BR122020005073A2 - Composto, composição farmacêutica e uso do composto - Google Patents

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Abstract

são descritos no presente documento compostos moduladores de splicing de molécula pequena que modulam o splicing de mrna, tal como pré-mrna, codificado por genes, e métodos de uso dos compostos moduladores de splicing de molécula pequena para modular o splicing e tratar doenças e condições.

Description

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DO COMPOSTO (Dividido do BR 112020002270-5 de 03/08/2018) REFERÊNCIA CRUZADA
[0001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido Provisório n° US 62/541.202, depositado em 4 de agosto de 2017; Pedido Provisório n° US 62/562.927, depositado em 25 de setembro de 2017; e Pedido Provisório n° US 62/562.948, depositado em 25 de setembro de 2017, cada um dos quais é incorporado ao presente documento a titulo de referência em sua totalidade.
ANTECEDENTES
[0002] A maior parte dos genes de codificação de proteína no genoma humano é composta de múltiplos éxons (regiões de codificação) que são separados por introns (regiões de não codificação) . A expressão de gene resulta em um RNA mensageiro de precursor único (pré-mRNA) . As sequências de íntron são subsequentemente removidas do pré-mRNA por um processo chamado splicing, que resulta no RNA mensageiro maduro (mRNA). Incluindo-se combinações diferentes de éxons, o splicing alternativo gera múltiplos mRNAs que codificam isoformas de proteína distintas. O spliceossomo, um complexo intracelular de múltiplas proteínas e ribonucleoproteínas, catalisa o splicing.
[0003] As abordagens terapêuticas atuais para direcionar e controlar expressão de mRNA exigem métodos, como terapia de gene, edição de genoma, ou uma ampla faixa de tecnologias de oligonucleotídeo (antissenso, RNAi, etc.). A terapia de gene e a edição de genoma atuam a montante de mRNA por influência do código de DNA e, portanto, alteram a expressão de mRNA. Os oligonucleotídeos modulam a ação de RNA por meio de hibridização base/base canônica. O apelo dessa abordagem está no projeto do farmacoporo básico de um oligonucleotídeo, que pode ser definido de uma maneira direta por pareamento de bases conhecidas ao indivíduo de sequência-alvo. Cada uma dessas modalidades terapêuticas sofre de desafios técnicos, clínicos e regulatórios substanciais. Algumas limitações de oligonucleotídeos como terapêuticos (por exemplo, antissenso, RNAi) incluem farmacocinéticas desfavoráveis, ausência de biodisponibilidade oral e ausência de penetração de barreira hematoencefálica, com a última impedindo a entrega ao cérebro ou medula espinhal após administração parenteral de fármaco para o tratamento de doenças (por exemplo, doenças neurológicas, cânceres do cérebro). Além disso, os oligonucleotídeos não são absorvidos de modo eficaz em tumores sólidos sem um sistema de entrega complexo, como nanopartículas de lipídeo. Ademais, a maioria dos oligonucleotídeos absorvidos nas células e nos tecidos permanece em compartimentos não funcionais (por exemplo, endossomos) e não ganham acesso ao citosol e/ou núcleo em que o alvo está localizado.
[0004] Adicionalmente, para anelar um alvo, terapias de oligonucleotídeo exigem o acesso a pares de base complementares do alvo. Essa abordagem presume que sequências de pré-mRNA existem como uma fita linear de RNA na célula. No entanto, pré-mRNA é raramente linear; esse tem uma estrutura secundária e terciária de complexo. Ademais, os elementos de ação cis (por exemplo, elementos de ligação de proteína) e fatores de ação trans (por exemplo, componentes de complexo de splicing) podem criar complexidade bidimensional e tridimensional adicional (por exemplo, ligando-se ao pré-mRNA). Esses recursos podem ser limitantes de potência e eficácia para terapias com oligonucleotídeo.
SUMÁRIO
[0005] Os moduladores de splicing de molécula pequena (SMSMs) inovadores descritos no presente documento não sofrem das limitações acima, nem dos impedimentos estruturais e estéricos que limitam amplamente as terapias com oligonucleotídeo (por exemplo, bloqueando-se a hibridização para alvos de pré-mRNA). Moléculas pequenas têm sido essenciais para encontrar os mecanismos, regulações e funções de diversos processos celulares, incluindo a replicação, transcrição e tradução de DNA. Embora diversos relatórios recentes tenham descrito proteções para efetores de molécula pequena de splicing, apenas um número pequeno de moduladores de splicing constitutivo ou alternativo foram identificados e muitos dos inibidores de molécula pequena carecem de especificidade, carecem de sensibilidade, carecem de potência, exibem toxicidade ou não estão oralmente disponíveis. O alvejamento do transcritoma de RNA com moduladores de molécula pequena representa uma abordagem terapêutica inexplorada para tratar uma variedade de doenças mediadas por RNA. Consequentemente, permanece uma necessidade de desenvolver moduladores de RNA de molécula pequena úteis como agentes terapêuticos. Há necessidade na técnica de moduladores inovadores de splicing ou processos dependentes de splicing. São fornecidos no presente documento moduladores de splicing de molécula pequena e usos dos mesmos que cumprem essa necessidade.
[0006] É fornecido no presente documento um composto que tem a estrutura da Fórmula (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0001
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR2S (=O) (=NR1) R2, -NR2S (=O) 2R2, S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila monocíclica, arila bicíclica, heteroarila monocíclica, ou heteroarila bicíclica fusionada;
X é -O-, -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -C(=CR22)-, -S-, -S (=O) -, -S (=O) 2-, ou -S (=O) (=NR1) - ;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, -C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é -OR1, -N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída;
R4 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou
R4 e R5 tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se fixam, formam uma C3-8 cicloalquila substituída ou não substituída ou uma C2-7 heterocicloalquila substituída ou não substituída;
Z é CR2; e R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída ou -CH2OR1;
W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído, C2-C4 alquenileno substituído ou não substituído, ou C1-C4 heteroalquileno substituído ou não substituído;
R é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído, ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17 e R18 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11 e R13, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído ou um grupo C1-3 heteroalquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R15, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R13 e R14, tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se unem, formam uma C3-8 cicloalquila espirocíclica; ou
R17 e R2, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R2 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R16 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros;
a e b são, cada um, independentemente selecionados a partir de 0, 1, 2, ou 3;
c e d são, cada um, independentemente selecionados a partir de 1, 2, 3, ou 4; e
em que o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %.
[0007] Em algumas modalidades, W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído.
[0008] Em algumas modalidades,
Figure img0002
Figure img0003
[0009] Em algumas modalidades,
Figure img0004
[0010] Em algumas modalidades, X é -0-, -NR3-, -S-, CR4R5-, -C (=O) -, ou -C(=CR22)-.
[0011] Em algumas modalidades, X é -O-, -NR3-, ou C(=O)-.
[0012] Em algumas modalidades, o anel Q é arila substituída ou não substituída.
[0013] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila substituída por: 0, 1, 2 ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, arila, heteroarila, C1-6 alquila substituída por hidróxi, C1-6 alcóxi substituída por arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC (=O)-C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O) NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionado a partir de S, O, e N, em que dois grupos C1-6 alquila podem se combinar com os átomos aos quais são ligados para formar a anel de 5-6 membros; em que heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de N, O, e S, e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo-C1-6 alquila de 4-7 membros, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0014] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0005
,em que o anel P é arila ou heteroarila.
[0015] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0006
,em que o anel P é arila ou heteroarila.
[0016] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0007
Figure img0008
, em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, --OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0017] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0009
Figure img0010
[0018] Em algumas modalidades, ο anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0011
Figure img0012
[0019] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0013
Figure img0014
[0020] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0015
Figure img0016
[0021] Em algumas modalidades, ο anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC (=O) -C1-6 alquila, -NHC (=O) -C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0022] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0017
ou
Figure img0018
[0023] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0019
,e cada R6 é independentemente H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0024] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0025] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O e S e é substituída por O, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0026] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0027] Em algumas modalidades, o anel Q é um heterociclo monocíclico selecionado a partir do grupo que consiste em:
Figure img0020
[0028] Em algumas modalidades, ο anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0029] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo
Figure img0021
que consiste em
Figure img0022
Figure img0023
[0030] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0024
ou
Figure img0025
; e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída
[0031] Em algumas modalidades, X é -NR3-.
[0032] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0033] Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila que é selecionada a partir de ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila.
[0034] Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila.
[0035] Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila que é selecionada a partir de ciclopentenila ou ciclo-hexenila.
[0036] Em algumas modalidades, R3 é -CH3 ou -CF3.
[0037] Em algumas modalidades, R3 é -CD3.
[0038] Em algumas modalidades, R3 é -OCH3, -OCH2CH3, OCH2CH2OH ou -OCH2CH2OCH3.
[0039] Em algumas modalidades, R3 é -OCD3.
[0040] Em algumas modalidades,
Figure img0026
em que p é 1, 2 ou 3.
[0041] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 2 ou 3.
[0042] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 2.
[0043] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 3.
[0044] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2 ou 3.
[0045] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2.
[0046] Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 3.
[0047] Em algumas modalidades,
Figure img0027
ou
Figure img0028
,em que R19 é H, D, -CN, -OH, -OR1, -SR1, - S (=O) R1, -S(=O)2R1, -CH2-N (R1) 2, -s (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, - CO2R1, -C (=O) N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C8 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0048] É fornecido no presente documento uma composição que compreende um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) ; em que o SMSM interage com uma nucleobase protuberante não pareada de um dúplex de RNA, e em que o dúplex de RNA compreende um sítio de splice.
[0049] É fornecido no presente documento composição que compreende um complexo que compreende um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) ligado a um dúplex de RNA, em que o SMSM interage com uma nucleobase protuberante não pareada de um dúplex de RNA, e em que o dúplex de RNA compreende um sítio de splice.
[0050] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende uma hélice alfa.
[0051] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada em uma porção externa de uma hélice do dúplex de RNA.
[0052] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada dentro de uma porção interna da hélice do dúplex de RNA.
[0053] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com o dúplex de RNA.
[0054] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com a nucleobase protuberante não pareada.
[0055] Em algumas modalidades, a interação intermolecular é selecionada a partir do grupo que compreende uma interação iônica, a ligação de hidrogênio, uma interação dipolo-dipolo ou uma interação de van der Waals.
[0056] Em algumas modalidades, uma primeira porção do SMSM interage com a nucleobase protuberante não pareada em uma primeira fita de RNA do dúplex de RNA.
[0057] Em algumas modalidades, uma segunda porção do SMSM interage com uma ou mais nucleobases de uma segunda fita de RNA do dúplex de RNA, em que a primeira fita de RNA não é a segunda fita de RNA.
[0058] Em algumas modalidades, uma taxa de troca da nucleobase protuberante não pareada de dentro do interior de uma hélice do dúplex de RNA a uma porção exterior da hélice é reduzida.
[0059] Em algumas modalidades, o SMSM reduz a taxa de rotação da nucleobase protuberante não pareada.
[0060] Em algumas modalidades, o SMSM reduz uma taxa de rotação da nucleobase protuberante não pareada ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0061] Em algumas modalidades, o SMSM modula uma distância da nucleobase protuberante não pareada de uma segunda nucleobase do dúplex de RNA.
[0062] Em algumas modalidades, o SMSM reduz a distância da nucleobase protuberante não pareada de uma segunda nucleobase do dúplex de RNA.
[0063] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada dentro do interior de uma hélice do dúplex de RNA do complexo.
[0064] Em algumas modalidades, o SMSM reduz um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA.
[0065] Em algumas modalidades, o SMSM remove uma protuberância do dúplex de RNA.
[0066] Em algumas modalidades, o SMSM estabiliza uma protuberância do dúplex de RNA.
[0067] Em algumas modalidades, o SMSM modula o splicing no sitio de splice do dúplex de RNA.
[0068] Em algumas modalidades, o SMSM aumenta o splicing no sitio de splice do dúplex de RNA.
[0069] Em algumas modalidades, o SMSM reduz o splicing no sitio de splice do dúplex de RNA.
[0070] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada tem empilhamento de base modulado dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0071] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada tem empilhamento de base aumentado dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0072] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada tem empilhamento de base diminuído dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0073] Em algumas modalidades, o SMSM não é um aptâmero.
[0074] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende pré-mRNA.
[0075] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada é livre para rotacionar ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA na ausência do SMSM
[0076] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com células, em que o SMSM mata as células em uma IC50 de menos de 50 nM.
[0077] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com células, em que o SMSM modula o splicing em uma sequência de sitio de splice de um pré-mRNA que codifica um mRNA, em que o mRNA codifica uma proteina-alvo ou um RNA funcional, e em que uma quantidade total do mRNA é aumentada pelo menos cerca de 10 % em comparação com a quantidade total do mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional produzido em células de controle.
[0078] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com células, em que o SMSM modula o splicing em uma sequência de sitio de splice de um pré-mRNA que codifica um mRNA, em que o mRNA codifica uma proteina-alvo ou um RNA funcional, e em que uma quantidade total do mRNA, a proteína-alvo e/ou o RNA funcional é pelo menos 10 % menor que a quantidade total do mRNA, a proteína-alvo e/ou o RNA funcional em células de controle.
[0079] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar em contato uma composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com células, em que o SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um pré-mRNA que codifica uma primeira isoforma de mRNA associado a uma doença ou condição e uma segunda isoforma de mRNA, em que uma quantidade total da primeira isoforma de mRNA é diminuída em pelo menos cerca de 10 % em comparação com a quantidade total da primeira isoforma de mRNA em células de controle, e/ou uma quantidade total da segunda isoforma de mRNA é aumentada em pelo menos cerca de 10 % em comparação com a quantidade total da primeira isoforma de mRNA em células de controle.
[0080] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com células que compreendem uma quantidade de uma primeira isoforma de mRNA e uma quantidade de uma segunda isoforma de mRNA presente nas células; em que uma razão da primeira isoforma de mRNA em relação à segunda isoforma de mRNA é diminuída pelo menos 1,2 vezes; em que o primeiro e segundo mRNAs são codificados por um pré-MRNA que compreende uma sequência de sítio de splice, e em que a primeira isoforma de mRNA é associada a uma doença ou condição e uma segunda isoforma de mRNA.
[0081] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sitio de splice, em que o SMSM modula inclusão de éxon, exclusão de éxon, inclusão de pseudoéxon, retenção de íntron, ou splicing em um sitio de splice críptico do polinucleotídeo, e em que o SMSM modula o splicing da sequência de sítio de splice.
[0082] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, modulando deste modo o splicing do polinucleotídeo, em que a sequência de sítio de splice compreende uma sequência de sítio de splice selecionada a partir do grupo que consiste em sequências de sítio de splice da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C ou Tabela 2D.
[0083] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, em que a sequência de sítio de splice compreende uma sequência selecionada a partir de GGAguaag e AGAguaag.
[0084] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, em que a sequência de sítio de splice compreende pelo menos um nucleotídeo protuberante na posição -3, -2, -1, +1, +2, +3, +4, +5 ou +6 da sequência de sítio de splice.
[0085] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, em que a sequência de sítio de splice compreende um nucleotídeo mutante na posição -3, -2, -1, +1, +2, +3, +4, +5 ou +6 da sequência de sítio de splice.
[0086] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing caracterizado por compreender colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, modulando deste modo o splicing do polinucleotídeo, em que a sequência de sítio de splice compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em NGAgunvrn, NHAdddddn, NNBnnnnnn, e NHAddmhvk; em que N ou n é A, U, G ou C; Β é C, G, ou U; H ou h é A, C, ou U; d é a, g, ou u; m é a ou c; r é a ou g; v é a, c ou g; k é g ou u.
[0087] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing caracterizado por compreender colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, modulando deste modo o splicing do polinucleotídeo, em que a sequência de sítio de splice compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em NNBgunnnn, NNBhunnnn, ou NNBgvnnnn; em que N ou n é A, U, G ou C; Β é C, G, ou U; H ou h é A, C, ou U; d é a, g, ou u; m é a ou c; r é a ou g; v é a, c ou g; k é g ou u.
[0088] Em algumas modalidades, a sequência de sitio de splice compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em NNBgurrrn, NNBguwwdn, NNBguvmvn, NNBguvbbn, NNBgukddn, NNBgubnbd, NNBhunngn, NNBhurmhd, ou NNBgvdnvn; em que N ou n é A, U, G ou C; Β é C, G, ou U; H ou h é A, C, ou U; d é a, g, ou u; m é a ou c; r é a ou g; v é a, c ou g; k é g ou u.
[0089] Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição -3, -2, -1, +1, +2, +3, +4, +5 ou +6 da sequência de sitio de splice é um nucleotídeo protuberante.
[0090] Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição -3, -2, -1, +1, +2, +3, +4, +5 ou +6 da sequência de sítio de splice é nucleotídeo mutado.
[0091] Em algumas modalidades, a sequência de sítio de splice compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em sequências de sítio de splice da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C ou Tabela 2D.
[0092] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing, que compreende colocar em contato um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula que compreende um polinucleotídeo com uma sequência de sítio de splice, modulando deste modo o splicing do polinucleotídeo, em que o polinucleotídeo é codificado por um gene selecionado a partir do grupo que consiste em genes da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C ou Tabela 2D.
[0093] Em algumas modalidades, o gene é SMN2.
[0094] Em algumas modalidades, modular o splicing do polinucleotídeo compreende inibir o salto do éxon 7.
[0095] Em algumas modalidades, o gene é DMD.
[0096] Em algumas modalidades, modular o splicing do polinucleotídeo compreende promover o salto do éxon 51.
[0097] É fornecido no presente documento um método de modulação de splicing que compreende colocar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) em contato com uma célula; em que o SMSM interage com uma nucleobase protuberante não pareada de um dúplex de RNA na célula; em que o dúplex de RNA compreende uma sequência de sítio de splice; e em que o SMSM modula o splicing do dúplex de RNA.
[0098] É fornecido no presente documento um método para modular a posição relativa de uma primeira nucleobase relativa a uma segunda nucleobase, em que a primeira nucleobase e a segunda nucleobase estão dentro de um dúplex de RNA, em que o método que compreende colocar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) em contato com o dúplex de RNA, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a primeira nucleobase é uma nucleobase protuberante não pareada do dúplex de RNA; em que o dúplex de RNA compreende uma sequência de sítio de splice.
[0099] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende uma hélice.
[0100] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada em uma porção externa de uma hélice do dúplex de RNA antes de entrar em contato com o SMSM.
[0101] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com o dúplex de RNA.
[0102] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com a nucleobase protuberante não pareada.
[0103] Em algumas modalidades, a interação intermolecular é selecionada a partir do grupo que compreende uma interação iônica, a ligação de hidrogênio, uma interação dipolo-dipolo ou uma interação de van der Waals.
[0104] Em algumas modalidades, uma taxa de troca da nucleobase protuberante não pareada de dentro do interior de uma hélice do dúplex de RNA a uma porção exterior da hélice é reduzida.
[0105] Em algumas modalidades, uma taxa de rotação da nucleobase protuberante não pareada é reduzida.
[0106] Em algumas modalidades, uma taxa de rotação da nucleobase protuberante não pareada ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA é reduzida.
[0107] Em algumas modalidades, uma distância da nucleobase protuberante não pareada de uma segunda nucleobase do dúplex de RNA é modulada após entrar em contato com o SMSM.
[0108] Em algumas modalidades, a distância da nucleobase protuberante não pareada de uma segunda nucleobase do dúplex de RNA é reduzida.
[0109] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada no interior da hélice do dúplex de RNA.
[0110] Em algumas modalidades, um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA é reduzido.
[0111] Em algumas modalidades, uma protuberância do dúplex de RNA é removida ou mantida.
[0112] Em algumas modalidades, o splicing no sitio de splice do dúplex de RNA é promovido.
[0113] Em algumas modalidades, o empilhamento de base da nucleobase protuberante não pareada dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA é aumentado após entrar em contato com o SMSM.
[0114] Em algumas modalidades, a distância da nucleobase protuberante não pareada de uma segunda nucleobase do dúplex de RNA é aumentada ou mantida.
[0115] Em algumas modalidades, uma protuberância do dúplex de RNA é estabilizada após entrar em contato com o SMSM.
[0116] Em algumas modalidades, a nucleobase protuberante não pareada está localizada em uma porção exterior de uma hélice do dúplex de RNA.
[0117] Em algumas modalidades, um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA é aumentado.
[0118] Em algumas modalidades, o splicing no sitio de splice do dúplex de RNA é inibido.
[0119] Em algumas modalidades, o splicing é inibido no sitio de splice
[0120] Em algumas modalidades, o empilhamento de base da nucleobase protuberante não pareada dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA é reduzido após entrar em contato com o SMSM.
[0121] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende pré-mRNA.
[0122] É fornecido no presente documento um método de tratamento de um indivíduo com um tumor que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) ao indivíduo, em que um tamanho de the tumor é reduzido.
[0123] É fornecido no presente documento um método de tratar um indivíduo com um tumor que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) ao indivíduo, em que crescimento tumoral é inibido em pelo menos 20.
[0124] É fornecido no presente documento um método do tratamento, prevenção e/ou atraso de progressão de uma condição ou doença que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) a um indivíduo, em que o SMSM modula o splicing de um sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de o indivíduo, em que a condição ou doença é associada a splicing do sítio de splice.
[0125] Em algumas modalidades, o indivíduo tem a doença ou condição.
[0126] É fornecido no presente documento um método de tratar um indivíduo com a doença ou condição que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) a um indivíduo com uma doença ou condição selecionada a partir do grupo que consiste em doenças da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D.
[0127] É fornecido no presente documento um método de tratar um indivíduo com a doença ou condição que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) a um indivíduo com uma doença ou condição, em que o SMSM é selecionado a partir do grupo que consiste nos SMSMs da Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C.
[0128] É fornecido no presente documento um método de tratar um indivíduo com a doença ou condição que compreende administrar um composto modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) a um indivíduo com uma doença ou condição, em que o SMSM se liga a um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice selecionada a partir do grupo que consiste em sequências de sítio de splice da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C ou Tabela 2D.
[0129] Em algumas modalidades, a doença ou condição é atrofia muscular espinhal.
[0130] Em algumas modalidades, a doença ou condição é distrofia muscular de Duchenne.
[0131] Em algumas modalidades, o SMSM é selecionado a partir do grupo que consiste em SMSMs da Tabela 1A, Tabela 1B e Tabela 1C.
[0132] Em algumas modalidades, o SMSM é um composto descrito no presente documento.
[0133] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar uma molécula terapêutica adicional ao indivíduo.
[0134] Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero.
[0135] Em algumas modalidades, o mamífero é um humano.
[0136] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é um pré-mRNA.
[0137] Em algumas modalidades, modular o splicing compreende prevenir, inibir ou reduzir o splicing na sequência de sítio de splice do polinucleotídeo.
[0138] Em algumas modalidades, modular o splicing compreende melhorar, promover ou aumentar o splicing na sequência de sitio de splice do polinucleotídeo.
[0139] Em algumas modalidades, a sequência de sítio de splice é uma sequência de sítio de splice 5', uma sequência de sítio de splice 3', uma sequência de sítio de splice de ponto de ramificação ou uma sequência de sítio de splice críptico.
[0140] Em algumas modalidades, o sítio de splice compreende uma mutação, o sítio de splice compreende uma protuberância, o sítio de splice compreende uma mutação e uma protuberância, o sítio de splice não compreende uma mutação, o sítio de splice não compreende uma protuberância, ou o sítio de splice não compreende uma mutação e não compreende uma protuberância.
[0141] Em algumas modalidades, a protuberância é uma protuberância causada pela mutação.
[0142] Em algumas modalidades, um nucleotídeo protuberante é um nucleotídeo mutante.
[0143] Em algumas modalidades, um nucleotídeo protuberante não é um nucleotídeo mutante.
[0144] Em algumas modalidades, o SMSM diminui um KD de componente de complexo de splicing para o polinucleotídeo.
[0145] Em algumas modalidades, o SMSM aumenta um KD de componente de complexo de splicing para o polinucleotídeo.
[0146] Em algumas modalidades, o SMSM inibe a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sítio de splice ou a jusante da sequência de sítio de splice.
[0147] Em algumas modalidades, o SMSM promove a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sítio de splice ou a jusante da sequência de sítio de splice.
[0148] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é RNA.
[0149] Em algumas modalidades, ο RNA é um pré-mRNA.
[0150] Em algumas modalidades, o RNA é um RNA nuclear heterogêneo.
[0151] Em algumas modalidades, a sequência de sítio de splice é uma sequência de sítio de splice 5', uma sequência de sítio de splice 3', uma sequência de sítio de splice de ponto de ramificação (BP), uma sequência de acentuador de splicing exônico (ESE), uma sequência de silenciador de splicing exônico (ESS), uma sequência de acentuador de splicing intrônico (ISE), uma sequência de silenciador de splicing intrônico (ISS), uma sequência de trato de polipirimidina, ou qualquer combinação das mesmas.
[0152] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é de pelo menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 50, 100, 250, 500, 750, 1000, 2000, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, ou 1000000 nucleotídeos de comprimento.
[0153] Em algumas modalidades, o SMSM se liga à sequência de sítio de splice do polinucleotídeo.
[0154] Em algumas modalidades, o SMSM interage com uma protuberância da sequência de sítio de splice do polinucleotídeo.
[0155] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de elemento de ação cis.
[0156] Em algumas modalidades, a sequência de elemento de ação cis não compreende uma protuberância.
[0157] Em algumas modalidades, a sequência de elemento de ação cis não compreende uma mutação.
[0158] Em algumas modalidades, a sequência de elemento de ação cis compreende uma mutação, uma protuberância, ou uma combinação dos mesmos, na sequência de elemento de ação cis, 1-1000 nucleobases a montante da sequência de elemento de ação cis ou 1-1000 nucleobases a jusante da sequência de elemento de ação cis.
[0159] Em algumas modalidades, a sequência de elemento de ação cis compreende uma sequência de elemento regulatório que modula o recrutamento de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo.
[0160] Em algumas modalidades, a sequência de elemento de ação cis compreende uma sequência de elemento regulatório que modula o recrutamento de um spliceossomo ao polinucleotídeo.
[0161] Em algumas modalidades, a sequência de elemento regulatório compreende uma sequência de acentuador de splicing exônico (ESE), uma sequência de silenciador de splicing exônico (ESS), uma sequência de acentuador de splicing intrônico (ISE), uma sequência de silenciador de splicing intrônico (ISS), e combinações das mesmas.
[0162] Em algumas modalidades, o SMSM se liga ao componente de complexo de splicing.
[0163] Em algumas modalidades, o componente de complexo de splicing é 9G8, Al hnRNP, A2 hnRNP, ASD-1, ASD-2b, ASF, B1 hnRNP, Cl hnRNP, C2 hnRNP, CBP20, CBP80, CELF, F hnRNP, FBP11, Fox-1, Fox-2, G hnRNP, H hnRNP, hnRNP 1, hnRNP 3, hnRNP C, hnRNP G, hnRNP K, hnRNP M, hnRNP U, Hu, HUR, I hnRNP, K hnRNP, proteína regulatória de splicing de tipo KH (KSRP), L hnRNP, M hnRNP, mBBP, semelhante a músculo cego (MBNL) , NF4 5, NFAR, Nova-1, Nova-2, nPTB, P54/SFRS11, proteína de ligação ao trato de polipirimidina (PTB), proteínas de complexo PRP19, R hnRNP, RNPC1, SAM68, SC35, SF, SF1/BBP, SF2, SF3 a, SF3B, SFRS10, proteínas Sm, proteínas SR, SRm300, SRp20, SRp30c, SRP35C, SRP36, SRP38, SRp40, SRp55, SRp75, SRSF, STAR, GSG, SUP-12, TASR-1, TASR-2, TIA, TIAR, TRA2, TRA2a/b, U hnRNP, U1 snRNP, U11 snRNP, U12 snRNP, U1-C, U2 snRNP, U2AF1-RS2, U2AF35, U2AF65, U4 snRNP, U5 snRNP, U6 snRNP, Urp, YB1, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0164] Em algumas modalidades, o componente de complexo de splicing compreende RNA.
[0165] Em algumas modalidades, o componente de complexo de splicing é um RNA nuclear pequeno (snRNA).
[0166] Em algumas modalidades, o snRNA compreende U1 snRNA, U2 snRNA, U4 snRNA, U5 snRNA, U6 snRNA, U11 snRNA, U12 snRNA, U4atac snRNA, U5 snRNA, U6 atac snRNA, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0167] Em algumas modalidades, o componente de complexo de splicing compreende uma proteína.
[0168] Em algumas modalidades, o componente de complexo de splicing compreende uma ribonucleoproteína nuclear pequena (snRNP).
[0169] Em algumas modalidades, a snRNP compreende U1 snRNP, U2 snRNP, U4 snRNP, U5 snRNP, U6 snRNP, U11 snRNP, U12 snRNP, U4atac snRNP, U5 snRNP, U6 atac snRNP, ou quaisquer combinações dos mesmos.
[0170] O método de 164, em que a proteína é uma proteína rica em serina/arginina (SR).
[0171] Em algumas modalidades, a sequência de sitio de splice compreende uma base que é mal pareada com uma base de uma sequência de snRNA.
[0172] Em algumas modalidades, uma protuberância é devido a erro de pareamento de base entre a sequência de sitio de splice e uma sequência de snRNA.
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA
[0173] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são incorporados no presente documento, por referência, na mesma extensão como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual tivesse sido especificamente indicado para ser incorporado por referência.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0174] A FIG. 1 retrata um diagrama de splicing alternativo de um pré-MRNA exemplificativo. Uma isoforma de mRNA retratada codifica uma proteína que melhora ou promove proliferação celular e/ou de câncer. A outra isoforma de mRNA retratada codifica uma proteína que melhora ou inibe proliferação celular e/ou de câncer. As duas isoformas diferem por um éxon único.
[0175] A FIG. 2 retrata um diagrama de um RNA (esquerda) , o RNA com uma mutação (meio) , e uma molécula pequena ligada ao RNA com a mutação (direita) . A mutação retratada interrompe uma haste-alça que contém a base mutada que aumenta a acessibilidade de 5'ss. O acesso ao sítio de splice 5' pode ser diminuído pelo modulador de splicing de molécula pequena estabilizante de haste-alça retratado. Nesse caso a isoforma de mRNA resultante tem um éxon omitido por um modulador de splicing de molécula pequena.
[0176] A FIG. 3 retrata diagramas de uma estrutura de RNA primária exemplificativa (topo), estruturas de RNA secundárias exemplificativas (meio) e estruturas de RNA terciárias exemplificativas (fundo).
[0177] A FIG. 4 retrata um diagrama de um modulador de splicing de molécula pequena exemplificativo ligado a um complexo que compreende um polinucleotídeo e complexo de proteína de splicing.
[0178] A FIG. 5 retrata um diagrama de splicing alternativo de pré-mRNAs exemplificativos transcritos a partir de genes indicados. Isoformas de mRNA retratadas do lado esquerdo são normais; isoformas de mRNA retratadas no lado direito promovem câncer.
[0179] A FIG. 6A retrata uma sequência de pré-mRNA de SMN2 exemplificativa com uma protuberância.
[0180] A FIG. 6B retrata uma sequência de pré-mRNA exemplificativa com uma protuberância.
[0181] A FIG. 6C retrata uma sequência de pré-mRNA exemplificativa com uma protuberância.
[0182] A FIG. 6D retrata uma sequência de pré-mRNA exemplificativa com uma protuberância.
[0183] A FIG. 6E retrata uma sequência de pré-mRNA exemplificativa sem uma protuberância.
[0184] A FIG. 7 retrata um gráfico de níveis de transcrição relativos de isoforma A de FOXM1 (reprime câncer) e isoforma Β de FOXM1 (promove câncer) em células A-673 incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0185] A FIG. 8 retrata uma plotagem do IC50 medido de viabilidade de célula de um SMSM para as células indicadas.
[0186] A FIG. 9A retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0187] A FIG. 9B retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0188] A FIG. 9C retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0189] A FIG. 9D retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0190] A FIG. 9E retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0191] A FIG. 9F retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0192] A FIG. 9G retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0193] A FIG. 9H retrata um gráfico de células A-673 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0194] A FIG. 10 retrata um gráfico de células A-375 viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM.
[0195] A FIG. 11A retrata um gráfico de células de fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDFs) viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de um SMSM tem um índice terapêutico 100 vezes maior em comparação a inibidores de HDAC.
[0196] A FIG. 11B retrata um gráfico de células de fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDFs) viáveis quando incubadas com as concentrações indicadas de DMSO.
[0197] A FIG. 12 retrata um gráfico de splicing de IC50 vs proliferação de IC50 para SMSMs revelados no presente documento. Os resultados mostram que a potência de viabilidade se correlaciona a splicing de célula.
[0198] A FIG. 13 ilustra o impacto representativo de estereoquímica de composto 1 e composto 2 retratados na atividade de célula.
[0199] A FIG. 14A retrata um gráfico que mostra alteração em vezes normalizada em volumes tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM para o tempo indicado.
[0200] A FIG. 14B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM.
[0201] A FIG. 14C retrata um gráfico que mostra alteração de porcentagem normalizada em volumes tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM.
[0202] A FIG. 15A retrata um gráfico que mostra a alteração em volumes tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM.
[0203] A FIG. 15B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM.
[0204] A FIG. 16A retrata um gráfico que mostra alteração de porcentagem normalizada em volumes tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM.
[0205] A FIG. 16B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM.
[0206] A FIG. 16C retrata um gráfico que mostra níveis de transcrição relativos normalizados de isoforma Β de FOXM1 nos camundongos após o tratamento com a dose indicada de um SMSM.
[0207] A FIG. 17A retrata um gráfico que mostra alteração em vezes normalizada em volumes tumorais de xenoenxerto de A-375 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM ou vemurafenibe.
[0208] A FIG. 17B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM ou vemurafenibe.
[0209] A FIG. 17C retrata um gráfico que mostra níveis de transcrição relativos normalizados de isoforma Β de FOXM1 nos camundongos após o tratamento com as doses indicadas de SMSMs ou vemurafenibe.
[0210] A FIG. 18A retrata um gráfico que mostra alteração em vezes em volumes tumorais de xenoenxerto (glioblastoma) U87 três dias após o tratamento de camundongos com imunodeficiência combinada grave (SCID) com as doses indicadas de um SMSM.
[0211] A FIG. 18B retrata um gráfico que mostra alteração em vezes em volumes tumorais de xenoenxerto (glioblastoma) U87 três dias após o tratamento de camundongos de SCID com as doses indicadas de um SMSM.
[0212] A FIG. 19A retrata bioluminescência dorsal e ventral em camundongos de SCID com xenoenxerto de Raji (linfoma) após o tratamento com um SMSM.
[0213] A FIG. 19B retrata um gráfico de bioluminescência ventral em camundongos de SCID com xenoenxerto de Raji (linfoma) após o tratamento com um SMSM.
[0214] A FIG. 19C retrata de bioluminescência ventral em camundongos de SCID com xenoenxerto de Raji (linfoma) cinco dias após o tratamento com um SMSM.
[0215] A FIG. 20A retrata um gráfico que mostra a alteração em vezes em volumes tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de um SMSM.
[0216] A FIG. 20B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM.
[0217] A FIG. 21A retrata um gráfico que mostra alteração de porcentagem normalizada em volumes tumorais de xenoenxerto de A-375 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de SMSMs.
[0218] A FIG. 21B retrata um gráfico que mostra volumes de tumores em camundongos com xenoenxerto de A-375 após o tratamento com as doses indicadas de SMSMs.
[0219] A FIG. 21C retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de um SMSM ou vemurafenibe.
[0220] A FIG. 22 retrata uma plotagem de Kaplan-Meier de sobrevivência em porcentagem ao longo do tempo de camundongos com sarcoma de Ewing A-673 médio após tratamento com as doses indicadas de um SMSM administrado duas vezes por dia (b.i.d.).
[0221] A FIG. 23 retrata um gráfico de pesos tumorais de xenoenxerto de A-673 após o tratamento de camundongos com as doses indicadas de SMSMs.
[0222] A FIG. 24A retrata um gráfico que mostra volumes de tumores em camundongos com xenoenxerto de A-375 após o tratamento com as doses indicadas de veiculo, um SMSM, veiculo + terapia de radiação (RT), e SMSM + terapia de radiação.
[0223] A FIG. 24B retrata um gráfico de alteração de massa corporal em porcentagem de camundongos após o tratamento com as doses indicadas de veiculo, um SMSM, veiculo + terapia de radiação (RT) e SMSM + terapia de radiação.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0224] Determinados detalhes específicos dessa descrição são estabelecidos a fim de fornecer um entendimento completo de várias modalidades. No entanto, um elemento versado na técnica entenderá que a presente revelação pode ser praticada sem esses detalhes. Em outros exemplos, estruturas bem conhecidas não foram mostradas ou descritas em detalhes para evitar obscurecer desnecessariamente descrições das modalidades. Salvo caso o contexto exija de outro modo, ao longo do relatório descritivo e das reivindicações que seguem, a palavra "compreender" e variações da mesma, como "compreende" e "que compreende" devem ser interpretadas em um sentido aberto e inclusivo, isto é, como "incluindo, porém sem limitação". Ademais, cabeçalhos fornecidos no presente documento são para conveniência apenas e não interpretam o escopo ou o significado da revelação reivindicada.
[0225] Conforme usadas neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma", "o" e "a" incluem referentes no plural a não ser que o conteúdo dite claramente de outra forma. Também deve ser observado que o termo "ou" é empregado, de modo geral, em seu sentido que inclui "e/ou", salvo caso o conteúdo indique claramente o contrário.
[0226] A menos que definido de outra maneira, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica a quem essa revelação pertence. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática ou testagem da presente revelação, métodos e materiais adequados são descritos abaixo.
Definições
[0227] Os termos "composto(s) dessa revelação", "composto(s) da presente revelação", "modulador(es) estérico(s) de molécula pequena", "modulador(es) de splicing de molécula pequena" "modulador(es) estéricos", "modulador(es) de splicing", "composto(s) que modifica(m) splicing" e "composto(s) de modificação splicing", "SMSM" ou "molécula pequena que liga um RNA-alvo", são intercambiavelmente usados no presente documento e se referem a compostos como revelado no presente documento e estereoisômeros, tautômeros, solvatos e sais (por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis) dos mesmos. Os termos "composto(s) dessa revelação", "composto(s) da presente revelação", "modulador(es) estérico(s) de molécula pequena", "modulador(es) de splicing de molécula pequena" "modulador(es) estéricos", "modulador(es) de splicing", "composto(s) que modifica(m) splicing" e "composto(s) de modificação splicing", "SMSM" ou "molécula pequena que liga um RNA-alvo", denotam um composto de molécula pequena que se liga a um componente de célula (por exemplo, DNA, RNA, pré-mRNA, proteína, RNP, snRNA, carboidratos, lipídeos, cofatores, nutrientes e/ou metabólitos) e modula o splicing de um polinucleotídeo-alvo, por exemplo, um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode se ligar direta ou indiretamente a um polinucleotídeo-alvo, por exemplo, RNA (por exemplo, um pré-mRNA) com um sítio de splice mutado, não mutado, protuberante e/ou anormal, que resulta na modulação de splicing do polinucleotídeo-alvo. Por exemplo, um SMSM pode se ligar direta ou indiretamente to a proteína, por exemplo, uma proteína de spliceossomo ou uma proteína ribonuclear, que resulta em modulação estérica da proteína e modulação de splicing de um RNA-alvo. Por exemplo, um SMSM pode se ligar direta ou indiretamente a um componente de spliceossomo, por exemplo, uma proteína de spliceossomo ou snRNA que resulta em modulação estérica da proteína de spliceossomo ou snRNA e modulação de splicing de polinucleotídeo-alvo. Esses termos excluem especificamente compostos que consistem em oligonucleotídeos. Esses termos incluem compostos de molécula pequena que podem se ligar a um ou mais elementos de estrutura secundária ou terciária de um RNA-alvo. Esses sítios incluem triplexos de RNA, 3WJs, 4WJs, junções Y paralelas, grampos, alças de protuberância, pseudonós, alças internas, e outros motivos estruturais de RNA de ordem superior.
[0228] O termo "RNA" (ácido ribonucleico) como usado no presente documento, significa oligorribonucleotideos de ocorrência natural ou sintéticos independentes de fonte (por exemplo, o RNA pode ser produzido por um ser humano, animal, planta, virus ou bactéria, ou pode ser sintético de origem), por contexto biológico (por exemplo, o RNA pode estar no núcleo, circulando no sangue, in vitro, lisato celular ou isolado ou na forma pura), ou forma física (por exemplo, o RNA pode estar na forma de fita única, dupla ou tripla (que inclui híbridos de RNA-DNA) , podem incluir modificações epigenéticas, modificações pós-transcricionais nativas, modificações artificiais (por exemplo, obtidas por modificação química ou in vitro), ou outras modificações, pode se ligar a, por exemplo, íons metálicos, moléculas pequenas, proteínas, como chaperonas, ou cofatores, ou pode estar em um estado desnaturado, parcialmente desnaturado ou dobrado que inclui qualquer estrutura secundária ou terciária nativa ou não natural, como quadruplexos, grampos, triplexos, junções de três vias (3WJs), junções de quatro vias (4WJs), junções Y paralelas, grampos, alças de protuberância, pseudonós, e alças internas, etc., e quaisquer formas ou estruturas transientes adotadas pelo RNA). Em algumas modalidades, o RNA é de 20, 22, 50, 75, ou 100 ou mais nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, o RNA é de 250 ou mais nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, o RNA é de 350, 450, 500, 600, 750, ou 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 7500, 10000, 15000, 25000, 50000, ou mais nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, o RNA está entre 250 e 1000 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, o RNA é um pré-RNA, pré-miRNA, ou pré-transcrito. Em algumas modalidades, o RNA é um RNA não codificante (ncRNA) , RNA mensageiro (mRNA), micro-RNA (miRNA), a ribozima, riboswitch, IncRNA, lincRNA, snoRNA, snRNA, scaRNA, piRNA, ceRNA, pseudogene, RNA viral, RNA fúngico, RNA parasitico, ou RNA bacteriano.
[0229] O termo "polinucleotideo-alvo" ou "RNA-alvo", como usado no presente documento, significa qualquer tipo de polinucleotídeo ou RNA, respectivamente, que tem um sítio de splice com a capacidade para ser modulado por um composto de molécula pequena descrito no presente documento. Por exemplo, um "polinucleotideo-alvo" ou "RNA-alvo", pode ter uma estrutura secundária ou terciária com a capacidade para ligar um composto de molécula pequena descrito no presente documento.
[0230] "Alteração estérica", "modificação estérica" ou "modulação estérica" no presente documento se refere a alterações na orientação espacial de frações químicas com relação uma à outra. Uma pessoa de habilidade comum na técnica reconheceria que mecanismos estéricos incluem, porém sem limitação, impedimento estérico, proteção estérica, atração estérica, cruzamento de cadeia, repulsões estéricas, inibição estérica de ressonância, e inibição estérica de protonação.
[0231] Qualquer valência aberta presente em um átomo de carbono, oxigênio, enxofre ou nitrogênio nas estruturas no presente documento indica a presença de hidrogênio, salvo caso indicado de outra forma.
[0232] As definições descritas no presente documento se aplicam independentemente dos termos em questão aparecerem sozinhos ou em combinação. É contemplado que as definições descritas no presente documento podem ser anexadas para formar combinações quimicamente relevantes, como, por exemplo, "heterocicloalquilarila", "haloalquil- heteroarila", "arilalquil-heterocicloalquila", ou "alcoxialquila". O último membro da combinação é o radical que é ligado ao restante da molécula. Os outros membros da combinação são fixados ao radical de ligação na ordem inversa com relação à sequência literal, por exemplo, a combinação de arilalquil-heterocicloalquila se refere a um radical de heterocicloalquila que é substituída por uma alquila que é substituída por uma arila.
[0233] Quando estiver indicado o número de substituintes, o termo "um ou mais" se refere à faixa de um substituinte ao maior número possível de substituição, isto é, substituição de um hidrogênio até substituição de todos os hidrogênios por substituintes.
[0234] O termo "opcional" ou "opcionalmente" denota que um evento ou circunstância descrita subsequentemente pode, mas não precisa ocorrer e que a descrição inclui casos em que o evento ou circunstância ocorre e exemplos em que não ocorre.
[0235] O termo "substituinte" denota um átomo ou um grupo de átomos que substituem um átomo de hidrogênio na molécula parente.
[0236] O termo "substituído" denota que um grupo específico suporta um ou mais substituintes. Em que qualquer grupo pode carrear múltiplos substituintes e uma variedade de substituintes possíveis é fornecida, os substituintes são independentemente selecionados e não precisam ser os mesmos. O termo "não substituído" significa que o grupo específico não suporta substituintes. O termo "opcionalmente substituído" significa que o grupo específico é não substituído ou substituído por um ou mais substituintes, independentemente escolhidos a partir do grupo de substituintes possíveis. Quando estiver indicado o número de substituintes, o termo "um ou mais" significa de um substituinte ao maior número possível de substituição, isto é, substituição de um hidrogênio até substituição de todos os hidrogênios por substituintes.
[0237] As seguintes abreviações são usadas ao longo do relatório descritivo: ácido acético (AcOH); acetato de etila (EtOAc); álcool butílico (η-BuOH); 1,2-dicloroetano (DCE) ; diclorometano (CH2C12, DCM) ; di-isopropiletilamina (Diipea); dimetilformamida (DMF); cloreto de hidrogênio (HCl); metanol (MeOH); brometo de metoximetila (MOMBr); N-metil-2-pirrolidona (NMP); Iodo de metila (MeI); n-propanol (n-PrOH) ; p-metoxibenzila (PMB) ; trietilamina (Et3N) ; [1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II); (Pd(dppf)Cl2) ; etano tiolato de sódio (EtSNa); acetato de sódio (NaOAc); hidreto de sódio (NaH); hidróxido de sódio (NaOH); tetra-hidropirana (THP); tetra-hidrofurano (THF).
[0238] Como usado no presente documento, C1-Cx inclui C1-C2, C1-C3. C1-Cx. Com fins exemplificativos apenas, um grupo designado como "C1-C4" indica que há de um a quatro átomos de carbono na fração, isto é, grupos que contêm 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono ou 4 átomos de carbono. Desse modo, com fins exemplificativos apenas, "C1-C4 alquila" indica que há de um a quatro átomos de carbono no grupo alquila, isto é, o grupo alquila é selecionado a partir dentre metila, etila, propila, isopropila, n-butila, iso-butila, sec-butila e t-butila.
[0239] O termo "oxo" se refere ao substituinte =0.
[0240] O termo "tioxo" se refere ao substituinte =S.
[0241] O termo "halo", "halogênio", e "haleto" são usados intercambiavelmente no presente documento e denotam flúor, cloro, bromo ou iodo.
[0242] O termo "alquila" se refere a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada, que tem de um a vinte átomos de carbono, e que é fixado ao restante da molécula por uma ligação simples. Uma alquila compreendendo até 10 átomos de carbono é chamada de uma C1-C10 alquila, de igual modo, por exemplo, uma alquila compreendendo até 6 átomos de carbono é uma C1-C6 alquila. As alquilas (e outras frações no presente documento definidas) compreendendo outros números de átomos de carbono são representadas de forma semelhante. Grupos alquila incluem, porém sem limitação, C1-C10 alquila, C1-C9 alquila, C1-C8 alquila, C1-C7 alquila, C1-C6 alquila, C1-C5 alquila, C1-C4 alquila, C1-C3 alquila, C1-C2 alquila, C2-C8 alquila, C3-C8 alquila e C4-C8 alquila. Grupos alquila representativos incluem, porém sem limitação, metila, etila, n-propila, 1-metiletila (i-propila), n-butila, i-butila, s-butila, n-pentila, 1,1-dimetiletila (t-butil), 3-metil-hexila, 2-metil-hexila, 1-etil-propila, e similares. Em algumas modalidades, a alquila é metila ou etila. Em algumas modalidades, a alquila é -CH (CH3)2 ou -C(CH3)3. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo alquila pode ser opcionalmente substituído como descrito a seguir. "Alquileno" ou "cadeia de alquileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto divalente linear ou ramificada que liga o restante da molécula a um grupo de radical. Em algumas modalidades, o alquileno é -CH2-, -CH2CH2-, ou -CH2CH2CH2-. Em algumas modalidades, o alquileno é -CH2-. Em algumas modalidades, o alquileno é -CH2CH2-. Em algumas modalidades, o alquileno é -CH2CH2CH2- .
[0243] O termo "alcóxi" se refere a um radical da fórmula -OR em que R é um radical alquila como definido. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo alcóxi pode ser opcionalmente substituído como descrito a seguir. Grupos alcóxi representativos incluem, porém sem limitação, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, pentóxi. Em algumas modalidades, o alcóxi é metóxi. Em algumas modalidades, o alcóxi é etóxi.
[0244] O termo "alquilamino" se refere a um radical da fórmula -NHR ou -NRR em que cada R é, independentemente, um radical alquila como definido acima. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo alquilamino pode ser opcionalmente substituído como descrito a seguir.
[0245] O termo "alquenila" se refere a um tipo de grupo alquila em que pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono está presente. Em uma modalidade, um grupo alquenila tem a fórmula -C(R)=CR2, em que R se refere às porções restantes do grupo alquenila, que pode ser igual ou diferente. Em algumas modalidades, R é H ou uma alquila. Em algumas modalidades, uma alquenila é independentemente selecionada dentre etenila (isto é, vinil), propenila (isto é, alila), butenila, pentenila, pentadienila e similares. Os exemplos não limitantes de um grupo alquenila incluem -CH=CH2, C(CH3)=CH2, -CH=CHCH3, -C (CH3) =CHCH3 e -CH2CH=CH2.
[0246] O termo "alquinila" se refere a um tipo de grupo alquila em que pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono está presente. Em uma modalidade, um grupo alquenila tem a fórmula -C=C-R, em que R se refere às porções restantes do grupo alquinila. Em algumas modalidades, R é H ou uma alquila. Em algumas modalidades, uma alquinila é independentemente selecionada dentre etinila, propinila, butinila, pentinila, hexinila e similares. Exemplos não limitantes de um grupo alquinila incluem -C≡CH, -C≡CCH3 -C≡CCH2CH3, -CH2C≡CH.
[0247] O termo "aromático" se refere a um anel plano que tem um sistema de π-elétron deslocado que contém 4n+2 π elétrons, em que n é um número inteiro. Aromáticos podem ser opcionalmente substituídos. O termo "aromático" inclui tanto grupos arila (por exemplo, fenila, naftalenila) quanto grupos heteroarila (por exemplo, piridinila, quinolinila).
[0248] O termo "arila" se refere a um anel aromático em que cada um dos átomos que formam o anel é um átomo de carbono. Grupos arila podem ser opcionalmente substituídos. Exemplos de grupos arila incluem, porém sem limitação, fenila e naftila. Em algumas modalidades, a arila é fenila. Dependendo da estrutura, um grupo arila pode ser um monorradical ou um dirradical (isto é, um grupo arileno). Salvo caso especificamente declarado no relatório descritivo, o termo "arila" ou o prefixo "ar-" (como em "aralquila") significa que inclui radicais arila que são opcionalmente substituídos. Em algumas modalidades, um grupo arila é parcialmente reduzido para formar um grupo cicloalquila definido no presente documento. Em algumas modalidades, um grupo arila é completamente reduzido para formar um grupo cicloalquila definido no presente documento.
[0249] O termo "haloalquila" denota um grupo alquila em que pelo menos um dentre os átomos de hidrogênio do grupo alquila foi substituído pelos mesmos ou diferentes átomos de halogênio, particularmente, átomos de flúor. Exemplos de haloalquila incluem monofluoro-, difluoro-ou trifluorometila, -etila ou -propila, por exemplo, 3,3,3-trifluoropropila, 2-fluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, fluorometila, ou trifluorometila. O termo "per-haloalquila" denota um grupo alquila em que todos os átomos de hidrogênio do grupo alquila foram substituídos pelos mesmos ou diferentes átomos de halogênio.
[0250] O termo "haloalcóxi" denota um grupo alcóxi em que pelo menos um dos átomos de hidrogênio do grupo alcóxi foi substituído pelos mesmos ou diferentes átomos de halogênio, particularmente átomos de flúor. Exemplos de haloalcoxila incluem monofluoro-, difluoro-ou trifluorometóxi, -etóxi ou -propóxi, por exemplo, 3,3,3-trifluoropropóxi, 2-fluoroetóxi, 2,2,2-trifluoroetóxi, fluorometóxi ou trifluorometóxi. O termo "per-haloalcóxi" denota um grupo alcóxi em que todos os átomos de hidrogênio do grupo alcóxi foram substituídos pelos mesmos ou diferentes átomos de halogênio.
[0251] Ο termo "sistema de anel bicíclico" denota dois anéis que são fusionados um ao outro por meio de uma ligação simples ou dupla comum (sistema de anel bicíclico anelado), por meio de uma sequência de três ou mais átomos comuns (sistema de anel bicíclico ligado) ou por meio de um átomo único comum (sistema de anel bicíclico em espiro). Sistemas de anel bicíclico podem ser saturados, parcialmente insaturados, insaturados ou aromáticos. Sistemas de anel bicíclico podem compreender heteroátomos selecionados a partir de N, O e S.
[0252] Os termos "carbocíclico" ou "carbociclo" se referem a um anel ou sistema de anel em que os átomos que formam a cadeia principal do anel são todos átomos de carbono. O termo distingue, então, carbocíclico de "heterocíclico" ou "heterociclos" em que a cadeia principal do anel contém pelo menos um átomo que é diferente de carbono. Em algumas modalidades, pelo menos um dos dois anéis de um carbociclo bicíclico é aromático. Em algumas modalidades, ambos os anéis de um carbociclo bicíclico são aromáticos. Carbociclo inclui cicloalquila e arila.
[0253] O termo "cicloalquila" se refere a um radical não aromático, monocíclico ou policíclico, em que cada um dos átomos que forma o anel (isto é, átomos esqueletais) é um átomo de carbono. Em algumas modalidades, cicloalquilas são saturadas ou parcialmente não saturadas. Em algumas modalidades, as cicloalquilas são compostos espirocíclicos ou em ponte. Em algumas modalidades, cicloalquilas são fusionadas com um anel aromático (nesse caso, a cicloalquila é ligada através de um átomo de carbono de anel não aromático). Os grupos cicloalquila incluem grupos que têm de 3 a 10 átomos de anel. Cicloalquilas representativas incluem, porém sem limitação, cicloalquilas que têm de três a dez átomos de carbono, de três a oito átomos de carbono, de três a seis átomos de carbono, ou de três a cinco átomos de carbono. Os radicais cicloalquila monocíclicos incluem, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila e ciclo-octila. Em algumas modalidades, a cicloalquila monocíclica é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em algumas modalidades, a cicloalquila monocíclica é ciclopentenila ou ciclo-hexenila. Em algumas modalidades, a cicloalquila monocíclica é ciclopentenila. Radicais policíclicos incluem, por exemplo, adamantila, 1,2-di-hidronaftalenila, 1,4-di-hidronaftalenila, tetrainila, decalinila, 3,4-di-hidronaftalenil-1(2H)-ona, spiro[2.2]pentila, norbornila e biciclo[1.1.1]pentila. Salvo caso declarado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo cicloalquila pode ser opcionalmente substituído.
[0254] O termo "ligado" se refere a qualquer estrutura de anel com dois ou mais anéis que contêm uma ponte que conecta dois átomos de cabeça de ponte. Os átomos de cabeça de ponte são definidos como átomos que são a parte da estrutura esquelética da molécula e que são ligados a três ou mais outros átomos esqueléticos. Em algumas modalidades, os átomos de cabeça de ponte são C, N ou P. Em algumas modalidades, a ponte é um átomo único ou uma cadeia de átomos que conecta dois átomos de cabeça de ponte. Em algumas modalidades, a ponte é uma ligação de valência que conecta dois átomos de cabeça de ponte. Em algumas modalidades, o sistema de anel ligado é cicloalquila. Em algumas modalidades, o sistema de anel ligado é heterocicloalquila.
[0255] O termo "fusionado" se refere a qualquer estrutura de anel no presente documento descrita, que está fusionada a uma estrutura em anel existente. Quando o anel fusionado é um anel de heterociclila ou um anel de heteroarila, qualquer átomo de carbono na estrutura de anel existente que se torna parte do anel de heterociclila fusionado ou o anel de heteroarila fusionado pode ser substituído por um ou mais átomos de N, S e O. Os exemplos não limitantes de estruturas de anel de heterociclila ou heteroarila fusionada incluem heterociclo 6-5 fusionado, heterociclo 6-6 fusionado, heterociclo 5-6 fusionado, heterociclo 5-5 fusionado, heterociclo 7-5 fusionado, e heterociclo 5-7 fusionado.
[0256] O termo "haloalquila" se refere a um radical alquila, como definido acima, que é substituído por um ou mais radicais halo, como definido acima, por exemplo, trifluorometila, difluorometila, fluorometila, triclorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 1,2-difluoroetila, 3-bromo-2-fluoropropila, 1,2-dibromoetila, e similares. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo haloalquila pode ser opcionalmente substituído.
[0257] O termo "haloalcóxi" se refere a um radical alcóxi, como definido acima, que é substituído por um ou mais radicais halo, como definido acima, por exemplo, trifluorometóxi, difluorometóxi, fluorometóxi, triclorometóxi, 2,2,2-trifluoroetóxi, 1,2-difluoroetóxi, 3-bromo-2-fluoropropóxi, 1,2-dibromoetóxi, e similares. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo haloalcóxi pode ser opcionalmente substituído.
[0258] O termo "fluoroalquila" se refere a uma alquila em que um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um átomo de flúor. Em um aspecto, uma fluoroalquila é uma C1—C6 fluoroalquila. Em algumas modalidades, a fluroalquila é independentemente selecionada dentre trifluorometila, difluorometila, fluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 1-fluorometil-2-fluoroetila e similares.
[0259] O termo "heteroalquila" se refere a um grupo alquila em que um ou mais átomos esqueletais da alquila são selecionados a partir de um átomo diferente de carbono, por exemplo, oxigênio, nitrogênio (por exemplo, -NH-, N(alquil)-, ou -N(aril)-), enxofre (por exemplo, -S-, S(=O)-, ou —S(=O)2_) , ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, uma heteroalquila é fixada ao restante da molécula em um átomo de carbono da heteroalquila. Em algumas modalidades, uma heteroalquila é fixada ao restante da molécula em um heteroátomo da heteroalquila. Em algumas modalidades, uma heteroalquila é uma C1-C6 heteroalquila. Grupos heteroalquila representativos incluem, porém sem limitação, -OCH2OMe, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2OMe, ou OCH2CH2OCH2CH2NH2.
[0260] O termo "heteroalquileno" se refere a um radical alquila como descrito acima em que um ou mais átomos de carbono da alquila são substituídos por um átomo de O, N ou S. "Heteroalquileno" ou "cadeia de heteroalquileno" se refere a uma cadeia de heteroalquila divalente linear ou ramificada que liga o restante da molécula a um grupo de radical. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, o grupo heteroalquila ou heteroalquileno pode ser opcionalmente substituído como descrito a seguir. Grupos heteroalquileno representativos incluem, porém sem limitação, -OCH2CH2O-, -OCH2CH2OCH2CH2O-, ou -OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2O-.
[0261] O termo "heterocicloalquil" se refere a um grupo cicloalquila que inclui pelo menos um heteroátomo selecionado dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre. A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, o radical heterocicloalquila pode ser um sistema de anel monocíclico, bicíclico que pode incluir sistemas de anéis fusionados (quando fusionados com um anel de heteroarila ou uma arila, a heterocicloalquila é ligada através de um átomo de anel não aromático) ou sistemas de anéis unidos por ponte. Os átomos de nitrogênio, carbono ou enxofre no radical heterociclila podem ser opcionalmente oxidados. O átomo de nitrogênio pode ser opcionalmente quaternizado. O radical heterocicloalquila é parcial ou completamente saturado. Exemplos de radicais heterocicloalquila incluem, porém sem limitação, dioxolanila, tienil[1,3]ditianila, tetra-hidroquinolila, tetra-hidroisoquinolila, deca-hidroquinolila, deca-hidroisoquinolila, imidazolinila, imidazolidinila, isotiazolidinila, isoxazolidinila, morfolinila, octa-hidroindolila, octa-hidroisoindolila, 2-oxopiperazinila, 2-oxopiperidinila, 2-oxopirrolidinila, oxazolidinila, piperidinila, piperazinila, 4-piperidonila, pirrolidinila, pirazolidinila, quinuclidinila, tiazolidinila, tetra-hidrofurila, tritianila, tetra-hidropiranila, tiomorfolinila, tiamorfolinila, 1-oxo-tiomorfolinila, 1,1-dioxo-tiomorfolinila. O termo heterocicloalquila também inclui todas as formas de anel de carboidratos, incluindo, porém, sem limitação, monossacarídeos, dissacarídeos e oligossacarídeos. A menos que indicado o contrário, heterocicloalquilas têm de 2 a 12 átomos de carbono no anel. Em algumas modalidades, heterocicloalquilas têm de 2 a 10 átomos de carbono no anel. Em algumas modalidades, heterocicloalquilas têm de 2 a 10 carbonos no anel e 1 ou 2 átomos de N. Em algumas modalidades, heterocicloalquilas têm de 2 a 10 carbonos no anel e 3 ou 4 átomos de N. Em algumas modalidades, heterocicloalquilas têm de 2 a 12 carbonos, 0-2 átomos de N, 0-2 átomos de O, 0-2 átomos de P, e 0-1 átomos de S no anel. Em algumas modalidades, heterocicloalquilas têm de 2 a 12 carbonos, 1-3 átomos de N, 0-1 átomos de O, e 0-1 átomos de S no anel. Entende-se que ao se referir ao número de átomos de carbono em uma heterocicloalquila, o número de átomos de carbono na heterocicloalquila não é o mesmo que o número total de átomos (incluindo os heteroátomos) que compõem a heterocicloalquila (por exemplo, átomos da cadeia principal do anel de heterocicloalquila). A menos que indicado especificamente o contrário no relatório descritivo, um grupo heterocicloalquila pode ser opcionalmente substituído.
[0262] O termo "heterociclo" ou "heterocíclico" se refere a anéis heteroaromáticos (também conhecidos como heteroarilas) e anéis de heterocicloalquila (também conhecidos como grupos heteroalicíclicos) que incluem pelo menos um heteroátomo selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, em que cada grupo heterocíclico tem de 3 a 12 átomos em seu sistema de anel, e desde que qualquer anel não contenha dois átomos adjacentes de O ou S. Em algumas modalidades, heterociclos são monocíclicos, bicíclicos, policíclicos, espirocíclicos ou compostos em ponte. Os grupos heterocíclicos não aromáticos (também conhecidos como heterocicloalquilas) incluem anéis que têm de 3 a 12 átomos em seu sistema de anel e grupos heterocíclicos aromáticos incluem anéis que têm de 5 a 12 átomos em seu sistema de anel. Os grupos heterocíclicos incluem sistemas de anel benzofusionados. Exemplos de grupos heterocíclicos não aromáticos são pirrolidinila, tetra-hidrofuranila, di-hidrofuranila, tetra-hidrotienila, oxazolidinonila, tetra-hidropiranila, di-hidropiranila, tetra-hidrotiopiranila, piperidinila, morfolinila, tiomorfolinila, tioxanila, piperazinila, aziridinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, homopiperidinila, oxepanila, tiepanila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinila, pirrolin-2-ila, pirrolin-3-ila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3-dioxolanila, pirazolinila, ditianila, ditiolanila, di-hidropiranila, di-hidrotienila, di-hidrofuranila, pirazolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanila, 3-azabiciclo[4.1.O]heptanila, 3h-indolila, indolin-2-onila, isoindolin-l-onila, isoindolina-1,3-dionila, 3,4-di-hidroisoquinolin-1(2H)-onila, 3,4-di-hidroquinolin-2(1H)-onila, isoindolina-1,3-ditionila, benzo[d]oxazol-2(3H)-onila, lH-benzo[d]imidazol-2(3H)-onila, benzo[d]tiazol-2(3H)-onila e quinolizinila. Exemplos de grupos heterocíclicos aromáticos são piridinila, imidazolila, pirimidinila, pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, quinolinila, isoquinolinila, indolila, benzimidazolila, benzofuranila, cinolinila, indazolila, indolizinila, ftalazinila, piridazinila, triazinila, isoindolila, pteridinila, purinila, oxadiazolila, tiadiazolila, furazanila, benzofurazanila, benzotiofenila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinazolinila, quinoxalinila, naftiridinila e furopiridinila. Os grupos anteriores são C-fixados (ou C-ligados) ou N-fixados, quando for possível. Por exemplo, um grupo derivado de pirrol inclui tanto pirrol-1-ila (N-fixada) quanto pirrol-3-ila (C-fixada). Além disso, um grupo derivado de imidazol inclui imidazol-1-ila ou imidazol-3-ila (ambas N-fixadas) ou imidazol-2-ila, imidazol-4-ila ou imidazol-5-ila (todas C-fixadas). Os grupos heterocíclicos incluem sistemas de anel benzofusionados. Os heterociclos não aromáticos são opcionalmente substituídos por uma ou duas frações de oxo (=O), como pirrolidin-2-ona. Em algumas modalidades, pelo menos um dos dois anéis de um heterociclo bicíclico é aromático. Em algumas modalidades, ambos os anéis de um heterociclo bicíclico são aromáticos.
[0263] O termo "heteroarila" se refere a um grupo arila que inclui um ou mais heteroátomos de anel selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. A heteroarila é monocíclica ou bicíclica. Exemplos ilustrativos de heteroarila monocíclicas incluem piridinila, imidazolila, pirimidinila, pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, piridazinila, triazinila, oxadiazolila, tiadiazolila, furazanila, indolizina, indol, benzofurano, benzotiofeno, indazol, benzimidazol, purina, quinolizina, quinolina, isoquinolina, cinolina, ftalazina, quinazolina, quinoxalina, 1,8-naftiridina e pteridina. Exemplos ilustrativos de heteroarila monocíclicas incluem piridinila, imidazolila, pirimidinila, pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, piridazinila, triazinila, oxadiazolila, tiadiazolila e furazanila. Exemplos ilustrativos de heteroarilas biciclicas inclueim indolizina, indol, benzofurano, benzotiofeno, indazol, benzimidazol, purina, quinolizina, quinolina, isoquinolina, cinolina, ftalazina, quinazolina, quinoxalina, 1,8-naftiridina e pteridina. Em algumas modalidades, heteroarila é piridinila, pirazinila, pirimidinila, tiazolila, tienila, tiadiazolila ou furila. Em algumas modalidades, uma heteroarila contém 0-6 átomos de N no anel. Em algumas modalidades, uma heteroarila contém 1-4 átomos de N no anel. Em algumas modalidades, uma heteroarila contém 4-6 átomos de N no anel. Em algumas modalidades, uma heteroarila contém 0-4 átomos de N, 0-1 átomos de Ο, 0-1 átomos de P, e 0-1 átomos de S no anel. Eim algumas modalidades, uma heteroarila contém 1-4 átomos de N, 0-1 átomos de O e 0-1 átomos de S no anel. Em algumas modalidades, a heteroarila é uma C1-C9heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila monocíclica é a C1-C5heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila monociclica é uma heteroarila de 5 membros ou 6 membros. Em algumas modalidades, uma heteroarila biciclica é uma C6-C9 heteroarila. Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é parcialmente reduzido para formar um grupo heterocicloalquila definido no presente documento. Em algumas modalidades, um grupo heteroarila é completamente reduzido para formar um grupo heterocicloalquila definido no presente documento.
[0264] O termo "fração" se refere a um segmento especifico ou grupo funcional de uma molécula. As frações químicas são entidades químicas frequentemente reconhecidas incorporadas ou anexadas a uma molécula.
[0265] O termo "opcionalmente substituído" ou "substituído" significa que o grupo citado é opcionalmente substituído por um ou mais grupos adicionais individual e independentemente selecionados a partir de D, halogênio, -CN, -NH2, -NH (alquila) , -N (alquila) 2, -OH, -CO2H, CO2alquila, -C(=O)NH2, -C (=O) NH (alquila) , -C (=O) N (alquila) 2, -S (=O) 2NH2, -S(=O) 2NH(alquila), -S(=O) 2N (alquila)2, alquila, cicloalquila, fluoroalquila, heteroalquila, alcóxi, fluoroalcóxi, heterocicloalquila, arila, heteroarila, arilóxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfóxido, arilsulfóxido, alquilsulfona e arilsulfona. Em algumas outras modalidades, substituintes opcionais são independentemente selecionados a partir de D, halogênio, -CN, -NH2, -NH(CH3), -N(CH3)2, -OH, -CO2H, -CO2 (C1-C4alquila) , -C(=O)NH2, -C (=O) NH (C1-C4alquila) , -C (=O)N(C1-C4alquila) 2, - S(=O)2NH2, -S (=O) 2NH (C1-C4alquila) , -S (=O)2N (C1-C4alquila) 2, C1-C4alquila, C3-C6Cicloalquila, C1-C4fluoroalquila, C1-C4heteroalquila, C1-C4alcóxi, C1-C4fluoroalcóxi, -SC1- C4alquila, -S (=O) C1-C4alquila e -S (=O) 2 (C1-C4alquila) . Em algumas modalidades, substituintes opcionais são independentemente selecionados a partir de D, halogênio, -CN, -NH2, -OH, -NH(CH3), -N(CH3)2, - NH (ciclopropila) , -CH3, -CH2CH3, -CF3, -OCH3, e -OCF3. Em algumas modalidades, grupos substituídos são substituídos por um ou dois dos grupos anteriores. Em algumas modalidades, um substituinte opcional em um átomo de carbono alifático (acídico ou cíclico) inclui oxo (=O).
[0266] O termo "tautômero" se refere a um deslocamento de prótons a partir de um átomo de uma molécula para um outro átomo da mesma molécula. Os compostos apresentados no presente documento podem estar presentes como tautômeros. Tautômeros são compostos que são interconversíveis por migração de um átomo de hidrogênio, acompanhado por uma comutação de uma ligação simples e ligação dupla adjacente. Em disposições de ligação em que a tautomerização é possível, um equilíbrio químico dos tautômeros irá existir. Todas as formas tautoméricas dos compostos reveladas no presente documento são contempladas. A razão exata dos tautômeros depende de vários fatores, incluindo a temperatura, o solvente e o pH. Alguns exemplos de interconversões tautoméricas incluem:
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[0267] Os termos "administrar", "administrando", "administração" e similares, como usado no presente documento, se referem aos métodos que podem ser usados para permitir a entrega de compostos ou composições ao local desejado de ação biológica. Esses métodos incluem, porém, sem limitação vias orais (p.o.), vias intraduodenais (i.d.), injeção parenteral (incluindo intravenosa (i.v.), subcutânea (s.c.), intraperitoneal (i.p.), intramuscular (i.m.), intravascular ou infusão (inf.)), administração tópica (top.) e retal (p.r.). Os elementos versados na técnica são familiares às técnicas de administração que podem ser empregadas com os compostos e métodos descritos no presente documento. Em algumas modalidades, os compostos e as composições descritos no presente documento são administrados oralmente.
[0268] Os termos "coadministração" ou similares, como usado no presente documento, devem abranger a administração dos agentes terapêuticos selecionados a um único paciente, e são destinados a incluírem regimes de tratamento em que os agentes são administrados pela mesma via de administração ou por uma via de administração diferente ou ao mesmo tempo ou em um momento diferente.
