<EMI ID=1.1> La présente invention est relative à un agent pour l'impiession par voie radio-active du système réticulo-endothélial (RES) des vertébrés, en particulier des primates,en particulier le foie, la rate et la moelle gélatineuse. Ces agents sont quelques fois appelés agents d' impression du RES radio-actifs. La présente invention est relative, d'uno manière plus particulière, à un agent du RES
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de réduction et d'albumine, en particulier d'albumine de sérum humain (HSA), au complexe micro agrégé non marqué tel quel et sous
la forme d'une trousse, au procédé de préparation de ces complexes et à leur méthode d'utilisation pour l'impression du RES.
A un moment donné, l'agent d'impression du RES du commerce
le plus ordinaire était un radio-colloïde (dimension des particu-
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la gélatine, qui, après injection dans le courant sanguin, est prélevé par le système réticulo-endothélial et se concentre dans celui-ci, pour donner une image radio-active de latente de ce systè- me, qui peut être converti en une image visible par l'instrumenta- tion appropriée.
Cet agent a été remplacé par un colloïde de soufre marqué
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encore actuellement l'agent d'impression du RES, radio-actif le
plus largement utilisé malgré les inconvénients de (a) requérir
un nombre relativement important de composants, (b) de requérir à des étapes de chauffage jusqu'à ébullition et de neutralisation
pour le marquage par l'utilisateur sur le site même de l'utilisa- tion, et (c) de ne pas être biodégradable. La plupart des agents <EMI ID=6.1>
RES colloïdes à base de soufre sur le marché ne donnent pas des images simultanées, claires, nettes du foie et de la rate. j
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ment été mis sur.le marché comme agent RES mais il présente l'in- convénient qu'il est difficile d'entacher la croissance des parti- cules colloïdales après le marquage sans l'addition ultérieure
de stabilisants par l'utilisateur sur le site d'utilisation, ce
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qu'il n'est pas stable.
Un autre agent RES qui a été mis sur le marché en petites
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croit-on, se convertit en un colloïde insoluble par le calcium dans le courant sanguin, à partir duquel il est ensuite prélevé par le RES. Toutefois, avec cet agent, on a eu difficile à obtenir une image nette, distincte, acceptable du point de vue clinique de la rate en même temps que du foie en bonne santé, normal. Par conséquent, cet agent n'a pas été largement utilisé.
La présente invention prévoit un agent du RES, biodégradable, hautement stable, qui requiert moins de composants que l'agent du RES colloïdal au soufre, qui ne requiert ni d'étapes de chauffage ou de neutralisation ni d'étape par l'utilisateur sur le lieu même de l'utilisation autre que l'addition d'une solu-
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ges nettes, claires acceptables du point de vue clinique à la fois du foie et de la rate simultanément, ainsi qu'un nouveau procédé pour la fabrication de cet agent et son utilisation.
On obtient cet agent au moyen d'une microagrégation d'albumine par voie anaérobie, de préférence de l'albumine de sérum hu-main (HSA) en présence d'un métal de réduction sous une forme ionique ou sous la forme d'un complexe physique ou chimique (appelé ci-après pour une question de commodité métal de réduction), de préférence un chlorure stanneux, iodure stanneux, fluorure stanneux ou bromure stanneux, de manière à former des particules colloïdales microagrégées de l'albumine et du métal de réduction qui
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solution de pertechnétate radio-active ou bien qui sont séchées par congélation et scellées dans une fiole exempte de pyrogène, stérile et stockées prêtes à l'utilisation, et qui sont ensuite
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tate radio-active sur le site de l'utilisation.
La microagrégation est de préférence également réalisée en présence d'un ligand additionnel, de préférence sous une forme soluble dans l'eau, pour stabiliser le métal de réduction vis-à-vis d'une précipitation avant l'agrégation. Des ligands intéressants sont les diphosphonates, de préférence le méthylènediphosphonate, l'hydroxyéthylènediphosphonate et l'aminoéthaned iphosphonate, les phosphates , tels que les polyphosphates, par exemple les pyro- phosphates, les aminocarboxylates tels que les sels de diéthylènetriaminepentaacétate, les polyhydroxycarboxylates, tels que le
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carboxyméthylcellulose. Jusqu'à présent, les diphosphonates se sont révélés les plus intéressants. Toutefois, d'autres ligands compatibles du point de vue physiologique et toxicologique connus pour le métal de réduction particulier utilisé s'avèrent appropriés. On a constaté que l'union de certains sels de métaux de réduction intéressants, tels que le fluorure stanneux lui-môme, ont une cons- <EMI ID=14.1>
tante de stabilité suffisamment élevée pour exclure la nécessité^ d'utiliser un ligand additionnel. Dans ce cas, l'anion fluorure fonctionne lui-même comme ligand de stabilisation pour l'ion stanneux. Suivant la présente invention, la distribution de radioactivité par dimension particulaire des particules colloïdales microagrégées est la suivante: au moins 90 à 95%, et de préférence au moins 98%, de l'activité sont associés avec dec particules ne mesu-
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rate en même temps que du foie, pas plus de 40 à 60%, et de préférence pas plus de 40 à 50%, et d'une manière plus particulièrement préférée pas plus de 10 à 40% de l'activité ne sont associés à des
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manière plus préférée, pour obtenir de bonnes images simultanées de la rate et du foie, au moins 40 à 60% et de préférence plus de
50% (la majeure partie) de l'activité sont associés à des parti-
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ont été obtenues lorsque l'on a associé entre 60 et 100% de l'activité à des particules mesurant entre 0,2 et 3 �m pour autant que plus de 90 à 98% de l'activité soient associés à des particules ne
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foie avec des images de la rate simultanées, plus faibles lorsque l'on associe seulement 5 à 20% de l'activité à des microparticu-
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de l'activité soient associés à des particules plus grandes que 5�m, le restant de l'activité étant associé en prédominance à des
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La distribution de la radio-activité par la dimension des <EMI ID=22.1>
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à travers une série de membranes filtrantes de polycarbonate
(par exemple membranes vendue sous la dénomination commerciale de NUCLEPORE par Nuclepore Corporation, assemblées sous la forme de cartouches filtrantes NUCLEPORE suivant les instructions du fabricant et empilas en série sous la forme de piles de dimension de pore décroissante (quelquefois appelée technique de filtration
en série) en mesurant ensuite la radio-activité des particules filtrées dans chaque cartouche filtrante et du filtrat final par des techniques de mesure traditionnelles, en divisant chaque quantité par la radio-activité totale et en multipliant par cent pour obtenir le pourcentage. La portion est diluée d'une manière suffisante pour empêcher ou réduire au minimum l'occlusion des pores des filtres qui réduiront leur dimension efficace et qui conduiront, par conséquent, à une mesure incorrecte. Une technique intéressante peur diluer la portion sera décrite ci-après. Toutes les dimensions des particules dont il est question ici sont déterminées par cette technique.
Bien que l'on réalise une bonne impression du foie lorsque pratiquement toutes les particules ont moins de 0, 2 \un, l' impres-
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Par conséquent, il est préférable de réaliser une distribution de dimensions de particules dans laquelle le plus grand nom-
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De bons résultats d'impressions simultanées de la rate et du foie, dégradées, par la suite, ont été réalisés avec la distri- <EMI ID=27.1>
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préférence pas plus de 5 à 8%, mobiles (solubles de poids moléculaires relativement faibles) dans une solution saline ITLC.
