BRPI0408236B1 - método para radiofluoração, composto, composição radiofarmacêutica, e, uso de um composto - Google Patents

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Hege Karlsen
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Magne Solbakken
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Abstract

"método para radiofluoração, composto, composição radiofarmacêutica, uso de um composto, e, métodos para gerar uma imagem de um corpo humano ou animal e para monitorar o efeito de tratamento de um corpo humano ou animal com um medicamento para combater uma condição associada com câncer" invenção refere-se a conjugados de fórmula (v) ou (vi): em que x é -co-nh-, -nh-, -o-, -nhconh-, ou -nhcsnh-; seu uso como compostos radiofarmacêuticos, processos para sua preparação e intermediários sintéticos usados em tais processos.

Description

‘ MÉTODO PARA RADIOFLUORAÇÃO, COMPOSTO, COMPOSIÇÃO RADIOFARMACÊUTICA, E, USO DE UM COMPOSTO" CAMFO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a agentes de diagnóstico e radiodiagnóstico,incluindo vetores biologicamente ativos, marcados com nuclídeos emissores de pósitron. Refere-se ainda a métodos e reagentes para fluoração-rlsFl de vetores, em que uni vetor é definido como uma molécula com uma afinidade para um alvo biológico específico e c, preferivelmente, um peptídeo. Os resultantes conjugados marcados-]*F sao úteis como compostos radiofarmaceuticos, espeeificamente para uso em Tomografia Emissora de Pósitron (PET).
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO A aplicação de peptídeos bioativos radiomarcados, para formação de imagem diagnostica, está ganhando importância na medicina nuclear. As moléculas biologicamente ativas, que seletivamente interagem com tipos de célula específicos, são úteis para o suprimento dc radioatividade para alvejar tecidos. Por exemplo, os peptídeos radiomarcados têm potencial significativo para o suprimento de radionuclídeos em tumores, irtfartos e tecidos infectados, para formação de imagem diagnostica e radioterapia, ISF, com sua meia vida de aproximadamente 1 10 minutos, é o nuclídeo emissor de pósitron de escolha para muitos estudos de formação de imagem. Portanto, os peptídeos bioativos marcados-lsF têm grande potencial clínico, por causa de sua utilidade em PET para quantitativamente detectar e caracterizar uma larga variedade de doenças.
Uma dificuldade com os peptídeos marcados-l8F é que os existentes agentes de marcação I8F são de preparo demorado. Marcação eficiente de peptídeos e proteínas com 18F é somente conseguida utilizando-se grupos prostéticos adequados. Diversos de tais grupos prostéticos foram 1 S propostos na literatura, incluindo N-succinimidil-4-[ Fjfluorobenzoato, m-maleimido-N-(p-[18F]fluorobenzil)-benzamida, N-(p-[' 8F]fluorofenil) maleimida e 4-[18F]fluorofenacilbrometo. Quase todas as metodologias atualmente usadas para a marcação de peptídeos e proteínas com 18F utilizam ésteres ativos do sínton marcado com flúor. Como peptídeos e proteínas podem conter uma multidão de grupos funcionais, capazes de reação com ésteres ativos, estes métodos atuais não são específicos de sítio. Por exemplo, um peptídeo contendo três resíduos de lisina tem três funções amina, todas igualmente reativas em relação ao sínton marcado. Portanto, existe ainda necessidade de grupos prostéticos marcados- F e de metodologias que permitam rápida introdução quimiosseletiva de 18F, particularmente dentro de peptídeos, sob condições suaves para fornecer produtos marcados-18F, em altas produção e pureza radioquímica. Adicionalmente, há necessidade de tais metodologias, que são receptivas para automação, para facilitar a preparação de compostos radiofarmacêuticos no cenário clínico.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção provê um método para radiofluoração, compreendendo a reação de um composto de Fórmula (I) com um composto de Fórmula (II): ou um composto de Fórmula (III) com um composto de Fórmula (IV) 18F-(Ligador)-R4 (IV) em que RI é uma porção aldeído, uma porção cetona, um aldeído protegido tal como um acetal, uma cetona protegida, tal como um cetal, ou uma funcionalidade, tal como diol ou resíduo serina N-terminal, que pode ser rápida e efícientemente oxidado em um aldeído ou cetona, utilizando-se um agente oxidante; R2 é um grupo funcional, que, sob condições suaves, tais como tampão aquoso, reage especificamente em sítio, com RI produzindo um conjugado estável. R2 pode ser derivados de amônia, tais como amina primária, amina secundária, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminóxi, fenilidrazina, semicarbazida ou tiossemicarbazida e é preferivelmente um grupo hidrazina, hidrazida ou aminóxi; R3 é um grupo funcional, que reage especificamente em sítio com R4. R3 pode ser derivados de amônia, tais como amina primária, amina secundária, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminóxi, fenilidrazina, semicarbazida ou tiossemicarbazida e é preferivelmente um grupo hidrazina, hidrazida ou aminóxi; R4 é uma porção aldeído, uma porção cetona, um aldeído protegido, tal como um acetal, uma cetona protegida, tal como um cetal, ou uma funcionalidade, tal como diol ou resíduo serina N-terminal, que pode ser rápida e efícientemente oxidado em um aldeído ou cetona, utilizando-se um agente oxidante; para fornecer um conjugado de Fórmula (V) ou (VI) respectivamente: (V) em que X é -CO-NH-, -NH-, -O-, -NHCONH-, ou -NHCSNH- e é preferivelmente CO-NH-, -NH- ou -Ο-; Y é substituintes H, alquila ou arila; e o grupo Ligador dos compostos de fórmulas (II), (IV), (V) e (V) é selecionado de em que: n é um inteiro de 0 a 20; m é um inteiro de 1 a 10; p é um inteiro de 0 ou 1; ZéOou S. O grupo Ligador dos compostos de fórmulas (II), (IV), (V) e (VI) são escolhidos para prover boa farmacocinética in vivo, tal como características de excreção favoráveis no conjugado resultante de Fórmula (V) ou (VI). O uso de grupos ligadores com diferentes lipofilicidades e/ou carga pode significativamente mudar a farmacocinética in vivo do peptídeo, para adequar às necessidades de diagnóstico. Por exemplo, onde for desejável que um conjugado de Fórmula (V) ou (VI) seja retirado do corpo por excreção renal, é usado um ligador hidrofílico e, onde for desejável que a depuração seja por excreção hepatobiliar, um ligador hidrofóbico é usado. Ligadores incluindo uma porção de polietileno glicol foram constatados retardar a depuração do sangue, o que é desejável em algumas circunstâncias.
Adequadamente, o aldeído RI é gerado por oxidação in sito de um vetor funcionalizado precursor, contendo um grupo 1,2-diol ou 1,2 aminoálcool. Por exemplo, o último pode ser inserido dentro da seqüência de peptídeo diretamente durante a síntese, usando-se o amino ácido Fmoc-Dpr(Boc-Ser)-OH descrito por Wahl e outros em Tetrahedron Letts. 37, 6861 (1996). Similarmente, um aldeído R4 em um composto de Fórmula (IV) pode ser gerado por oxidação de um precursor.
Agentes oxidantes adequados, que podem ser usados para gerar a porção RI ou R4 nos compostos de fórmulas (I) e (IV), respectivamente, incluem periodato, ácido periódico, ácido paraperiódico, metaperiodato de sódio e metaperiodato de potássio.
Cada um de RI e R4 dos compostos de fórmulas (I) e (IV) e aspectos relacionados da invenção é preferivelmente selecionado de -CHO, >C=0, -CH(-0-Ci.4alquil-0-), tal como -CH(-0CH2CH20-) e -CH(OCi. 4alquil)2, tal como -CH(OCH3)2 e um aspecto preferido RI e R4 são -CHO.
Cada um de R2 e R3 dos compostos de fórmulas (II) e (III) e aspectos relacionados da invenção é preferivelmente selecionado de -NHNH2, -C(0)NHNH2 e -ONH2 e -ONH2 e preferivelmente -ONH2. Y dos compostos de fórmulas (II) e (III) e aspectos relacionados da invenção é preferivelmente H, Cj-Cô alquila (tal como metila) ou fenila. A reação pode ser realizada em um solvente adequado, por exemplo, em um tampão aquoso na faixa de pH 2 a 11, adequadamente 3 a 11, mais adequadamente 3 a 6 e em uma temperatura não-extrema de 5 a 70°C, preferivelmente em temperatura ambiente. A presente invenção provê uma abordagem mais quimiosseletiva para radiomarcação, em que o sítio exato de introdução da marcação é pré-selecionado durante a síntese do precursor de peptídeo ou vetor. A reação de ligação, ocorrendo em um predeterminado sítio do vetor, fornece somente um produto possível. Esta metodologia é, portanto, quimiosseletiva e sua aplicação é considerada genérica para uma larga faixa de peptídeos, biomoléculas e medicamentos de baixo peso molecular.
