BG61277B1 - Process for the preparation of optically activecyanohydrines with enzymes - Google Patents

Process for the preparation of optically activecyanohydrines with enzymes Download PDF

Info

Publication number
BG61277B1
BG61277B1 BG97619A BG9761993A BG61277B1 BG 61277 B1 BG61277 B1 BG 61277B1 BG 97619 A BG97619 A BG 97619A BG 9761993 A BG9761993 A BG 9761993A BG 61277 B1 BG61277 B1 BG 61277B1
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
membrane
enzyme
aldehyde
porous membrane
binder
Prior art date
Application number
BG97619A
Other languages
English (en)
Other versions
BG97619A (bg
Inventor
Stephen W Andruski
Bruce Goldberg
Original Assignee
Fmc Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fmc Corp filed Critical Fmc Corp
Publication of BG97619A publication Critical patent/BG97619A/bg
Publication of BG61277B1 publication Critical patent/BG61277B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/002—Nitriles (-CN)
    • C12P13/004—Cyanohydrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D237/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D237/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D237/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • Manufacture Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)

Description

Изобретението се отнася до метод за получаване на цианхидрини. По-специално, то се отнася до подобрен метод за получаване на оптичноактивни (S)-цианхидрини, намиращи приложение като междинни продукти при синтеза на известни пиретроидни инсектициди, състоящ се във взаимодействие на алдехиди с циановодородна киселина в присъствие на Sоксинитрилазен ензим.
Известен е метод /1/ на взаимодействие на алдехиди с циановодородна киселина в присъствието на ензима оксинитрилаза и при разтворител диизопропилов етер за получаване на оптичноактивни цианхидрини. Реакцията се провежда с ензима в свързана форма, например свързан към повърхността на стъклени сфери, йонообменни смоли или целулозни частички, под формата на каша, която преди да се получи готовия продукт предварително трябва да се отфилтрува от разтвора. При все, че е ефективен за целта, за която е предназначен, този метод се характеризира само с един цикъл на обработване на реактивите през свързания ензим, като за да приключи преминаването, са необходими 5 до 6 дни.
Известен е друг метод /2/, при който ензимът S-оксинитрилаза е получен от специфичен източник (Sorghum bicolop). При едно от изпълненията на този метод се използва акрилова гранула (перла) за свързване на ензима, т.е. Еупергит С (производство на Роом, Дармщадт), търговски достъпни акрилови гранули, които се използват, като се суспендират в реакционната среда или в колона. При всеки от случаите, те могат да се използват само във водни системи, за да се избегне разрушаването на акриловите гранули от различните органични разтворители. Нещо повече, при този процес, при който се използват свързани ензими, се получават добиви от около 85 % тегл., но само след тридневно непрекъснато протичане на процеса, като за алдехид се използва 4-хидроксибензалдехид. Също така /3, 4, 5 и 6/ допълват или отговарят на цитираните по-горе два източника.
Във всеки от по-горе цитираните източници се говори за “ензимен-диафрагмен-реактор”. Както обаче показва съответната техническа литература (виж например /7/ с посочените там забележки 16 и 17, /8 и 9/) тези реактори не представляват нищо повече от серия контейнери, разделени с филтруващи мембрани, през които ензимът физически не може да премине. Така, при този тип реактори, 5 реакцията се провежда в разтвор, съдържащ диспергиран ензим, с който реактивите биха могли да влязат евентуално в контакт чрез дифузия.
Използването на полимерен мембранен 10 реактор за свързване на ензимите е най-общо известно от /10 и 11/. В /12/ са описани мембранни реактори, използвани в /10 и 11/.
Съгласно настоящото изобретение, времето на взаимодействие и лекотата за провеж15 дане на процеса при вече известния метод за получаване на оптичноактивни (S)-цианхидрини при взаимодействие на алдехиди с циановодородна киселина в присъствие на каталитичния ензим S-оксинитрилаза и разтворител, е значително подобрен в сравнение с описаните досега методи, като разтворът на алдехида и киселината се пропуска през химически активирана порьозна мембрана, както е описано по-долу, към която S-оксинитрилазният ензим е химически свързан.
Трябва да се има предвид, че нормално (S)- и (Ю-енантиомерните форми на цианхидрина ще се образуват в равни количества, т.е. в съотношение 50:50, когато не присъства стереоселективен катализатор.
Задача на изобретението е да се повиши количеството на (З)-изомера над (Я)-изомера (“S/R”), при подходящ подбор на подобрен катализатор и на реакционни условия. Друга задача на изобретението е не само да се повиши селективността, като се получават повече S- и по-малко R-изомери, но също така да се осигури висока конверсия на продукта при най-кратка продължителност от време. Друга задача на изобретението е да се приключи реакцията, без да е необходимо физическото отделяне на ензима от крайния продукт.
Съгласно изобретението методът за получаване на желаните оптически активни цианхидрини се провежда лесно по начина, описан по-горе, т.е. чрез пропускане на разтвор на алдехид и циановодородна киселина през определена порьозна мембрана, към която ензимът е химически свързан, било в прекъснат или непрекъснат процес, за подбран период от време и получаване на желания оптически2 активен цианхидрин. Когато процесът се провежда по този начин, намерено бе, че времето на реагиране може да се намали до един ден, за разлика от предишните методи, за които са необходими 6 до 7 дни, като при това се запазва, или в някой случай дори се увеличава, средният добив от продукта при повишена селективност към желания S-изомер в сравнение с предишните методи.