Au cours d'une période allant de moins de 15 minutes à plus de 60 minutes après l'injection, on obtient une excellente représentation à la fois de la rate et du foie sans une distribution importante non voulue au moment de l'acquisition optimale pour le tissu visé. La distribution de la moelle, en particulier dans la zone des vertèbres et dans la zone pelvienne, peut être impression-
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sont optimales pour le foie et la rate, comme cela est vrai dans le cas des agents RES à base de soufre, colloldaux.
Une solution de l'albumine et du métal de réduction, de préférence avec un ligand additionnel dans la solution, est chauffée à un pH et à une température réglés pour former les microagrégats.
La distribution des dimensions des particules susmention-
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composants, le pH et les conditions de chauffage, ainsi qu'on le décrira d'une manière plus détaillée ci-après.
Le métal de réduction se lie à l'albumine (on suppose qu'un complexe physique ou chimique se forme), ce qui favorise l'efficacité de liaison sélective du Tc-99m à l'albumine microagrégée dénaturée lorsque les particules d'albumine microagrégées sont mar- <EMI ID=33.1>
quées par la suite, de manière à obtenir ainsi une meilleure fixaition dans le système réticulo-endothélial (RES) et une impression claire du RES.
La fonction du ligand additionnel est d'augmenter la quantité du métal de réduction qui peut être stabilisée vis-à-vis d'une hydrolyse (formation d'hydroxydes ou d'oxydes hydratés insolubles du métal de réduction) avant la microagrégation. Au cours de la dénaturation de l'albumine provoquée par le chauffage, on suppose que des modifications conformationnelles dans l'albumine exposent des groupes réactifs qui augmentent l'affinité de l'albumine pour le métal de réduction, en liant ainsi des quantités sensiblement plus grandes du métal de réduction aux et dans les microagrégats que celles qui ont été réalisées en l'absence du ligand additionnel ou comparativement à la réaction du métal de réduction avec l'albumine après la microagrégation.
En tout cas, le ligand additionnel contribue fortement à l'excellente impression par voie radio-active du système réticulo-endothélial (RES). Toutefois, comme déjà mentionné, lorsque l'anion du sel de métal de réduction soluble dans l'eau a une constante de stabilité suffisamment élevée pour stabiliser l'agent de réduction vis-à-vis d'une hydrolyse, comme dans le cas du fluorure, il n'est pas nécessaire d'ajouter un ligand additionnel. Dans ce cas, l'anion est en fait un ligand de stabilisation pour le métal de réduction.
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pour le stockage avant utilisation, ils sont de préférence mélangés avant le séchage par congélation avec une solution stabilisante d'albumine non dénaturée (non agrégée), soluble (HSA) pour faciliter la dispersion (reconstitution) des particules séchées par <EMI ID=35.1>
y ajoute cette dernière, pour marquer les microagrégats avec du Tc-99m en vue de leur utilisation. Suivant une forme de réalisation préférée, la solution stabilisante contient également un agent tensio-actif non ionique (de préférence le Pluronic F-68) pour faciliter davantage la dispersion des particules séchées par congélation, solides dans la solution de pertechnétate.
On ajoute également des tampons, tels que du phosphate sodique (de préférence avec le HSA non agrégé et 1'.agent tensio-actif comme portion de la solution stabilisante) pour réaliser un pH suffisamment éloigné du point isoélectrique des particules, de manière à stabiliser la préparation reconstituée vis-à-vis d'une croissance des particules lorsque la solution de pertechnétate est ajoutée par la suite aux particules séchées par congélation
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dispersés dans une solution saline ou tout autre support acceptable du point de vue pharmaceutique ou pharmacologique, en vue d'une injection au patient. Par conséquent, il est avantageux d'ajouter une solution stabilisante, tamponnée de ce type en môme temps que
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chage par congélation.
Parmi les ligands les plus intéressants se trouvent les
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éthylène diphosphonate (HEDP) sont préférés, mais on peut utiliser n'importe lequel des diphosphonates décrits dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 4.032.625 et dans la demande de brevet allemand publiée avant examen n[deg.] 2.424.296.
Parmi les phosphates, les pyrophosphates (de préférence le pyrophosphate de sodium) sont préférés. Toutefois, on peut également utiliser les orthophosphates, les polyphosphates linéaires et les phosphates organiques, tels que les inositolhexaphosphates.
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vent les sels d'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) et les
sels d'acide diéthylènetriaminepentaacétique (DTPA)'.
Bien que les polyhydroxycarboxylates et les polycarboxylates puissent fonctionner comme ligands faibles, ils ne sont pas aussi appropriés que ceux dont il est question ci-dessus.
Les ligands de stabilisation que l'on peut utiliser sont limités uniquement par leur aptitude à stabiliser d'une manière suffisante le métal de réduction contre une hydrolyse, et par des considérations toxicologiques.
L'albumine la plus préférée pour une utilisation sur l'être humain, est l'albumine de sérum humain, bien que l'on puisse utiliser des albumines provenant d'autres espèces pour des applications diagnostiques relatives à ces espèces respectives.
Bien que l'on préfère utiliser l'ion stanneux (Sn ) comme métal de réduction, on peut également utiliser d'autres ions tels
que l'ion ferreux (Fe ) et l'ion de cuivre monovalent (Cu ), mais sans obtenir d'aussi bons résultats. Tous ces métaux de réduction peuvent exister dans au moins deux états redox cationiques dont
une charge valencielle plus faible est requise pour la réduction
du pertechnétate lors du marquage ultérieur.
Pour obtenir la microagrégation, on chauffe rapidement une solution d'un mélange de l'albumine, du ligand et du métal de ré-
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préférence entre 80 et 100[deg.]C, et d'une manière plus particulière- <EMI ID=41.1>
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peut également utiliser des températures supérieures pour autant j que la pression soit augmentée d'une façon suffisante pour empocher l'ébullition importante de la masse réactionnelle. Le temps de chauffage peut se situer. entre quelques secondes et quelques heu- res suivant la température et suivant la manière dont on réalise j . le chauffage. Par exemple, un chauffage par énergie à micro-ondes, un chauffage à hautes fréquences ou un chauffage par induction ne <EMI ID=43.1>
dans de l'eau bouillante ou par passage dans des serpentins de chauffage requiert quelques minutes. Le temps de chauffage maximal est régi par le fait qu'un chauffage continu après la formation des microagrégats (uAA) peut provoquer une augmentation de la di- mension des particules du complexe de HSA - métal de réduction au-
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bles. De même, une ébullition semble devoir augmenter la taille
des particules. Le temps de chauffage et la température minima
sont dictés par la durée et la température requises pour réaliser
une agrégation suffisante de manière à obtenir la distribution des dimensions des microparticules désirée dont il est question ci-des- ! sus. La durée et la température de chauffage maximales sont régies par la durée et la température en dehors desquelles une trop quan-
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parition d'une dégradation. En utilisant ces lignes de guidage, la température et la durée de chauffage optimales peuvent être aisé- ment déterminées par des essais de routine sur une composition don-
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but d'obtenir la distribution de dimensions des particules désirée.
