BRPI0405215B1 - elemento de teste na forma de uma tira de teste imunocromatográfico e método para detectar o peptídeo natriurético procerebral de terminal n - Google Patents

elemento de teste na forma de uma tira de teste imunocromatográfico e método para detectar o peptídeo natriurético procerebral de terminal n Download PDF

Info

Publication number
BRPI0405215B1
BRPI0405215B1 BRPI0405215A BRPI0405215A BRPI0405215B1 BR PI0405215 B1 BRPI0405215 B1 BR PI0405215B1 BR PI0405215 A BRPI0405215 A BR PI0405215A BR PI0405215 A BRPI0405215 A BR PI0405215A BR PI0405215 B1 BRPI0405215 B1 BR PI0405215B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
probnp
test
mab
pab
antibodies
Prior art date
Application number
BRPI0405215A
Other languages
English (en)
Inventor
Alfons Nichtl
Andreas Gallusser
Anneliese Borgya
Juergen Spinke
Klaus Hallermayer
Michael Grol
Volker Klemt
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of BRPI0405215A publication Critical patent/BRPI0405215A/pt
Publication of BRPI0405215B1 publication Critical patent/BRPI0405215B1/pt
Publication of BRPI0405215B8 publication Critical patent/BRPI0405215B8/pt

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/575—Hormones
    • G01N2333/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Brain natriuretic peptide [BNP, proBNP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/80—Antihypertensive peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