Желателно е, реакцията да се провежда в органична система, в която водно неразтворимият алдехид и получаващият се цианхидрин са разтворими. Докато може да се използват малки количества от воден буфер, т.е. около 1 % тегл. вода на база общото тегло на системата, предпочита се да се използва възможно по-малко количество вода, т.е около < 0,03 %. Така, настоящото изобретение по същество включва система, състояща се от органичен разтворител (евентуално съдържаща воден буфер) , алдехида и киселината като реактиви и ензим, който е химически свързан към определена порьозна мембрана, както подробно е описано по-долу.
Реакцията може да се проведе в широк диапазон от температури и pH условия, които нямат критично значение. Така например, температури от около -6 до +30°С, за предпочитане около +6 до +25°С са приемливи. Условията на pH, въпреки че не са от определящо значение, могат да се контролират от буферни системи като натриев ацетат, натриев цитрат или натриев фосфат и могат да са от порядъка на pH от около 3,5 до 7,5.
Използваните алдехиди са описани в US 4 859 784 и са включени тук, както и описаните в патента алдехиди с формула
О « R - С - Н в която R може да бъде наситен или ненаситен, алифатен или ароматен, който може да бъде заместен с халоген, със сяра, с азот или съдържащ кислород заместители.
Използваните съгласно метода на изобретението алдехиди е желателно да са по същество водонеразтворими, т.е. предпочита се те да са разтворими в органичните разтворители от настоящото изобретение. Предпочитат се алдехиди, чиято разтворимост във вода е по-малка от около 2,0 - 0,01 mg/ml и найдобре е да се използват такива, чиято разтворимост е по-малка от 0,1 mg/ml до около 0,01 mg/ml. Примери на тези водонеразтворими алдехиди са такива представени с формулата
в която А означава водород или флуор и В е водород, флуор, хлор или бром. От тях се предпочита 3-феноксибензалдехид.
Желателно е, съотношението на алдехида към циановодородната киселина да е от около 1:1 до 1:100, и по-добре от около 1:1 до 1:2.
Органичният разтворител, който ще се използва, може лесно да се подбере между такива, които не повлияват неблагоприятно на използваната мембрана или на характера на реакцията. Така например, предпочита се използването на ди-н.-бутилов етер, докато диизопропилов етер, който се прилага в процеса съгласно US 4 859 784, неочаквано е открито, че повлиява на настоящия процес неблагоприятно.
S-оксинитрилазният ензимен катализатор (ЕС 4.1.2.11) е търговски достъпен от Сигма Кемикъл Къмпани или може да се изолира от кълнове на сорго по известни методи (виж Bove et al., J. Biol.Chem., 226 (1), 207, (1961)).
Количеството на използвания ензим по отношение на алдехида е желателно около 502500 единици за грам алдехид, по-добре около 500-750 единици за грам алдехид. Ензимът може подходящо да се свърже химически към порьозната мембрана, описана по-долу, чрез нейното третиране с например 5 тегл.% воден разтвор на полиетиленимин, последвано от например 5 тегл. % воден разтвор на глутаров алдехид и накрая-с разтвор на S-оксинитрилазен ензим в подходящ буфер.
Предимство на метода е, че ензимът остава свързан към мембраната за няколко дни и така не само представлява по-стабилно и трайно устройство в сравнение с предишните известни методи, но също така се избягва допълнителният етап на отделяне и извличане на ензима, когато той е в суспензията под формата на каша, както е при US 4 859 784 и US 5 008 192.
Порьозните мембрани използвани в настоящия метод, са описани в по-горе цитирания US 4 102 746, където са определени свързващите ензима мембрани, природата и метода за получаването им и определят възстановяването на ензима от различни материали.
Тези мембрани имат подбрана дебелина и/или слоеве и се състоят от неразтворимо, тридименсионално полимерно смолестообразно свързващо вещество, което има фино надробени частички от пълнител, диспергирани в свързващото вещество и мрежа от взаимно свързани пори в него. Размерите на порите могат да варират в широки граници, най-добре е те да са от около 0,01 до около 100 μ и общата порьозност на материала е около 50 до 75 %. Наличните диспергирани частички от пълнителя могат да са в количество от по-малко от 25 % тегл. по отношение на общото тегло на състава.
Такава мембрана е MPS мембраната (ФМЦ Корпорейшън, Филаделфия, САЩ) която представлява микропорьозен поли(винилхлориден)-силициев двуокисен лист с обем на порьозността от порядъка на 70-80 %. Размерите на порите, както са определени чрез Меркури Интружън Порозиметри, са най-общо от порядъка на 0,2 до 2,0 μχη. Този листносител е изключително хидрофилен, има отрицателен товар, който може да се смени в положителен и повърхностна площ 80 m2/g. Също така, този материал не се поддава на компресия при нормални условия и има ниска сухо плътност от 0,45 g/cm3. Активните местоположения са в силициевия двуокис, който се съдържа в порьозната матрица, и позволяват прибавянето на органични функционални групи, свързващи се със силициевия двуокис чрез химически връзки. MPS мембраната има DNA свързващ капацитет от поне около 240 μ g/cm2. Нещо повече, мембраната, както и другите подходящи мембрани, които биха могли да се използват, въпреки че обикновено се използват само във водна среда, се оказват изненадващо стабилни в условията на органичен разтворител съгласно настоящия метод.
Полимерите, които образуват свързващото вещество, т.е. матрицата, на мембраната, могат да бъдат от най-различно естество. Желателно е те да са термопластични, търговски достъпни смоли, от които се предпочита поливинил хлорид (PVC).
Нещо повече, може да се използват също така материали като полиетилен, напълнен със силициев двуокис или съполимери на поливинил хлорид с малки количества от моностиленови мономери като винилацетат, винилиден хлорид, пропилен или други подобни.
