BRPI0520481A2 - composição de b-1, 3 (4) - endoglucanohidrolase, b-1, 3 (4) glucanas, terra diatomácea, argila mineral e glucomananas e método de uso para aumentar a função imunológica - Google Patents

Abstract

Descreve-se um método para o aumento da função imunológica. A invenção compreende uma combinação de <225>-3-1,3(4)-endo-glucano-hidrolase, <225>-3-1 ,3(4) glucano, terra de diatomáceas, argila mineral e glucomanano, que é oferecida ou consumida por espécies mamíferas ou aviárias em quantidades suficientes para aumentar a função imunológica. A invenção descrita pode ser misturada com rações e alimentos, incorporada em rações ou alimentos em grãos ou administrada ás espécies mamíferas e aviárias por via oral.

Description

COMPOSIÇÃO DE p-1, 3 (4)-ENDOGLUCANOHIDROLASE,P-1,3(4)GLUCANAS, TERRA DIATOMÁCEA, ARGILA MINERAL EGLUCOMANANAS E MÉTODO DE USO PARA AUMENTAR A FUNÇÃOIMUNOLÓGICA

Campo da Invenção

Esta invenção refere-se a métodos e composições para o aumento dafunção imunológica em mamíferos e espécies aviárias.

Referências citadas [Referidas por]:

Patentes norte-americanas

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Outras referências:

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Fundamentos da invenção

O sistema imunologico consiste de duas características gerais. São elas:1) o sistema imunologico inato e 2) o sistema imunologico adaptativo (mediadopelos anticorpos). O sistema imunologico inato representa a primeira linha dedefesa contra um agente patogênico invasor (seja bacteriano ou fúngico) epropicia ao sistema imunologico adaptativo tempo suficiente (3-5 dias) para queele produza anticorpos que serão usados para "combater" os agentespatogênicos. Embora os sistemas inato e adaptativo sejam descritosfreqüentemente de forma separada, eles atuam em série; lutando para seqüestrare neutralizar uma empreitada invasora.

O sistema imunologico inato.

O sistema imunologico inato consiste de diversos componentesinteressantes. Entre eles estão:

1. As barreiras físico-químicas contra os agentes patogênicos propiciadaspelo epitélio, suco gástrico e enzimas digestivas.

2. As células que engolfam e digerem os agentes invasores (por exemplo,os neutrófilos).

3. Os receptores presentes na superfície destas células, que reconhecem ese ligam a estes agentes patogênicos.

4. Moléculas sinalizantes (por exemplo, quimosinas, citosinas), que indicamos locais de infecção e regulam a expressão de genes imunológicos.

Neutrófilos.

Os neutrófilos estão entre as células mais importantes do sistemaimunologico inato. Elas são as primeiras células a chegarem a um local deinfecção. Nos mamíferos, existem bilhões de neutrófilos, das quais cerca dametade circulam livremente no sangue (Burton e Erskine, 2003). As restantesficam reservadas na medula óssea, onde são geradas. Os neutrófilos expressamuma proteína de ligação extra-molecular em suas membranas nomeada"L-selectina" (também chamada CD62L). O papel da L-selectina é o de interagirfracamente com a parede da célula endotelial permitindo assim que o neutrófilo"role" ao longo da parede de um vaso sangüíneo e "monitore" a parede da célulaquanto à presença de sinais que indiquem uma infecção local. (Figura 1). Apresença dos agentes patogênicos nos tecidos periféricos causa a liberação desubstâncias químicas locais, que, então, sinalizam a um neutrófilo rolante sobreuma infecção. Em resposta a estes sinais, a L-selectina é liberada da superfíciedo neutrófilo (veja Figura 1) e outras moléculas mais adesivas são expressas emsua superfície. Estas moléculas essencialmente "grudam" o neutrófilo dentro dovaso sangüíneo adjacente ao local da infecção. O neutrófilo ativado então migraatravés da célula endotelial em direção ao agente patogênico invasor. Alnterleucina-1(3 é produzida pelo neutrófilo como uma citosina pró-inflamatória.Isto auxilia na mediação da inflamação e facilita a contenção dos agentespatogênicos invasores. Durante a migração do neutrófilo, os sinais químicosoriginários do local de infecção (tais como TNF-a e interferon-Y) ativam oneutrófilo a ser tornar uma "célula exterminadora" madura. O neutrófilo maduromigra em direção ao local de infecção, onde ela interage com os padrõesmicrobianos associados a agentes patogênicos (sigla em inglês, PAMPs) nasuperfície dos agentes patogênicos por meio de diversos tipos de receptores.