Em um outro aspecto, a presente invenção provê um método para radiofluoração, compreendendo a reação de um composto de Fórmula (Ia) com um composto de Fórmula (Ila): ou um composto de Fórmula (Illa) com um composto de Fórmula (IVa) em que RI e R4 são como definidos acima, para os compostos de Fórmula (I) e (IV), respectivamente; o grupo Ligador dos compostos de fórmulas (Ila) e (IVa) é um grupo hidrocarbila Ci_6o, adequadamente um grupo hidrocarbila C1.30, opcionalmente incluindo 1 a 30 heteroátomos, adequadamente 1 a 10 heteroátomos, tais como oxigênio ou nitrogênio. Grupos Ligadores adequados incluem cadeias de alquila, alquenila, alquinila, anéis aromáticos, poliaromáticos e heteroaromáticos e polímeros compreendendo subunidades etilenoglicol, amino ácido ou carboidrato; para fornecer um conjugado de Fórmula (Va) ou (Via) respectivamente: em que Y é substituintes H, alquila ou arila; e o grupo Ligador é como definido para o composto de Fórmula (lia) ou (IVa). A expressão “grupo hidrocarbila” significa um substituinte orgânico, consistindo de carbono e hidrogênio, tais grupos podendo incluir porções saturadas, insaturadas ou aromáticas.
Em um aspecto preferido, a presente invenção provê um método para radiofluoração, compreendendo a reação de um composto de Fórmula (VII): com um composto de Fórmula (VIII), (IX), (X) ou (XI): 18F-(CH2CH20)„-(CH2)m-CH0 (VHI) (IX) (X) (XO em que: n é um inteiro de 0 a 20; m é um inteiro de 1 a 10; X é -CO-NH-, -NH- ou -O- e é preferivelmente -ΟΥ é substituintes H, alquila ou arila para fornecer compostos de Fórmula (XII-XV) respectivamente: (Xli) (XIII) (XIV) (XV) em que X é como definido para o composto de Fórmula (VII), m e n são definidos como para os compostos de Fórmula (VIII a XI).
Esta reação pode ser realizada em um solvente adequado, por exemplo, em um tampão aquoso na faixa de pH 2 a 11, adequadamente 3 a 11, mais adequadamente 3 a 6, e em uma temperatura não-extrema de 5 a 70°C, preferivelmente em temperatura ambiente. É também considerado útil, quando se utiliza uma porção amina no composto vetor de Fórmula (I) ou (III) ou no sínton de Fórmula (II) ou (IV), como grupo funcional, e também nos aspectos mais especificamente descritos da invenção, incluir uma etapa redutora, a fim de estabilizar a base Schiff resultante. Agentes redutores adequados para esta etapa são bem conhecidos daqueles hábeis na técnica e incluem boroidreto de sódio e cianoboroidreto de sódio.
Em um outro aspecto preferido, a presente invenção provê um método para radiofluoração, compreendendo a reação de um composto de Fórmula (XVI): em que Y é substituinte H, alquila ou arila, preferivelmente com compostos de Fórmula (XVII), (XVIII), (XIX) ou (XX): 1 !F-(CH2CH2-0)„-(CH2)m-W-NH2 (XVII) em que m e n são como definidos para os compostos anteriores e W = -CONH-, -NH- ou -O-, para fornecer um composto de Fórmula (XXI), (XXII), (XXIII) ou (XXIV), respectivamente: em que W = -CONH-, -NH- ou -O-, m, n são como definidos para os compostos de Fórmula (XIII a XI) e Y é uma porção H, alquila ou arila.
Esta reação pode ser realizada em um solvente adequado, por exemplo, em um tampão aquoso na faixa de pH 2 a 11, adequadamente 3 a 11, mais adequadamente 3 a 6 e em uma temperatura não-extrema de 5 a 70°C, preferivelmente em temperatura ambiente.
Nas fórmulas (I) e (III) e em outros aspectos da invenção, a menos que especificamente citado de outro modo, vetores adequados para marcação são peptídeos, que podem incluir análogos da somatostatina, tais como octreotídeo, bombesina, peptídeo intestinal vasoativo, análogos de peptídeo quimiotático, hormônio estimulador do α-melanócito, neurotensina, peptídeo Arg-Gly-Asp e seus análogos, peptídeo conector da pró-insulina humana, endotelina, angiotensina e formil-norleucil-leucil-fenilalanil-norleucil-tirosil-lisina. Peptídeos preferidos para marcação são peptídeo Arg-Gly-Asp e seus análogos, tais como aqueles descritos no WO 01/77415 e WO 03/006491. Peptídeos preferidos compreendem o fragmento Em um aspecto particular, o peptídeo de Fórmula (I) ou (III) é de fórmula (A): em que a é um inteiro de 1 a 10, preferivelmente a é 1.
Como será apreciado pela pessoa hábil, os métodos da invenção podem também ser usados para radiofluoração ou outras biomoléculas, tais como proteínas, hormônios, oligonucleotídeos e fragmentos de anticorpo, bem como moléculas pequenas semelhantes a medicamento, para prover uma variedade de traçadores PET.
Nas fórmulas (lia) e (IVa) e em outros aspectos da invenção, a menos que especificamente dito de outro modo, o Ligador é um grupo hidrocarbila Ci.60, adequadamente um grupo hidrocarbila C1.30, opcionalmente incluindo 1 a 30 heteroátomos, adequadamente 1 a 10 heteroátomos, tais como oxigênio ou nitrogênio, e é escolhido para prover boa farmacocinética in vivo. Grupos Ligadores adequados incluem cadeias de alquila, alquenila, alquinila, anéis aromáticos, poliaromáticos e heteroaromáticos, e polímeros compreendendo subunidades etilenoglicol, amino ácido ou carboidrato. Grupos Ligadores preferidos nas fórmulas (lia) e (IVa) e em outros aspectos da invenção, incluem aqueles selecionados de: em que: n é um inteiro de 0 a 20; m é um inteiro de 1 a 10; p é um inteiro de 0 ou 1; Z é O ou S.
Grupos ligadores particularmente preferidos de fórmulas (lia) e (IVa) e de outros aspectos da invenção, podem ser selecionados de: Os compostos de Fórmula (I) e (III) podem ser preparados por métodos padrão de síntese de peptídeo, por exemplo, síntese de peptídeo de fase sólida, por exemplo, como descrito em Atherton, E. e Sheppard, R.C.; “Solid Phase Sythesis”; IRL Press: Oxford, 1989. A incorporação do grupo RI e R3 em um composto de Fórmula (I) ou (III) pode ser conseguida por reação do término-N ou C do peptídeo ou com algum outro grupo funcional contido dentro da seqüência de peptídeo, cuja modificação não afeta as características de ligação do vetor. Em um exemplo preferido, o grupo aminóxi, NH2-0-, pode ser diretamente introduzido dentro da seqüência de peptídeo utilizando-se os ácidos amino Fmoc-Mas(Boc)-OH ou Fmoc-Dpr(Boc-Aoa)-OH, supridos por Novabiochem. Os grupos funcionais RI e R3 são preferivelmente introduzidos por formação de uma ligação amida estável, formada por reação de uma função amina peptídeo com um ácido ativado e introduzidos durante ou em seguida a síntese do peptídeo. Quando o precursor é um ácido, então RI e R3 podem ser introduzidos utilizando-se agentes de ativação in situ, tais como hexafluorofosfato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametilurônio (HBTU) ou N-[(dimetilamino)-lH-l,2,3-triazolo[4,5-b]piridin-l-ilmetileno]-N-metilmetanamínio hexafluorofosfato N-óxido (HATU).
Em outro aspecto, a presente invenção provê novos grupos prostéticos-lsF, úteis para marcar peptídeos e proteínas, por exemplo, pelos métodos descritos acima.
Por conseguinte, é provido um composto de Fórmula (II) ou Fórmula (IV) ou um composto de Fórmula (lia), (IVa), (VIII), (X), (XI), (XVII), (XVIII), (XIX) ou (XX); todos como definidos acima, com as condições: (i) nos compostos de Fórmula (II), se o ligador for fenila, então R2 seja aminóxi (adequadamente -ONH2); (ii) nos compostos de Fórmula (IV), o ligador não seja fenila; (iii) nos compostos de fórmula (IVa), o ligador não seja fenila ou fenila substituída por halo, hidróxi ou benzilóxi; (iv) nos compostos de Fórmula (X), n não seja 0.
