"Procédé de culture de levures"
La présente invention concerne un procédé de
culture de levures. Plus spécifiquement, l'invention concerne
un procédé en vue de fabriquer efficacement une levure, ses composants et le produit qu'elle permet d'obtenir, en cultivant
une levure appartenant aux genres Saccharomyces , Pichia, Saccharomycopsis, Rhodotorula, Candida, Torulopsis ou Trichosporon dans
un milieu nutritif dans lequel, comme substance activatrice de croissance, on ajoute de la carnitine (décrite ci-après) son précurseur ou un de ses dérivés, afin d'activer la croissance
des cellules.
L'accroissement de la vitesse de croissance dans la culture des micro-organismes est un moyen efficace pour réduire les frais de culture, car ainsi on raccourcit la durée de culture, on augmente le rendement des cellules et l'on réduit
les risques de contamination par différents germes.
On a habituellement adopté un procédé consistant
à ajouter, dans un milieu de culture et comme substance contenant un facteur de croissance, une liqueur de macération du
mais, des extraits de levure, etc. lorsqu'on cultive une levure en utilisant du glucose, de l'éthanol, de l'acide acétique, des hydrocarbures, etc. comme source de carbone, encore que ce ne soit pas le cas pour les procédés consistant à utiliser un milieu de culture riche en sources nutritives organiques telles que
les mélasses ou les moûts. Un tel procédé n'est jamais souhaitable, étant donné qu'il implique un accroissement des quantités requises d'oxygène chimique et d'oxygène �biologique ou qu'il donne lieu à un risque de contamination par des germes. Partant de ce point de vue, la Demanderesse a sélectionné un certain nombre de composés et elle a trouvé des substances exerçant des effets à de faibles concentrations. C'est ainsi que la Demanderesse a trouvé qu'en les utilisant à de très faibles concentrations, la carnitine et ses dérivés exerçaient un net effet d'activation de croissance; la présente invention est basée sur cette découverte.
La carnitine est une substance se formant naturellement dans les muscles et le foie des animaux et l'on sait qu'elle joue un rôle important dans le métabolisme des acides gras. Toutefois, on ne savait pas qu.'elle activait la croissance des levures.
L'expression "carnitine" utilisée dans la présente spécification, désigne à la fois les isomères optiquement actifs ou inactifs. Les précurseurs de la carnitine sont, par exemple,
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nitine et ses précurseurs, il y a, par exemple, ses sels inorganiques et organiques (par exemple, le chlorhydrate ou le chloiatrate), ses sels de métaux alcalins (par exemple, ses sels de sodium ou de potassium) , de même que ses sels de métaux alcalinoterreux.
Parmi les dérivés de carnitine pouvant être utilisés suivant la présente invention, il y a, par exemple, ceux agissant sur la décomposition en carnitine sous l'action d'une enzyme
pour un micro-organisme, par exemple, l'acétyl-carnitine, les acyl-carnitines à longue chaîne et à courte chaîne (par exemple,
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exemple, leurs esters méthyliques et éthyliques).
Suivant l'invention, on peut utiliser n'importe quel micro-organisme appartenant aux genres Saccharomyces, Zygosaccharomyces, Saccharomycopsis, Pichia, Rhodotorula, Candida, Torulopsis ou Trichosporon. Le procédé de la présente invention est particulièrement efficace pour la culture de Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces rouxii IFO 0476, Saccharomycopsis lipolytica 6124, Pichia farinosa IFO 0193� Pichia membranaefaciens IAM 4744, Rhodotorula rubra IFO 0383, Rhodotorula glutinis IFO 0559, Candida novellus ATCC 20275, Candida tropicalis IFO 0006, Candida arborea IAM 4l47, Candida guilliermondii IFO
0566, Candida rugosa IFO 0591. Torulopsis xylinus IFO 0454; Torulopsis magnoliae IFO 0705, Trichosporon cutaneum OUT 6259,
et Trichosporon pullulans OUT 6260, seuls ou en combinaison.
Suivant la présente invention, on peut utiliser n'importe quelle source de carbone pouvant être assimilée par
la levure à employer. Parmi les sources de carbone, il y a,
par exemple, les sucres tels que le glucose, le sucrose ou l'amidon, les alcools tels que l'éthanol ou le méthanol, les acides organiques tels que l'acide acétique ou l'acide fumarique, les acides gras supérieurs tels que l'acide palmitique, l'acide stéarique ou l'acide oléique, ainsi que leurs esters
les huiles et les graisses telles que l'huile de soya ou l'huile de baleine contenant ces acides gras et les hydrocarbures tels
que les n-paraffines, le kérosène en contenant ou le gas oil.
Comme sources nutritives, on utilise des sels d'ammonium tels que le sulfate d'ammonium ou le chlorure d'ammonium, ou encore l'urée. On peut également utiliser d'autres
sels inorganiques, par exemple, des sels de potassium, des
sels de magnésium, des sels d'acide phosphorique, des sels de zinc et des sels de manganèse tels que le chlorure de potassium,
le sulfate de magnésium, le phosphate de potassium, le sulfate
de zinc ou le sulfate de manganèse. A un milieu do culture,
on peut incorporer des traces de vitamines' telles que la biotine
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ainsi que de la liqueur de macération du mais contenant ce" vi- tamines. Toutefois, en ce qui concerne la liqueur résiduaire, il est souhaitable d'incorporer une seule vitamine que nécessite le micro-organisme à utiliser.