Estes receptores são expressos na superfície do neutrófilo e incluem os seguintestipos bem identificados (Figura 2):

a-CD18eCD14

b - receptores tipo Toll (TLRs)

c - C3b e C3bi (fatores complementares)

d-Fc

Ligação de neutrófilos a agentes patogênicos por meio de receptores.

Ambos receptores CD14 e CD18 se ligam a lipopolissacarídeos (LPS), umaestrutura de polissacarídeo comum associada com as membranas de bactériasgram-negativas. Além disto, os neutrófilos expressam os receptores tipo Toll(TLRs) que reconhecem e se ligam às estruturas adicionais associadas com osagentes patogênicos. Até agora, 10 receptores tipo Toll diferentes foramidentificados em mamíferos (Figura 2 e Tabela 1). Os TLRs exercem um papelcrítico na imunidade inata recente a agentes patogênicos invasores pormicroorganismos sensíveis. Estes receptores evolucionários conservadosreconhecem motivos estruturais altamente conservados somente expressos pelosagentes patogênicos microbianos chamados padrões microbianos associados aagentes patogênicos (PAMPs: Invivògen, 2004). A estimulação de TLRs porPAMPs inicia uma cascata de sinais que envolvem diversas proteínas, como porexemplo MyD88 e IRAK (Figura 2). Esta cascata de sinais leva à ativação do fatorde transcrição NF-kB que induz à secreção de citosinas, que orienta a respostaimunológica adaptativa (por exemplo, mediada por anticorpos). Os TLRs sãoexpressos predominantemente em tecidos envolvidos na função imunológicacomo, por exemplo, do baço e por lèucócitos sangüíneos periféricos, assim comoaqueles expostos ao ambiente externo, como do pulmão e do trato intestinal. 10TLRs humanos e 9 de ratos foram caracterizados, 7 dos quais tiveram seusligantes identificados. Por exemplo, o TLR2 é essencial para o reconhecimento deuma variedade de PAMPs, incluindo as lipoproteínas bacterianas,peptídioglucano, e ácidos lipotenóicos. O TLR3 está implicado com RNA em fitadupla derivado de vírus. O TLR4 é ativado predominantemente pelolipopolissacarídeo. O TLR5 detecta flagelina bacteriana e o TLR9 é solicitado pararesposta a DNA CpG não-metilado (Tabela 1). Recentemente, constatou-se que oTLR7 e TLR8 reconhecem as moléculas antivirais sintéticas. Estes receptores sãoelementos essenciais na defesa do hospedeiro contra agentes patogênicos pormeio da ativação do sistema de imunidade inata (Invivògen, 2004).

TLRs Bovinos. Relativamente poucos estudos sobre PAMPs foramconcluídos com células bovinas. Até agora, constatou-se que as célulasimunológicas bovinas contêm TLR2 e TLR4 (Werling et al, 2004). Ospolimorfismos foram observados em receptor bovino TLR4 que pode determinar asuscetibilidade à doença respiratória bovina e a doença de Johne (White et al,2003).

C3b e C3bi são componentes da cascata complementar enquanto que oreceptor Fc se liga à "região constante" de anticorpos. Assim, os agentespatogênicos que estão protegidos com fatores complementares ou anticorpos (porexemplo, os agentes patogênicos formados opsoninas) são mais reconhecidospor neutrófilos ativadas e são subseqüentemente fagocitados. Em outraspalavras, os neutrófilos ativados possuem diversos meios de reconhecer osagentes patogênicos (Tabela 1).

Fagocitose e Destruição.

A ligação de neutrófilos (e outras células fagocíticas) a marcadores deagentes patogênicos presentes na superfície das células por meio destesreceptores permite então que a célula fagocítica engolfe o agente patogênicoinvasor e o "mate" (Figura 3). Atualmente são conhecidos dois mecanismos de"destruição". São eles: 1) uma explosão oxidativa, onde o fagócito expressaespécies de oxigênio reativo que destrói o agente patogênico invasor, e 2) fusãodo agente patogênico engolfado com uma estrutura tipo lisossoma para formarum "fagossoma". O fagossoma é rico em enzimas digestivas que media acompleta digestão dos agentes patogênicos.Infecções Comuns.

