BR102017010607A2

BR102017010607A2 - 2-amino-5,5-difluoro-6-(fluorometil)-6-fenil-3,4,5,6- tetrahidropiridinas como inibidoras da bace1, composição farmacêutica compreendendo as mesmas e seu uso para tratar a doença de alzheimer

Info

Publication number: BR102017010607A2
Application number: BR102017010607-1A
Authority: BR
Inventors: Karsten Juhl; Lena Tagmose; Mauro Marigo
Original assignee: H. Lundbeck A/S
Priority date: 2017-05-19
Filing date: 2017-05-19
Publication date: 2018-12-04

Abstract

2-amino-5,5-difluoro-6-(fluorometil)-6-fenil-3,4,5,6- tetrahidropiridinas como inibidoras da bace1, composição farmacêutica compreendendo as mesmas e seu uso para tratar a doença de alzheimer a presente invenção se refere a compostos de acordo com a fórmula (i), compostos esses que são inibidores da enzima bace1. aspectos separados da invenção se referem a composições farmacêuticas compreendendo os referidos compostos e a usos dos compostos no tratamento de transtornos para os quais a redução de depósitos de aß seja benéfica, tal como a doença de alzheimer.

Description

(54) Título: 2-AMINO-5,5-DIFLUORO-6-(FLUOROMETIL)-6-FENIL-3,4,5,6- TETRAHIDROPIRIDINAS COMO INIBIDORAS DA BACE1, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO AS MESMAS E SEU USO PARA TRATAR A DOENÇA DE ALZHEIMER (51) Int. Cl.: C07D 401/12; C07D 413/12; C07D 417/12; C07D 211/72; C07D 211/76; (...).

(71) Depositante(es): H. LUNDBECK A/S.

(72) lnventor(es): KARSTEN JUHL; LENATAGMOSE; MAURO MARIGO.

(57) Resumo: 2-AMINO-5,5-DIFLUORO-6-(FLUOROMETIL)-6-FENIL-3,4,5,6- TETRAHIDROPIRIDINAS COMO INIBIDORAS DA BACE1, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO AS MESMAS E SEU USO PARA TRATAR A DOENÇA DE ALZHEIMER A presente invenção se refere a compostos de acordo com a Fórmula (I), Compostos esses que são inibidores da enzima BACE1. Aspectos separados da invenção se referem a composições farmacêuticas compreendendo os referidos compostos e a usos dos compostos no tratamento de transtornos para os quais a redução de depósitos de AB seja benéfica, tal como a doença de Alzheimer.

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2-AMINO-5,5-DIFLUORO-6-(FLUOROMETIL)-6-FENIL-3,4,5,6TETRAHIDROPIRIDINAS COMO INIBIDORAS DA BACE1, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO AS MESMAS E SEU USO PARA TRATAR A DOENÇA DE ALZHEIMER

ÁREA DA INVENÇÃO [001] A presente invenção proporciona compostos que são inibidores da BACE1. Aspectos separados da invenção se referem a composições farmacêuticas compreendendo os referidos compostos e a usos dos compostos para tratar transtornos neurodegenerativos e cognitivos.

ESTADO DA TÉCNICA [002] A demência é uma síndrome clínica caracterizada por deficiência em várias áreas da cognição que não pode ser explicada por envelhecimento normal, uma diminuição visível de função, e a ausência de delírio. Para além disso, estão normalmente presentes sintomas neuropsiquiátricos e achados neurológicos focais. A demência é também classificada com base na etiologia. A doença de Alzheimer (DA) é a causa mais comum de demência, seguida de uma combinação de DA e demência vascular, demência com corpos de Lewy (DCL) e demência frontotemporal.

[003] Os depósitos de β-amiloide e os emaranhados neurofibrilares são considerados importantes caracterizações patológicas associadas à DA, a qual é caracterizada pela perda de memória, cognição, raciocínio, apreciação e orientação. Também são afetadas, à medida que a doença progride, capacidades motoras, sensoriais e linguísticas até à ocorrência de diminuição global de múltiplas funções cognitivas. Os depósitos de β-amiloide consistem predominantemente em um agregado do peptídeo Αβ, que por sua vez é um produto da proteólise da proteína precursora de amiloide (APP) como parte da via β-amiloidogênica. O peptídeo Αβ resulta da divagem da APP nos terminais C ffiâtçjãDÍSTinT7ESBSBM3 ,dte0l17tt872inT7? BiW

2/67 por uma ou mais γ-secretases e no terminal N pela β-secretase 1 (BACE1), também conhecida como aspartil protease 2. A atividade da BACE1 está correlacionada diretamente com a geração do peptídeo Αβ a partir da APP.

[004] Estudos indicam que a inibição da BACE1 impede a produção do peptídeo Αβ. Para além disso, a BACE1 se colocaliza com o seu substrato APP no complexo de Golgi e compartimentos endocíticos (Willem M, et al. Semin.Cell Dev. Biol, 2009, 20, 175-182). Estudos nocaute em camundongos têm demonstrado a ausência da formação do peptídeo amiloide enquanto os animais são saudáveis e férteis (Ohno M, et al. Neurobiol. Dis., 2007, 26, 134-145). A ablação genética da BACE1 em camundongos que sobrexpressam a APP demonstrou a ausência de formação de placas e a reversão de déficits cognitivos (Ohno M, et al. Neuron; 2004, 41, 27-33). Os níveis de BACE1 são elevados nos cérebros de pacientes com DA esporádica (Hampel e Shen, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2009, 69, 8-12).

[005] Estas descobertas convergentes indicam que a inibição da BACE1 pode ser um alvo terapêutico para o tratamento da DA, assim como de transtornos para os quais a redução de depósitos de Αβ seja benéfica.

[006] A AstraZeneca anunciou a descoberta do AZD3839, um potente candidato clínico a inibidor da BACE1 para o tratamento da DA (Jeppsson, F., et al. J. Biol. Chem., 2012, 287, 41245-41257), em outubro de 2012. O esforço que levou à descoberta do AZD3839 foi ainda descrito em Ginman, T., et al. J. Med. Chem., 2013, 56, 4181-4205. A publicação de Ginman descreve os problemas que foram superados em relação à descoberta e identificação do AZD3839. Estes problemas se relacionaram com uma baixa penetração na barreira hematoencefálica e o efluxo mediado pela glicoproteína P dos compostos, resultando em falta de exposição cerebral.

[007] O manuscrito de Ginman colocou a hipótese de que as diferenças

W^SraT7ra»W2Ç,dfeO117fi«72inT7?,ipfe.)9fOTI

3/67 na exposição cerebral seriam em grande parte devidas às estruturas dos núcleos, e foram fornecidos dados da Relação entre Estrutura e Atividade em que as propriedades in vitro dos compostos relatados foram apresentadas em quatro tabelas de acordo com os subtipos dos núcleos. Na tabela 4 é descrita uma série de compostos contendo amidina, que foram considerados interessantes do ponto de vista da atividade. No entanto, os dados sugerem que o núcleo contendo amidina não exibiu um perfil favorável de permeabilidade na barreira hematoencefálica.

[008] Pesquisadores da Hoffmann-La Roche e Siena Biotech também relataram a descoberta de compostos contendo amidina (Woltering, T. J., et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 4239-4243). Verificou-se que estes compostos (compostos 17 e 18 na publicação) não possuem nenhum efeito in vivo (ausência de redução de Αβ40 no cérebro em camundongos de tipo selvagem).

[009] Contrariamente aos ensinamentos de Ginman, et al. e Woltering, T. J., et al., os presentes inventores descobriram uma série de compostos de amidina que penetram no cérebro. Consequentemente, a presente invenção se refere a novos compostos com atividade inibidora da BACE1, à sua preparação, ao seu uso médico e a medicamentos compreendendo os mesmos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0010] Um objetivo da presente invenção consiste em proporcionar compostos que inibem a BACE1. Consequentemente, a presente invenção se refere a compostos de Fórmula I

Ar,

NH

Fórmula I

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4/G7 em que Ar é selecionado do grupo que consiste em fenila, piridila, pirimidila, pirazinila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila e isoxazolila, e onde o Ar é opcionalmente substituído com um ou mais de halogênio, CN, alquila C1-C6, alcenila C2-C6, alcinila C2-C6, fluoroalquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6; e

R¹ e R² são, independentemente, hidrogênio, halogênio, fluoroalquila C1-C3 ou alquila C1-C3; ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0011] Em modalidades separadas da invenção, o composto é selecionado de um dos compostos exemplificados revelados na Seção experimental.

[0012] A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0013] A presente invenção proporciona um método de tratamento de um sujeito que sofre de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo compreendendo administrar ao referido sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0014] Em uma modalidade, a presente invenção é dirigida ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo.

[0015] Em uma modalidade, o composto da presente invenção é de acordo com a Fórmula la

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5/67 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0016] Em uma modalidade, R¹ e R² são independentemente H ou F, em particular R¹ é F e R² é H ou ambos de R^xe R² são F.

[0017] Em uma modalidade, Ar é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de F, Cl, CN, alquila C1-C3, fluoroalquila C1-C3 ou alcóxi C1-C3.

[0018] Em uma modalidade, Ar é fenila opcionalmente substituída.

[0019] Em uma modalidade, Ar é piridila opcionalmente substituída.

[0020] Em uma modalidade, Ar é pirimidila opcionalmente substituída. [0021] Em uma modalidade, Ar é pirazinila opcionalmente substituída. [0022] Em uma modalidade, Ar é imidazolila opcionalmente substituída. [0023] Em uma modalidade, Ar é pirazolila opcionalmente substituída. [0024] Em uma modalidade, Ar é tiazolila opcionalmente substituída. [0025] Em uma modalidade, Ar é oxazolila opcionalmente substituída. [0026] Em uma modalidade, Ar é isoxazolila opcionalmente substituída. [0027] Em uma modalidade, o composto é selecionado do grupo que consiste em:

(S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2il)-4-fluorofenil)-5-cloropicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2il)-4-fluorofenil)-5-fluoropicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2il)-4-fluorofenil)-5-metoxipirazino-2-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2il)-4-fluorofenil)-l-(difluorometil)-lH-pirazol-3-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2il)-4-fluorofenil)-2-(difluorometil)oxazol-4-carboxamida

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6/67 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidrOpiridinil)-4-fluorofenil)-5-cianopicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4-fluorofenil)-2-metiloxazol-4-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4-fluorofenil)-5-metoxipirimidino-2-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4-fluorofenil)-5-(difluorometil)pirazino-2-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-2-metiloxazol-4-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-metoxipirazino-2-carboxamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-cloropicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-cianopicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-metoxipicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-(metoxi-c/3)picolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4,5-difluorofenil)-5-ciano-3-metilpicolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinil)-4-fluorofenil)-5-(metoxi-c/3)picolinamida (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2_/3_/4_/5-tetraidropiridinPetição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 18/70

1/G7 il)-4-fluorofenil)-5-bromopicolinamida ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0028] Uma modalidade separada é direcionada a uma composição farmacêutica compreendendo um composto da lista acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0029] Outra modalidade da invenção é direcionada a um método de tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da lista acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção é direcionada a um uso de um composto da lista acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento para tratar um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo.

[0030] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um composto da lista acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo.

[0031] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a um composto da lista acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0032] A presente invenção se baseia na descoberta de que os compostos de Fórmula I são inibidores da BACE1, e, como tal, são úteis para o tratamento de transtornos relacionados. Certos aspectos da invenção são explicados mais em detalhe abaixo, mas não se pretende que esta descrição seja um catálogo detalhado de todos os diferentes modos pelos quais é possível implementar a invenção, ou de todas as características que podem ser adicionadas à presente

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Z/G7 invenção. Assim, se pretende que a seguinte especificação ilustre algumas modalidades da invenção, e não que especifique de modo exaustivo todas as suas permutações, combinações e variações.

[0033] Como usado no presente documento, o termo alquila C1-C6 se refere a um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada, com um a seis átomos de carbono inclusive. Exemplos de alquilas C1-C6 incluem, mas não estão limitados a, metila, etila, 1-propila, 2-propila, 1-butila, 2-butila, 2-metil-2propila, 2-metil-l-propila, n-pentila e n-hexila. De forma semelhante, o termo alquila C1-C3 se refere a um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada, com um a três átomos de carbono inclusive. Exemplos de tais substituintes incluem, mas não estão limitados a, metila, etila e n-propila.

