BE834859A

BE834859A - Substance antivirale

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Publication number: BE834859A
Application number: BE161243A
Authority: BE
Priority date: 1975-10-24
Filing date: 1975-10-24
Publication date: 1976-04-26

Description


  Substance antivirale. 

  
 <EMI ID=1.1> 

  
rales, un procédé pour leur préparation et les compositions  pharmaceutiques les' renfermant. 

  
On sait maintenant d'une façon générale que les acides ribonucléiques à double chaîne sont des inducteurs puissants  d'interférons et qu'ils doivent ainsi présenter un intérêt dans; la prophylaxie à larqe spectre des infections virales, et à un ,

  
 <EMI ID=2.1> 

  
ribonucléiques à double chaîne, à la fois d'origine naturelle et synthétique, possèdent comme cela a été mis en évidence une.  activité inductrice d'interférons et antivirale dans les cultures de tissus et chez les animaux vivants. Parmi les sources spécifiques d'acide ribonucléique à double chaîne inducteur 

  
 <EMI ID=3.1> 

  
 <EMI ID=4.1> 

  
ches de Pénicillium chrysogenum, P. Funiculosum, P. stoloniferum, Aspergillus niger et A. Foetidus ; le virus ce polyédrose cytoplasmique ; le virion du réovirus 3 et la forme réplique du

  
 <EMI ID=5.1> 

  
Toutefois, certains phénomènes suggèrent que l'acide ribonucléique à double chaîne d'origine naturelle peut présen-

  
 <EMI ID=6.1> 

  
plication médicale et vétérinaire peut être limitée. Il existe ainsi un besoin d'agent antiviral qui soit rr.oins toxique que l'acide ribonucléique à double chaîne seul et qui présente une activité antivirale comparable ou meilleure.

  
Cette invention est fondée sur cette constatation que

  
 <EMI ID=7.1> 

  
 <EMI ID=8.1> 

  
 <EMI ID=9.1> 

  
 <EMI ID=10.1> 

  
 <EMI ID=11.1> 

  
 <EMI ID=12.1> 

  
Pour définir correctement l'invention, il est: nécessaire d'examiner d'une façon assez développée la technique antérieure.

  
On sait bien entendu que les acides nucléiques forment

  
 <EMI ID=13.1>  <EMI ID=14.1> 

  
 <EMI ID=15.1>  

  
 <EMI ID=16.1> 

  
 <EMI ID=17.1> 

  
complexes de polybases avec des acides nucléiques sont, comme  on le sait, plus stables à la dégradation par la nucléase et à la dénaturation thermique que les acides nucléiques initiaux.

  
 <EMI ID=18.1> 

  
 <EMI ID=19.1> 

  
 <EMI ID=20.1> 

  
des polybases aboutirait à une stabilisation vis-à-vis d'une

  
 <EMI ID=21.1> 

  
virale améliorée ou prolongée. Les résultats publies à l'appui ce cette théorie n'ont pas été particulièrement encourageants.

  
 <EMI ID=22.1> 

  
ont indiqué que la stimulation du mécanisme des interférons

  
 <EMI ID=23.1> 

  
jusqu' à 100 fois par l'addition de substances polybasiques

  
 <EMI ID=24.1> 

  
 <EMI ID=25.1> 

  
colistine, ces substances ayant été indiquées précédemment comme étant capables d'inhiber l'action de la ribonucléase ou d'augmenter la fixation cellulaire de Ces chercheurs spéculaient sur le fait qu' "On pouvait concevoir que certaines

  
 <EMI ID=26.1> 

  
précisaient cette affirmation en ajoutant eu' "il a été cons-

  
 <EMI ID=27.1> 

  
 <EMI ID=28.1> 

  
par la néomycine ou la protamine".

  
On a montré que la poly-D-lysine ce poids moléculaire

  
 <EMI ID=29.1> 

  
renforçait l'induction d'interférons par Poly I:r-oly C chez la souris, et on a indiqué qu'elle était à cet égard supérieure au

  
 <EMI ID=30.1> 

  
naison de Poly I:Poly C et de poly-D-lysine n'ont pas montré de signes immédiats de toxicité, bien que la dose ce substance soit nettement inférieure à celle pour laquelle les effets toxiques de Poly I:?oly C lui-même seraient apparus.

