BG107121A - Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo - Google Patents
Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo Download PDFInfo
- Publication number
- BG107121A BG107121A BG107121A BG10712102A BG107121A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A BG 10712102 A BG10712102 A BG 10712102A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- xxx
- liz
- hfa
- nle
- nal
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 229940124041 Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) antagonist Drugs 0.000 title description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 45
- -1 4-amidinophenyl Chemical group 0.000 claims description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 20
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 claims description 6
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 claims description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 4
- 238000005304 joining Methods 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000282322 Panthera Species 0.000 claims description 2
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 claims description 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 229950005627 embonate Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 239000006104 solid solution Substances 0.000 claims description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 39
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 25
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 16
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 13
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 10
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- SBNPWPIBESPSIF-MHWMIDJBSA-N cetrorelix Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 SBNPWPIBESPSIF-MHWMIDJBSA-N 0.000 description 10
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 9
- 229960003230 cetrorelix Drugs 0.000 description 9
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 9
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 9
- 108700008462 cetrorelix Proteins 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 4
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JMKBTQYGOKJMBJ-ZQPPIKFSSA-N bacteriohopane-32,33,34,35-tetrol Chemical compound C([C@]1(C)[C@H]2CC[C@H]34)CCC(C)(C)[C@@H]1CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@@H]1[C@@H](CC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO)C JMKBTQYGOKJMBJ-ZQPPIKFSSA-N 0.000 description 4
- NNTOJPXOCKCMKR-UHFFFAOYSA-N boron;pyridine Chemical compound [B].C1=CC=NC=C1 NNTOJPXOCKCMKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N cyclohexatrienamine Chemical group NC1=CC=C=C[CH]1 UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 4
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 4
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- NOENHWMKHNSHGX-IZOOSHNJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-pyridin-3-ylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-6-(ca Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CCCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NOENHWMKHNSHGX-IZOOSHNJSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 108010070670 antarelix Proteins 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 3
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 3
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- MVDPNTCYCFVFOX-SZENRQNHSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-3-(4-iodanylphenyl)propanoyl]amino]-3-pyridin-3-ylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(c Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC([125I])=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 MVDPNTCYCFVFOX-SZENRQNHSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical class NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-BXKVDMCESA-N L-mannitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-BXKVDMCESA-N 0.000 description 2
- 229930182842 L-mannitol Natural products 0.000 description 2
- 102000008238 LHRH Receptors Human genes 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 2
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- ZELBLMDUXBNUSM-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-amino-3-naphthalen-2-yloxypropanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(OC[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 ZELBLMDUXBNUSM-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- VXEOCBVZFIXWQA-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-tris(benzenesulfonyl)benzene Chemical group C1(=CC=CC=C1)S(=O)(=O)C=1C(=C(C=CC=1)S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1)S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 VXEOCBVZFIXWQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMSZFQVDZUKSFV-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[amino-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]phenoxy]acetic acid Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(N)C1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 YMSZFQVDZUKSFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050000048 Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 102000009165 Gonadoliberin Human genes 0.000 description 1
- 102400000932 Gonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101100229685 Homo sapiens GNRH1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101500026183 Homo sapiens Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010021290 LHRH Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000131894 Lampyris noctiluca Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241000254064 Photinus pyralis Species 0.000 description 1
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 1
- 108700023965 acetyl-2-(2-naphthyl)-Ala(1)-4-F-Phe(2)-Trp(3)-Arg(6)- LHRH Proteins 0.000 description 1
- CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N acetyl-2-(2-naphthyl)-ala(1)-4-f-phe(2)-trp(3)-arg(6)-lhrh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(F)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGLLICRFEVEWOZ-UHFFFAOYSA-L disodium;3-carboxy-1-[(3-carboxy-2-oxidonaphthalen-1-yl)methyl]naphthalen-2-olate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=C2C(CC3=C4C=CC=CC4=CC(=C3O)C([O-])=O)=C(O)C(C([O-])=O)=CC2=C1 YGLLICRFEVEWOZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 108700032141 ganirelix Proteins 0.000 description 1
- GJNXBNATEDXMAK-PFLSVRRQSA-N ganirelix Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN=C(NCC)NCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN=C(NCC)NCC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJNXBNATEDXMAK-PFLSVRRQSA-N 0.000 description 1
- 229960003794 ganirelix Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960001442 gonadorelin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- CBCIHIVRDWLAME-UHFFFAOYSA-N hexanitrodiphenylamine Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1NC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O CBCIHIVRDWLAME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical class [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000036185 rubor Effects 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950011372 teverelix Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N triptorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N 0.000 description 1
- 229960004824 triptorelin Drugs 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
- A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до пептиди, които включват N-метилиран аминокиселинен компонент и са с подобрена разтворимост във вода. Лекарствените средства, съдържащи посочените пептиди, могат да се използват за лечение на хормонозависими тумори и повлияващи се от хормони незлокачествени болестни състояния.
Description
НОВИ LHRH-АНТАГОНИСТИ, тяхното получаване и ИЗПОЛЗВАНЕ КАТО ЛЕКАРСТВЕНО СРЕДСТВО ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася до нови LHRH-антагонисти, до тяхното получаване и използване като лекарствено средство. По-точно то се отнася до LHRH-антагонисти с подобрена разтворимост, до методи за получаването на тези съединения, до лекарствени средства, които ги съдържат, както и до приложение на лекарствените средства за лечение на хормонозависими тумори и на повлияващи се от хормони незлокачествени заболявания, като доброкачествена хиперплазия на простатата и ендометриоза. ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Номенклатурата, използвана за дефиниране на пептиди, съвпада с тази, използвана от комисията на IUPAC-IUB (Международен съюз по чиста и приложна химия - Международен съюз по биохимия) и обяснена чрез биохимичната номенклатура, в която, съгласно традиционното предста вяне, аминогрупата в N-края се намира отляво, а карбоксилната група в Скрая - отдясно. LHRH-антагонистите, както пептидите съгласно изобретението, включват природни и синтетични аминокиселини, при което първите обхващат Ала, Вал, Лев, Иле, Сер, Тре, Лиз, Apr, Асп, Асн, Глу, Глн, Цис, Мет, фал, Тир, Про, Три и Хис. Съкращенията за отделните аминокиселинни остатъци са на базата на тривиалните имена на аминокиселините и са:
*
Ала=аланин, Арг=аргинин, Гли=глицин, Лев=левцин, Лиз=лизин, Пал(3) = 3-(3-пиридил)аланин, Нал(2)=3-(2-нафтил)аланин, фал=фенилаланин, Хфа =4-хлорфенилаланин, Про=пролин, Сер=серин, Тре=треонин, Три=триптофан, Тир=тирозин и Сар=саркозин. Всички споменати тук аминокиселини притежават L-конфигурация, освен ако не е посочено по друг начин. Например, D-Han(2) е съкращение за 3-(2-нафтил)-О-аланин и Сер е съкращение за L-серин. Заместителите в ε-аминогрупата на страничната верига на лизина са означени с поставено в скоба обозначение след Лиз, евентуално, под формата на съкращение.
