, n>Jssi bien que la présaccharification en un seul stade, s'effectue par traitement de la charge à   45 -50 C   et pH 6 par brassage rapide au moyen d'un puissant agitateur. La durée moyenne de contact pour la   présaccharifi-   cation primaire, lorsque l'opération s'effectue en 2 stades, varie de 20 à 60 minutes.

   Autrement les durées sont   compri-   ses entre 180 et 240 minutes. Dans chaque expérience, le produit de réaction est introduit dans le bac principal de saccharification et cette opération s'effectue en discontinu. 



  La température est ajustée à 45 c et le pH à 5,5 si on utilise l'enzyme   I,   et à 6 dans les autres cas. La durée de contact pour la totalité de la saccharification est de 2 à 3 jours. 



   Tandis que le remdement en sucre immédiatement après la   saccharificaticn   est de   58%,   le rendement final en produit cristallisé n'est que de   95%   du fait des parties se produisant lors de la purification. La teneur en maltos e des 

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 produits expérimentaux est comprise entre 92 et 95%.

   Quelques exemples sont donnés dans le Tableau 1 
 EMI10.1 
 
<tb> 
<tb> TABLEAU <SEP> 1
<tb> N  <SEP> 1 <SEP> II <SEP> III <SEP> IV <SEP> V <SEP> VI <SEP> VII
<tb> Sorte <SEP> d'amidon <SEP> A <SEP> A <SEP> A <SEP> B <SEP> B <SEP> A <SEP> A
<tb> Concentration <SEP> en
<tb> amidon <SEP> %.... <SEP> 30 <SEP> 30 <SEP> 25 <SEP> 25 <SEP> 25 <SEP> 25 <SEP> 10
<tb> Temp. <SEP> de <SEP> liquéfaction <SEP>  C <SEP> .. <SEP> 90-92 <SEP> 90-92 <SEP> 90-92 <SEP> 165 <SEP> 165. <SEP> 120 <SEP> 120
<tb> Enzyme <SEP> de <SEP> liquéfaction <SEP> ... <SEP> Ó-amy-Ó-amy- <SEP>  -amy- <SEP> - <SEP> acide
<tb> lase <SEP> lase <SEP> lase <SEP> oxalique
<tb> E.D. <SEP> de <SEP> l'amidon
<tb> liquéfié <SEP> .... <SEP> 1.8 <SEP> 1.

   <SEP> 5 <SEP> 1.5 <SEP> 0.9 <SEP> 0.8 <SEP> 2 <SEP> 0.5
<tb> 1ère <SEP> présaccharification
<tb> Enzyme <SEP> unités <SEP> ss50 <SEP> ss50 <SEP> ss70 <SEP> ss5- <SEP> ss50 <SEP> ss50
<tb> g <SEP> .amidon <SEP> P <SEP> 50 <SEP> L <SEP> 40 <SEP> 1 <SEP> 30 <SEP> L <SEP> 40 <SEP> L <SEP> 50
<tb> p30
<tb> pH <SEP> ............ <SEP> 6.0 <SEP> 6.0 <SEP> 6.0 <SEP> 6.0 <SEP> 5. <SEP> 5 <SEP> 6.0
<tb> Temp. <SEP>  C <SEP> ...... <SEP> 45-50 <SEP> 65 <SEP> 60 <SEP> 65 <SEP> 45-50 <SEP> 45-50 <SEP> 45-50
<tb> 2ème <SEP> présaccharification
<tb> Enzyme <SEP> ...... <SEP> - <SEP> P <SEP> 40 <SEP> ss40 <SEP> 1 <SEP> 50 <SEP> - <SEP> pH <SEP> - <SEP> 6.0 <SEP> 6.0 <SEP> 5.5 <SEP> - <SEP> Temp........ <SEP> - <SEP> 45-50 <SEP> 45-50 <SEP> 45-50 <SEP> - <SEP> Durée <SEP> de <SEP> contact <SEP> (heures) <SEP> 48 <SEP> 50 <SEP> 48 <SEP> .

   <SEP> 40 <SEP> 50 <SEP> 50
<tb> Teneur <SEP> en
<tb> maltose <SEP> .... <SEP> 93-92 <SEP> 93 <SEP> 93-94 <SEP> 90-93 <SEP> 91-93 <SEP> 90 <SEP> 67
<tb> 
 A = amidon de patate douce B = amidon de maïs

Claims (1)