"teste analítico em sanduíche para determinar nt-probnp". a presente invenção refere-se a testes imunológicos rápidos para determinar nt-probnp, que usam combinações especiais de anticorpos. o teste rápido, de acordo com a invenção, pode estar presente com vantagens como uma tira de teste imunocromatográfico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ELEMENTO DE TESTE NA FORMA DE UMA TIRA DE TESTE IMUNOCROMATOGRÁ-FICO E MÉTODO PARA DETECTAR O PEPTÍDEO NATRIURÉTICO PRO-CEREBRAL DE TERMINAL N". A presente invenção refere-se a um teste analítico em sanduíche, particularmente um elemento de teste, e particularmente na forma de uma tira de teste imunocromatográfico, usando o princípio de sanduíche para determinar o peptídeo natriurético procerebral de terminal N (NT-proBNP). NT-proBNP é um marcador muito promissor para o diagnóstico e controle de insuficiência cardíaca. Um retrospecto sobre insuficiência cardíaca e a importância de NT-proBNP como uma substância marcadora para isto pode ser encontrado no documento nsWO 00/45176, nas páginas 1 a 4, cujo conteúdo é aqui explicitamente incorporado como referência. Além disso, os documentos n22 US 5.786.163, US 6.461.828, US 6.117.644, EP 1 151 304, WO 02/083913 e o pedido de patente n2 EP 03 010 591.0, datado de 5 de dezembro de 2003 (Klemt et al.) referem-se a NT-proBNP, anticorpos para ele e métodos de determinação.
Atualmente, o único teste de NT-proBNP disponível no mercado de diagnósticos in vitro é o teste de NT-proBNP Elecsys® completamente automatizado, da Roche Diagnostics, que baseia-se em uma reação em sanduíche com detecção de eletroquimioluminescência. Este teste é desenhado para ser usado em centrais de laboratórios grandes, e além disso, usado com reagentes líquidos que têm de ser dosados precisamente, requer um instrumento relativamente complexo para dosar os líquidos e para detectar o sinal de lumines-cência, a fim de conduzir o teste. Um teste simples de usar e rápido para NT-proBNP, o qual, caso necessário, possa ser avaliado visualmente sem um instrumento de avaliação, não está presentemente disponível no mercado.
Testes rápidos para substâncias imunologicamente detectáveis têm sido conhecidos há longo tempo para inúmeros parâmetros diferentes, como por exemplo, os descritos nos documentos n— WO 97/06439, EP 0 291 194, US 5.591.645, US 4.861.711, US 5.141.850, US 6.506.612, US 5.458.852 e US 5.073.484. Nestes casos, os reagentes de detecção imuno- lógica (essencialmente anticorpos ou antígenos marcados e não-marcados) são usualmente fornecidos na forma seca sobre um suporte que permite o transporte de uma amostra líquida (particularmente, fluidos corporais tais como sangue, soro, plasma, urina, saliva etc.) sobre ou dentro do suporte. Para este propósito, o suporte é, de preferência, ativo em capilares, como por exemplo,uma membrana ou um suporte de plástico dotado de canais capilares. Entre os versados, eles são frequentemente referidos como tiras para testes imunocromatográficos ou dispositivos para testes.
Em pacientes com angústia respiratória aguda é vantajoso conduzir uma determinação de NT-proBNP tão rapidamente quanto possível, para excluir ou diagnosticar insuficiência cardíaca como uma causa da dispnéia, e para iniciar o tratamento adequado. Como o teste de NT-proBNP com Elecsys® somente pode ser conduzido em uma central de laboratório, é difícil determinar rapidamente NT-proBNP que não nos tempos rotineiros. Assim sendo, seria particularmente vantajoso para a sala de emergência se estivesse disponível um teste rápido que pudesse ser conduzido diretamente na sala de emergência em tempos que não os rotineiros. Este teste rápido deveria, entretanto, assegurar as mesmas faixas referenciais e cortes que o método referencial na centrai do laboratório (Elecsys® NT-proBNP), para permitir uma boa possibilidade de comparação dos resultados independentemente do tipo de teste que está realmente conduzido.
Os anticorpos policlonais (PAB) usados no teste Elecsys® NT-proBNP reconhecem uma fração muito especial de NT-proBNP (NT-proBNP "nativo"; vide pedido de patente η- EP 03 010 591.0, datado de 5 de dezembro de 2003, em nome de Klemt et a!.; de acordo com este documento, o teste reconhece os epitopos de NT-proBNP que compreendem os aminoáci-dos 1-21 (AA 1-21) e 39-50 (AA 39-50)). Entretanto, resultou que esses anticorpos policlonais são inadequados para testes rápidos de NT-proBNP que usam marcadores particulados, tal como ouro coloidal, como um marcador, pois eles apresentam uma alta variabilidade indesejada na geração de sinais devido às interações físico-químicas com os componentes do teste rápido (tais como os materiais de suporte, matrizes etc.). Isto resulta em oscilações consideráveis na qualidade do teste de lote para lote.
Assim sendo, o objeto da presente invenção foi eliminar as desvantagens das técnicas anteriores. Particularmente, o objetivo é fornecer um teste rápido para determinar NT-proBNP, que possa ser fabricado de forma reprodutível e tenha uma boa correlação com o método de laboratório.
Este objetivo é alcançado pela matéria em questão da invenção. A invenção refere-se a um teste imunológico, particularmente na forma de um teste rápido, tal como um elemento de teste analítico, como caracterizado nas reivindicações independentes da patente. As modalidades preferidas estão descritas nas reivindicações dependentes. A solução inventiva para produzir um teste imunológico em formato de sanduíche, e particularmente, um teste rápido que se correlaciona bem com o método referencial Elecsys®, usa uma combinação especial de anticorpos que compreendem pelo menos dois anticorpos para NT-proBNP, onde pelo menos um anticorpo é um anticorpo monoclonal (MAB). Outro anticorpo do teste em sanduíche de acordo com a invenção pode ser também um anticorpo monoclonal (MAB) ou um anticorpo policlonal (PAB). Nesta conexão, um desses anticorpos (abreviado AB) é direcionado pelo menos contra partes do epitopo de NT-proBNP, compreendendo os aminoácidos 38 a 50 (no texto que se segue também abreviado como AB (38-50) ou MAB (38-50) ou PAB (38-50)). Pelo menos um anticorpo adicional é direcionado pelo menos contra partes do epitopo de NT-proBNP, compreendendo os aminoácidos 1 a 37 ou 43 a 76 (no texto que se segue abreviado como AB (1-37) ou AB (43-76) ou MAB (1-37) ou MAB (43-76) ou PAB (1-37) ou PAB (43-76)). Os epitopos reconhecidos pelos anticorpos podem sobrepor-se ligeiramente, de preferência em menos do que 5 aminoácidos, e especialmente, de preferência, em menos do que 2 aminoácidos.