Други използвани съкращения са:
| Ас | Ац=ацетил |
| В | 4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксобутил |
| Вос | трет.бутоксикарбонил |
| Вор | бензотриазол-1-окси-трис(диметиламино)фосфониев |
| хексафлуорфосфат | |
| DCC | дициклохексилкарбодиимид |
| DCM | ДХМ =дихлорметан |
| Ddz | диметоксифенилдиметилметиленоксикарбонил (диметокси- |
| диметил-Z) | |
| DIC | ДИК=диизопропилкарбодиимид |
| DIPEA | ДИПЕА=М,М-диизопропилетиламин |
| DMF | ДМф=диметилформамид |
| Fmoc | флуоренилметилоксикарбонил |
| HF | флуороводородна киселина |
| HOBT | 1 -хидроксибензотриазол |
| HPLC | ТХВН=течна хроматография под високо налягане |
| Me | метил |
| TFA | ТфК=трифлуороцетна киселина |
| Z | бензилоксикарбонил |
Пептидите съгласно изобретението представляват аналози на лутеинизиращ хормон-освобождаващ хормон (LH-RH), който притежава следната структура: р-Глу-Хис-Три-Сер-Тир-Гли-Лев-Арг-Про-Гли-Г\1Н2 [LHRH, гонадорелин].
В продължение на повече от 20 години изследователите търсят мощни селективни антагонисти на LH-RH-декапептида [М. Karten und J.Е. Rivier, Endocrine Reviews 7, 44-66 (1986)]. Големият интерес към такива антагонисти се основава на ползата от тях в ендокринологията, гинекологията, предпазването от забременяване и раковите заболявания. Получени са голям брой съединения като мощни LH-RH-антагонисти. Най-интересните съединения, открити до днес, са всички съединения, чиито структури представляват модификация на LH-RH-структурата.
Първата серия мощни антагонисти е получена чрез въвеждане на радикали от ароматни аминокиселини в местата 1, 2, 3 и 6 или в 2, 3 и 6. Приетият начин на изписване на съединенията изглежда така: първо се дават аминокиселините, които са представени в пептидната верига на LHRH на мястото на първоначално намиращите се там аминокиселини, при което местата, където е извършен обмена са обозначени с повдигнати цифри. По-нататък, чрез последващо обозначение „LH-RH,, се показва, че се отнася до аналози на LH-RH, в които е извършен обмена.
Известни са следните антагонисти:
[Ац-О-Хфа1,2, D-Tpn3,6]LH-RH (D.H.Coy et al., Gross, E. and Meienhofer, J. (Eds) Peptides; Proceedings of the 6th American Peptide Symposium, S. 775-779,
Pierce Chem. Co. Rockville III. (1979);
[Ац-Про1, D-Хфа2, D-Han(2)3,6]LH-RH (Патент на САЩ № 4.419.374) и [Ац-Про1, D-Хфа2, D-Tpn3,6]LH-RH (J.L. Pineda et al., J. Clin. Endocrinol. Metab.
56, 420,1983).
За да се подобри действието на антагонистите, по-късно, на 6-то място се въвеждат основни аминокиселини, напр. D-Apr. Например, [Ац-DХфа1’2, D-Три3, D-Арг6, D-Ana10]LH-RH Ац-Про1, D-Хфа2, D-Han(2)3'6]LH-RH (D.H.Coy et al. Endocrinology 100,1445,1982) и
Ац-0-Нал(2)1, D-Oan(4-F)2, D-Три3, D-Apr6]LH-RH (ORF 18260) (J. E. Rivier et al, във Vickery B.H. Nestor, Jr.J.J., Hafez, E.S.E. (Eds). LHRH and ist Analogs,
S.11-22 MTP Press, Lancaster, Uk 1984).
Други мощни LH-RH-антагонисти са описани в WO 92/19651, WO 94/19370, WO 92/17025, WO 94/14841, WO 94/13313, US-A 5,300,492, US-A 5,140,009, EP O 413 209 A1 и в DE 195 44 212 A1.
Последните публикувани съединения са тези с модифициран орнитинов или лизинов радикал на 6-то място и отговарят на следната формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Тир5-О-Ххх6-Лев7-Арг8-Про9-О-Ала10-МН2, в която D-Xxx означава аминокиселинна група с обща формула (IV):
-HN-CH-COI (СН2)П
NH
CO-R
Други известни LH-RH-антагонисти са Антареликс (Antarelix), Ганиреликс (Ganirelix) и Цетрореликс (Cetrorelix).
Антареликс® (генерично наименование: Тевереликс (Teverelix)): Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-Тир5-0-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8-Про9D-Ana10-NH2,
Ганиреликс:
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-Тир5-0-хАрг(Е1:)26-Лев7-хАрг(етил)28-Про9D-Ana10-NH2,
Цетрореликс: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Тир5-О-Цит6-Лев7-Арг8-Про9-О-Апа10-НН2,
Цел на изобретението е да даде нови LH-RH-антагоцисти, притежаващи повишена ензимна стабилност и значително подобрена водоразтворимост.
Тази задача е решена чрез съединенията с дадената по-долу обща формула (I):
A-Xxx1-Xxx2-Xxx3-Xxx4-Xxx5-Xxx6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2, (I) в която:
А означава ацетилна група
| Ххх1 - | D-Han(2) |
| Ххх2 | D-Хфа |
| Ххх3 - | О-Пал(З) |
| Ххх4 - | Сер |
| Ххх5 - | N-Ме-Тир |
| Ххх6 - | D-Цит, D-Хци или О-[8-1\Г-4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксо- |
| бутил]-Лиз (или съкратено: О-Лиз(Б)), | |
| Ххх7 - | Лев или Нле |
| Ххх8 - | Apr или Лиз(изопропил), |
| Ххх9 - | Про и |
| Ххх10 - | D-Ала или Cap, |
| при условие, че |
когато Ххх6 означава О-Лиз(Б), тогава Ххх7 е Нле, когато Ххх6 означава D-Цит, тогава Ххх7 е Нле и Ххх10 е D-Ала или когато Ххх6 означава D-Хци, тогава Ххх7 е Лев и Ххх10 е D-Ала, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини, по-специално, техните ацетати, ембонати и трифлуорацетати.
Съгласно друг аспект на изобретението, особено предпочетени са следните съединения, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Сар10-1\1Н2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-Сар10-МН2;
Ац-0-Нал(2)1-0-фал(4-С1)2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала 10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-ОАла10-1МН2;
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пап(3)3-Сер4-Г\1-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8npo9-D-Ana10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8ч ripo9-D-Ana10-NH2.
Съгласно друг аспект на изобретението, съединенията съгласно изобретението са под формата на ацетатна, трифлуорацетатна или ембонатна сол.