[0269] Os termos "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz", como usado no presente documento, se referem a uma quantidade suficiente de um agente ou um composto que é administrado que aliviará em alguma medida um ou mais dos sintomas da doença ou condição que é tratada; por exemplo, uma redução e/ou alivio de um ou mais sinais, sintomas ou causas de uma doença, ou qualquer outra alteração desejada de um sistema biológico. Por exemplo, uma "quantidade eficaz" para usos terapêuticos pode ser uma quantidade de um agente que fornece uma diminuição clinicamente significativa em um ou mais sintomas de doença. Uma quantidade "eficaz" pode ser determinada com o uso de técnicas, como um estudo de escalonamento de dose, em casos individuais.
[0270] Os termos "melhorar" ou "que melhora", como usado no presente documento, significa aumentar ou prolongar em quantidade, potência ou duração um efeito desejado. Por exemplo, em relação a melhorar splicing de um alvo, o termo "melhorar" pode se referir à habilidade para aumentar ou prolongar o splicing, em quantidade, potência ou duração, do alvo.
[0271] O termo "indivíduo" ou "paciente" abrange mamíferos. Os exemplos de mamíferos incluem, porém sem limitação, qualquer membro da classe Mamíferos: seres humanos, primatas não humanos como chimpanzés e outras espécies de símios e macacos; animais agropecuários como gado, cavalos, ovelhas, cabras, suíno; animais domésticos como coelhos, cachorros e gatos; animais de laboratório incluindo roedores, como ratos, camundongos e porcos-da-índia e similares. Em um aspecto, o mamífero é um ser humano. O termo "animal" como usado no presente documento compreende seres humanos e animais não humanos. Em uma modalidade, um "animal não humano" é um mamífero, por exemplo, um roedor, como um rato ou um camundongo. Em uma modalidade, um animal não humano é um camundongo.
[0272] Os termos "tratar", "que trata" ou "tratamento", como usado no presente documento, incluem aliviar, reduzir ou melhorar pelo menos um sintoma de uma doença ou condição, prevenindo sintomas adicionais, inibindo a doença ou condição, por exemplo, interrompendo o desenvolvimento da doença ou condição, aliviando a doença ou condição, causando a regressão da doença ou condição, aliviando uma condição causada pela doença ou condição, ou cessando os sintomas da doença ou condição profilática e/ou terapeuticamente.
[0273] O termo "prevenir" ou "prevenção" de um estado de doença denota fazer com que os sintomas clínicos do estado de doença não se desenvolvem em um indivíduo que pode ser exposto a ou é predisposto ao estado de doença, mas ainda não experimentou ou exibiu sintomas do estado de doença.
[0274] Os termos "composição farmacêutica" e "formulação farmacêutica" (ou "formulação") são usados intercambiavelmente e denotam uma mistura ou solução que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ingrediente farmaceuticamente ativo juntamente com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis a serem administrados a um indivíduo, por exemplo, um ser humano que precisa do mesmo.
[0275] O termo "combinação farmacêutica", como usado no presente documento, significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo e inclui ambas as combinações fixas e não fixas dos ingredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto descrito no presente documento e um coagente são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. O termo "combinação não fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto descrito no presente documento e um coagente são administrados a um paciente como entidades separadas simultânea, paralela ou sequencialmente sem limites específicos de tempo decorrido, sendo que tai administração fornece níveis eficazes dos dois compostos no corpo do paciente. O último se aplica à terapia de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais ingredientes ativos.
[0276] O termo "farmaceuticamente aceitável" denota um atributo de um material que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é, de modo geral, segura, não tóxica, e nem biologicamente ou de outra forma indesejável e é aceitável para uso veterinário bem como humano. "Farmaceuticamente aceitável" se refere a um material, como um carreador ou diluente, que não anula a atividade biológica ou as propriedades do composto, e é relativamente não tóxico, isto é, o material pode ser administrado a um indivíduo sem causar efeitos biológicos indesejáveis ou sem interagir de uma maneira prejudicial com qualquer um dos componentes da composição na qual está contido.
[0277] Os termos "excipiente farmaceuticamente aceitável", "carreador farmaceuticamente aceitável" e "excipiente terapeuticamente inerte" podem ser usados intercambiavelmente e denotam qualquer ingrediente farmaceuticamente aceitável em uma composição farmacêutica que não tem atividade terapêutica e é não tóxico ao indivíduo administrado, como desintegradores, ligantes, cargas, solventes, tampões, agentes de tonicidade, estabilizantes, antioxidantes, tensoativos, carreadores, diluentes, excipientes, conservantes ou lubrificantes usados na formulação de produtos farmacêuticos.
[0278] O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" denotam sais que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. "Sais farmaceuticamente aceitáveis" incluem tanto sais de adição de ácido quanto de base. Um "sal farmaceuticamente aceitável" pode se referir a uma formulação de um composto que não causa irritação significativa a um organismo ao qual é administrado e/ou não anula a atividade e propriedades biológicas do composto. Em algumas modalidades, os sais farmaceuticamente aceitáveis são obtidos reagindo-se um SMSM composto de qualquer uma das Fórmulas (I)-(V) com um ácido. Sais farmaceuticamente aceitáveis também são obtidos através da reação de um composto de qualquer uma das Fórmulas (I)-(V) com uma base para formar um sal.
[0279] O termo "ácido nucleico" como usado no presente documento se refere, de modo geral, a um ou mais nucleobases, nucleosídeos ou nucleotídeos, e o termo includes polinucleobases, polinucleosídeos, e polinucleotídeos.
[0280] O termo "polinucleotídeo", como usado no presente documento, se refere, de modo geral, a uma molécula que compreende duas ou mais subunidades de ácido nucleico ligadas, por exemplo, nucleotídeos, e pode ser usado intercambiavelmente com "oligonucleotídeo". Por exemplo, um polinucleotídeo pode incluir um ou mais nucleotídeos selecionados a partir de adenosina (A) , citosina (C) , guanina (G) , timina (T) e uracila (U) , ou variantes dos mesmos. Um nucleotídeo inclui, de modo geral, um nucleosídeo e pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais grupos fosfato (PO3) . Um nucleotídeo pode incluir uma nucleobase, um açúcar de cinco carbonos (ribose ou desoxirribose), e um ou mais grupos fosfato. Ribonucleotídeos incluem nucleotídeos nos quais o açúcar é ribose. Desoxirribonucleotídeos incluem nucleotídeos nos quais o açúcar é desoxirribose. Um nucleotídeo pode ser um nucleosídeo monofosfato, nucleosídeo difosfato, nucleosídeo trifosfato ou um nucleosídeo polifosfato. Por exemplo, um nucleotídeo pode ser um desoxirribonucleosideo polifosfato, como um desoxirribonucleosideo trifosfato (dNTP), dNTPs exemplificativos incluem desoxiadenosina trifosfato (dATP), trifosfato desoxicitidina(dCTP), desoxiguanosina trifosfato (dGTP), uridina trifosfato (dUTP) e desoxitimidina trifosfato (dTTP). dNTPs também pode incluir etiquetas detectáveis, como etiquetas luminescentes ou marcadores (por exemplo, fluoróforos). Por exemplo, um nucleotídeo pode ser uma purina (isto é, A ou G, ou variante dos mesmos) ou a pirimidina (isto é, C, T ou U, ou variante dos mesmos). Em alguns exemplos, um polinucleotídeo é ácido desoxirribonucleico (DNA), ácido ribonucleico (RNA), ou derivados ou variantes dos mesmos. Polinucleotídeos exemplificativos incluem, porém sem limitação, RNA de interferência curto (siRNA), um microRNA (miRNA), um RNA plasmidal (pDNA), um RNA grampo curto (shRNA), RNA nuclear pequeno (snRNA), RNA mensageiro (mRNA), mRNA precursor (pré-mRNA), RNA antissenso (asRNA), e RNA heteronuclear (hnRNA), e abrange tanto a sequência de nucleotídeo quanto quaisquer outras modalidades estruturais do mesmo, como um de fita única, fita dupla, fita tripla, em hélice, de grampo, de haste-alça, protuberância, etc. Em alguns casos, um polinucleotídeo é circular. Um polinucleotídeo pode ter vários comprimentos. Por exemplo, um polinucleotídeo pode ter um comprimento de pelo menos cerca de 7 bases, 8 bases, 9 bases, 10 bases, 20 bases, 30 bases, 40 bases, 50 bases, 100 bases, 200 bases, 300 bases, 400 bases, 500 bases, 1 quilobase (kb) , 2 kb, 3, kb, 4 kb, 5 kb, 10 kb, 50 kb ou mais. Um polinucleotídeo pode ser isolado de uma célula ou um tecido. Por exemplo, a sequência de polinucleotídeos pode compreender moléculas de DNA/RNA isoladas e purificadas, moléculas de DNA/RNA sintéticas e/ou análogos de DNA/RNA sintéticos.
[0281] Polinucleotideos podem incluir um ou mais variantes de nucleotídeo, que incluem nucleotídeo(s) não padrão, nucleotídeo(s) não natural (is), análogo (s) de nucleotídeo e/ou nucleotídeos modificados. Exemplos de nucleotídeos modificados incluem, porém sem limitação, diaminopurina, 5-fluorouracila, 5-bromouracila, 5-clorouracila, 5-iodouracila, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5-(carboxi-hidroxilmetil)uracila, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carboximetilaminometiluracila, di-hidrouracila, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenia, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2,2-dimetilguanina, 2-metiladenia, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6-adenina, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracila, 5-metoxiaminometil-2-tiouracila, beta-D- manosilqueosina, 5'-metoxicarboximetiluracila, 5-metoxiuracila, 2-metiltio-N6- isopenteniladenia, ácido uracil-5-oxiacetico (v) , wibutoxosina, pseudouracila, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracila, 2-tiouracila, 4-tiouracila, 5-metiluracila, metiléster de ácido uracil-5- oxiacético, 5-metil-2-tiouracila, 3 —(3 — amino-3-N-2-carboxipropil)uracila, (acp3)w, 2,6-diaminopurina e similares. Em alguns casos, nucleotídeos podem incluir modificações em suas frações de fosfato, incluindo modificações a uma fração de trifosfato. Exemplos não limitantes de tais modificações incluem cadeias de fosfato de maior comprimento (por exemplo, uma cadeia de fosfato que têm 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais frações de fosfato) e modificações com frações de tiol (por exemplo, alfa-tiotrifosfato e beta-tiotrifosfatos). Moléculas de ácido nucleico também podem ser modificadas na fração de base (por exemplo, em um ou mais átomos que tipicamente estão disponíveis para formar uma ligação de hidrogênio com um nucleotídeo complementar e/ou em um ou mais átomos que não têm tipicamente a capacidade para formar uma ligação de hidrogênio com um nucleotídeo complementar) , fração de açúcar ou esqueleto de fosfato. Moléculas de ácido nucleico também podem conter grupos modificados por amina, como amino-alil-1-dUTP (aa-dUTP) e amino-hexilacrilamida-dCTP (aha-dCTP) para permitir a fixação covalente de frações reativas de amina, como ésteres de N-hidroxissuccinimida (NHS) . Alternativas para pares de base de DNA ou pares de base de RNA padrão nos oligonucleotídeos da presente revelação podem fornecer maior densidade em bits por mm cúbico, maior segurança (resistente a síntese acidental ou proposital de toxinas naturais), discriminação mais fácil em polimerases fotoprogramadas, ou estrutura secundária inferior. Tais pares de base alternativos compatíveis com polimerases naturais e mutantes para de novo e/ou síntese de amplificação são descritos em Betz K, Malyshev DA, Lavergne T, Welte W, Diederichs K, Dwyer TJ, Ordoukhanian P, Romesberg FE, Marx A. Nat. Chem. Biol. 2012 Jul;8(7):612-4, que é incorporado ao presente documento a título de referência para todos os propósitos.
[0282] Como usado no presente documento, os termos "polipeptídeo", "proteína" e "peptídeo" são usados intercambiavelmente e se referem a um polímero de resíduos de aminoácido ligados por meio de ligações de peptídeo e que podem ser compostos por duas ou mais cadeias de polipeptídeo. Os termos "polipeptídeo", "proteína" e "peptídeo" se referem a um polímero de pelo menos dois monômeros de aminoácido unidos através de ligações de amida. Um aminoácido pode ser o isômero L-óptico ou o isômero D-óptico. Mais especificamente, os termos "polipeptídeo", "proteína" e "peptídeo" se referem a uma molécula composta por dois ou mais aminoácidos em uma ordem específica; por exemplo, a ordem como determinada pela sequência de base de nucleotídeos no gene ou RNA que codifica para a proteína. Proteínas são essenciais para a estrutura, função e regulação das células, dos tecidos e dos órgãos do corpo, e cada proteína tem funções únicas. Exemplos são hormônios, enzimas, anticorpos e quaisquer fragmentos dos mesmos. Em alguns casos, uma proteína pode ser uma porção da proteína, por exemplo, um domínio, um subdomínio ou um motivo da proteína. Em alguns casos, uma proteína pode ser uma variante (ou mutação) da proteína, em que um ou mais resíduos de aminoácido são inseridos, deletados e/ou substituídos pela sequência de aminoácido de ocorrência natural (ou pelo menos um conhecido) da proteína. Uma proteína ou uma variante dos mesmos pode ser de ocorrência natural ou recombinante.
[0283] Métodos para a detecção e/ou medição de polipeptídeos em material biológico são bem conhecidos na técnica e incluem, porém sem limitação, Western-blotting, citometria de fluxo, ELISAs, RIAs, e várias técnicas proteômicas. Um método exemplificativo para medir ou detectar um polipeptídeo é um imunoensaio, como um ELISA. Esse tipo de quantificação de proteína pode ter como base um anticorpo com a capacidade para capturar um antígeno específico, e um segundo anticorpo com a capacidade para detectar o antígeno capturado. Ensaios exemplificativos para detecção e/ou medição de polipeptídeos são descritos em Harlow, E. e Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, (1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press.
[0284] Métodos para detecção e/ou medição de RNA em material biológico são bem conhecidos na técnica e incluem, porém sem limitação, Northern-blotting, ensaio de proteção de RNA, RT PCR. Métodos adequados são descritos em Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Quarta Edição) de Michael R. Green, Joseph Sambrook, Peter MacCallum 2012, 2028 pp, ISBN 978-1-936113-42-2.
[0285] Como usado aqui, um "composto de peso molecular pequeno" pode ser usado intercambiavelmente com "molécula pequena" ou "molécula orgânica pequena". Moléculas pequenas se referem a compostos diferentes de peptídeos ou oligonucleotídeos; e tipicamente têm pesos moleculares menores que cerca de 2000 Daltons, por exemplo, menos que cerca de 900 Daltons.
[0286] Uma ribonucleoproteína (RNP) se refere a uma nucleoproteína que contém RNA. Uma RNP pode ser um complexo de um ácido ribonucleico e um proteína de ligação a RNA. Tal combinação também pode ser denominada complexo de proteína-RNA. Esses complexos podem funcionar em várias funções biológicas que incluem, porém sem limitação, replicação de DNA, expressão de gene, metabolismo de RNA, e splicing de pré-mRNA. Exemplos de RNPs incluem o ribossomo, a enzima telomerase, válvula ribonucleoproteínas de válvula, RNase P, RNPs nuclear heterogêneos (hnRNPs) e RNPs nucleares pequenos (snRNPs).
[0287] Transcrições de RNA nascentes de genes de codificação de proteína e intermediários de processamento de mRNA, coletivamente denominados pré-mRNA, são ligados, de modo geral, por proteínas nos núcleos de células eucarióticas. A partir do momento em que transcrições nascentes surgem primeiro a partir de RNA polimerase (por exemplo, RNA polimerase II) até mRNAs maduras serem transportadas para o citoplasma, as moléculas de RNA são associadas a um conjunto abundante de componentes de complexo de splicing (por exemplo, proteínas nucleares e snRNAs). Essas proteínas podem ser componentes de hnRNPs, que podem conter RNA nuclear heterogêneo (hnRNA) (por exemplo, pré-mRNA e complexos nucleares de RNA) de vários tamanhos.
[0288] A função de componentes de complexo de splicing em splicing e/ou regulação de splicing. Os componentes de complexo de splicing podem incluir, porém sem limitação, proteínas ribonucleares (RNPs), proteínas de splicing, RNAs nucleares pequenos (snRNAs), ribonucleoproteínas nucleares pequenas (snRNPs) e ribonucleoproteínas nucleares heterogêneas (hnRNPs). Componentes de complexo de splicing incluem, porém sem limitação, aqueles que podem ser exigidos para splicing, como splicing constitutivo, splicing alternativo, splicing regulado e splicing de mensagens específicas ou grupos de mensagens. Um grupo de proteínas relacionado, as proteínas ricas em serina e arginina (proteínas SR) , podem funcionar em splicing de pré-mRNA constitutivo e também podem regular seleção de sítio de splice alternativo de uma maneira dependente de concentração. As proteínas SR tipicamente têm uma estrutura modular que consiste em um ou dois motivos de reconhecimento de RNA (RRMs) e um C-terminal rico em resíduos de arginina e serina (domínio de RS). Suas atividades em splicing alternativo podem ser antagonizadas por membros da família hnRNP A/B de proteínas. Componentes de complexo de splicing também podem incluir proteínas que são associadas a um ou mais snRNAs. As proteínas SR em ser humano incluem, porém sem limitação, SC35, SRp55, SRp40, SRm300, SFRS10, TASR-1, TASR-2, SF2/ASF, 9G8, SRp75, SRp30c, SRp20 e P54/SFRS11. Outros componentes de complexo de splicing em ser humano que podem estar envolvidos em seleção de sítio de splice incluem, porém sem limitação, fatores auxiliares de U2 snRNA (por exemplo, U2AF65, U2AF35) , Urp/U2AFl-RS2, SF1/BBP, CBP80, CBP 20, SF1 e PTB/hnRNP1. As proteínas hnRNP em seres humanos incluem, porém sem limitação, Al, A2/B1, L, Μ, K, U, F, H, G, R, I e C1/C2. Genes humanos que codificam hnRNPs incluem HNRNPA0, HNRNPA1, HNRNPA1 L1, HNRNPA1L2, HNRNPA3, HNRNPA2B1, HNRNPAB, HNRNPB1, HNRNPC, HNRNPCL1, HNRNPD, HNRPDL, HNRNPF, HNRNPH1, HNRNPH2, HNRNPH3, HNRNPK, HNRNPL, HNRPLL, HNRNPM, HNRNPR, HNRNPU, HNRNPUL1, HNRNPUL2, HNRNPUL3, e FMR1. Componentes de complexo de splicing pode ser estável ou transientemente associados a um snRNP ou a uma transcrição.
[0289] O termo "íntron" se refere tanto à sequência de DNA em um gene quanto à sequência correspondente na transcrição de RNA não processada. Como parte da trajetória de processamento de RNA, os introns podem ser movidos por splicing de RNA logo após ou de modo concomitante com a transcrição, Íntrons são encontrados nos genes da maioria dos organismos e de muitos vírus. Os mesmos podem estar localizados em uma ampla faixa de genes, incluindo aqueles que geram proteínas, RNA ribossomal (rRNA), e RNA de transferência (tRNA).
[0290] Uma "éxon" pode ser qualquer parte de um gene que codificada uma parte do RNA maduro final produzido por tal gene após os introns terem sido removidos por splicing de RNA. O termo "éxon" se refere tanto à sequência de DNA em um gene quanto à sequência correspondente nas transcrições de RNA.
[0291] Um "spliceossomo" pode ser montado a partir de snRNAs e complexos de proteína. O spliceossomo pode remover introns de um pré-mRNA transcrito.
[0292] "Dose eficaz média" (ED50) é a dose na qual 50 % de uma população expressa uma resposta especifica. "Dose letal média" (LD50) é a dose na qual 50 % de uma população morre. "Dose tóxica média" (TD50) é a dose na qual 50 % de uma população expressa um efeito tóxico especifico. Um indicador farmacológico particularmente útil é o "índice terapêutico" que é tradicionalmente definido como a razão de LD50 para ED50 ou a razão de TD50 para ED50. O índice terapêutico fornece um indicador simples e útil do benefício versus efeito adverso de um fármaco. Aqueles fármacos que têm um índice terapêutico alto têm uma janela terapêutica grande, isto é, os fármacos podem ser administrados ao longo de uma faixa mais ampla de doses eficazes sem incorrer em eventos adversos significativos. Por outro lado, os fármacos que têm um índice terapêutico pequeno que têm uma janela terapêutica pequena (faixa pequena de doses eficazes sem incorrer em eventos adversos significativos) .
[0293] O termo "AUC" como usado no presente documento se refere a uma abreviação para "área sob a curva" em um gráfico da concentração de um agente terapêutico ao longo do tempo de uma determinada parte ou tecido, como sangue ou plasma, de um indivíduo a quem o agente terapêutico foi administrado.
Moduladores de Splicing de Molécula Pequena (SMSMs)
[0294] Constatou-se que compostos dessa invenção, e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são eficazes como agentes para o uso no tratamento, na prevenção ou no melhoramento de uma doença ou condição associada a um RNA-alvo. A presente invenção fornece a constatação inesperado de que determinadas moléculas químicas pequenas podem modificar eventos de splicing em moléculas de pré-mRNA, no presente documento denominadas moduladores de splicing de molécula pequena (SMSMs). Esses SMSMs podem modular eventos de splicing específicos em moléculas de pré-mRNA específicas. Esses SMSMs podem operar por uma variedade de mecanismos para modificar eventos de splicing. Por exemplo, os SMSMs dessa invenção podem: 1) interferir com a formação e/ou função e/ou outras propriedades de complexos de splicing, spliceossomos, e/ou seus componentes, como hnRNPs, snRNPs, SR-proteínas e outros fatores ou elementos de splicing, que resulta na prevenção ou indução de um evento de splicing em uma molécula de pré-mRNA. Como outro exemplo; 2) prevenir e/ou modificar regulação pós-transcricional (por exemplo, splicing) de produtos de gene, como hnRNPs, snRNPs, SR-proteínas e outros fatores de splicing, que podem subsequentemente ser envolvidos na formação e/ou função de um spliceossomo ou componente de complexo de splicing; 3) prevenir e/ou modificar fosforilação, glicosilação e/ou outras modificações de produtos de gene que incluem, porém sem limitação, hnRNPs, snRNPs, SR-proteínas e outros fatores de splicing, que podem ser subsequencialmente envolvidos na formação e/ou função de um spliceossomo ou componente de complexo de splicing; 4) ligar a e/ou afetar de outra forma pré-mRNA específico, de modo que um evento de splicing específico seja impedido ou induzido, por exemplo, por meio de um mecanismo que não envolve o pareamento de base com RNA de uma maneira específica para sequência. As moléculas pequenas dessa invenção são diferentes de e não são relacionadas aos oligonucleotídeos antissenso ou de antígeno.
[0295] São descritos no presente documento são compostos que modificam splicing de produtos de gene para uso no tratamento, na prevenção e/ou atraso de progressão de doenças ou condições (por exemplo, câncer). São descritos no presente documento compostos que modificam splicing de produtos de gene em que os compostos induzem uma variante transcricionalmente inativa ou transcrição de um produto de gene. São descritos no presente documento compostos que modificam splicing de produtos de gene em que os compostos reprimem uma variante transcricionalmente ativa ou transcrição de um produto de gene.
[0296] Em um aspecto, é descrito no presente documento um composto que tem a estrutura de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0030
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR1S (=O) (=NR1) R2, -NR1S (=O) 2R2, S (=O)2N(R1)2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila, heteroarila monocíclica, ou heteroarila bicíclica fusionada;
X é -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, ou -S (=O) (=NR1) ;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, - C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é -OR1, -N (R1)2, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída,
em que C1-C6 alquila substituída compreende um ou mais substituintes diferentes de -OH, -NH2, e -CO2H,
em que C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída compreende pelo menos 2 átomos de O, 2 átomos de N, ou átomo de S, e
em que C3-C8 cicloalquila substituída compreende pelo menos 1 substituinte selecionado a partir de D, halogênio, e -OR1;
R4 é D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; G de anel é a grupo da Fórmula
Figure img0031
, em que Z é N ou CR7; e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída ou -CH2OR1;
a, b e c são, cada um, independentemente selecionados a partir de 0, 1 ou 2;
R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são, cada um,
independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não
substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído; ou
R e R13, tomados em combinação formam um anel heterocíclico de 5 ou 6 membros fusionado que tem 0 ou 1 heteroátomos de anel adicionais selecionados a partir de N, O ou S; ou
R11 e R13, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R15, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam uma ligação; ou
R13 e R14, tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se unem, formam uma C3-8 cicloalquila espirocíclica; ou
R16 e R2, tomados em combinação formam uma ligação dupla; ou
R17 e R2, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando Z é CR7, então, R3 e R7 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R16 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros; ou
quando Z é CR7 e X é -CR4R5-, então, R7 e R5 são opcionalmente tomados em combinação para formar uma ligação dupla.
[0297] Para qualquer modalidade e para todas as modalidades, os substituintes são selecionados dentre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades, a é 0, 1 ou 2. Em outras modalidades, a é 0. Em algumas outras modalidades, a é 1. Em algumas outras modalidades, a é 2.
[0298] Em algumas modalidades,
Figure img0032
Em algumas modalidades,
Figure img0033
[0299] Em algumas modalidades, Z é N e X é -NR3-, CH(CH2OR1)-, -CH (OR1) -, -C (=O) -, -S(=O)-, -S(=O)2-, ou -S (=O) (=NR1)-. Em algumas modalidades, Z é N. Em algumas modalidades, X é -NR3-. Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OH)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OCH2) -. Em algumas modalidades, X é -CH(OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH(OH)-. Em algumas modalidades, X é -CH(OCH2)-. Em algumas modalidades, X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -S(=O)—. Em algumas modalidades, X é -S(=O)2-. Em algumas modalidades, X é -S (=O) (=NR1)-.
[0300] Em algumas modalidades, R3 é H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0301] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0302] Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é -C(=O)-, -CH(CH2OR1)-, ou -CH (OR1) —. Em algumas modalidades, Z é CR7. Em algumas modalidades, X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OR1) -. Em algumas modalidades, X é -CH (OR1) - .
[0303] Em algumas modalidades, o anel Q é arila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila não substituída.
[0304] Em algumas modalidades, o anel Q é fenila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por: 0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, heteroarila, C1-6 alquila substituída com hidróxi, C1-6 alcóxi substituído com arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC(=O) -C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O) NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionados a partir de S, O, e N.
[0305] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por duas C1-6 alquila. Em algumas modalidades, dois grupos C1-6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são ligados para formar um anel de 5-6 membros.
[0306] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionado a partir de N, O e S, e é substituída por O, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo de 4-7 membros-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0307] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por uma heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0034
e
Figure img0035
; em gUe cacda rb é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, --OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2 ou 3.
[0308] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0036
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0037
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0038
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0039
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0040
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0041
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0042
[0309] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0043
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0044
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0045
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0046
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0047
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0048
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0049
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0050
[0310] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC (=O)-C1-6 alquila, -NHC(=O)-C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0311] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0312] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, 0 e S e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0313] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0051
, em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0314] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 6 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0052
em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0315] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0316] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0317] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0053
Figure img0054
em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 1, 2, ou 3.
[0318] Em algumas modalidades, X é S.
[0319] Em algumas modalidades, X é -NR3-.
[0320] Em algumas modalidades, R3 é -OR1. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH (CH3)2.
[0321] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 alquila substituída que compreende um ou mais substituintes diferentes de -OH, -NH2, e -CO2H. Em algumas modalidades, R3 é -CDs.
[0322] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CF3.
[0323] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, a C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída compreende pelo menos 2 átomos de átomo de O ou S. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCH3 ou -OCH2CH2OCF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2SCH3 ou -CH2SCH3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2SCH3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2SCH3.
[0324] Em algumas modalidades, R3 é C3-C5 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ou ciclo-octila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-heptenila ou ciclo-octenila.
[0325] Em algumas modalidades, X é -NR3- e G de anel é
Figure img0055
Em algumas modalidades, X é - NR3- e G de anel é
Figure img0056
Em algumas modalidades, X é -
Figure img0057
NR3- e G de anel é Em algumas modalidades, X é - NR3- e G de anel é
Figure img0058
[0326] Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0059
Figure img0060
em que p é 1 ou 2. Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0061
Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0062
Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0063
[0327] Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0064
Figure img0065
em que p é 1 ou 2. Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0066
Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0067
Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0068
[0328] Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0069
Figure img0070
em que cada Rc é independentemente selecionado a partir de H, D, F, -CN, -OH, -OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S (=O) 2R1, -N(R1)2, - CH2-N(R1)2, -NHS(=O)2R1, -S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -CO2R1, -OCO2R1, -C (=O) N (R1) 2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1-C (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -NR1C (=O) OR1, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, e C2-C8 heterocicloalquila substituída ou não substituída; e q é 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
[0329] Em algumas modalidades, o G de anel é
Figure img0071
Figure img0072
[0330] Em algumas modalidades,
Figure img0073
Em algumas modalidades,
Figure img0074
Em algumas modalidades,
Figure img0075
[0331] Em algumas modalidades,
Figure img0076
Em algumas modalidades,
Figure img0077
[0332] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) é selecionado a partir de um composto na Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C.
[0333] Em um aspecto, é descrito no presente documento um composto que tem a estrutura de Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0078
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR2S (=O) (=NR1) R2, -nr2s (=o) 2r2, S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila monocíclica, arila bicíclica, heteroarila monocíclica, ou heteroarila bicíclica fusionada;
X é -O-, -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -C (=C (R2) 2) -, -S-, - S (=O) -, -S (=O) 2-, ou -S (=O) (=NR1) - ;
S de anel é heterociclo bicíclico fusionado;
R é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído, ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, - C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é H, -OR1, -N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R4 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou
R4 e R5 tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se fixam, formam uma C3-8 cicloalquila substituída ou não substituída ou uma C2-7 heterocicloalquila substituída ou não substituída; e
em que o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %.
[0334] Para qualquer modalidade e para todas as modalidades, os substituintes são selecionados dentre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades, a é 0, 1 ou 2. Em outras modalidades, a é 0. Em algumas outras modalidades, a é 1. Em algumas outras modalidades, a é 2.
[0335] Em algumas modalidades,
Figure img0079
Em algumas modalidades,
Figure img0080
Em algumas modalidades,
Figure img0081
[0336] Em algumas modalidades, X é -0-, -NR3-, -S-, CR4R5-, —C (=O) —, ou —C (=CR22) — · Em algumas modalidades, X é -O-. Em algumas modalidades, X é -NR3-. Em algumas modalidades, X é -S-. Em algumas modalidades, X é -CR4R5-. Em algumas modalidades, X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -C(=CR22)-.
[0337] Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OR1)- ou CH (OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OR1) -. Em algumas modalidades, X é -CH(OR1)-.
[0338] Em algumas modalidades, R3 é H, -OR1, -N(R1)2, C1- C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0339] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0340] Em algumas modalidades, ο anel Q é arila monocíclica substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica não substituída.
[0341] Em algumas modalidades, o anel Q é fenila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por: 0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, heteroarila, C1-6 alquila substituída com hidróxi, C1-6 alcóxi substituído com arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC (=O) -C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O)NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionados a partir de S, O, e N.
[0342] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por duas C1-6 alquila. Em algumas modalidades, dois grupos C1-6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são ligados para formar um anel de 5-6 membros.
[0343] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionado a partir de N, O e S, e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo de 4-7 membros-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0344] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0082
,em que o anel P é arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0083
,em que o anel P é arila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0084
,em que o anel P é heteroarila. Em algumas modalidades, a heteroarila é selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0085
Figure img0086
; em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituída ou não substituída, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0345] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0087
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0088
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0089
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0090
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0091
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0092
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0093
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0094
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0095
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0096
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0097
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0098
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0099
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0100
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0101
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0102
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0103
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0104
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0105
Em algumas modalidades, o anel Q e
Figure img0106
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0107
[0346] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC(=O) -C1-6 alquila, -NHC(=O)-C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0347] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0108
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0109
[0348] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0110
e cada R6 é independentemente H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0349] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0350] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O e S e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0351] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0111
em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0352] Em algumas modalidades, ο anel Q é uma heteroarila monocíclica de 6 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0112
em que cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0353] Em algumas modalidades, ο anel Q é uma heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, 0 ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0354] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0355] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0113
Figure img0114
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 1, 2, ou 3.
[0356] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0115
ou
Figure img0116
e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0357] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0117
ou
Figure img0118
; e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0358] Em algumas modalidades, X é -NR3-.
[0359] Em algumas modalidades, R3 é -OR1. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH (CH3)2.
[0360] Em algumas modalidades, R3 é -CD3.
[0361] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CF3.
[0362] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCH3 ou -OCH2CH2OCF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2OCH3.
[0363] Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ou ciclo-octila.
[0364] Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-heptenila ou ciclo-octenila.
[0365] Em algumas modalidades,
Figure img0119
em que Z é CR7, e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, ou -CH2OR1.
[0366] Em algumas modalidades
Figure img0120
Figure img0121
Em algumas modalidades,
Figure img0122
Em algumas modalidades,
Figure img0123
Em algumas modalidades,
Figure img0124
[0367] Em algumas modalidades,
Figure img0125
[0368] Em algumas modalidades,
Figure img0126
, em que Z é CR7, e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, ou -CH2OR1.
[0369] Em algumas modalidades,
Figure img0127
Em algumas modalidades,
Figure img0128
Emalgumas modalidades,
Figure img0129
[0370] Em algumas modalidades,
Figure img0130
em que o anel R é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída.
[0371] Em algumas modalidades,
Figure img0131
ou
Figure img0132
[0372] Em algumas modalidades,
Figure img0133
Em algumas modalidades,
Figure img0134
[0373] Em algumas modalidades,
Figure img0135
Em algumas modalidades,
Figure img0136
[0374] Em algumas modalidades,
Figure img0137
Figure img0138
Em algumas modalidades,
Figure img0139
Figure img0140
[0375] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (II) não é racêmico. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) é substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) é um isômero único substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 25 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 20 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 15 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 10 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 5 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) compreende 1 % ou menos de outros isômeros.
[0376] Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 75 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 85 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 90 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 95 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 96 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 97 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 98 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (II) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 99 %.
[0377] Em algumas modalidades preferidas, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (I) está presente na forma enantiomericamente enriquecida. Em determinadas modalidades, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (II) tem pelo menos 50 % de excesso enantiomérico, pelo menos 60 % de excesso enantiomérico, pelo menos 70 % de excesso enantiomérico, pelo menos 80 % de excesso enantiomérico, pelo menos 90 % de excesso enantiomérico, pelo menos 95 % de excesso enantiomérico, ou pelo menos 99 % de excesso enantiomérico na configuração (S) ou (R).
[0378] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (II) é selecionado a partir de um composto na Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C.
[0379] Qualquer combinação dos grupos descritos acima para as diversas variáveis é contemplada no presente documento. Ao longo do relatório descritivo, grupos e substituintes dos mesmos são escolhidos por uma pessoa versada no campo para fornecer frações e compostos estáveis.
[0380] Em um aspecto, é descrito no presente documento um composto que tem a estrutura de Fórmula (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0141
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, - S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR2S (=O) (=NR1) R2, -NR1S (=O) 2R2,-S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila monocíclica substituída ou não substituída, arila bicíclica substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, ou heteroarila bicíclica fusionada substituída ou não substituída;
X é -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -O-, -S-, -S(=O)-, - S (=O) 2-, ou -S (=O) (=NR1) - ;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, - C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é -OR1, -N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R4 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
Z é N ou CR7; e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída ou -CH2OR1;
a, b e c são, cada um, independentemente selecionados a partir de 0, 1 ou 2;
R11, R12, R13 e R14 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R15, R16, e R17 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, F, OR1, e C1-6 alquila substituída ou não substituída; ou
R11 e R13, tomados em combinação formam uma ligação ou um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R15, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam uma ligação ou um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R13 e R14, tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se unem, formam uma C3-8 cicloalquila espirocíclica; ou
quando Z é CR7, então, R16 e R7, são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais os mesmos são fixados para formar uma ligação dupla ou um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando Z é CR7 e X é NR3, então, R3 e R7, são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais os mesmos são fixados para formar um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando Z é CR7 e X é NR3, então, R3 e R16, são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais os mesmos são fixados para formar um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando Z é CR7 e X é -CR4R5-, então, R7 e R5 são opcionalmente tomados em combinação para formar uma ligação dupla; e
Y é W-L-V, em que
W é -C (=O) -, -S (=O) -, -S(=O)2-, -S (=O) (=NR1) C(=O)O-, -c (=O) NR1-,-S (=O) NR1-, ou -S (=O) 2NR1-;
L está ausente, C1-C4alquileno substituído ou não substituído, C2-C4alquenileno substituído ou não substituído, C2-C4alquinileno substituído ou não substituído, C1-C4heteroalquileno substituído ou não substituído, C1-C4CÍcloalquileno substituído ou não substituído, C1-C4heterocicloalquileno substituído ou não substituído, arileno substituído ou não substituído, ou heteroarileno monocíclico substituído ou não substituído, ou uma combinação dos mesmos; e
V é -CN, -OR1, -SR1, -S (=O) R1, -S (=O) 2R1, -N(R1)2, -NR1S (=O) (=NR1) R2, -NR1S (=O) 2R2, -S (=O)2N (R1) 2, -C (=O)R1, OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C (=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, C1-C4alquila substituída ou não substituída, C1-C4fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C4heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila monocíclica substituída ou não substituída.
[0381] Para qualquer modalidade e para todas as modalidades, os substituintes são selecionados dentre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades, a é 0, 1 ou 2. Em outras modalidades, a é 0. Em algumas outras modalidades, a é 1. Em algumas outras modalidades, a é 2.
[0382] Em algumas outras modalidades,
Figure img0142
Figure img0143
Em algumas outras modalidades,
Figure img0144
Em algumas outras modalidades,
Figure img0145
Em algumas outras modalidades,
Figure img0146
[0383] Em algumas outras modalidades,
Figure img0147
Figure img0148
[0384] Em algumas modalidades, Z é N. Em algumas modalidades, Z é CR7.
[0385] Em algumas modalidades, X é -0-, -NR3-, -S-, CR4R5-, -C (=O) -, -C(=CR2)2)-, -S (=O) -, -S(=O)2-, ou - S (=O) (=NR1)-. Em algumas modalidades, X é -O-. Em algumas modalidades, X é -NR3-. Em algumas modalidades, X é -S-. Em algumas modalidades, X é -CR4R5-. Em algumas modalidades, X é -C(=O) - . Em algumas modalidades, X é -C(=C(R2) 2) - . Em algumas modalidades, X é -S(=O)-. Em algumas modalidades, X é -S(=O)2- · Em algumas modalidades, X é -S(=O) (=NR1)-.
[0386] Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OR1)- ou CH (OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OR1) -. Em algumas modalidades, X é -CH(OR1)-.
[0387] Em algumas modalidades, R3 é H, -OR1, -N(R1)2, C1- C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0388] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0389] Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica não substituída.
[0390] Em algumas modalidades, o anel Q é fenila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por: 0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, heteroarila, C1-6 alquila substituída com hidróxi, C1-6 alcóxi substituído com arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC(=O) -C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O)NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionados a partir de S, O, e N.
[0391] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por duas C1-6 alquila. Em algumas modalidades, dois grupos C1-6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são ligados para formar um anel de 5-6 membros.
[0392] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionado a partir de N, O e S, e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo de 4-7 membros-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0393] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0149
em que o anel P é arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0150
em que o anel P é arila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0151
,em que o anel P é heteroarila.
[0394] Em algumas modalidades, o anel Q é em que o anel P é heteroarila, em que a heteroarila é selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0152
[0395]
Figure img0153
Figure img0154
; em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0396] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0155
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0156
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0157
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0158
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0159
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0160
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0161
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0162
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0163
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0164
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0165
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0166
[0397] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0167
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0168
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0169
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0170
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0171
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0172
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0173
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0174
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0175
[0398] Em algumas modalidades, ο anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC(=O)-C1-6 alquila, -NHC(=O) -C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0399] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0176
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0177
[0400] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0178
e cada R6 é independentemente H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0401] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0402] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O e S e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0403] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0179
Figure img0180
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0404] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 6 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0181
Figure img0182
,em que
cada RB e independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0405] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0406] Em algumas modalidades, ο anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0407] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0183
Figure img0184
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 1, 2, ou 3.
[0408] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0185
Figure img0186
; e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0409] Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é-NR3-, CR4R5-, -C (=O) —, -S-, ou -O-. Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é-NR3-. Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é -CR4R5-. Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é -S-. Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é -O-.
[0410] Em algumas modalidades, Z é CR7 e X é-NR3-.
[0411] Em algumas modalidades, cada R7 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, ou -CH2OR1.
[0412] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é -OR1. Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é -CD3.
[0413] Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila. Em algumas modalidades, R3 é ciclobutila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-heptila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-octila.
[0414] Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-heptenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-octenila.
[0415] Em algumas modalidades, R3 é -CF3, -CH2CH2F, CH2CF3, ou -CH2CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CH2F.
[0416] Em algumas modalidades, R3 é -OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OH. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCH3.
[0417] Em algumas modalidades,
Figure img0187
ou
Figure img0188
Em algumas modalidades,
Figure img0189
Figure img0190
Em algumas modalidades,
Figure img0191
Figure img0192
[0418] Em algumas modalidades,
Figure img0193
Figure img0194
Em algumas modalidades,
Figure img0195
Em algumas modalidades,
Figure img0196
Em algumas modalidades,
Figure img0197
Em algumas modalidades, p é 1 ou 2. Em algumas modalidades, p é 1. Em algumas modalidades, p é 2.
[0419] Em algumas modalidades,
Figure img0198
Figure img0199
em que
cada Rc é independentemente selecionado a partir de D, F, -CN, -OH, -OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S (=O) 2R1, -N(R1)2, -CH2-N(R1)2, -NHS(=O)2R1, -S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -CO2R1, -OCO2R1, -C (=O) N (R1) 2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1-C (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -NR1C (=O) OR1, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, e C2-C8 heterocicloalquila substituída ou não substituída; e q é 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
[0420] Em algumas modalidades,
Figure img0200
Em algumas modalidades,
Figure img0201
Em algumas modalidades,
Figure img0202
[0421] Em algumas modalidades,
Figure img0203
Figure img0204
Figure img0205
[0422] Em algumas modalidades,
Figure img0206
Figure img0207
[0423] Em algumas modalidades, Y é -C (=O) (CH2)yNH2, S (=O) (CH2)yNH2, ou -S (=O) 2 (CH2) yNH2, em que y é 0, 1 ou 2. Em algumas modalidades, Y é -C(=O)NH2. Em algumas modalidades, Y é -C (=O) CH2NH2. Em algumas modalidades, Y é C (=O) CH2CH2NH2. Em algumas modalidades, Y é -S(=O)NH2. Em algumas modalidades, Y é -S (=O) CH2NH2. Em algumas modalidades, Y é -S(=O)CH2CH2NH2. Em algumas modalidades, Y é -S (=O) 2NH2. Em algumas modalidades, Y é -S (=O) 2CH2NH2. Em algumas modalidades, Y é -S(=O)2CH2CH2NH2.
[0424] Em algumas modalidades, Y é -C (=O) (CH2)yCH=CH2 ou -C (=O) (CH2) yC≡CH, em que y é 0, 1 ou 2. Em algumas modalidades, Y é -C(=O)CH=CH2. Em algumas modalidades, Y é -C (=O)CH2GHNCH2. Em algumas modalidades, Y é C (=O) CH2CH2CH=CH2. Em algumas modalidades, Y é -C (=O) CH=CH2. Em algumas modalidades, Y é -C(=O) CH2CH≡CH2. Em algumas modalidades, Y é -C(=O)CH2CH2CH≡CH2.
[0425] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0208
Figure img0209
Em algumas modalidades, Y é
Figure img0210
Em algumas modalidades, Y é
Figure img0211
[0426] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0212
Figure img0213
, em que y é 0, 1 ou 2.
[0427] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0214
Figure img0215
[0428] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0216
Figure img0217
[0429] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0218
Figure img0219
[0430] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0220
Figure img0221
, em que y é 0, 1 ou 2.
[0431] Em algumas modalidades, Em algumas modalidades, Y é
Figure img0222
[0432] Em algumas modalidades, Em algumas modalidades, Y é
Figure img0223
[0433] Em algumas modalidades, Y é
Figure img0224
ou
Figure img0225
[0434] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (III) é selecionado a partir de um composto na Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C.
[0435] Em um aspecto, é descrito no presente documento um composto que tem a estrutura de Fórmula (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0226
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR1S (=O)(=NR1)R2, -NR1S (=O) 2R2, S (=O)2N (R1)2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila monocíclica, arila bicíclica,heteroarila monocíclica, ou heteroarila bicíclica fusionada;
X é -O-, -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -C(=CR22)-, -S-, -S (=O) -, -S(=O)2-, OU -S (=O) (=NR1) - ;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, - C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é H, -OR1, -N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R4 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou
R4 e R5 tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se fixam, formam uma C3-8 cicloalquila substituída ou não substituída ou uma C2-7 heterocicloalquila substituída ou não substituída;
Z é CR7; e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída ou -CH2OR1;
W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído, C2-C4 alquenileno substituído ou não substituído, ou C1-C4 heteroalquileno substituído ou não substituído;
R é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído, ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17 e R18 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11 e R13, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído ou um grupo C1-3 heteroalquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R15, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R13 e R14, tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se unem, formam uma C3-8 cicloalquila espirocíclica; ou
R17 e R2, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R2 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R16 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros;
a e b são, cada um, independentemente selecionados a partir de 0, 1, 2, ou 3;
c e d são, cada um, independentemente selecionados a partir de 1, 2, 3, ou 4; e
em que o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %.
[0436] Para qualquer modalidade e para todas as modalidades, os substituintes são selecionados dentre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades, a é 0, 1 ou 2. Em outras modalidades, a é 0. Em algumas outras modalidades, a é 1. Em algumas outras modalidades, a é 2.
[0437] Em algumas modalidades, W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído.
[0438] Em algumas modalidades,
Figure img0227
Figure img0228
[0439] Em algumas modalidades,
Figure img0229
Em algumas modalidades,
Figure img0230
Em algumas modalidades,
Figure img0231
[0440] Em algumas modalidades, X é -O-, -NR3-, -S-, CR4R5-, —C (=O) —, ou —C (=CR22) — · Em algumas modalidades, X é -O-, -NR3-, ou —C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -O-. Em algumas modalidades, X é -NR3-. Em algumas modalidades, X é -S-. Em algumas modalidades, X é -CR4R5-. Em algumas modalidades, X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -C (=CR22) -.
[0441] Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OR1)- ou CH (OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OR1) -. Em algumas modalidades, X é -CH(OR1)-.
[0442] Em algumas modalidades, R3 é H, -OR1, -N(R1)2, C1- C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0443] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0444] Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica não substituída.
[0445] Em algumas modalidades, o anel Q é fenila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por: 0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, heteroarila, C1-6 alquila substituída com hidróxi, C1-6 alcóxi substituído com arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC (=O) -C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O) NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionados a partir de S, O, e N.
[0446] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por duas C1-6 alquila. Em algumas modalidades, dois grupos C1-6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são ligados para formar um anel de 5-6 membros.
[0447] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionado a partir de N, O e S, e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo de 4-7 membros-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0448] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0232
,em que o anel P é arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0233
,em que o anel P é arila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0234
,em que o anel P é heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0235
,em que o anel P é arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0236
,em que o anel P é arila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0237
, em que o anel P é heteroarila. Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila e a heteroarila é selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0238
Figure img0239
; em que
[0449] cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0450] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0240
Figure img0241
[0451] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0242
[0452] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0243
[0453] Em algumas modalidades, o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0244
Figure img0245
[0454] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0246
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0247
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0248
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0249
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0250
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0251
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0252
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0253
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0254
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0255
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0256
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0257
[0455] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0258
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0259
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0260
Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0261
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0262
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0263
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0264
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0265
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0266
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0267
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0268
[0456] Em algumas modalidades, ο anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC (=O) -C1-6 alquila, -NHC (=O) -C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0457] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0269
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0270
[0458] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0271
e cada R6 é independentemente H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0459] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0460] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O e S e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0461] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0272
Figure img0273
,em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0462] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 6 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0274
Figure img0275
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0463] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0464] Em algumas modalidades, ο anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0465] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0276
Figure img0277
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila,
heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 1, 2, ou 3.
[0466] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0278
Figure img0279
; e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0467] Em algumas modalidades, X é -NR3-.
[0468] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0469] Em algumas modalidades, R3 é -OR1. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH ou -OCH2CH2OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH(CH3)2. Em algumas modalidades, R3 é -OCD3.
[0470] Em algumas modalidades, R3 é -CD3.
[0471] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CF3.
[0472] Em algumas modalidades, R3 é -CH3 ou -CF3.
[0473] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCH3 ou -OCH2CH2OCF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2OCH3.
[0474] Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ou ciclo-octila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila. Em algumas modalidades, R3 é ciclobutila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexila.
[0475] Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-heptenila ou ciclo-octenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila ou ciclo-hexenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexenila.
[0476] Em algumas modalidades,
Figure img0280
, em que p é 1, 2 ou 3.
[0477] Em algumas modalidades,
Figure img0281
em que p é 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 2 ou 3. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 2. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são H; e p é 3. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2 ou 3. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2. Em algumas modalidades, R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 3.
[0478] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0282
[0479] Em algumas modalidades,
Figure img0283
Em algumas modalidades,
Figure img0284
Em algumas modalidades,
Figure img0285
Em algumas modalidades,
Figure img0286
[0480] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0287
Em algumas outras modalidades preferidas,
Figure img0288
tem uma estrutura de
Figure img0289
[0481] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0290
Em algumas outras modalidades preferidas,
Figure img0291
tem uma estrutura de
Figure img0292
[0482] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0293
Em algumas outras odalidades preferidas,
Figure img0294
tem uma estrutura de
Figure img0295
[0483] Em algumas modalidades,
Figure img0296
[0484] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0297
[0485] Em algumas modalidades,
Figure img0298
Figure img0299
, em que
R19 é H, D, -CN, -OH, -OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S (=O) 2R1, -CH2-N(R1)2, -s (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -CO2R1, -c (=O) N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C8 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0486] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0300
[0487] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (IV) não é racêmico. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) é substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) é substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 25 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 20 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 15 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 10 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 5 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) compreende 1 % ou menos de outros isômeros.
[0488] Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 75 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 85 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 90 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 95 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 96 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 97 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 98 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 99 %.
[0489] Em algumas modalidades preferidas, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (IV) está presente na forma enantiomericamente enriquecida. Em determinadas modalidades, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (IV) tem pelo menos 50 % de excesso enantiomérico, pelo menos 60 % de excesso enantiomérico, pelo menos 70 % de excesso enantiomérico, pelo menos 80 % de excesso enantiomérico, pelo menos 90 % de excesso enantiomérico, pelo menos 95 % de excesso enantiomérico, ou pelo menos 99 % de excesso enantiomérico na configuração (S) ou (R).
[0490] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (IV) é selecionado a partir de um composto na Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C.
[0491] Em outro aspecto, é descrito no presente documento um composto que tem a estrutura de Fórmula (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
Figure img0301
em que,
cada A é independentemente N ou CRA;
cada RA é independentemente selecionado a partir de H, D, halogênio, -CN, -OH, -OR1, =O, =N-OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S(=O)2R1, -N(R1)2, -NR2S (=O) (=NR1) R2, -NR2S (=O) 2R2, S (=O) 2N (R1) 2, -C (=O) R1, -OC (=O) R1, -C (=O) OR1, -OC (=O) OR1, -C(=O)N(R1)2, -OC (=O) N (R1) 2, -NR1C(=O)R1, -P(=O)(R2)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila monocíclica substituída ou não substituída;
anel Q é arila monocíclica, arila bicíclica, heteroarila monocíclica, ou heteroarila bicíclica fusionada;
X é -O-, -NR3-, -CR4R5-, -C (=O) -, -C(=CR22)-, -S-, -S (=O) -, -S (=O) 2-, ou -S (=O) (=NR2) - ;
cada R1 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
cada R2 é independentemente H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica substituída ou não substituída, -OR1, -N(R1)2, -CH2OR1, -C (=O) OR1, -OC(=O)R1, - C(=O)N(R1)2, ou -NR1C(=O)R1;
R3 é H, -OR1, -N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R4 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
R5 é H, D, F, -CN, -OR1, -SR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 alquileno-OR1 substituído ou não substituído, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou
R4 e R5 tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se fixam, formam uma C3-8 cicloalquila substituída ou não substituída ou uma C2-7 heterocicloalquila substituída ou não substituída;
Z é CR7; e R7 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída ou -CH2OR1;
W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído, C2-C4 alquenileno substituído ou não substituído, ou C1-C4 heteroalquileno substituído ou não substituído;
R é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, e heteroarila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído, ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17 e R18 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
R11 e R13, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído ou um grupo C1-3 heteroalquileno substituído ou não substituído; ou
R11 e R15, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R16 e R17, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
R13 e R14, tomados em combinação com o átomo de carbono ao qual se unem, formam uma C3-8 cicloalquila espirocíclica; ou
R17 e R2, tomados em combinação formam um grupo C1-3 alquileno substituído ou não substituído; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R2 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros; ou
quando X é -NR3-, então R3 e R16 são opcionalmente tomados juntamente com os átomos intervenientes aos quais são unidos para formar um anel de 4, 5, ou 6 membros;
a, b, e e são, cada um, independentemente selecionados a partir de 0, 1 ou 2; e
em que o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %.
[0492] Para qualquer modalidade e para todas as modalidades, os substituintes são selecionados dentre um subconjunto das alternativas listadas. Por exemplo, em algumas modalidades, a é 0, 1 ou 2. Em outras modalidades, a é 0. Em algumas outras modalidades, a é 1. Em algumas outras modalidades, a é 2.
[0493] Em algumas modalidades,
Figure img0302
Em algumas odalidades,
Figure img0303
Em algumas modalidades,
Figure img0304
[0494] Em algumas modalidades, X é -O-, -NR3-, -S-, CR4R5-, —C (=O) —, ou —C (=CR22) — · Em algumas modalidades, X é -O-. Em algumas modalidades, X é -NR3-. Em algumas modalidades, X é -S-. Em algumas modalidades, X é -CR4R5-. Em algumas modalidades, X é -C(=O)-. Em algumas modalidades, X é -C(=CR22)-.
[0495] Em algumas modalidades, X é -CH(CH2OR1)- ou CH (OR1)-. Em algumas modalidades, X é -CH (CH2OR1) -. Em algumas modalidades, X é -CH(OR1)-.
[0496] Em algumas modalidades, R3 é H, -OR1, -N(R1)2, C1- C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0497] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0498] Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é arila monocíclica não substituída.
[0499] Em algumas modalidades, o anel Q é fenila substituída. Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por: 0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-6 alquila, oxo, oxima, hidróxi, halo-C1-6 alquila, di-halo-C1-6 alquila, tri-halo-C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcoxi-C3-7 cicloalquila, halo-C1-6 alcóxi, di-halo-C1-6 alcóxi, tri-halo-C1-6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, heteroarila, C1-6 alquila substituída com hidróxi, C1-6 alcóxi substituído com arila, amino, -C (=O) NH-C1-6 alquil-heteroarila, -NHC (=O) -C1-6 alquil-heteroarila, C1-6 alquil-C (=O) NH-heteroarila, C1-6 alquil-NHC (=O) -heteroarila, C3-7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, ou heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente, selecionados a partir de S, O, e N.
[0500] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi- fenila que é substituída por duas C1-6 alquila. Em algumas modalidades, dois grupos C1-6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são ligados para formar um anel de 5-6 membros.
[0501] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-hidroxi-fenila que é substituída por heteroarila. Em algumas modalidades, heteroarila tem 5, 6, 9 ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionado a partir de N, O e S, e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-6 alquila, C1-6 alquenila, C1-6 alcóxi, C3-7 cicloalquila, C1-6 alquil-OH, tri-halo-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, -C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, heterociclo de 4-7 membros-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0502] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0305
, em que o anel P é arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0306
,em que o anel P é arila. Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0307
,em que o anel P é heteroarila. Em algumas modalidades, a heteroarila é selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0308
Figure img0309
; em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0503] Em algumas modalidades, ο anel Q é
Figure img0310
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0311
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0312
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0313
Em algumas modalidades, ο anel Q e
Figure img0314
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0315
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0316
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0317
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0318
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0319
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0320
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0321
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0322
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0323
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0324
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0325
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0326
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0327
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0328
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0329
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0330
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0331
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0332
[0504] Em algumas modalidades, o anel Q é 2-naftila opcionalmente substituída na posição 3 por hidróxi e adicionalmente substituído por 0, 1 ou 2 substituintes selecionados a partir de hidróxi, ciano, halogênio, C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C1-6 alcóxi, em que o alcóxi é substituído ou não substituído por hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, -NHC (=O) -C1-6 alquila, -NHC (=O) -C1-6 alquila, C1-6 alquileno-heterociclo de 4-7 membros, heterociclo de 4-7 membros, mono-C1-6 alquilamino, e di-C1-6 alquilamino.
[0505] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0333
Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0334
[0506] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0335
, e cada R6 é independentemente H, -OR1, -N(R1)2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0507] Em algumas modalidades, o anel Q é heteroarila monocíclica ou heteroarila bicíclica fusionada.
[0508] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 ou 6 membros que tem 1-4 átomos de nitrogênio de anel e que é substituída por fenila ou uma heteroarila que tem 5 ou 6 átomos de anel, 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O e S e é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, C1-6 alquila, mono-C1-6 alquilamino, di-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquilamino, hidroxi-C1-6 alquila, amino-C1-6 alquila e mono-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila, e di-C1-6 alquilamino-C1-6 alquila.
[0509] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 5 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0336
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0510] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila monocíclica de 6 membros selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0337
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 0, 1, 2, ou 3.
[0511] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila bicíclica fusionada que tem 8 a 10 átomos de anel, 1, 2, ou 3 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de N, O ou S, e que é substituída por 0, 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de ciano, oxima, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila, C24 alquenila, C24 alquinila, C1-6 alcóxi, C1-6 alcóxi substituída por hidróxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino.
[0512] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, heteroarila 5-6 fusionada, heteroarila 5-5 fusionada, heteroarila 7-5 fusionada, ou heteroarila 5-7 fusionada.
[0513] Em algumas modalidades, o anel Q é uma heteroarila 6-5 fusionada, heteroarila 6-6 fusionada, ou heteroarila 5-6 fusionada, selecionada a partir do grupo que consiste em:
Figure img0338
Figure img0339
, em que
cada RB é independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidróxi, C1-6 alquila substituída ou não substituída, -OCH3, -OCD3, C2-6 alquenila substituída ou não substituída, C2-6 alquinila substituída ou não substituída, C1-6 alcóxi substituído ou não substituído, C3-7 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-8 heterocicloalquila substituída ou não substituída, heteroarila, heterocicloalquil-C1-6 alquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-arila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alquil-heteroarila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-arila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heterocicloalquila substituída ou não substituída, C1-6 alcoxi-heteroarila substituída ou não substituída, e C1-6 alcóxi substituído com hidróxi, C1-6 alcóxi, amino, mono-C1-6 alquilamino e di-C1-6 alquilamino; e m é 1, 2, ou 3.
[0514] Em algumas modalidades, o anel Q é
Figure img0340
Figure img0341
; e cada R6 é independentemente H, -OR1, N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída; ou dois R6 são tomados juntamente com o átomo N ao qual são fixados para formar uma C2-C6 heterocicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, cada R6 é independentemente H, C1-C4 alquila substituída ou não substituída, ou C3-C6 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0515] Em algumas modalidades, X é -NR3-.
[0516] Em algumas modalidades, R3 é -OR1, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, ou C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída.
[0517] Em algumas modalidades, R3 é -OR1. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OH ou -OCH2CH2OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2CH3. Em algumas modalidades, R3 é -OCH(CH3)2. Em algumas modalidades, R3 é -OCD3.
[0518] Em algumas modalidades, R3 é -CD3.
[0519] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CH2F. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2CF3.
[0520] Em algumas modalidades, R3 é -CH3 ou -CF3.
[0521] Em algumas modalidades, R3 é C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é -OCH2CH2OCH3 ou -OCH2CH2OCF3. Em algumas modalidades, R3 é -CH2CH2OCH3.
[0522] Em algumas modalidades, R3 é C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ou ciclo-octila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila. Em algumas modalidades, R3 é ciclobutila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexila.
[0523] Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-heptenila ou ciclo-octenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila ou ciclo-hexenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclopentenila. Em algumas modalidades, R3 é ciclo-hexenila.
[0524] Em algumas modalidades,
Figure img0342
em que p é 1, 2 ou 3.
[0525] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0343
[0526] Em algumas modalidades,
Figure img0344
Em algumas modalidades,
Figure img0345
[0527] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0346
Em algumas outras modalidades preferidas,
Figure img0347
tem uma estrutura de
Figure img0348
[0528] Em algumas modalidades,
Figure img0349
em que p é 1, 2 ou 3.
[0529] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0350
[0530] Em algumas modalidades,
Figure img0351
Em algumas modalidades,
Figure img0352
[0531] Em algumas modalidades,
Figure img0353
, em que W é -CH2OCH2-.
[0532] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0354
, em que W é -CH2OCH2-.
[0533] Em algumas modalidades,
Figure img0355
, em que W é -CH2N (R19) CH2-, em que
R19 é H, D, -CN, -OH, -OR1, -SR1, -S(=O)R1, -S (=O) 2R1, -CH2- N (R1) 2, -S (=O) 2N(R1) 2, -C (=O) R1, -CO2R1, -C (=O) N (R1) 2, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, ou C2-C8 heterocicloalquila substituída ou não substituída.
[0534] Em algumas modalidades preferidas, X está em posição equatorial de
Figure img0356
, em que W é -CH2N (R19) CH2-
[0535] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (V) não é racêmica. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) é substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) é um isômero único substancialmente livre de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 25 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 20 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 15 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 10 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 5 % ou menos de outros isômeros. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) compreende 1 % ou menos de outros isômeros.
[0536] Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 75 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 85 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 90 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 95 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 96 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 97 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 98 %. Em algumas modalidades preferidas, o composto da Fórmula (V) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 99 %.
[0537] Em algumas modalidades, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (V) está presente na forma enantiomericamente enriquecida. Em determinadas modalidades, o átomo de carbono assimétrico (CR7) do composto da Fórmula (V) tem pelo menos 50 % de excesso enantiomérico, pelo menos 60 % de excesso enantiomérico, pelo menos 70 % de excesso enantiomérico, pelo menos 80 % de excesso enantiomérico, pelo menos 90 % de excesso enantiomérico, pelo menos 95 % de excesso enantiomérico, ou pelo menos 99 % de excesso enantiomérico na configuração (S) ou (R) .
[0538] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (V) é selecionado a partir de um composto na Tabela 1A, Tabela 1B ou Tabela 1C
[0539] Qualquer combinação dos grupos descritos acima para as diversas variáveis é contemplada no presente documento. Ao longo do relatório descritivo, grupos e substituintes dos mesmos são escolhidos por uma pessoa versada no campo para fornecer frações e compostos estáveis.
[0540] Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV) ou (V) é selecionado a partir de:
(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3- il) (piperazin-l-il)metanona;
2-(6-(piperidin-4-iltio)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
(3, 6-diazabiciclo[3.1.1]heptan-3-il) (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)metanona;
2 - (6- ( (6-azabiciclo[3.1.1]heptan-3-il) (2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
(3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)metanona;
2 - (6- ( (8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(octa-hidro-1,6-naftiridin-l(2H)-il)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(metóxi(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(hidroxi(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)metil)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il) (3,3,5,5-tetrametilpiperazin-1-il)metanona;
(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)metanona;
5-(1H-pirazol-4-il)-2-(6-((2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)tio)piridazin-3-il)fenol;
2- (6- ( (2-metóxietoxi) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
5-(1H-pirazol-4-il)-2-(6-((2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-ilideno)metil)piridazin-3-il)fenol;
5-(1H-pirazol-4-il)-2-(6-((2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)(trifluorometil)amino)piridazin-3-il)fenol;
2 - (6- ( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
5-(1H-pirazol-4-il)-2-(6-((2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) (2,2,2-trifluoroetil)amino)piridazin-3-il)fenol;
2- (6- ( (3-fluoropropil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
5-(1H-pirazol-4-il)-2-(6-((2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)(3,3,3-trifluoropropil)amino)piridazin-3-il)fenol;
3- (6- ( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-7-metoxinaftalen-2-ol ;
2 - (6-( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1-metil-lH-pirazol-4-il)fenol;
2 - (6-( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 - (6- ( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metiloxazol-2-il)fenol;
2 - (6-( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-1-il)fenol;
5- (4 - (6- ( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
5- (4 - (6- ( (2-fluoroetil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)pirimidin-2(1H)-ona;
2- (6- ( (2-metoxietoxi) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)metil)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metiloxazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (lR,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-imidazol-1-il)fenol ;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(3-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-1-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-amino-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-amino-5-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-amino-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)fenol;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-7-metoxinaftalen-2-ol ;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)naftaleno-2,7-diol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)isoquinolin-7-ol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-1-metilisoquinolin-7-ol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)tio)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(6-(2-hidróxi-4 (1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)metanona;
2 - (6-(1-( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)vinil)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metiloxazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-imidazol-l-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(3-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-1-il)fenol ;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-amino-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-amino-5-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-amino-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-l,3,4-oxadiazol 2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-1,3,4-tiadiazol 2-il)fenol;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-7-metoxinaftalen-2-ol;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)naftaleno-2,7-diol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)isoquinolin-7-ol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-1-metilisoquinolin-7-ol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1H-pirazol-4- il)fenol;
4 —(4 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-hidroxifenil)1- metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2,3-difluoro-5-hidroxifenil)-l-metilpiridin-2(1H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(2-metoxipiridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(2-metoxipiridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-hidroxifenil)2- metilpiridazin-3(2H)-ona;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2,3-difluoro-5-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro 5- (6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1H pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(2-(metoxi d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-(metoxi d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(1-metil-lH-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1-metil-lH-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(l,2,3-triazin-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1,2,3-triazin-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(l,2,3-triazin-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro 5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro 5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4 il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-2,3-difluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2,3-difluoro-5-hidroxifenil)-l-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-hidroxifenil)l-metilpiridin-2(1H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)-4-fluoropiridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)-5-fluoropiridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)-4-fluoropiridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)-5-fluoropiridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
7 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-N-metilisoquinolina-3-carboxamida;
7 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-N-metilisoquinolina-3-carboxamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-7-hidroxi-N-metilquinolina2-carboxamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-1-fluoro-7-hidroxi-N-metil 2-naftamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-7-hidroxi-N-metil 2-naftamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-flúor-7-hidroxi-N-metil-2-naftamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-1-flúor-7-hidroxi-N-metil-2-naftamida;
2-(6-(ciclopropil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 - (6-(ciclobutil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(octa-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-1-il)piridazin-3 il)-5- (1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(1,7-diazaspiro[3.5]nonan-1-il)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2- (6- ( (2-metoxietil) (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2- (5- (metil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)pirimidin-2-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(5-(metil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridin 2-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(5-(metil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)pirazin 2-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,6s)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-6-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3r,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3r,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(metil((3R,5r,6S)-octa-hidrociclopenta[c]pirrol-5-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2-(6-(metil((3R,5s,6S)-octa-hidrociclopenta[c]pirrol-5-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,8s)-3-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,8r)-3-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,4R,5S)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1S,4S,5R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 —(6 —( ( (1R,4R,5R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1S,4S,5S)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3r,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3r,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7r)-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7s)-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7r)-1,5-dimetil-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5 (1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7s)-1,5-dimetil-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5 (1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7s)-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,5S,7r)-3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-7-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)quino1in-7-ol;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-7-metoxinaftaien-2-ol;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-hidroxi-3-metilbenzo[d]oxazol-2(3H)-ona;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-7-(fluorometoxi)naftalen-2 ol;
3 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-7-(difluorometoxi)naftalen 2 - ol;
2 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1-metilpiridin-2(1H)-ona;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-(metil-d3)-1H-pirazol 4- il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metoxipiridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-(fluorometil)-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-fluoro-lH-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-fluoro-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-hidroxi-2-metilfenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
5- (1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il)— 2 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5- dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpirimidin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metil 1.3.5- triazin-2(1H)-ona;
2 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-metil-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
5- (2-(difluorometoxi)piridin-4-il)-2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-(trifluorometil)-1H-pirazol-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)- 5-hidroxi-limetilbenzofuran-2-carboxamida;
2 — ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-fluoro-6-metoxipiridin-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-6-fluoropiridin-2-ol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
5— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-limetilbenzofuran-2-carboxamida;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona;
6 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-3-metilpirimidin-4(3H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil) -1-metil-1H-pirrol-2-carbonitrila;
1— (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1H-imidazol-4-carbonitrila;
1— (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1H-imidazol-4-carbonitrila;
6 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 3-metilpirimidin-4(3H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il) -3-hidroxifenil)picolinonitrila;
1— (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1H-pirazol-4-carbonitrila;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (etil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(etil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
1— (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1H-pirrol-3-carbonitrila;
5-(2,6-difluoropiridin-4-il)— 2 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil 8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4- il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-fluoro-6-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(2-fluoro-6-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3'-metóxi-[1,1'-bifenil]-3 ol;
4 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4'-fluoro-3'-metoxi-[1,1'-bifenil]-3-ol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metoxipiridin-3-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-fluoro-5-metoxipiridin-3-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-l,3,4-oxadiazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2H-1,2,3-triazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(lH-l,2,3-triazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-l,2,3-triazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-1,2,3-triazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-tetrazol-5-il)fenol
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metiloxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(3-metilisoxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metil-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2,4-dimetil-1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-(trifluorometil)-1,3,4-oxadiazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-H-tetrazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(5-metil-2H-tetrazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4H-1,2,4-triazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metilpiridin-3-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metilpirimidin-5-il)fenol;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metilpiridazin-3-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
5 — (4 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (lR,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(4-(trifluorometil)-1H imidazol-l-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-l,2,4-triazol-1- il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(3-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-imidazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)fenol
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metil-l,3,4-oxadiazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(4-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(2H-l,2,3-triazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-1,2,3-triazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-tetrazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(2-metiloxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(3-metilisoxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metil-1H-tetrazol-1-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(5-metil-2H-tetrazol-2-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
5— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-limetilbenzofuran-2-carboxamida;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil) 1-metilpiridin-2(1H)-ona;
6 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan 3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-3-metilpirimidin-4(3H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-(metoxi-d3)piridazin 4- il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-imidazol-1-il)fenol
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metiloxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(2-metiloxazol 5- il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2H-1,2,3-triazol-2-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 —( ( (1R,3r,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)oxi)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenol;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
5 — (4 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-(metil-d3)piridazin-3(2H)-ona;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-2-(metil-d3)piridazin-3(2H)-ona;
4 — (4 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil) -1-metilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-(metil-d3)piridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1 metilpiridin-2(1H)-ona;
5 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-2 metilpiridazin-3(2H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-(metil-d3)-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-metoxipiridin-4-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 —( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona;
4 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3'-metoxi-4’-metil-[1,1'-bifenil]-3-ol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-hidroxi-N-metilbenzofuran-2-carboxamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-hidroxi-N,N-dimetilbenzofuran-2-carboxamida;
6— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-N-ciclopropil-5-hidroxibenzofuran-2-carboxamida;
5— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-N-metilbenzofuran-2-carboxamida;
5— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-6-hidroxi-N,N-dimetilbenzofuran-2-carboxamida;
5— ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-N-ciclopropil-6-hidroxibenzofuran-2-carboxamida;
6 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-3-metilpirimidin-4(3H)-ona;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il)fenol;
2- (6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6— ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(2-(metil-d3)oxazol-5-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(2-(metil-d3)oxazol-5-il)fenol;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan 3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpirimidin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan 3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
4 — (4 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-flúor-5-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona;
5-(2-(difluorometoxi)piridin-4-il)-2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il) (metil)amino)piridazin-3-il)fenol;
3-amino-l-(4-(ciclopropil(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin 1-il)propan-1-ona;
3-amino-l-(4-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazina-3-carbonil)-2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)tio)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1il)propan-1-ona;
3-amino-1-((1R,3s,5S)-3-((6-(2-hidróxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-l-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1l)propan-1-ona;
3-amino-1-((1R,5S)-6-((6-(2-hidróxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-(ciclobutil(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin 1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metoxi)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-l-(1-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)octa-hidro-5H-pirrolo[3,2—c]piridin-5-il)propan-1-ona;
3-amino-l-(1-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)octa-hidro-1,6-naftiridin-6(2H)-il)propan-1-ona;
3-amino-l-(1-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-1,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)tio)piperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il) (2-metoxietoxi)amino)-2,2,6, 6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)metileno)-2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazina-3-carbonil)piperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-(hidróxi(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)metil)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin 1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metóxi)metil)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazina-3-carbonil)-2,2, 6, 6-tetrametilpiperazin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(trifluorometil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((2-fluoroetil)(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3- amino-1-(4-((3-fluoropropil)(6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4- il)fenil)piridazin-3-il)amino)-2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(2-metoxietil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-( (1R,3s,5S)—3—( (6—(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-((1R,3r,5S)-3-((6-(2-hidróxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-( (1R,3s,5S)—3—( (6—(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-((lR,3r,5S)-3-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(3-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((5-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)pirazin-2-il)(metil)amino)piperidin-1-il)propan-1 ona;
3-amino-1-(4-((5-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)pirazin-2-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((5-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)pirazin-2-il)oxi)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3-amino-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
3- amino-1-(4-((2-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)pirimidin-5-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
5- (4 - (5- ( (1-(3-aminopropanoil)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin4- il)(metil)amino)pirazin-2-il)-3-hidroxifenil)pirimidin-2(1H)-ona;
1- (4 - ( (4-(5-(1H-pirazol-4-il)pirimidin-2-il)-3-hidroxifenil)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)-3-aminopropan-1-ona;
2’- (4- ( (1-(3-aminopropanoil)piperidin-4-il) (metil)amino)-2 hidroxifenil)-[5,5'-bipirimidin]-2(1H)-ona;
(E)-3-(4-aminofenil)-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona;
3- (4-aminofenil)-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)propan-1-ona;
1- (4- ( (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)-2-(piperidin-4-il)etan-1-ona;
ácido 4- (4- ( (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-carbonil)ciclo-hexano-1-carboxílico; 1- (4- ( (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)-2-(2-(metilamino)etóxi)etan-1-ona;
4- ((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametil-N-(3-(metilamino)propil)piperidina-1-carboxamida;
(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il) (piperidin-4-il)metanona;
1- (4- ( (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)-2-(metil(2-(metilamino)etil)amino)etan-1-ona;
2- (azetidin-3-il)-1-(4-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)etan-1-ona;
1- (4- ( (6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)pent-4-in-1-ona.
