BR102016018778A2

BR102016018778A2 - Novas n-[(pirimidinilamino)propanil]- e n- (pirazinilamino)propanil]arilcarboxamidas

Info

Publication number: BR102016018778A2
Application number: BR102016018778-8A
Authority: BR
Inventors: Riether Doris
Original assignee: Boehringer Ingelheim International Gmbh
Priority date: 2016-08-15
Filing date: 2016-08-15
Publication date: 2018-02-27

Abstract

a presente invenção refere-se aos novos derivados de n-[(pirimidinilamino)propanil]- e n-[(pirazinilamino)-propanil]arilcarboxamida e processos para preparação destes.

Description

(54) Título: NOVAS N-[(PIRIMIDINILAMINO) PROPANIL]- E N-(PIRAZINILAMINO)

PROPANIL] AR ILCARBOXAMI DAS (51) Int. Cl.: C07D 207/30; C07D 239/28; C07C 233/36; C07C 237/14; A61K 31/4192; (...) (73) Titular(es): BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH (72) Inventor(es): DORIS RIETHER (74) Procurador(es): FLÁVIA SALIM LOPES (57) Resumo: A presente invenção refere-se aos novos derivados de N-[(pirimidinilamino) propanil]- e N-[(pirazinilamino)-propanil] arilcarboxamida e processos para preparação destes.

1/70

NOVAS N-[(PIRIMIDINILAMINO)PROPANIL]- E N(PIRAZINILAMINO)PROPANIL]ARILCARBOXAMIDAS CAMPO DE INVENÇÃO [001] A presente invenção refere-se a novos derivados de N’-[(pirimidinilamino)propanil]- e ^-[(pirazinilamino)propanil]arilcarboxamida, processos para preparação destes, composições farmacêuticas contendo e sua utilização em terapia, particularmente, no tratamento ou prevenção de condições tendo uma associação com o receptor da orexina subtipo 1.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [002] Orexinas são neuropeptídeos do hipotalâmico que desempenham um papel importante na regulação de muitos comportamentos fisiológicos, tais como excitação, insônia (Wakefullness), apetite, ingestão de alimentos, cognição, comportamentos motivados, recompensa, humor e estresse. A orexina, também referido como hipocretina 1, é um peptídeo composto por 33 aminoácidos e orexina B, também referida como hipocretina 2, é um peptídeo composto por 28 aminoácidos. Ambos são derivados a partir de um peptídeo precursor comum referido como pré-pro-orexina [Sakurai et al., Cell, 1998 Feb 20; 92(4):573-85, and De Lecea et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 1998 Jan 06; 95(1):322-7). As orexinas ligam-se a dois receptores órfãos acoplados à proteína G, o receptor da orexina do tipo 1 (OX1R) e o receptor da orexina do tipo 2 (OX2R), que estão amplamente distribuídos no sistema nervoso central e órgãos periféricos, tais como glândulas suprarrenais, gônadas, e intestino. Considerando orexina A liga-se predominantemente a OX1R, orexina B é capaz de se ligar a ambos OX1R e OX2R.

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2/70 [003] Orexinas estão envolvidas na regulação de uma ampla faixa de comportamentos, incluindo, por exemplo, a regulação da emoção e da recompensa, cognição, controle de impulsos, regulação das funções autonômicas e neuroendócrinas, excitação, vigilância e estados de sonoinsônia (Muschamp et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2014 Apr 22; 111(16):E1648-55; para uma revisão recente, ver Sakurai, Nat. Rev. Neurosci, 2014; Nov; 15 (11) :719-31; Chen et al., Med. Res. Rev., 2015; Jan; 35(1): 152-97; Gotter et al., Pharmacol. Rev., 2012, 64:389-420 e muitos mais).

[004] Antagonismo duplo de OX1R e OX2R por moléculas pequenas é clinicamente eficaz no tratamento da insônia, para o qual o fármaco suvorexanto, [[(7#)-4-(5-cloro-1,3benzoxazol-2-il)-7-metil-1,4-diazepan-1-il][5-metil-2-(2HI, 2,3-triazol-2-il)fenil]metanona] foi concedida a autorização de comercialização (Kishi et al., PLoS One, 2015; 10(8):e0136910). Os efeitos indutores do sono de antagonistas do receptor de orexina dupla são predominantemente mediada através OX2R (Bonaventure et al.,

J. Pharmacol. Exp. Ther., March 2015, 352, 3, 590-601), enquanto que os outros estados fisiológicos, tais como emoção e recompensa, cognição, controle de impulsos, regulação das funções autonômicas e neuroendócrinas, excitação e vigilância são bastante mediada via OX1R.

[005] Devido aos seus efeitos de indução do sono, os antagonistas OX1R e OX2R duplas não são adequados para o tratamento de distúrbios relacionados ao impulso déficits de controle como visto em vícios como distúrbios por uso de substâncias, distúrbios de personalidade, como Transtorno

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3/70 de personalidade limítrofe, transtornos alimentares, como transtorno de compulsão alimentar ou transtorno de hiperatividade do déficit de atenção. Portanto, é desejável proporcionar um antagonista seletivo OX1R para o tratamento de déficit de controle de impulsos.

[006] Antagonistas do receptor da orexina de várias classes estruturais são revistos em Roecker et al. (J. Med. Chem. 2015, 59, 504-530). WO03/051872, WO2013/187466, WO2016/034882 e Bioorganic & Medicinal Chemistry 2015, 23, 1260-1275 descrevem antagonistas dos receptores da orexina.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [007] A presente invenção proporciona novos derivados de N’-[(pirimidinilamino)propanil]- e ^-[(pirazinilamino)propanil]arilcarboxamida que inesperadamente são antagonistas altamente potentes OX1R (ensaio A) ainda caracterizada por

1) elevada seletividade sobre o receptor OX2 (ensaio

B),

2)	um meio de alta estabilidade em	microssomas	de
fígado	humano (ensaio C), e
3)	pouca ou nenhuma MDCK (rim canino de	Madin-Darby)	de
efluxo	(ensaio D).

[008] Os compostos da presente invenção são superiores sobre aqueles revelados na técnica anterior em termos da combinação dos seguintes parâmetros chave farmacodinâmicos e farmacocinéticos:

1) potência como antagonistas OX1R,

2) seletividade sobre o receptor OX2,

3) estabilidade em microssomas de fígado humano, e

4) efluxo MDCK.

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4/70 [009] Os compostos da presente invenção são, no entanto, englobados pela fórmula I de WO03/051872, diferem estruturalmente daqueles explicitamente revelados neste, em que:

1) eles contêm uma porção do grupo central N-etil(propan-2-il)amino em substituição da N-metil-etilamino, NH-etilamino, ou porção NH-(propan-2-il)amino, e

2) a porção do lado esquerdo consiste em um grupo fenil, piridil, pirimidil ou pirazil substituído adicionalmente com um grupo heteroaril em lugar de um grupo tiazolil substituído adicionalmente com um grupo fenil. Estas diferenças estruturais inesperadamente resultam em maior potência, seletividade mais elevada através da OX2R e estabilidade melhorada em microssomas de fígado humano do que o exemplo estruturalmente mais próximo explicitamente divulgado no documento WO03/051872.

[0010] Os compostos da presente invenção diferem estruturalmente dos descritos em WO2013/187466, em que eles contêm uma porção (5-trifluorometil-pirimidin-2-il)-amino ou (5-trifluorometil-pirazin-2-il)-amino em lugar de uma fração Het1-Het2, em que Het2 é fenil ou piridil. Estas diferenças estruturais inesperadamente resultam numa seletividade mais elevada através da OX2R e estabilidade melhorada em microssomas de fígado humano.

[0011] Os compostos da presente invenção diferem estruturalmente dos Exemplos 46, 70, 73, e 91 em WO2016/034882 (estado da técnica mais próxima), em que eles contêm uma porção central de N-etil-(propan-2-il)amino em substituição da porção N-etil-[butan-2-il]amino ou N-metil[butan-2-il]amino. Estas diferenças estruturais

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5/70 inesperadamente resultam numa concentração superior dos seguintes parâmetros chave Pharma-codinâmico e farmacocinéticos:

1) potência como antagonistas OX1R,

2) seletividade sobre o receptor OX2,

3) estabilidade em microssomas de fígado humano, e

4) efluxo MDCK.

[0012] Devido à sua alta potência a OX1R e seletividade sobre OX2R, os compostos da presente invenção são esperados ser ambos eficazes em modelos in vivo e ter uma janela suficiente entre eficácia e efeitos indesejáveis, tais como sonolência e sono.

[0013] Devido à combinação superior dos compostos-chave farmacodinâmicos e parâmetros farmacocinéticos (#1-4) da presente invenção são esperados demonstrar a exposição adequada do cérebro e têm uma forma para baixo na depuração in vivo e, assim, uma maior duração de ação e uma maior tolerabilidade. Por conseguinte, os compostos da presente invenção devem ser mais viável para uso humano.

DEFINIÇÕES GERAIS [0014] Os termos não especificamente aqui definidos devem ser dado o significado que seria dado a eles por um perito na técnica à luz da descrição e do contexto.

Estereoquímica:

[0015] A menos que especificamente indicado, ao longo do relatório e das reivindicações anexas, uma dada fórmula química ou nome deve englobar todos os tautômeros e isômeros estéreo, ópticos e geométricos (por exemplo, enantiômeros, diastereoisômeros, isômeros E/Z etc.) e seus racematos, bem como as misturas em diferentes proporções

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6/70 dos enantiômeros separados, misturas de diastereoisômeros, ou misturas de qualquer das formas anteriores em que existam tais isômeros e enantiômeros, bem como os seus sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Sais:

[0016] A frase farmaceuticamente aceitável é aqui empregada para referir aqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que, dentro do escopo do julgamento médico adequado, são adequados para utilização em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, e compatíveis com uma razão benefício/risco razoável.

[0017] Tal como aqui utilizado, sais farmaceuticamente aceitáveis referem-se aos derivados dos compostos divulgados, em que o composto original forma um sal com Exemplos de ácidos para ácidos formando um sal farmaceuticamente aceitável com um composto precursor contendo uma porção básica incluem ácidos minerais ou orgânicos tais como o ácido benzenossulfônico, ácido benzóico, ácido cítrico, ácido etanossulfônico, ácido fumárico, ácido gentísico, ácido bromídrico, ácido clorídrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malônico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido 4-metilbenzenossulfônico, ácido fosfórico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico ou ácido tartárico.

[0018] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto original que contém uma unidade básica ou ácida por métodos

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7/70 químicos convencionais. Geralmente, esses sais podem ser preparados fazendo reagir as formas de ácido ou base livres destes compostos com uma quantidade suficiente apropriada da base ou ácido em água ou em um diluente orgânico, tal como éter, acetato de etil, etanol, isopropanol, ou acetonitrila, ou um mistura dos mesmos.

[0019] Sais de outros ácidos além dos mencionados acima, que são úteis por exemplo para a purificação ou isolamento dos compostos da presente invenção (por exemplo, sais de trifluoroacetato) também compreendem uma parte da invenção.

ENSAIOS BIOLÓGICOS

Abreviações:

IP1 D-mio-inositol-1-fosfato

IP3 D-mio-inositol-1,4,5-trifosfato

Ácido 4-(2-hidroxietil)-1HEPES piperazinoetanossulfônico HBSS Solução Salina Equilibrada de Hanks

BSA Albumina de soro bovino

DMSO Dimetilssulfóxido

CHO Ovário de hamster chinês [0020] A ativação dos receptores de orexina expressa em linhas celulares resulta num aumento da concentração de IP3 intracelular. IP1, um metabólito a jusante do IP3, acumulase nas células seguindo a ativação do receptor e é estável na presença de LiCl. Usando a tecnologia de fluorescência resolvida no tempo Homogêneo com criptato Lumi4-Tb (comercialmente disponível a partir de Cisbio Bioassay.) e um leitor de placas de fluorescência adequado. Esta resposta funcional é detectável e quantificável, tal como

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8/70 descrito em Trinquet et al. Anal. Biochem. 2006, 358, 126135, Degorce et al. Curr. Chem. Genomics 2009, 3, 22-32. Esta técnica é utilizada para caracterizar a modificação farmacológica dos receptores de orexina.