Съгласно друг аспект на изобретението, съединенията на представеното изобретение могат да се използват като лекарствени средства, респ. като фармацевтични състави.
Съгласно друг аспект на изобретението, фармацевтичните състави, включват най-малко едно от съединенията на изобретението и традиционните носители и помощни вещества.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за получаване на съединенията на изобретението с обща формула I, при който фрагменти от градивни единици с обща формула Хххт, в която m е цяло число от 1 до 10 и с подходящи защитни групи и при положение, че Ххх1 е ацетилиран, при което споменатите фрагменти са доведени по традиционните методи в твърда фаза или разтвор, след това се присъединяват последователно един с друг и след присъединяването, съединенията с обща формула I, по познати методи и с амидиране на елемента Ххх10, се отделят от твърдата фаза.
Съгласно друг аспект на изобретението, то се отнася до приложение на съединенията на изобретението за изработване на лекарствени средства за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата или на рак на гърдата, както и на доброкачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RH-хормона.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за получаване на фармацевтични състави, при който най-малко едно съединение, съгласно претенции от 1 до 10, се смесва с традиционни носители и помощни материали, за да се създаде лекарствено средство.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, на рак на гърдата или на миома на матката, както и на не-злокачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RH-хормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, при бозайниците, по-специално при хората, характеризиращ се с това, че се дава ефективна доза от най-малко едно от съединенията на изобретението.
Съединенията, съгласно изобретението могат да се използват за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, на рак на гърдата или на миома на матката, както и на не злокачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RHхормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата. Освен това те могат да се използват и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, напр. за контрол на овариалното суперстимулиране в рамките на изкуственото оплождане (оплождане „ин витро,,). За тази цел съединенията се смесват по обичайни и познати методи с традиционни носители и помощни материали за получаване на лекарствени средства.
Синтезът на съединенията с формула (I) може да се извърши както чрез класическа фрагментна кондензация така и чрез синтез в твърда фаза по Merrifield, с последователно изграждане с използване на D-лизин, чиято странична верига вече е ацилирана с карбоксилна киселина с обща формула Rt-COOH, а също така и чрез реакция на декапептидна основа със съответни карбоксилни киселини посредством амидно присъединяване към страничната верига на D-лизин0. След това може да се предприеме въвеждането на групата R^CO- в три разрични етапа от синтеза: преди кондензирането на отделните съставни елементи до пептид, след въвеждането на лизин или орнитин в пептидната верига, но преди кондензацията на следващите елементи или след кондензацията на всички съставни части.
Съединенията с формула (I) се синтезират по познати методи, напр. чрез техника на чист синтез в твърда фаза, на частичен твърдофазен синтез (т.н. фрагментна кондензация) или чрез класически присъединявания в разтвор (вижте М. Bodanszky, „Principles of Peptide Synthesis,, Springer Verlag 1884).
Методите за синтез в твърда фаза са описани, например в учебника „Solid Phase Peptide Synthesis,, J.M. Steward and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984 и в G. Barany and R.B. Merrifield „The Peptides,,, Ch. 1, S. 1-285, Academic Press Inc. Класическите методи на синтез в
разтвор са описани подробно в наръчника „Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Synthese von Peptiden,, E. Wuensch (Herausgeber) 1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Последователното (стъпаловидно) изграждане се извършва, напр. като първоначално аминокиселината в карбокси-края, чиято а-аминогрупа е защитена, се свързва ковалентно към обичаен неразтворим носител; отцепва се α-аминозащитната група; към така получената свободна аминогрупа се свързва следващата защитена аминокиселина чрез карбоксигрупата си и така, стъпка по стъпка се присъединяват следващите аминокиселини към синтезирания пептид в правилната последователност и след присъединяване на всички аминокиселини, полученият пептид се отделя от носителя и, евентуално се отстраняват други налични защитни групи на странични функционални групи. Стъпаловидната кондензация се извършва чрез традиционен синтез от подходящи защитени по обичаен начин аминокиселини.
Присъединяването на отделните аминокиселини една към друга става по обичайните за това методи, по-специално следните:
метод на симетрични анхидриди в присъствие на дициклохексилкарбодиимид или на диизопропилкарбодиимид (DCC, DIC);
общ метод с карбодиимид метод с карбодиимид-хидроксибензотриазол (вижте The Peptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer).
При свързване на фрагменти, за предпочитане е да се използва азидно свързване, протичащо без рацемизиране или метода с DCC-1-хидроксибензотриазол, респ. с ОСС-3-хидрокси-4-оксо-3,4-дихидро-1,2,3-бензотриазин. Може да се използват също така и активирани естери на фрагментите.
За стъпаловидната кондензация на аминокиселини особено подходящи са активирани естери на N-защитени аминокиселини, напр. N-хидрокси-
сукцинимиден естер или 2,4,5-трихлорфенилов естер. Аминолизата се катализира много добре от N-хидроксисъединения, които притежават в определена степен киселинността на оцетната киселина, напр. 1-хидроксибензотриазол.
Като междинни аминозащитни групи могат да се използват групи, отделящи се с хидриране, напр. бензилоксикарбонилов радикал (=Z-paflHкал) или групи, отцепващи се в слабокисели условия. Като защитни групи за аминогрупите на α-място могат да се използват следните:
третични бутилоксикарбонилни групи, флуоренилметоксикарбонилни групи (евентуално също така с р-бром- или р-нитробензилови радикали), трифлуорацетилна група, фталилов радикал, о-нитрофеноксиацетилна група, тритилна група, р-толуенсулфонилна група, бензилна група, бензинови радикали, заместени в бензеновото ядро (р-бром- или р-нитробензилов радикал) и α-фенилетилов радикал. Тук може да се препоръча следната литература: Jesse Р. Greenstein und Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc., Vol. 2, напр. страници 883 и следващите, „Principles of Peptide Synthesis,,, Springer Verlag 1984, „Solid Phase Peptide Synthesis,, J.M. Steward and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984, G. Barany and R.B. Merrifield „The Peptides,,, Ch. 1, S. 1-285, 1979 Academic Press Inc., както и The Peptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer Academic Press, New York. Тези защитни групи се използват по принцип и за защита на други функционални групи в страничните вериги (ОН-групи, NH2-rpynn) на съответните разглеждани аминокиселини.
Наличните хидроксигрупи (серин, треонин) е за предпочитане да бъдат защитени с бензилови и подобни на тях групи. Другите, намиращи се не на α-място аминогрупи (напр. аминогрупите на ω-място, гуанидиногрупата на аргинина) е препоръчително да се защитят ортогонално.
Отделните аминокиселини за изграждане на съединенията, с изключение на лизина, модифициран с ЯтСО-група, се намират на пазара.
Една възможна схема на метода за получаване на лизин, модифициран с RpCO-група, е следната:
1. α-групата на карбоксилната киселина се защитава по подходящ начин, например чрез естерифициране.