[0541] Os compostos SMSM exemplificativos são resumidos na Tabela 1A, Tabela 1B e Tabela 1C.
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[0542] Em algumas modalidades, um composto é selecionado a partir de:
6-cloro-N-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina;
6-cloro-N-ciclopropil-N-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina;
6-(4-cloro-2-metoxifenil)-N-ciclopropil-N-(2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina;
N-ciclopropil-6-(2-metoxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)-N-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina;
(1R,3S,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-2-metóxifenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato deterc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-(2-metóxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino) -9-azabiciclo[3,3,1]nonane-9-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3,3,1]nonano-9-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
(1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
(1R,3s,5S)-9-(4-metoxibenzil)-N-(6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
terc-butil(1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato;
(1R,3s,5S)-3-((6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila;
(1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
(1R,3s,5S)-N-(6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil) piridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
(1R,3s,5S)-N-(6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4 il)fenil)piridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil 9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina;
(1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-metil-2-oxo-1,2-di hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc butila;
(1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc butila;
2terc-butil(1R,3s,5S)-3-((6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato;
(1R,3s,5S)-3-(6-cloropiridazin-3-iloxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano; e(1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano.
[0543] Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento, possui um ou mais estereocentros e cada estereocentro existe independentemente na configuração R ou S. Os compostos apresentados no presente documento incluem todas as formas diastereoméricas, enantioméricas e epiméricas, bem como as misturas adequadas das mesmas. Os compostos e métodos fornecidos no presente documento incluem todos os isômeros cis, trans, sin, anti, entgegen(E) e zusammen (Z), bem como as misturas adequadas dos mesmos. Em certas modalidades, os compostos descritos no presente documento são preparados como seus estereoisômeros individuais reagindo-se uma mistura racêmica do composto com um agente de resolução oticamente ativo para formar um par de sais/compostos diastereoisoméricos, separando-se os diastereômeros e recuperando-se os enantiômeros oticamente puros. Em algumas modalidades, a resolução de enantiômeros é realizada com o uso de derivados diastereoméricos covalentes dos compostos descritos no presente documento. Em outra modalidade, os diastereômeros são separados por técnicas de separação/resolução com base em diferenças de solubilidade. Em outras modalidades, a separação de esteroisômeros é realizada por cromatografia ou pela formação de sais diastereoméricos e separação por recristalização, ou cromatografia, ou qualquer combinação das mesmas. Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981. Em um aspecto, os estereoisômeros são obtidos por síntese estereosseletiva.
[0544] Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são preparados como pró-fármacos. Um "pró-fármaco" se refere a um agente que é convertido no fármaco original in vivo. Os pró-fármacos são, com frequência, úteis devido ao fato de que, em algumas situações, podem ser mais fáceis de administrar do que o fármaco original. Podem, por exemplo, ser biodisponíveis por administração oral, enquanto o original não é. O pró-fármaco também pode ter melhorado a solubilidade em composições farmacêuticas em relação ao fármaco original. Em algumas modalidades, o projeto de um pró-fármaco aumenta a solubilidade em água efetiva. Um exemplo, sem limitação, de um pró-fármaco é um composto descrito no presente documento, que é administrado como um éster (o "pró- fármaco") para facilitar a transmissão através de uma membrana celular em que a solubilidade de água é prejudicial à mobilidade, mas que é, então, metabolicamente hidrolisado para o ácido carboxílico, a entidade ativa, uma vez dentro da célula em que a solubilidade de água é benéfica. Um exemplo adicional de um pró-fármaco pode ser um peptídeo curto (poliaminoácido) ligado a um grupo ácido em que o peptídeo é metabolizado para revelar a fração ativa. Em certas modalidades, mediante administração in vivo, um pró-fármaco é quimicamente convertido na forma biológica, farmacêutica ou terapeuticamente ativa do composto. Em certas modalidades, um pró-fármaco é enzimaticamente metabolizado por uma ou mais etapas ou processos à forma biológica, farmacêutica ou terapeuticamente ativa do composto.
[0545] Em um aspecto, os pró-fármacos são projetados para alterar a estabilidade metabólica ou as características de transporte de um fármaco, para mascarar os efeitos colaterais ou toxicidade, para melhorar o sabor de um fármaco ou para alterar outras características ou propriedades de um fármaco. Em virtude do conhecimento de processos farmacocinéticos, farmacodinâmicos e metabolismo de fármaco in vivo, uma vez que um composto farmaceuticamente ativo é conhecido, o projeto de pró-fármacos do composto é possível, (consultar, por exemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, Nova York, EUA, páginas 388-392; Silverman (1992), The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc., San Diego, EUA, páginas 352-401, Rooseboom et al., Pharmacological Reviews, 56:53-102, 2004; Aesop Cho, "Recent Advances in Oral Prodrug Discovery", Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol. 41, 395-407, 2006; T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 de A.C.S. Symposium Series) .
[0546] Em alguns casos, alguns dos compostos descritos no presente documento podem ser um pró-fármaco para outro derivado ou composto ativo.
[0547] Em algumas modalidades, os locais na porção de anel aromático de compostos descrito no presente documento são suscetíveis a várias reações metabólicas. Portanto, a incorporação de substituintes apropriados nas estruturas de anel aromático reduzirão, minimizarão ou eliminarão essa trajetória metabólica. Em modalidades específicas, o substituinte adequado para diminuir ou eliminar a susceptibilidade do anel aromático a reações metabólicas é, com fins exemplificativos apenas, um halogênio ou um grupo alquila.
[0548] Em outra modalidade, os compostos descritos no presente documento são marcados isotopicamente (por exemplo, com um radioisótopo) ou por outros meios, incluindo, porém, sem limitação, o uso de cromóforos ou frações fluorescentes, marcadores bioluminescentes ou marcadores quimioluminescentes.
[0549] Os compostos descritos no presente documento incluem compostos isotopicamente marcados, os quais são idênticos àqueles citados nas várias fórmulas e estruturas apresentadas no presente documento, porém, devido ao fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo que tem uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa usualmente encontrado na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos presentes compostos incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, enxofre, flúor e cloro, como, por exemplo, 2H, 3 h, 13C, 14C, 25N, 180, 170, 35S, 18F, 36 cl. Em um aspecto, compostos isotopicamente marcados descritos no presente documento, por exemplo aqueles em que os isótopos radioativos, como 3H e 14C, são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição de tecido de substrato e/ou fármaco. Em um aspecto, a substituição por isótopos como deutério fornece certas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior estabilidade metabólica, como, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou exigências de dosagem reduzidas.
[0550] Em modalidades adicionais ou outras modalidades, os compostos descritos no presente documento são metabolizados mediante a administração a um organismo que precisa produzir um metabólito que é, então, usado para produzir um efeito desejado, incluindo um efeito terapêutico desejado.
[0551] Os compostos descritos no presente documento podem ser formados como e/ou usados como sais farmaceuticamente aceitáveis. O tipo de sais farmaceuticamente aceitáveis inclui, mas não se limita a: (1) sais de adição de ácido, formados por reação da forma de base livre do composto com um farmaceuticamente aceitável: ácido inorgânico, como, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metafosfórico e semelhantes; ou com um ácido orgânico, como, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido lático, ácido malônico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido trifluoroacético, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3 — (4 — hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1,2-etanodissulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido 4-metilbiciclo-[2.2.2]oct-2-eno-1-carboxílico, ácido gluco-heptônico, ácido 4,4'-metilenobis-(3-hidroxi-2-eno-l-carboxílico), ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido lauril sulfúrico, ácido glucônico, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucônico, ácido butírico, ácido fenilacético, ácido fenilbutírico, ácido valproico e similares; (2) sais formados quando um próton ácido presente no composto original é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino (por exemplo, lítio, sódio ou potássio), um íon alcalinoterroso (por exemplo, magnésio ou cálcio) ou um íon de alumínio. Em alguns casos, os compostos descritos no presente documento são coordenados com uma base orgânica, como, porém, sem limitação, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, diciclo-hexilamina, tris(hidroximetil)metilamina. Em outros casos, os compostos descritos no presente documento podem formar sais com aminoácidos, como, porém, sem limitação, arginina, lisina e similares. As bases inorgânicas aceitáveis usadas para formar sais com compostos que incluem um próton ácido incluem, porém, sem limitação, hidróxido de alumínio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio e similares.
[0552] Deve-se compreender que uma referência a um sal farmaceuticamente aceitável inclui as formas de adição de solvente, particularmente solvatos. Os solvatos contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de um solvente, e podem ser formados durante o processo de cristalização com solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como água, etanol e similares. Hidratos são formados quando o solvente é água, ou alcoolatos são formados quando o solvente é álcool. Em algumas modalidades, os solvatos de compostos descritos no presente documento são convenientemente preparados ou formados durante os processos descritos no presente documento. Além disso, os compostos fornecidos no presente documento podem existir em formas não solvatadas bem como em formas solvatadas. Em geral, as formas solvatadas são consideradas equivalentes às formas não solvatadas para os efeitos dos compostos e métodos no presente documento fornecidos.
[0553] Em algumas modalidades, um SMSM tem um peso molecular de no máximo cerca de 2000 Daltons, 1500 Daltons, 1000 Daltons ou 900 Daltons. Em algumas modalidades, um SMSM tem um peso molecular de pelo menos 100 Daltons, 200 Daltons, 300 Daltons, 400 Daltons ou 500 Daltons. Em algumas modalidades, um SMSM não compreende uma ligação de fosfodiéster.
Métodos de Fabricação de Compostos
[0554] Os compostos descritos no presente documento podem ser sintetizados com o uso de técnicas sintéticas padrão ou com o uso de métodos conhecidos na técnica em combinação com os métodos descritos no presente documento. A menos que seja indicado de outro modo, métodos convencionais de espectroscopia de massa, RMN, CLAE, química de proteína, bioquímica, técnicas de DNA recombinante e farmacologia podem ser empregados. Os compostos podem ser preparados com o uso de técnicas químicas padrão tais como aquelas descritas, por exemplo, em March's Advanced Organic Chemistry, 6a Edição, John Wiley and Sons, Inc. Condições de reação alternativas para as transformações sintéticas descritas no presente documento podem ser empregadas tai como a variação de solvente, temperatura de reação, tempo de reação, assim como reagentes químicos diferentes e outras condições de reação. Os materiais de partida podem estar disponíveis dentre fontes comerciais ou podem ser prontamente preparados. Apenas a título de exemplo, são fornecidos esquemas para preparar os SMSMs descritos no presente documento.
[0555] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 1:
Figure img0490
[0556] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 2:
Figure img0491
[0557] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 3:
Figure img0492
[0558] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 4:
Figure img0493
[0559] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 5:
Figure img0494
[0560] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 6:
Figure img0495
[0561] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 7:
Figure img0496
[0562] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 8:
Figure img0497
[0563] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 9:
Figure img0498
[0564] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 10:
Figure img0499
[0565] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 11:
Figure img0500
[0566] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 12:
Figure img0501
[0567] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 13:
Figure img0502
[0568] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 14:
Figure img0503
[0569] Era alguraas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 15:
Figure img0504
[0570] Em alguraas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 16:
Figure img0505
[0571] Era alguraas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 17:
Figure img0506
[0572] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 18:
Figure img0507
[0573] Em algumas modalidades, um esquema para preparar um SMSM descrito no presente documento é o Esquema 19:
Figure img0508
[0574] Os tratados e livros de referência adequados que detalhara a síntese de reagentes úteis na preparação de compostos descritos no presente documento ou fornecem referências aos artigos que descrevem a preparação, incluem, por exemplo, "Synthetic Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Inc., Nova York, EUA; S. R. Sandler et al., "Organic Functional Group Preparations," 2a Edição, Academic Press, Nova York, EUA, 1983; H. 0. House, "Modern Synthetic Reactions", 2a Edição, W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif., EUA, 1972; T. L. Gilchrist, "Heterocyclic Chemistry", 2a Edição, John Wiley & Sons, Nova York, EUA, 1992; J. March, "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure", 4a Edição, Wileylnterscience, Nova York, EUA, 1992. Tratados e livros de referência adicionais que detalham a síntese de reagentes úteis na preparação de compostos descritos no presente documento, ou fornecem referências aos artigos que descrevem a preparação, incluem, por exemplo, Fuhrhop, J. e Penzlin G. "Organic Synthesis: Concepts, Methods, Starting Materials", Segunda Edição Revisada e Ampliada (1994) John Wiley & Sons ISBN: 3 527-29074-5; Hoffman, R.V. "Organic Chemistry, An Intermediate Text" (1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5; Larock, R. C. "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" Segunda Edição (1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4; March, J. "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure" Quarta Edição (1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2; Otera, J. (editor) "Modern Carbonyl Chemistry" (2000) Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1; Patai, S. "Patai's 1992 Guide to the Chemistry of Functional Groups" (1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9; Solomons, T. W. G. "Organic Chemistry" 7a Edição (2000) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0; Stowell, J.C., "Intermediate Organic Chemistry" 2a Edição (1993) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2; "Industrial Organic Chemicals: Starting Materials and Intermediates: An Ullmann's Encyclopedia" (1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, em 8 volumes; "Organic Reactions" (1942-2000) John Wiley & Sons, em mais de 55 volumes; e "Chemistry of Functional Groups" John Wiley & Sons, em 73 volumes.
[0575] Nas reações descritas, pode ser necessário proteger os grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidróxi, amino, imino, tio ou carbóxi, em que esses são desejados no produto final, a fim de evitar sua participação indesejada nas reações. Uma descrição detalhada das técnicas aplicáveisà criação de grupos de proteção e sua remoção é descrita em Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., John Wiley & Sons, Nova York, NY, 1999, e Kocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, Nova York, NY, 1994, os quais são incorporados no presente documento a titulo de referência para essa revelação.
[0576] SMSMs podem ser feitos usando técnicas conhecidas e, além disso, quimicamente modificadas, em algumas modalidades, para facilitar a transferência intranuclear para, por exemplo, um componente de complexo de splicing, um spliceossomo ou uma molécula de pré-mRNA. Um elemento de conhecimento comum na técnica apreciará que a química médica padrão aborda as modificações químicas para transferência intranuclear (por exemplo, reduz a carga, otimiza o tamanho e/ou modifica a lipofilicidade).
Composições Farmacêuticas
[0577] Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são formulados em composições farmacêuticas. As composições farmacêuticas são formuladas de uma maneira convencional com o uso de um ou mais ingredientes inativos farmaceuticamente aceitáveis que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. Uma formulação adequada é dependente da via de administração escolhida. Um resumo de composições farmacêuticas descritas no presente documento pode ser encontrado, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Décima nona Edição (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. e Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Nova York, N.Y., 1980; e Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Décima sétima Ed. (Lippincott Williams & Wilkinsl999), incorporados no presente documento a título de referência para tal revelação.
[0578] Uma composição farmacêutica pode ser uma mistura de um SMSM descrito no presente documento com um ou mais outros componentes químicos (isto é, ingredientes farmaceuticamente aceitáveis), como transportadores, excipientes aglutinantes, agentes de enchimento, agentes de suspensão, agentes aromatizantes, agentes adoçantes, agentes desintegrantes, agentes dispersantes, tensoativos, lubrificantes, corantes, diluentes, solubilizadores, agentes umidificantes, plastificantes, estabilizantes, intensificadores de penetração, agentes umectantes, agentes antiespumantes, antioxidantes, conservantes ou uma ou mais combinações dos mesmos. A composição farmacêutica facilita a administração do composto a um organismo.
[0579] As composições descritas no presente documento podem ser administradas ao indivíduo de uma variedade de maneiras, incluindo por via parenteral, por via intravenosa, por via intradérmica, por via intramuscular, por via colônica, por via retal ou por via intraperitoneal. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de molécula pequena ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado por injeção intraperitoneal, injeção intramuscular, injeção subcutânea ou injeção intravenosa do indivíduo. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem ser administradas por via parenteral, por via intravenosa, por via intramuscular ou por via oral. Os agentes orais que compreendem um modulador de splicing de molécula pequena podem estar em qualquer forma adequada para administração oral, como líquido, comprimidos, cápsulas ou similares. As formulações orais podem ser adicionalmente revestidas ou tratadas para impedir ou reduzir a dissolução no estômago. As composições da presente invenção podem ser administradas a um indivíduo usando quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica. As formulações adequadas para uso na presente invenção e métodos de entrega são geralmente bem conhecidos na técnica. Por exemplo, o modulador de splicing de molécula pequena descrito no presente documento pode ser formulado como composições farmacêuticas com um diluente, carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis como exigido para aproximar as condições fisiológicas incluindo agentes de tamponamento e ajuste de pH, agentes de ajuste de tonicidade, agentes de molhagem e similares, como, por exemplo, acetato de sódio, lactato de sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina, etc.
[0580] As formulações farmacêuticas descritas no presente documento podem ser administráveis a um indivíduo de uma variedade de maneiras por múltiplas vias de administração, incluindo, porém sem limitação, vias de administração oral, parenteral (por exemplo, injeções intravenosas, subcutâneas, intramusculares, intramedulares, intratecais, intraventriculares direta, intraperitoneais, intralinfáticas, intranasais), intranasal, bucal, tópica ou transdérmica. As formulações farmacêuticas descritas no presente documento incluem, mas não estão limitadas a, dispersões líquidas aquosas, dispersões autoemulsionantes, soluções sólidas, dispersões lipossômicas, aerossóis, formas farmacêuticas sólidas, pós, formulações de liberação imediata, formulações de liberação controlada, formulações de fusão rápida, comprimidos, cápsulas, pílulas, formulações de liberação retardada, formulações de liberação prolongada, formulações de liberação pulsátil, formulações multiparticuladas e formulações mistas de liberação imediata e controlada.
[0581] Em algumas modalidades, a formulação farmacêutica está na forma de um comprimido. Em outras modalidades, as formulações farmacêuticas que contêm um SMSM descrito no presente documento estão na forma de uma cápsula. Em um aspecto, as formas de dosagem de formulação líquida para administração oral estão na forma de soluções ou suspensões aquosas selecionadas do grupo incluindo, porém sem limitação, dispersões orais aquosas, emulsões, soluções, elixires, géis e xaropes.
[0582] Para administração por inalação, um SMSM descrito no presente documento pode ser formulado para uso como um aerossol, uma névoa ou um pó. Para administração bucal ou sublingual, as composições podem assumir a forma de comprimidos, drágeas ou géis formulados de uma maneira convencional. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser preparado como formas de dosagem transdérmica. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser formulado em uma composição farmacêutica adequada para injeção intramuscular, subcutânea ou intravenosa. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser administrado por via tópica e pode ser formulado em uma variedade de composições administradas por via tópica, como soluções, suspensões, loções, géis, pastas, palitos medicinais, bálsamos, cremes ou pomadas. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser formulado em composições retais, como enemas, géis retais, espumas retais, aerossóis retais, supositórios, supositórios gelatinosos ou enemas de retenção.
Splicing
[0583] O processamento pós-transcricional extensivo ocorre antes de pré-mRNA eucariota mature e saia do núcleo para o citoplasma, incluindo a adição de uma tampa de 7-metilguanosina na extremidade 5', a clivagem e a adição de uma cauda de poli-A na extremidade 3' bem como a remoção de sequências de intervenção ou introns pelo spliceossomo. A grande maioria de genes eucariotas maiores contém múltiplos introns que são divididos com alta precisão e fidelidade a fim de manter o quadro de leitura dos éxons. Splicing de pré-mRNA pode utilizar o reconhecimento de sequências consenso curtas nos limites e dentro de introns e éxons por uma matriz de complexos de ribonucleoproteína nuclear pequena (snRNP) (por exemplo, snRNPs U1, U2, U4, U5, U6, U11, U12m U4atc e U6 ate) e um grande número de proteínas, incluindo proteínas spliceossomais e moduladores de splicing que atuam positivamente bem como negativamente.
[0584] As proteínas que contém o domínio rico em serina-arginina (SR)servem geralmente para promover o splicing constitutivo. As mesmas também podem modular o splicing alternativo pela ligação a sequências de acentuador de splicing intrônicos ou exônicos (ISE ou ESE, respectivamente). Outras proteínas de ligação de pré-mRNA, como hnRNPs, regulam splicing pela ligação a sequências de supressor de splicing intrônico ou exônico (ISS ou ESS, respectivamente) e também podem atuar como moduladores de splicing geral. A família de proteína de SR é uma classe de pelo menos 10 proteínas que têm um domínio rico em serina/arginina característico além de uma ligação de RNA. Acredita-se geralmente que as proteínas de SR melhoram o splicing pela ligação de modo simultâneo a U170K, um componente principal de U1 snRNP, no sítio de splice 5' e U2AF35 no sítio de splice 3' conectando, assim, as duas extremidades do íntron. Embora essa função particular de proteínas SR pareça ser redundante, visto que qualquer proteína SR individual pode comprometer um pré-mRNA para splicing constitutivo, o objetivo das várias proteínas SR em splicing alternativo de pré-mRNAs específicos é diferente devido em parte a sua capacidade de reconhecer e se ligar a sequências consenso únicas. A fosforilação do domínio de RS de proteínas SR pode levar à regulação de suas interações de proteína, ligação de RNA, localização, tráfego e objetivo do splicing alternativo. As várias quinases celulares que fosforilam as proteínas SR foram identificadas, incluindo Quinase de proteína SR (SRPKs), quinases semelhantes a Cdc2 (Clks), mutante de processamento de pré-mRNA 4 (PRP4) e topoisomerase I. A fosforilação ideal de proteínas SR pode ser exigida para o funcionamento adequado tanto como hipofosforilação quanto como hiperfosforilação dos domínios de RS que podem ser prejudiciais ao desempenho de sua função em splicing alternativo e constitutivo.
[0585] Em eucariotas maiores, a grande maioria de genes contém um ou mais introns, que criam uma situação em que os éxons são ligados de forma única para gerar mRNA e microRNA (miRNA) maduros. No núcleo hospedeiro, o splicing de pré-mRNA é o mecanismo pelo qual os introns são removidos a partir de um pré-mRNA e os éxons são ligados em conjunto para gerar mRNAs e pré-miRNA maduros que são, então, exportados para o citoplasma para translação no produto de gene de polipeptídeo. Splicing de pré-mRNA pode ocorrer em cís, em que os dois éxons se derivam de duas sequências cotranscritas adjacentes, ou em trans, quando os dois éxons se transformam em diferentes transcrições de pré-mRNA. A razão entre os diferentes produtos de proteína (isoformas) pode ser devido à frequência de casos de splicing alternativo em um pré-mRNA que leva a diferentes quantidades de diferentes variantes de splice. Em algumas modalidades, splicing alternativo de um pré-mRNA pode levar a 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 isoformas de proteína que são expressas.
[0586] Acredita-se que as anormalidades em splicing sejam a causa de aproximadamente metade de todas as doenças herdadas. O splicing aberrante devido às mutações em sequências consenso envolvidas em reconhecimento de limite de éxon-íntron é responsável por até 15 % de doenças herdadas. Além disso, os defeitos na própria maquinaria de splicing devido à perda ou ao ganho de função de moduladores e fatores de splicing são as causas de uma ampla faixa de alimentos humanos de câncer para doenças neurodegenerativas. Tanto o splicing alternativo quanto o splicing constitutivo são submetidos à regulação por trajetórias de sinalização a montante. Essa regulação pode ser essencial durante o desenvolvimento, na expressão especifica de tecido de certas isoformas, durante o ciclo celular e em resposta às moléculas de sinalização extrínseca.
[0587] O splicing alternativo permite que um único gene expresse diferentes isoformas de mRNA desempenhando, assim, uma função principal em contribuição à complexidade celular em eucariotas maiores sem a necessidade de expandir o genoma. O splicing também pode ser submetido à regulação por trajetórias de sinalização a montante. Por exemplo, uma trajetória de sinalização a montante pode modular o splicing alternativo e aumentar ou diminuir os níveis de expressão de diferentes isoformas de mRNA.
[0588] Os casos de splicing alternativo são altamente regulados por vários fatores de splicing de uma maneira do tipo de tecido, de estágio de desenvolvimento e dependente de sinal. Além disso, as causas não baseadas em mutação de defeitos de splicing e defeitos na própria maquinaria de splicing, por exemplo, devido à perda/ganho de função de fatores de splicing ou sua estequiometria relativa, provocam uma ampla faixa de alimentos humanos, que variam de câncer a doenças neurodegenerativas. Em muitas doenças, o estado da doença é causado por uma alteração da razão de diferentes isoformas de duas ou mais proteínas expressadas a partir de um gene. Em algumas modalidades, a alteração na razão dos produtos de proteína se deve às alterações na frequência de casos de splicing alternativo em um pré-mRNA, levando a alterações na razão de variantes de splice produzidas. Em algumas modalidades, splicing alternativo de um pré-mRNA pode levar a 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 isoformas de proteína que são expressas. Em algumas modalidades, uma alteração na razão de variante de splice é causada por mutação genética.
[0589] Em eucariotas, a grande maioria de processos de splicing é catalizada pelo spliceossomo, um complexo de proteína de RNA que ocorre em etapas únicas e pode compreender um subconjunto de várias centenas diferentes de proteínas, além de cinco snRNAs spliceossomais. Esses fatores são responsáveis pelo posicionamento exato do spliceossomo nas sequências de sítio de splice 5' e 3' . A razão pela qual há necessidade de muitos fatores reflete em relação à observação de que o reconhecimento de éxon pode ser afetado por muitas características de pré-mRNA, como comprimento de éxon, reconhecimento de sequência, a presença de elementos acentuadores e silenciadores, a resistência de sinais de splicing a montante, a arquitetura de promotor e a taxa de processividade de RNA, estrutura secundária e terciária de RNA.
[0590] Todas as doenças de mamíferos são, por fim, mediadas pelo transcriptoma. Na medida em que o mRNA mensageiro (mRNA) é parte do transcriptoma e toda a expressão de proteína se deriva dos mRNAs, há o potencial de intervir em doenças mediadas por proteína pela modulação da expressão da proteína relevante e pela, por sua vez, modulação da translação do mRNA a montante correspondente. Porém, mRNA é apenas uma pequena porção do transcriptoma: outros RNAs transcritos também regulam a biologia celular diretamente pela estrutura e função de estruturas de RNA (por exemplo, ribonucleoproteínas) bem como através da expressão e ação de proteína, incluindo (porém sem limitação) microRNA (miRNA), RNA longo de não codificação (IncRNA), RNA intergênico longo de não codificação (lincRNA), RNA nucleolar pequeno (snoRNA), RNA nuclear pequeno (snRNA), RNA pequeno especifico do corpo de Cajal (scaRNA), RNA de interação com piwi (piRNA), RNA endógeno de competição (ceRNA) e pseudogenes. Os fármacos que intervêm nesse nível têm o potencial para modular qualquer um e todos os processos celulares. As modalidades terapêuticas existentes, como RNA ou siRNA antissenso, na maioria dos casos, ainda têm que superar desafios significativos, como entrega de fármaco, absorção de fármaco, distribuição de fármaco para órgãos-alvo, farmacocinéticas e penetração celular. Ao contrário, pequenas moléculas têm um longo histórico de superação bem-sucedida dessas barreiras e essas qualidades, que torna as mesmas adequadas como fármacos, são prontamente otimizadas através de uma série de análogos para superar tais desafios. Em grande contraste, a aplicação de pequenas moléculas como ligantes para RNA que produzem beneficio terapêutico recebeu pouca ou nenhuma atenção da comunidade de revelação de fármaco.
[0591] As sequências de DNA no cromossomo são transcritas em pré-mRNAs que contêm regiões de codificação (éxons) e geralmente também contêm regiões de não codificação de intervenção (introns). Os introns são removidos dos pré-mRNAs através de splicing. O splicing de pré-mRNA procede por um mecanismo de duas etapas. Na primeira etapa, o sítio de splice 5' é clivado, o que resulta em um éxon 5' "livre" e um intermediário em forma de laço. Na segunda etapa, o éxon 5' é ligado ao éxon 3' com liberação do íntron como o produto em forma de laço. Essas etapas são catalisadas em um complexo de ribonucleoproteínas nucleares pequenas e proteínas chamadas de spliceossomo.
[0592] Na maioria dos casos, a reação de splicing ocorre na mesma molécula de pré-mRNA, que é chamada de cis-splicing. O splicing entre dois pré-mRNAs independentemente transcritos é chamado de trans-splicing.
[0593] Os introns são porções de DNA eucariota, que intervém entre as porções de codificação ou "éxons" daquele DNA. Os introns e éxons são transcritos em RNA chamado de "transcrição primária, precursora ao mRNA" (ou "pré-mRNA"). Os introns podem ser removidos do pré-mRNA de modo que a proteína nativa codificada pelos éxons possa ser produzida (o termo "proteína nativa" como usado no presente documento se refere à proteína de ocorrência natural, do tipo selvagem ou funcional). A remoção de introns do pré-mRNA e a junção subsequente dos éxons são executadas no processo de splicing.
[0594] O processo de splicing é uma série de reações, que são executadas no RNA após a transcrição, mas antes da translação e que são mediadas por fatores de splicing. Assim, um "pré-mRNA" pode ser um RNA que contém tanto éxons quanto íntron (ou introns) e um mRNA maduro ("mRNA") pode ser um RNA em que o íntron (ou introns) foi removido e os éxons unidos sequencialmente de modo que a proteína possa ser traduzida a partir dos mesmos pelos ribossomos.
[0595] Os introns podem ser definidos por um conjunto de "elementos de splice" que fazem parte da maquinaria de splicing e podem ser exigidos para splicing e que são relativamente curtos, que são segmentos de RNA conservados que se ligam a vários fatores de splicing, que executam as reações de splicing. Assim, cada íntron é definido por um sítio de splice 5', um sítio de splice 3' e um ponto de ramificação situado entre os mesmos. Os elementos de splice também compreendem silenciadores e acentuadores de splicing de éxon, situados em éxons, e silenciadores e acentuadores de splicing de íntron situados em introns em uma distância a partir dos sítios de splice e pontos de ramificação. Além do sítio de splice e dos pontos de ramificação, esses elementos controlam splicing constitutivo e aberrante alternativo.
[0596] As transcrições de RNA inicial (pré-mRNA) da maioria dos genes eucariotas são retidas no núcleo até as sequências de íntron de não codificação serem removidas pelo spliceossomo para produzir RNA mensageiro maduro (mRNA). O splicing que ocorre pode variar, assim, a síntese de produtos de proteína alternativos a partir da mesma transcrição primária pode ser afetada por sinais de desenvolvimento ou de tecido específico. Acredita-se que uma fração significativa de doenças genéticas humanas, incluindo vários cânceres, resulte dos desvios no padrão normal de splicing de pré-mRNA. O spliceossomo é um complexo que compreende partículas de ribonucleoproteína (snRNP) compostas de RNAs nucleares pequenos e proteínas. Os componentes de snRNA do spliceossomo podem promover as duas reações transesterificação de splicing.
[0597] Os dois spliceossomos únicos coexistem na maioria dos eucariotas: o spliceossomo dependente de U2, que catalisa a remoção de introns do tipo U2, e o spliceossomo dependente de U12 menos abundante, que está presente apenas em um subconjunto de eucariotas e emendas da classe do tipo U12 rara de introns. O spliceossomo dependente de U2 é montado a partir de U1, U2, U5 e U4/U6 snRNPs e várias proteínas de não snRNP. O snRNP de U2 é recrutado com duas subunidades de proteína ligadas de modo fraco, SF3a e SF3b, durante a primeira etapa dependente de ATP na montagem de spliceossomo. SF3b é composto de sete proteínas conservadas, incluindo PHF5α, SF3b155, SF3b145, SF3b130, SF3b49, SF3b14a e SF3b10.
[0598] O splicing ou splicing de RNA se refere tipicamente à edição da transcrição de RNA mensageiro precursor nascente (pré-mRNA) em um RNA mensageiro maduro (mRNA). O splicing é um processo bioquímico que inclui a remoção de introns seguido da ligação de éxon. As reações de transesterificação sequencial são iniciadas por um ataque neofílico do sítio de splice 5' (5'ss) pela ramificação da adenosina (ponto de ramificação; BP) no íntron a jusante que resulta na formação de um íntron intermediário em forma de laço com uma ligação de 2’ , 5'-fosfodiéster. Isso é seguido por um ataque mediado por 5'ss no sítio de splice 3' (3'ss), que leva à remoção do íntron que assume forma de laço e à formação do produto de splicing.
[0599] O splicing pode ser regulado por vários elementos de ação cis e fatores de ação trans. Os elementos de ação cis são sequências do mRNA e podem incluir sequências consenso principais e outros elementos reguladores. As sequências consenso principais podem se referir tipicamente a motivos de sequência de RNA conservada, incluindo 5'ss, 3'ss, trato de polipirimidina e região de BP, que podem funcionar para recrutamento de spliceossomo. BP se refere a uma sequência parcialmente conservada de pré-mRNA, geralmente menor que 50 nucleotídeos a montante de 3'ss. BP reage com 5'ss durante a primeira etapa da reação de splicing. Outros elementos de ação cis reguladores podem incluir acentuador de splicing exônico (ESE), silenciador de splicing exônico (ESS), acentuador de splicing intrônico (ISE) e silenciador de splicing intrônico (ISS). Os fatores de ação trans podem ser proteínas ou ribonucleoproteínas que se ligam aos elementos de ação cis.
[0600] A identificação de sítio de splice e splicing regulado podem ser realizados principalmente por duas máquinas macromoleculares dinâmicas, o spliceossomo maior (dependente de U2) e spliceossomo menor (dependente de U12) . Cada spliceossomo contém cinco snRNPs: snRNPs de U1, U2, U4, U5 e U6 para o maior spliceossomo (que produz ~95,5 % de todos os introns); e snRNPs de U11, U12, U4atac, U5 e U6 atac para o menor spliceossomo. O reconhecimento de spliceossomo de elementos de sequência consenso nos locais 5'ss, 3'ss e BP é uma das etapas na trajetória de splicing e pode ser modulado por ESEs, ISEs, ESSs e ISSs, que pode ser reconhecido por fatores auxiliares de splicing, incluindo proteínas SR e hnRNPs. A proteína de ligação de trato de polipirimidina (PTBP) podem se ligar ao trato de polipirimidina de íntrons e pode promover a formação de alça em RNA.
[0601] O splicing alternativo é um mecanismo pelo qual um único gene pode eventualmente dar origem a diferentes proteínas. O splicing alternativo pode ser realizado pela ação concertada de uma variedade de diferentes proteínas, chamadas de "proteínas reguladoras de splicing alternativo", que se associam ao pré-mRNA e fazem com que diferentes éxons alternativos sejam incluídos no mRNA maduro. Essas formas alternativas da transcrição de gene podem dar origem a diferentes isoformas da proteína específica. As sequências nas moléculas de pré-mRNA que podem se ligar às proteínas reguladoras de splicing alternativo podem ser encontradas em introns ou éxons, incluindo, porém sem limitação, ISS, ISE, ESS, ESE e trato de polipirimidina. Muitas mutações podem alterar os padrões de splicing. Por exemplo, as mutações podem ser elementos de ação cis e podem estar localizadas em sequências consenso principais (por exemplo, 5'ss, 3'ss e BP) ou os elementos reguladores que modulam o recrutamento de spliceossomo, incluindo ESE, ESS, ISE e ISS.
[0602] Um sítio de splice críptico, por exemplo, um 5'ss críptico e um 3'ss críptico, pode se referir a um sítio de splice que não é normalmente reconhecido pelo spliceossomo e, portanto, estão no estado latente. O sítio de splice críptico pode ser reconhecido ou ativado, por exemplo, por mutações em elementos de ação cis ou fatores de ação trans ou configurações estruturais, como protuberâncias.
Modulação de Splicing
[0603] A presente invenção contempla o uso de pequenas moléculas com propriedades favoráveis de fármaco que modulam a atividade de splicing de um RNA-alvo. São fornecidos no presente documento moduladores de splicing de molécula pequena (SMSMs) que modulam o splicing de um polinucleotídeo-alvo. Em algumas modalidades, os SMSMs ligam e modulam o RNA-alvo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento uma biblioteca de SMSMs que ligam e modulam um ou mais RNAs-alvo. Em algumas modalidades, o RNA-alvo é mRNA. Em algumas modalidades, o RNA-alvo é mRNA em um RNA de não codificação. Em algumas modalidades, o RNA-alvo é um pré-mRNA. Em algumas modalidades, o RNA-alvo é hnRNA. Em algumas modalidades, as pequenas moléculas modulam o splicing do RNA-alvo. Em algumas modalidades, uma molécula pequena fornecida no presente documento modula o splicing em uma sequência do RNA-alvo. Em algumas modalidades, uma molécula pequena fornecida no presente documento modula o splicing em uma sequência de sitio de splice críptico do RNA-alvo. Em algumas modalidades, uma molécula pequena fornecida no presente documento se liga a um RNA-alvo. Em algumas modalidades, uma molécula pequena fornecida no presente documento se liga a um componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, uma molécula pequena fornecida no presente documento se liga a um RNA-alvo e um componente de complexo de splicing.
[0604] Assim, são fornecidos no presente documento métodos para impedir ou induzir um caso de splicing em uma molécula de pré-mRNA, que compreende colocar a molécula de pré-mRNA e/ou outros elementos da maquinaria de splicing (por exemplo, em uma célula) em contato com um composto fornecido no presente documento para impedir ou induzir o caso de splicing na molécula de pré-mRNA. O caso de splicing que é impedido ou induzido pode ser, por exemplo, um caso de splicing aberrante, um caso de splicing constitutivo ou um caso de splicing alternativo.
[0605] É adicionalmente fornecido no presente documento um método para identificar um composto capaz de impedir ou induzir um caso de splicing em uma molécula de pré-mRNA, que compreende colocar o composto em contato com fatores e/ou elementos de splicing envolvidos em splicing alternativo, aberrante e/ou constitutivo como descrito no presente documento (por exemplo, em células) sob condições, através disso, um efeito positivo (prevenção ou indução de splicing) ou negativo (nenhuma prevenção ou indução de splicing) é produzido e detectado e para identificar um composto que produz um efeito positivo como um composto capaz de impedir ou induzir um caso de splicing.
[0606] Em algumas modalidades, um composto de molécula pequena descrito no presente documento em um carreador farmaceuticamente aceitável impede ou induz um caso de splicing aberrante ou alternativo em uma molécula de pré-mRNA. Como notado acima, os compostos de molécula pequena fornecidos no presente documento não são oligonucletideos antissenso ou antigene. A Tabela 1A, a Tabela 1B e a Tabela 1C mostram a estrutura química e nome de compostos exemplificativos e não são destinadas a serem todas inclusivas.
[0607] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para regular no modo ascendente a expressão de uma proteína nativa em uma célula que contém um DNA que codifica a proteína nativa, em que o DNA contém uma mutação ou nenhuma mutação que causa a regulação descendente da proteína nativa por splicing aberrante e/ou alternativo da mesma. Por exemplo, o DNA pode codificar um pré-mRNA que tem uma mutação ou uma estrutura secundária ou terciária aberrante que causa regulação descendente de uma ou mais isoformas de uma proteína. O método pode compreender introduzir na célula uma molécula pequena fornecida no presente documento que impede um caso de splicing aberrante, através disso, o íntron nativo é removido por splicing correto e a proteína nativa é produzida pela célula. Em algumas modalidades, um método compreende introduzir em uma célula uma molécula pequena fornecida no presente documento que modula um caso de splicing alternativo para produzir uma proteína que tem uma função diferente daquela da proteína que seria produzida sem modulação de splicing alternativo.
[0608] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para regular de modo descendente a expressão de uma proteína nativa em uma célula que contém um DNA que codifica a proteína nativa, em que o DNA contém uma mutação ou nenhuma mutação que causa regulação ascendente da proteína nativa por splicing aberrante e/ou alternativo da mesma. Por exemplo, o DNA pode codificar um pré-mRNA que tem uma mutação ou uma estrutura secundária ou terciária aberrante que causa regulação ascendente de uma ou mais isoformas de uma proteína. O método pode compreender introduzir na célula uma molécula pequena fornecida no presente documento que impede um caso de splicing aberrante, através disso, o íntron nativo é removido por splicing correto e a proteína nativa é produzida pela célula. Em algumas modalidades, um método compreende introduzir em uma célula uma molécula pequena fornecida no presente documento que modula um caso de splicing alternativo para produzir uma proteína que tem uma função diferente daquela da proteína que seria produzida sem modulação de splicing alternativo. Por exemplo, um método pode compreender impedir o splicing aberrante em uma molécula de pré-mRNA que contém uma mutação ou uma estrutura secundária ou terciária aberrante e/ou impedir um caso de splicing alternativo. Quando presente no pré-mRNA, a mutação ou estrutura secundária ou terciária aberrante pode fazer com que uma pré-mRNA se divida de modo incorreto e produza um fragmento de mRNA ou mRNA aberrante diferente do mRNA que resulta normalmente de um pré-mRNA sem a mutação ou estrutura secundária ou terciária aberrante. Por exemplo, as moléculas de pré-mRNA podem conter: (i) um primeiro conjunto de elementos de splice que definem um íntron nativo que pode ser removido por splicing quando a mutação ou estrutura secundária ou terciária aberrante não produzir uma primeira molécula de mRNA que codifica uma proteína nativa e (ii) um segundo conjunto de elementos de splice induzido pela mutação ou estrutura secundária ou terciária aberrante que define um íntron aberrante diferente do íntron nativo, cujo íntron aberrante é removido por splicing quando a mutação ou estrutura secundária ou terciária aberrante não produzir uma segunda molécula de mRNA aberrante diferente da primeira molécula de mRNA. O método pode compreender colocar a molécula de pré-mRNA e/ou outros fatores e/ou elementos da maquinaria de splicing como descrito no presente documento (por exemplo, em uma célula) em contato com um composto descrito no presente documento para impedir ou promover um caso de splicing aberrante em uma molécula de pré-mRNA, através disso, o íntron nativo é removido por splicing correto e a produção de proteína nativa é aumentada na célula.
[0609] Também é fornecido no presente documento um método para regular no modo ascendente expressão um RNA que seria, de outro modo, regulado de modo descendente pela modulação de um caso de splicing alternativo no RNA. O método pode compreender colocar uma molécula de pré-mRNA e/ou outros elementos e/ou fatores da maquinaria de splicing em contato com um composto descrito no presente documento para modular casos de splicing alternativo, através disso, um caso de splicing nativo é inibido e promove-se um caso de splicing alternativo que regula de modo ascendente a expressão de um RNA que é, de outro modo, regulada de modo descendente quando sob o controle do caso de splicing nativo.
[0610] Também é fornecido no presente documento um método para regular de modo descendente expressão um RNA que seria de outro modo regulado de modo ascendente pela modulação de um caso de splicing alternativo no RNA. O método pode compreender colocar uma molécula de pré-mRNA e/ou outros elementos e/ou fatores da maquinaria de splicing em contato com um composto descrito no presente documento para modular casos de splicing alternativo, através disso, um caso de splicing nativo é inibido e promove-se um caso de splicing alternativo que regula de modo descendente a expressão de um RNA que é, de outro modo, regulada de modo ascendente quando sob o controle do caso de splicing nativo.
[0611] Os métodos, compostos e composições descritas no presente documento têm uma variedade de usos. Por exemplo, são úteis em qualquer processo em que se deseja ter meios para regular de modo descendente a expressão de um RNA a ser expresso até um certo tempo, após o qual se deseja regular de modo ascendente a expressão de RNA. Para tal uso, o RNA a ser expresso pode ser qualquer RNA que codifica uma proteína a ser produzida na medida que o gene contém um íntron nativo. O RNA pode ser mutado por qualquer meio adequado, como mutagênese de local específico (consultar, T. Kunkel, Patente n° US 4.873.192) para criar deliberadamente um segundo conjunto aberrante de elementos de splice que definem um íntron aberrante que substancialmente regula de modo descendente a expressão do gene. Uma sequência que codifica o RNA pode ser inserida em um vetor de expressão adequado e o vetor de expressão inserido em uma célula hospedeira (por exemplo, uma célula eucariota, como uma levedura, inseto ou célula de mamífero (por exemplo, humano, rato)) por técnicas recombinantes padrão. A célula hospedeira pode, então, ser cultivada em cultura por técnicas padrão. Quando se deseja regular de modo ascendente a expressão do gene mutado, um composto adequado da presente invenção, em uma formulação adequada, pode ser adicionado ao meio de cultura de modo que a expressão do gene seja regulada de modo ascendente.
[0612] Também é fornecido no presente documento um método para alterar a razão de variantes de splice produzidas a partir de um gene. O método pode compreender colocar uma molécula de pré-mRNA e/ou outros elementos e/ou fatores da maquinaria de splicing em contato com um composto ou compostos descritos no presente documento para modular casos de splicing alternativo. O composto ou compostos dessa invenção podem ser usados para atuar em 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 casos de splicing alternativo que podem ocorrer em um pré-mRNA. Em algumas modalidades, uma primeira variante de splice pode ser regulada de modo descendente ou inibida e/ou uma segunda variante de splice pode ser regulada de modo ascendente, que resulta em uma razão alterada de variantes de splice de dois ou mais RNAs. Em algumas modalidades, uma primeira variante de splice pode ser regulada de modo ascendente enquanto uma segunda variante de splice pode ser não afetada alternando, através disso, a razão do RNA. Em algumas modalidades, uma primeira variante de splice pode ser regulada de modo descendente enquanto um segundo caso de splicing pode ser não afetado alternando, através disso, a razão do RNA.
[0613] Os métodos, os compostos e as formulações descritas no presente documento também são úteis como ferramentas in vitro ou in vivo para examinar e modular os casos de splicing em RNAs humanos ou animais codificados por genes, por exemplo, aqueles regulados por desenvolvimento e/ou por tecido (por exemplo, casos de splicing alternativo).
[0614] Os compostos e as formulações descritos no presente documento também úteis como agentes terapêuticos no tratamento de doenças que envolvem splicing aberrante e/ou alternativo. Assim, em algumas modalidades, um método para tratar um indivíduo que tem uma condição ou transtorno associado a um caso de splicing aberrante ou alternativo em uma molécula de pré-mRNA, compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento para modular um caso de splicing alternativo ou impedir um caso de splicing aberrante, tratando, através disso, o indivíduo. O método pode, por exemplo, restaurar um caso de splicing correto em uma molécula de pré-mRNA. O método pode, por exemplo, utilizar um composto de molécula pequena descrito no presente documento em um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0615] As formulações que contêm as pequenas moléculas descritas no presente documento podem compreender um carreador farmaceuticamente aceitável ou psicologicamente aceitável, como um carreador aquoso. Assim, as formulações para uso nos métodos descritos no presente documento incluem, porém sem limitação, aquelas adequadas para administração oral, administração parenteral, incluindo administração subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa e intra-arterial, bem como administração tópica (por exemplo, administração de uma formulação aerolisada de partículas respiráveis para os pulmões de um paciente afetados com fibrose cística ou câncer de pulmão ou uma formulação em creme ou loção para administração transdérmica de pacientes com psoríase). As formulações podem ser convenientemente apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica. A via mais adequada de administração em qualquer determinado caso pode depender do indivíduo, da natureza e da gravidade da condição que é tratada e o composto ativo particular, que está sendo usado, como seria prontamente determinado por aquele versado na técnica.
[0616] Também são fornecidos no presente documento métodos para o uso de um composto descrito no presente documento que tem as características apresentadas acima para a preparação de um medicamento para regular de modo ascendente ou regular de modo descendente a expressão de RNA em um paciente que tem um transtorno associado a splicing alternativo ou aberrante de uma molécula de pré-mRNA, como discutido acima. Em algumas modalidades, o medicamento regula de modo ascendente a expressão de gene. Em outras modalidades, o medicamento regula de modo descendente a expressão de gene. Na fabricação do medicamento de acordo com a invenção, o composto pode ser misturado por adição com, entre outros, um carreador farmaceuticamente aceitável. O carreador pode ser um sólido ou um líquido. Um ou mais compostos podem ser incorporados em qualquer combinação nas formulações descritas no presente documento, que podem ser preparadas por qualquer uma das técnicas bem conhecidas de farmácia, como admistura dos componentes, e/ou incluindo um ou mais ingredientes terapêuticos de acessório.
[0617] Os presentes inventores identificam no presente documento compostos de baixo peso molecular (algumas vezes chamado no presente documento de pequenas moléculas, que bloqueiam splicing de mRNA e/ou melhoram (facilitam, aumentam) splicing de mRNA. O splicing que pode ser regulado pelos métodos descritos no presente documento inclui splicing alternativo, por exemplo, salto de éxon, retenção de íntron, salto os pseudoéxons, exclusão de éxon, exclusão de íntron parcial e outros. Dependendo dos fatores, como a sequência de splicing e o RNA (ou gene que codifica o RNA) ou éxon envolvido, a modulação de splicing pode ser realizada na presença de ou na ausência de oligonucleotídeos antissenso (AOs) que são específicos para sequências de splicing de interesse. Em algumas modalidades, uma molécula pequena e um AO atuam sinergicamente.
[0618] Em alguns aspectos, um método compreende colocar um composto de modulação de splice (por exemplo, um SMSM) em contato com um pré-mRNA que modula o splicing do pré-mRNA para favorecer a expressão de uma transcrição que promove a proliferação celular. Por exemplo, um SMSM descrito no presente documento pode aumentar uma ou mais isoformas de uma transcrição que promove a proliferação celular. Por exemplo, um SMSM descrito no presente documento pode diminuir a expressão de uma ou mais isoformas de uma transcrição que impede ou inibe a proliferação celular.
[0619] Em alguns aspectos, um método compreende colocar um composto de modulação de splice (por exemplo, um SMSM) em contato com um pré-mRNA que modula o splicing do pré-mRNA para favorecer a expressão de uma transcrição que impede ou inibe a proliferação celular. Por exemplo, um SMSM descrito no presente documento pode aumentar uma ou mais isoformas de uma transcrição que impede ou inibe a proliferação celular. Por exemplo, um SMSM descrito no presente documento pode diminuir expressão uma ou mais isoformas de uma transcrição que promove a proliferação celular.
[0620] Em algumas modalidades, um método para modular o splicing de pré-mRNA compreende usar um SMSM para diminuir a expressão ou funcionalidade de uma ou mais isoformas de uma transcrição em um indivíduo. O método pode compreender administrar um SMSM, ou uma composição que compreende um SMSM, a um indivíduo, em que o SMSM se liga a um pré-mRNA ou um componente de complexo de splicing e modula o splicing do pré-mRNA para favorecer a expressão de uma ou mais isoformas de uma transcrição. O método pode compreender administrar um SMSM, ou uma composição que compreende um SMSM, a um indivíduo, em que o SMSM se liga a um pré-mRNA ou um componente de complexo de splicing e modula o splicing do pré-mRNA para desfavorecer a expressão de uma ou mais isoformas de uma transcrição.
[0621] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para tratar um indivíduo afetado por uma doença ou condição associada ao splicing aberrante de um pré-mRNA. O método pode compreender administrar um SMSM, ou uma composição que compreende um SMSM, a um indivíduo, em que o SMSM se liga a um pré-mRNA ou um componente de complexo de splicing e modula o splicing do pré-mRNA para inibir a expressão de uma ou mais isoformas de uma transcrição. O método pode compreender administrar um SMSM, ou uma composição que compreende um SMSM, a um indivíduo, em que o SMSM se liga a um pré-mRNA ou um componente de complexo de splicing e modula o splicing do pré-mRNA para aumentar a expressão de uma ou mais isoformas de uma transcrição.
[0622] Várias doenças estão associadas à expressão de um produto de gene aberrante (por exemplo, uma proteína ou transcrição de RNA) de um gene. Por exemplo, quantidades aberrantes de uma transcrição de RNA podem levar à doença devido às alterações correspondentes na expressão de proteína. As alterações na quantidade de uma transcrição de RNA particular podem ser o resultado de vários fatores. Em primeiro lugar, as alterações na quantidade de transcrições de RNA podem ser devido a um nível aberrante de transcrição de um gene particular, como pela perturbação de um fator de transcrição ou uma porção do processo de transcrição, resultando em uma alteração no nível de expressão de uma transcrição de RNA particular. Em segundo lugar, as alterações no splicing de transcrições de RNA particulares, como pela perturbação de um processo de splicing particular ou mutações no gene que leva ao splicing modificado, podem alterar os níveis de uma transcrição de RNA particular. As alterações em relação à estabilidade de uma transcrição de RNA particular ou aos componentes que mantêm a estabilidade de transcrição de RNA, como o processo de incorporação de cauda de poli-A ou um efeito em certos fatores ou proteínas que se ligam a e estabilizam as transcrições de RNA, podem levar a alterações nos níveis de uma transcrição de RNA particular. O nível de translação de transcrições de RNA particulares também pode afetar a quantidade dessas transcrições, afetando ou regulando de modo ascendente os processos de decaimento de transcrição de RNA. Por fim, o sequestro de RNA ou transporte de RNA aberrante também pode levar a alterações em níveis funcionais de transcrições de RNA, e pode ter um efeito na estabilidade, processamento adicional ou translação das transcrições de RNA.
[0623] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento métodos para modular a quantidade de uma, duas, três ou mais transcrições de RNA codificadas por um pré-mRNA, que compreende colocar uma célula em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a célula é colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma cultura de célula. Em outras modalidades, a célula é coloca em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo animal não humano ou um indivíduo humano).
[0624] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento métodos para tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão de uma doença ou condição que compreende administrar uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de molécula pequena como descrito no presente documento a um indivíduo, em particular a um mamífero.
[0625] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento composições e métodos para tratar uma doença ou condição, incluindo compostos moduladores estéricos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos que promovem a prevenção ou a correção de salto de éxon de um pré-mRNA. A invenção fornece adicionalmente composições e métodos para aumentar a produção de mRNA maduro e, por sua vez, proteína, em células de um indivíduo em necessidade da mesma, por exemplo, um indivíduo que pode se beneficiar da produção aumentada de proteína. A invenção fornece adicionalmente composições e métodos para diminuir a produção de mRNA maduro e, por sua vez, proteína, em células de um indivíduo em necessidade da mesma, por exemplo, um indivíduo que pode se beneficiar da produção diminuída da proteína. Em uma modalidade, os métodos descritos podem ser usados para tratar os indivíduos que têm uma doença ou condição causada por uma mutação em um gene, incluindo mutações de senso errado, splicing, fase de leitura e não senso, bem como todas as deleções de gene, que resultam na produção de proteína deficiente. Em uma outra modalidade, os métodos descritos podem ser usados para tratar os indivíduos que têm uma doença ou condição não causada pela mutação de gene. Em algumas modalidades, as composições e os métodos da presente invenção são usados para tratar os indivíduos que têm uma doença ou condição, os quais podem se beneficiar da produção aumentada de proteína. Em algumas modalidades, as composições e os métodos da presente invenção são usados para tratar os indivíduos que têm uma doença ou condição, os quais podem se beneficiar da produção aumentada de proteína. Em algumas modalidades, as composições e os métodos da presente invenção são usados para tratar os indivíduos que têm uma doença ou condição, os quais podem se beneficiar da produção diminuída de proteína.
[0626] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento métodos para tratar uma doença ou condição em um indivíduo em necessidade dos mesmos aumentando-se a expressão de uma proteina-alvo ou RNA funcional por células do indivíduo, em que as células têm uma mutação que causa, por exemplo, o salto de éxon ou inclusão de íntron ou uma porção das mesmas, de pré-mRNA, em que o pré-mRNA codifica a proteina-alvo ou o RNA funcional. O método pode compreender colocar as células de um indivíduo em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo que alveja o pré-mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional ou componente de complexo de splicing, através disso, o splicing de um éxon a partir de um pré-mRNA que codifica uma proteina-alvo ou RNA funcional é impedido ou inibido aumentando, através disso, um nível de mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional e aumentando a expressão da proteina-alvo ou RNA funcional nas células do indivíduo. Em algumas modalidades, também é revelado no presente documento um método para aumentar a expressão de uma proteina-alvo pelas células que têm uma mutação ou estrutura de RNA secundária ou terciária aberrante que causa o salto de éxon de pré-mRNA, em que o pré-mRNA compreende uma mutação ou estrutura de RNA secundária ou terciária aberrante que causa o salto de éxon. O método pode compreender colocar as células em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo que alveja um pré-mRNA que codifica uma proteina-alvo ou RNA funcional, através disso, o splicing de um éxon de um pré-mRNA que codifica uma proteina-alvo ou RNA funcional é impedido ou inibido, aumentando, através disso, o nível de mRNA que codifica a proteína funcional e aumentando a expressão de proteína nas células. Em algumas modalidades, a proteina-alvo é um supressor de tumor. Em algumas modalidades, a proteina-alvo é um promotor de tumor. Em algumas modalidades, a proteina-alvo ou o RNA funcional é uma proteína de compensação ou um RNA funcional de compensação que aumenta ou substitui funcionalmente uma proteina-alvo ou RNA funcional que é deficiente em termos de quantidade ou atividade no indivíduo. Em algumas modalidades, as células estão em ou são de um indivíduo que tem uma condição causada por uma atividade ou quantidade deficiente da proteína. Em algumas modalidades, a quantidade deficiente da proteina-alvo é causada por haploinsuficiência da proteina-alvo, em que o indivíduo tem um primeiro alelo que codifica uma proteina-alvo funcional e um segundo alelo a partir do qual a proteina-alvo não é produzida ou um segundo alelo que codifica uma proteina-alvo não funcional e em que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo se liga a uma porção alvejada de uma pré-mRNA transcrita a partir do primeiro alelo. Em algumas modalidades, a proteina-alvo é produzida em uma forma que é completamente funcional em comparação com a proteína equivalente produzida a partir de mRNA em que um éxon foi saltado ou está faltando. Em algumas modalidades, o pré-mRNA é codificado por uma sequência genética com pelo menos cerca de 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência para um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo aumenta a quantidade da proteina-alvo ou do RNA funcional pela modulação de splicing alternativo de pré-mRNA transcrito a partir de um gene que codifica o RNA funcional ou a proteina-alvo. Em algumas modalidades, um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo aumenta a quantidade da proteina-alvo ou do RNA funcional pela modulação de splicing aberrante que resulta da mutação do gene que codifica a proteina-alvo ou o RNA funcional.
[0627] Em algumas modalidades, a quantidade total do mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional produzido na célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aumentada pelo menos cerca de 10 %, pelo menos cerca de
300 %, cerca de 20 % a cerca de 50 %, cerca de 20 % a cerca de 100 %, cerca de 20 % a cerca de 150 %, cerca de 20 % a cerca de 200 %, cerca de 20 % a cerca de 250 %, cerca de 50 % a cerca de 100 %, cerca de 50 % a cerca de 150 %, cerca de 50 % a cerca de 200 %, cerca de 50 % a cerca de 250 %, cerca de 100 % a cerca de 150 %, cerca de 100 % a cerca de 200 %, cerca de 100 % a cerca de 250 %, cerca de 150 % a cerca de 200 %, cerca de 150 % a cerca de 250 %, cerca de 200 % a cerca de 250 %, pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 50 %, pelo menos cerca de 100 %, pelo menos cerca de 150 %, pelo menos cerca de 200 %, pelo menos cerca de 250 % ou pelo menos cerca de 300 % em comparação com a diferença em quantidades entre duas isoformas de proteína produzidas a partir de variantes de splice produzidas por uma célula de controle.
[0636] Em algumas modalidades, a diferença em quantidade entre uma primeira variante de splice e uma segunda variante de splice que codifica uma isoforma de proteina-alvo ou RNA funcional produzida na célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aumentada cerca de 1,1 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,5 a cerca de 10 vezes, cerca de 2 a cerca de 10 vezes, cerca de 3 a cerca de 10 vezes, cerca de 4 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 5 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 6 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 7 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 8 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 9 vezes, cerca de 2 a cerca de 5 vezes, cerca de 2 a cerca de 6 vezes, cerca de 2 a cerca de 7 vezes, cerca de 2 a cerca de 8 vezes, cerca de 2 a cerca de 9 vezes, cerca de 3 a cerca de 6 vezes, cerca de 3 a cerca de 7 vezes, cerca de 3 a cerca de 8 vezes, cerca de 3 a cerca de 9 vezes, cerca de 4 a cerca de 7 vezes, cerca de 4 a cerca de 8 vezes, cerca de 4 a cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 1, 1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 3,5 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes ou pelo menos cerca de 10 vezes em comparação com a diferença em quantidades entre as duas variantes de splice produzidas por uma célula de controle. Em algumas modalidades, a diferença em quantidade entre uma primeira isoforma de proteína expressada a partir de uma primeira variante de splice e uma segunda isoforma de proteína expressada a partir de uma segunda variante de splice produzida pela célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aumentada cerca de 1,1 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,5 a cerca de 10 vezes, cerca de 2 a cerca de 10 vezes, cerca de 3 a cerca de 10 vezes, cerca de 4 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 5 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 6 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 7 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 8 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 9 vezes, cerca de 2 a cerca de 5 vezes, cerca de 2 a cerca de 6 vezes, cerca de 2 a cerca de 7 vezes, cerca de 2 a cerca de 8 vezes, cerca de 2 a cerca de 9 vezes, cerca de 3 a cerca de 6 vezes, cerca de 3 a cerca de 7 vezes, cerca de 3 a cerca de 8 vezes, cerca de 3 a cerca de 9 vezes, cerca de 4 a cerca de 7 vezes, cerca de 4 a cerca de 8 vezes, cerca de 4 a cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 1,1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 3,5 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes ou pelo menos cerca de 10 vezes em comparação com a diferença em quantidades entre duas isoformas de proteína expressadas a partir das variantes de splice produzidas por uma célula de controle.
[0637] Em algumas modalidades, uma diferença em quantidades entre uma primeira variante de splice e uma segunda variante de splice que codifica uma isoforma de proteina-alvo ou RNA funcional produzida em uma célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é diminuída cerca de 20 % a cerca de 300 %, cerca de 50 % a cerca de 300 %, cerca de 100 % a cerca de 300 %, cerca de 150 % a cerca de 300 %, cerca de 20 % a cerca de 50 %, cerca de 20 % a cerca de 100 %, cerca de 20 % a cerca de 150 %, cerca de 20 % a cerca de 200 %, cerca de 20 % a cerca de 250 %, cerca de 50 % a cerca de 100 %, cerca de 50 % a cerca de 150 %, cerca de 50 % a cerca de 200 %, cerca de 50 % a cerca de 250 %, cerca de 100 % a cerca de 150 %, cerca de 100 % a cerca de 200 %, cerca de 100 % a cerca de 250 %, cerca de 150 % a cerca de 200 %, cerca de 150 % a cerca de 250 %, cerca de 200 % a cerca de 250 %, pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 50 %, pelo menos cerca de 100 %, pelo menos cerca de 150 %, pelo menos cerca de 200 %, pelo menos cerca de 250 % ou pelo menos cerca de 300 % em comparação com a diferença em quantidades entre as duas variantes de splice produzidas por uma célula de controle. Em algumas modalidades, uma diferença em quantidades entre uma primeira isoforma de proteína expressada a partir de uma primeira variante de splice e uma segunda isoforma de proteína expressada a partir de uma segunda variante de splice produzida por uma célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é diminuída cerca de 20 % a cerca de 300 %, cerca de 50 % a cerca de 300 %, cerca de 100 % a cerca de 300 %, cerca de 150 % a cerca de 300 %, cerca de 20 % a cerca de 50 %, cerca de 20 % a cerca de 100 %, cerca de 20 % a cerca de 150 %, cerca de 20 % a cerca de 200 %, cerca de 20 % a cerca de 250 %, cerca de 50 % a cerca de 100 %, cerca de 50 % a cerca de 150 %, cerca de 50 % a cerca de 200 %, cerca de 50 % a cerca de 250 %, cerca de 100 % a cerca de 150 %, cerca de 100 % a cerca de 200 %, cerca de 100 % a cerca de 250 %, cerca de 150 % a cerca de 200 %, cerca de 150 % a cerca de 250 %, cerca de 200 % a cerca de 250 %, pelo menos cerca de 20 %, pelo menos cerca de 50 %, pelo menos cerca de 100 %, pelo menos cerca de 150 %, pelo menos cerca de 200 %, pelo menos cerca de 250 %, ou pelo menos cerca de 300 % em comparação com uma diferença em quantidades entre duas isoformas de proteína produzidas a partir das variantes de splice produzidas por uma célula de controle.
[0638] Em algumas modalidades, a diferença em quantidade entre uma primeira variante de splice e uma segunda variante de splice que codifica uma isoforma de proteina-alvo ou RNA funcional produzida na célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é diminuída cerca de 1,1 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,5 a cerca de 10 vezes, cerca de 2 a cerca de 10 vezes, cerca de 3 a cerca de 10 vezes, cerca de 4 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 5 vezes , cerca de 1,1 a cerca de 6 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 7 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 8 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 9 vezes, cerca de 2 a cerca de 5 vezes, cerca de 2 a cerca de 6 vezes, cerca de 2 a cerca de 7 vezes, cerca de 2 a cerca de 8 vezes, cerca de 2 a cerca de 9 vezes, cerca de 3 a cerca de 6 vezes, cerca de 3 a cerca de 7 vezes, cerca de 3 a cerca de 8 vezes, cerca de 3 a cerca de 9 vezes, cerca de 4 a cerca de 7 vezes, cerca de 4 a cerca de 8 vezes, cerca de 4 a cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 1,1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 3,5 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes ou pelo menos cerca de 10 vezes em comparação com a diferença em quantidades entre as duas variantes de splice produzidas por uma célula de controle. Em algumas modalidades, a diferença em quantidade entre uma primeira isoforma de proteína expressada a partir de uma primeira variante de splice e uma segunda isoforma de proteína expressada a partir de uma segunda variante de splice produzida pela célula colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é diminuída cerca de 1,1 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,5 a cerca de 10 vezes, cerca de 2 a cerca de 10 vezes, cerca de 3 a cerca de 10 vezes, cerca de 4 a cerca de 10 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 5 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 6 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 7 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 8 vezes, cerca de 1,1 a cerca de 9 vezes, cerca de 2 a cerca de 5 vezes, cerca de 2 a cerca de 6 vezes, cerca de 2 a cerca de 7 vezes, cerca de 2 a cerca de 8 vezes, cerca de 2 a cerca de 9 vezes, cerca de 3 a cerca de 6 vezes, cerca de 3 a cerca de 7 vezes, cerca de 3 a cerca de 8 vezes, cerca de 3 a cerca de 9 vezes, cerca de 4 a cerca de 7 vezes, cerca de 4 a cerca de 8 vezes, cerca de 4 a cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 1,1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 2,5 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 3,5 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes ou pelo menos cerca de 10 vezes em comparação com a diferença em quantidades entre duas isoformas de proteína expressadas a partir das variantes de splice produzidas por uma célula de controle.
[0639] A razão entre uma primeira isoforma e uma segunda isoforma pode contribuir para várias condições ou doenças. Em algumas modalidades, um indivíduo sem uma condição ou doença tem uma razão entre primeira isoforma e segunda isoforma de 1:1. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrito no presente documento tem uma razão entre primeira isoforma e segunda isoforma de cerca de 1:1,2, 1:1,4, 1:1,6, 1:1,8, 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 ou 1:5. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrito no presente documento tem uma razão entre primeira isoforma e segunda isoforma de cerca de 1:1 a cerca de 1:1,1, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,2, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,3, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,4, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,6, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,8, cerca de 1:1 a cerca de 1:2, cerca de 1:1 a cerca de 1:3, cerca de 1:1 a cerca de 1:3,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:4, cerca de 1:1 a cerca de 1:4,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:5, 1:2 a cerca de 1:3, cerca de 1:2 a cerca de 1:4, cerca de 1:2 a cerca de 1:5, cerca de 1:3 a cerca de 1:4, cerca de 1:3 a cerca de 1:5, ou cerca de 1:4 a cerca de 1:5.
[0640] Em algumas modalidades, a ligação de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao pré-mRNA impede o splicing de um ou mais éxons e/ou introns e/ou proteínas dos mesmos, da população de pré-mRNAs para produzir mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional. Em algumas modalidades, a célula compreende uma população de pré-mRNAs transcritos a partir do gene que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional, em que a população de pré-mRNAs compreende uma mutação que causa o splicing de um ou mais éxons e em que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo se liga à mutação que causa o splicing de um ou mais éxons na população de pré-mRNAs. Em algumas modalidades, a ligação de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo à mutação que causa o splicing de um ou mais éxons impede o splicing de um ou mais éxons da população de pré-mRNAs para produzir mRNA que codifica a proteina-alvo ou RNA funcional. Em algumas modalidades, a condição é uma doença ou transtorno. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente avaliar a expressão de proteína. Em algumas modalidades, um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo se liga a uma porção alvejada de um pré-mRNA.