[0021] A atividade biológica dos compostos é determinada pelos seguintes métodos:

A. Ensaio in vitro da potência OX1R: OX1R IP1 [0022] As medições IP1 são realizadas em células CHO-K1 expressando estavelmente o comprimento total receptor da orexina 1 humana e a fotoproteína aequorina. As células são cultivadas em meio de mistura nutriente de Ham F12 com soro de bezerro fetal a 10%, num banho a 37°C, 95% de umidade e incubadora de 5% de CO₂. A massa de células CHO-K1/hOx1 é expandida para maiores números de células. As células são obtidas como células congeladas em crio-frascos e armazenadas até serem utilizada em -150°C. A viabilidade das células após descongelamento é > 90%. Na preparação para o ensaio, 24 horas antes do ensaio, as células são descongeladas a 37°C e imediatamente diluídas com meio de cultura celular. Após centrifugação, o pellet de células é ressuspenso em meio e, em seguida, distribuído em placas de ensaio com uma densidade de 10000 células/25 pl por cavidade. As placas são incubadas durante uma hora à temperatura ambiente para reduzir os efeitos de borda antes de serem incubadas durante 24 horas a 37°C/5% de CO2. Os compostos são preparados por uma diluição em série de 8 pontos em DMSO e uma etapa de diluição final em tampão de ensaio (HBSS com 20 mM de HEPES, 0,1% de BSA e 50 mM de LiCl, pH 7,4) para assegurar uma concentração final de DMSO de 1% no ensaio.

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9/70 [0023] No dia do ensaio, as células na placa foram lavadas duas vezes com 60 μL de tampão de ensaio (20 μl de tampão permaneceram nas cavidades após lavagem), seguindose a adição de 5 μl por cavidade de compostos diluídos em tampão de ensaio. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, 5 μl por cavidade de peptídeo de Orexina A (concentração final: 0,5 nM, e/ou 50 nM) dissolvido em tampão de ensaio é adicionado à placa de ensaio. A placa de ensaio é incubada durante 60 minutos a 37°C. Em seguida, 5 μl por cavidade de uma solução de antiIPl-criptato Tb e 5 μl por cavidade da diluição IP1-D2 são adicionados e a placa é incubada durante mais 60 minutos, protegida da luz, à temperatura ambiente. As emissões em 615 nm e 665 nm (comprimento de onda de excitação: 320 nm) são medidas utilizando um leitor EnVision (PerkinElmer). A razão entre a emissão a 665 nm e 615 é calculada pelo leitor.

[0024] Ajuste de curva não linear paramétrica de quatro 8 pontos e determinação dos valores de IC₅₀ e inclinações Hill são realizados utilizando um software de análise regular, por exemplo, AssayExplorer (Accelrys). A fim de estabelecer um parâmetro independente da concentração agonista, valores de Kb são calculados usando a seguinte equação: IC₅₀/((2+(A/EC₅₀) ⁿ)^1/n-1) (com A = concentração de agonista, EC₅₀ = EC₅₀ agonista, n = inclinações Hill agonista) (ver P. Leff, I.G. Dougall, Trends Pharmacol. Sci., 1993, 14(4), 110-112).

B. Ensaio in vitro da potência OX2R: OX2R IP1 [0025] As medições IP1 são realizadas em células CHO-K1 expressando estavelmente o comprimento total do receptor da

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10/70 orexina 2 humana e a fotoproteína aequorina. As células são cultivadas em meio mistura nutriente de Ham F12 com soro de bezerro fetal a 10%, num banho a 37°C, 95% de umidade e incubadora de 5% de CO₂. A massa de células CHO-K1/hOx2 é expandida para maiores números de células. As células são obtidas como células congeladas em crio-frascos e armazenadas até ser utilizada em -150°C. A viabilidade das células após descongelamento é > 90%. Na preparação para o ensaio, 24 horas antes do ensaio, as células são descongeladas a 37°C e imediatamente diluídas com meio de cultura celular. Após centrifugação, o pellet celular é ressuspenso no meio e, em seguida, distribuído em placas de ensaio com uma densidade de 5000 células/25 pl por cavidade. As placas são incubadas durante uma hora à temperatura ambiente para reduzir os efeitos de borda antes de serem incubadas durante 24 horas a 37°C/5% de CO2. Os compostos são preparados por uma diluição em série de 8 pontos em DMSO e uma etapa de diluição final em tampão de ensaio (HBSS com 20 mM de HEPES, 0,1% de BSA e 50 mM LiCl, pH 7,4) para assegurar uma concentração final de DMSO de 1% no ensaio.

[0026] No dia do ensaio, as células na placa foram lavadas duas vezes com 60 pL de tampão de ensaio (20 pl de tampão permaneceram nas cavidades após lavagem), seguindose a adição de 5 pl por cavidade de compostos diluídos em tampão de ensaio. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, 5 pl por cavidade de peptídeo de Orexin A (concentração final: 0,5 nM) dissolvido em tampão de ensaio é adicionado à placa de ensaio. A placa de ensaio é incubada durante 60 minutos a 37°C. Em seguida, 5 pl por

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11/70 cavidade de solução anti-IPl-criptato Tb e 5 μΐ por cavidade da diluição IP1-D2 são adicionados a todas as cavidade da placa e a placa é incubada durante mais 60 minutos, protegida da luz, à temperatura ambiente. A emissão em 615 nm e 665 nm (comprimento de onda de excitação: 320 nm) são medidas utilizando um leitor

EnVision (PerkinElmer). A razão entre a emissão a 665 nm e 615 é calculada pelo leitor.

[0027] Ajuste de curva não linear paramétrica de quatro 8 pontos e determinação dos valores de IC₅₀ e inclinações Hill são realizados utilizando um software de análise regular, por exemplo, AssayExplorer (Accelrys). A fim de estabelecer um parâmetro independente da concentração agonista, valores de Kb são calculados usando a seguinte equação: IC50/((2+(A/EC50)ⁿ)^1/n-1) (com A agonista, EC50 = EC50 agonista, n = agonista) (ver P. Leff, I.G. Dougall, Trends Pharmacol. Sci., 1993, 14(4), 110-112).

[0028] Os valores Kb de Ensaio A (OX1R) e Ensaio B (OX2R) podem, então, fornecer uma razão de seletividade que é independente da Concentração (Orexin A) do agonista.

C. Avaliação da estabilidade metabólica em microssomas de fígado humano (MST humano) [0029] A estabilidade metabólica dos compostos de acordo com a invenção podem ser investigada como se segue:

[0030] A degradação metabólica do composto teste é ensaiada a 37°C com microssomas de fígado humano agregado. O volume final de incubação de 100 μl por ponto de tempo contém tampão TRIS pH 7,6 à temperatura ambiente (0,1 M), MgCl₂ (5 mM) , proteína microssomal (1 mg/mL) e o composto concentração de inclinações Hill

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12/70 teste a uma concentração final de 1 μΜ. Após um período de pré-incubação curto a 37°C, as reações são iniciadas através da adição de fosfato de dinucleotídeo adenina betanicotinamida, forma reduzida (NADPH, 1 mM), e terminado por transferência de uma alíquota em solvente após aos diferentes pontos de tempo. Após centrifugação (10000 g, 5 minutos), uma alíquota do sobrenadante é ensaiada por LCMS/MS para a quantidade de composto original. A meia-vida (T1/2) é determinada pela inclinação do gráfico semilogarítmico do perfil de concentração-tempo.

D. Avaliação de efluxo das células de rim canino em Madin-Darby (MDCK) transfectadas com o gene MDR1 humano [0031] Coeficientes de permeabilidade aparente (PE) dos compostos através das monocamadas de células MDCK-MDR1 são medidos (pH 7,4, 37°C) em direção de transporte apicalpara-basal (AB) e basal-para-apical (BA) . A permeabilidade AB (PEAB) representa a absorção do fármaco a partir do sangue no cérebro e efluxo de fármaco de permeabilidade BA (PEBA) a partir do cérebro de volta para a corrente sanguínea via a permeabilidade passiva, assim como mecanismos de transporte ativo mediados por efluxo e de absorção de transportadores que são expressos sobre as células MDCK-MDR1, predominantemente, pelo MDR1 P-gp humana overexpresso. Os compostos são designados para classes de permeabilidade/absorção por comparação das permeabilidades AB com as permeabilidades AB de compostos de referência conhecidos na permeabilidade in vitro e absorção oral humana. As permeabilidades idênticas ou semelhantes em ambos os sentidos de transporte indicam permeação passiva, pontos de permeabilidade vetorial para mecanismos

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13/70 adicionais de transporte ativo. PEBA maior do que PEAB indica o envolvimento de efluxo ativo mediado por MDR1 Pgp. O transporte ativo é saturável dependente da concentração.

[0032] As células MDCK-MDR1 (1-2 x 10e5 células/1 cm²de área) foram semeadas em inserções de filtro (policarbonato transcavidade Costar ou filtros de PET, 0,4 pm de tamanho de poro) e cultivadas (DMEM) durante 7 dias. Subsequentemente, a expressão MDR1 é impulsionada por cultura das células com 5 mM de butirato de sódio em meio completo, durante 2 dias. Os compostos são dissolvidos no solvente adequado (como DMSO, 1 -20 mM de soluções mãe). As soluções mãe são diluídas com tampão de HTP-4 (128,13 mM de NaCl, 5,36 mM de KCl, 1 mM de MgSO₄, 1,8 mM de CaCl₂, 4,17 mM de NaHCO₃, 1,19 mM de Na₂HPO₄ x 7H₂O, 0,41 mM de NaH₂PO₄xH₂O, 15 mM de HEPES, 20 mM de glicose, 0,25% de BSA, pH 7,4) para preparar as soluções de transporte (0,1-300 pM do composto, DMSO final <= 0,5%) . A solução de transporte (TL) é aplicada a lateral do doador apical ou basolateral para a medição da permeabilidade A-B ou B-A (repetições de 3 filtros), respectivamente. A lateral do receptor contém o mesmo tampão como a lateral do doador. As amostras são coletadas no início e no final do experimento do doador e em vários intervalos de tempo até 2 horas também a partir da lateral do receptor para a medição da concentração por HPLC-MS/MS ou contagem de cintilação. Volumes do receptor amostrado são substituídos por solução receptora fresca.

Dados biológicos

Comparação dos ensaios A e B com os ensaios descritos no documento WO03/051872

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Tabela 1: Potências in vitro dos compostos do documento

W003/051872 como reportadas neste contra como determinadas nos ensaios A, B, C, e D (descrito acima)

Estrutura do Exemplo 6 em W003/051872 F sfY Ύ 1 ¹	Dados como descritos em W003/051872 (páginas 16-18)
0X1R pKb = 6,4 até 7,4 corresponde para Kb = 400 até 40 nM	0X2 R pKb < 6,6 até 7,4 corresponde para Kb >250 até 40 nM	0X2RKb/ 0X1R Kb = não descrito
Dados como determinados nos Ensaios A e B (concentração de 0,5 nM de Orexina A)
Ensaio A: 0X1R Kb = 3 0 nM	Ensaio B: 0X2R Kb = 101 nM	0X2RKb/ 0X1R Kb = 3,4
Dados como determinados nos Ensaios C e D
Ensaio C: MST Humano ti/2 = 8 min	Ensaio D: Razão de efluxo MDCK (BA/AB) = 0,8

Comparação dos ensaios A e B com os ensaios descritos no documento WO2013/187466 [0033] Os ensaios descritos no documento WO2013/187466 diferem dos ensaios A e B, em:

• A tecnologia e leitura: medição de fluorescência de

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15/70 mudanças de Ca²⁺ intracelular (WO2013/187466) em vez da medição de luminescência do IP1 (ensaios A e B).

· Linhas de células que sobre-expressam Ox1R Ox2R e utilizadas para os ensaios descritos em WO2013/187466 são de origem diferente como as linhas de células utilizadas para os ensaios A e B.

· Uso de orexina modificada A (2 aminoácidos substituídos) como agonista em vez de orexina A.