Compostos preferidos de Fórmula (IV), para uso nos processos descritos aqui e que são reivindicados por si, incluem: 18F-(CH2),^HO 18f-ch2oc-cho Em outro aspecto, a presente invenção provê compostos de Fórmula (I) e (III), bem como compostos de fórmula (Ia), (IHa), (VII), (XVI); todos como definidos acima.
Compostos preferidos de Fórmula (I), (III), (Ia), (Illa), (VII) e (XVI) são aqueles em que o vetor é peptídeo Arg-Gly-Asp ou um seu análogo, como descrito acima e especialmente onde o vetor é de Fórmula (A): (A) n em que X é -NH2 ou em que a é um inteiro de 1 a 10, preferivelmente a é 1.
Em um outro aspecto, a presente invenção provê conjugados radiomarcados de fórmulas (V)e (VI), bem como compostos de fórmulas (Va), (Via), (XII), (XIII), (XIV), (XV), (XXI), (XXII), (XXIII), (XXIV); todos como definidos acima. Compostos preferidos de fórmulas (V), (VI), Va), (Via), (XII), (XIII), (XIV), (XV), (XXI), (XXII), (XXIII) e (XXIV) são aqueles em que o vetor é peptídeo Arg-Gly-Asp ou um seu análogo, como descrito acima e especialmente onde o vetor é de Fórmula (A): em que a é um inteiro de 1 a 10,preferivelmente a é 1.
Os compostos de Fórmula (II) podem ser preparados dos correspondentes precursores de Fórmula (XXV): (XXV) em que L é um grupo de partida, preferivelmente um p-toluenossulfonato, trifluorometanossulfonato ou metanossulfonato ou um haleto e o Ligador é como definido anteriormente e onde X é preferivelmente -CO-NH-, -NH- ou -O-, R5 e R6 são H ou um grupo de proteção adequado, tal o t-butiloxicarbonila, por reação com [ F]-fluoreto aquoso, produzido por ciclotron, adequadamente pré-ativado por evaporação de uma base (por exemplo, de tetrabutilamônio ou K2C03]Kryptofix-222), em um solvente adequado, tal como acetonitrila, Ν,Ν-dimetilformamida ou dimetil sulfóxido, tipicamente em temperatura ambiente ou elevada, por exemplo até 150°C,adequadamente 60 a 120°C ou por aquecimento por microondas, seguido por remoção de qualquer grupo protetor-N, empregando-se métodos padrão,tais como tratamento acido lítico.
Os compostos de Fórmula (IV) podem ser preparados dos correspondentes precursores de Fórmula (XXVI): ou um seu derivado protegido, em que L é um grupo de partida, preferivelmente um p-toluenossulfonato, trifluorometanossulfonato ou metanossulfonato ou um haleto e o Ligador é como definido anteriormente e Y é preferivelmente os substituintes H, alquila ou arila, por reação com [18F]-fluoreto aquoso, produzido por ciclotron, adequadamente pré-ativado por evaporação de uma base (por exemplo,de tetrabutilamônio ou K2C03/Kryptofix-222), em um solvente adequado, tal como acetonitrila,N,N-dimetilformamida ou dimetil sulfóxido, tipicamente em temperatura ambiente ou elevada, por exemplo, até 120°C. A função aldeído ou cetona dos compostos de Fórmula (XXVI) pode também ser rapidamente gerada de seus precursores protegidos, tais como acetais ou cetais, por simples tratamento ácido em seguida à fluoração. Em um exemplo preferido, os compostos de Fórmula (IV) são preparados dos compostos de Fórmula (XXVII) em que L é um grupo de partida, tal como p-toluenossulfonato, trifluorometanossulfonato, metanossulfonato ou um haleto e o ligador é definido como acima e é unido via uma ligação amida a um derivado protegido. Neste caso, o grupo de proteção-0 R6 é preferivelmente t-butila e R5 é definido como 1 s acima. A ração com [ F]-fluoreto aquoso produzido por ciclotron, adequadamente pré-ativado por evaporação de uma base (por exemplo, de tetrabutilamônio ou K2C03/Kryptofix-222), em um solvente adequado, tal como acetonitrila, Ν,Ν-dimetilformamida ou dimetil sulfóxido, tipicamente em temperatura ambiente ou elevada, por exemplo,até 150°C, adequadamente 60 a 120°C ou por aquecimento por microondas, seguido por remoção da proteção-0 e N e oxidação no aldeído por um agente de oxidação, tal como periodato.
Em um aspecto preferido, os compostos de Fórmula (IV) podem ser preparados em um suporte sólido, tal como contas de polímero, revestimentos ou dispositivos de micro-crosta, por exemplo, em uma resina utilizando uma estratégia BAL, como descrito por Brask e outros em Bioorg. Med. Chem. Lett. 11 (2001) 697-700. Os aldeídos de peptídeo são sintetizados partindo-se com uma aminação redutiva de O-PALaldeído em resina PEG-AMPS com aminoacetaldeído dimetil acetal, seguido por acilação com o componente ligador. Neste aspecto, reagentes em excesso e subprodutos da reação de radiofluoração podem ser separados do produto ligado por polímero por lavagem. Pelos tratamento ácido, os compostos de Fórmula (IV) são obtidos diretamente do suporte sólido, como mostrado abaixo. em que L e o ligador são como descritos acima.
Esta abordagem pode ser particularmente adequada para produção automatizada dos compostos de Fórmula (IV). A presente invenção também provê uma composição radiofarmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz (por exemplo, uma quantidade eficaz para uso em formação de imagem PET) de um composto de fórmula geral (V) ou (VI), ou um composto de Fórmula (Va), (Via), (XII), (XIII), (XIV), (XV), (XXI), (XXII), (XXIII) ou (XXIV); todos como definidos acima; junto com um ou mais adjuvantes, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
Uma forma de realização preferida da invenção refere-se a um composto de fórmula geral (V) ou (VI) ou um composto de Fórmula (Va), (Via), (XII), (XIII), (XIV), (XV), (XXI), (XXII), (XXIII) ou (XXIV); todos como definidos acima, para uso médico e, particularmente, para uso em formação de imagem tumoral (adequadamente por PET); em que o vetor é peptídeo Arg-Gly-Asp ou um seu análogo, tal como aqueles descritos em WO 01/77415 e WO 03/006491, preferivelmente um peptídeo compreendendo o fragmento mais preferivelmente o peptídeo de Fórmula (A): em que X7 é -NH2 ou em que a é um inteiro de 1 a 10, preferivelmente a é 1.
Os conjugados radiomarcados da invenção podem ser administrados em pacientes para formação de imagem PET, em quantidades suficientes para produzir o sinal desejado, dosagens típicas de radionuclídeo de 0,01 a 100 mCi, preferivelmente 0,1 a 50 mCi normalmente serão suficientes por peso corporal de 70 kg.
Os conjugados radiomarcados, de acordo com a presente invenção, podem, portanto, ser formulados por administração, empregando-se veículos ou excipientes fisiologicamente aceitáveis, de uma maneira totalmente dentro da habilidade da técnica. Por exemplo, os compostos, opcionalmente com a adição de excipientes farmaceuticamente aceitáveis, podem ser suspensos ou dissolvidos em um meio aquoso, com a solução ou suspensão resultante então sendo esterilizada. Visto por um outro aspecto, a invenção provê o uso de um conjugado radiomarcado da invenção, para a manufatura de um composto radiofarmacêutico para uso em um método de formação de imagem in vivo, adequadamente PET e, preferivelmente, para formação de imagem de tumor; envolvendo a administração de dito composto radiofarmacêutico a um corpo humano ou animal e geração de uma imagem de pelo menos parte de dito corpo.
Visto por ainda outro aspecto, a invenção provê um método para gerar uma imagem de corpo de humano ou animal, envolvendo a administração de um composto radiofarmacêutico a dito corpo, por exemplo, dentro do sistema vascular, e a geração de uma imagem de pelo menos uma parte de dito corpo, a que dito composto radiofarmacêutico foi distribuído empregando-se PET, em que dito composto radiofarmacêutico compreende um conjugado radiomarcado de acordo com a presente invenção. Visto por mais um aspecto,a invenção provê um método para monitorar o efeito de tratamento de um corpo humano ou animal com um medicamento para combater uma condição associada com câncer, preferivelmente angiogênese, por exemplo, um agente citotóxico, dito método compreendendo administrar a dito corpo um conjugado radiomarcado de acordo com a presente invenção e detectar a captação de dito conjugado pelos receptores celulares, preferivelmente receptores de células endoteliais e, em particular receptores av/33, dita administração e detecção opcionalmente, porém preferivelmente, sendo realizada repetidamente, por exemplo, antes, durante e após tratamento com dito medicamento.