[0641] Em algumas modalidades, a ligação de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo catalisa a inclusão de um éxon ausente ou remoção de um íntron retido indesejado ou porções do mesmo, resultando em proteínas e mRNA saudáveis. Em algumas modalidades, a ligação de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem efeitos mínimos ou nenhum efeito em células sem doença.
[0642] Em algumas modalidades, um SMSM extermina as células em uma IC50 menor que 50 nM. Em algumas modalidades, as células são células primárias. Em algumas modalidades, um SMSM extermina as células em uma IC50 menor que 48 nM, 45 nM, 40 nM, 35 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 5 nM, 3 nM ou 1 nM.
[0643] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sitio de splice de um polinucleotídeo das células primárias. Em algumas modalidades, um SMSM modula a proliferação ou sobrevivência das células primárias. Em algumas modalidades, as células primárias são células com doença primárias. Em algumas modalidades, as células com doença primárias são células de câncer primárias. Em algumas modalidades, o SMSM está presente em uma concentração de pelo menos cerca de 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 μΜ, 10 μΜ, 100 μΜ, 1 mM, 10 mM, 100 mM ou 1 M. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 5 %, 10 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % das células com doença primárias são exterminadas. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 5 %, 10 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % das células com doença primárias são submetidas à apoptose. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 5 %, 10 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % das células com doença primárias são submetidas à necrose. Em algumas modalidades, a proliferação é reduzida ou inibida em pelo menos cerca de 5 %, 10 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % das células com doença primárias. Em algumas modalidades, as células com doença primárias são células não transformadas.
[0644] Em algumas modalidades, um SMSM reduz um tamanho de um tumor em um indivíduo. Em algumas modalidades, um tamanho de um tumor em um indivíduo administrado com um SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é reduzido por pelo menos cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % no indivíduo. Em algumas modalidades, um diâmetro de um tumor em um indivíduo administrado com um SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é reduzido por pelo menos cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%. Em algumas modalidades, um volume do tumor é reduzido por pelo menos cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % no indivíduo. Em algumas modalidades, o tumor é maligno.
[0645] Em algumas modalidades, um método compreende colocar um SMSM em contato com células sem doença primárias. Em algumas modalidades, no máximo cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, ou 50 % das células sem doença primárias são exterminados. Em algumas modalidades, no máximo cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, ou 50 % das células sem doença primárias são submetidos à apoptose. Em algumas modalidades, no máximo cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, ou 50 % das células sem doença primárias são submetidos à necrose. Em algumas modalidades, a proliferação é reduzida ou inibida em no máximo cerca de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 50 % das células sem doença primárias. Em algumas modalidades, as células sem doença primárias são do mesmo tecido que as células com doença primárias. Em algumas modalidades, as células sem doença primárias são células diferenciadas.
[0646] Um SMSM pode modular o splicing em um sitio de splice de um polinucleotídeo e não exibe toxicidade significativa. Em algumas modalidades, um SMSM penetra a barreira hematoencefálica (BBB) quando administrado a um indivíduo.
[0647] Em algumas modalidades, um SMSM tem uma AUC de cérebro/sangue de pelo menos cerca de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 40 ou mais.
[0648] Em algumas modalidades, um SMSM tem uma meia-vida de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, ou 1000 horas em um ser humano.
[0649] Em algumas modalidades, um SMSM é estável à temperatura ambiente por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 horas; ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses; ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos. Em algumas modalidades, um SMSM é estável a 4 °C por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 horas; ou por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses; ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos. Em algumas modalidades, um SMSM é estável à temperatura ambiente em água ou um solvente orgânico por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 horas; ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses; ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos. Em algumas modalidades, um SMSM é estável a 4 °C em água ou um solvente orgânico por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 horas; ou por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou 12 meses; ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos.
[0650] Em algumas modalidades, um SMSM tem uma viabilidade celular IC50 de 0,01-10 nM, 0,01-5 nM, 0,01-2,5 nM, 0,01-1 nM, 0,01-0,75 nM, 0,01-0,5 nM, 0,01-0,25 nM, 0,01-0,1 nM, 0,1-100 nM, 0,1-50 nM, 0,1-25 nM, 0,1-10 nM, 0,1-7,5 nM, 0,1-5 nM, 0,1-2,5 nM, 2-1000 nM, 2-500 nM, 2-250 nM, 2-100 nM, 2-75 nM, 2-50 nM, 2-25 nM, 2-10 nM, 10-1000 nM, 10-500 nM, 10-250 nM, 10-100 nM, 10-75 nM, 10-5 0 nM, 10-25 nM, 25-1000 nM, 25-500 nM, 25-250 nM, 25- 100 nM, 25-75 nM, 25-50 nM, 50-1000 nM, 50-500 nM, 50- 250 nM, 50-100 nM, 50-75 nM, 60-70 nM, 100-1000 nM, 100-500 nM, 100-250 nM, 250-1000 nM, 250-500 nM ou 500-1000 nM.
[0651] Em algumas modalidades, um SMSM tem uma viabilidade celular IC50 de no máximo 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 25 nM, 30 nM, 35 nM, 40 nM, 45 nM, 50 nM, 51 nM, 52 nM, 53 nM, 54 nM, 55 nM, 56 nM, 57 nM, 58 nM, 59 nM, 60 nM, 61 nM, 62 nM, 63 nM, 64nM,65nM, 66 nM, 67 nM, 68 nM, 69 nM, 70 nM, 71 nM, 72nM, 73nM, 74 nM, 75 nM, 76 nM, 77 nM, 78 nM, 79 nM, 80nM, 81 nM, 82 nM, 83 nM, 84 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM, 110 nM, 120 nM, 130 nM, 140 nM, 150 nM, 160 nM, 170 nM, 180 nM, 190 nM, 200 nM, 210 nM, 220 nM, 230 nM, 240 nM, 250 nM, 275 nM, 300 nM, 325 nM, 350 nM, 375 nM,400 nM, 425 nM, 450 nM, 475 nM, 500 nM, 550 nM, 600 nM,650 nM, 700 nM, 750 nM, 800 nM, 850 nM, 900 nM, 950 nM, 1 μΜ ou 10 μΜ.
[0652] Em algumas modalidades, um SMSM reduz a proliferação celular de células com doença por mais que 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % quando as células são tratadas com o SMSM em uma concentração de 2-1000 nM, 2-500 nM, 2-250 nM, 2-100 nM, 275 nM, 2-50 nM, 2-25 nM, 2-10 nM, 10-1000 nM, 10-500 nM, 10-250 nM, 10-100 nM, 10-75 nM, 10-50 nM, 10-25 nM, 25-1000 nM, 25-500 nM, 25-250 nM, 25-100 nM, 25-75 nM, 25-50 nM, 50-1000 nM, 50-500 nM, 50-250 nM, 50-100 nM, 50- 75 nM, 60-70 nM, 100-1000 nM, 100-500 nM, 100-250 nM, 250- 1000 nM, 250-500 nM ou 500-1000 nM por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0653] Em algumas modalidades, um SMSM reduz a proliferação celular de células com doença por mais que 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % quando as células são tratadas com o SMSM em uma concentração de pelo menos 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 25 nM, 30 nM, 35 nM, 40 nM, 45 nM, 50 nM, 51 nM, 52 nM, 53 nM, 54 nM, 55 nM, 56 nM, 57 nM, 58 nM, 59 nM, 60 nM, 61 nM, 62 nM, 63 nM, 64 nM, 65 nM, 66 nM, 67 nM, 68 nM, 69 nM, 70 nM, 71 nM, 72 nM, 73 nM, 74 nM, 75 nM, 76 nM, 77 nM, 78 nM, 79 nM, 80nM, 81 nM, 82 nM, 83 nM, 84 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM, 110 nM, 120 nM, 130 nM, 140 nM, 150 nM, 160 nM, 170 nM, 180 nM, 190 nM, 200 nM, 210 nM, 220 nM, 230 nM, 240 nM, 250 nM, 275 nM, 300 nM, 325 nM, 350 nM, 375 nM, 400 nM, 425 nM, 450 nM, 475 nM, 500 nM, 550 nM, 600 nM, 650 nM, 700 nM, 750 nM, 800 nM, 850 nM, 900 nM, 950 nM, 1 μΜ ou 10 μΜ por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0654] Em algumas modalidades, um SMSM reduz a viabilidade de células com doença por mais que 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % quando as células são tratadas com ο SMSM em uma concentração de 2-1000 nM, 2-500 nM, 2-250 nM, 2-100 nM, 2-75 nM, 2-50 nM, 2-25 nM, 2-10 nM, 10-1000 nM, 10-500 nM, 10-250 nM, 10-100 nM, 10-75 nM, 10-50 nM, 10-25 nM, 25- 1000 nM, 25-500 nM, 25-250 nM, 25-100 nM, 25-75 nM, 25- 50 nM, 50-1000 nM, 50-500 nM, 50-250 nM, 50-100 nM, 50- 75 nM, 60-70 nM, 100-1000 nM, 100-500 nM, 100-250 nM, 250-1000 nM, 250-500 nM ou 500-1000 nM por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0655] Em algumas modalidades, um SMSM reduz a viabilidade de células com doença por mais que 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % quando as células são tratadas com ο SMSM em uma concentração de pelo menos 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 25 nM, 30 nM, 35 nM, 40 nM, 45 nM, 50 nM, 51 nM, 52 nM, 53 nM, 54 nM, 55 nM, 56 nM, 57 nM, 58 nM, 59 nM, 60 nM, 61 nM, 62 nM, 63 nM, 64 nM, 65 nM, 66 nM, 67 nM, 68 nM, 69 nM, 70 nM, 71 nM, 72 nM, 73 nM, 74 nM, 75 nM, 76 nM, 77 nM, 78 nM, 79 nM, 80 nM, 81 nM, 82 nM, 83 nM, 84 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM, 110 nM, 120 nM, 130 nM, 140 nM, 150 nM, 160 nM, 170 nM, 180 nM, 190 nM, 200 nM, 210 nM, 220 nM, 230 nM, 240 nM, 250 nM, 275 nM, 300 nM, 325 nM, 350 nM, 375 nM, 400 nM, 425 nM, 450 nM, 475 nM, 500 nM, 550 nM, 600 nM, 650 nM, 700 nM, 750 nM, 800 nM, 850 nM, 900 nM, 950 nM, 1 μΜ ou 10 μΜ por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0656] Em algumas modalidades, um SMSM não reduz a viabilidade de células sem doença por mais que 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % ou 50 % quando as células são tratadas com o SMSM em uma concentração de 2- 1000 nM, 2-500 nM, 2-250 nM, 2-100 nM, 2-75 nM, 2-50 nM, 2-25 nM, 2-10 nM, 10-1000 nM, 10-500 nM, 10-250 nM, 10- 100 nM, 10-75 nM, 10-50 nM, 10-25 nM, 25-1000 nM, 25- 500 nM, 25-250 nM, 25-100 nM, 25-75 nM, 25-50 nM, 50- 1000 nM, 50-500 nM, 50-250 nM, 50-100 nM, 50-75 nM, 60- 70 nM, 100-1000 nM, 100-500 nM, 100-250 nM, 250-1000 nM, 250-500 nM, ou 500-1000 nM por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0657] Em algumas modalidades, um SMSM não reduz a viabilidade de células sem doença por mais que 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % ou 50 % quando as células são tratadas com o SMSM em uma concentração de pele menos 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7nM, 8nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 25 nM, 30 nM, 35 nM, 40 nM, 45 nM, 50 nM, 51 nM, 52 nM, 53 nM, 54 nM, 55 nM, 56 nM, 57 nM, 5 8 nM, 59 nM, 60 nM, 61 nM, 62 nM, 63 nM, 64 nM, 65 nM, 6 6 nM, 67 nM, 68 nM, 69 nM, 70 nM, 71 nM, 72 nM, 73 nM, 74 nM, 75 nM, 76 nM, 77 nM, 78 nM, 79 nM, 80 nM, 81 nM, 82 nM, 83 nM, 84 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM, 110 nM, 120 nM, 130 nM, 140 nM, 150 nM, 160 nM, 170 nM, 180 nM, 190 nM,200 nM, 210 nM, 220 nM, 230 nM, 240 nM, 250 nM, 275 nM, 300 nM, 325 nM, 350 nM, 375 nM, 400 nM, 425 nM, 450 nM, 475 nM, 500 nM, 550 nM, 600 nM, 650 nM, 700 nM, 750 nM,800 nM, 850 nM, 900 nM, 950 nM, 1 μΜ ou 10 μΜ por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 21, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 ou 48 horas.
[0658] Em algumas modalidades, um SMSM reduz um tamanho de um tumor em um indivíduo por pelo menos 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 %.
[0659] Em algumas modalidades, um SMSM inibe o crescimento de tumor de um tumor em um indivíduo por pelo menos 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 %.
Alvos de SMSM
[0660] 0 splicing aberrante de mRNA, como pré-mRNA, pode resultar em uma proteína defeituosa e pode causar uma doença ou um transtorno em um indivíduo. As composições e os métodos descritos no presente documento podem reduzir esse splicing aberrante de mRNA, como pré-mRNA, e tratar uma doença ou um transtorno causado por esse splicing aberrante.
[0661] As doenças associadas às alterações para quantidade de transcrição de RNA são, frequentemente, tratadas tendo como principal foco a expressão de proteína aberrante. No entanto, se os processos responsáveis pelas alterações aberrantes em níveis de RNA, como componentes do processo de splicing ou fatores de transcrição associados ou fatores de estabilidade associados, puderem ser alvejados pelo tratamento com uma molécula pequena, seria possível restaurar os níveis de expressão de proteína de modo que os efeitos indesejados da expressão de níveis aberrante de transcrições de RNA ou proteínas associadas. Portanto, há uma necessidade de métodos para modular a quantidade de transcrições de RNA codificadas por certos genes como uma maneira de impedir ou tratar as doenças associadas à expressão aberrante das transcrições de RNA ou proteínas associadas.
Alvos Estruturais
[0662] As mutações e/ou estruturas de RNA secundárias e/ou terciárias aberrante em elementos de ação cis podem induzir a carga estrutural tridimensional em pré-mRNA. As mutações e/ou estruturas de RNA secundárias aberrante em elementos de ação cis podem induzir a carga estrutural tridimensional em pré-mRNA quando o pré-mRNA é, por exemplo, ligado a pelo menos um snRNA ou pelo menos um snRNP ou pelo menos um outro fator de splicing auxiliar. Por exemplo, o pareamento de base não canônico de uma sequência de sítio de splice não canônico para um snRNA pode formar uma protuberância. Por exemplo, uma protuberância pode ser formada quando o 5'ss é ligado a U1-U12 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser induzida para se formar quando 5'ss que contém pelo menos uma mutação é ligado a U1-U12 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser formada quando o 5'ss críptico é ligado a U1-U12 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser induzida para se formar quando 5'ss críptico que contém pelo menos uma mutação é ligado a U1-U12 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser formada quando o 3'ss é ligado a U2 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser induzida para se formar quando o 3'ss é ligado a U2 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser formada quando o 3'ss críptico é ligado a U2 snRNA ou uma porção do mesmo. Por exemplo, uma protuberância pode ser induzida para se formar quando o 3'ss críptico é ligado a U2 snRNA ou uma porção do mesmo. Os componentes de proteína de U1 e U2 podem se apresentar ou não para formar a protuberância. As mutações de sítio de splice 5' exemplificativas e/ou com estruturas terciárias e/ou secundárias aberrantes que podem induzir uma estrutura de protuberância são conhecidas nas Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D. Um polinucleotídeo nos métodos revelados no presente documento pode conter qualquer uma das sequências de sítio de splice 5' exemplificativas resumidas nas Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D.
[0663] Em algumas modalidades, uma molécula pequena pode se ligar a uma protuberância. Em algumas modalidades, uma protuberância é de ocorrência natural. Em algumas modalidades, uma protuberância é formada por pareamento de base não canônico entre o sitio de splice e o RNA nuclear pequeno. Por exemplo, uma protuberância pode ser formada por pareamento de base não canônico entre os 5'ss e U1-U12 snRNA. A protuberância pode compreender 1 nucleotídeo, 2 nucleotídeos, 3 nucleotídeos, 4 nucleotídeos, 5 nucleotídeos, 6 nucleotídeos, 7 nucleotídeos, 8 nucleotídeos, 9 nucleotídeos, 10 nucleotídeos, 11 nucleotídeos, 12 nucleotídeos, 13 nucleotídeos, 14 nucleotídeos ou 15 nucleotídeos. Em algumas modalidades, as alterações estruturais tridimensionais podem ser induzidas por uma mutação sem formação de protuberância. Em algumas modalidades, uma protuberância pode ser formada sem qualquer mutação em um sítio de splice. Em algumas modalidades, uma porção de reconhecimento pode ser formada por uma mutação em qualquer um dos elementos de ação cis. Em algumas modalidades, uma molécula pequena pode se ligar a uma porção de reconhecimento que é induzida por uma mutação. Em algumas modalidades, uma mutação e/ou estrutura de RNA secundária ou terciária aberrante em um sítio de splice 5' autêntico pode resultar em splicing em um sítio de splice 5' críptica. Em algumas modalidades, uma mutação e/ou estrutura de RNA secundária ou terciária aberrante podem estar em um dos elementos reguladores incluindo ESEs, ESSs, ISEs e ISSs.
[0664] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante em um éxon. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante a montante (5') do sítio de splice da sequência de sitio de splice. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sitio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição -1 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNN*nnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição -2 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NN*Nnnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição -3 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de N*NNnnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante.
[0665] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante em um íntron. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante a jusante (3') do sítio de splice da sequência de sítio de splice.
[0666] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +1 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNn*nnnnn, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +2 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNnn*nnnn, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +3 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNnnn*nnn, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +4 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNnnnn*nn, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +5 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sitio de splice de NNNnnnnn*n, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +6 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNnnnnnn*, em que n* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição +7 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNnnnnnnn*, em que n* representa um nucleotídeo protuberante.
[0667] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um ou mais nucleotídeos protuberantes na posição -1, -2, -3, +1, +2, +3, +4, +5, +6 e/ou +7 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNN*nnnnnn, NN*Nnnnnnn, N*NNnnnnnn, NNNn*nnnnn, NNNnn*nnnn, NNNnnn*nnn, NNNnnnn*nn, NNNnnnnn*n, NNNnnnnnn*, ou NNNnnnnnnn*, em que N* ou n* representa um nucleotídeo protuberante.
[0668] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um ou mais nucleotídeos protuberantes na posição -1, -2 e/ou -3 relativa ao sitio de splice da sequência de sitio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sitio de splice de NNN*nnnnnn, NN*Nnnnnnn, ou N*NNnnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante.
[0669] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um ou mais nucleotídeos protuberantes na posição +1, + 2, +3, +4, +5, +6 e/ou +7 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NNNn*nnnnn, NNNnn*nnnn, NNNnnn*nnn, NNNnnnn*nn, NNNnnnnn*n, NNNnnnnnn*, ou NNNnnnnnnn*, em que n* representa um nucleotídeo protuberante.
[0670] Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição -1 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice e um nucleotídeo protuberante na posição -2 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice de NN*N*nnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante. Em algumas modalidades, um alvo de um SMSM é um pré-mRNA que compreende uma sequência de sítio de splice com um nucleotídeo protuberante na posição -2 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice e um nucleotídeo protuberante na posição -3 relativa ao sítio de splice da sequência de sítio de splice. Por exemplo, um alvo de um SMSM pode ser um pré-mRNA que compreende uma sequência de sitio de splice de N*N*Nnnnnnn, em que N* representa um nucleotídeo protuberante.
[0671] Em algumas modalidades, um SMSM interage com um nucleotídeo protuberante de um dúplex de RNA que compreende um sítio de splice. Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM se liga a um dúplex de RNA e interage com um núcleobase protuberante não pareado de um dúplex de RNA que compreende um sítio de splice. Em algumas modalidades, uma primeira porção do SMSM interage com o nucleotídeo protuberante em uma primeira fita de RNA do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, uma segunda porção do SMSM interage com um ou mais nucleotídeos de uma segunda fita de RNA do dúplex de RNA, em que a primeira fita de RNA não é a segunda fita de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com o dúplex de RNA, por exemplo, uma interação iônica, uma ligação de hidrogênio, uma interação dipolo-dipolo ou uma interação van der Waals. Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com o nucleotídeo protuberante, por exemplo, uma interação iônica, uma ligação de hidrogênio, uma interação dipolo-dipolo ou uma interação van der Waals.
[0672] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende uma hélice alfa. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante está localizado em uma porção externa de uma hélice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante está localizado em uma porção interna da hélice do dúplex de RNA.
[0673] Em algumas modalidades, uma taxa de troca do nucleotídeo protuberante a partir do interior de uma hélice do dúplex de RNA para uma porção externa da hélice é reduzida.
[0674] Em algumas modalidades, o SMSM modula uma distância do nucleotídeo protuberante a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM reduz a distância do nucleotídeo protuberante a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM aumenta a distância do nucleotídeo protuberante a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA.
[0675] Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante está localizado no interior de uma hélice do dúplex de RNA do complexo. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante modulou o empilhamento de base dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante aumentou o empilhamento de base dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante diminuiu o empilhamento de base dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0676] Em algumas modalidades, o SMSM modula o splicing no sítio de splice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM aumenta o splicing no sítio de splice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM reduz o splicing no sítio de splice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM reduz um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM remove uma protuberância do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, o SMSM estabiliza uma protuberância do dúplex de RNA.
[0677] Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante não pareado é livre para rotacionar ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA na ausência do SMSM. Em algumas modalidades, o SMSM reduz uma taxa de rotação do nucleotídeo protuberante não pareado. Em algumas modalidades, o SMSM reduz uma taxa de rotação do nucleotídeo protuberante não pareado ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA.
[0678] Em algumas modalidades, o SMSM não é um aptâmero.
[0679] Também, é fornecido no presente documento um método para modular o splicing que compreende colocar em contato um composto de modulador de splicing de molécula pequena (SMSM) com uma célula; em que o SMSM interage com um nucleotídeo protuberante não pareado de um dúplex de RNA na célula; em que o dúplex de RNA compreende um sítio de splice; e em que o SMSM modula o splicing do dúplex de RNA.
[0680] É fornecido no presente documento um método para modular a posição relativa de um primeiro nucleotídeo em relação a um segundo nucleotídeo, em que o primeiro nucleotídeo e o segundo nucleotídeo estão dentro de um dúplex de RNA, em que o método compreende colocar um modulador de splicing de composto de molécula pequena (SMSM) em contato com o dúplex de RNA, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o primeiro nucleotídeo é um nucleotídeo protuberante do dúplex de RNA; em que o dúplex de RNA compreende um sítio de splice.
[0681] Em algumas modalidades, o dúplex de RNA compreende uma hélice.
[0682] Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante está localizado em uma porção externa de uma hélice do dúplex de RNA antes de entrar em contato com o SMSM.
[0683] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com o dúplex de RNA.
[0684] Em algumas modalidades, o SMSM forma uma ou mais interações intermoleculares com um nucleotídeo protuberante não pareado. Em algumas modalidades, a interação intermolecular é selecionada a partir do grupo que compreende uma interação iônica, a ligação de hidrogênio, uma interação dipolo-dipolo ou uma interação de van der Waals. Em algumas modalidades, uma taxa de troca do nucleotídeo protuberante não pareado a partir do interior de uma hélice do dúplex de RNA para uma porção externa da hélice é reduzida. Em algumas modalidades, uma taxa de rotação do nucleotídeo protuberante não pareado é reduzida. Em algumas modalidades, uma taxa de rotação do nucleotídeo protuberante não pareado ao redor de um esqueleto de fosfato de uma fita de RNA do dúplex de RNA é reduzida. Em algumas modalidades, uma distância do nucleotídeo protuberante não pareado a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA é modulada após entrar em contato com o SMSM. Em algumas modalidades, a distância do nucleotídeo protuberante não pareado a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA é reduzida. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante não pareado está localizado no interior da hélice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA é reduzido. Em algumas modalidades, uma protuberância do dúplex de RNA é removida ou mantida.
[0685] Em algumas modalidades, o splicing no sítio de splice do dúplex de RNA é promovido. Em algumas modalidades, o empilhamento de base do nucleotídeo protuberante não pareado dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA é aumentado após entrar em contato com o SMSM. Em algumas modalidades, a distância do nucleotídeo protuberante não pareado a partir de um segundo nucleotídeo do dúplex de RNA é aumentada ou mantida. Em algumas modalidades, uma protuberância do dúplex de RNA é estabilizada após entrar em contato com o SMSM. Em algumas modalidades, o nucleotídeo protuberante não pareado está localizado em uma porção externa de uma hélice do dúplex de RNA. Em algumas modalidades, um tamanho de uma protuberância do dúplex de RNA é aumentado. Em algumas modalidades, o splicing no sítio de splice do dúplex de RNA é inibido. Em algumas modalidades, o splicing é inibido no sítio de splice. Em algumas modalidades, o empilhamento de base do nucleotídeo protuberante não pareado dentro de uma fita de RNA do dúplex de RNA é reduzido após entrar em contato com o SMSM.
[0686] Os locais exemplificativos alvejados pelos SMSMs descritos no presente documento incluem sítios de splice 5', sítios de splice 3', tratos de polipirimidina, locais de ramificação, acentuadores de splicing e elementos silenciadores. As mutações ou estruturas de RNA secundárias e/ou terciárias aberrante na área de interesse podem criar locais de mRNA ou sequências de arcabouço que podem ser alvejadas. Por exemplo, muitos éxons são flanqueados pelos dinucleotídeos intrônicos GT e AG nos sítios de splice 5' e 3', respectivamente. Por exemplo, as mutações ou estruturas de RNA secundárias e/ou terciárias aberrante nesse locais podem causar, por exemplo, a exclusão de um éxon adjacente ou inclusão de um íntron adjacente. Muitos fatores influenciam o processo de splicing de pré-mRNA de complexo, incluindo várias centenas diferentes de proteínas, pelo menos cinco snRNAs spliceossomais, sequências no mRNA, comprimento de sequência, elementos acentuadores e silenciadores e resistência de sinais de splicing. Os locais exemplificativos alvejados pelos SMSMs descritos no presente documento incluem estruturas secundárias e algumas vezes terciárias de RNA. Por exemplo, os locais exemplificativos alvejados pelos SMSMs descritos no presente documento incluem uma estrutura em haste-alça, grampo, sequência de ponto de ramificação (BPS), trato de polipirimidina (PPT), sítio de splice 5' (5'ss) e sítio de splice 3' (3'ss), snRNA de dúplex e sítios de splice e proteína de ação trans que se liga a RNA. O pré-mRNA-alvo pode compreender uma sequência defeituosa, como uma sequência que produz uma proteína defeituosa, como uma proteína com função alterada, como atividade de enzima ou expressão, como ausência de expressão. Em algumas modalidades, a sequência defeituosa afeta a estrutura do RNA. Em algumas modalidades, a sequência defeituosa afeta o reconhecimento por snRNP.
[0687] Além das sequências de sítio de splice consenso, restrições estruturais, incluindo aquelas que resultam em mutações, podem afetar sequências de ação cis, como elementos silenciadores (ESS/ISS) ou acentuadores de splicing (ESE/ISE) exônicos/intrônicos.
[0688] Em algumas modalidades, uma mutação em DNA nativo e/ou pré-mRNA ou uma estrutura secundária ou terciária aberrante de RNA, cria uma nova sequência de sitio de splice. Por exemplo, uma mutação ou estrutura de RNA aberrante pode fazer com que as regiões nativas do RNA que são normalmente inativas ou não desempenham função como elementos de splicing, fiquem ativadas e sirvam como sítios de splice ou elementos de splice. Tais elementos e sítios de splice podem ser chamados de "crípticos". Por exemplo, um íntron nativo pode ficar dividido em dois introns aberrantes, com um novo éxon situado entre os mesmos. Por exemplo, uma mutação pode criar um novo sítio de splice entre um sítio de splice 5' nativo e um ponto de ramificação nativo. Por exemplo, uma mutação pode ativar uma sequência de ponto de ramificação críptica entre um sítio de splice nativo e um ponto de ramificação nativo. Por exemplo, uma mutação pode criar um novo sítio de splice entre um ponto de ramificação nativo e um sítio de splice nativo e pode ativar adicionalmente um sítio de splice críptico e um ponto de ramificação críptico sequencialmente a montante do sítio de splice mutado aberrante.
[0689] Em algumas modalidades, uma mutação ou expressão errônea de proteínas de ação trans que regulam a atividade de splicing pode fazer com que as regiões nativas do RNA que são normalmente inativas ou não desempenham função como elementos de splicing, fiquem ativadas e sirvam como sítios de splice ou elementos de splice. Por exemplo, uma mutação ou expressão errônea de uma proteína de SR pode fazer com que as regiões nativas do RNA que são normalmente inativas ou não desempenham função como elementos de splicing, fiquem ativadas e sirvam como sítios de splice ou elementos de splice.
[0690] Em algumas modalidades, uma mutação em DNA e/ou pré-mRNA nativos inibe o splicing em um sitio de splice. Por exemplo, uma mutação pode resultar em um novo sitio de splice a montante de (isto é, 5' para) uma sequência de sitio de splice nativa e a jusante de (isto é, 3' para) uma sequência de ponto de ramificação nativo. A sequência de sitio de splice nativa e a sequência de ponto de ramificação nativo podem servir como membros tanto do conjunto nativo de sequências de sitio de splice quanto do conjunto aberrante de sequências de sitio de splice.
[0691] Em algumas modalidades, um elemento de splice nativo (por exemplo, um ponto de ramificação) também é um membro do conjunto de elementos de splice aberrantes. Por exemplo, os SMSMs fornecidos no presente documento podem bloquear o elemento nativo e ativar um elemento críptico (por exemplo, um 5'ss críptico, um 3'ss críptico ou um ponto de ramificação críptico), que pode recrutar os membros restantes do conjunto nativo de elementos de splice para promover o splicing correto sobre o splicing incorreto. Em algumas modalidades, um elemento de splice críptico ativado está em um íntron. Em algumas modalidades, um elemento de splice críptico ativado está em um éxon. Os compostos e os métodos fornecidos no presente documento podem ser usados para bloquear ou ativar uma variedade de diferentes elementos de splice, dependendo do tipo de elemento de splice aberrante (por exemplo, elemento de splice mutado ou elemento de splice não mutado) e/ou dependendo da regulação de um elemento de splice (por exemplo, regulação por trajetórias de sinalização a montante). Por exemplo, os compostos e métodos fornecidos no presente documento podem bloquear um elemento mutado, um elemento não mutado, um elemento críptico ou um elemento nativo; os mesmos podem bloquear um sítio de splice 5', um sítio de splice 3' ou um ponto de ramificação.
[0692] Em algumas modalidades, um caso de splicing alternativo pode ser modulado empregando-se os compostos fornecida no presente documento. Por exemplo, um composto fornecido no presente documento pode ser introduzido em uma célula em que está presente um gene que codifica um pré-mRNA que compreende sítios de splice alternativos. Em algumas modalidades, na ausência do composto, um primeiro caso de splicing ocorre para produzir um produto de gene que tem uma função particular. Por exemplo, na presença do composto fornecido no presente documento, o primeiro caso de splicing pode ser inibido. Em algumas modalidades, na presença do composto fornecido no presente documento, o primeiro caso de splicing pode ser inibido e um segundo ou alternativo caso de splicing ocorre, resultando na expressão do mesmo gene para produzir um produto de gene que tem uma diferente função.
[0693] Em algumas modalidades, um primeiro caso de splicing inibido (por exemplo, um caso de splicing inibido por uma mutação, uma protuberância induzida por mutação ou uma protuberância não induzida por mutação), é promovido ou melhorado na presença de um composto fornecido no presente documento. Em algumas modalidades, o primeiro caso de splicing inibido (por exemplo, um caso de splicing inibido por uma mutação, uma protuberância induzida por mutação ou uma protuberância não induzida por mutação), é promovido ou melhorado na presença de um composto fornecido no presente documento. Por exemplo, a inibição do primeiro caso de splicing (por exemplo, um caso de splicing inibido por uma mutação, uma protuberância induzida por mutação ou uma protuberância não induzida por mutação) pode ser restaurado para um primeiro caso de splicing correspondente que não é inibido, na presença de um composto fornecido no presente documento; ou a inibição do primeiro caso de splicing pode ser diminuída, na presença de um composto fornecido no presente documento. Em algumas modalidades, um segundo ou alternativo caso de splicing ocorre, resultando na expressão do mesmo gene para produzir um produto de gene que tem uma diferente função.
[0694] Polinucleotídeos-Alvo
[0695] Os compostos descritos no presente documento podem modular o splicing de produtos gênicos, tais como aqueles mostrados na Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são usados no tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão de doenças ou condições (por exemplo, câncer e doenças neurodegenerativas). Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento podem modular o splicing e induzir uma variante ou transcrição transcricionalmente inativa de um produto genético, tais como aqueles mostrados na Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento modulam o splicing e reprimem uma variante ou transcrição transcricionalmente ativa de um produto genético, tais como aqueles mostrados na Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D.
[0696] A modulação de splicing pelos compostos descritos no presente documento inclui, porém, sem limitação, modulação do splicing de ocorrência natural, splicing de um RNA expresso em uma célula doente, splicing de sequências criptográficas no sitio de splice de um RNA ou splicing alternativo. A modulação de splicing pelos compostos descritos no presente documento pode restaurar ou promover splicing correto ou um evento de splicing desejado. A modulação de splicing pelos compostos descritos no presente documento inclui, porém, sem limitação, prevenção de eventos de splicing aberrante, por exemplo, eventos de splicing causados por mutações ou estruturas secundárias ou terciárias aberrantes de RNA que estão associadas a condições e doenças. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento impedem ou inibem o splicing em uma sequência do sitio de splice. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento promovem ou aumentam o splicing em uma sequência do sitio de splice. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento modulam o splicing em uma sequência do sitio de splice especifico.
[0697] As composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para modular splicing de um RNA-alvo, por exemplo, pré-mRNAs, codificado por genes. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, os genes na Tabela 2A. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, ABCA4, ABCD1, ACADM, ACADSB, ADA, ADAMTS13, AGL, AGT, ALB, ALDH3A2, ALG6, ANGPTL3, APC, APOA1, APOB, APOC3, AR, ATM, ATP7A, ΑΤΡ7Β, ATR, ATXN2, ATXN3, B2M, BCL2-like 11 (BIM) , BMP2K, BRCA1, BRCA2, BTK, C3, CACNA1B, CACNA1C, CALCA, CAT, CD33, CD46, CDH1, CDH23, CFB, CFTR, CHM, CLCN1, COL11A1, COL11A2, COL1A1, COL1A2, COL2A1, COL3A1, COL4A5, COL6Al, COL7A1, COL9A2, COLQ, CREBBP, CSTB, CUL4B, CYBB, CYP17, CYP19, CYP27A1, DES, DGAT2, DMD, DUX4, DYSF, EGFR, EMD, ETV4, F11, F13A1, F5, F7, F8, FAH, FANCA, FANCC, FANCG, FBN1, FECH, EGA, FGFR2, EGG, FLX, FLNA, FOXM1, FRAS1, GALC, GBA, GCGR, GH1, GHR, GHV, GLA, HADHA, HBA2, HBB, HEXA, HEXB, HLCS, HMBS, HMGCL, HNF1A, HPRT1, HPRT2, HSF4, HSPG2, HTT, IDH1, IDS, IKBKAP, IL7RA, INSR, ITGB2, ITGB3, ITGB4, JAG1, KLKB1, KRAS, KRT5, L1CAM, LAMA2, LAMA3, LDLR, LGALS3, LMNA, LPA, LPL, LRRK2, MADD, MAPT, MET, MLH1, MSH2, MST1R, MTHFR, MUT, MVK, NF1, NF2, NR1H4, OAT, OPA1, OTO, OXT, PAH, PBGD, PCCA, PDH1, PGK1, PHEX, PKD2, PKLR, PKM1, PKM2, PLEKHM1, PLKR, POMT2, PRDM1, PRKAR1A, PROC, PSEN1, PTCH1, PTEN, PYGM, RP6KA3, RPGR, RSK2, SBCAD, SCN5A, SCNA, SERPINA1, SH2D1A, SLC12A3, SLC6A8, SMN2, SOD1, SPINK5, SPTA1, TMPRSS6, TP53, TRAPPC2, TSC1, TSC2, TSHB, TTN, TTR, UBE3A, UGT1A1 e USH2A.
[0698] Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, os genes na Tabela 2B. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, ABCD1, APOB, AR, ATM, ΒRCA1, C3, CFTR, COL1A1, COL3A1, COL6A1, COL7A1, CYP19, CYP27A1, DMD, F5, F7, FAH, FBN1, FGA, GCK, GHV, HBA2, HBB, HMGCL, HPRT1, HXA, IDS, ITGB2, ITGB3, KRT5, LDLR, LMNA, LPL, MTHFR, NF1, NF2, PBGD, PGK1, PKD1, PTEN, RPGR, TP53, TSC2, UGT1A1 e YGM.
[0699] Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, os genes na Tabela 2C. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, com um sitio de splice que compreende uma sequência de sitio de splice de AGAguaag. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, ABCA9, ABCB1, ABCB5, ACADL, ACSS2, ADAL, ADAM10, ADAM15, ADAMTS20, ADAMTS6, ADAMTS9, ADCY10, ADCY8, AFP, AGL, AHCTF1, AKAP10, AKAP3, ALAS1, ALS2CL, AMBRA1, ANK3, ANTXR2, ANXA10, ANXA11, AP2A2, AP4E1, APOB, AREGEE1, AREGEE2, ARHGAP1, ARHGAP18, ARHGEF18, ARHGEF2, ARPC3, ARS2, ASH1L, ASNSD1, ASPM, ATAD5, ATG4A, ATP11C, ATP6V1G3, BBOX1, BCS1L, BMPR2, BRCC3, BRSK2, C10orf137, C11orf70, C12orf51, C13orf1, C13orf15, C14orf118, C15orf29, C15orf42, C16orf33, C16orf38, C16orf48, C18orf8, C19orf42, Clorf107, C1orf114, C1orf130, C1orf149, C1orf27, C1orf71, C1orf94, C1R, C20orf74, C21orf70, C3orf23, C4orf18, C5orf34, C8B, C8orf33, C9orf114, C9orf86, C9orf98, CA11, CAB39, CACNA2D1, CALCOC02, CAMK1D, CAMKK1, CAPN9, CAPSL, CBX1, CBX3, CCDC102B, CCDC11, CCDC15, CCDC18, CCDC5, CCDC81, CD4, CDC14A, CDC16, CDC2L5, CDC42BPB, CDCA8, CDH10, CDH11, CDH24, CDH8, CDH9, CDK5RAP2, CDK8, CELSR3, CENPI, CENTB2, CENTG2, CEP110, CEP170, CEP192, CETP, CFH, CHAF1A, CHD9, CHIC2, CHN1, CLIC2, CLINT1, CLPB, CMIP, CNOT1, CNOT7, COG3, COL11A1, COL12A1, COL14A1, COL19A1, COL1A1, COL1A2, COL22A1, COL24A1, COL25A1, COL29A1, COL2A1, COL3A1, COL4A1, COL4A2, COL4A5, COL4A6, COL5A2, COL9A1, COMTD1, COPA, COPB2, COPS7B, COPZ2, CPSF2, CPXM2, CR1, CREBBP, CRKRS, CSE1L, CT45-6, CUBN, CUL5, CXorf41, CYP3A4, CYP3A43, CYP3A5, DCC, DCTN3, DDA1, DDX1, DDX24, DDX4, DENND2D, DEPDC2, DHFR, DHRS7, DIP2A, DMD, DNAH3, DNAH8, DNAI1, DNAJA4, DNAJC13, DNAJC7, DNTTLP2, DOCK11, DOCK4, DPP4, DSCC1, DYNC1H1, ECM2, EDEM3, EFCAB3, EFCAB4B, ELF3A, ELA1, ELA2A, EMCN, EML5, ENPP3, EPB41L5, EPHA3, EPHB1, EPHB3, EPS15, ERCC8, ERGIC3, ERMN, ERMP1, ERN1, ERN2, ETS2, EVC2, EXO1, EXOC4, F3, FAM13A1, FAM13B1, FAM13C1, FAM184A, FAM19A1, FAM20A, FAM23B, FAM65C, FANCA, FANCM, FANK1, FAR2, FBXO15, FBXO18, FBXO38, FEZ2, FGFR10P, FGFR10P2, FGFR2, FGR, FLJ35848, FLJ36070, FLNA, FN1, FNBP1L, FOLH1, FRAS1, FUT9, FZD3, FZD6, GAB1, GALNT3, GART, GAS2L3, GCG, GJA1, GLT8D1, GNAS, GNB5, GOLGB1, G0LT1A, G0LT1B, GPATCH1, GPR160, GRAMD3, GRHPR, GRIA1, GRIA3, GRIA4, GRIN2B, GRM3, GRM4, GRN, GSDMB, GSTCD, GTPBP4, HDAC3, HDAC5, HDX, HEPACAM2, HERC1, HLPK3, HNRNPH1, HSPA9, HSPG2, HTT, ICA1, IFL44L, IL1R2, IL5RA, IMMT, INPP5D, INTU, IP04, LP08, LSL2, IWS1, JAK1, JAK2, KATNAL2, KCNN2, KCNT2, KIAA0256, KIAA0586, KIAA1033, KIAA1219, KIAA1622, KIF15, KLF16B, KIF5A, KIF5B, KIF9, KIN, KIR2DL5B, KIR3DL2, KIR3DL3, KLF12, KLF3, KPNA5, KREMEN1, KRLT1, KRTCAP2, L1CAM, L3MBTL, L3MBTL2, LACEI, LAMA2, LAMB1, LGMN, LHCGR, LHX6, LIMCH1, LIMK2, LMBRD1, LMBRD2, LMLN, LM02, LOC390110, LPCAT2, LRP4, LRPPRC, LRRC19, LRRC42, LUM, LVRN, LYST, MADD, MAGL1, MAGT1, MALT1, MAP4K4, MAPK8LP3, MAPK9, MATN2, MCF2L2, MDGA2, MEGF10, MEGF11, MEMO1, MGAM, MGAT4A, MGC34774, ΜΙΒ1, MIER2, MKL2, MLANA, MLL5, MLX, MME, MPI, MRAP2, MRPL39, MRPS28, MRPS35, MTDH, MTF2, MUC2, MYB, MYCBP2, MYH2, MYO19, MYO3A, MYO9B, MYOM2, MYOM3, NAG, NARG1, NARG2, NCOA1, NDFIP2, NEDD4, NEK1, NEK5, NFIA, NFIX, NFRKB, NKAP, NLRC3, NLRC5, NME7, NOL10, NOS1, NOS2A, NOTCH1, NPM1, NR4A3, NRXN1, NSMAF, NSMCE2, NT5C3, NUBP1, NUBPL, NUMA1, NUP160, NUP98, NUPL1, OBFC2B, OLIG2, OSBPL11, OSBPL8, OSGEPL1, PADL4, PAH, PAN2, PAPOLG, PARVB, PAWR, PCNX, PCOTH, PDCD4, PDE8B, POLA3, PDK4, PDS5A, PDS5B, PHACTR4, PHKB, PHLDB2, PHTF1, PIAS1, PIGF, PIGN, PIGT, PIK3C2G, PIK3CG, PIK3R1, PIWIL3, PKHD1L1, PLCB1, PLCB4, PLCG1, PLD1, PLEKHA5, PLEKHA7, PLXNC1, POLN, POLR3D, POMT2, POSTN, PPFIA2, PPP1R12A, PPP3CB, PPP4C, PPP4R1L, PPP4R2, PRAME, PRC1, PRLM1, PRLM2, PRKG1, PRMT7, PROCR, PROSC, PROX1, PRPF40B, PRPF4B, PRRG2, PSD3, PSMAL, PTK2, PTK2B, PTPN11, PTPN22, PTPN3, PTPN4, PTPRD, PTPRK, PTPRM, PUS10, PVRL2, QRSL1, RAB11FIP2, RAB23, RB1CC1, RBM39, RBM45, REC8, RFC4, RHPN2, RLN3, RNF32, RNFT1, ROCK1, ROCK2, RP1, RP11-265F1, RP13- 36C9. , RPAP3, RPN1, RTEL1, RYR3, SAAL1, SAE1, SCN11A, SCN1A, SCN3A, SCO1, SCYL3, SDK2, SEC24A, SEC24D, SEC31A, SEL1L, SENP3, SENP6, SENP7, SETD3, SETD4, SGCE, SGOL2, SGPL1, SH3PXD2A, SH3PXD2B, SH3RF2, SH3TC2, SLPA1L2, SLPA1L3, SKAP1, SKLV2L2, SLC13A1, SLC28A3, SLC38A1, SLC38A4, SLC39A10, SLC4A2, SMARCA1, SMARCA5, SMC5, SNRK, SNRP70, SNX6, SPAG9, SPATA13, SPATA4, SPATS1, SPECC1L, SPP2, SRP72, SSX3, SSX5, SSX9, STAG1, STAMBPL1, STARD6, STK17B, STX3, STXBP1, SUCLG2, SULF2, SUPT16H, SYCP1, SYTL5, TAF2, TBC1D3G, TBC1D8B, TBCEL, TBK1, TCEB3, TCF12, TCP11L2, TDRD3, TEAD1, LET2, TFRC, TG, THOC2, TLAL1, TIAYM2, TLMM50, TLK2, TMEM15 6, TMEM27, TMF1, TNFRSF10A, TNFRSF10B, TNFRSF8, TNK2, TNKS, TNKS2, TOM1L1 , TOP2B, TP53INP1, TP63, TRAF3IP3, TRIM44 , TRIM65, TRIML1, TRIML2, TRPM7, TTC17 , TTLL5, TTN, TTPAL, UHRF1BP1 , UNC45B, UNC5C, USP38, USP39, USP6 , UTP15, UTP18, UTRN, UTX, UTY, UVRAG, UXT, VAPA, VPS29, VPS35, VTI1A, VTI1B, VWA3B, WDFY2, WDR17, WDR26, WDR44, WDR67, WDTC1, WRNIP1, WWC3, XRN1, XRN2, XX-FW88277, YARS, ZΒTB20, ZC3HAV1, ZC3HC1, ZNF114, ZNF365, ZNF37A, ZNF618 e ZWINT.
[0700] Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, os genes na Tabela 2D. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, genes que codificam um RNA-alvo, por exemplo, um pré-mRNA, com um sitio de splice que compreende uma sequência de sitio de splice de GGAgtaag. Exemplos de genes que codificam um RNA-alvo das composições e métodos descritos no presente documento, por exemplo, um pré-mRNA, incluem, porém, sem limitação, ABCC9, ACTG2, ADAM22, ADAM32, ADAMTS12, ADCY3, ADRBK2, AFP, AKNA, APOH, ARHGAP2 6, ARHGAP8, ATG16L2, ATP13A5, B4GALNT3, BBS4, BPS K1, BTAF1, C11orf30, C11orf65, C14orf101, C15orf60, Clorf87, C2orf55, C4orf29, C6orf118, C9orf43, CACHD1, CACNA1G, CACNA1H, CAPN3, CARKD, CCDC131, CCDC146, CD1B, CDK6, CEL, CGN, CGNL1, CHL1, CLEC16A, CLK1, CLPTM1, CMYA5, CNGA3, CNTN6, COL11A1, COL15A1, COL17A1, COL1A1, COL2A1, CRYZ, CSTF3, CYFIP2, CYP24A1, CYP4F2, CYP4F3, DAZ2, DCBLD1, DCUN1D4, DDEF1, DDX1, DHRS9, DMTF1, DOCK10, DPP3, DPY19L2P2, DVL3, EFNA4, EFTUD2, EPHA4, EPHB2, ERBB4, ERCC1, FAM134A, FAM161A, FAM176B, FCGBP, FGD6, FKBP3, GAPDH, GBGT1, GFM1, GPR158, GRIA1, GSTCD, GSTO2, HCK, HLA-DPB1, HLA-G, HLTF, HP1BP3, HPGD, HSF2BP, INTS3, IQGAP2, ITFG1, ITGAL, ITGB1, ITIH1, ITPR2, JMJD1C, KALRN, KCNN2, KIAA0528, KIAA0564, KIAA1166, KIAA1409, KIAA1787, KIF3B, KLHL20, KLK12, LAMA1, LARP7, LENG1, LOC389634, LRWD1, LYN, MAP2KI, MCM6, MEGF10, MGAM, MGAT5, MGC16169, MKKS, MPDZ, MRPL11, MS4A13, MSMB, MTIF2, NDC80, NEB, NEK11, NFE2L2, NFKBIL2, NKAIN2, NLRC3, NLRC5, NLRP13, NLRP7, NLRP8, NT5C, NUDT5, NUP88, OBFC2A, OPN4, OPTN, PARD3, PBRM1, PCBP4, PDE10A, PDLIM5, PDXK, PDZRN3, PELI2, PGM2, PIP5K1A, PITRM1, PKIB, PMFBP1, POMT2, PRKCA, PRODH, PRUNE 2, PTPRN2, PTPRT, RALBP1, RALGDS, RBL2, RFT1, RFTN1, RIF1, RMND5B, RNF11, RNGTT, RPS6KA6, RRM1, RRP1B, RTF1, RUFY1, SCN2A, SCN4A, SCN8A, SDK1, SEZ6, SFRS12, SH3BGRL2, SIVA1, SLC22A17, SLC25A14, SLC6A11, SLC6A13, SLC6A6, SMTN, SNCAIP, SNX6, STAT6, SUPT6H, SV2C, SYCP2, SYT6, TAF2, TBC1D26, TBC1D29, TBPL1, TECTB, TEK, TGM7, TGS1, TM4SF20, TM6SF1, TMEM194A, TMEM77, TOM1L2, TP53BP2, TP53I3, TRPM3, TRPM5, TSPAN7, TTLL9, TUSC3, TXNDC10, UCK1, USH2A, USP1, UTP20, VPS39, WDR16, ZC3H7A, ZFYVE1, ZNF169 e ZNF326.
[0701] Os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing, tal como splicing aberrante de polinucleotídeo codificado por um gene, por exemplo, um gene ABCA4, ABCA9, ABCB1, ABCB5, ABCC9, ABCD1, ACADL, ACADM, ACADSB, ACSS2, ACTG2, ADA, ADAL, ADAM10, ADAM15, ADAM22, ADAM32, ADAMTS12, ADAMTS13, ADAMTS20, ADAMTS6, ADAMTS9, ADCY10, ADCY3, ADCY8, ADRBK2, AFP, AGT, AGT, AHCTF1, AKAP10, AKAP3, AKNA, ALAS1, ALB, ALDH3A2, ALG6, ALS2CL, AMBRA1, ANGPTL3, ΑΝΚ3, ANTXR2, ΑΝΧΑ10, ΑΝΧΑ11, ΑΡ2Α2, ΑΡ4Ε1, APC, ΑΡΟΑ1, ΑΡΟΒ, APOC3, APOH, AR, ARFGEF1, ARFGEF2, ARHGAP1, ARHGAP18, ARHGAP2 6, ARHGAP8, ARHGEF18, ARHGEF2, ARPC3, ARS2, ASH1L, ASNSD1, ASPM, ATAD5, ATG16L2, ATG4A, ATM, ATP11C, ATP13A5, ATP6V1G3, ATP7Α, ΑΤP7Β, ATR, ATXN2, ATXN3, B2M, B4GALNT3, BBOX1, BBS4, BCL2-like 11 (BIM) , BCS1L, BMP2K, BMPR2, BRCA1, BRCA2, BRCC3, BRSK1, BRSK2, BTAF1, BTK, C10orf137, C11orf30, C11orf65, C11orf70, C12orf51, C13orf1, C13orf15, C14orf101, C14orf118, C15orf29, C15orf42, C15orf60, C16orf33, C16orf38, C16orf48, C18orf8, C19orf42, Clorf107, Clorf114, Clorf130, Clorf149, Clorf27, Clorf71, Clorf87, Clorf 94, C1R, C20orf74, C21orf70, C2orf55, C3, C3orf23, C4orf18, C4orf29, C5orf34, C6orf118, C8B, C8orf33, C9orf114, C9orf43, C9orf86, C9orf98, CA11, CAB39, CACHD1, CACNA1B, CACNA1C, CACNA1G, CACNA1H, CACNA2D1, CALCA, CALCOCO2, CAMK1D, CAMKK1, CAPN3, CAPN9, CAPSL, CARKD, CAT, CBX1, CBX3, CCDC102B, CCDC11, CCDC131, CCDC146, CCDC15, CCDC18, CCDC5, CCDC81, CD1B, CD33, CD4, CD46, CDC14A, CDC16, CDC2L5, CDC42BPB, CDCA8, CDH1, CDH10, CDH11, CDH23, CDH24, CDH8, CDM9, CDK5RAP2, CDK6, CDK8, CEL, CELSR3, CENPI, CENTB2, CENTG2, CEP110, CEP170, CEP192, CETP, CEB, CFH, CFTR, CGN, CGNL1, CHAF1A, CHD9, CHLC2, CHL1, CHM, CHN1, CLCN1, CLEC16A, CLIC2, CLINT1, CLK1, CLPB, CLPTM1, CMLP, CMYA5, CNGA3, CNOT1, CNOT7, CNTN6, COG3, COL11Al, COL11A2, COL12A1, COL14A1, COL15A1, COL17A1, COL19A1, COL1A1, COL1A2, COL22A1, COL24A1, COL25A1, COL29A1, COL2A1, COL3A1, COL4Al, COL4A2, COL4A5, COL4A6, COL5A2, COL6Al, COL7A1, COL9A1, COL9A2, COLQ, COMTD1, COPA, COPB2, COPS7B, COPZ2, CPSF2, CPXM2, CR1, CREBBP, CRKRS, CRYZ, CSE1L, CSTB, CSTF3, CT45-6, CUBN, CUL4B, CUL5, CXorf41, CYBB, CYFLP2, CYP17, CYP19, CYP24A1, CYP27A1, CYP3A4, CYP3A43, CYP3A5, CYP4F2, CYP4F3, DAZ2, DCBLD1, FCC, DCTN3, DCUN1D4, DDA1, DDEF1, DDX1, DDX24, DDX4, DENND2D, DEPDC2, DES, DGAT2, DHFR, DHRS7, DHRS9, DIP2A, DMD, DMTF1, DNAH3, DNAH8, DNAI1, DNAJA4, DNAJC13, DNAJC7, DNTTIP2, DOCK10, DOCK11, DOCK4, DPP3, DPP4, DPY19L2P2, DSCC1, DUX4, DVL3, DYNC1H1, DYSF, ECM2, EDEM3, EFCAB3, EFCAB4B, EFNA4, EFTUD2, EGFR, EIF3A, ELA1, ELA2A, EMCN, EMD, EML5, ENPP3, EPB41L5, EPHA3, EPHA4, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPS15, ERBB4, ERCC1, ERCC8, ERGIC3, ERMN, ERMP1, ERN1, ERN2, ETS2, ETV4, EVC2, EXO1, EXOC4, F11, F1 3 A1, F3, F5, F7, F8, FAH, FAM134A, FAM13A1, FAM13B1, FAM13C1, FAM161A, FAM176B, FAM184A, FAM19A1, FAM20A, FAM23B, FAM65C, FANCA, FANCC, FANCG, FANCM, FANK1, FAR2, FBN1, FBXO15, FBXO18, FBXO38, FCGBP, FECH, FEZ 2, FGA, FGD6, FGFR10P, FGFR10P2, FGFR2, FGG, FGR, FIX, FKBP3, FLJ35848, FLJ36070, FLNA, FN1, FNBP1L, FOLH1, FOXM1, FRAS1, FUT9, FZD3, FZD6, GAB1, GALC, GALNT3, GAPDH, GART, GAS2L3, GBA, GBGT1, GCG, GCGR, GCK, GEM1, GH1, GHR, GHV, GJA1, GLA, GLT8D1, GNAS, GNB5, GOLGB1, GOLT1A, GOLT1B, GPATCH1, GPR158, GPR160, GRAMD3, GRHPR, GRIA1, GRIA3, GRIA4, GRIN2B, GRM3, GRM4, GRN, GSDMB, GSTCD, GST02, GTPBP4, HADHA, HBA2, HBB, HCK, HDAC3, HDAC5, HDX, HEPACAM2, HERC1, HEXA, HEXB, HIPK3, HLA-DPB1, HLA-G, HLCS, HLTF, HMBS, HMGCL, HNF1A, HNRNPH1, HP1BP3, HPGD, HPRT1, HPRT2, HSF2BP, HSF4, HSPA9, HSPG2, HTT, HXA, ICA1, IDH1, IDS, IFI44L, IKBKAP, IL1R2, IL5RA, II7RA, IMMT, INPP5D, INSR, INTS3, INTU, IPO4, IPO8, IQGAP2, ISL2, ITFG1, ITGAL, ITGB1, ITGB2, ITGB3, ITGB4, ITIH1, ITPR2, IWS1, JAG1, JAK1, JAK2, JMJD1C, KALRN, KATNAL2, KCNN2, KCNT2, KIAA0256, KIAA0528, KIAA0564, KIAA0586, KIAA1033, KIAA1166, KIAA1219, KIAA1409, KIAA1622, KIAA1787, KIF15, KIF16B, KIF3B, KIF5A, KIF5B, KIF9, KIN, KIR2DL5B, KIR3DL2, KIR3DL3, KLF12, KLF3, KLHL20, KLK12, KLKB1, ΚΡΝΑ5, KRAS, BREMEN 1, KRIT1, KRT5, KRTCAP2, L1CAM, L3MBTL, L3MBTL2, LACE1, LAMA1, LAMA2, LAMA3, LAMB1, LARP7, LDLR, LENG1, LGALS3, LGMN, LHCGR, LHX6, LIMCH1, LIMK2, LMBRD1, LMBRD2, LMLN, LMNA, LMO2, LOC389634, LOC390110, LPA, LPCAT2, LPL, LRP4, LRPPRC, LRRC19, LRRC42, LRRK2, LRWD1, LUM, LVRN, LYN, LYST, MADD, MAGI 1, MAGT1, MAIT1, ΜΑΡ2Κ1, ΜΑΡ4Κ4, ΜΑΡΚ8ΙΡ3, ΜΑΡΚ9, ΜΑΡΤ, ΜΑΤΝ2, MCF2L2, MCM6, MDGA2, MEGF10, MEGF11, ΜΕΜO1, MET, MGAM, MGAT4A, MGAT5, MGC16169, MGC34774, ΜΙΒ1, MIER2, MKKS, MKL2, MLANA, MLH1, MLL5, MLX, MME, MPDZ, ΜΡΙ, MRAP2, MRPL11, MRPL39, MRPS28, MRPS35, MS4A13, MSH2, MSMB, MST1R, MTDH, MTF2, MTHFR, MTIF2, MUC2, MUT, MVK, ΜΥΒ, MYCBP2, ΜΥΗ2, ΜΥO19, ΜΥO3Α, ΜΥO9Β, ΜΥOΜ2, ΜΥOΜ3, NAG, NARG1, NARG2, NCOA1, NDC80, NDFIP2, NEB, NEDD4, ΝΕΚ1, ΝΕΚ11, ΝΕΚ5, NF1, NF2, NFE2L2, NFIA, NFIX, NFKBIL2, NFRKB, ΝΚΑΙΝ2, ΝΚΑΡ, NLRC3, NLRC5, NLRP13, NLRP7, NLRP8, ΝΜΕ7, NOL10, NOS1, NOS2A, NOTCH1, ΝΡΜ1, NR1H4, NR4A3, NRXN1, NSMAF, NSMCE2, NT5C, NT5C3, NUBP1, NUBPL, NUDT5, NUMA1, NUP160, NUP88, NUP98, NUPL1, OAT, OBFC2A, OBFC2B, OLIG2, OΡΑ1, OΡΝ4, ΟΡΤΝ, OSBPL11, OSBPL8, OSGEPL1, OTC, ΟΧΤ, PADI4, PAH, ΡΑΝ2, PAPOLG, PARD3, PARVB, PAWR, PBGD, PBRM1, PCBP4, PCCA, PCNX, PCOTH, PDCD4, PDE10A, PDE8B, PDH1, PDIA3, PDK4, PDLIM5, PDS5A, PDS5B, PDXK, PDZRN3, PELI2, PGK1, PGM2, PHACTR4, ΡΗΕΧ, ΡΗΚΒ, PHLDB2, PHTF1, PIAS1, PIGF, PIGN, PIGT, PIK3C2G, PIK3CG, PIK3R1, ΡΙΡ5Κ1Α, PITRM1, PIWIL3, PKD1, PKD2, PKHD1L1, ΡΚΙΒ, PKLR, ΡΚΜ1, ΡΚΜ2, PLCB1, PLCB4, PLCG1, PLD1, PLEKHA5, PLEKHA7, PLEKHM1, PLKR, PLXNC1, PMFBP1, POLN, POLR3D, ΡOΜΤ2, POSTN, PPFIA2, PPP1R12A, PPP3CB, PPP4C, PPP4R1L, PPP4R2, PRAME, PRC1, PRDM1, PRIM1, PRIM2, PRKAR1A, PRKCA, PRKG1, PRMT7, PROC, PROCR, PRODH, PROSC, PROX1, PRPF40B, PRPF4B, PRRG2, PRUNE2, PSD3, PSEN1, PSMAL, PTCH1, PTEN, PTK2, PTK2B, PTPN11, PTPN22, PTPN3, PTPN4, PTPRD, PTPRK, PTPRM, PTPRN2, PTPRT, PUS10, PVRL2, PYGM, QRSL1, RAB11FIP2, RAB23, RALBP1, RALGDS, RB1CC1, RBL2, RBM39, RBM45, REC8, RFC4, RFT1, RFTN1, RHPN2, RIF1, RLN3, RMND5B, RNF11, RNF32, RNFT1, RNGTT, ROCK1, ROCK2, RP1, RP11-265F1, RP13-36C9, RP6KA3, RPAP3, RPGR, RPN1, RPS6KA6, RRM1, RRP1B, RSK2, RTEL1, RTF1, RUFY1, RYR3, SAAL1, SAE1, SBCAD, SCN11A, SCN1A, SCN2A, SCN3A, SCN4A, SCN5A, SCN8A, SCNA, SCO1, SCYL3, SDK1, SDK2, SEC24A, SEC24D, SEC31A, SEL1L, SENP3, SENP6, SENP7, SERPINA1, SETD3, SETD4, SEZ6, SFRS12, SGCE, SGOL2, SGPL1, SH2D1A, SH3BGRL2, SH3PXD2A, SH3PXD2B, SH3RF2, SH3TC2, SIPA1L2, SIPA1L3, SIVA1, SKAP1, SKIV2L2, SLC12A3, SLC13A1, SLC22A17, SLC25A14, SLC28A3, SLC38A1, SLC38A4, SLC39A10, SLC4A2, SLC6A11, SLC6A13, SLC6A6, SLC6A8, SMARCA1, SMARCA5, SMC5, SMN2, SMTN, SNCAIP, SNRK, SNRP70, SNX6, SOD1, SPAG9, SPATA13, SPATA4, SPATS1, SPECC1L, SPINK5, SPP2, SPTA1, SRP72, SSX3, SSX5, SSX9, STAG1, STAMBPL1, STARD6, STAT6, STK17B, STX3, STXBP1, SUCLG2, SULF2, SUPT16H, SUPT6H, SV2C, SYCP1, SYCP2, SYT6, SYTL5, TAF2, TBC1D26, TBC1D29, TBC1D3G, TBC1D8B, TBCEL, TBK1, TBPL1, TCEB3, TCF12, TCP11L2, TDRD3, TEAD1, TECTB, TEK, TET2, TFRC, TG, TGM7, TGS1, THOC2, TIAL1, TIAM2, TIMM50, TLK2, TM4SF20, TM6SF1, TMEM156, TMEM194A, TMEM27, TMEM77, TMF1, TMPRSS6, TNFRSF10A, TNFRSF10B, TNFRSF8, TNK2, TNKS, TNKS2, TOM1L1, TOM1L2, TOP2B, TP53, TP53BP2, TP53I3, TP53 INP1, TP63, TRAF3IP3, TRAPPC2, TRIM44, TRIM65, TRIML1, TRIML2, TRPM3, TRPM5, TRPM7, TSC1, TSC2, TSHB, TSPAN7, TTC17, TTLL5, TTLL9, TTN, TTPAL, TTR, TUSC3, TXNDC10, UBE3A, UCK1, UGT1A1, UHRF1BP1, UNC45B, UNC5C, USH2A, USP1, USP38, USP39, USP6, UTP15, UTP18, UTP20, UTRN, UTX, UTY, UVRAG, UXT, VAPA, VPS29, VPS35, VPS39, VTI1A, VTI1B, VWA3B, WDFY2, WDR16, WDR17, WDR26, WDR44, WDR67, WDTC1, WRNIP1, WWC3, XRN1, XRN2, XX-FW88277, YARS, YGM, ZBTB20, ZC3H7A, ZC3HAV1, ZC3HC1, ZFYVE1, ZNF114, ZNF169, ZNF326, ZNF365, ZNF3 7A, ZNF618 ou ZWINT.