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le cas où le chauffage est réalisé dans un bain d'eau chaude, des résultats acceptables ayant été obtenus avec des durées de chauffage de 2 à 5 minutes en utilisant un bain et des températures de ce type.
On suppose que l'albumine se dénature au cours de cette phase de chauffage, c'est-à-dire qu'une dénaturation se produit simultanément avec la microagrégation.
On réalise la microagrégation par chauffage à un pH suffisamment éloigné du point isoélectrique de l'albumine (point auquel il y a une charge nulle ou proche du zéro sur les molécules) de ma- <EMI ID=48.1> <EMI ID=49.1>
d'albumines avec une distribution de points isoélectriques. En conséquence, les points isoélectriques du mélange peuvent varier de lot en lot. Ils ont été rapportés comme allant de pH 4,8 à
pH 5,5; toutefois, la présence de composés chargés qui tendent à s'associer avec l'albumine, peut déplacer d'une manière sensible
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effet, soit en communiquant leur charge propre à l'albumine soit en neutralisant certains groupes chargés positivement ou négativement sur cette protéine.
Les particules agrégées sont d'autant plus grandes que le pH est plus proche du point isoélectrique; c'est ainsi qu'au pH isoélectrique, une macroagrégation ou une agglomération non contrôlée se produit. Au fur et à mesure que le pH est éloigné du pH <EMI ID=51.1> cadre de la présente invention varie suivant le ligand additionnel que l'on utilise. On a constaté que l'on pouvait obtenir la distribution de dimensions de particules désirée des microagrégats sur une gamme de pH, qui dépend à nouveau du ligand additionnel particulier utilisé, le ligand le plus intéressant étant celui qui permet d'obtenir la dimension de particules désirée sur la gamme de pH la plus large, en permettant d'obtenir ainsi le système le moins sensible et le plus aisément productible.
On a également constaté que le fait d'augmenter la concentration ionique, par exemple en ajoutant un sel neutre tel que du NaCl, au cours de l'agrégation, éloignera encore plus le pH auquel la distribution
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trique. En dehors du ligand additionnel et du sel de réduction, les seules autres matières présentes qui modifieront la concentration ionique de la solution globale préalablement agrégée (le mélange qui est soumis à l' agrégation) sont, de préférence, l'acide, par exemple HC1, ou la base, par exemple NaOH, utilisés pour l'ajustement du pH. Toutefois, d'autres matières qui modifient la concentration ionique peuvent être présentes.
Bien que l'on puisse réaliser la distribution de dimensions de particules désirée à une gamme de pH du côté acide du pH isoélectrique et du c8té alcalin, ce dernier est préféré puisque la microagrégation du côté acide présente d'autres difficultés.
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viron 3,5 à 4,5 et du cOté alcalin du point isoélectrique, il peut se situer entre environ 5,4 et 9,5, d'une manière plus préférée <EMI ID=54.1>
tion des composants. Toutefois, lorsque le point isoélectrique apparent a été réduit par la présence d'un composé chargé tel que mentionné ci-dessus, jusqu'à une valeur en dessous de 4,5, le pH optimum peut être aussi bas que 4,5.
Les conditions de traitement examinées avec le MDP, ont permis d'obtenir des résultats satisfaisants sur une gamme de pH de 5,4 à 6,6, d' une manière plus préférée de 5,6 à 6,5, des résultats reproductibles optima ayant été réalisés sur une gamme de pH de 5,7 à 6,35. Les conditions de traitement examinées avec les pyrophosphates, ont permis de réaliser des résultats optima sur une gamme de pH de 5,9 à 6,1.
Le pH optimal' pour un ligand particulier quelconque en une concentration particulière quelconque peut être déterminé aisément et d'une façon courante en effectuant des agrégations à différents pH éloignés du point isoélectrique jusqu'à ce que l'on atteigne la distribution de dimensions de particules désirée.
Le métal de réduction, par exemple du chlorure stanneux, peut être ajouté à l'albumine et à la solution de ligand sous la forme d'un solide, ou bien il peut être ajouté sous la forme d'une solution.
La quantité maximale de métal de réduction correspond à celle au-delà de laquelle une précipitation de ce métal se produit avant l'agrégation de l' albumine. La quantité minimale est celle qui est nécessaire pour réduire er lier suffisamment de Tc-99m à l'albumine agrégée de manière à réaliser une fixation dans le RES <EMI ID=55.1> aisément déterminées pour des mélanges particuliers par des expé-
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tion sont efficaces pour réduire et lier d'une façon appropriée le Tc-99m à l'albumine agrégée, par exemple des quantités moindres qu'un rapport molaire 8/1 de l'ion stanneux à l'albumine, mais étant donné qu'il s'oxyde aisément, les compositions utilisant la quantité minimale requise peuvent perdre leur efficacité sur une certaine période de temps après le stockage, la manipulation ou l'utilisation. Par conséquent, on utilise un excès par rapport à la quantité minimale utilisée pour obtenir une liaison appropriée du Tc-99m. Lorsque l'on augmente la quantité de métal de réduction, il apparatt .. un point pour n'importe quelle combinaison donnée de composés de départ auquel l'efficacité de liaison du Tc-99m à
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période de temps allant jusque 24 heures ou plus après le marquage.
En tenant compte de cela, le rapport des poids moléculaires du métal de réduction, en particulier Sn ++ à l'albumine peut varier sur une gamme étendue, c'est-à-dire de 8/1 à 80/1, de préférence de 30/1 à 50/1. Il est préférable que le rapport des poids
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d'environ 30/1 à 50/1.
La quantité minimale de ligand additionnel est celle requise pour éviter la formation de quantités importantes quelconques de l'hydroxyde ou de l'oxyde hydraté insoluble du métal de réduction pour une composition donnée quelconque, lors de la liaison du métal de réduction. La quantité maximale est celle en dehors de <EMI ID=60.1>
laquelle il commence à entrer vraiment en compétition avec l'albumine vis-à-vis du Tc-99m, lorsque les microagrégats sont mélangés au pertechnétate. Ces ligands, lorsqu'ils sont présents en excès
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particulier ceux présentant une grande affinité pour le Tc, peuvent réagir avec le Tc-99m pour former des complexes qui recherchent les os, les reins ou d'autres tissus non visés, en augmentant ainsi
la fixation non prévue au dépend de la fixation dans le système réticulo-endothélial (RES) et en réduisant l'efficacité des microagrégats comme agents du RES. Par conséquent, la quantité de ligand ne doit pas être en un excès important par rapport à la quantité qui est requise pour stabiliser le métal de réduction. Les quantités minimale et maximale de ligand peuvent être aisément
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des insolubles avant l'agrégation et en observant l'effet sur la fixation des os, la fixation des reins et l'excrétion urinaire, et toute autre distribution non prévue par le produit agrégé. De plus, la gamme de pH sur laquelle la distribution de dimensions des particules désirée est réalisée au cours de l'agrégation, peut être d'autant plus étroite que la concentration de ligand est plus grande. Par conséquent, pour obtenir des résultats optima, il est souhaitable d'utiliser un peu plus que la quantité minimale de ligand nécessaire pour maintenir le métal de réduction en solution avant l'agrégation.