Алтернативно, матрицата може да се формува от материали като политетрафлуоретилен (PTFE), целулозен ацетат или триацетат, полиамиди (като найлон) или други подобни. 5 Когато се използва политетрафлуоретилен, той може да е под формата на фибрилна матрица (виж US 4 152 661 и US 4 373 519) като има примерно хидрифилни абсорбтивни частички, включени в него. Така, най-общо, всяка тер10 мопластична смола, която лесно се пластифицира чрез разтворител или се синтерува чрез топлина или налягане, или може лесно да се формува, като се започне от предварителна матрица, е която е химически и физически 15 стабилна при условията на настоящото изобретение може също да се използва.
Пълнителите, за предпочитане в наситнена форма, могат да бъдат както неорганични вещества, например по-горе посочените силициеви двуокисни съединения или, например алуминиеви съединения като алуминиев окис или хидроокис; така и органични пълнители, например полизахариди, включително активирани целулозни производни. (От друга страна, намерено бе, че неактивирана целулоза не е ефективна в комбинация с PVC).
Получената мембрана може да се активира чрез обработване по известни начини, така че да образува химическа връзка между себе си и ензима, т.е. между частичките на пълнителя и ензима. Свързването може да се осъществи чрез хемиадсорбция, чрез ковалентна връзка или чрез напречно свързване между средството-посредник и ензима. Свързващите функционални групи, които могат да са разпределени в мембраната, са примерно всякакви свободни аминоостатъци, карбоксилни, изонитрилни, алдехидни или кетонни групи, които ще свържат S-оксинитрилазния ензим към мембранния пълнител. От посочените се предпочита полиетиленимин (PEI), който може да се хемиадсорбира върху пълнителя, заедно в комбинация с например глутаров алдехид, към който след това се свързва ензимът.
Както е описано в US 4 102 746 (погоре), мембраната, която се използва в настоящото изобретение, може лесно да се получи при смесване на подходящи количества от фино наситнена полимерна смола, фино надробен неорганичен пълнител, разтворител (например циклохсксанон) и един неразтворител (например вода), за да се получи стабилен, влажен, свободно изтичащ прах. Прахообразната смес след това се екструдира и се пропуска през каландър, за да се образува плоскостна структура или лист с желани размери. След това плоскостта или листът се прекарват през водна баня за отмиване на разтворителя и накрая преминават през нагрята въздушна сушилня, за да се отстрани водата. В съответствие с настоящото изобретение, получаващият се продукт под формата на микропорьозна, стабилна в размерите си, полутвърда, неразтворима, пропускаща течности мембрана може след това да се обработи така, че да купелува или свързва ензимите към себе си.
Съгласно едно предпочитано изпълнение, първоначалната, химически неактивирана мембрана може да се получи по следния начин: лист от порьозен материал се получава при първоначално сухо смесване на 20,0 либри (9,07 kg) Коноко 5385 поли (винилхлорид)-на смола с едрина на частичките такава, че да преминава пред сито с отвори 180 μ m (80 меша) и 40,0 либри (18,14 kg) Хи-Сил 233, преципитиран хидратиран силициев двуокис, в Патерсон-Кели “лоу-шир” смесител за течно-твърди вещества в продължение на приблизително 3 минути. След това, при непрекъснато бъркане, се прибавят в продължение на 20 минути чрез помпа 54,6 либри (24,8 kg) разтворител (циклохексанон). Към сместа се прибавят след това 59,0 либри (26,8 kg) вода при въртящ се смесител и размесването продължава след това допълнително още 20 минути, като в края се получава влажен, стабилен, свободно-изтичащ прах. Прахът се поставя в шнеков екструдер, като температурата в барабана е приблизително 120°F (48,9°С) и екструдатът преминава между валяците на каландър, за да се получи практически плосък лист с дебелина 0,02 инча (0,5 mm). След това листът се пропуска през екстракционна баня с вода и температура 170°F (76,7°С) и се суши в нагрята пещ при 225°F (107,2°С) в продължение на 6 минути. Готовият порьозен лист има сравнително широки размери на порите, простиращи се между около 0,01 до около 100μ и среден диаметър на порите от порядъка на около 0,15 до около 0,25 μ, както това е определено по метода на Меркури Интружън. Общата порьозност на този материал е приблизително 65 % по обем и съдържанието на диспергирания пълнител (примерно силициев двуокис) възлиза на приблизително 56 % по тегло. При опит, проведен с този материал, например чрез накисване във вода, тя бързо ще проникне в материала, без да се прилага каквото и да е налягане, което означава, че микропорите са взаимно свързани от повърхност до повърхност.
Получената по горния начин мембрана може след това да се модифицира със свързващо средство за по-плътно свързване на Sоксинитрилазата по следния начин. Необработената мембрана се поставя в 5 % тегло/ обем воден разтвор на полиетиленимин (ΡΕΙ) с разклонена верига и молекулно тегло 50 000 при стайна температура в продължение на един час. Обработената обложка се промива с вода и 1 М натриев хлорид, за да се отстрани неадсорбирания ΡΕΙ. Може да бъде изпробвана с тринитробензолеулфонова киселина: наблюдава се получаването на интензивно оранжево оцветяване от тринитрофенил аминовото производно на повърхността на обработената мембранна подложка. Така се демонстрира наличието на значително количество алифатни аминофункционални групи. Отложеният азот върху третираната мембранна подложка може да се определи чрез количествен елементарен анализ, например 1,25 % азот в сухо тегло към 0,02 % азот на сухо тегло при немодифицираната мембранна подложка. Хемиадсорбираният ΡΕΙ върху модифицираната мембранна подложка е фактически необратимо свързан, т.е. той не може да се отстрани чрез инкубиране в разтвори с големи йонни сили (например 1 М натриев хлорид или 1 М К2НРО4/ КН2РОЧ) при pH стойности между 3 и 9. Само при силно кисели условия (накисване в 1 М хлороводородна киселина в продължение на 2 h) може да се получи частична десорбция, стигаща до 50 % от азотното съдържание, както се вижда от елементарния анализ. Повърхностната площ на модифицираната подложка, определена чрез стандартния ВЕТ метод възлиза на 55,4 m2/g при 81,1 m2/g при контролата. Обработената мембранна подложка има идентични свойства за преминаване на течности през нея каквито има и необработената мембранна подложка без оглед на използвания буфер или йонна сила.