As espécies mamíferas e aviárias são constantemente atingidas poragentes patogênicos no trato gastro-intestinal e no pulmão. Estes são pontosimportantes para os neutrófilos residentes, onde minimizam a invasão patogênica.

Além disto, a glândula mamaria dos mamíferos representa um local atrativo paraa entrada de agentes patogênicos. Em todas as infecções, o sistema imunológicoinato exerce um papel inicial fundamental na defesa contra o ataque imunológicoinicial. O sistema inato é essencial para permitir que o sistema adaptativo(mediado por anticorpos) desenvolva e articule uma resposta imunológica maisespecífica e direta.

Cooperação entre o Sistema Inato e o Adquirido nos Ruminantes.

Os anticorpos específicos para um agente patogênico invasor penetram umlocal de infecção com o objetivo de otimizar a eliminação deste invasor. Indivíduoscom uma alta titulação contra um antígeno específico são capazes de liberarestes anticorpos no local de infecção por meio de um endotélio permeável(decorrente de uma resposta inflamatória). A chegada de anticorpos reativos (porexemplo, lgG2) nos alvéolos cobre (opsoniza) o agente patogênico e, conformeobservado anteriormente, permite o reconhecimento dos agentes patogênicospelos neutrófilos por meio dos receptores Fc (Tabela 1) e que ocorra a fagocitose.

Stress e Função Imunológica.

O stress reduz as habilidades individuais de combater doenças. Os efeitosnegativos do stress sobre o sistema imunológico são mediados pelos hormôniosesteroidais do stress (cortisol, hidròcortisona e corticosterona). Burton e colegasda Universidade Estadual de Michigan (Weber et al, 2001) identificaram omecanismo pelo qual o stress causa uma redução da função imunológica. Emespecial, eles documentaram que os glicocorticóides (por exemplo, o cortisol)"sobe" próximo de um parto (Figura 4) e reduz a expressão da L-selectina nosneutrófilos (Figura 5). Isto compromete um aspecto importante de uma primeiralinha de defesa de um indivíduo contra uma investida de um agente patogênico.

Especialmente, um indivíduo estressado com imunidade suprimida possuiredução na sua habilidade de monitorar o alinhamento celular endotelial para oslocais de infecção e em atacar e seqüestrar os agentes patogênicos. Isto poderesultar em uma infecção. (Figura 6).

Sumário da invenção

O objetivo da presente invenção é o de fornecer um método novo edesconhecido anteriormente que aumenta o sistema imunologico nas espéciesmamíferas e aviárias. A invenção pode ser aplicada, embora não esteja limitada,às espécies mamíferas e aviárias, e visa reduzir a suscetibilidade de um indivíduoa doenças provenientes de fungos e bactérias.

Um outro objetivo desta invençãpé a de propiciar um método de aumentoda função imunológica e, assim, minimizar ou prevenir morbidades e mortalidadescausadas, não exclusivamente, por fungos e bactérias, com uma preparação quecompreende uma combinação de (3.-1,3(4)-endoglucanohidrolase, 0-glucanas,terra diatomácea, glucomananas, e argila mineral, tais como silicato de alumínio,argila montmorilonita, bentonita ou zeólita.

Outro objetivo da invenção é fornecer uma composição que compreendeuma combinação de |3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, (3-glucanas, terradiatomácea, argila mineral, e glucomananas, que aumenta aditivamente a funçãoimunológica e, com isto, reduz o potencial de fungos e bactériaspatogênicas de causarem morbidades e mortalidades nas espécies mamíferas eaviárias.