[0702] Por exemplo, são fornecidos no presente documento compostos de modulação de splice que modulam o splicing, tal como splicing aberrante de mRNA ABCA4, ABCA9, ABCB1, ABCB5, ABCC9, ABCD1, ACADL, ACADM, ACADSΒ, ACSS2, ACTG2, ADA, ADAL, ADAM10, ADAM15, ADAM22, ADAM32, ADAMTS12, ADAMTS13, ADAMTS20, ADAMTS6, ADAMTS9, ADCY10, ADCY3, ADCY8, ADRBK2, AFP, AGL, AGT, AHCTF1, AKAP10, AKAP3, AKNA, ALAS1, ALB, ALDH3A2, ALG6, ALS2CL, AMBRA1, ANGPTL3, ANK3, ANTXR2, ANXA10, ANXA11, AP2A2, AP4E1, APC, APOA1, APOB, APOC3, APOH, AR, ARFGEF1, ARFGEF2, ARHGAP1, ARHGAP18, ARHGAP26, ARHGAP8, ARHGEF18, ARHGEF2, ARPC3, ARS2, ASH1L, ASNSD1, ASPM, ATAD5, ATG16L2, ATG4A, ATM, ATP11C, ATP13A5, ATP6V1G3, ATP7A, ATP7B, ATR, ATXN2, ATXN3, B2M, B4GALNT3, BBOX1, BBS4, BCL2-like 11 (BIM), BCS1L, BMP2K, BMPR2, BRCA1, BRCA2, BRCC3, BRSK1, BRSK2, BTAF1, BTK, C10orf137, C11orf30, C11orf65, C11orf70, C12orf51, C13orf1, C13orf15, C14orf101, C14orf118, C15orf29, C15orf42, C15orf60, C16orf33, C16orf38, C16orf48, C18orf8, C19orf42, C1orf107, C1orf114, C1orf130, C1orf149, C1orf27, C1orf71, C1orf87, C1orf94, C1R, C20orf74, C21orf70, C2orf55, C3, C3orf23, C4orf18, C4orf29, C5orf34, C6orf118, C8B, C8orf33, C9orf114, C9orf43, C9orf8 6, C9orf98, CA11, CAB39, CACHD1, CACNA1B, CACNA1C, CACNA1G, CACNA1H, CACNA2D1, CALCA, CALCOCO2, CAMK1D, CAMKK1, CAPN3, CAPN9, CAPSL, CARKD, CAT, CBX1, CBX3, CCDC102B, CCDC11, CCDC131, CCDC146, CCDC15, CCDC18, CCDC5, CCDC81, CD1B, CD33, CD4, CD46, CDC14A, CDC16, CDC2L5, CDC42BPB, CDCA8, CDH1, CDH10, CDH11, CDH23, CDH24, CDH8, CDH9, CDK5RAP2, CDK6, CDK8, CEL, CELSR3, CENPI, CENTB2, CENTG2, CEP110, CEP170, CEP192, CETP, CFB, CFH, CFTR, CGN, CGNL1, CHAF1A, CHD9, CHIC2, CHL1, CHM, CHN1, CLCN1, CLEC16A, CLIC2, CLINT1, CLK1, CLPB, CLPTM1, CMIP, CMYA5, CNGA3, CNOT1, CNOT7, CNTN6, COG3, COL11A1, COL11A2, COL12A1, COL14A1, COL15A1, COL17A1, COL19A1, COL1A1, COL1A2, COL22A1, COL24A1, COL25A1, COL29A1, COL2A1, COL3A1, COL4A1, COL4A2, COL4A5, COL4A6, COL5A2, COL6A1, COL7A1, COL9A1, COL9A2, COLQ, COMTD1, COPA, COPB2, COPS7B, COPZ2, CPSF2, CPXM2, CR1, CREBBP, CRKRS, CRYZ, CSE1L, CSTB, CSTF3, CT45-6, CUBN, CUL4B, CUL5, CXorf41, CYBB, CYFIP2, CYP17, CYP19, CYP24A1, CYP27A1, CYP3A4, CYP3A43, CYP3A5, CYP4F2, CYP4F3, DAZ2, DCBLD1, DCC, DCTN3, DCUN1D4, DDA1, DDEF1, DDX1, DDX24, DDX4, DENND2D, DEPDC2, DES, DGAT2, DHFR, DHRS7, DHRS9, DIP2A, DMD, DMTF1, DNAH3, DNAH8, DNAI1, DNAJA4, DNAJC13, DNAJC7, DNTTIP2, DOCK10, DOCK11, DOCK4, DPP3, DPP4, DPY19L2P2, DSCC1, DUX4, DVL3, DYNC1H1, DYSF, ECM2, EDEM3, EFCAB3, EFCAB4B, EFNA4, EFTUD2, EGFR, EIF3A, ELA1, ELA2A, EMCN, EMD, EML5, ENPP3, EPB41L5, EPHA3, EPHA4, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPS15, ERBB4, ERCC1, ERCC8, ERGIC3, ERMN, ERMP1, ERN1, ERN2, ETS2, ETV4, EVC2, EXOl, EXOC4, F11, F13A1, F3, F5, F7, F8, FAH, FAM134A, FAM13A1, FAM13B1, FAM13C1, FAM161A, FAM176B, FAM184A, FAM19A1, FAM20A, FAM23B, FAM65C, FANCA, FANCC, FANCG, FANCM, FANK1, FAR2, FBN1, FBXO15, FBXO18, FBXO38, FCGBP, FECH, FEZ2, FGA, FGD6, FGFR1OP, FGFR1OP2, FGFR2, FGG, FGR, FIX, FKBP3, FLJ35848, FLJ36070, FLNA, FN1, FNBP1L, FOLH1, FOXM1, FRAS1, FUT9, FZD3, FZD6, GAB1, GALC, GALNT3, GAPDH, GART, GAS2L3, GBA, GBGT1, GCG, GCGR, GCK, GFM1, GH1, GHR, GHV, GJA1, GLA, GLT8D1, GNAS, GNB5, GOLGB1, GOLT1A, GOLT1B, GPATCH1, GPR158, GPR160, GRAMD3, GRHPR, GRIA1, GRIA3, GRIA4, GRIN2B, GRM3, GRM4, GRN, GSDMB, GSTCD, GSTO2, GTPBP4, HADHA, HBA2, HBB, HCK, HDAC3, HDAC5, HDX, HEPACAM2, HERC1, HEXA, HEXB, HIPK3, HLA-DPB1, HLA-G, HLCS, HLTF, HMBS, HMGCL, HNF1A, HNRNPH1, HP1BP3, HPGD, HPRT1, HPRT2, HSF2BP, HSF4, HSPA9, HSPG2, HTT, HXA, ICA1, IDH1, IDS, IFI44L, IKBKAP, IL1R2, IL5RA, IL7RA, IMMT, INPP5D, INSR, INTS3, INTU, IP04, IP08, IQGAP2, ISL2, ITFG1, ITGAL, ITGB1, ITGB2, ITGB3, ITGB4, ITIH1, ITPR2, IWS1, JAG1, JAK1, JAK2, JMJD1C, KALRN, KATNAL2, KCNN2, KCNT2, KIAA0256, KIAA0528, KIAA0564, KIAA058 6, KIAA1033, KIAA1166, KIAA1219, KIAA1409, KIAA1622, KIAA1787, KIF15, KIF16B, KIF3B, KIF5A, KIF5B, KIF9, KIN, KIR2DL5B, KIR3DL2, KIR3DL3, KLF12, KLF3, KLHL20, KLK12, KLKB1, KPNA5, KRAS, KREMEN1, KRIT1, KRT5, KRTCAP2, L1CAM, L3MBTL, L3MBTL2, LACEI, LAMA1, LAMA2, LAMA3, LAMB1, LARP7, LDLR, LENG1, LGALS3, LGMN, LHCGR, LHX6, LIMCH1, LIMK2, LMBRD1, LMBRD2, LMLN, LMNA, LMO2, LOC389634, LOC390110, LPA, LPCAT2, LPL, LRP4, LRPPRC, LRRC19, LRRC42, LRRK2, LRWD1, LIM, LVRN, LYN, LYST, MADD, MAGI1, MAGT1, MALT1, MAP2K1, MAP4K4, MAPK8IP3, MAPK9, MAPT, MATN2, MCF2L2, MCM6, MDGA2, MEGF10, MEGF11, MEMO1, MET, MGAM, MGAT4A, MGAT5, MGC16169, MGC34774, MIB1, MIER2, MKKS, MKL2, MLANA, MLH1, MLL5, MLX, MME, MPDZ, MPI, MRAP2, MRPL11, MRPL39, MRPS28, MRPS35, MS4A13, MSH2, MSMB, MST1R, MTDH, MTF2, MTHFR, MTIF2, MUC2, MUT, MVK, MYB, MYCBP2, MYH2, MYO19, MYO3A, MYO9B, MYOM2, MYOM3, NAG, NARG1, NARG2, NCOA1, NDC80, NDFIP2, NEB, NEDD4, ΝΕΚ1, ΝΕΚ11, ΝΕΚ5, NF1, NF2, NFE2L2, NFIA, NFIX, NFKBIL2, NFRKB, ΝΚΑΙΝ2, ΝΚΑΡ, NLRC3, NLRC5, NLRP13, NLRP7, NLRP8, ΝΜΕ7, NOL10, NOS1, NOS2A, NOTCH1, ΝΡΜ1, NR1H4, NR4A3, NRXN1, NSMAF, NSMCE2, NT5C, NT5C3, NUBP1, NUBPL, NUDT5, NUMA1, NUP160, NUP88, NUP98, NUPL1, ΟΑΤ, OBFC2A, OBFC2B, OLIG2, ΟΡΑ1, ΟΡΝ4, ΟΡΤΝ, OSBPL11, OSBPL8, OSGEPL1, OTC, ΟΧΤ, PAD14, PAH, ΡΑΝ2 , PAPOLG, PARD3, PARVB, PAWR, PBGD, PBRM1, PCBP4, PCCA, PCNX, PCOTH, PDCD4, PDE10A, PDE8B, PDH1, PDIA3, PDK4, PDLIM5, PDS5A, PDS5B, PDXK, PDZRN3, PELI2, PGK1, PGM2, PHACTR4, ΡΗΕΧ, ΡΗΚΒ, PHLDB2, PHTF1, PIAS 1, PIGF, PIGN, PIGT, PIK3C2G, PIK3CG, PIK3R1, ΡΙΡ5Κ1Α, PITRM1, PIWIL3, PKD1, PKD2, PKHD1L1, ΡΚΙΒ, PKLR, ΡΚΜ1, ΡΚΜ2, PLCB1, PLCB4, PLCG1, PLD1, PLEKHA5, PLEKHA7, PLEKHM1, PLKR, PLXNC1, PMFBP1, POLN, POLR3D, ΡΟΜΤ2, POSTN, PPFIA2, PPP1R12A, PPP3CB, PPP4C, PPP4R1L, PPP4R2, PRAME, PRC1, PRDM1, PRIM1, PRIM2, PRKAR1A, PRKCA, PRKG1, PRMT7, PROC, PROCR, PRODH, PROSC, PROX1, PRPF40B, PRPF4B, PRRG2, PRUNE2, PSD3, PSEN1, PSMAL, PTCH1, ΡΤΕΝ, ΡΤΚ2, ΡΤΚ2Β, ΡΤΡΝ11, ΡΤΡΝ22, ΡΤΡΝ3, ΡΤΡΝ4, PTPRD, PTPRK, PTPRM, PTPRN2, PTPRT, PUS10, PVRL2, PYGM, QRSL1, RAB11FIP2, RAB2 3, RALBP1, RALGDS, RB1CC1, RBL2, RBM3 9, RBM45, REC8, RFC4, RFT1, RFTN1, RHPN2, RIF1, RLN3, RMND5B, RNF11, RNF32, RNFT1, RNGTT, ROCK1, ROCK2, RP1, RP11-265F1, RP13-36C9, RP6KA3, RPAP3, RPGR, RPN1, RPS6KA6, RRM1, RRP1B, RSK2, RTEL1, RTF1, RUFY1, RYR3, SAAL1, SAE1, SBCAD, SCN11A, SCN1A, SCN2A, SCN3A, SCN4A, SCN5A, SCN8A, SCNA, SCO1, SCYL3, SDK1, SDK2, SEC24A, SEC24D, SEC31A, SEL1L, SENP3, SENP6, SENP7 , SERPINA1, SETD3, SETD4, SEZ 6, SFRS12, SGCE, SGOL2, SGPL1, SH2D1A, SH3BGRL2, SH3PXD2A, SH3PXD2B, SH3RF2, SH3TC2, SIPA1L2, SIPA1L3, SIVA1, SKAP1, SKIV2L2, SLC12A3, SLC13A1, SLC22A17, SLC25A14, SLC28A3, SLC38A1, SLC38A4, SLC39A10, SLC4A2, SLC6A11, SLC6A13, SLC6A6, SLC6A8, SMARCA1, SMARCA5, SMC5, SMN2, SMTN, SNCAIP, SNRK, SNRP70, SNX6, SOD1, SPAG9, SPATA13, SPATA4, SPATS1, SPECC1L, SPINK5, SPP2, SPTA1, SRP72, SSX3, SSX5, SSX9, STAG1, STAMBPL1, STARD6, STAT6, STK17B, STX3, STXBP1, SUCLG2, SULF2, SUPT16H, SUPT6H, SV2C, SYCP1, SYCP2, SYT6, SYTL5, TAF2, TBC1D26, TBC1D29, TBC1D3G, TBC1D8B, TBCEL, ΤΒΚ1, TBPL1, TCEB3, TCF12, TCP11L2, TDRD3, TEAD1, TECTB, ΤΕΚ, ΤΕΤ2, TFRC, TG, TGM7, TGS1, THOC2, ΤΙAL1, ΤΙΑΜ2, ΤΙΜΜ50, TLK2, TM4SF20, TM6SF1, ΤΜΕΜ156, ΤΜΕΜ194Α, ΤΜΕΜ27, ΤΜΕΜ77, TMF1, TMPRSS6, TNFRSF10A, TNFRSF10B, TNFRSF8, ΤΝΚ2, TNKS, TNKS2, TOM1L1, TOM1L2, ΤΟΡ2Β, ΤΡ53, ΤΡ53ΒΡ2, ΤΡ53Ι3, ΤΡ53INP1, ΤΡ63, TRAF3IP3, TRAPPC2, TRIM44, TRIM65, TRIML1, TRIML2, TRPM3, TRPM5, TRPM7, TSC1, TSC2, TSHB, TSPAN7, TTC17, TTLL5, TTLL9, ΤΤΝ, ΤΤPAL, TTR, TUSC3, TXNDC10, UBE3A, UCK1, UGT1A1, UHRF1BP1, UNC45B, UNC5C, USH2A, USP1, USP38, USP39, USP6, UTP15, UTP18, UTP20, UTRN, UTX, UTY, UVRAG, UXT, VAPA, VPS29, VPS35, VPS39, VTI1A, VTI1B, VWA3B, WDFY2, WDR16, WDR17, WDR26, WDR44, WDR67, WDTC1, WRNIP1, WWC3, XRN1, XRN2, XX-FW88277, YARS, YGM, ΖΒΤΒ20, ZC3H7A, ZC3HAV1, ZC3HC1, ZFYVE1, ZNF114, ZNF169, ZNF326, ZNF365, ZNF37A, ZNF618 ou um ZWINT, tal como pré-mRNA.
[0703] Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCA9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCB5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCC9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ABCD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ACADL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ACADM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ACADSB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ACSS2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ACTG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAM10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAM15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAM22. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAM32. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAMTS12. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAMTS13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAMTS20. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAMTS6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADAMTS9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADCY10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADCY3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADCY8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ADRBK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AFP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AGL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AGT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AHCTF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AKAP10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AKAP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AKNA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ALAS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ALB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ALDH3A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ALG6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ALS2CL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AMBRA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ANGPTL3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ANK3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ANTXR2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ANXA10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ANXA11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AP2A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AP4E1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de APC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de APOA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de APOB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de APOC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de APOH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de AR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARFGEF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARFGEF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGAP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGAP18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGAP26. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGAP8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGEF18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARHGEF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARPC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ARS2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ASH1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ASNSD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ASPM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATAD5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATG16L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATG4A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATP11C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATP13A5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATP6V1G3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATP7A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATP7B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATXN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ATXN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de B2M. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de B4GALNT3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BBOX1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BBS4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BCL2-like 11 (BIM). Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BCS1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BMP2K. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BMPR2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BRCA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BRCA2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BRCC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BRSK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BRSK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BTAF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de BTK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C10orf137. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C11orf30. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C11orf65. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C11orf70. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C12orf51. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C13orf1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C13orf15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C14orf101. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C14orf118. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C15orf29. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C15orf42. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C15orf60. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C16orf33. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C16orf38. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C16orf48. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C18orf8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C19orf42. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf107. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf114. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf130. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf149. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf27. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf71. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf87. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de Clorf94. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C1R. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C20orf74. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C21orf70. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C2orf55. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C3orf23. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C4orf18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C4orf29. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C5orf34. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C6orf118. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C8B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C8orf33. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C9orf114. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C9orf43. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C9orf86. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de C9orf98. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CA11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAB39. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACHD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACNA1B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACNA1C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACNA1G. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACNA1H. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CACNA2D1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CALCA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CALCOCO2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAMK1D. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAMKK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAPN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAPN9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAPSL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CARKD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CAT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CBX1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CBX3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC102B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC131. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC146. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CCDC81. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CD1B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CD33. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CD4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CD46. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDC14A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDC16. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDC2L5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDC42BPB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDCA8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH23. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH24. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDH9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDK5RAP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDK6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CDK8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CEL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CELSR3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CENPI. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CENTB2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CENTG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CEP110. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CEP170. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CEP192. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CETP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CFB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CFH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CFTR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CGN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CGNL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHAF1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHD9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHIC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CHN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLCN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLEC16A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLIC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLINT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLPB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CLPTM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CMIP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CMYA5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CNGA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CNOT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CNOT7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CNTN6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COG3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL11A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL11A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL12A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL14A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL15A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL17A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL19A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL1A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL1A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL22A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL24A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL25A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL29A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL2A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL3A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL4A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL4A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL4A5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL4A6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL5A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL6A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL7A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL9A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COL9A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COLQ. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COMTD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COPA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COPB2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COPS7B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de COPZ2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CPSF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CPXM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CR1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CREBBP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CRKRS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CRYZ. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CSE1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CSTB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CSTF3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CT45-6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CUBN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CUL4B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CUL5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CXorf41. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYBB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYFIP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP17. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP19. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP24A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP27A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP3A4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP3A43. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP3A5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP4F2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de CYP4F3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DAZ2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DCBLD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DCC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DCTN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DCUN1D4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DDA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DDEF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DDX1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DDX24. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DDX4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DENND2D. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DEPDC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DES. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DGAT2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DHFR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DHRS7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DHRS9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DIP2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DMD. Por exemplo, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de éxon 51a pré-mRNA de DMD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DMTF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAH3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAH8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAI1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAJA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAJC13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNAJC7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DNTTIP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DOCK10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DOCK11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DOCK4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DPP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DPP4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DPY19L2P2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DSCC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DUX4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DVL3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DYNC1H1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de DYSF. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ECM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EDEM3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EFCAB3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EFCAB4B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EFNA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EFTUD2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EGFR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EIF3A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ELA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ELA2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EMCN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EMD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EML5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ENPP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPB41L5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPHA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPHA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPHB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPHB2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPHB3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EPS15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERBB4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERCC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERCC8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERGIC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERMN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERMP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ERN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ETS2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ETV4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EVC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EXO1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de EXOC4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F13A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de F8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM134A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM13A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM13B1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM13C1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM161A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM176B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM184A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM19A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM20A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM23B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAM65C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FANCA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FANCC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FANCG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FANCM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FANK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FAR2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FBN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FBX015. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FBXO18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FBX038. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FCGBP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FECH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FEZ2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGD6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGFR1OP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGFR1OP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGFR2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FGR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FIX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FKBP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FLJ35848. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FLJ36070. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FLNA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FNBP1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FOLH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FOXM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FRAS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FUT9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FZD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de FZD6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GAB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GALC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GALNT3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GAPDH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GART. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GAS2L3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GBA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GBGT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GCG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GCGR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GCK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GEM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GHR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GHV. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GJA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GLA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GLT8D1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GNAS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GNB5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GOLGB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GOLT1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GOLT1B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GPATCH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GPR158. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GPR160. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRAMD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRHPR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRIA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRIA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRIA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRIN2B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRM3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRM4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GRN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GSDMB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GSTCD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GSTO2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de GTPBP4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HADHA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HBA2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HBB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HCK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HDAC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HDAC5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HDX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HEPACAM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HERC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HEXA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HEXB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HIPK3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HLA-DPB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HLA-G. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HLCS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HLTF. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HMBS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HMGCL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HNF1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HNRNPH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HP1BP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HPGD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HPRT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HPRT2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HSF2BP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HSF4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HSPA9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HSPG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HTT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de HXA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ICA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IDH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IDS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IFI44L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IKBKAP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IL1R2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IL5RA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IL7RA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IMMT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de INPP5D. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de INSR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de INTS3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de INTU. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IP04. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IP08. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IQGAP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ISL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITFG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITGAL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITGB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITGB2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITGB3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITGB4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITIH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ITPR2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de IWS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de JAG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de JAK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de JAK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de JMJD1C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KALRN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KATNAL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KCNN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KCNT2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA0256. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA0528. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA0564. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA0586. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1033. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1166. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1219. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1409. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1622. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIAA1787. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF16B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF3B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF5A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF5B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIF9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIR2DL5B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIR3DL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KIR3DL3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KLF12. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KLF3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KLHL20. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KLK12. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KLKB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KPNA5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KRAS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KREMEN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KRIT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KRT5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de KRTCAP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de L1CAM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de L3MBTL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de L3MBTL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LACEI. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LAMA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LAMA2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LAMA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LAMB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LARP7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LDLR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LENG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LGALS3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LGMN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LHCGR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LHX6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LIMCH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LIMK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LMBRD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LMBRD2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LMLN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LMNA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LMO2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LOC389634. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LOC390110. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LPA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LPCAT2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LPL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRP4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRPPRC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRRC19. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRRC42. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRRK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LRWD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LUM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LVRN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LYN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de LYST. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MADD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAGI1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAGT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MALT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAP2K1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAP4K4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAPK8IP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAPK9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MAPT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MATN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MCF2L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MCM6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MDGA2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MEGF10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MEGF11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MEMO1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MET. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MGAM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MGAT4A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MGAT5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MGC16169. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MGC34774. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MIB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MIER2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MKKS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MKL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MLANA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MLH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MLL5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MLX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MME. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MPDZ. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MPI. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MRAP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MRPL11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MRPL39. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MRPS28. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MRPS35. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MS4A13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MSH2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MSMB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MST1R. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MTDH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MTF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MTHFR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MTIF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MUC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MUT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MVK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYCBP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYH2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYO19. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MY03A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MY09B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYOM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de MYOM3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NAG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NARG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NARG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NCOA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NDC80. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NDFIP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NEB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NEDD4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NEK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NEK11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NEK5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NFE2L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NFIA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NFIX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NFKBIL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NFRKB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NKAIN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NKAP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NLRC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NLRC5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NLRP13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NLRP7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NLRP8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NME7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NOL10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NOS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NOS2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NOTCH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NPM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NR1H4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NR4A3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NRXN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NSMAF. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NSMCE2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NT5C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NT5C3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUBP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUBPL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUDT5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUMA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUP160. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUP88. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUP98. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de NUPL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OAT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OBFC2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OBFC2B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OLIG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OPA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OPN4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OPTN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OSBPL11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OSBPL8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OSGEPL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OTC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de OXT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PADI4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PAH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PAN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PAPOLG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PARD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PARVB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PAWR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PBGD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PBRM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PCBP4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PCCA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PCNX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PCOTH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDCD4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDE10A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDE8B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDIA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDK4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDLIM5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDS5A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDS5B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDXK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PDZRN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PELI2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PGK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PGM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PHACTR4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PHEX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PHKB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PHLDB2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PHTF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIAS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIGF. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIGN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIGT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIK3C2G. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIK3CG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIK3R1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIP5K1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PITRM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PIWIL3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKD2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKHD1L1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKIB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKLR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PKM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLCB1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLCB4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLCG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLEKHA5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLEKHA7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLEKHM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLKR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PLXNC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PMFBP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de POLN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de POLR3D. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de POMT2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de POSTN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPFIA2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPP1R12A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPP3CB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPP4C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPP4R1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PPP4R2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRAME. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRDM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRIM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRIM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRKAR1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRKCA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRKG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRMT7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PROC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PROCR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRODH. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PROSC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PROX1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRPF40B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRPF4B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRRG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PRUNE2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PSD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PSEN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PSMAL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTCH1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTEN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTK2B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPN11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPN22. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPN4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPRD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPRK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPRM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPRN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PTPRT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PUS10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PVRL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de PYGM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de QRSL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RAB11FIP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RAB23. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RALBP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RALGDS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RB1CC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RBL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RBM39. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RBM45. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de REC8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RFC4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RFT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RFTN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RHPN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RIF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RLN3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RMND5B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RNF11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RNF32. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RNFT1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RNGTT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ROCK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ROCK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RP11-265F1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RP13-36C9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RP6KA3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RPAP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RPGR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RPN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RPS6KA6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RRM1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RRP1B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RSK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RTEL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RTF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RUFY1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de RYR3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SAAL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SAE1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SBCAD. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN11A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN3A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN4A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN5A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCN8A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCNA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCO1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SCYL3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SDK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SDK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SEC24A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SEC24D. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SEC31A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SEL1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SENP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SENP6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SENP7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SERPINA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SETD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SETD4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SEZ6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SFRS12. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SGCE. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SGOL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SGPL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH2D1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH3BGRL2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH3PXD2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH3PXD2B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH3RF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SH3TC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SIPA1L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SIPA1L3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SIVA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SKAP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SKIV2L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC12A3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC13A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC22A17. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC25A14. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC28A3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC38A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC38A4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC39A10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC4A2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC6A11. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC6A13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC6A6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SLC6A8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SMARCA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SMARCA5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SMC5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SMN2. Por exemplo, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de éxon 7 de um pré-mRNA de SMN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SMTN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SNCAIP. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SNRK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SNRP70. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SNX6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SOD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPAG9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPATA13. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPATA4. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPATS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPECC1L. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPINK5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SPTA1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SRP72. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SSX3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SSX5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SSX9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STAG1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STAMBPL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STARD6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STAT6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STK17B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STX3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de STXBP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SUCLG2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SULF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SUPT16H. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SUPT6H. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SV2C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SYCP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SYCP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SYT6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de SYTL5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TAF2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBC1D26. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBC1D29. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBC1D3G. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBC1D8B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBCEL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TBPL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TCEB3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TCF12. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TCP11L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TDRD3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TEAD1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TECTB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TEK. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TET2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TFRC. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TGM7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TGS1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de THOC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TIAL1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TIAM2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TIMM50. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TLK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TM4SF20. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TM6SF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMEM156. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMEM194A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMEM27. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMEM77. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMF1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TMPRSS6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNFRSF10A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNFRSF10B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNFRSF8. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNK2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNKS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TNKS2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TOM1L1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TOM1L2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TOP2B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TP53. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TP53BP2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TP53I3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TP53INP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TP63. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRAF3IP3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRAPPC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRIM44. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRIM65. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRIML1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRIML2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRPM3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRPM5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TRPM7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TSC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TSC2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TSHB. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TSPAN7. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTC17. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTLL5. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTLL9. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTPAL. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TTR. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TUSC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de TXNDC10. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UBE3A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UCK1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UGT1A1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UHRF1BP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UNC45B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UNC5C. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de USH2A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de USP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de USP38. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de USP39. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de USP6. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTP15. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTP18. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTP20. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTRN. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTX. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UTY. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UVRAG. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de UXT. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VAPA. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VPS29. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VPS35. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VPS39. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VTI1A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VTI1B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de VWA3B. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDFY2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDR16. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDR17. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDR26. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDR44. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDR67. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WDTC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WRNIP1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de WWC3. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de XRN1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de XRN2. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de XX-FW88277. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de YARS. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de YGM. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZBTB20. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZC3H7A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZC3HAV1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZC3HC1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZFYVE1. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF114. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF169. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF326. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF365. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF37A. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZNF618. Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing de um pré-mRNA de ZWINT.
[0704] Em algumas modalidades, os compostos SMSM e métodos para seu uso descritos no presente documento podem modular o splicing, tai como splicing alternativo de um polinucleotídeo codificado por gene MAPT. Em algumas modalidades, splicing alternativo do pré-mRNA de MAPT pode levar à expressão de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 isoformas da proteína tau. Em algumas modalidades, splicing alternativo do pré-mRNA de MAPT pode levar à expressão de 6 isoformas da proteína tau. Em algumas modalidades, as 6 isoformas de tau incluem 3 isoformas de quatro repetições (4R) e 3 isoformas de três repetições (3R) da proteína tau. Nas isoformas de tau 3R o éxon 10 é excluído das variantes de splice. Por exemplo, uma isoforma de tau 3R na qual o éxon 10 é excluído pode incluir o éxon 2 e/ou éxon 3. Nas isoformas de tau 4R o éxon 10 é incluído nas variantes de splice. Por exemplo, uma isoforma de tau 4R na qual o éxon 10 é incluído pode incluir o éxon 2 e/ou éxon 3. A inclusão ou exclusão do éxon 10 pode depender de eventos de splicing alternativo em uma haste-alça que ocorre na junção éxon 10 íntron 10. Em algumas modalidades, uma mutação que ocorre nos 5'ss resulta na inclusão do éxon 10 em um mRNA que codifica a proteína tau. Em algumas modalidades, uma mutação em um ISS região da haste-alça resulta na exclusão do éxon 10 do mRNA que codifica a proteína tau. Em algumas modalidades, uma mutação nas 5'ss desestabiliza a haste-alça, diminuindo assim a inclusão do éxon 10 no mRNA da tau. Em algumas modalidades, uma mutação nas 5'ss inibe a ligação de um componente do spliceossomo ao pré-mRNA, diminuindo assim a inclusão do éxon 10 no mRNA da tau. Em algumas modalidades, uma mutação na região ISS da haste-alça inibe a ligação de um componente do spliceossomo ao pré-mRNA, aumentando assim a inclusão do éxon 10 no mRNA da tau.
[0705] A razão entre 3R e isoformas de tau 4R pode contribuir para inúmeras condições ou doenças. Em algumas modalidades, um sujeito sem uma condição ou doença tem uma razão entre 3R e 4R de 1:1. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrita no presente documento tem uma razão entre 3R e 4R de cerca de 1:1,2, 1:1,4, 1:1,6, 1:1,8, 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 ou 1:5. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrita no presente documento tem uma razão entre 3R e 4R de cerca de 1:1 a cerca de 1:1,1, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,2, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,3, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,4, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,6, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,8, cerca de 1:1 a cerca de 1:2, cerca de 1:1 a cerca de 1:3, cerca de 1:1 a cerca de 1:3,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:4, cerca de 1:1 a cerca de 1:4,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:5, 1:2 a cerca de 1:3, cerca de 1:2 a cerca de 1:4, cerca de 1:2 a cerca de 1:5, cerca de 1:3 a cerca de 1:4, cerca de 1:3 a cerca de 1:5 ou cerca de 1:4 a cerca de 1:5. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrita no presente documento tem uma razão entre 4R e 3R de cerca de 1:1,2, 1:1,4, 1:1,6, 1:1,8, 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 ou 1:5. Em algumas modalidades, um indivíduo com uma condição ou doença descrita no presente documento tem uma razão entre 4R e 3R de cerca de 1:1 a cerca de 1:1,1, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,2, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,3, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,4, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,6, cerca de 1:1 a cerca de 1:1,8, cerca de 1:1 a cerca de 1:2, cerca de 1:1 a cerca de 1:3, cerca de 1:1 a cerca de 1:3,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:4, cerca de 1:1 a cerca de 1:4,5, cerca de 1:1 a cerca de 1:5, 1:2 a cerca de 1:3, cerca de 1:2 a cerca de 1:4, cerca de 1:2 a cerca de 1:5, cerca de 1:3 a cerca de 1:4, cerca de 1:3 a cerca de 1:5 ou cerca de 1:4 a cerca de 1:5.
[0706] Em alguns aspectos, os compostos SMSM são usados para modular o splicing alternativo do pré-mRNA de tau. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA da tau, reduzindo a afinidade de ligação de um componente do spliceossomo aos 5'ss, aumentando assim a exclusão do éxon 10 no mRNA de tau e aumentando a razão de isoformas de tau 3R:4R. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA da tau, aumentando a afinidade de ligação de um componente do spliceossomo aos 5'ss, aumentando assim a inclusão do éxon 10 no mRNA de tau e reduzindo a razão de isoformas de tau 3R:4R. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA da tau, reduzindo a afinidade de ligação de um componente do spliceossomo à região de ISS, aumentando assim a inclusão do éxon 10 no mRNA de tau e reduzindo a razão de isoformas de tau 3R:4R. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA da tau, aumentando a afinidade de ligação de um componente do spliceossomo à região de ISS, reduzindo assim a inclusão do éxon 10 no mRNA de tau e aumentando a razão de isoformas de tau 3R:4R. Em algumas modalidades, o composto SMSM restaura a razão de 3R:4R para 1:1. Em algumas modalidades, o composto SMSM altera a razão de 3R>4R para 4R>3R. Em algumas modalidades, o composto SMSM altera a razão de 3R<4R para 4R<3R. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA de tau, aumentando a estabilidade termodinâmica da haste-alça, reduzindo assim a inclusão de éxon 10 no mRNA de tau e aumentando a razão de isoformas de tau 3R:4R. Em algumas modalidades, o composto SMSM se liga à haste-alça de éxon 10 do pré-mRNA de tau, reduzindo a estabilidade termodinâmica da haste-alça, aumentando assim a inclusão de éxon 10 no mRNA de tau e reduzindo a razão de isoformas de tau 3R:4R.
[0707] Mutações e/ou estruturas de RNA secundárias ou terciárias aberrantes em elementos de splicing de ação cis podem alterar os padrões de splicing. Mutações e/ou estruturas de RNA secundárias ou terciárias aberrantes podem ser encontradas nas sequências de consenso principais, incluindo regiões 5'ss, 3'ss e BP, ou outros elementos reguladores, incluindo ESEs, ESSs, ISEs e ISSs. Mutações nos elementos de ação cis podem resultar em múltiplas doenças. Doenças exemplificativas são descritas abaixo. A presente revelação fornece compostos e métodos modulação de splice que têm como alvo pré-mRNA contendo uma ou more mutações e/ou estruturas de RNA secundárias ou terciárias aberrantes em elementos de ação cis. Em algumas modalidades, a presente revelação fornece métodos e agentes de ligação a pequenas moléculas que têm como alvo pré-mRNA contendo uma ou mais mutações e/ou estruturas de RNA secundárias ou terciárias aberrantes em sítios de splice ou regiões BP. Em algumas modalidades, a presente revelação fornece métodos e agentes de ligação a pequenas moléculas que têm como alvo pré-mRNA contendo uma ou mais mutações e/ou estruturas de RNA secundárias ou terciárias aberrantes em outros elementos reguladores, por exemplo, ESEs, ESSs, ISEs e ISSs.
[0708] Em algumas modalidades, splicing em uma sequência de sitio de splice de um polinucleotídeo de células primárias é modulado. Em algumas modalidades, splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo de células de um tumor é modulado. Em algumas modalidades, o SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice críptica. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de sítio de splice de um polinucleotídeo. Em algumas modalidades, em que o polinucleotídeo é transcrito a partir do gene. Em algumas modalidades, o SMSM modula a inclusão de éxon no polinucleotídeo e o splicing da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, o SMSM modula a inclusão de pseudoexons no polinucleotídeo e splicing da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, o SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice críptica de um polinucleotídeo.
[0709] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing impedindo, inibindo ou reduzindo o splicing do polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing impedindo, inibindo ou reduzindo o splicing na sequência do sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM diminui a afinidade de um componente de complexo de splicing com o polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM diminui a afinidade de um componente de complexo de splicing com o polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sitio de splice ou a jusante da sequência de sitio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM inibe ou reduz uma taxa de catálise de splicing do polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM inibe ou reduz uma taxa de catálise de splicing do polinucleotídeo na sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta o impedimento estérico entre um componente de complexo de splicing e o polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta o impedimento estérico entre um componente de complexo de splicing e o polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sítio de splice ou a jusante da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta o impedimento estérico entre um primeiro componente de complexo de splicing e um segundo componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, um SMSM impede, inibe, interrompe ou reduz a ligação de um primeiro componente de complexo de splicing e um segundo componente de complexo de splicing.
[0710] Em algumas modalidades, um SMSM diminui a afinidade de um primeiro componente de complexo de splicing com um segundo componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, um SMSM impede, inibe, interrompe ou reduz a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM impede, inibe, interrompe ou reduz a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sítio de splice ou a jusante da sequência de sítio de splice.
[0711] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing promovendo ou aumentando o splicing do polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing promovendo ou aumentando o splicing da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta a afinidade de um componente de complexo de splicing com o polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta a afinidade de um componente de complexo de splicing com o polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, a montante da sequência de sítio de splice ou a jusante da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta uma taxa de catálise de splicing do polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta uma taxa de catálise de splicing do polinucleotídeo na sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM diminui ou reduz o impedimento estérico entre um componente de complexo de splicing e o polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM diminui o impedimento estérico entre um componente de complexo de splicing e o polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, 1 a 1.000 nucleobases básicas a montante da sequência de sítio de splice ou 1 a 1.000 nucleobases a jusante da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM diminui ou reduz o impedimento estérico entre um primeiro componente de complexo de splicing e um segundo componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, um SMSM promove ou aumenta a ligação de um primeiro componente de complexo de splicing e um segundo componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, um SMSM aumenta a afinidade de um primeiro componente de complexo de splicing com um segundo componente de complexo de splicing. Em algumas modalidades, um SMSM promove ou aumenta a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo. Em algumas modalidades, um SMSM promove ou aumenta a ligação de um componente de complexo de splicing ao polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, 1 a 1.000 nucleobases a montante da sequência de sítio de splice ou 1-1.000 nucleobases a jusante da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM se liga a um componente de complexo de splicing, o polinucleotídeo, ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, um SMSM se liga ao polinucleotídeo na sequência de sítio de splice, 1 a 1.000 nucleobases a montante da sequência de sítio de splice ou 1 a 1.000 nucleobases a jusante da sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, um SMSM modula estruturalmente um componente de complexo de splicing, o polinucleotídeo ou ambos. Em algumas modalidades, um SMSM promove ou aumenta o impedimento estérico, blindagem estérica, atração estérica, cruzamento de cadeias, repulsões estéricas, inibição estérica de ressonância, inibição estérica de protonação ou uma combinação dos mesmos do polinucleotídeo, um componente de complexo de splicing ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a ligação de um SMSM a um polinucleotídeo ou um componente de complexo de splicing diminui a estabilidade conformacional de uma sequência de sítio de splice. Em algumas modalidades, a ligação de um SMSM a um polinucleotídeo aumenta a estabilidade conformacional de uma sequência de sítio de splice.
[0712] Em algumas modalidades, um SMSM modula o salto de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode inibir o salto de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode promover o salto de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sitio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada ao salto de éxon do polinucleotídeo, tal como um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada ao salto de éxon aberrante do polinucleotídeo, tal como um pré-mRNA.
[0713] Em algumas modalidades, um SMSM modula a inclusão de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode inibir a inclusão de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode promover a inclusão de éxon de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada à inclusão de éxon do polinucleotídeo, tal como um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada à inclusão de éxon aberrante do polinucleotídeo, tal como um pré-mRNA.
[0714] Em algumas modalidades, um SMSM modula degradação mediada sem sentido (NMD) de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode inibir degradação mediada sem sentido (NMD) de um polinucleotídeo-alvo, tai como um pré-mRNA ou um mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sitio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada à NMD do polinucleotídeo, tai como um pré-mRNA ou um mRNA.
[0715] Em algumas modalidades, um SMSM modula a inclusão de íntron de um polinucleotídeo-alvo. Por exemplo, um SMSM pode inibir a inclusão de íntron de um polinucleotídeo-alvo, tai como um pré-mRNA. Por exemplo, um SMSM pode promover a inclusão de íntron de um polinucleotídeo-alvo, tal como um pré-mRNA. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada à inclusão de íntron do polinucleotídeo. Em algumas modalidades, o SMSM modula o splicing em uma sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo em uma célula de um indivíduo com uma doença ou condição associada à inclusão de íntron do polinucleotídeo.
[0716] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing em sequência de sítio de splice de um polinucleotídeo, tai como um pré-mRNA, em que a sequência de sítio de splice compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em NGAgunvrn, , NHAdddddn, NNBnnnnnn e NHAddmhvk; em que N ou n é A, U, G ou C; Β é C, G ou U; H ou h é A, C ou U; d é a, g ou u; mé a ou c; r é a ou g; v é a, c ou g; k é g ou u.
[0717] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sítio de splice que compreende uma sequência NNBgunnnn, NNBhunnnn ou NNBgvnnnn. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência NNBgurrrn, NNBguwwdn, NNBguvmvn, NNBguvbbn, NNBgukddn, NNBgubnbd, NNBhunngn, NNBhurmhd ou NNBgvdnvn; em que N ou n é A, U, G ou C; Β é C, G ou U; H ou h é A, C ou U; d é a, g ou u; m é a ou c; r é a ou g; v é a, c ou g; k é g ou u.
[0718] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C ou Tabela 2D. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência AAAauaagu, AAAguaagua, AAAguacau, AAAguaga, AAAguaug, AAAguaugu, AAAgugagug, AAAgugaguu, AACaugagga, AACguaagu, AACgugacu, AACgugauu, AAGaugagc, AAGauuugu, AAGgaugag, AAGgcaaaa, AAGgcaaggg, AAGgcaggga, AAGggaaaa, AAGguaugag, AAGguaaag, AAGguaaau, AAGguaaca, AAGguaacaug, AAGguaacu, AAGguaagcc, AAGguaagcg, AAGguaauaa, AAGguaaugu, AAGguaaugua, AAGguacag, AAGguacgg, AAGguacug, AAGguagacc, AAGguagag, AAGguagcg, AAGguagua, AAGguagug, AAGguauac, AAGguauau, AAGguauauu, AAGguauca, AAGguaucg, AAGguaucu, AAGguauga, AAGguaugg, AAGguaugu, AAGguauuu, AAGgucaag, AAGgucaau, AAGgucucu, AAGgucuggg, AAGgucugu, AAGgugaccuu, AAGgugagau, AAGgugaguc, AAGgugccu, AAGgugggcc, AAGgugggu, AAGguggua, AAGguguau, AAGgugucu, AAGgugugc, AAGgugugu, AAGguguua, AAGguuaag, AAGguuagc, AAGguuagug, AAGguuca, AAGguuuaa, AAGguuuau, AAGguuugg, AAGuuaagg, AAGuuaaua, AAGuuagga, AAUguaaau, AAUguaagc, AAUguaagg, AAUguaauu, AAUguaugu, AAUgugagu, AAUgugugu, ACAguaaau, ACAgugagg, ACAguuagu, ACAguuuga, ACCaugagu, ACCgugaguu, ACGauaagg, ACGcuaagc, ACGguagcu, ACGgugaac, ACGgugagug, ACUguaaau, ACUguaacu, ACUguauu, ACUgugagug, AGAguaag, AGAguaaga, AGAguaagg, AGAguaagu, AGAguagau, AGAguaggu, AGAgugaau, AGAgugagc, AGAgugagu, AGAgugcgu, AGCguaagg, AGCguaagu, AGCguacgu, AGCguaggu, AGCgugagu, AGGguaauga, AGGguagac, AGGguauau, AGGgugaau, AGGgugagg, AGGgugauc, AGGgugcaa, AGGgugucu, AGUguaagc, AGUguaagu, AGUgugagu, AGUgugaguac, AUAgucagu, AUAgugaau, AUCgguaaaa, AUCguuaga, AUGguaaaa, AUGguaacc, AUGguacau, AUGguaugu, AUGguauuu, AUGgucauu, AUGgugacc, AUUuuaagc, CAAGguaccu, CAAguaaac, CAAguaacu, CAAguaagc, CAAguaagg, CAAguaagua, CAAguaau, CAAguaugu, CAAguauuu, CAAgugaaa, CAAgugagu, CACgugagc, CACguuggu, CAGauaacu, CAGaugagg, CAGaugagu, CAGauuggu, CAGcugugu, CAGgcgagu, CAGgcuggu, CAGguaaggc, CAGguaaaa, CAGguaaag, CAGguaaccuc, CAGguaagac, CAGguaagc, CAGguaagu, CAGguaau, CAGguaaugc, CAGguaaugu, CAGguacaa, CAGguacag, CAGguacagu, CAGguaccg, CAGguacug, CAGguagag, CAGguagcaa, CAGguaggagg, CAGguaggc, CAGguagguga, CAGguagua, CAGguagug, CAGguauag, CAGguauau, CAGguaucc, CAGguauga, CAGguaugg, CAGguaugu, CAGguauug, CAGgucaau, CAGgucagug, CAGgucuga, CAGgucugga, CAGgucuggu, CAGgucuuu, CAGgugacu, CAGgugagc, CAGgugaggg, CAGgugagugg, CAGgugaua, CAGgugcac, CAGgugcag, CAGgugcgc, CAGgugcug, CAGguggau, CAGgugggug, CAGgugua, CAGguguag, CAGguguau, CAGguguga, CAGgugugu, CAGguuaag, CAGguugau, CAGguugcu, CAGguuggc, CAGguuguc, CAGguuguu, CAGguuuagu, CAGguuugc, CAGguuugg, CAGuuuggu, CAUggaagac, CAUguaau, CAUguaauu, CAUguaggg, CAUguauuu, CCAguaaac, CCAgugaga, CCGguaacu, CCGgugaau, CCGgugacu, CCGgugagg, CCUauaagu, CCUaugagu, CCUguaaau, CCUguaagc, CCUguaauu, CCUgugaau, CCUgugauu, CGAguccgu, CGCauaagu, CGGguaau, CGGguauau, CGGguaugg, CGGgucauaauc, CGGgugggu, CGGguguau, CGGgugugu, CGUgugaau, CGUgugggu, CUGguauga, CUGgugaau, CUGgugaguc, CUGgugaguuc, CUGgugcau, CUGgugcuu, CUGguguga, CUGguuugu, CUGuuaag, CUGuugaga, GAAggaagu, GAAguaaac, GAAguaaau, GAAgucugg, GAAguggg, GAAgugugu, GAAuaaguu, GACaugagg, GAGaucugg, GAGaugagg, GAGCAGguaagcu, GAGcugcag, GAGgcaggu, GAGgcgugg, GAGgcuccc, GAGguggguuu, GAGguaaag, GAGguaaga, GAGguaagag, GAGguaagcg, GAGguaauac, GAGguaauau, GAGguaaugu, GAGguacaa, GAGguagga, GAGguauau, GAGguauga, GAGguaugg, GAGgucuggu, GAGgugaag, GAGgugagg, GAGgugca, GAGgugccu, GAGgugcggg, GAGgugcug, GAGguguac, GAGguguau, GAGgugugc, GAGgugugu, GAGuuaagu, GAUaugagu, GAUguaaau, GAUguaagu, GAUguaauu, GAUguaua, GAUgugacu, GAUgugagg, GAUgugauu, GCAguaaau, GCAguagga, GCAguuagu, GCGaugagu, GCGgagagu, GCGguaaaa, GCGguaauca, GCGgugacu, GCGgugagca, GCGgugagcu, GCGguggga, GCGguuagu, GCUguaaau, GCUguaacu, GCUguaauu, GGAguaag, GGAguaagg, GGAguaagu, GGAguaggu, GGAgugagu, GGAguuagu, GGCguaagu, GGCgucagu, GGGauaagu, GGGaugagu, GGGguaagug, GGGguaaau, GGGguaacu, GGGguacau, GGGgugacg, GGGgugagug, GGGgugcau, GGGguuggga, GGUguaagu, GUAgugagu, GUGguaagu, GUGguaagug, GUGgugagc, GUGgugagu, GUGgugauc, GUGguugua, GUUauaagu, GUUCUCAgugug, GUUguaaau, GUUuugguga, uAGCAGguaagca, uGGguaccug, UAGaugcgu, UAGguaaag, UAGguaccc, UAGguaggu, UAGguauau, UAGguauc, UAGguauga, UAGguauug, UAGgucaga, UAGgugcau, UAGguguau, UCAguaaac, UCAguaaau, UCAguaagu, UCAgugauu, UCAgugug, UCCgugaau, UCCgugacu, UCCgugagc, UCUguaaau, UGAgugaau, UGGauaagg, UGGguaaag, UGGguacca, UGGguaugc, UGGguggau, UGGguggggg, UGGgugggug, UGGgugugg, UGGguuagu, UGUgcaagu, UGUguaaau, UGUguacau, UUAguaaau, UUCauaagu, UUGguaaag, UUGguaaca, UUGguacau,UUGguagau, UUGgugaau, UUGgugagc, UUUauaagc ou UUUgugagc.
[0719] ABCA4, ABCA9, ABCB1, ABCB5, ABCC9, ABCD1, ACADL, ACADM, ACADSΒ, ACSS2, ACTG2, ADA, ADAL, ADAM10, ADAM15, ADAM22, ADAM32, ADAMTS12, ADAMTS13, ADAMTS20, ADAMTS6, ADAMTS9, ADCY10, ADCY3, ADCY8, ADRBK2, AFP, AGL, AGT, AHCTF1, AKAP10, AKAP3, AKNA, ALAS1, ALB, ALDH3A2, ALG6, ALS2CL, AMBRA1, ANGPTL3, ANK3, ANTXR2, ANXA10, ANXA11, AP2A2, AP4E1, APC, APOA1, APOB, APOC3, APOH, AR, ARFGEF1, ARFGEF2, ARHGAP1, ARHGAP18, ARHGAP26, ARHGAP8, ARHGEF18, ARHGEF2, ARPC3, ARS2, ASH1L, ASNSD1, ASPM, ATAD5, ATG16L2, ATG4A, ATM, ATP11C, ATP13A5, ATP6V1G3, ATP7A, ATP7B, ATR, ATXN2, ATXN3, B2M, B4GALNT3, BBOX1, BBS4, BCL2-like 11 (BIM) , BCS1L, BMP2K, BMPR2, BRCA1, BRCA2, BRCC3, BRSK1, BRSK2, BTAF1, BTK, C10orf137, C11orf30, C11orf65, C11orf70, C12orf51, C13orf1, C13orf15, C14orf101, C14orf118, C15orf29, C15orf42, C15orf60, C16orf33, C16orf38, C16orf48, C18orf8, C19orf42, C1orf107, C1orf114, C1orf130, C1orf149, C1orf27, C1orf71, C1orf87, C1orf94, C1R, C20orf74, C21orf70, C2orf55, C3, C3orf23, C4orf18, C4orf29, C5orf34, C6orf118, C8B, C8orf33, C9orf114, C9orf43, C9orf86, C9orf98, CA11 CAB39, CACHD1, CACNA1B, CACNA1C, CACNA1G, CACNA1H, CACNA2D1, CALCA, CALCOCO2, CAMK1D, CAMKK1, CAPN3, CAPN9, CAPSL, CARKD, CAT, CBX1, CBX3, CCDC102B, CCDC11, CCDC131, CCDC146, CCDC15, CCDC18, CCDC5, CCDC81, CD1B, CD33, CD4, CD4 6, CDC14A, CDC16, CDC2L5, CDC42BPB, CDCA8, CDH1, CDH10, CDH11, CDH23, CDH24, CDH8, CDH9, CDK5RAP2, CDK6, CDK8, CEL, CELSR3, CENPI, CENTB2, CENTG2, CEP110, CEP170, CEP192, CETP, CFB, CFH, CFTR, CGN, CGNL1, CHAF1A, CHD9, CHIC2, CHL1, CHM, CHN1, CLCN1, CLEC16A, CLIC2, CLINT1, CLK1, CLPB, CLPTM1, CMIP, CMYA5, CNGA3, CNOT1,CNOT7, CNTN6, COG3, COL11A1, COL11A2, COL12A1, COL14A1, COL15Α1, COL17Α1, COL19A1, COL1A1, COL1A2, COL22A1, COL24A1, COL25A1, COL29A1, COL2A1, COL3A1, COL4A1, COL4A2, COL4A5, COL4A6, COL5A2, COL6A1, COL7A1, COL9A1, COL9A2, COLQ, COMTD1, COPA, COPB2, COPS7B, COPZ2, CPSF2, CPXM2, CR1, CREBBP, CRKRS, CRYZ, CSE1L, CSTB, CSTF3, CT45-6, CUBN, CUL4B, CUL5, CXorf41, CYBB, CYFIP2, CYP17, CYP19, CYP24A1, CYP27A1, CYP3A4, CYP3A43, CYP3A5, CYP4F2, CYP4F3, DAZ2, DCBLD1, DCC, DCTN3, DCUN1D4, DDA1, DDEF1, DDX1, DDX24, DDX4, DENND2D, DEPDC2, DES, DGAT2, DHFR, DHRS7, DHRS9, DIP2A, DMD, DMTF1, DNAH3, DNAH8, DNAI1, DNAJA4, DNAJC13, DNAJC7, DNTTIP2, DOCK10, DOCK11, DOCK4, DPP3, DPP4, DPY19L2P2, DSCC1, DUX4, DVL3, DYNC1H1, DYSF, ECM2, EDEM3, EFCAB3, EFCAB4B, EFNA4, EFTUD2, EGFR, EIF3A, ELA1, ELA2A, EMCN, EMD, EML5, ΕΝΡΡ3, EPB41L5, ΕΡΗΑ3, ΕΡΗΑ4, ΕΡΗΒ1, ΕΡΗΒ2, ΕΡΗΒ3, EPS15, ERBB4, ERCC1, ERCC8, ERGIC3, ERMN, ERMP1, ERN1, ERN2, ETS2, ETV4, EVC2, ΕΧΟ1, EXOC4, F11, F13A1, F3, F5, F7, F8, FAH, FAM134A, FAM13A1, FAM13B1, FAM13C1, FAM161A, FAM176B, FAM184A, FAM19A1, FAM20A, FAM23B, FAM65C, FANCA, FANCC, FANCG, FANCM, FANK1, FAR2, FBN1, FBXO15, FBXO18, FBXO38, FCGBP, FECH, FEZ2, FGA, FGD6, FGFR1OP, FGFR1OP2, FGFR2, FGG, FGR, FIX, FKBP3, FLJ35848, FLJ36070, FLNA, FN1, FNBP1L, FOLH1, FOXM1, FRAS1, FUT9, FZD3, FZD6, GAB1, GALC, GALNT3, GAPDH, GART, GAS2L3, GBA, GBGT1, GCG, GCGR, GCK, GFM1, GH1, GHR, GHV, GJA1, GLA, GLT8D1, GNAS, GNB5, GOLGB1, GOLT1A, GOLT1B, GPATCH1, GPR158, GPR160, GRAMD3, GRHPR, GRIA1, GRIA3, GRIA4, GRIN2B, GRM3, GRM4, GRN, GSDMB, GSTCD, GSTO2, GTPBP4, HADHA, HBA2, HBB, HCK, HDAC3, HDAC5, HDX, HEPACAM2, HERC1, HEXA, HEXB, HIPK3, HLA-DPB1, HLA-G, HLCS, HLTF, HMBS, HMGCL, HNF1A, HNRNPH1, HP1BP3, HPGD, HPRT1, HPRT2, HSF2BP, HSF4, HSPA9, HSPG2, ΗΤΤ, HXΑ, ICA1, IDH1, IDS, IFI44L, ΙΚΒΚΑΡ, IL1R2, IL5RA, IL7RA, ΙΜΜΤ, INPP5D, INSR, INTS3, INTU, ΙΡO4, ΙΡO8, IQGAP2, ISL2, ITFG1, ITGAL, ITGB1, ITGB2, ITGB3, ITGB4, ΙΤΙΗ1, ITPR2, IWS1, JAG1, JAK1, JAK2, JMJD1C, KALRN, KATNAL2, KCNN2, KCNT2, ΚΙΑΑ0256, ΚΙΑΑ0528, ΚΙΑΑ0564, ΚΙΑΑ058 6, ΚΙΑΑ1033, ΚΙΑΑ1166, ΚΙΑΑ1219, ΚΙΑΑ1409, ΚΙΑΑ1622, ΚΙΑΑ1787, KIF15, KIF16B, KIF3B, KIF5A, KIF5B, KIF9, ΚΙΝ, KIR2DL5B, KIR3DL2, KIR3DL3, KLF12, KLF3, KLHL20, KLK12, KLKB1, ΚΡΝΑ5, KRAS, KREMEN1, KRIT1, KRT5, KRTCAP2, L1CAM, L3MBTL, L3MBTL2, LACE1, LAMA1, LAMA2, LAMA3, LAMB1, LARP7, LDLR, LENG1, LGALS3, LGMN, LHCGR, LHX6, LIMCH1, LIMK2, LMBRD1, LMBRD2, LMLN, LMNA, LMO2, LOC389634, LOC390110, LPA, LPCAT2, LPL, LRP4, LRPPRC, LRRC19, LRRC42, LRRK2, LRWD1, LUM, LVRN, LYN, LYST, MADD, MAGI1, MAGT1, MALT1, ΜΑΡ2Κ1, ΜΑΡ4Κ4, ΜΑΡΚ8ΙΡ3, ΜΑΡΚ9, ΜΑΡΤ, ΜΑΤΝ2, MCF2L2, MCM6, MDGA2, MEGF10, MEGF11, ΜΕΜO1, MET, ΜGAM, ΜGAT4Α, MGAT5, MGC16169, MGC34774, ΜΙΒ1, MIER2, MKKS, MKL2, MLANA, MLH1, MLL5, MLX, MME, MPDZ, ΜΡΙ, MRAP2, MRPL11, MRPL39, MRPS28, MRPS35 , MS4A13, MSH2, MSMB, MST1R, MTDH, MTF2 , MTHFR, MTIF2, MUC2, MUT, MVK , ΜΥΒ, MYCBP2, ΜΥΗ2, ΜΥO19, ΜΥO3Α, ΜΥ09Β, MYOM2, ΜΥΟΜ3, NAG, NARG1, NARG2, NCOA1, NDC80, NDFIP2 , NEB, NEDD4, ΝΕΚ1, ΝΕΚ11, ΝΕΚ5, NF1 , NF2, NFE2L2, NFIA, NFIX, NFKBIL2, NFRKB, ΝΚΑΙΝ2, ΝΚΑΡ, NLRC3, NLRC5, NLRP13, NLRP7, NLRP8, ΝΜΕ7, NOL10, NOS1, NOS2A, NOTCH1, ΝΡΜ1, NR1H4, NR4A3, NRXN1, NSMAF, NSMCE2, NT5C, NT5C3, NUBP1, NUBPL, NUDT5, NLMA1, NUP160, NUP88, NUP98, NUPL1, ΟΑΤ, OBFC2A, OBFC2B, OLIG2, ΟΡΑ1, ΟΡΝ4, ΟΡΤΝ, OSBPL11, OSBPL8, OSGEPL1, OTC, ΟΧΤ, PADI4, PAH, ΡΑΝ2, PAPOLG, PARD3, PARVB, PAWR, PBGD, PBRM1, PCBP4, PCCA, PCNX, PCOTH, PDCD4, PDE10A, PDE8B, PDH1, PDIA3, PDK4, PDLIM5, PDS5A, PDS5B, PDXK, PDZRN3, PELI2, PGK1, PGM2, PHACTR4, PHEX, PHKB, PHLDB2, PHTF1, PIAS1, PIGF, PIGN, PIGT, PIK3C2G, PIK3CG, PIK3R1, PIP5K1A, PITRM1, PIWIL3, PKD1, PKD2, PKHD1L1, PKIB, PKLR, PKM1, PKM2, PLCB1, PLCB4, PLCG1, PLD1, PLEKHA5, PLEKHA7, PLEKHM1, PLKR, PLXNC1, PMFBP1, POLN, POLR3D, POMT2, POSTN, PPFIA2, PPP1R12A, PPP3CB, PPP4C, PPP4R1L, PPP4R2, PRAME, PRC1, PRDM1, PRIMI, PRIM2, PRKAR1A, PRKCA, PRKG1, PRMT7, PROC, PROCR, PRODH, PROSC, PROX1, PRPF40B, PRPF4B, PRRG2, PRUNE2, PSD3, PSEN1, PSMAL, PTCH1, PTEN, PTK2, PTK2B, PTPN11, PTPN22, PTPN3, PTPN4, PTPRD, PTPRK, PTPRM, PTPRN2, PTPRT, PUS10, PVRL2, PYGM, QRSL1, RAB11FIP2, RAB2 3, RALBPl, RALGDS, RB1CC1, RBL2, RBM3 9, RBM4 5, REC8, RFC4, RFT1, RFTN1, RHPN2, RIF1, RLN3, RMND5B, RNF11, RNF32, RNFT1, RNGTT, ROCK1, ROCK2, RP1, RP11-265F1, RP13-36C9, RP6KA3, RPAP3, RPGR, RPN1, RPS6KA6, RRM1, RRP1B, RSK2, RTEL1, RTF1, RUFY1, RYR3, SAAL1, SAE1, SBCAD, SCN11A, SCN1A, SCN2A, SCN3A, SCN4A, SCN5A, SCN8A, SCNA, SCO1, SCYL3, SDK1, SDK2, SEC24A, SEC24D, SEC31A, SEL1L, SENP3, SENP6, SENP7, SERPINA1, SETD3, SETD4, SEZ 6, SFRS12, SGCE, SGOL2, SGPL1, SH2D1A, SH3BGRL2, SH3PXD2A, SH3PXD2B, SH3RF2, SH3TC2, SIPA1L2, SIPA1L3, SIVA1, SKAP1, SKIV2L2, SLC12A3, SLC13A1, SLC22A17, SLC25A14, SLC28A3, SLC38A1, SLC38A4, SLC39A10, SLC4A2, SLC6A11, SLC6A13, SLC6A6, SLC6A8, SMARCA1, SMARCA5, SMC5, SMN2, SMTN, SNCAIP, SNRK, SNRP70, SNX6, SOD1, SPAG9, SPATA13, SPATA4, SPATS1, SPECC1L, SPINK5, SPP2, SPTA1, SRP72, SSX3, SSX5, SSX9, STAG1, STAMBPL1, STARD6, STAT 6, STK17B, STX3, STXBP1, SUCLG2, SULF2, SUPT16H, SUPT6H, SV2C, SYCP1, SYCP2, SYT6, SYTL5 TAF2, TBC1D26, TBC1D29, TBC1D3G, TBC1D8B, TBCEL, TBK1 TBPL1, TCEB3, TCF12, TCP11L2, TDRD3, TEAD1, TECTB, ΤΕΚ, ΤΕΤ2, TFRC, TG, TGM7, TGS1, THOC2, ΤΙAL1, ΤΙΑΜ2, ΤΙΜΜ50, TLK2, TM4SF20, TM6SF1, ΤΜΕΜ156, ΤΜΕΜ194Α, ΤΜΕΜ27, ΤΜΕΜ77, TMF1, TMPRSS6, TNFRSF10A, TNFRSF10B, TNFRSF8, ΤΝΚ2, TNKS, TNKS2, TOM1L1, TOM1L2, ΤΟΡ2Β, ΤΡ53, ΤΡ53ΒΡ2, ΤΡ53Ι3, ΤΡ53INP1, ΤΡ63, TRAF3IP3, TRAPPC2, TRIM44, TRIM65, TRIML1, TRIML2, TRPM3, TRPM5, TRPM7, TSC1, TSC2, TSHB, TSPAN7, TTC17, TTLL5, TTLL9, ΤΤΝ, ΤΤPAL, TTR, TUSC3, TXNDC10, UBE3A, UCK1, UGT1A1, UHRF1BP1, UNC45B, UNC5C, USH2A, USP1, USP38, USP39, USP6, UTP15, UTP18, UTP20, UTRN, UTX, UTY, UVRAG, UXT, VAPA, VPS29, VPS35, VPS39, VTI1A, VTI1B, VWA3B, WDFY2, WDR16, WDR17, WDR26, WDR44, WDR67, WDTC1, WRNIP1, WWC3, XRN1, XRN2, XX-FW88277, YARS, YGM, ΖΒΤΒ2 O, ZC3H7A, ZC3HAV1, ZC3HC1, ZFYVE1, ZNF114, ZNF169, ZNF326, ZNF365, ZNF37A, ZNF618 ou um ZWINT
[0720] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2A. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência AAAauaagu, , AAAguaagua, AAAguacau, AAAguaga, AAAguaug, AAAguaugu, AAAgugagug, AAAgugaguu, AACaugagga, AACguaagu, AACgugacu, AACgugauu, AAGaugagc, AAGauuugu, AAGgaugag, AAGgcaaaa, AAGgcaaggg, AAGgcaggga, AAGggaaaa, AAGgtatgag, AAGguaaag, AAGguaaau, AAGguaaca, AAGguaacaug , AAGguaacu, AAGguaagcc, AAGguaagcg, AAGguaauaa, AAGguaaugu, AAGguaaugua , AAGguacag , AAGguacgg, AAGguacug, AAGguagacc, AAGguagag, AAGguagcg, AAGguagua, AAGguagug, AAGguauac, AAGguauau, AAGguauauu, AAGguauca, AAGguaucg, AAGguaucu, AAGguauga, AAGguaugg, AAGguaugu, AAGguauuu, AAGgucaag, AAGgucaau, AAGgucucu, AAGgucuggg, AAGgucugu, AAGgugaccuu, AAGgugagau, AAGgugaguc, AAGgugccu, AAGgugggcc, AAGgugggu, AAGguggua, AAGguguau, AAGgugucu, AAGgugugc, AAGgugugu, AAGguguua, AAGguuaag, AAGguuagc, AAGguuagug, AAGguuca, AAGguuuaa, AAGguuuau, AAGguuugg, AAGuuaagg, AAGuuaaua, AAGuuagga, AAUguaaau, AAUguaagc, AAUguaagg, AAUguaauu, AAUguaugu, AAUgugagu, AAUgugugu, ACAguaaau, ACAgugagg, ACAguuagu, ACAguuuga, ACCaugagu, ACCgugaguu, ACGauaagg, ACGcuaagc, ACGguagcu, ACGgugaac, ACGgugagug, ACUguaaau, ACUguaacu, ACUguauu, ACUgugagug, AGAguaaga, AGAguaagg, AGAguaagu, AGAguagau, AGAguaggu, AGAgugaau, AGAgugagc, AGAgugagu, AGAgugcgu, AGCguaagg, AGCguaagu, AGCguacgu, AGCguaggu, AGCgugagu, AGGguaauga, AGGguagac, AGGguauau, AGGgugaau, AGGgugagg, AGGgugauc, AGGgugcaa, AGGgugucu, AGUguaagc, AGUguaagu, AGUgugagu, AGUgugaguac, AUAgucagu, AUAgugaau, AUCgguaaaa, AUCguuaga, AUGguaaaa, AUGguaacc, AUGguacau, AUGguaugu, AUGguauuu, AUGgucauu, AUGgugacc, AUUuuaagc, CAAGguaccu, CAAguaaac, CAAguaacu, CAAguaagc, CAAguaagg, CAAguaagua, CAAguaau, CAAguaugu, CAAguauuu, CAAgugaaa, CAAgugagu, CACgugagc, CACguuggu, CAGauaacu, CAGaugagg, CAGauuggu, CAGcugugu, CAGgcuggu, CAGgtaaggc, CAGguaaaa, CAGguaaag, CAGguaaccuc, CAGguaagac, CAGguaagc, CAGguaagu, CAGguaau, CAGguaaugc, CAGguaaugu, CAGguacaa, CAGguacag, CAGguacagu, CAGguaccg, CAGguacug, CAGguagag, CAGguagcaa, CAGguaggagg, CAGguaggc, CAGguagguga, CAGguagua, CAGguagug, CAGguauag, CAGguauau, CAGguaucc, CAGguauga, CAGguaugg, CAGguaugu, CAGguauug, CAGgucaau, CAGgucagug, CAGgucuga, CAGgucugga, CAGgucuggu, CAGgucuuu, CAGgugagc, CAGgugaggg, CAGgugagugg, CAGgugaua, CAGgugcac, CAGgugcag, CAGgugcgc, CAGgugcug, CAGguggau, CAGgugggug, CAGgugua, CAGguguag, CAGguguau, CAGguguga, CAGgugugu, CAGguuaag, CAGguugau, CAGguugcu, CAGguuggc, CAGguuguc, CAGguuguu, CAGguuuagu, CAGguuugc, CAGguuugg, CAGuuuggu, CAUggaagac, CAUguaau, CAUguaauu, CAUguaggg, CAUguauuu, CCAguaaac, CCAgugaga, CCGguaacu, CCGgugaau, CCGgugacu, CCGgugagg, CCUauaagu, CCUaugagu, CCUguaaau, CCUguaagc, CCUguaauu, CCUgugaau, CCUgugauu, CGAguccgu, CGCauaagu, CGGguaau, CGGguauau, CGGguaugg, CGGgucauaauc, CGGgugggu, CGGguguau, CGGgugugu, CGUgugaau, CGUgugggu, CUGguauga, CUGgugaau, CUGgugaguc, CUGgugaguuc, CUGgugcau, CUGgugcuu, CUGguguga, CUGguuugu, CUGuuaag, CUGuugaga, GAAggaagu, GAAguaaac, GAAguaaau, GAAgucugg, GAAguggg, GAAgugugu, GAAuaaguu, GACaugagg, GAGaucugg, GAGaugagg, GAGCAGguaagcu, GAGcugcag, GAGgcaggu, GAGgcgugg, GAGgcuccc, GAGgtgggttt, GAGguaaag, GAGguaaga, GAGguaagag, GAGguaagcg, GAGguaauac, GAGguaauau, GAGguaaugu, GAGguacaa, GAGguagga, GAGguauau, GAGguauga, GAGguaugg, GAGgucuggu, GAGgugaag, GAGgugagg, GAGgugca, GAGgugccu, GAGgugcggg, GAGgugcug, GAGguguac, GAGguguau, GAGgugugc, GAGgugugu, GAGuuaagu, GAUaugagu, GAUguaaau, GAUguaagu, GAUguaauu, GAUguaua, GAUgugacu, GAUgugagg, GAUgugauu, GCAguaaau, GCAguagga, GCAguuagu, GCGaugagu, GCGgagagu, GCGguaaaa, GCGguaauca, GCGgugacu, GCGgugagca, GCGgugagcu, GCGguggga, GCGguuagu, GCUguaaau, GCUguaacu, GCUguaauu, GGAguaagg, GGAguaagu, GGAguaggu, GGAgugagu, GGAguuagu, GGCguaagu, GGCgucagu, GGGauaagu, GGGaugagu, GGGgtaagtg, GGGguaaau, GGGguaacu, GGGguacau, GGGgugacg, GGGgugagug, GGGgugcau, GGGguuggga, GGUguaagu, GUUCUCAgugug, UCAgugug, GUAgugagu, GUGguaagu, GUGguaagug, GUGgugagc, GUGgugagu, GUGgugauc, GUGguugua, GUUauaagu, GUUguaaau, GUUuugguga, UAGCAGguaagca, TGGgtacctg, UAGaugcgu, UAGguaaag, UAGguaccc, UAGguaggu, UAGguauau, UAGguauc, UAGguauga, UAGguauug, UAGgucaga, UAGgugcau, UAGguguau, UCAguaaac, UCAguaaau, UCAguaagu, UCAgugauu, UCCgugaau, UCCgugacu, UCCgugagc, UCUguaaau, UGAgugaau, UGGauaagg, UGGguaaag, UGGguacca, UGGguaugc, UGGguggau, UGGguggggg, UGGgugggug, UGGgugugg, UGGguuagu, UGUgcaagu, UGUguaaau, UGUguacau, UUAguaaau, UUCauaagu, UUGguaaag, UUGguaaca, UUGguacau, UUGguagau, UUGgugaau, UUGgugagc, UUUauaagc ou UUUgugagc.
[0721] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2B. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência AAAauaagu, AAGaugagc, AAGauuugu, AAGgaugag, AAGgcaaaa, AAGuuaagg, AAGuuaaua, AAGuuagga, ACCaugagu, ACGauaagg, ACGcuaagc, AGGguauau, AGGgugagg, AGGgugauc, AGGgugucu, AUGgugacc, AUUuuaagc, CAAgugagu, CACgugagc, CACguuggu, CAGauaacu, CAGaugagg, CAGaugagu, CAGauuggu, CAGcugugu, CAGgcgagu, CAGgcuggu, CAGgugacu, CAGguugau, CAGguugcu, CAGguuggc, CAGguuguu, CAGuuuggu, CAUguaggg, CAUguauuu, CCGgugaau, CCUauaagu, CCUaugagu, CCUgugaau, CGCauaagu, CGGguguau, CUGuuaag, CUGuugaga, GAAggaagu, GAAguaaau, GAAgucugg, GAAguggg, GAAgugugu, GAAuaaguu, GACaugagg, GAGaucugg, GAGaugagg, GAGgcaggu, GAGgcgugg, GAGgcuccc, GAGguaaga, GAGguagga, GAGgugagg, GAGuuaagu, GAUaugagu, GAUaugagu, GCAguagga, GCGaugagu, GCGgagagu, GCGgugacu, GCGguuagu, GCUguaacu, GGGaugagu, GUAgugagu, GUGgugagc, GUGgugauc, UAGaugcgu, UGGauaagg, UGGguacca, UGGguggau, UGGgugggug, UGUgcaagu, UUCauaagu, UUGguaaca, UUUauaagc ou UUUgugagc.
[0722] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2C ou Tabela 2D. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência NGAguaag.
[0723] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2C. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência AGAguaag.
[0724] Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência da Tabela 2D. Em algumas modalidades, um SMSM modula o splicing de uma sequência de sitio de splice que compreende uma sequência GGAguaag.
Tabela 2A - alvos Exemplificativos
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Tabela 2B - alvos Exemplificativos
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A Tabela 2C - alvos Exemplificativos com a sequência do sítio de splice AGAguaag
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A Conjunto do genoma de Homo sapiens (humano) GRCh37 (hg19) do Genome Reference Consortium
A Tabela 2D - Alvos de sítio de Splice SMSM Exemplificativos com sequência de sítios se splice GGAguaag
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A Conjunto do genoma de Homo sapiens (humano) GRCh37 (hg19) do Genome Reference Consortium
Métodos de Tratamento
[0725] As composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para o tratamento de uma doença ou transtorno humano associado ao splicing aberrante, como splicing de pré-mRNA aberrante. As composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para o tratamento de uma doença ou transtorno humano, modulando ο mRNA, como o pré-mRNA. Em algumas modalidades, as composições e métodos descritos no presente documento podem ser usados para o tratamento de uma doença ou transtorno humano, modulando o splicing de um ácido nucleico, mesmo quando esse ácido nucleico não é submetido a splicing de modo aberrante na patogênese da doença ou transtorno que está sendo tratado.
[0726] São fornecidos no presente documento métodos de tratamento de câncer ou uma doença ou condição não cancerígena em um mamífero com necessidade dos mesmos. O método pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um mamífero com um câncer ou uma doença ou uma condição não cancerígena. Em algumas modalidades, a presente revelação se refere ao uso de um SMSM como descrito no presente documento para a preparação de um medicamento para o tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão do câncer ou de uma doença ou uma condição não cancerígena. Em algumas modalidades, a presente revelação se refere ao uso de um modulador estérico, como descrito no presente documento para o tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão do câncer ou de uma doença ou condição não cancerígena.
[0727] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz no contexto da administração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição ou medicamento do mesmo, se refere a uma quantidade de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo administrada a um paciente que tem um efeito terapêutico e/ou efeito benéfico. Em certas modalidades especificas, uma quantidade eficaz no contexto da administração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição ou medicamento do mesmo a um paciente resulta em um, dois ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduz ou ameniza a gravidade de uma doença; (ii) atrasa o inicio de uma doença; (iii) inibe a progressão de uma doença; (iv) reduz a hospitalização de um indivíduo; (v) reduz a duração de hospitalização de um indivíduo; (vi) aumenta a sobrevivência de um indivíduo; (vii) melhora a qualidade de vida de um indivíduo; (viii) reduz o número de sintomas associados a uma doença; (ix) reduz ou ameniza a gravidade de um sintoma associado a uma doença; (x) reduz a duração de um sintoma associado a uma doença associada; (xi) previne a recorrência de um sintoma associado a uma doença; (xii) inibe o desenvolvimento ou o início de um sintoma de uma doença; e/ou (xiii) inibe a progressão de um sintoma associado a uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para restaurar a quantidade de um transcrito de RNA de um gene para a quantidade de transcrito de RNA detectável em pacientes saudáveis ou células de pacientes saudáveis. Em outras modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para restaurar a quantidade de isoforma de RNA e/ou isoforma de proteína do gene para a quantidade de isoforma de RNA e/ou isoforma de proteína detectável em pacientes saudáveis ou células de pacientes saudáveis.
[0728] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para diminuir a quantidade aberrante de um transcrito de RNA de um gene associado a uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para diminuir a quantidade da expressão aberrante de uma isoforma de um gene. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para resultar em uma alteração substancial na quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, transcrito de mRNA), variante de splicing alternativo ou isoforma.
[0729] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA) do gene que é benéfico para a prevenção e/ou tratamento de uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de uma variante de splicing alternativo de um transcrito de RNA do gene que é benéfica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de uma isoforma do gene que é benéfica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença.