След това ензимът се свързва с мембраната, която се активира химически първона5 чално с ΡΕ1, както вече беше описано, и след това със свързваща група като глутаров алдехид, към който ензимът окончателно се обвързва. Реактивите се поставят в контакт с ензима при протичането им през порите на мембраната. Желателно е потокът от реакционната среда да се контролира, като мембраната или слоевете от нея се поставят в корпус или статив, където чрез фиксиране на краищата й се образува реакторен апарат и потокът не може да премине покрай тях. При желание, могат да се поставят входящ и изходящ отвор, които имат достъп до повърхността на мембраната, с което се направлява и принуждава реактивите да преминат през сърцевината на реактора и да контактуват с ензима. Характерни реактори от този тип, под формата на дискове, са АКТИ-ДИСК и АСТИ-МОД (ФМЦ Корпорейшън, Филаделфия, ПА, САЩ). Последният диск по-специално включва няколко слоя мембрани, за да се осигури по-цялостно протичане на процеса. Поради това, трябва да се подразбира, че терминът “мембрана” използван в описанието, включва един или повече слоеве мембрани и крайната дебелина, при необходимост, може лесно да се определи чрез обичайните тестове. Така, в следващите примери, АКТИ-ДИСК матрицата съдържа някъде между една до около 5 слойни мембрани, например една мембрана в примерите 2, 3, 6 и 7 и 5 слоя в примерите 1, 4 и 5.
Желаният цианхидринов реакционен продукт може да се изолира чрез отстраняване на циановодородната киселина и на разтворителя чрез дестилация.
Настоящото изобретение е илюстрирано с примери. Използваните тук означения на ситата са съгласно ASTM стандарт Е11-87.
Пример 1. Получаване на (S) - (циано) (3феноксифенил)-метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в ди-н-бутилов етер при температура на околната среда
Етап А. Свързване на S-оксинитрилазния ензим върху порьозната матрица
АСТИ-ДИСК матрична подложка, съдържаща поли(винилхлорид)на и силициев двуокисна мембрана (MPS листове, ФМЦ Корпорейшън, Филаделфия, ПА), предварително обработена с полиетиленимин, се поставя в стандартен циркулационен реактор с помпа. Реакторът се състои от помпа за течности, способна да изпомпва максимално 10 ml/min, свързана на изхода си с прозрачен, гъвкав пластмасов маркуч с входа на АКТИ-ДСК матрична подложка. Тя от своя страна е свързана към изхода си със 100 ml резервоар. Чрез мар5 куч резервоарът е свързан с входа на помпата. АКТИ-ДИСК матричната подложка (материали за биоподложки, група за химически продукти, ФМЦ Корпорейшън, Филаделфия, ПА) се състои от пластмасов корпус, 63,5 mm 10 диаметър и 6,4 mm дебелина, притежаващ входящ отвор на една от плоските си страни и изходящ отвор на противоположната плоска страна. В пластмасовия корпус са поместени пет слоя от проницаема за течности порьозна мембрана, състояща се от хидрофобна полимерна матрица от поли(винилхлорид), от фино надробен хидрофилен пълнител от силициев двуокис, диспергиран в смолестата матрица, и мрежа от взаимносвързани микропори, образувани в целия материал.
ml воден 5 %-ен (тегло/обем) разтвор на глутаров алдехид се поставя в резервоара и се изпомпва със скорост 8 ml/min през АКТИ-ДИСК матричната подложка в продължение на 60 минути с оглед да се свърже Nкрая на ензима към РЕ1 модифицираната АКТИ-ДИСК. Разтворът се заменя с 50 ml вода, която се помпа през АКТИ-ДИСК-а матричната подложка в продължение на 30 минути. След това водата се отстранява от резервоара.
ml воден разтвор на S-оксинитрилазен ензим, получен от 7 дневни етиолирани кълнове на сорго/Судан тревен хибрид (анализът на протеин показва 5,4 mg протеин/ml; анализът за активност на ензима показва 10,7 единици/mg протеин), се разрежда до 100 ml с 0,05 М разтвор на натриев ацетатен буфер (pH = 5,4) и се поставя в резервоара. Разтворът се помпа през АКТИ-ДИСК матричната подложка в продължение на 30 минути. След това потокът през АКТИ-ДИСК матрицата се обръща в реактора, за да се осигури цялостно и равномерно зареждане с ензим. Помпането на ензимния разтвор продължава допълнително още 30 минути. АКТИ-ДИСК матричната подложка се промива след това с 50 ml вода 30 минути, както е описано по-горе. Корпусът, съдържащ АКТИ-ДИСК матричната подложка, в която е свързан S-оксинитрилазният ензим, се отделя от циркулационния реактор и се поставя в хладилник за съхранение, докато стане нужда от нея.