· Concentração de agonista de 300 pM usados para o ensaio OX1R e 3 nM para o ensaio OX2R (EC75 versus EC100; de acordo com Okumura T. et al., Biochemical e Biophysical Research Communications, 2001) (WO2013/187466) . Os valores de IC50 que foram relatados são dependentes da concentração do agonista. Razões de seletividade calculadas a partir destes valores de IC50 não podem ser comparadas com as razões de seletividade calculadas a partir da concentração de agonista independente de valores Kb obtidos a partir de ensaio A e B.

[0034] Devido a estas diferenças entre os ensaios, uma comparação direta tem que ser estabelecida. Por conseguinte, os exemplos 69, 70 (os mais seletivos) e 5 (um dos mais potentes) descrito em WO2013/187466 são testados em ensaios A e B, de modo a ser diretamente comparados com os compostos da presente invenção (ver Tabela 2).

Tabela 2a: Potências in vitro dos compostos da WO2013/187466 como reportados neste versus como determinado nos ensaios A e B (descrito acima)

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Estrutura	Como descrito em WO2013/187466	Como determinado n Ensaios A e B	os
						OX1R Kb	OX2R Kb
			OX1R	OX2R IC50	OX2R	[nM]	[nM] (0,5	OX2R
Exemplo # em WO2013/187466	IC50	IC50 / OX1R	(Orexina A concen-	nM Orexina A	Kb / OX1R
			[nM]	[nM]	IC50	tração	concen-	Kb
						usada)	tração)
n N^N o		ÃjÃ^F	1,6	1896	1185	2,25 (0,5 nM)	98	43
	Exemplo 69
N^N ψ	hkXl·	Ό ^:	1,1	452	411	1,10 (0,5 nM) 0,72	29	26 40
F	Exemplo 70					(50 nM)
iTN N^N	ο 1 UA	N=\				1,78
ç			0,5	76	152	(0,5 nM) 0,94	28	16 30
F	Exemplo 5					(50 nM)

Tabela 2b: Estabilidade em microssomas hepáticos humanos e as razões de efluxo dos compostos de MDCK WO2013/187466, tal como determinado nos ensaios C e D (descrito acima)

Exemplo # em WO2013/187466

Dados como determinados no Ensaio C: t₁/₂ de MST Humano [min]

Dados como determinados no Ensaio D: razão de efluxo de MDCK (BA/AB)

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 20/81

17/70

Exemplo 69	23	1,3
Exemplo 70	16	0,8
Exemplo 5	30	3,1

Tabela 3a: Potências in vitro dos compostos estruturalmente mais próximos da técnica anterior (Exemplo

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 21/81

18/70

Estrutura

Como descrito em WO2016/034882 (Tabela 1, Tabela 2, Tabela 3, páginas 177-180)

Exemplo # em WO2016/034882

OX1R

OX2R

IC50 /

OX1R

IC50

V

O

N

H

N^ ^N.

N ^CF3

Exemplo 70

Tabela 1 e : não relatado

Tabela 1 e

2: não relatado

Tabela 3:

Tabela

3:

PIC50 = 8,8

PIC50 = 5,3 >3125 corresponde a IC50 = 1,6 nM corresponde a IC50 > 5000 nM

Tabela 1 e

2: não relatado

Tabela 1 e

2: não relatado

N, „N N O

H

N^N

X

Exemplo 73

Tabela 3:

³ PIC50 = 8,8 corresponde a IC50 = 1,6 nM

Tabela 3:

PIC50 <6,0 corresponde a IC50 > 1000 nM

Tabela

3:

>625

Y' ^N-,v

CF,

Exemplo 91

Tabela 1 e

2: não relatado

Tabela 1 e

2: não relatado

Tabela 3:

PIC50 = 7,6 corresponde a IC50 = 25 nM

Tabela 3:

PIC50 <5,1 corresponde a IC50 = 7950 nM

Tabela

3:

318

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 22/81

19/70

Tabela 3b: Potências in vitro dos compostos estruturalmente mais próximos da técnica anterior (Exemplo 46, 70, 73 e 91) em WO2016/034882, tal como determinado nos ensaios A e B (descrito acima)

Exemplo # em WO2016/034882	OX1R Kb [nM] (concentração usada de Orexina A)	OX2R Kb [nM] (concentração de 0,5 nM Orexina A)	OX2R Kb/OX1R Kb
Exemplo 46	1,17 (0,5 nM) 1,56 (50 nM)	372	318 238
Exemplo 70	0,135 (50 nM)	42,7	316
Exemplo 73	0,390 (0,5 nM) 0,309 (50 nM)	148	379 479
Exemplo 91	3,63 (0,5 nM)	313	86

Tabela 3c: Estabilidade em microssomas hepáticos humanos e as proporções de efluxo dos compostos de MDCK WO2016/034882, tal como determinado nos ensaios C e D (descrito acima)

Exemplo # em WO2016/034882	Dados como determinados no Ensaio C: t₁/₂ MST Humano [min]	Dados como determinados no Ensaio D: razão de efluxo MDCK (BA/AB)
Exemplo 46	32	0,7
Exemplo 70	20	0,7
Exemplo 73	11	0,7
Exemplo 91	>130	0,6

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 23/81

20/70

Compostos da presente invenção [0035] A tabela 4a lista dados sobre as potências OX1R e OX2R e a Tabela 4b lista dados sobre a estabilidade em microssomas hepáticos humanos e efluxo MDCK dos compostos da presente invenção. Estes dados demonstram que os compostos da presente invenção são superiores em relação aos compostos do estado da técnica na combinação de potência, seletividade, a estabilidade em microssomas hepáticos humanos e efluxo de MDCK:

[0036] Os compostos da presente invenção são mais potentes, mais seletivos e mais estáveis em microssomas de fígado humano do que o exemplo mais estruturalmente semelhante, Exemplo 6, descritos no documento WO03/051872.

[0037] Os compostos da presente invenção são mais seletivos sobre OX2R do que os exemplos preferidos, Exemplos 5, 69 e 70, descritos em WO2013/187466. Além disso, eles são mais estáveis em microssomas de fígado humano.

[0038] Os compostos da presente invenção são superiores aos exemplos mais semelhantes estruturalmente dos descritos em WO2016/034882, em pelo menos um dos seguintes critérios: a potência, a seletividade ou a estabilidade em microssomas de fígado humano, isto é, mais potente e mais estável em microssomas de fígado humano, do que o Exemplo 46, mais potentes e mais seletivos do que o Exemplo 91, e mais estável em microssomas de fígado humano que os Exemplos 70 e 73.

Tabela 4a: Dados biológicos dos compostos da presente invenção

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 24/81

21/70

Exemplo	Estrutura	Ensaio A OX1R Kb [nM] (concentração de 50 nM de Orexina A)	Ensaio B OX2R Kb [nM] (concentração de 0,5 nM de Orexina A)	OX2RKb/OX1R Kb
1	/n, N o óy%x_:	0,048	19,4	404
2	Λ x _v, ^F F ^F	0,188	64,5	343
3	Q_o C^AÀAa ^N^X_<F F F	0,015	6,27	418
4	ÇN ^N O I _fX..X J ^N^X_<F ^F F F	0,096	46,9	489
5	Ό- rf V'·' N ^í> \ LfX J N^l F F ^F	0,083	35,3	425
6	Ό ΧγΧ n^X<f _FF	0,091	53,1	584

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 25/81

22/70

Exemplo	Estrutura	Ensaio A OX1R Kb [nM] (concentração de 50 nM de Orexina A)	Ensaio B OX2R Kb [nM] (concentração de 0,5 nM de Orexina A)	OX2RKb/OX1R Kb
7	Ό· N o . cX.....‘ϊΧ. F ^F	0,141	33,4	237
8	Ό· ϊ O \| O\ Ιχ,; N	0,292	33,4	114
9	-ο- Αα T p	0,106	32,9	310
10	Ό· ^N O _H iAAAAA ‘^'Ύ; F F	1,12	1060	949
11	r X Λ X .n. Ai n -- a \;O ^V^F f ;	0,014	19,3	1379
12	O- Ια Λ/ Lx < V n^z^^/ A^ A \χϊ N^Jkp 1 r	0,614	129	210

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 26/81

23/70

Exemplo	Estrutura	Ensaio A OX1R Kb [nM] (concentração de 50 nM de Orexina A)	Ensaio B OX2R Kb [nM] (concentração de 0,5 nM de Orexina A)	OX2RKb/OX1R Kb
13	fk kk, k ^N^k_<F ^F F F	0,0925	62,0	670
14	LL _/ LL Λ oJ~\ °^\ /⁼\	0,138	44,0	319
15	nOi _o φΎΛχ F F	0,0397	22,9	577
16	kzJ /L Jk À z^N^ /N, ίΐ^Ί Ν ^^ >\| _F^^ k ^^\<^F F ^F	0,0947	76,8	811
17	1 .z-K .k /N. N, n ^N <	0,0216	54,0	2500
18	ÇN ^N O . _N kk k ^N ^\_<:f F F	0,0512	18,0	352

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 27/81

24/70

Exemplo	Estrutura	Ensaio A OX1R Kb [nM] (concentração de 50 nM de Orexina A)	Ensaio B OX2R Kb [nM] (concentração de 0,5 nM de Orexina A)	OX2RKb/OX1R Kb
19	ΛΛλαΛ) F ^F	0,120	12,5	104
20	,k Jk xk /N\ /N, n U-' N '' N k ^N.^: ^N Ef	0,566	68,0	120
21	l\^>N k N^kr F F	0,363	55,9	154
22	^XN^X kk k ^^\<^F	0,0202	7,37	366
23	LL ,Λ> LL	0,558	222	398
24	ÇN ^N O 1 ^F^Y''^Jk^-'^NV^?'''N kk k ⁿ^y^f	0,0141	10,0	709

Tabela 4b: Estabilidade em microssomas hepáticos

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 28/81

25/70 humanos e as proporções de efluxo MDCK dos compostos da presente invenção

	Exemplos
Ensaio C
ti/2 MST Humano >12 0 min	1, 5,	6, 8, 10, 11, 13, 15,
17,	18, 19, 21, 22, 23
ti/2 MST Humano = 43 - 100	2, 3,	4, 7, 9, 12, 14, 16,
min		20, 24
Ensaio D
	1, 2,	3, 4, 5, 6, 7, 9, 12,
Razão de efluxo MDCK	13, 14	, 15, 16, 17, 18, 19,
(BA/AB) <3		20, 21, 21
Razão de efluxo MDCK	8,	10, 11, 22, 23, 24
(BA/AB) =3-5

USO EM TRATAMENTO/MÉTODO DE UTILIZAÇÃO [0039] A presente invenção é dirigida para compostos que são úteis no tratamento de uma doença, distúrbio e condição em que o antagonismo de OX1R é de benefício terapêutico, incluindo, mas não se limitando ao tratamento e/ou prevenção de doenças psiquiátricas e neurológicas associadas com déficits de controle de impulso. Tais déficits de controle de impulso são vistos em vícios, incluindo transtornos de uso de substância; transtornos de personalidade, como transtorno de personalidade limítrofe; transtornos como o transtorno de compulsão alimentar de comer; ou transtorno de hiperatividade do déficit de atenção. De acordo com outro aspecto da invenção, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de distúrbios fisiopatológicos relacionados a OX1R em excitação/insônia, o apetite/ingestão de alimentos,

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 29/81

26/70 cognição, comportamentos motivados/recompensa, humor e estresse.