[0730] Um método de tratamento de câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo pode compreender a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um método de tratamento de uma doença ou condição não cancerígena em um indivíduo em necessidade do mesmo pode compreender a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0731] Em algumas modalidades, a presente revelação se refere a um método para o tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão do câncer ou de uma doença ou condição não cancerígena, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um SMSM como descrito no presente documento a um indivíduo, em particular a um mamífero.
[0732] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz no contexto da administração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição ou medicamento do mesmo, se refere a uma quantidade de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo administrada a um paciente que tem um efeito terapêutico e/ou efeito benéfico. Em certas modalidades especificas, uma quantidade eficaz no contexto da administração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou composição ou medicamento do mesmo a um paciente resulta em um, dois ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduz ou ameniza a gravidade de uma doença; (ii) atrasa o inicio de uma doença; (iii) inibe a progressão de uma doença; (iv) reduz a hospitalização de um indivíduo; (v) reduz a duração de hospitalização de um indivíduo; (vi) aumenta a sobrevivência de um indivíduo; (vii) melhora a qualidade de vida de um indivíduo; (viii) reduz o número de sintomas associados a uma doença; (ix) reduz ou ameniza a gravidade de um sintoma associado a uma doença; (x) reduz a duração de um sintoma associado a uma doença associada; (xi) previne a recorrência de um sintoma associado a uma doença; (xii) inibe o desenvolvimento ou o início de um sintoma de uma doença; e/ou (xiii) inibe a progressão de um sintoma associado a uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para restaurar a quantidade de um transcrito de RNA de um gene para a quantidade de transcrito de RNA detectável em pacientes saudáveis ou células de pacientes saudáveis. Em outras modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para restaurar a quantidade de isoforma de RNA e/ou isoforma de proteína do gene para a quantidade de isoforma de RNA e/ou isoforma de proteína detectável em pacientes saudáveis ou células de pacientes saudáveis.
[0733] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para diminuir a quantidade aberrante de um transcrito de RNA de um gene associado a uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para diminuir a quantidade da expressão aberrante de uma isoforma de um gene. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para resultar em uma alteração substancial na quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, transcrito de mRNA), variante de splicing alternativo ou isoforma.
[0734] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA) do gene que é benéfico para a prevenção e/ou tratamento de uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de uma variante de splicing alternativo de um transcrito de RNA do gene que é benéfica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma quantidade eficaz para aumentar ou diminuir a quantidade de uma isoforma do gene que é benéfica para a prevenção e/ou tratamento de uma doença. Exemplos não limitativos de quantidades eficazes de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo são descritos no presente documento. Por exemplo, a quantidade eficaz pode ser a quantidade necessária para prevenir e/ou tratar uma doença associada à quantidade aberrante de um transcrito de mRNA do gene em um indivíduo humano. Em geral, a quantidade eficaz estará em uma faixa de cerca de 0,001 mg/kg/dia a cerca de 500 mg/kg/dia para um paciente com um peso em uma faixa de cerca de 1 kg a cerca de 200 kg. Espera-se que o indivíduo adulto típico tenha um peso médio em uma faixa entre cerca de 70 e cerca de 100 kg.
[0735] Em uma modalidade, um SMSM descrito no presente documento pode ser usado na preparação de medicamentos para o tratamento de doenças ou condições descritas no presente documento. Além disso, um método para o tratamento de qualquer uma das doenças ou condições descritas no presente documento em um indivíduo em necessidade de tal tratamento, pode envolver a administração de composições farmacêuticas que incluem pelo menos um SMSM descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável, do mesmo, em uma quantidade terapeuticamente eficaz a um indivíduo.
[0736] Em certas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser administrado para tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos. Em certas aplicações terapêuticas, as composições são administradas a um paciente que já sofre de uma doença ou condição, em uma quantidade suficiente para curar ou deter pelo menos parcialmente pelo menos um dos sintomas da doença ou condição. Quantidades eficazes para esse uso dependem da gravidade e evolução da doença ou condição, da terapia anterior, da situação de saúde do paciente, do peso e da resposta aos fármacos e do julgamento do médico responsável pelo tratamento. Quantidades terapeuticamente eficazes são opcionalmente determinadas por métodos incluindo, mas não limitados a, um ensaio clinico de escalonamento de dose. Em aplicações profiláticas, as composições que contêm um SMSM descrito no presente documento são administradas a um paciente suscetível a, ou de outro modo, sob o risco de, ter uma doença, transtorno ou condição particular. Em algumas modalidades, a dose do fármaco sendo administrado pode ser temporariamente reduzida ou temporariamente suspensa durante um certo período de tempo (isto é, uma "interrupção do fármaco"). As doses usadas para o tratamento humano adulto variam tipicamente entre 0,01 mg-5000 mg por dia ou entre cerca de 1 mg e cerca de 1000 mg por dia. Em algumas modalidades, uma dose desejada é convenientemente apresentada em uma dose única ou em doses divididas.
[0737] Para terapias de combinação descritas no presente documento, dosagens dos compostos coadministrados podem variar dependendo do(s) tipo(s) de cofármaco (s) empregado (s), do(s) fármaco (s) empregado(s) específico (s), da doença ou condição sendo tratada e assim por diante. Em modalidades adicionais, quando coadministrado com um ou mais outros agentes terapêuticos, o composto fornecido no presente documento é administrado simultaneamente ao um ou mais outros agentes terapêuticos, ou sequencialmente. Se a administração é simultânea, os múltiplos agentes terapêuticos podem ser, com fins exemplificativos apenas, fornecidos em uma forma unificada única ou em múltiplas formas.
Condições e Doenças
[0738] A presente revelação se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um SMSM descrito no presente documento para uso no tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão de uma doença, transtorno ou condição. Em algumas modalidades, a presente revelação se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um SMSM descrito no presente documento para uso no tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão de uma doença, transtorno ou condição da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D.
[0739] Um método de tratamento, prevenção ou atraso de uma doença ou condição não cancerígena pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com uma doença, transtorno ou condição da Tabela 2A, Tabela 2B, Tabela 2C e Tabela 2D.
[0740] Em algumas modalidades, a presente revelação se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um SMSM descrito no presente documento para uso no tratamento, prevenção e/ou atraso da progressão do câncer.
[0741] Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com um câncer líquido. Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com leucemia ou linfoma. Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com leucemia, leucemia mieloide aguda, câncer de cólon, câncer gástrico, degeneração macular, leucemia monocítica aguda, câncer de mama, carcinoma hepatocelular, distrofia dos cones e bastonetes, sarcoma alveolar de partes moles, mieloma, melanoma de pele, prostatite, pancreatite, câncer de pâncreas, retinite, adenocarcinoma, adenoidite, carcinoma adenoide cístico, catarata, degeneração da retina, tumor estromal gastrointestinal, granulomatose de Wegener, sarcoma, miopatia, adenocarcinoma da próstata, linfoma de Hodgkin, câncer de ovário, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoblástica aguda, carcinoma de células renais, carcinoma de células de transição, câncer colorretal, leucemia linfocítica crônica, linfoma anaplásico de células grandes, câncer de rim, câncer de mama, câncer cervical.
[0742] Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com um câncer sólido ou tumor sólido.
[0743] Em algumas modalidades, o tumor é selecionado do grupo que consiste em adenocarcinoma, melanoma (por exemplo, melanoma metastático), câncer de fígado (por exemplo, carcinoma hepatocelular, hepatoblastoma, carcinoma de fígado), câncer de próstata (por exemplo, adenocarcinoma de próstata e câncer de próstata independente de androgênio, câncer de próstata dependente de androgênio, carcinoma da próstata), sarcoma (por exemplo, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma), câncer do cérebro (por exemplo, glioma, um glioma maligno, astrocitoma, glioma do tronco encefálico, ependimoma, oligodendroglioma, tumor não glial, neurinoma acústico, craniofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pinocitoma, pinoblastoma, linfoma cerebral primário, astrocitoma anaplásico, astrocitoma pilocítico juvenil, uma mistura de elementos de oligodendroglioma e astrocitoma), câncer de mama (por exemplo, câncer de mama triplo negativo, câncer de mama metastático, carcinoma de mama, sarcoma de mama, adenocarcinoma, carcinoma lobular (células pequenas), carcinoma intradutal, câncer de mama medular, câncer de mama mucinoso, câncer de mama tubular, câncer de mama papilar, câncer de mama inflamatório), doença de Paget, doença de Paget juvenil, câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas com mutação KRAS, câncer de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células escamosas (carcinoma epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes, câncer de pulmão de células pequenas, carcinoma de pulmão), câncer de pâncreas (por exemplo, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina, tumor carcinoide, tumor de células das ilhotas, carcinoma de pâncreas), câncer de pele (por exemplo, melanoma de pele, carcinoma basocelular, carcinoma de células escamosas, melanoma, melanoma de disseminação superficial, melanoma nodular, melanoma maligno por lentigo, melanoma acralentiginoso, carcinoma de pele), câncer cervical (por exemplo, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma cervical), câncer de ovário (por exemplo, carcinoma epitelial ovariano, tumor limítrofe, tumor de células germinativas, tumor estroma, carcinoma ovariano), câncer de boca, câncer de sistema nervoso (por exemplo, câncer de sistema nervoso central), um tumor de células germinativas do CNS), metaplasia de células caliciformes, câncer de rim (por exemplo, câncer de células renais, adenocarcinoma, hipernefroma, tumor de Wilms, fibrossarcoma, câncer de células de transição (pelve renal e/ou útero), carcinoma de células renais, carcinoma renal), câncer de bexiga (por exemplo, carcinoma de células de transição, câncer de células escamosas, carcinossarcoma), câncer de estômago (por exemplo, fúngicos (polipoide), ulceração, disseminação superficial, disseminação por difusão, lipossarcoma, fibrossarcoma, carcinossarcoma), câncer uterino (por exemplo, câncer endometrial, carcinoma endometrial, sarcoma uterino), câncer de esôfago (por exemplo, câncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma adenoide cíctico, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamoso, sarcoma, melanoma, plasmocitoma, carcinoma verrucoso e carcinoma de células de esôfago), câncer de cólon (por exemplo, carcinoma do cólon), câncer de reto (por exemplo, câncer retal), câncer colorretal (por exemplo, carcinoma colorretal, câncer colorretal metastático, câncer colorretal não-polipose hereditário, câncer colorretal com mutação KRAS), câncer de vesícula biliar (por exemplo, adenocarcinoma, colangiocarcinoma, colangiocarcinoma papilar, colangiocarcinoma nodular, colangiocarcinoma difuso), câncer testicular (por exemplo, tumor germinal, seminoma, câncer testicular anaplásico, câncer testicular clássico, câncer testicular clássico (típico), câncer testicular espermatocitico, câncer testicular sem seminoma), carcinoma embrionário (por exemplo, carcinoma de teratoma, coriocarcinoma (tumor no saco vitelino), câncer gástrico (por exemplo, tumor estromal gastrointestinal, câncer de outros órgãos do trato gastrointestinal, carcinomas gástricos), câncer ósseo (por exemplo, sarcoma de tecido conjuntivo, sarcoma ósseo, osteossarcoma ósseo induzido por colesteatoma, doença óssea de Paget, osteossarcoma, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, tumor de células gigantes maligno, fibrossarcoma ósseo, cordoma, sarcoma periosteal, sarcoma de tecidos moles, angiossarcoma (hemangiossarcoma) fibrossarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiossarcoma, sarcoma alveolar de partes moles), lipossarcoma, linfoma giossarcoma, neurilemoma, rabdomiossarcoma, sarcoma sinovial, câncer de linfonodo (por exemplo, linfangioendoteliossarcoma), carcinoma adenoide cístico, câncer vaginal (por exemplo, carcinoma espinocelular, adenocarcinoma, melanoma), câncer vulvar (por exemplo, carcinoma de células escamosas), sarcoma, doença de Paget), câncer de outros órgãos reprodutivos, câncer de tireoide (por exemplo, câncer de tireoide papilar, câncer de tireoide folicular, câncer de tireoide medular, câncer de tireoide anaplásico, carcinoma de tireoide), câncer de glândula salivar (por exemplo, adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide), câncer ocular (por exemplo, melanoma ocular, melanoma da íris, melanoma coroide, melanoma do corpo ciliar, retinoblastoma), cânceres penianos, câncer bucal (por exemplo, carcinoma de células escamosas, câncer de base), câncer de faringe (por exemplo, câncer de células escamosas, câncer de faringe verrucoso), câncer de cabeça, câncer de pescoço, câncer de garganta, câncer de tórax, câncer de baço, câncer de músculo-esquelético, câncer de tecido subcutâneo, câncer adrenal, feocromocitoma, carcinoma adrenocortical, câncer da hipófise, doença de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia, diabetes insipidus, mixossarcoma, sarcoma osteogênico, endoteliossarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogênico, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, ependioma, glioma do nervo óptico, tumor neuroectodérmico primitivo, tumor rabdoide, câncer renal, glioblastoma multiforme, neurofibroma, neurofibromatose, câncer pediátrico, neuroblastoma, melanoma maligno, carcinoma da epiderme, policitemia vera, macroglobulinemia de Waldenstrom, gamopatia monoclonal de significado indeterminado, gamopatia monoclonal benigna, doença em cadeia pesada, tumor sólido pediátrico, sarcoma de Ewing, tumor de Wilms, carcinoma da epiderme, sarcoma de Kaposi relacionado ao HIV, rabdomiossarcoma, tecomas, arrenoblastomas, carcinoma endometrial, hiperplasia endometrial, endometriose, fibrossarcomas, coriocarcinoma, carcinoma da nasofaringe, carcinoma da laringe, hepatoblastoma, sarcoma de Kaposi, hemangioma, hemangioma cavernoso, hemangioblastoma, retinoblastoma, glioblastoma, Schwannoma, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, sarcoma osteogênico, leiomiossarcoma, carcinoma do trato urinário, proliferação vascular anormal associada a facomatoses, edema (como o associado a tumores cerebrais), síndrome de Meigs, adenoma hipofisário, tumor neuroectodérmico primitivo, blastoma medular e neuroma acústico.
[0744] Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com carcinoma basocelular, metaplasia de células caliciformes ou glioma maligno. Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com um câncer no fígado, mama, pulmão, próstata, cervical, útero, cólon, pâncreas, rim, estômago, bexiga, ovário ou cérebro.
[0745] Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com um câncer de cabeça, pescoço, olhos, boca, garganta, esôfago, peito, osso, pulmão, rim, cólon, reto ou outros órgãos do trato gastrointestinal, estômago, baço, músculo esquelético, tecido subcutâneo, próstata, mama, ovários, testículos ou outros órgãos reprodutivos, pele, tireoide, sangue, linfonodos, rim, fígado, pâncreas e cérebro ou sistema nervoso central.
[0746] Exemplos específicos de cânceres que podem ser prevenidos e/ou tratados de acordo com a presente revelação incluem, mas não se limitam aos seguintes: câncer renal, câncer dos rins, glioblastoma multiforme, câncer de mama metastático; carcinoma de mama; sarcoma de mama; neurofibroma; neurofibromatose; tumores pediátricos; neuroblastoma; melanoma maligno; carcinomas da epiderme; leucemias como, sem limitação, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemias mielocíticas agudas, como leucemias mieloblástica, promielocítica, mielomonocíticas, monocíticas, eritroleucemia e síndrome mioclodisplásica, leucemias crônicas como mas não limitadas a, leucemia mielocítica (granulocítica) crônica, leucemia linfocítica crônica, leucemia de células capilares; policitemia vera; linfomas como, mas não limitados a, doença de Hodgkin, doença de não-Hodgkin; mielomas múltiplos, como, mas não se limitando a, mieloma múltiplo latente, mieloma não secretor, mieloma osteosclerótico, leucemia de células plasmáticas, plasmocitoma solitário e plasmocitoma extramedular; macroglobulinemia de Waldenstrom; gamopatia monoclonal de significado indeterminado; gamopatia monoclonal benigna; doença da cadeia pesada; câncer ósseo e sarcomas do tecido conjuntivo, como, mas não se limitando a, sarcoma ósseo, doença óssea do mieloma, mieloma múltiplo, osteossarcoma ósseo induzido por colesteatoma, doença óssea de Paget, osteossarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor maligno de células gigantes, fibrossarcoma ósseo, cordoma, sarcoma periosteal, sarcomas de tecidos moles, angiossarcoma (hemangiossarcoma), lipossarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiossarcoma, lipossarcoma, sarcoma linfangio, neurilemoma, rabdomiossarcoma, e sarcoma sinovial; tumores do cérebro, como mas não se limitando a, glioma, astrocitoma, glioma do tronco cerebral, ependimoma, oligodendroglioma, tumor não glial, neurinoma acústico, craniofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pinocitoma, pinoblastoma e linfoma cerebral primário; câncer de mama incluindo, mas não se limitando a, adenocarcinoma, carcinoma lobular (pequenas células), carcinoma intradutal, câncer de mama medular, câncer de mama mucinoso, câncer de mama tubular, câncer de mama papilar, doença de Paget (incluindo doença de Paget juvenil) e câncer de mama inflamatório; câncer adrenal como, mas não se limitando a, feocromocitoma e carcinoma adrenocortical; câncer de tireoide, como, mas não se limitando a, câncer de tireoide papilar ou folicular, câncer de tireoide medular e câncer de tireoide anaplásico; câncer de pâncreas, como, mas não se limitando a, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina e tumor de células carcinoides ou das ilhotas; cânceres da hipófise, como, mas não se limitando a, doença de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia e diabetes insipius; cânceres oculares, como mas não se limitando a, melanoma ocular, como melanoma da íris, melanoma coroide e melanoma do corpo ciliar e retinoblastoma; cânceres vaginais como carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma e melanoma; câncer vulvar como carcinoma células escamosas, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma basocelular, sarcoma e doença de Paget; cânceres cervicais como, mas não se limitando a, carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma; cânceres uterinos como mas não se limitando a, carcinoma endometrial e sarcoma uterino; cânceres ovarianos, como mas não se limitando a, carcinoma epitelial ovariano, tumor limítrofe, tumor de células germinativas e tumor estromal; carcinoma cervical; cânceres esofágicos como mas não se limitando a câncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma adenoide cíctico, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamoso, sarcoma, melanoma, plasmacitoma, carcinoma verrucoso e carcinoma de células tipo grão de aveias (pequenas células); cânceres estomacais como, mas não se limitando a, adenocarcinoma, fúngico (polipoide), ulceração, disseminação superficial, disseminação por difusão, linfoma maligno, lipossarcoma, fibrossarcoma e carcinossarcoma; cânceres do cólon; câncer colorretal mutado por KRAS; carcinoma do cólon; cânceres retais; cânceres do fígado como mas não se limitando a, carcinoma hepatocelular e hepatoblastoma, cânceres da vesícula biliar como adenocarcinoma; colangiocarcinomas como mas não se limitando a, papilar, nodular e difuso; cânceres do pulmão, como câncer do pulmão de células não pequenas mutados por KRAS, câncer do pulmão de células não pequenas, carcinoma de células escamosas (carcinoma epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes e câncer do pulmão de células pequenas; carcinoma de pulmão; cânceres testiculares, como mas não se limitando a, tumor germinal, seminoma anaplásico, clássico (típico), espermatocítico, não seminoma, carcinoma embrionário, carcinoma de teratoma, coriocarcinoma (tumor do saco vitelino), cânceres da próstata, como mas não se limitando a, câncer da próstata independente de androgênio, câncer da próstata dependente de androgênio, adenocarcinoma, leiomiossarcoma e rabdomiossarcoma; cânceres penianos; cânceres orais como, mas não se limitando a carcinoma de células escamosas; cânceres basais; cânceres da glândula salivar, como mas não se limitando a, adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide e carcinoma adenoide cístico; cânceres da faringe como mas não se limitando a, câncer de células escamosas e verrucosos; cânceres da pele, como, mas não se limitando a, carcinoma basocelular, carcinoma de células escamosas e melanoma, melanoma de disseminação superficial, melanoma nodular, melanoma maligno de lentigo, melanoma acralentiginoso; cânceres dos rins, como mas não se limitando a, câncer de células renais, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrossarcoma, câncer de células de transição (pelve renal e/ou útero); carcinoma renal; tumor de Wilms; cânceres da bexiga, como mas não se limitando a, carcinoma de células transicionais, câncer de células escamosas, adenocarcinoma, carcinossarcoma. Além disso, os cânceres incluem mixossarcoma, sarcoma osteogênico, endoteliossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogênico, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar e adenocarcinomas papilares.
[0747] Um método de tratamento, prevenção ou atraso do câncer pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com um tumor sólido pediátrico, sarcoma de Ewing, tumor de Wilms, neuroblastoma, neurofibroma, carcinoma da epiderme, melanoma maligno, carcinoma cervical, carcinoma do cólon, carcinoma do pulmão, carcinoma renal, carcinoma da mama, sarcoma da mama, câncer de mama metastático, sarcoma de Kaposi relacionado ao HIV, câncer de próstata e câncer de próstata independente de androgênio, câncer de próstata dependente de androgênio, neurofibromatose, pulmão câncer, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas com mutação KRAS, melanoma maligno, melanoma, câncer de cólon, câncer colorretal com mutação KRAS, glioblastoma multiforme, câncer renal, câncer dos rins, câncer de bexiga, câncer de ovário, carcinoma hepatocelular, carcinoma da tireoide, rabdomiossarcoma, leucemia mieloide aguda ou mieloma múltiplo.
[0748] Em algumas modalidades, os cânceres e condições associados aos mesmos que são prevenidos e/ou tratados de acordo com a presente revelação são carcinomas de mama, carcinomas de pulmão, carcinomas gástricos, carcinomas de esôfago, carcinomas colorretais, carcinomas de fígado, carcinomas de ovário, tecomas, arrenoblastomas, carcinomas cervicais, carcinoma endometrial, hiperplasia endometrial, endometriose, fibrossarcomas, coriocarcinoma, câncer de cabeça e pescoço, carcinoma nasofaríngeo, carcinomas laríngeos, hepatoblastoma, sarcoma de Kaposi, melanoma, carcinomas de pele, hemangioma, hemangioma cavernoso, hemangioblastoma, carcinomas do pâncreas, retinoblastoma, astrocitoma, glioblastoma, Schwannoma, oligodendroglioma, meduloblastoma, neuroblastomas, rabdomiossarcoma, sarcoma osteogênico, leiomiossarcomas, carcinomas do trato urinário, carcinomas da tiroide, tumor de Wilm, carcinoma de células renais, carcinoma da próstata, proliferação vascular anormal associada a facomatoses, edema (como o associado a tumores cerebrais) ou síndrome de Meigs. Em uma modalidade específica, o câncer é um astrocitoma, um oligodendroglioma, uma mistura de elementos de oligodendroglioma e um astrocitoma, um ependimoma, um meningioma, um adenoma da hipófise, um tumor neuroectodérmico primitivo, um meduloblastoma, um linfoma do sistema nervoso central (CNS) ou um tumor de células germinativas do CNS.
[0749] Em algumas modalidades, o câncer tratado de acordo com a presente revelação é um neuroma acústico, um astrocitoma anaplásico, um glioblastoma multiforme ou um meningioma. Em algumas modalidades, o câncer tratado de acordo com a presente revelação é um glioma do tronco cerebral, um craniofaringioma, um ependioma, um astrocitoma pilocítico juvenil, um meduloblastoma, um glioma do nervo óptico, um tumor neuroectodérmico primitivo ou um tumor rabdoide.
[0750] Um método de tratamento, prevenção ou atraso de uma condição ou doença pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com leucemia mieloide aguda, ALS, doença de Alzheimer, doença de grãos argirofílicos, metabolismo do câncer, leucemia linfocítica crônica, carcinoma colorretal, degeneração corticobasal, fibrose cística, cardiomiopatia dilatada, distrofia muscular de Duchenne, síndrome de Ehlers-Danlos, câncer endometrial, doença de Fabry, disautonomia familiar, hipercolesterolemia familiar, hipoglicemia hiperinsulinêmica persistente familiar, demência frontotemporal, FTDP-17, doença de Gucher, glioma, tauopatia glial globular, HIV-1, doença de Huntington, síndrome da progeria de Hutchinson-Gilford, hipercolesterolemia, amaurose congênita de Leber, enxaqueca, esclerose múltipla, síndromes mielodisplásicas, NASH, câncer de pulmão de células não pequenas, de Niemann-Pick, dor, doença de Parkinson, fenilcetonúria, doença de Pick, paralisia supranuclear progressiva, atrofia muscular espinhal, ataxia espinocerebelosa tipo 2 ou doença de Wilson.
[0751] Um método de tratamento, prevenção ou atraso de uma doença ou condição não cancerígena pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS), fibrose cística, distrofia muscular, doença renal autossômica dominante policística, caquexia induzida por câncer, hiperplasia prostática benigna, artrite reumatoide, psoríase, aterosclerose, obesidade, retinopatias (incluindo retinopatia diabética e retinopatia da prematuridade), fibroplasia retrolental, glaucoma neovascular, degeneração macular relacionada à idade, degeneração macular exsudativa, hiperplasia da tireoide (incluindo doença de Grave), transplante de córnea e outros tecidos, ceratoconjuntivite epidêmica, deficiência de vitamina A, excesso de uso de lentes de contato, queratite atópica, queratite límbica superior e queratite secular do pterígio, infecções virais, inflamação associada a infecções virais, inflamação crônica, inflamação pulmonar, síndrome nefrótica, pré-eclâmpsia, ascite, derrame pericárdico (como o associado à pericardite), derrame pleural, síndrome de Sjogren, acne rosácea, filectenulose, sífilis, degeneração lipídica, queimaduras químicas, úlceras bacterianas, úlceras fúngicas, infecção por Herpes simplex, infecções por Herpes zoster, infecções por protozoários, úlcera de Mooren, degeneração marginal de Terrien, queratólise marginal, lúpus sistêmico, poliarterite, trauma, Wegener, Doença de Paget, esclerite, doença de Stevens-Johnson, penfigoide, ceratotomia radial, doença de Eales, doença de Behcet, anemia falciforme, pseudoxantoma elástico, doença de Stargardt, pars planitis, descolamento retiniano crônico, oclusão de veias, oclusão de artéria, doença obstrutiva de carótida, uveíte/vitrite crônica, histoplasmose ocular, infecções por micobactérias, doença de Lyme, doença de Best, miopia, cavidades ópticas, síndromes de hiperviscosidade, toxoplasmose, sarcoidose, trauma, complicações pós-laser, doenças associadas à rubeose (neovascularização da íris e do ângulo) e doenças causadas pela proliferação anormal de tecido fibrovascular ou fibroso, incluindo todas as formas de vitreorretinopatia prolífica. Certos exemplos de condições não neoplásicas que podem ser prevenidas e/ou tratadas de acordo com os métodos descritos no presente documento incluem infecções virais, incluindo, mas não se limitando a, aquelas associadas a vírus pertencentes a Flaviviridae, flavivírus, Pestivírus, hepacivírus, vírus do Nilo Ocidental, vírus da hepatite C (HCV) ou vírus do papiloma humano (HPV), distrofia dos cones e bastonetes, prostatite, pancreatite, retinite, catarata, degeneração da retina, granulomatose de Wegener, miopatia, adenoidite, tumores de células germinativas, acidúria metilmalônica combinada e homocistinúria, tipo cblC, Doença de Alzheimer, hiperprolinemia, acne, tuberculose, deficiência succinica de semialdeido desidrogenase, esofagite, retardo mental, encefalopatia por glicina, doença de Crohn, espinha bífida, doença autossômica recessiva, esquizofrenia, defeitos do tubo neural, síndromes mielodisplásicas, esclerose lateral amiotrópica, neuronite, doença de Parkinson, talipes equinovarus, distrofinopatias, cerebrite, transtornos da bexiga, lábio leporino, fenda palatina, cervicite, espasticidade, lipoma, escleroderma, síndrome de Gitelman, poliomielite, paralisia do nervo oculomotor e atrofia muscular da coluna vertebral.
[0752] Um método de tratamento, prevenção ou atraso de uma doença ou condição não cancerígena pode compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo com síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS), síndrome de progeria de Hutchinson-Gilford (HGPS), distrofia muscular da cintura e dos membros tipo 1B, lipodistrofia parcial familiar tipo 2, demência frontotemporal com cromossomo 17 do parkinsonismo, síndrome de Richardson, parkinsonismo-PSP, doença dos grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, doença de Pick, tauopatia glial globular, Parkinsonismo de Guadalupe, distrofia miotônica, síndrome de Down, hipóxia-isquemia neonatal, disautonomia familiar, atrofia muscular da coluna vertebral, deficiência de hipoxantina fosforibosiltransferase, síndrome de Ehlers-Danlos, síndrome do chifre occipital, anemia de Fanconi, síndrome de Marfan, púrpura trombocitopênica trombótica, Doença de armazenamento de glicogênio tipo III, fibrose cística, neurofibromatose, tirosinemia (tipo I), doença de Menkes, analbuminemia, deficiência congênita de acetilcolinesterase, deficiência de hemofilia Β (deficiência de fator de coagulação IX) , epidermólise bolhosa distrófica recessiva, epidermólise bolhosa distrófica dominante, mutações somáticas nas células epiteliais tubulares dos rins, Neurofibromatose tipo II, adrenoleucodistrofia ligada a X (X-ALD), deficiência de FVII, hipobetalipoproteinemia homozigótica, ataxia-telangiectasia, sensibilidade androgênica, afibrinogenemia congênita comum, risco para enfisema, síndrome de mucopoliopolisacaridose tipo II (síndrome de Hunter), Osteogênese tipo III grave, síndrome de Ehlers-Danlos IV, trombastenia de Glanzmann, miopatia leve de Bethlem, epidermólise bolhosa simples de Dowling-Meara, deficiência grave de MTHFR, porfíria aguda intermitente, síndrome de Tay-Sachs, deficiência de miofosforilase (doença de McArthur), Tirosinemia Crônica Tipo 1, Mutação na placenta, Deficiência de adesão de leucócitos, Deficiência hereditária de C3, Neurofibromatose tipo I, Deficiência de aromatase placentária, Xantomatose cerebrotendinosa, Distrofia muscular de Duchenne e Becker, Deficiência de fator V grave, alfa-Talassemia, beta-Talassemia, Deficiência hereditária de HL, Síndrome de Lesch-Nyhan, Hipercolesterolemia familiar, Deficiência de fosfoglicerato-quinase, síndrome de Cowden, retinite pigmentar ligada a X (RP3), síndrome de Crigler-Najjar tipo 1, tirosinemia crônica tipo I, doença de Sandhoff, Diabetes da Maturidade com Início na Juventude (MODY), esclerose tuberosa familiar, doença do rim policístico 1 ou Hipertireoidismo Primário.
[0753] Em algumas modalidades, as doenças não cancerígenas que podem ser prevenidas e/ou tratadas de acordo com a revelação dos documentos W02016/196386 Al, W02 016/128343 Al, W02015/024876 A2 e EP3053577A1. Em algumas modalidades, as doenças não cancerígenas que podem ser prevenidas e/ou tratadas incluem, mas não se limitam a, síndrome hemolítica urêmica atípica (aHUS), síndrome de progeria de Hutchinson-Gilford (HGPS), distrofia muscular da cintura e dos membros tipo 1B, lipodistrofia familiar parcial tipo 2, demência frontotemporal com cromossomo 17 do parkinsonismo, síndrome de Richardson, Parkinsonismo-PSP, doença dos grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, doença de Pick, tauopatia glial globular, parkinsonismo guadeloupiano, distrofia miotônica, síndrome de Down, Hipóxia-isquemia neonatal, Disautonomia familiar, Atrofia muscular espinhal, Deficiência de hipoxantina fosforibosiltransferase, síndrome de Ehlers-Danlos, síndrome do chifre occipital, anemia de Fanconi, síndrome de Marfan, púrpura trombocitopênica trombótica, Doença de armazenamento de glicogênio tipo III, fibrose cística, neurofibromatose, tirosinemia (tipo I), Doença de Menkes, Analbuminemia, Deficiência congênita de acetilcolinesterase, Deficiência de Hemofilia Β (deficiência de fator IX de coagulação), Epidermólise bolhosa distrófica recessiva, Epidermólise bolhosa distrófica dominante, Mutações somáticas nas células epiteliais tubulares dos rins, Neurofibromatose tipo II, adrenoleucodistrofia ligada a X (X-ALD), deficiência de FVII, hipobetalipoproteinemia homozigótica, Ataxia-telangiectasia, Sensibilidade ao Androgênio, Afibrinogenemia congênita comum, Risco para enfisema, Mucopolissacaridose tipo II (síndrome de Hunter), osteogênese tipo III grave imperfeita, síndrome de Ehlers-Danlos IV, trombastenia de Glanzmann, miopatia de Bethlem leve, epidermólise bolhosa simples de Dealing-Meara, Deficiência de MTHFR grave, porfíria aguda intermitente, síndrome de Tay-Sachs, Deficiência de miofosforilase (doença de McArdle), tirosinemia crônica tipo 1, mutação na placenta, Deficiência de adesão de leucócitos, deficiência de C3 hereditária, neurofibromatose tipo I, deficiência de aromatase placentária, xantomatose cerebrotendinosa, distrofia muscular de Duchenne e Becker, deficiência de fator V grave, alfa-talassemia, beta-talassemia, Deficiência de LH hereditária, síndrome de Lesch-Nyhan, Hipercolesterolemia familiar, deficiência de fosfoglicerato-quinase, síndrome de Cowden, retinite pigmentar ligada a X (RP3), síndrome de Crigler-Najjar tipo 1, tirosinemia crônica tipo I, doença de Sandhoff, Diabetes da Maturidade com Início na Juventude (MODY), esclerose tuberosa familiar ou doença renal Policística 1.
Métodos de Administração
[0754] As composições descritas no presente documento podem ser administradas ao indivíduo de uma variedade de maneiras, incluindo por via parenteral, por via intravenosa, por via intradérmica, por via intramuscular, por via colônica, por via retal ou por via intraperitoneal. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de molécula pequena ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado por injeção intraperitoneal, injeção intramuscular, injeção subcutânea ou injeção intravenosa do indivíduo. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem ser administradas por via parenteral, por via intravenosa, por via intramuscular ou por via oral. Os agentes orais que compreendem um modulador de splicing de molécula pequena podem estar em qualquer forma adequada para administração oral, como líquido, comprimidos, cápsulas ou similares. As formulações orais podem ser adicionalmente revestidas ou tratadas para impedir ou reduzir a dissolução no estômago. As composições da presente invenção podem ser administradas a um indivíduo usando quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica. As formulações adequadas para uso na presente invenção e métodos de entrega são geralmente bem conhecidos na técnica. Por exemplo, o modulador de splicing de molécula pequena descrito no presente documento pode ser formulado como composições farmacêuticas com um diluente, carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. As composições podem conter substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis como exigido para aproximar as condições fisiológicas incluindo agentes de tamponamento e ajuste de pH, agentes de ajuste de tonicidade, agentes de molhagem e similares, como, por exemplo, acetato de sódio, lactato de sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina, etc.
[0755] As formulações farmacêuticas descritas no presente documento podem ser administráveis a um indivíduo de uma variedade de maneiras por múltiplas vias de administração, incluindo, porém sem limitação, vias de administração oral, parenteral (por exemplo, injeções intravenosas, subcutâneas, intramusculares, intramedulares, intratecais, intraventriculares direta, intraperitoneais, intralinfáticas, intranasais), intranasal, bucal, tópica ou transdérmica. As formulações farmacêuticas descritas no presente documento incluem, mas não estão limitadas a, dispersões liquidas aquosas, dispersões autoemulsionantes, soluções sólidas, dispersões lipossômicas, aerossóis, formas farmacêuticas sólidas, pós, formulações de liberação imediata, formulações de liberação controlada, formulações de fusão rápida, comprimidos, cápsulas, pílulas, formulações de liberação retardada, formulações de liberação prolongada, formulações de liberação pulsátil, formulações multiparticuladas e formulações mistas de liberação imediata e controlada.
[0756] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administradas por via oral. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administradas por via tópica. Em tais modalidades, as composições farmacêuticas descritas neste documento são formuladas em uma variedade de composições administráveis topicamente, como soluções, suspensões, loções, géis, pastas, xampus, esfoliantes, fricções, esfregaços, bastões medicamentosos, ataduras medicamentosas, bálsamos, cremes ou pomadas. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administradas por via tópica à pele. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administradas por inalação. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são formuladas para administração intranasal. Tais formulações incluem sprays nasais, névoas nasais e similares. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são formuladas como colírios. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são: (a) administrada por via sistêmica ao mamífero; e/ou (b) administrada por via oral ao mamífero; e/ou (c) administrada por via intravenosa ao mamífero; e/ou (d) administrada por inalação ao mamífero; e/ou (e) administrada por administração nasal ao mamífero; ou e/ou (f) administrada por injeção ao mamífero; e/ou (g) administrada por via tópica ao mamífero; e/ou (h) administrada por administração oftálmica e/ou (i) administrada por via retal ao mamífero; e/ou (j) administrada por via não sistêmica ou localmente ao mamífero. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administradas por via oral ao mamífero. Em certas modalidades, um SMSM descrito no presente documento é administrado em um local e não de maneira sistêmica. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento é administrado por via tópica. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento é administrado sistemicamente.
[0757] As composições orais geralmente incluem um diluente inerte ou um veiculo comestível. Podem ser incluídas em cápsulas de gelatina ou compactadas em comprimidos. Com o propósito da administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e utilizado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição. Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e similares podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes ou compostos de natureza similar: um aglutinante como celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente como amido ou lactose, um agente desintegrante como ácido algínico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante como estearato de magnésio ou estearatos; um deslizante como dióxido de silício coloidal; um agente adoçante como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante, como hortelã-pimenta, salicilato de metila ou aroma de laranja.
[0758] Para administração por inalação, os compostos são fornecidos sob a forma de uma aspersão em aerossol a partir de um recipiente ou distribuidor pressurizado que contém um propulsor adequado, por exemplo, um gás como dióxido de carbono ou um nebulizador.
[0759] A administração sistêmica também pode ser por meio transmucosal ou transdérmico. Para a administração transmucosal ou transdérmica, são utilizados na formulação os penetrantes adequados à barreira a ser permeada. Esses penetrantes são geralmente conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, para administração transmucosal, detergentes, sais biliares e derivados de ácido fusidico. A administração transmucosal pode ser realizada através do uso de aspersões nasais ou supositórios. Para administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em pomadas, unguentos, géis ou cremes, como é geralmente conhecido na técnica.
[0760] SMSMs para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde são solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Para administração intravenosa, veiculos adequados incluem solução salina fisiológica, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS) . Em todos os casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida até o ponto em que exista fácil seringabilidade. Deve ser estável nas condições de fabricação e armazenamento e deve ser preservada contra a contaminação de microrganismos, como bactérias e fungos. O veiculo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol liquido e similares), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso da dispersão e pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação dos microrganismos pode ser conseguida por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e similares. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, como manitol, sorbitol, cloreto de sódio na composição.
Dosagem e Programas
[0761] Os SMSMs utilizados nos métodos da invenção podem ser, por exemplo, administrados em dosagens que podem variar, dependendo das necessidades do indivíduo, da gravidade da condição sendo tratada e/ou imageada e/ou do SMSM sendo empregado. Por exemplo, as dosagens podem ser determinadas empiricamente, considerando o tipo e o estágio da doença diagnosticada em um indivíduo em particular e/ou o tipo de modalidade de imageamento usada em conjunto com os SMSMs. A dose administrada a um indivíduo, no contexto da presente invenção, deve ser suficiente para realizar uma resposta diagnóstica ou terapêutica benéfica no indivíduo. O tamanho da dose também pode ser determinado pela existência, natureza e extensão de quaisquer efeitos colaterais adversos que acompanham a administração de um SMSM em um indivíduo particular.
[0762] É vantajoso formular composições na forma de unidade de dosagem para facilitar a administração e a uniformidade da dosagem. A forma de unidade de dosagem como usada no presente documento se refere a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação para as formas de unidade de dosagem da invenção é ditada e diretamente dependente das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico específico a ser alcançado, e das limitações inerentes à técnica de composição de tal composto ativo para o tratamento de indivíduos. A toxicidade e a eficácia terapêutica de tais compostos podem ser determinadas por procedimentos em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinação de LD50 (a dose letal para 50 % da população) e de ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50 % da população) . A razão de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e pode ser expressa como a razão LD50/ED50. Os compostos que exibem índices terapêuticos grandes são preferenciais. Embora os compostos que exibem efeitos colaterais tóxicos possam ser usados, deve-se tomar cuidado para projetar um sistema de aplicação que direcione esses compostos para o local do tecido afetado, a fim de minimizar danos potenciais às células não infectadas e, assim, reduzir os efeitos colaterais.
[0763] Os dados do índice terapêutico obtidos a partir de ensaios de cultura de células e/ou estudos em animais podem ser usados na previsão do índice terapêutico in vivo e formulação uma faixa de dosagens para uso em indivíduos, como indivíduos humanos. Os dados obtidos a partir de ensaios de cultura de células e estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em seres humanos. A dosagem de tais compostos se situa, de preferência, em uma faixa de concentrações circulantes que incluem a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração usada. Para qualquer composto usado no método da invenção, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de células. Uma dose pode ser formulada em modelos animais para atingir uma faixa de concentração plasmática circulante que inclui a concentração do composto de teste que atinge uma inibição até a metade dos sintomas, conforme determinado na cultura de células. Essa informação pode ser usada para determinar com mais precisão as doses úteis em humanos. Os níveis no plasma podem ser medidos, por exemplo, por cromatografia líquida de alta eficiência. Vários modelos animais e ensaios clínicos para avaliar a eficácia de um SMSM particular na prevenção ou redução de uma doença ou condição são conhecidos na técnica, e podem ser usados na presente invenção. A dosagem pode variar dentro dessa faixa dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração usada. A formulação exata, a via de administração e a dosagem podem ser escolhidas pelo médico em vista da condição do paciente. (Ver, por exemplo, Fingi et al, 1975, Em: The Pharmacological Basis of Therapeutics. Ch. 1 pi).
[0764] Em alguns aspectos, os SMSMs fornecidos possuem um índice terapêutico (LD50./ED50) de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 10000, ou 100000 ou mais. Em alguns aspectos, os SMSMs fornecidos possuem um índice terapêutico (LD50/ED50) de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 10000, ou 100000 ou mais, conforme determinado na cultura de células.
[0765] Em alguns aspectos, os SMSMs fornecidos possuem uma viabilidade de IC50/valor de splicing de EC50. de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 10000, ou 100000 ou mais. Em alguns aspectos, os SMSMs fornecidos possuem uma viabilidade de IC50/valor de splicing de EC50. de pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 10000, ou 100000 ou mais, conforme determinado na cultura de células.
[0766] Uma dosagem do uso de um SMSM quando administrado pode ser pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 gramas/m2 em seres humanos, ou uma dosagem em outro indivíduo comparável à dos humanos. Uma dosagem ("dosagem X") de um SMSM em um indivíduo que não seja humano é comparável a uma dosagem ("dosagem Y") do SMSM em humanos se a concentração sérica do captador no indivíduo após a administração do SMSM na dosagem X for igual à concentração sérica do SMSM em humanos após a administração do composto na dosagem Y.
[0767] Dentro do escopo da presente descrição, a quantidade eficaz de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso na fabricação de um medicamento, na preparação de um kit farmacêutico ou em um método para prevenir e/ou tratar uma doença em um indivíduo humano em necessidade do mesmo, pretende incluir uma quantidade na faixa de cerca de 1 μg a cerca de 50 gramas.
[0768] As composições da presente invenção podem ser administradas tão frequentemente quanto necessário, incluindo por hora, diariamente, semanalmente ou mensalmente.
[0769] Em qualquer um dos aspectos mencionados acima há modalidades adicionais que compreendem administrações únicas da quantidade eficaz de um SMSM descrito no presente documento, incluindo modalidades adicionais nas quais (i) o composto é administrado uma vez; (ii) o composto é administrado ao mamífero múltiplas vezes ao longo de um dia; (iii) continuamente; ou (iv) continuadamente.
[0770] Em qualquer um dos aspectos mencionados acima há modalidades adicionais que compreendem múltiplas administrações da quantidade eficaz de um SMSM descrito no presente documento, incluindo modalidades adicionais nas quais (i) o composto é administrado continuamente ou intermitentemente: como em uma dose única; (ii) o tempo entre múltiplas administrações é a cada 6 horas; (iii) o composto é administrado ao mamífero a cada 8 horas; (iv) o composto é administrado ao mamífero a cada 12 horas; (v) o composto é administrado ao mamífero a cada 24 horas. Em modalidades adicionais ou alternativas, o método compreende uma interrupção de fármaco, em que a administração um SMSM descrito no presente documento é temporariamente suspensa ou a dose do composto sendo administrado é temporariamente reduzida; no término da suspensão do fármaco, a dosagem do composto é continuada. Em uma modalidade, a duração da interrupção do fármaco varia de 2 dias a 1 ano.
Terapias de Combinação
[0771] Em certos casos, é apropriado administrar pelo menos um SMSM descrito no presente documento em combinação com um outro agente terapêutico. Por exemplo, um SMSM composto descrito no presente documento pode ser coadministrado com um segundo agente terapêutico, em que o SMSM e o segundo agente terapêutico modulam diferentes aspectos da doença, transtorno ou condição sendo tratada, fornecendo, desse modo, um melhor beneficio geral do que a administração de qualquer um dos agentes terapêuticos por si sós.
[0772] Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser usado em combinação com uma terapia anticâncer. Em algumas modalidades, um modulador estérico é usado em combinação com quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal e/ou imunoterapia convencionais. Em algumas modalidades, um SMSM descrito no presente documento pode ser usado em combinação com agentes quimioterápicos convencionais, incluindo agentes alquilantes (por exemplo, temozolomida, ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosoureias, etc.), antimetabólitos (por exemplo, 5-fluorouracil, azatioprina, metotrexato, leucovorina, capecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, gencitabina, pemetrexed, raltitrexed, etc.), alcaloides vegetais (por exemplo, vincristina, vinblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel, docetaxel, etc.), inibidores da topoisomerase (por exemplo, irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposideo (VP16), fosfato de etoposídeo, teniposideo, etc.), antibióticos antitumorais (por exemplo, doxorrubicina, adriamicina, daunorubicina, epirubicina, actinomicina, bleomicina, mitomicina, mitoxantrona, plicamicina, etc.)/ compostos à base de platina (por exemplo, cisplatina, oxaloplatina, carboplatina, etc.), inibidores de EGFR (por exemplo, gefitinib, erlotinib, etc.) e similares.
[0773] Em algumas modalidades, um SMSM pode ser administrado em combinação com um ou mais outros SMSMs.
[0774] Um SMSM pode ser administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo antes, simultaneamente ou após a administração de agentes quimioterápicos. Por exemplo, os SMSMs podem ser administrados a um indivíduo pelo menos 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 2 horas, 1,5 hora, 1 hora ou 30 minutos antes do horário de início da administração do(s) agente(s) quimioterápico(s). Em certas modalidades, eles podem ser administrados simultaneamente com a administração do agente quimioterápico. Em outras palavras, nessas modalidades, os SMSMs são administrados ao mesmo tempo em que a administração do(s) agente(s) quimioterápico(s) começa. Em outras modalidades, os SMSMs podem ser administrados após o horário de início da administração do(s) agente(s) quimioterápico(s) (por exemplo, pelo menos 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas ou 8 horas após o horário de início da administração de agentes quimioterápicos). Alternativamente, os SMSMs podem ser administrados pelo menos 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas ou 8 horas após a conclusão da administração dos agentes quimioterápicos. Geralmente, esses SMSMs são administrados por um período de tempo suficiente para que a doença ou condição seja evitada ou reduzida. Esse período de tempo suficiente pode ser idêntico ou diferente do período durante o qual os agentes quimioterápicos são administrados. Em certas modalidades, as doses múltiplas de SMSMs são administradas para cada administração de um agente quimioterápico ou uma combinação de múltiplos agentes quimioterápicos.
[0775] Em certas modalidades, uma dosagem apropriada de um SMSM é combinada com um tempo específico e/ou uma rota específica para alcançar o efeito ótimo na prevenção ou redução da doença ou condição. Por exemplo, um SMSM pode ser administrado a um ser humano por via oral pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas ou 12 horas; ou pelo menos 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 8 dias, 9 dias, 10 dias, 11 dias, 12 dias; ou pelo menos 1 semana, 2 semanas, 3 semanas ou 4 semanas; ou pelo menos 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses ou 12 meses; antes ou depois do início ou da conclusão da administração de um agente quimioterápico ou de uma combinação de agentes quimioterápicos.
Indivíduos
[0776] Os indivíduos que podem ser tratados com os SMSMs e os métodos descritos neste documento podem ser qualquer indivíduo que produz mRNA que é submetido a splicing alternativo, por exemplo, o indivíduo pode ser um indivíduo eucariótico, como uma planta ou um animal. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero, por exemplo, ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um animal não humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um feto, um embrião ou uma criança. Em algumas modalidades, o indivíduo é um primata não humano como chimpanzés e outras espécies de símios e macacos; animais agropecuários como gado, cavalos, ovelhas, cabras, suíno; animais domésticos como coelhos, cachorros e gatos; animais de laboratório incluindo roedores, como ratos, camundongos e porcos-da-índia e similares.
[0777] Em algumas modalidades, o indivíduo é pré-natal (por exemplo, um feto), uma criança (por exemplo, um recém-nascido, um bebê, uma criança, um pré-adolescente), um adolescente, um pubescente ou um adulto (por exemplo, um adulto prematuro, um adulto de meia-idade, idoso). O indivíduo humano pode ter entre O meses e 120 anos de idade ou mais velho. O indivíduo humano pode ter entre 0 e 12 meses de idade; por exemplo, com cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses de idade. O indivíduo humano pode ter entre 0 e 12 anos de idade; por exemplo, entre cerca de 0 e 30 dias de idade; entre cerca de 1 mês e 12 meses de idade; entre cerca de 1 ano e 3 anos de idade; entre cerca de 4 anos e 5 anos de idade; entre cerca de 4 anos e 12 anos de idade; cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre cerca de 13 anos e 19 anos de idade; por exemplo, com 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre cerca de 20 e cerca de 39 anos de idade; por exemplo, com cerca de 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38 ou 39 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre 40 e 59 meses de idade; por exemplo, com cerca de 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, ou 59 anos de idade. O indivíduo humano pode ter mais de 59 anos de idade; por exemplo, cerca de 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120 anos de idade. Os indivíduos humanos podem incluir indivíduos vivos ou falecidos. Os indivíduos humanos podem incluir indivíduos masculinos e/ou femininos.
Ensaios
[0778] Os experimentos de expressão de genes geralmente envolvem a medição da quantidade relativa de produtos de expressão de genes, como o mRNA, expresso em duas ou mais condições experimentais. Isso ocorre porque níveis alterados de uma sequência específica de um produto de expressão de genes podem sugerir uma necessidade alterada da proteína codificada pelo produto de expressão de genes, talvez indicando uma resposta homeostática ou uma condição patológica.
[0779] Em algumas modalidades, um método pode compreender medir, ensaiar ou obter níveis de expressão de um ou mais genes. Em alguns casos, o método fornece um número ou uma faixa de números de genes que os níveis de expressão dos genes podem ser usados para diagnosticar, caracterizar ou categorizar uma amostra biológica. Em algumas modalidades, os dados de expressão de genes correspondem aos dados de um nível de expressão de um ou mais biomarcadores que estão relacionados a uma doença ou condição. O número de genes usados pode estar entre cerca de 1 e cerca de 500; por exemplo, cerca de 1-500, 1-400, 1-300, 1-200, 1-100, 1-50, 1-25, 1-10, 10-500, 10-400, 10-300, 10-200, 10-100, 10-50, 10-25, 25-500, 25-400, 25-300, 25-200, 25-100, 25-50, 50-500, 50-400, 50-300, 50-200, 50-100, 100-500, 100-400, 100-300, 100-200, 200-500, 200-400, 200-300, 300-500, 300-400, 400-500, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, ou qualquer faixa ou número inteiro incluído. Por exemplo, pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 33, 35, 38, 40, 43, 45, 48, 50, 53, 58, 63, 65, 68, 100, 120, 140, 142, 145, 147, 150, 152, 157, 160, 162, 167, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 300, 400, 500 ou mais genes totais podem ser usados. O número de genes usados pode ser menor ou igual a 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 33, 35, 38, 40, 43, 45, 48, 50, 53, 58, 63, 65, 68, 100, 120, 140, 142, 145, 147, 150, 152, 157, 160, 162, 167, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 300, 400, 500, ou mais.
[0780] Em algumas modalidades, a expressão de genes relativa, em comparação com células e/ou tecidos normais do mesmo órgão, pode ser determinada medindo as taxas relativas de transcrição de RNA, como por produção de cDNAs correspondentes e, em seguida, analisando o DNA resultante com o uso de sondas desenvolvidas a partir das sequências de genes como correspondendo a um marcador genético. Assim, os níveis de cDNA produzidos pelo uso da transcriptase reversa com o complemento de RNA completo de uma célula suspeita de ser cancerígena produz uma quantidade correspondente de cDNA que pode ser amplificada usando a reação em cadeia da polimerase, ou alguns outros meios, como amplificação linear, amplificação isotérmica, NASB ou amplificação de círculo rolante, para determinar os níveis relativos de cDNA resultante e, assim, os níveis relativos de expressão de genes. Os métodos gerais para determinar os níveis do produto de expressão de genes são conhecidos na técnica e podem incluir, mas não estão limitados a, um ou mais dos seguintes: ensaios citológicos adicionais, ensaios para proteínas específicas ou atividades enzimáticas, ensaios para produtos de expressão específicos, incluindo proteína ou RNA ou variantes de splicing de RNA específicos, hibridização in situ, análise de expressão do genoma inteiro ou parcial, ensaios de hibridização por micromatrizes, SAGE, ensaios de imunoabsorbância ligados a enzimas, espectrometria de massa, imuno-histoquímica, blotting, micromatriz, RT-PCR, PCR quantitativo, sequenciamento, sequenciamento de RNA, sequenciamento de DNA (por exemplo, sequenciamento de cDNA obtido a partir de RNA) ; sequenciamento de nova geração, sequenciamento de nanoporos, pirossequenciamento ou sequenciamento Nanostring. Os níveis do produto de expressão de genes podem ser normalizados para um padrão interno, como mRNA total ou o nível de expressão de um gene em particular, incluindo, mas não se limitando a, gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase, ou tubulina.
[0781] Dados de expressão de genes geralmente compreendem a medição da atividade (ou a expressão) de uma pluralidade de genes, para criar uma imagem da função celular. Os dados de expressão de genes podem ser usados, por exemplo, para distinguir entre as células que estão se dividindo ativamente, ou para mostrar como as células reagem a um tratamento particular. A tecnologia de micromatriz pode ser usada para medir a atividade relativa de genes alvos previamente identificados e outras sequências expressas. Técnicas baseadas em sequência, como análise em série da expressão de genes (SAGE, SuperSAGE), também são usadas para analisar, medir ou obter dados de expressão de genes. O SuperSAGE é especialmente preciso e pode medir qualquer gene ativo, não apenas um conjunto predefinido. Em um RNA, mRNA ou micromatriz de perfil de expressão de genes, os níveis de expressão de milhares de genes podem ser monitorados simultaneamente para estudar os efeitos de certos tratamentos, doenças e estágios de desenvolvimento na expressão de genes.
[0782] De acordo com o acima exposto, o nível de expressão de um gene, marcador, produto de expressão de genes, mRNA, pré-mRNA ou uma combinação dos mesmos pode ser determinado usando Northern Blotting e empregando as sequências como identificadas no presente documento para desenvolver sondas para esse fim. Tais sondas podem ser compostas de DNA ou RNA ou nucleotídeos sintéticos ou uma combinação destes e podem ser vantajosamente constituídas por um estiramento contíguo de resíduos de nucleotídeos que se correspondem ou são complementares a uma sequência correspondente a um marcador genético identificado na FIG. 4. Tais sondas compreenderão de maneira mais útil um estiramento contíguo de pelo menos 15-200 resíduos ou mais, incluindo 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 175 ou 200 nucleotídeos ou mais. Assim, quando uma única sonda se liga várias vezes ao transcriptoma de células experimentais, enquanto a ligação da mesma sonda a uma quantidade similar de transcriptoma derivada do genoma de células de controle do mesmo órgão ou tecido resulta notavelmente em mais ou menos ligações, isso é indicativo da expressão diferencial de um gene, marcador, produto de expressão de genes, mRNA ou pré-mRNA compreendendo ou correspondendo a sequências correspondentes a um marcador genético do qual a sequência da sonda foi derivada.
[0783] Em algumas modalidades da presente invenção, a expressão de genes pode ser determinada por análise de micromatrizes usando, por exemplo, matrizes de Affymetrix, micromatrizes de cDNA, micromatrizes de oligonucleotídeos, micromatrizes manchadas ou outros produtos de micromatrizes da Biorad, Agilent ou Eppendorf. As micromatrizes fornecem vantagens particulares porque podem conter um grande número de genes ou variantes de splicing alternativo que podem ser testadas em um único experimento. Em alguns casos, o dispositivo de micromatriz pode conter todo o genoma ou transcriptoma humano ou uma fração substancial do mesmo, permitindo uma avaliação abrangente dos padrões de expressão de genes, sequência genômica ou splicing alternativo. Os marcadores podem ser encontrados usando técnicas padrão de biologia molecular e análise de micromatrizes, conforme descrito em Sambrook Molecular Cloning a Laboratory Manual 2001 and Baldi, P., and Hatfield, W.G., DNA Microarrays and Gene Expression 2002.
[0784] A análise de micromatriz geralmente começa com a extração e purificação de ácido nucleico de uma amostra biológica (por exemplo, uma biópsia ou aspirado por agulha fina) usando métodos conhecidos na técnica. Para expressão e análise de splicing alternativo, pode ser vantajoso extrair e/ou purificar RNA do DNA. Pode ainda ser vantajoso extrair e/ou purificar mRNA de outras formas de RNA, como tRNA e rRNA. Em algumas modalidades, amostras de RNA com RIN ≤5.0 não são tipicamente usadas para análise de micromatrizes multigênicas e, em vez disso, podem ser usadas apenas para ensaios de RT-PCR e/ou TaqMan de gene único. Os ensaios de micromatriz, RT-PCR e TaqMan são técnicas moleculares padrão bem conhecidas na técnica relevante. Os ensaios baseados em sonda TaqMan são amplamente usados em PCR em tempo real, incluindo ensaios de expressão de genes, quantificação de DNA e genotipagem de SNP.
[0785] Vários kits podem ser usados para a amplificação de ácido nucleico e geração de sonda dos métodos em questão. Em algumas modalidades, o kit de expressão Ambion WT pode ser usado. O kit de expressão Ambion WT permite a amplificação do RNA total diretamente, sem uma etapa separada de depleção do RNA ribossômico (rRNA) . Com o Kit de Expressão Ambion® WT, amostras de até 50 ng de RNA total podem ser analisadas em matrizes STAffymetrix® GeneChip® de Humanos, de Camundongos, e Éxon e Gene 1.0 ST de Ratos. Além do menor requisito de RNA de entrada e alta concordância entre o método Affymetrix® e os dados de PCR em tempo real TaqMan®, o Kit de Expressão Ambion® WT fornece um aumento significativo na sensibilidade. Por exemplo, um número maior de conjuntos de sondas detectados acima do plano de fundo pode ser obtido no nível do éxon com o Kit de Expressão Ambion® WT como resultado de uma maior razão de sinal para ruído. O kit de expressão Ambion WT pode ser usado em combinação com o kit de marcação adicional Affymetrix.
[0786] Em algumas modalidades, o kit de Amplificação AmpTec Trinucleotide Nano mRNA (6299-A15) pode ser usado nos métodos em questão. O Nano kit de amplificação ExpressArt® TRinucleotide mRNA é adequado para uma ampla faixa, de 1 ng a 700 ng de RNA total de entrada. De acordo com a quantidade de RNA total de entrada e os rendimentos necessários de um RNA, ele pode ser usado por 1 rodada (entrada > 300 ng de RNA total) ou 2 rodadas (quantidade mínima de entrada de 1 ng de RNA total), com um rendimento de RNA na faixa de > 10 μg. A tecnologia de iniciação TRinucleotide de propriedade da AmpTec resulta na amplificação preferencial de mRNAs (independente da sequência 3'-poli(A) eucariótica universal), combinada com a seleção contra rRNAs. Este kit pode ser usado em combinação com o kit de conversão de cDNA e o kit de marcação Affymetrix.
[0787] Em algumas modalidades, os níveis de expressão de genes podem ser obtidos ou medidos em um indivíduo sem primeiro obter uma amostra. Por exemplo, os níveis de expressão de genes podem ser determinados in vivo, ou seja, no indivíduo. Métodos para determinar os níveis de expressão de genes in vivo são conhecidos na técnica e incluem técnicas de imagem como CAT, MRI; NMR; PET; e imageamento óptico, de fluorescência ou biofotônico de níveis de proteína ou RNA usando anticorpos ou sinais moleculares. Tais métodos são descritos nos documentos US 2008/0044824, US 2008/0131892, incorporados no presente documento por referência. Métodos adicionais para perfis moleculares in vivo estão contemplados como estando dentro do escopo da presente invenção.
[0788] São fornecidos no presente documento métodos para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um, dois, três ou mais transcritos de RNA (por exemplo, transcritos de pré-mRNA ou mRNA ou isoformas) de um, dois, três ou mais genes.
[0789] Em uma modalidade, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA, compreendendo: (a) colocar em contato uma célula com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (b) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em relação à quantidade do transcrito de RNA na ausência de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) colocar em contato uma primeira célula com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) colocar em contato uma segunda célula com um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo, como PBS ou DMSO) ; e (c) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula e pela segunda célula; e (d) comparar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula com a quantidade do transcrito de RNA expressa pela segunda célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula em relação à quantidade do transcrito de RNA produzida pela segunda célula indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, o contato da célula com o composto ocorre na cultura celular. Em outras modalidades, o contato da célula com o composto ocorre em um indivíduo, como um indivíduo animal não humano. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) cultivar uma célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) determinar a quantidade de duas ou mais variantes de splice de transcritos de RNA produzidas pela célula, em que uma alteração na quantidade de dois ou mais transcritos de RNA na presença do composto em relação à quantidade de duas ou mais variantes de splice de transcritos de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing do transcrito de RNA.
[0790] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) cultivar uma célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) isolar duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA da célula após um certo período de tempo; e (c) determinar a quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela célula, em que uma alteração na quantidade de dois ou mais transcritos de RNA na presença do composto em relação à quantidade de duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo (a) cultivar uma primeira célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) cultivar uma segunda célula na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo, como PBS ou DMSO) ; (c) isolar duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela primeira célula e isolar duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela segunda célula; (d) determinar a quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela primeira célula e pela segunda célula; e (e) comparar a quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela primeira célula para a quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela segunda célula, em que uma alteração na quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela primeira célula em relação à quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzidas pela segunda célula indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing do transcrito de RNA.
[0791] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) colocar em contato um sistema isento de células com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (b) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pelo sistema isento de células, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA na presença do composto em relação à quantidade do transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) colocar em contato um primeiro sistema isento de células com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (b) colocar em contato um segundo sistema isento de células com um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo, como PBS ou DMSO); e (c) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células e pelo segundo sistema isento de células; e (d) comparar a quantidade do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células com a quantidade do transcrito de RNA expressa pelo segundo sistema isento de células, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células em relação à quantidade de transcrito de RNA produzida pelo segundo sistema isento de células indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de transcrito de RNA. Em algumas modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético, enzimas sintéticas ou recombinantes (purificadas) e fatores de proteína. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético, enzimas sintéticas ou recombinantes (purificadas) e fatores de proteína. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético e extrato nuclear. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético e extrato nuclear. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético e extrato de célula inteira. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético e extrato de célula inteira. Em algumas modalidades, o sistema isento de células compreende adicionalmente RNAs reguladores (por exemplo, microRNAs).
[0792] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) colocar em contato um sistema isento de células com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) determinar a quantidade de duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA produzida pelo sistema isento de células, em que uma alteração na quantidade das duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA na presença do composto em relação à quantidade de duas ou mais variantes de splice de transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) colocar em contato um primeiro sistema isento de células com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (b) colocar em contato um segundo sistema isento de células com um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo, como PBS ou DMSO); e (c) determinar a quantidade de duas ou mais variantes de splice do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células e pelo segundo sistema isento de células; e (d) comparar a quantidade de duas ou mais variantes de splice do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células com a quantidade do transcrito de RNA expressa pelo segundo sistema isento de células, em que uma alteração na quantidade de duas ou mais variantes de splice do transcrito de RNA produzida pelo primeiro sistema isento de células em relação à quantidade de duas ou mais variantes de splice do transcrito de RNA produzida pelo segundo sistema isento de células indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula o splicing do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético, enzimas sintéticas ou recombinantes (purificadas) e fatores de proteína. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético, enzimas sintéticas ou recombinantes (purificadas) e fatores de proteína. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético e extrato nuclear. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético e extrato nuclear. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA puramente sintético e extrato de célula inteira. Em outras modalidades, o sistema isento de células compreende RNA transcrito a partir de um modelo de DNA sintético e extrato de célula inteira. Em algumas modalidades, o sistema isento de células compreende adicionalmente RNAs reguladores (por exemplo, microRNAs).
[0793] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo: (a) cultivar uma célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) isolar o transcrito de RNA da célula após um certo período de tempo; e (c) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA na presença do composto em relação à quantidade do transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um método para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade de um transcrito de RNA (por exemplo, um transcrito de mRNA), compreendendo (a) cultivar uma primeira célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (b) cultivar uma segunda célula na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veiculo, como PBS ou DMSO) ; (c) isolar o transcrito de RNA produzido pela primeira célula e isolar o transcrito de RNA produzido pela segunda célula; (d) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula e pela segunda célula; e (e) comparar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula com a quantidade do transcrito de RNA produzida pela segunda célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA produzida pela primeira célula em relação à quantidade de transcrito de RNA produzida pela segunda célula indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA.
[0794] Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma célula primária de um indivíduo. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma célula primária de um indivíduo com uma doença. Em modalidades específicas, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma célula primária de um indivíduo com uma doença associada a uma quantidade aberrante de um transcrito de RNA para um gene específico. Em algumas modalidades específicas, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma célula primária de um indivíduo com uma doença associada a uma quantidade aberrante de uma isoforma de um gene específico. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é um fibroblasto, uma célula imune ou uma célula muscular. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma célula doente.
[0795] Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de uma linhagem celular. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma linhagem celular derivada de um indivíduo com uma doença. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de uma linhagem celular conhecida por ter níveis de transcrito de RNA aberrante para um gene específico. Em modalidades específicas, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de uma linhagem celular derivada de um indivíduo com uma doença conhecida por possuir níveis de transcrito de RNA aberrante para um gene específico. Em algumas modalidades, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é uma linhagem celular doente. Em algumas modalidades específicas, a célula contatada ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de uma linhagem celular derivada de um indivíduo com uma doença conhecida por possuir uma quantidade aberrante de uma isoforma de RNA e/ou isoforma de proteína de um gene específico. Exemplos não limitativos de linhagens celulares incluem células 293, 3T3, 4T1, 721, 9L, A2780, A172, A20, A253, A431, A-549, A-673, ALC, Β 16, B35, BCP-1, BEAS-2B, bEnd.3, BHK, BR 293, BT20, BT483, BxPC3, C2C12, C3 h-10T1/2, C6/36, C6, Cal-27, CHO, COR-L23, COS, COV-434, CML Tl, CMT, CRL7030, CT26, D17, DH82, DU145, DuCaP, EL4, EM2, EM3, EMT6, EM3, H1299, H69, HB54, HB55, HCA2, HEK-293, HeLa, Hepalclc7, HL-60, HMEC, Hs578T, HsS78Bst, HT-29, HTB2, HUVEC, Jurkat, J558L, JY, K562, Ku812, KCL22, KG1, KYO1, LNCap, Ma- Mel, MC-38, MCF-7, MCF-IOA, MDA-MB-231, MDA-MB-468, MDA-MB-435, MDCK, MG63, MOR/0.2R, MONO-MAC 6, MRC5, MTD-1A, NCI-H69, NIH-3T3, NALM-1, NSO, NW-145, OPCN, OPCT, PNT-1A, PNT-2, Raji, RBL, RenCa, RIN-5F, RMA, Saos-2, Sf21, Sf9, SiHa, SKBR3, SKOV-3, T2, T-47D, T84, THP1, U373, U87, U937, VCaP, Vero, VERY, W138, WM39, WT-49, X63, YAC-1, e céluas YAR. Em uma modalidade, as células são de um paciente.
[0796] Em algumas modalidades, um ensaio de dose-resposta é realizado. Em uma modalidade, o ensaio de dose-resposta compreende: (a) colocar em contato uma célula com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA na presença do composto em relação à quantidade do transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA; (c) repetir as etapas (a) e (b), em que a única variável experimental alterada é a concentração do composto ou uma forma do mesmo; e (d) comparar a quantidade do transcrito de RNA produzida nas diferentes concentrações do composto ou uma forma do mesmo. Em algumas modalidades, o ensaio de dose-resposta compreende: (a) cultivar uma célula na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, (b) isolar o transcrito de RNA da célula após um certo período de tempo; (c) determinar a quantidade do transcrito de RNA produzida pela célula, em que uma alteração na quantidade do transcrito de RNA na presença do composto em relação à quantidade do transcrito de RNA na ausência do composto ou na presença de um controle negativo (por exemplo, um controle de veículo como PBS ou DMSO) indica que um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo modula a quantidade do transcrito de RNA; (d) repetir as etapas (a), (b) e (c), em que a única variável experimental alterada é a concentração do composto ou uma forma do mesmo; e (e) comparar a quantidade do transcrito de RNA produzida nas diferentes concentrações do composto ou uma forma do mesmo. Em algumas modalidades, o ensaio de dose-resposta compreende: (a) colocar em contato cada poço de uma placa de microtitulação contendo células com uma concentração diferente de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) determinar a quantidade de um transcrito de RNA produzida pelas células em cada poço; e (c) avaliar a alteração da quantidade do transcrito de RNA nas diferentes concentrações do composto ou forma do mesmo.
[0797] Em algumas modalidades descritas neste documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um controle negativo por um período de 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas ou mais. Em outras modalidades descritas no presente documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um controle negativo por um período de 15 minutos a 1 hora, 1 a 2 horas, 2 a 4 horas, 6 a 12 horas, 12 a 18 horas, 12 a 24 horas, 28 a 24 horas, 24 a 48 horas, 48 a 72 horas.
[0798] Em algumas modalidades descritas neste documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a concentração é 0,01 μΜ, 0,05 μΜ, 1 μΜ, 2 μΜ, 5 μΜ, 10 μΜ, 15 μΜ, 20 μΜ, 25 μΜ, 50 μΜ, 75 μΜ, 100 μΜ, ou 150 μΜ. Em outras modalidades descritas neste documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a concentração é 175 μΜ, 200 μΜ, 250 μΜ, 275 μΜ, 300 μΜ, 350 μΜ, 400 μΜ, 450 μΜ, 500 μΜ, 550 μΜ 600 μΜ, 650 μΜ, 700 μΜ, 750 μΜ, 800 μΜ, 850 μΜ, 900 μΜ, 950 μΜ ou 1 μΜ. Em algumas modalidades descritas neste documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a concentração é 5 nM, 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM, 100 nM, 150 nM, 200 nM, 250 nM, 300 nM, 350 nM, 400 nM, 450 nM, 500 nM, 550 nM, 600 nM, 650 nM, 700 nM, 750 nM, 800 nM, 850 nM, 900 nM, ou 950 nM. Em algumas modalidades descritas neste documento, a célula é colocada em contato ou cultivada com concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma amostra de tecido é colocada em contato com uma concentração de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a concentração está entre 0,01 μΜ a 0,1 μΜ, 0,1 μΜ a 1 μΜ, 1 μΜ a 50 μΜ, 50 μΜ a 100 μΜ, 100 μΜ a 500 μΜ, 500 μΜ a 1 nM, 1 nM a 10 ηΜ, 10 nM a 50 ηΜ, 50 nM a 100 ηΜ, 100 nM a 50 0 ηΜ, 50 0 ηΜ a 1000 ηΜ.