Етап Б. Получаване на (5)-(циано) (3феноксифенил) -метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в ди-н-бутилов етер при ί ί температура на околната среда 5
АКТИ-ДИСК матричната подложка от етап А, съдържаща свързания ензим, се поставя в стандартен циркулационен реактор. Резервоарът в тази система има капацитет 250 ml или повече. Остатъчната вода се отстраня- 10 ва от АКТИ-ДИСК матричната подложка чрез помпане на малко количество ди-н-бутилов етер през АКТИ-ДИСК матричната подложка непрекъснато в продължение на около 30 минути. За един шарж резервоарът се зареж- 15 да с разтвор на 5,1 g (0,026 mol) до 24,8 g (0,125 mol) 3-феноксибензалдехид в 100 ml дин-бутилов етер. Към това чрез спринцовка се прибавят 1,1 молеквивалента циановодород. Разтворът се бърка, за да се осигури цялостно 20 разтваряне на циановодорода. Започва се циркулиране на разтвора през АКТИ-ДИСК матричната подложка със скорост на помпане от 1 ml/min до 5 ml/min. Периодично се взимат проби за анализ, както е описано по-долу. След 25 приключване на реакцията, обикновено след около 24 часа, реакционната смес се изпомпва от реактора. АКТИ-ДИСК матричната подложка след това се промива чрез помпане на 25 ml ди-н-бутилов етер през нея. След промиването, 30 реакторът е готов за провеждане на нов шарж в него.
С всяка проба, взета от реакционната смес, се правят два анализа. Единият анализ се прави, за да се установи общото превръщане на 3-феноксибензалдехид в (циано) (3-феноксифенил)метанол, а вторият анализ се провежда, за да се определи съотношението S/R в така получения продукт.
За определяне на конверсията в (циано) (3-феноксифенил)метанол, проба от 0,1 ml от реакционната смес се поставя в газхроматографски флакон и се разрежда с около 1 ml метиленхлорид. Към това се прибавя около 1 ml М,О-бис(триметилсилил)трифлуорацетамид. Флаконът се затваря и разклаща, след което се оставя да престои 15 min. Проба от разтвора се инжектира в подходящо програмиран газ хроматограф.
За установяване на съотношението S/R в (циано) (3-феноксифенил)метанола, проба от 0,5 ml от реакционната смес се поставя в 1 драхма флакон. Към това се прибавят три капки Мошеров киселинен хлорид (Б-О-а-метокси-бг- (трифлуорметил)фенилоцетен киселинен хлорид) и пет капки пиридин. Получената реакционна смес се бърка и се оставя да взаимодейства в продължение на един час. След това се прибавят 1 ml вода и 1 ml етилацетат. Реакционната смес се разклаща и слоят от етилацетат се отделя и се поставя във флакон за газхроматографиране. Проба от разтвора се инжектира в подходящо програмиран газхроматограф.
Резултатите от седем шаржа за получаване на (5)-(циано)(3-феноксифенил)мс1анол са дадени по-долу:
Шарж № Алдехид (mol) Скорост на протичане ml/min Време на протичане, h Превръщане в продукт, % Съотношение на S/R
1 0,026 1 24 76,3 91,4/8,6
2 0,026 5 23 91,8 91,4/8,6
3 0,026 5 19 88,4 92,4/7,6
4 0,026 5 24 91,2 93,7/6,3
5 0,125 5 24 94,0 91,0/9,0
6 0,125 5 24 90,7 85,7/14,3
7 0,026 5 24 80,7 75,5/24,6
Пример 2. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил)-метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в ди-н-бутилов етер при температура 6°С (S)-(циано) (З-феноксифенил)метанолът 5 в този пример се получава по начина, описан в пример 1. Циркулационният реактор се различава от този в пример 1 по това, че АКТИДИСК матричната подложка съдържа само един слой от пропусклива за течности микропорьозна мембрана, върху която е свързан (5)-оксинит10 рилазният ензим. АКТИ-ДИСК матричната подложка, използвана при този опит, се потапя в баня с постоянна температура, която се поддържа 6°С. Провеждат се шестнадесет отделни шаржа. Всеки шарж се зарежда с 1,0 g (0,005 mol) 3-феноксибензалдехид и 0,4-0,5 ml (излишък) циановодород в 25 ml ди-н-бутилов етер. Скоростта на протичане се поддържа 4 до 5 ml/min. Резултатите от шестнадесетте шаржа за получаване на (S)-(циано) (3-феноксифенил) метанол са дадени по-долу:
Шарж № Време на протичане, h Превръщане в продукт, % Съотношение на S/R
8 23 70,0 95,0/5,0
9 26 65,8 93,2/6,8
10 24 62,8 94,0/6,0
11 24 65,7 93,0/7,0
12 27 63,9 93,0/7,0
13 24 65,9 93,4/6,6
14 36 76,9 93,0/7,0
15 24 75,0 93,6/6,5
16 23 78,2 95,0/5,0
17 24 77,1 96,0/4,0
18 23 76,4 95,0/5,0
19 24 72,7 94,5/5,5
20 24 69,2 93,0/7,0
21 24 70,2 90,0/10,0
22 24 68,2 87,0/13,0
23 24 56,1 81,0/19,0
Пример 3. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил)-метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в терц.-бутил метилов етер при температура на околната среда (S) - (циано) (З-феноксифенил)метанолът в този пример се получава по метода, описан в пример 1. Циркулационният реактор се различава от този в пример 1 по това, че АКТИДИСК матричната подложка съдържа само един слой от пропусклива за течности микропорьозна мембрана, върху която е свързан (5)-оксинитрилазпият ензим. Провеждат се общо три шаржа. Всеки шарж се зарежда с 1,0 g (0,005 mol) 3-феноксибензалдехид и 0,5 ml циановодород (последният е в излишък с оглед да се осигури цялостно превръщане и за компенсиране на загуби от изпаряване). Разтворителят при първия шарж е 50 ml ди-н-бутилов етер, а за следващите два шаржа е по 50 терц.бутил метилов етер. При всеки шарж времетраенето на взаимодействието е 24 часа. Скоростта на протичане се поддържа при 5 ml/min. Резултатите от трите шаржа за получаване на (S)- (циано) (3-феноксифенил)метанол са посочени по-долу:
Шарж № Разтворител Превръщане в продукт, % Съотношение на S/R
24 н-дибутилов етер 95,0 93,0/7,0
25 терц.-бутил метилов етер 74,0 58,0/42,0
26 терц.-бутил метилов етер 88,5 53,0/47,0
Пример 4. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил) метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в ацетонитрил при температура на околната среда (S) - (циано) (3-феноксифенил) метанолът от този пример се получава по метода, описан в пример 1. Провежда се един шарж с 25,0 g (0,126 mol) 3-феноксибензалдехид и 6 ml (излишък) циановодород в 100 ml ацетонитрил. Реакцията се провежда в продължение на 24 h, като скоростта на протичане на течността е 5 ml/min. Превръщането в целевия продукт е 88,0 %, а съотношението на S/R на продукта е 52,0/48,0.