[0040] Em vista do seu efeito farmacológico, os compostos da presente invenção são adequados para utilização no tratamento de uma doença ou condição selecionada dentre a lista consistindo em:

(1) tratamento ou prevenção de abuso de substâncias/dependência/recorrência ou vício, bem como a prevenção da recaída (incluindo, mas não se limitando a drogas, como a cocaína, opiáceos, como a morfina, barbitúricos, benzodiazepinas, anfetaminas, nicotina/tabaco e outros psicoestimulantes), alcoolismo e transtornos relacionados ao álcool, abuso de drogas ou vício ou recaída, tolerância a narcóticos ou suspensão de narcóticos, (2) distúrbios alimentares, como a compulsão alimentar, bulimia nervosa, anorexia nervosa, outra alimentação específica ou distúrbios alimentares, obesidade, excesso de peso, caquexia, distúrbios do apetite/paladar, vômitos, náuseas, Prader-Willi-Síndrome, hiperfagia, distúrbios de apetite/sabor, (3) transtorno de déficit de atenção e hiperatividade, transtornos de conduta, problemas de atenção e trasnstornos relacionados, trasnstornos do sono, trasnstornos de ansiedade, tais como distúrbio da ansiedade generalizada, trasnstorno de pânico, fobias, distúrbio de estresse póstraumático, esquizofrenia, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington e síndrome de Gilles de la Tourette, síndrome das pernas inquietas, demência, discinesia, retardo mental grave, doenças

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 30/81

27/70 neurodegenerativas, incluindo entidades nosológicas como complexo desinibição-demência-parkinsonismo-amiotrofia, degeneração pálido-ponto-nigral, (4) a disfunção cognitiva na doença psiquiátrica ou neurológica, dificuldades cognitivas associadas com a esquizofrenia, doença de Alzheimer e outros transtornos neurológicos e psiquiátricos, (5) distúrbios de humor, transtorno bipolar, mania, depressão, psicose maníaco-depressiva, transtorno de personalidade limítrofe, transtorno de personalidade antisocial, agressão, tais como agressividade impulsiva, tendências suicidas, demência frontotemporal, transtorno obsessivo-compulsivo, delírio, transtorno afetivo/neurose, transtorno depressivo/neurose, neurose de angústia, transtorno distímico, (6) distúrbio sexual, disfunção sexual, distúrbio psicossexual, (7) distúrbios de controle de impulsos, como jogatina patológica, tricotilomania, transtorno explosivo intermitente, cleptomania, piromania, compras compulsivas, vício em internet, compulsão sexual, (8) distúrbios do sono como a narcolepsia, fuso horário, apnéia do sono, insônia, parasomnia, ritmos circadianos e biológicos perturbados, distúrbios do sono associadas a transtornos psiquiátricos e neurológicos, (9) tratamento, prevenção e controle de recaída da impulsividade e/ou déficits de controle de impulso e/ou desinibição comportamental em qualquer condição psiquiátrica e/ou neurológica, (10) distúrbios de personalidade, como transtorno de

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 31/81

28/70 personalidade limítrofe, transtorno de personalidade antisocial, transtorno de personalidade paranóide, transtorno do tipo esquizóide e de personalidade esquizóide, transtorno de personalidade histriônica, transtorno de personalidade narcisista, transtorno de personalidade esquiva, transtorno de personalidade dependente, outros transtornos de personalidade específicos e não específicos, (11) doenças neurológicas, tais como o edema cerebral e angioedema, demência cerebral, como, por exemplo, doença de Parkinson e doença de Alzheimer, demência senil; a esclerose múltipla, a epilepsia, epilepsia do lobo temporal, epilepsia resistente aos fármacos, perturbações convulsivas, derrame, miastenia grave, infecções cerebrais e das meninges, como encefalomielite, meningite, HIV, bem como a esquizofrenia, transtornos delirantes, autismo, transtornos afetivos e transtornos de tiques.

[0041] A dose diária aplicável de compostos da presente invenção podem variar entre 0,1 e 2000 mg.

[0042] A quantidade farmaceuticamente eficaz ou dose terapêutica efetiva dependerá de fatores conhecidos pelos peritos na técnica, tais como a idade e peso do paciente, rota de administração e da gravidade da doença. Em qualquer caso, a substância do fármaco é para ser administrada numa dose e de uma forma que permite que uma quantidade farmaceuticamente eficaz seja administrada, que é apropriado para a condição do paciente.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS [0043] As preparações adequadas para administração dos compostos da presente invenção serão evidentes para aqueles com conhecimentos normais na técnica e incluem, por

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 32/81

29/70 exemplo, comprimidos, pílulas, cápsulas, supositórios, tabletes, pastilhas, soluções, xaropes, elixires, sachê, injetáveis, inaláveis pós, etc.. O teor do(s) composto(s) farmaceuticamente ativo(s) pode variar na faixa de 0,1 a 95% em peso, de preferência 5,0-90% em peso da composição como um todo.

[0044] Os comprimidos adequados podem ser obtidos, por exemplo, por mistura de um composto da presente invenção com excipientes conhecidos, por exemplo, diluentes inertes, veículos, desintegrantes, adjuvantes, tensoativos, ligantes e/ou lubrificantes e comprimindo a mistura resultante para formar comprimidos.

TERAPIA DE COMBINAÇÃO [0045] Compostos de acordo com a presente invenção podem ser combinados com outras opções de tratamentos

conhecidos	para	ser utilizado na técnica em conexão com	um
tratamento	de	qualquer uma das	indicações de que	o
tratamento	está	no foco da presente	invenção.
[0046]	Entre	tais opções de	tratamentos que	são

considerados adequados para combinação com o tratamento de acordo com a presente invenção estão os seguintes:

- Antidepressivos,

- Estabilizadores do humor,

- Antipsicóticos,

- Ansiolíticos,

- Fármacos antiepilépticos,

- Agentes de dormir,

- Estimulador cognitivo,

- Estimulantes,

- Medicamento não-estimulante para o transtorno de

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 33/81

30/70 déficit de atenção,

- Fármacos psicoativos adicionais.

SEÇÃO EXPERIMENTAL Lists de abreviações

RT Temperatura ambiente

	Espectrometria de massa de ionização
ESI-MS	de eletropulverização
APCI	Ionização química de pressão atmosférica
aq.	aquoso
MS	Espectrometria de massa
MeOH	metanol
EtOH	etanol
EA	Acetato de etil
DMF	N,N-dimetilformamida
DCM	diclorometano
DMA	dimetilacetamida
TEA	trietilamina
THF	tetrahidrofurano
dppf	1,1'-bis(difenilfosfanil)ferroceno
DIPEA	N,N-diisopropiletilamina
HATU	1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H- 1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio 3 - óxido hexafluorofosfato
DBU	1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno
DIAD	diisopropil azodicarboxilato
Rt	Tempo de retenção
h	hora(s)
min	minutos
sat.	saturado

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 34/81

31/70

ACN acetonitrila

TFA Ácido trifluoroacético

Cromatografia líquida de alta

HPLC performance

Cromatografia líquida de alta

HPLC-MS performance-Espectrometria de massa Hexafluorofosfato de 2-cloro-4,5CIP dihidro-1,3-dimetil-1H-imidazolio

Métodos HPLC:

Nome do Método: A

Coluna: Venusil XBP-C18, 2,1x50mm, 5pm

Fornecedor da Coluna: Agela Technologies

Gradiente/Solvente	% Sol [H2O,	% Sol [ACN,	Fluxo	Temperatura
Tempo [min]	0,0375%	0,018%	[mL/min]	[°C]
	TFA]	TFA]
0,00	90	10	0,8	50
0,40	90	10	0,8	50
3,40	0	100	0,8	50
3,85	0	100	0,8	50
3,86	90	10	0,8	50
4,50	90	10	0,8	50

Nome do Método: B

Coluna: Sunfire C18, 2,1 x 30 mm, 2,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [H2O, 0,1% TFA]	% Sol [ACN]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	99	1	1,5	60

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 35/81

32/70

0,02	99	1	1,5	60
1,00	0	100	1,5	60
1,10	0	100	1,5	60

Nome do Método: C

Coluna: Chromolith Flash RP-18e 25-2mm

Fornecedor da Coluna: Merck

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp [°C]
Tempo [min]	[H2O,	[ACN,	[mL/min]
	0,0375%	0,018%
	TFA]	TFA]
0,00	95	5	1,5	40
0,70	5	95	1,5	40
1,15	5	95	1,5	40
1,16	95	5	1,5	40
1,60	5	95	1,5	40

Nome do Método: D

Coluna: XBridge BEH Fenil, 2,1 x 30 mm, 1,7 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[H2O, 0,1% NH3]	[Acetonitrila]	[mL/min]	[°C]
0,00	95	5	1,3	60
0,02	95	5	1,3	60
1,00	0	100	1,3	60
1,10	0	100	1,3	60

Nome do Método: E

Coluna: XBridge C18, 4,6 x 30 mm, 3,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol [H2O,	% Sol	Fluxo	Temp [°C]
Tempo [min]	0,1% NH3]	[ACN]	[mL/min]

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 36/81

33/70

0,00	97	3	5	60
0,02	97	3	5	60
1,60	0	100	5	60
1,70	0	100	5	60

Nome do Método: F

Coluna: Sunfire C18, 2,1 x 30 mm, 2,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp [°C]
Tempo [min]	[H₂O, 0,1% TFA]	[ACN]	[mL/min]
0,00	99	1	1,3	60
0,02	99	1	1,3	60
1,00	0	100	1,3	60
1,10	0	100	1,3	60

Nome do Método: G

Coluna: XBridge C18, 3 x 30 mm, 2,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[H₂O, 0,1% NH3]	[ACN]	[mL/min]	[°C]
0,00	97	3	2,2	60
0,02	97	3	2,2	60
1,20	0	100	2,2	60
1,25	0	100	3	60
1,40	0	100	3	60

Nome do Método: H

Coluna: Xselect CSH, 2,5 pm, 4,6 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[90% H₂O +	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 37/81

34/70

	10% ACN +	10% h₂o +
	0,1% HCOOH]	0,1%
		HCOOH]
0,00	100	0	1,4	RT
4,00	0	100	1,4	RT
5,30	0	100	1,4	RT
5,50	100	0	1,4	RT
6,00	100	0	1,4	RT

Nome do Método: I

Coluna: Xselect CSH Fenil- Hexil, 2,5 pm, 4,6 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[90% H2O +	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	10% ACN +	10% h₂o +
	0,1% HCOOH]	0,1% HCOOH]
0,00	100	0	1,4	RT
4,00	0	100	1,4	RT
5,30	0	100	1,4	RT
5,50	100	0	1,4	RT
6,00	100	0	1,4	RT

Nome do Método: J

Coluna: Sunfire C18, 3,0 x 30 mm, 2,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [h₂o, 0,1% TFA]	% Sol [ACN]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	95	5	1,5	60
1,30	0	100	1,5	60
1,50	0	100	1,5	60

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 38/81

35/70

Nome do Método: K

Coluna: BEH C18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[90% H2O +	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	10% ACN + 5	10% H2O]
	nM NH₄HCO₃]
0,00	100	0	0,7	35
1,20	0	100	0,7	35
1,45	0	100	0,7	35
1,55	100	0	0,7	35
1,75	100	0	0,7	35

Nome do Método: L

Coluna: CSH C18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp [°C]
Tempo [min]	[90% H₂O +	[90% ACN	[mL/min]
	10% ACN +	+ 10% H2O]
	0,1% HCOOH]
0,00	100	0	0,7	35
1,20	0	100	0,7	35
1,45	0	100	0,7	35
1,55	100	0	0,7	35
1,75	100	0	0,7	35

Nome do Método: M

Coluna: Atlantis T3, 3,0 pm 2,1 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol [90% H₂O	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	+ 10% ACN +	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	0,1% HCOOH]	10% H2O]

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 39/81

36/70

0,00	100	0	0,7	35
2,40	0	100	0,7	35
2,70	0	100	0,7	35
2,80	100	0	0,7	35
3,00	100	0	0,7	35

Nome do Método: N

Coluna: Synergi Hydro RP100A, 2,5 pm, 3 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Phenomenex

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[90% H₂O +	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	10% ACN + 5	10% H₂O]
	mM NH₄COOH]
0,00	100	0	1,2	RT
4,00	0	100	1,2	RT
5,30	0	100	1,2	RT
5,50	100	0	1,2	RT
6,00	100	0	1,2	RT

Nome do Método: O

Coluna: HSS C18, 1,8 pm, 2,1 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [90% H2O + 10% ACN + 0,1% CF₃COOH]	% Sol [90% ACN + 10% H2O]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	100	0	0,7	35
1,20	0	100	0,7	35
1,45	0	100	0,7	35
1,55	100	0	0,7	35
1,75	100	0	0,7	35