  
 <EMI ID=31.1>   <EMI ID=32.1> 

  
 <EMI ID=33.1> 

  
que antérieure indiquait à cet égard qu'il existait de bonnes  raisons de supposer que des complexes de certaines polybases

  
 <EMI ID=34.1> 

  
augmentés et (ou) prolongés in vitro et in vivo. Toutefois,  comme on le sait, les taux d'interférons ne sont pas strictement parallèles à l'activité antivirale. Un compose qui est

  
 <EMI ID=35.1> 

  
bon agent antiviral, et vice versa. outre, selon la techni-

  
 <EMI ID=36.1> 

  
type de polybase qui est nécessaire pour fournir des taux ac- 

  
 <EMI ID=37.1> 

  
d'ARN d.c. sont, selon certains chercheurs, moins satisfaisan-

  
 <EMI ID=38.1> 

  
sont, de l'avis de la Société Demanderesse, la confirmation du ! fait qu'il n'existe pas de loi ou tendance générale confirmée  par la technique antérieure. Il n'est donc pas possible de dire 

  
 <EMI ID=39.1> 

  
 <EMI ID=40.1> 

  
 <EMI ID=41.1> 

  
d'interférons (beaucoup moins au point de vue activité antivi-

  
 <EMI ID=42.1> 

  
L'utilisé d'un agent antiviral dépend principalement de deux facteurs, à savoir la durée de la protection conférée

  
 <EMI ID=43.1> 

  
ces deux facteurs peut être lié ou non à sa capacité d'induire ! la production d'interférons, et ainsi selon la technique anté- 

  
 <EMI ID=44.1> 

  
base, tandis que le second de ces facteurs, à savoir la toxici-  té, est un fait à propos duquel la technique antérieure est  complètement silencieuse. 

  
L'invention est matérialisée dans une substance anti-  virale constituée par un complexe principalement; ionique dans  lequel le constituant cationique est un polycation d'une mole- :

  
 <EMI ID=45.1> 

  
tandis que le constituant anionique est (a) un polyanion d'aci-! .de ribonucléique à double chaîne, cet acide ribonucléique à  <EMI ID=46.1>   <EMI ID=47.1> 

  
chaîne d'origine naturelle.

  
 <EMI ID=48.1> 

  
l'acide ribonucléique se rapporte le la caractéristique selon la-

  
 <EMI ID=49.1> 

  
 <EMI ID=50.1> 

  
que molécule. Les acides ribonucléiques peuvent présenter des degrés variables de "caractère à double chaîne".

  
 <EMI ID=51.1> 

  
rigine naturelle" désigne n'importe quel acide ribonucléique à double chaîne qui peut être isolé à partir d'une source d'or;-

  
 <EMI ID=52.1> 

  
 <EMI ID=53.1> 

  
?oly C. 

  
L'expression "dérivé à double chaîne d'un acide ribo-  nucléique à double chaîne d'origine naturelle" désigne n'impor-  te quel acide ribonucléique à double chaîne d'origine naturelle ;

  
 <EMI ID=54.1> 

  
 <EMI ID=55.1> 

  
 <EMI ID=56.1> 

  
dans le brevet français n[deg.] 71-14303, ou les acides ribonucléi-  ques à double chaîne modifiés par un alcalin tels que décrits  dans le brevet français n[deg.] 72-00892), à condition que les dé- 

  
 <EMI ID=57.1> 

  
des bases entre les chaînes complémentaires. 

  
Le caractère à double chaîne d'un acide ribonucléique  à double chaîne ou d'un dérivé d'acide ribonucléique à double  chaîne peut être mesuré par deux paramètres qui sont dénommés  hyperchromicité et Tm. Ces paramètres son= obtenus en enregis- 

  
 <EMI ID=58.1> 

  
tout en élevant progressivement la température de cette matière.! Le coefficient d'absorption des ultra-violets d'une matière à 

  
 <EMI ID=59.1> 

  
jusqu' à ce qu'une valeur constante soit atteinte, qui corres- j  pond 'à l'absorption de l'acide ribonucléique thermiquement dé-  naturé (c'est-à-dire à simple chaîne). La différence entre les 

  
 <EMI ID=60.1>  .ption de la matière à double chaîne, est dénommée "hyperchromi-  cité" de cette matière. 

  
 <EMI ID=61.1> 

  
 <EMI ID=62.1> 

  
 <EMI ID=63.1> 

  
 <EMI ID=64.1> 

  
Le constituant cationique présent dans le complexe 

  
 <EMI ID=65.1> 

  
 <EMI ID=66.1> 

  
molécule de polyarginine, qu'il n'existe sensiblement pas ce 

  
 <EMI ID=67.1> 

  
nine dans la molécule de polyarginine.

  
 <EMI ID=68.1> 

  
arginine est une poly-L-arginine. 1 

  
Les polyanions présents dans le complexe suivant l'in- j 

  
 <EMI ID=69.1> 

  
chaîne, cet acide ribonucléique à double chaîne étant d'origine !