Outros objetivos, vantagens e características novas da invenção sãoexpressos, em parte, na descrição que segue e, em parte, se tornarão aparentespara aqueles versados na arte pelo exame das informações seguintes ou poderãoser apreendidos da prática da invenção. Para atingir os objetivos acima descritose outros, e de acordo com os propósitos da presente invenção, conforme descritoneste documento, descreve-se um método novo de aumento da funçãoimunológica nas espécies mamíferas e aviárias. Em particular, esta invençãoaumenta a expressão da L-selectina e interleucina-ip no neutrófilo e, com isto,minimiza ou elimina a colonização das superfícies epiteliais e dos tecidosparenquimais adjacentes por fungos e bactérias patogênicas, e reduz aspopulações de organismos patogênicos no sangue e, assim, minimiza ou eliminapatologias diretamente causadas por esta colonização. A invenção compreendeuma mistura de p-1,3(4)-endoglucanohidrolase, (3-glucanas, terra diatomácea,argila mineral, e glucomananas. A terra diatomácea é a de nível comercial padrãodisponível de uma variedade de fontes. O P-1,3(4)-endoglucanohidrolase éproduzido da fermentação submersa de uma classe de Trichodermalongibrachiatum. O (3-1,3(4) glucàhas e glucomananas são derivados de umproduto comercial e são uma extração de alguns dos inúmeros organismos emfermentação. O produto de argila mineral é de um nível comercial padrão (comoexemplo, se incluem, mas não limitados a estes, a argila montmorillonita,bentonita e zeólita). As extrações e produções de terra diatomácea, extração deparede de célula em fermentação e argila mineral são bem conhecidas na arte edisponíveis comercialmente.

As composições que são apresentadas na invenção podem ser oferecidascomo alimento para qualquer espécie mamífera ou aviaria, incluindo, mas não selimitando, aos bovinos, eqüinos, ovinos, caprinos e espécies aviárias. Quandomisturado com a ração ou alimento ou incluído como um complemento, o objetoda invenção aumenta a função imunológica, reduzindo, assim, a colonização deagentes patogênicos. A invenção também minimiza ou elimina a invasão docompartimento sangüíneo por fungos ou bactérias patogênicas. A invenção destamaneira minimiza ou elimina as manifestações das patologias associadascomumente com as infecções epiteliais e sistêmicas por fungos e bactérias. Aadministração do produto pode ser profilática (por exemplo, para prevenir acolonização e o crescimento de espécies de fungos e bactérias patogênicas nasespécies mamíferas e aviárias), como um aditivo a rações e alimentos infectadoscom fungos e bactérias patogênicas, ou como um método preferido para tratar e,com isto, minimizar ou eliminar uma infecção existente, diagnosticada ou não, porfungos ou bactérias. A aplicação da invenção conforme descrita neste documentoe por meio de mecanismos específicos e novos descritos neste documentominimizará e possivelmente eliminará as manifestações de infecções fúngicas ebacterianas. A aplicação da invenção conforme descrito neste relatório minimizaráainda ou possivelmente eliminará as manifestações associadas com a presençade organismos fúngicos e bacterianos patogênicos, conforme identificados acima,no alimento ou ração de espécies mamíferas e aviárias.Breve descrição dos desenhos

Os desenhos anexos formam parte do relatório e ilustram diversosaspectos da presente invenção e, juntos com a Descrição Detalhada, servem paraexplicar os detalhes da invenção. As figuras 3, 7 e 9 são micrografias. As fontesdas figuras são indicadas ao fim do respectivo texto.

Figura 1. Movimento de neutrófilos em um vaso sangüíneo. A L-selectina(CD62L) é mostrada como círculos sobre a superfície do neutrófilo.Isto permite o aporte do neutrófilo no endotélio. Observe a correntede L-selectina e a migração de neutrófilo no tecido periféricoem direção a um local de infecção (F). Fonte: Burton e Erskine, 2003.

Figura 2. Receptores tipo Toll na superfície de uma célula imune e atransdução de sinal seguinte a ligação de TLRs com PAMPsmicrobianos.

Figura 3. Em um processo chamado fagocitose, esta célula macrófagaengolfa uma bactéria. Receptores tipo Toll e outros orientam osfagócitos a reconhecer os micróbios. Observe as projeções porpseudopodia em torno da bactéria. Fonte: Travis, 2002.

Figura 4. Níveis de cortisol em gado leiteiro no dia do parto. Observe que os ocortisol chega no ponto de pico no dia do parto. Fonte: Weber et al.,2001.

Figura 5. As colunas representam a concentração de L-selectina em neutrófilode gado no dia do parto. Fonte: Weber et al., 2001.

Figura 6. Neutrófilos com falta de expressão de L-selectina (CD62L) em umgado leiteiro em situação de stress. Fonte: Burton e Erskine, 2003.

Figura 7. O efeito de 5 tratamentos experimentais em concentrações deL-selectina em neutrófilo em um experimento conduzido com 60carneiros.

Figura 8. Densitometria por escaneamento dos dados mostrados na figura 7.