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 40/81

37/70

Nome do Método: P

Coluna: BEH C18 1,7 pm 2,1 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol [90% H2O	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	+ 10% ACN + 5	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	mM de NH₄COOH]	10% H₂O]
0,00	100	0	0,7	35
1,20	0	100	0,7	35
1,45	0	100	0,7	35
1,55	100	0	0,7	35
1,75	100	0	0,7	35

Nome do Método: Q

Coluna: Venusil XBP-C18, 2,1 x 50 mm, 5 pm

Fornecedor da Coluna: Agilent

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp [°C]
Tempo [min]	[H2O, 0,0375%	[ACN,	[mL/min]
	TFA]	0,018% TFA]
0,00	90	10	1,0	50
2,00	20	80	1,0	50
2,48	20	80	1,0	50
2,50	90	10	1,0	50
3,00	90	10	1,0	50

Nome do Método: R

Coluna: Luna-C18 5pm, 2,0*50 mm

Fornecedor da Coluna: Phenomenex

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [H2O, 0,0375% TFA]	% Sol [ACN, 0,018% TFA]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	99	1	0,8	40
0,40	99	1	0,8	40
3,40	0	100	0,8	40

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 41/81

38/70

3,85	0	100	0,8	40
3,86	99	1	0,8	40
4,50	99	1	0,8	40

Nome do Método: S

Coluna: XBridge C18 2,5pm, 3,0*30 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [Água 0,1% NH₃]	% Sol [Acetonitrila]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	95	5	1,5	60
1,30	0	100	1,5	60
1,50	0	100	1,5	60
1,60	95	5	1,5	60

Nome do Método: T

Coluna: Atlantis dC18 5pm 4,6 x 50 mm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente	% Sol	% Sol	Fluxo	Temp
Tempo [min]	[90% H₂O + 10%	[90% ACN +	[mL/min]	[°C]
	ACN + 0,05%	10% H₂O]
	CF₃COOH]
0,00	100	0	1,3	35
0,70	100	0	1,3	35
4,50	0	100	1,3	35
5,80	0	100	1,3	35
6,00	100	0	1,3	35

Nome do Método: U

Coluna: Sunfire, 3 x 30 mm, 2,5 pm

Fornecedor da Coluna: Waters

Gradiente/Solvente Tempo [min]	% Sol [H2O, 0,1% TFA]	% Sol [ACN]	Fluxo [mL/min]	Temp [°C]
0,00	97	3	2,2	60

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 42/81

39/70

0,02	97	3	2,2	60
1,00	0	100	2,2	60
1,25	0	100	3	60
1,40	0	100	3	60

[0047] Vestígios de HPLC e de RMN dos exemplos e alguns intermediários avançados são de maior complexidade devido ao fato de existirem estes compostos num equilíbrio de várias formas rotaméricas. No caso de múltiplos picos no espectro de HPLC, o tempo de retenção do pico principal é relatado.

Preparação de Intermediários

Intermediários Ácidos:

Ácido	Nome	Estrutura	Referência/fonte
A-1	Ácido 2- [1,2,3]triazol-2il-benzóico	FF N_{x X}N N O J^OH	WO2008/143856, página 30, Composto B-1
A-2	Ácido 3-Fluoro-2[1,2,3]triazol-2il-benzóico	ΓΛ N_{x X}N N O F, X. /X jj OH	WO2011/50198, Página 47, Intermediário 5
A-3	Ácido 4-fluoro-2[1,2,3]triazol-2il-benzóico	FF N_{x X}N N O X°O„	WO2011/50200, Página 54, Intermediário 16

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 43/81

40/70

Ácido

Nome

Estrutura

Referência/fonte

A-4

Ácido 3-cloro-2[1,2,3]triazol-2il-benzóico

A-5

Ácido 5-fluoro-2[1,2,3]triazol-2il-benzóico

A-6

Ácido 5-ciano-2[1,2,3]triazol-2il-benzóico

A-7

Ácido 4-fluoro-2pirimidin-2-ilbenzóico

A-8

Ácido 2-fluoro-6[1,2,3]triazol-2il-benzóico

FF

O

WO2013/68935 E-23 na Table 6,

OH

p.

V

OH

F

FF

V

O

N

OH

FF

WO2011/50198, Páginas 45-46, Intermediário 1

WO2012/85852 Página 50, Intermediário

WO2011/50200, página 95, intermediário 85

WO2012/145581, intermediário 12, páginas 49-50

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 44/81

41/70

Ácido	Nome	Estrutura	Referência/fonte

	Ácido 3-fluoro-2-		^N	O	WO2011/50200,
A-9	pirimidin-2-il-	Fx				página 78,
	benzóico		Ύ		OH	Intermediário 52

		ⁿL	AN	O
A-10	Ácido 5-fluoro-2pirimidin-2-ilbenzóico	(f	k.....	OH	WO2011/50200, páginas 54-57, Intermediário 17
		F
		ζ	A
	Ácido 2-fluoro-6-	N^	f^N	O		WO2011/50198 A1,
A-11	pirimidin-2-il-			II		página 52,
	benzóico		V	X	Oh	Intermediário 14
				‘F
A-12	Ácido 6-metil-3[1,2,3]triazol-2il-piridina-2carboxílico	r	O sl N Y Af	O 0	oH	WO2012/89606, Página 44, Intermediário D40

A-13	Ácido 6-metil-3pirazol-1-ilpiridina-2carboxílico		Q Λτ	O 0	OH	WO2010/122151, Página 47, Intermediário D37

						Comercialmente
			1			disponível de
A-14	Ácido 2-metil-4fenil-pirimidina5-carboxílico	An-		OH ^O	Número de catálogo Fluoroquímica 322095, MDL número: MFCD02682072

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 45/81

42/70

Ácido	Nome	Estrutura	Referência/fonte
A-15	Ácido 3-fenilpiridina-2carboxí1ico		Comercialmente disponível de Número de catálogo Fluoroquímica 065974, MDL número: MFCD04114112
A-16	Ácido 4-fenilpirimidina-5carboxí1ico	OH	Comercialmente disponível de Emolecules catalog número 45773153, MDL número: MFCD09835877
A-17	Ácido 3-fenilpirazina-2carboxí1ico	OH	Comercialmente disponível de Número de catálogo Fluoroquímica 079153, MDL número: MFCD02181157

Acido 3,5-Difluor-2-[1,2,3]triazol-2-il-benzóico A-18:

A-18.4 [0048] Etapa 1: Uma mistura de A-18.1 (9,80 g, 0,55 mmol) em água (70 mL) e H₂SO₄ (25,0 mL, 0,48 mol) é resfriada a 0°C. Em seguida, NaNO₂ (4,8 g, 69 mmol) em H₂O (20 mL) é adicionada gota a gota e a mistura de reação é agitada durante 1,5 h. A esta mistura, Kl (45,0 g, 0,27 mol) em H₂0 (40 mL) é adicionada Ientamente. A mistura de reação é aquecida até à RT e depois aquecida a 90 °C durante 90 min. A mistura é deixada resfriar até à RT e Na₂S₂O₃ (solução aq.) é adicionada até a cor desaparecer. 0 precipitado é filtrado e depois retomado em NaOH (4 M de solução aq.) . A mistura é filtrada, o filtrado é acidifiçado com HC1 (4 M de solução aq.) e o precipitado é

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 46/81

Α3/70 separado por filtração, lavado com água e seco para fornecer 9,0 g de A-18.2. ESI-MS: 285 [M + H]⁺; HPLC (Rt):

0,71 min (Método C) .

[0049] Etapa 2: Uma mistura de A-45.2, (3,50 g, 11,1 mmol), A-18.3 (1,56 g, 22,2 mmol), Cul (0,18 g, 0,89 mmol),

A-18.4 (0,70 mL, 4,44 mmol) e K₂CO₃ (3,46 g, 23,9 mmol) em

DMF (10 mL) é resfriada a 100 °C por micro-ondas durante

1,5 h. A mistura é vertida em água e extraída com EA. A fase orgânica é lavada com água. As fases aquosas combinadas são acidifiçadas com HC1 (0,5 M de solução aq.) e extraídas com EA. A fase orgânica é lavada com salmoura, seca e concentrada para fornecer o produto bruto o qual é purificado por meio de HPLC-MS (utilizando um gradiente de solvente H₂0 + 0,075% de TFA, com 5-35% de ACN) para proporcionar 1,3 g de A-18. ESI-MS: 226 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,88 min (Método A).

Ácido 4-fluor-2-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il) benzóico A-19:

[0050] Etapa 1: A uma mistura de A-19.1 (2,00 g, 8,42 mmol) em DCM seco (50 mL) é adicionado A-19.2 (0,83 g, 10,1 mmol) e agitada à RT durante 1 h. Uma outra porção de A19.2 (0,83 g, 10,1 mmol) é adicionada e a reação é agitada durante a noite. MeOH (5,0 mL) é adicionado e o solvente é

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 47/81

44/70 reduzido a metade do volume. O precipitado é filtrado para se obter 0,5 g de A-19.3. O filtrado é concentrado e purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel (usando um gradiente de solvente de 100% de DCM a 95% de DCM e 5% de MeOH) para fornecer outro 1,10 g de A-19.3. ESI-MS: 275 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,11 min (Método D).

[0051] Etapa 2: A uma mistura de A-19.3 (1,57 g, 5,71 mmol) em DCM (50 mL) é adicionada A-19.4 (2,70 g, 11,3 mmol) e a mistura é agitada durante a noite. Na₂CO₃ (2M de solução aq.) é adicionado, a fase orgânica é extraída com Na2CO3 (2M de solução aq.), as fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina, secas e concentradas para proporcionar 0,80 g do A-19.5. ESI-MS: 257,3 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,47 min (Método D).

[0052] Etapa 3: A uma mistura de A-19.5 (0,80 g, 3,10 mmol), MeOH seco (10 mL) e TEA (1,08 mL, 7,46 mmol) é adicionado Pd(dppf)Cl₂*DCM (152 mg, 0,19 mmol). A reação é agitada a 70°C sob uma pressão de monóxido de carbono (3 bar - 300 KPa) durante 4 h. A mistura é filtrada, concentrada e purificada por HPLC-MS (utilizando um gradiente de solvente de H2O/ACN com NH4OH) para

proporcionar 0,55 g do A-19.6 (Rt): 0,88 min (método E).	. ESI-MS	: 237,1	[M +	H]⁺; HPLC
[0053] Etapa 4: Uma mistura de	A-19.6	(0,55	g, 2,31
mmol), MeOH (4,0 mL) e NaOH	(4M de	solução	aq.,	2,88 mL,
11,5 mmol) é agitada à RT	durante	30 min.	A mistura é

concentrada e acidificada com HCl (4M de solução aq.) até pH 2 e extraída com EA, a fase orgânica é seca e concentrada para proporcionar 0,40 g do A-19. ESI-MS: 223,4 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 0,10 min (Método D).

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 48/81

Α5/70

Ácido 3,4-difluor-2-[1,2,3]triazol-2-il-benzóico A-20

[0054] Uma mistura de A-20.1 (9,00 g, 36,1 mmol), A20.2 (5,25 g, 72,1 mmol), Cul (0,70 g, 3,61 mmol) e K₂CO₃ (11,3 g, 77,6 mmol) em DMF (100 mL) é aquecida a 120 °C durante 16 h. A mistura é acidificada com HC1 (0,5M de solução aq.) a pH 2. A mistura é extraída com EA, a fase orgânica é lavada com salmoura, seca e concentrada para proporcionar o produto bruto o qual é purificado por HPLC prep. HPLC-MS (utilizando um gradiente de solvente H₂0 + 0,075% de TFA, com 5-35% de ACN) para proporcionar 3,00 g do A-20. ESI-MS: 248 [M + Na]⁺; HPLC (Rt) : 0,45 min (Método B) .