  
 <EMI ID=70.1> 

  
 <EMI ID=71.1> 

  
Les sources préférées d'acide ribonucléique a double chaîne comprennent les particules du type des virus que l'on trouve 

  
 <EMI ID=72.1> 

  
 <EMI ID=73.1> 

  
capable d'induire la production d'interférons chez les mammi-  fères vivants. (Ceci peut être confirmé par la méthode ce Lamp- 

  
 <EMI ID=74.1> 

  
 <EMI ID=75.1> 

  
 <EMI ID=76.1> 
-complexe est caractérisé'par une interaction électrostatique  puissante entre la fraction molaire cationique de polyarginine  <EMI ID=77.1> 

  
 <EMI ID=78.1> 

  
 <EMI ID=79.1> 

  
ayant sensiblement un même nombre de centres cationiques que

  
 <EMI ID=80.1> 

  
 <EMI ID=81.1> 

  
 <EMI ID=82.1> 

  
 <EMI ID=83.1> 

  
faible toxicité.

  
Les complexes suivant l'invention peuvent être prépa-

  
 <EMI ID=84.1> 

  
de la polyarginine ou un sel ce celle-ci avec (a) ces polyanions

  
 <EMI ID=85.1> 

  
chaîne d'origine naturelle.

  
 <EMI ID=86.1> 

  
 <EMI ID=87.1> 

  
tion de chlorhydrate de polyarginine dans une solution aqueuse .  d'un sel minéral, par exemple de NaCl. Cn peut préparer une  solution analogue de constituant formé par l'acide ribonucléi- 

  
 <EMI ID=88.1> 

  
 <EMI ID=89.1> 

  
 <EMI ID=90.1> 

  
ré va précipiter directement. S'il n'est pas précipité, on peut;  diluer la solution pour réduire la molarité, et ceci va généra-)  lement précipiter le complexe désiré. 

  
Suivant une variante, on peut ajouter un mélange physique de polyarginine neutre et de l'acide ribonucléique ou du dérivé d'acide ribonucléique à une solution ce sel, et si nécessaire on peut diluer la solution résultante pour précipiter le complexe désiré.

  
 <EMI ID=91.1> 

  
ce polyarginine en contact avec le polyanion d'acide polynuclé-

  
 <EMI ID=92.1> 

  
la base du nombre des centres amino basiques capables de réagir avec les centres acide phosphorique du polyanion d'acide ribonucléique). 

  
Les complexes suivant l'invention ont une activité  &#65533;ntivirale, avec un large spectre d'activité vis-à-vis d'une

  
 <EMI ID=93.1> 

  
 <EMI ID=94.1> 

  
 <EMI ID=95.1> 

  
 <EMI ID=96.1> 

  
lement à l'induction d'interférons chez les cellules hôtes, en conférant ainsi une protection vis-à-vis d'une attaque par le virus.

  
Une propriété surprenante de ces complexes réside dans'

  
 <EMI ID=97.1> 

  
 <EMI ID=98.1> 

  
Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention con- ;  cerne une composition pharmaceutique ou vétérinaire renfermant  un complexe suivant l'invention et un véhicule pharmaceutique  ou vétérinaire. 

  
Le choix du véhicule pharmaceutique est déterminé par le. mode d'administration préféré et par la pratique pharmaceu-

  
 <EMI ID=99.1> 

  
injection, par exemple sous-cutanée ou intramusculaire, auquel cas le véhicule va être un liquide injectable dans lequel le complexe peut être dissous ou mis en suspension sous forme d'une suspension fine. Dans le cas d'une application localisée, le  véhicule peut être un liquide destiné à une application locale sur la muqueuse du nez ou de la gorge. 

  
Les exemples donnés ci-après à titre non limitatif :

  
 <EMI ID=100.1> 

  
d.c. correspond à un acide ribonucléique à double chaîne. 

  
 <EMI ID=101.1>  .(200 ml), à la température ambiante, une solution ce poly-L-ar-  <EMI ID=102.1> 

  
 <EMI ID=103.1> 

  
lange réactionnel pendant 15 heures à la température ambiante, puis on centrifuge. La mesure du spectre u.v. ce la liqueur qui surnage indique qu'elle ne contient pas d'acide nucléique. On 

  
 <EMI ID=104.1> 

  
 <EMI ID=105.1> 

  
 <EMI ID=106.1> 

  
 <EMI ID=107.1> 

  
forme d'une suspension en vue d'un titrage biologique.

  
La toxicité et l'activité biologique de ce produit sort:
indiquées dans les tableaux ci-après.