Figura 9. Análise de interleucina-1(3 em neutrófilo nas mesmas amostras deneutrófilo de carneiro apresentadas na figura 7.

Figura 10. Densitometria de escaneamento de dados mostrados na figura 9.

Figura 11. As concentrações de Aspergillus fumigatus nas amostras de sanguetomadas dos carneiros no 282 dia do estudo.Descrição detalhada da invenção

A presente invenção está baseada na descoberta inovadora de que umacombinação de (3-1,3(4)-endoglucahohidrolase, (3-glucanas, terra diatomácea,argila mineral, e glucomananas efetivamente aumenta a função imunológica ereduz a colonização de tecidos e do sangue por um agente patogênico.

O (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase está disponível comercialmente e éproduzido da fermentação submersa de uma classe de Trichodermalongibrachiatum.

A terra diatomácea é preparada por métodos normalmente conhecidos naarte. Ele está disponível como um produto lavado a ácido, e é disponívelcomercialmente com 95% de sílica (SÍO2) e seus componentes restantes nãoensaiados, mas consistindo principalmente de cinza (minerais) como definido pelaAssociação dos Químicos Analíticos (AOAC, 2002).

O extrato da parede celular de levedura é preparado por um métodocomumente conhecido na arte. É uma fonte comercial de (3-1,3(4)glucanas eglucomananas derivado de levedura inativada primária (Saccharomycescerevisiae) com a seguinte composição química:

Umidade 2-3%

Parte seca 97-98%

Proteínas 14-17%

Gorduras 20-22%

Fósforo 1-2% . . =

Mananas 22-24%

(3-1,3(4) glucanas 24-26%

Cinza 3-5%

As argilas minerais (aluminosilicatos) usadas nesta invenção podem serescolhidas de uma variedade de argilas disponíveis comercialmente incluindo,mas não limitadas aos tipos montmorilonita, bentonita e zeólita.

Em uma versão preferida da invenção, (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase,terra diatomácea, extrato de parede celular de levedura e argila mineral sãocombinados respectivamente a 0.05-3%, 1-40%, 1-20% e 40-92%. Em umacomposição preferida, (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea, extratode parede celular de levedura e argila mineral são combinados respectivamente a0.1-3%, 5- 40%, 2-10% e 40-80%. Em uma versão especialmente preferida dainvenção, P-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea, extrato de paredecelular de levedura e argila mineral são combinados respectivamente a 0.2-3%,30-40%, 4-6% e 50-65%. A configuração física preferida da invenção é um póseco e fino adequado para inclusão direta em uma ração ou alimento ou como umsuplemento a uma ração ou dieta misturada total.

As composições fornecidas pela invenção podem ser incorporadasdiretamente em produtos de ração ou em alimentos disponíveis comercialmenteou oferecidas como suplementos aos produtos de ração ou alimentares. Acomposição contida na presente invenção pode ser oferecida a todas as espéciesmamíferas ou aviárias. Os métodos da invenção abrangem o aumento da funçãoimunológica em espécies mamíferas e aviárias. Quando incorporadas diretamentenas rações, a presente invenção pode ser adicionada às rações em quantidadesque variam de 0.1 a 5 kg por tonelada de ração. Em uma composiçãoespecialmente preferida, a invenção pode ser adicionada às rações em quantiasque variam de 1 -2 kg por tonelada de ração.

A composição da presente invenção pode ser adicionada a rações paraanimal ou a alimentos em quantias variando entre 0.0125% a 2% por peso deração. Em uma versão preferida, a composição é adicionada a rações para animalou a alimentos em quantias de 0.0625% a 1% por peso de ração. Em uma versãoespecialmente preferida, a invenção é adicionada em quantias de 0.125% a 0.5%por peso de ração.

De forma alternativa, a composição da presente invenção pode seroferecida diretamente às espécies mamíferas e aviárias como um suplemento emquantias de 0.016 gramas/kg a 0.37 gramas/kg de peso corporal vivo por dia. Emuma versão especialmente preferida, a invenção pode ser oferecida às espéciesmamíferas e aviárias em quantias de 0.10 gramas/kg a 0.20 gramas/kg de pesocorporal por dia. Uma pessoa versada na arte pode observar que a quantia deração da invenção pode variar dependendo das espécies animais, do tamanho doanimal e do tipo de ração a que a invenção for adicionada.