La concentration de ligand additionnel et ses quantités maximale et minimale dépendent également du ligand utilisé, puisque
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grande (constante de stabilité très élevée) et une concentration <EMI ID=64.1>
ionique plus petite que d'autres. Un ligand qui permet d'obtenir la gamme de pH la plus large sur laquelle on réalise la distribution des dimensions de particules désirée, est le plus intéressant. Les diphosphonates, en particulier le MDP et le HEDP, tombent dans cette catégorie. Les quantités maximale et minimale de ligand dépendent également du pH particulier auquel on réalise l'agrégation.
La quantité optimale de ligand additionnel est trop petite pour avoir un effet tampon appréciable ou pour réduire d'une façon
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vue marne si le ligand peut être un ligand qui est connu comme recherchant les tissus non visés. Il est intéressant de noter que
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visés, augmente le rapport activité visée/activité non visée.
Puisque c'est le fragment complexant du ligand qui sert à lier le métal de réduction, la concentration en ligand. est mieux exprimée sous la forme du rapport des poids moléculaires de ce fragment vis-à-vis de l'ion de métal de réduction, par exemple Sn . Ce rapport dépend fortement du choix du ligand. Pour un ligand tel que le diphosphonate de méthylène, qui a une constante de stabilité assez élevée, ce rapport est de préférence compris entre 0,6/1 et 1,2/1; pour un ligand tel que le glucoheptonate, qui a une constante de stabilité assez faible, on préfère utiliser environ
2 1/2 fois ce rapport.
En utilisant du MDP et du chlorure stanneux et une gamme de pH de 5,4 à 6,6, on a obtenu des résultats satisfaisants avec un
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te le pH en dehors de cette gamme, la concentration en MDP peut <EMI ID=68.1>
être accrue pour obtenir la même biodistribution.
Il est clair diaprés ce qui précède qu'il y a une interdépendance fonctionnelle entre le choix et la concentration du ligand et le pH optimal pour obtenir des particules de la gamme de dimensions appropriée au cours de la création.
Suivant une forme de réalisation préférée de l'invention, on réalise l'agrégation en présence d'un agent tensio-actif accepta-
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l'eau, du même type que celui qui est incorporé de préférence dans la solution de stabilisation. Bien que l'on ait réalisé de bons résultats sans la présence d'un agent tensio-actif au cours de l'agrégation, il est préférable de l'utiliser comme mesure de précaution supplémentaire puisqu'on croit qu'il peut favoriser la reproductibilité et la stabilité des agrégats pour ce qui est de la dimension des particules.
Une grande gamme d'agents tensio-actifs peut être utilisée dans l'étape d'agrégation et dans la solution de stabilisation. Les agents tensio-actifs sont de préférence du type non ionique et sont des solides à la température ambiante. Les agents tensio-actifs intéressants sont ceux qui sont non toxiques vis-à-vis des constituants du sang ou des tissus et ont de préférence un équilibre hydrophile/lipophile (HLB) d'environ 14 à environ 40, et de préférence d'environ 27-30,5. Lorsque l'on utilise un agent tensio-actif dans l'étape d'agrégation, on en utilise qu'une très petite quantité. L'agent tensio-actif dans la masse préalablement agrégée, lorsqu'on en utilise un, est de préférence présent à raison d'environ 0,1% à environ 10% par rapport au poids de l'albumine dans cette masse de préagrégation, et de préférence à raison d'en-
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L'agent tensio-actif dissous dans la solution de stabilisation, comme mentionné ci-dessus, facilite la dispersion rapide
(reconstitution) de l'agrégat d'albumine et de métal de réduction séché par congélation,d ans la solution de pertechnétate lorsque l'on ajoute cette dernière solution en vue d'une administration au patient. La quantité d'agent tensio-actif utilisée dans la solution de stabilisation est ordinairement sensiblement plus élevée que la quantité utilisée dans l'étape d'agrégation.
L'agent tensio-actif dans la solution de stabilisation est
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nière plus préférée à raison d'environ 1 à 10% par rapport au poids de la composition lyophilisée (base solide) .
Des agents tensio-actifs intéressants que l'on peut utiliser au cours de l'agrégation et dans la solution de stabilisation sont le Polysorbate 80, U.S.P., les polyéthylène glycols de poids moléculaire très élevé tels que les Carbowaxes fabriqués par Union Carbide, et les combinaisons moléculaires de polyoxyéthylène et
de polyoxypropylène (copolymères blocs d'oxyde d'éthylène et d'oxyde de propylène), par exemple les Pluronics, délivrés par BASF Wyandotte. Voir également McCutcbeon Détergents and
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grand nombre d'agents tensio-actifs disponibles dans le commerce ayant des valeurs d'équilibre hydrophile/lipophile d'environ 14 et
40, sont indiqués. Les plus intéressants sont les Pluronics, en particulier le Pluronic F-68, qui a un poids moléculaire d'environ
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re ambiante.
Le rapport volumique de la solution stabilisante à base d'albumine non agrégée (contenant des agents tensio-actifs et des <EMI ID=74.1>
tampons si l'on en utilise) à l'albumine de sérum humain agrégée
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de 1/2 étant préférable.
En ce qui concerne la composition solide lyophilisée finale, le rapport de l'albumine soluble à l'albumine agrégée peut se situer entre environ 3/1 et 20/1, et de préférence entre 5/1 et 15/1.
On ajoute le composé tampon à la masse agrégée soit comme portion de la solution stabilisante, soit, lorsque cette solution n'est pas utilisée, tel quel, pour maintenir le pH à un niveau suffisamment éloigné du point isoélectrique de manière à stabiliser la composition vis-à-vis d'une croissance des particules suite à une opération de combinaison lors de la lyophilisation, ou après le marquage. Une gamme de pH appropriée se situe entre 7 et 9,
et est de préférence de l'ordre de 8 + ou - 0,5, pour les raisons susmentionnées. On peut utiliser n'importe quel composé tampon compatible du point de vue pharmacologique et acceptable du point de vue toxicologique qui n'entre pas en compétition d'une manière significative vis-à-vis du Te-99m. Des tampons appropriés sont des mélanges d'acide et de sels d'acides faibles, tels que les sels
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Dans certains cas, il peut être souhaitable d'ajouter à la masse préagrégée, un électrolyte, tel que des sels solubles de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux, par exemple NaCl, pour ajuster la concentration ionique.
La quantité maximale de Tc-99m (pertéchnétate) ajoutée aux agrégats d'albumine par rapport au HSA dénaturé ou agrégé est régie par le fait que tout excès important par rapport à la quantité <EMI ID=78.1>
fois, un léger excès par rapport à la quantité qui est liée aux microagrégats peut �tre utilisée. En se basant sur des études effectuées sur des primates, de quantités allant jusqu' à 10% de
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tion clinique. La quantité minimale est régie par la quantité requise pour obtenir des images acceptables du point Ce vue clinique. Le rapport des poids moléculaire du Tc-99m au HSA agrégé (basé
sur le poids moléculaire du HSA avant l'agrégation) peut être aussi élevé- que 0,25 ou plus élevé que cette valeur.
La dosage radio-actif des microagrégats marqués au Tc-99m de l'invention peut varier de 0,01 à 50 mCi (millicuries)par patient, mais il est de préférence de 1 à 8.