Em ainda outra forma de realização da presente invenção, é provido um kit para a preparação de um traçador radiofluorado, compreendendo um grupo prostético de Fórmula (II) ou (IV) e um composto de Fórmula (I) ou (III).
De acordo com mais um aspecto da invenção, é provido um kit para a preparação de um traçador radiofluorado, compreendendo um grupo prostético de Fórmula (XXV) e um composto de Fórmula (I). De acordo com outro aspecto da invenção, é provido um kit para a preparação de um traçador radiofluorado, compreendendo um grupo prostético de Fórmula (XXVI) ou (XXVII) e um composto de Fórmula (III).
No uso dos kits, o composto de Fórmula (XXV) seria convertido no correspondente composto de Fórmula (II) e o composto de Fórmula (XXVI) ou (XXVII) seria convertido no correspondente composto de Fórmula (IV), respectivamente, empregando-se métodos descritos acima. Preferivelmente, o composto de Fórmula (II) e (IV) pode ser separado de reagentes refugo, passando-se a mistura de reação através de um cartucho de Extração de Fase Sólida (SPE). O cartucho SPE pode compreender uma almofada de grafite, fase estacionária Ci8 ou resina de troca iônica. O composto de Fórmula (II) e (IV) seria então adicionado aos compostos de Fórmula (I) e (III) respectivamente, que podem adequadamente ser dissolvidos em tampão aquoso (pH 3-11). Após a reação em uma temperatura não-extrema por 1 a 70 minutos, o peptídeo marcado pode ser purificado, por exemplo, por SPE e coletado.
EXEMPLOS A invenção é ilustrada por meio de exemplos, em que as seguintes abreviações são usadas: HPLC: cromatografia líquida de elevado desempenho RMN: ressonância magnética nuclear TF A: ácido trifluoroacético. h: hora(s) min: minuto(s) DMAP: 4-(dimetilamino)piridina THF: tetraidrofurano DCM: diclorometano DMF: N,N-dimetilformamida TBAF: fluoreto de tetrabutilamônio MeOH: metanol TLC: cromatografia de camada delgada TIS: triisopropilsilano DMSO: dimetilsulfóxido PyAOP: [7-azabenzotriazol-1 -iloxitris(pirrolidino)fosfônio- hexafluorofosfato] Boc: t-butoxicarbonila Exemplo 1: Preparação de triflato de 4-trimetilamônio benzaldeído (composto i) Este composto foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Haka e outros (J. Labelled Cpds. & Radiopharms 1989 27(7) 823).
Exemplo 2: Preparação de 2-í242T2-(2-fluoro-etóxi)-etoxi1-etóxi>-etóxí)-1,1 -dimetóxi-etano (composto 7) a) Éster 2-12-(2-[2-('2.2-dimetóxi-etóxiVetóxil-etóxil-etóxiVetili1ico do ácido acético (composto 41 A uma suspensão agitando de hidreto de sódio (248 mg, 5,15 mmol em óleo mineral) em THF (5 ml) foi adicionada, através de uma seringa, uma solução de 2-{2-[2-(2-hidroxietóxi)-etóxi]-etóxi}-etanol (Composto 2) (1,0 g, 5,15 mmol) em THF (5 ml) em temperatura ambiente. Após o desprendimento de gás ter cessado, a mistura foi agitada por 45 minutos em temperatura ambiente, durante cujo tempo uma solução ligeiramente amarela transparente foi obtida. Bromoacetaldeído (8,71 g, 51,5 mmol) foi adicionado via seringa e a mistura agitada por 24 h. Em seguida acetato de etila (3 ml) foi adicionado e a mistura agitada em temperatura ambiente por mais 2 h. A mistura foi vertida dentro de éter (100 ml) e extraída uma cada vez com 10% K2C03 aquoso (30 ml) e salmoura (30 ml). A fase orgânica foi secada (Na2S04) filtrada e evaporada. O óleo residual foi destilado para eliminar bromoacetaldeído em excesso e o produto bruto residual foi purificado por cromatografia por vaporização instantânea, empregando-se 100% acetato de etila, para propiciar o produto (355 mg, 21%) como um óleo incolor. b) 2-(2-12-r2-(2,2-dimetóxi-etóxiVetóxi1-etóxi>-etóxi)-etanol (Composto 51 1 N NaOH/Metanol (1 ml) foi adicionado a uma solução agitando de éster 2-(2-{2-[2-(2,2-dimetóxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etílico do ácido acético (Composto 4) (110 mg, 0,34 mmol) em metanol (3 ml) em temperatura ambiente. A reação foi monitorada por TLC (CHCl3/MeOH, 9:1) e foi completada dentro de 30 minutos. O solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia por vaporização instantânea (CHCl3/MeOH, 9:1) para propiciar o produto (73 mg, 76%) como um óleo incolor. c) Éster 2-(2-(2-r2-f2.2-dimetóxi-etóxi)-etóxil-etóxi}-etóxi)-etílico do ácido metanossulfônico (Composto 61 A uma solução agitando do álcool (Composto 5) (60 mg, 0,21 mmol) e trietilamina (59 μΐ), 0,42 mmol) em THF (1 ml) foi adicionado cloreto de metanossulfonila (24:1, 0,30 mmol). A reação foi monitorada por TLC (CHCL3/MeOH, 9:1). Após 2 h, o precipitado sal de cloridreto de trietilamina foi filtrado. O solvente foi evaporado e o produto (75 mg, 99%) obtido após cromatografia por vaporização instantânea, empregando-se clorofórmio/metanol (9:1) como óleo. d) 2-(2-12-r2-(2-fluoro-etóxiy etóxil-etóxil -etóxiV 1.1 -dimetóxi-etano ('Composto 7) Uma mistura do sulfonato (Composto 6) (75 mg, 0,21 mmol) e TBAF (1,1 M em THF, 573 μΐ, 0,63 mmol) em acetonitrila (8 ml) foi aquecida a 90°C por 30 minutos. Monitoramento com TLC (acetato de etila) mostrou que a reação estava completa. Após esfriar à temperatura ambiente e evaporação do solvente, o resíduo foi ignizado (acetato de etila), para propiciar o produto (56 mg, 93%) como um óleo incolor.
Exemplo 3 - Preparação de 4-('3-fluoropropóxi')benzaldeído (Composto 10) a) 4-(3-hidroxietóxi)benzaldeído (Composto 81 Uma solução de 4-hidroxibenzaldeído (Fluka, 4,9 g, 0,040 mol), carbonato de sódio (4,7 g, 0,044mol) e 3-bromo-l-propanol (6,1 g, 0,044 mol) em DMF (30 ml) foi aquecida a 140°C por 8 h. A mistura de reação foi esfriada e concentrada e o resíduo foi absorvido em éter, lavado com água e secado (Na2SC>4). Filtragem e concentração forneceram 4,6 g (64%) de um xarope amarelo,que foi usado na etapa seguinte sem mais purificação. A estrutura foi confirmada por análise RMN. b) Éster 3-f4-formilfenóxOetílico do ácido metanossulfônico (Composto 9) A uma solução do álcool 12 (1,4 g, 8,0 mmol) em diclorometano (10 ml) foi adicionada trietilamina (1,2 ml, 8,5 mmol) e cloreto de mesila (0,62 ml, 8,0 mmol). Após agitar por 1,5 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi lavada com água e secada (Na2SC>4) para fornecer 1,8 g de material bruto (óleo amarelo). Uma alíquota de 290 mg foi purificada por cromatografia de fase inversa (coluna Phenomenex Luna C18(2) 5 pm 21,2 x 250 mm, solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 20 - 40% B durante 60 min; fluxo 10,0 ml/min, detecção UV a 254 nm) para fornecer 244 mg de material sólido branco, após liofilização. A estrutura foi confirmada por análise RMN. c) 4-/3 -fluoronronóxilbenzaldeído (Composto 101 Fluoreto de potássio (Fluka, 7,2 mg, 0,124 mmol) e kryptofix 222 (Fluka, 46,7 mg, 0,124 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila seca (2,5 ml). Após 10 min, a mistura foi adicionada a uma solução agitada de éster 3-(4-formilfenóxi)propílico do ácido metanossulfônico 13 (16,0 mg, 0,062 mmol) em acetonitrila seca (1,5 ml). A mistura de reação foi aquecida a 60°C por 30 minutos. O produto foi confirmado por HPLC analítica (coluna Phenomenex Luna (C18(2) 3 pm 4,6 x 50 mm, solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 10-80% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml/min, detecção UV a 214 e 254 nm), co-eluindo com norma comercial (Fluorochem) a 5,0 minutos.