[0034] De mesmo modo, o termo alcóxi C1-C6 se refere a um grupo alcóxi saturado de cadeia linear ou ramificada, com um a seis átomos de carbono inclusive, com a valência aberta no oxigênio. Exemplos de alcóxis C1-C6 incluem, mas não estão limitados a, metóxi, etóxi, n-butóxi, t-butóxi e n-hexilóxi. O alcóxi C1-C6 é opcionalmente substituído com um ou mais átomos de flúor.

[0035] Como usado no presente documento, o termo fluoroalquila C1-C6 se refere a um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada, com um a seis átomos de carbono inclusive, substituído com um ou mais átomos de flúor. Exemplos de fluoroalquilas C1-C6 incluem, mas não estão limitados a, trifluorometila, pentafluoroetila, 1-fluoroetila, monofluorometila, difluorometila, 1,2-difluoroetila e 3,4-difluorohexila. De forma semelhante, o termo fluoroalquila C1-C3 se refere a um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada com um a três átomos de carbono inclusive, substituído com um ou mais átomos de flúor por átomo de carbono.

[0036] O termo halogênio se refere a flúor, cloro, bromo e iodo.

[0037] O termo alcenila C2-C6 se refere a um grupo alcenila ramificado ou

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9/67 não ramificado, com dois a seis átomos de carbono e uma ligação dupla, incluindo, mas não limitado a, etenila, propenila e butenila.

[0038] O termo alcinila C2-C6 significará um grupo alcinila ramificado ou não ramificado, com dois a seis átomos de carbono e uma ligação tripla, incluindo, mas não limitado a, etinila, propinila e butinila.

[0039] Como usada no presente documento, se pretende que a frase quantidade eficaz, quando aplicada a um composto da invenção, designe uma quantidade suficiente para causar um efeito biológico pretendido. Pretende-se que a frase quantidade terapeuticamente eficaz, quando aplicada a um composto da invenção, designe uma quantidade do composto que é suficiente para melhorar, paliar, estabilizar, reverter, abrandar ou retardar a progressão de um transtorno ou estado patológico, ou de um sintoma do transtorno ou doença. Em uma modalidade, o método da presente invenção proporciona a administração de combinações de compostos. Em tais casos, a quantidade eficaz é a quantidade do composto da presente invenção em tal combinação suficiente para causar o efeito biológico pretendido.

[0040] O termo tratamento ou tratar, como usado no presente documento, significa melhorar ou reverter a progressão ou gravidade de uma doença ou transtorno, ou melhorar ou reverter um ou mais sintomas ou efeitos secundários de tal doença ou transtorno. Tratamento ou tratar, como usado no presente documento, também significa inibir ou bloquear, tal como em retardar, parar, restringir, impedir ou obstruir, a progressão de um sistema, condição patológica ou estado de uma doença ou transtorno. Para as finalidades desta invenção, tratamento ou tratar significa ainda uma abordagem para a obtenção de resultados clínicos benéficos ou desejados, onde resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, sem limitação, o alívio de um sintoma, diminuição da extensão de um transtorno ou doença, doença ou estado

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10/67 patológico estabilizado (isto é, sem agravamento), retardamento ou abrandamento de uma doença ou estado patológico, melhoria ou paliação de uma doença ou estado patológico, e remissão de uma doença ou transtorno, quer parcial quer total.

[0041] A presente invenção também proporciona um método de tratamento de uma doença ou distúrbio, em que o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um mamífero que necessita do mesmo, em que a doença ou distúrbio é uma doença ou distúrbio neurodegenerativo ou cognitivo.

[0042] Espera-se que os compostos da presente invenção, tal como discutido acima, sejam úteis no tratamento da doença de Alzheimer devido aos seus efeitos nos depósitos de β-amiloide e emaranhados neurofibrilares. Isto inclui a doença de Alzheimer familiar, em que os pacientes carregam mutações em genes específicos intimamente envolvidos na produção do peptídeo Αβ. No entanto, é importante notar que os agregados do peptídeo Αβ não se limitam à doença de Alzheimer familiar, mas que, de forma semelhante, eles são uma característica patofisiológica importante da doença de Alzheimer esporádica mais comum [Mol Cell Neurosci, 66, 3-11, 2015].

[0043] Acredita-se que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento da doença de Alzheimer em fase inicial, isto é, de fases iniciais em que as modificações biológicas e estruturais se iniciaram, mas as manifestações clínicas da doença ainda não se tornaram evidentes ou não estão ainda bem desenvolvidas. A doença de Alzheimer em fase inicial pode, com efeito, se iniciar anos antes de qualquer manifestação clínica da doença se tornar manifesta. A doença de Alzheimer em fase inicial inclui a doença de Alzheimer prodrômica, doença de Alzheimer pré-clínica e comprometimento cognitivo leve. Embora o

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11/67 comprometimento cognitivo leve possa não estar relacionado com a doença de Alzheimer, ele é frequentemente uma fase transitória para a doença de Alzheimer ou devido a doença de Alzheimer. A doença de Alzheimer pré-clínica e prodrômica são fases assintomáticas, e são tipicamente diagnosticadas pela presença de biomarcadores relacionados com a doença de Alzheimer. Neste contexto, se acredita que os compostos da presente invenção sejam úteis no retardamento da progressão da doença de Alzheimer em fase inicial, tal como comprometimento cognitivo leve para doença de Alzheimer. Também se acredita que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento da perda de memória, déficits de atenção e demência associada à doença de Alzheimer.

[0044] Outras doenças, para além do contínuo da doença de Alzheimer, são caracterizadas por depósitos de β-amiloide e emaranhados neurofibrilares. Isto inclui p.ex. a Trissomia do 21, também conhecida como síndrome de Down. Os pacientes que sofrem de síndrome de Down têm um cromossomo 21 extra, cromossomo esse que contém o gene para a proteína precursora de amilode (APP). O cromossomo 21 extra leva a uma sobrexpressão da APP, o que leva ao aumento dos níveis do peptídeo Αβ, provocando eventualmente o aumento acentuado do risco de desenvolvimento de doença de Alzheimer verificado em pacientes com síndrome de Down [Alzheimer's & Dementia, 11, 700-709, 201]. A angiopatia amiloide cerebral também é caracterizada por depósitos de βamiloide e emaranhados neurofibrilares em vasos sanguíneos do sistema nervoso central [Pharmacol Reports, 67, 195-203, 2015] e se espera, como tal, ser tratável com compostos da presente invenção.

[0045] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um método para tratar uma doença selecionada de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica,

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12/67 comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down e angiopatia amiloide cerebral, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um paciente com necessidade do mesmo.

[0046] A presente invenção proporciona ainda um método de inibição da BACE1 em um paciente, compreendendo a administração a um paciente com necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0047] A presente invenção também proporciona um método de inibição da divagem da proteína precursora de amiloide mediada pela β-secretase, compreendendo a administração a um paciente que necessite de tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0048] Em outras modalidades, a presente invenção proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica, comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down ou angiopatia amiloide cerebral.

[0049] A presente invenção também proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado à inibição da BACE1. A presente invenção proporciona adicionalmente o uso de um composto de fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a fabricação de um medicamento destinado à inibição da produção ou acúmulo do peptídeo Αβ.

[0050] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um

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13/67 composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em um método de tratamento de uma doença selecionada de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica, comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down ou angiopatia amiloide cerebral.

[0051] Em uma modalidade, a presente invenção se refere a um composto de fórmula I ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em um método para a inibição da BACE1 ou em um método para a inibição da produção ou acúmulo do peptídeo Αβ.

[0052] Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona uma formulação farmacêutica adaptada para quaisquer dos tratamentos e usos acima.

[0053] Em uma modalidade, um mamífero é um humano.

[0054] Em uma modalidade, o paciente é um paciente humano.

[0055] Os compostos da presente invenção são, tal como demonstrado nos exemplos, potentes inibidores da BACE1 e capazes de baixar o nível de peptídeo Αβ no cérebro e plasma de ratos, e se acredita assim que os referidos compostos sejam úteis no tratamento de transtornos neurodegenerativos e cognitivos cujas características patológicas compreendem depósitos de Αβ e emaranhados neurofibrilares, tal como p.ex. a doença de Alzheimer. Pode ser benéfico combinar um composto da presente invenção com um outro paradigma no tratamento, útil no tratamento dessa doença, p.ex. doença de Alzheimer.

[0056] As proteínas Tau são abundantes nos neurônios. As proteínas Tau são solúveis e altamente lábeis por fosforilação, e se ligam à tubulina proporcionando regulação e modulação da montagem de tubulina, isto é, eventualmente estrutura e estabilidade microtubular. As proteínas Tau apenas podem se associar à tubulina no estado mais desfosforilado, e a

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14/67 fosforilação/desfosforilação atua como um interruptor que controla a associação de tubulina. A Tau fosforilada constitui uma parte importante dos emaranhados neurofibrilares, que são uma das características da doença de Alzheimer. A chamada hipótese de Tau sugere o direcionamento destes emaranhados patológicos, dos quais um constituinte principal é a proteína Tau fosforilada, como um paradigma no tratamento da doença de Alzheimer. Em particular, as imunoterapias, tanto ativa como passiva, foram sugeridas como um modo de direcionar emaranhados neurofibrilares contendo a proteína Tau. Na imunoterapia ativa, é injetado um antígeno patogênico no paciente e o sistema imune inato provoca uma resposta imune. Isto desencadeia a maturação de células B, que geram anticorpos de alta afinidade contra o antígeno administrado. Na imunoterapia passiva, o desencadear do sistema imune inato é contornado por infusão de um anticorpo específico contra o antígeno. Sugerese que o sistema de depuração inerente remova então o ligando ligado ao anticorpo. Existe evidência substancial da eficácia tanto da imunoterapia ativa como passiva que visa a proteína Tau fosforilada como tratamento para a doença de Alzheimer [Alzheimer's &Dementia, 7(4, suppl) S480-481; J Neurosci 30, 16559-16556, 2010; J Neurosci, 27, 9115-9129, 2007].

[0057] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. doença de Alzheimer, compreendendo o método a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com a Tau, a um paciente com necessidade do mesmo. O referido composto útil na imunoterapia passiva com a Tau pode ser um anticorpo direcionado contra a proteína Tau fosforilada. O referido composto útil na imunoterapia ativa com a Tau pode ser um fragmento da

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15/67 sequência de aminoácidos da proteína Tau que, por injeção em um paciente, provoque a geração de um anticorpo anti-proteína Tau fosforilada no referido paciente. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0058] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com a Tau para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0059] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com a Tau para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0060] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com a Tau e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0061] Um outro paradigma para tratar um transtorno neurodegenerativo e cognitivo, p.ex. a doença de Alzheimer, consiste em direcionar os peptídeos Αβ. Foi sugerido que isto pode ser conseguido por imunoterapia passiva ou ativa direcionando peptídeos Αβ [J Neurosci, 34, 11621-11630, 2014; J Neurosci 33, 4923-4934, 2013]. Em combinação com compostos da presente invenção, esta tenta direcionar o mesmo mecanismo patológico através de duas vias diferentes. Os anticorpos anti-Αβ (injetados diretamente no paciente ou gerados no paciente como resultado de imunoterapia ativa) eliminam depósitos de Αβ no

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16/67 cérebro, enquanto que a acumulação adicional do peptídeo Αβ é bloqueada ou reduzida pelos compostos da presente invenção.

[0062] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com o peptídeo Αβ, a um paciente com necessidade do mesmo. O referido composto útil em imunoterapia passiva com o peptídeo Αβ pode ser um anticorpo antipeptídeo Αβ, tal como o gantenerumab, solanezumab, aducanumab ou crenezumab. O referido composto útil na imunoterapia ativa com o peptídeo Αβ pode ser um fragmento da sequência de aminoácidos do peptídeo Αβ que, por injeção em um paciente, gera anticorpos antipeptídeo Αβ no referido paciente. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0063] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com o peptídeo Αβ para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0064] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com o peptídeo Αβ para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0065] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição

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YJ/G7 farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um composto útil na imunoterapia ativa ou passiva com o peptídeo Αβ e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0066] O antagonista do receptor NMDA (N-Metil-D-Aspartato) memantina e os inibidores da acetilcolina esterase donepezila, rivastigmina e galantamina são fármacos aprovados para o tratamento da doença de Alzheimer.