Пример 5. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил) метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в тетрахидрофуран при температура на околната среда (S) - (циано) (3-феноксифенил) метанолът от този пример се получава по метода, описан в пример 1. Провежда се един шарж, при който се зареждат 5,0 g (0,025 mol) 3феноксибензалдехид и 1,5 ml (излишък) циановодород в 100 ml тетрахидрофуран. Взаимодействието се провежда в продължение на 24 h при скорост на преминаване на течността 5 ml/min. Превръщането на продукта е 82,0 % и съотношението на S/R в продукта е 48,0/52,0.
Пример 6. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил) метанол от 3-феноксибензалдехид при температура на околната среда, като се използва циановодород за разтворител (S)-(циано) (3-феноксифенил) метанолът от този пример се получава по метода, описан в пример 1. Циркулационният реактор се различава по АКТИ-ДИСК матричната подложка, която съдържа само един слой пропусклива за течности микропорьозна мембрана, върху която се свързва S-оксинитрилазният ензим. Провежда се един шарж с 1,0 g (0,005 mol) 3-феноксибензалдехид в 20 ml циановодород. Взаимодействието се провежда в продължение на 24 h и скоростта на протичане на течността е 5 ml/min. Превръщането в продукт е 96,7 % и съотношението на S/R в продукта е 58,1/41,9.
Пример 7. Получаване на (S)-(циано) (3феноксифенил) метанол от циановодород и 3феноксибензалдехид в диизопропилов етер при температура на околната среда
Този пример показва, че разтворителят диизопропилов етер, използван например в US 4 859 784 (по-горе), е неефективен като разтворител в настоящия метод.
(S) - (циано) (3-феноксифенил) метанолът от този пример се получава по метода, описан в пример 1. Циркулационният реактор се различава по АКТИ-ДИСК матричната подложка, която съдържа само един слой пропусклива за течности микропорьозна мембрана, върху която е свързан S-оксинитрилазният ензим. Провеждат се общо два шаржа. Всеки от тях се зарежда с 2,1 g (0,011 mol) 3-феноксибензалдехид и 0,6 ml (излишък) от циановодород. При първия шарж разтворителят е 50 ml дин-бутилов етер, а при втория - 50 ml диизопропилов етер. Преди използването му, 500 ml от диизопропиловия етер се пречиства, като се пропуска през колона 2,5 cm х 28 cm с неутрален двуалуминиев триокис. Пречистеният диизопропилов етер се съхранява в азотна атмосфера, докато се използва. Циркулационният реактор се промива със 75 ml пречистен изопропилов етер между двата шаржа. Всеки от шаржовете взаимодейства в продължение на 23-24 h. Скоростта на протичане на течността се поддържа при 5 ml/min. Резултатите от двата шаржа за получаване на (З)-(циано) (3-феноксифенил)метанол са дадени по-долу:
«rtt
Шарж № Разтворител Превръщане в продукт, % Съотношение на S/R
27 н-дибутилов етер 89,5 94,0/6,0
28 диизопропилов етер 80,0 66,0/34,0
Патентни претенции

Claims (11)

  1. Патентни претенции
    1. Метод за получаване на оптичноактивни (S) -цианохидрини чрез взаимодействие на алдехид с циановодородна киселина при контактуване на органичен разтворител, съдържащ киселината и алдехида с ензима S-оксинитрилаза, характеризиращ се с това, че ензимът е химически свързан към неразтворим композиционен материал, представляващ порьозна мембрана, през която преминават реактивите, като тази порьозна мембрана включва полимерно смолисто вещество, в което са диспергирани фино наситнени частички от пълнител и мрежа от практически взаимносвързани пори, като порьозната мембрана е пропусклива за потока от течност, съдържащ споменатите реактиви.