2. ε-аминогрупата се защитава например, със Z-rpyna,
3. α-аминогрупата се защитава по такъв начин (напр. с Вос-група), че да се получи селективност спрямо последващото отцепване на аминозащитните групи.
4. Z-групата на ε-аминогрупата се отцепва,
5. Към ε-аминогрупата се въвежда желаната група F^-CO-,
6. Отцепва се защитната група на а-аминогрупата
7. Евентуално, α-аминогрупата се дериватизира, напр. със Z-rpyna.
За въвеждане на F^-CO-rpyna чрез реакция на аминогрупата на лизина с подходяща аминокиселина, реел, с аминокиселинно производно, по принцип се използва същия метод, както описания по-горе за присъединяване на описаните аминокиселини. Особено препоръчителна е кондензацията с използване на карбодиимид, напр. на 1-етил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид и на 1-хидроксибензотриазол.
Реакцията на присъединяване на аминокиселини се извършва в традиционните за тази цел неутрални разтворители или суспендиращи агенти (напр. дихлорметан), при което, евентуално може да се прибави и диметилформамид за подобряване на разтворимостта.
Като синтетичен материал за носител са подходящи неразтворими полимери, напр. набъбваща в органичен разтворител полистиролна смола под формата на перли (напр. съполимеризат от полистирол и 1% дивинилбензен). Изграждането на защитен декапептидамид върху метилбензхидриламинна смола (МБХА-смола, т.е. полистиролна смола с метилбензхидриламинни групи), чийто С-крайща проявяват амидната функция на пеп тид, след отцепване с HF от носителя, може да се извърши съгласно следната технологична схема:
Технологична схема
Протокол за синтез на пептид с използване на Вос-защитени аминокиселини
| Етап | Действие | Разтворител/реагент (об.) | Време |
| 1 | Промиване | Метанол | 2x2 мин |
| 2 | Промиване | Дихлорметан (ДХМ) | 3x3 мин |
| 3 | Отцепване | ДХМ/ТФК (1:1) | 1 х 30 мин |
| 4 | Промиване | Изопропанол | 2x2 мин |
| 5 | Промиване | Метанол | 2x2 мин |
| 6 | Промиване | ДХМ | 2x3 мин |
| 7 | Неутрализиране | ДХМ/ДИПЕА (9:1) | 3x5 мин |
| 8 | Промиване | Метанол | 2x2 мин |
| 9 | Промиване | ДХМ | 3x3 мин |
| 10 | СТОП | Прибавяне на Вос-АК в ДХМ + ДИК + НОВТ | |
| 11 | Присъединяване | ДХМ, евент. ДХМ/ДЦф | ок. 90 мин |
| 12 | Промиване | Метанол | Зх2>мин |
| 13 | Промиване | ДХМ | 2x3 мин |
Να-Вос-защитените аминокиселини, в трикратен молен излишък се свързват по обичайния метод, в присъствие на диизопропилкарбодиимид (ДИК) и 1-хидроксибензотриазол (НОВТ) в СН2С12/ДМф в продължение на 90 минути. Защитната Вос-група се отцепва с половинчасова обработка с 50% трифлуороцетна киселина (ТфК) в СН2С12. За контрол на пълното превръщане може да се използва хлоранилтест по Кристенсен (Christensen) и на нинхидринов тест на Кайзер (Kaiser). Остатъци от свободни аминофункционални групи се блокират чрез ацетилиране в петкратен
излишък от ацетилимидазол в СН2С12. Последователността на реакциите за изграждане на пептида върху смолата се вижда от технологичната схема. За отделяне на пептида свързан към смолата, полученият до този момент краен продукт от синтеза в твърдата фаза, се суши под вакуум над Р2О2 и се обработва в 500 кратен излишък от HF/анизол 10:1 (об.) за 60 мин при 0°С.
След отстраняване на HF и анизола под вакуум, пептидите се получават чрез стриване с безводен етилетер под формата на бял твърд продукт, като разделянето от полимерния носител се извършва, чрез промиване с 50% воден разтвор на оцетна киселина. Чрез концентриране на оцетнокиселите разтвори под вакуум, получените пептиди могат да се изолират като силновискозни масла, които, след прибавяне на абсолютен етер на студено, се превръщат в бели твърди субстанции.
По-нататъшното пречистване се извършва по рутинните методи на п pen арати в н ата те»'на хроматография под високо налягане (ТХВН).
Превръщането на пептидите в техните киселинни присъединителни соли може да се извърши при взаимодействие на същите с киселини по известни от практиката методи. Обратно, свободни пептиди могат да се получат при взаимодействие на техните киселинни присъединителни соли с бази. Пептидни ембонати (памоати) могат да се получат чрез взаимодействие на соли на трифлуороцетната киселина (ТфК-соли) на пептида със свободна ембонова (памоева) киселина или със съответната двунатриева сол на ембоновата киселина. За тази цел воден разтвор на пептидната ТфК-сол се смесва с разтвор на двунатриев ембонат в полярен непротонен разтворител, за предпочитане диметилацетамид, след което образуваната светложълта утайка се изолира от разтвора.
Дадените по-долу примери служат за обяснение на изобретението, без да го ограничават.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Пример 1 (D-68968): Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Cap10-NH2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Fmoc-D-Tln3(Boc)-OH, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид се пречиства с ТХВН. След сублимационно сушене се получава 98.5% декапептид.
Заместването при ε-азота на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4диоксомаслена киселина се извършва с РуВор (пиридин-Вор) в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Пречистването на изолирания суров пептид се извършва с препаративна ТХВН. Крайното сублимационно сушене дава около 99% продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула C82H1o6CIN19015 с коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1633 (М+Н) (изчислен 1631.78096).
ч
Пример 2 (D-68969) Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Г\1-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Етос-0-Лиз(Вос)-ОН, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид със съдържание около 71% (ТХВН) се използва в следващия етап без допълнително пречистване.
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 98%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула С82Н106С11\119О15 с коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1633 (М + Н) (изчисл. 1631.78096). Пример 3 (D-68971) Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Н-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(из6пропил)8-Про9-Сар10-МН2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Fmoc-D41n3(Boc)-OH, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид (съдържание около 59%, ТХВН) се пречиства с препаративна ТХВН. След сублимационно сушене се получава 95%-ен декапептид.
Ч
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 96.6%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула θ854ΐ12θΙΝ17Ο15 C коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1648 (М+Н) (изчисл. 1645.8218).
Пример 4 (D-68987) Ац-0-Нал(2)1-0-фал(4-С1)2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изоnponnn)8-npo9-D-Ana10-NH2,·
Синтезът на D-Лиз-б-незаместен декапептид се извършва върху 9.09 г полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г. Лиз6 се свързва под формата на Fmoc-DJln3(Boc)-OH.