[0067] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um antagonista do receptor NMDA ou um inibidor da acetilcolina esterase, a um paciente com necessidade do mesmo. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0068] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um antagonista do receptor NMDA ou de um inibidor da acetilcolina esterase para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0069] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um antagonista do receptor NMDA ou um inibidor da acetilcolina esterase para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0070] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal

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18/67 farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um antagonista do receptor NMDA ou um inibidor da acetilcolina esterase e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0071] As convulsões ou a atividade epileptiforme também estão associadas à doença de Alzheimer, incluindo fases iniciais da doença de Alzheimer, e o tratamento da referida atividade epiléptica, que visa normalizar a hiperatividade do hipocampo, pode fazer parte de um paradigma no tratamento da doença de Alzheimer [JAMA Neurol, 70, 1158-1166, 2013; J Neurosci Res, 93,454,465,2015; Neuron, 74, 647-474, 2012; Neurepsychpharm, 35, 1016-1025, 2010; CNS Neurosci Ther, 19, 871-881, 2013]. Antiepilépticos úteis incluem antagonistas do receptor NMDA e moduladores de canais iônicos tais como o topiramato, levetiracetam e lamotrigina.

[0072] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um antiepiléptico, a um paciente com necessidade do mesmo. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0073] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um antiepiléptico na fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0074] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um antiepiléptico para uso em um método para o tratamento de um transtorno

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19/67 neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0075] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um antiepiléptico e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0076] Evidências emergentes sugerem que a inflamação tem um papel causai na patogênese da doença de Alzheimer e que a neuroinflamação não é um sistema passivo ativado por depósitos emergentes de β-amiloide e emaranhados neurofibrilares, mas contribui também para a própria patogênese [Lancet Neurol, 14,388-405, 2015; J Alz Dis, 44,385-396, 2015; Neurol, 84, 21612168, 2015]. Daqui resulta que fármacos anti-inflamatórios tais como AINES (fármacos anti-inflamatórios não esteroidais), inibidores do TNFa tais como o etanercepte e inibidores da p38 MAP quinase tais como VX-745 (5-(2,6Diclorofenil)-2-((2,4-difluorofenil)tio)-6H-pirimido[l,6-b]piridazin-6-ona) podem ser úteis no tratamento da doença de Alzheimer.

[0077] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um fármaco antiinflamatório, a um paciente com necessidade do mesmo. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0078] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um fármaco anti-inflamatório na fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de

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Alzheimer.

[0079] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um fármaco antiinflamatório para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0080] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um fármaco anti-inflamatório e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0081] Além disso, a eficácia no tratamento da doença de Alzheimer foi demonstrada para inibidores da agregação da proteína Tau tais como TRX-0237, também conhecido como Azul de Metileno, e SSRI (Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina) tais como o citalopram [Behav Pharmacol, 26, 353368, 2015; Sei Transi Med, 6(236re4), 2014].

[0082] Em uma modalidade, a invenção proporciona um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer, compreendendo o método a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de dois componentes (1) um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (2) um inibidor da agregação da proteína Tau ou um SSRI, a um paciente com necessidade do mesmo. A administração de acordo com esta modalidade da invenção pode ser simultânea, ou pode haver um intervalo de tempo entre a administração dos dois componentes.

[0083] Em uma modalidade, a invenção se refere ao uso de um composto de Fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e de um inibidor da agregação da proteína Tau ou de um SSRI na fabricação de um medicamento para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou

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21/67 cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0084] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um inibidor da agregação da proteína Tau ou um SSRI para uso em um método para o tratamento de um transtorno neurodegenerativo ou cognitivo, p.ex. da doença de Alzheimer.

[0085] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um inibidor da agregação da proteína Tau ou um SSRI e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Sais Farmaceuticamente Aceitáveis [0086] A presente invenção também compreende sais dos presentes compostos, tipicamente sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais incluem sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de adição de ácido incluem sais de ácidos inorgânicos, bem como de ácidos orgânicos.

[0087] Exemplos representativos de ácidos inorgânicos adequados incluem os ácidos clorídrico, bromídrico, iodídrico, fosfórico, sulfúrico, sulfâmico, nítrico e semelhantes. Exemplos representativos de ácidos orgânicos adequados incluem os ácidos fórmico, acético, tricloroacético, trifluoroacético, propiônico, benzoico, cinâmico, cítrico, fumárico, glicólico, itacônico, láctico, metanossulfônico, maleico, málico, malônico, mandélico, oxálico, pícrico, pirúvico, salicílico, succínico, metanossulfônico, etanossulfônico, tartárico, ascórbico, pamoico, bismetilenossalicílico, etanodissulfônico, glucônico, citracônico, aspártico, esteárico, palmítico, EDTA, glicólico, p-aminobenzoico, glutâmico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ácidos teofilina-acéticos, bem como as 8-haloteofilinas (por exemplo, 8-bromoteofilina e semelhantes). Exemplos adicionais de sais de adição de ácido inorgânico ou orgânico

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22/67 farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais farmaceuticamente aceitáveis listados em S. M. Berge, et al., J. Pharm. Sei., 1977, 66, 2.

[0088] Adicionalmente, os compostos desta invenção podem existir em formas não solvatadas, bem como em formas solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como água, etanol e semelhantes.

[0089] Os compostos da presente invenção podem ter um ou mais centros assimétricos, e se pretende que quaisquer isômeros ópticos (isto é, enantiômeros ou diastereoisômeros) como isômeros ópticos isolados, puros ou parcialmente purificados, e quaisquer de suas misturas, incluindo misturas racêmicas, isto é, uma mistura de estereoisômeros, estejam incluídos no escopo da invenção.

[0090] Neste contexto, se entende que quando a forma enantiomérica é especificada, então o composto está em excesso enantiomérico, p.ex., essencialmente em uma forma pura. Consequentemente, uma modalidade da invenção se refere a um composto da invenção com um excesso enantiomérico de pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 96%, preferencialmente pelo menos 98%.

[0091] As formas racêmicas podem ser resolvidas nos antípodas ópticos por métodos conhecidos, por exemplo por separação dos seus sais diastereoisoméricos com um ácido oticamente ativo, e liberando o composto de amina oticamente ativo por tratamento com uma base. A separação de tais sais diastereoisoméricos pode ser conseguida, p.ex. por cristalização fracionada. Os ácidos oticamente ativos adequados para esta finalidade podem incluir, mas não estão limitados aos, ácidos d- ou l-tartárico, mandélico ou canforsulfônico. Outro método de resolução de racematos nos antípodas ópticos se baseia em cromatografia em uma matriz oticamente ativa. Os compostos da presente invenção também podem ser resolvidos pela formação e separação

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23/67 cromatográfica de derivados diastereoisoméricos a partir de reagentes de derivatização quirais tais como reagentes alquilantes ou acilantes quirais, seguidas de divagem do auxiliar quiral. Qualquer um dos métodos acima pode ser aplicado para resolver os antípodas ópticos dos compostos da invenção per se ou para resolver os antípodas ópticos de intermediários sintéticos, que então podem ser convertidos, por métodos descritos no presente documento, nos produtos finais oticamente resolvidos que são os compostos da invenção.

[0092] Podem ser usados métodos adicionais para a resolução de isômeros ópticos, conhecidos dos peritos na técnica. Tais métodos incluem os discutidos por J. Jaques, A. Collet e S. Wilen em Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley and Sons, Nova Iorque, 1981. Os compostos oticamente ativos também podem ser preparados a partir de materiais de partida oticamente ativos.

Composições farmacêuticas [0093] A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo compostos específicos revelados na Seção Experimental ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0094] Os compostos da invenção podem ser administrados isoladamente ou em combinação com veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis, em uma única ou múltiplas doses. As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser formuladas com veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, bem como com quaisquer outros adjuvantes e excipientes conhecidos, de acordo com técnicas convencionais tais como as divulgadas em

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24/S7

Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^a Edição, Gennaro, Editor, Mack Publishing Co., Easton, PA, 2013.

[0095] As composições farmacêuticas para administração oral incluem formas de dosagem sólidas tais como cápsulas, comprimidos, drágeas, pílulas, pastilhas, pós e grânulos. Quando apropriado, as composições podem ser preparadas com revestimentos tais como revestimentos entéricos ou podem ser formuladas de modo a proporcionar liberação controlada do princípio ativo tal como liberação sustentada ou prolongada, de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem soluções, emulsões, suspensões, xaropes e elixires. As composições farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções, dispersões, suspensões ou emulsões injetáveis aquosas e não aquosas estéreis, bem como pós estéreis a serem reconstituídos em soluções ou dispersões injetáveis estéreis antes do uso. Outras formas de administração adequadas incluem, mas não estão limitadas a, supositórios, pulverizações, pomadas, cremes, géis, inalantes, adesivos dérmicos e implantes.

[0096] Dosagens orais típicas variam de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia.

[0097] Os compostos desta invenção são geralmente utilizados na forma de base livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto de Fórmula I são preparados p.ex. de modo convencional, se tratando uma solução ou suspensão de uma base livre de Fórmula I com um equivalente molar de um ácido farmaceuticamente aceitável. Exemplos representativos de ácidos orgânicos e inorgânicos adequados estão descritos acima.

[0098] Veículos farmacêuticos adequados incluem diluentes ou enchimentos sólidos inertes, soluções aquosas estéreis e vários solventes

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25/67 orgânicos. Exemplos de veículos sólidos incluem lactose, terra alba, sacarose, ciclodextrina, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico e éteres de alquila inferior de celulose. Exemplos de veículos líquidos incluem, mas não estão limitados a, xarope, óleo de amendoim, azeite de oliva, fosfolipídeos, ácidos graxos, aminas de ácidos graxos, polioxietileno e água. De forma semelhante, o veículo ou diluente pode incluir qualquer material de liberação sustentada conhecido na técnica, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, sozinho ou misturado com uma cera. As composições farmacêuticas formadas combinando os compostos de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável são prontamente administradas em uma variedade de formas de dosagem adequadas para as vias de administração divulgadas. As formulações podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária por métodos conhecidos na técnica da farmácia.

[0099] Se for usado um veículo sólido para administração oral, a preparação pode ser configurada em comprimidos, colocada em uma cápsula de gelatina dura na forma de pó ou pélete, ou pode estar na forma de um trocisco ou pastilha. A quantidade de veículo sólido irá variar amplamente, mas variará de cerca de 25 mg a cerca de 1 g por unidade de dosagem. Se for usado um veículo líquido, a preparação pode estar na forma de um xarope, emulsão, cápsula de gelatina mole ou líquido injetável estéril tal como uma suspensão ou solução líquida aquosa ou não aquosa.

SEÇÃO EXPERIMENTAL [00100] Os compostos de fórmula I, em que R¹, R² e Ar são como definidos acima, podem ser preparados pelos métodos delineados nos seguintes esquemas reacionais 1-7 e nos exemplos. Nos métodos descritos, é possível usar variantes ou modificações, que são, por si próprias, conhecidas dos químicos

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26/67 peritos na técnica ou que podem ser evidentes para o perito nesta técnica. Adicionalmente, outros métodos de preparação de compostos da invenção serão prontamente evidentes para o perito na técnica à luz dos seguintes esquemas reacionais e exemplos.

[00101] Por exemplo, o Esquema 5 descreve o uso de grupos protetores seletivos durante a síntese dos compostos da invenção. O perito na técnica será capaz de selecionar o grupo protetor apropriado para uma reação particular. Além disso, pode ser necessário incorporar estratégias de proteção e desproteção para substituintes tais como grupos amino, amido, ceto e hidroxila nos métodos sintéticos descritos abaixo para sintetizar os compostos de Fórmula

I. Métodos de proteção e desproteção de tais grupos são bem conhecidas na técnica e podem ser encontradas em T. Green, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 1991, 2½ Edição, John Wiley & Sons, Nova Iorque.

[00102] Para os compostos que podem existir como uma mistura ou em equilíbrio entre dois ou mais tautômeros, apenas um tautômero é representado nos esquemas, embora ele possa não ser o tautômero mais estável. Para os compostos que podem existir em formas enantioméricas, estereoisoméricas ou isoméricas geométricas, a sua configuração geométrica é especificada; caso contrário, a estrutura representa uma mistura de estereoisômeros.

[00103] Os dados analíticos de LC-MS foram obtidos usando os métodos a seguir.