Os novos métodos desta invenção compreendem a habilidade de umacombinação de (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea, extrato deparede celular de levedura e argila para aumentar a função imunológica. Osbenefícios resultantes da aplicação desta invenção nas espécies mamíferasincluem, mas não estão limitados, a redução de perdas por mortes, redução daincidência de absorção micótica, redução da incidência de síndrome dehemorragia jejunal (síndrome de boa morte), redução da incidência de disenteria(diarréia), aumento da taxa de nascimento, melhorada eficiência de crescimento,melhorada produção de leite, melhorada eficiência de produção de leite e reduçãodas contagens de células nos produtos derivados do leite (animais leiteiros). Osbenefícios da aplicação da invenção a espécies aviárias incluem, mas não estãolimitados, à redução de perdas por morte, crescimento melhorado e produção deovos, fertilidade melhorada, e incidência reduzida de doenças entéricas.

Os seguintes exemplos pretendem ilustrar a invenção, e não devem serconsiderados restritivos ao escopo da invenção, conforme do contrário descritoneste documento.

Exemplo 1

Uma experiência foi conduzida usando 60 carneiros vivos, machos efêmeas. Os carneiros foram distribuídos entre um dos 5 tratamentos (7 fêmeas e5 machos por tratamento):

1. Controle.

2. Imunosuprimido (injeções diárias de Azium [Dexametisona], 0.1 mg/kgduas vezes ao dia).

3. Imunosuprimido mais produto experimental oferecido a 0.5% de ingestãodiária de material seco.

4. Imunosuprimido mais alimento com levedura (adição de Aspergillusfumigatus- produto de trigo infectado; 1.5 Ibs/por indíviduo/dia).

5. Imunosuprimido mais alimento mofado (como no Tratamento 4) mais oproduto alimentar experimental conforme indicado no Tratamento 3.

Os animais foram alimentados com uma dieta para estimular a produção deleite por um período de 28 dias. A imunossupressão foi mediada nos Tratamentos2, 3, 4 e 5 por injeção diária de Azium usando uma alta dose (um modelo destress extremo: Weber et al, 2001). Os carneiros dos Tratamentos 4 e 5 foramcontaminados com um elemento patogênico por meio da alimentação comproduto de trigo que tinha sido contaminado com um elemento patogênico(Aspergillus fumigatus). Os carneiros dos Tratamentos 3 e 5 foram suplementadoscom a composição da invenção a uma taxa de 0.5% de sua ingestão de matériaseca diária. Após 28 dias, as amostras de sangue foram tiradas via perfuraçãojugular e as frações de neutrófilos e foram isolados usando centrifugação degradiente de densidade Percoll. Seguinte a este procedimento, as amostras deproteína de neutrófilo foram processadas usando eletroforese em gel depoliacrilamida sulfato dodecílico de sódio e Western blotting usando anticorposque são específicos para L-selectina e interleucina-1 p. As concentrações relativasde L-selectina e interleucina-1 p foram avaliadas usando densitometria deescaneamento.

As Figuras 7 e 8 demonstram efeitos dos tratamentos experimentais emL-selectina de neutrófilo. A injeção de Azium causou uma redução visível (P<0,05)de L-selectina e fornece evidência de que a injeção de Azium foi, de fato,imunossupressiva. A adição de uma levedura às dietas não obteve qualquer efeito(P>0.05) sobre as concentrações de L-selectina. De interesse, a adição dacomposição da invenção à ração (Tratamentos 3 e 5) causou a restauração(aumento: P<0,05) de L-selectina.

Interpretação.

A nova invenção restaurou de forma bem sucedida (aumentou) os níveisnormais de L-selectina em neutrófilos. A restauração da L-selectina nassuperfícies do neutrófilo restabeleceu sua habilidade de monitorar o revestimentoendotelial para agentes patogênicos.

As Figuras 9 e 10 demonstram os efeitos dos 5 tratamentos experimentaissobre as concentrações de interleucina-1 p no neutrófilo. O tratamento com Aziumocasionou uma redução significativa (P<0,05) na concentração de interleucina-1 pem neutrófilo. Isto demonstra que o Azium foi imunossupressivo. A nova invençãonão apresentou qualquer efeito (P>0.05) sobre a interleucina-1 P nos neutrófilosna ausência de uma invasão patogênica (por exemplo, o Tratamento 3 emcomparação com o Tratamento 2); entretanto, a invenção ocasionou um aumentosignificativo (P<0,05) de interleucina-1 p nos neutrófilos na presença de umainvasão patogênica (por exemplo, o Tratamento 5 em comparação com oTratamento 4).