След отделяне от смолата, се изолират 8.15 г суров пептид. Пречистването на суровия пептид се извършва с препаративна ТХВН.
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 94.6%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула θ85Ηΐΐ2θΙΝ17Ο15 ** със съответния МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1646.8 (М+Н, изчисл.
1645.82).
Пример 5: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2.
Пример 6: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1М-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ала10-ИН2.
Пример 7: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала10-МН2.
Пример 8: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Лиз(изоnponnn)8-npo9-D-Ana10-NH2.
Обши правила за работа за получаване на пептидите съгласно примери от 5 до 8:
Декапептидите могат да се получат както по метода на Мерифийлд, чрез синтез в твърда фаза, така и съгласно клаческата фрагментна кондензация в разтвор. Изграждането на пептидната последователност върху полимерен носител е за предпочитане от икономическа гледна точка и принципно може да се извърши по избор с (1) Вос- или с (2) Fmocстратегия, като съответно може да се извърши или с метилбензхидриламинна смола (за пр. 1) или с Е-тос-2,4-диметокси-4’-(карбоксиметилокси)бензхидриламинна смола (за пр. 2) за свързване на D-Ала в С-края.
Синтез в твърда фаза, метод на Мерифийлд:
Декапептидите се синтезират при стандартизирани условия на реакция (технологична схема, Таблица I) за синтез в твърда фаза по технологията Fmoc с използване на 5 грама от полимерния носител Fmoc-
2,4-диметокси-4’-(карбоксиметилокси)бензхидриламинна смола от фирма Bachem D 1675, плътност на зареждане около 0.55 ммол/г, размер на зърната 200-400 меша.
Последователното създаване на последователността върху смолата с помоща на Na-Fmoc-защитени аминокиселини, протича по следната технологична схема:
Таблица I:
| Етап | Действие | Разтворител | Време | Повтаряне |
| 1 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х2 |
| 2 | Отцепване | 20% пиперидин в ДМФ | 5 мин | ' х 2 |
| 3 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х2 |
| 4 | Промиване | изопропанол | 2 мин | х1 |
| 5 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х2 |
| 6 | Промиване | изопропанол | 2 мин | х1 |
| 7 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х2 |
| 8 | Присъединяване | Вос-АК-ОН, НОВТ, ДИК в ДМФ | 90 мин | х1 |
| 9 | Промиване | дмф | 2 мин | х1 |
| 10 | Промиване | изопропанол | 2 мин | х1 |
| 11 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х1 |
| 12 | Промиване | изопропанол | 2 мин | х 1 |
| 13 | Промиване | ДМФ | 2 мин | х1 |
| 14 | Промиване | изопропанол | 2 мин | х1 |
| 15 | Доказване | Хлоранил-оцветяващ тест* |
(* по Т. Christensen, Acta Chem. Scand. B 33, 763-766, 1979)
Типични за метода (повтаряеми) параметри на реакцията за синтез в твърда фаза на декапептиди съгласно горната схема са:
• Отцепване на защитната група Fmoc с 20% пиперидин в ДМф, 2x5 мин при стайна температура (етап 2).
• Присъединяването се извършва в трикратен молен излишък на Fmoc-
С аминокиселините с диизопропилкарбодиимид (ДИК) в присъствие на хидроксибензотриазол (НОВТ) (етап 8).
• Отцепване на С-края от полимерния носител включително и отстраняването на защитните групи от страничните вериги на аминокиселините с трифлуороцетна киселина (ТфК).
След отцепване от полимерния носител, с използване на 5 грама смола, се получават около 5-6 г сурова пептидна смес с 70-80% съдържание на желаните компоненти; последните се получават при последващата препаративна ТХВН.
W Пречистване на декапептиди с препаративна ТХВН: хроматографски условия
Препаративна ТХВН, фирма Shimadzu, колона Dynamax RP18, 12 мкм, 300а L = 250 мм, вътр. диам. = 41.1 мм
Градиентна система с програма за време, 40% В 90% В, 50 мин Елеунт А: 970 мл Н2О + 30 мл CH3CN + 1 мл CF3COOH Елуент В: 300 мл Н2О + 700 мл CH3CN + 1 мл CF3COOH УВ-детекция, λ = 220 нм, дебит 60 мл/мин
Получените фракции се концентрират под вакуум и лиофилизират. Декапептидите се получават под формата на лек, безцветен материал.
Превръщането в ацетатна сол, която е необходима за фармакологични цели, се извършва накрая чрез хроматографски йонообмен. Тестово за биологичното действие:
Съединенията на изобретението с формула I се тестват за рецепторно свързване. Методът следва описания от Beckers et al., Eur. J. Biochem. 231, 535-543 (1995). След извършване на публикувания по-горе синтез, полученият Цетрореликс се йодира с [125l] (Amersham, специфична активност 80.5 Bq/фмол) с използване на реагенти lodoGen (Pierce). Реакционната смес се пречиства с високоефективна течна хроматография (ВЕТХ) с обратна фаза, при което се получава монойодиран Цетрореликс без немаркиран пептид. Само около 80% [1251]-цетрореликс и от немаркираното съединение, съгласно изобретението са годни за специфично рецепторно свързване.
Съединенията съгласно съединението, могат да бъдат тествани за in vitro-активността им по дадените по-долу методи: (1) и (2), с които се определят афинитетите на свързване в теста за свързване с [1251]-цетрореликс (метод 1) и функционалните активности с трипторелин като стимулиращ агонист (метод 2).
Метод 1 (определяне на KD в пример с цетрореликс):
Тестът за рецепторно свързване е по Beckers, Т., Marheineke, К., Reilaender, Н., Hilgard Р. (1995) „Selection and characterization of mammalian cell lines with stable overexpression of human pituarity receptors for gonadoliberin (GnRH),„ Eur. J. Biochem. 231,535-543.
За изследване на рецепторното свързване, цетрореликс се йодира с [125l] (Amersham; 80.5 Bq/фмол специфична активност) с реактиви lodo-Gen (Pierce). Реакционната смес се пречиства с високоефективна течна хроматография с разменени фази, при което се получава монойодиран цетрореликс без немаркиран пептид. Около 80% от [1251]-цетрореликс е годен за специфично рецепторно свързване.