Ácido 5-Fluoro-2-[1,2,3]triazol-2-il-nicotínico A-21:

H

A-21.3

[0055] Etapa 1: Uma mistura de A-21.1 (2,00 g, 11,0 mmol), A-21.2 (3,88 g, 17,1 mmol), Cul (0,13 g, 0,68 mmol), A-21.3 (0,15 mL, 1,03 mmol) e K₂CO₃ (2,36 g, 17,1 mmol) em

DMF seco (10 mL) é aquecida a 120 °C por micro-ondas

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 49/81

46/70 durante 40 min. A mistura é vertida em água e extraída com Et₂O. A fase aquosa é acidificada com HCl (4M de solução aq.) e extraída com EA. As fases orgânicas combinadas são secas e concentradas para proporcionar o produto bruto, o qual é purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel (usando um gradiente de solvente de 100% de EA a EA/MeOH = 9/1) para se obter 3,6 g de A-21.4. APCI +/-: 365 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,10 min (Método N).

[0056] Etapa 2: Para A-21.4 (3,60 g, 7,87 mmol) em EtOH anidro (36 mL) é adicionado gota a gota A-21.5 (0,86 mL,

11,8 mmol). A mistura é aquecida a refluxo durante a noite, depois concentrada. O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel. O composto, assim, obtido é retomado em DCM e lavado com NaHCO3 (solução sat.). A fase orgânica é seca e concentrada para proporcionar 2,30 g do A-21.6. ES + /-: 395 [M + H]+; HPLC (Rt): 1,23 min (Método P).

[0057] Etapa 3: Para A-21.6 (2,0 g, 5,0 mmol) dissolvido em EtOH (25 mL) é adicionado TEA (1,4 mL, 10 mmol) e paládio sobre carbono (10%, 0,20 g, 1,88 mmol). A reação é agitada durante a noite sob uma atmosfera de hidrogênio (2 bar = 200 kPa). A mistura é filtrada através de uma almofada de Celite e concentrada. O resíduo é dissolvido em DCM e lavado com ácido cítrico (solução aq. sat.). A fase orgânica é seca e concentrada para se obter 1,4 g de A-21.7. ES + /-: 237 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,88 min (Método P).

[0058] Etapa 4: A uma mistura de A-21.7 (0,85 g, 2,52 mmol) em água (5,0 mL) e THF (15 mL) é adicionado monohidratado de LiOH (0,32 g, 7,60 mmol) e a mistura é agitada

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 50/81

47/70 à RT durante a noite. A mistura é concentrada e a fase aquosa é acidifiçada com HCl (4M de solução aq.) e extraída com DCM. A fase orgânica é seca e concentrada para se obter 0,6 g de A-21. ES + /-: 209 [M + H]⁺; HPLC (Rt) : 0,61 min (Método 0).

Rota alternativa para a A-21:

[0059] Etapa 1: Uma mistura de A-21.1 (15,0 g, 81,0 mmol), A-21.8 (11,0 g, 0,16 mol), Cul (0,94 g, 4,90 mmol) e Cs₂CO₃ (53,0 g, 0,16 mol) em 1,4-dioxano (60 mL) e H₂0 (0,50 mL) é aquecida a 100 °C por micro-ondas durante 10 min. A mistura é vertida em água e extraída com EA. A fase orgânica é lavada com água e a fase aquosa é acidif içada com HCl (5M de solução aq.) e extraída com EA. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina, secas e concentradas para se obter 12 g de uma mistura de A-21.9 e A-21.10.

[0060] Etapa 2: A mistura de A-21.9 e A-21.10 (4,0 g,

6,5 mmol) é dissolvida em MeOH (50 mL) e A-21.11 é adicionado gota a gota à mistura resfriada até 0 °C. A reação é agitada a RT durante a noite. A mistura é resfriada instantaneamente com ácido acético e o produto é extraído com EA. A fase orgânica é lavada com água e salmoura, seca e concentrada. 0 produto bruto é purificado por HPLC preparativa (utilizando um gradiente de solvente de H₂0/CAN com NH4HCO3) , para obter 2,6 g de A-21.12 como um

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 51/81

43/70 único isômero. ESI-MS: 223 [M + H]⁺; HPLC (Rt) : 0,77 min (método P) . A hidrólise de A-21.12 é realizada em analogia com a conversão de A-21.7 a A-21.

Ácido 2 -(5-metil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzóico A-22

O

Br

A-22.1	A-22.2	A-22.3	A-22 4	A-22
[0061]	Etapa 1: Uma mistura de	NH₂0H.HC1	(28,6 g, 0,41
mol) e K₂CO₃ (56,9 g,	0,41 mol) em	EtOH (500	mL) é agitada
a 25 °C	durante 30	min. A-22.1	(30,0 g,	0,17 mol) é

adicionado e a mistura de reação é aquecida a 70°C durante 12 h. Após filtração, a mistura é concentrada e o resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando éter de petróleo/EA = 5:1 a 2:1) para obter 25 g de

A-22.2 .

[0062] Etapa 2: A uma mistura de A-22.2 (18,0 g, 0,08 mol) em ACN (200 mL) é adicionado anidrido acético (10,3 g, 0,10 mol) e TEA (16,9 g, 0,17 mol) . A mistura é agitada a 120 °C durante 48 h. A mistura é concentrada sob vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando éter de petróleo/EA = 1/0 a 10/1), para obter 9,0 g de A-22.3. ESI-MS: 239/241 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,43 min (Método Q).

[0063] Etapa 3: A uma mistura de A-22.3 (9,00 g, 0,04 mol) e TEA (11,5 g, 0,11 mol) em MeOH (200 mL) adicionou-se Pd(dppf)C1₂*DCM (1,00 g, 1,20 mmol) . A mistura é agitada a 50 °C sob uma atmosfera de monóxido de carbono (50 psi 344,74 kPa) durante 16 h. A mistura é concentrada e o

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 52/81

49/70 resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando éter de petróleo/EA = 1/0 a 5/1) para Obter 4,0 g de A-22.4. ESI-MS: 219 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,28 min (Método Q) .

[0064] Etapa 4: A uma mistura de A-22.4 (4,00 g, 0,02 mol) em MeOH (40 mL) e H₂0 (4,0 mL) adiciona-se NaOH (1,47 g, 0,04 mol) a 25 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura é agitada a 7 0 °C durante 4 h e é, em seguida, concentrada. 0 resíduo é retomado em H₂0, acidifiçada com HC1 (4M de solução aq.) a pH 3 e o precipitado é filtrado para obter 2,2 g de A-22, tal como um sal de HC1. ESI-MS: 205 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 2,13 min (Método R).

Síntese de intermediários de amina

Cloridrato de N-[ (2S)-2-(etilamino)propil]-5(trifluormetil)pirimidin-2-amina B-l:

[0065] Etapa 1: Uma mistura de B-l.11 (5,0 g, 66 mmol), B-l.12 (6,8 mL, 66 mmol) em THF anidro (180 mL) é agitada à RT durante 1 h. Triacetoxiborohidreto de sódio (44,6 g, 0,20 mol) é adicionado a 0 °C e a mistura é agitada à RT

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 53/81

50/70 durante 30 min. B-1.13 (11,0 mL, 0,20 mol) em THF (20 mL) é adicionado gota a gota dentro de 10 min a 0 °C e a mistura é agitada à RT durante a noite. B-1.13 adicional (10 mL) é adicionado e agitado à RT durante 3 h. O precipitado é filtrado e lavado com THF e DCM. NaHCO3 (solução aq. sat., 200 mL) e NaHCO3 sólido são adicionados até que a formação de gás é terminada. A fase aquosa é extraída com DCM, seca e concentrada para fornecer 12 g de B-1.14. ESI-MS: 194 [M + H] +; HPLC (Rt): 1,13 min (Método E).

[0066] Etapa 2: A uma mistura de B-1.14 (3,47 g, 18,0 mmol) em MeOH (4,9 mL) é adicionado Pd/C (350 mg). A mistura é agitada à RT durante 16 h sob uma atmosfera de hidrogênio (3 bar - 300 KPa). A mistura é filtrada através de uma almofada de celite e o solvente é evaporado para obter 2,7 g de B-1.15. ESI-MS: 130 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,27 min (Método P) .

[0067] Etapa 3: B-1.15 (3,15 g, 22,6 mmol) e di-tercbutildicarbonato (5,42 g, 24,8 mmol) são dissolvidos em THF (100 mL). Sob agitação DIPEA (10,0 mL, 58,4 mmol) é adicionada em porções e a mistura é agitada à RT durante 3 h. A mistura é concentrada e o resíduo é dissolvido em DCM. A mistura é lavada com H₂O, NaOH (1 N de solução aq.), HCl (1 N de solução aq.) e NaCl (solução aq. sat.). A fase orgânica é seca e concentrada. O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel (usando um gradiente de solvente de 100% de ciclohexano a 60% ciclohexano e de 40% de EA) para proporcionar 4,5 g de B1.16. ESI-MS: 204 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,92 min (Método P).

[0068] Etapa 4: A uma mistura de B-1.16 (4,50 g, 22,1 mmol), B-1.17 (5,00 g, 34,0 mmol) e PPh₃ (8,90 g, 33,9

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 54/81

51/70 mmol) em THF seco (80 mL) é adicionado DIAD (6,00 mL, 33,2 mmol) gota a gota a 0 °C e sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura é agitada à RT durante 16 h. O solvente é concentrado, o resíduo é tratado com H₂O e extraído com EA. A camada orgânica é separada, seca e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando uma mistura solvente de n-hexano/EA/MeOH 70/30/1 respectivamente) para obter 4,4 g de B-1.18. ESIMS: 333 [M + H]+; HPLC (Rt): 1,25 min (Método P).

[0069] Etapa 5: MeNH₂ (33% em EtOH, 20 mL) é adicionada a B-1.18 (1,20 g, 3,61 mmol) em RT. A mistura é agitada durante 20 h. Em seguida, resfriada em gelo-água e o sólido é filtrado e lavado com EtOH frio. O solvente é evaporado e o resíduo é tratado com ácido cítrico frio (solução aq. 10%). A mistura é extraída com EA. A camada orgânica é separada. A fase aquosa é tratada com NH4OH e extraída com EA. A camada orgânica é separada, seca e concentrada para proporcionar 650 mg de B-1.19. ESI-MS: 203 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,65 min (Método P).

[0070] Etapa 6: A uma mistura agitada de B-1.19 (1,88 g, 9,29 mmol) e DIPEA (2,50 mL, 14,6 mmol) em NMP (20 mL) é adicionada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio B-1.20 (2,20 g, 12,1 mmol). A mistura é agitada no micro-ondas a 100 °C durante 30 min. A mistura é vertida em H2O e extraída com EA. A fase orgânica é separada, lavada com ácido cítrico (solução aq. 10%) e H₂O. A camada orgânica é seca e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando uma mistura solvente de n-hexano/EA 80/20) para obter 2,7 g de B-1.21. ESI-MS: 349 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,34 min (Método

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52/70

Ρ) · [0071] Etapa 7: HC1 (4 M em dioxano, 40 mL) é adicionada a uma mistura agitada de B-1.21 (5,50 g, 15,8 mmol) em dioxano (10 mL) à RT e a mistura é agitada durante 2h. O solvente é evaporado. O resíduo é tratado com EA e o sólido é filtrado para proporcionar 3,5 g de B-l. ESI-MS: 249 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 0,63 min (Método P).

Cloridrato de N-[(2S)-2-(etilamino)propil]-5(trifluormetil)pirazin-2-amina B-2:

[0072] Etapa 1: A uma mistura agitada de B-l.8 (1,00 g,

4,90 mmol) e DIPEA (1,4 mL, 8,0 mmol) em NMP (8,0 mL) é adicionado à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio, B-l.9 (0,8 mL, 6,4 mmol). A reação é aquecida a 100°C em micro-ondas durante 30 min. A reação é vertida em água e extraída com EA. A camada orgânica é separada, lavada com ácido cítrico (solução aq. 10%) e água. A camada orgânica é seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando CH/EA 80/20 como eluente) . Após a evaporação 1,0 g de B-l. 10 é obtido. ES +/-: 349 [M + H]⁺; HPLC (Rt) : 1,36 min (Método P) .