Le volume de la solution de pertéchnétate ajoutée à la masse finale telle quelle, ou après un séchaga par congélation, peut varier de 1 à 10 ml, de préférence de 1 à 8 ml, contenant 1 à
300 ou plus, et de préférence 5 à 50 mCi par mg d'albumine dénaturée. La solution de pertéchnétate est ordinairement le produit d'élution provenant d'un générateur de Tc-99m ordinaire mais cela n'est pas nécessairement le cas.
On obtient une meilleure liaison du métal de réduction au HSA et des microagrégats plus homogènes avec une plus faible oxydation du métal de réduction, en mélangeant celui-ci et le ligand
<EMI ID=80.1>
nir une impression du RES améliorée. On suppose qu'un contact plus <EMI ID=81.1>
intime entre le HSA et le métal de réduction est réalisé parce
<EMI ID=82.1>
liaison fraîchement exposés de celui-ci réagissent avec le métal de réduction avant et au cours de l'agrégation et le métal de réduction devient une partie intime des particules de microagrégats.
En tout cas, comme mentionné ci-dessus, on a constaté que l'on obtenait de meilleurs résultats lorsque le HSA était agrégé en présence du métal de réduction. Toutefois, la présence du métal de réduction au cours de l'agrégation présente certains pro-
<EMI ID=83.1>
la présence du métal de réduction et qui sont surmontés par la précensé du ligand au cours de l'agrégation, par le réglage du pH et
des conditions de chauffage au cours de l'agrégation, et par le maintien des conditions anaérobies tout au long de l'opération.
<EMI ID=84.1>
des dimensions des particules désirée, un autre consiste en la liaison de la quantité requise de métal de réduction à l'albumine dénaturée, et encore un autre problème consiste à éviter la for-
<EMI ID=85.1>
solubles.
L'eau ou tout autre support acceptable du point de vue pharmaceutique utilisé pour forme** les différentes solutions et dans lequel se produit la microagrégation, est de préférence de l'eau distillée apyrogénique qui a été traitée pour réduire l'oxygène qui y est contenu.
<EMI ID=86.1>
réalisées sous des conditions anaérobies, c'est-à-dire en l'absen- ce d' oxygène, comme par exemple sous une atmosphère d'azote.
<EMI ID=87.1>
<EMI ID=88.1>
duction, contenant le ligand, lorsque l'on en utilise un, est séché par congélation d'une manière traditionnelle dans des récipients ou des fioles non pyrogéniques, stériles qui sont scellés et vendus sous la forme d'une trousse que l'on peut utiliser sur le site même de l'utilisation, en ajoutant la quantité prescrite de pertéchnétate radio-actif à la fiole.
En ce qui concerne la technique utilisée pour déterminer la distribution radio-active des microagrégats par la dimension des particules, une technique appropriée que l'on a utilisé pour diluer les portions de microagrégats marqués au Tc-99m lors du passage à travers les filtres disposés en série, consiste à ajouter aux microagrégats marqués, c'est-à-dire le produit résultant de
<EMI ID=89.1>
sés, une dilution de la solution stabilisante dans un rapport en volume de 9 parties de la solution stabilisante diluée pour une partie d'agrégats marqués. Ce rapport peut varier sur une large gamme pour autant que la portion diluée finale ne bouche pas d'une façon exagérée les pores des membranes filtrantes. La solution stabilisante est diluée en y ajoutant une quantité suffisante de solution saline pour la diluer jusqu'à environ la même concentration en matières solides que celle du produit marqué.Les distributions des dimensions de particules dont il est question ici sont obtenues par cette technique. Toutefois, on peut utiliser d'autres techniques.
Bien que la solution stabilisante ne soit pas requise lorsque la masse agrégée doit être utilisée sans séchage par congélation (dans ce cas on peut ajouter le tampon tel quel), il est pré-f érable en tout cas d'ajouter la solution stabilisante avec le tampon afin de stabiliser la dimension des particules lors de l'addition de la solution de pertéchnétate.
On peut réaliser le procédé de l'invention sous la forme d'un procédé discontinu, d'un procédé semi-continu ou d'un procédé continu en utilisant un rapport de la surface au volume de chauffage relativement grand.
La masse préagrégée est de préférence filtrée à travers une membrane stérilisante, par exemple une membrane stérilisante de 0,22 lira, avant l'agrégation et la solution stabilisante est filtrée au travers d'un filtre stérilisant avant d'être ajoutée à la masse agrégée.
De même, on fait passer la masse finale (le mélange de la masse agrégée et de la solution stabilisante) de préférence au tra-
<EMI ID=90.1>
3 pm et on la déverse ensuite dans des fioles et on la lyophilise.
La masse agrégée de l'invention a un aspect laiteux à trouble suivant les conditions utilisées dans la phase d'agrégation.
<EMI ID=91.1>
être opaque. Lorsque l'on élève le pH vers le milieu de la gamme, elle devient plus légèrement laiteuse avec une légère translucidité, et lorsque l'on continue à élever le pH dans cette gamme, elle devient trouble.
La présente invention sera décrite plus en détail au moyen des exemples non limitatifs suivants.
Exemple 1
On ajoute, sous des conditions de mélange et d'anaérobie,
à 90 ml d'eau à faible teneur en oxygène les constituants suivants:
0,6 ml d'albumine de sérum humain sous la forme d'une solution à
25% (25 g/100 ml), de la qualité U.S.P., le HSA pesant 0,15 g,
3 ml d'une solution de méthylène diphoaphonate de sodium (MDP)
(0,5 g d'acide méthylène diphosphonique dissous dans 100 ml d'hy- droxyde de sodium 0,05 N), 11,15 ml d'hydroxyde de sodium 0,05 N pour l'ajustement du pH, 0,5 ml d'une solution de chlorure stanneux (4,2 g de dihydrate de chlorure stanneux plus 1,5 ml d'acide chlorhydrique 12 N dilué jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène), et 0,6 ml d'une solution aqueuse à 1% de Pluronic F-68, un agent tensio-actif non ionique formé d'un copo- lymère bloc d'oxyde d'éthylène et d'oxyde de propylène. Le pH de la solution est de 6,1. Des portions de cette solution filtrées sous des conditions d'anaérobie àu travers d'une membrane stérili-
<EMI ID=92.1>
une température d'environ 99[deg.]C, donnent une suspension laiteuse de
<EMI ID=93.1>
On ajoute sous des conditions d'anaérobie à approximativement 50 ml d'eau à faible teneur en oxygène, 5,7 g d'orthophosphate disodique heptahydraté (tampon), 12 ml de HSA à 25% et 0,33 g de Pluronic F-68. Après dissolution des matières solides, on dilue la solution stabilisante jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène et on la fait passer au travers d'un filtre stérilisant sous des conditions d'anaérobie.
3,3 ml de la solution stabilisante stérile précédente sont mélangés sous des conditions d'anaérobie avec 6,7 ml de la suspension de microagrégats, laiteuse, stérile. Des portions de 1 ml de cette formulation, qui a un pH de 8, sont déversées sous des conditions aseptiques dans des fioles à sérum de 10 ml, non pyrogé- <EMI ID=94.1> niques, stériles. Les fioles sont séchées par congélation (lyophilisées) d'une manière ordinaire et sous des conditions aseptiques pour enlever l'eau. Ceci permet d'obtenir des microagrégats solides du complexe (chimique ou physique) de HSA dénaturé et de Sn . Chaque fiole contient 1 mg de particules microagrégées de HSA dénaturé et agrégé, complexé, 10 mg de HSA non agrégé, 0,1 mg
<EMI ID=95.1>
la forme d'orthophosphate disodique) et 1,14 mg de Pluronic F-68 comme agent tensio-actif.