Exemplo 4 - Preparação de LI dimetóxi-4-fluorometil ciclo-hexano /Composto 141 a) l.l-dimetóxi-4-hidroximetil ciclo-hexano /Composto 12) Uma solução de cetona 11 (2,54 g, 19,8 mmol), ortoformiato de trimetila (9,75 ml, 89,1 mmol) e ácido p-tolueno sulfônico (150 mg, 0,9 mmol) em metanol seco (30 ml) foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente por 24 h. A mistura de reação foi neutralizada com carbonato de potássio sólido (4 g),filtrada e os solventes evaporados. O não refinado foi dissolvido em DCM (30 ml) e lavado com água (40 ml). A fase orgânica foi secada (Na2S04), filtrada e evaporada. O óleo amarelo bruto (3,0 g) foi destilado a 85°C (0,2 mmHg) para propiciar o produto (1,69 g, 49%) como um óleo incolor. O produto foi caracterizado por 1H e 13C RMN. c) Ester 4.4-dimetóxi-ciclo-hexilmetílico do ácido metanossulfônico (Composto 131 A uma solução esfriada (0°C) do álcool 12 (275 mg, 1,58 mmol) e trietilamina (3,3 ml, 23,7 mmol) em DCM seco (5 ml) sob nitrogênio foi adicionado, em gotas, cloreto de metanossulfonila (246 μΐ, 3,16 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 2 horas. O sal cloridreto de trietilamina precipitado foi retirado por filtragem e os solventes evaporados. O não refinado foi dissolvido em DCM (30 ml), lavado com água (2x 20 ml), secado (Na2S04), filtrado e evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia por vaporização instantânea (EtOAc: espírito de petróleo: NH3 (50:50:4), para propiciar o produto (214 mg, 54%) como um óleo amarelo pálido. O produto foi caracterizado por 1H e 13C RMN.
Exemplo 5 - Preparação de Precursor de Peptídeo (Composto 15) O peptídeo, Composto 14, foi sintetizado utilizando-se síntese de peptídeo padrão. O Composto 14 (150 mg, 0,12 mmol) em DMF foi adicionado a uma solução de ácido Boc-aminoacético (34,4 mg, 0,18 mmol), PyAOP 93,9 mg, 0,18 mmol) e NMM (40 μΐ, 0,36 mmol em DMF. DMF foi evaporado sob pressão reduzida, após 12 h, e o produto bruto foi purificado por cromatografia preparativa de fase inversa (coluna Phenomenex Luna Cl8, 00G-4253-V0; solventes A = água/0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 60 min; fluxo 50 ml / min; detecção a 254 nm), propiciando 97,1 mg (57 %)de composto puro (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna Cl 8, 00G-4252-E0; solventes: A = água + 0,1% TFA / B = CH3CN + 0,1% TFA, gradiente: 10 - 50% B durante 20 minutos; fluxo 1,0 ml/minuto; tempo de retenção 19,4 minutos, detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada usando-se espectrometria de massa, fornecendo valor m/z 1431,2 [M-H+].
Exemplo 6 - Ligação ouimiosseletiva do Composto 1 ao Composto 15. para fornecer o composto 16 A desproteção do peptídeo 15 foi realizada por adição de TFA contendo 5% de água a 10 mg de peptídeo. O peptídeo desprotegido-Boc (5,9mg, 0,0044 mmol) em 1 ml de água foi adicionado a 4-fluoro benzaldeído (Composto 1) (1,1 mg, 0,94 μΐ, 0,0089 mmol) em 1 ml de acetonitrila. O pH da mistura foi de 3,5. Após 45 min a 70 graus, a mistura foi purificada por cromatografia preparativa de fase inversa duas vezes (coluna Phenomenex Luna C18, 00G-4253-N0; Solventes: A = água + 0,1% TFA / B = CH3CN + 0,1% TFA, gradiente: 10 - 40% B durante 30 min; fluxo 5,0 ml/min; detectado a 214 nm), propiciando 2,0 mg (32 %) do composto puro (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna Cl8, 00G-4252-E0; solventes: A = água + 0,1% TFA / B = CH3CN + 0,1% TFA, gradiente: 10 - 50% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml/min; tempo de retenção 16,3 min, detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada utilizando-se espectrometria de massa, fornecendo o valor m/z 1437,2 [M-FG].
Exemplo 7 - Ligação quimiosseletiva do Composto 7 ao Composto 15. para fornecer o Composto 17 O grupo de proteção de 2-(2-{2[[2-(2-fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi) 1,1-dimetóxi etano 6 (3,9 mg, 0,016 mmol) foi removido utilizando-se HC1 (cons.) em acetonitrila (1:1) (0,5 ml). A mistura foi deixada por 15 minutos e então adicionada ao peptídeo desprotegido-Boc, obtido tratando-se (Composto 9) (10 mg, 0,007 mol) com TFA contendo 5% de água e então evaporando-se TFA sob pressão reduzida após 20 min. O pH da mistura foi ajustado a 4 com amônia e em seguida aquecido a 70 graus por 20 minutos. A reação foi monitorada utilizando-se HPLC analítica e LC-MS e purificada por cromatografia preparativa de fase inversa (coluna Phenomenex Luna C18, 00G-4252-E0; solventes: A = água + 0,1% TFA/ B = CH3CN + 0,1% TFA, gradiente: 10 - 50% B durante 30 min; fluxo 5,0 ml/min; detectado a 214 nm e 254 nm). Mais caracterização foi realizada utilizando-se espectrometria de massa, fornecendo o valor m/z 1551,1. [M-H+].
Exemplo 8 - Radiossíntese de composto- F 16 152 a) Radiossíntese do Composto- F 1 Fluoreto F (até 370MBq) foi azeotropicamente secado na presença de Kryptofix 222 (12-14 mg em 0,5 ml MeCN) e carbonato de potássio (100 μΐ de solução 0,1M em água) aquecendo-se sob N2 a 125°C por 15 min. Durante este tempo, 2x1 ml MeCN foram adicionados e evaporados. Após esfriar a <40°C, uma solução de triflato de trimetilamônio benzaldeído (3 - 7 mg em 0,7 ml DMSO) foi adicionada. O vaso de reação foi selado e aquecido a 120°C por 15 min, para realizar a marcação. A mistura de reação bruta foi esfriada à temperatura ambiente e diluída pela adição de 10 ml de água. A mistura foi passada seqüencialmente através de um cartucho Sep-pak CM-plus (condicionado com 10 ml de água) e um cartucho SepPak C18-plus (condicionado com 20 ml EtOH e 20 ml H20). Os cartuchos foram inundados com água (10 ml) e o produto 18F-fluorobenzaldeído foi eluído do cartucho SepPak C18-plus com MeOH (1 ml), h) Conjugação do Composto 15 e 4-18F-fluorobenzaldeído O Composto 15 (4-5 mg) foi tratado com 5% de água em TF A por 5 min em temperatura ambiente. Os solventes foram então removidos por evaporação sob vácuo. O peptídeo foi redissolvido em tampão NH4OAc 0,5M, pH4 (0,5 ml) e combinado com 4-18F-fluorobenzaldeído dentro do vaso de reação. O vaso de reação foi selado e aquecido a 70°C por 15 min, para realizar a conjugação. Após esfriar à temperatura ambiente, o produto foi obtido por rádio HPLC preparativa (Coluna Phenomenex Prodigy ODS-Prep,250 x 10 mm, 10 μ, 4 ml/min, solvente A: H20 (0,5% TFA), solvente B: CH3CN (0,5 % TFA), gradiente: 10% B por 5 min, 10 - 40% B em 15 min.).