  2. 2. Метод съгласно претенция 1 за получаване на оптичноактивни (S)-цианохидрини при взаимодействие на алдехид с циановодородна киселина при контактуване на органичен разтворител, в който се съдържат киселината и алдехида, с ензима S-оксинитрилаза, характеризиращ се с това, че ензимът е химически свързан към неразтворим композиционен материал, представляващ порьозна мембрана или слоеве от мембрана, притежаващи поне чифт противоположни повърхности, с предварително определена дебелина, през която преминават реактивите, порьозната мембрана включва полимерно смолисто свързващо вещество, в което са диспергирани фино наситнени частички от пълнител и мрежа от практически взаимносвързани, образувани в него пори между частичките на пълнителя и смолистото свързващо вещество и между съседни частички на пълнителя, количеството на наличните в порьозната мембрана частички от пълнител са поне 25 тегл.%, размерите на разположените върху повърхностите и в масата на мембраната, с предварително определената дебелина, пори са различни и са от порядъка на 0,01 до 100μ, както това се установява порьозиметрично чрез Меркури Интружън метода, като поне едната от повърхностите на порьозната мембрана е пропусклива за потока от течност.
  3. 3. Метод съгласно претенции 1 и 2, характеризиращ се с това, че мембраната съдържа свързващо вещество поли(винилхлорид) и пълнител силициев двуокис.
  4. 4. Метод съгласно претенции 1 и 2, характеризиращ се с това, че мембраната с краищата си е свързана към корпус, при което течността няма възможност да преминава около краищата й.
  5. 5. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че корпусът е снабден с входящ отвор, който има достъп до едната повърхност на мембраната и изходящ отвор, който има достъп до противоположната повърхност на мембраната.
  6. 6. Метод съгласно претенции 1 или 2, характеризиращ се с това, че мембраната е химически активирана със свързващо ензима вещество.
  7. 7. Метод съгласно претенции 1 или 2, характеризиращ се с това, че ензимът е ковалентно свързан или свързан с напречни връзки към свързващото вещество.
  8. 8. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че мембраната е химически активирана с полиетиленимин и глутаров алдехид.
  9. 9. Метод съгласно претенция 1 или 2, характеризиращ се с това, че разтворимостта на алдехида във вода е по-малка от около 2,0 mg/ml.
  10. 10. Метод съгласно претенции 1 или 2, характеризиращ се с това, че алдехидът е 3феноксибензалдехид.
  11. 11. Метод съгласно претенции 1 или 2, характеризиращ се с това, че органичният разтворител е ди-н-бутилов етер.
BG97619A 1991-12-17 1993-04-07 Process for the preparation of optically activecyanohydrines with enzymes BG61277B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/809,803 US5177242A (en) 1991-12-17 1991-12-17 Process for preparing optically active cyanohydrins with enzymes
PCT/US1992/009945 WO1993012072A1 (en) 1991-12-17 1992-11-13 Process for preparing optically active cyanohydrins with enzymes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG97619A BG97619A (bg) 1994-03-31
BG61277B1 true BG61277B1 (en) 1997-04-30

Family

ID=25202264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG97619A BG61277B1 (en) 1991-12-17 1993-04-07 Process for the preparation of optically activecyanohydrines with enzymes

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5177242A (bg)
EP (1) EP0590096B1 (bg)
JP (2) JPH05507736A (bg)
KR (1) KR970009155B1 (bg)
CN (1) CN1075166A (bg)
AR (1) AR247921A1 (bg)
AT (1) ATE135047T1 (bg)
AU (1) AU647982B2 (bg)
BG (1) BG61277B1 (bg)
BR (1) BR9205413A (bg)
CA (1) CA2093826C (bg)
CZ (1) CZ280422B6 (bg)
DE (2) DE69208878T2 (bg)
FI (1) FI931583A7 (bg)
HU (1) HUT71308A (bg)
IL (1) IL104046A0 (bg)
MW (1) MW4993A1 (bg)
MX (1) MX9206954A (bg)
OA (1) OA09873A (bg)
PL (1) PL170490B1 (bg)
RO (1) RO112765B1 (bg)
RU (1) RU2092558C1 (bg)
SK (1) SK36293A3 (bg)
TW (1) TW242166B (bg)
WO (1) WO1993012072A1 (bg)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT396252B (de) * 1991-10-31 1993-07-26 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur enantioselektiven herstellung optisch aktiver cyanhydrine
GB9222253D0 (en) * 1992-10-23 1992-12-09 Celltech Ltd Chemical compounds
AT400035B (de) * 1993-06-01 1995-09-25 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur herstellung aliphatischer s-cyanhydrine
DE4322064A1 (de) * 1993-07-02 1995-01-12 Chemie Linz Deutschland Enzymatisches Verfahren zur Herstellung aliphatischer S-Cyanhydrine
DE19529116A1 (de) * 1995-08-08 1997-03-06 Chemie Linz Deutschland Gmbh I (S)-Hydroxynitrillyase aus Hevea brasiliensis
DK0799894T3 (da) * 1996-02-09 2004-08-09 Degussa Fremgangsmåde til fremstilling af (S)-cyanhydriner
CN1093531C (zh) * 1998-05-04 2002-10-30 中国科学院上海有机化学研究所 氰醇裂解酶催化合成光学活性氰醇化合物
CN1083009C (zh) * 1999-07-16 2002-04-17 中国科学院上海有机化学研究所 一种新酶源的醇腈裂解酶催化合成光学活性氰醇化合物的方法
ATE241700T1 (de) * 1999-11-25 2003-06-15 Degussa Verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
JP3709317B2 (ja) 2000-01-12 2005-10-26 株式会社日本触媒 光学活性シアノヒドリンの合成方法
US7078225B2 (en) * 2000-06-02 2006-07-18 Nippon Shokubai Co., Ltd. Method for enzymatically producing an optically active cyanohydrin
WO2007026623A1 (ja) * 2005-08-30 2007-03-08 Sumitomo Chemical Company, Limited ３−アミノ−６−クロロピリダジンの製造方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862030A (en) * 1972-12-13 1975-01-21 Amerace Esna Corp Microporous sub-micron filter media
IL46178A (en) * 1974-12-03 1978-10-31 Rehovot Res Prod Method for the performance of enzymatic reactions
US4102746A (en) * 1975-08-29 1978-07-25 Amerace Corporation Immobilized proteins
US4169014A (en) * 1976-08-16 1979-09-25 Amerace Corporation Method of immobilizing proteinaceous substances
US4795704A (en) * 1985-10-11 1989-01-03 Sepracor, Inc. Multiphase asymmetric membrane reactor systems
US4959467A (en) * 1985-11-27 1990-09-25 Allied-Signal Inc. Control of product selectivity in the addition of HCN to arabinose
US4900667A (en) * 1985-12-19 1990-02-13 Allied-Signal Inc. One carbon homologation of carbohydrates by transcyanohydrination
DE3701383A1 (de) * 1987-01-20 1988-07-28 Degussa Verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
US4800162A (en) * 1987-04-01 1989-01-24 Sepracor, Inc. Method for resolution of steroisomers in multiphase and extractive membrane reactors
DE3823864A1 (de) * 1988-01-29 1989-08-10 Kernforschungsanlage Juelich Enymatisches verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
DE3917374A1 (de) * 1988-07-14 1990-12-06 Forschungszentrum Juelich Gmbh Verfahren zur herstellung von s-cyanhydrinen
DE59106876D1 (de) * 1990-03-16 1995-12-21 Forschungszentrum Juelich Gmbh Verfahren zur enzymatischen Herstellung optisch aktiver Cyanhydrine.