<EMI ID=96.1>
utilisation, moment auquel l'albumine microagrégée stannause qui
y est contenue est marquée avec du Tc-99m.
Pour préparer les agrégats marqués au Tc-99m, 5 ml de pertéchnétate de sodium radio-actif, frais (environ 100 mCi,
bien que l'on puisse obtenir un marquage efficace en utilisant des quantités correspondant à moins de 1 mCi et allant jusqu'à plus
de 300 mCi), extraits sous la forme d'un produit d'élution non pyrogénique, stérile à partir d'un générateur de Tc-99m NEN stérile dans une solution saline à 0,9%, sont ajoutés sous des conditions aseptiques à chaque fiole; la fiole est secouée pour dissoudre les composants solubles et pour disperser les particules de microagrégats dans la solution saline, en reconstituant ainsi le produit séché par congélation et en marquant les microagrégats.
On utilise dans toutes les étapes des techniques aseptiques et des ingrédients et des récipients non pyrogéniques, stériles.
Distribution de l'activité par la dimension des particules
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1>
Tc-99m sont injectés chez des sourie adultes par la voie intravei- neuse.
15 minutes après l'injection intraveineuse, les souris sont tuées et les différents organes (foie, rate, etc) sont soumis à un comptage par des techniques de comptage aux rayons gamma tradi-
<EMI ID=99.1>
organa.
Biodistribution chez les souris 15 minutes après l'injec- <EMI ID=100.1>
<EMI ID=101.1>
On injecte par la voie intraveineuse 1 à 5 mCi de prépara-
tions similaires à des primates (babouins) . L'impression du foie
i et de la rate est réalisée d'une manière ordinaire au cours des premièrej trente minutes après l'injection, en utilisant une caméra à scintillation gamma (Picker Dyna Camera II).
Des images nettes, claires simultanées du foie et de la rate sont obtenues avec un faible fond de rayonnement. La fixation sur les poumons et sur les tissus lisses est minimale. On peut également obtenir d'excellentes images de la moelle osseuse avec
une exposition appropriée, plus longue que celle utilisée pour le foie et la rate. Ces images sont aussi bonnes que celles que l'on <EMI ID=102.1>
seraient intéressantes du point de vue clinique pour des applications diagnostiques précises. Bien que l'on puisse s'appuyer sur la biodistribution ou distribution biologique de la radio-activité chez la souris pour prédire chez les primates la fixation sélective par le RES comme un tout (foie, rate et moelle osseuse) et le contraste entre la fixation du RES comme un tout et la fixation par les autres organes, elle ne peut pas être mise en corrélation avec le rapport de fixation foie-rate chez les primates, et par conséquent avec la qualité de l'image splénique individuellement et simultanément avec l'image du foie chez les primates. Voir Int. J. of Applied Radiation and Isotpes 1977, volume 28, pages
123-130. En conséquence, pour prédire ce rapport et la qualité
<EMI ID=103.1>
du RES chez un primate, tel que le singe ou le babouin.
La biodistribution susmentionnée chez la souris et les images radio-actives du RES chez les primates montrent que les préparations d' albumine microagrégées stanneuses, marquées par la radio-activité, de cet exemple sont d'excellents agents du RES donnant une excellente impression simultanée de la rate et du foie.
<EMI ID=104.1>
fectue pas la phase de séchage par congélation; on peut également obtenir de bons résultats lorsque l'on utilise directement l'albumine microagrégée stanneuse sans qu'elle ne soit séchée par
<EMI ID=105.1>
F-68 tamponnée, stabilisante mais avec l'addition d'une quantité suffisante d'un tampon pour réaliser le même pH. Toutefois, lorsque les microagrégats sont séchés par congélation sans l'addition d'une telle solution stabilisante, il est difficile de les redis-" perser lors de l'addition de la solution de pertéchnétate. Que les microagrégats soient ou non séchés par congélation, en l'abscence de la stabilisation obtenue par le tampon, la dimension des particules peut s'accroître d'une façon non contrôlée dans la solution saline physiologique à base de pertéchnétate.
Dans chacun des exemples suivants, toutes les phases de mélange, de filtration et de chauffage sont réalisées sous des conditions d'anaérobie, comme dans l'exemple précédent, et dans chacun des cas, les portions de 1 ml dispersées dans les fioles non pyrogéniques, stériles de 10 ml, sont soumises aux marnes phases que dans l'exemple 1, c'est-à-dire que la portion peut être séchée par
<EMI ID=106.1>
ge par congélation, et la portion marquée est analysée en vue d'ob tenir la distribution de l'activité par la dimension des particules, comme précédemment. La biodistribution chez les souris et les images ou impressions obtenues par voie radio-active chez les singes, lorsqu'on les essaye par ces processus, comme indiqué dans chacun des exemples, sont réalisées de la même manière que dans l'Exemple 1.
<EMI ID=107.1>
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 45 ml d'eau
<EMI ID=108.1>
à 25% (75 mg de HSA), 0,25 ml d'une solution de chlorure stanneux
(comme dans l'Exemple 1), 0,3 ml d'une solution à 196 de Pluronic F-68, 11,2 mg d'acide diéthylènetriaminepentaacétique, et 1,65 ml d'hydroxyde de sodium de 0,1 N. Le pH de la solution est de 6,54. Des portions de cette solution, filtrées à travers une membrane <EMI ID=109.1>
<EMI ID=110.1>
<EMI ID=111.1>
3,3 ml d'une solution stabilisante formulée comme dans l'Exem ple 1, sont mélangés sous des conditions d'anaérobie avec 6,7 ml de la suspension laiteuse. Des portions de 1 ml de cette formulation, qui a un pH de 8, sont versées dans des fioles à sérum de
10 ml non pyrogéniques, stériles comme dans l'Exemple 1. Les résultats des essais effectués sur une préparation de ce type, traitée et marquée comme décrit dans l'Exemple 1, sont les suivants:
Distribution de l'activité par la dimension des particules:
Dimension des particules % de la totalité
<EMI ID=112.1>
Exemple 3
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 45 ml d'eau à faible à faible teneur en oxygène, les composants suivants: 0,3 ml d'une solution à 1% de Pluronic F-68, 0,3 ml de HSA à 25% (75 mg de HSA), 0,25 ml d'une solution de chlorure stanneux (4,2 g de
<EMI ID=113.1>
jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène). On mélange 16,7 ml de cette solution avec 1 ml d'une solution aqueuse à
<EMI ID=114.1>
0,55 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 0,025N. Le pH de la solution est de 5,85. Des portions de cette solution, filtrées à
<EMI ID=115.1>
3,5 minutes dans de l'eau bouillante, donnent une suspension laiteuse de microagrégats de HSA dénaturé.