  
 <EMI ID=108.1> 

  
A. Toxicité chez la souris 

  
 <EMI ID=109.1> 

  
d.c. et celle des complexes préparés dans l'exemple 1 ont été 

  
 <EMI ID=110.1> 

  
animaux ont été observés ensuite pendant 10 jours, 

  
Complexe ARN d.c.-Dolvarainine : Toxicité ; 

  
i
 <EMI ID=111.1> 
  <EMI ID=112.1> 

  
nombre d'animaux du groupe

  
 <EMI ID=113.1> 

  
On a administre par injection intrapéritonéale composé testé à des souris de &#65533;6-20 g de la souche CD1. 24 heures 

  
 <EMI ID=114.1> 

  
pendant 12 jours et on a comparé le taux de mortalité ces sou ris traitées avec celui des souris témoins non -traitées* 

  

 <EMI ID=115.1> 


  

 <EMI ID=116.1> 
 

  
 <EMI ID=117.1> 

  
Cn ajoute à une solution sous agitation du sel de so-

  
 <EMI ID=118.1> 

  
 <EMI ID=119.1> 

  
 <EMI ID=120.1> 

  
 <EMI ID=121.1> 

  
 <EMI ID=122.1> 

  
centrifuge ensuite le précipité. Une mesure du spectre u.v. de la solution qui surnage indique quelle ne renferme pas d'acide nucléique. On remet le précipité en suspension dans du chlorure  ce sodium O,15M (50 ml), on centrifuge CI% nouveau et on remet  encore le précipité en suspension dans du chlorure de sodium 

  
 <EMI ID=123.1> 

  
 <EMI ID=124.1> 

  
est insoluble dans NaCl 3M et il est utilisé scus forme d'une  suspension pour un titrage biologique. 

  
Durée de l'activité

  
La durée de la protection assurée par le complexe vis-

  
 <EMI ID=125.1> 

  
 <EMI ID=126.1> 

  
pendant une durée allant jusqu' à 5 semaines. On a administré une! 

  
 <EMI ID=127.1> 

  
de la souche CD1. Aux jours -35, -21, -7 ou -1 relativement au jour 0, on a testé ces souris avec l'une ce deux dilutions du 

  
 <EMI ID=128.1> 

  
intrapéritonéale. On a observé les animaux pendant 12 jours et 

  
 <EMI ID=129.1> 

  
complexe avec celui de souris témoins auxquelles une dose équi- 

  
 <EMI ID=130.1> 

  
tanée ou intrapéritonéale (i.p.) et testées de la même manière.  Les intervalles de temps, les doses et les voies sont indiqués 

  
 <EMI ID=131.1> 

  
grosse des souris à la fin de la période de prétraitement, un 

  
 <EMI ID=132.1> 

  
appropriés ont pu être ainsi choisis :- 

  
 <EMI ID=133.1>  

  
 <EMI ID=134.1> 

  
testés.

  
 <EMI ID=135.1> 

  
TABLEAU 3 

  

 <EMI ID=136.1> 


  
TABLEAU 4 

  
 <EMI ID=137.1> 

  
1
 <EMI ID=138.1> 
  <EMI ID=139.1> 

  
 <EMI ID=140.1> 

  
ou  <EMI ID=141.1>  <EMI ID=142.1>

Claims

2.- Substance antivirale suivant la revendication -, caractérisée en ce que le constituant cationicue est un cation ) <EMI ID=143.1>

<EMI ID=144.1>

<EMI ID=145.1>

<EMI ID=146.1>

4.- Substance antivirale suivant la revendication <1> ou ! 2, caractérisée en ce que le polyanion est le polyanion de l'a-

<EMI ID=147.1>

5.- Substance antivirale suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le polyanion est le polyanicn ce la

<EMI ID=148.1>

<EMI ID=149.1>

-revendications précédentes, caractérisée en ce qu'en principe <EMI ID=150.1>

ribonucléique interviennent dans la liaison ionique avec les

<EMI ID=151.1>

<EMI ID=152.1>

<EMI ID=153.1>

<EMI ID=154.1>

de polyarginine linéaire avec,

(a) des polyanions d'acide ribonucléique à double chaîne, cet acide ribonucléique à double chaîne étant d'origine naturelle ; ou (b) des polyanions d'un dérivé à double chaîne d'un acide ribonucléique à double chaîne d'origine naturelle.

<EMI ID=155.1> <EMI ID=156.1>

<EMI ID=157.1>

<EMI ID=158.1>

<EMI ID=159.1>

<EMI ID=160.1>

<EMI ID=161.1>

<EMI ID=162.1>

<EMI ID=163.1>

<EMI ID=164.1>

nez ou de la gorge.