Prefere-se uma combinação de anticorpos que compreendem pelo menos um anticorpo policlonal (PAB) e um anticorpo monoclonal (MAB) (assim denominada combinação PAB/MAB) para NT-proBNP. O termo PAB (X-Y), como utilizado neste pedido da patente, significa um anticorpo policlonal que é direcionado contra o epitopo de NT- proBNP que compreende os aminoácidos X a Y. MAB (X-Y) é um anticorpo monoclonal correspondente. AB (X-Y) denota genericamente um anticorpo (como por exemplo, PAB ou MAB) que é direcionado contra o epitopo de NT-proBNP que compreende os aminoácidos X a Y. MAB a.b.c (X-Y) é um anticorpo monoclonal direcionado contra o epitopo de NT-proBNP que compreende os aminoácidos X a Y, que é obtido a partir de uma linhagem de célula depositada, a.b.c.
Para garantir uma qualidade reprodutível do conjugado anticor-po-etiquetado, o MAB é, de preferência, imobilizado sobre uma etiqueta par-ticulada, particularmente uma etiqueta de ouro.
Outras etiquetas apropriadas são, por exemplo, látices coloridos, outras etiquetas de sol metálico, etiquetas poliméricas ou nanocristais semicondutores (assim denominados pontos quânticos). O conjugado MAB-etiquetado é, de preferência, fornecido no dispositivo de teste rápido de tal modo que ele possa ser destacado dele pela amostra líquida, como por exemplo, impregnando materiais de suporte apropriados, tais como velos, membranas etc. Entretanto, é possível também adicionar o conjugado MAB-etiquetado como uma solução ao teste rápido. O anticorpo policlonal (PAB) que é, de preferência, obtido imunizando animais, particularmente ovinos, caprinos ou leporídeos, é de preferência fornecido no teste rápido como um derivado de biotina e pode estar íigado a uma linhagem de detecção de avidina ou estreptavidina. Entretanto, é possível também imobilizar diretamente o PAB no dispositivo de teste rápido, como por exemplo, na forma de uma linhagem de detecção sobre uma membrana de cromatografia apropriada.
De acordo com a invenção, é possível também, embora seja menos preferido, usar o AB etiquetado, particularmente o MAB marcado, e o segundo anticorpo, particularmente o segundo MAB ou PAB, em solução ou em soluções para o teste rápido. Um parceiro iigante, que pode capturar o AB adequadamente etiquetado, é então localizado em uma zona de detecção no dispositivo do teste, e assim sendo, liga o complexo em sanduíche que compreende o primeiro anticorpo, o analisado e o segundo anticorpo, a uma fase sólida do teste rápido.
O anticorpo monoclona! (MAB) usado, de acordo com a invenção, não precisa necessariamente reconhecer o epitopo (AA 1-21) que é detectado no sistema referencial (teste Elecsys®) para assegurar boa correlação com o teste referencial: as combinações de anticorpos mencionadas na reivindicação 1 e, particularmente, as combinações MAB/PAB MAB 17.3.1 (13-16/PAB (39-50) e MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) correlacionam-se bem com o sistema referencial Elecsys® que usa anticorpos policlo-nais para os epitopos AA 1-21 e AA 39-50 de NT-proBNP (PAB (1-21) e PAB (39-50)).
Os anticorpos policlonais tais como PAB (1-21) e PAB (39-50) podem ser obtidos, caracterizado e identificados por métodos conhecidos pelos versados nas técnicas, especialmente em analogia com o Exemplo 2 do documento ne WO 00/45176.
Os anticorpos monoclonais tais como MAB (38-42) e MAB (44-50) podem ser obtidos, caracterizados e identificados por métodos conhecidos pelos versados nas técnicas, especialmente em analogia com o Exemplo 3 do documento n- WO 00/45176, ou o Exemplo 3 do pedido de patente ns EP 03 010 591.0, datado de 5 de dezembro de 2003 (Klemt et a!.).
Os anticorpos são marcados, por exemplo, com ouro ou outras etiquetas, biotina, etc., por métodos conhecidos pelos versados nas técnicas (cf. também, Exemplo 2 do documento ne WO 00/45176, e Exemplo 2 do pedido de patente EP n- 03 010 591.0, datado de 5 de dezembro de 2003, em nome de Klemt et ai). A marcação com ouro está descrita detalhadamente, por exemplo, no documento n2 EP-A 0 898 170.
Particularmente, os anticorpos monoclonais preferidos MAB 17.3.1 (13-16), MAB 16.1.39 (38-42), MAB 18.29.23 (64-67) e MAB 18.4.34 (27-31) podem ser obtidos de acordo com o Exemplo 3 do pedido de patente EP n2 03 010 591.0, datado de 5 de dezembro de 2003, em nome de Klemt et al. As linhagens de células correspondentes estão depositadas na "Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSZM)" (números de acesso do depositário e data do depósito: DSM ACC2591 (7 de maio de 2003) para MAB 17.3.1 (13-16); DSM ACC2590 (7 de maio de 2003) para MAB 16.1.39 (38-42); DSM ACC2593 (7 de maio de 2003) para MAB 18.29.23 (64-67); e DSM ACC2592 (7 de maio de 2003) para MAB 18.4.34(27-31). A combinação de MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) resulta em uma correlação relativamente boa com o teste referencial, assim como a combinação MAB 17.3.1 (13-16)/PAB (39-50) (vide também Exemplo 2).
Além disso, a combinação MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) demonstrou ser particularmente vantajosa para o teste de acordo com a invenção: esta combinação permitiu que uma curva de função seja adaptada, o que é particularmente apropriado para testes rápidos (vide Exemplo 3). Em comparação, a combinação MAB 17.3.1 (13-16)/PAB (39-50) apresentou uma sensibilidade pior no teste. A invenção é elucidada ainda mais, baseado nos exemplos e figuras que se seguem. A Figura 1 ilustra um diagrama de uma modalidade preferida de um dispositivo de teste rápido, de acordo com a invenção, na forma de uma tira de teste imunocromatográfico. A Figura 2 ilustra a correlação da combinação de anticorpos MAB 17.3.1 (13-16)/PAB (39-50) no formato de teste úmido Elecsys® com o método referencial Elecsys® PAB (1-21 )/PAB (39-50). A Figura 3 ilustra a correlação da combinação de anticorpos MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) no formato de teste úmido Elecsys® com o método referencial Elecsys® PAB (1-21 )/PAB (39-50). A Figura 4 ilustra curvas de função de tiras de teste de NT-proBNP, de acordo com o Exemplo 1, com diferentes combinações de anticorpos. A Figura 5 ilustra a combinação de uma tira de teste de NT-proBNP com a combinação de anticorpos: Au-MAB 18.4.34 (27-31 )/Bi-PAB (39-50) para o kit do teste Elecsys® NT-proBNP.