Тестът за рецепторно свързване се извършва с интактни клетки при физиологични условия, както описаните (Beckers et al. 1995). Субконфлуентни култури от стабилно транфицирани LTK'-клетки, експримиращи човешки LHRH-рецептор се отделят чрез инкубиране в NaCI/P; (137 ммола NaCI, 2.7 ммола KCI, 8.1 ммола Na2HPO4, 11.47 ммола КН2РО4)/1 ммол EDTA и се събират с центрофугиране. Утайката от клетки се ресуспендира в свързващ буфер (DMEM без Н2СО3 с 4.5 г/л глюкоза, 10 ммола Hepes, pH
7.5, 0.5% (маса/обем) BSA (говежди серумен албумин), 1 г/л бацитрацин, 0.1 г/л SBTI (соев трипсин инхибитор), 0.1% (маса/обем) NaN3). За теста на изместване се инкубират 0.25 х 106 клетки/100 мкл с около 225 пмола (пикомола) от [1251]-цетрореликс (специфична активнност 5-10x105 разп. за мин/ пмол с различни концентрации от немаркирано съединение на изобретението като конкурент. Клетъчната суспензия в 100 мкл свързваща среда се нанася в 400 мкл-ови тестови тръбички върху 200 мкл 84 об.% силиконово масло (тип 550 от фирма Merck) / 16 об.% парафиново масло. След инкубиране в продължение на 1 час при 37°С и с бавно, непрекъснато разклащане, клетките се отделят от инкубационната среда с центрофугиране в продължение на 2 минути при 9000 об/мин (роторен тип НТА 13.8; Heraeus Sepatec, Osterode/Germany). Връхчетата на тръбичките, съдържащи клетъчната утайка се отрязват. Клетъчната утайка и супранатантата се анализират чрез отчитане на γ-лъченето. Количеството на неспецифичното свързване се определя чрез включване не намаркиран цетрореликс при крайна концентрация 1 микромол и в типичния случай представлява < 10% от общия свързан материал. Анализът на данните от свързването се извършва с EBDA/лиганд-аналитична програма (Biosoft V 3.0). Цетрореликс показва стойност за KD равна на 170 пикомола на литър (пмол) (брой на проведените независими експеримента: 21).
Метод 2 (функционален тест за определяне на антагонистичното действие (стойности на 1С50)
Тестът трябва да бъде предвиден с дадените по-долу видоизменения, иначе се извършва по метода описан от Beckers, Т., Reilaender, Н., Hilgard, Р. (1997) „Characterization of gonadotropin-releasing hormone analogs based on a sensitive cellular luciferasa reporter gene assay,,, Analyt. Biochem. 251,1723 (beckers et al. 1997). 10 000 клетки/гнездо, които експримират човешки LHRH-рецептор и луцифераза-репортен ген, се култивират 24 часа в плака за микротитруване с DMEM с добавки и 1% (об.) фетален телешки серум. Накрая, клетките се стимулират 6 часа с 1 наномол [D-Tpn6]LHRH. Антагонистично действуващите съединения на изобретението се прибавят преди стимулирането и накрая клетките се лизират за количествено определяне на Лф-активността. Определянето на стойностите 1С50 се извършва от кривите доза-действие чрез нелинеен регресивен анализ с използване на модели на Hill (програма EDX 2.0 С. Grunwald, Arzneimittel-werk Dresden).
Количественото определяне на Лф-активността по същество се извършва както е описано в литературата (Promega Technical Bulletins # 101/161) с използване на съответните луцифераза-есей системи (Promega Е4030) като опитите се дублират. Чрез прибавяне на коензим А (КоА), се извършва окисление на луциферил-КоА, чията кинетика е предпочетена. След отстраняване на културалната среда от плаката за микротитруване, клетките се лизират с прибавяне на 100 мкл лизиращ буфер (25 ммола Трие -фосфат, pH 7.8, 2 ммола дитиотрейтол, 2 ммола 1,2-диаминоциклохексанΝ,Ν,Ν’,Ν’-тетраоцетна киселина, 10% (об) глицерин, 1% (об.) Тритон Х-100). След 15 минутно инкубиране при стайна температура, 10 мкл от клетъчния лизат се прехвърлят в бяла плака за микротитруване (Dynatech), пригодена за луминометрична детекция.
Ензимната реакция се инициира с прибавяне на 50 мкл есей-буфер (20 ммола Трицин pH 7.8, 1.07 ммола (MgCO3)4Mg(OH)2, 2.67 ммола MgSO4, 0.1 ммол етилендиаминтетраоцетна киселина (ЕДТА), 33.3 ммола дитиотрейтол, 270 микромола коензим А, 470 микромола луциферин от светещ червей (Photinus pyralis), 530 микромола pAT0Na2). След 1 минута, се определя луминисценцията за общо време от една секунда със сигнално полувреме от 5 минути с EG&G Berthold Micro-Lumat LB 96 Р.
На Таблица 2 са представени физико-химичните и in vitro-данните на съединенията на изобретението. 1С50 е показател за функционалната активност и рМ означава пикомол/литър. Разтворимостта във вода е определена по метода, описан в забележка (2).
Таблица 2
| Съединение | Водоразтворимост2 [мг/мл] | 1С50 [рМ] |
| Цетрореликс | 0.002 | 198 (5)' |
| Пример 1 (D-68968) | 1.03 | 1300 (1)1 |
| Пример 2 (D-68969) | 1.11 | 1400(1)1 |
| Пример 3 (D-68971) | 1.36 | 4700 (1)1 |
| Пример 4 (D-68987) | 1.18 | 700 (1)1 |
Забележки:
1) Намиращата се в скоби цифра означава броя на независимите едни от друг експерименти
2) Водоразтворимостта се определя съгласно описания по-долу метод: w Разтворимост по метода на Амтсблат в разтвор на Рингер (Ringer)
За определяне на водоразтворимостта по метода на Амтсблат, тестваната субстанция, която е в излишък, се смесва с инертен носител, напр. пясък и се поставя в стъклена колона (с обем около 10 мл). Преди това на дъното на колоната се поставя сито от памук и филтър от стъкловлакна. Сместа субстанция-пясък се оставя да престои 1 час в 1.0 мл разтворител, в който ще трябва да се определя разтворимостта. След това в стъклената колона се наливат 10 мл от разтворителя. С помоща на помпа с маркуч разтворителят се изпомпва циклично. Този експеримент се извършва при стайна температура (около 20°С). Разтворимостта се определя, когато масовата концентрация на вземаните една след друга фракции е постоянна. Масовата концентрация се определя с помоща на дадения по по-долу метод с ТХВН.
Метод сТХВН:
Апаратура: Система за ТХВН:
Packard DAD серия 1100
Колона: материал размер на частиците размери на колоната производител:
Параметри на апаратурата: инжекционен обем поток температура на пеща дължина на вълната време на спиране
Hewlett Packard 1100; детектор: Hewlett
Нуклеосил Nucleosil® 120-3 С18 микрометра
125x4 мм
Macherey & Nagel
15микролитра
1.0мл/мин
45°С
226 нансметра мин
55% подвижна фаза А: Смесват се 970 мл Milli-Q-H2O, 30 мл ацетонитрил и 1 мл трифлуороцетна киселина. Полученото pH 1 около 1.9.
45% подвижна фаза В: Смесват се 300 мл Milli-Q-H2O, 700 мл ацетонитрил и 1 мл трифлуороцетна киселина. Полученото pH 1 около 1.8.