[0073] Etapa 2: HC1 (4 M em dioxano, 20 mL) é adicionado a uma mistura de B-l. 10 (1,50 g, 4,30 mmol) em dioxano (5,0 mL) a 0°C e depois agitado à RT durante a noite. 0 solvente é removido e o resíduo é tratado com Et₂O

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53/70 para proporcionar 830 mg de B-l. ES +/-: 249 [M + H]+; HPLC (Rt): 0,67 min (Método P).

Cloridrato de terc-butil N-[(2S)-2(etilamino)propil]carbamato B-3

[0074] Etapa 1: Di-terc-butildicarbonato (1,50 g, 6,87 mmol) em THF (10 mL) é adicionado gota a gota a uma mistura agitada de B-3.1 (1,32 g, 6,86 mmol) em THF (20 mL) à RT. Após 16h, o solvente é evaporado e o resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando uma mistura solvente de n-hexano/EA/MeOH 80/20/1), para obter

1,7 g de B-3.2. ES +/-: 293 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,31 min (Método P).

[0075] Etapa 2: B-3.2 (900 mg, 3,08 mmol) é dissolvido em MeOH (50 mL) . Pd/C (120 mg, 0,11 mmol) é adicionado e a mistura é agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (3 bar = 300 kPa) durante a noite. A mistura é filtrada através de celite e a solução é concentrada para proporcionar 500 mg de B-3. ES +/-: 203 [Μ + H]⁺; HPLC (Rt) : 0,58 min (Método P) .

N- [(2S)-l-aminopropan-2-il]-W-etil-3-fluor-2(pirimidin-2-il)benzamida C-l:

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54/70

C-1.3 C-1.4

C-1.4

C-1.7 C-1.6

F

C-1.9

C-1 [0076] Etapa 1: Uma mistura de C-1.2 (10 g, 67 mmol) em

DCM (30 mL) é adicionada gota a gota a uma mistura agitada de C-l.l (5,0 g, 67 mmol) e TEA (19,0 mL, 0,13 mol) em DCM (70 mL) . A mistura é agitada à RT durante a noite, em seguida, NH₄C1 (solução sat. aq.) é adicionado e a fase aquosa foi extraída com DCM. A fase orgânica é seca e concentrada para proporcionar 10 g de C-1.3. ESI-MS: 189 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 0,84 min (Método P).

[0077] Etapa 2: A uma mistura de A-9 (2,49 g, 11,4 mmol) em DMF seco (40 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio adiciona-se DIPEA (5,8 mL, 34 mmol) e HATU (5,7 g, 15 mmol) e a mistura é agitada durante 10 min. C-1.3 é adicionado (2,4 g, 13 mmol) e a mistura é agitada à RT durante 16 h. A mistura é tratada com água e a fase aquosa foi extraída com EA. A fase orgânica é separada, lavada com NaHCO₃ (solução aq. sat.) e ácido cítrico (solução aq. 5%), seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia flash

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 58/81

55/70 em coluna sobre sílica gel (utilizando n-hexano/EA 50/50) para obter 2,7 g de C-1.4. ESI-MS: 389 [M + H]+; HPLC (Rt):

1,30 min (Método P).

[0078] Etapa 3: NaH (330 mg, suspensão a 60% em óleo mineral, 8,24 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de C-1.4 (2,14 g, 5,49 mmol) e C-1.5 (883 pL, 11,0 mmol) em DMF seco (3 mL) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura é agitada a 0 °C durante 2h. É adicionada água e a fase aquosa foi extraída com Et₂O. A camada orgânica é seca e concentrada para obter 2,3 g de C-1.6. ESI-MS: 418 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,50 min (Método P).

[007 9] Etapa 4: TBAF (765 mg, 0,86 mL, 0,86 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de C-1.6 (200 mg, 0,43 mmol) em THF (5,0 mL), sob agitação a 0°C. A mistura é agitada a 0°C durante 30 min, concentrada e o resíduo purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (usando um gradiente de solvente de 100% de DCM a 97% de DCM/MeOH a 3%) para obter 130 mg de C-1.7. ESI-MS: 304 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 0,68 min (Método P).

[0080] Etapa 5: cloreto de metanossulfonil (30,0 pL, 0,39 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de C-1.7 (100 mg, 0,33 mmol) e DIPEA (70,0 pL, 0,41 mmol) em DCM seco a 10°C. Após 2h, a reação é tratada com água. A fase orgânica é separada, seca e concentrada sob pressão reduzida sem aquecimento. Ao resíduo é adicionado C-1.8 (70,0 mg, 0,38 mmol) e DMF à temperatura ambiente sob agitação. Após 1 h, a reação é vertida em água e extraída com EA. A camada orgânica é separada, seca e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (utilizando n-hexano/EA/MeOH 50/50/1), para obter 75 mg

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50/70 de C-1.9. ESI-MS: 433 [Μ + H]⁺; HPLC (Rt): 3.71 min (Método

N) .

[0081] Etapa 6: N₂H₄xH₂0 (30,0 pL, 0,60 mmol) é adicionado a uma mistura de C-1.9 (60,0 mg, 0,14 mmol) em

EtOH (3,0 mL) à RT. A mistura é agitada durante 2 0 h. A mistura é vertida em gelo-água e o sólido é filtrado e lavado com EtOH frio. 0 solvente é evaporado e o resíduo é tratado com ácido cítrico frio (solução aq. A 10%) . A mistura é extraída com EA. A fase orgânica é separada, a fase aquosa é tratada com NH₄0H e extraída com EA. A camada orgânica é separada, seca e concentrada para obter 30 mg de C-l. ES +/-: 303 [Μ + H]⁺; HPLC (Rt): 0,58 min (Método P).

Rota alternativa para C-l a partir de C-l.7

[0082] Etapa 1: A uma mistura agitada de C-l.7 (100 mg,

0,33 mmol) e DBU (100 pL, 0,67 mmol) em THF seco (4,0 mL) em RT sob uma atmosfera de nitrogênio é adicionada C-l.10 (90,0 pL, 0,42 mmol) . Após 16 h, a mistura é concentrada e o resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (utilizando n-hexano/EA/MeOH 80/20/1), para obter 80 mg de C-l-11. ESI-MS: 329 [Μ + H]⁺; HPLC (Rt): 0,94 min (Método P).

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 60/81

57/70 [0083] Etapa 2: PPh₃ (160 mg, 0,61 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de C-l.ll (80,0 mg, 0,24 mmol) em THF (5,0 mL) e água (0,24 mL) à RT sob uma atmosfera de nitrogênio. Após 16 h, a mistura é concentrada e o resíduo é tratado com HC1 (1M de solução aq.) e a fase aquosa é lavada com EA. A fase aquosa é tratada com NH₄0H (solução aq.) até pH 10-11 e extraída com DCM. A camada orgânica é separada, seca e concentrada para proporcionar 65 mg de ΟΙ. ES +/-: 303 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 0,58 min (Método P).

N- [(2S)-l-aminopropan-2-il]-N-etil-3-fluor-2-(2H-1,2,3triazol-2-i1)benzamida C-2:

o

C-2 C-2.4 [0084] Etapa 1: A uma mistura de B-1.14 (10,0 g, 0,05 mol) e C-2.1 (7,60 g, 0,05 mol) em THF (150 mL) é adicionada PPh₃ (13,6 g, 0,05 mol). Em seguida, DIAD (8,80 g, 0,05 mol) é adicionado gota a gota a 0 °C. A mistura é agitada à RT durante 12 h. A mistura de reação é concentrada e o resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando éter de petróleo/EA de 20/1 a 10/1) para obter 10 g de C-2.2.

[0085] Etapa 2: A uma mistura de C-2.2 (2,00 g, 0,01

Petição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 61/81

58/70 mol) em MeOH (30 mL) é adicionado Pd/C (1,0 g). A mistura é agitada a 20 °C durante 12 h sob uma atmosfera de hidrogênio (50 psi = 344,74 KPa). A mistura é filtrada e o filtrado é concentrado para obter 800 mg de C-2.3.

[0086] Etapa 3: A uma mistura de C-2.3 (2,50 g, 9,30 mmol) em ACN seco (50 mL) é adicionado A-2 (2,30 g, 11,0 mmol), DIPEA (4,8 mL, 28 mmol) e CIP (3,1 g, 11 mmol) e a mistura é agitada à RT durante 2 h. Uma outra porção de A-2 (200 mg) e do CIP (500 mg) é adicionada e a reação é agitada durante mais 2 h. Em seguida, uma outra porção de DIPEA (1,5 mL) e CIP (300 mg) é adicionada e a reação é agitada durante 2 h. Água (70 mL) é adicionada à mistura de reação é agitada durante 1 h. O precipitado é filtrado e seco. O líquido mãe é extraído com EA, seco e concentrado. O resíduo é purificado por HPLC prep. (utilizando um gradiente de solventes de H2O/ACN com NH4OH) e combinado com o sólido seco para produzir 3,4 g de C-2.4. ESI pos.+neg. (Loop-Inj.) [M + H]+: 422; HPLC (Rt): 0,97 min (Método G).

[0087] Etapa 5: A uma mistura de C-2.4 (3,4 g, 8,0 mmol) em EtOH (100 mL) é adicionado à RT N2H4xH2O (1,2 mL, 20 mmol) e a reação é agitada durante a noite. Outra porção de N2H4xH2O (0,50 mL) é adicionada e a reação é agitada a 60 °C durante 2 h. O sólido é filtrado. O solvente é evaporado e o resíduo é dissolvido em EA e extraído com HCl (1 M de solução aq.). A camada aquosa acídica é lavada com EA, em seguida, o pH é ajustado com NH₄OH (solução aq. a 25%) até pH = 10. A fase aquosa é extraída com EA, seca e concentrada para obter 2,1 g de C-2. ESI pos.+neg. (LoopInj.) [M + H]⁺: 292 [M + H] +; HPLC (Rt): 0,70 min (Método

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U) .

Amidas

N-Etil-2-fluor-6-iodo-N- [(S)-l-metil-2-(5trifluormetil-piridin-2-iloxi)-etil]-benzamida D-l

[0088] D-l.l (150 mg, 0,56 mmol) é dissolvido em DCM seco (3,0 mL). Sob agitação cloreto de oxalil (846 mg, 1,13 mmol) e uma gota de DMF são adicionados e a mistura é agitada durante 2 h. A mistura é concentrada e o resíduo é retomado em DCM seco (3,0 mL) . A mistura resultante é adicionada gota a gota a uma mistura de B-l (145 mg, 0,51 mmol) e DIPEA (390 pL, 2,30 mmol) em DCM (4,0 mL) a 0 °C. 0 banho frio é removido e a mistura é agitada durante 2 h. 0 produto bruto é diluído com DCM e lavado com NH₄C1 (solução sat.), KHCO₃ (solução aq.) e água. A fase orgânica é seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente de solvente de 100% de ciclohexano para ciclohexano/EA 65/35) para obter 160 mg de composto D-l. ESI-MS: 497 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 1,21 min (Método P).

Preparação dos compostos da presente invenção

Exemplo 1:

[0089] CIP (76 mg, 0,27 mmol) é adicionado a uma

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60/70 mistura agitada de A-1 (48 mg, 0,25 mmol), B-1 (60 mg, 0,21 mmol) e DIPEA (109 μΏ, 0,63 mmol) em ACN seco (2,0 mL) à RT. Após 16 h, a reação é tratada com ACN/água e purificada por LCMS preparativa (utilizando um gradiente de solvente de H2O/ACN com NH4OH) para obter 50 mg do composto do Exemplo 1. MS-ESI: 420 [M + Na]+; HPLC (Rt): 1,02 min (Método G).

[0090] Os exemplos a seguir são preparados em analogia com o processo acima descrito utilizando o ácido correspondente (ver Intermediários de ácido) e amina (ver Intermediários de amina), tal como descrito antes. Para o Exemplo 4, isolamento e purificação são adaptados: O produto bruto é concentrado e o resíduo é retomado em EA e lavado com ácido cítrico (solução aq. a 10%), Na2CO3 (solução aq. sat.) e água, seco e concentrado. O resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (ciclohexano utilizando a ciclohexano/EA 4/6).