<EMI ID=116.1>
de Pluronic F-68. Après avoir dissous les matières solides, on dilue cette solution de stabilisation jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène, et on la fait passer au travers d'un filtre stérilisant. 3,3 ml de la solution stabilisante précédente sont mélangés sous des conditions d'anaérobie avec 6,7 ml de la suspension laiteuse. Des portions de 1 ml de cette formulation , qui a un pH de 8, sont versées dans des fioles à sérum de 10 ml. Les résultats des essais effectués sur une préparation de ce type, traitas comme décrit après l'exemple 1, sont les suivants:
Distribution de l'activité par la dimension des particules:
Dimension des particules % de la totalité
<EMI ID=117.1>
Exemple 4
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 290 ml d'eau à faible teneur en oxygène, les composants suivants: 1 ml d'une solution aqueuse contenant 0,2 g de Pluronic F-68 par 5 ml, 4 ml de HSA à 25% (1 g de HSA), 3 ml d'une solution de chlorure stan-
<EMI ID=118.1>
ble teneur en oxygène, et 4,04 ml d'une solution de chlorure de sodium 4 molaire. Le pH de la solution est de 6,5. Après une filtration sous des conditions d'anaérobie au travers d'une mem-
<EMI ID=119.1> sivement et d'une façon continue à travers deux échangeurs de chaleur. On obtient ainsi une méthode semi-continue pour l'agrégation qui peut être rendue totalement continue par l'utilisation d'un écoulement mesuré et continu des matières de mélange dans une chambre de mélange avec un écoulement en continu à partir de celle-ci à travers le filtre et les échangeurs de chaleur, la sortie au départ des échangeurs de chaleur étant mesurée d'une façon continue dans une chambre de mélange dans laquelle la solution de stabilisation est mesurée et mélangée d'une façon continue avec le mélange résultant, qui passe d'une façon continue à travers le fil-
<EMI ID=120.1>
gées d'une façon continue dans le dispositif de séchage par congélation. Le premier échangeur de chaleur est chauffé par un fluide
<EMI ID=121.1>
produits agrégés sont recueillis sous des conditions d'anaérobie. Le temps de séjour moyen de la masse dans chaque échangeur de chaleur se situe entre 3 et 8 minutes, et permet d'obtenir une suspension laiteuse des microagrégats de HSA dénaturé, stanneux.
On ajoute à 10 ml d'une solution de phosphate sodique (9,5 g de Na2HP04.7H20 par 100 ml) 2 ml de ESA à 25% (0,5 g de HSA), 6,25 ml d'une solution de Pluronic F-68 (4,0 g par 100 ml), et de l'eau jusqu'à l'obtention d'un volume total de 35 ml de solution stabilisante. Après avoir réalisé un mélange intime, une désoxygénation et une filtration stérilisante, on ajoute 15 ml de la suspension laiteuse, cette opération étant suivie à nouveau d'un mélange intime.
On verse des portions de 1 ml de cette formulation, qui a <EMI ID=122.1>
un pH de 8, dans des fioles à sérum de 10 ml. :.sa résultats des essais effectués sur cette préparation marquée comme dans l'Exemple 1, sont les suivants:
Distribution de l'activité par la dimension des particules:
Dimension des particules % de la totalité
<EMI ID=123.1>
<EMI ID=124.1>
nistration intraveineuse:
<EMI ID=125.1>
Exemple 5
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 45 ml d'eau à
<EMI ID=126.1>
25% (75 mg de HSA), 0,25 ml d'une solution de chlorure stanneux
(4,2 g de chlorure stanneux dihydraté plus 3 ml d'acide chlorhydrique 12N, dilués jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène), 0,3 ml d'une solution de Pluronic F-68 à 1%, et 3,7 ml d'une solution de pyrophosphate sodique à 1% (préparée comme dans l'Exemple 3). Le pH est de 5,71. Des portions de cette solution <EMI ID=127.1>
La. suspension laiteuse est combinée avec une solution stabilisante de HSA-phosphate de sodium-Pluronic F-68 pour obtenir
<EMI ID=128.1>
et on la marque avec 7 ml de pertéchnétate de sodium 99m-Tc, tout comme dans l'Exemple 3. On obtient les résultats suivants sur une de ces préparations:
Distribution de l'activité par la dimension des particules:
Dimension des particules % de la totalité
<EMI ID=129.1>
Biodistribution chez la souris 15 minutes après une administration intraveineuse:
Organe % de dose injectée par organe
<EMI ID=130.1>
Exemples 6 et 7
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 417 ml d'eau à faille teneur en oxygène, les composants suivants: 16,3 ml (0,75 g)
<EMI ID=131.1> <EMI ID=132.1>
n[deg.] 4.094.965, cette étape étant suivie d'une ultrafiltration, pour obtenir une concentration d'albumine de 4,6% ), 2,5 ml d'une solution de chlorure stanneux (4,2 g de chlorure stanneux d ihydraté
<EMI ID=133.1>
<EMI ID=134.1>
Pluronic F-68. On mélange à fond la solution résultante avec
25,6 ml d'une solution aqueuse à 1% de pyrophosphate de sodium
(préparée comme dans l'Exemple 3) et avec 34,2 ml d'hydroxyde de
<EMI ID=135.1>
<EMI ID=136.1>
<EMI ID=137.1>
l'Exemple 6.
On ajoute une quantité additionnelle de 3,4 ml d'hydroxyde
<EMI ID=138.1>
tation. Le pH est de 6,11. On réalise les filtrations comme cidessus. Cette masse de pré-agrégation est conservée pour l'Exemple
7.
Des portions des deux masses de pré-agrégation sont chauf-
<EMI ID=139.1>
pour former des microagrégats.
<EMI ID=140.1>
Formulées avec la solution stabilisante (pH de la formula- tion stabilisée' : 8) , déversées dans des fioles et marquées avec
<EMI ID=141.1>
on obtient les résultats suivants:
<EMI ID=142.1>
Dimension des 'Particules Exemple 6 Exemple 7
<EMI ID=143.1>
Biodistribution chez la souris 15 minutes après une administration intraveineuse:
Organe % de dose injectée par organe
<EMI ID=144.1>
Impression chez les singes
Organe Qualité de l'impression ou l'image
<EMI ID=145.1>
<EMI ID=146.1>
La détérioration de la qualité de l'impression splénique résultant d'une nette réduction de la dimension des particules provoquée par une augmentation du pH dans l'Exemple 7, est évidente <EMI ID=147.1>
en comparant la relation, dans les Exemples 6 et 7, existant entre la distribution de l'activité par la dimension des particules (qui ' se réfléchit également dans l'aspect des masses agrégées) et la qualité de l'impression chez des primates en bonne santé.
Exemple 8
On ajoute, sous des conditions de mélange, à 45 ml d'eau à faible teneur en oxygène les composants suivants: 0,3 ml de HSA à
<EMI ID=148.1>
<EMI ID=149.1>
30 ml), 0,25 ml d'une solution de chlorure stanneux (4,2 g de chlorure stanneux dihydraté plus 3 ml d'acide chlorhydrique 6,15N, dilués jusqu'à 100 ml avec de l'eau à faible teneur en oxygène), 0,3 ml d'une solution à 1% de Pluronic F-68 et 5,42 ml d'une solu-
<EMI ID=150.1>
5,90. Des portions de cette solution en vrac de pré-agrégation, filtrées à travers une membrane stérilisante de 0,22�m et chauffées
<EMI ID=151.1>
ment une suspension laiteuse de microagrégats.