Даването на съединенията съгласно изобретението може да се извърши под най-различна, подходяща за пептидната активна съставка форма. Подходящите лекарствени форми са добре познати на специалиста. Даването може да се осъществи, например, чрез инжекция. Може да се извърши и парентерално. Предпочетените форми са подкожна, мускулна, венозна, букална (напр. подезична) или ректална. Особено предпочетени са венозната и интраспиналните.
Съединенията, съгласно изобретението са пригодни за изработване на най-различни форми за приемане, напр. лиофилизати, разтвори или суспензии. Подходящите форми за приемане и тяхното получаване са добре известни на специалиста. Като подходящи помощни вещества или носители са пригодни напр. следните субстанции: хексит, като манит, поспециално D-манит, L-манит или D.L-манит, сорбит, като D-сорбит, D- или Lалтрит, идит, глуцит и дулцит. Изработката се извършва по известни методи, напр. смесване, суспендиране или лиофилизиране.
Пример А: Лиофилизат за получаване на инжекционен разтвор за подкожни инжекции мг от съединението на пример 1 (отговарящ на 0.26-0.27 мг ацетатна сол); 0.16.9 тегловни части D-манитол, за предпочитане, 0.1-7 тегловни части, отнесени спрямо пример 1 и вода за инжекции (за получаване на инжекционен разтвор от лиофилизата).
Поручаване: 1.62 г от съединението на пример 1 се разтварят в 30% оцетна киселина (около 1.5 л вода за инжекции и 91.17 г оцетна киселина). Разтворът се разрежда с 1.5 л вода. Прибавят се 82.2 г манитол, филтрува се стерилно и с него се напълват, при асептични условия, 2 мл-ови стерилни флакони за инжекция и се подлагат на сублимационно сушене. Получава се 1 мг лиофилизат от съединението, съгласно пример 1.
Съединенията съгласно изобретението са подходящи за лечение на злокачествени или незлокачествени, хормонозависими заболявания, например за лечение на карцином на гърдата, на простатата, на ендометриоза, на миоми на матката, на доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, напр. за предотвратяване на преждевременно отделяне на яйцеклетката при пациентки, които са се подложили на контролирано овариално стимулиране, което ще бъде последвано от изваждане на яйцеклетка и подлагането й на техниките на изкуствено оплождане. Споменатите лечения могат да се провеждат при млекопитаещи, по-специално при човека.
Claims (16)
- ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ1. Съединения с обща формула I:
A-Ххх1 -Ххх2-Ххх3-Ххх4-Ххх5-Хххб-Ххх7-Ххх8-Ххх9-Ххх1 °-N Н2, (I) в която: А означава ацетилна група Ххх1 - D-Han(2) Ххх2 D-Хфа Ххх3 - D-Flan(3) Ххх4 - Cep Ххх5 - N-Ме-Тир Ххх6 - D-Цит, D-Хци или 0-[8-1\Г-4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксо- бутил]-Лиз (или съкратено: О-Лиз(Б)), Ххх7 - Лев или Нле Ххх8 - Apr или Лиз(изопропил), Ххх9 - Про и Ххх10 - D-Ала или Cap, при условие, че когато Ххх6 означава О-Лиз(Б), тогава Ххх7 е Нле, когато Ххх6 означава D-Цит, тогава Ххх7 е Нле и Ххх10 е D-Ала или когато Ххх6 означава D-Хци, тогава Ххх7 е Лев и Ххх10 е D-Ала, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини. - 2. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Cap10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 3. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9D‘Ana10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 4. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопроnnn)8-ilpo9-Cap10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 5. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:Ац-О-Нал(2)1-В-фал(4-С1)2-О-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала 10-NH2;или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 6. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 7. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4Х-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2;или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 8. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8ripo9-D-Ana10-NH2;или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 9. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8ripo9-D-Ana10-NH2;или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
- 10. Съединения, съгласно една от претенциите от 1 до 9, при които солта може да бъде ацетат, трифлуорацетат или ембонат (памоат).
- 11. Съединения, съгласно една от претенциите от 1 до 10 с приложение като лекарствени средства.
- 12. фармацевтичен състав, фарактеризиращ се с това, че включва наймалко едно съединение, съгласно една от претенциите от 1 до 10, както и традиционни носители и помощни вещества.
- 13. Метод за получаване на съединения с обща формула I, съгласно претенция 1, както и на претенциите от 2 до 9, характеризиращ се с това, че фрагменти от градивни единици, защитени с подходящи групи, с обща формула Хххт, в която m е цяло число от 1 до 10 и от които Ххх1 е ацетилиран, при което споменатите фрагменти са включени по познати методи в твърда фаза или разтвор, накрая се присъединяват един с друг и след присъединяването, съединенията с обща формула I, по познати методи и при амидиране на фрагмента Ххх10, се отделят от твърдата фаза.
- 14. Приложение на съединенията съгласно претенции от 1 до 10 за получаване на лекарствени средства за лечение на хормонозависими томори, по-специално на карцином на простатата, рак на гърдата или миома на матката, както и на незлокачествени индикации, чието лечение налага подтискане на LH-RH-хормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата или за лечение на нарушения във фертилитета при жената и мъжа, при млекопитаещи, по-специално, при човека.S
- 15. Метод за получаване на фармацевтични лекарствени състави, съгласно претенция 12, характеризиращ се с това, че най-малко от едно съединение, съгласно една от претенциите от 1 до 10 се получава лекарствена форма, чрез смесване с познатите носители и помощни вещества.