Interpretação.

A lnterleucina-ip é uma citosi.na pró-inflamatória importante que permiteque o neutrófilo cumpra sua função como um fagócito. A habilidade do produto deração de restaurar a interleucina-1 p na presença de um agente patogênico (A.fumigatus) demonstra os efeitos potenciais dos agentes patogênicos da invençãosobre a função imunológica.A Figura 11 mostra os efeitos dos tratamentos experimentais sobre asconcentrações de sangue de Aspergillus fumigatus. As concentrações deA. fumigatus foram determinadas usando um ensaio (PCR) de cadeia depolimerase quantitativa em tempo real com agente Sybr-Green desenvolvido emnosso laboratório. Os resultados demonstram que a invenção reduziu (P<0,05) aconcentração de A. fumigatus no sangue.

Interpretação.

A restauração da função do neutrófilo mostrada nas Figuras 7-10 seautomanifesta reduzindo a carga patogênica detectada dentro do compartimentosangüíneo. A invenção reduz a carga patogênica.

Estes resultados mostram que a composição da invenção (por exemplo, aargila mineral, extrato de parede celular de levedura, terra diatomácea e(3-1,3(4)-endoglucanohidrolase) é capaz de um efeito não descrito anteriormentede aumento da função imunológica. A invenção restaura especificamente osníveis de L-selectina e de inter)eucina-1(3 nos neutrófilos, restaurando assim ahabilidade dos neutrófilos de monitorar a presença de agentes patogênicosinvasores.

A combinação de produtos aumenta a imunidade em espécies mamíferas eaviárias e, com isto, impede a invasão e colonização do compartimentosangüíneo. Ela representa uma mistura em forma de flocos e que é facilmenteincorporada aos produtos de ração e produtos alimentícios. A presente invençãofoi efetiva no alcance dos efeitos imunoestimulatórios sob condições decrescimento que podem ser encontradas em sistemas digestivos de mamíferos eaviários, onde os nutrientes, umidade, oxigênio e elevadas temperaturas sãofornecidos por um hospedeiro.

A precedente descrição da versão preferida da invenção foi apresentadapara fins de ilustração e descrição. Ela não pretende ser exaustiva ou limitar ainvenção à configuração exata divulgada. As modificações óbvias ou variaçõessão possíveis à luz das ilustrações acima. A versão foi escolhida e descrita parafornecer uma melhor ilustração dos princípios da invenção e sua aplicaçãoprática, de forma a permitir que uma pessoa com habilidade comum na arte possautilizar a invenção em várias versões e com modificações adequadas para o usoparticular contemplado. Todas estas modificações e variações estão dentro doescopo da invenção, conforme definidas pelas reivindicações anexas, quandointerpretadas de acordo com o efeito geral que elas estão intituladas de formajusta, legal e imparcial.

Tabela 1. Sumário de mecanismos pelos quais os neutrófilos podemreconhecer / se ligar a agente patogênico antes do processo de fagocitose.

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Claims (36)

1. COMPOSIÇÃO caracterizada por compreender uma combinação de(3-glucanas, (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea calcinada, umaargila mineral, e glucomananas a qual é misturada em alimentos e rações paraanimais aumentando, assim, a função imunológica em espécies de mamíferos ede aves e, dessa forma, reduzindo a susceptibilidade a uma infecção.

2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o sistemaimunológico inato ser aumentado em espécies de mamíferos e de aves.

3. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o sistemaimunológico inato ser aumentado em espécies de mamíferos e de avesimunossuprimidos.

4. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada porL-selectina e lnterleucina-1(3, que serve como indicador de função imunológicainata, serem aumentadas em espécies de mamíferos e de aves.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir todos animais ruminantes.

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir gado leiteiro, gado de corte e ovinos.

7. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir ovinos.

8. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por espéciesde aves incluir espécies de aves domésticas utilizadas na produção pecuáriacomercial.

9. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir todos animais ruminantes.

10. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir gado leiteiro, gado de corte e ovinos.

11. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir ovinos.

12. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por espéciesde aves incluir espécies de ave utilizadas na produção pecuária comercial.

13. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir todos animais ruminantes.

14. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir gado leiteiro, gado de corte e ovinos.

15. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir ovinos.

16. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por espéciesde aves incluir espécies de ave utilizadas na produção pecuária comercial.

17. COMPOSIÇÃO, de acordo coma reivindicação 4, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir todos animais ruminantes.

18. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir gado leiteiro, gado de corte e ovinos.

19. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por espéciesde mamíferos incluir ovinos.

20. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por espéciesde aves incluir espécies de ave utilizadas na produção pecuária comercial.

21. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por oproduto argila mineral ser montmorilonita, bentonita, aluminosilicato ou argilaszeolíticas ou suas misturas.

22. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1. caracterizada por 3-1,3(4)-endoglucanohidrolase ser produzido a partir da fermentação submersade Trichoderma longibrachiatum.

23. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada porP-glucanas e glucomananas serem derivados de fervura e autólise enzimática dasparedes celulares de leveduras gram-positivas do gênero Saccharomyces.

24. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada porP-glucanas e glucomananas serem derivados de fervura e autólise enzimática dasparedes celulares de leveduras gram-positivas de Saccharomyces cerevisiae.

25. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a terradiatomácea ser calcinada a uma temperatura mínima de 900°C.

26. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por acomposição compreender entre 15% e 40% de terra diatomácea, entre 50% e 81% de argila mineral, entre 1,0% e 5,0% de p-glucanas, entre 0,05% e 3,0% deP-1,3(4)-endoglucanohidrolase e entre 1% e 8,0% de glucomananas.

27. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por acomposição compreende entre 20% e 30% de terra diatomácea, entre 60% e 75%de argila mineral, entre 1,0% e 3,5% de p-glucanas, entre 0,1% e 3,0% de(3-1,3(4)-endoglucanohidrolase e entre 1,0% e 6,0% de glucomananas.

28. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por acombinação de terra diatomácea, uma argila mineral,-3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, (3-glucanas e glucomananas ser misturada emalimentos ou rações para animais numa concentração entre 0,0125% e 5% empeso com o propósito de inibir o crescimento de fungos, em rações, alimentos oudigesta.

29. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ditacomposição ser misturada em alimentos ou rações animais e sersubseqüentemente servida aos animais domésticos vivos.

30. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ditacomposição ser misturada em alimentos ou rações animais e sersubseqüentemente servida a ruminantes vivos ou aves domésticas vivas.

31. COMPOSIÇÃO caracterizada por ser misturada em alimentos e rações paraanimais com a finalidade de inibir o crescimento de mofo patogênico nosalimentos, rações para animais e digesta compreendendo uma combinação de (5-glucanas, (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea calcinada, uma argilamineral e glucomananas, inibindo assim o crescimento de mofo patogênico tantono alimento ou ração animal quanto na digesta passando pelo animal, reduzindoassim a susceptibilidade a uma colonização micótica do trato digestivo e micosesinvasivas.

32. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizada por asespécies infectantes de mofo incluírem pelo menos uma dentre Aspergillus,Aureobasidium, Cândida, Eupennicillium, Eurotium, Fusarium, Mucor, Penicillium,Rachiborskiomyces e outros gêneros que integram a classificação taxonômica defungos.

33. MÉTODO PARA INIBIR O CRESCIMENTO DE MOFO PATOGÊNICO EMALIMENTOS E RAÇÕES ANIMAIS caracterizado por compreender umacombinação de terra diatomácea calcinada, uma argila mineral,(3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, (3-glucanas e glucomananas, para espéciesanimais ou aviárias, desse modo inibindo o crescimento de mofo tanto noalimento ou ração animal como na digesta que passa pelo animal, reduzindoassim a susceptibilidade a uma colonização micótica do trato digestivo.

34. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por o montanteda composição incorporada na dieta compreender entre 0,0125% e 5% em pesoda ingestão diária dos animais.

35. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizada por as espéciesde mofo infectante incluírem pelo menos uma dentre Aspergillus, Aureobasidium,Cândida, Eurotium, Fusarium, Mucor, Penicillium, Rachiborskiomyces e outrosgêneros que integram a classificação taxonômica de fungos.

36. COMPOSIÇÃO caracterizada por compreender uma combinação de(3-glucanas, (3-1,3(4)-endoglucanohidrolase, terra diatomácea calcinada, um argilamineral e glucomananas que é misturada em alimentos e rações.