La culture peut être effectuée suivant les techniques de culture solide ou de culture liquide en utilisant une cuve de culture du type à courant d'air ascentionnel, une cuve de culture du type à agitation et analogues. La culture peut être effectuée à n'importe quelle température permettant la croissance de la levure. Toutefois, sauf pour certains micro-organismes, des températures de 25 à 40[deg.]C sont particulièrement préférées.
De préférence, le pH du milieu de culture se situe entre 6 et 8 lorsqu'on utilise des acides organiques ou des acides gras supérieurs, tandis qu'il est de 4 à 7 pour les autres sources de carbone. En particulier, lorsqu'on utilise des hydrocarbures ou des huiles et des graisses comme substrats, on peut ajouter un agent tensio-actif, par exemple, des dérivés d'acides gras, afin d'activer la.dispersion de ce substrat dans les conditions de la culture. Suivant l'état de culture, on peut ajouter un agent antimousse tel qu'une résine de silicone, un dérivé d'acide gras ou un ester monoalkylique ou dialkylique d'un polyoxyalkylène� glycol.
La carnitine ou son dérivé, que l'on doit ajouter au milieu de culture, peut être utilisé à n'importe quelle con-
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élevées, la carnitine ou son dérivé n'inhibe pas la croissance des levures. Toutefois, des concentrations trop élevées peuvent donner lieu à un accroissement des frais de fabrication et, par
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ne (précurseur de carnitine) se situe, de préférence, entre
<EMI ID=6.1> élevées, on observe une inhibition de la croissance des levures.
Les exemples suivants illustrent la présente invention d'une manière plus détaillée sans cependant en limiter
le cadre. Dans ces exemples, tous les pourcentages sont en poids.
Exemple 1
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1 mg de chlorhydrate de thiamine et 1 litre d'eau du robinet, on ajoute du chlorure de carnitine en une quantité calculée de telle sorte que le milieu de culture obtenu ait les différentes concentrations indiquées au tableau 1 ci-après. On dépose
30 ml du milieu de culture obtenu dans un ballon à agitation de
500 ml, on inocule avec 0,5 ml d'un bouillon da culture de Candida novellus ATCC 20275 que l'on cultive préalablement dans un ballon contenant le milieu de base et on effectue la culture
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au tableau 1 ci-après.
Tableau 1
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Exemple 2
De la même manière qu'à l'exemple 1, on cultive respectivement Candida tropicalis IFO 0006, Candi-da lipolytica IFO 0746 et Candida rugosa IFO 0591. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 2 ci-après.
Tableau 2
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Exemple 3
De la même manière qu'à l'exemple 1, on cultive Pichia farinosa en utilisant un milieu de culture obtenu en ajoutant du chlorure de carnitine au même milieu de culture de base que celui utilisé à l'exemple 1, en une quantité calculée de telle sorte que le milieu de culture obtenu présente les ..différentes concentrations en -Chlorure de carnitine indiquées au tableau 3 ci-après. Les résultats obtenus sont également indiqués au tableau 3.
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De la même manière qu'à l'exemple 1, on cultive Saccharomyces rouxii. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau ci-après.
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Exemple 5
De la même manière qu'à l'exemple 1, on cultive Saccharomycopsis lipolytica CBS 6124. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 5 ci-après.
Tableau 5
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Exemple 6
De la même manière qu'à l'exemple 1, on cultive Torulopsis xylinus IFO 0454. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 6 ci-après.
Tableau 6
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Exemple 7
On cultive Saccharomyces cerevisiae (levure de boulangerie) de la même manière qu'à l'exemple 1, avec cette exception que, comme source de carbone, on utilise 20 g d'éthanol au lieu de la n-paraffine tandis que, outre la biotine et le chlorhydrate de thiamine, on ajoute, comme vitamines, 2 mg
de pantothénate de potassium, 10 mg de chlorhydrate de pyridoxine et 10 mg d'inositol, la température étant ici de 30[deg.]C. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 7 ci-après.
Tableau 7
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Exemple 8
On cultive Pichia membranaefaciens IAM 4744 de la même manière qu'à l'exemple 1, avec cette exception que l'on utilise un milieu de base (réglé. à un pH de 6) comprenant 10 g
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Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 8 ci-après.
Tableau 8
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Exemple 9
On cultive Rhodotorula rubra IFO 0383 de la môme manière qu'à l'exemple 1, avec cette exception que, comme source de carbone, on utilise 20 g de glucose au lieu de la n-paraffine. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau 9 -ci-après.
Tableau 9
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Exemple 10
On répète l'exemple 1, avec cette exception que, comme additifs, on ajoute respectivement du chlorhydrate de
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résultats obtenus sont indiqués au tableau 10 ci-après.
Tableau 10
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REVENDICATIONS
1. Procédé de culture d'une levure consistant à soumettre, à une culture aérobie, une levure appartenant aux genres Saccharomyces, Pichia, Saccharamycopeis, Rhodotorula, Candida, Torulopsis ou Trichosporon, dans un milieu nutritif pouvant être assimilé par cette levure, caractérisé en ce quo, au milieu nutritif on ajoute de la carnitine, un de ses précurseurs ou un de leurs dérivés.