BE905345A - Een nieuwe methode om creatinefosfaat (cp) te bepalen in lichaamsvloeistoffen, weefsels en de extracten daarvan bij de mens en de zoogdieren. - Google Patents

Abstract

Methode gekaraktiriseerd door een nieuwe reactie die gebruikt maakt van de opeenvolgende combinatie van creatinekinose en creatinase in een reactieschema dat kan doorgaan zowal in vloeibare fase als op een vaste drager.

Description

   <Desc/Clms Page number 1> 
 



  4. BESCHRIJVING VAN HET SYSTEEM. 



   DOSAGE VAN CREATINEFOSFAAT. 



  De dosage van creatinefosfaat wordt uitgevoerd op monsters van lichaamsvloeistoffen (plasma, serum en hun ultrafiltraten, urine of bij weefselextracten. 



  De analyse verloopt volgens een enzymatische methode, waarin gebruik gemaakt wordt van creatine kinase en creatinase. Deze reactie is zowel uitvoerbaar in een vloeistofmilieu (waterige op lossing) als op een vaste drager. 



  Bij deze methode wordt het creatinefosfaat met behulp van creatine kinase omgezet tot creatine. Het aldus gevormde creatine wordt verder omgezet via creatinase en een tweede monitorreactie zoals beschreven in het Belgisch Octrooi   904. 688 (Min. Besluitdd.   



  15. 05. 86). 



  Een parallel uitgevoerde bepaling, ditmaal zonder toevoeging va' creatine kinase, maar voor de rest volledig identiek aan de   eerst   bepaling, doet dienst ter bepaling van de blankowaarde. 



  Het netto-gehalte aan creatinefosfaat wordt bekomen door het resul taat van de blankometing af te trekken van de eerste meting. 

 <Desc/Clms Page number 2> 

 



  RECEPT De bepaling van creatinefosfaat gebeurt door staal en reagens te mengen in de verhouding l (monster) tot 20 (reagens). 



  De reactie gaat door bij temperaturen begrepen tussen 15 en 4   0 C.    



  Het reagens bestaat uit een mengsel van 50   %   Tris-buffer pH 7, 4 ; sterkte : 150 mmol/1 en 50   %   Kaliumfosfaatbuffer pH   7, 4 ;   sterkte 150   mmol/1. Afwijkingen   van deze mengverhouding beinvloeden de reactie niet zolang de Tris-buffer tussen de 40 
 EMI2.1 
 en de 95 % van het reactievolume inneemt. 



  TOEVOEGINGEN AAN DE KALIUMFOSFAATBUFFER T')aiiumhexacyanoterrat(Il) 2) 2, 3). Natriumcholaat 5 mmol/l 4) Triton X-100 0,25% 
Bij dit mengsel wordt gevoegd : 4-aminofenazone   0, 8 mol/1   creatinase 30 U/ml sarcosine oxidase 10 U/ml lipase 2U/ml creatine kinase 29 U/ml 
 EMI2.2 
 ADP-di natrium 0, MgC12 6 H20 7, peroxidase 2 U/ml ascorbaat oxidase 20 U/ml 

 <Desc/Clms Page number 3> 

 5. SITUERING IN HET DOMEIN. 



  De bepaling van creatinefosfaat met deze methode betekent een significante verbetering ten opzichte van vorige methoden aangezien : 1. Deze methode sneller is dan de voorheen gebruikte methode : Dit betekent een belangrijk voordeel bij het doseren van creatinefosfaat in weinig stabiel biologisch materiaal. 



  2. Door het volledig enzymatisch karakter van de methode is deze methode zeer specifiek en eenvoudig meetbaar. De   aflt   zing gebeurt immers bij een golflengte tussen 500 en 600   nm ;   een spectrale zone waarbij in biologisch materiaal weinig interferenties te verwachten zijn.

Claims (2)

6. TOEPASSINGSMOGELIJKHEDEN.

1. Evalueren en opstellen van energiebalansen in weefsels door het meten van creatinefosfaat concentraties in de hoger vernoemde biologische milieus.

2. Voor de diagnose van skelet- en hartspiernecrose en/of ischemie en de follow-up gedurende de vroege (eerste dag) post-hartinfarct periode door het bepalen van de in het extracellulair milieu vrijgestelde concentraties-creatinefosfaat vanuit beschadigde skeletspier- of hartspiercellen. <Desc/Clms Page number 5> EMI5.1

Opgemaakt te Gent op 28 augustus 1986 DELANGHE Joris DE SCHEERDER r,/, DE BUYZERE M " / --.

\''. " GHEERAERT Peter t WIEME Roger