Os números nas figuras denotam: 1 - zona de aplicação da amostra 2 - zona de separação de eritrócitos 3 - zona de detecção 4 - zona de sucção 5 - material de suporte 6 - matriz de aplicação da amostra ("velo de biotina" e "velo de ouro") 7 - matriz de separação de eritrócitos 8 - matriz de detecção 9 - zona de imobilização em forma de linha 10 - matriz de sucção EXEMPLOS 1) Preparação do dispositivo de teste para determinar NT-proBNP a partir de sangue total (cf. Figura 1) O dispositivo de teste (Figura 1) consiste em um material de suporte (5) sobre o qual uma zona de aplicação da amostra (1), uma zona de separação de eritrócitos (2), uma zona de detecção (3), e uma zona de sucção (4) são montadas. Uma matriz de aplicação da amostra (6), que sobrepõe-se parcialmente a uma zona de separação de eritrócitos (7), fica localizada na zona de aplicação da amostra (1). A matriz de separação de eritrócitos (7), por sua vez, sobrepõe-se iigeiramente à matriz de detecção (8) (zona de detecção), sobre a qual uma substância imobilizada é aplicada na forma de uma linhagem (9). Uma matriz de sucção (10) sobrepõe-se ligeiramente à matriz de detecção (8). Todos reagentes que são necessários para formar um complexo com o analisado a ser detectado são acomodados na matriz de aplicação da amostra (6). No presente caso, a zona de aplicação da amostra é composta de dois velos, um em cima do outro, onde o primeiro ("velo de ouro") é impregnado com um anticorpo marcado com ouro para NT-proBNP (MAB 18.4.34 (27-31)) e o segundo velo ("velo de biotina") contém um anticorpo biotinilado para NT-proBNP (PAB (39-50)). Uma linhagem (9) feita de estreptavidina é aplicada dentro da zona de detecção.
Uma folha de poliéster (Pütz) com 350 μιτι de espessura é usada com camada de suporte (5). Um velo de poliéster (Roche Diagnostics) com 360 μΐη de espessura é usado como "velo de ouro" ou "velo de biotina" da matriz de aplicação da amostra (6). Um velo de fibra de vidro (Roche Dia-gnostics") com 1,8 mm de espessura é usado como matriz de separação de eritrócitos (7). Uma membrana de nitrocelulose (Sartorius) com 140 pm de espessura é usada como matriz de sucção (8). Um velo de vidro (Roche Di-agnosties) com 1,8mm de espessura é usado como matriz de sucção (10). Os componentes individuais (6, 7, 8, 10) são colados sobrepondo-se ligeiramente à camada de suporte (5) por meio de um adesivo termofundível, como ilustrado na Figura 1. A formulação de impregnação dos "veios de ouro e biotina" é a seguinte: "velo de biotina": Hepes 100 mM pH 7,4, 0,1% de Tween®, 20 pg/mL de PAB (39-50) biotinilado "velo de ouro": Hepes 100 mM pH 7,4, conjugado de ouro e OD4 MAB 18.4.34 (27-31) 2) Correlação da combinação epitopos/anticorpos MAB 17.3.1 (13-16)/PAB (39-50) e MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) no formato Ele-csys® para o kit de teste Elecsys® NT-proBNP (cf. Figuras 2 e 3) A correlação das combinações MAB/PAB, MAB 17.3.1 (13-16)/PAB (39-50) e MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) para o kit de teste Elecsys® (PAB (1-21)/PAB (30-50)) foi examinada em um imunoensaio de ele-troquimioluminescência em um Elecsys® 2010 (Roche Diagnostics). Para isso, o PAB (39-50) foi usado como reagente de captura e os fragmentos biotinilado e rutenilado F(ab')2 dos MABs foram usados como reagente de detecção. 20 μ1_ de amostra ou material padrão foram, em cada caso, incubados com 75 μί dos dois reagentes de anticorpos por 9 minutos a 37 °C. Depois disso, 35 μΙ_ de partículas magnéticas de poliestireno revestidas com estreptavidina foram adicionados e incubou-se por mais 9 minutos à temperatura ambiente. O sinal de eletroluminescência de uma alíquota da solução de incubação foi medido rotineiramente no Elecsys® 2010 e convertido em um sinal de concentração por meio de uma curva-padrão.
Amostras clínicas de pacientes com insuficiência cardíaca foram agora medidas com as duas variantes do teste de MAB/PAB e com o kit Ele-csys®. Os resultados estão indicados nas Figuras 2 e 3. Uma correlação muito boa com o kit Elecsys® (r = 0,978 e r = 0,957) foi obtida com ambas variantes de MAB/PAB.
3) Curva de função de uma tira de teste de NT-proBNP com duas combinações diferentes de MAB/PAB
Uma tira de teste de NT-proBNP foi preparada de acordo com o Exemplo 1. A seguinte formulação de impregnação para os velos dos rea-gentes foi usada: "velo de biotina": Hepes 100 mM pH 7,4, 0,1% de Tween®, 20 pg/mL de PAB (39-50) biotinilado "velo de ouro": Hepes 100 mM pH 7,4, conjugado de ouro e OD 4 MAB 18.4.34 (27-31) ou MAB 17.3.1 (13-16) Amostras de sangue heparinizado de doadores saudáveis foram puncionadas com soros contendo NT-proBNP de pacientes com insuficiência cardíaca, e fracionadas. 150 pL das amostras de sangue puncionado foram pipetados sobrè tiras do teste e medidos em um CARDIAC Reader® (Roche Diagnostics). O tempo de reação depois da detecção da amostra foi de 12 minutos. Para determinar a concentração de NT-proBNP das amostras, o plasma foi centrifugado a partir de uma alíquota e medido com um kit Elecsys® NT-proBNP (Roche Diagnostics). As curvas de função obtidas desta maneira das duas variantes de tiras de teste, MAB 17,3.1 (13-16)/PAB (39-50) e MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50), estão ilustradas na Figura 4. A variante MAB 18.4.34 (27-31 )/PAB (39-50) tem uma curva-padrão consideravelmente mais íngreme e é assim um teste mais sensível.
4) Correlação de uma tira de teste de NT-proBNP com a combinação AB: Au-MAB 18.4.34 (27-31 )/Bi-PAB (39-50) com o kit de teste Elecsys® NT-proBNP
Soros contendo NT-proBNP de pacientes com insuficiência cardíaca foram adicionados amostras de sangue heparinizado de doadores saudáveis e fracionados. 150 μ!_ destas amostras de sangue "puncionadas" foram pipetados sobre as fitas do teste e medidos em um CARDIAC Rea-der® (Roche Diagnostics) de acordo com o método-padrão. O plasma foi centrifugado a partir da mesma amostra e medido com o kit Elecsys® NT-proBNP no sistema analítico Elecsys® 1010 (Roche Diagnostics). Sessenta amostras foram preparadas desta maneira e medidas com ambos sistemas. A Figura 5 ilustra os valores medidos para ambos sistemas. A correlação é muito boa a r = 0,95.
REIVINDICAÇÕES