Exemplo 9 - Radiossíntese de Composto-18F 17 a) Radiossíntese do Composto- F 7 Em um frasco Wheaton (2 ml) carregados com Kryptofix 222 (10 mg), carbonato de potássio (1 mg em 50 μΐ de água) e acetonitrila (0,8 ml) foi adicionado o flúor-18 contendo água (10 mCi, 1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 110°C por 30 min sob uma corrente de nitrogênio. Acetonitrila anidra (0,5 ml) foi adicionada e evaporada como antes. Esta etapa foi repetida 2 vezes. Uma solução do composto 6 (1 mg) em DMSO anidro (0,2 ml) foi adicionada. Após aquecer por microondas (5 min, 160°C, 150 50 W) a mistura de reação foi esfriada à temperatura ambiente e aplicada a um cartucho SepPak lC18-plus, que tinha sido condicionado com MeCN (5 ML) e H20 (20 ml). O cartucho foi inundado com água (10 ml) e o produto eluído com MeCN (0,5 ml). O solvente foi evaporado utilizando-se uma corrente de nitrogênio a 80°C. Uma mistura de HC1 (34 μΐ, 12 M) e MeCN (34 μΐ) foi adicionada e o frasco deixado em temperatura ambiente por 5 min. i o b) Conjugação do Composto 15 e Composto- F 7 O composto 15 (3 mg) foi reagido com TFAJ 5% H20 (0,2 ml). Após repousar por 1 min à temperatura ambiente, o solvente foi removido por uma corrente de nitrogênio. Hidróxido de amônio (38 μΐ, 28%) foi adicionado ao frasco contendo o composto- F 7 desprotegido. A mistura neutralizada foi transferida para dentro do frasco contendo o composto 15 desprotegido em tampão de acetato de amônio (50 μΐ, pH 4,0, 0,5 Μ). O frasco foi incubado a 70°C por 7 min. Após esfriar à temperatura ambiente adição de fase móvel HPLC (100 pL, 20% MeCN, 80% H20, 0,5% TFA) o produto foi obtido por HPLC rádio preparativa [coluna: Luna Cl8(2), Phenomenex, 100 x 10 mm, 5 μ, 4 ml/min, solvente A: H20 (0,5 % TFA), solvente B: CH3CN (0,5 % TFA), gradiente: 10-50% B em 20 min].
Exemplo 10 - Síntese de 4-ffluorometiBbenzoil]hidrazida - Composto 23 23 Preparação de 2-r4-(fluorometil)benzoil1hidrazino-1.1.2-tricarboxilato de tri-terc-butila. para coniugacão com aldeído ou peptídeos modificados por cetona. a) Síntese de 2-r4-íhidroximetil)benzoil]-hidrazino-l-carboxilato de terc-butila - Composto 18 18 Uma solução de éster pentafluorofenílico do ácido 4-hidroximetil benzóico (Milligen, 0,60 g, 1,9 mmol), hidroxibenzotriazol (0,29 g, 1,9 mmol), carbazato de terc-butila (Fluka, 0,29 g, 2,2 mmol) e diisopropiletilamina (0,68ml, 4,0 mmol) em diclorometano (20 ml) foi refluxada por 3 h. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o produto foi purificado por cromatografia de coluna (sílica, acetato de etila/hexano 9:1). Produção 0,50 g (90%). HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 10 - 80% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml/min; tempo de retenção 2,38 minutos, detectado a 214 e 254 nm. Análise RMN estava em acordo com a estrutura. b) Síntese de 2-r4-íterc-butildifenilsiloximetil)benzoillhidrazino-1 -carboxilato de butila terciária - Composto 19 19 Uma solução de terc-butildifenilclorossilano (0,57 ml, 2,2 mmol), 2-[4-(hidroximetil0benzoil]-hidrazino-l-carboxilato de terc-butila (0,48 g, 1,8 mmol) e imidazol (0,37 g, 5,4 mmol) em diclorometano (60 ml) foi agitada em temperatura ambiente por 1 h 15 min. A solução foi extraída com sulfato hidrogenado de potássio aquoso (pH3, 3 x 10 ml) e secada (Na2S04). O produto foi analisado por HPLC (coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 60 - 100% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 3,37 minutos detectado a 214 e 254 nm). A solução foi concentrada e o produto foi usado na etapa seguinte sem mais purificação. c) Síntese de 2-r4-(terc-butildifenilsiloximetil)benzoil]hidrazino-l, 1,2-tricarboxilato de tri-terc-butila - Composto 20 20 A uma solução de 2-[4-(terc-butildifenilsiloximetil) benzoil]hidrazino-l-carboxilato de terc-butila (69 mg, 0,14 mmol) em diclorometano (15 ml) foram adicionados DMAP (20 mg, 0,16 mmol), trietilamina (0,13 ml, 0,96 mmol) e di-terc-butil-dicarbonato (90 mg, 0,41 mmol). Após 2 h, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado pro cromatografia de coluna (sílica, hexano/acetato de etila 4:1 (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TF A; gradiente 60 - 100% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 7,85 minutos detectado a 214 e 254 nm). A estrutura foi confirmada por análise RMN. d) Síntese de 2-r4-('hidroximetiribenzoillhidrazino-1.1.2-tricarboxilato de tri-terc-butila - Composto 21 21 A uma solução de 2-[4-(terc-butildifenilsiloximetil) benzoil]hidrazino-1,1,2-tricarboxilato de tri-terc-butila (0,37 g, 0,52 mmol) em THF (25 ml) foi adicionado fluoreto de tetrabutilamônio (1,1 M em THF, 0,50 ml, 0,55 mmol). Após 50 min, solução de cloreto de amônio aquosa (10%, 10 ml) foi adicionada. Após 10 min, a mistura foi extraída com diclorometano 93 x 15 ml) e a fase orgânica foi secada (Na2S04). A solução foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (sílica, hexano/acetato de etila 1:1) para fornecer 0,21 g (84%) do produto (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TF A; gradiente 60 - 100% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 1,38 minutos detectado a 214 e 254 nm). A estrutura foi confirmada por análise RMN. e) Síntese de 2-r4-metanossulfonatometillbenzoil~lhidrazino-1.1.2-tricarboxilato de tri-terc-butila - Composto 21 21 A uma solução agitada de 2-[4-(hidroximetil0benzoil]hidrazino-l,l,2-tricarboxilato de tri-terc-butila (0,22 g, 0,48 mmol) e trietilamina (0,080 ml, 0,57mmol) em diclorometano (40ml) foi adicionado cloreto de metanossulfonila (0,040ml, 0,52 mmol). Após 2 h, uma segunda parte de cloreto de metanossulfonila e trietilamina (mesmas quantidades)foi adicionada. Após 12 h, HPLC analítica (coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 60 - 10-80% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 8,25 minutos por detecção a 214 e 254 nm) indicou que a reação estava completada. A mistura foi filtrada através de sílica e concentrada in vacuo. O produto foi purificado por cromatografia de coluna (sílica, hexano/acetato de etila 1:1), produção 0,21 g (81%). A análise RMN foi de acordo com a estrutura. f) Síntese de 2T4AfluorometiLbenzoillhidrazino-1.2,2-tricarboxilato de trí-terc-butila - Composto 22 22 Fluoreto de potássio (3,0 mg, 0,052 mmol) e Kryptofix 222 (Fluka, 20 mg, 0,053 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila seca (0,6 ml). Após 15 min, a mistura foi adicionada a uma solução agitada de 2-[4-(metanossulfonatometil0benzoil]hidrazino-l,l,2-tricarboxilato de tri-terc-butila (14 mg, 0,026 mmol) em acetonitrila seca (0,4 ml). A mistura de reação foi aquecida a 60°C por 15 min. O produto foi purificado por HPLC preparativa (HPLC (coluna Phenomenex Luna Cl8(2), 5 μιη 21,2 x 250 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TF A; gradiente 60 -100% B durante 60 min; fluxo 10,0 ml / min; tempo de retenção 33 minutos detectado a 214 nm). Produção 3,2 mg (26%). HPLC analítica: coluna Phenomenex Lima Cl8(2), 3 pm 4,6 x 50 mm; solventes: A = água/0,1% TFA e B = acetonitrila/0,1% TFA; gradiente 10 - 80% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 8,78 minutos detectado a 214 e 254 nm. A estrutura foi confirmada por análise RMN. A desproteção do Composto 22, para produzir o Composto 23, foi realizada em 50% TFA/DCM por 15 minutos.