- 16. Метод за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, рак на гърдата или миома на матката, както и на незлокачествени заболявания, чието лечение налага подтискане на LH-RHхормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при млекопитаещи, по специално при при човека, характеризиращ се с това, че се дава активна доза от най-малко едно от съединенията съгласно претенции от 1 до 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/525,007 US6627609B1 (en) | 1999-03-17 | 2000-03-14 | LHRH antagonists having improved solubility properties |
| PCT/EP2001/002719 WO2001068676A2 (de) | 2000-03-14 | 2001-03-12 | Lh-rh-antagonisten, deren herstellung und verwendung als arzeimittel |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG107121A true BG107121A (bg) | 2003-05-30 |
Family
ID=24091545
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG107121A BG107121A (bg) | 2000-03-14 | 2002-09-18 | Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1268522B1 (bg) |
| JP (1) | JP3805679B2 (bg) |
| KR (1) | KR100607396B1 (bg) |
| CN (2) | CN1443195A (bg) |
| AT (1) | ATE408619T1 (bg) |
| AU (2) | AU2001260110B2 (bg) |
| BG (1) | BG107121A (bg) |
| BR (1) | BR0109279A (bg) |
| CA (1) | CA2402193C (bg) |
| DE (1) | DE50114335D1 (bg) |
| DK (1) | DK1268522T3 (bg) |
| ES (1) | ES2312435T3 (bg) |
| HR (1) | HRP20020810A2 (bg) |
| HU (1) | HUP0300222A3 (bg) |
| IL (1) | IL151647A0 (bg) |
| MX (1) | MXPA02008870A (bg) |
| NO (1) | NO20024363L (bg) |
| NZ (1) | NZ521273A (bg) |
| PL (1) | PL357999A1 (bg) |
| PT (1) | PT1268522E (bg) |
| RU (1) | RU2248982C9 (bg) |
| SK (1) | SK14332002A3 (bg) |
| UA (1) | UA79070C2 (bg) |
| WO (1) | WO2001068676A2 (bg) |
| ZA (1) | ZA200207248B (bg) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100340572C (zh) * | 2004-12-01 | 2007-10-03 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 新的lhrh拮抗剂 |
| CN101037472B (zh) * | 2006-03-14 | 2013-03-27 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 具有低组胺释放作用的促黄体生成素释放激素拮抗剂 |
| PT2252627T (pt) | 2008-01-24 | 2017-07-24 | Esperance Pharmaceuticals | Constructos de fusão de domínio lítico e métodos para produzir e utilizar os mesmos |
| TWI442932B (zh) * | 2008-02-11 | 2014-07-01 | Ferring Int Ct Sa | 以ＧｎＲＨ拮抗劑治療攝護腺癌的方法 |
| CN101597321B (zh) * | 2008-06-03 | 2013-04-24 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂 |
| WO2010142060A1 (zh) * | 2009-06-11 | 2010-12-16 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂 |
| AU2013337926B2 (en) | 2012-10-30 | 2017-12-21 | Esperance Pharmaceuticals, Inc. | Antibody/drug conjugates and methods of use |
| CN104418936B (zh) * | 2013-08-20 | 2018-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | Lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途 |
| FR3024612B1 (fr) * | 2014-08-04 | 2018-03-09 | Alstom Transp Tech | Module d'alimentation electrique d'un bloc moteur, systeme de traction et vehicule electrique associe |
| RU2585367C1 (ru) * | 2014-11-05 | 2016-05-27 | Наталья Владимировна Спиридонова | Способ лечения бесплодия у женщин с миомой матки |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA862570B (en) * | 1985-04-09 | 1986-12-30 | Univ Tulane | Therapeutic decapeptides |
| US5110904A (en) | 1989-08-07 | 1992-05-05 | Abbott Laboratories | Lhrh analogs |
| US5300492A (en) * | 1988-02-10 | 1994-04-05 | Tap Pharmaceuticals | LHRH analogs |
| US5140009A (en) | 1988-02-10 | 1992-08-18 | Tap Pharmaceuticals, Inc. | Octapeptide LHRH antagonists |
| IL101074A (en) | 1991-03-14 | 1997-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | GnRH ANALOGS AND THEIR PREPARATION |
| DE69214818T2 (de) | 1991-04-25 | 1997-02-27 | Romano S.-Cergue Deghenghi | LHRH-Antagonisten |
| RU2043362C1 (ru) * | 1991-08-12 | 1995-09-10 | Синтекс (Ю-Эс-Эй) Инк. | Способ твердофазного синтеза пептидов |
| US5698522A (en) | 1992-12-04 | 1997-12-16 | Abbott Laboratories | 6-position modified decapeptide LHRH antagonists |
| ATE206136T1 (de) | 1992-12-18 | 2001-10-15 | Abbott Lab | Lhrh antagonisten mit modifizierten aminoacylresten an den positionen 5 und 6 |
| IL108509A0 (en) | 1993-02-22 | 1994-05-30 | Salk Inst For Biological Studi | GnRH antagonist peptides |
| DE4320201A1 (de) * | 1993-06-18 | 1995-01-12 | Asta Medica Ag | Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation |
| DE19544212A1 (de) * | 1995-11-28 | 1997-06-05 | Asta Medica Ag | Neue LH-RH-Antagonisten mit verbesserter Wirkung |
| DE19911771B4 (de) | 1999-03-17 | 2006-03-30 | Zentaris Gmbh | LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung |
-
2001
- 2001-03-12 CN CN01807543A patent/CN1443195A/zh active Pending
- 2001-03-12 MX MXPA02008870A patent/MXPA02008870A/es active IP Right Grant
- 2001-03-12 WO PCT/EP2001/002719 patent/WO2001068676A2/de not_active Ceased
- 2001-03-12 DK DK01933682T patent/DK1268522T3/da active
- 2001-03-12 RU RU2002127786/04A patent/RU2248982C9/ru active
- 2001-03-12 ES ES01933682T patent/ES2312435T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 AU AU2001260110A patent/AU2001260110B2/en not_active Ceased
- 2001-03-12 IL IL15164701A patent/IL151647A0/xx unknown
- 2001-03-12 DE DE50114335T patent/DE50114335D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-12 PT PT01933682T patent/PT1268522E/pt unknown
- 2001-03-12 AU AU6011001A patent/AU6011001A/xx active Pending
- 2001-03-12 CN CNB2006100817821A patent/CN100500692C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-12 KR KR1020027012059A patent/KR100607396B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 SK SK1433-2002A patent/SK14332002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-03-12 BR BR0109279-0A patent/BR0109279A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 EP EP01933682A patent/EP1268522B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 CA CA2402193A patent/CA2402193C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 HU HU0300222A patent/HUP0300222A3/hu unknown
- 2001-03-12 JP JP2001567766A patent/JP3805679B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 AT AT01933682T patent/ATE408619T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 NZ NZ521273A patent/NZ521273A/en unknown
- 2001-03-12 HR HRP20020810 patent/HRP20020810A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-03-12 PL PL01357999A patent/PL357999A1/xx unknown
- 2001-12-03 UA UA2002108075A patent/UA79070C2/uk unknown
-
2002
- 2002-09-10 ZA ZA200207248A patent/ZA200207248B/en unknown
- 2002-09-12 NO NO20024363A patent/NO20024363L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-09-18 BG BG107121A patent/BG107121A/bg unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3850789T2 (de) | Nonapeptid- und Dekapeptid-Analoge von LHRH, die als LHRH-Antagonisten dienen. | |
| JP2944669B2 (ja) | ペプチド、その製造法、該ペプチドを含有する、ｌｈｒｈ拮抗剤 | |
| DK171483B1 (da) | Aminosyrederivater | |
| AU759442B2 (en) | Novel LHRH antagonists with improved solubility characteristics | |
| JPS61122297A (ja) | 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法 | |
| WO1995004540A1 (en) | N-terminus modified analogs of lhrh | |
| BG107121A (bg) | Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo | |
| HU208159B (en) | Process for producing 1h-rh analogs and pharmaceutical compositions comprising same | |
| BG64386B1 (bg) | Нови lн-rн-антагонисти с подобрено действие | |
| JPS63303999A (ja) | バソプレシン拮抗剤 | |
| HK1057569A (en) | Novel lhrh-antagonists, production and use thereof as medicament |