[0799] Técnicas conhecidas por um versado na técnica podem ser usadas para determinar a quantidade de um transcrito de RNA. Em algumas modalidades, a quantidade de um, dois, três ou mais transcritos de RNA é medida usando o sequenciamento profundo, como ILLUMINA® RNASeq, sequenciamento de próxima geração ILLUMINA® (NGS), sequenciamento de próxima geração ION TORRENT™, 454™ pirossequenciamento ou sequenciamento por detecção de Oligo Ligação (SOLID™). Em outras modalidades, a quantidade de múltiplos transcritos de RNA é medida usando uma matriz de éxons, como a matriz de éxons humanos GENECHIP®. Em algumas modalidades, a quantidade de um, dois, três ou mais transcritos de RNA é determinada por RT-PCR. Em outras modalidades, a quantidade de um, dois, três ou mais transcritos de RNA é medida por RT-qPCR. As técnicas para realizar estes ensaios são conhecidas dos versados na técnica.
[0800] Em algumas modalidades, uma análise estatística ou outra análise é realizada nos dados do ensaio utilizados para medir um transcrito de RNA. Em algumas modalidades, uma análise estatística de teste-t de student é realizada nos dados do ensaio utilizados para medir um transcrito de RNA para determinar aqueles transcritos de RNA que têm uma alteração na quantidade na presença do composto em relação à quantidade na ausência do composto ou presença de um controle negativo. Em modalidades específicas, o valor do teste-t de student desses transcritos de RNA com a alteração é de 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % ou 0,1 %. Em algumas modalidades especificas, o valor de p desses transcritos de RNA com a alteração é 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % ou 0,1 %. Em certas modalidades especificas, o teste-t de Student os valores de p dos transcritos de RNA com a alteração são 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2%, 1%, 0,5% ou 0,1% e 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5 % ou 0,1 %), respectivamente.
[0801] Em algumas modalidades, uma análise adicional é realizada para determinar como um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo está alterando a quantidade de um transcrito de RNA. Em modalidades especificas, uma análise adicional é realizada para determinar se uma alteração na quantidade de um transcrito de RNA na presença de um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em relação à quantidade de transcrito de RNA na ausência do composto ou de uma forma do mesmo, ou a presença de um controle negativo é devido a alterações na transcrição, splicing e/ou estabilidade do transcrito de RNA. As técnicas conhecidas por um versado na técnica podem ser usadas para determinar se um composto SMSM ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo altera, por exemplo, a transcrição, splicing e/ou estabilidade de um transcrito de RNA.
[0802] Em algumas modalidades, a estabilidade de um ou mais transcritos de RNA é determinada por análise em série da expressão de genes (SAGE), análise diferencial de exibição (DD), arbitrariamente iniciador de RNA (RAP)-PCR, análise litica da endonuclease de restrição de sequências diferencialmente expressas (READS), polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição amplificado (ALFP), análise de expressão de genes total (TOGA), RT-PCR, RT-qPCR, análise de hibridização de filtro de cDNA de alta densidade (HDFCA), hibridização subtrativa de supressão (SSH), triagem diferencial (DS), matrizes de cDNA, chips de oligonucleotídeos ou micromatrizes de tecidos. Em outras modalidades, a estabilidade de um ou mais transcritos de RNA é determinada por Northern blots, proteção de RNase ou slot blots.
[0803] Em algumas modalidades, a transcrição em uma amostra de célula ou tecido é inibida antes (por exemplo, 5 minutos, 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas ou 72 horas antes) ou depois (por exemplo, 5 minutos, 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas ou 72 horas após) da célula ou da amostra de tecido ser contatada ou cultivada com um inibidor da transcrição, como a-amanitina, DRB, flavopiridol, triptolideo ou actinomicina-D. Em outras modalidades, a transcrição em uma amostra de célula ou tecido é inibida com um inibidor de transcrição, como a-amanitina, DRB, flavopiridol, triptolideo ou actinomicina-D, enquanto a amostra de célula ou tecido é colocada em contato ou cultivada com um SMSM composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0804] Em algumas modalidades, o nivel de transcrição de um ou mais transcritos de RNA é determinado por ensaio de execução nuclear ou uma iniciação da transcrição in vitro e ensaio de alongamento. Em algumas modalidades, a detecção da transcrição é baseada na medição de radioatividade ou fluorescência. Em algumas modalidades, uma etapa de amplificação baseada em PCR é usada.
[0805] Em algumas modalidades, a quantidade de formas de splice alternativamente dos transcritos de RNA de um gene especifico é medida para ver se há uma alteração na quantidade de uma, duas ou mais formas de splicing alternativamente dos transcritos de RNA do gene. Em algumas modalidades, a quantidade de uma isoforma codificada por um gene especifico é medida para ver se há uma alteração na quantidade da isoforma. Em algumas modalidades, os níveis de formas de splicing de RNA são quantificados por RT-PCR, RT-qPCR ou transferência de Northern. Em outras modalidades, técnicas especificas de sequência podem ser usadas para detectar os níveis de uma forma de splice individual. Em algumas modalidades, o splicing é medido in vitro usando extratos nucleares. Em algumas modalidades, a detecção é baseada na medição de radioatividade ou fluorescência. Técnicas conhecidas por um versado na técnica podem ser usadas para medir alterações na quantidade de formas com splice alternativamente de um transcrito de RNA de um gene e alterações na quantidade de uma isoforma codificada por um gene.
Amostras biológicas
[0806] Uma amostra, por exemplo, uma amostra biológica pode ser retirada de um indivíduo e examinada para determinar se o indivíduo produz mRNA que é submetido a splicing alternativo. Uma amostra biológica pode compreender uma pluralidade de amostras biológicas. A pluralidade de amostras biológicas pode conter duas ou mais amostras biológicas; por exemplo, cerca de 2-1000, 2-500, 2-250, 2-100, 2-75, 2-50, 2-25, 2-10, 10-1000, 10-500, 10-250, 10-100, 10-75, 10-50, 10-25, 25-1000, 25-500, 25-250, 25-100, 25-75, 25-50, 50-1000, 50-500, 50-250, 50-100, 50-75, 60-70, 100-1000, 100-500, 100-250, 250-1000, 250-500, 500-1000, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, ou qualquer faixa ou número inteiro incluído. As amostras biológicas podem ser obtidas de uma pluralidade de indivíduos, dando uma pluralidade de conjuntos de uma pluralidade de amostras. As amostras biológicas podem ser obtidas de cerca de 2 a cerca de 1000 indivíduos, ou mais; por exemplo, cerca de 2-1000, 2-500, 2-250, 2-100, 2-50, 2-25, 2-20, 2-10, 10-1000, 10-500, 10-250, 10-100, 10-50, 10-25, 10-20, 15-20, 25-1000, 25-500, 25-250, 25-100, 25-50, 50-1000, 50-500, 50-250, 50-100, 100-1000, 100-500, 100-250, 250-1000, 250-500, 500-1000, ou pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 68, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, a 1000 ou mais indivíduos.
[0807] As amostras biológicas podem ser obtidas em seres humanos. As amostras biológicas podem ser obtidas de indivíduos humanos em diferentes idades. O indivíduo humano pode ser pré-natal (por exemplo, um feto), uma criança (por exemplo, um recém-nascido, um bebê, uma criança pequena, um pré-adolescente), um adolescente, um púbere ou um adulto (por exemplo, um adulto precoce, um adulto de meia idade, um idoso). O indivíduo humano pode ter entre 0 meses e 120 anos de idade ou mais velho. O indivíduo humano pode ter entre O e 12 meses de idade; por exemplo, com cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses de idade. O indivíduo humano pode ter entre 0 e 12 anos de idade; por exemplo, entre cerca de 0 e 30 dias de idade; entre cerca de 1 mês e 12 meses de idade; entre cerca de 1 ano e 3 anos de idade; entre cerca de 4 anos e 5 anos de idade; entre cerca de 4 anos e 12 anos de idade; cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre cerca de 13 anos e 19 anos de idade; por exemplo, com 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre cerca de 20 e cerca de 39 anos de idade; por exemplo, com cerca de 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38 ou 39 anos de idade. O indivíduo humano pode ter entre 40 e 59 meses de idade; por exemplo, com cerca de 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, ou 59 anos de idade. O indivíduo humano pode ter mais de 59 anos de idade; por exemplo, cerca de 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 12 0 anos de idade. Os indivíduos humanos podem incluir indivíduos vivos ou falecidos. Os indivíduos humanos podem incluir indivíduos masculinos e/ou femininos.
[0808] Amostras biológicas podem ser obtidas de qualquer fonte adequada que permita a determinação dos níveis de expressão de genes, por exemplo, de células, tecidos, fluidos ou secreções corporais ou um produto de expressão de genes derivado dos mesmos (por exemplo, ácidos nucleicos, como DNA ou RNA; polipeptídeos, como proteínas ou fragmentos de proteínas). A natureza da amostra biológica pode depender da natureza do indivíduo. Se uma amostra biológica for de um indivíduo que é um organismo unicelular ou um organismo multicelular com tecido indiferenciado, a amostra biológica pode compreender células, como uma amostra de uma cultura de células, uma excisão do organismo ou de todo o organismo. Se uma amostra biológica for de um organismo multicelular, a amostra biológica pode ser uma amostra de tecido, uma amostra de fluido ou uma secreção.
[0809] As amostras biológicas podem ser obtidas de diferentes tecidos. O termo tecido pretende incluir conjuntos de células que são de uma origem de desenvolvimento comum e têm função semelhante ou idêntica. O termo tecido também se destina a abranger órgãos, que podem ser um agrupamento funcional e organização de células que podem ter origens diferentes. A amostra biológica pode ser obtida de qualquer tecido. Os tecidos adequados de uma planta podem incluir, mas não estão limitados a, tecido epidérmico, como a superfície externa das folhas; tecido vascular, como o xilema e floema, e tecido moído. Os tecidos vegetais adequados também podem incluir folhas, raízes, pontas das raízes, caules, flores, sementes, cones, brotos, estômatos, pólen ou uma porção ou combinação dos mesmos.
[0810] As amostras biológicas podem ser obtidas de diferentes amostras de tecido de um ou mais humanos ou animais não humanos. Os tecidos adequados podem incluir tecidos conjuntivos, tecidos musculares, tecidos nervosos, tecidos epiteliais ou uma porção ou combinação dos mesmos. Os tecidos adequados também podem incluir todo ou parte de um pulmão, um coração, um vaso sanguíneo (por exemplo, artéria, veia, capilar), uma glândula salivar, um esôfago, um estômago, um fígado, uma vesícula biliar, um pâncreas, um cólon, um reto, um ânus, um hipotálamo, uma glândula pituitária, uma glândula pineal, uma tireoide, uma paratireoide, uma glândula adrenal, um rim, um ureter, uma bexiga, uma uretra, um linfonodo, uma amígdala, uma adenoide, um timo, um baço, pele, músculo, um cérebro, uma medula espinhal, um nervo, um ovário, uma trompa de Falópio, um útero, um tecido vaginal, uma glândula mamária, um testículo, um duto deferente, uma vesícula seminal, uma próstata, tecido peniano, uma faringe, uma laringe, traquéia, brônquios, um diafragma, medula óssea, folículo piloso ou uma combinação dos mesmos. Uma amostra biológica de um animal humano ou não humano também pode incluir um fluido corporal, secreção ou excreção; por exemplo, uma amostra biológica pode ser uma amostra de humor aquoso, humor vítreo, bile, sangue, soro sanguíneo, leite materno, fluido cefalorraquidiano, endolinfa, perilinfa, ejaculado feminino, líquido amniótico, suco gástrico, menstruação, muco, líquido peritoneal, líquido pleural, saliva, sebo, sêmen, suor, lágrimas, secreção vaginal, vômito, urina, fezes ou uma combinação dos mesmos. A amostra biológica pode ser de tecido saudável, tecido doente, tecido suspeito de estar doente ou uma combinação dos mesmos.
[0811] Em algumas modalidades, a amostra biológica é uma amostra de fluido, por exemplo uma amostra de sangue, soro, escarro, urina, sêmen ou outro fluido biológico. Em determinadas modalidades, a amostra é uma amostra de sangue. Em algumas modalidades, a amostra biológica é uma amostra de tecido, como uma amostra de tecido colhida para determinar a presença ou ausência de doença no tecido. Em certas modalidades, a amostra é uma amostra de tecido da tireoide.
[0812] As amostras biológicas podem ser obtidas de indivíduos em diferentes estágios de progressão da doença ou em diferentes condições. Diferentes estágios da progressão da doença ou diferentes condições podem incluir saudáveis, no início do sintoma primário, no início do sintoma secundário, no início do sintoma terciário, durante o curso do sintoma primário, durante o curso do sintoma secundário, durante o curso de sintoma terciário, no final do sintoma primário, no final do sintoma secundário, no final do sintoma terciário, após o final do sintoma primário, após o final do sintoma secundário, após o final do sintoma terciário ou uma combinação dos mesmos. Diferentes estágios da progressão da doença podem ser um período após o diagnóstico ou com suspeita de ter uma doença; por exemplo, pelo menos cerca de, ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 horas; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ou 28 dias; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 semanas; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 anos depois de ser diagnosticado ou com suspeita de ter uma doença. Diferentes estágios da progressão da doença ou diferentes condições podem incluir antes, durante ou após uma ação ou estado; por exemplo, tratamento com fármacos, tratamento com uma cirurgia, tratamento com um procedimento, realização de um procedimento padrão de cuidados, repouso, sono, alimentação, jejum, caminhada, corrida, realização de uma tarefa cognitiva, atividade sexual, pensamento, salto, urinação, relaxação, sendo imobilizado, sendo emocionalmente traumatizado, sendo chocado e similares.
[0813] Os métodos da presente revelação fornecem análise de uma amostra biológica de um indivíduo ou um conjunto de indivíduos. O(s) indivíduo(s) pode(m) ser, por exemplo, qualquer animal (por exemplo, um mamífero), incluindo mas não limitado a seres humanos, primatas não humanos, roedores, cães, gatos, porcos, peixes e similares. Os presentes métodos e composições podem se aplicar a amostras biológicas de seres humanos, como descrito no presente documento.
[0814] Uma amostra biológica pode ser obtida por métodos conhecidos na técnica, como os métodos de biópsia fornecidos no presente documento, esfregaço, raspagem, flebotomia ou qualquer outro método adequado. A amostra biológica pode ser obtida, armazenada ou transportada usando componentes de um kit da presente revelação. Em alguns casos, múltiplas amostras biológicas, como múltiplas amostras de tireoide, podem ser obtidas para análise, caracterização ou diagnóstico de acordo com os métodos da presente revelação. Em alguns casos, múltiplas amostras biológicas, como uma ou mais amostras de um tipo de tecido (por exemplo, tireoide) e uma ou mais amostras de outro tipo de tecido (por exemplo, bucal) podem ser obtidas para diagnóstico ou caracterização pelos métodos da presente revelação. Em alguns casos, múltiplas amostras, como uma ou mais amostras de um tipo de tecido (por exemplo, tireoide) e uma ou mais amostras de outro tecido (por exemplo, bucal) podem ser obtidas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes. Em alguns casos, as amostras obtidas em tempos diferentes são armazenadas e/ou analisadas por diferentes métodos. Por exemplo, uma amostra pode ser obtida e analisada por análise citológica (por exemplo, usando coloração de rotina). Em alguns casos, uma amostra adicional pode ser obtida de um indivíduo com base nos resultados de uma análise citológica. O diagnóstico de câncer ou outra condição pode incluir um exame de um indivíduo por um médico, enfermeiro ou outro profissional médico. O exame pode fazer parte de um exame de rotina, ou pode ser devido a uma queixa específica, incluindo, mas não se limitando a, um dos seguintes: dor, doença, antecipação de doença, presença de nódulo ou massa suspeita, uma doença ou uma condição. O indivíduo pode ou não estar ciente da doença ou condição. O profissional médico pode obter uma amostra biológica para teste. Em alguns casos, o profissional médico pode encaminhar o indivíduo a um centro ou laboratório de testes para apresentação da amostra biológica. Os métodos de obtenção fornecidos no presente documento incluem métodos de biópsia, incluindo aspiração por agulha fina, biópsia com agulha central, biópsia assistida a vácuo, biópsia incisional, biópsia excisional, biópsia por punção, biópsia por raspagem ou biópsia de pele. Em alguns casos, os métodos e composições fornecidos no presente documento são aplicados aos dados apenas de amostras biológicas obtidas por FNA. Em alguns casos, os métodos e composições fornecidos no presente documento são aplicados aos dados apenas de amostras biológicas obtidas por FNA ou biópsia cirúrgica. Em alguns casos, os métodos e composições fornecidos no presente documento são aplicados aos dados apenas de amostras biológicas obtidas por biópsia cirúrgica. Uma amostra biológica pode ser obtida por métodos não invasivos, como, métodos incluindo, mas não se limitando a: raspagem da pele ou colo do útero, esfregaço da bochecha, coleta de saliva, coleta de urina, coleta de fezes, coleta de menstruação, lágrimas ou sêmen. A amostra biológica pode ser obtida por um procedimento invasivo, sendo que tais procedimentos incluem, mas não se limitam a: biópsia, lavagem alveolar ou pulmonar, aspiração por agulha ou flebotomia. O método de biópsia pode ainda incluir biópsia incisional, biópsia excisional, biópsia por punção, biópsia por raspagem ou biópsia de pele. O método de aspiração por agulha pode ainda incluir aspiração por agulha fina, biópsia com agulha central, biópsia assistida a vácuo ou biópsia com núcleo grande. Várias amostras biológicas podem ser obtidas pelos métodos descritos no presente documento para garantir uma quantidade suficiente de material biológico. Os métodos para obter amostras adequadas de tireoide são conhecidos na técnica e são descritos em mais detalhes nas Diretrizes de ATA para o gerenciamento de nódulos tireoidianos (Cooper et al. Thyroid Vol. 16 N° 2 2006), incorporado no presente documento por referência na sua totalidade. Os métodos genéricos para a obtenção de amostras biológicas também são conhecidos na técnica e descritos adicionalmente em, por exemplo, Ramzy, Ibrahim Clinical Cytopathology and Aspiration Biopsy 2001, que é incorporado no presente documento por referência na sua totalidade. A amostra biológica pode ser uma agulha fina aspirada de um nódulo da tireoide ou um tumor de tireoide suspeito. O procedimento de amostragem de aspirado por agulha fina pode ser orientado pelo uso de ultrassom, raios X ou outro dispositivo de imagem.
[0815] Em alguns casos, o indivíduo pode ser encaminhado para um especialista, como oncologista, cirurgião ou endocrinologista, para diagnóstico adicional. O especialista também pode obter uma amostra biológica para teste ou encaminhar o indivíduo a um centro ou laboratório de teste para apresentação da amostra biológica. Em qualquer caso, a amostra biológica pode ser obtida por um médico, enfermeiro ou outro profissional médico, como técnico médico, endocrinologista, citologista, flebotomista, radiologista ou pneumologista. O profissional médico pode indicar o teste ou ensaio apropriado a ser realizado na amostra, ou o negócio de perfis moleculares da presente revelação pode consultar quais ensaios ou testes são indicados de mais apropriadamente. O negócio de perfis moleculares pode cobrar do indivíduo ou médico ou fornecedor de seguros do mesmo para trabalho de consultoria, para aquisição e/ou armazenamento de amostra ou todos os produtos e serviços prestados.
[0816] Um profissional médico não precisa se envolver no diagnóstico inicial ou na aquisição de amostras. Um indivíduo pode, alternativamente, obter uma amostra através do uso de um kit de venda livre. O kit pode conter um meio para obter a dita amostra como descrito no presente documento, um meio para armazenar a amostra para inspeção, e instruções para o uso adequado do kit. Em alguns casos, os serviços de perfil molecular estão incluídos no preço para compra do kit. Em outros casos, os serviços de perfil molecular são cobrados separadamente.
[0817] Uma amostra biológica adequada para uso pelo negócio de perfil molecular pode ser qualquer material que contenha tecidos, células, ácidos nucleicos, genes, fragmentos de genes, produtos de expressão, produtos de expressão de genes e/ou fragmentos de produtos de expressão de genes de um indivíduo a ser testado. Métodos para determinar a adequabilidade e/ou adequação da amostra são fornecidos. A amostra biológica pode incluir, mas não está limitada a, tecido, células e/ou material biológico de células ou derivado de células de um indivíduo. A amostra pode ser uma população heterogênea ou homogênea de células ou tecidos. A amostra biológica pode ser obtida usando qualquer método conhecido na técnica que pode fornecer uma amostra adequada para os métodos analíticos descritos no presente documento.
[0818] A obtenção de uma amostra biológica pode ser auxiliada pelo uso de um kit. Pode ser fornecido um kit contendo materiais para obter, armazenar e/ou transportar amostras biológicas. O kit pode conter, por exemplo, materiais e/ou instrumentos para a coleta da amostra biológica (por exemplo, esfregaços estéreis, algodão estéril, desinfetante, agulhas, seringas, bisturis, esfregaços anestésicos, facas, lâmina de cureta, nitrogênio liquido, etc. ) . O kit pode conter, por exemplo, materiais e/ou instrumentos para armazenamento e/ou preservação de amostras biológicas (por exemplo, recipientes; materiais para controle de temperatura, como gelo, compressas de gelo, compressas frias, gelo seco, nitrogênio líquido; conservantes químicos ou tampões como formaldeído, formalina, paraformaldeído, glutaraldeído, álcoois como etanol ou metanol, acetona, ácido acético, fixador HOPE (efeito de proteção de solvente orgânico mediado por tampão de ácido hepes-glutâmico), heparina, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, TAPS, bicina, Tris, tricina, TAPSO, HEPES, TES, MOPS, TUBOS, cadodilato, SSC, MES, tampão fosfato; inibidores de protease como aprotinina, bestatina, inibidor da calpaína I e II, quimostatina, E-64, leupeptina, alfa-2 -macroglobulina, pefabloc SC, pepstatina, fluoreto de fenilmetanossufonila, inibidores de tripsina; inibidores de DNAse, como 2-mercaptoetanol, ácido 2-nitro-5-tiocianobenzoico, cálcio, EGTA, EDTA, dodecil sulfato de sódio, iodoacetato, etc. ; inibidores de RNAse como proteina inibidora de ribonuclease; água destilada dupla; água tratada com DEPC (dietioprocarbonato), etc.). O kit pode conter instruções para uso. O kit pode ser fornecido como, ou conter, um recipiente adequado para o transporte. O contêiner de transporte pode ser um contêiner isolado. O contêiner de transporte pode ser autoendereçado a um agente de coleta (por exemplo, laboratório, centro médico, empresa de testes genéticos, etc. ) . O kit pode ser fornecido a um indivíduo para uso doméstico ou uso por um profissional médico. Como alternativa, o kit pode ser fornecido diretamente a um profissional médico.
[0819] Uma ou mais amostras biológicas podem ser obtidas de um determinado indivíduo. Em alguns casos, entre cerca de 1 e cerca de 50 amostras biológicas são obtidas do determinado indivíduo; por exemplo, cerca de 1-50, 1-40, 1- 30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10, 1-7, 1-5, 5-50, 5-40, 5-30, 5-25, 5-15, 5-10, 10-50, 10-40, 10-25, 10-20, 25-50, 25-40, ou pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, ou 50 amostras biológicas podem ser obtidas do determinado indivíduo. Múltiplas amostras biológicas de um determinado indivíduo podem ser obtidas da mesma fonte (por exemplo, o mesmo tecido), por exemplo, múltiplas amostras de sangue ou múltiplas amostras de tecido ou de múltiplas fontes (por exemplo, múltiplos tecidos). Várias amostras biológicas do determinado indivíduo podem ser obtidas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes. Várias amostras biológicas de um determinado indivíduo podem ser obtidas na mesma condição ou em uma condição diferente. Múltiplas amostras biológicas do determinado indivíduo podem ser obtidas na mesma progressão da doença ou em progressão da doença diferente do indivíduo. Se várias amostras biológicas forem coletadas da mesma fonte (por exemplo, o mesmo tecido) de um indivíduo particular, as amostras poderão ser combinadas em uma única amostra. A combinação de amostras dessa maneira pode garantir a obtenção de material suficiente para teste e/ou análise.
EXEMPLOS
[0820] Esses exemplos são fornecidos para propósitos ilustrativos somente e não limitam o escopo das reivindicações fornecidas no presente documento. Os materiais de partida e reagentes usados para a síntese dos compostos descritos no presente documento podem ser sintetizados ou podem ser obtidos a partir de fontes comerciais, tais como, mas não limitadas a, Sigma-Aldrich, Acros Organics, Fluka, e Fischer Scientific.
Exemplo 1: 2-(6-(ciclopropil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0559
[0821] Etapa 1: Síntese de 6-cloro-N-(2,2, 6, 6- tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina.
Figure img0560
[0822] Uma mistura de 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-amina (2,1 g, 14,1 mmol), 3,6-dicloropiridazina (2 g, 12,8 mmol) e di-isopropiletilamina (3,6 g, 28,2 mmol) em 50 ml de álcool n- butílico foi agitada a 120 °C por 4 h. A mistura foi concentrada e acetato de etila (60 ml) foi adicionado. A mistura resultante foi lavada com 10 ml de H2O, concentrada e triturada em acetato de etila /éter de petróleo que deu 2,3 g de 6-cloro-N- (2,2, 6, 6- tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina como sólido branco (67 % de rendimento) . LCMS: m/z 269, 2 [M+H]+; tr = 1,46 min.
[0823] Etapa 2: Síntese de 6-cloro-W-ciclopropil-N- (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina.
Figure img0561
[0824] Uma mistura de 6-cloro-N- (2,2, 6, 6- tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina (400 mg, 1,5 mmol), ácido ciclopropilborônico (387 mg, 4,5 mmol), Cu(OAc)2 (273 mg, 1,5 mmol), Na2CO3 (318 mg, 3 mmol) e trietilamina (303 mg, 3 mmol) em 10 ml de 1,2-dicloroetano foi agitado à temperatura ambiente por 16 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (metanol / diclorometano = 0-20 %) que deu 210 mg de 6-cloro-N-ciclopropil-N- (2,2,6, 6-tetrametilpiperidin-4- il)piridazin-3-amina como sólido preto (34 % de rendimento). LCMS: m/z 309,2 [M+H]+; tr = 1,77 min.
[0825] Etapa 3: Síntese de 6-(4-cloro-2-metoxifenil) -N- ciclopropil-N- (2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-il) piridazin-3-amina.
Figure img0562
[0826] Uma mistura de 6-cloro-N-ciclopropil-N-(2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina (160 mg, 0,52 mmol), ácido 4-cloro-2-metoxifenilborônico (106 mg, 0,57 mmo1), [1,1'- Bis(difenilfosfino)ferrocene]dicloropaládio(II) (42 mg, 0,05 mmol) e K2CO3 (144 mg, 1,04 mmol) em 3 ml de 1,4-dioxano e 0,3 ml de água foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-20 % de metanol / diclorometano) que deu 150 mg de 6-(4-cloro-2-metoxifenil)-N-ciclopropil-N- (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina como sólido preto (53 % de rendimento) . LCMS: m/z 415,1 [M+H]+; tr = 1,51 min.
[0827] Etapa 4: Síntese de N-ciclopropil-6-(2-metoxi-4- (1H-pirazol-4-il) fenil) -N- (2,2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina.
Figure img0563
[0828] Uma mistura de 6-(4-cloro-2-metoxifenil)-N-ciclopropil-N-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina (110 mg, 0,27 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lfí-pirazol (78 mg, 0,4 mmol), 1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (22 mg, 0,03 mmol) e K2CO3 (73 mg, 0,53 mmol) em 4 ml de 1,4-dioxano e 0,4 ml de água foi purgada com nitrogênio e vedada. A mistura foi agitada a 130 °C sob irradiação de micro-ondas por 2 h, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-20 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 100 mg de AN-ciclopropil-6-(2-metoxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)-N- (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina como sólido branco (25 % de rendimento) . LCMS: m/z 4 4 7,3 [M+H]; tr = 1,78 min.
[0829] Etapa 5: Síntese de composto do título, 2 — (6 — (ciclopropil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4- il) amino )piridazin-3-il) - 5- (1H-pirazol-4-il) fenol.
Figure img0564
[0830] Uma mistura de N-ciclopropil-6- (2-metoxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)-N- (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piridazin-3-amina (80 mg, 0,18 mmol) e etano tiolato de sódio (30 mg, 0,36 mmol) foi dissolvida em N-Metil-2-pirrolidona (2 ml). A mistura foi agitada a 185 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi purificada por HPLC reversa que deu 33 mg de 2 — (6 — (ciclopropil(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il) amino )piridazin-3-il) - 5- (1H-pirazol-4-il) fenol como sólido amarelo (34 % de rendimento).
Exemplo 2: Síntese de 2 - (6- ( ( (1R, 3s , 5S) -8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0565
[0831] Etapa 1: Síntese de (1R,3S,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0566
[0832] Uma mistura de terc-butila (1R,3S,5S)-3-amino-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato (400 mg, 1,77 mmol), 3,6-dicloropiridazina (489 mg, 3,28 mmol) e DIPEA (652 mg, 5,1 mmol) em 4 ml de DMSO foi agitado a 120 °C por 18 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extinta com 10 ml de água, extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram lavados com água (10 ml), concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (5-80 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 320 mg de (lR,3S,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino) -8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (53 % de rendimento). LCMS: m/z 339,2 [M+H]+; tr = 1,41 min.
[0833] Etapa 2: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0567
[0834] Hidreto de sódio (89 mg, 2,23 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de (lR,3S,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (300 mg, 0,89 mmol) em 4 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação a 0 °C por 40 min, Iodeto de Metila (253 mg, 1,78 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 2 h. A mistura foi extinta com água (10 ml), extraída com EtOAc (30 ml X 3), concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (5-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 300 mg de (1R, 3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (96 % de rendimento). LCMS: m/z 353,0 [M+H]+; tr = 1,43 min.
[0835] Etapa 3: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- metoxifenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0568
[0836] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (300 mg, 0,85 mmol), ácido 4-cloro-2-metoxifenilborônico (158 mg, 0,85 mmol), Pd(dppf)Cl2 (78 mg, 0,1 mmol) e K2CO3 (265 mg, 1,92 mmol) em 4 ml de 1,4-dioxano e 0,4 ml de água foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 6 h sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (5-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 130 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-2-metóxifenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (34 % de rendimento). LCMS: m/z 459, 1 [M+H]+; tr = 1,64 min.
[0837] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-metoxi-4- (1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0569
[0838] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-2-metoxifenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (130 mg, 0,28 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (66 mg, 0,34 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0, 028 mmol) e K2CO3 (77 mg, 0,56 mmol) em 2 ml de 1,4-dioxano e 0,4 ml de água foi purgada com nitrogênio e vedada. A mistura foi agitada a 130 °C sob MW por 2 h, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-50 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 120 mg de (1R, 3s, 5S)-3-( (6-(2-metoxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (87 % de rendimento). LCMS: m/z 4 91,3 [M+H]+; tR = 1,98 min.
[0839] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-hidroxi-4- (1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino) -8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0570
[0840] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-( (6-(2-metoxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (120 mg, 0,24 mmol) e EtSNa (41 mg, 0,48 mmol) foi dissolvida em NMP (2 ml) . A mistura foi agitada a 180 °C por 6 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi purificada por HPLC reversa (NH4)2CO3 que deu 70 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4- il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (61 % de rendimento). LCMS: m/z 477,2 [M+H]+; tR = 1,58 min.
[0841] Etapa 6: Síntese de composto do título: 2 —(6 — (((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0571
[0842] Uma solução de 2 ml de Cloreto de Hidrogênio a 4 N em dioxano foi adicionada a uma solução de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-hidroxi-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (70 mg, 0,15 mmol) em 1 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. Após a agitação à temperatura ambiente por 1 h, a mistura foi concentrada, neutralizada com hidróxido de amônio e purificado por HPLC prep (NH4HCO3) que deu 36 mg de 2-(6-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol como sólido amarelo (45 % de rendimento).
Exemplo 3: Síntese de 2 - (6- ( ( (1R, 3s , 5S) -9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0572
[0843] Etapa 1: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila
Figure img0573
[0844] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila (2,5 g, 10,42 mmol), 3,6-dicloropiridazina (2,02 g, 13,55 mmol) e DIPEA (2,96 g, 22,92 mmol) em 50 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 6 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (160 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de silica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,3 g de (1R, 3s, 5S)-3- ( ( 6-cloropiridazin-3-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 63 %). LCMS: m/z 353,2 [M+H]+; tR = 1,93 min.
[0845] Etapa 2: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila
Figure img0574
[0846] Hidreto de sódio (784 mg, 19,60 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino) -9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila (2,3 g, 6,54 mmol) em 40 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (1,9 g, 13,08 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (80 ml X 3) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,0 g de (1R, 3s, 5S)-3-( (6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (84 % de rendimento). LCMS: m/z 367,2 [M+H]+; tr = 2,11 min.
[0847] Etapa 3: Síntese de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0575
[0848] Bromometil metil éter (1,25 g, 10 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-iodofenol (1,5 g, 5 mmol) e K2CO3 (1,38 g, 10 mmol) em 20 ml de DMF a 0°C. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 16 h, extinta com 20 ml de H2O e extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-5 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 1,45 g de 1-bromo-4-iodo-2-(metoximetoxi)benzeno como líquido incolor (79 % de rendimento). LCMS: tr = 1,50 min.
[0849] Etapa 4: Síntese de 4-(4-bromo-3- (metoximetoxi) fenil) -1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol.
Figure img0576
[0850] Uma mistura de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi) benzeno (3,3 g, 9,6 mmol), 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (2,67 g, 9,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (866 mg, 1 mmol) e K2CO3 (2,66 g, 19,3 mmol) em 40 ml de dioxano e 4 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extraída com EtOAc (30 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (10-50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,5 g de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)-1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-lfí-pirazol como óleo incolor (69 % de rendimento). LCMS: m/z 367,1 [M+H]+; tr = 2,03 min.
[0851] Etapa 5: Síntese de 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il) - 1H-pirazol.
Figure img0577
[0852] Uma mistura de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)-1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-lfí-pirazol (1,5 g, 4,1 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,1 g, 8,2 mmol), Pd(dppf)Cl2 (369 mg, 0,41 mmol) e KOAc (804 mg, 8,2 mmol) em 20 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica que deu 0,81 g de 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil) -1- (tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-lfí-pirazol como óleo incolor (48 % de rendimento) . LCMS: m/z 415,3 [M+H]+; tR = 2,10 min.
[0853] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(2- (metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila
Figure img0578
[0854] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3- il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila ( 1,7 g, 4,64 mmol), 4-(3-(metoximetoxi)-4- (4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol (2,5 g, 6,04 mmol), Pd(dppf)Cl2 (339 mg, 0,46 mmol) e K2CO3 (1,28 g, 9,28 mmol) em 40 ml de 1,4-dioxano e 8 ml de água foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 2 h sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (5-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,2 g de (1R,3s,5S)-3-( (6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo pálido (77 % de rendimento). LCMS(AO39): m/z 619,3 [M+H]+; tr = 2,17 min.
[0855] Etapa 7: Síntese de composto do título: 2 —(6 — (((tR,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0579
[0856] Uma solução de 10 ml de HCl a 4 N em dioxano foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonano-9-carboxilato de terc-butila (2,2 g, 3,56 mmol) em 4 ml de CH2Cl2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 h, concentrada sob pressão reduzida, neutralizada com NH3/MeOH e purificada por HPLC prep que deu 900 mg de 2-(6-(((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol como um sólido amarelo (65 % de rendimento).
Exemplo 4: Síntese de 2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0580
[0858] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0581
[0859] Uma solução de hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 7 0 ml de H2O foi adicionada a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O a 0°C. Cloreto de amônio (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram, em seguida, adicionados com agitação. O pH da solução resultante foi ajustado até ~9 com o uso de solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por cerca de 72 h durante cujo tempo o pH foi mantido em aproximadamente 9 usando-se NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento) . LCMS (039) : m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min; pureza: 85 %.
[0860] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0582
[0861] Uma mistura de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitada a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %). LCMS(042): m/z 198,1 [M-55]+; tr = 1,40 min; pureza: 100 %.
[0862] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxiimino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0583
[0863] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e acetato de sódio (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de etanol foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada para dar 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento) . LCMS (039) : m/z 269, 2 [M+H]+; tr = 1,92 min; pureza: 100 %.
[0864] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0584
[0865] Metal sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado porção a porção a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e extinta cuidadosamente com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para propiciar 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente para a seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS(A038): m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min; pureza: 99 %.
[0866] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0585
[0867] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS (038) : m/z 367,2 [M+H]+; tR = 1,88 min; pureza: 99 %.
[0868] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0586
[0869] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 14,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento) . LCMS (039) : m/z 381,2 [M+H]+; tr = 2,17 min; pureza: 99 %.
[0870]
[0871] Etapa 7: Síntese de 1-bromo-4-cloro-2- (metoximetoxi)benzeno
Figure img0587
[0872] Hidreto de sódio (1,85 g, 46,3 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-clorofenol (8 g, 38,6 mmol) em 150 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação a 0 °C por 30 min, Brometo de Metóxi Metila (7,25 g, 58 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com solução aquosa de NH4Cl (15 ml), extraída com EtOAc (30 ml X 3) . A camada orgânica combinada foi seca em Na2SO4 anidro, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 8,1 g de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi)benzeno como óleo incolor (84 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,17 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 6,89 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H). LCMS: tR = 1,51 min.
[0873] Etapa 8: Sintese de ácido 4-cloro-2- (metoximetoxi)fenilborônico
Figure img0588
[0874] Uma solução de THF de n-BuLi (5,76 ml, 14,4 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi) benzeno (3 g, 12 mmol) em 40 ml de THF sob nitrogênio a -78 °C. Após a agitação a -78 °C por 40 min, B(OMe)3 (2 g, 19,2 mmol) foi adicionado. A mistura foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 16 h. Solução aquosa de NH4Cl (10 ml) foi adicionada à mistura. A mistura foi extraída com EtOAc (20 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml), secos em Na2SO4, concentrados e recristalizados a partir de 3 % de EtOAc/éter de petróleo para dar 1,6 g de ácido 4-cloro-2-(metoximetoxi)fenilborônico como sólido branco pérola (62 % de rendimento). LCMS: m/z 199,1 [M- OH] +; tR = 1,65 min.
[0875] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0589
[0876] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3- il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (6 g, 16,4 mmol), ácido 4-cloro-2-(metoximetoxi)fenilborônico (5,3 g, 24,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,6 mg, 2 mmol) e K2CO3 (4,53 mg, 32,8 mmol) em 80 ml de dioxano e 8 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 7 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 4,52 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (57 % de rendimento) . LCMS: m/z 517,3 [M+H]+; tr = 1,86 min.
[0877] Etapa 10: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3- il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0590
[0878] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (14,5 g, 28,1 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H -pirazol (10,9 g, 56,2 mmol), catalisador (2,21 g, 2,82 mmol) e K3PO4 (11,9 g, 56,2 mmol) em 100 ml de dioxano e 50 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 5 h. A mistura foi concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (10-80 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 11,1 g de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (72 % de rendimento) . LCMS: m/z 549, 2 [M+H]+; tr = 2,09 min.
[0879] Etapa 10: Síntese de Composto do título: 2 —(6 — (((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol
Figure img0591
[0880] Uma solução de HCl a 4 N em dioxano (80 ml) foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16 g, 29,2 mmol) em 80 ml de CH2C12 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 h e concentrada. O resíduo foi dissolvido em água. O valor de pH foi ajustado até 9. A mistura foi extraída com CH2C12/MeOH (4/1, v/v). Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-60 % de MeOH/CH2C12) para dar 11,2 g de 2-( 6-( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol como sólido amarelo (84 % de rendimento).
Exemplo 5: Síntese de 2-(6-( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0592
[0882] Etapa 1: Síntese de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0593
[0883] Brometo de metoximetila (1,25 g, 10 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-iodofenol (1,5 g, 5 mmol) e K2CO3 (1,38 g, 10 mmol) em 20 ml de DMF a 0 °C. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 16 h, extinta com 20 ml de H2O e extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-5 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 1,45 g de 1-bromo-4-iodo-2-(metoximetoxi)benzeno como líquido incolor (79 % de rendimento). LCMS: tr = 1,50 min.
[0884] Etapa 2: Síntese de 4-(4-bromo-3- (metoximetoxi) fenil) -1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol.
Figure img0594
[0885] Uma mistura de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi) benzeno (3,3 g, 9,6 mmol), 1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (2,67 g, 9,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (866 mg, 1 mmol) e K2CO3 (2,66 g, 19,3 mmol) em 40 ml de dioxano e 4 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extraída com EtOAc (30 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (10-50 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 2,5 g de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)-1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-lfí-pirazol como óleo incolor (69 % de rendimento). LCMS: m/z 367,1 [M+H]+; tR = 2,03 min.
[0886] Etapa 3: Síntese de 4-(3-(metoximetoxi)-4- (4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil) -1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il) -1H-pirazol.
Figure img0595
[0887] Uma mistura de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)-1-(tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-lfí-pirazol (1,5 g, 4,1 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,1 g, 8,2 mmol), Pd(dppf)Cl2 (3 69 mg, 0,41 mmol) e KOAc (804 mg, 8,2 mmol) em 20 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica que deu 0,81 g de 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil) -1- (tetra-hidro-2fí-piran-2-il)-1H-pirazol como óleo incolor (48 % de rendimento) . LCMS: m/z 415,3 [M+H]+; tR = 2,10 min.
[0888] Etapa 4: Síntese de N1, N5-dimetoxi-Nl, N5- dimetilglutaramide.
Figure img0596
[0889] Did oreto de glutaroíla (50 g, 0,299 mol) foi adicionado a uma solução agitada de cloridrato de N, O- dimetil hidroxilamina (64 g, 0,658 mmol) e Et3N (121,2 g, 1,2 mmol) em 1000 ml de CH2Cl2 a 0°C ao longo de 30 min. A mistura de reação foi deixada até a temperatura ambiente e agitada por 3 h. 500 ml de água foram adicionados à mistura, que foi extraída com CH2Cl2 (1000 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de HCl a 1 %, salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para propiciar 55 g de N1, N5-dimetoxi-N1, N5-dimetilglutaramida como óleo marrom (85 % de rendimento), que foi usado para a seguinte etapa sem purificação adicional. LCMS: m/z 219,2 [M+H]+; tr = 1,26 min.
[0890] Etapa 5: Síntese de heptano-2,6-diona.
Figure img0597
[0891] Brometo de metil magnésio (250 ml, 0,756 mol) foi adicionado a uma solução agitada de N1,N5-dimetoxi-Nl, N5-dimetilglutaramida (55 g, 0,252 mol) em 800 ml de THF seco a 0°C ao longo de 30 min. Após todo o reagente de Grignard ter sido adicionado, a mistura de reação foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 2 h. Água, 50 ml, foi adicionada à mistura seguido de 300 ml de solução aquosa de HCl a 1 %. A mistura foi extraída com acetato de etila (1000 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa de HCl a 1 %, salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (10-50 % acetato de etila em éter de petróleo) para propiciar 13 g de heptano-2,6-diona como sólido amarronzado (40 % de rendimento) . LCMS: m/z 129,1 [M+H]+; tr = 1,24 min.
[0892] Etapa 6: Síntese de 1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona.
Figure img0598
[0893] Acetato de Amônio (18,3 g, 0,238 mol) e ácido acetona dicarboxílico (34,7 g, 0,238 mol) foram adicionados a uma solução agitada de heptano-2,6-diona (5,07 g, 39,6 mmol) em AcOH (49 ml) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi, em seguida, agitada por 3 h a 80 °C. A mistura foi resfriada até 0 °C e diluída com CH2Cl2 e água. A fase aquosa foi separada e acidificada com solução aquosa de HCl a 10 % (pH =1) e, em seguida, diluída com EtOAc. A mistura resultante foi extraída com água. As camadas aquosas combinadas foram basificadas com NaOH a 20 % (pH =11) e extraídas com CH2Cl2 (três vezes) . As camadas orgânicas combinadas foram secas em K2CO3 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (50 % de acetato de etila em éter de petróleo a 10 % de MeOH em CH2Cl2) para propiciar 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (2,0 g, 30 % de rendimento) como óleo vermelho escuro. LCMS: m/z 168,2 [M+H]+; tr = 1,24 min.
[0894] Etapa 7: Síntese de 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona.
Figure img0599
[0895] Uma solução de 1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (2,0 g, 11,98 mmol), K2CO3 (3,3 g, 24 mmol) e 1-(clorometil)-4-metoxibenzeno (2,2 g, 14,4 mmol.) em 50 ml de acetona foi aquecida até o refluxo por 16 h sob proteção de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, 50 ml de água foram adicionados a essa mistura que foi extraída com acetato de etila (50 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de sílica (10-30 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona como sólido amarelado (2,4 g, 70 % de rendimento) . LCMS: m/z 288,2 [M+H]+; tr = 1,22 min.
[0896] Etapa 8: Síntese de oxima de 9-(4-metoxibenzil)- 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona.
Figure img0600
[0897] Uma solução de 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (8,5 g, 29,62 mmol) e NH2OH HCl (4,1 g, 60 mmol) em 150 ml de etanol foi aquecida até 85 °C por 3 h. Em seguida, a mistura foi concentrada ao resíduo que foi dissolvido em água e o pH ajustado até 8 com solução aquosa de Na2CO3. A mistura foi extraída com acetato de etila (200 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas que deu oxima de 9-(4-metoxibenzil)- 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona como sólido branco (8,1 g, 90 % de rendimento ) . LCMS: m/z 303,1 [M+H]+; tr = 1,19 min.
[0898] Etapa 9: Síntese de (1R, 3s,5S)-9-(4- metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0601
[0899] Sódio (6,72 g, 280 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de oxima de 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (8,1 g, 26,82 mmol) em 100 ml de propanol em porções a 105 °C. Após a adição, a reação foi agitada a 105 °C por 1 h. A mistura de reação foi concentrada e 100 ml de água foram adicionados. A mistura foi extraída com acetato de etila (150 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas para propiciar (1R, 3s, 5S)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como óleo incolor (6,3 g, 82 % de rendimento) . LCMS: m/z 2 8 9, 1 [M+H]+; tr = 1,18 min.
[0900] Etapa 10: Síntese de (1R,3s,5S)-N-(6- cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0602
[0901] Uma solução de (1R,3s,5S)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (6,3 g, 21,88 mmol), 3,6-dicloropiridazina (3,9 g, 26,26 mmol) e DIPEA (5,4 g, 42 mmol) em 100 ml de DMSO foi aquecida até 140 °C por 6 h sob proteção de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente. 100 ml de água foram adicionados a essa mistura e extraídos com acetato de etila (105 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NH4Cl, salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de sílica (10-50 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu (1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido marrom (4,2 g, 50 % de rendimento). LCMS: m/z 4 01,2 [M+H]+; tr = 1,39 min.
[0902] Etapa 11: Síntese de (1R,3s,5S)-N-(6- cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0603
[0903] Hidreto de sódio (768 mg, 16 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)- 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (4,2 g, 10,5 mmol) em 100 ml de THF à temperatura ambiente. Após a reação ter sido agitada por 30 min, iodeto de metila (1,78 g, 12,6 mmol) foi adicionado à mistura. A reação foi aquecida até 50 °C por 6 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com 50 ml de água e extraída com acetato de etila (100 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de sílica (10-60 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu (1R, 3s, 5S) -N- (6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido marrom (2,7 g, 60 % de rendimento). LCMS: m/z 415,2 [M+H]+; tr = 1,42 min.
[0904] Etapa 12: Síntese de (1R,3s,5S)-9-(4- metoxibenzil)-N-(6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il) -N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0604
[0905] Uma mistura de (1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (120 mg, 0,3 mmol), 4—(3— (metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol (120 mg, 0,3 mmol), Pd(dppf)Cl2 (22 mg, 0,03 mmol) e K2CO3 (81 mg, 0,6 mmol) em 5 ml de dioxano e 1 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 85 °C por 6 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extraída com EtOAc (30 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (10-50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 100 mg g de (1R,3s,5S)-9-(4-metoxibenzil)-N-(6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-N,1,5-trimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido amarelado (50 % de rendimento) . LCMS: m/z 667,5 [M+H]+; tr = 1,51 min.
[0906] Etapa 13: Síntese de (1R, 3s, 5S) -N- (6- (2- (metoximetoxi) -4- (1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0605
[0907] Uma solução de (1R,3s,5S)-9-(4-metoxibenzil)-N- (6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (100 mg, 0,15 mmol) e Pd (OH) 2 (100 mg) em MeOH (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob um balão de hidrogênio por 6 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite e concentrada o que deu (1R,3s,5S)-N- (6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol-4-il) fenil) piridazin-3-il) -N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido amarelado (52 mg, 78 % em rendimento) . LCMS: m/z 547,3 [M+H]+; tR = 1,54 min.
[0908] Etapa 13: Síntese de 2-( 6- ( ( (1R,3s,5S)-1,5- dime til-9-azabiciclo [3.3.1]nonan-3- il) (metil) amino )piridazin-3-il) - 5- (1H-pirazol-4-il) fenol.
Figure img0606
[0909] uma solução de (1R, 3s, 5S) -N- ( 6- (2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)-N, 1,5-trimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (52 mg, 0,095 mmol) em 10 ml de HCl em dioxano (4 N) foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. A mistura de reação foi concentrada. Uma solução de Amônia em metanol (7 N) foi adicionada para ajustar o pH até 9. A mistura foi concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (80 % de MeOH/EtOAc) que deu 25 mg de 2 — (6 — (((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il) (metil) amino )piridazin-3-il) - 5- (1H-pirazol-4-il) fenol como sólido amarelo (60 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Metanol-d4) δ 8,15 (d, J = 9,9 Hz, 1H) , 8,09 (s, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,33 (d, J = 9,8 Hz, 1H) , 7,21-7,20 (m, 2H) , 6, 08 - 6, 03 (m, 1H) , 2,99 (s, 3H) , 2,45 - 2,42 (m, 1H) , 2,15 - 1,76 (m, 9H) , 1,48 (s, 6H) . LCMS: m/z 419.2.0 [M+H]+; tR = 1,34 min.
Exemplo 6: Síntese de 2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0607
[0910] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0608
[0911] Hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionado a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 LX 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento) . LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min.
[0912] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0609
[0913] Uma mistura de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitada a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %). LCMS: m/z 198,1 [M-55]+; tR = 1,40 min.
[0914] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila .
Figure img0610
[0915] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e NaOAc (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de EtOH foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada para dar 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento). LCMS: m/z 269,2 [M+H]+; tr = 1,92 min.
[0916] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila .
Figure img0611
[0917] Sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado em porções a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para propiciar 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente para a seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS: m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min.
[0918] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0612
[0919] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de silica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS: m/z 367,2 [M+H]+; tr = 1,88 min.
[0920] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0613
[0921] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 14,5 g de (1R,3s,5S)-3-( (6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento). LCMS: m/z 381,2 [M+H]+; tr = 2,17 min.
[0922] Etapa 7: Síntese de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol
Figure img0614
[0923] Bromo (3,52 g, 22 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 3-cloro-4-fluorofenol (4,02 g, 20 mmol) em 80 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 18 h e extinta com 10 ml de solução aquosa de Na2S2O3. A fase orgânica foi coletada, concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 2,5 g de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol como sólido branco (44 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J= 6,6 Hz, 1H) , 5,45 (s, 1H) . LCMS: tr = 1,44 min.
[0924] Etapa 8: Síntese de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0615
[0925] Hidreto de sódio (215 mg, 5,4 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol (1 g, 4,48 mmol) em 14 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 30 min, bromo (metoxi) metano (428 mg, 8 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com 10 ml de solução aquosa saturada de NH4Cl e extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-8 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 1,01 g de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)benzeno como sólido branco (70 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 6,6 Hz, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 3,52 (s, 3H).
[0926] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(4-cloro-5- fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0616
[0927] Uma mistura de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno (8,5 g, 31,7 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (12,1 g, 47,5 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,86 g, 2,54 mmol) e acetato de potássio (6,2 g, 63,4 mmol) em 200 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (8 g, 21,2 mmol), K2CO3 (5,8 g, 42,3 mmol) e H2O (30 ml) foram adicionados. A mistura foi agitada a 100 °C por 3 h, concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-25 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 6 g de (1R, 3s, 5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3- il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo claro (53 % de rendimento) . LCMS: m/z 535, 2 [M+H]+; tr = 2,40 min.
[0928] Etapa 10: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0617
[0929] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (120 mg, 0,22 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (66 mg, 0,34 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0, 028 mmol) e K2CO3 (77 mg, 0,56 mmol) em 2 ml de 1,4-dioxano e 0,4 ml de água foi purgada com nitrogênio e vedada. A mistura foi agitada a 130 °C sob MW por 2 h, concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (0-20 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 90 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (72 % de rendimento) . LCMS: m/z 567,2 [M+H]+; tr = 1,59 min.
[0930] Etapa 11: Síntese de 2-( 6- ( ( (1R,3s,5S)-1,5- dime til-8-azabiciclo [3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0618
[0931] Uma solução HCl em dioxano (4 N, 4 ml) foi adicionada a uma solução agitada de (1R, 3s, 5S)-3-((6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (90 mg, 0,16 mmol) em 2 ml de CH2Cl2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 h, concentrada sob pressão reduzida, neutralizada com NH3/MeOH e purificada por HPLC prep para dar 32 mg de 2 —(6 — (((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il) fenol como um sólido amarelo (54 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, DMSO-de) δ 13,56 (s, 1H) , 13,14 (s, 1H) , 8,21 (d, J = 9,9 Hz, 1H) , 8,11 (s, 2H) , 7,81 (d, J = 12,6 Hz, 1H) , 7,35 (d, J = 9,9 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 7,0 Hz, 1H) , 5, 00 - 4, 87 (m, 1H) , 2,93 (s, 3H) , 1,83 - 1,77 (m, 2H) , 1,56 - 1,39 (m, 6H), 1,17 (s, 6H). LCMS(A038): m/z 42 3,3 [M+H]+; tr = 1,36min.
Exemplo 7: Síntese de 2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0619
[0932] Etapa 1: Síntese de N1, N5-dimetoxi-Nl,N5-dimetilglutaramida
Figure img0620
[0933] Did oreto de glutaroila (50 g, 0,299 mol) foi adicionado a uma solução agitada de cloridrato de N, O-dimetil hidroxilamina (64 g, 0,658 mmol) e Et3N (121,2 g, 1,2 mmol) em 1000 ml de CH2Cl2 a 0 °C ao longo de 30 min. A mistura de reação foi deixada até a temperatura ambiente e agitada por 3 h. 500 ml de água foram adicionados à mistura, que foi extraída com CH2Cl2 (1000 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de HCl a 1 %, salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida que deu 55 g de N1, N5-dimetoxi-Nl, N5-dimetilglutaramida como óleo marrom (85 % de rendimento), que foi usado para a seguinte etapa sem purificação adicional. LCMS: m/z 219,2 [M+H]+; tr = 1,26 min.
[0934] Etapa 2: Síntese de heptano-2,6-diona
Figure img0621
[0935] Brometo de metil magnésio (250 ml, 0,756 mol) foi adicionado a uma solução agitada de N1, N5-dimetoxi-N1, N5-dimetilglutaramida (55 g, 0,252 mol) em 800 ml de THF a 0 °C ao longo de 30 min. A mistura de reação foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 2 h. 50 ml de água foram adicionados à mistura seguido de 300 ml de solução aquosa de HCl a 1 %. A mistura foi extraída com acetato de etila (1000 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa de HCl a 1 %, salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (10-50 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu 13 g de heptano-2,6-diona como sólido amarronzado (40 % de rendimento). LCMS: m/z 129,1 [M+H]+;tr = 1,24 min.
[0936] Etapa 3: Síntese de 1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona
Figure img0622
[0937] Acetato de Amônio (18,3 g, 0,238 mol) e ácido acetona dicarboxílico (34,7 g, 0,238 mol) foram adicionados a uma solução agitada de heptano-2,6-diona (5,07 g, 39,6 mmol) em AcOH (49 ml) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi, em seguida, agitada por 3 h a 80 °C. A mistura foi resfriada até 0 °C e diluída com CH2Cl2 e água. A fase aquosa foi separada e acidificada com solução aquosa de HCl a 10 % (pH =1) e, em seguida, diluída com AcOEt. A mistura resultante foi extraída com água. As camadas aquosas combinadas foram basificadas com NaOH a 20 % (pH =11) e extraídas com CH2Cl2 (três vezes) . As camadas orgânicas combinadas foram secas em K2CO3 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (50 % de acetato de etila em éter de petróleo a 10 % de MeOH em CH2Cl2) que deu 1,5- dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (2,0 g, 30 % de rendimento) como óleo vermelho escuro. LCMS: m/z 168,2 [M+H]+; tr = 1,24 min.
[0938] Etapa 4: Síntese de 9-(4-metoxibenzil)-1,5- dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona
Figure img0623
[0939] Uma solução de 1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (2,0 g, 11,98 mmol), K2CO3 (3,3 g, 24 mmol) e 1-(clorometil)-4-metoxibenzeno (2,2 g, 14,4 mmol.) em 50 ml de acetona foi aquecida até o refluxo por 16 h sob proteção de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, 50 ml de água foram adicionados a essa mistura que foi extraída com acetato de etila (50 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de silica (10-30 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona como sólido amarelado (2,4 g, 70 % de rendimento) . LCMS: m/z 288,2 [M+H]+; tr = 1,22 min.
[0940] Etapa 5: Síntese de oxima de 9-(4-metoxibenzil)- 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona
Figure img0624
[0941] Uma solução de 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (8,5 g, 29,62 mmol) e NH2OH HCl (4,1 g, 60 mmol) em 150 ml de etanol foi aquecida até 85 °C por 3 h. Em seguida, a mistura foi concentrada ao resíduo que foi dissolvida em água e o pH ajustado até 8 com solução aquosa de Na2CO3. A mistura foi extraída com acetato de etila (200 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas que deu oxima de 9-(4-metoxibenzil)- 1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona como sólido branco (8,1 g, 90 % de rendimento ) . LCMS: m/z 303,1 [M+H]+; tr = 1,19 min.
[0942] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-9-(4- metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina
Figure img0625
[0943] Sódio (6,72 g, 280 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de oxima de 9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-ona (8,1 g, 26,82 mmol) em 100 ml de propanol em porções a 105 °C. Após a adição, a reação foi agitada a 105 °C por 1 h. A mistura de reação foi concentrada e 100 ml de água foram adicionados. A mistura foi extraída com acetato de etila (150 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas que deu (1R,3s,5S)-9-(4- metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como óleo incolor (6,3 g, 82 % de rendimento) . LCMS: m/z 289, 1 [M+H]+; tR = 1,18 min.
[0944] Etapa 7: Síntese de (1R, 3s,5S)-N-(6- cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina
Figure img0626
[0945] Uma solução de (1R, 3s,5S)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (6,3 g, 21,88 mmol), 3,6-dicloropiridazina (3,9 g, 26,26 mmol) e DIPEA (5,4 g, 42 mmol) em 100 ml de DMSO foi aquecido até 140 °C por 6 h sob proteção de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente. 100 ml de água foram adicionados a essa mistura e extraídos com acetato de etila (105 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NH4Cl, salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de silica (10-50 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu (1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido marrom (4,2 g, 50 % de rendimento). LCMS: m/z 401,2 [M+H]+; tr = 1,39 min.
[0946] Etapa 8: Síntese de (1R,3s,5S)-N-(6- cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina
Figure img0627
[0947] Hidreto de sódio (768 mg, 16 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de (1S,3R)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-1,5-dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (4,2 g, 10,5 mmol) em 100 ml de THF à temperatura ambiente. Após a reação ter sido agitada por 30 min, iodeto de metila (1,78 g, 12,6 mmol) foi adicionado à mistura. A reação foi aquecida até 50 °C por 6 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com 50 ml de água e extraída com acetato de etila (100 ml X 3) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas e purificadas por cromatografia em gel de silica (10-60 % de acetato de etila em éter de petróleo) que deu (1S,3R)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4- metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido marrom (2,7 g, 60 % de rendimento). LCMS: m/z 415,2 [M+H]+; tr = 1,42 min.
[0948] Etapa 9: Síntese de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol
Figure img0628
[0949] Bromo (3,52 g, 22 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 3-cloro-4-fluorofenol (4,02 g, 20 mmol) em 80 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 18 h e extinta com 10 ml de solução aquosa de Na2S2O3. A fase orgânica foi coletada, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,5 g de 2- bromo-5-cloro-4-fluorofenol como sólido branco (44 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J= 6,6 Hz, 1H) , 5,45 (s, 1H) . LCMS: tr = 1,44 min.
[0950] Etapa 10: Síntese de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0629
[0951] Hidreto de sódio (215 mg, 5,4 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol (1 g, 4,48 mmol) em 14 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 30 min, bromo (metoxi) metano (428 mg, 8 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com 10 ml de solução aquosa saturada de NH4Cl e extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de silica (0-8 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 1,01 g de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)benzeno como sólido branco (70 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 6,6 Hz, 1H) , 5,20 (s, 2H), 3,52 (s, 3H).
[0952] Etapa 11: Síntese de (1R, 3s, 5S)-N-(6-(4-cloro-5- fluoro-2-(metoximetoxi)fenil) piridazin-3-il)-9-(4- metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0630
[0953] Uma mistura de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)benzeno (600 mg, 2,22 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (677 mg, 2,66 mmol), Pd(dppf)Cl2 (325 mg, 0,44 mmol) e KOAc (435 mg, 4,44 mmol) em 8 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 6 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, (1R,3s,5S)-N-(6-cloropiridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)-N,1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (735 mg, 1,78 mmol), Pd(dppf)Cl2 (325 mg, 0,44 mmol), K2CO3 (613 mg, 4,44 mmol) e 1 ml de H2O foi adicionado. A mistura foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 2 h, concentrada e purificada por coluna de gel de silica (40 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 615 mg de (1R, 3s, 5S)-N-(6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil) piridazin -3-il)-9- (4-metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido marrom (49 % de rendimento). LCMS: m/z 569,0 [M+H]+; tr = 2,54 min.
[0954] Etapa 12: Síntese de (1R, 3s, 5S)-N-( 6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi) - 4- (1H-pirazol-4-il) fenil) piridazin-3-il) - 9-(4-metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina.
Figure img0631
[0955] Uma mistura de (1R,3s,5S)-N- (6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil) piridazin-3-il)-9-(4-metoxibenzil)- N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (188 mg, O, 33 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il) - 1H -pirazol (65 mg, 0,33 mmol), catalisador (52 mg, 0,07 mmol) e K3PO4 (141 mg, 0,66 mmol) em 2 ml de dioxano e 0,3 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 16 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (40-100 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 113 mg de (1R,3s,5S)-N-(6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1H-pirazol-4-il) fenil) piridazin-3-il) - 9- (4-metoxibenzil) -N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina como sólido branco (57 % de rendimento) . LCMS: m/z 601,2 [M+H]+; tr = 2,27 min.
[0956] Etapa 13: Síntese de 2-(6-(((1H,3s,5S)-1,5- dimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il) (metil) amino )piridazin-3-il) - 4-fluoro-5- (1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0632
[0957] Uma mistura de (1R, 3s, 5S)-N-( 6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi) - 4- (1H-pirazol-4-il) fenil) piridazin-3-il) - 9-(4-metoxibenzil)-N, 1,5-trimetil-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-amina (113 mg, 0,19 mmol) em 10 ml de TFA foi agitada a 70 °C por 72 h. A mistura de reação foi concentrada, NH3/MeOH (7 N) foi adicionado para tornar o pH = 9, concentrado e purificado por coluna de gel de silica (80 % de MeOH/EtOAc) que deu 2-( 6-( ( (1H,3s,5S)-1,5-dimetil-9- azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol (13 mg, 16 % de rendimento). H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,52 (s, 1H) , 13,13 (s, 1H) , 8,22 (d, J= 10,1 Hz, 1H) , 8,18 - 7,91 (m, 2H), 7,80 (d, J= 12,7 Hz, 1H), 7,29 (dd, J= 11,7, 8,3 Hz, 2H) , 5,74 (m, 1H) , 2,88 (s, 2H) , 2,15 - 1,99 (m, 1H) , 1,63 (m, 5H), 1,56 - 1,24 (m, 4H), 1,05 (s, 6H). LCMS: m/z 437,0 [M+H]+; tr = 1,77 min.
Exemplo 8: Síntese de 4 -(4-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona
Figure img0633
[0958] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0634
[0959] Hidreto de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionado a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento). LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min; pureza: 85 %.
[0960] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0635
[0961] Uma mistura de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitado a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %) . LCMS: m/z 198,1 [M-55]+; tr = 1,40 min; pureza: 100%
[0962] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0636
[0963] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e NaOAc (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de EtOH foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada para dar 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento). LCMS: m/z 269,2 [M+H]+; tr = 1,92 min; pureza: 100 %.
[0964] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0637
[0965] Sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado em porções a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida que deu 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente para a seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS: m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min; pureza: 99 %.
[0966] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0638
[0967] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS: m/z 367,2 [M+H]+; tr = 1,88 min; pureza: 99 %.
[0968] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0639
[0969] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, iodometano (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de silica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 14,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento). LCMS: m/z 381,2 [M+H]+; ír = 2,17 min; pureza: 99 %.
[0970] Etapa 7: Síntese de 1-bromo-4-cloro-2- (metoximetoxi)benzeno
Figure img0640
[0971] Hidreto de sódio (185 g, 46,3 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-clorofenol (8 g, 38,6 mmol) em 150 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação a 0 °C por 30 min, MOMBr (7,25 g, 58 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com solução aquosa de NH4Cl (15 ml), extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 8,1 g de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi)benzeno como óleo incolor (84 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,17 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 6,89 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H) , 5,24 (s, 2H) . LCMS: tR = 1,51 min.
[0972] Etapa 8: Síntese de ácido 4-cloro-2- (metoximetoxi)fenilborônico
Figure img0641
[0973] Uma solução de n-BuLi em hexano (5,76 ml, 14,4 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi) benzeno (3 g, 12 mmol) em 40 ml de THF sob nitrogênio a -78 °C. Após a agitação a -78 °C por 40 min, B(OMe)3 (2 g, 19,2 mmol) foi adicionado. A mistura foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 16 h. Solução aquosa de NH4Cl (10 ml) foi adicionada à mistura. A mistura foi extraída com EtOAc (20 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml), secos em Na2SO4, concentrados e recristalizados a partir de 3 % de EtOAc/éter de petróleo que deu 1,6 g de ácido 4-cloro-2-(metoximetoxi)fenilborônico como sólido branco pérola (62 % de rendimento). LCMS: m/z 199,1 [M-OH] +; tr = 1,65 min.
[0974] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2-(metoximetoxi)fenil) piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0642
[0975] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (6 g, 16,4 mmol), ácido 4-cloro- 2-(metoximetoxi)fenilborônico (5,3 g, 24,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,6 mg, 2 mmol) e K2CO3 (4,53 mg, 32,8 mmol) em 80 ml de dioxano e 8 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 7 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (10-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 4,52 g de (1R,3s,5S)-3-( (6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (57 % de rendimento) . LCMS: m/z 517,3 [M+H]+; tr = 1,86 min.
[0976] Etapa 10: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(1-meti1-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0643
[0977] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-( (6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (4 g, 7,75 mmol), ácido l-metil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-4-ilborônico (1,77 g, 11,6 mmol), catalisador (610 mg mg, 0,78 mmol) e K3PO4 (3,29 g, 15,5 mmol) em 30 ml de dioxano e 10 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 6 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (0-15 % de MeOH/EtOAc) que deu 4,2 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(1-meti1-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (77 % de rendimento). LCMS: m/z 590,2 [M+H]+; tr = 2,09 min.
[0978] Etapa 11: Síntese de 4-(4-( 6-( ( (1R, 3s, 5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-hidroxifenil)-1- metilpiridin-2 (1H)-ona
Figure img0644
[0979] Uma solução de 30 ml de HCl a 4 N em dioxano foi adicionada a uma solução agitada de 3—((6—(2— (metoximetoxi)-4-(1-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4- il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de (1R,3s,5S)-terc-butila (3 g, 5,1 mmol) em 20 ml de CH2Cl2 e 20 ml de MeOH. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 h, concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água. Solução aquosa de K2CO3 foi adicionada para ajustar o pH =9. O sólido foi coletado e seco em vácuo que deu 2,15 g de 4-(4-( 6-( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino) piridazin-3-il)- 3-hidroxifenil)-l-metilpiridin-2(1H)-ona como sólido amarelo (80 % de rendimento).
[0980] 1H RMN (500 MHz, DMSO- de) δ 13,75 (s, 1H) , 8,25 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 7,97 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 7,38 (d, J = 9,9 Hz, 1H) , 7,29 - 7,22 (m, 2H) , 6,70 (s, 1H) , 6,61 (d, J= 7,2 Hz, 1H) , 4,94 (s, 1H) , 3,46 (s, 3H) , 2,94 (s, 3H) , 1, 88-1,83 (m, 2H) , 1,61 - 1,42 (m, 6H) , 1,23 (s, 6H) . LCMS: m/z 446, 1 [M+H]+; tR = 1,72 min.
Exemplo 9: Síntese de 4-(4-(6- ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona
Figure img0645
[0981] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0646
[0982] Hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionada a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) para dar 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento) . LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min.
[0983] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0647
[0984] Uma mistura de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitada a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %). LCMS: m/z 198,1 [M-55]+; tR = 1,40 min.
[0985] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0648
[0986] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e NaOAc (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de EtOH foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada para dar 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento). LCMS: m/z 269,2 [M+H]-; tr = 1,92 min.
[0987] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0649
[0988] Sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado em porções a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para propiciar 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente para a seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS: m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min.
[0989] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0650
[0990] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS: m/z 367,2 [M+H]-; tr = 1,88 min.
[0991] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0651
[0992] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de silica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 14,5 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento). LCMS: m/z 381,2 [M+H]-; tr = 2,17 min.
[0993] Etapa 7: Síntese de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol
Figure img0652
[0994] Bromo (3,52 g, 22 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 3-cloro-4-fluorofenol (4,02 g, 20 mmol) em 80 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 18 h e extinta com 10 ml de solução aquosa de Na2S2O3. A fase orgânica foi coletada, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) para propiciar 2,5 g de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol como sólido branco (44 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J= 6,6 Hz, 1H) , 5,45 (s, 1H) . LCMS: tr = 1,44 min.
[0995] Etapa 8: Síntese de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0653
[0996] Hidreto de sódio (215 mg, 5,4 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol (1 g, 4,48 mmol) em 14 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 30 min, bromo (metoxi) metano (428 mg, 8 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com 10 ml de solução aquosa saturada de NH4Cl e extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-8 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 1,01 g de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)benzeno como sólido branco (70 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 6,6 Hz, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 3,52 (s, 3H).