Exemplo 11 - Preparação de 2T2A2-fluorometilfenilsulfanilVetill- rL31dioxolona. para conjugação com aminóxi, hidrazina ou peptídeos modificados por hidrazida - Composto 27 27 a") Síntese de Γ2-12-Γ 1.31dioxolan-2-iletilsulfanillfenil1metanol Composto 24 24 2-(2-bromoetil)-1,3-dioxolano (223 μ1,1,86 mmol) foi adicionado a 2-mercaptobenzil álcool (52,3mg, 0,37 mmol) e carbonato de potássio (102,3, 0,74 mmol) em DMF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite antes de DMF ser evaporado, sob pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia preparativa de fase inversa (coluna Vydac 218TP1022; solventes: A = água/0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 40 min; fluxo 10 ml / min; detectado a 214 e 254 nm). Uma produção de 65,1 mg de material purificado foi obtida (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN /0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempo de retenção 15,017minutos detectado a 214 e 254 nm). b) Síntese de 2-r2-12-clorometilfenilsulfanilVetil1-ri.31dioxolano - Composto 25 25 Cloreto de mesila (65 μΐ, 0,83 mmol) foi adicionado a uma solução de [2-(2-[l,3]dioxolan-2-iletilsulfanil)-fenil]-metanol (40 mg, 0,17 mmol) e trietilamina (116 μΐ, 0,83 mmol) em THF. Após 5 dias o precipitado foi filtrado e THF evaporado sob pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia preparativa de fase inversa (coluna Vydac 218TP1022; solventes: A = água / 0,1% TF A e B = CH3CN / 0,1% TF A; gradiente 40 - 80% B durante 40 min; fluxo 10 ml / minuto; detecção a 254 nm). As frações foram deixadas no refrigerador durante a noite e na fase acetonitrila foi adicionado éter dietílico, secadas (Na2S04) e evaporadas sob pressão reduzida. Uma produção de 24,5 mg de material purificado foi obtida (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN /0,1% TFA; gradiente 40 - 80% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempo de retenção 10,4 minutos detectado a 214 e 254 nm). Estrutura verificada por RMN. c) Síntese de 2-r2-f2-fluorometilfenilsulfanil)-etill-U.3-ldioxolano -Composto 26 Fluoreto de potássio (3,5 mg, 0,060 mmol) e kryptofix 222 (22,5 mg, 0,060 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila (1 ml) e adicionados a 2-[2-(2-clorometilfenilsulfanil)-etil]-[l,3]-dioxolano (77 mg, 0,030 mmol) em acetonitrila (1 ml). A mistura de reação foi aquecida a 70 graus por 30 minutos. O produto bruto foi purificado por cromatografia preparativa de fase inversa (coluna Vydac 218TP1022; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN /0,1% TFA; gradiente 40 - 80% B durante 40 min; fluxo 10 ml / minuto; detecção a 254 nm). As frações foram deixadas no refrigerador durante a noite e na fase acetonitrila foi adicionado éter dietílico, secadas (Na2S04) e evaporadas sob pressão reduzida. (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 40 - 80% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempo de retenção 9,200 minutos detectado a 214 e 254 nm). Estrutura verificada por RMN.
Exemplo 12 - Síntese de 4-fluorometilbenzaldeído - Composto 29 a) Síntese de metanossulfonato de f4-formilfenil)metil - Composto 28 Cloreto de mesila (12,8 μΐ, 0,16 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-(hidroximetil)benzaldeído dimetilacetal (30 mg, 0,16 mmol) e trietilamina (22,9 μΐ, 0,16 mmol) em THF. Após 1 hora outro equivalente de cloreto de mesila e trietilamina foram adicionados. O precipitado foi retirado por filtragem após 1 hora e THF evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado usando-se uma coluna curta de sílica e DCM, propiciando 42,0 mg (98 %) de produto puro. (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna 00B-4251-E0, solventes: A = água/0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 5 - 50% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 4,900 minutos detectado a 214 e 254 nm). Estrutura verificada RMN. b) Síntese de 4-fluorometilbenzaldeído - Composto 29 KF (2,7 mg, 0,047 mmol) e kryptofix 222 (17,6 mg, 0,047 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila (1 ml) e adicionados a metanossulfonato de (4-formilfenil)metila (10 mg, 0,047 mol) em acetonitrila (1 ml). A mistura de reação foi aquecida a 65 graus por 10 minutos. O produto bruto foi purificado usando-se uma coluna curta de sílica e éter dietílico. (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna 00B-4251-E0, solventes: A = água/0,1% TFA e B = CH3CN /0,1% TFA; gradiente 5 - 50% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 5,1 minutos detectado a 214 e 254 nm).
Exemplo 13 - Síntese de análogo de oxitocina funcionalizada (dissulfeto Cvs1'6): rBocNHOCHoCO-Ahx-Cvs-Tw-Ile-Gln-Asn-Cvs-Pro-Leu-Glv-NHfl - Composto 30 Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Le-Gly-NH2 protegido: Montagem da seqüência amino ácida, utilizando-se síntese totalmente automatizada (ABI433A). A resina foi colocada em um aparelho borbulhador manual e clivada com TVA com 5% de água e 5% TIS presentes. TFA foi evaporado sob pressão reduzida após um hora. O precipitado resultante foi lavado com éter e secado ao ar. TFA e DMSO (95:5) foram adicionados ao peptídeo. Após 2 horas, TFA foi evaporado sob pressão reduzida e éter dietílico foi adicionado ao resíduo. O precipitado resultante foi lavado com éter e secado ao ar. O peptídeo (70,6 mg, 0,063 mmol) em DMF (5 ml) foi adicionado a uma solução de ácido Boc-aminoxiacético (23,9 m, 0,13 mmol), PyAOP (65,2 mg, 0,13 mmol) e NMM (27,5 μΐ, 0,25 mmol) em DMF (5 ml). DMF foi evaporado sob pressão reduzida após 12 horas. O produto bruto foi purificado por cromatografía preparativa de fase inversa (coluna Vydac 218TP1022; solventes: A = água/0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 60% B durante 40 min; fluxo 10 ml / min; detecção a 230 nm). (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água /0,1% TFA e B = CH3CN /0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempo de retenção 16 minutos detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada empregando-se espectrometria de massa, fornecendo valor m/z de 1293,0 [MH+].
Exemplo 14 - Conjugação de 4-fluorometilbenzaldeído com oxitocina (dissulfeto Cvs1'6!: rNH^OCHoCO-Ahx-Cvs-Tvr-Ile-Gln-Asn-Cvs-Pro-Leu-Glv-NFEI - Composto 31 O grupo de proteção Boc foi clivado de oxitocina (dissulfeto Cys1'6); [Boc-NHOCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2] (3,0 mg, 0,0023 mmol) empregando-se TFA e 5% de água. TFA foi evaporado sob pressão reduzida após 30 minutos e 4-fluorometilbenzaldeído (1,5 mg, 0,011 mmol) dissolvidos em água (0,5 ml) foi adicionado e o pH ajustado com amônia diluída a 4. A mistura foi aquecida a 70 graus por 50 minutos. (HPLC analítica: coluna Phenomenex Luna 00B-4251-E0, solventes: A = água/0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 60% B durante 10 min; fluxo 2,0 ml / min; tempo de retenção 6,3 minutos detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada utilizando-se espectrometria de massa, fornecendo 0 valor m/z 1313,1 [MH+], Exemplo 14 - Conjugação de 3-fl-fluorometilfenilsulfani1)-propiona1deído com oxitocina (dissulfeto Cvs1'6L rNH^OCH^CO-Abx-Cvs-Tvr-Ile-Gln-Asn-Cvs-Pro-Leu-Glv-NHri - Composto 32 O grupo Boc foi removido da porção peptídeo como descrito no Exemplo 6 antes da conjugação. O grupo de proteção de 3-(2-fluorometilfenilsulfanil)-propionaldeído (0,81 mg, 0,0034 mmol) foi removido utilizando-se HC1 IN em acetonitrila (1:1) 0,1 ml. A mistura foi abandonada por 30 minutos antes de ser adicionada ao peptídeo (2,0 mg, 0,0017 mmol) em 0,4 ml água e pH ajustado a 4 com amônia diluída. A mistura foi aquecida a 70 graus por 50 minutos. (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempo de retenção 19,8 minutos; tempo de retenção 19,8 minutos detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada utilizando-se espectrometria de massa, fornecendo valor m/z 1373,5 [MH+].