AT396252B (de) * 1991-10-31 1993-07-26 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur enantioselektiven herstellung optisch aktiver cyanhydrine

Also Published As

Publication number Publication date
EP0590096A4 (en) 1994-02-18
BR9205413A (pt) 1994-05-31
JPH05507736A (ja) 1993-11-04
HU9301020D0 (en) 1993-11-29
EP0590096A1 (en) 1994-04-06
FI931583L (fi) 1993-06-18
DE69208878D1 (de) 1996-04-11
FI931583A7 (fi) 1993-06-18
CZ65193A3 (en) 1994-04-13
MW4993A1 (en) 1994-10-12
WO1993012072A1 (en) 1993-06-24
CA2093826A1 (en) 1993-06-18
RU2092558C1 (ru) 1997-10-10
AR247921A1 (es) 1995-04-28
US5177242A (en) 1993-01-05
TW242166B (bg) 1995-03-01
IL104046A0 (en) 1993-05-13
PL170490B1 (pl) 1996-12-31
AU647982B2 (en) 1994-03-31
JPH0832243B2 (ja) 1996-03-29
KR970009155B1 (ko) 1997-06-07
DE590096T1 (de) 1994-07-28
SK36293A3 (en) 1993-10-06
BG97619A (bg) 1994-03-31
CZ280422B6 (cs) 1996-01-17
RO112765B1 (ro) 1997-12-30
CA2093826C (en) 1995-08-29
JPH06506674A (ja) 1994-07-28
MX9206954A (es) 1993-06-01
FI931583A0 (fi) 1993-04-07
EP0590096B1 (en) 1996-03-06
AU3141493A (en) 1993-07-19
OA09873A (en) 1994-09-15
DE69208878T2 (de) 1996-10-31
CN1075166A (zh) 1993-08-11
ATE135047T1 (de) 1996-03-15
HUT71308A (en) 1995-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4102746A (en) Immobilized proteins
US4169014A (en) Method of immobilizing proteinaceous substances
RU2089283C1 (ru) Био-, гемосовместимые сорбенты на основе сверхсшитых полимеров стирола с модифицированной поверхностью, способ их получения (варианты) и способ получения матрицы сорбента
US3983053A (en) Coated adsorbent materials
Ingole et al. Methods for separation of organic and pharmaceutical compounds by different polymer materials
CA2121747C (en) Hydrophilic polymer coated perfluorocarbon polymer-based matrices, their preparation and use in bioaffinity
RU2092558C1 (ru) Способ получения оптически активных s-циангидринов
CN109772178B (zh) 一种基于点击化学双面负载的乙胺嘧啶分子印迹复合膜的制备方法及应用
FR2534486A1 (fr) Support particulaire greffe en surface, son procede de preparation et adsorbants pour chromatographie d&#39;affinite incorporant ce support, ainsi que leur utilisation, notamment en biologie
JPH0458311B2 (bg)
JP3151331B2 (ja) 生化学物質の固定化方法
JPH0616699A (ja) 生化学物質の固定化方法
JP3441530B2 (ja) 温度応答型分離材料及びその製造方法
JPS5853922B2 (ja) 加水分解用触媒膜
CN110841602B (zh) 基于贻贝仿生化学的血液净化材料及其制备方法
Kawai et al. Immobilization of ascorbic acid oxydase in multilayers onto porous hollow-fiber membrane
Gai et al. Preparation of bovine hemoglobin-imprinted polymer beads via the photografting surface-modified method
SU755296A1 (ru) Способ получения активированных носителей для иммобилизации биологически активных веществ 1
JPS6344885A (ja) 酵素固定化ダイナミツクス膜
JPH06256434A (ja) 多孔体、多孔体からなる多孔性担体、多孔性担体を用いた固定化機能性物質、これらの製造方法および多孔体製造用組成物
JPH08319431A (ja) スーパー抗原吸着材料
JPS6254127B2 (bg)
Pişkin Structural and transport properties of polymeric carriers for bioagents and immobilization techniques and their applications
JPH02193059A (ja) 微生物センサー
JPH0416158B2 (bg)