[0997] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(4-cloro-5- fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0654
[0998] Uma mistura de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno (8,5 g, 31,7 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (12,1 g, 47,5 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,86 g, 2,54 mmol) e KOAc (6,2 g, 63,4 mmol) em 200 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (8 g, 21,2 mmol), K2CO3 (5,8 g, 42,3 mmol) e H2O (30 ml) foram adicionados. A mistura foi agitada a 100 °C por 3 h, concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-25 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 6 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo claro (53 % de rendimento). LCMS: m/z 535, 2 [M+H]+; tR = 2,40 min.
[0999] Etapa 10: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(5-fluoro- 2-(metoximetoxi)-4-(1-meti1-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0655
[1000] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-5- fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (120 mg, 0,22 mmol), ácido l-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-4-ilborônico (63 mg, 0,27 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0, 028 mmol) e K2CO3 (77 mg, 0,56 mmol) em 2 ml de 1,4-dioxano e 0,4 ml de água foi purgada com nitrogênio e vedada. A mistura foi agitada a 130 °C sob MW por 2 h, concentrado e purificado por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 110 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1-meti1-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (82 % de rendimento). LCMS: m/z 608,2 [M+H]+; tR = 1,59 min.
[1001] Etapa 11: Síntese de 4—(4—(6—( ( (1R,3s,5S)—1,5 —dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona.
Figure img0656
[1002] A uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-( (6-(5-fluoro-2-(metoximetoxi)-4-(1-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (100 mg, 0,16 mmol) em 2 ml de CH2Cl2 foi adicionado 4 ml de uma solução a 4 N de HCl em dioxano. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 h, concentrada sob pressão reduzida, neutralizada com NH3/MeOH e purificada por HPLC prep para dar 37 mg de 4-(4-( 6- ( ( (1R, 3s, 5S)-1,5-dime til-8-azabiciclo [3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-metilpiridin-2(1H)-ona como um sólido amarelo (50 % de rendimento).
Exemplo 10: Síntese de 2-(6-( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-iloxi)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0657
[1004] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0658
[1005] Hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionado a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento) . LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min.
[1006] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ol.
Figure img0659
[1007] Boro-hidreto de sódio (224 mg, 5,88 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (600 mg, 3,92 mmol) em 10 ml de metanol a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 h e concentrada. 100 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro e concentrada que deu 600 mg de uma mistura de isômeros de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ol como sólido branco (rendimento: 99 %) . LCMS: m/z 156,3 [M+H]+; tR = 0,28 min.
[1008] Etapa 3: Síntese de (1R, 3s,5S)-3-(6- cloropiridazin-3-iloxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano
Figure img0660
[1009] Hidreto de sódio (129 mg, 3,23 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma mistura de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ol (200 mg, 1,29 mmol) em THF (10 ml) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos. Em seguida, 3,6-dicloropiridazina (210 mg, 1,42 mmol) foi adicionada. A mistura foi agitada a 50 °C por 18 horas. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extinta com 20 ml de água, extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram lavados com água (10 ml), concentrados e os isômeros foram purificados por coluna de gel de silica (0-10 % de MeOH/DCM) que deu 45 mg de (1R, 3s,5S)-3-(6-cloropiridazin-3-iloxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano como sólido branco (13 % de rendimento) . LCMS: m/z 268,1 [M+H]+; tR = 1,56 min.
[1010] Etapa 4: Síntese de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0661
[1011] Brometo de metoximetila (1,25 g, 10 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-iodofenol (1,5 g, 5 mmol) e K2CO3 (1,38 g, 10 mmol) em 20 ml de DMF a 0 °C. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 16 h, extinta com 20 ml de H2O e extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-5 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 1,45 g de 1-bromo-4-iodo-2-(metoximetoxi)benzeno como líquido incolor (79 % de rendimento). LCMS: tr = 1,50 min.
[1012] Etapa 5: Síntese de 4-(4-bromo-3- (metoximetoxi) fenil) -1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol.
Figure img0662
[1013] Uma mistura de 1-bromo-4-iodo-2- (metoximetoxi) benzeno (3,3 g, 9,6 mmol), 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (2,67 g, 9,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (866 mg, 1 mmol) e K2CO3 (2,66 g, 19,3 mmol) em 40 ml de dioxano e 4 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi extraída com EtOAc (30 ml X 3) . Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (10-50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,5 g de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol como óleo incolor (69 % de rendimento). LCMS: m/z 367,1 [M+H]+; tr = 2,03 min.
[1014] Etapa 6: Síntese de 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil) -1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol.
Figure img0663
[1015] Uma mistura de 4-(4-bromo-3-(metoximetoxi)fenil)- 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol (1,5 g, 4,1 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oetametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,1 g, 8,2 mmol), Pd(dppf)Cl2 (3 69 mg, 0,41 mmol) e KOAc (804 mg, 8,2 mmol) em 20 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 8 h. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por coluna de gel de silica para dar 0,81 g de 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil) -1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol como óleo incolor (48 % de rendimento) . LCMS: m/z 415,3 [M+H]+; tR = 2,10 min.
[1016] Etapa 7: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano.
Figure img0664
[1017] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-(6-cloropiridazin-3-iloxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano (40 mg, 0,15 mmol), 4-(3-(metoximetoxi)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1, 3,2-dioxaborolan-2-il) fenil) -1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il) -1H-pirazol (81 mg, 0,20 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15 mg, 0,021 mmol) e K2CO3 (42 mg, 0,30 mmol) em 1,5 ml de 1,4-dioxano e 0,5 ml de água foi desgaseificada e agitada a 105 °C por 2 h sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi, em seguida, concentrada e purificada por cromatografia em gel de silica (1-15 % de MeOH/DCM) que deu 60 mg de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2-(metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol- 4- il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano como sólido branco (78 % de rendimento) . LCMS: m/z 520,3 [M+H]+; tr = 1,89 min.
[1018] Etapa 8: Síntese de 2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5- dimetil-8-azabiciclo [3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)- 5- (1H-pirazol-4-il)fenol.
Figure img0665
[1019] Uma solução de 1 ml de HCl a 4 N em dioxano foi adicionada a uma solução de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol- 4- il)fenil)piridazin-3-il)oxi)-1,5-dimetil-8-azabiciclo [ 3.2.1 ] octano (60 mg, 0,12 mmol) em 1 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. Após a agitação à temperatura ambiente por 1 h, a mistura foi concentrada, neutralizada com hidróxido de amônio e purificada por HPLC prep (NH4HCO3) que deu 30 mg de 2-( 6-(((1R, 3s, 5S)-1,5-dime til-8-azabiciclo [3.2.1]octan-3-il)oxi)piridazin-3-il)- 5- (1H-pirazol-4-il)fenol como sólido amarelo (67 % de rendimento).
Exemplo 11: Síntese de 2-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol
Figure img0666
[1021] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0667
[1022] Hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionado a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento). LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tr = 1,20 min; pureza: 85 %.
[1023] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0668
[1024] Uma mistura de 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitada a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %) . LCMS: m/z 198,1 [M-55]+; tr = 1,40 min; pureza: 100%
[1025] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0669
[1026] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e NaOAc (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de EtOH foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada que deu 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento). LCMS: m/z 269,2 [M+H]+; tR = 1,92 min; pureza: 100 %.
[1027] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5- dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0670
[1028] Sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado em porções a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi triturado retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para propiciar 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente na seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS: m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min; pureza: 99 %.
[1029] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0671
[1030] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS: m/z 367,2 [M+H]-; tr = 1,88 min; pureza: 99 %.
[1031] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0672
[1032] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 14,5 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento). LCMS: m/z 381,2 [M+H]-; tr = 2,17 min; pureza: 99 %.
[1033] Etapa 7: Síntese de 1-bromo-4-cloro-2- (metoximetoxi)benzeno
Figure img0673
[1034] Hidreto de sódio (185 g, 46,3 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-clorofenol (8 g, 38,6 mmol) em 150 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação a 0 °C por 30 min, MOMBr (7,25 g, 58 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com solução aquosa de NH4Cl (15 ml), extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 8,1 g de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi)benzeno como óleo incolor (84 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,17 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 6,89 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H) , 5,24 (s, 2H) . LCMS: tR = 1,51 min.
[1035] Etapa 8: Síntese de ácido 4-cloro-2- (metoximetoxi)fenilborônico
Figure img0674
[1036] A uma solução agitada de 1-bromo-4-cloro-2-(metoximetoxi) benzeno (3 g, 12 mmol) em 40 ml de THF sob nitrogênio a -78 °C foi adicionado n-BuLi (5,76 ml, 14,4 mmol). Após a agitação a -78 °C por 40 min, B(OMe)3 (2 g, 19,2 mmol) foi adicionado. A mistura foi deixada a aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 16 h. Solução aquosa de NH4Cl (10 ml) foi adicionada à mistura. A mistura foi extraída com EtOAc (20 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml), secos em Na2SO4, concentrados e recristalizados a partir de 3 % de EtOAc/éter de petróleo que deu 1,6 g de ácido 4-cloro-2-(metoximetoxi)fenilborônico como sólido branco pérola (62 % de rendimento) . LCMS: m/z 199,1 [M-OH]+; tR = 1,65 min.
[1037] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0675
[1038] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (6 g, 16,4 mmol), ácido 4-cloro-2-(metoximetoxi)fenilborônico (5,3 g, 24,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,6 mg, 2 mmol) e K2CO3 (4,53 mg, 32,8 mmol) em 80 ml de dioxano e 8 ml de H2O foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 7 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-60 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 4,52 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (57 % de rendimento) . LCMS: m/z 517,3 [M+H]+; tr = 1,86 min.
[1039] Etapa 10: Síntese de 5-cloro-3-metoxipiridazina
Figure img0676
[1040] Metóxido de sódio (5,84 g, 0,108 mol) foi adicionado a uma solução agitada de 3,5-dicloropiridazina (8 g, 0,054 mol) em 350 ml de THF a 0 °C. Após a adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. A mistura foi extinta com água (100 ml), extraída com EA (300 ml X 2) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-40 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 1,5 g de 5-cloro-3-metoxipiridazina como sólido amarelo (17 % de rendimento). LCMS: m/z 145,1 [M+H]+; tr = 1,42 min.
[1041] Etapa 11: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2- (metoximetoxi)-4-(6-metoxipiridazin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0677
[1042] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-2- (metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (200 mg, 0,39 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (197 mg, 0,77 mmol), Pd2(dba)3 (32 mg, 0,04 mmol), X-Phos (20 mg, 0,04 mmol) e KOAc (115 mg, 1,2 mmol) em 4 ml de 1,4-dioxano foi desgaseificada e agitada a 90 °C por 2 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, Pd(dppf)Cl2 (61 mg, 0,08), 5-cloro-3-metoxipiridazina (113 mg, 0,78 mmol), K2CO3 (163 mg, 1,2 mmol) e H2O (0,3 ml) foram adicionados. A mistura foi agitada a 110 °C por 2 h, concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-80 % de EtOAc/éter de petróleo) para dar 230 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(2-(metoximetoxi)-4-(6-metoxipiridazin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo claro (78 % de rendimento). LCMS: m/z 591,2 [M+H]+; tR = 2,20 min.
[1043] Etapa 12: Síntese de 2-(6-( ( (1R,3s,5S)-1,5- dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol
Figure img0678
[1044] Uma solução HCl a 4 N em dioxano 4 ml foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(2-(metoximetoxi)-4-(6-metoxipiridazin-4-il)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,3 mmol) em 4 ml de CH2Cl2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 h, concentrada sob pressão reduzida, neutralizada com NH3/MeOH e purificada por HPLC prep que deu 58 mg de 2 —(6 — (((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol como um sólido amarelo (43 % de rendimento).
Exemplo 12: Síntese de 4-(4-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-(fluorometil)piridin-2(1H) -ona.
Figure img0679
[1049] Etapa 1: Síntese de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona.
Figure img0680
[1050] Hidróxido de potássio (108 g, 1,93 mol) em 70 ml de H2O foi adicionado a uma solução agitada de ácido 3-oxopentanodioico (120 g, 822 mmol) e hexano-2,5-diona (49,2 g, 432 mmol) em 350 ml de H2O e 0 °C. Após a adição, NH4Cl (70,1 g, 1,32 mol) e tri-hidrato de NaOAc (70,1 g, 515 mmol) em 667 ml de H2O foram adicionados. O valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 72 h durante cujo tempo o valor de pH foi ajustado até ~9 usando-se solução aquosa de NaOH a 1 N adicional. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (1 L X 5) . Os solventes orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 anidro, concentrados e purificados por cromatografia em gel de sílica (0-25 % de MeOH/CH2Cl2) que deu 16,7 g de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona como óleo preto (25 % de rendimento) . LCMS: m/z 154,2 [M+H]+; tR = 1,20 min.
[1051] Etapa 2: Síntese de 1,5-dimetil-3-oxo-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0681
[1052] Uma mistura de 1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (24 g, 163 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (35,6 g, 326 mmol) e DIPEA (31,5 g, 244 mmol) em 500 ml de 1,4-dioxano foi agitada a 70 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 16,7 de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido branco (rendimento: 42 %). LCMS: m/z 198,1 [M-55]+; tR = 1,40 min.
[1053] Etapa 3: Síntese de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0682
[1054] Uma mistura de 1,5-dimetil-3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (16,7 g, 66 mmol), cloridrato de hidroxilamina (18,2 g, 26,4 mmol) e NaOAc (10,8 g, 132 mmol) em 250 ml de EtOH foi agitada a 70 °C por 4 h. A mistura foi concentrada. 200 ml de EtOAc e 60 ml de H2O foram adicionados. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca em Na2SO4 anidro, concentrada para dar 16,7 g de 3-(hidroxi-imino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo que foi usado diretamente para a seguinte etapa (93 % de rendimento). LCMS: m/z 269,2 [M+H]+; tr = 1,92 min.
[1055] Etapa 4: Síntese de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0683
[1056] Sódio (40,2 g, 1,75 mol) foi adicionado em porções a uma mistura de 3-(hidroxi-imino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (26,8 g, 0,1 mol) em 1000 ml de n-PrOH foi aquecido até 110 °C ao longo de 1 h. Após a adição, a mistura foi agitada em refluxo por 1 h adicional. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O (500 ml) . A camada orgânica foi separada e concentrada. DCM (500 ml) foi adicionado ao resíduo. O sólido foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida que deu 20 g de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo, que foi usado diretamente para a seguinte etapa (rendimento: 79 %). LCMS: m/z 255,3 [M+H]+; tr = 1,37 min.
[1057] Etapa 5: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( ( 6- cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0684
[1058] Uma mistura de (1R,3s,5S)-3-amino-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (20 g, 78,7 mmol), 3,6-dicloropiridazina (23,3 g, 157,5 mmol) e DIPEA (20,48 g, 157,5 mmol) em 500 ml de DMSO foi agitada a 120 °C por 24 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, extinta com H2O e extraída com acetato de etila (500 ml X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. Após a remoção de solvente, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 17,5 g de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimetil-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (rendimento: 61 %) . LCMS: m/z 367,2 [M+H]+; tr = 1,88 min.
[1059] Etapa 6: Síntese de (1R,3s,5S)-3-((6- cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0685
[1060] Hidreto de sódio (2,87 g, 71,7 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)amino)-1,5-dimeti1-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (17,5 g, 47,8 mmol) em 400 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, CH3I (13,58 g, 95,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (300 ml X 3). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (30 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 14,5 g de (1R, 3s, 5S)-3-( (6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo (80 % de rendimento). LCMS: m/z 381,2 [M+H]-; tr = 2,17 min.
[1061] Etapa 7: Síntese de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol
Figure img0686
[1062] Bromo (3,52 g, 22 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 3-cloro-4-fluorofenol (4,02 g, 20 mmol) em 80 ml de CH2Cl2 à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 18 h e extinta com 10 ml de solução aquosa de Na2S2O3. A fase orgânica foi coletada, concentrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (0-10 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 2,5 g de 2- bromo-5-cloro-4-fluorofenol como sólido branco (44 % de rendimento). 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J= 6,6 Hz, 1H) , 5,45 (s, 1H) . LCMS: tr = 1,44 min.
[1063] Etapa 8: Síntese de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno.
Figure img0687
[1064] Hidreto de sódio (215 mg, 5,4 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 2-bromo-5-cloro-4-fluorofenol (1 g, 4,48 mmol) em 14 ml de DMF a 0 °C. Após a agitação por 30 min, bromo (metoxi) metano (428 mg, 8 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente por 2 h, extinta com 10 ml de solução aquosa saturada de NH4Cl e extraída com EtOAc (30 ml X 3). Os solventes orgânicos combinados foram concentrados e purificados por coluna de gel de sílica (0-8 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 1,01 g de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)benzeno como sólido branco (70 % de rendimento) . 1H RMN (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 6,6 Hz, 1H) , 5,20 (s, 2H), 3,52 (s, 3H).
[1065] Etapa 9: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)- 1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0688
[1066] Uma mistura de 1-bromo-4-cloro-5-fluoro-2- (metoximetoxi)benzeno (8,5 g, 31,7 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (12,1 g, 47,5 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,86 g, 2,54 mmol) e KOAc (6,2 g, 63,4 mmol) em 200 ml de dioxano foi desgaseificada e agitada a 100 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, (1R,3s,5S)-3-((6-cloropiridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (8 g, 21,2 mmol), K2CO3 (5,8 g, 42,3 mmol) e H2O (30 ml) foram adicionados. A mistura foi agitada a 100 °C por 3 h, concentrada e purificada por coluna de gel de sílica (10-25 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 6 g de (1R,3s,5S)-3-( ( 6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como sólido amarelo claro (53 % de rendimento). LCMS: m/z 535, 2 [M+H]+; tR = 2,40 min.
[1067] Etapa 10: Síntese de 4-bromo-1- (fluorometil)piridin-2(1H)-ona.
Figure img0689
[1068] Hidreto de sódio (111 mg, 4,62 mmol, 60 % em óleo mineral) foi adicionado a uma solução agitada de 4-bromopiridin-2 (1H)-ona (400 mg, 2,31 mmol) em 15 ml de THF a 0 °C. Após a agitação por 20 min a 0 °C, bromofluorometano (517 mg, 4,62 mmol) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada a 50 °C por 1 h, extinta com H2O e extraída com EtOAc (30 ml X 3) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4 anidro, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por coluna de gel de sílica (50 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 400 mg de 4-bromo-1- (fluorometil)piridin-2(1H) -ona como sólido branco (84 % de rendimento). LCMS: m/z 207,9 [M+H]+; tr = 1,46 min.
[1069] Etapa 11: Síntese de (1R,3s,5S)-3-( (6-(5-fluoro- 4- (1-(fluorometil)-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-4-il) -2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila.
Figure img0690
[1070] Uma mistura de 4-bromo-1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona (65 mg, 0,32 mmol), 4,4,4 ' , 4 ' , 5, 5, 5 ' , 5 ' -octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (97 mg, 0,38 mmol), Pd2(dba)3 (27 mg, 0,03 mmol), X-Phos (29 mg, 0,06 mmol) e KOAc (63 mg, 0,64 mmol) em 4 ml de 1,4-dioxano foi desgaseificada e agitada a 90 °C por 8 h. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, (1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (100 mg, 0,19 mmol), K2CO3 (52 mg, 0,38 mmol) e H2O (0,8 ml) foram adicionados. A mistura foi agitada a 110 °C por 3 h, concentrada e purificada por coluna de gel de silica (10-80 % de EtOAc/éter de petróleo) que deu 90 mg de (1R,3s,5S)-3-((6-(5-fluoro-4-(1-(fluorometil)-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila como óleo amarelo claro (77 % de rendimento) . LCMS: m/z 626, 1 [M+H]+; tr = 2,19 min.
[1071] Etapa 12: Síntese de 4—(4—(6—( ( (1R,3s,5S)—1,5 — dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona.
Figure img0691
[1072] Uma solução de HCl a 4 N em dioxano (4 ml) foi adicionada a uma solução agitada de (1R,3s,5S)-3-((6-(4-cloro-5-fluoro-2-(metoximetoxi)fenil)piridazin-3-il)(metil)amino)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de terc-butila (90 mg, 0,14 mmol) em 4 ml de CH2Cl2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 h, concentrada sob pressão reduzida, neutralizada com NH3/MeOH e purificada por HPLC prep que deu 32 mg de 4 —(4 — (6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2-fluoro-5-hidroxifenil)-1-(fluorometil)piridin-2(1H)-ona como um sólido amarelo (46 % de rendimento).
Exemplo 13: Ensaio de Splicing (MAPTau, MADD, FOXM1)
[1073] Várias linhagens celulares foram tratadas com os SMSMs descritos no presente documento. O RNA foi, em seguida, isolado, cDNA sintetizado, qPCR realizado e os níveis de vários alvos de mRNA dos SMSMs foram determinados. Em alguns casos, o RNA foi isolado, cDNA sintetizado, qPCR realizado e os níveis de isoformas de mRNA nas várias amostras celulares foram determinados.
Materiais
[1074] Kit Cells to Ct: ThermoFisher, AM1728. TaqMan Gene Expression Master Mix: ThermoFisher, 4369542. sonda/iniciador de PPIA: ThermoFisher, Hs03045993_gH, VIC- MGB_PL.
Sequências de sonda/iniciador:
[1075] FoxMl
sonda/iniciador de FOXM1 A2: IDT DNA
Iniciador 1: ACA GGT GGT GTT TGG TTA CA
Iniciador 2: AAA TTA AAC AAG CTG GTG ATG GG
Sonda: / 56-FAM/AG TTC TTT A/Zen/G TGG CGA TCT GCG AGA
/3IABkFQ/
sonda/iniciador de FOXM1 BC: IDT DNA
Iniciador 1: GAG CTT GCC CGC CAT AG
Iniciador 2: CTG GTC CTG CAG AAG AAA GAG
Sonda: /5HEX/CC AAG GTG C/ZEN/T GCT AGC TGA GGA /3IABkFQ/
[1076] MADD
Isoforma 4 (WT)
Iniciador 1: GGC TAA ATA CTC TAA TGG AGA TTG TTA C
Iniciador 2: GGC TGT GTT TAA TGA CAG ATG AC
Sonda: /5HEX/AG TGG TGA A/ZEN/G GAA ACA GGA GGG CGT TAG
/3IABkFQ/
Isoforma 3 (Exl6)
Iniciador 1: CAC TGT TGG GCT GTG TTT AAT G
Iniciador 2: ACA GTA CCA GCT TCA GTC TTT C
Sonda: / 56-FAM/TC TGA AAG G/ZEN/A AAC AGG AGG GCG TT/3IABkFQ/
[1077] MAPTau sonda/iniciador de MAPT de comprimento total (4R): IDT DNA Iniciador 1: CCA TGC CAG ACC TGA AGA AT Iniciador 2: TTG GAC TGG ACG TTG CTA AG Sonda: /5HEX/AA TTA TCT G/ZEN/C ACC TTC CCG CCT CC/3IABkFQ/ sonda/iniciador Truncagem de MAPT (3R): IDT DNA Iniciador 1: AGA TCG GCT CCA CTG AGA A Iniciador 2: GGT TTA TGA TGG ATG TTG CCT AAT G Sonda: /56-FAM/CA ACT GGT T/ZEN/T GTA GAC TAT TTG CAC CTT CCC /3IABkFQ/
Células:
[1078] As células usadas incluiram as células 93-T449, A-375, A-673, ASPC-1, BxPC-3, CCL-136, Daoy, DU-145, G-401, Hep-3B, IMR-32, K-562, LP-LoVo, MDA-MB-157, MDA-MB-231-luc, MDA-MB-468, MG-63, Ms751, NCI-H358, PACA-2, PANC-1, PC-3, RGX-MPC-11, RGX-PACA-2, SH-SY5Y, SJSA, SKOV3, SNU-16, SW872 (HTB-92), TOLEDO, T.T, U-118, U-251MG, U-87MG e Z-138.
[1079] No dia do experimento, uma placa de 96 poços foi semeada com as linhagens celulares de interesse. As células foram diluídas com meios de crescimento total a uma concentração de 2,0 x 105 células/ml e 100 μL de células foram adicionadas a cada poço (20.000 células por poço). As células foram tratadas com um composto imediatamente após o plaqueamento.
[1080] Os compostos foram, em seguida, adicionados à placa celular com o uso do dispensador de composto HP. No experimento inicial, uma concentração superior de 10 μΜ e um esquema de diluição de 4 vezes, 8 pontos foram usados. Os compostos de estoque foram feitos em uma concentração de 5 mM, e a concentração de DMSO foi ajustada a 0,2 %. DMSO foi usado para normalizar todos os poços que contêm composto e as células não tratadas.
[1081] As células tratadas foram incubadas a 37 °C em um incubador de CO2 a 5 % para a quantidade desejada de tempo. As placas foram colocadas em uma bolsa de plástico com um papel úmido para prevenir a evaporação.
[1082] O RNA foi isolado com o uso das kit Cells to Ct (ThermoFisher, AM1728) . As células foram lavadas uma vez com 100 μL de PBS frio. 50 μL de tampão de lise foram adicionados a cada poço/tubo (49,5 μL tampão de lise + 0,5 μL DNase I por poço/tubo). A reação de lise foi misturada e incubada à temperatura ambiente por 5 minutos. 5 μL de solução de parada foram adicionados diretamente em cada reação de lise celular e misturados por pipetagem para cima e para baixo 5 vezes. As placas/tubos foram incubadas à temperatura ambiente por 2 minutos, em seguida, colocadas em gelo se a síntese de cDNA for para ser realizada imediatamente. De outro modo, as placas/tubos foram armazenadas a -80 °C. as reações de síntese de cDNA foram, em seguida, realizadas. A Reverse Transcription (RT) Master mix foi preparada de acordo com a tabela abaixo.
Figure img0692
Figure img0693
[1083] 40 μL de RT master mix foram adicionados a tubos ou poços de placa de PCR. 10 μL de RNA foram adicionados a cada tubo/poço. O programa de ciclador térmico de RT foi, em seguida, executado e tubos ou poços de placa foram incubados a 37 °C por 1 hora, então a 95 °C por 5 minutos para desativar a enzima.
[1084] O qPCR foi realizado com o uso de um QuantStudio 6 instrument (ThermoFisher) e as seguintes condições de ciclagem e de acordo com as tabelas abaixo. Todas as amostras e padrões foram analisadas em triplicata. Ciclo 1: 2 minutos a 50 °C. Ciclo 2: 10 minutos a 95 °C. Ciclo 3 (repetição 40 vezes) : 15 segundos a 95 °C, 1 minuto a 60 ° C.
Amostras padrão de isoforma 1 ou isoforma 2
Figure img0694
Amostra desconhecida (quantização de isoforma A2 FOXM1 / isoforma BC de FOXM1
Figure img0695
Amostra Padrão de PPIA
Figure img0696
Amostra desconhecida (quantização de PPIA)
Figure img0697
[1085] As quantidades determinadas de isoforma 2 e isoforma 1 foram, então, usadas para determinar a razão de isoforma 2: isoforma 2 nas várias concentrações de composto. As quantidades de PPIA foram usadas na normalização para o cálculo de efeitos de proliferação celular dos compostos.
Construção padrão PPIA padrão (5834 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCGGCCAGGCTCGTGCCGTTTTGCAGACGCCACCGCCGAGGAAAACCGTGTACTATTAGCCATGGTCAACCCCACCGTGTTCTTCGACATTGCCGTCGACGGCGAGCCCTTGGGCCGCGTCTCCTTTGAGCTGTTTGCAGACAAGGTCCCAAAGACAGCAGAAAATTTTCGTGCTCTGAGCACTGGAGAGAAAGGATTTGGTTATAAGGGTTCCTGCTTTCACAGAATTATTCCAGGGTTTATGTGTCAGGGTGGTGACTTCACACGCCATAATGGCACTGGTGGCAAGTCCATCTATGGGGAGAAATTTGAAGATGAGAACTTCATCCTAAAGCATACGGGTCCTGGCATCTTGTCCATGGCAAATGCTGGACCCAACACAAATGGTTCCCGCGGCCGC.
FoxMl A2 (5558 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCGTTTTTGGGGAACAGGTGGTGTTTGGTTACATGAGTAAGTTCTTTAGTGGCGATCTGCGAGATTTTGGTACACCCATCACCAGCTTGTTTAATTTTATCTTTCTTTGTTTATCAGCGGCCGC
FoxM2 BC (6439 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCGGCGGAAGATGAAGCCACTGCTACCACGGGTCAGCTCATACCTGGTACCTATCAGTTCCCGGTGAACCAGTCACTGGTGTTGCAGCCCTCGGTGAAGGTGCCATTGCCCCT GGCGGCTTCCCTCATGAGCTCAGAGCTTGCCCGCCATAGCAAGCGAGTCCGCATTGCCCCCAAGGTGCTGCTAGCTGAGGAGGGGATAGCTCCTCTTTCTTCTGCAGGACCAGGGAAAGAGGAGAAACTCCTGTTTGGAGAAGGGTTTTCTCCTTTGCTTCCAGTTCAGACTATCAAGGAGGAAGAAATCCAGCCTGGGGAGGAAATGCCACACTTAGCGAGACCCATCAAAGTGGAGAGCCCTCCCTTGGAAGAGTGGCCCTCCCCGGCCCCATCTTTCAAAGAGGAATCATCTCACTCCTGGGAGGATTCGTCCCAATCTCCCACCCCAAGACCCAAGAAGTCCTACAGTGGGCTTAGGTCCCCAACCCGGTGTGTCTCGGAAATGCTTGTGATTCAACACAGGGAGAGGAGGGAGAGGAGCCGGTCTCGGAGGAAACAGCATCTACTGCCTCCCTGTGTGGATGAGCCGGAGCTGCTCTTCTCAGAGGGGCCCAGTACTTCCCGCTGGGCCGCAGAGCTCCCGTTCCCAGCAGACTCCTCTGACCCTGCCTCCCAGCTCAGCTACTCCCAGGAAGTGGGAGGACCTTTTAAGACACCCATTAAGGAAACGCTGCCCATCTCCTCCACCCCGAGCAAATCTGTCCTCCCCAGAACCCCTGAATCCTGGAGGCTCACGCCCCCAGCCAAAGTAGGGGGACTGGATTTCAGCCCAGTACAAACCTCCCAGGGTGCCTCTGACCCCTTGCCTGACCCCCTGGGGCTGATGGATCTCAGCACCACTCCCTTGCAAAGTGCTCCCCCCCTTGAATCACCGCAAAGGCTCCTCAGTTCAGAACCCTTAGACCTCATCTCCGTCCCCTTTGGCAACTCTTCTCCCTCAGCGGCCGC
Isoforma 4 de MADD (WT) (5668 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCAAAGGTGCCCGAGAGAAGGCCACGCCCTTCCCCAGTCTGAAAGTATTTGGGCTAAATACTCTAATGGAGATTGTTACTGAAGCCGGCCCCGGGAGTGGTGAAGGAAACAGGAGGGCGTTAGTGGATCAGAAGTCATCTGTCATTAAACACAGCCCAACAGTGAAAAGAGAACCTCCATCACCCCAGGGTCGATCCAGCAATTCTAGTGAGAACCAGCAGTTCCTGCGGCCGC
Isoforma 3 de MADD (Exl6) (5689 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCACCGAGGGCTTCGGGGGCATCATGTCTTTTGCCAGCAGCCTCTATCGGAACCACAGTACCAGCTTCAGTCTTTCAAACCTCACACTGCCCACCAAAGGTGCCCGAGAGAAGGCCACGCCCTTCCCCAGTCTGAAAGGAAACAGGAGGGCGTTAGTGGATCAGAAGTCATCTGTCATTAAACACAGCCCAACAGTGAAAAGAGAACCTCCATCACCCCAGGGTCGATCCAG CAATTCTAGTGAGAAGCGGCCGC
MAPTau de comprimento total (4R) (5654 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAGCGGCCGC
Truncagem de MAPTau (3R) (5644 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCTGAGAAGC TTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGGCGGCCGC
[1086] Os Blocos G foram inseridos no vetor de expressão de mamíferos pCI-neo (Promega) nos sítios de restrição EcoRI e NotI (negrito) com o uso de Infusion cloning technology (Clontech). Os plasmídeos foram, em seguida, purificados com o uso de kits miniprep ou maxiprep padrão (Macherey Nagel).
Preparação de curva padrão
[1087] A diluição para preparar o padrão superior é calculada. Uma concentração superior de 200.000.000 cópias/pL do plasmídeo de estoque foi preparada em tampão TE. Uma série de diluições de 10 vezes, também em TE, foi, em seguida, feita. Um total de 5 μL de cada padrão foi usado em um poço de qPCR para gerar amostras que contêm 109 cópias, 108 cópias, 107 cópias, 106 cópias, 105 cópias, 104 cópias, 103 cópias, 102 cópias, 101 cópias e 0 cópia.
[1088] Um ensaio para medir o FOXM1A2 mRNA e FOXM1BC mRNA, OU MADDWT (isoforma 4) mRNA e MADDEx16 (isoforma 3) mRNA, ou MAPTau4R mRNA e MAPTau3R mRNA simultaneamente em poços celulares foi realizado. Os valores de RNA foram medidos em relação ao controle de DMSO e também incluíram um gene de manutenção, PPIA para assegurar que os dados sejam consistentes. Os valores de mRNA foram medidos após 24 horas de incubação com os compostos de SMSM. A dose de SMSMs aumentou de modo dependente os níveis de FOXM1A2 ao mesmo tempo que diminui de modo concomitante os níveis FOXM1BC com valores de EC50 e IC50 na faixa nanomolar. Esse ensaio foi realizado em as linhagens celulares mostradas na Tabela 3A. Os resultados de FOXM1 exemplificativos são mostrados na Tabela 3A.
Tabela 3A
FOXM1
Figure img0698
Exemplo 14: Ensaio de Splicing de SMN2 - Monitoramento dos níveis de expressão de variante de splice de SMN2 com o uso de PCR quantitativo em tempo real
[1089] Várias linhagens celulares foram tratadas com os SMSMs descritos no presente documento. O RNA foi, em seguida, isolado, cDNA sintetizado, qPCR realizado e os níveis de vários alvos de mRNA dos SMSMs foram determinados. Em alguns casos, o RNA foi isolado, cDNA sintetizado, qPCR realizado e os níveis de isoformas de mRNA nas várias amostras celulares foram determinados.
Materiais
[1090] Kit Cells to Ct: ThermoFisher, AM1728. TaqMan Gene Expression Master Mix: ThermoFisher, 4369542. sonda/iniciador de PPIA: ThermoFisher, Hs03045993_gH, VIC- MGB_PL.
Sequências de sonda/iniciador:
[1091] A tabela abaixo resume os iniciadores usados.
Figure img0699
Células:
[1092] células de paciente de SMA tipo I (GM03813 (Coriell))
Protocolo
[1093] No dia do experimento, uma placa de 96 poços foi semeada com as linhagens celulares de interesse. As células foram diluídas com meios de crescimento total a uma concentração de 2,0 x 105 células/ml e 100 μL de células foram adicionadas a cada poço (20.000 células por poço). As células foram tratadas com um composto imediatamente após o plaqueamento.
[1094] Os compostos foram, em seguida, adicionados à placa celular com o uso do dispensador de composto HP. No experimento inicial, uma concentração superior de 10 μΜ e um esquema de diluição de 4 vezes, 8 pontos foram usados. Os compostos de estoque foram feitos em uma concentração de 5 mM, e a concentração de DMSO foi ajustada a 0,2 %. DMSO foi usado para normalizar todos os poços que contêm composto e as células não tratadas.
[1095] As células tratadas foram incubadas a 37 °C em um incubador de CO2 a 5 % para a quantidade desejada de tempo. As placas foram colocadas em uma bolsa de plástico com um papel úmido para prevenir a evaporação.
[1096] O RNA foi isolado com o uso das kit Cells to Ct (ThermoFisher, AM1728). As células foram lavadas uma vez com 100 μL de PBS frio. 50 μL de tampão de lise foram adicionados a cada poço/tubo (49,5 μL tampão de lise + 0,5 μL DNase I por poço/tubo). A reação de lise foi misturada e incubada à temperatura ambiente por 5 minutos. 5 μL de solução de parada foram adicionados diretamente em cada reação de lise celular e misturados por pipetagem para cima e para baixo 5 vezes. As placas/tubos foram incubadas à temperatura ambiente por 2 minutos, em seguida, colocadas em gelo se a síntese de cDNA for para ser realizada imediatamente. De outro modo, as placas/tubos foram armazenadas a -80 °C.
[1097] As reações de síntese de cDNA foram, em seguida, realizadas. 40 μL de RT master mix foram adicionados a tubos ou poços de placa de PCR. 10 μL de RNA foram adicionados a cada tubo/poço. O programa de ciclador térmico de RT foi, em seguida, executado e tubos ou poços de placa foram incubados a 37 °C por 1 hora, então a 95 °C por 5 minutos para desativar a enzima.
[1098] O qPCR foi realizado com o uso de um QuantStudio 6 instrument (ThermoFisher) e as seguintes condições de ciclagem e de acordo com as tabelas abaixo. Todas as amostras e padrões foram analisadas em triplicata. Ciclo 1: 2 minutos a 50 °C. Ciclo 2: 10 minutos a 95 °C. Ciclo 3 (repetição 40 vezes) : 15 segundos a 95 °C, 1 minuto a 60 ° C.
Amostra Padrão de SMN2FL ou SMN2∆7
Figure img0700
Amostra desconhecida (quantização de isoforma A2 de FOXM1 / isoforma BC de FOXM1)
Figure img0701
Amostra Padrão de PPIA
Figure img0702
Amostra desconhecida (quantização de PPIA)
Figure img0703
[1099] As quantidades determinadas de SMN2Δ7 e SMN2FL foram, então, usadas para determinar a razão de SMN2Δ7: SMN2FL nas várias concentrações de composto. As quantidades de PPIA foram usadas na normalização para o cálculo de efeitos de proliferação celular dos compostos.
Construção padrão
PPIA padrão (5834 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA)
GAATTCGGCCAGGCTCGTGCCGTTTTGCAGACGCCACCGCCGAGGAAAACCGTGTACTATTAGCCATGGTCAACCCCACCGTGTTCTTCGACATTGCCGTCGACGGCGAGCCCTTGGGCCGCGTCTCCTTTGAGCTGTTTGCAGACAAGGTCCCAAAGACAGCAGAAAATTTTCGTGCTCTGAGCACTGGAGAGAAAGGATTTGGTTATAAGGGTTCCTGCTTTCACAGAATTATTCCAGGGTTTATGTGTCAGGGTGGTGACTTCACACGCCATAATGGCACTGGTGGCAAGTCCATCTATGGGGAGAAATTTGAAGATGAGAACTTCATCCTAAAGCATACGGGTCCTGGCATCTTGTCCATGGCAAATGCTGGACCCAACACAAATGGTTCCCGCGGCCGC
A sequência de Bloco G (IDT DNA) de SMN2FL padrão foi usada
A sequência de Bloco G (IDT DNA) de SMN2Δ7 padrão foi usada
[1100] Os Blocos G foram inseridos no vetor de expressão de mamíferos pCI-neo (Promega) nos sítios de restrição EcoRI e Notl (negrito) com o uso de Infusion cloning technology (Clontech). Os plasmídeos foram, em seguida, purificados com o uso de kits miniprep ou maxiprep padrão (Macherey Nagel).
Preparação de curva padrão
[1101] A diluição para preparar o padrão superior foi calculada. Uma concentração superior de 200.000.000 cópias/pL do plasmídeo de estoque foi preparada em tampão TE. Uma série de diluições de 10 vezes, também em TE, foi, em seguida, feita. Um total de 5 μL de cada padrão foi usado em um poço de qPCR para gerar amostras que contêm 109 cópias, 108 cópias, 107 cópias, 106 cópias, 105 cópias, 104 cópias, 103 cópias, 102 cópias, 101 cópias e 0 cópia.
[1102] Um ensaio para medir o SMN2FL mRNA e SMN2Δ7 mRNA simultaneamente em poços celulares foi realizado. Os valores de RNA foram medidos em relação ao controle de DMSO e também incluiram um gene de manutenção, PPIA para assegurar que os dados sejam consistentes. Os valores de mRNA foram medidos após 24 horas de incubação com os compostos de SMSM. A dose de SMSMs aumentou de modo dependente dos valores de SMN2FL ao mesmo tempo que diminui de modo concomitante os valores de SMN2Δ7 e o mesmo com valores de EC50 e IC50 na faixa nanomolar.
[1103] Adi cionalmente, para monitorar os níveis de expressão de variante de splice de SMN2 com o uso de PCR quantitativo em tempo real, células de paciente de SMA tipo I (GM03813 (Coriell)) foram plaqueadas a 5.000 células/poço em 200 μl de meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) com GlutaMAX e 10 % de soro fetal bovino (FBS) (Life Technologies, Inc.) em placas de 96 poços, e incubadas por 6 horas em um incubador de cultura celular. As células foram, em seguida, tratadas com SMSMs nas diferentes concentrações (0,5 % de DMSO) em duplicata por 24 horas. Após a remoção do sobrenadante, as células foram lisadas em tampão de lise Cells-To-Ct (Life Technologies, Inc.) de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de mRNA de SMN2 FL, SMN2 Δ7 foram quantificados com o uso de Taqman-based RT-qPCR e iniciadores e sondas específicos para SMN2. Os iniciadores direto e reverso do SMN2 foram, cada um, usados em uma concentração final de 0,4 μΜ. A sonda de SMN2 foi usada em uma concentração final de 0,15 μΜ. RT-qPCR foi levado a cabo nas seguintes temperaturas pelos tempos indicados: Etapa 1: 48°C (15 min); Etapa 2: 95 °C (10 min); Etapa 3: 95 °C (15 see); Etapa 4: 60 °C (1 min); as Etapas 3 e 4 foram repetidas por 40 ciclos. Os valores de Ct para cada mRNA foram convertidos em abundância de mRNA usando eficiências reais de PCR.
[1104] Resultados exemplificativos dos ensaios descritos nos exemplos acima são mostrados na Tabela 3B.
Tabela 3B
Figure img0704
Exemplo 15: Ensaio de Splicing de IKBKAP
[1105] Várias linhagens celulares foram tratadas com os SMSMs descritos no presente documento. O RNA foi, em seguida, isolado, cDNA sintetizado, qPCR realizado e os níveis de IKBKAP targets dos SMSMs foram determinados.
Materiais
[1106] Kit Cells to Ct: ThermoFisher, AM1728. TaqMan Gene Expression Master Mix: ThermoFisher, 4369542. sonda/iniciador de PPIA: ThermoFisher, Hs03045993_gH, VIC- MGB_PL.
Sequências de sonda/iniciador:
[1107] IKBKAP
sonda/iniciador de IKBKAP WT: IDT DNA
Iniciador 1: ACC AGG GCT CGA TGA TGA A
Iniciador 2: GCA GCA ATC ATG TGT CCC A
Sonda: /56-FAM/GT TCA CGG A/ZEN/T TGT CAC TGT TGT GCC
/3IABkFQ/
sonda/iniciador de ΙΚΒΚAΡ MU: IDT DNA
Iniciador 1: GAA GGT TTC CAC ATT TCC AAG
Iniciador 2: CAC AAA GCT TGT ATT ACA GAC T
Sonda: /5HEX/CT CAA TCT G/ZEN/A TTT ATG ATC ATA ACC CTA AGG TG/3IABkFQ/
Protocolo
[1108] No dia do experimento, uma placa de 96 poços foi semeada com as linhagens celulares de interesse. As células foram diluídas com meios de crescimento total a uma concentração de 2,0 x 105 células/ml e 100 μL de células foram adicionadas a cada poço (20.000 células por poço). As células foram tratadas com um composto imediatamente após o plaqueamento.
[1109] Os compostos foram, em seguida, adicionados à placa celular com o uso do dispensador de composto HP. No experimento inicial, uma concentração superior de 10 μΜ e um esquema de diluição de 4 vezes, 8 pontos foram usados. Os compostos de estoque foram feitos em uma concentração de 5 mM, e a concentração de DMSO foi ajustada a 0,2 %. DMSO foi usado para normalizar todos os poços que contêm composto e as células não tratadas.
[1110] As células tratadas foram incubadas a 37 °C em um incubador de CO2 a 5 % para a quantidade desejada de tempo. As placas foram colocadas em uma bolsa de plástico com um papel úmido para prevenir a evaporação.
[11ll] O RNA foi isolado com o uso das kit Cells to Ct (ThermoFisher, AM1728). As células foram lavadas uma vez com 100 μL de PBS frio. 50 μL de tampão de lise foram adicionados a cada poço/tubo (49,5 μL tampão de lise + 0,5 μL DNase I por poço/tubo) . A reação de lise foi misturada e incubada à temperatura ambiente por 5 minutos. 5 μL de solução de parada foram adicionados diretamente em cada reação de lise celular e misturados por pipetagem para cima e para baixo 5 vezes. As placas/tubos foram incubadas à temperatura ambiente por 2 minutos, em seguida, colocadas em gelo se a síntese de cDNA for para ser realizada imediatamente. De outro modo, as placas/tubos foram armazenadas a -80 °C.
[1112] As reações de síntese de cDNA foram, em seguida, realizadas. 40 μL de RT master mix foram adicionados a tubos ou poços de placa de PCR. 10 μL de RNA foram adicionados a cada tubo/poço. O programa de ciclador térmico de RT foi, em seguida, executado e tubos ou poços de placa foram incubados a 37 °C por 1 hora, então a 95 °C por 5 minutos para desativar a enzima.
[1113] O qPCR foi realizado com o uso de um QuantStudio 6 instrument (ThermoFisher) e as seguintes condições de ciclagem e de acordo com as tabelas abaixo. Todas as amostras e padrões foram analisadas em triplicata. Ciclo 1: 2 minutos a 50 °C. Ciclo 2: 10 minutos a 95 °C. Ciclo 3 (repetição 40 vezes) : 15 segundos a 95 °C, 1 minuto a 60 ° C.
Amostra Padrão de IKBKAPFL ou IKBKAP∆20
Figure img0705
Figure img0706
Amostra desconhecida (quantização de IKBKAPFL ou IKBKAP∆20)
Figure img0707
Amostra Padrão de PPIA
Figure img0708
Amostra desconhecida (quantização de PPIA)
Figure img0709
Figure img0710
[1114] As quantidades determinadas das isoformas IKBKAPFL e ΙΚΒΚΑΡΔ2° foram, em seguida, usadas para determinar a razão de IKBKAPFL: ΙΚΒΚΑΡΔ20 em concentrações crescentes de omposto de SMSM. As quantidades de PPIA foram usadas na normalização para o cálculo de efeitos de proliferação celular dos compostos.
Construção padrão
PPIA padrão (5834 bps)
Sequência de Bloco G (IDT DNA
GAATTCGGCCAGGCTCGTGCCGTTTTGCAGACGCCACCGCCGAGGAAAACCGTGTACTATTAGCCATGGTCAACCCCACCGTGTTCTTCGACATTGCCGTCGACGGCGAGCCCTTGGGCCGCGTCTCCTTTGAGCTGTTTGCAGACAAGGTCCCAAAGACAGCAGAAAATTTTCGTGCTCTGAGCACTGGAGAGAAAGGATTTGGTTATAAGGGTTCCTGCTTTCACAGAATTATTCCAGGGTTTATGTGTCAGGGTGGTGACTTCACACGCCATAATGGCACTGGTGGCAAGTCCATCTATGGGGAGAAATTTGAAGATGAGAACTTCATCCTAAAGCATACGGGTCCTGGCATCTTGTCCATGGCAAATGCTGGACCCAACACAAATGGTTCCCGCGGCCGC
IKBKAP WT (5639 bps)
GAATTCCTTCATTTAAAACATTACAGGCCGGCCTGAGCAGCAATCATGTGTCCCATGGGGAAGTTCTGCGGAAAGTGGAGAGGGGTTCACGGATTGTCACTGTTGTGCCCCAGGACACAAAGCTTGTATTACAGATGCCAAGGGGAAACTTAGAAGTTGTTCATCATCGAGCCCTGG TTTTAGCTCAGATTCGGAAGTGGTGCGGCCGC
IKBKAP MU (5645 bps)
GAATTCCGGATTGTCACTGTTGTGCCCCAGGACACAAAGCTTGTATTACAGACTTATGTTTAAAGAGGCATTTGAATGCATGAGAAAGCTGAGAATCAATCTCAATCTGATTTATGATCATAACCCTAAGGTGTTTCTTGGAAATGTGGAAACCTTCATTAAACAGATAGATTCTGT GAATCATATTAACTTGTTTTTTACAGAATTGCGGCCGC
[1115] Os Blocos G foram inseridos no vetor de expressão de mamíferos pCI-neo (Promega) nos sítios de restrição EcoRI e Notl (negrito) com o uso de Infusion cloning technology (Clontech). Os plasmídeos foram, em seguida, purificados com o uso de kits miniprep ou maxiprep padrão (Macherey Nagel).
Preparação de curva padrão
[1116] A diluição para preparar o padrão superior é calculada. Uma concentração superior de 200.000.000 cópias/pL do plasmídeo de estoque foi preparada em tampão TE. Uma série de diluições de 10 vezes, também em TE, foi, em seguida, feita. Um total de 5 μL de cada padrão foi usado em um poço de qPCR para gerar amostras que contêm 109 cópias, 108 cópias, 107 cópias, 106 cópias, 105 cópias, 104 cópias, 103 cópias, 102 cópias, 101 cópias e 0 cópia.
[1117] Um ensaio para medir o IKBKAPFL mRNA e ΙΚΒΚΑΡΔ20 mRNA simultaneamente em poços celulares foi realizado. Os valores de RNA foram medidos em relação ao controle de DMSO e também incluíram um gene de manutenção, PPIA para assegurar que os dados sejam consistentes. Os valores de mRNA foram medidos após 24 horas de incubação com os compostos de SMSM. A dose de SMSMs aumentou de modo dependente os valores de IKBKAPFL ao mesmo tempo que diminui de modo concomitante os valores de ΙΚΒΚΑΡΔ20 e o mesmo com valores de EC50 e IC50 na faixa nanomolar.
[1118] Resultados exemplificativos dos ensaios são mostrados na Tabela 3C:
Tabela 3C
Figure img0711
Figure img0712
Exemplo 16: Proliferação e viabilidade celular
[1119] Os moduladores de splicing de molécula pequena foram testados em um ensaio de dose-resposta com o uso de diferentes linhagens de célula de câncer. As células foram primeiro plaqueadas em placas de cultura de tecido de plástico de 96 poços (10.000 células por poço). As células foram tratadas com 500 nM de SMSM ou veiculo sozinho (DMSO) por 48 horas. Em seguida ao tratamento, as células foram lavadas com PBS, coradas com uma solução de coloração de cristal violeta e deixadas a secar por 48-72 h. Após a secagem, foi adicionado tampão de citrato de sódio a cada poço e deixado a incubar por 5 min à temperatura ambiente. A absorvância foi medida a 450 nM com o uso de um leitor de microplacas (Biorad; Hercules, CA). A proliferação celular relativa para cada uma das linhagens de célula de câncer foi determinada.
[1120] Para medir a viabilidade celular, as células foram plaqueadas em placas de cultura de tecido de plástico de 96 poços em uma densidade de 5x103 células/poço. Vinte e quatro horas após o plaqueamento, as células foram tratadas com vários SMSMs. Após 72 horas, os meios de cultura de células foram removidos e as placas foram coradas com 100 ml/poço de uma solução que contém 0,5 % de cristal violeta e 25 % de metanol, enxaguadas com água desionizada, secas durante a noite e ressuspensas em 100 ml de tampão de citrato (citrato de sódio a 0,1 M em etanol a 50 %) para avaliar a eficiência do plaqueamento. A intensidade da coloração por cristal violeta, avaliada a 570 nm e quantificada usando o software Vmax Kinetic Microplate Reader e Softmax (Molecular Devices Corp., Menlo Park, CA), foi diretamente proporcional ao número de células. Os dados foram normalizados para células tratadas com veiculo e foram apresentados como a média ± SE de experimentos representativos. Os SMSMs eficazes foram determinados para várias linhagens celulares.
[1121] Os moduladores de splicing de molécula pequena foram testados em um ensaio de dose-resposta com o uso das células A673 e células NHDF.
[1122] As células A673 ou células NHDF foram primeiro plaqueadas em placas de cultura de tecido de plástico de 96 poços (10.000 células por poço). As células foram tratadas com veiculo sozinho (DMSO), ou concentrações crescentes de SMSM compostos por 72 h. Em seguida ao tratamento, a proliferação celular foi determinada com o uso de um ensaio com cristal violeta. A proliferação celular relativa em cada concentração foi determinada.
[1123] Resultados exemplificativos são mostrados na tabela abaixo e FIGS. 9A-9H.
Figure img0713
Exemplo 17: Monitoramento dos níveis de expressão de FOXM1 variantes de splice com o uso de PCR quantitativo em tempo real
[1124] Os fibroblastos humanos foram plaqueados a 10.000 células/poço em 200 μL de DMEM com GlutaMAX e 10 % de FBS em placas de 96 poços em um incubador de cultura celular (37 °C, 5 % CO2, 100 % de umidade relativa) . As células foram, em seguida, tratadas com SMSMs na Tabela 1B nas diferentes concentrações (0,1-1000 nM, cada uma em 0,5 % de DMSO) em triplicata por 24 horas. A extração do RNA foi realizada de acordo com as instruções dos Kits Cells-to-CT™ (Ambion®, Applied Biosystems). As amostras de RNA foram congeladas a -20 °C até análise posterior. Os níveis relativos de expressão de FOXM1 de comprimento total (FOXM1FL) ou FOXM1 sem o éxon VIIa (FOXMlΔvIIa) com GAPDH para controle interno, foram medidos com o uso de reação em cadeia de polimerase-transcrição reversa multiplex de uma etapa (RT-PCR). As sondas TaqMan® FAM foram usadas para a quantização relativa de níveis de expressão de FOXM1FL ou FOXMlΔvIIa e as sondas TaqMan® VIC para a quantização relativa de níveis de GAPDH humano. A fidelidade dos métodos de amplificação foi determinada com o uso do método de quantificação relativa de ΔΔCt para PCR quantitativa. Os dados mostram que os compostos induziram splicing alternativo de FOXM1 em relação ao FOXM1 de comprimento total. Os SMSMs aumentaram a expressão do FOXM1FL mRNA. Correspondentemente, os mRNAs para FOXMlΔvIIa diminuiram. Os dados demonstram que a regulação positiva de FOXM1FL com regulação negativa de FOXMlΔvIIa por tratamento com os SMSMs da presente revelação foram diretamente correlacionados, indicando um efeito dos SMSMs sobre o splicing alternativo de FOXM1. As curvas resultantes de dependência de concentração da variante de splice FOXMlΔvIIa são ajustados a uma equação de ligação Hill para produzir valores IC50. Tomados em conjunto, os dados sublinham uma atividade de modificação de splicing no gene FOXM1. Isso pode resultar na interrupção do ciclo celular e na indução de apoptose, pois a variante FOXM1FL variante criada pelo tratamento por SMSM é funcionalmente inativa e antagoniza o efeito de pró-proliferação de FOXM1 funcional. Resultados exemplificativos são mostrados nas FIG. 7 e FIG. 12.
Exemplo 18: Estudo de dose máxima tolerável
[1125] Foi avaliada a sobrevivência de camundongos após a administração de SMSMs após 10 ou 11 dias.
[1126] A tolerância dos tratamentos com fármacos foi determinada medindo o peso dos camundongos durante o período de administração do fármaco. O peso corporal foi medido antes da inoculação do tumor e antes da administração do tratamento e depois diariamente. As mudanças no peso final dos camundongos para os tratamentos SMSM foram determinadas. Os resultados estão resumidos na tabela abaixo:
Figure img0714
Figure img0715
Exemplo 19: Estudos de faixa de dosagem e em fungão do tempo
[1127] Foram realizados estudos de faixa de dosagem e em função do tempo comparando os efeitos antineoplásicos de SMSM-167 e SMSM-151 contra veiculo.
[1128] Os grupos experimentais usados para esse estudo são mostrados na tabela abaixo e FIGS. 14A-C.
Figure img0716
[1129] Os camundongos fêmeas NCrNu foram usados. A faixa
[1130] A linhagem de tumor A673 foi mantida in vitro como uma cultura em monocamada. As células tumorais foram subcultivadas rotineiramente duas vezes por semana por TryplE e não excederam 4-5 passagens. As células que crescem em uma fase de crescimento exponencial foram colhidas e contadas para inoculação do tumor.
[1131] Cada camundongo foi inoculado em um flanco direito com a suspensão de células isoladas de células de tumor viáveis de 95 % (5 x 106 células/ camundongo) em Meios RPMI 1640 livres de soro para o desenvolvimento do tumor. Os tratamentos foram administrados quando o tamanho médio do tumor atingiu aproximadamente 75 mm3.
[1132] Um período de aclimatação de um mínimo de 72 h foi permitido entre a recepção dos animais e a inoculação do tumor, de modo a habituar os animais ao ambiente do laboratório. Os camundongos NCrNu imunodeficientes foram mantidos em um ambiente livre de patógenos. Os animais foram alimentados com uma dieta de Irradiated Mouse pellet feed Purina rodent diet #5053 (Fisher Feeds, Bound Brook, NJ) e água clorada de um sistema de osmose reversa (RO) (4-6 ppm).
[1133] Antes do início do tratamento, todos os animais foram pesados e distribuídos por grupos de tratamento, com o uso de um procedimento de aleatorização. Os camundongos foram randomizados em grupos com base em seus tamanhos de tumor para garantir que cada grupo tivesse aproximadamente o mesmo tamanho médio de tumor e faixa de tamanho de tumor.
[1134] Após a inoculação, os animais foram observados diariamente para a morbidade e mortalidade. No momento do monitoramento de rotina, os animais foram verificados quanto a quaisquer efeitos do crescimento do tumor no comportamento normal, como mobilidade, consumo de comida e água, ganho/perda de peso corporal, colagem de olhos/cabelos e outros efeitos anormais. Mortes e sinais clinicos observados foram registrados. Os animais que foram observados estarem em uma condição de deterioração continua ou portador de um tumor que excedia 2.000 mm3 de tamanho foram sacrificados.
[1135] O peso corporal foi medido antes da inoculação do tumor e antes da administração do tratamento e em seguida diariamente. O tamanho do tumor foi medido 2 a 3 vezes por semana em duas dimensões com o uso de um paquímetro, e o volume foi expresso em mm3 com o uso da fórmula: V = 0,5 x a x b2 onde a e b são os diâmetros longo e curto do tumor, respectivamente.
[1136] Os estudos foram finalizados quando o tamanho do tumor no grupo tratado com veículo atingiu 2.000 mm3. Cada camundongo foi sangrado 2 h após a última dose e pelo menos 50 μl de plasma foram coletados de cada camundongo. Todas as amostras de plasma coletadas e soluções de dosagem de retentor para cada nível de dose foram usadas para medições bioanalíticas. Todos os tumores também foram coletados e pesados. Um fragmento de tumor livre de necrose de aproximadamente 50 mg foi retirado de cada tumor e congelado rapidamente para isolamento de RNA. O tumor restante foi congelado rapidamente para análise de PK.
Exemplo 20: Modelo Subcutâneo de Tumor Cerebral U87-Luc em Camundongos Nude Ncr
[1137] Foi avaliada a eficácia de SMSM-167, SMSM-160 e SMSM-151 em um modelo subcutâneo de tumor cerebral U87-Luc em camundongos C.B-17 SCID.
[1138] Os grupos experimentais a serem usados para esse estudo são mostrados na tabela abaixo e FIGs. 15A-B.
Figure img0717
[1139] A inoculação do tumor começou no dia 0. Os tratamentos foram administrados quando o tamanho médio do tumor atingiu aproximadamente 100 mm3. 100 camundongos foram usados para esse estudo.
[1140] Um período de aclimatação de um mínimo de 72 h foi permitido entre a recepção dos animais e a inoculação do tumor, de modo a habituar os animais ao ambiente do laboratório. Os animais foram alimentados com uma dieta de Irradiated Mouse pellet feed Purina rodent diet #5053 (Fisher Feeds, Bound Brook, NJ) e água clorada de um sistema de osmose reversa (RO) (4-6 ppm).
[1141] Antes do início do tratamento, todos os animais foram pesados e distribuídos por grupos de tratamento, com o uso de um procedimento de aleatorização. Os camundongos foram randomizados em grupos com base em seus tamanhos de tumor, como medido pelo paquímetro para garantir que cada grupo tivesse aproximadamente o mesmo tamanho médio de tumor e faixa de tamanho de tumor.
[1142] Após a inoculação, os animais foram observados diariamente para a morbidade e mortalidade. No momento do monitoramento de rotina, os animais foram verificados quanto a quaisquer efeitos do crescimento do tumor no comportamento normal, como mobilidade, consumo de comida e água, ganho/perda de peso corporal, colagem de olhos/cabelos e outros efeitos anormais. Mortes e sinais clinicos observados foram registrados. Os animais que foram observados estarem em uma condição de deterioração continua ou portador de um tumor que excedia 2.000 mm3 de tamanho foram sacrificados.
[1143] O peso corporal foi medido antes da inoculação do tumor e antes da administração do tratamento e, em seguida, diariamente. O tamanho do tumor foi medido 2 vezes por semana em duas dimensões com o uso de um paquímetro. Os estudos foram finalizados quando o tamanho do tumor no grupo tratado com veículo atingiu 2.000 mm3. Cada camundongo foi sangrado a 2 h após a última dose e pelo menos 50 μl de plasma foram coletados de cada camundongo. Todas as amostras de plasma coletadas e soluções de dosagem de retentor para cada nível de dose foram usadas para medições bioanalíticas. Todos os tumores também foram coletados e pesados. Um fragmento de tumor livre de necrose de aproximadamente 50 mg foi retirado de cada tumor e congelado rapidamente para isolamento de RNA. O tumor restante foi congelado rapidamente para análise de PK.
Exemplo 21: Tratamento com SMSM in vivo inibe o crescimento tumoral
[1144] Fo ram realizados estudos para avaliar os efeitos do tratamento com SMSM in vivo em glioblastoma, mama, pâncreas, próstata, melanoma, linfoma e tumores do sarcoma de Ewing. Também foram realizados estudos para avaliar os efeitos do tratamento com SMSM in vivo nos níveis de mRNA. Camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de glioblastoma, mama, pancreático, próstata, melanoma, linfoma e sarcoma de Ewing preexistentes foram tratados com veículo ou SMSMs. Os tecidos tumorais dos xenoenxertos subcutâneos foram divididos em pó com o uso de um BioPulverizer (BioSpec Produtos, Inc.). Após o tratamento com SMSM, o RNAm foi isolado dos xenoenxertos e analisado por qRT -PCR.
[1145] O tamanho do tumor foi medido 2 vezes por semana em duas dimensões com o uso de um paquímetro. Os estudos foram finalizados quando o tamanho do tumor no grupo tratado com veículo atingiu 2.000 mm3. Cada camundongo foi sangrado a 2 h após a última dose e pelo menos 50 μl de plasma foram coletados de cada camundongo. Todas as amostras de plasma coletadas e soluções de dosagem de retentor para cada nível de dose foram usadas para medições bioanalíticas. Todos os tumores também foram coletados e pesados. Um fragmento de tumor livre de necrose de aproximadamente 50 mg foi retirado de cada tumor e congelado rapidamente para isolamento de RNA. O tumor restante foi congelado rapidamente para análise de PK.
[1146] Os efeitos do tratamento com SMSM in vivo em xenoenxertos de glioblastoma subcutâneo, mama, pancreático, próstata, melanoma, linfoma e sarcoma de Ewing preexistentes foram avaliados. Para esses experimentos in vivo, 1 x 106 Raji, A375, A673, MDA-MB-231, BxPC-3, PC-3 ou U87 (células ressuspensas em 100 μl de PBS foram injetadas subcutaneamente nos flancos de camundongos nude. Quando o tumor atingiu aproximadamente 100 mm3 (volume= (¾ (π) (comprimento/2 ) (largura/2 ) 2 ) , os tratamentos indicados nas tabelas abaixo foram iniciados.
[1147] Como mostrado na tabela abaixo e FIGS. 14A, 14B e 14C, SMSM-160 tratamento de camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de A673 preexistentes levou a inibição do crescimento tumoral (TGI) . (TGI (%) = (1 — (TVTratamento/Dx — TVTratamento/Dl) / (TVcontrole/Dx- TVcontrole/Dl) ) × 100).
Figure img0718
[1148] Como mostrado na tabela abaixo e FIGS. 16A, 16B e 16C, o tratamento com SMSM-160 de camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de A673 preexistentes levou a inibição do crescimento tumoral (TGI) . (TGI (%) = (1 — (TVTratamento/Dx — TVTratamento/Dl) / (TVcontrole/Dx- TVcontrole/Dl) ) × 100).
Figure img0719
[1149] Como mostrado na tabela abaixo e FIGs. 17A e 17B, o tratamento com SMSM-160 de camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de A375 preexistentes levou a inibição do crescimento tumoral (TGI).
Figure img0720
[1150] Como mostrado na tabela abaixo e FIGs. 20A e 20B, o tratamento com SMSM-151 de camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de A673 preexistentes levou a inibição do crescimento tumoral (TGI).
Figure img0721
[1151] Como mostrado na tabela abaixo e FIGs. 21A e 21B, o tratamento com SMSM-160 ou SMSM-151 de camundongos nude imunocomprometidos com xenoenxertos de A-375 preexistentes levou a inibição do crescimento tumoral (TGI).
Figure img0722
Exemplo 22: Farmacodinâmica
[1152] Fo ram determinadas a viabilidade de células A-673 (IC50), splicing (IC50) e AUC de cérebro/AUC de Plasma de SMSMs. Como mostrado na as tabelas abaixo os SMSMs tiveram alta exposição ao SNC.
Figure img0723
Exemplo 23: Eficácia de SMSMs em modelo subcutâneo de tumor cerebral U87-Luc em combinação com radioterapia
[1153] Objetivo do Estudo
[1154] Avaliar a eficácia de SMSMs em Modelo Subcutâneo de Tumor Cerebral U87-Luc em combinação com radioterapia
[1155] Projeto experimental
[1156] Modelo Subcutâneo de Tumor Cerebral U87-Luc em Camundongos Nude Ncr: inoculação do tumor no Dia 0; inicio do tratamento com composto a 100 mm3 (Dia 0), duas vezes ao dia por sonda oral; tratamento de radioterapia no Dia 3. O tratamento de radioterapia (10 Gy) foi conduzido com o uso de o irradiador da Plataforma de Pesquisa em Radiação de Animais Pequenos Guiados por Imagem (SARRP [Image Guided Small Animal Radiation Research Platform]) (Xstrahl Limited, GU15 3IL).
[1157] Grupos experimentais
[1158] Os grupos experimentais usados nesse estudo são mostrados na tabela abaixo. Os resultados são mostrados na FIGS. 24A e 24B.
Figure img0724
[1159] Os exemplos e modalidades descritos no presente documento são para propósitos ilustrativos somente e várias modificações ou alterações sugeridas aos técnicos no 5-(4-(6-(((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-2,3-difluoro-5-hidroxifenil)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2-(6-(ciclopropil((1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipiridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-metoxipirimidin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(2-fluoroetil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 —(6 —( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(2-(metoxi-d3)piridin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil-d3)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(6-(metoxi-d3)piridazin-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-3,4-difluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenol;
2 — ( 6 — ( ( (1R,3s,5S)-1,5-dimetil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)piridazin-3-il)-4-fluoro-5-(1,2,3-triazin-5-il)fenol;

Claims (16)

  1. Composto, caracterizado por ser da Fórmula (IV), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo:
    Figure img0725
    em que,
    Figure img0726
    anel Q é fenila substituída;
    X é -O- ou -S-;
    Z é -CR7-; e R7 é H;
    W é C1-C4 alquileno substituído ou não substituído;
    R é H;
    R11, R12, R13, R14, R15, R16 e R17 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, F, OR1, C1-6 alquila substituída ou não substituída, uma C1-6 fluoroalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, em que alquila é opcionalmente substituída com hidróxi, amino, metóxi, mono-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído ou di-C1-6 alquilamino substituído ou não substituído;
    R15 e R18 são os mesmos e selecionados de H e -CH3;
    R1 é H, D, C1-C6 alquila substituída ou não substituída, -CD3, C1-C6 haloalquila substituída ou não substituída, C1-C6 heteroalquila substituída ou não substituída, C3-C8 cicloalquila substituída ou não substituída, C2-C7 heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída, ou heteroarila substituída ou não substituída;
    a e b são cada 0;
    c e d são cada 1; e
    em que o composto da Fórmula (IV) tem uma pureza estereoquímica de pelo menos 80 %.
  2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel Q é 2-hidroxi-fenil substituído com:
    0, 1, 2, ou 3 substituintes independentemente selecionados a partir de C1-C6 alquila, oxo, oxima, halo-C1-C6 alquila, di-halo-C1-C6 alquila, tri-halo-C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alcoxi-C3-C7 cicloalquila, halo-C1-C6 alcóxi, di-halo-C1-C6 alcóxi, tri-halo-C1-C6 alcóxi, hidróxi, ciano, halogênio, amino, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, arila, heteroarila, C1-C6 alquila substituída com hidróxi, C1-C6 alcóxi substituído com arila, -C(=O)NH-C1-C6 alquil-heteroarila, -NHC(=O)-C1-C6 alquil heteroarila, C1-C6 alquil-C(=O)NH-heteroarila, C1-C6 alquil-NHC(=O)-heteroarila, C3-C7 cicloalquila, cicloalquenila de 5-7 membros, e heterociclo de 5, 6 ou 9 membros que contém 1 ou 2 heteroátomos independentemente selecionados a partir de S, O, e N;
    em que dois grupos C1-C6 alquila podem combinar com os átomos aos quais são unidos para formar um anel de 5-6 membros; e
    em que a heteroarila tem 5, 6, 9, ou 10 átomos de anel, 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel selecionados a partir de N, O, e S, e é substituída com 0, 1, ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de oxo, hidróxi, nitro, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alquenila, C1-C6 alcóxi, C3-C7 cicloalquila, C1-C6 alquil-OH, tri-halo-C1-C6 alquila, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, C(=O)NH2, -NH2, -NO2, hidróxi-C1-C6 alquilamino, hidróxi-C1-C6 alquila, heterocíclico-C1-C6 alquila de 4-7 membros, amino-C1-C6 alquila, mono-C1-C6 alquilamino-C1-C6 alquila, e di-C1-C6 alquilamino-C1-C6 alquila.
  3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que:
    anel Q é
    Figure img0727
    , m que anel P é arila ou heteroarila.
  4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que:
    anel Q é
    Figure img0728
    ,em que anel P é arila ou heteroarila.
  5. Composto, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
    Figure img0729
  6. Composto, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel P é heteroarila selecionada a partir do grupo que consiste em:
    Figure img0730
  7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é -O-.
  8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é -S-.
  9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    Figure img0731
    ,em que p é 1, 2, ou 3.
  10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    R é H; R15 e R18 são H; e p é 2 ou 3.
  11. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    R é H; R15 e R18 são H; e p é 2.
  12. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    R é H; R15 e R18 são H; e p é 3.
  13. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2 ou 3.
  14. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    R é H; R15 e R18 são CH3; e p é 2.
  15. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, e um excipiente ou um carreador farmaceuticamente aceitável.
  16. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição.
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