[0091] Para alguns exemplos, os tempos de reação estão adaptados: 4h para o Exemplo 7; 1h para o Exemplo 9; 2 h a 60 °C para o Exemplo 16:

Exemplo	Estrutura	ESI-MS [M+H]+	HPLC (Rt) [min]	Método HPLC
	N_{x X}N N O . I II H
2		438	0,83	S

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Exemplo	Estrutura	ESI-MS [M+H]+	HPLC (Rt) [min]	Método HPLC
4	FF N_{x X}N N O . R /L X X/N_x/N_x _F^^^ X ^N^X^^F	456	3,19	H
5	N	FF X /N N O . X F\ /N. /N. kk k ⁿF F	k	438	1,02	G
8	N	FF X /N N O . /L A. x-X/^/N. 1 N X XX X n^X^/F ΐ ^f/f N	445	0,77	S
9	N	FF < _XN N O . zX/X xX/^/N. 1 N ^\|\| ⁿ k ⁿF cn₃	k	435	1,04	G
10	FF N_{x X}N N O . xXxX X\/N. .N. k ^N< F	k	439	0,71	S

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62/70

Exemplo	Estrutura	ESI-MS [M+H]+	HPLC (Rt) [min]	Método HPLC
12		N 0 . χΥ /Y Y. /H. _ZN_Xi Y^ n Y Y>N Y N^Y^F 1 kF	434	0,81	S
20		M k ⁿ^v^f ^F F	431	0,79	S
21	⁰ \| _H Y>N Y N^Y^F ^F F	431	1,02	G

Exemplo	Estrutura	ESI pos.+ neg. (LoopInj.) [M+H] +	HPLC (Rt)	Método HPLC
	/ΓΛ N_{x X}N N 0	I H
7	<Ύ		N^NN		438	1,07	G
		T	k ^N-	Y
				fF

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63/70

[0092] Α-4 (61 mg, 0,27 mmol) é dissolvido em DMF seco (2 mL) . HATU (112 mg, 0,30 mmol) e DIPEA (127 pL, 0,74 mmol) são adicionados e a mistura é agitada durante 10 min. Então, B-l (70 mg, 0,25 mmol) é adicionado e a reação é agitada a RT durante 3 h. A mistura é purificada por LCMS preparativa (utilizando um gradiente de solventes de H₂O/ACN com NH4OH) . Após a concentração, o resíduo é extraído com DCM. A fase orgânica é seca e concentrada para proporcionar 70 mg do composto do Exemplo 3. MS-ESI: 454 [M + Na]⁺; HPLC (Rt): 3,52 min (Método H).

[0093] Os exemplos a seguir são preparados em analogia com o processo acima descrito utilizando o ácido correspondente (ver Intermediários de ácido) e amina (ver Intermediários de amina), tal como descrito antes, ajustando o tempo de reação: durante a noite para o Exemplo 14, 19:

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^F Α-18

Cl—Η

Β-1

ΓΊ\

[0094] Α-18 (640 mg, 2,8 mmol), Β-1 (809 mg, 2,84 mmol), CIP (1,0 g, 3,7 mmol) e DIPEA (1,5 mL, 8,5 mmol) são misturados em ACN seco (3 mL) e a mistura é agitada à RT durante a noite. A mistura é concentrada e o resíduo é retomado com EA e lavado com ácido cítrico (solução aq. a 10%), Na₂CO₃ (solução aq.) e com salmoura, seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (usando um gradiente de solvente de ciclohexano a ciclohexano/EA 2/3) para obter 802 mg do Exemplo 6. MS-ESI: 456 [M + Na]⁺; HPLC (Rt) : 4,40 min

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65/50 (Método N).

Exemplo 11:

F

F [0095] A uma mistura agitada de C-l (1,0 g, 3,3 mmol) em NMP (15 mL) , 11.1 (700 mg, 3,8 mmol) e DIPEA (0,70 mL,

4,1 mmol) são adicionados à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação é aquecida a 100 °C durante 1 h. Depois de resfriar, a reação é vertida em água e extraída com EA. A camada orgânica é separada, lavada com ácido cítrico (solução aq. a 10%), seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (utilizando como eluente DCM/MeOH 97/3) para obter 1,3 g do Exemplo 11. ESI-MS: 471 [M + Na]⁺; HPLC (Rt): 3,16 min (Método H).

Exemplo 13:

Exemplo 13 [0096] A uma mistura de D-l (160 mg, 0,29 mmol), Cul (2,80 mg, 0,01 mmol), Pd(PPh₃)₄ (17 mg, 0,01 mmol) e CsF (66 mg, 0,44 mmol) em DME seco (2,0 mL), sob uma atmosfera de nitrogênio é adicionado 13.1 (92 pL, 0,2 9 mmol) . A reação é aquecida a 120 °C por micro-ondas durante 2 h. Em seguida, a 13 0 °C durante 3 0 min. Após resfriamento, a

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00/70 mistura é vertida em água e extraída com Et₂O (2x). A camada orgânica é seca e concentrada para obter o produto bruto, o qual é purificado por meio de LCMS preparativa (utilizando um gradiente de solvente de H₂O/ACN com NH₄OH) para obter 28 mg do Exemplo 13. ESI-MS: 471 [M + Na]⁺; HPLC (Rt): 3,54 min (Método H).

Exemplo 15:

[0097] Etapa 1: 15.1 (1,50 g, 5,64 mmol) é dissolvido em DCM (8,3 mL) . Em seguida, cloreto de oxalil (5,6 mL, 11,3 mmol) é adicionado seguido por uma gota de DMF e a mistura é agitada à RT durante 1 h. 0 solvente é removido sob pressão reduzida. 0 resíduo é misturado com DCM (8 mL) e adicionado a 0 °C, a uma mistura de B-3 (1,04 g, 5,13 mmol) e DIPEA (3,9 mL, 22,6 mmol) em DCM (8 mL). A mistura é agitada durante 12 h a 20 °C. A água é adicionada e a camada orgânica é lavada com NH₄C1 (solução aq. sat.), KHCO₃ (solução aq. sat.) e água. A fase orgânica é seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia em coluna flash (utilizando um gradiente de solvente de 100%

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67/70 de ciclohexano para ciclohexano/EA 8/2) para obter 0,91 g de 15.2. ESI-MS: 451 [M + H]+; HPLC (Rt): 1,17 min (Método

P).

[0098] Etapa 2: 15.2 (914 mg, 1,93 mmol), 15.3 (980 pL,

3,0 9 mmol), CuI (36,7 mg, 0,19 mmol) CsF (589 mg, 3,88 mmol) e Pd(PPh₃)₄ são dissolvidos em DMF seco (7,0 mL) e a mistura é agitada num micro-ondas a 130 °C durante 15 min. água é adicionada e o produto é extraído com EA. A fase orgânica é seca e concentrada. O produto bruto é purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel (usando um gradiente de solvente de ciclohexano/EA 30/70 a 100% EA) para obter 477 mg de 15,4. ESI-MS: 403 [M + H]+; HPLC (Rt): 1,02 min (Método P).

[0099] Etapa 3: A uma mistura de 15.4 (477 mg, 1,19 mmol) em MeOH (6,0 mL) HCl (4 M de solução aq., 7,41 mL, 2 9,6 mmol) é adicionado a 0 °C. A mistura é agitada à RT durante 1 h. O solvente é evaporado e o resíduo é purificado por HPLC-MS prep. (utilizando um gradiente de solvente de H₂O/ACN com NH₄OH) para obter 333 mg de 15,5. ESI-MS: 303 [M + H]+; HPLC (Rt): 2,98 min (Método N).

[00100] Etapa 4: A uma mistura de 15.5 (45,0 mg, 0,15 mmol) em DMF seco (1,0 mL), DIPEA (77,3 pL, 0,45 mmol) é adicionada. Após 20 min, 15.6 (32,6 mg, 0,18 mmol) é adicionado e a mistura é agitada a 70 °C durante 1,5 h. EA é adicionado e a camada orgânica é lavada com água, seca e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando uma mistura de solvente de ciclo-hexano/EA 10/90) para obter 34 mg do Exemplo 15. ESIMS: 471 [M + Na]⁺; HPLC (Rt): 3,21 min (Método H).

Exemplo 17:

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Exemplo 17 [00101] A uma mistura de A-14 (135 mg, 0,63 mmol) , B-l (150 mg, 0,53 mmol) e DIPEA (273 pL, 1,60 mmol) em ACN seco (2,0 mL) é adicionado CIP (191 mg, 0,68 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 2 dias. ACN/H₂O é adicionada e a mistura é purificada por HPLC prep. HPLC-MS (utilizando um gradiente de solvente de H₂O/ACN com NH₄OH) para proporcionar 133 mg do Exemplo 17. ESI-MS: 445 [M + Na]⁺; HPLC (Rt): 1,04 min (Método G).

Exemplo 18:

A-2 B-1

[00102] 0 cloreto de tionil (0,28 mL, 3,86 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de A-2 (800 mg, 3,86 mmol) em tolueno (6,0 mL) . Uma gota de DMF é adicionada e a mistura é aquecida a 60 °C durante 2 h. 0 solvente é evaporado. 0 resíduo é dissolvido em DCM seco (10 mL) e, em seguida, uma mistura de B-l (1,00 g, 3,50 mmol) e TEA (1,5 mL, 11 mmol) em DCM é adicionada gota a gota a 0 °C. A mistura de reação é aquecida até à RT. Água é adicionada e a camada orgânica é seca e concentrada. 0 produto bruto é purificado por cromatografia flash em coluna de sílica gel (usando uma mistura solvente de acetato de etil/nhexano/MeOH 90/10/1), para obter 1,2 g do Exemplo 18. ESIPetição 870160043843, de 15/08/2016, pág. 72/81

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MS: 438 [Μ + Na]⁺; HPLC (Rt): 4,32 min (Método T).

Exemplo 22:

[00103] CIP (55 mg, 0,20 mmol) é adicionado a uma mistura agitada de A-l (40 mg, 0,14 mmol), B-2 (35 mg, 0,19 mmol) e DIPEA (80 pL, 0,47 mmol) em DMA seco (2,0 mL) à RT. Após 16 h, a reação é tratada com água e extraída com EA. A camada orgânica é separada e lavada com NaHCO₃ (solução aq. a 5%). A camada orgânica é separada, seca e concentrada. 0 resíduo é purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (utilizando como eluente DCM/MeOH 100/2), para obter 35 mg do Exemplo 22. ES +/-: 420 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 4,28 min (Método N).

[00104] Os exemplos a seguir são preparados em analogia com o processo acima descrito utilizando o ácido correspondente (ver Intermediários de ácido) e amina (ver Intermediários de amina), tal como descrito antes.

Exemplo	Estrutura	ESI-MS [M+H] ⁺	HPLC (Rt) [min]	Método HPLC
23	H,C Οχ />N γ 0 CH, II 1 H		453	3,26	H
		\ /F N /1 ^F F

Exemplo 24:

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[00105] A uma mistura de C-2 (30,0 mg, 0,08 mmol) e

DIPEA (35,0 pL, 0,21 mmol) em DMF (4,0 mL) é adicionado 24.1 (18,0 mg, 0,10 mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação é aquecida em micro-ondas a 90 °C durante 30 min. Após resfriamento da mistura reacional, adiciona-se água e a mistura é extraída com DCM, as fases orgânicas combinadas são lavadas com NH₄C1 (solução aq. sat.), secas e concentradas. 0 produto bruto é purificado por meio de LCMS preparativa (utilizando um gradiente de solvente de H₂O/ACN com HCOOH) para obter 10 mg do Exemplo 24. ESI-MS: 438 [M + H]⁺; HPLC (Rt): 4,42 min (Método N).

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1/6

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto CARACTERIZADO por ser selecionado a partir do grupo consistindo em:

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2/6

η.

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Αχ« » »

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N

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F

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Αχ» k

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3/6

F /

F

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F

N N

AJi

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4/6

AA r - γ- ' ' ^H '^N

ML n

N ''' N

N

UM

F

F

2. Composto,

CARACTERIZADO por grupo consistindo de acordo com a reivindicação 1, ser um composto selecionado a partir do em:

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5/6 ίΓΛ

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1/1