[00104] Método A:

As LC-MS foram realizadas em um UPLC-MS Waters Acquity consistindo em Waters Acquity incluindo um gestor de colunas, gestor de solvente binário, organizador de amostras, detector de PDA (operando a 254 nm), detector de ELS, e SQ-MS equipado com uma fonte de APPI operando em modo de íons

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27/67 positivos.

Condições de LC: A coluna foi uma Acquity UPLC BEH C18 1,7 pm; 2,1x150 mm funcionando a 60 °C com 0,6 mL/minuto de um gradiente binário consistindo em água + ácido trifluoroacético a 0,05% (A) e acetonitrila + água a 5% + ácido trifluoroacético a 0,03% (B). Gradiente: 0,00 min: 10% de B; 3,00 min: 99,9% de B; 3,01 min: 10% de B; 3,60 min: 10% de B. Tempo total da corrida: 3,60 min.

[00105] Método B:

As LC-MS foram realizadas em um Waters Acquity UPLC-MS consistindo de Waters Acquity incluindo um gestor de colunas, gestor de solvente binário, organizador de amostras, detector de PDA (operando a 254 nm), detector de ELS, e TQ-MS equipado com uma fonte de APPI operando em modo de íons positivos.

Condições de LC: A coluna foi uma Acquity UPLC BEH C18 1,7 pm; 2,1x50 mm funcionando a 60 °C com 1,2 mL/minuto de um gradiente binário consistindo em água + ácido trifluoroacético a 0,05% (A) e acetonitrila + água a 5% + ácido trifluoroacético a 0,05% (B). Gradiente: 0,00 min: 10% de B; 1,00 min: 100% de B; 1,01 min: 10% de B; 1,15 min: 10% de B. Tempo total da corrida: 1,15 min.

[00106] Os espectros de RMN de ^XH foram registrados a 600 MHz em um instrumento Bruker Avance AV-lll-600 ou a 400 MHz em um instrumento

Bruker Avance AV-lll-400 ou um instrumento Varian 400. Os valores dos desvios químicos são expressos em valores de ppm relativos. As seguintes abreviaturas são usadas para a multiplicidade de sinais de RMN: s = singleto, d = dubleto, t = tripleto, q = quarteto, dd = duplo dubleto, ddd = duplo duplo dubleto, dt = duplo tripleto, I = largo, e m = multipleto.

[00107] Os compostos de fórmula geral IV podem ser preparados

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28/67 como mostrado no Esquema 1.

em que R¹ é tal como definido na fórmula I e R³ é um hidrogênio ou um grupo nitro.

[00108] Compostos de fórmula geral III (Esquema 1) podem ser preparados por reação de compostos de fórmula geral II com um oxidante tal como bis(acetoxi)iodobenzeno em uma solução de uma base tal como hidróxido de potássio em metanol, seguido de desproteção do dimetilcetal formado. Compostos de fórmula geral IV podem então ser obtidos por substituição da fração hidróxi do composto III por flúor usando procedimentos padrão.

[00109] Os compostos de fórmula geral X podem ser preparados como mostrado no Esquema 2.

Esquema 2

o

II

H₂N'^S'^ztBu

em que R¹ e R² são tal como definidos na fórmula I, R³ é hidrogênio ou um grupo nitro e R⁴e R⁵ são um grupo alquila, tal como metila ou etila.

[00110] Os compostos de fórmula geral VI (Esquema 2) podem ser preparados por reação de compostos de fórmula geral IV com uma sulfinamida

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29/67 tal como V na presença de um ácido de Lewis/agente desidratante tal como tetraetóxido de titânio. O tratamento de compostos de fórmula geral VI com compostos de fórmula geral VII como bromodifluoroacetato de etila na presença de pó de Zn ou na presença de dietilzinco e cloreto de tris(trifenilfosfina)ródio(l) fornece compostos de fórmula geral VIII. Os compostos de fórmula geral IX são obtidos a partir de compostos de fórmula geral VIII por tratamento com um agente redutor tal como hidreto de di-isobutilalumínio. Em alguns casos, o composto IX pode estar em equilíbrio com a forma hidratada. O tratamento de compostos de fórmula geral IX com condições tais como 2-(dimetoxifosforil)acetato de metila na presença de cloreto de lítio e de uma base tal como N,Ndiisopropiletilamina dá origem a compostos de fórmula geral X.

[00111] Um composto de fórmula geral XV pode ser preparado como mostrado no Esquema 3.

Esquema 3

em que R¹ e R² são tal como definidos na fórmula I e R⁵ é um grupo alquila, tal como metila ou etila.

[00112] Os compostos de fórmula geral XI são obtidos por hidrogenação de compostos de fórmula geral X na presença de um catalisador como paládio sobre carvão. Os compostos de fórmula geral XII são obtidos por tratamento de compostos de fórmula geral XI com um ácido tal como ácido

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30/67 clorídrico em metanol seguido por tratamento com uma base tal como trietilamina ou carbonato de potássio em metanol. Compostos de fórmula geral XII (quando R³ é hidrogênio) podem ser nitrados usando ácido nítrico para fornecer compostos de fórmula geral XIII. A redução do grupo nitro de compostos de fórmula geral XIII seguida de proteção da unidade anilina formada (XIV) dá origem a compostos de fórmula geral XV.

[00113] Um composto de fórmula geral XV pode ser preparado como mostrado no Esquema 4.

em que R¹ e R² são tal como definidos na fórmula I e R⁵ é um grupo aIquila, tal como metila ou etila.

[00114] Compostos de fórmula geral XI (quando R³ é um grupo amino) são obtidos por hidrogenação de compostos de fórmula geral X (quando R³ é nitro) na presença de um catalisador tal como paládio sobre carvão. Compostos de fórmula geral XIV são obtidos por tratamento de compostos de fórmula geral XI (quando R³ é um grupo amino) com um ácido tal como ácido clorídrico em metanol seguido por tratamento com uma base tal como trietilamina ou carbonato de potássio em metanol seguido por proteção da fração anilina (XIV) fornece compostos de fórmula geral XV.

[00115] Um composto de fórmula geral XVII pode ser preparado

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31/67 como mostrado no Esquema 5. Esquema 5

XV XVI XVII em que R¹ e R² são tal como definidos na fórmula I [00116] O tratamento de compostos de fórmula geral XV com um reagente tal como o reagente de Lawesson (2,4-bis(4-metoxifenil)-l,3,2,4ditiadifosfetano-2,4-dissulfeto) seguido de desproteção dá origem a compostos de fórmula geral XVII.

[00117] Um composto de fórmula geral XVII pode ser preparado como mostrado no Esquema 6.

Esquema 6

XIII XXI XVII em que R¹ e R² são tal como definidos na fórmula I [00118] O tratamento de compostos de fórmula geral XIII com um reagente tal como o reagente de Lawesson, (2,4-bis(4-metoxifenil)-l,3,2,4ditiadifosfetano-2,4-dissulfureto), dá origem a compostos de fórmula geral XXI. Compostos de fórmula geral XVII podem ser obtidos por redução de compostos de fórmula geral XXI com um redutor tal como ditionito de sódio ou com hidrogênio na presença de um catalisador tal como paládio sobre carvão.

[00119] Os compostos de fórmula geral I podem ser preparados como mostrado no Esquema 7.

Esquema 7

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em que R¹, R² e Ar são tal como definidos na fórmula I.

[00120] Os compostos da fórmula geral XX podem ser preparados por reação de compostos da fórmula geral XVII com um cloreto de ácido carboxílico da fórmula geral XVIII ou por reação com um ácido carboxílico da fórmula geral XIX usando procedimentos conhecidos por químicos peritos na técnica. O tratamento de compostos da fórmula geral XX com amônia fornece compostos da fórmula geral I. Em alguns casos, pode ser necessário adicionar um reagente oxidante tal como hidroperóxido de terc-butila para facilitar a reação.

PREPARAÇÃO DE INTERMEDIÁRIOS INTERMEDIÁRIO: 2-(2-fluorofenil)-2,2-dimetoxietan-l-ol

[00121] A uma mistura de hidróxido de potássio (91,4 g, 1,63 mol) em metanol (1L) se adicionou uma solução de l-(2-fluorofenil)etan-l-ona (50 g, 362 mmol) em metanol (300 mL) de um modo gota a gota a 0 °C. Então se adicionou bis(acetoxi)iodobenzeno (175 g, 543 mmol) em porções. Após agitação a 0 °C durante 4 horas, a reação foi extinta com a adição de água (500 mL). A mistura foi concentrada para remover metanol e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (700 mL, três vezes), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas. O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional.

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33/67 [00122] 2-(2,3-difluorofenil)-2,2-dimetoxietan-l-ol foi preparado de um modo similar a partir de l-(2,3-difluorofenil)etan-l-ona.

INTERMEDIÁRIO: l-(2-fluorofenil)-2-hidroxietan-l-ona

[00123] 2-(2-Fluorofenil)-2,2-dimetoxietan-l-ol (bruto, 362 mmol) foi dissolvido em THF (450 mL) e água (150 mL). Então se adicionou em porções ácido p-toluenossulfônico (125 g, 726 mmol) à temperatura ambiente. Após a adição, a mistura foi agitada sob refluxo durante 5 horas. Adicionou-se água (150 mL) e NaHCO3 sat. para interromper a reação, a mistura foi extraída com acetato de etila (500 mL, três vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas com Na2SO4. Após remoção dos solventes sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com éter de petróleo: acetato de etila = 20:1, dando origem a l-(2-fluorofenil)-2-hidroxietan1-ona (42 g, 76% de rendimento, dois passos).

[00124] l-(2,3-difluorofenil)-2-hidroxietan-l-ona foi preparado de um modo similar a partir de 2-(2,3-difluorofenil)-2,2-dimetoxietan-l-ol.

INTERMEDIÁRIO: 2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etan-l-ona o o

[00125] A uma solução de l-(2-fluorofenil)-2-hidroxietan-l-ona (10 g, 64,88 mmol) em diclorometano (200 mL) se adicionou Et3N(HF)3 (10,46 g, 227,8 mmol) e CF3(CF2)3SO2F (29,4 g, 97,32 mmol) gota a gota a 0 °C, a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. Uma CCF (éter de petróleo:acetato de etila=10:l) não mostrou qualquer material de partida. A mistura foi vertida em uma solução saturada de NaHCO3 e gelo, extraída com diclorometano (200 mL três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram

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34/G7 lavadas com salmoura, então secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluída com éter de petróleo: acetato de etila = 1:0-10:1), dando origem a 2fluoro-l-(2-fluorofenil)etan-l-ona (6 g, rendimento: 59%).

[00126] l-(2,3-difluorofenil)-2-fluoroetan-l-ona foi preparado de um modo similar a partir de l-(2,3-difluorofenil)-2-hidroxietan-l-ona.

INTERMEDIÁRIO: (/?)-/V-(2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etilideno)-2metilpropano-2-sulfinamida

[00127] A uma solução de 2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etan-l-ona (6 g, 38,43 mmol) e Ti(0Et)4 (17,53 g, 76,86 mmol) em THF (100 mL) se adicionou (/?)2-metilpropano-2-sulfinamida (5,59 g, 46,12 mmol), a solução foi agitada a 70 °C durante 12 h. CCF (éter de petróleo: acetato de etila = 10:1) não revelou qualquer material de partida. A mistura foi extinta com água (200 mL), então filtrada e extraída com acetato de etila (200 mL, quatro vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluída com éter de petróleo: acetato de etila = 1:0 10:1), dando origem a (/?)-/V-(2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etilideno)-2metilpropano-2-sulfinamida (6,9 g, rendimento: 69%).

[00128] (/?)-/V-(l-(2,3-difluorofenil)-2-fluoroetilideno)-2metilpropano-2-sulfinamida foi preparado de um modo similar a partir de 1-(2,3difluorofenil)-2-fluoroetan-l-ona.