Claims (5)

1. Elemento de teste na forma de uma tira de teste imunocroma-tográfico usando o princípio de sanduíche para determinar o peptídeo natriu-rético procerebral de terminal N (NT-proBNP), caracterizado pelo fato de que compreende um material de suporte (5) uma zona de aplicação da amostra (1) para receber uma amostra líquida; pelo menos dois anticorpos contra NT-proBNP em que um deste pelo menos dois anticorpos é um anticorpo monoclonal MAB 18.4.34 direcionado a pelo menos contra partes do epítopo de NT-proBNP compreendendo os aminoácidos 27 a 31, e em que um destes pelo menos dois anticorpos é um anticorpo policlonal direcionado a pelo menos contra partes do epítopo de NT-proBNP compreendendo os aminoácidos 38 a 50, e uma zona de detecção (3) em comunicação de fluido com a zona de aplicação da amostra (1) para ligar um complexo compreendendo NT-proBNP, o anticorpo monoclonal e o anticorpo policlonal.
2. Elemento de teste de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um dos anticorpos está presente como um conjugado anticorpo-ouro.
3. Elemento de teste de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um dos anticorpos está presente como um anticorpo látice colorido.
4. Elemento de teste de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que um dos anticorpos está presente como um anticorpo biotinilado.
5. Método para detectar o peptídeo natriurético procerebral de terminal N (NT-proBNP), caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer o dispositivo de teste imunológico como definido na reivindicação 1; adicionar uma amostra biológica suspeita de conter NT-proBNP ao dispositivo de teste; e determinar a presença ou quantidade de NT-proBNP na amostra que se liga tanto ao anticorpo monoclonal quanto ao anticorpo policlonal.
BRPI0405215A 2003-11-28 2004-11-25 elemento de teste na forma de uma tira de teste imunocromatográfico e método para detectar o peptídeo natriurético procerebral de terminal n BRPI0405215B8 (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10355731A DE10355731A1 (de) 2003-11-28 2003-11-28 Analytischer Sandwichtest zur Bestimmung von NT-proBNP