Exemplo 15 - Coniugacão do Composto 7 com oxitocina (dissulfeto Cvs1'6!: rNH?QCH2CO-Ahx-Cvs-Tvr-Ile-Gln-Asn-Cvs-Pro-Leu-Glv-NH?l_____________= Composto 33 O grupo de proteção Boc foi clivado de oxitocina (dissulfeto Cys1'6); [Boc-NHOCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly- ΝΗ2] (2,5 mg, 0,0019 mmol) empregando-se TFA e 5% de água. TFA foi evaporado sob pressão reduzida após 30 min. O grupo de proteção do composto 7 (1,0 mg, 0,0041 mmol) foi removido utilizando-se HC1 IN em acetonitrila (1:1) 0,5 ml. A mistura foi abandonada por 30 minutos antes de ser adicionada ao peptídeo e o pH ajustado a 4 com amônia diluída. A mistura foi aquecida a 70 graus por 15 minutos. (HPLC analítica: coluna Vydac 218TP54; solventes: A = água / 0,1% TFA e B = CH3CN / 0,1% TFA; gradiente 10 - 50% B durante 20 min; fluxo 1,0 ml / minuto; tempos de retenção 15,1 e 15,4 minutos detectado a 214 e 254 nm). Mais caracterização foi realizada utilizando-se espectrometria de massa, fornecendo valor m/z 1413,5 [MH+]. A invenção descrita e reivindicada aqui não é para ser limitada em escopo pelas formas de realização específicas aqui descritas, uma vez que estas formas de realização são pretendidas como ilustração dos diversos aspectos da invenção. Quaisquer formas de realização equivalentes são destinadas a situarem-se dentro do escopo desta invenção. Na realidade, várias modificações da invenção, além daquelas mostradas e descritas aqui, tomar-se-ão evidentes para aqueles hábeis na técnica, pela descrição precedente. Tais modificações são também destinadas a situarem-se dentro do escopo das reivindicações anexas.
REIVINDICAÇÕES

Claims (25)

1. Método para radiofluoração, caracterizado pelo fato de compreender a reação de um composto de Fórmula (I) com um composto de Fórmula (II)i (D IHF(Ugador)-R2 (II) ou um composto de Fórmula (III) com um composto de Fórmula (IV) (III) lsF-(Ligador)-R4 (IV) em que RI é uma porção aldeído, uma porção eetona, um aldeído protegido tal como um acetal, uma eetona protegida, tal como um eeial, ou uma funcionalidade, tal como diol ou resíduo serina N-terminal, que pode ser rápida e eficientemente oxidado em um aldeído ou eetona, utilizando-se um agente oxidante; R2 é um grupo selecionado de amina primária, amina secundária, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminóxi, fenílidrazina, semicarbazida e tiossemicarbazida e é preferivelmente um grupo hidrazina, hidrazida ou aminóxi; R3 é um grupo selecionado de amina primária, amina secundária, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminóxi, fenílidrazina, semicarbazida ou tiossemicarbazida e é preferivelmente um grupo hidrazina, hidrazida ou aminóxi; R4 é uma porção aldeído, uma porção eetona, um aldeído protegido, tal como um acetal, uma eetona protegida, tal como um cetal, ou uma funcionalidade, tal como diol ou resíduo serina N-ierminal, que pode ser rápida e efieientemente oxidado em um aldeído ou cetona, utilizando-se um agente oxidante; para fornecer um conjugado de Fórmula (V) ou (VI) respectivamente: em que X é -CO-NH-, -NH-, -O-, -NHCONH-, ou -NHCSNH- e é preferivelmente CO-NH-, -NH- ou -O-; Y é o substituinte H, alquila ou arila; e o grupo Lígador dos compostos de fórmulas (II), (IV), (V) e (VI) é selecionado de em que: n é um inteiro de 0 a 20; ni é um inteiro de 1 a 10; p é um inteiro de 0 ou 1; Z é O ou S.
2. Método para radíofluoração, caracterizado pelo fato de compreender a reação de um composto de fórmula (Ia) com um composto de fórmula (lia): (Ia) lHF-(Ugador)-0-NH: (üa) ou um composto de Fórmula (IHa) com um composto de Fórmula (IVa) (Hla) 1 sF-( Li g ad o r) -R4 (IVa) em que Rl e R4 são como definidos na reivindicação 1; o grupo Ligador dos compostos de fórmulas (Ha) e (IVa) é um grupo hidrocarbila C|.W), adequadamente um grupo hidrocarbila C],;«>, opcional mente incluindo 1 a 30 heteroãtomos, adequadamente I a 10 heteroátomos, tais como oxigênio ou nitrogênio; para fornecer um conjugado de Fórmula (Va) ou (Via) respec t i va mente: (Va) (Via) cm que Y é o substituínte H, alquila ou arila; e o grupo Ligador é como definido para o composto de Fórmula (Ma) ou (IVa).
3. Método para radiofluoração de acordo com a reivindicação L caracterizado pelo fato de compreender a reação de um composto de fórmula (VII): com um composto de Fórmula (VIII), (IX), (X) ou (XI): ,8f-(ch2ch2o)„-(ch,vcho (vin) (IX) (X) (XI) em que: n é um inteiro de 0 a 20; m é um inteiro de I a 10; X é -CO-NH-, -NH- ou -O- e é preferivelmente -ΟΥ é o substituinte H, alquíla ou arila para fornecer compostos de Fórmula (XII-XV) respectivamente: em que X é como definido para o composto de Fórmula (VII), m e n são definidos como para os compostos de Fórmula (VIII a XI).
4. Método para radiofluoração de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender a reação de um composto de fórmula (XVI): em que Yéo suhstituinte II, alquila ou arila. preferivelmente com compostos de Fórmula (XVII), (XVIII), (XIX) ou (XX): em que m é um inteiro de 1 a 10. n é um inteiro de 0 a 20 e W = -CONH-, -NH- ou -O-, para fornecer um composto de Fórmula (XXI), (XXII), (XXIII) ou (XXIV), respeetivamente: em que W = -CONH-, -NH- ou -O-, m, n são como definidos para os compostos de Fórmula (XIII a XI) e Y é uma porção H, alquila ou aríla.
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato do vetor ser peptfdeo Arg-Cly-Asp ou um seu análogo.
6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato do vetor compreender o fragmento
7. Método de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de o vetor ser de Fórmula (A): ÍA) em que X7 é -NFF ou em que a é um inteiro de 1 a 10, preferi velmente a é 1.
8. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (II), como definida na reivindicação I, ou da fórmula (lia), como definida na reivindicação 2, com a condição de que: nos compostos de Fórmula (II), se o ligador for fenila, então R2 é aminóxi (adequadamente — ONFF).
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ser das fórmulas (XVII), (XVIII), (XIX) ou (XX): em que m é um inteiro de 1 a 10, n ê um inteiro de I a 20 e W = -CONH-, -NH- ou -O-,
10. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (IV), como definida na reivindicação 1, ou da Fórmula (IVa), como definida na reivindicação 2; com a condição de que: (i) nos compostos de Fórmula (IV) o ligador não seja fenila (ii) nos compostos de Fórmula (IVa), o ligador não seja fenila ou fenila substituída por halo, hidróxi ou benzilóxi
11. Composto de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de ser das fórmulas (VIII), (IX), (X) ou (XI): lKF-(CH2CH20)„-(CH2)m-CH0 (VIII) (IX) (X) (XI) em que: n é um inteiro de 0 a 20; m ó um inteiro de 1 a 10; X é -CO-NH-, -NH- ou -O- e é preferivelmente -ΟΥ é o substituinte H, alquila ou arila com a condição de que, nos compostos de Fórmula (X), n não seja 0.
12. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (I) ou (III), como definida na reivindicação 1, ou da Fórmula (Ia) ou (IIIa), como definida na reivindicação 2.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato do vetor ser o peptídeo Arg-Gly-Asp ou um seu análogo.
14. Composto de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato do vetor ser de Fórmula (A): (A) em que X7 é —Nffi ou em que a é um inteiro de 1 a 10, preferivelmente a é 1.
15. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (V) ou (VI), como definida na reivindicação L
16. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (Va) ou (Via), como definida na reivindicação 2.
17. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (XII), (XIII), (XIV), (XV), como definida na reivindicação 3.
18. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (XXI). (XXII), (XXIII), (XXIV), como definida na reivindicação 4
19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 18, caracterizado pelo fato do vetor ser peptídeo Arg-Gly-Asp ou um seu análogo.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato do vetor compreender o fragmento:
21. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato do vetor ser de Fórmula (A): em que X7 é -NFF ou em que a é um inteiro de 1 a 10, preferivelmente a é 1.
22. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de ser da fórmula:
23. Composição radiofarmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender uma quantidade eficaz de um composto como definido cm qualquer uma das reivindicações 15 a 22; junto com um ou mais adjuvantes, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
24. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 22, caracterizado pelo fato de ser para uso médico.
25. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 15 a 22, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um composto radiofarmacêutico para uso em um método de formação de imagem in vivo.
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