  1. REVENDICATIONS 1. Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants : prise en gel totale et dissolution par la cha- leur d'une suspension aqueuse d'amidon; refroidissement de la solution gélifiée d'amidon et mélange uniforme avec EMI11.1 une <t-t,6-glucosid3se et ine .3mylase ; maintien du mé- lange réactionnel à un pH approprié et à une température comprise entre 45 et 65 C jusqu'à ce que la réaction soit achevée.
    2. Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivante: chauffage en continu et liquéfaction d'une sus- pension d'amidon contenant un enzyme de liquéfaction de l'amidon (ce-amylase) à une température supérieure à 60 C., refroidissement de la solution d'amidon liquéfié et bros- EMI11.2 sage avec une -le6--glucosidase et 8-ameflase ; ensuite -,1#tier' OI '-'!..'.-:? -.i,±'1#1,,;:.1 a une température comprise entre 5 et 60 C et à pH optimal pour les enzymes a- joutés, jusqu'à l'achèvement de la réaction.
    3. Procédé de fabrication de maltose, qui comprend les stades suivants : liquéfaction complète et dissolution d'une sus- pension d'amidon qui contient une petite quantité d'acide préalablement ajouté, par chauffage à plus de 100 C; re- froidissement de la solution d'amidon liquéfié et, après ajustage du pH entre 3 et 7, brassage énergique avec une EMI11.3 a-i,6-glucosidase et 6--=mylase ; ensuite maintien du mé- lange réactionnel à une température comprise entre 45 C et 60 C, avec pH optimal pour les enzymes utilisés, jusqu' à l'achèvement de la réaction de saccharification.
    4. Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants : gélification complète et dissolution d'une sus- pension aqueuse d'amidon par chauffage à température com- prise entre 100 et 180 C, refroidissement de la solution EMI11.4 d'amidon gélifiée à une température inférieure à z, brassage énergique et réaction avec -amylase ; refroidissement de la solution réactionnelle à une température <Desc/Clms Page number 12> prise entre 45 et 60 C après la réduction de la via. cosité de cette solution, mélange à pH compris entre 3 EMI12.1 et 7 avec une a-'6-g.ucosidase ;
    ensuite maintien du Mélange réactionnel entre 45 et 6O C à un pH compris entre 3 et 7, jusqu'à l'achèvement de la sacar1f1ca- tion 5. Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants s liquéfaction complète et dissolution d'une suspension d'amidon contenant un enzyme de liquéfaction de l'amidon par chauffage à plus de 60 C refroidisse- ment de la solution d'amidon liquéfié à une température EMI12.2 inférieure à 80*'C brassage énergique avec °-amylase, après diminution de la viscosité de la solution réactionnelle, brassage énergique avec une sc-i *53.ucosidass à une température comprise entre 45 et 60 C et à un pH compris entre 3 et 7,
    ensuite maintien du mélange réac- tionnel dans les mêmes conditions da pH et de temp4ra- ture jusqu'à l'achèvement de la saccharification. EMI12.3
    6. Procédé de fabrication de maltose qui comprend s stades suivants : liquéfaction complète et dissolution d'une suspension d'amidon contenant une petite quantité d'un acide, EMI12.4 par chauffage au-dessus de 'f3 C ; i refroidissement de la solution d'amidon liquéfié au-dessous de 80 C; addition de 9-amylase et brassage énergique par agitation après abaissement de la viscosité, et de la température entre 45 et 60 C ajustage du pH entre 3 et 7 suivi d'addition EMI12.5 dtun -1,6-g1ucosidase avec brassage énergique ; ensuite maintien du mélange réactionnel dans lqs mêmes conditions de pH et de température jusqu'à l'achèveront de la saccha- rification.
    7. Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants, dissolution complète d'une suspension aqueuse d' EMI12.6 amidon par chauffage entre 100,0 et 13'' ; refroidissement -de a solution d'amidon gélifiée à moins de 65*Cp addition d'une a-1 *5-glucosidass mélangée de manière uniforme à la <Desc/Clms Page number 13> EMI13.1 1¯, solution par agitation, et, après réduction de la v3sca-- - . ' - j/ site, addition de fi-amylase et brassage ; ensuite main- bien du mélange réactionnel entre 45 et 6(3 C pH com- pris entre 3 et 7 jusqu' 1 l'achèvement de la sacchari- fication. EMI13.2 r' 8 Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants :
    liquéfaction complète et dissolution d'une suspension d'amidon contenant un enzyme de liquéfaction de 1'amidon, par chauffage au-dessus de 60 C refroi- EMI13.3 e dissement du mélange réactionnel T--desous de 65 C environ et addition d'une 1,6-g1 .cosidase avec brassage énergique par agitation ; après réduction de la viseosité, additif de 3.....:'!\ylase et brassage énergique ; ensuite maintien du mélange réactionnel entre 450 et 600C à pH compris entre 3 et 7 jusqu'à l'achèvement de la sac- EMI13.4 charif1cation.
    9 Procédé de fabrication de maltose qui comprend les stades suivants : dissolution complète et liquéfaction d'une suspension d'amidon contenant une petite quantité d'un EMI13.5 acide, par chauffage entre t00 et 180'C ; refroidisse- ment de la solution d'amidon liquéfiée au-dessous de 65 C EMI13.6 addition d'une -1,6-31ucosidase et brassage énergique par agitation, puis après diminution de la viscosité, in- troduction de ss-amylase et mélange ; ensuite maintien du ,, ¯ mélange réactionnel entre 45 et 60 C à pH compris entre 3 et 6 jusqu'à l'achèvement de la saccharification.
    0/ Procédé de fabrication de maltose selon les revendications 1 - 9, dans lequel le taux de décomposition de la solu- tion d'amidon liquéfiée est compris entre 0.5 et 5.
    1 Procédé de fabrication de maltose selon les revendications 1-9, suivant lequel 2 ou plusieurs enzymes de propriétés EMI13.7 différentes sont incorporés dans 1' -1,6-glucosidase us- lisée,, 2. Procédé de fabrication de maltose de grande pureté, substantielle- EMI13.8 Q ment tel que décrit préc'demmn1: et illustré au dessin annexé.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504148A1 (fr) * 1981-04-20 1982-10-22 Novo Industri As Substance enzymatique deramifiante, procede pour sa preparation et utilisation de celle-ci
EP0302838A3 (en) * 1987-08-07 1989-11-08 Eniricerche S.P.A. Cloning of the gene coding the isoamylase enzyme and its use in the production of said enzyme

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