INTERMEDIÁRIO: (S)-3-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-2,2,4-trifluoro-3-(2fluorofenil)butanoato de etila

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[00129] A uma solução de (/?)-/V-(2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etilideno)2-metilpropano-2-sulfinamida (10 g, 38,6 mmol), cloreto de tris(trifenilfosfina)ródio(l) (1,01 g, 1,2 mmol) e 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etila (15,7 g, 77,1 mmol) em THF anidro (200 mL) se adicionou gota a gota Et2Zn (77,1 mL, 1 M em hexano, 77,1 mmol) a -78 °C, a solução foi agitada a 0 °C durante 1 hora sob N2. CCF (éter de petróleo: acetato de etila = 10:1) não revelou (/?)-/V-(2-fluoro-l-(2-fluorofenil)etilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida. A mistura foi extinta com água (100 mL), filtrada e extraída com acetato de etila (200 mL, três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluída com éter de petróleo: acetato de etila = 20:1 - 5:1), dando origem a (S)-3-(((/?)-tercbutilsulfinil)amino)-2,2,4-trifluoro-3-(2-fluorofenil)butanoato de etila (13 g, rendimento: 88%) na forma de um óleo amarelo. ^XH RMN (CDCb, 400MHz): δ 7,59-7,57 (m, 1H), 7,44-7,42 (m, 1H), 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,14-7,10 (m, 1H), 5,52-5,37 (m, 1H), 5,24-5,10 (m, 2H), 4,35 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,36-1,23 (m, 12H).

[00130] (S)-3-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-3-(2,3-difluorofenil)2,2,4-trifluorobutanoato de etila foi preparado de um modo similar a partir de (/?)-/V-(l-(2,3-difluorofenil)-2-fluoroetilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida.

INTERMEDIÁRIO: (/?)-2-metil-/V-((S)-l,3,3-trifluoro-2-(2-fluorofenil)-4oxobutan-2-il)propano-2-sulfinamida

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[00131] A uma solução de (S)-3-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-2,2,4trifluoro-3-(2-fluorofenil)butanoato de etila (12 g, 31,30 mmol) em THF anidro (200 mL) se adicionou gota a gota, a -78 °C, DIBAL-H (hidreto de diisobutilalumínio) (62,6 mL, 1 M em THF, 62,6 mmol). A solução foi agitada a -78 °C durante 2 horas sob N2. A mistura foi extinta com água (100 mL), filtrada e extraída com acetato de etila (200 mL, quatro vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida, dando origem a (/?)-2-metil-/V-((S)-l,3,3-trifluoro-2-(2fluorofenil)-4-oxobutan-2-il)propano-2-sulfinamida bruto (10,6 g) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

[00132] (/?)-/V-((S)-2-(2,3-difluorofenil)-l,3,3-trifluoro-4-oxobutan-2il)-2-metilpropano-2-sulfinamida foi preparado de um modo similar a partir de (S)-3-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-3-(2,3-difluorofenil)-2,2,4-trifluorobutanoato de etila.

INTERMEDIÁRIO: (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6-trifluoro-5-(2fluorofenil)hex-2-enoato de metila

F HN'%

F HN'%

CO₂Me [00133] A uma mistura de /V,/V-di-isopropiletilamina (4,8 g, 37,49 mmol) e UCI (1,6 g, 37,49 mmol) em acetonitrila (200 mL) se adicionou 2(dimetoxifosforil)-acetato de metila (7,9 g, 37,49 mmol), então se adicionou (/?)Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 48/79

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2-metil-/V-((S)-l,3,3-trifluoro-2-(2-fluorofenil)-4-oxobutan-2-il)propano-2sulfinamida (10,6 g, 31,24 mmol) à mistura a 0 °C. A mistura foi deixada aquecer para 25 °C e agitada durante 12 horas. Uma CCF (éter de petróleo:acetato de etila=3:l) não mostrou qualquer material de partida. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi extraído com acetato de etila (500 mL, três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 5:1 - 1:1), dando origem a (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6-trifluoro-5(2-fluorofenil)hex-2-enoato de metila (8 g, rendimento: 75%, dois passos).

[00134] Sulfinamida de (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-5-(2,3difluorofenil)-4,4,6-trifluoro-hex-2-enoato de metila foi preparado de um modo similar a partir de (/?)-/V-((S)-2-(2,3-difluorofenil)-l,3,3-trifluoro-4-oxobutan-2il)-2-metilpropano-2-sulfinamida.

INTERMEDIÁRIO: (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6-trifluoro-5-(2fluorofenil)hexanoato de metila

[00135] A uma solução de (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6trifluoro-5-(2-fluorofenil)hex-2-enoato de metila (8 g, 20,23 mmol) em acetato de etila (1000 mL) se adicionou Pd/C (5 g, 10%). A mistura foi agitada a 30 °C sob 50 psi de Hk durante 12 h. LCMS não revelou qualquer material de partida. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida, dando origem a (S)-5(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6-trifluoro-5-(2-fluorofenil)hexanoato de metila bruto (8,04 g) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 49/79

38/67 [00136] (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-5-(2,3-difluorofenil)4,4,6-trifluoro-hexanoato de metila foi preparado de um modo similar a partir de sulfinamida de (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-5-(2,3-difluorofenil)-4,4,6trifluoro-hex-2-enoato de metila.

INTERMEDIÁRIO: (S)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)-6-(2-fluorofenil)piperidin2-ona

[00137] A uma solução de (S)-5-(((/?)-terc-butilsulfinil)amino)-4,4,6trifluoro-5-(2-fluorofenil)hexanoato de metila (8,0 g, 20,13 mol) em metanol (200 mL) se adicionou HCI/metanol (100 mL), a solução foi agitada a 20 °C durante 2 h. CCF (éter de petróleo: acetato de etila = 3:1) não revelou qualquer material de partida. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em xileno (200 mL), então à solução se adicionou Et3N (5 mL). A solução foi agitada a 110 °C durante 12 h sob N2. O solvente foi removido sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluída com éter de petróleo: acetato de etila = 3:1 - 0:1), dando origem a (S)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)-6-(2-fluorofenil)piperidin-2-ona (4,1 g, 77% de rendimento ao longo de dois passos). ^ΧΗ RMN (CDCI3, 400MHz): δ 7,55-7,53 (m, 1H), 7,48-7,46 (m, 1H), 7,31-7,29 (m, 1H), 7,20-7,17 (m, 1H), 6,49 (s, 1H), 5,255,22 (m, 1H), 5,13-5,11 (m, 1H), 2,75-2,71 (m, 2H), 2,36-2,28 (m, 2H).

[00138] (S)-6-(2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidin2-ona foi preparado de um modo similar a partir de (S)-5-(((/?)-tercbutilsulfinil)amino)-5-(2,3-difluorofenil)-4,4,6-trifluoro-hexanoato de metila.

INTERMEDIÁRIO: (S)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)-6Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 40/79

39/67 (fluorometil)piperidin-2-ona ο

ο,

F

F [00139] (S)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)-6-(2-fluorofenil)piperidin-2ona (3,5 g, 13,4 mmol) foi dissolvido em TFA (23 mL). A solução foi resfriada para 0 °C e se adicionou H2SO4 concentrado (5,5 mL). Por fim, HNO3 65% (1,0 mL, 14,7 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min. A solução foi agitada a 0 °C durante 10 min. LCMS não revelou qualquer material de partida. A solução foi vertida em 50 g de gelo e basificada para pH>ll usando NaOH 5 N. A suspensão foi extraída com acetato de etila (200 mL), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução de NH4CI aquoso saturado (50 mL) e água (100 mL), então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida, dando origem a: (S)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)-6-(fluorometil)piperidin-2ona (4 g, 98% de rendimento). ^ΧΗ RMN (DMSO-c/6,400MHz): δ 8,73 (s, 1H), 8,418,34 (m, 2H), 7,64-7,59 (m, 1H), 5,35-5,20 (m, 1H), 4,92-4,78 (m, 1H), 2,57-2,50 (m, 2H), 2,34-2,30 (m, 2H).

[00140] (S)-6-(2,3-difluoro-5-nitrofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidin-2-ona foi preparado de um modo similar a partir de (S)-6(2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidin-2-ona.

INTERMEDIÁRIO: (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidin-2-ona [00141] A uma solução de (S)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)-6(fluorometil)piperidin-2-ona (4 g, 13,06 mmol) em acetato de etila (200 mL) se

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40/67 adicionou Pd/C (2 g, 10%), a mistura foi agitada a 30 °C durante 12 h sob 50 psi de Hk. LCMS não revelou qualquer material de partida. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida, dando origem a (S)-6-(5-amino-2fluorofenil)-5,5-difluoro-6-fluorometil)piperidin-2-ona bruto (3,6 g) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

INTERMEDIÁRIO: (S)-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-oxopiperidin-2-il)-4fluorofenil)carbamato de terc-butila

Boc^- [00142] A uma solução de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro6-(fluorometil)piperidin-2-ona (3,6 g, 13,03 mmol) em diclorometano anidro (100 ml_) e NaHCCh aquoso saturado (72 ml_) se adicionou BOC2O (8,53 g, 39,09 mmol), a solução foi agitada a 20 °C durante 12 horas. A mistura foi extinta com água (50 ml_) e extraída com diclorometano (100 ml_, três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 20:1 -10:1), dando origem a (S)-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-oxopiperidin-2-il)-4fluorofenil)carbamato de terc-butila (4,9 g, 94% de rendimento ao longo de dois passos). ^XH RMN (DMSO-d6, 400MHz): δ 9,51 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,66-7,65 (m, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,16-7,11 (m, 1H), 5,22 (dd, J = 48,0, 9,2 Hz, 1H), 4,69 (dd, J = 48,0, 9,2 Hz, 1H), 2,50-2,16 (m, 4H), 1,46 (s, 9H).

INTERMEDIÁRIO: (S)-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)4-fluorofenil)carbamato de terc-butila

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41/67

[00143] A uma solução de (S)-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6oxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)carbamato de íerc-butila (2,3 g, 6,11 mmol) em tolueno anidro (50 mL) se adicionou reagente de Lawesson (2,4-bis(4metoxifenil)-l,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-dissulfeto) (1,36 g, 3,36 mmol), a solução foi agitada a 90 °C durante 12 h sob N2. CCF (éter de petróleo: acetato de etila = 3:1) não revelou quaisquer materiais de partida. A solução foi extraída com acetato de etila (50 mL três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 10:1 - 3:1), dando origem a (S)-(3-(3,3difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)carbamato de tercbutila (2,15 g, rendimento: 90%).

INTERMEDIÁRIO: (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona

[00144] A uma solução de (S)-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)carbamato de terc-butila (5,5 g, 14,02 mmol) em diclorometano (100 mL) se adicionou HCI/metanol (50 mL), a solução foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Uma CCF (éter de petróleo:acetato de etila=2:1) não mostrou qualquer material de partida. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em diclorometano (50 mL), a solução foi basificada para pH=7-8 usando NaHCCh aquoso saturado, a solução foi extraída

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42/S7 com diclorometano (100 mL, três vezes), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, então secas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi disperso em diclorometano (20 mL), então filtrado, o filtrado foi seco sob pressão reduzida, dando origem a (S)-6-(5-amino2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona (1,74 g) na forma de um sólido branco, ^XH RMN (DMSO-c/6, 400 MHZ): δ 10,69 (s, 1H), 6,92-6,87 (m, 1H), 6,60-6,58 (m, 1H), 6,51-6,49 (m, 1H), 5,35-5,33 (m, 1H), 5,23-5,18 (m, 2H), 4,72 (dd, J = 48,0,10,0 Hz, 1H), 3,29-2,92 (m, 2H), 2,24-2,19 (m, 2H), [a]²⁰,D = 192 (c = 0,1 g/100 mL, EtOH).

INTERMEDIÁRIO: (S)-6-(2,3-difluoro-5-nitrofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona

[00145] Adicionou-se Reagente de Lawesson (0,81 g, 2,0 mmol) a (S)6-(2,3-difluoro-5-nitrofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidin-2-ona (0,59 g, 1,82 mmol) em tolueno (25 mL). A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e vertida em NaHCO3 (aq) sat. A mistura foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca com MgSÜ4 e concentrada in vacuo. O material bruto foi purificado via cromatografia flash com sílica-gel (acetato de etila/heptano), dando origem a (S)-6-(2,3-difluoro-5-nitrofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona (0,58 g 65% de pureza, 61% de rendimento).

INTERMEDIÁRIO: (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona

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43/67 s,

-σ

F

F s,

F

F [00146] Ditionito de sódio (1,16 g, 6,65 mmol) e carbonato de potássio (0,459 g, 3,32 mmol) foram dissolvidos em água (5,00 g, 5 mL, 278 mmol). A mistura reacional foi resfriada para 0 °C. Adicionou-se gota a gota (S)6-(2,3-difluoro-5-nitrofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona (0,58 g, 1,11 mmol, 65% de pureza) em etanol (5 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Adicionou-se água. A mistura foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca com MgSCU e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila e filtrado através de um tampão de sílica-gel e concentrado in vacuo. O material bruto foi purificado via cromatografia flash com sílica-gel (acetato de etila/heptano), dando origem a (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona (105 mg, 35%)

INTERMEDIÁRIO: 5-(metoxi-d3)picolinato de metila

HO.