Publications (3)

Publication Number Publication Date
BRPI0405215A BRPI0405215A (pt) 2005-07-19
BRPI0405215B1 true BRPI0405215B1 (pt) 2016-08-02
BRPI0405215B8 BRPI0405215B8 (pt) 2021-07-27

Family

ID=34442338

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0405215A BRPI0405215B8 (pt) 2003-11-28 2004-11-25 elemento de teste na forma de uma tira de teste imunocromatográfico e método para detectar o peptídeo natriurético procerebral de terminal n

Country Status (13)

Country Link
US (2) US7507550B2 (pt)
EP (1) EP1536232B1 (pt)
JP (1) JP4236629B2 (pt)
KR (1) KR100620297B1 (pt)
CN (1) CN1316248C (pt)
AT (1) ATE487946T1 (pt)
AU (1) AU2004231236B2 (pt)
BR (1) BRPI0405215B8 (pt)
CA (1) CA2488483C (pt)
DE (2) DE10355731A1 (pt)
ES (1) ES2355556T3 (pt)
MX (1) MXPA04011672A (pt)
SG (1) SG112059A1 (pt)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2843396B1 (fr) * 2002-08-07 2005-04-15 Bio Rad Pasteur Anticorps specifiques pour le diagnostic de l'insuffisance cardiaque
DE10355731A1 (de) * 2003-11-28 2005-06-30 Roche Diagnostics Gmbh Analytischer Sandwichtest zur Bestimmung von NT-proBNP
ATE425458T1 (de) 2006-01-14 2009-03-15 Hoffmann La Roche Immunologisches testelement mit verbesserter kontrollzone
ES2430290T3 (es) * 2007-03-06 2013-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Utilización de péptidos de tipo PNC para predecir la necesidad de diálisis
CN101896816B (zh) * 2007-06-22 2014-08-20 B.R.A.H.M.S有限公司 用于检测分析物的方法
CN101230101B (zh) * 2008-01-25 2012-03-28 中国人民解放军第三军医大学 一种用作NT-proBNP免疫诊断试剂标准品的重组蛋白及制备方法与应用
US9482677B2 (en) 2008-02-27 2016-11-01 Scios Inc. Method, composition and device for sampling natriuretic peptides in a biological fluid
US20090286329A1 (en) * 2008-05-19 2009-11-19 Abbott Laboratoires Isolated human autoantibodies to natriuretic peptides and methods and kits for detecting human autoantibodies to natriuretic peptides
RU2423072C1 (ru) * 2009-11-19 2011-07-10 Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" Способ прогнозирования исхода постгипоксических нарушений сердечно-сосудистой системы у новорожденных
WO2012028697A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Eth Zürich, Institute Of Molecular Biology And Biophysics Affinity purification system based on donor strand complementation
EP2594940A1 (en) * 2011-11-16 2013-05-22 Koninklijke Philips Electronics N.V. Particle repulsion to enhance surface contact in magnetic particle immunoassays
CN102692512A (zh) * 2012-06-26 2012-09-26 南京基蛋生物科技有限公司 NT-proBNP双抗夹心快速检测试剂盒
CN102879589A (zh) * 2012-09-26 2013-01-16 中国人民解放军总医院 一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法
AU2014241115A1 (en) * 2013-03-14 2015-10-08 Instrumentation Laboratory Company Plasma separation from blood using a filtration device and methods thereof
CN105092832B (zh) * 2015-08-28 2016-11-30 宁波瑞源生物科技有限公司 一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法
US10436773B2 (en) 2016-01-18 2019-10-08 Jana Care, Inc. Mobile device based multi-analyte testing analyzer for use in medical diagnostic monitoring and screening
CN105699458A (zh) * 2016-02-03 2016-06-22 洪国粦 用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器及其制备方法
CN106771168A (zh) * 2016-12-30 2017-05-31 武汉纽康度生物科技股份有限公司 荧光免疫层析检测卡及其制备方法和应用
CN107478848B (zh) * 2017-08-23 2019-04-16 广州瑞博奥生物科技有限公司 定量检测人NT-proBNP的试剂盒及其制备方法
JP7527960B2 (ja) * 2017-12-15 2024-08-05 ジャナ ケア インコーポレイテッド 病状をモニターするためにペプチド濃度を測定する生体医療用測定装置、システム、及び方法
US11446009B2 (en) 2018-12-11 2022-09-20 Eko.Ai Pte. Ltd. Clinical workflow to diagnose heart disease based on cardiac biomarker measurements and AI recognition of 2D and doppler modality echocardiogram images
US11931207B2 (en) 2018-12-11 2024-03-19 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI) recognition of echocardiogram images to enhance a mobile ultrasound device
US12400762B2 (en) 2018-12-11 2025-08-26 Eko.Ai Pte. Ltd. Automatic clinical workflow that recognizes and analyzes 2D and doppler modality echocardiogram images for automated cardiac measurements and diagnosis of cardiac amyloidosis and hypertrophic cardiomyopathy
US12322100B2 (en) 2018-12-11 2025-06-03 Eko.Ai Pte. Ltd. Automatic clinical workflow that recognizes and analyzes 2D and doppler modality echocardiogram images for automated cardiac measurements and grading of aortic stenosis severity
US12001939B2 (en) 2018-12-11 2024-06-04 Eko.Ai Pte. Ltd. Artificial intelligence (AI)-based guidance for an ultrasound device to improve capture of echo image views
CN112707964B (zh) * 2019-10-25 2022-11-08 东莞市朋志生物科技有限公司 一种抗n末端脑钠肽前体的重组抗体
US11536732B2 (en) 2020-03-13 2022-12-27 Jana Care, Inc. Devices, systems, and methods for measuring biomarkers in biological fluids
JP7352503B2 (ja) * 2020-03-26 2023-09-28 三洋化成工業株式会社 磁性粒子、免疫測定用試薬、免疫測定用キット及び免疫測定方法
CN111781385B (zh) * 2020-08-19 2023-07-18 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法
CN112964885B (zh) * 2021-02-20 2022-11-11 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN112986586A (zh) * 2021-02-20 2021-06-18 广东菲鹏生物有限公司 一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒
CN113580583B (zh) * 2021-08-04 2023-06-02 江苏毕辉建设工程有限公司 一种拼接整齐的房建水电暖施工用管道拼接装置
EP4462122A1 (en) 2023-05-08 2024-11-13 Roche Diagnostics GmbH Method of manufacturing a plurality of analytical test elements