Formulée avec une solution stabilisante (pH de la formulation : 8), versée dans des fioles et marquée avec 5 ml de per-.
<EMI ID=152.1>
tient les résultat suivant:
Distribution de l'activité par la dimension des particules:
Dimension des particules % de la totalité
<EMI ID=153.1>
<EMI ID=154.1>
<EMI ID=155.1>
L'albumine microagrégée stanneuse, lyophilisée de la présente invention a une durée d'existence très longue d'au moins 1 an à la température ambiante (lorsqu'elle est protégée de la lumière). Elle est également stable pendant au moins 24 heures après le marquage bien qu'il soit préférable de l'utiliser endéans 6 heures après le marquage, lorsqu'elle est stockée sous réfrigération, pour la sécurité du patient, parce qu'elle ne contient aucun agent de conservation.
Des macroagrégats stanneux de HSA, biodégradables, marqués
<EMI ID=156.1>
que ou à une valeur proche du point isoélectrique du HSA où les particules ont une charge nulle ou proche de zéro (réalisés au moyen d'une agrégation au pH isoélectrique d'environ 4,8-5,5 et à une concentration ionique relativement élevée) ont été utilisés dans le commerce pour l'impression par voie radio-active des poumons. Ils sont également décrits dans la littérature de brevets. Voir les brevets des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3.987.157,
3.863.004 et 3.872.226. Toutefois, ces agents ne conviennent pas <EMI ID=157.1>
teindre le foie, la rate et la moelle osseuse. Voir également le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 4.024.233 et United States Pharmacopia XIX, page 488.
Une trousse d'exploration du RES de minimicrosphères de HSA marquées au Tc-99m, contenant de l' étain (diamètre moyen de
<EMI ID=158.1>
un pH de 2,4 avec un tampon de glycine-HCl, délivrée par la 3M, est rapportée dans Journal of Nuclear Medicine vol. 16, n[deg.] 6,
1975, page 543. On suppose que ces minimicrosphères sont précipitées à partir d'une émulsion de HSA liquide dans un bain d'huile. On ne sait pas à quel moment on ajoute l'étain. Voir également le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3.937.668 et Int. J. of App.
<EMI ID=159.1>
On a également proposé dans la littérature de décomposer au
<EMI ID=160.1>
iodés par voie radio-active en microparticules (J.N.M. Vol. 13,
1972 pp 260-65; J.N.M. Abstract, Vol. 12, n[deg.] 6, 1971, pp 373; J.N.M. Abstract Vol. 10, n[deg.] 6, pp 453-4; Int. J. of Applied Radiation and Isotopes, 1975 Vol. 26, pp 31-32). Toutefois, on ne mentionne pas dans ces articles la présence d'un métal de réduction au cours de l'agrégation et d'un ligand, et ces produits requièrent une étape de décomposition.
<EMI ID=161.1>
présence d'un métal de réduction quelconque et d'un ligand et on <EMI ID=162.1> ne précise pas comment les microagrégats sont formés.
On décrit dans J.N.M. vol. 10, n[deg.] 6, 1969, page 464, des méthodes de marquage de macro- et de microagrégats d'albumine de sérum, utilisant des ions ferriques et de l'acide ascorbique, mais on ne précise pas comment les microagrégats sont formés et on ne mentionne pas la présence d'un métal de réduction et d'un ligand.
Dans J.N.M. vol. 9, n[deg.] 9, 1968, pages 482-485, on décrit un procédé de fabrication de microagrégats de HSA suivi d'une iodation par voie radio-active de ces microagrégats. On ne mentionne
<EMI ID=163.1>
J.N.M., vol. 11, n[deg.] 6, 1970, page 387, on décrit un procédé de préparation de microagrégats d'albumine marqués au Tc-99m, d'une dimension de particules d'environ 0,5um, où les microagrégats sont apparemment formés à partir d'albumine non agrégée marquée au Tc-
99m (l'albumine non agrégée est marquée avec du Tc-99m en utilisant du chlorure ferrique, de l'acide ascorbique et un tampon formé d'acétate); on ne mentionne toutefois pas la présence d'un métal de réduction et d'un ligand.
Dans J.N.M. vol. 12, n[deg.] 6, 1971, pages 467-468, on décrit une suspension colloïdale d'hydroxyde stanneux marquée au Tc-99m utilisée pour l'impression du foie, mais on ne mentionne pas l'utilisation de HSA ou d'un ligand de stabilisation dans la préparation ainsi décrite.
On décrit dans J.N.M. vol. 11, n[deg.] 10, pages 580-585, 1970, un procédé de microagrégation du HSA suivi d'un marquage avec du technétium réduit préalablement avec du chlorure ferrique et de l'acide ascorbique. On ne mentionne toutefois pas la présence d'un métal de réduction ou d'un ligand au cours de l'agrégation.
M
La littérature suivante décrit des agrégats de HSA iodés:
Br. J. Exp. Path. vol. 38, 1957, pp 35-48; Rapport Scientifique intitulé "Colloidal Radioalbumin Aggregates For Organ Scanning",
<EMI ID=164.1>
<EMI ID=165.1>
Med., vol. 51, n[deg.] 2, pp. 230-239. 1958; "Dynamic Clinical Studies With Radioisotopes" USAEC Division of Tech. Info., pp 285-317, juin
1964; Invest. Radiol. vol. 1, 1966, pp. 295-300; Rapport de G. V. Taplan et coll. intitulé "Preparation of Colloidal Suspensions of
<EMI ID=166.1>
Reticulo-endothelial System Functions in Man", Rapport du UCLA
n[deg.] 481 Biology and Medicine, 23 juin 1961, University of California, Los Angeles School of Medicine.
Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 4.054.645 décrit l'utilisation d'un agent de réduction de fluorure stanneux avec
un certain nombre de différents ligands de recherche de l'objectif visé, dont l'un est l'albumine, mais on ne mentionne en aucun cas la microagrégation d'albumine en présence d'un sel stanneux
et d'un ligand de recherche de l'objectif non visé, additionnel.
Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 4.057.615 décrit l'utilisation d'un complexe formé d'un agent de réduction avec différents excipients de recherche de l'objectif visé (un terme
choisi de manière inappropriée pour les ligands de recherche de l'objectif visé) dans lequel la constante d'association de
l'anion de l'agent de réduction pour le technécium est inférieure à celle de l'excipient. On ne mentionne pas de microagrégation en présence d'un métal de réduction et d'un ligand de recherche de l'objectif non visé.
Bien que certaines des références de la littérature susmentionnée se réfèrent à des microagrégats d'albumine marqués au Tc-99m comma agents d'impression par voie radio-active, il n'y a actuellement aucun agent de ce type sur le marché pour l'impression
du RES, et le soufre colloïdal continue à être l'agent principal du
RES sur le marché en dépit de ses inconvénients et compte tenu du
fait que les macroagrégats marqués au Tc-99m sont devenus un facteur majeur dans le marché de l'impression des poumons.
REVENDICATIONS
<EMI ID=167.1>
voie radio-active, caractérisé en ce qu'elle comprend des microagrégats d'albumine et d'un métal de réduction.