O

O [00147] Dissolveu-se 5-hidroxipicolinato de metila (2,88 g, 18,8 mmol) em dimetilformamida (108 mL) sob argônio. Adicionou-se carbonato de potássio (7,20 g, 52,1 mmol) e se agitou a suspensão laranja durante 45 minutos à temperatura ambiente. Adicionou-se iodometano-Gfe (1,41 mL, 22,6 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 2 horas. Adicionou-se água. A mistura foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com solução saturada de cloreto de sódio, seca com MgSCU e concentrada em vácuo, e purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (heptano:acetato de etila) para dar

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44/67 origem ao 5-(metoxi-c/3)picolinato de metila.

INTERMEDIÁRIO: ácido 5-(metoxi-d3)picolínico D,C'° D,C'°

O

OH

O *» [00148] Dissolveu-se 5-(metoxi-c/3)picolinato de metila (200mg, 1,175 mmol) em água (1,5 mL) e 1,4-dioxano (3 mL). Adicionou-se hidróxido de lítio (70,4 mg, 2,94 mmol) e se agitou a mistura reacional durante 1 hora. A mistura reacional foi evaporada até cerca de 2 mL e extraída com éter dietílico. A fase orgânica foi extraída com NaOH 1M e as fases aquosas combinadas acidificadas a pH 2 com HCI 6N (aq). A mistura foi resfriada em um banho de gelo e se formou um precipitado. O precipitado foi coletado para dar origem ao ácido 5-(metoxid3)picolínico

PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS DA INVENÇÃO

Exemplo 1 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cloropicolinamida (composto 1)

[00149] A uma solução de ácido 5-cloropicolínico (0,243 g, 1,540 mmol) em DMF (12 mL) se adicionou HATU (hexafluorofosfato de 1[bis(dimetilamino)metileno]-lH-l,2,3-triazol[4,5-b]piridínio 3-óxido) (0,86 g, 2,3 mmol), a solução foi agitada durante 5 minutos. Então se adicionaram (S)-6-(5amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6-fluorometil)piperidino-2-tiona (0,3 g, 1,026 mmol) e DIPEA (/V,/V-di-isopropiletilamina) (0,90 mL, 5,1 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por uma noite. Adicionou-se cloreto de amônio

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45/57 aquoso saturado e a mistura foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca com MgSCU, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (heptano: acetato de etila), dando origem a (S)-5-cloro-/V-(3-(3,3-difluoro-2(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)picolinamida, que foi dissolvido em amônia 7 M em metanol (12 mL). A mistura foi agitada a 50 °C durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em coluna com sílica-gel (heptano: acetato de etila), dando origem a (S)-/V-(3-(6amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5-tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5cloropicolinamida (0,23 g, 55% de rendimento). ^XH RMN (600 MHz, DMSO-c/6) δ 10,75 (s, 1H), 8,80 (dd, J = 2,4, 0,6 Hz, 1H), 8,21 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 8,16 (dd, J = 8,4, 0,6 Hz, 1H), 7,89 (ddd, J = 11,7, 6,6, 3,8 Hz, 1H), 7,86 (dd, J = 6,6, 2,4 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 11,7, 8,8 Hz, 1H), 6,10 (s, 2H), 5,02 - 4,88 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 45,9,8,8 Hz, 1H), 2,53 - 2,50 (m, 2H), 2,18-1,97 (m, 2H). LC-MS (m/z) 415 (MH⁺); ír = 0,52 minutos (Método A) [00150] Os seguintes compostos foram preparados de forma semelhante ao exemplo 1:

Exemplo 2 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-fluoropicolinamida (composto 2)

[00151] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-fluoropicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,85 (s, 1H), 8,76 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,26 (dd, J = 8,6,4,4 Hz,

1H), 8,15 (m, 1H), 8,00 (td, J = 8,7, 2,8 Hz, 2H), 7,33 (dd, J = 11,8, 9,1 Hz, 1H), 5,15

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46/67 (ddd, J = 54,9, 46,5, 9,2 Hz, 2H), 2,58 - 2,46 (m, 2H), 2,46 - 2,23 (m, 2H). LC-MS (m/z) 399,2 (MH⁺); ír = 0,49 minutos (Método B)

Exemplo 3 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoxipirazino-2-carboxamida (composto

3) o^Z )=\

[00152] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-metoxipirazino-2carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,71 (s, 1H), 8,91 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 8,06 (m, 1H), 7,98 (m, 1H), 7,29 (dd, J = 11,6, 9,1 Hz, 1H), 5,11 (ddd, J = 94,4,46,2, 8,7 Hz, 2H), 4,03 (s, 3H), 2,55 - 2,48 (m, 2H), 2,42 - 2,19 (m, 2H). LC-MS (m/z) 412 (MH⁺); ír = 0,47 minutos (Método A)

Exemplo 4 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-l-(difluorometil)-lH-pirazol-3-carboxamida (composto 4)

[00153] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido l-(difluorometil)-lH-pirazol-3carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,46 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,7 Hz, 1H),

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8,04 - 7,76 (m, 3H), 7,15 (dd, J = 11,7, 8,6 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,16 (s, 2H), 5,06 - 4,72 (m, 2H), 2,54 - 2,49 (m, 2H), 2,20 -1,98 (m, 2H). LC-MS (m/z) 420 (MH⁺); t_R = 0,46 minutos (Método A)

Exemplo 5 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-2-(difluorometil)oxazol-4-carboxamida (composto 5)

[00154] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 2-(difluorometil)oxazol-4carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,54 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,86 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,21 (m, 2H), 5,04 (dd, J = 94,5, 46,0 Hz, 2H), 2,55 - 2,49 (m, 2H), 2,24 (dd, J = 68,4, 4,9 Hz, 2H). LC-MS (m/z) 421 (MH⁺); t_R = 0,46 minutos (Método A)

Exemplo 6 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cianopicolinamida (composto 6)

[00155] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-cianopicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,95 (s, 1H), 9,21 (dd, J = 2,0, 0,8 Hz, 1H), 8,59 (dd, J = 8,2,

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2,0 Ηζ, 1Η), 8,29 (dd, J = 8,2, 0,8 Hz, 1H), 8,03 - 7,90 (m, 2H), 7,23 (s, 1H), 4,97 (dd, J = 94,5, 45,1 Hz, 2H), 2,54 - 2,48 (m, 2H), 2,29 - 2,03 (m, 2H). LC-MS (m/z) 406 (MH⁺); ír = 0,47 minutos (Método A)

Exemplo 7 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-2-metiloxazol-4-carboxamida (composto 7)

[00156] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 2-metiloxazol-4-carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) do sal do ácido trifluoracético δ 10,97 (s, 1H), 10,38 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,09 (m, 1H), 7,94 (dd, J = 7,0, 2,5 Hz, 1H), 7,32 (dt, J = 12,1, 9,0 Hz, 1H), 5,37 - 4,99 (m, 2H), 3,10 - 2,96 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,49 - 2,31 (m, 2H).LC-MS (m/z) 385 (MH⁺); ír = 0,43 minutos (Método A)

Exemplo 8 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoxipirimidino-2-carboxamida (composto 8)

[00157] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-metoxipirimidino-2carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) do sal do ácido trifluoracético δ 10,89 (s,

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1Η), 10,81 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,74 (s, 2H), 8,16 (ddd, J = 8,9, 4,0, 2,7 Hz, 1H), 7,99 (dd, J = 7,0, 2,5 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 12,1, 9,0 Hz, 1H), 5,21 (ddd, J = 55,4, 45,9,10,0 Hz, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,11 - 2,97 (m, 2H), 2,50 - 2,31 (m, 2H). LC-MS (m/z) 412 (MH⁺); t_R = 0,42 minutos (Método A)

Exemplo 9 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(difluorometil)pirazino-2-carboxamida (composto 9)

[00158] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-(difluorometil)pirazino-2carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) do sal do ácido trifluoracético δ 11,14 (s, 1H), 11,00 (s, 1H), 9,72 (s, 1H), 9,42 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 9,18 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,19 (ddd, J = 8,9, 3,9, 2,7 Hz, 1H), 8,06 (dd, J = 7,0, 2,5 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 12,0, 9,0 Hz, 1H), 7,28 (t, J = 53,9 Hz, 1H), 5,21 (ddd, J = 55,5, 46,0, 10,0 Hz, 2H), 3,12 - 2,97 (m, 2H), 2,51 - 2,32 (m, 2H). LC-MS (m/z) 432 (MH⁺); t_R = 0,48 minutos (Método A)

Exemplo 10 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-2-metiloxazol-4-carboxamida (composto 10)

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50/67 [00159] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 2-metiloxazol-4-carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,44 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,96 (ddd, J = 12,2, 6,6,

2,6 Hz, 1H), 7,69 - 7,65 (m, 1H), 6,17 (s, 2H), 4,87 (td, J = 46,0, 8,9 Hz, 2H), 2,55 - 2,49 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,19 -1,96 (m, 2H). LC-MS (m/z) 403 (MH⁺); t_R = 0,46 minutos (Método A)

Exemplo 11 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-metoxipirazino-2-carboxamida (composto 11)

[00160] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-metoxipirazino-2carboxílico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,77 (s, 1H), 8,89 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,03 (ddd, J = 12,0, 6,6, 2,4 Hz, 1H), 7,79 - 7,71 (m, 1H), 6,18 (s, 2H), 5,03 - 4,70 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 2,55 - 2,49 (m, 2H), 2,23 -1,95 (m, 2H). LC-MS (m/z) 430 (MH⁺); t_R = 0,52 minutos (Método A)

Exemplo 12 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida (composto 12)

[00161] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-fluoropicolínico. ^XH RMN

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51/67 (600 MHz, DMSO) δ 10,89 (s, 1H), 8,74 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,24 (dd, J = 8,7,4,6 Hz, 1H), 8,06 (m, 1H), 7,99 (td, J = 8,7, 2,8 Hz, 1H), 7,76 - 7,72 (m, 1H), 6,23 (s, 2H), 4,98 - 4,81 (m, 2H), 2,52 - 2,50 (m, 2H), 2,22 - 1,97 (m, 2H). LC-MS (m/z) 417 (MH⁺); tR = 0,52 minutos (Método A)

Exemplo 13 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-cloropicolinamida (composto 13)

[00162] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-cloropicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,96 (s, 1H), 8,79 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,22 - 8,14 (m, 2H), 8,12 8,04 (m, 1H), 7,75 (s, 1H), 6,38 (s, 2H), 5,04 - 4,80 (m, 2H), 2,56 - 2,49 (m, 2H), 2,11 (m, 2H). LC-MS (m/z) 433 (MH⁺); ír = 0,55 minutos (Método A)

Exemplo 14 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-cianopicolinamida (composto 14)

[00163] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-cianopicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 11,10 (s, 1H), 9,22 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,60 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 8,30 (dd, J = 13,0, 4,9 Hz, 1H), 8,06 (ddd, J = 12,0, 6,6, 2,5 Hz, 1H), 7,80 7,76 (m, 1H), 6,18 (s, 2H), 5,00 - 4,77 (m, 2H), 2,51 (dd, J = 3,5,1,7 Hz, 2H), 2,20 -1,99 (m, 2H). LC-MS (m/z) 424 (MH⁺); ír = 0,49 minutos (Método B)

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52/67

Exemplo 15 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-metoxipicolinamida (composto 15) /

o_v

o

[00164] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-metoxipicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,72 (s, 1H), 8,40 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 8,05 (ddd, J = 12,2, 6,6, 2,4 Hz, 1H), 7,73 - 7,68 (m, 1H), 7,63 (dd, J = 8,7, 2,9 Hz, 1H), 6,15 (s, 2H), 4,99 -4,77 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,55 - 2,47 (m, 2H), 2,20 -1,98 (m, 2H). LC-MS (m/z) 429 (MH⁺); t_R = 0,51 minutos (Método B)

Exemplo 16 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-(metoxi-c/3)picolinamida (composto 16)

[00165] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-(metoxi-c/3)picolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,72 (s, 1H), 8,40 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,7 Hz,