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5073484A (en) * 1982-03-09 1991-12-17 Bio-Metric Systems, Inc. Quantitative analysis apparatus and method
DE3445816C1 (de) * 1984-12-15 1986-06-12 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel
CA1303983C (en) * 1987-03-27 1992-06-23 Robert W. Rosenstein Solid phase assay
ES2150428T3 (es) 1987-04-27 2000-12-01 Unilever Nv Ensayos de union especifica.
US5252496A (en) * 1989-12-18 1993-10-12 Princeton Biomeditech Corporation Carbon black immunochemical label
US5141850A (en) * 1990-02-07 1992-08-25 Hygeia Sciences, Inc. Porous strip form assay device method
US5458852A (en) 1992-05-21 1995-10-17 Biosite Diagnostics, Inc. Diagnostic devices for the controlled movement of reagents without membranes
GB9211686D0 (en) 1992-06-03 1992-07-15 Medisinsk Innovation A S Chemical compounds
US5485852A (en) * 1994-12-12 1996-01-23 Johnson; Lanny L. Pain tolerance testing device
WO1997006439A1 (en) 1995-08-09 1997-02-20 Quidel Corporation Test strip and method for one step lateral flow assay
US6833275B1 (en) * 1997-07-22 2004-12-21 Roche Diagnostics Gmbh Gold conjugates containing detergent
US6117644A (en) * 1998-06-04 2000-09-12 Ottawa Heart Institute Research Corporation Predicting and detecting cardiac allograft rejection
GB9827348D0 (en) * 1998-12-12 1999-02-03 Univ Leicester Natriuretic peptide
AU758562B2 (en) 1999-01-29 2003-03-27 Roche Diagnostics Gmbh Method of identifying N-terminal proBNP
US6136963A (en) * 1999-07-27 2000-10-24 Heska Corporation Parasitic helminth DiAg2 nucleic acid molecules, and uses thereof
JP2002272458A (ja) * 2000-09-29 2002-09-24 Shionogi & Co Ltd イヌｂｎｐに対する特異抗体を用いたサンドイッチ測定方法
US7632647B2 (en) 2001-04-13 2009-12-15 Biosite Incorporated Use of B-type natriuretic peptide as a prognostic indicator in acute coronary syndromes
US6461828B1 (en) * 2001-09-04 2002-10-08 Syn X Pharma Conjunctive analysis of biological marker expression for diagnosing organ failure
AUPS169202A0 (en) 2002-04-11 2002-05-16 Goetze, Jens Peter Neuropeptide assay
JP4610025B2 (ja) 2002-11-18 2011-01-12 シン．クス ファーマ、インコーポレイテッド ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ検出用ポリクローナル・モノクローナル・エライサ検定法
US20040096919A1 (en) * 2002-11-18 2004-05-20 Michelle Davey Polyclonal-monoclonal ELISA assay for detecting N-terminus proBNP
US7109023B2 (en) * 2002-11-18 2006-09-19 Princeton Biomeditech Corporation Immunossay device for diagnosing congestive heart failure and predicting mortality in congestive heart failure patients
CA2522747C (en) 2003-05-12 2012-08-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Method of detecting native probnp with a monoclonal antibody binding to the amino acids 38-43
DE10355731A1 (de) * 2003-11-28 2005-06-30 Roche Diagnostics Gmbh Analytischer Sandwichtest zur Bestimmung von NT-proBNP