1H), 8,05 (ddd, J = 12,2, 6,6, 2,6 Hz, 1H), 7,73 - 7,69 (m, 1H), 7,62 (dd, J = 8,7, 2,9 Hz, 1H), 6,17 (s, 2H), 5,00 - 4,75 (m, 2H), 2,20 - 2,00 (m, 2H). LC-MS (m/z) 432,1 (MH⁺); t_R = 0,54 (Método B)

Exemplo 17 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4,5-difluorofenil)-5-ciano-3-metilpicolinamida (composto

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17)

[00166] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-ciano-3-metilpicolínico. ^XH

RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,98 (s, 1H), 9,00 (dd, J = 1,9, 0,6 Hz, 1H), 8,42 (dd, J = 1,9, 0,7 Hz, 1H), 8,12 - 7,99 (m, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,19 (s, 2H), 4,88 (ddd, J = 54,2,46,8,8,0 Hz, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,24 -1,99 (m, 2H). LC-MS (m/z) 438,1 (MH⁺); tR = 0,55 (Método B)

Exemplo 18 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoxi-c/3)picolinamida (composto 18)

[00167] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-(metoxi-d3)picolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,52 (s, 1H), 8,39 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,7 Hz,

1H), 7,92 - 7,88 (m, 1H), 7,84 (dd, J = 6,9, 2,7 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,7, 2,9 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 11,8, 8,8 Hz, 1H), 6,11 (s, 2H), 5,02 - 4,88 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 46,0,8,9 Hz, 1H), 2,18 -1,96 (m, 2H). LC-MS (m/z) 414,1 (MH⁺); t_R = 0,49 (Método

B)

Exemplo 19 (S)-/V-(3-(6-amino-3,3-difluoro-2-(fluorometil)-2,3,4,5tetraidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-bromopicolinamida (composto 19)

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[00168] Preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-bromopicolínico. ^XH RMN (600 MHz, DMSO) δ 10,74 (s, 1H), 8,87 (dd, J = 2,3, 0,7 Hz, 1H), 8,33 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 8,4, 0,6 Hz, 1H), 7,90 (ddd, J = 8,7, 4,0, 2,9 Hz, 1H), 7,86 (dd, J = 6,9, 2,7 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 11,8, 8,8 Hz, 1H), 6,10 (s, 2H), 4,95 (ddd, J = 48,4, 8,8, 2,5 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 46,0, 8,9 Hz, 1H), 2,52 - 2,48 (m, 2H), 2,18 1,95 (m, 2H). LC-MS (m/z) 459,1 (MH⁺); t_R = 0,53 (Método B)

Estereoquímica [00169] Obtiveram-se cristais por recristalização de (S)-5-bromo-/V(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)picolinamida a partir de uma mistura de heptano e acetato de etila. A estrutura de (S)-5bromo-/V-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4fluorofenil)picolinamida foi elucidada por cristalografia de raios X dos referidos cristais. A estrutura mostra a configuração absoluta de (S)-5-bromo-/V-(3-(3,3difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)picolinamida. (S)-5Bromo-/V-(3-(3,3-difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4fluorofenil)picolinamida foi preparado como descrito no exemplo 1 partindo de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e ácido 5-bromopicolínico.

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Figura 1: Estrutura de raios X do (S)-5-bromo-/V-(3-(2-(difluorometil)-3,3difluoro-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)picolinamida [00170] As configurações absolutas dos compostos exemplificados da presente invenção podem assim ser racionalizadas. (S)-5-Bromo-/V-(3-(3,3difluoro-2-(fluorometil)-6-tioxopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)picolinamida foi preparado a partir de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro-6(fluorometil)piperidino-2-tiona que é material de partida para os compostos 1-9 exemplificados e composto 18 exemplificado da presente invenção. Os restantes compostos exemplificados da presente invenção foram preparados a partir de (S)-6-(5-amino-2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona. (S)-6-(5-Amino-2,3-difluorofenil)-5,5-difluoro-6-(fluorometil)piperidino-2-tiona foi preparado pelo mesmo método de (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-5,5-difluoro6-(fluorometil)piperidino-2-tiona e, assim, deve ter a mesma estereoquímica absoluta e relativa.

Testes Farmacológicos

Ensaio de ligação à BACE1 [00171] O ensaio de ligação foi realizado como ensaio à base de SPA, usando uma forma biotinilada da BACE1 humana recombinantemente expressa e posteriormente purificada a partir de células HEK293 Freestyle. O ensaio de ligação foi realizado em tampão acetato de sódio 50 mM, pH 4,5, contendo NaCl 50 mM e Tween-20 a 0,03%, em placas brancas de fundo transparente de 384

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56/67 poços (Corning #3653). O radioligando ([³H]-/V-((lS,2/?)-l-benzil-3ciclopropilamino-2-hidroxipropil)-5-(metanossulfonilmetilamino)-/V-((/?)-lfeniletil)-isoftalamida) (TRQ11569 comprado de GE Healthcare) 10 nM (concentração final) foi misturado com o composto de teste a uma determinada concentração, BACE1 humana 6 nM (concentração final) e 25 pg de Esferas SPA com núcleo de PVT e revestidas com estreptavidina (RPNQ0007, GE Healthcare Life Sciences) em um volume total de 40 pL. Várias concentrações de cada composto de teste foram testadas no ensaio para determinação da ICso. As placas foram incubadas durante uma hora à temperatura ambiente e contadas em um contador Wallac Trilux. As ligações total e não específica foram determinadas usando tampão e o inibidor da BACE1 de referência de alta afinidade (S)-6-[3-cloro-5-(5-prop-l-inil-piridin-3-il)-tiofen-2-il]-2-imino-3,6dimetiltetraidropirimidin-4-ona 1 pM (concentração final), respectivamente. Para cada composto de teste, foi determinado um valor de ICso (a concentração que medeia 50% de inibição da ligação específica do radioligando) a partir da curva de concentração-resposta e usado para calcular a K, a partir da equação Ki= ICso/(l+L/Kd), em que L e Kd são a concentração final do radioligando usado no ensaio e a constante de dissociação do radioligando, respectiva mente. A Kd do radioligando foi determinada a partir de experimentos de ligação de saturação.

Tabela 1: afinidade de ligação de compostos selecionados

Composto N°	Ki (nM) para a BACE1
1	5,7
2	22
3	13

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4	25
5	15
6	20
7	32
8	29
9	30
10	55
11	14
12	84
13	22
14	23
15	9
16	21
17	16
18	25
19	11

Ensaio da eficácia contra a BACE1 [00172] O ensaio de eficácia foi realizado como um ensaio à base de FRET usando um kit de BACE1 comercialmente disponível (Life Technologies, P2985). 2 pL do composto de teste 10 μΜ (concentração final) e 15 pL da enzima BACE1 do kit (concentração final 3 nM) foram pré-incubados durante 15 minutos à temperatura ambiente antes da adição de 15 pL de substrato do kit (concentração final 250 nM), e incubados durante mais 90 minutos à temperatura ambiente. A placa de ensaio foi posteriormente lida em um Pherastar (Ex540/Em590). A atividade enzimática observada na presença do composto de teste foi normalizada para a atividade enzimática observada na presença de tampão e do inibidor da BACE1 de referência de alta afinidade, (S)Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 69/79

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6-[3-Cloro-5-(5-prop-l-inil-piridin-3-il)-tiofen-2-il]-2-imino-3,6-dimetiltetraidropirimidin-4-ona 10 μΜ (concentração final), respectivamente. A eficácia dos compostos de teste foi avaliada a 10 μΜ (concentração final) e definida como a porcentagem de inibição da atividade enzimática usando a equação % de inibição = 100% - atividade enzimática normalizada em porcentagem.

Tabela 2: Atividade contra a BACE1 de compostos selecionados

Composto N°	Inibição da BACE1 a 10 μΜ (%)
1	104
2	104
3	104
4	104
5	102
6	103
7	96
9	103
10	102
11	103
12	101
13	103
14	103
15	106
16	106
17	111
18	109

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Avaliação de níveis do peptídeo Αβ em cérebro e plasma de rato após inibição da BACE1.

Animais [00173] Todos os cuidados e procedimentos experimentais com os ratos foram aprovados pelos Funcionários Veterinários da Lundbeck, de acordo com a legislação dinamarquesa. Os ratos foram mantidos em instalações com sistema de barreira, com um ciclo de luz/escuridão de 12/12 h, e acesso ad libitum a alimento e água.

Tratamento de Ratos naive [00174] Ratos Sprague Dawley Macho adultos jovens com cerca de 250g de peso foram comprados de Charles River e receberam 0-30 mg/kg de veículo (HP betaCD a 10% + MeSÜ4 1 M, pH 2,5) ou de compostos de teste (dissolvidos em veículo) apenas por gavagem oral (p.o). Os compostos são doseados a um volume de 5 ml_/kg. Foram estabelecidas coortes de 5-10 animais para cada condição de tratamento.

[00175] Os animais que receberam o tratamento foram monitorizados de perto por funcionários veterinários quanto a quaisquer sinais de toxicidade. Os parâmetros de monitorização incluíram o peso corporal, aparência física, mudanças na aparência do pelo, ocorrência de comportamento não provocado, e respostas atenuadas ou exageradas a estímulos externos.

Coleta de tecidos [00176] A T =180 minutos após a dosagem inicial, os animais foram imobilizados e decapitados com uma guilhotina. Foram coletadas amostras de sangue do tronco em tubos revestidos com EDTA após decapitação do animal. O sangue foi centrifugado a 2200G a 4 °C durante 15 minutos e o plasma coletado e congelado a -80 °C. O sangue foi aliquotado para ELISA de Αβ e análise de DMPK. Imediatamente após o sacrifício, o cérebro foi extraído e dividido em 2

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60/67 metades. Os hemicérebros direitos foram rapidamente congelados em gelo seco e armazenados a -80 °C. A metade esquerda foi dissecada, tendo a parte da frente do cérebro anterior sido usada para ELISA de Αβ e o restante usado para análise de DMPK. Estas amostras também foram rapidamente congeladas em gelo seco e armazenadas a -80 °C até serem utilizadas para análise.

Processamento tecidual [00177] As amostras de córtex foram ligeiramente descongeladas em gelo molhado antes de serem homogeneizadas com um instrumento de dispersão de volume pequeno (T10 basic ULTRA-TURRAX®) que foi ajustado à velocidade 5 durante aproximadamente 5-7 segundos. O tecido foi processado em um volume de 10 vezes o seu peso, por exemplo 100 mg de tecido foram homogeneizados em lOOOpL de Tampão de homogeneização. Tampão de homogeneização: 50 mL de água Milli-Q. + NaCI 50 nM + Dietilamina (DEA) a 0,2% + 1 pastilha de Coquetel Completo de inibição de protease + o inibidor irreversível da serina protease cloridrato de fluoreto de 4-(2aminoetiljbenzenossulfonila (AEBSF) 1 nM.

[00178] Após homogeneização, são coletadas alíquotas de 450 pL das amostras em tubos Eppendorf de 1,5 mL e colocadas em gelo molhado, foi adicionado NP-40 (50 uL) a 0,5% a todas as amostras e em seguida se incubou em gelo durante 30 minutos. Após incubação, todas as amostras foram sonicadas usando um Homogeneizador ultrassônico com 10 pulsos de som homogêneo de 20 kHz (SONOPLUS HD2070, Bandelin Electronic) ajustado a 1213% de potência para extrair todas as espécies Αβ. As amostras foram então centrifugadas (Microcentrífuga Ole Dich 157 MPRF) a 20000G durante 20 minutos a 4 °C. Após centrifugação, foram pipetados 285 pL do sobrenadante para dentro de microtubos de 600 pL e neutralizados com 15 pL de tampão TrisHCI1M.

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Protocolo de ELISA [00179] O kit de amiloide Abeta (40) Humano/de Rato WAKO 29462501 foi usado para todas as análises de ELISA. Amostras de 30 pL de plasma ou 30 pL dos sobrenadantes de córtex gerados como descrito acima foram colocadas em microtubos de 600 pL em gelo molhado. A estes são adicionados 30 pL de Ureia 8M (AppiiChem A1049, 9025) para gerar uma diluição de 2 vezes. Tanto o plasma como os sobrenadantes de córtex são incubados em gelo durante 30 minutos. Foram preparadas filas padrão com o estoque de peptídeo padrão fornecido no kite diluente padrão contendo Ureia 1,6M (200 pLde Ureia 8M + 800 pL de diluente padrão) e Ureia 0,8M (400pL de Ureia 8M + 3600pL de Diluente padrão). Foi preparada para o ensaio uma diluição de 2 vezes em série de Αβ40 de 100 pmol/mL para 0 pmol/L.

[00180] Após a incubação com ureia, todas as amostras foram ainda diluídas 5 vezes por adição do diluente padrão do Kit. Isto foi feito adicionando 240 pL de Diluente Padrão a 60 pL de mistura de amostra/ureia, a qual foi então bem misturada. Pipetou-se 100 pL de cada amostra diluída para dentro de poços designados da placa de ELISA em duplicata. A placa foi então coberta e incubada durante a noite a 4 °C. No dia seguinte, o kit de ELISA foi trazido à temperatura ambiente antes do uso. A placa incubada foi lavada 5 vezes com a solução de lavagem 20x diluída com água Milli-Q. Aplicou-se 100 pLde conjugado com HRP a cada poço, e a placa foi coberta e incubada a 4 °C durante 1 hora. A lavagem foi repetida novamente 5 vezes. 100 pL de solução de 3,3',5,5'tetrametilbenzidina (TMB) foram aplicados a cada poço e a placa foi coberta e incubada no escuro à temperatura ambiente durante 30 minutos. Aplicou-se de seguida 100 pL de solução STOP a cada poço, e a placa foi lida a um comprimento de onda de 450 nm em um espectrofotômetro (Labsystems Multiscan Ascent) até 30 minutos após a adição da solução STOP aos poços.

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62/67 [00181] A concentração do peptídeo Αβ nas amostras foi determinada com base em uma curva padrão gerada a partir de padrões contendo concentrações conhecidas de Αβ40 sintético. Os peritos na técnica reconhecerão que extrações com dietilamina (DEA) e ureia irão liberar Αβ solúvel e Αβ insolúvel, respectiva mente. Como o kit de ELISA é validado e bastante utilizado, é aceito que, desde que as condições de tratamento e as condições de ensaio sejam iguais para cada composto testado, o ensaio deverá fornecer dados sólidos consistentes para os compostos testados e produzir discrepâncias mínimas.

Análise dos dados [00182] Para determinar a concentração de Αβ40 nas amostras, os valores interpolados das amostras carregadas nas placas são multiplicados por 20 para se ter em conta as diluições realizadas quando os volumes de DEA, ureia e a solução de neutralização são somados. Os valores são calculados como a mudança percentual de Αβ40 em comparação com animais tratados com o veículo.

Bioanálise de amostras de cérebro e plasma [00183] A TC foi determinada em homogenatos de plasma e cérebro usando a cromatografia de UltraPerformance LC® (UPLC®) seguida de detecção por MS em tandem (MS/MS).

[00184] Aparelho:

Tecan Genesis RSP 200; Biomek NXP, Beckman Coulter; centrífuga 4K15 da Sigma; Acquity UPLC, Waters; Sciex API4000 TQ, Applied Biosystems; software para MS: Analyst version 1.4.1

Produtos químicos [00185] Acetonitrila, grau HPLC, Fluka, N² 34967N; Metanol, grau HPLC, Sigma-Aldrich, Lote 9003S; Ácido fórmico, grau HPLC, Riedel-de Haèn, Lote

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51660; Água purificada, Millipore Synergy UV

Preparação das amostras [00186] Preparou-se homogenato de cérebro por homogeneização do cérebro 1:4 (v/v) com água:2-propanol:DMSO (50:30:20 v/v/v), seguida de centrifugação e coleta do sobrenadante. Os padrões para calibração e as amostras de QC foram preparados usando um robô Hamilton. Adicionou-se 150 μΙ_ de ISTD em acetonitrila (ISTD a 1 ng/ml_) a 25 μΙ_ de padrões de calibração, amostras de QC e amostras de teste (homogenato de plasma e cérebro) usando um robô Biomek. Após centrifugação (6200 g, 4 °C, 20 min) se transferiu 100 μΙ_ de sobrenadante de cada amostra para uma nova placa e misturou com 100 μΙ_ de água com ácido fórmico a 0,1% usando um robô Biomek (transferência InVivo do arquivo do método). Após uma rápida centrifugação (6200 g, 4 °C, 5 min) as amostras foram colocadas no amostrador automático.

Análise por UPLC-MS/MS [00187] A detecção por MS/MS foi efetuada com um instrumento Sciex API 4000 da Applied Biosystems no modo de ionização por eletropulverização de íons positivos. Detectou-se TC e ISTD a uma razão massa para carga parente > filho (m/z). Foi utilizado nitrogênio para o nebulizador e gases de colisão. A área dos picos se correlacionou linearmente com a concentração de plasma e cérebro dos analitos na gama 1,00 - 1000 ng/ml_ de plasma e 5,00 - 5000 ng/g de cérebro (corrigida para diluição). Quando a concentração de fármaco na amostra de plasma/cérebro era superior a 1000 ng/ml_ ou 5000 ng/g, a amostra foi diluída apropriadamente em homogenato de branco de plasma/branco de cérebro antes da análise.

Sistema cromatográfico

Colunas analíticas:

Waters Acquity UPLC HSS C18 SB (pH 2-8) 1,8 pm, 2,lx30mm.

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Fase móvel A: Ácido fórmico aq. a 0,1% ou hidróxido de amônio aq. a 0,1%

Fase móvel B: Acetonitrila com ácido fórmico aq. a 0,1% ou hidróxido de amônio aq. a 0,1%.

Lavagem fraca: Metanol

Lavagem forte: Acetonitrila/lsopropanol/ácido fórmico (50/50/2 v/v/v)

Fluxo: 0,6 mL/min

Tempo do experimento: 3 min

Para o esgoto: 0-0,5 min

Temperatura: 40 °C

Gradiente:

Tempo (min) %deA %deB

98 2

0,01 98 2

1,5 5 95

5 95

2,2 98 2

98 2 [00188] Os compostos 11 e 15 foram administrados a doses de 10 mg/kg p.o. e se coletou amostras de cérebro e plasma 3 horas após a dosagem, tendo as exposições seguintes sido medidas como descrito acima.

Tabela 3: Resultados para o composto 11

	Dose (mg/kg)	Exp (ng/g)	Razão Cérebro/Plasma	Redução de Αβ40 (%)
Cérebro de Rato	10	1758	1,8	43
Plasma de Rato		1118		31

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Cérebro de Rato	30	4210	1,3	50
Plasma de Rato		3290		37

Tabela 4: Resultados para o composto 15

	Dose (mg/kg)	Exp (ng/g)	Razão Cérebro/Plasma	Redução de Αβ40 (%)
Cérebro de Rato	10			33
Plasma de Rato				34
Cérebro de Rato	30			43
Plasma de Rato				34

[00189] Como mostrado nas tabelas 3 e 4, os compostos da presente invenção conseguem penetrar na barreira hematoencefálica e apresentam eficácia no SNC.

Ensaio MDCK-MDR1 [00190] A permeabilidade dos compostos de teste foi avaliada em células MDCK-MDR1 que foram cultivadas até à confluência (4-6 dias) em uma placa de 96 transpoços. Os compostos de teste foram diluídos com o tampão de transporte (HBSS + BSA a 1%) até uma concentração de 0,5 μΜ e aplicados ao lado apical ou basolateral da monocamada de células. A permeação dos compostos de teste na direção A para B ou na direção B para A foi determinada em triplicado durante um período de tempo de incubação de 60 minutos a 37 °C e 5% de CO2 com uma umidade relativa de 95%. Os compostos de teste foram

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66/67 quantificados por análise de LC-MS/MS com base nas razões das áreas dos picos a na lito/IS, tanto nos poços receptores como doadores da placa de transpoços.

[00191] O coeficiente de permeabilidade aparente Papp (cm/s) foi calculado usando a equação:

Papp = (dCr/dt) x Vr / (A x CO) [00192] Onde dCr/dt é a concentração cumulativa de composto na câmara receptora em função do tempo (μΜ/s); Vr é o volume de solução na câmara receptora (0,05 mL no lado apical; 0,25 mL no lado basolateral); A é a área superficial para o transporte, isto é, 0,0804 cm² para a área da monocamada; C0 é a concentração inicial na câmara doadora (μΜ).

[00193] Os compostos são classificados como substratos Pgp quando a razão de efluxo (Papp BA / Papp AB) é > 2.

Tabela 5: Atividade contra a BACE1 de compostos selecionados

Composto	Razão de efluxo de MDCK- MDR1
1	1,75
2	2,6
3	2,84
4	13,81
5	7,31
6	2,07
7	4,59
8	23,42
9	1,76
10	3,57
11	0,77
12	1,11

Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 78/79

67/67

13	1,11
14	1,81
15	1,09
16	1,1
17	2,21
19	1,59

[00194] Tal como mostrado nas tabelas 5, a maioria dos compostos exemplificados da presente invenção têm razões de efluxo de MDCK- MDR1 abaixo de 2, e são assim provavelmente capazes de atravessar a barreira hematoencefálica (E Kerns, L Di, Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods (2008) Elsevier).

Petição 870170049034, de 07/08/2017, pág. 79/79

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto caracterizado pelo fato de ser de fórmula I em que Ar é selecionado do grupo que consiste em fenila, piridila, pirimidila, pirazinila, imidazolila, pirazolila, oxazolila, tiazolila, e isoxazolila, e em que o Ar é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio, CN, alquila C1-C6, alcenila C2-C6, alcinila C2-C6, fluoroalquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6; e

R¹ e R² são, independentemente, hidrogênio, halogênio, fluoroalquila C1-C3 ou alquila C1-C3;

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto possui a fórmula Ia ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
3. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R¹ e R² são, independentemente, F ou H.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Ar é opcionalmente substituído com um ou mais dentre F, Cl, CN, alquila CiC3, fluoroalquila C1-C3 ou alcóxi C1-C3.

Petição 870170033498, de 19/05/2017, pág. 9/13

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5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Ar é piridila opcionalmente substituída.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Ar é pirimidila opcionalmente substituída.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Ar é pirazinila opcionalmente substituída.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Ar é oxazolila opcionalmente substituída.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:

(S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4-fluoro- fenil) -5- cloropicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4-fluorofenil) -5- fluoropicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4- fluorofenil) -5-metoxipirazina- 2-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4-fluorofenil) -1- (difluorometil) -1 H-pirazol-3-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4-fluorofenil) -2- (difluorometil) oxazol-4-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4-fluorofenil) -5-cianopicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4- fluorofenil) -2-metiloxazol- 4-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetrahidropiridin2-il) -4-fluorofenil) -5-metoxipirimidino- 2-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetrahidropiridinPetição 870170033498, de 19/05/2017, pág. 10/13

2-il) -4-fluorofenil) -5- (difluorometil) pirazina-2-carboxamida (S) -N- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -2- Metilaxazole-4-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -5- Metoxipirazina-2-carboxamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -5- fluoropicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -5 - cloropicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -5- cianopicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4,5- difluorofenil) -5- metlioxipicolinamida (S)-/V- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometoil) -2,3,4,5-tetraliidropiridin2-il) -4,5- difluorofenil) -5- (Metlioxi- c/3) picolinamida (S)-/V- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraliidropiridin2-il) -4,5- difluorofenil) -5- Ciano-3-metlilpicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4- fluorofeno

5-(metoxi-c/3) picolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2-il) -4 Fluorofenil) -5-bromopicolinamida (S) -Λ/- (3- (6-amino-3,3-difluoro-2- (fluorometil) -2,3,4,5-tetraidropiridin-2il) -4- fluorofenil) -5-bromopicolinamida ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender o composto definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Petição 870170033498, de 19/05/2017, pág. 11/13

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11. Método para tratar uma doença selecionada a partir de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica, comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down e angiopatia amiloide cerebral, caracterizado pelo fato de compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 a um paciente com necessidade do mesmo.
12. Uso de um composto definido qualquer uma das reivindicações 1 a 9 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica, comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down e angiopatia amiloide cerebral.
13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso em terapia.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para o tratamento de uma doença selecionada a partir de doença de Alzheimer (familiar ou esporádica), doença de Alzheimer pré-clínica, doença de Alzheimer prodrômica, comprometimento cognitivo leve, síndrome de Down e angiopatia amiloide cerebral.

Petição 870170033498, de 19/05/2017, pág. 12/13

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