Also Published As

Publication number Publication date
US7507550B2 (en) 2009-03-24
BRPI0405215B8 (pt) 2021-07-27
AU2004231236B2 (en) 2006-10-19
CA2488483C (en) 2011-09-06
CN1316248C (zh) 2007-05-16
EP1536232A3 (de) 2006-08-09
ES2355556T3 (es) 2011-03-28
DE502004011867D1 (de) 2010-12-23
US9140709B2 (en) 2015-09-22
MXPA04011672A (es) 2005-06-01
US20090123947A1 (en) 2009-05-14
AU2004231236A1 (en) 2005-06-16
KR100620297B1 (ko) 2006-09-12
JP4236629B2 (ja) 2009-03-11
DE10355731A1 (de) 2005-06-30
EP1536232B1 (de) 2010-11-10
BRPI0405215A (pt) 2005-07-19
CA2488483A1 (en) 2005-05-28
ATE487946T1 (de) 2010-11-15
CN1641352A (zh) 2005-07-20
EP1536232A2 (de) 2005-06-01
SG112059A1 (en) 2005-06-29
US20050118662A1 (en) 2005-06-02
JP2005181304A (ja) 2005-07-07
HK1078647A1 (en) 2006-03-17
KR20050052354A (ko) 2005-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2004231236B2 (en) Analytical sandwich test for determining NT-proBNP
US6998246B2 (en) Method for immobilizing conjugates in diagnostic tests
US6121008A (en) Chromatographic immunoassay device and method utilizing particle valency for quantification
JP3585933B2 (ja) 導伝バリアを用いる対置成分アッセイ装置
FI92110B (fi) Useiden analyyttien vallitsevien konsentraatioiden määrittäminen
US5244815A (en) Fingerprint test pad and method for fingerprinting using particle based immunoassay
US7344893B2 (en) Immuno-gold lateral flow assay
US5474902A (en) Semi-permeable capillary assay device
US7374950B2 (en) Immunoassay device for diagnosing congestive heart failure and predicting mortality in congestive heart failure patients
RU95118163A (ru) Устройство для хроматографического анализа
MX2007011116A (es) Dispositivo de inmunoanalisis de trayecto dual.
WO1994007136A1 (en) Immunodiagnostic test system and uses thereof
US7067264B2 (en) Test device for detecting human blood and method of use
US20040096988A1 (en) Immunossay device for diagnosing congestive heart failure and predicting mortality in congestive heart failure patients
HK1078647B (en) Analytical sandwich test for determining nt-probnp

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]
B07G Grant request does not fulfill article 229-c lpi (prior consent of anvisa) [chapter 7.7 patent gazette]

Free format text: NOTIFICACAO DE DEVOLUCAO DO PEDIDO POR NAO SE ENQUADRAR NO ART. 229-C DA LPI.

B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 10 (DEZ) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 02/08/2016, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS.

B21F Lapse acc. art. 78, item iv - on non-payment of the annual fees in time

Free format text: REFERENTE A 14A ANUIDADE.

B21H Decision of lapse of a patent or of a certificate of addition of invention cancelled [chapter 21.8 patent gazette]

Free format text: ANULADA A PUBLICACAO CODIGO 21.6 NA RPI NO 2494 DE 23/10/2018 POR TER SIDO INDEVIDA.

B16C Correction of notification of the grant [chapter 16.3 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 25/11/2004, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO