BRPI0609595A2

BRPI0609595A2 - uso de amilina ou agonista de amilina e composição farmacêutica compreendendo os mesmos

Info

Publication number: BRPI0609595A2
Application number: BRPI0609595-0A
Authority: BR
Inventors: Christian Weyer; Kevin D Laugero; Christine M Mack; David G Parkes
Original assignee: Amylin Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2005-03-31
Filing date: 2006-03-31
Publication date: 2010-04-20
Also published as: US20110263491A1; US20090062193A1; WO2006105527A3; EP1888094A2; NZ561936A; US20130225485A1; IL186200A0; US7671023B2; JP2008534606A; CN101189021A; DE602006008456D1; EP1888094B1; KR101383493B1; JP2008534627A; WO2006105345A3; EP2258382A2; ATE439140T1; MX2007012236A; CA2602261A1; AU2006230420A1

Abstract

USO DE AMILINA OU AGONISTA DE AMILINA E COMPOSIçãO FARMACêUTICA COMPREENDENDO OS MESMOS. A presente invenção refere-se a composições e métodos para prevenir, tratar ou controlar condições ou distúrbios associados com obesidade, dieta, e nutrição. Os métodos fornecidos envolvem geralmente a administração de amilina ou um agonista de amilina a um indivíduo a fim de prevenir, tratar ou controlar condições e distúrbios associados com obesidade, dieta e nutrição.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA O CONTROLE, PREVENÇÃO E TRATAMENTO DA OBESIDADE E DESORDENS ALIMENTARES".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

Esse pedido de patente reivindica o benefício do pedido de paten-te provisório U.S. número 60/667.335, depositado em 31 de março de 2005,pedido de patente provisório U.S. número 60/666.681, depositado em 31 demarço de 2005, pedido de patente provisório U.S. número 60/675.441, de-positado em 28 de abril de 2005, e pedido de patente provisório U.S. número60/760.583, depositado em 20 de janeiro de 2006, os conteúdos completosde cada estão incorporados aqui para todas as finalidades.

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se ao campo médico e em particularaos campos de saúde, dieta e nutrição. Essa descrição refere-se aos usosde peptídeos, e mais particularmente aos usos de amilina e agonistas deamilina.

ANTECEDENTES

A família da amilina de hormônios peptídicos, incluindo amilina,calcitonina, peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), adreno-medulina (ADM), e intermedina (também conhecido como "AFP-6") é umafamília de hormônios peptídicos geralmente implicada em condições e dis-túrbios metabólicos. Foi relatado que as ações biológicas dos hormôniospeptídicos são geralmente mediadas através da ligação a dois receptoresacoplados a proteína G do tipo II intimamente relacionados, o receptor decalcitonina receptor (CTR) e o receptor semelhante ao receptor da calcitoni-na (CRLR). Clonagem e estudos funcionais mostraram que, CGRP, ADM, eamilina interagem com diferentes combinações de CTR ou de CRLR e daproteína modificadora da atividade do receptor (RAMP). Acredita-se que aco-expressão RAMPs e de CTR ou CRLR é necessária para gerar recepto-res funcionais para calcitonina, CGRP, ADM, e amilina. Um receptor especí-fico para AFP-6 não foi relatado ainda; entretanto, estudos de ligação indi-cam que AFP-6 se liga a todos os receptores conhecidos da família da amilina.Em geral, a amilina regula o esvaziamento gástrico, e suprime asecreção de glucagon e a ingestão de alimento, regulando assim a taxa deaparecimento de glicose na circulação. Em testes em seres humanos, umanálogo de amilina, pramlintida, mostrou reduzir o peso ou o ganho de peso.A amilina pode ser benéfica no tratamento de condições metabolicas taiscomo diabetes e obesidade. A amilina também pode ser usada para tratardor, distúrbios ósseos, gastrite, e para modular lipídeos, em particular trigli-cerídeos, ou afetar a composição corporal tal como a perda preferencial degordura e a poupar o tecido magro. Veja, por exemplo Pat. U.S. Nos.5.175.145, 5.677.279, 5.405.831, 6114.304 e Publicação de Pedido de Pat.U.S. Nos. 2002-0010133, 2003-0130177, 2004-0022807, e 2005-0197287.

O hormônio calcitonina (CT) foi nomeado por sua secreção emresposta a hipercalcemia induzida e seu rápido efeito hipocalcêmico. CT temum efeito sobre os níveis de cálcio do plasma e inibe a função dos osteo-clastos e é amplamente usado para o tratamento de osteoporose. Terapeuti-camente, CT de salmão (sCT) parece aumentar a densidade óssea e dimi-nuir as taxas de fratura com efeitos adversos mínimos. CT tem sido usadocom sucesso pelos últimos 25 anos como uma terapia para doença de Pagetde osso, que é um distúrbio esquelético crônico que pode resultar em ossosaumentados os deformados em uma ou mais regiões do estrutura principal.CT também é amplamente usado por seu efeito analgésico sobre dor ósseasentida durante a osteoporose, embora o mecanismo para esse efeito nãoseja claramente compreendido.

O peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) é umneuropeptídeo cujos receptores estão amplamente distribuídos no corpo,incluindo o sistema nervoso e o sistema cardiovascular. Esse peptídeo pare-ce modular a neurotransmissão sensorial e é um dos peptídeos vasodilata-dores endógenos mais potentes descobertos até o momento. Os efeitos bio-lógicos relatados para GRP incluem: modulação da substância P em infla-mação, atividade do receptor nicotínico na junção neuromuscular, estímuloda secreção de enzima pancreática, uma redução da secreção de ácido gás-trico, vasodilatação periférica, aceleração cardíaca, neuromodulação, regu-lação do metabolismo de cálcio, estímulo osteogênico, secreção de insulina,um aumento na temperatura do corpo e uma diminuição da ingestão de ali-mento (Wimalawansa (1997) Crit Rev Neurobiol. 11:167-239).

A adrenomedulina (ADM) é expressa quase ubiqüitariamentecom mais tecidos contendo o peptídeo do que não o contendo. Hinson et aí.(2000) Endocrine Reviews 21:138-167 detalha os efeitos de ADM sobre osistema cardiovascular, crescimento celular, e o sistema nervoso central e osistema endócrino, com uma variedade de ações biológicas incluindo vasodi-latação, crescimento celular, regulação da secreção de hormônios, e natriu-rese.

A expressão de AFP-6 (isto é, intermedina) é primariamente notrato pituitário e gastrointestinal. Em estudos in vivo, a administração deAFP-6 levou a redução da pressão sangüínea tanto em ratos normais comoespontaneamente hipertensivos e a administração in vivo de AFP-6 em ca-mundongos levou a supressão de esvaziamento gástrico e ingestão de ali-mento (Roh et ai. (2004) J. Biol. Chem. 279:7264-7274).

Estima-se que cerca de 64% dos americanos estejam acima dopeso ou obesos (aproximadamente cerca de 97 milhões de adultos) e ge-ralmente acredita-se que esses números estejam aumentando. Ser obeso ouestar acima do peso pode aumentar substancialmente o risco de morbidadepor hipertensão; dislipidemia; diabetes tipo 2; doença cardíaca coronária;acidente vascular encefálico; doença de vesícula biliar; osteoartrite; apnéiado sono e problemas respiratórios; e cânceres endometriais, de mama, prós-tata e cólon. Pesos corporais maiores também estão associados com au-mentos na mortalidade por causas gerais. Além disso, ser obeso ou estaracima do peso pode causar em uma pessoa uma auto-imagem negativa arespeito de si próprio.

Em sereá humanos, pacientes que estão acima do peso ou obe-sos são considerados aqueles com um índice de Massa Corporal (IMC) igualou maior do que 25. IMC é uma medida comum que expressa a relação (ourazão) de peso para altura. É uma fórmula matemática na qual o peso corpo-ral de uma pessoa em quilogramas é dividido pelo quadrado da sua alturaem metros (isto é, peso/(altura)2). Indivíduos com um IMC de 25 a 29,9 sãoconsiderados acima do peso, enquanto indivíduos com um IMC de 30 a 39,9são considerados obesos, e indivíduos com um IMC de 40 ou mais são con-siderados obesos mórbidos. De acordo com as Diretrizes Clínicas sobre aIdentificação, Avaliação e Tratamento de Sobrepeso e Obesidade em Adul-tos do NIH, todos os adultos (de 18 anos de idade ou mais) que tem um IMCde 25 ou mais são considerados em risco para morte prematura e incapaci-dade como uma conseqüência de sobrepeso e obesidade. Esses riscos dasaúde aumentam ainda mais quanto mais a severidade da obesidade doindivíduo aumenta.

Por essas razões, há um grande interesse em tratar a obesida-de. Terapias existentes incluem dietas usuais e exercício, dietas de muitopouco calórica, terapia comportamental, farmacoterapia envolvendo supres-sores de apetite, fármacos termogênicos, inibidores da absorção de alimen-tos e dispositivos mecânicos tais como fechos de arame para o maxilar, cin-tas, e balões, e cirurgia, tal como derivação gástrica. Jung etal. (1991) Clini-cai EndocrinologyZ5-M -20; Bray (1992) Am. J. Clin. Nutr. 55:538S-544S.

Em geral, entretanto, enquanto a perda de gordura é desejada, aperda de massa corporal magra (proteína) não é. A massa corporal magra éaltamente ativa metabólica e fisiologicamente e o tamanho é geralmente de-finido e mantido geneticamente. A massa corporal magra contém toda a pro-teína do corpo. Não há nenhum depósito de proteína real já que cada molé-cula de proteína tem um papel na manutenção da homeostase. Acredita-seque a perda de proteína corporal seja deletéria para a saúde de um indiví-duo. A maioria da proteína na massa corporal magra está na massa muscu-lar esquelética. A massa corporal magra é 50 - 60% da massa muscular porpeso, o resto é osso e tensão. Proteína forma a estrutura celular crítica nomúsculo, vísceras, e células vermelhas e tecido conjuntivo. Enzimas, quedirecionam o metabolismo, e anticorpos, que mantém a função imune, tam-bém são proteínas. Dessa forma, é desejável evitar ou minimizar a perda demassa corporal magra mesmo quando se reduz a gordura corporal.

Restrição calórica, independente de sua forma, pode causar ca-tabolismo de proteína do corpo e produzir um balanço negativo de nitrogê-nio. Dietas suplementadas com proteínas, portanto, ganharam popularidadecomo um meio de reduzir a perda de nitrogênio durante a restrição calórica.Jejum modificado limitado em proteína foi relatado como sendo eficaz daredução do peso em adolescentes. Lee et al. (1992) Clin. Pediatr. 31:234-236. Entretanto, essas dietas podem produzir apenas modesta escassez denitrogênio. Existe uma necessidade por meios eficazes de promover perdade gordura enquanto ainda se preserva a massa corporal magra ou se mini-miza sua perda.

A alimentação é controlada por diversos fatores, incluindo apeti-te, disponibilidade de alimento, práticas familiares, de grupo e culturais, etentativas em controle voluntário. Fazer dieta para um peso corporal maismagro do que o necessário é altamente promovido por tendências da modaatuais, campanhas promocionais para alimentos especiais, e em algumasatividade e profissões. Distúrbios alimentares envolvem distúrbios sérios nocomportamento alimentar, tais como redução extrema e prejudicial à saúdede ingestão de alimento ou ingestão exagerada, assim como sentimentos deagonia ou extrema preocupação em relação à forma física ou peso corporal.Pesquisadores estão investigando como e porque comportamentos inicial-mente voluntários, tais como ingerir menor ou quantidades menores de co-mida do que o usual, em algum ponto vai além do controle em algumas pes-soas e se desenvolve um distúrbio alimentar. Estudos sobre a biologia bási-ca do controle do apetite e sua alteração por ingestão exagerada prolongadaou inanição têm revelado grande complexidade, mas em longo prazo tem opotencial para levar a novos tratamentos farmacológicos paro distúrbios ali-mentares.

Os principais tipos de distúrbios alimentares são anorexia e bu-limia nervosa. Um terceiro tipo, distúrbio de compulsão alimentar, foi sugeri-do mas não foi ainda aprovado como um diagnóstico psiquiátrico formal. Dis-túrbios alimentares se desenvolvem freqüentemente durante a adolescênciaou idade adulta precoce, mas alguns relatos indicam que seu início podeocorrer durante a infância ou mais tarde na idade adulta. Distúrbios alimenta-res freqüentemente co-ocorrem com outros distúrbios psiquiátricos tais comodepressão, abuso de substâncias, e distúrbios de ansiedade. Além disso,pessoas que sofrem de distúrbios alimentares podem experimentar umagrande variedade de complicações de saúde, incluindo condições cardíacasgraves e insuficiência renal que pode levar a morte. O reconhecimento dedistúrbios alimentares como doenças reais e tratáveis, portanto, é critica-mente importante.

Permanece uma necessidade por métodos e composições efica-zes para modificar a composição corporal, assim como controlar, prevenir outratar a obesidade e distúrbios alimentares e condições e distúrbios associados.

Todas as patentes, pedidos de patente, e publicações aqui cita-dos estão por meio desse incorporadas por referência na sua totalidade.

SUMÁRIO

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, em métodos de controle de compulsão alimentar em um indivíduo.Em uma modalidade, são fornecidos métodos para controlar a compulsãoalimentar, onde os métodos compreendem administrar, a um indivíduo quedela necessite, uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade efi-caz para controlar ou reduzir a compulsão alimentar pelo indivíduo. Em umamodalidade, são fornecidos métodos para controlar a compulsão alimentar,em um indivíduo que compreendem administrar uma quantidade eficaz deamilina ou um agonista de amilina a um indivíduo em períodos do dia quan-do o indivíduo está mais provavelmente compelido a comer. Em uma moda-lidade, são fornecidos métodos para controlar a compulsão alimentar em umindivíduo compreendendo ainda administrar ao indivíduo pelo menos umoutro fármaco que suprime a fome nos períodos do dia quando o indivíduomais provavelmente não é compelido a comer. Em algumas modalidades, ooutro fármaco que pelo menos suprime a fome é sibutramina, orlistat, umPYY ou um análogo de PYY, um antagonista de CB-1 tal como rimonabant,uma leptina ou análogo de leptina ou fentermina. Em algumas modalidades,o outro fármaco que pelo menos suprime a fome tem uma meia vida in vivomaior do que a amilina.

Em uma modalidade, são fornecidos métodos para controlar acompulsão alimentar, onde os métodos compreendem administrar, a um in-divíduo que necessite disso, uma amilina ou agonista de amilina em umaquantidade eficaz para controlar ou reduzir a compulsão alimentar pelo indi-víduo em resposta a condições de estresse. Em outra modalidade, são for-necidos métodos para controlar a compulsão alimentar, onde os métodoscompreendem administrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilinaou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para controlar ou reduzir acompulsão alimentar pelo indivíduo em resposta a condições sem estresse.

Em algumas modalidades nas quais um indivíduo tem necessi-dade de controlar a compulsão alimentar, o controle da compulsão alimentarinclui uma redução na freqüência de episódios de compulsão alimentar, umaredução na duração de episódios de compulsão alimentar, uma redução naquantidade total consumida durante um episódio de compulsão alimentar,uma redução na dificuldade de resistir ao início de um episódio de compul-são alimentar, ou qualquer combinação desses. Em algumas modalidadesnas quais um indivíduo tem necessidade de controlar a compulsão alimentar,o indivíduo come grandes quantidades de alimento quando não fisicamentefaminto, o indivíduo come o alimento até o desconforto total, o indivíduo co-me o alimento quando emocionalmente estressado, o indivíduo foi diagnosti-cado com um distúrbio tal como distúrbio obsessivO-compulsivO, o dito indi-víduo foi diagnosticado como tendo problemas de controle de impulso, o in-divíduo foi diagnosticado como fazendo uso abusivo de uma substância talcomo uso abusivo de droga ou uso abusivo de álcool ou qualquer combina-ção desses.

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, para modificar as preferências alimentares de um indivíduo. Em umamodalidade, são fornecidos métodos para modificar as preferências alimen-tares de um indivíduo que compreendem administrar, a um indivíduo desejo-so de modificar as preferências alimentares, uma amilina ou um agonista deamilina em uma quantidade eficaz para modificar as preferências alimenta-res do indivíduo quando comparadas com as preferências alimentares doindivíduo na ausência da administração.

Em algumas modalidades, a modificação das preferências ali-mentares inclui uma diminuição na preferência por alimentos com muita gor-dura, uma diminuição na ingestão de alimentos com muita gordura, uma di-minuição na preferência por alimentos doces, uma diminuição na ingestãode alimentos doces, uma diminuição na preferência por alimentos achocola-tados, uma diminuição na ingestão de alimentos achocolatados, uma diminu-ição na preferência de alimentos condimentados, uma diminuição na inges-tão de alimentos condimentados ou qualquer combinação desses. Em algu-mas modalidades, a modificação das preferências alimentares inclui um au-mento na preferência por alimentos com pouca gordura, um aumento na in-gestão de alimentos com pouca gordura ou ambos.

Em uma modalidade, são fornecidos métodos para modificaçãodas preferências alimentares de um indivíduo que compreendem adminis-trar, a um indivíduo desejoso de modificar as preferências alimentares, umaamilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para modificaras preferências alimentares do indivíduo em resposta a condições estres-santes. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para modificação daspreferências alimentares de um indivíduo que compreendem administrar, aum indivíduo desejoso de modificar as preferências alimentares, uma amilinaou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para modificar as prefe-rências alimentares do indivíduo não em resposta a condições estressantes.

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, para tratar, reduzir ou prevenir os desejos alimentares de um indiví-duo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para tratar, reduzir ouprevenir desejos alimentares de um indivíduo que compreendem administrarao indivíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade efi-caz para tratar, reduzir ou prevenir desejos alimentares de um indivíduo. Emalgumas modalidades, o indivíduo deseja doces, chocolate, alimentos con-dimentados, alimentos gordurosos ou qualquer combinação desses. Em al-gumas modalidades, o tratamento dos desejos alimentares de um indivíduoinclui a redução na freqüência de desejos por alimentos em particular, umaredução na duração de desejo por alimentos em particular, uma redução naintensidade dos desejos por alimentos em particular, uma redução na dificul-dade de resistir aos desejos por alimentos em particular, uma redução na fre-qüência de comer alimentos em particular ou qualquer combinação desses.

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, para reduzir o estresse associado com a ingestão calórica diminuídaem um indivíduo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para reduziro estresse associado com a ingestão calórica diminuída de um indivíduo quecompreendem administrar ao indivíduo uma amilina ou um agonista de ami-lina em uma quantidade eficaz para reduzir o estresse associado com a in-gestão calórica diminuída do indivíduo. Em uma modalidade, o estresse doindivíduo associado com a ingestão calórica diminuída é manifestado comodepressão.

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, para reduzir o estresse causado pelo uso de fármacos que causamperda de peso em um indivíduo. Em uma modalidade, são fornecidos méto-dos para reduzir o estresse causado pelo uso de fármacos que causam per-da de peso em um indivíduo que compreendem administrar ao indivíduouma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para re-duzir o estresse do indivíduo causado pelo uso de fármacos que causamperda de peso. Em uma modalidade, o estresse do indivíduo causado pelouso de fármacos que causam perda de peso é causado por fármacos queatuam no cérebro tais como sibutramina e rimonabant.

Em um aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de amilinaou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivados de a-milina, em métodos para modular a taxa metabólica de um indivíduo. Emuma modalidade, são fornecidos métodos para aumentar a taxa metabólicade um indivíduo que compreendem administrar ao indivíduo uma amilina ouum agonista de amilina em uma quantidade eficaz para aumentar a taxa me-tabolica do indivíduo. Em outra modalidade, são fornecidos métodos parapreservar a taxa metabolica do indivíduo que compreendem administrar aoindivíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficazpara preservar a taxa metabolica do indivíduo. Em outra modalidade, sãofornecidos métodos para reduzir uma diminuição da taxa metabolica de umindivíduo que compreendem administrar ao indivíduo uma amilina ou umagonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir uma diminuiçãoda taxa metabolica de um indivíduo. Em algumas modalidades, tal diminui-ção da taxa metabolica de um indivíduo pode ser devida a uma dieta comcaloria reduzida, uma dieta restritiva ou perda de peso.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para reduzir pelomenos um platô metabólico em um indivíduo que compreende administrar aum indivíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidadeeficaz para reduzir pelo menos um platô metabólico no indivíduo. Em algu-mas modalidades, a redução em um platô metabólico é uma redução na du-ração do platô metabólico, uma redução na freqüência do platô metabólico, umretardo no início de um platô metabólico ou qualquer combinação desses.

Em algumas modalidades nas quais a taxa metabolica de umindivíduo é modulada ou um platô metabólico está reduzido em um indiví-duo, a taxa metabolica no indivíduo está aumentada em pelo menos cercade 5% comparada a um indivíduo idêntico durante o mesmo período de tem-po sob condições substancialmente similares ou idênticas e sem amilina ouagonista de amilina administrados.

Em algumas modalidades nas quais a taxa metabolica de umindivíduo é modulada ou um platô metabólico está reduzido em um indiví-duo, o indivíduo está em uma dieta com calorias reduzidas, está em umadieta restritiva, tem perda de peso, está perdendo peso, está iniciando umadieta de caloria reduzida ou está iniciando uma dieta restritiva. Em algumasmodalidades nas quais a taxa metabolica de um indivíduo é modulada ou umplatô metabólico está reduzido em um indivíduo, a massa magra do indiví-duo não está diminuída ou a massa magra está aumentada com a adminis-tração de amilina ou agonista de amilina. Em algumas modalidades, o indiví-duo tem o risco de desenvolver uma taxa metabólica reduzida. Em algumasmodalidades nas quais o indivíduo está iniciando uma dieta de redução decalorias ou uma dieta restritiva, a administração de amilina ou agonista deamilina é iniciada no momento ou antes do início da dieta de redução de ca-lorias ou dieta restritiva. Em algumas modalidades nas quais a taxa metabó-lica de um indivíduo está aumentada, o indivíduo foi diagnosticado com um dis-túrbio psiquiátrico tal como distúrbio de personalidade limítrofe ou depressão.

Em outro aspecto geral, os métodos fornecidos incluem o uso deamilina ou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina e derivadosde amilina, para alterar a composição ou distribuição de gordura no indiví-duo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para diminuir a massagorda em um indivíduo pelo aumento de sua taxa metabólica compreenden-do administrar a um indivíduo uma amilina ou um agonista de amilina emuma quantidade eficaz para aumentar a taxa metabólica do indivíduo. Emalgumas modalidades nas quais a massa gorda de um indivíduo está diminu-ída por um aumento na taxa metabólica, a massa magra do indivíduo não édiminuída, é mantida ou é aumentada com a administração da amilina ouagonista de amilina. Em algumas modalidades nas quais a massa gorda deum indivíduo está diminuída por um aumento na taxa metabólica, a massagorda está reduzida como uma porcentagem da massa corporal total, porexemplo, pelo menos 1% da massa corporal total. Em algumas modalidadesnas quais a massa gorda de um indivíduo está diminuída por um aumento nataxa metabólica, o indivíduo está em uma dieta de redução de calorias ouuma dieta restritiva.

Em uma modalidade, são fornecidos métodos para alterar a dis-tribuição de gordura em um indivíduo que compreendem administrar a umindivíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficazpara alterar a distribuição de gordura do indivíduo. Em uma modalidade, sãofornecidos métodos para produzir uma distribuição de gordura mais favorá-vel em um indivíduo que compreendem administrar a um indivíduo uma ami-lina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para produzir umadistribuição de gordura mais favorável no indivíduo. Em uma modalidade,são fornecidos métodos para prevenir ou diminuir a deposição ectópica degordura em um indivíduo que compreendem administrar a um indivíduo umaamilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para prevenirou diminuir a deposição ectópica de gordura no indivíduo. Em outra modali-dade, são fornecidos métodos para reduzir a quantidade de gordura visceralem um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma amilina ouum agonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a quantidadede gordura visceral no indivíduo.

Em algumas modalidades nas quais a distribuição de gordura deum indivíduo está alterada, o método reduz o risco do desenvolvimento deum distúrbio metabólico selecionado a partir do grupo que consiste em sín-drome do ovário policístico, síndrome metabólica e distúrbio cardiovascular.

Em algumas modalidades nas quais a distribuição de gordura de um indiví-duo está alterada, o método resulta em uma proporção maior de gordurasubcutânea para gordura visceral, comparado ao indivíduo no momento daadministração de amilina ou agonista de amilina. Em algumas modalidadesresulta em uma proporção maior de gordura subcutânea para gordura ectó-pica. Em algumas modalidades nas quais a distribuição de gordura de umindivíduo está alterada, o método resulta em uma diminuição de gordura ec-tópica ou uma diminuição na gordura visceral ou uma combinação dessas.Em algumas modalidades nas quais a distribuição de gordura de um indiví-duo está alterada, o método ainda resulta em um aumento na massa magracorporal, por exemplo, como resultado de um aumento na massa de célulasmusculares. Em algumas modalidades nas quais a distribuição de gordurade um indivíduo está alterada, a gordura visceral ou gordura ectópica ouambas são metabolizadas em uma taxa maior que a gordura subcutânea.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem o uso de ami-lina ou um agonista de amilina, incluindo análogos de amilina ou derivadosde amilina, para reduzir o peso em um indivíduo com obesidade mórbida.Em uma modalidade, são fornecidos métodos para reduzir o peso em umindivíduo com obesidade mórbida que compreendem reduzir o peso do ditoindivíduo abaixo da obesidade mórbida e administrar ao indivíduo uma amili-na ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir ainda opeso do indivíduo. Em uma modalidade, os métodos fornecidos compreen-dem inicialmente reduzir o IMC do indivíduo a um nível abaixo de 40 antesda administração da amilina ou agonista de amilina. Em algumas modalida-des nas quais o peso de um indivíduo com obesidade mórbida é reduzido, oindivíduo com obesidade mórbida tem um índice de massa corporal de 40 ousuperior. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para reduzir o pesoem um indivíduo com IMC abaixo de 40 que compreendem administrar aoindivíduo uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz parareduzir o peso do indivíduo.

Em algumas modalidades nas quais o peso de um indivíduo comobesidade mórbida está reduzido antes da administração de amilina ou ago-nista de amilina, o peso do indivíduo é reduzido pela redução da ingestãocalórica, aumento da atividade física, terapia com fármaco, cirurgia bariátricaou qualquer combinação desses. Em uma modalidade, a cirurgia bariátrica éa cirurgia de bypass gástrico. Em algumas modalidades, o método aindacompreende a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos umsegundo agente redutor de obesidade, por exemplo, sibutramina, orlistat,leptina ou rimonabant. Em algumas modalidades, a amilina ou agonista deamilina é co-administrada com pelo menos um segundo agente redutor deobesidade, tanto simultânea quanto seqüencialmente.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem a administra-ção a um indivíduo de amilina ou um agonista de amilina, incluindo análogosde amilina ou derivados de amilina, em uma dose em bolus uma ou maisvezes por dia para reduzir o peso do indivíduo. Em algumas modalidades, aamilina ou agonista de amilina é co-administrada com pelo menos um outrofármaco conhecido por causar perda de peso, tanto simultânea quanto se-qüencialmente. Em algumas modalidades, o outro fármaco conhecido porcausar perda de peso é administrado como uma dose em bolus ou comouma dose contínua.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem a administra-ção a um indivíduo de amilina ou um agonista de amilina, incluindo análogosde amilina ou derivados de amilina, em uma dose contínua para reduzir opeso do indivíduo. Em algumas modalidades, a amilina ou agonista de amili-na é co-administrada com pelo menos um outro fármaco conhecido por cau-sar perda de peso, tanto simultânea quanto seqüencialmente. Em algumasmodalidades, o outro fármaco conhecido por causar perda de peso é admi-nistrado como uma dose em bolus ou como uma dose contínua.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem a administra-ção a um indivíduo de amilina ou um agonista de amilina, incluindo análogosde amilina e derivados de amilina, para tratar perda óssea em um indivíduoque tenha feito cirurgia bariátrica. Em uma modalidade, são fornecidos mé-todos para reduzir a perda óssea em um indivíduo que tenha feito cirurgiabariátrica compreendendo administrar ao indivíduo uma amilina ou agonistade amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a perda óssea no indiví-duo. Em algumas modalidades nas quais a perda óssea é tratada com aamilina ou agonista de amilina, o método ainda compreende a administraçãode pelo menos um outro fármaco conhecido por ser eficaz para tratar perdaóssea, por exemplo, risedronato, alendronato, raloxifeno, calcitonina ou teri-paritida.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem a administra-ção a um indivíduo de amilina ou um agonista de amilina, incluindo análogosde amilina e derivados de amilina, para aumentar a termogênese em um in-divíduo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para aumentar a ter-mogênese em um indivíduo que compreendem administrar ao indivíduo umaamilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para aumentar atermogênese em um indivíduo.

Em outro aspecto, os métodos fornecidos incluem a administra-ção a um indivíduo de amilina ou um agonista de amilina, incluindo análogosde amilina e derivados de amilina, para aumentar o metabolismo oxidativoem um indivíduo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos para aumen-tar o metabolismo oxidativo em um indivíduo que compreendem administrarao indivíduo uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficazpara aumentar o metabolismo oxidativo no indivíduo.

A presente invenção também está relacionada com o controle,tratamento e prevenção de obesidade, distúrbios da alimentação e condi-ções, distúrbios e doenças relacionadas, e o uso de amilina ou agonistas deamilina e composições da presente invenção para a produção de um medi-camento útil para tratar essas condições.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

As figuras 1A - 1D são gráficos que descrevem efeitos de amili-na sobre as preferências alimentares sob condições de estresse e sem es-tresse. Nesses gráficos, R indica animais submetidos a estresse de restriçãoe C indica animais de controle não submetidos a estresse de restrição. Afigura 1A representa sacarose média para a taxa de comida como um per-centual da linha de base, a figura 1B representa o consumo total de comida,a figura 1C representa a média das kcal totais consumidas e a figura 1D re-presenta a sacarose média em kcal consumidas.

A figura 2 é um gráfico que representa o efeito de amilina sobreo percentual de ingestão calórica de comida com muita gordura.

A figura 3 é um gráfico que representa o efeito de amilina sobreo percentual de ingestão calórica de comida com muita gordura e comidacom pouca gordura.

A figura 4 é um gráfico que representa o efeito de amilina sobreo ganho de peso corporal em estudo de preferência alimentar.

A figura 5 é um gráfico que representa o efeito de amilina sobrea composição corporal em estudo de preferência alimentar.

A figura 6 é um gráfico que representa o efeito de amilina sobrea pontuação total média da escala de compulsão alimentar. As barras aber-tas representam todos os receptores de placebo (n=53), as barras sólidasrepresentam receptores de pramlintida TID (n=59) e as barras tracejadasrepresentam receptores de pramlintida CSI (n=47).

A figura 7 é um gráfico que representa a pontuação total médiada escala de compulsão alimentar a partir da linha de base.

A figura 8 é um gráfico que representa a ingestão cumulativa dealimento durante 28 dias por ratos DIO que receberam tanto veículo (círcu-los) quanto amilina (triângulos) nos dias 1-14 e que receberam apenas veículo daí por diante.

A figura 9 é um gráfico que representa alterações no percentualde peso corporal (corrigido por veículo) em ratos DIO que receberam tantoveículo (círculos) quanto amilina (triângulos) nos dias de 1-14 e que recebe-ram apenas veículo daí por diante.

A figuras 10A e 10B são gráficos que descrevem os efeitos so-bre o peso corporal da administração de veículo ou amilina nos dias 1-14 eapenas veículo nos dias 15-28. figura 10A é um gráfico que representa umefeito sobre a gordura corporal e a figura 10B é um gráfico que representaum efeito sobre a proteína corporal.

A figura 11 é um gráfico que representa uma redução dependen-te da dose no consumo de alimento em camundongos em jejum durante anoite, a doses de um composto exemplar, composto 2.

As figuras 12A e 12B são gráficos que representam os efeitos deagonistas de amilina sobre a ingestão calórica (figura 12A) e peso corporal(figura 12B) em ratos com obesidade induzida por dieta (DIO).

A figura 13 é um gráfico que descreve os efeitos sobre a compo-sição corporal de um composto exemplar.

As figura 14A e 14B são gráficos que descrevem os efeitos deum composto exemplar (composto 1) sobre o esvaziamento gástrico (figura 14A) e sobre a hipocalcemia (figura 14B).

A figura 15 é um gráfico que representa o efeito de amilina, tantosozinha quanto em combinação com sibutramina, sobre o peso corporal emratos DIO. Os quadrados sólidos representam veículo, círculos sólidos re-presentam apenas sibutramina, triângulos vazados representam apenasamilina e triângulos sólidos representam a combinação de amilina e sibutramina.

As figuras 16A e 16B são gráficos que representam os efeitossobre o peso corporal da administração de sibutramina (3 mg/kg/dia) e amili-na (100 ug/kg/dia), tanto isoladas quanto em combinação durante duas se-manas. A figura 16A é um gráfico que representa um efeito sobre a gorduracorporal e a figura 16B é um gráfico que representa um efeito sobre a proteína corporal.

A figura 17 é um gráfico que representa o efeito da administra-ção de uma faixa de doses de um antagonista de CB-1, tanto isoladas quan-to em combinação com amilina (100 ug/kg/dia), sobre o peso corporal. Operíodo de tempo das combinações na área circulada são descritos nas figuras18Ae18B.

As figuras 18A e 18B são gráficos que representam o efeito daadministração de um antagonista de CB-1 e amilina, tanto isolados quantoem combinação, sobre o peso corporal. A figura 18A representa o efeito daadministração de um antagonista de CB-1 (1 mg/kg/dia) e amilina (100 ug/kg/dia), tanto isolados quanto em combinação e a figura 18B representa o efeito da administração de um antagonista de CB-1 (3 mg/kg/dia) e amilina(100 ug/kg/dia), tanto isolados quanto em combinação.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Descobriu-se uma variedade de métodos e composições úteisno controle, tratamento e prevenção da obesidade, distúrbios da alimentaçãoe condições e distúrbios relacionados. Em um aspecto, são fornecidos mé-todos para a redução do peso em um indivíduo que deseja ou necessita dis-so e o tratamento e prevenção de condições associadas com perda de peso,tal como alteração de taxas metabólicas e termogênese. Em outro aspecto,são fornecidos métodos para redução de peso em um indivíduo obeso mór-bido, que compreendem administrar uma quantidade eficaz de amilina ouagonista de amilina. Também são fornecidos métodos para reduzir a perdaóssea associada com a cirurgia bariátrica. Em outro aspecto, são fornecidosmétodos para controlar, prevenir ou tratar condições ou distúrbios associa-dos com a alimentação, tais como compulsão alimentar, desejos alimentarese distúrbios alimentares relacionados com estresse.

Essa descrição também refere-se a descoberta surpreendentede que amilina e agonistas de amilina são capazes de modificar as preferên-cias alimentares em indivíduos, sob ambas as condições estressantes e nãoestressantes. Conseqüentemente, em outro aspecto, são fornecidos méto-dos para modificar as preferências alimentares. As modificações nas prefe-rências alimentares incluem uma alteração nas preferências por certos tiposde alimento, uma alteração na quantidade de ingestão de certos tipos dealimentos, uma alteração na freqüência dos desejos, duração dos desejos,intensidade dos desejos, dificuldade de resistir aos desejos e qualquer com-binação desses. Em algumas modalidades, as preferências alimentares in-cluem preferências por alimentos doces, alimentos achocolatados, alimentoscondimentados e qualquer combinação desses.

Os métodos aqui descritos usam a administração de amilina ouagonistas de amilina para o controle, prevenção ou tratamento de tais condi-ções e distúrbios.

Embora "obesidade" é geralmente definida como um índice demassa corporal acima de 30, para os propósitos dessa descrição, qualquerindivíduo, incluindo aqueles com índice de massa corporal de menos do que30, que necessite ou deseje reduzir o peso corporal ou prevenir o ganho depeso corporal está incluído no escopo de "obeso". Assim, indivíduos com umIMC de menos do que 30 e 25 e acima (considerado sobrepeso) ou abaixode 25 também estão incluídos nos indivíduos da invenção. Obesidade mór-bida refere-se a um IMC de 40 ou mais. Em uma modalidade, "um indivíduoque necessita disso" é obeso. Indivíduos que são resistentes a insulina, into-lerantes a glicose ou tem qualquer forma de diabetes mellitus (por exemplo,tipo 1, 2 ou diabetes gestacional) podem se beneficiar desse método. Emoutra modalidade, o indivíduo pode estar sofrendo ou ser suscetível a umacondição associada com alimentação tal como compulsão alimentar ou de-sejos alimentares.

Um "indivíduo" pode incluir qualquer mamífero, incluindo sereshumanos. Um "indivíduo" pode incluir também animais domésticos (por e-xemplo, cães, gatos, cavalos), assim como outros animais (por exemplo,vacas, carneiros, porcos, cabras). Indivíduos que podem se beneficiar dosmétodos descritos aqui podem ter excesso de peso ou obesidade; entretan-to, eles também podem ser magros. Indivíduos que podem se beneficiar dosmétodos descritos aqui podem estar desejosos de perder peso ou podem terum distúrbio alimentar, tal como compulsão alimentar, ou uma condição ali-mentar, tal como desejos alimentares. Os indivíduos que podem se benefici-ar dos métodos descritos aqui podem estar desejosos de modificar preferên-cias alimentares. Eles podem ter um distúrbio ou condição metabólico alémdessas condições. Distúrbios metabólicos exemplares incluem diabetes, sín-drome metabólica, resistência à insulina e dislipidemia. Os indivíduos podemter qualquer idade. Conseqüentemente, esses distúrbios podem ser encon-trados em adultos jovens e adultos (definidos aqui como aqueles com 65anos ou menos) assim como bebês, crianças, adolescentes e os idosos (de-finidos aqui como com idade superior a 65). De fato, certos segmentos dapopulação podem ser particularmente propensos a ter uma condição particu-lar, tal como distúrbios da alimentação em adolescentes e adultos jovens.

Por "taxa metabólica" entende-se a quantidade de energia libe-rada/consumida por unidade de tempo. Metabolismo por unidade de tempopode ser estimado pelo consumo de alimento, energia liberada como calorou oxigênio usado nos processos metabólicos. É geralmente desejável teruma taxa metabólica mais elevada quando se deseja perder peso. Por e-xemplo, uma pessoa com uma alta taxa metabólica pode ser capaz de con-sumir mais energia (o corpo queima mais calorias) para realizar uma ativida-de do que uma pessoa com uma taxa metabólica baixa para aquela ativida-de.

Como usado aqui, "massa magra" ou "massa corporal magra"refere-se a músculo e osso. Massa corporal magra não indica necessaria-mente massa livre de gordura. Massa corporal magra contém um pequenopercentual de gordura (aproximadamente 3%) dentro do sistema nervosocentral (cérebro e medula espinhal), medula óssea e órgãos internos. Amassa corporal magra é medida em termos de densidade. Métodos paramedir a massa gorda e a massa magra incluem, mas não são limitados apesagem hidrostática, pletismografia de corpo inteiro, raio X, exames de ab-sormetria radiológica de dupla energia (DEXA), exames de MRIs e CT. Emuma modalidade, a massa gorda e a massa magra são medidas usando apesagem hidrostática.

Por "distribuição de gordura" entende-se a localização de depó-sitos de gordura no corpo. Tais localizações de deposição de gordura inclu-em depósitos de gordura subcutâneos, viscerais e ectópicos.

Por "gordura subcutânea" entende-se o depósito de lipídios logoabaixo da superfície da pele. A quantidade de gordura subcutânea em umindivíduo pode ser medida usando qualquer método disponível para a medi-da da gordura subcutânea. Métodos para medir a gordura subcutânea sãoconhecidos na técnica, por exemplo, aqueles descritos na Pat. U.S. N°.6.530.886, cuja totalidade está incorporada aqui por referência.

Por "gordura visceral" entende-se o depósito de gordura comotecido adiposo intra-abdominal. A gordura visceral circunda órgãos vitais epode ser metabolizada pelo fígado para produzir colesterol sangüíneo. Agordura visceral tem sido associada com riscos aumentados de condiçõestais como síndrome do ovário policístico, síndrome metabólica e doençascardiovasculares.

Por "armazenamento ectópico de gordura" entende-se depósitoslipídicos dentro e em volta de tecidos e órgãos que constituem a massa ma-gra corporal (por exemplo, músculo esquelético, coração, fígado, pâncreas,rins, vasos sangüíneos). Geralmente, o armazenamento ectópico de gorduraé um acúmulo de lipídios fora dos depósitos de tecido adiposo clássicos nocorpo.

Como usado aqui, e como bem entendido na técnica, "tratamen-to" é uma abordagem para se obter resultados benéficos ou desejados, in-cluindo resultados clínicos. "Tratar" ou "paliar" uma doença, distúrbio oucondição significa que o grau, as manifestações clínicas indesejáveis deuma condição, ou ambos, de um distúrbio ou um estado de doença são mi-nimizados e/ou a duração da progressão é diminuída ou prolongada, quandocomparado com o distúrbio não tratado. Para os propósitos dos métodosaqui descritos, resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas nãosão limitados a alívio ou melhora de um ou mais sintomas, diminuição daextensão do distúrbio, estado da doença estabilizado (isto é, não agravado),retardo ou redução da progressão da doença, melhora ou paliação do dis-túrbio e remissão (parcial ou total), seja detectável ou não detectável. "Tra-tamento" também pode significar prolongar a sobrevivência quando compa-rada com a sobrevivência esperada se não houver tratamento. Adicional-mente, tratamento não ocorre necessariamente pela administração de umadose, mas freqüentemente ocorre após a administração de uma série dedoses. Assim, uma quantidade terapeuticamente eficaz, uma quantidadesuficiente para aliviar ou uma quantidade suficiente para tratar uma doença,distúrbio ou condição pode ser administrada em uma ou mais administra-ções.

Como usado aqui, a forma no singular "um", uma" e "o/a" incluireferências no plural a menos que indicado de outra maneira ou claro a partirdo contexto. Por exemplo, ficará claro pelo contexto que "um" agonista deamilina pode incluir um ou mais agonistas de amilina.

Em um aspecto, os métodos aqui fornecidos são usados paraaumentar a taxa metabólica em um indivíduo, diminuir uma redução da taxametabólica em um indivíduo ou preservar a taxa metabólica em um indiví-duo. Em uma modalidade, a taxa metabólica pode envolver o uso preferen-cial da gordura corporal como fonte de energia sobre o tecido corporal ma-gro. Em um aspecto, a massa corporal magra não está diminuída após aadministração de amilina ou agonista de amilina. Em outro aspecto, umaredução da massa corporal magra é diminuída ou prevenida após a adminis-tração de amilina ou agonista de amilina. Em outro aspecto ainda, a massacorporal magra está aumentada após a administração de amilina ou agonistade amilina. Tal preferência por gordura como fonte de energia pode ser de-terminada pela comparação da quantidade de tecido gorduroso com tecidocorporal magro, verificada pela medida do peso corporal total e conteúdo degordura no início e no final do período de tratamento. Um aumento na taxametabólica é o nível mais alto de uso de calorias ou outra fonte de energiapelo indivíduo durante um período de tempo em comparação com o nível deuso de calorias ou outra fonte de energia pelo indivíduo durante outro perío-do de tempo sob condições substancialmente similares ou idênticas semadministração de amilina ou agonista de amilina. Em algumas modalidades,a taxa metabólica do indivíduo está aumentada mesmo que a ingestão caló-rica do indivíduo esteja diminuída em comparação àquela na ausência deadministração de amilina ou agonista de amilina. A ingestão calórica podeestar diminuída, por exemplo, devido a uma dieta de redução de caloria,uma dieta restritiva ou saciedade aumentada ou redução da fome compara-da a aquela na ausência de administração de amilina ou agonista de amilina.

Em uma modalidade a taxa metabólica está aumentada em pelo menos cer-ca de 5% em um indivíduo, em outras modalidades, a taxa metabólica estáaumentada em pelo menos cerca de 10%, 20%, 25%, 30% ou 35% em umindivíduo em comparação com o nível de uso de calorias ou outra fonte deenergia pelo indivíduo durante outro período de tempo sob condições subs-tancialmente similares ou idênticas sem administração de amilina ou agonis-ta de amilina. O aumento da taxa metabólica é medido usando um caloríme-tro respiratório. Uma quantidade eficaz de amilina ou agonista de amilinacomo usada nessa modalidade é uma quantidade eficaz para aumentar ataxa metabólica em um indivíduo.

Em outra modalidade, é fornecido um método para reduzir a di-minuição na taxa metabólica em um indivíduo. Tal diminuição na taxa meta-bólica pode ser o resultado de qualquer condição ou regime nutricional oufísico que leva a uma redução da taxa metabólica, por exemplo, devido auma dieta de redução de caloria, dieta restritiva ou perda de peso. Uma dietarestritiva inclui permissões ou proibições ou ambos, sobre os tipos de ali-mento ou as quantidades de alimentos ou ambos permitidos em uma dieta,não necessariamente com base nas calorias. Por exemplo, quando um indi-víduo faz dieta, o corpo compensa com uma taxa metabólica reduzida base-ada na ingestão calórica diminuída. Em essência, o corpo regula negativa-mente a necessidade de alimento, subsistindo dessa maneira com menosalimento. Conforme a dieta continua, o limiar de ingestão calórica é reduzido.Quando a dieta termina, o indivíduo tipicamente ganha peso apesar de co-mer uma dieta normal por causa do limiar de ingestão calórica diminuído eda taxa metabólica basal diminuída (NIH Technology Assessment Conferen-ce Panei (1992) Ann. Intern. Med. 116:942-949; Wadden (1993) Ann. Intern.Med. 119:688-693). Em um aspecto, é fornecido um método para reduzir aperda de taxa metabólica em um indivíduo, onde a perda de taxa metabólicaé o resultado de uma dieta de caloria reduzida ou perda de peso. Pelo usode tal método, a redução na taxa metabólica do indivíduo é diminuída empelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%,80%, 90% ou 95% no indivíduo. Para tais métodos, pode ser desejável ad-ministrar a amilina ou agonista de amilina no momento em que a condiçãoou regime nutricional ou físico é iniciado o que leva a perda ou redução nataxa metabólica. Entretanto, também é contemplado que a administração deamilina ou agonista de amilina é iniciada antes que condição ou regime nu-tricional ou físico seja iniciado. Em um exemplo, a taxa metabólica é medidausando um calorímetro respiratório. Uma quantidade eficaz de amilina ouagonista de amilina nessa modalidade é uma quantidade eficaz para diminuira redução da taxa metabólica em um indivíduo.

Em outro aspecto, são fornecidos métodos para reduzir platôsmetabólicos, onde um método compreende administrar uma quantidade efi-caz de amilina ou agonista de amilina a um indivíduo. Em uma modalidade,o indivíduo está perdendo peso ou perdeu peso, por exemplo, devido a umadieta de caloria reduzida, aumento de exercício ou uma combinação desses.Por "platô metabólico" entende-se os intervalos de tempo de taxa metabólicaconstante enquanto o corpo se ajusta a alterações no aporte calórico ou deenergia. Alterações no aporte ou consumo calórico podem ser o resultadode, por exemplo, dietas de caloria reduzida ou atividade física aumentada.Tais platôs podem ser observados, por exemplo, durante um regime de per-da de peso quando a perda de peso é lenta ou paralisada. Em uma modali-dade, um método da presente invenção reduz a duração de um platô meta-bólico em um indivíduo em comparação com a duração de platôs metabóli-cos em um indivíduo idêntico sob outros aspectos durante o mesmo períodode tempo sob condições substancialmente similares ou idênticas sem admi-nistração da amilina ou agonista de amilina. Em outra modalidade, um méto-do fornecido reduz a freqüência de platôs metabólicos em comparação coma freqüência de platôs metabólicos em um indivíduo idêntico sob outros as-pectos durante o mesmo período de tempo sob condições substancialmentesimilares ou idênticas sem administração da amilina ou agonista de amilina.Em outra modalidade ainda, um método fornecido retarda o início de um pla-tô metabólico em comparação ao início de um platô metabólico em um indi-víduo idêntico sob outros aspectos durante o mesmo período de tempo sobcondições substancialmente similares ou idênticas sem administração daamilina ou agonista de amilina. Em uma modalidade, platôs metabólicos sãoidentificados por períodos registrados de perda de peso reduzida ou inexis-tente. Em uma modalidade, pelo menos um platô metabólico é reduzido. Emoutras modalidades, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito,nove ou dez platôs metabólicos são reduzidos. Em outro aspecto, platôs me-tabólicos são retardados em um dia em comparação a um indivíduo não tra-tado com amilina ou agonista de amilina sob condições idênticas ou simila-res. Em outros aspectos, platôs metabólicos são retardados 2 dias, 3 dias, 4dias, 5 dias, seis dias, 1 semana, 10 dias, 2 semanas ou 3 semanas em umindivíduo.

Em outra modalidade ainda, é fornecido um método para preser-var a taxa metabólica em um indivíduo. Em uma modalidade, o indivíduopode estar em risco de perder taxa metabólica, por exemplo, devido ao iníciode uma dieta de caloria reduzida, dieta restritiva ou perda de peso antecipa-da. A preservação da taxa metabólica é uma manutenção do nível de uso decalorias ou outra fonte de energia por um indivíduo durante um período detempo em comparação com o nível de uso de calorias ou outra fonte de e-nergia por um indivíduo idêntico sob outros aspectos durante o mesmo perí-odo de tempo sob condições similares ou idênticas sem administração deamilina ou agonista de amilina. Em um aspecto, a taxa metabólica está man-tida dentro de 15% da taxa metabólica do indivíduo antes do início do eventoque resulta na diminuição da taxa metabólica. Em outros aspectos, a taxametabólica é mantida em 10%, em 7%, em 5%, em 3% ou menos da taxametabólica do indivíduo. Em um aspecto, a amilina ou agonista de amilina éadministrada no início de uma dieta de caloria reduzida, dieta restritiva ouregime de exercício.

Taxas metabólicas podem ser obtidas usando qualquer métododisponível para determinação de tais taxas, por exemplo pelo uso de um ca-lorímetro respiratório. Tais métodos e aparelhos para análise de taxas meta-bólicas são conhecidos na técnica e estão descritos, por exemplo, nas Pat.U.S. Nos. 4.572.208, 4.856.531, 6.468.222, 6.616.615, 6.013.009 e6.475.158. Alternativamente, a taxa metabólica de um animal pode ser obti-da pela medida da quantidade de tecido magro versus a quantidade de teci-do gorduroso catabolisado pelo animal seguindo o período de dieta. Assim, opeso corporal total e o conteúdo de gordura podem ser medidos no final doperíodo de dieta. Em ratos, um método freqüentemente usado para determi-nar a gordura corporal total é remover cirurgicamente e pesar o coxim gordu-roso retroperitonial, uma camada de gordura localizada no retroperitônio, aárea entre a parede abdominal posterior e o peritônio parietal posterior. Opeso do coxim é considerado como estando diretamente relacionado a umpercentual da camada de gordura do animal. Como a relação entre pesocorporal e camada de gordura em ratos é linear, animais obesos tem umpercentual de camada de gordura e coxim gorduroso retroperitonial corres-pondentemente maiores.

Em outros aspectos, são fornecidos métodos para reduzir amassa de gordura pelo aumento da taxa metabólica em um indivíduo, ondeos métodos compreendem administrar uma amilina ou agonista de amilinaem uma quantidade eficaz para reduzir a massa de gordura pelo aumento dataxa metabólica do indivíduo. A massa de gordura pode ser expressa comoum percentual da massa corporal total. Em alguns aspectos, a massa degordura está reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 5%, pelo menos10%, pelo menos 15%, pelo menos 20% ou pelo menos 25% durante o cur-so do tratamento. Em um aspecto, a massa magra do indivíduo não estádiminuída durante o curso do tratamento. Em outro aspecto, a massa magrado indivíduo está mantida ou aumentada durante o curso do tratamento. Emoutro aspecto, o indivíduo está em uma dieta de caloria reduzida ou dietarestritiva. Por "dieta de caloria reduzida" entende-se que o indivíduo estáingerindo menos calorias por dia em comparação com a dieta normal domesmo indivíduo. Em um exemplo, o indivíduo está consumindo pelo menos50 calorias a menos por dia. Em outros exemplos, o indivíduo está consu-mindo pelo menos 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000calorias a menos por dia.

Em uma modalidade, é fornecido um método para alterar a dis-tribuição de gordura de um indivíduo, onde o método compreende adminis-trar uma amilina ou agonista de amilina ao indivíduo em uma quantidadeeficaz para alterar a distribuição de gordura no indivíduo. Em um aspecto, aalteração resulta de um metabolismo aumentado da gordura visceral ou gor-dura ectópica ou ambas no indivíduo. Em algumas modalidades, o métodoenvolve o metabolismo da gordura visceral ou gordura ectópica ou ambasem uma taxa de pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%ou 50% ou mais do que para a gordura subcutânea. Em um aspecto, o mé-todo resulta em uma distribuição de gordura favorável. Em uma modalidade,a distribuição de gordura favorável é uma taxa aumentada de gordura subcu-tânea para gordura visceral, gordura ectópica ou ambas. Em um aspecto, ométodo envolve um aumento na massa magra corporal, por exemplo, comoresultado de um aumento na massa celular muscular.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para reduzir aquantidade de gordura subcutânea em um indivíduo, em que o método com-preende administrar, a um indivíduo necessitado disso, uma amilina ou ago-nista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a quantidade degordura subcutânea no indivíduo. Em uma modalidade, a quantidade degordura subcutânea está reduzida em um indivíduo em pelo menos 5%. Emoutras modalidades, a a quantidade de gordura subcutânea está reduzidaem pelo menos cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% compa-rada ao indivíduo antes da administração da amilina ou agonista de amilina.

Os métodos aqui descritos podem ser usados para reduzir aquantidade de gordura visceral em um indivíduo. Em um exemplo, a gorduravisceral está reduzida em um indivíduo em pelo menos 5%. Em outros e-xemplos, a quantidade de gordura visceral está reduzida em pelo menoscerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% comparada ao indivíduoantes da administração da amilina ou agonista de amilina. A gordura visceralpode ser medida através de qualquer meio disponível para determinar aquantidade de gordura visceral em um indivíduo. Tais métodos incluem, porexemplo, tomografia abdominal por meio de rastreamento por CT e MRI.Outros métodos para determinar a gordura visceral estão descritos, por e-xemplo, nas Pat. U.S. Nos. 6.864.415, 6.850.797 e 6.487.445.

Em uma modalidade, é fornecido um método para prevenir oacúmulo de gordura ectopica ou reduzir a quantidade de gordura ectopicaem um indivíduo, em que o método compreende administrar, a um indivíduoque necessita disso, uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidadeeficaz para prevenir o acúmulo de gordura ectopica ou reduzir a quantidadede gordura ectopica em um indivíduo. Em um exemplo, a quantidade de gor-dura ectopica está reduzida em um indivíduo em pelo menos cerca de 5%comparada ao indivíduo antes da administração da amilina ou agonista deamilina. Em outros exemplos, a quantidade de gordura ectopica está reduzi-da em pelo menos cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50%. Alter-nativamente, a quantidade de gordura ectopica está proporcionalmente re-duzida em 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%,90% ou 100% em comparação a gordura subcutanea em um indivíduo. Agordura ectopica pode ser medida em um indivíduo usando qualquer métododisponível para medir gordura ectopica.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para produziruma distribuição mais favorável de gordura em um indivíduo, onde o métodocompreende administrar a um indivíduo uma amilina ou agonista de amilinaem uma quantidade eficaz para produzir uma distribuição favorável de gor-dura. Em uma modalidade, a administração de amilina ou agonista de amili-na reduz a quantidade de gordura visceral ou gordura ectopica ou ambas emum indivíduo. Em uma modalidade, os métodos reduzem preferencialmentea quantidade de gordura visceral ou gordura ectopica ou uma combinaçãode ambas, sobre a redução da gordura subcutânea. Tais métodos resultamem uma proporção maior de gordura subcutânea sobre gordura visceral ougordura ectópica. Tais proporções melhoradas podem resultar em um riscoreduzido do desenvolvimento de doenças cardiovasculares, síndrome doovário policístico, síndrome metabólica ou qualquer combinação dessas. Emuma modalidade, a gordura ectópica ou visceral é metabolizada em umataxa 5% maior do que a gordura subcutânea. Em outras modalidades, a gor-dura ectópica ou visceral é metabolizada em uma taxa pelo menos 10%,15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100% maior doque a gordura subcutânea.

Em outro aspecto ainda, os métodos fornecidos incluem o usode uma quantidade terapeuticamente eficaz de amilina ou agonista de amili-na em combinação com glicocorticosteróides. Glicocorticosteróides têm oefeito adverso de aumentar a massa gorda e diminuir a massa magra. Con-sequentemente, é contemplado que a amilina ou agonista de amilina podeser usada em conjunto com glicocorticosteróides sob condições onde o usode glicocorticosteróide é benéfico.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para alterar pa-râmetros antropométricos, por exemplo, circunferência da cintura, circunfe-rência do quadril, proporção cintura-quadril). A circunferência da cintura éuma medida de obesidade abdominal. Em uma modalidade, são fornecidosmétodos para reduzir a circunferência da cintura de um indivíduo, nos quaiso método compreende administrar, a um indivíduo que necessite disso, umaamilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a cir-cunferência da cintura do indivíduo. Em uma modalidade, a circunferência dacintura do indivíduo é reduzida em pelo menos cerca de 1%. Em outras mo-dalidades, a circunferência da cintura do indivíduo é reduzida em pelo me-nos cerca de 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% em comparação aoindivíduo antes da administração da amilina ou agonista de amilina. Em umamodalidade, a circunferência da cintura do indivíduo é reduzida em pelo me-nos cerca de 1 cm. Em outras modalidades, a circunferência da cintura doindivíduo é reduzida em pelo menos cerca de 2 cm, 3cm, 4cm, 5 cm ou 6 cmem comparação ao indivíduo antes da administração da amilina ou agonistade amilina.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para reduzir acircunferência do quadril de um indivíduo, nos quais o método compreendeadministrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilina ou agonista deamilina em uma quantidade eficaz para reduzir a circunferência do quadril doindivíduo. Em uma modalidade, a circunferência do quadril do indivíduo éreduzida em pelo menos cerca de 1%. Em outras modalidades, a circunfe-rência do quadril do indivíduo é reduzida em pelo menos cerca de 2%, 3%,4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% em comparação ao indivíduo antes daadministração da amilina ou agonista de amilina. Em uma modalidade, a cir-cunferência da cintura do indivíduo é reduzida em pelo menos cerca de 1cm. Em outras modalidades, a circunferência do quadril do indivíduo é redu-zida em pelo menos cerca de 2 cm, 3cm, 4cm, 5 cm ou 6 cm comparada aoindivíduo antes da administração da amilina ou agonista de amilina.

Também são fornecidos métodos para reduzir peso em um indi-víduo obeso mórbido primeiro pela redução do peso do indivíduo a um nívelabaixo daquele de obeso mórbido, então administrando uma amilina ou ago-nista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir adicionalmente opeso do indivíduo. Métodos para reduzir o peso de um indivíduo abaixo da-quele da obesidade mórbida incluem ingestão reduzida de calorias, atividadefísica aumentada, terapia com fármaco, cirurgia bariátrica, tal como cirurgiade bypass gástrico ou quaisquer combinações dos métodos anteriores. Emum aspecto, administrar a amilina ou agonista de amilina reduz o peso doindivíduo. Em outra modalidade, são fornecidos métodos para reduzir o índi-ce de massa corporal (IMC) em um indivíduo que tem um IMC de 40 ou me-nos pela administração de uma amilina ou agonista de amilina em umaquantidade eficaz para reduzir adicionalmente o peso do indivíduo.

Em outro aspecto, são fornecidos métodos para reduzir o riscode desenvolvimento de distúrbios metabólicos, onde o método compreendeadministrar uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficazpara reduzir o peso de um indivíduo.Em outro aspecto, são fornecidos métodos para controlar oumodificar comportamentos alimentares, nos quais os métodos compreendemadministrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilina ou agonista deamilina em uma quantidade eficaz para controlar ou modificar um compor-tamento alimentar no indivíduo. Em uma modalidade, são fornecidos méto-dos para controlar a compulsão alimentar, onde os métodos compreendemadministrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilina ou agonista deamilina em uma quantidade eficaz para controlar ou reprimir a compulsãoalimentar no indivíduo. Em uma modalidade, a amilina ou agonista de amili-na é administrada nos períodos do dia em que o indivíduo está mais prova-velmente compelido a comer. Em um aspecto a compulsão alimentar é ca-racterizada por 1) comer, em um período de tempo discreto (por exemplo,dentro de qualquer período de 2 horas), uma quantidade de comida que édefinitivamente maior do que a maioria das pessoas poderia comer duranteum período de tempo similar e sob circunstâncias similares e 2) um senti-mento de falta de controle sobre a alimentação durante o episódio (por e-xemplo, um sentimento de que não se pode parar de comer ou controlar oque ou quanto se está comendo). Em uma modalidade, agonistas de amilinapara uso no controle de compulsão alimentar incluem agonistas que temuma meia-vida in vivo maior do que a amilina.

Em uma modalidade, são fornecidos métodos para reduzir acompulsão alimentar, onde os métodos compreendem administrar, a um in-divíduo que necessite disso, uma amilina ou agonista de amilina em umaquantidade eficaz para reduzir a compulsão alimentar no indivíduo. A redu-ção da compulsão alimentar inclui uma redução na freqüência de episódiosde compulsão alimentar, na duração de episódios de compulsão alimentar,na quantidade total consumida durante um episódio de compulsão alimentar,dificuldade em resistir ao início de um episódio de compulsão alimentar ouqualquer combinação desses, como comparado com tal freqüência, duração,quantidade e resistência na ausência de administração de uma amilina ouagonista de amilina. Como tal, como meio de exemplo, em uma modalidade,um método pode compreender uma redução na freqüência de episódios decompulsão alimentar. Em outra modalidade, um método pode compreenderuma redução na duração de episódios de compulsão alimentar. Em outramodalidade ainda, um método pode compreender uma redução na quanti-dade total consumida durante um episódio de compulsão alimentar. Em ou-tra modalidade ainda, um método pode compreender uma redução na difi-culdade de resistir ao início de um episódio de compulsão alimentar.

Em algumas modalidades, a compulsão alimentar é especifica-mente compulsão alimentar por alimentos doces, alimentos achocolatados,alimentos condimentados, alimentos ricos em gordura, ou qualquer combi-nação desses, sob condições estressantes ou não estressantes. Em umamodalidade, a compulsão alimentar é especificamente compulsão alimentarpor alimentos condimentados, incluindo alimentos ricos em gordura. Em umamodalidade, a compulsão alimentar é especificamente compulsão alimentarpor alimentos doces, sob ambas as condições estressantes e não estressantes.

A compulsão alimentar pode ser determinada ou medida usandoum questionário e uma Escala de Compulsão Alimentar (BES). A severidadeda compulsão alimentar pode ser dividida em três categorias (leve, modera-da e severa) com base na pontuação de BES total (calculado pela soma daspontuações para cada item individual). Conseqüentemente, são fornecidosmétodos para reduzir a pontuação de BES de um indivíduo que compreen-dem administrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilina ou agonis-ta de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a pontuação de BES doindivíduo. Em algumas modalidades, a administração de uma amilina ou a-gonista de amilina altera a categoria de BES do indivíduo, por exemplo, desevera para moderada, de severa para leve ou de moderada para leve.

Alguns dos sinais de compulsão alimentar incluem comer gran-des quantidades de comida quando não fisicamente com fome, comer rapi-damente, esconder o alimento por que a pessoa se sente embaraçada emrelação ao quanto ele ou ela está comendo, comer até se sentir desconforta-velmente cheio ou qualquer combinação desses. Muitos comedores compul-sivos são comedores emocionais, isto é, suas compulsões alimentares sãodesencadeadas por seus estados emocionais (por exemplo, alguns comedo-res compulsivos comem quando eles estão tristes, alguns comem quandoeles estão felizes e alguns comem quando eles estão sob estresse). Umgrande número de comedores compulsivos sofrem de distúrbios de ansieda-de, tais como distúrbio obsessivo-compulsiva; problemas de controle de im-pulso; ou distúrbios de personalidade, tais como distúrbio de personalidadelimítrofe ou depressão. Em uma modalidade, a compulsão alimentar é umaresposta a condições estressantes. Outros comedores compulsivos fazemuso abusivo de substâncias, tais como uso abusivo de drogas ou uso abusi-vo de álcool. Nem todos que tem um distúrbio de compulsão alimentar estãoacima do peso, tais como aqueles comedores compulsivos com diagnósticode bulimia.

Indivíduos que comem compulsivamente freqüentemente o fa-zem em períodos do dia em particular e assim o tratamento deve ser ajustode acordo com quando o indivíduo está mais provavelmente compelido acomer. Por exemplo, se o indivíduo come compulsivamente principalmenteapós 7 horas da noite, o indivíduo deve ser medicado com a amilina ou ago-nista de amilina às 7 horas ou um pouco antes. Em uma modalidade o indi-víduo é medicado com a amilina ou agonista de amilina no momento em queele está suscetível a comer compulsivamente. Em outras modalidades, oindivíduo é medicado com a amilina ou agonista de amilina pelo menos cer-ca de 15 minutos, pelo menos cerca de 30 minutos, pelo menos cerca de 45minutos, pelo menos cerca de 1 hora, pelo menos cerca de 1hora e 30 minu-tos ou pelo menos cerca de 2 horas antes dele estar suscetível a comercompulsivamente.

Uma quantidade eficaz de amilina ou agonista de amilina nessamodalidade é uma quantidade eficaz para reprimir ou controlar o desejo doindivíduo de comer compulsivamente. Entretanto, a quantidade eficaz deamilina ou agonista de amilina mudará dependendo do indivíduo e do nívelde seu desejo de comer compulsivamente. Além disso, se o desejo do indi-víduo de comer compulsivamente é menor em um período do dia do que emoutro, a dosagem pode ser ajustada para fornecer conseqüentemente umadose menor nos períodos do dia em que o indivíduo tem um desejo menorde comer compulsivamente e para fornecer uma dose maior nos períodos dodia em que o indivíduo tem um desejo maior de comer compulsivamente. Emuma modalidade o indivíduo é tratado com uma dosagem de ataque de ami-lina ou agonista de amilina no momento em que ele tiver um grande desejode comer compulsivamente. Em outras modalidades o indivíduo é tratadocom uma dosagem de ataque de amilina ou agonista de amilina pelo menoscerca de 15 minutos, pelo menos cerca de 30 minutos, pelo menos cerca de45 minutos, pelo menos cerca de 1 hora, pelo menos cerca de 1 hora e 30minutos ou pelo menos cerca de 2 horas antes dele ter um grande desejo decomer compulsivamente. Em algumas modalidades, as dosagens de amilinaou agonista de amilina são de 25 ug a 240 ug, ou podem ser maiores oumenores.

Em certos métodos de controle de compulsão alimentar e outroscomportamentos alimentares, a amilina ou agonista de amilina é o único a-gente antiobesidade ou redutor de peso administrado ao indivíduo durante ocurso do tratamento.

Em outros métodos de controle de compulsão alimentar, o indi-víduo pode ainda ser tratado com pelo menos um outro fármaco que é co-nhecido por suprimir a fome ou controlar o apetite. Tais fármacos incluem,mas não são limitados a rimonabant, sibutramina, orlistat, exendin ou umanálogo desse, PYY ou um análogo desse, CB-1, leptina e fentermina.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para modificar aspreferências alimentares em um indivíduo, nos quais os métodos compreen-dem administrar, a um indivíduo que necessite disso, uma amilina ou agonis-ta de amilina em uma quantidade eficaz para modificar as preferências ali-mentares em um indivíduo. Como descrito aqui, os métodos da invençãoincluem a modificação das preferências alimentares sob condições de es-tresse, assim como modificação das preferências alimentares sob condiçõesnão estressantes. Em uma modalidade, as preferências alimentares incluempreferências por alimentos doces, alimentos achocolatados, alimentos con-dimentados, alimentos ricos em gordura, alimentos pobres em gordura equalquer combinação desses. Como tal, como meio de exemplo, em umamodalidade, é fornecido um método para modificar as preferências por ali-mentos doces em um indivíduo, o dito método compreendendo administraruma quantidade eficaz de uma amilina ou agonista de amilina a um indivíduoque deseja modificar as preferências por alimentos doces, em que a ditaquantidade é eficaz para modificar a preferência do indivíduo por alimentosdoces. Em outra modalidade, é fornecido um método para modificar as pre-ferências por alimentos achocolatados. Em outra modalidade, é fornecidoum método para modificar as preferências por alimentos condimentados. Emoutra modalidade, é fornecido um método para modificar as preferências poralimentos ricos em gordura. Em outra modalidade, é fornecido um métodopara modificar as preferências por alimentos pobres em gordura.

As modificações nas preferências alimentares podem incluir umadiminuição na preferência por tais alimentos, uma diminuição na quantidadede ingestão de tais alimentos, um aumento da preferência de um tipo de ali-mento sobre outro tipo de alimento, alterações na freqüência de desejos portais alimentos, duração dos desejos por tais alimentos, intensidade dos de-sejos por tais alimentos, dificuldade em resistir aos desejos por tais alimen-tos, freqüência de alimentação em resposta aos desejos por tais alimentos, equalquer combinação desses, como comparado a tal freqüência, intensidadeou resistência na ausência de administração de uma amilina ou agonista deamilina.

Em outra modalidade ainda, um método pode compreender re-duzir a preferência do indivíduo por alimentos doces. Em outra modalidadeainda, um método pode compreender reduzir a preferência do indivíduo poralimentos condimentados. Em outra modalidade ainda, um método podecompreender reduzir a preferência do indivíduo por alimentos ricos em gor-dura. Em outra modalidade ainda, um método pode compreender aumentara preferência do indivíduo por alimentos pobres em gordura. Em outra moda-lidade ainda, um método pode compreender aumentar a preferência do indi-víduo por alimentos condimentados sobre alimentos doces. Em outra moda-lidade ainda, um método pode compreender aumentar a preferência do indi-víduo por alimentos condimentados sobre alimentos achocolatados. Em ou-tra modalidade ainda, um método pode compreender aumentar a preferênciado indivíduo por alimentos pobres em gordura sobre alimentos ricos em gordura.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para tratar, redu-zir ou prevenir desejos alimentares em um indivíduo, os métodos compreen-dendo administrar ao indivíduo uma amilina ou um agonista de amilina emuma quantidade eficaz para tratar, reduzir ou prevenir desejos alimentaresem um indivíduo. Por desejos alimentares é entendido significar o desejo doindivíduo por um tipo particular de alimento. Os desejos alimentares maiscomuns incluem desejos por alimentos adocicados, tais como chocolate edesejos por alimentos condimentados tais como petiscos salgados e petis-cos gordurosos. Os desejos alimentares podem ser medidos pelo uso de umquestionário tanto conhecido na técnica quanto criado pela pessoa que es-tuda os desejos alimentares. Tal questionário preferivelmente graduará onível de desejo alimentar em uma escala numérica, com o indivíduo mar-cando 0 se ele não tem desejos alimentares e marcando 10 (se a escala éde 1-10) se o indivíduo tem desejos alimentares severos. O questionário pre-ferivelmente incluirá também perguntas como quais os tipos de alimento oindivíduo está desejando.

Em uma modalidade, um método pode compreender reduzir afreqüência de um indivíduo de desejos por alimentos doces, alimentos acho-colatados, alimentos condimentados, alimentos ricos em gordura, etc. Emoutra modalidade, um método pode compreender reduzir a intensidade dedesejos de um indivíduo por alimentos doces, alimentos achocolatados, ali-mentos condimentados, alimentos ricos em gordura, etc. Em outra modali-dade ainda, um método pode compreender reduzir a dificuldade do indivíduode resistir aos desejos por alimentos doces, alimentos achocolatados, ali-mentos condimentados, alimentos ricos em gordura, etc. Em outra modali-dade ainda, um método pode compreender reduzir a freqüência do indivíduode comer em resposta aos desejos por alimentos doces, alimentos achocola-tados, alimentos condimentados, alimentos ricos em gordura, etc. Em outramodalidade ainda, um método pode compreender reduzir a ingestão peloindivíduo de alimentos doces. Em outra modalidade ainda, um método podecompreender reduzir a ingestão pelo indivíduo de alimentos achocolatados.Em outra modalidade ainda, um método pode compreender reduzir a inges-tão pelo indivíduo de alimentos condimentados. Em outra modalidade ainda,um método pode compreender reduzir a ingestão pelo indivíduo de alimen-tos ricos em gordura.

Uma quantidade eficaz de amilina ou agonista de amilina paraos métodos de tratamento de desejos alimentares é uma quantidade eficazpara reduzir o desejo de um indivíduo por um tipo de comida em particular.Assim, a quantidade eficaz é diferente dependendo do indivíduo a ser trata-do e da intensidade de seu desejo por um alimento em particular. Por exem-plo, uma pessoa que está sofrendo um estresse pode desejar alimentos a-docicados mais do que uma pessoa que não sofre de estresse e portantopode requerer uma dose maior da amilina ou agonista de amilina. Além dis-so, uma pessoa que sofre da síndrome de ovário policístico pode desejaralimentos ricos em carboidratos e portanto pode requerer uma dose maiorde amilina ou agonista de amilina.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos de redução doestresse associado com ingestão calórica diminuída em um indivíduo, osmétodos compreendendo administrar a um indivíduo que necessite dissouma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficaz para re-duzir o estresse associado com ingestão calórica reduzida. Por estresse as-sociado com ingestão calórica diminuída é pretendido significar sentimentosde depressão ou ansiedade trazidos pela diminuição de calorias a seremconsumidas pelo indivíduo. Por redução de estresse é pretendido significar amelhora do estado de depressão do indivíduo (pela melhora da sensação debem estar geral e do humor) ou a redução do sentimento de ansiedade doindivíduo. Uma quantidade eficaz de amilina ou agonista de amilina para osmétodos de redução de estresse associado com ingestão calórica diminuídaé uma quantidade eficaz para melhorar a depressão (ou sensação de bemestar geral e humor) ou a redução do sentimento de ansiedade do indivíduo.Assim, a quantidade eficaz é diferente dependendo do indivíduo a ser trata-do e da intensidade de sua depressão ou ansiedade causada pela ingestãocalórica diminuída.

Por redução de peso entende-se que o indivíduo perde uma por-ção de seu peso corporal total durante o decorrer do tratamento (se o cursodo tratamento for de dias, semanas, meses ou anos). Alternativamente, re-dução de peso pode ser definida como uma diminuição na proporção demassa gorda para massa magra (em outras palavras, o indivíduo perdemassa gorda, mas mantém ou ganha massa magra, sem necessariamenteuma correspondente perda no peso corporal total). Uma quantidade eficazde amilina ou agonista de amilina administrada nessa modalidade é umaquantidade eficaz para reduzir o peso corporal do indivíduo durante o decor-rer do tratamento ou alternativamente uma quantidade eficaz para reduzir opercentual de massa gorda do indivíduo durante o decorrer do tratamento.

Em certas modalidades, o peso corporal do indivíduo é reduzido, durante odecorrer do tratamento, em pelo menos cerca de 1%, em pelo menos cercade 5%, em pelo menos cerca de 10%, em pelo menos cerca de 15% ou empelo menos cerca de 20%. Alternativamente, o percentual de massa gordado indivíduo está reduzido, durante o decorrer do tratamento, em pelo me-nos 1%, em pelo menos 5%, em pelo menos 10%, em pelo menos 15% , empelo menos 20% ou pelo menos 25%.

Em certas modalidades, são fornecidos métodos para reduzir opeso em um indivíduo que compreendem administrar ao indivíduo umaquantidade eficaz de amilina ou agonista de amilina em uma dose em bolusuma ou mais vezes por dia. Uma dose em bolus é uma dosagem intermiten-te de medicamento (ao contrário da infusão contínua). Um indivíduo podeser medicado com uma ou mais doses em bolus por dia. A dose em boluspode ser a mesma não importando quando ela é administrada ao indivíduo,ou pode ser ajustada tal que o indivíduo é medicado com uma dose em bo-lus maior em certos períodos do dia quando comparara com outros. A admi-nistração de uma amilina ou agonista de amilina em certas formulações, porexemplo, formulações de liberação sustentada, a dose em bolus pode seradministrada menos freqüentemente, por exemplo, uma vez a cada três di-as, uma vez por semana, duas vezes por mês, uma vez a cada mês. Alémdisso, o intervalo de tempo entre as doses em bolus é preferivelmente longoo bastante para permitir que o fármaco administrado na dose em bolus ante-rior seja depurado da corrente sangüínea do indivíduo. Em algumas modali-dades, agonistas da amilina que tem uma meia-vida maior do que a amilinasão administrados.

Em outras modalidades, são fornecidos métodos para reduçãode peso em um indivíduo que compreendem administrar ao indivíduo umaquantidade eficaz de amilina ou agonista de amilina em uma dose contínua.Por dose contínua entende-se significar a infusão contínua do fármaco, porexemplo, por injeção intravenosa ou um adesivo transdérmico. Alternativa-mente, uma dose contínua pode ser administrada oralmente na forma deuma cápsula de liberação controlada ou comprimido que libera o fármaco nosistema do indivíduo durante um período de tempo. Quando administradapor uma dose contínua, o fármaco é liberado durante um período de cercade 1 hora, mais preferivelmente o fármaco é liberado durante um período decerca de 2, 3, 4, 5,6,7,8,9,10,11,12,18 ou 24 horas.

Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para reduçãode peso nos quais a amilina ou agonista de amilina não é co-administradacom um outro fármaco conhecido por causar perda de peso. Em outras mo-dalidades, são fornecidos métodos para redução de peso nos quais pelomenos um outro fármaco que é conhecido por causar perda de peso é co-administrado ao indivíduo com a amilina ou agonista de amilina. Tal outrofármaco pode ter seu efeito de perda de peso por qualquer de inúmerosmeios, incluindo, mas não limitados a supressão de fome, controle de apeti-te, aumento de metabolismo, etc. Em uma modalidade, pelo menos um outrofármaco que é conhecido por causar perda de peso é co-administrado com aamilina ou agonista de amilina. Por "co-administrado" entende-se que a ami-lina ou agonista de amilina é administrada em uma única administração comum segundo composto redutor de obesidade, simultaneamente como dosesseparadas ou administrados seqüencialmente. Administração seqüencialrefere-se a administração de amilina ou agonista de amilina tanto antesquanto depois do segundo fármaco que é conhecido por causar perda depeso. Em um aspecto, a amilina ou agonista de amilina é administrada cercade 30 minutos antes ou depois de pelo menos um outro fármaco que é co-nhecido por causar perda de peso, mais preferivelmente cerca de 1, 2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 horas antes ou depois de pelo menos um outro fár-maco que é conhecido por causar perda de peso. O outro fármaco que éconhecido por causar perda de peso pode ser administrado como uma doseem bolus ou como uma dose contínua.

Amilina e agonistas de amilina reduzem ou protegem contra oestresse e seus efeitos e tem efeitos ansiolíticos, antidepressivos e antipsi-cóticos, como é descrito no Pedido de Pat. U.S. Nos. 60/667.335 e60/760.583 comumente pertecente e no Pedido PCT attorney docket no.0110-PCT-0, depositado em 31 de março de 2006, cada um dos quais estáincorporado aqui por referência.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para reduzir oestresse associado com o uso de farmacos que causam perda de peso, osmétodos compreendendo administrar a um indivíduo que necessite dissouma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir oestresse associado com o uso de farmacos que causam perda de peso. Porestresse associado com o uso de farmacos que causam perda de peso en-tende-se significar sentimentos de depressão ou ansiedade trazidos peladiminuição das calorias a serem consumidas pelo indivíduo. Por redução deestresse entende-se significar melhora do estado de depressão (por melhorade sua sensação de bem estar geral e humor) ou redução do sentimento deansiedade.

Farmacos no mercado ou sob investigação clínica que controlamo apetite por atingir o cérebro, tais como rimonabant e sibutramina, podemcausar ao indivíduo que as toma sentimentos de depressão ou ansiedade.Rimonabant atinge os receptores endocanabinóides no cérebro assim comoreceptores no tecido adiposo, que são conhecidos por desempenhar um pa-pel nos desejos alimentares. Sibutramina parece agir pelo aumento da ativi-dade de norepinefrina e serotonina no cérebro. Amilina e agonistas de amili-na melhoram os sentimentos de depressão ou ansiedade causados pelo usode tais farmacos por melhorar o estado depressivo do indivíduo e/ou reduziro nível de ansiedade do indivíduo.

Uma quantidade eficaz de amilina ou de um agonista de amilinapara os métodos que reduzem o estresse causado pelo uso de farmacosque causam perda de peso é uma quantidade eficaz para melhorar a de-pressão (ou sensação de bem estar e humor) ou uma quantidade eficaz parareduzir o sentimento de ansiedade. Assim, a quantidade eficaz é diferentedependendo do indivíduo a ser tratado e da intensidade de sua depressãoou ansiedade causada pelo uso de farmacos que causam perda de peso.

Em outro aspecto, são fornecidos métodos para reduzir a perdaóssea em um indivíduo que tenha feito a cirurgia bariatrica, os métodoscompreendendo administrar ao indivíduo que necessite disso uma amilina ouagonista de amilina em uma quantidade eficaz para reduzir a perda óssea doindivíduo. Por perda óssea entende-se a redução da densidade óssea quan-do comparada a densidade óssea do indivíduo pré-cirurgia. Por reduzir aperda óssea entende-se prevenir qualquer perda óssea ou redução da quan-tidade de perda óssea quando comparada a um indivíduo similar que fez acirurgia bariatrica mas não foi tratado pelos métodos da presente invenção.A perda óssea pode ser medida por quaisquer meios conhecidos, incluindo ouso de densitometria óssea DEXA para medir a densidade óssea. A cirurgiabariatrica inclui, mas não está limitada a cirurgia gástrica em Y de Roux deSapala-Wood Micropouch, banda gástrica ajustável, gastroplastia em bandavertical, bypass gástrico em Y de Roux, derivação biliopancreática e "duode-nal switch".

Uma quantidade eficaz de amilina ou de um agonista de amilinapara os métodos que reduzem a perda óssea em um indivíduo que tenhafeito a cirurgia bariatrica é uma quantidade eficaz para prevenir ou lentificar areabsorção óssea. Além da amilina ou de agonista de amilina, o indivíduopode ser tratado com farmacos adicionais conhecidos na técnica para pre-venir ou lentificar a perda óssea. Tais farmacos incluem, mas não são limita-dos a risedronato, alendronato, raloxifeno, calcitonina e teriparitida.

Em outra modalidade são fornecidos métodos para aumentar atermogênese em um indivíduo, os métodos compreendendo administrar aoindivíduo que necessite disso uma amilina ou agonista de amilina em umaquantidade eficaz para aumentar a termogênese em um indivíduo. Termo-gênese é o processo de liberação de calorias como calor pelo aumento dataxa metabólica corporal. A termogênese é ativada por alguns mecanismos,incluindo suplementos, nutrição, exercício e exposição ao frio.

Em outra modalidade são fornecidos métodos para aumentar ometabolismo oxidativo em um indivíduo, os métodos compreendendo admi-nistrar ao indivíduo que necessite disso uma amilina ou agonista de amilinaem uma quantidade eficaz para aumentar o metabolismo oxidativo no indiví-duo. Metabolismo oxidativo é o processo pelo qual o oxigênio é usado paraproduzir energia a partir de carboidratos (açúcares).

Em outro aspecto, são fornecidos métodos para induzir umasensação de plenitude, onde os métodos compreendem administrar ao indi-víduo necessitado ou desejoso disso, uma amilina ou agonista de amilina emuma quantidade eficaz para induzir uma sensação de plenitude ou sacieda-de no indivíduo. Em uma modalidade, são fornecidos métodos que induzemuma sensação de plenitude em um indivíduo que compreendem administrar,ao indivíduo necessitado ou desejoso disso, uma amilina ou agonista deamilina em uma quantidade eficaz para induzir uma sensação de plenitudeou saciedade no indivíduo após o indivíduo ter comido menos alimento doque a sensação de plenitude ou saciedade induzida na ausência da adminis-tração. Em algumas modalidades, a administração de amilina ou agonista deamilina induz uma sensação de plenitude ou saciedade após o indivíduo tercomido pelo menos cerca de 5% a menos de alimento, pelo menos cerca de10% a menos de alimento, pelo menos cerca de 15% a menos de alimento,pelo menos cerca de 20% a menos de alimento ou pelo menos cerca de 25% a menos de alimento.

Em outro aspecto ainda, é fornecido um método de controlar afome em um indivíduo, em que o método compreende administrar ao indiví-duo uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para con-trolar a fome no indivíduo.

Em um aspecto adicional ainda, é fornecido um método de pro-longar a sensação de saciedade em um indivíduo, em que o método com-preende administrar ao indivíduo uma amilina ou agonista de amilina emuma quantidade eficaz para prolongar a sensação de saciedade em um indivíduo.

Em um outro aspecto ainda, é fornecido um método de reduzir,melhorar ou prevenir a preocupação do indivíduo com comida, em que o mé-todo compreende administrar ao indivíduo uma amilina ou agonista de amili-na em uma quantidade eficaz para reduzir, melhorar ou prevenir a preocu-pação do indivíduo com comida.

Em um aspecto adicional, é fornecido um método para reduzir aingestão calórica de um indivíduo, em que o método compreende administrarao indivíduo uma amilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficazcomo substituição de uma refeição ou petisco para o indivíduo. Em um as-pecto adicional ainda, é fornecido um método para reduzir a ingestão calóri-ca pela redução do tamanho de uma refeição, em que o método compreen-de administrar ao dito indivíduo uma amilina ou agonista de amilina em umaquantidade eficaz para reduzir o tamanho de uma refeição ingerida pelo indi-víduo.

Em outro aspecto, é fornecido um método para controlar a inges-tão de alimento, em que o método compreende administrar ao indivíduo umaamilina ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para causar o con-trole ou reprimir a ingestão de alimento pelo indivíduo. Em outro aspecto a-inda, é fornecido um método para assegurar ou auxiliar na obediência deuma dieta de caloria reduzida ou dieta restritiva, em que o método compre-ende administrar uma quantidade eficaz de uma amilina ou agonista de ami-lina ao dito indivíduo. Em outra modalidade, é fornecido um método parareduzir a ingestão calórica de um indivíduo, em que o método compreendeadministrar ao indivíduo uma amilina ou agonista de amilina em períodos dodia em particular quando o indivíduo mais provavelmente comerá demais oucomerá alimentos doces ou condimentados.

Em um aspecto adicional, é fornecido um método de ajustar umponto de acerto no indivíduo tal que a propensão do corpo para a homeosta-se é ajustada para um ponto de acerto saudável, em que o método compre-ende administrar uma quantidade eficaz de uma amilina ou agonista de ami-lina ao dito indivíduo. Em outra modalidade, é fornecido um método de man-ter a perda de peso ou manter o peso perdido, em que o método compreen-de administrar uma quantidade eficaz de uma amilina ou agonista de amilinapara manter a perda de peso do indivíduo ou o peso perdido pelo indivíduo.

Em uma modalidade, a perda de peso é mantida pelo restabelecimento doponto de ajuste do indivíduo.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para melhorar,moderar ou prevenir um efeito colateral adverso de um agente redutor daobesidade em um indivíduo, os métodos compreendendo administrar ao in-divíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quantidade eficazpara melhorar, moderar ou prevenir um efeito colateral adverso de um agen-te redutor da obesidade tomado pelo indivíduo. Em outra modalidade, sãofornecidos métodos para melhorar, moderar ou prevenir um efeito colateralpsicológico adverso de um agente redutor da obesidade em um indivíduo, osmétodos compreendendo administrar ao indivíduo uma amilina ou um ago-nista de amilina em uma quantidade eficaz para melhorar, moderar ou pre-venir um efeito colateral psicológico adverso de um agente redutor da obesi-dade.

Em outra modalidade, são fornecidos métodos para melhorar,moderar ou prevenir um efeito colateral gastrointestinal adverso de um agen-te redutor da obesidade em um indivíduo, os métodos compreendendo ad-ministrar ao indivíduo uma amilina ou um agonista de amilina em uma quan-tidade eficaz para melhorar, moderar ou prevenir um efeito colateral gastro-intestinal adverso de um agente redutor da obesidade tomado pelo indivíduo.Em tal modalidade, a amilina ou agonista de amilina tem um efeito gastro-protetor.

Adicionalmente, em qualquer dos aspectos da invenção aquidescritos onde a amilina ou agonista de amilina é co-administrada com pelomenos um agente redutor de obesidade (ou antiobesidade) ou fármaco redu-tor de peso, o uso da amilina ou agonista de amilina em combinação compelo menos um agente redutor de obesidade (ou antiobesidade) ou fármacoredutor de peso resulta em um efeito sinérgico.

Nas modalidades aqui descritas onde a amilina ou agonista deamilina é co-administrada com pelo menos um agente redutor de obesidade(ou antiobesidade) ou fármaco redutor de peso, o uso da amilina ou agonistade amilina em combinação com pelo menos um agente redutor de obesidade(ou antiobesidade) ou fármaco redutor de peso resulta em uma necessidadede dosagem mais baixa de pelo menos um dos compostos, com o mesmoefeito.

Em outro aspecto, também é possível combinar uma amilina ouagonista de amilina útil nos métodos aqui descritos com um ou mais ingredi-entes ativos úteis no controle, prevenção ou tratamento da obesidade oucondições ou distúrbios da alimentação. Por exemplo, em uma modalidadesão fornecidos métodos para reduzir o IMC de um indivíduo que tem um IMCde 40 ou menos pela administração de uma amilina ou agonista de amilinaem combinação com pelo menos um segundo agente redutor de obesidadeem quantidades eficazes para reduzir o IMC de um indivíduo. Tais segundoscompostos redutores de obesidade incluem sibutramina, orlistat, leptina erimonabant. Por exemplo, amilina ou agonista de amilina pode ser combina-da com um ou mais outros compostos, em uma forma de dosagem unitáriaou em formas de dosagem separadas pretendidas para administração simul-tânea ou seqüencial a um indivíduo necessitado. Em uma modalidade, amili-na ou agonista de amilina é co-administrada com o segundo composto redu-tor de obesidade, por exemplo, como uma administração única com um se-gundo composto redutor de obesidade, simultaneamente como doses sepa-radas ou seqüencialmente administrada onde a administração dos compos-tos pode ser separada em períodos de segundos, minutos ou horas. A admi-nistração seqüencial pode incluir também a administração de uma primeirasérie de um redutor de obesidade, por exemplo, uma amilina ou um agonistade amilina, seguida por pelo menos uma série de outro agente redutor deobesidade. As séries do tratamento podem ou não se poder.

Quando administrada seqüencialmente, a combinação pode seradministrada em duas ou mais administrações. Em uma modalidade alterna-tiva, é possível administrar uma ou mais amilinas ou agonistas de amilina eum ou mais ingredientes ativos adicionais por diferentes vias. O versado re-conhecerá que uma variedade de ingredientes ativos podem ser administra-dos em combinação com amilina ou agonista de amilina que podem agir pa-ra aumentar ou intensificar sinergicamente o controle, prevenção, melhora,atenuação ou tratamento de obesidade ou condições ou distúrbios alimenta-res.

De acordo com os métodos fornecidos aqui, quando co-administrada com pelo menos um outro fármaco que reduz a obesidade (ouantiobesidade) ou que reduz o peso, uma amilina ou agonista de amilina po-de ser: (1) co-formulada e administrada ou liberada simultaneamente emuma formulação combinada; (2) liberada por alternaçao ou em paralelo comoformulações separadas; ou (3) por qualquer outro regime de combinação deterapia conhecido na técnica. Quando liberada em terapia de alternaçao, osmétodos fornecidos podem compreender administrar ou liberar os ingredien-tes ativos seqüencialmente, por exemplo, em solução, emulsão, suspensão,comprimidos, pílulas ou cápsulas em separado ou por injeções diferentes emseringas separadas. Em geral, durante a terapia de alternaçao, uma dosa-gem eficaz de cada ingrediente ativo é administrada seqüencialmente, isto é,seriadamente, enquanto que na terapia simultânea, dosagens eficazes dedois ou mais ingredientes ativos são administradas juntas. Várias seqüên-cias de terapia de combinação intermitente também podem ser usadas.

Em certas modalidades, os compostos fornecidos aqui podemser usados com outros auxiliares de dieta comercialmente disponíveis ououtros agentes antiobesidade, tais como, por exemplo, PYY e agonistas dePYY, GLP-1 e agonistas de GLP-1, um inibidor de DPPIV, CCK e agonistasde CCK, exendina e agonistas de exendina, GIP e agonistas de GIP e lepti-na e agonistas de leptina. Agentes antiobesidade adicionais para uso nosmétodos fornecidos que estão em desenvolvimento atualmente também sãode interesse nos métodos da presente invenção. Outros agentes antiobesi-dade incluem fentermina, fenfluramina, sibutramina, rimonabant e orlistat.

Como tal, em um aspecto, a amilina e agonistas de amilina po-dem ser usadas como parte de uma terapia de combinação para o controle,prevenção ou tratamento de obesidade e condições e distúrbios da alimen-tação. Os compostos preferidos usados como parte de uma terapia de com-binação para tratar obesidade ou reduzir o peso incluem, mas não são limi-tados a agentes que atuam no sistema nervoso central que afetam neuro-transmissores ou canais de íons neurais, incluindo antidepressivos (bupropi-ona), inibidores da reutilização de noradrenalina (GW320659), agonistas se-letivos do receptor 2c de serotonina, agonistas seletivos do receptor 2c de5HT, agentes anticonvulsivantes (topiramato, zonisamida), alguns antagonis-tas de dopamina e antagonistas do receptor canabinóide-1 (antagonistas doreceptor de CB-1) (rimonabant); agentes da via leptina/insulina/sistema ner-voso central, incluindo análogos de leptina e/ou promotores do receptor deleptina, fator neurotrófico ciliar (Axokine), neuropeptídeo Y a antagonistas dopeptídeo relacionado a agouti, promotores da transcrição regulada de propi-omelanocortina e cocaína e anfetamina, análogos do hormônio estimulantede a-melanócito, agonistas do receptor 4 de melanocoritina e agentes queafetam o metabolismo/atividade da insulina, que incluem inibidores de prote-ína tirosina fosfatase-1B, antagonistas do receptor v ativado por proliferadorde peroxissoma, bromocriptina de curta duração (ergoset), agonistas de so-matostatina (octreotide) e adiponectin/Acrp30 (Famoxin ou Indutor da Oxida-ção Metabólica de Ácido Graxo); agentes da via gastrointestinal-neural, in-cluindo aqueles que aumentam a atividade da colecistocinina (CCK), ativida-de de PYY, atividade de NPY, e atividade de PP, aumentam a atividade dopeptídeo 1 semelhante ao glucagon (exendin 4, liraglutida, inibidores da di-peptidil peptidase IV) e aqueles que diminuem a atividade da grelina, assimcomo análogos de amilina (pramlintida); agentes que podem aumentar a ta-xa metabólica de repouso (estimuladores/agonistas seletivos de (3-3, homó-logos de proteína não acoplada e agonistas do receptor de tireóide); outrosagentes diversos, incluindo antagonistas do hormônio que concentra a me-lanina, análogos de fitostanol, óleos funcionais, P57, inibidores de amilase,fragmentos de hormônio do crescimento, análogos sintéticos de sulfato dede-hidroepiandrosterona, antagonistas da atividade de 11 B-hidroxiesteróidedesidrogenase tipo 1 de adipócito, agonistas do hormônio que libera a corti-cotropina, inibidores da síntese de ácidos graxos (cerulenia e C75), inibido-res de carboxipeptidase, indanona/indanóis, aminoesteróides (trodusquemi-na/trodulamina) e outros inibidores da lípase gastrointestinal (ATL962); anfe-taminas, tais como dextroanfetamina; outros agentes adrenérgicos simpati-comiméticos, incluindo fentermina, benzofetamina, fendimetrazina, mazindole dietilpropiona.

Outros compostos preferidos incluem ecopipam; oxintomodulina(OM). inibidores de polipeptídeo insulinotrópico dependente de glicose (GIP);peptídeo que libera gastrina; neuromedina B; enterostatina; amfebutamona,,SR-58611; CP-045598; AOD-0604; QC-BT16; rGLP-1; 1426 (HMR-1426); N-5984; ISIS-113715; solabegron; SR-147778; Org-34517; melanotan-ll; ceti-listat; c-2735; c-5093; c-2624; APD-356; radafaxine; fluasterona; GP-389255;856464; S-2367; AVE-1625; T-71; oleoil-estrona; peptideo YY [3-36] intrana-sal; agonistas do receptor de androgenio; PYY 3-36; DOV-102677; tagatose;SLV-319; 1954 (Aventis Pharma AG); oxintomodulina, Thiakis; bromocripti-na, PLIVA; diabetes/terapia de hiperlipidemia , Yissum; CKD-502; agonistasdo receptor beta da tireóide; agonista do adrenoceptor beta-3; agonistas deCDK-A; antagonista de galanina; agonistas D1/D2 de dopamina; modulado-res de melanocortina; verongamina; antagonistas do neuropeptídeo Y; anta-gonistas do receptor do hormônio que concentra melanina; agonistas duplosde PPAR alfa/gama; CGEN-P-4; inibidores de quinase; antagonistas do re-ceptor humano de MCH; antagonistas de GHS-R; agonistas do receptor degrelina; inibidores de DG70; cotinina; inibidores de CRF-BP; agonistas deurocortina; UCL-2000; impentamina; receptor adrenérgico (3-3; agonistas dopentapeptideo de MC4; trodusquemina; GT-2016; C-75; CPOP; antagonistasdo receptor de MCH-1; aminoesteróis; antagonistas de orexina-1; antagonis-tas do receptor do neuropeptídeo Y5; DRF-4158; PT-15; inibidores da PTPa-se; A37215; SA-0204; metabólitos de glico-lipídios; agonista de MC-4; produ-lestan; inibidores de PTP-1B; GT-2394; antagonistas do neuropeptídeo Y5;moduladores do receptor de melanocortina; MLN-4760; agonistas duplos dePPAR gama/delta; NPY5RA-972; agonista do receptor de 5-HT2C; antago-nistas do receptor do neuropeptídeo Y5 (análogos de fenil uréia); antagonis-tas de AGRP/MC4; antagonistas do neuropeptídeo Y5 (benzimidazol); anta-gonistas de glicocorticóides; antagonistas de MCHR1; inibidores da Acetil-CoA carboxilase; R-1496; moduladores de HOB1; NOX-B11; peptídeo YY 3-36 (eligen); moduladores de 5-HT 1; inibidores da lipase pancreática; GRC-1087; antagonistas de CB-1; antagonistas de MCH-1; LY-448100; agonistasBRS3 de bombesina; antagonistas de grelina; antagonistas de MC4; modu-ladores de estearoil-CoA desaturase; antagonistas de histamina H3; agonis-tas de PPARpan; EP-01492; inibidores da lipase sensível a hormônio; inibi-dores de proteína 4 que se liga a ácidos graxos; derivados de tiolactona; ini-bidores da proteína tirosina fosfatase 1B; antagonista de MCH-1; P-64; ligan-tes de PPAR gama; antagonistas do hormônio que concentra a melanina;gastroprocinéticos de tiazol; PA-452; T-226296; A-331440; vacinas de imu-nofármacos; diabetes/terapêutica de obesidade (Bioagency, Biofrontera Dis-covery GmbH); P-7 (Genfit); DT-011M; inibidor de PTP1B; conjugados depeptídeo anti-diabético; agonistas de KATP; terapêutica de obesidade (Lexi-con); agonistas de 5-HT2; antagonistas do receptor de MCH-1; GMAD-1/GMAD-2; STG-a-MD; antagonista do neuropeptídio Y; inibidores da angio-gênese; agonistas do receptor acoplado a proteína G; terapêutica nicotínica(ChemGenex); agentes antiobesidade (Abbott); moduladores do neuropeptí-dio Y; hormônio que concentra melanina; GW-594884A; agonista de MC-4R;antagonistas H3 de histamina; moduladores de GPCR orfã; MITO-3108;NLC-002; HE-2300; IGF/IBP-2-13; agonistas de 5-HT2C; ML-22952; antago-nistas do receptor do neuropeptídeo Y; AZ-40140; terapia antiobesidade(Nisshin Flour); GNTI; moduladores do receptor de melanocortina; inibidoresda alfa-amilase; antagonista do neuropeptídeo Y1; agonistas do adrenocep-tor beta-3; produtos do gene ob (Eli Lilly & Co.); SWR-0342-SA; agonistas doadrenoceptor beta-3; SWR-0335; SP-18904; miméticos de insulina oral; a-gonistas do adrenoceptor beta-3; antagonistas de NPY-1; agonistas (3-3; te-rapêutica de obesidade (7TM Pharma); inibidores de 11 beta-hidroxisteróidedesidrogenase (HSD)1; QRX-431; E-6776; RI-450; antagonistas de melano-cortina-4; agonistas do receptor de melanocortina 4; terapêutica de obesida-de (CuraGen);miméticos de leptina; A-74498; leptina de segunda geração;NBI-103; CL-314698; CP-114271; agonistas do adrenoceptor beta-3; NMI-8739; UCL-1283; BMS-192548; CP-94253; PD-160170; agonista nicotínico;LG-100754; SB-226552; LY-355124; CKD-711; L-751250; inibidores dePPAR; terapêutica de proteína G; terapia de obesidade (Amylin Pharmaceu-ticals Inc.); BW-1229; anticorpo monoclonal (ObeSys/CAT); L-742791; (S)-sibutramina; MBU-23; YM-268; BTS-78050; genes de proteína semelhante atubby; genomas (distúrbios da alimentação; Allelix/Lilly); MS-706; Gl-264879A; GW-409890; análogos de FR-79620; terapia de obesidade (Hybri-genics SA); ICI-198157; ESP-A; agonistas de 5-HT2C; PD-170292; AIT-202;LG-100641; GI-181771; terapêutica antiobesidade (Genzyme); modulador deleptina; miméticos de GHRH; terapia da obesidade (Yamanouchi Pharma-ceutical Co. Ltd.); SB-251023; CP-331684; BIBO-3304; colesten-3-onas; LY-362884; BRL-48962; antagonistas de NPY-1; A-71378; ®-didesmetilsibutramina; derivados de amida; terapêutica da obesidade (Bris-tol-Myers Squibb Co.); terapêutica da obesidade (Ligand PharmaceuticalsInc.); LY-226936; antagonistas de NPY; agonistas de CCK-A; FPL-14294;PD-145942; ZA-7114; CL-316243; SR-58878; R-1065; BIBP-3226; HP-228;talibegron; FR-165914; AZM-008; AZM-016; AZM-120; AZM-090; vomerofe-rina; BMS-187257; D-3800; AZM-131; descoberta de gene (Axys/Glaxo);BRL-26830A; SX-013; moduladores de ERR; adipsina; AC-253; A-71623; A-68552; BMS-210285; TAK-677; MPV-1743; terapêutica da obesidade (Mo-dex); GI-248573; AZM-134; AZM-127; AZM-083; AZM-132; AZM-115; exopi-pam; SSR-125180; terapêutica da obesidade (Melacure Therapeutics AB);BRL-35135; SR-146131; P-57; AZM-140; CGP-71583A; RF-1051; BMS-196085; manifaxina; agonistas beta-3; DMNJ (Korea Research Institute ofBioscience and Biotechnology); BVT-5182; LY-255582; SNX-024; antagonis-tas de galanina; antagonistas de neurocinina-3; dexfenfluramina; mazindol;dietilpropiona; fendimetrazina; benzofetamina; amfebutmona; sertralina; met-formina; AOD-9604; ATL-062; BVT-933; GT389-255; SLV319; HE-2500;PEG-axoquina; L-796568; e ABT-239.

Em algumas modalidades, compostos para uso em combinaçãocom uma amilina ou agonista de amilina incluem rimonabant, sibutramina,orlistat, PYY ou um análogo desse, antagonista de CB-1, leptina, fenterminae análogos de exendina. Faixas de dosagens exemplares incluem resina defentermina (30 mg pela manhã), cloridrato de fenfluramina (20 mg três vezespor dia), e uma combinação de resina de fentermina (15 mg pela manhã) ecloridrato de fenfluramina (30 mg antes da refeição noturna) e sibutramina(10-20 mg). Weintraub et ai (1984) Arch. Intern. Med. 144:1143-1148.

Em outras modalidades, os métodos fornecidos compreendem aadministração de uma amilina ou um agonista de amilina em combinaçãocom pelo menos um outro agente antiobesidade com a condição de que ooutro agente antiobesidade não seja um antagonista do receptor de NPY1,um antagonista do receptor de NPY5, um agonista do receptor de NPY2, umagonista do receptor de NPY4, uma leptina, um derivado de leptina, um ago-nista de leptina, um CNTF, um agonista/modulador de CNTF, um derivadode CNTF, um antagonista de MCH1R, um antagonista de MCH2R, um ago-nista de melanocortina 4, um agonista do receptor de MC4, um antagonis-ta/agonista inverso de um receptor canabinóide (CB-1), um antagonista degrelina, um agonista de 5HT2c, um inibidor da reutilização de serotonina, uminibidor do transporte de serotonina, uma exendina, um derivado de exendi-na, um agonista de exendina, um GLP-1, um análogo de GLP-1, um agonis-ta de GLP-1, um inibidor de DPP-IV, um antagonista opióide, um antagonistade orexina, um antagonista do receptor metabotropico do glutamato subtipo5, um antagonista/agonista inverso de histamina 3 ou topiramato. Em certasmodalidades, os métodos fornecidos compreendem a administração de umaamilina ou um agonista de amilina em combinação com pelo menos um ou-tro agente antiobesidade com a condição de que o outro agente antiobesi-dade não seja fentermina, rimonabant ou sibutramina.

Amilina e agonistas de amilina também podem ser administradascom compostos úteis para tratar síndrome metabólica, tais como análogosde peptídeo insulinotrópico dependente de glicose (GIP). Em outras modali-dades, os compostos aqui fornecidos podem ser usados com outros analgé-sicos, imunossupressores ou outros agentes antiinflamatórios.

Compostos úteis no contexto dos métodos aqui descritos incluemamilina e agonistas de amilina. Geralmente, amilina e agonistas de amilinaincluem hormônios peptídicos da família da amilina tais como amilina, adre-nomedulina ("ADM"), calcitonina ("CT"), peptídeo relacionado ao gene decalcitonina ("CGRP"), intermedina (também conhecida como "AFP-6") e pep-tídeos relacionados. Hormônios peptídicos da família da amilina nativa sãoconhecidos na técnica, como são os análogos de peptídeos agonistas e de-rivados. Certos peptídeos nativos, análogos de peptídeo agonista e deriva-dos são descritos aqui, entretanto deve ser reconhecido que quaisquer pep-tídeos conhecidos da família de amilina que têm as propriedades aqui des-critas podem ser usados em conjunção com o método aqui descrito.

Como será reconhecido por aqueles versados na técnica, hormô-nios peptídicos da família da amilina são geralmente amidados na termina-ção C quando expressos fisiologicamente, mas não necessariamente serãopara os propósitos dos métodos e composições fornecidos aqui. Em outraspalavras, a terminação C desses peptídeos pode ter um grupo -OH livre ou-NH2. Como aqui descrito, esses peptídeos também podem ter outras modi-ficações pós-tradução.

Por "amilina" é entendido o hormônio peptídico humano referidocomo amilina e secretado pelas células beta do pâncreas, e variações daespécie dessa, exemplos das quais estão descritas na Pat. U.S. N°.5.234.906, cujo conteúdo está dessa forma incorporado pela referência.Mais particularmente, amilina é um hormônio polipeptídico de 37 aminoáci-dos co-secretado com insulina pelas células beta pancreáticas em respostaa ingestão de nutrientes (veja, por exemplo, Koda et ai (1992) Lancet339:1179-1180). Nesse sentido, "amilina", "amilina de tipo selvagem" e "ami-lina nativa", isto é amilina não modificada, são usados intercambiavelmente.Amilina algumas vezes é referida como "IAPP".Por "agonista" entende-se um composto que propicia uma ativida-de biológica de amilina, por exemplo, que tem uma potência melhor do que aamilina, ou dentro de cinco ordens de magnitude (mais ou menos) de potên-cia comparada a amilina tem, por exemplo 4, 3, 2, ou 1 ordem de magnitude,quando avaliado por medidas conhecidas na técnica tais como, por exemplo,estudos de competição/ligação ao receptor como aqui descritos. Por exem-plo, agonistas de amilina podem ter 3, 5, 10, 50, 100, 500, 1000 vezes oumais atividade do que a amilina nativa. Alternativamente, agonistas, por e-xemplo, podem ser 2, 5, 10, 15, ou 20 vezes menos ativos que amilina nati-va.

Em uma modalidade, o termo agonista refere-se a um compostoque propicia um efeito biológico similar a aquele da amilina nativa, por e-xemplo um composto (1) que tem atividade na modificação de preferênciasalimentares como aqui descrito similar a do peptídeo nativo humano de refe-rência, e/ou (2) que tem atividade na alteração de taxas metabólicas comoaqui descrito similar a do peptídeo nativo humano de referência. Em umamodalidade, o termo agonista refere-se a um composto que propicia um efei-to biológico similar a aquele da amilina nativa, por exemplo um compostoque tem atividade no controle, prevenção ou tratamento da obesidade ou deuma condição ou distúrbio da alimentação como aqui descrito similar a dopeptídeo nativo humano de referência. Em uma modalidade, o termo agonis-ta refere-se a um composto que propicia um efeito biológico similar a aqueleda amilina nativa, por exemplo um composto (1) que tem atividade em umensaio de ingestão alimentar, esvaziamento gástrico, secreção pancreáticaou perda de peso (Pedido PCT No. PCT/US2005/004631, depositado em 11de fevereiro de 2005 e incorporado pela referência) similar a do peptídeonativo humano de referência, e/ou (2) que se liga especificamente em umensaio de receptor de referência ou em um ensaio de ligação competitivacom amilina. Em uma modalidade, os agonistas se ligarão, em tais ensaios,com uma afinidade de mais do que 1uM e, em outra modalidade, com umaafinidade de mais do que 1-5 nM. Tais agonistas podem compreender umfragmento ativo de amilina ou uma molécula química pequena. Em algumasmodalidades, um agonista é um peptídeo, não uma molécula química pe-quena. Entretanto, é contemplado que em certas modalidades, calcitoninade salmão, calcitonina, CGRP, ADM, AFP-6 e/ou seus respectivos análogospodem ser excluídos do escopo de agonista de amilina com linguagem con-dicional. Em certas modalidades, um agonista de amilina não é uma molécu-la química pequena e moléculas químicas pequenas podem ser excluídas doescopo de agonista de amilina com linguagem condicional.

Por "análogo" entende-se um peptídeo cuja seqüência é derivadadaquela da amilina incluindo inserções, substituições, extensões e/ou dele-ções, que tem pelo menos alguma identidade de aminoácidos com a amilinaou região de um peptídeo de amilina. Análogos podem ter pelo menos 50 a55% de identidade de seqüência de aminoácidos com uma amilina nativa, oupelo menos 70%, 80%, 90%, 95% de identidade de seqüência de aminoáci-dos com uma amilina nativa. Em uma modalidade, tais análogos podemcompreender substituições conservativas ou não conservativas de aminoá-cidos (incluindo aminoácidos não naturais e formas L e D). Análogos incluemcompostos que têm atividade agonista e compostos que têm atividade deantagonista. Análogos agonistas de amilina são análogos como descrito aquie funcionam como um agonista de amilina. Análogos, como definido aqui,também incluem derivados.

Um "derivado" é definido como uma molécula que tem a seqüên-cia de aminoácido de uma amilina nativa ou análogo, mas que tem adicio-nalmente uma modificação química de um ou mais de seus grupos de ami-noácidos laterais, átomos de carbono a, grupo amino terminal ou grupo áci-do carboxílico terminal. Uma modificação química inclui, mas não é limitadaa porções químicas adicionais, criação de novas pontes e remoção de por-ções químicas. Modificações em grupos de aminoácidos laterais incluem,sem limitação, acilação de grupos e-amino de lisina, N-alquilação de argini-na, histidina ou lisina, alquilação de grupos de ácido carboxílico, glutâmicoou aspartico e desamidação de glutamina ou asparagina. Modificações daterminação amino incluem, sem limitação, as modificações de desamino, N-alquil inferior, N-dialquil inferior, alquilas limitadas (por exemplo, ramificado,cíclico, fundido, adamantila) e N-acila. Modificações do grupo carbóxi termi-nal incluem, sem limitação, as modificações de amida, amida de alquila infe-rior, alquilas limitadas ((por exemplo, ramificado, cíclico, fundido, adamantila)alquila, amida de dialquila e modificações de éster de alquila inferior. Alquilinferior é uma C1-C4 alquila. Além disso, um ou mais grupos laterais, ougrupos terminais podem ser protegidos por grupos protetores conhecidosdos versados em química sintética. O carbono a de um aminoácido pode sermono- ou dimetilado.

Em geral, com relação a uma seqüência de aminoácido, o termo"modificação" inclui substituições, inserções, alongamentos, deleções e deri-vatizações isoladas ou em combinação. Em algumas modalidades, os peptí-deos podem incluir uma ou mais modificações de um resíduo de aminoácido"não essencial". Nesse contexto, um resíduo de aminoácido "não essencial"é um resíduo que pode ser alterado, por exemplo, deletado ou substituído,na nova seqüência de aminoácido sem abolir ou reduzir substancialmente aatividade (por exemplo, a atividade de agonista) do peptídeo (por exemplo, opeptídeo análogo). Em algumas modalidades, os peptídeos podem incluiruma ou mais modificações de um resíduo de aminoácido "essencial". Nessecontexto, um resíduo de aminoácido "essencial" é um resíduo que quandoalterado, por exemplo, deletado ou substituído, na nova seqüência de ami-noácido a atividade do peptídeo de referência é substancialmente reduzidaou abolida. Em tais modalidades onde um resíduo de aminoácido essencialé alterado, o peptídeo modificado pode possuir uma atividade de amilina deuso nos métodos fornecidos. As substituições, inserções e deleções podemser na extremidade N terminal ou C terminal e podem ser em porções inter-nas do componente hormônio peptídico. Como meio de exemplo, o peptídeopode incluir 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais substituições tanto de umamaneira consecutiva quanto espaçada através da molécula do peptídeo. Iso-ladas ou em combinação com as substituições, o peptídeo pode incluir 1,2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais inserções, de novo tanto de uma maneira con-secutiva quanto espaçada através da molécula do peptídeo. O peptídeo, iso-lado ou em combinação com as substituições e/ou inserções, pode incluir1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais deleções, de novo tanto de uma maneiraconsecutiva quanto espaçada através da molécula do peptídeo. O peptídeo,isolado ou em combinação com as substituições, inserções e/ou deleções,também pode incluir 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10 ou mais adições de ácido.Substituições incluem substituições de aminoácidos conservativas.

Uma "substituição de aminoácido conservativa" é uma na qual o resíduo deaminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem cadeia late-ral ou características físico-químicas similares (por exemplo, aspectos ele-trostáticos, de ligação de hidrogênio, isoestérica, hidrofóbica). Os aminoáci-dos podem ser de ocorrência natural ou não natural (artificial). Famílias deresíduos de aminoácidos que tem cadeias laterais similares são conhecidasna técnica. Essas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas(por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exem-plo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carrega-das (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina,metionina, cisteína), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, vali-na, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano), cadeias laterais B-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais a-romáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Substitui-ções também podem incluir alterações não conservativas.

Por "aminoácido" ou "resíduo de aminoácido" entende-se ami-noácidos naturais, aminoácidos não-naturais, e aminoácido modificado. Amenos que estabelecido ao contrário, qualquer referência a um aminoácidogeralmente ou especificamente pelo nome, inclui referência tanto aos este-reoisômeros D e L se sua estrutura permitir tais formas estereoisoméricas.Aminoácidos naturais incluem alanina (Ala), arginina (Arg), asparagina (Asn),ácido aspártico (Asp), cisteína (Cys), glutamina (Gln), ácido glutâmico (Glu),glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (lie), leucina (Leu), Lisina (Lys), meti-onina (Met), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), trip-tofano (Trp), tirosina (Tyr) e valina (Vai). Aminoácidos não naturais incluem,mas não são limitados a, homolisina, homoarginina, homoserina, ácido aze-tidinacarboxílico, ácido 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, beta-alanina,ácido aminopropiônico, ácido 2-aminobutírico, áicdo 4-aminobutírico, ácido6-aminocapróico, ácido 2-aminoheptanóico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimelico, butilglicina terciária, ácido 2,4-diaminoisobutírico, desmosina, ácido 2,2'-diaminopimélico, ácido 2,3-diaminopropiônico, N-etilglicina, N-etilasparagina, homoprolina, hidroxilisina,alo-hidroxilisina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, alo-isoleucina, N-metilalanina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, N-metilpentilglicina, N-metilvalina, naftalanina, norvalina, norleucina, ornitina,pentilglicina, ácido pipecólico, piroglutamato, e tioprolina. Aminoácidos nãonaturais adicionais incluem resíduos aminoácidos modificados que são blo-queados química, reversível ou irreversivelmente, ou modificados quimica-mente no seu grupo amino N-terminal ou seus grupos de cadeia lateral, co-mo por exemplo, D e L aminoácidos N-metilados ou resíduos em que osgrupos funcionais da cadeia lateral são modificados quimicamente para ou-tro grupo funcional Por exemplo, aminoácidos modificados incluem sulfóxidode metionina; sulfona demetionina; ácido aspártico- (beta-metil éster), umaminoácido modificado de ácido aspártico; N-etilglicina, um aminoácido mo-dificado de glicina; ou alanina carboxamida, um aminoácido modificado dealanina. Resíduos adicionais que podem ser incorporados são descritos emSandberg et ai (1998) J. Med. Chem. 41:2481 -2491.

Deve ser observado que alternativas estão escritas por todo es-se documento em grupos Markush, por exemplo, cada posição de aminoáci-do que contem mais do que um aminoácido possível. É especificamentecontemplado que cada membro do grupo Markush deve ser consideradoseparadamente, com isso compreendendo outra modalidade, e o grupo Mar-kush não deve ser lido como uma unidade única.

"Identidade de seqüência", como é bem-conhecida na técnica, éuma relação entre duas ou mais seqüências de polipeptídeos ou duas oumais seqüências de polinucleotídeos, como determinado pela comparaçãodas seqüências. Na técnica, "identidade" também pode significar o grau derelação de seqüência entre seqüências de polipeptídeo ou polinucleotídeo,como determinado pelo pareamento entre fitas de tais seqüências. A identi-dade pode ser facilmente calculada por métodos conhecidos incluindo masnão limitados a, aqueles descritos em Computational Molecular Biology,Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, Nova Iorque (1988); Biocomputing:Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, NovaIorque, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. &Griffin, H.G., eds., Humana Press, Nova Jersey (1994); Sequence Analysisin Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press (1987); Sequence A-nalysis Primer, Gribskov, M. & Devereux, J., eds., Stockton Press, Nova Ior-que (1991); e Carillo, H., & Lipman, D., SIAM J Applied Math, 48:1073(1988). Métodos para determinar identidade são projetados para dar o maiorpareamento entre as seqüências testadas. Alem disso, métodos para deter-minar identidade são codificados em programas disponíveis ao público. Pro-gramas de computador que podem ser usados para determinar a identidadeentre duas seqüências incluem, mas não são limitados a, GCG (Devereux etal. (1984) Nucleic Acids Research 12:387; pacote de cinco programasBLAST, três projetados para pesquisas de seqüências de nucleotídeo(BLASTN, BLASTX, e TBLASTX) e dois projetados para pesquisas de se-qüências de proteína (BLASTP e TBLASTN) (Coulson (1994) Trends in Bio-technology 12:76-80; Birren et al. (1997) Genome Analysis 1:543-559). Oprograma BLAST X está disponível para o público pelo NCBI e outras fontes(BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH, Bethesda, MD 20894;Altschul etal. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410). O bem-conhecido algoritmode Smith Waterman também pode ser usado para determinar identidade.

Parâmetros para comparação de seqüência de polipeptídeo in-cluem tipicamente os seguintes: Needleman & Wunsch (1970) J. Mol. Biol.48:443-453; Matriz de comparação: BLOSSUM62 de Hentikoff & Hentikoff(1992) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89:10915-10919; Gap Penalty. 12; GapLength Penalty. 4. Um programa que pode ser usado com esses parâmetrosé disponível para o público como o programa "gap" de Genetics ComputerGroup ("GCG"), Madison, Wl. Os parâmetros acima junto com nenhuma pe-nalidade para end gap são os parâmetros padrão para comparações de pep-tídeos. Em uma modalidade o programa BLASTP do NCBI é usado com osparâmetros padrão de nenhum ajuste composicional, expect value de 10,word size de 3, matriz BLOSUM62, gap extension cost de 11, end gap ex-tension cost de 1, declínio (X) para blast extension (em bits) 7, valor de de-clínio de X para gapped alignment (em bits) 15, e valor de declínio de X finalpara gapped alignment (em bits) 25.

Parâmetros para comparação de seqüência de moléculas deácido nucléico incluem os seguintes: Algoritmo: Needleman & Wunsch(1970) J. Mol. Bio. 48:443-453; Matriz de comparação: matches - +10; mis-matches = 0; Gap Penalty. 50; Gap Length Penalty. 3. Como usado aqui,"%de identidade" é determinado usando os parâmetros acima para compara-ções de seqüência de molécula de ácido nucléico e o programa "gap" deGCG, versão 10.2.

Por toda essa, descrição, seqüências de aminoácido podem serreferidas como aminoácidos na posição a até a posição b adjacente a umpeptídeo de referência. Por exemplo, 1-7 hAmilina refere-se a seqüência deaminoácido da posição 1 até a posição 7, inclusive, da amilina humana (SEQID NO: 1), o peptídeo de referência nesse exemplo. Modificação ao peptídeode referência pode ser mostrada como a posição de modificação adjacente amodificação. Por exemplo, (2Asp 7Lys) 1-7 hAmilina representa a seqüênciade aminoácido nas posições 1 a 7 de amilina humana com uma modificaçãode Cys para Asp na posição 2 e uma modificação de Cys para Lys na posi-ção 7. Para outro exemplo, 18Arg25,28Pro-h-amilina representa a seqüênciade aminoácido de amilina humana com uma modificação de His para Arg naposição 18, uma modificação de Ala para Pro na posição 25, e uma modifi-cação de Ser para Pro na posição 28.

Amilina humana (hAmilina ou h-amilina) tem a seguinte seqüên-cia de aminoácido: Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-lle-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (SEQ ID NO:1). Amilina de rato (rAmilina) tema seguinte seqüência: KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGP-VLPPTNVGSNTY (SEQ ID NO:2). O uso de amilinas de qualquer espécie écontemplado.Agonistas de amilina contemplados nos métodos descritos aquiincluem aqueles descritos nas Pat. U.S. Nos. 5.686.411, 6.114.304, e6.410.511, e Publicação de Pedido PCT No. WO 93/10146, os conteúdosdos quais estão por meio desse incorporados por referência na sua totalida-de. Tais compostos incluem aquele que tem include aqueles que têm a fór-mula I:

^rX-Asn-Thr^Ala-Thr-Y-Ala-Thr-^GIn-Arg-Leu-BrAsn-^Phe-Leu-Ci-Di-Ei-^FrGi-Asn-HrGIy-^lrJrLeu-KrLr^Thr-MrVal-Gly-Ser-35Asn-Thr-Tyr (SEQ ID NO:3)

em que Ai é Lys, Ala, Ser ou hidrogênio;

Bi é Ala, Ser ou Thr;

Ci é Vai, Leu ou Me;

Di é His ou Arg;

Ei é Ser ou Thr;

F-i é Ser, Thr, Gln ou Asn;

Gi é Asn, Gln ou His;

H-\ é Phe, Leu ou Tyr;

li é Ala ou Pro;

Ji é Me, Vai, Ala ou Leu;

K: é Ser, Pro, Leu, Me ou Thr;

Li é Ser, Pro ou Thr;

Mi é Asn, Asp, ou Gln;

X e Y são resíduos de aminoácido selecionados independente-mente que têm cadeias laterais que são ligadas quimicamente uma a outrapara formar uma ligação intramolecular.

A porção C-terminal pode ser amino, alquilamino, dialquilamino,cicloalquilamino, arilamino, aralquilamino, alquilóxi, arilóxi, aralquilóxi ou car-boxila. Cadeias laterais adequadas para X e Y incluem grupos derivados desulfidrilas de alquila que podem formar pontes de dissulfeto; ácidos de alqui-la e aminas de alquila que podem formar lactamas cíclicas; aldeídos de al-quila ou haletos de alquila e alquilaminas que podem condensar e ser redu-zidas para formar uma ponte de amina de alquila; ou cadeias laterais quepodem ser conectadas para formar uma ligação de alquila, alquenila, alquini-la, éter ou tioéter; cadeias de alquila exemplares incluem grupos alquila infe-riores que tem de cerca de 1 a cerca de 6 átomos de carbono.

Um aspecto adicional, composições e métodos de uso forneci-dos são direcionados para análogos de agonista de SEQ ID NO: 3 que nãosão ligados, e em que X e Y são independentemente selecionados a partirde Ala, Ser, Cys, Vai, Leu e lie ou ésteres e éteres de alquila, arila, ou aral-quila de Ser ou Cys.

Compostos exemplares incluem, mas não são limitados a des-1Lys-h-amilina (SEQ ID NO: 4), 28Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 5), 25'2829Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 6), 18Arg25'28Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 7), e des-1Lys18Arg25,28Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 8), que mostram todos atividade deamilina in vivo em animais de teste tratados (por exemplo., provocando hi-perlactemia acentuada seguida por hiperglicemia). Além de ter atividadescaracterísticas de amilina, também foi descoberto que determinados com-postos fornecidos aqui possuem características de solubilidade e estabilida-de mais desejáveis quando comparados com amilina humana. Exemplosdesses compostos incluem 25Pro26Val28,29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 9),25'28'29Pro-h-amilina, e 18Arg25'28Pro-h-amilina.

Outros compostos incluem 18Arg25,28'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO:10), des-1Lys18Arg2528'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 11), des-1 Lys2528'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 12), 25Pro26Val28'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 13),23Leu25Pro26Val28'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 14), 23Leu25Pro26Val28Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 15), des-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-amilina (SEQ IDNO: 16), 18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 17),18Arg23Leu25-28-29 Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 18), 18Arg23Leu25-28Pro-h-amilina(SEQ ID NO: 19), 17lle23Leu2528'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 20),i7||e25,28,29pro.n.amj|jna (seq |d j^jq. 21)> desjLys17lle23Leu25'28'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 22), 17lle18Arg23Leu-h-amilina (SEQ ID NO: 23),17lle18Arg23Leu26Val29Pro-h-amilina (SEQ ID NO: 24),17lle18Arg23Leu25Pro26Val28'29Pro-h-amilina (SEQ ID NO:25),13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-amilina (SEQ ID NO: 26),13Thi^1His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-amilina (SEQ ID NO: 27), des-Yys^h^^is^Leu^Ala^Pro^Asp-h-amilina (SEQ ID NO: 28),13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-amilina (SEQ ID NO: 29),13Thr18Arg21His23Leu28,29Pro31Asp-h-amilina (SEQ ID "NO: 30), e13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28'29Pro31Asp-h-amilina (SEQ ID NO: 31).

Agonistas de amilina contemplados no uso nos métodos descri-tos aqui incluem intermedina ou peptídeos AFP-6. Por "intermedina" ou"AFP-6" entende-se o hormônio de peptídeo humano e espécies variantesdesse em qualquer forma fisiológica. Peptídeos AFP-6 nativos são conheci-dos na técnica, como são análogos, derivados e híbridos de peptídeo AFP-6funcionais. Qualquer peptídeo, análogo ou derivado de AFP-6 conhecido natécnica que exibe atividade biológica conhecida na técnica pode ser usadoem conjunto com as composições e métodos aqui descritos. Em uma moda-lidade, os peptídeos análogos e derivados de AFP-6 tem pelo menos umaatividade hormonal de AFP-6 nativo. Em certas modalidades, os peptídeos,análogos, derivados e híbridos de AFP-6 são agonistas de um receptor aoqual AFP-6 nativo é capaz de se ligar especificamente.

Agonistas de amilina contemplados no uso nos métodos descri-tos aqui incluem análogos de AFP-6 como descrito no Pedido Provisório USNo. 60/617.468 e Pedido PCT No. PCT/US05/036456, que estão por meiodesse incorporados por referência na sua totalidade. Um peptídeo AFP-6maduro, também conhecido como intermedina, tem a seguinte seqüência deaminoácido TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 32). O AFP-6 ou análogos de AFP-6 podem ou podem nãoser amidados na extremidade C-terminal. Tais análogos de AFP-6 incluemaqueles que tem a fórmula II: XrXs-Xg-X^Xs-Xe-Xz-Xs-QVQNLSHRLWQL-X2i-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-SAPV-X33-PSSPHSY (SEQ ID NO: 33) emque

Xt está ausente, TQAQLLRVG (SEQ ID NO: 34), qualquer umou mas aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO: 34, N-arila, ou N-acilacom um substituinte selecionado a partir de uma C1-C18 alquila, uma alquilasubstituída ou uma porção heteroarila;X2 é M, S, C, L substituído, K, D, ou E, onde a cadeia lateral po-de ser ligada através de uma ligação de amida, ou qualquer aminoacido quepode formar uma ligação com X8, por exemplo uma ligação de dissulfeto oude amida; X3 é V, D, L, G, N, A, ou S;

X4 é V, D, L, G, N, A, S ou T;

X5 é V, D, L, G, N, A, ou S;

X6 é V, D, L, G, N, A, S, ou está ausente;

X7 é T, S, Hse (homoSER), Ahb (ácido (S)-2-Amino-3-hidróxi-3-metilbutanóico) ou (Ahp) ácido (2R,3R)-2-amino-3-hidróxi-4-metilpentanóico;

X8 é M, S, C, L substituído, K, D, ou E, ou qualquer aminoacidoque pode formar uma ligação com X2, por exemplo uma ligação de dissulfetoou de amida;

X21 é M, G, P, A, ou está ausente;

X22 é M, G, P, A, ou está ausente;

X23 é M, G, P, A, ou está ausente;

X24 é M, G, P, A, ou está ausente;

X25 é M, G, P, A, ou está ausente;

X26 é R ou está ausente, em que quando X26 está ausente, X27está ausente;

X27 é Q ou está ausente, em que quando X27 está ausente, X26está ausente;

X28 é D ou E;

X33 é D ou E; e

fragmentos biologicamente ativos desses.

Em outras modalidades, análogos de AFP-6 compreendem, ou aregião ativa consiste em compostos que tem uma seqüência de aminoacidoda fórmula (III): XrXg-QNLSHRLWQL-X^-X^-X^-X^-Xn-X^-X^^o-SAPV-X25-PSSPHSY (SEQ ID NO:35) em queé Q ou está ausente;

X2 é V ou está ausente;

X13 é M, G, P, A, ou está ausente;

X14 é M, G, P, A, ou está ausenteX15 é M, G, P, A, ou está ausente;X16 é M, G, P, A, ou está ausente;X17 é M, G, P, A, ou está ausente,

X18 é R ou está ausente, em que quando X18 está ausente, X19está ausente;

X19 é Q ou está ausente, em que quando X19 está ausente, Xi8está ausente

X20 é D ou E;X25 é D ou E; efragmentos biologicamente ativos desses.

Seqüências de aminoácidos de análogos de AFP-6 exemplarespara uso nos métodos descritos incluem:

RVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 36)

GCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 37)

CVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 38)

QVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 39)

VQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 40)

VQNLSHRLQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 41)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 42)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 43)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 44)

CVLGTCQVQNLSHRLWQLRQESAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 45)

TQAQLLRVGCSNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 46)

TQAQLLRVGCNTATCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO: 47)

RVGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ IDNO: 48)

TQAQLLRVGCDTATCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO: 49)

TQAQLLRVGCG N LSTCQVQN LS H RLWQLMG PAG RQDSAPVDPSS PHSY(SEQ ID NO: 50)

TQAQLLRVGMVLGTMQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO: 51)

GMVLGTMQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 52)

VGMVLGTMQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 53)

RVGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 54)

VGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 55)

VCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 56)

GCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO: 57)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQESAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 58)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 59)

GTMQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 60)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 61)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 62)

GCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 63)

GCSNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 64)

GCGNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 65)

GCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQESAPVEPSSPHSY (SEQ ID NO: 66).

Outros análogos e derivados de AFP-6 exemplares são descritosem Pat. U.S. N°. 6.965.013 e Publicação PCT No. WO 2004/048547, cadaum dos quais está incorporado aqui por referência.

Agonistas de amilina contemplados no uso nos métodos descri-tos aqui incluem análogos identificados na Pat. US. No. 6.087.334, os conte-údos dos quais estão por meio desse incorporados por referência. Tais ago-nistas de amilina úteis incluem análogos de fórmula IV: X1Xaa1-X2-Xaa2-X3-Xaa3-X4-Xaa4-X5-Xaa5-X6 (SEQ ID NO: 67) em que

X1 é Lys, Arg ou está ausente;

X2 é Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9 (SEQ. ID. NO: 68) ou Z-Xaa10SerThr,contanto que se X2 é Z-Xaai0SerThr, então Xi e Xaai estão ambos ausen-tes;

X3 é AlaThr, AlaSer, SerMet, GluThr ou ValThr;

X4 é ArgLeuAla, HisLeuAla, ArgIleAla, LysIleAla, ArgMetAla,HisMetAla, LysMetAla ou ArgLeuThr;

X5 é PheLeu, Phelle, PheMet, TyrLeu, Tyrlle, TyrMet, Trplle ouTrpMet;

X6 é ArgSerSerGIyTyr (SEQ ID NO: 69), LysSerSerGIyTyr (SEQID NO: 70), HisSerSerGIyTyr (SEQ ID NO: 71), ProSerSerGIyTyr (SEQ IDNO: 72), ArgSerArgGlyTyr (SEQ ID NO: 73), ArgThrSerGIyTyr (SEQ ID NO:74), ArgAlaSerGIyTyr (SEQ ID NO: 75), AlaSerSerGIyTyr (SEQ ID NO: 76),ArgSerAlaGlyTyr (SEQ ID NO: 77), HisSerAlaGlyTyr (SEQ ID NO: 78), Arg-SerGIyTyr (SEQ ID NO: 79), ArgSer, LysSer, HisSer, ArgThr, ProSer ou Arg;

Xaa1 é Cys ou está ausente;Xaa2 é Cys ou Ala;

Xaa3 é Gln, Ala ou Asn;

Xaa4 é Asn, Ala ou Gln;

Xaa5 é Vai, Ala, lie, Met, Leu, PentilGIy, ou t-butilGIy;

Xaa6 é Asn, Gln ou Asp;

Xaa7 é Thr, Ser, Met, Vai, Leu ou lie;

Xaa8 é Ala ou Vai;

Xaa9 é Thr ou Ser;

Xaaio é Leu, Vai, Met ou lie;

Z é um grupo alcanoíla de cerca de 1 a cerca de 8 átomos decarbono ou ausente;

e sais farmaceuticamente aceitáveis desse.

Agonistas de amilina contemplados no uso nos métodos aquidescritos incluem peptídeos, análogos e derivados da família da amilina, (re-feridos aqui como peptídeos LHC (volta-hélice terminação-C)) descritos noPedido de Pat. U.S. N°. 60/543.275 e no Pedido PCT No.PCT/US2005/004631, cada um dos quais está por meio deste incorporadopor referência na sua totalidade.

Os peptídeos LHC para uso nos métodos fornecidos agem comoum agonista para pelo menos um efeito biológico de calcitonina, amilina,CGRP, ou qualquer combinação dos três aqui descrita ou se ligam a pelomenos um dos receptores de amilina, calcitonina, ou CGRP. A atividade deligação ao receptor e atividade biológica de peptídeos LHC exemplares es-tão descritas no Pedido de Pat. U.S. N°. 60/543.275 e no Pedido PCT No.PCT/US2005/004631. Em um aspecto geral, esses agonistas de polipeptí-deos tem pelo menos uma região de volta de amilina ou calcitonina ou aná-logos desses ou uma região de a hélice de pelo menos uma porção de umaregião de a hélice de calcitonina ou análogos disso ou uma região de a héli-ce que tem uma porção de uma região de a hélice de amilina e uma regiãode a hélice de calcitonina ou seus respectivos análogos, e uma cauda C-terminal de amilina ou calcitonina ou análogos desses, com a condição deque a cauda C-terminal de calcitonina ou um análogo de calcitonina não éprolina (Pro), hidroxiprolina (Hyp), homoserina (Hse) ou derivados de Hse.

Em certas modalidades, esses peptídeos LHC têm uma regiãode volta de amilina ou análogo de amilina, pelo menos uma porção de umaregião de a hélice de calcitonina ou um análogo de calcitonina, e uma caudaC-terminal de amilina ou análogo de amilina, em outras modalidades, essespeptídeos LHC tem uma região de volta de calcitonina ou análogo de calci-tonina, pelo menos uma porção de a hélice de calcitonina ou análogo de cal-citonina, e uma cauda C-terminal de amilina ou análogo de amilina. Em ain-da outras modalidades, esses peptídeos LHC tem uma região de volta deamilina ou análogo de amilina, pelo menos uma porção de uma região de ahélice de amilina ou análogo de amilina e pelo menos uma porção de umaregião de a hélice de calcitonina ou análogo de calcitonina e uma cauda C-terminal de amilina ou análogo de amilina. Em ainda outras modalidades,esses peptídeos LHC tem uma região de volta de tem uma região de voltade amilina ou análogo de amilina, uma porção ou uma região de a hélice decalcitonina ou análogo de calcitonina ou pelo menos uma porção de umaregião de a hélice de amilina ou análogo de amilina e pelo menos uma por-ção de uma região de a hélice de calcitonina ou análogo de calcitonina, euma cauda C-terminal de calcitonina ou análogo de calcitonina.

Em certas modalidades, a região de volta desses peptídeos LHCpode ainda compreende não mais do que uma, duas, três ou quatro modifi-cações incluindo substituições, inserções ou deleções da volta de amilina oucalcitonina e análogos desses. É ainda contemplado que esses peptídeos deLHC possam ter modificações adicionais na porção N-terminal da volta com-preendendo uma região N-cap, que pode ter características hidrofóbicas ouhidrofílicas tais como acetila, isocaproila, ácido 3,6-dioxioctanóico, ou ácidosuccinímico de 1-amino-4,7,10-trioxa-13-tridecanamina. Modificações podemainda compreender um, dois, três ou mais aminoacidos adicionais. Essasestão em uma área que permite muitas modificações, numerosas demaispara serem mencionadas, mas devem ser compreendidas por um versadona técnica com base no que está exemplificado posteriormente no presentepedido de patente.

Tais agonistas de amilina úteis incluem peptídeos de LHC quecompreendem uma seqüência de aminoácido de fórmula V: Xaai X Xaa3Xaa4 Xaa5 Xaa6 Y Xaa8 Xaa9 Xaa™ Xaan Xaai2 Xaa13 Xaau Xaai5 Xaai6Xaai7 Xaa-i8 Xaa-ig Xaa2o Xaa2i Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28Xaa29 Xaa3o Xaa3i Xaa32 (SEQ ID NO: 80) em que

Xaa! é A, C, hC (homoCys), D, E, F, I, L, K, hK (homoLys), R, hR(homoArg), S, Hse(homoSer), T, G, Q, N, M, Y, W, P, Hyp (hidroxiPro), H, Vou está ausente;

Xaa3 é A, D, E, N, Q, G, V, R, K, hK, hR, H, I, L, M, ou está au-sente;

Xaa4 é A, I, L, S, Hse, T, V, M, ou está ausente;

Xaa5 is A, S, T, Hse, Y, V, I, L, ou M;

Xaa6 é T, A, S, Hse, Y, V, I, L, ou M;Xaa8 é A, V, I, L, F, ou M;

Xaa9 é L, T, S, Hse, V, I, ou M;

Xaaio é G, H, Q, K, R, N, hK, ou hR;

Xaan é K, R, Q, N, hK, hR, ou H;

Xaa12 é L, I, V, F, M, W, ou Y;

Xaai3 é A, F, Y, N, Q, S, Hse, orT;

Xaa14 é A, D, E, G, N, K, Q, R, H, hR, ou hK;

Xaa15 é A, D, E, F, L, S, Y, I, V, ou M;

Xaa16 é L, F, M, V, Y, ou I;

Xaan é H, Q, N, S, Hse, T, ou V;

Xaa18 é K, hK, R, hR, H, u (Cit), ou n (Orn);

Xaa19 é F, L, S, Hse.V, I, T, ou está ausente;

Xaa2o é H, R, K, hR, hK, N, Q, ou está ausente;

Xaa2i é T, S, Hse, V, I, L, Q, N, ou está ausente;

Xaa22 é F, L, M, V, Y, ou I;

Xaa23 é P ou Hyp;

Xaa24 é P, Hyp, R,K, hR, hK, ou H;

Xaa25 é T, S, Hse, V, I, L, F, ou Y;

Xaa26 é N,Q, D, ou E;

Xaa27 é T, V, S, F, I, ou L;

Xaa28 é G ou A;

Xaa29 é S, Hse, T, V, I, L, ou Y;

Xaa30 é E, G, K, N, D, R, hR, hK, H, ou Q;

Xaa3i é A, T, S, Hse, V, I, L, F, ou Y; e

Xaa32 é F, P, Y, Hse, S, T, ou Hyp;

em que X e Y são capazes de criar uma ligação e são resíduos selecionadosindependentemente que têm cadeias laterais que são ligadas quimicamenteuma a outra para formar uma ligação intramolecular tais como ligações dedissulfeto; ligação de amida, ácidos de alquila, e aminas de alquila que po-dem formar lactamas cíclicas; aldeídos de alquila ou haletos de alquila e al-quilaminas que podem ser condensadas e ser reduzidas para formar umaponte de amina de alquila ou de imina; ou cadeias laterais que podem serconectadas para formar uma ligação de alquila, alquenila, alquinila, éter outioéter.

Cadeias de alquila podem incluir grupos alquila inferiores de cer-ca de 1 a cerca de 6 átomos de carbono. Em certas modalidades, a ligaçãointramolecular pode ser uma ligação de dissulfeto, amida, imina, amina, al-quila ou alqueno. Em certas modalidades, X e Y são selecionados indepen-dentemente a partir de Ser, Asp, Glu, Lys, Orn, ou Cys. Em certas modalida-des, X e Y são Cys e Cys. Em outras modalidades, X e Y são Ser e Ser. Emainda outras modalidades, X e Y são Asp e Lys ou Lys e Asp.

Agonistas de amilina úteis também incluem peptídeos LHC quecompreendem a seqüência de aminoácido da fórmula VI: Xaai Xaa2 Xaa3Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaag Xaaio Xaan Xaai2 Xaai3 Xaai4 Xaai5 Xaai6Xaau Xaai8 Xaaig Xaa2o Xaa2i Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa3o Xaa3iXaa32 (SEQ ID NO: 81) em que

Xaai é A, C, D, F, I, K, S, T, ou está ausente;

Xaa2 é C, D, S, ou está ausente;

Xaa3 é A, D, N, ou está ausente;

Xaa4 é A, L, T, ou está ausente;

Xaa5 é A ou S;

Xaa6 é T, A, S, ou V;

Xaa7 é C, K, ou A;

Xaae é A, V, L, ou M;

Xaa9 é L ou T;

Xaaio é G, H, ou Q;

Xaan é K, R, Q, ou hArg;

Xaai2 é L, W, ou Y;

Xaa13 é A, F, N, Q, S, ou T;

XaaM é A, D, E, G, N, K, Q, ou R;

Xaa15 é A, D, E, F, L, S, ou Y;

Xaa16 é L, ou F;

Xaaiy é H, Q, S, ou V;

Xaai8 é K, R, hArg, u (Cit), ou n (Orn);Xaa19 é F, L, S, ou está ausente;Xaa20 é H, Q, ou está ausente;Xaa21 é T, N, ou está ausente;Xaa22 é F, L, M, V, ou Y;Xaa24 é P ou R;Xaa27 é T ou V;Xaa30 é E, G, K, ou N;Xaa31 é A ou T; eXaa32 é F, P, ou Y.

Agonistas de amilina úteis também incluem peptídeos de LHCque compreendem a seqüência de aminoácido da fórmula VII: Xaai Xaa2Xaa3 Xaa4 Xaa5 T Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaaio Xaan L Xaai3 Xaai4 Xaai5 L Xaai7Xaais Xaa^ Xaa2o Xaa2i Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa3i Xaa32,(SEQ ID NO: 82) em que

Xaa1 é A, C, F, I, K, S, ou está ausente;

Xaa2 é C, D, ou S;

Xaa3 é A, D ou N;

Xaa4 é A, L ou T;

Xaa5 é A ou S;

Xaa7 é C ou K;

Xaa8 é A ou V;

Xaa9 é L ou T;

Xaa10 é G, H, ou Q;

Xaan é K, R, ou hArg;

Xaa13 é A, F, N, S, ou T;

Xaau é A, D, E, G, N, Q, ou R;

Xaa15 é A, E, F, L, S, ou Y;

Xaa17 é H, S, ou V;

Xaa18 é K, R, hArg, u (Cit), ou n (Orn);

Xaa19 é F, L, ou S;

Xaa20 é H ou Q;

Xaa21 é T ou N;Xaa22 é F, L, M, V, ou Y;Xaa24 é P ou R;Xaa27 é T, ou V;Xaa30 é E, G, K, ou N;Xaa31 é A, ou T; eXaa32 é F, P, ou Y.

Agonistas de amilina úteis também podem incluir peptídeos deLHC que compreendem a seqüência de aminoácido da fórmula VIII: Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaas Xaa6 Xaa7 Xaas Xaag Xaa10 Xaan Xaa12 Xaa13 Xaai4Xaa10 Xaa16 Xaai7 Xaai8 Xaaig Xaa2o Xaa2i Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G SXaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 83) em que

Xaa1 é A, C, D, F, K, T, ou está ausente;

Xaa2 é A, C, D, S, ou está ausente;

Xaa3 é A, D, N, ou está ausente;

Xaa4 é A, L, T, ou está ausente;

Xaa5 é A ou S;

Xaa6 é A, S, T, ou V;

Xaa7 é A, C, ou K;

Xaas é A, L, M, ou V;

Xaa9 é L ou T;

Xaa10 é G, H, ou Q;

Xaan é K, Q, ou R;

Xaa12 é L, W, ou Y;

Xaa13 é A, N, Q, S, ou T;

Xaa14 é A, D, E, G, K, N, Q, ou R;

Xaa15 é A, D, E, F, L, S, ou Y;

Xaa16 é F ou L;

Xaa17 é H, Q, S ou V;

Xaa18 é K, ou R;

Xaa19 é F, L, S, ou está ausente;

Xaa20 é H, K, Q, ou está ausente;

Xaa21 é Q, T, ou está ausente;Xaa22 é F, L, ou Y;

Xaa24 é P ou R;

Xaa27 é T ou V;

Xaa3o é E, K ou N;

Xaa3i é A ou T; e

Xaa32 é F,Y, ou está ausente.

Em um aspecto geral, a seqüência de fórmulas V, VI, VII, ou VIIIainda compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, ou mais modificaçõesde substituições, inserções, deleções, alongamentos e/ou derivatizações.

Em certas modalidades, a seqüência de fórmula V, VI, VII, ou VIII compre-ende uma deleção na posição 24. Em certas modalidades, a seqüência defórmula V, VI, ou VII compreende uma Vai inserida entre os aminoácidos nasposições 22 e 23. Em outras modalidades, a seqüência de fórmula V, VI, ouVII compreende uma Gln inserida entre as posições 22 e 23. Em ainda ou-tras modalidades, a seqüência de fórmula V, VI, ou VII compreende umaseqüência de Gln-Thr-Tyr entre as posições 22 e 23. Em ainda outras moda-lidades, a seqüência de fórmula V, VI, ou VII compreende uma seqüência deLeu-GIn-Thr-Tyr (SEQ ID NO: 84) entre as posições 22 e 23. Em outro as-pecto geral, as modificações de fórmula V, VI, ou VII podem ser na extremi-

20 dade N-terminal. Em certas modalidades, a porção N-terminal da fórmula V,VI, ou VII tem uma octilglicina adicionada. Em outras modalidades, a porçãoN-terminal da fórmula V, VI, ou VII tem um "isocap" adicionado. Outras mo-dalidades são descritas no Pedido de Patente PCT N°. PCT/US2005/004631e incorporadas por referência.

Compostos exemplares descritos com referência a amilina hu-mana (SEQ ID NO: 1; hAmilina), amilina de rato (SEQ ID NO: 2; rAmilina), ecalcitonina de salmão (sCT) CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO: 85) com modificações nas posições indicadas incluem,(1-7 hAmilina) (18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 86);(1-7 hAmilina) (11 '18Arg22Leu 8-27sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 87);(1-7 hAmilina) (11'18Arg24Pro 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 88);(1-7 hAmilina) (1118Arg 8-24 sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 89);(1-7 hAmilina) (11'18Arg 8-21 sCT) (27-37 rAmilina) (SEQ ID NO: 90);(8Val9Leu10Gly 1-15 hAmilina) (18Arg 16-27 sCT) (31-37 hAmilina) (SEQ IDNO: 91);

(1Ala 1-7 hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 92);

(3Ala 1 -7 hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 93);

(4Ala 1-7 hAmilina) (11,18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 94);

(6Ala 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 95);

(2Ala11,18Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 96);

(lsocap-7Ala11'18Arg 5-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 97);

(4Ala11,18Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 98);

(5Ala1118Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 99);

(6Ala1118Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 100);

(1-7 hAmilina) (11Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 101);

(13Ser14Gln15Glu 1-16 hAmilina) (17Arg30Asn32Tyr 17-32 sCT) (SEQ ID NO: 102);

(3Ala1118Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 103);

(Acetil-2'7Agy1118Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 104);

(Acetil-2,7Agy 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 105);

(lsocap-7Ala10Aib11Lys(For)17Aib18Lys(For) 5-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 106);

(lsocap-7Ala10Aib11Lys(For)17Aib18Lys(For) 5-24sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 107);

(lsocap-7Ala10Aib11Lys(For)17Aib18Lys(For) 5-22 sCT) (2829Pro 28-37 hAmili-na) (SEQ ID NO: 108);

(lsocap-7Ala10Aib11Lys(For)17Aib18Lys(For) 5-21 sCT) (28,29Pro 27-37 hAmili-na) (SEQ ID NO: 109);

(1-7 hAmilina) (LLQQWQKLLQKLKQ (SEQ ID NO: 110)) (28Pro29Arg32Thr27- 37 hAmilina) (SEQ ID NO: 111);

(1-7 hAmilina) (LLQQLQKLLQKLKQY (SEQ ID NO: 112)) (28Pro29Arg32Thr28- 37 hAmilina) (SEQ ID NO: 113);

(6Ser 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 114);(6Val 1-7 hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 115);(1-7 hAmilina) (11>18Arg 8-18 sCT) (28Pro29Arg32Thr 27-37 hAmilina) (SEQ IDNO: 116);

(1-7 hAmilina) (11Arg 8-17 sCT) (28Pro29Arg32Thr 27-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 117);

(1-7 hAmilina) (11Arg 8-16 sCT) (^Tyr^Pro^Arg^Thr 27-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 118);

(1-7 hAmilina) (11Arg 8-15sCT) ("Tyr^Pro^Arg^Thr 27-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 119);

(1-7 hAmilina) (11Arg 8-14 sCT) (27Tyi^8Pro29Arg32Thr 27-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 120);

(1-7 hAmilina) (11'18Lys(For) 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 121);

(6D-Thr 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 122);

(Acetil-1-7 hAmilina) (11'18Lys(PEG5000) 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 123);

(Acetil-1Ala 1-7 hAmilina) (11Lys (PEG5000)18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 124);

(Acetil-1Ala 1-7 hAmilina) (11Arg18Lys (PEG5000) 8-27 sCT) (33-37 hAmilina)(SEQ ID NO: 125);

(1-7 hAmilina) (11,18Arg 8-21 sCT) (19-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 126);

(1-7 hAmilina) (1118Arg 8-21 sCT) (18Leu 18-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 127);

(1-7 hAmilina) (8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 128);

(5Ser 1-7 hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 129);

(1-12 hAmilina) (18Arg 13-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 130);

(1-12 hAmilina) (18Arg 13-24 sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 131);

(5Ser15Glu18Arg 1-18hAmilina) (19-24 sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 132;

(6Hse 1-7 hAmilina) (11-18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 133);

(6Ahb 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 134);

(6Ahp 1-7hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 135);6Thr (OPO3H2) 1-7 hAmilina) (11,18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 136);

(7Ala1118Arg 5-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 137);

(1-7 hAmilina) (11'18Orn 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 138);

(1-7 hAmilina) (11,18Cit 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 139);

(1-7 hAmilina) (1118homoLys 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 140);

(L-Octilglicina-1-7hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 141);

(N-3,6-dioxaoctanoil-1-7-hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO:142);

(ciclo (1-7)-1Asp7Lys1118Arg 1-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 143);

(ciclo (2-7)-2Asp7Lys 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 144);

(ciclo (2-7) hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 145);

(1-7 hAmilina) (11'18Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina-9Anc) (SEQ ID NO: 146);

(1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina-L-octilglicina) (SEQ ID NO: 147);

(N-isocaproil-1-7-hAmilina) (11|18Arg 8-27sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 148);

(1-7 hAmilina) (11'18homoArg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 149);

(1Phe 1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCT) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 150);

(1-7 hAmilina) (1118Arg 8-24 sCT) (32Thr 30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 151);

(1-7 hAmilina) (1118Arg 8-27 sCt) (33-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 152);

(15Glu18Arg 1-18 hAmilina) (19-24 sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 153);

(13Ala14Asp15Phe 1-18 hAmilina) (19-23 sCT) (30-37 hAmilina) (SEQ ID NO: 154); e

(2-18 hAmilina) (19-23 sCT) (30-36 hAmilina) (SEQ ID NO: 155). Peptídeosúteis nas composições e métodos aqui fornecidos, como aqueles acima, po-dem estar na forma ácida ou na forma de amida.

Peptídeos exemplares também para uso nas composições e métodos aqui fornecidos incluem:

KCNTATCVLGKLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 156)KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 157)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPPTNTGSNTY (SEQ ID NO: 158)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 159)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPPTNVGSNTY (SEQ ID NO: 160)

KCNTATCVLGRLANFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 161)

ACNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 162)

KCNAATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 163)

KCNTAACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 164)

CANLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 165)

isocaproil-STAVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 166)

CSNASTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 167)

CSNLATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 168)

CSNLSACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 169)

KCNTATCVLGRLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 170)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID NO: 171)

CSALSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 172)

Ac-(Agy)SNLST(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 173)

Ac-K(Agy)NTAT(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 174)

lsocaproil-STAVL(Aib)RLSQELRLQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID NO: 175)

lsocaproil-STAVLG[K(For)]LSQELH[K(For)]LQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID NO: 176)

lsocaproil-STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)]LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO:177)

lsocaproil-STAVL(Aib)[K(For)]LSQEL(Aib)[K(For)]LQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 178)

KC NTATC LLQQLQ KLLQKLKQYP RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 179)

KC NTASC VLG R LSQ ELH R LQTYP RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 180)

KCNTAVCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 181)

KCNTATCVLGRLSQELHRYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 182)

KCNTATCVLG[K(For)]LSQELH[K(For)L]QTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO:183)

KCNTA(d-Thr)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 184)

KCNTA(dAh)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 185)

Ac-ACNTATCVLGRLSQELHK(PEG5000)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 186)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 187)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 188)

KC NTATC VLG KLSQ ELH KLQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 189)

KCNTSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 190)

KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 191)

KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 192)

KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 193)

KCNTA(Hse)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 194)

KCNTA(Ahb)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 195)

KCNTA(Ahp)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 196)

KCNTAT(OP03H2)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 197)

KCNTATCVLG(0m)LSQELH(0m)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 198)

KCNTATCVLG(Cit)LSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 199)

KC NTATC VLG (h K) LSQ ELH (h K) LQTYP RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 200)

L-Octilglicina KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 201)

N-3,6-dioxaoctanoil-CNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 202)

KCNTATCMLGRYTQDFHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 203)

DSNLSTKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 204)

KDNTATKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 205)

CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 206)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(9Anc) (SEQ ID NO: 207)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(L-octilglicina) (SEQ ID NO: 208)

N-isocaproil-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 209)KCNTATCVLG(hR)LSQELH(hR)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 210)

FCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 211)

KCNTATCVLGRLSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 212)

KCNTATCVLGRLSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 213)

ICNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 214)

1-Octilglicina-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 215)

Isocaproil-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 216)

KC NTATC VLG (C it) LSQ E LH RLQTY P RTNTGS NTY (SEQ ID NO: 217)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU) (SEQ ID NO: 218)

lsocaproil-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU) (SEQ ID NO: 219)

KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSEAF (SEQ ID NO: 220)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPTNVGSEAF (SEQ ID NO: 221)

KC NTATC VLG R LS RS LH R LQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 222)

KC NTATCVTH R LSQ ELH R LQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 223)

KC NTATC VLG R LA D FLH R LQTY P RTNTGS NTY (SEQ ID NO: 224)

C NTATCVLG RLSQ E LH R LQTY P RTNTG S NT (SEQ ID NO: 225)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQNFVPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 226)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSETF (SEQ ID NO: 227)

ACDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 228)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSKAF (SEQ ID NO: 229)

KC DTATCVTH RLAG LLS RSQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 230)

KCNTATCVLGRLADALHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 231)

KC NTATC VLG R LA A FLH RLQTY P RTNTG SNTY (SEQ ID NO: 232)

SC NTATCVLG R LA D FLH R LQTYP RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 233)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTMPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 234)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 235)

KC NTATC VLG R LN E YLH RLQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 236)

SCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 237)

KCNTATCVLGRLTEFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 238)

KCNTATCVLGRLAEFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 239)KCNTATCVLGRLTDYLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 240)

KCNTATCVLGRLAQFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 241)

KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 242)

KCNTATCVLGRLADFLHRFHTFPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 243)

KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSGTP (SEQ ID NO: 244)

CNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 245)

KCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 246)

KCNTATCVLGRLFDFLHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 247)

KC NTATC VLG R LAAALH R LQTY P RTNTG S NTY (SEQ ID NO: 248)

TCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 249)

CSNLSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 250)

KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 251)

CSNLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 252)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY (SEQ ID NO: 253).

Em algumas modalidades, compostos que compreendem a se-qüência de aminoácido KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO: 253) são de uso particular nos métodos descritos.

Como descrito aqui, os hormônios de peptídeo da família daamilina úteis nas composições e métodos descritos aqui também incluempeptídeos de adrenomedulina (ADM). Por "adrenomedulina" ou "ADM" en-tende-se o hormônio de peptídeo humano e espécies variantes desse. ADMé gerado a partir de um ferormônio de 185 aminoácidos através de clivagemenzimática e amidação consecutivas. Esse processo culmina na liberação deum peptídeo bioativo de 52 aminoácidos. Qualquer peptídeo de ADM conhe-cido, análogo ou derivado que exibe atividade biológica conhecida na técnicapode ser usado nas composições e métodos aqui descritos. Em uma moda-lidade, os peptídeos análogos e derivados de ADM, têm pelo menos umaatividade hormonal de peptídeos de ADM nativos. Em certas modalidades,os peptídeos, análogos e derivados de ADM são agonistas de um receptorao qual ADM nativa é capaz de se ligar especificamente.

Como descrito aqui, os hormônios de peptídeo da família daamilina úteis nas composições e métodos aqui descritos também incluempeptídeos de calcitonina (CT). Por "calcitonina" ou "CT" entende-se o hor-mônio peptídico humano e espécies variantes desse, incluindo calcitonina desalmão (sCT). CT é um peptídeo de 32 aminoácidos clivado a partir de umpró-hormônio maior. Ele contém uma única ligação de dissulfeto, que fazcom que a terminação amino assuma o formato de um anel. Peptídeos deCT nativos são conhecidos na técnica, como são análogos, derivados e hí-bridos de peptídeo CT funcionais. Qualquer peptídeo, análogo, ou derivadode CT conhecido na técnica que exibe atividade biológica conhecida na téc-nica pode ser usado nas composições e métodos aqui descritos. Em umamodalidade, os peptídeos, análogos, e derivados de CT, são agonistas deum receptor ao qual CT nativo é capaz de se ligar especificamente. Análo-gos, derivados e híbridos de peptídeo CT podem ser amidados como conhe-cido na técnica, ou podem estar na forma ácida. Análogos e derivados de CTexemplares incluem, mas não são limitados, àqueles descritos nas Pat. U.S.Nos. 4.652.627, 4.606.856, 4.604.238, 4.597.900, 4.537.716, 4.497.731,4.495.097, 4.444.981, 4.414.149, 4.401.593, e 4.397.780, que estão pormeio deste incorporados por referência.

Como descrito aqui, os hormônios de peptídeo da família daamilina úteis nas composições e métodos aqui descritos também incluem opeptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP). Por "peptídeo relacio-nado ao gene da calcitonina" ou "CGRP" entende-se o hormônio de peptí-deo humano entende-se o hormônio de peptídeo humano e espécies varian-tes desse, em qualquer forma fisiológica. CGRP é um peptídeo de 37 ami-noácidos e é codificado e expresso a partir de splicing alternativo do pré-mRNA da calcitonina. Qualquer CGRP, análogo de CGRP, ou derivado deCGRP conhecido na técnica que exibe atividade biológica conhecida na téc-nica pode ser usada nas composições e métodos aqui descritos. Em umamodalidade, os peptídeos, análogos, e derivados de CGRP têm pelo menosuma atividade hormonal de CGRP nativo. Em certas modalidades, os peptí-deos, análogos e derivados de CGRP são agonistas de um receptor ao qualCGRP nativo é capaz de se ligar especificamente. Peptídeos, análogos ederivados de CGRP podem ser amidados como conhecido na técnica oupodem estar na forma ácida. Análogos e derivados de CGRP exemplaresincluem, mas não são limitados, àqueles descritos na Pat. U.S. N055. 4.697.002;e 4.687.839, que estão por meio desse incorporados por referência.

Derivados dos agonistas e análogos também estão incluídosdentro dos métodos fornecidos nos quais a estereoquímica de aminoácidosindividuais pode ser invertida de (L)/S para (D)/R em um ou mais sítios es-pecíficos. Também incluídos dentro dos métodos fornecidos estão os ago-nistas e análogos modificados por glicosilação de resíduos de Asn, Ser e/ouThr. Compostos úteis nos métodos fornecidos aqui também podem serfragmentos biologicamente ativos dos peptídeos (nativo, agonista, e derivado) aqui descritos.

Agonistas e análogos de amilina que contêm menos caráter depeptídeo estão incluídos dentro dos métodos fornecidos. Tais miméticos depeptídeo podem incluir, por exemplo, uma ou mais das seguintes substitui-ções para ligações de amida --CO-NH-: depsipeptídeos (--CO--0--), imi-nometilenos (-CH2 -NH-), trans-alquenos (~CH=CH-), beta-enaminonitrilas (--C(=CH--CN)--NH--), tioamidas (--CS--NH--), tiometilenos (--S--CH2 - ou -CH2 -S-), metilenos (-CH2 --C2 --) e retroamidas (-NH-CO-).

Compostos para uso nos métodos fornecidos formam sais comvários ácidos e bases inorgânicos e orgânicos. Tais sais incluem sais prepa-rados com ácidos orgânicos e inorgânicos, por exemplo HCI, HBr, H2S04,H3PO4, ácido trifluoroacético, ácido acético, ácido fórmico, ácido metanossul-fônico, ácido toluenossulfônico, ácido maléico, ácido fumárico e ácido can-forsulfônico. Sais preparados com bases incluem, por exemplo, sais de a-mônio, sais de metal alcalino (tais como sais de sódio e potássio) e sais demetal alcalino-terroso (tais como sais de cálcio e magnésio). Em certas mo-dalidades, os compostos formam sais de acetato, cloridrato e trifluoroacetato.

Agonistas de amilina úteis nas composições e métodos aqui for-necidos também podem incluir fragmentos de amilina e seus análogos comodescrito acima assim como aqueles descritos em EP 289287, os conteúdosdos quais estão por meio desse incorporados por referência. Análogos deagonistas de amilina também podem ser compostos que tem pelo menos 60,65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, ou 99% de identidade de seqüência de aminoáci-do a SEQ ID NO: 1, ou qualquer um dos análogos de amilina especificamen-te descritos aqui que tem atividade de amilina. Agonistas de amilina tambémincluem moléculas químicas pequenas e moléculas não peptídicas, por e-xemplo aquelas baseadas em química de moléculas pequenas. Em algumasmodalidades, agonistas de amilina não são moléculas químicas pequenas.

Derivados dos peptídeos ou análogos da família da amilina tam-bém são conhecidos na técnica. Tais derivados incluem hormônios de peptí-deo da família da amilina e análogos desses conjugados a uma ou mais mo-léculas de polímero solúvel em água, tal como polietileno glicol (PEG) oucadeias de ácido graxo de varias extensões (por exemplo, estearila, palmi-toíla, octanoíla, etc), ou pela adição de poliamino ácidos, tais como poli-his,poli-arg, poli-lys, poli-ala, e combinações de poliamino ácidos, tais como poli-his-ala, poli-arg-ala, e poli-lys-ala. Modificações aos peptídeos ou análogosdesses também podem incluir substituintes de molécula, tais como alquilascurtas e alquilas limitadas (por exemplo, ramificado, cíclico, fundido, ada-mantila), e grupos aromáticos. Como descrito aqui, tais conjugações de po-límero e modificações de pequenas moléculas podem ocorrer singularmentena terminação-N ou -C ou nas cadeias laterais de resíduos de aminoácidosdentro do peptídeo. Alternativamente, podem haver múltiplos sítios de deri-vatização ao longo do peptídeo. Substituição de um ou mais aminoácidoscom Usina, ácido aspartico, ácido glutamico, ou cisteína pode fornecer sítiosadicionais para derivatização. Veja, por exemplo Pat. U.S. Nos. 5.824.784 e5.824.778. Em algumas modalidades, os peptídeos podem ser conjugados auma, duas, ou três moléculas de polímero.

Moléculas de polímero solúvel em água exemplares terão umpeso molecular variando entre cerca de 500 a cerca de 20.000 dáltons. Emalguns casos, as moléculas de polímero solúvel em água são ligadas a umgrupo amino, carboxila, ou tiol e podem ser ligadas por uma terminação N ouC, ou nas cadeias laterais de lisina, ácido aspartico, ácido glutamico ou eis-teína. Alternativamente, as moléculas de polímero solúvel em água podemser ligadas com diamina e grupos dicarboxílicos. Em algumas modalidades,os peptídeos são ligados a uma, duas, ou três moléculas de PEG através deum grupo amino sobre um aminoácido lisina.

Derivados também incluem hormônios de peptídeo da família daamilina ou análogos com alterações químicas a um ou mais resíduos de a-minoácido. Tais alterações químicas incluem amidação, glicosilação, acila-ção, sulfatação, fosforilação, acetilaçao e ciclizaçao. As alterações químicaspodem ocorrer singularmente na terminação N- ou C ou nas cadeias lateraisde resíduos de aminoácidos dentro da seqüência do peptídeo. Em uma mo-dalidade, a terminação-C desses peptídeos pode ter um grupo -OH ou -NH2livre. Em outra modalidade, a extremidade N-terminal pode ser capeada comum grupo isobutiloxicarbonila, um grupo isopropiloxicarbonila, um grupo n-butiloxicarbonila, um grupo etoxicarbonila, um grupo isocaproíla (isocap), umgrupo octanila um grupo de octil glicina (G(Oct)), ou um grupo de ácido 8-aminooctânico. Em uma modalidade, ciclizaçao pode ser através da forma-ção de pontes de dissulfeto. Alternativamente, podem ser vários sítios dealteração química ao longo do peptídeo.

"Atividade de amilina" como usado aqui pode incluir pelo menosuma das atividades conhecidas na técnica descritas abaixo. Atividade deamilina pode incluir também a atividade da amilina de modificar a preferênciapor alimentos, modificar a compulsão alimentar, modificar o desejo por ali-mento, ou qualquer combinação desses. Em geral, agonistas de amilina ouanálogos de agonistas de amilina são reconhecidos como se referindo acompostos que, pela interação ou ligação direta ou indireta com um ou maisreceptores, mimetiza uma ação da amilina. Eles também podem ser referi-dos como amilinomiméticos.

Atividade como agonistas e/ou análogos de amilina pode serconfirmada e quantificada pela realização de vários ensaios de rastreamen-to, incluindo o ensaio de ligação ao receptor de nucleus accumbens, o en-saio do músculo soleus, um ensaio de esvaziamento gástrico, ou pela habili-dade de induzir hipocalcemia ou reduzir hiperglicemia pós-prandial em ma-míferos. Métodos de testar compostos para a atividade de amilina são co-nhecidos na técnica. Métodos e ensaios de rastreamento exemplares paratestar agonistas de amilina são descritos nas Pat. U.S. Nos. 5.264.372 e5.686.411, que estão incorporadas aqui por referência.

O ensaio de ligação ao receptor, um ensaio de competição quemede a habilidade de compostos se ligarem especificamente a receptoresde amilina ligados a membrana. Uma fonte das preparações de membranausada no ensaio é o prosencéfalo basal que compreende membranas donucleus accumbens e regiões adjacentes. Compostos sendo testados com-petem pela ligação a essas preparações de receptor com amilina de rato 125lBolton Hunter. As curvas de competição, em que a quantidade ligada (B) éplotada como uma função do log da concentração de ligante, são analisadaspor computador usando análises por regressão não-linear a uma equaçãologística de 4 parâmetros (programa INPLOT, GraphPAD Software, San Di-ego, CA) ou o programa ALLFIT de DeLean et al. (ALLFIT, Versão 2.7 (NIH,Bethesda, Md. 20892)). Munson etal. (1980) Anal. Biochem. 107:220-239.

Ensaios de atividade biológica de agonistas/análogos de amilinano músculo soleus podem ser realizados usando métodos descritos anteri-ormente (Leighton et al. (1988) Nature 335:632-635; Cooper et al. (1988)Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:7763-7766), nos quais a atividade de agonis-tas de amilina pode ser avaliada pela mediação da inibição de síntese deglicogênio estimulada por insulina. Em resumo, um método exemplar incluifitas de músculo soleus preparadas a partir de ratos machos Wistar com je-jum de 12 horas. Os tendões dos músculos são ligados antes da ligação aclipes de aço inoxidável. Fitas de músculo são pré-incubadas em frascosErlenmeyer contendo 3,5 ml de tampão de bicarbonato Krebs-Ringer, ácidoN-2-hidroxietil-peperazina-N'-2-etano-sulfônico 7mM, pH 7.4, e piruvato 5.5mM. Os frascos são selados e gaseificados continuamente com O2 e CO2 narazão 19:1 (v/v). Após pré-incubação de músculos nesse meio por 30 min a37°C em um banho de água oscilante, as fitas de músculo são transferidaspara frascos similares contendo meio idêntico (exceto piruvato) com glicose[U-14C] (0,5 uCi/ml) e insulina (100 uU/ml) adicionadas. Os frascos foramselados e re-gaseifiçados por 15 min iniciais em uma incubação de 1-h. Nofinal do período de incubação. Os músculos são marcados e rapidamentecongelados em N2 líquido. A concentração de lactato no meio de incubaçãopode ser determinada espectrofotometricamente e a incorporação de glicose[U-14C] em glicogênio medida.

Métodos de medir a taxa de esvaziamento gástrico são descritasem, por exemplo Young et al. (1995) Diabetologia 38:642-648. Em um méto-do de vermelho de fenol, ratos conscientes recebem por gavagem um gelincolor contendo metil celulose e um indicador de vermelho de fenol. Vinteminutos após a gavagem, os animais são anestesiados usando halotano, oestômago é exposto e pinçado nos esfíncteres pilórico e esofágico inferior,removido e aberto dentro de uma solução alcalina. O conteúdo do estômagopode ser derivado da intensidade do vermelho de fenol na solução alcalina,medida pela absorbância em um comprimento de onda de 560 nm. Em ummétodo de glicose tritiada, ratos conscientes são submetidos a gavagemcom glicose tritiada em água. Os ratos são gentilmente controlados pelacauda, a ponta da qual é anestesiada usando lidocaína. O trítio no plasmaseparado do sangue da cauda é coletado em vários pontos de tempo e de-tectado em um contador beta. Os compostos de teste são normalmente ad-ministrados cerca de um minuto antes da gavagem.

Os compostos agonistas de amilina podem exibir atividade noensaio de ligação ao receptor na ordem de menos do que cerca de 1 a 5 nM,em algumas modalidades menos do que cerca de 1 nM e em algumas mo-dalidades menos do que cerca de 50 pM. No ensaio do músculo soleus,compostos agonistas de amilina podem mostrar valores de EC5o na ordemde menos do que cerca de 1 a 10 micromolares. Nos ensaios de esvazia-mento gástrico, compostos agonistas de amilina mostram valores de ED50 naordem de menos do que 100 ug/rato.

Os peptídeos descritos aqui podem ser preparados usando téc-nicas de síntese química de peptídeos conhecidas na técnica, por exemplousando um sintetizador de peptídeo automático ou semi-automático, técni-cas recombinantes padrão, ou ambas. Da mesma forma, derivados dos pep-tídeos podem ser produzidos usando metodologias químicas, bioquímicas,ou in vivo padronizadas.

Os peptídeos podem ser sintetizados em solução ou sobre umsuporte sólido de acordo com técnicas convencionais. Vários sintetizadoresautomáticos são disponíveis comercialmente e podem ser usados de acordocom vários protocolos conhecidos. Veja, por exemplo, Stewart et al. (1984)Solid Phase Peptide Synthesis, 2d. ed., Pierce Chemical Co.; Tam et al.(1983) J. Am. Chem. Soe. 105: 6442; Merrifield (1986) Science 232: 341-347; e Barany et al. (1979) The Peptides, Gross et ai, eds., Academic Press,NY, 1-284. Síntese de peptídeo em fase sólida pode ser realizada usandoum sintetizador de peptídeo automático ou semi-automático. Tipicamente,usando tais técnicas, um aminoácido protegido com a-N-carbamoíla e umaminoácido ligado a cadeia crescente de peptídeo sobre uma resina são a-coplados em temperatura ambiente em um solvente inerte tal como dimetil-formamida, N-metilpirrolidinona ou cloreto de metileno na presença de agen-tes acopladores tais como dicicloexilcarbodiimida e 1-hidroxibenzotriazol napresença de uma base tal como diisopropiletilamina. O grupo protetor a-N-carbamoíla é removido da resina de peptídeo resultante usando um reagentetal como ácido trifluoroacético ou piperidina, e a reação de acoplamento re-petida com o próximo aminoácido N-protegido desejado a ser adicionado acadeia de peptídeo. Grupos N-protetores são bem-conhecidos na técnica,com t-butiloxicarbonil a (tBoc) e fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc) como exem-plos. Por exemplo, síntese de peptídeo em fase sólida pode ser realizadacom um sintetizador automático de peptídeo (por exemplo, Modelo 430A,Applied Biosystems Inc., Foster City, CA) usando o sistema de NMP/HOBt(Opção 1) e química de tBoc ou Fmoc com capeamento (veja, Manual doUsuário da Applied Biosystems para o Sintetizador de Peptídeo ABI 430A,Versão 1.3B, 1o de julho de 1988, seção 6:49-70). Os peptídeos tambémpode ser agrupados usando um Sintetizador Advanced ChemTech (ModeloMPS 350, Louisville, KY). Os peptídeos podem ser purificados por RP-HPLC(preparativo e analítico) usando, por exemplo, um sistema Waters® DELTA-PREP™ 3000 (Waters Corp., Milford, MA) e uma coluna preparativa C4, C8,ou C18 (10 u, 2,2 x 25 cm; Grace Vydac, Hesperia, CA). O peptídeo podeser facilmente sintetizado e então rastreado em ensaios projetados para i-dentificar peptídeos com atividades particulares, outros métodos de sintetizare purificar peptídeos são conhecidos do versado na técnica.

Os peptídeos aqui descritos podem ser produzidos alternativa-mente por técnicas recombinantes bem-conhecidas na técnica. Veja, porexemplo, Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,2d ed., Cold Spring Harbor, NY. Os peptídeos produzidos por tecnologiasrecombinantes podem ser expressos a partir de um polinucleotídeo. Um ver-sado na técnica observará que os polinucleotídeos, incluindo DNA e RNA,que codificam os tais vários fragmentos dos peptídeos podem ser obtidos apartir do cDNA selvagem, levando em consideração a degeneração do usode códon, ou podem ser projetados como desejado. Essas seqüências depolinucleotídeo podem incorporar códons que facilitam a transcrição e tradu-ção de mRNA em hospedeiros microbianos. Tais seqüências de fabricaçãopodem ser facilmente construídas de acordo com os métodos bem-conhecidos na técnica. Os polinucleotídeos acima também podem codificaropcionalmente um resíduo de metionila N-terminal. Os polinucleotídeos aci-ma também pode codificar opcionalmente um resíduo de glicil C-terminalpara formação de amida apropriada. Compostos não-peptidícos úteis nacomposição e métodos fornecidos aqui podem ser preparados por métodosconhecidos na técnica. Por exemplo, aminoácidos contendo fosfato e peptí-deos que contêm tais aminoácidos podem ser preparados usando métodosconhecidos na técnica. Veja, por exemplo,. Bartlett et al. (1986) Bioorg.Chem. 14: 356-377.

Uma variedade de tipos celulares pode ser usadas para conter eexpressar uma seqüência codificante de peptídeo, incluindo, por exemplo,bactérias, leveduras, algas, células de inseto, células de planta e células deanimais tais como células de mamífero e de aves. Vários sistemas de ex-pressão vetor/hospedeiro podem ser usados, incluindo, mas não são limita-dos a microorganismos tais como bactérias transformadas com vetores deexpressão de DNA de bacteriófago, plasmídeo ou cosmídeo recombinantes;leveduras transformadas com vetores de expressão de levedura; sistemasde células de inseto infectadas com vetores de expressão virais (por exem-plo, baculovírus); sistemas de células de planta transfectados com vetoresde expressão virais (por exemplo, vírus do mosaico da couve-flor (CaMV);vírus do mosaico do tabaco (TMV) ou vetores de expressão bacterianos (porexemplo, plasmídeo Ti ou pBR322); ou sistemas de célula animal. Célulasde mamífero e linhagens celulares que são úteis em produções de proteínarecombinante incluem, mas não são limitadas a, células VERO (rim de ma-caco verde africano), células HeLa, linhagens celulares de ovário de hamsterchinês (CHO), células COS (tal como COS-7), WI38 (fibroblastos de pulmãohumano), células de rim de hamster recém-nascido (BHK), células HepG2,3T3, RIN, epiteliais de rim canino Madin-Darby (MDCK), células A549, PC12,K562 e 293. Protocolos exemplares para a expressão recombinante de poli-peptídeos são bem-conhecidos na técnica.

Cepas de células hospedeiras podem ser escolhidas para umahabilidade particular para processar o peptídeo expresso ou produzir certasmodificações pós-tradução que serão úteis em fornecer atividade de peptí-deo. Tais modificações do polipeptídeo incluem, mas não são limitadas a,acetilação, carboxilação, glicosilação, fosforilação, lipidação, acilação e ami-dação, por exemplo amidação carbóxi-terminal. Processamento pós-traducional, que diva uma forma "prepro" do polipeptídeo também pode serimportante para inserção, dobramento e/ou função corretas. Células hospe-deiras diferentes tais como CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38, e similars, temmaquinário celular específico e mecanismos característicos para tais ativida-des pós-traducionais, e podem ser escolhidas para garantir a modificação eprocessamento corretos da proteína estranha introduzida.

Os peptídeos descritos aqui podem ser produzidos usando umacombinação tanto de síntese de peptídeo automática quanto de técnicas re-combinantes. Por exemplo, um peptídeo pode conter uma combinação demodificações incluindo deleção, substituição, e inserção por PEGuilação. Talpeptídeo pode ser produzido em estágios. Por exemplo, no primeiro estágio,um peptídeo intermediário contendo as modificações de deleção, substitui-ção e inserção, e qualquer combinação dessas, pode ser produzido por téc-nicas recombinante como descrito. Então, após uma etapa de purificaçãoopcional, o peptídeo intermediário é PEGuilado através de modificação quí-mica com um reagente PEGuilante apropriado (por exemplo, de Nektar The-rapeutics, San Carlos, CA) para produzir o peptídeo desejado. A amidaçãode um peptídeo também pode ser feita em estágios. Um versado na técnicaobservará que o procedimento descrito acima pode ser generalizado para seaplicar a um peptídeo que contem uma combinação de modificações sele-cionadas a partir de deleção, substituição, inserção, derivação, e outros mei-os de modificação bem-conhecidos na técnica e contemplados aqui.

Os peptídeos aqui descritos também podem ser produzidos u-sando esquemas de ligação química conhecidos na técnica, incluindo aque-les descritos, por exemplo nas Publicações de Pedido Nos. 2003-0191291,2003-0208046, e 2004-0115774. Ligação química refere-se a uma reaçãoquimiosseletiva envolvendo a união covalente de duas porções químicas,cada uma das ditas porções carrega um grupo funcional reativo que é capazexclusivamente de formar uma ligação covalente irreversível com o outro.Grupos funcionais únicos, mutuamente reativos, presentes nos primeiro esegundo componentes podem ser usados para tornar a reação de ligaçãoquimiosseletiva. Por exemplo, a ligação química de peptídeos e polipeptí-deos envolve a reação quimiosseletiva de segmentos do peptídeo ou poli-peptídeo que carregam resíduos de aminoácidos C-terminais e N-terminaisúnicos, mutuamente reativos. A ligação química inclui a ligação covalente de(1) um primeiro peptídeo ou polipeptídeo que carrega um grupo C-terminalexclusivamente reativo C-terminal com (2) um segundo peptídeo ou polipep-tídeo que carrega um grupo N-terminal exclusivamente reativo, onde os gru-pos reativos C-terminais e N-terminais formam uma ligação não covalentereversível entre eles. Isso também inclui ligação N-terminal e N-terminal e C-terminal a C-terminal. Em particular, ligação química inclui qualquer químicade reação quimiosseletiva que pode ser aplicada a ligação de segmentos depeptídeo desprotegidos. Vários químicos diferentes têm sido utilizados paraessa finalidade, exemplos dos quais incluem ligação química nativa, ligaçãoquímica formadora de oxima, ligação formadora de tioéster (Schnolzer et al.(1992) Science 256:221-225; Gieselman et al. (2001) Org. Lett. 3:1331-1334), ligação formadora de tioéter (Englebretsen et al. (1995) Tot. Leffs.36:8871-8874), ligação formadora de hidrazona (Gaertner, et al. (1994) Bio-conj. Chem. 5:333-338), e ligação formadora de tiazolidina e ligação forma-dora de oxazolidina (Zhang et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95:9184-9189; Publicação PCT No. WO 95/00846; Pat. U.S. N°. 5.589.356); e ligaçãoquímica formadora de amida de Staudinger (Saxon et al. (2000) Org. Lett.2:2141-2143).

Condições de reação para uma dada química de ligação sãogeralmente selecionadas para manter interação desejada do peptídeo ousegmentos de polipeptídeo empregados para ligação. Por exemplo, o pH etemperatura, solubilidade em água dos componentes de ligação, razão doprimeiro segmento para o segundo segmento, conteúdo de água e composi-ção da mistura de reação pode ser alterada para otimizar a ligação. A adiçãoou exclusão de segmentos em diferentes extensões pode ainda ser usadapara controlar a especificidade e taxa da reação de ligação desejada, isto é,controlar a exposição e apresentação de grupos reativos pela manipulaçãoda solubilidade do peptídeo ou segmentos de polipeptídeo. Condições dereação são facilmente determinadas pelo teste para o produto de reaçãoquimiosseletiva desejado em comparação a um ou mais controles externos.Essas metodologias provaram ser metodologias robustas para gerar umaligação de amida nativa no sítio de ligação.

Em conjunto com o desenho do peptídeo, os peptídeos ou seg-mentos de polipeptídeo utilizados para sintetizar o estrutura principal do poli-peptídeo são construídos. Métodos úteis na síntese de peptídeos e estrutu-ras principais de polipeptídeos são descritos, em por exemplo, Publicação dePedido de Patente U.S. Nos. 2004-0138412 (ligação química nativa estendi-da), 2003-0208046 (ligação química pseudonativa), 2005-0261473 (estraté-gias de proteção carbóxi para aminoácidos C-terminais ácidos em ligaçãoquímica para eliminar a formação de produtos secundários indesejados),2005-0064538 e 2005-0113563 (ligação química ativa com eficácia melhora-da de ligação e ligação química com três ou mais componentes); na Publica-ção de Pedido PCT Nos. WO2004/105685 (ligação química em fase sólidacompatível com água usando um ligante deslocável) e WO2004/060925 (li-gação de polímero multiplex com grupos protetores poliméricos solúveis emágua e sua substituição com adutos desejados); e nas Pat. U.S. Nos.6.307.018 e 6.184.344 (ligação química nativa), 6.326.468 (ligação químicanativa em fasse sólida), 6.217.873 (compostos de polioxima), 6.174.530(composições homogêneas de polioxima), 6.001.364 (compostos heteropoli-oxima), e 6.451.543 (síntese assistida lipídeo-matriz). Em geral, a síntese deuma estrutura principal de peptídeo ou polipeptídeo por ligação química en-volve a seleção de sítios de ligação adequados que são escolhidos com ba-se na química de ligação selecionada para agrupar os vários segmentos daestrutura principal de polipeptídeo, a química de acoplamento de polímeroreversível (ou clivável) escolhida para um dado peptídeo alvo, e os sítios deacoplamento particulares. Quando a ligação química nativa é empregada,sítios de ligação de cisteína são determinados pelo rastreamento da se-qüência de aminoácido da estrutura principal do polipeptídeo alvo para oresíduo de cisteína de ocorrência natural adequado. Quando "ligação quími-ca nativa estendida" é empregada os sítios de ligação podem ser seleciona-dos pelo rastreamento da seqüência de aminoácido da estrutura principal dopolipeptídeo alvo por junções de sítio de ligação de ocorrência natural quepermitem ligações robustas. Pelo fato da ligação química nativa estendidanão ser limitada a ligação em resíduos de cisteína, qualquer número de resí-duos pode servir como a junção do sítio de ligação. Em alguns casos, umacombinação de ligação química nativa e estendida pode ser parte do dese-nho.

Em uma modalidade, a ligação química nativa é usada para ge-rar parte ou toda a cadeia de polipeptídeo de extensão completa. As cisteí-nas presentes na estrutura principal de peptídeo de ocorrência natural po-dem ser usadas como os sítios de ligação química. Alternativamente, onde ajunção de ligação desejada é isenta de uma cisteína adequada, o aminoáci-do não cisteína naquela posição pode ser substituído com uma cisteína ouuma cisteína pode ser inserida para permitir a ligação química nativa naque-le sítio. Se desejado, a cisteína recentemente introduzida pode ser converti-da em um pseudo resíduo de aminoácido que corresponde ao aminoácidooriginal naquela posição. A formação de um pseudo-aminoácido por conver-são de uma cisteína em sítios de ligação nativos é referida como "pseudoli-gação química nativa". Alternativamente, quando a cisteína é introduzida emum sítio para modificação de grupo protetor de polímero, o tiol da cadeia la-teral pode ser explorado para a ligação de um construto de polímero solúvelem água reativo com tiol, contanto que todas as outras cisteínas no polipep-tídeo alvo que não se deseje modificar sejam protegidas. Em outra modali-dade, ligação química nativa estendida pode ser utilizada para gerar parte outodo o polipeptídeo de extensão completa. Os peptídeos usados para liga-ção mediada por tioéster, tal como para ligação química nativa, também po-dem ser feitos seguindo protocolos padronizados, por exemplo veja Pat. U.S.Nos. 6.307.018 e 6.184.344.

Como usado aqui, o termo "peptídeo purificado" é pretendidopara se referir a uma composição, isolada de outros componentes, em que opeptídeo é purificado em qualquer grau em relação ao seu estado de obten-ção natural. Um peptídeo purificado portanto também refere-se a um peptí-deo, livre do ambiente no qual ele pode ocorrer naturalmente. Geralmente,"purificado" irá se referir a uma composição de peptídeo que foi submetida afracionamento para remover vários outros componentes, e cuja composiçãoretém substancialmente uma atividade biológica. Onde o termo "substanci-almente purificado" é usado, essa designação se referirá a uma composiçãona qual o peptídeo forma o principal componente da composição, tal comoconstituindo cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cer-ca de 90%, cerca de 95% ou mais dos peptídeos na composição.

Pode ser desejável purificar os peptídeos gerados pelos méto-dos descritos aqui. Técnicas de purificação de peptídeo são bem-conhecidasdaqueles versados na técnica. Essas técnicas envolvem, em um nível, o fra-cionamento bruto do ambiente celular para frações polipeptídicas e não poli-peptídicas. Tendo separado o polipeptídeo de outras proteínas, o polipeptí-deo de interesse pode ser purificado adicionalmente usando técnicas croma-tográficas e eletroforéticas para alcançar purificação completa ou parcial (oupurificação até homogeneidade). Técnicas de purificação incluem, por e-xemplo, precipitação com sulfato de amônio, PEG, anticorpos, e similars;desnaturação por calor, seguida por centrifugação; etapas de cromatografiatais como cromatografia de troca de íon, de filtração em gel, de fase reversa,de hidroxilapatita e de afinidade; focalização isoelétrica; eletroforese em gel;e combinações de tais e outras técnicas. Métodos analíticos particularmenteadequados para a preparação de um peptídeo puro são cromatografia detroca de íon, cromatografia de exclusão, eletroforese em gel de poliacrilami-da, e focalização isoelétrica. Um método particularmente eficaz de purifica-ção de peptídeos é HPLC de fase reversa, seguido pela caracterização dpproduto purificado por cromatografia líquida/espectometria de massa(LC/MS) e espectometria de massa de lonização de Dessorção a Laser As-sistida por Matriz (MALDI). Confirmação adicional de pureza é obtida peladeterminação de análise de aminoácido. Como é geralmente conhecido natécnica, acredita-se que a ordem de condução das várias etapas de purifica-ção pode ser alterada, ou que certas etapas podem ser omitidas, e aindaresultará em um método adequado para a preparação de uma proteína oupeptídeo substancialmente purificado.

Não há necessidade geral de que os peptídeos sempre sejamfornecidos no seu estado mais purificado. De fato, é contemplado que produ-tos menos substancialmente purificados terão utilidade em certas modalida-des. A purificação parcial pode ser realizada pelo uso de menos etapas depurificação em combinação, ou pela utilização de formas diferentes do mes-mo esquema de geral de purificação. Por exemplo, é observado que croma-tografia de coluna de troca de cátion realizada, utilizado um aparelho de H-PLC, geralmente resultará em uma purificação melhor do que a mesma téc-nica utilizando um sistema de cromatografia de baixa pressão. Métodos queexibem um grau menor de purificação relativa têm vantagens na recupera-ção total do produto de proteína, ou na manutenção da atividade do peptí-deo. Em algumas modalidades, uma combinação de troca de ânion e croma-tografia de imunoafinidade pode ser usada para produzir composições depeptídeo purificadas descritas aqui.

A amilina, agonistas e amilina, e derivados de amilina (aqui refe-ridos nessa seção como os "compostos de amilina" podem ser administra-dos sozinhos ou em combinação com veículos ou excipientes farmaceutica-mente aceitáveis, tanto em doses únicas como múltiplas. Conseqüentemen-te, composições farmacêuticas são fornecidas que compreendem uma quan-tidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de pelo menos um composto deamilina ou um sal farmaceuticamente aceitável desse, junto com diluentesfarmaceuticamente aceitáveis, conservantes, solubilizantes, emulsificantes,adjuvantes e/ou veículos úteis na liberação dos compostos de amilina. Essescompostos farmacêuticos podem ser formulados com veículos ou diluentesfarmaceuticamente aceitáveis assim como quaisquer outros adjuvantes eexcipientes de acordo com técnicas convencionais tais como aquelas descri-tas em Remington's Pharmaceutical Sciences por E. W. Martin. Veja tam-bém Wang et al. (1988) Journal of Parenteral Science and Technology Te-chnical Report No. 10, Sup. 42:2S. Formulações exemplares para amilina ouum agonista de amilina podem ser encontradas em Pat. U.S. N°. 6.410.511 ePublicação de Pedido de Pat. U.S. N°. 2003-0092606, que estão incorpora-das aqui por referência.

Um uso exemplar fornecido aqui é administrar perifericamentetais compostos de amilina para o tratamento ou prevenção de compulsãoalimentar. Outro uso exemplar fornecido aqui é administrar perifericamentetais compostos de amilina para modificar a preferência por alimentos ou de-sejos por alimento. Outro uso exemplar fornecido aqui e administrar periferi-camente tais compostos de amilina para modificar a taxa metabólica de umindivíduo.

Em geral, os compostos podem ser formulados em uma compo-sição farmacêutica estável e segura para administração a um paciente. For-mulações farmacêuticas contempladas para uso nos métodos descritos aquipodem compreender aproximadamente 0,01 a 6,0% (p/v), ou 0,05 a 1,0%,do composto, aproximadamente 0,02 a 0,5% (p/v) de um tampão de acetato,fosfato, citrato ou glutamato que permite um pH da composição final de cer-ca de 3.0 a cerca de 7.0; aproximadamente 1,0 to 10% (p/v) de um tonifican-te de carboidrato ou álcool poliídrico e, opcionalmente aproximadamente0,005 a 1,0% (p/v) de um conservante selecionado a partir do grupo queconsiste em m-cresol, álcool benzílico, metil-, etil-, propil- e butil- parabenose fenol. Tal conservante é geralmente incluído se o peptídeo formulado forpara ser incluído em um produto de múltiplo uso.

Em uma modalidade particular, uma formulação farmacêuticapode ser uma variação de concentrações do composto, por exemplo entrecerca de 0,01% a cerca de 98% (p/v), ou entre cerca de 1 a cerca de 98%(p/v), ou entre cerca de 80% e 90% (p/v), ou entre cerca de 0,01% a cercade 50% (p/v), ou entre cerca de 10% a cerca de 25% (p/v) nessa modalida-de. Uma quantidade suficiente de água para injeção pode ser usada paraobter a concentração desejada de solução.

Agentes tonificantes adicionais tais como cloreto de sódio, assimcomo outros excipientes conhecidos, também podem estar presentes, sedesejado. Em alguns casos, tais excipientes são úteis na manutenção datonicidade geral da formulação. Um excipiente pode ser incluído nas formu-lações presentemente descritas em várias concentrações. Por exemplo, umexcipiente pode ser incluído na faixa de concentração de cerca de 0,02% acerca de 20% (p/p), cerca de 0,02% e 0,5% (p/p), cerca de 0,02% a cerca de10% (p/p), ou cerca de 1% a cerca de 20% (p/p). Além disso, da mesmaforma que as presentes formulações em si, um excipiente pode ser incluídona forma sólida (incluindo em pó), líquida, semi-sólida ou gel.

Como descrito aqui, uma variedade de veículos líquidos são a-dequados para uso nas presentes formulações de peptídeo, por exemploágua ou uma mistura ou suspensão de solvente aquoso/orgânico. As formu-lações farmacêuticas podem ser compostas em várias formas, por exemplosólida, semi-sólida e líquida. O termo "sólido", como usado aqui, pretendeabranger todos os usos normais desse termo incluindo, por exemplo, formu-lações em pó e liofilizadas. As formulações presentemente descritas podemser liofilizadas.Os termos tampão, solução de tampão e solução tamponada,quando usados como referência a uma concentração de íon hidrogênio oupH, refere-se a habilidade de um sistema, particularmente uma solução a-quosa, de resistir uma alteração de pH ao adicionar ácido ou base, ou emdiluição com um solvente. Característica de soluções tamponadas, que so-frem pequenas alterações de pH na adição de um ácido ou base, é a pre-sença tanto de um ácido fraco e um sal do ácido fraco, ou uma base fraca eum sal da base fraca. Um exemplo do sistema anterior à ácido acético e ace-tato de sódio. A alteração de pH é leve contanto que a quantidade de íonhidrônio e hidroxila adicionado não exceda a capacidade do sistema tampãoutilizado de neutralizá-la. Em algumas modalidades, o composto de amilina ésuspenso em um veículo aquoso, por exemplo uma solução tampão isotôni-ca em um pH de cerca de 3.0 a cerca de 8.0, em um pH de cerca de 3.5 acerca de 7.4, em um pH de cerca de 3.5 a cerca de 6.0, ou em um pH decerca de 3.5 a cerca de 5.0. Em certas modalidades, o pH da formulação émantido na faixa de cerca de 3.5 to cerca de 5.0, ou cerca de 3.5 a cerca de6.5, ou cerca de 3.7 a cerca de 4.3, ou cerca de 3.8 a cerca de 4.2. Um pHparticular pode ser de cerca de 4.0. Enquanto não procura estar ligado poresta teoria, é presentemente entendido que, em algumas modalidades, ondeo pH da formulação farmacêutica excede 5.5, a degradação química do pep-tídeo pode ser acelerada tal que a vida útil é de menos do que cerca de doisanos.

Tampões úteis incluem tampões de citrato de sódio/ácido cítrico,e fosfato de sódio/ácido fosfórico e acetato de sódio/ácido acético. Em certasmodalidades, o tampão com o composto de amilina é um tampão de acetato(por exemplo, em uma concentração e formulação final de cerca de 1-5 mM,por exemplo, 1.5 mM, a cerca de 60 mM), um tampão de fosfato (por exem-plo em uma concentração de formulação final de cerca de 1-5 mM, por e-xemplo, 1.5 mM, a cerca de 30 mM) ou um tampão de glutamato (por exem-pio, em uma concentração final de cerca de 1-5 mM, por exemplo, 1.5 mM, acerca de 60 mM). Em algumas modalidades, o tampão é acetato (por exem-plo, em uma concentração de formulação final de cerca de 5 mM a cerca de30 mM).

Um estabilizante pode ser incluído na presente formulação mas,e de forma importante, não é necessariamente necessário. Se incluído, en-tretanto, um estabilizante na prática da presente formulação é um carboidra-to ou álcool poliídrico. Um estabilizante adequado útil na prática dos presen-tes métodos é aproximadamente 1,0 a 10% (p/v) de um carboidrato ou álcoolpoliídrico. Os alcoóis poliídricos e carboidratos e carboidratos partilham amesma característica nas suas estruturas principais, isto é, -CHOH-CHOH-,que é responsável por estabilizar as proteínas. Os alcoóis poliídricos incluemtais compostos como sorbitol, manitol, glicerol, e polietileno glicóis (PEGs).Esses compostos são moléculas de cadeia simples. Os carboidratos, taiscomo manose, ribose, sacarose, frutose, trealose, maltose, inositol, e lacto-se, por outro lado, são moléculas cíclicas que podem conter um grupo cetoou aldeído. Essas duas classes de compostos têm demonstrado serem efi-cazes em estabilizar a proteína contra desnaturação causada por temperatu-ra elevada e por processos de congelamento-descongelamento ou congela-mento-secagem. Em modalidades nas quais os indivíduos têm diabete, car-boidratos adequados incluem: galactose, arabinose, lactose ou qualquer ou-tro carboidrato que não tem um efeito adverso sobre um paciente diabético,isto é, o carboidrato não é metabolizado para formar concentrações inaceita-velmente grandes de glicose no sangue. Tais carboidratos são bem-conhecidos na técnica como adequados para o diabete. Sacarose e frutosesão adequados para uso com o composto em indivíduos não diabéticos (porexemplo, tratando obesidade ou compulsão alimentar).

Em certas modalidades, se um estabilizante é incluído, o com-posto é estabilizado com um álcool poliídrico tal como sorbitol, manitol, inosi-tol, glicerol, xilitol, e copolímero de polipropileno/etileno glicol, assim como osvários PEGs de peso molecular 200, 400, 1450, 3350, 4000, 6000, e 8000).Manitol é um exemplo de um álcool poliídrico em particular. Outra caracterís-tica útil das formulações liofilizadas descritas aqui é a manutenção da tonici-dade das formulações liofilizadas com o mesmo componente da formulaçãoque serve para manter sua estabilidade. Manitol é um álcool poliídrico parti-cular usado para essa finalidade.

A Farmacopéia dos Estados Unidos (USP) determina que agen-tes antimicrobianos em concentrações bacteriostáticas e fungistáticas deveser adicionados a preparações contidas em recipientes de múltiplas doses.Elas devem estar presentes em uma concentração adequada no momentodo uso para evitar a multiplicação de microorganismos inadvertidamente in-troduzidos na preparação enquanto se retira uma porção dos conteúdos comuma agulha hipodérmica e seringa, ou enquanto se usam outros meios inva-sivos para liberação, tal como injetores em caneta. Agentes antimicrobianosdevem ser avaliados para garantir a compatibilidade com todos os outroscomponentes da fórmula, e sua atividade deve ser avaliada na fórmula totalpara garantir que um agente em particular que é eficaz em uma formulaçãonão seja ineficaz em outra. Não é incomum descobrir que um agente antimi-crobiano em particular será eficaz em uma formulação mas não eficaz emoutra formulação.

Um conservante é, no sentido farmacêutico comum, uma subs-tância que evita ou inibe o crescimento microbiano e pode ser adicionada aformulações farmacêuticas para essa finalidade para evitar a conseqüentedestruição da formulação por microorganismos. Enquanto a quantidade deconservante não é grande, ele pode contudo afetar a estabilidade geral dopeptídeo. A prevenção da ação de microorganismos pode ser alcançada porvários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clo-robutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, e similars. Enquanto o conservantepara uso nas composições farmacêuticas pode varia de 0,005 a 1.0% (p/v),a variação típica para cada conservante, sozinho ou em combinação comoutros, é álcool benzílico (0,1-1,0%), ou m-cresol (0,1-0,6%), ou fenol (0,1-0,8%) ou combinação de metila (0,05-0,25%) e etil- ou propil- ou butil-(0,005%-0,03%) parabenos. Os parabenos são ésteres de alquila inferior deácido para-hidroxibenzóico. Uma descrição detalhada de cada conservante édescrita em "Remington's Pharmaceutical Sciences" assim como Pharma-ceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Vol. 1, 2- ed., Avis et al. Ed.,Mercel Dekker, Nova Iorque, N.Y. (1992).Enquanto não se pretende estar tão limitado, pramlintida25,28,29prohamí|jna não tem uma tencjência de adsorver sobre um recipientede vidro quando em uma forma líquida, portanto, um tensoativo não é ne-cessário para estabilizar a formulação farmacêutica. Entretanto, com relaçãoa compostos que tem tal tendência quando na forma líquida, um tensoativodeve ser usado nas suas formulações. Essas formulações podem então serliofilizadas. Tensoativos causam freqüentemente desnaturação de proteína,tanto de quebra hidrofóbica como por separação de sal. Concentrações rela-tivamente baixas de tensoativo podem exercer uma atividade desnaturantepotente, por causa da forte interação entre as porções de tensoativo e ossítios reativos nas proteínas. Entretanto, o uso criterioso dessa interaçãopode estabilizar proteínas contra desnaturação de superfície e interfacial. Ostensoativos que podem ainda estabilizar o peptídeo podem opcionalmenteestar presentes na faixa de cerca 0,001 a 0,3% (p/v) da formulação e inclu-em polissorbato 80 (isto é, monooleato de polioxietileno (20) sorbitano),CHAPS® (isto é, 3-[(3-colamidopropil) dimetilamônio] 1-propanossulfonato),BRIJ® (por exemplo, Brij 35, que é (éter laurílico de polioxietileno (23)), po-loxâmero, ou outro tensoativo não iônico.

Também pode ser desejável adicionar cloreto de sódio ou outrosal para ajustar a tonicidade da formulação farmacêutica, dependendo dotonificante selecionado. Entretanto, isso é opcional e depende da formulaçãoparticular selecionada. Formulações parenterais podem tipicamente ser iso-tônicas ou substancialmente isotônicas.

Um veículo adequado para produtos parenterais é água. Águade qualidade adequada para administração parenteral pode ser preparadatanto pode destilação ou por osmose reversa. Água para injeção é o veículoaquoso preferido para uso nas formulações farmacêuticas injetáveis.

É possível que outros ingrediente possam estar presentes nasformulações farmacêuticas. Tais ingredientes adicionais podem incluir, porexemplo agentes umidificantes, emulsificadores, óleos, antioxidantes, agen-tes de diluição, modificadores de tonicidade, agentes quelantes, íons de me-tal, veículos oleaginosos, proteínas (por exemplo albumina sérica humana,gelatina ou proteínas) e um zwitterion (por exemplo, um aminoácido tal comobetaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina). Adicionalmente, solu-ções de polímero, ou misturas com polímeros fornecem a oportunidade paraliberação controlado do peptídeo. Tais ingredientes adicionais, logicamente,não devem afetar de forma adversa a estabilidade geral da formulação for-necida aqui.

Recipientes também são uma parte integral da formulação deuma injeção e podem ser considerados um componente, já que não há reci-piente que é totalmente inerte, ou não afeta de alguma forma o líquido queele contém, particularmente se o líquido é aquoso. Portanto, a seleção deum recipiente para uma injeção em particular deve ser baseada em umaconsideração da composição do recipiente, assim como da solução, e dotratamento ao qual ele será submetido. Adsorção do peptídeo à superfície dovidro também pode ser minimizada, se necessário, pelo uso de vidro de bo-rossilicato, por exemplo vidro de borossilicato de Wheaton Tipo I N° 33(Wheaton Tipo I-33) ou seu equivalente (Wheaton Glass Co.). Outros ven-dedores de frascos e cartuchos de vidro de borossilicato similares aceitáveispara fabricação incluem Kimbel Glass Co., West Co., Bünder Glas GMBH eForma Vitrum. As propriedades químicas do composto podem ser estabiliza-das pela formulação e liofilização em um frasco de vidro de borossilicatoWheaton Tipo I-33 para uma concentração final de final 0,1 mg/ml e 10mg/ml do composto na presença de 5% de manitol, e 0,02% de Tween 80.

A fim de permitir a introdução de uma agulha de uma seringahipodérmica dentro de um frasco multidose e fornecer resselagem assim quea agulha for retirada, a extremidade aberta de cada frasco é selada tipica-mente com uma tampa de borracha mantida no lugar por uma faixa de alu-mínio. Tampas para frascos de vidro, tais como West 4416/50, 4416/50 (facede Teflon) e 4406/40, Abbott 5139 ou qualquer tampa equivalente pode serusada como o fechamento para o fármaco para injeção. Essas tampas sãocompatíveis com o peptídeo assim como outros componentes da formula-ção. Essas tampas passam no teste de integridade da tampa quando testa-dos usando padrões de uso do paciente, por exemplo, a tampa pode resistira pelo menos cerca de 100 injeções. Alternativamente, o peptídeo pode serliofilizado em frascos, seringas ou cartuchos para subseqüente reconstitui-ção. Formulações líquidas fornecidas aqui podem ser colocadas preenchen-do um ou dois cartuchos com câmara, ou uma ou suas seringas com câmara.

Cada um dos componentes da formulação farmacêutica acima éconhecido na técnica e é descrito em Pharmaceutical Dosage Forms: Paren-teral Medications, Vol. 1, 2- ed., Avis et al. Ed., Mercel Dekker, Nova Iorque,N.Y. 1992, que está incorporada aqui por referência em sua totalidade.

O processo de fabricação para as formulações líquidas acimageralmente envolve etapas de composição, filtração estéril e preenchimento.O procedimento de composição envolve a dissolução de ingrediente em umaordem específica (por exemplo, um conservante seguido por agentes estabi-lizantes/de tonicidade, tampões e peptídeo) ou dissolvendo ao mesmo tempo.

Formulações alternativas, por exemplo não parenterais, podemnão necessitar esterilização. Entretanto, se a esterilização é desejada ounecessária, qualquer processo de esterilização adequado pode ser usadopara desenvolver a formulação farmacêutica de peptídeo aqui fornecida.

Processos de esterilização típicos incluem filtração, vapor (aquecimento ú-mido), aquecimento seco, gases (por exemplo, oxido de etileno, formaldeído,dióxido de cloro, oxido de propileno, beta-propiolactona, ozônio, cloropicrina,brometo metílico de ácido peracético e similars), exposição a uma fonte deradiação, e manuseio asséptico. Filtração é um método exemplar de esterili-zação para formulações líquidas descritas aqui. A filtração estéril envolve afiltração através de 0,45 um e 0,22 um (1 ou 2) que podem ser conectadosem série. Após a filtração, a solução é preenchida dentro de frascos ou reci-pientes apropriados.

Em uma modalidade, as formulações farmacêuticas são preten-didas para administração parenteral. Vias de administração adequadas in-cluem intramuscular, intravenosa, subcutânea, intradérmica, intra-articular,intratecal, intramamária, retrobulbar, intrapulmonar (e.g., liberação controla-da), transdérmica, e similars. A via de administração subcutânea é uma viaparticular. Liberação mucosa também é particularmente adequada. Essasvias mucosas incluem, mas não são limitados a, vias oral, nasal, sublingual,pulmonar, anal, vaginal, e bucal que podem incluir administração do peptí-deo na forma líquida, semi-sólida ou sólida. A administração através dessasvias requer substancialmente mais peptídeo para obter os efeitos biológicosdesejados devido a biodisponibilidade reduzida em comparação a liberaçãoparenteral. Além disso, a liberação parenteral de forma controlada pode serobtida pela formação de microcápsulas, matrizes, soluções, implantes e apa-relhos e administração deles parenteralmente ou por meio cirúrgicos. Exem-plos de formulações de liberação controlada são descritos em Pat. U.S. Nos.6.368.630, 6.379.704, e 5.766.627, que estão incorporados aqui por referên-cia. Essas formas de dosagem podem ter uma biodisponilidade menor devi-do a captura de algum do peptídeo no matriz de polímero do aparelho. Vejapor exemplo, Pat. U.S. Nos. 6.379.704, 6.379.703, e 6.296.842.

Os compostos de amilina podem ser fornecidos em uma formade dosagem unitária contendo uma quantidade do composto que será eficazem uma ou múltiplas doses para tratar ou ajudar no tratamento de um animalque necessite disso. Administração parenteral pode ser realizada com umbolus inicial seguido por infusão contínua para manter os níveis circulantesterapêuticos do produto farmacêutico. Uma forma de preparação de libera-ção lenta de "depósito" ou repositória. Pode ser usada para que quantidadesterapeuticamente eficazes da preparação sejam liberadas dentro da correntesangüínea durante várias horas ou dias após a injeção ou liberação trans-dérmica. Aqueles versados na técnica otimizarão facilmente dosagens efica-zes e regimes de administração como determinado pela via prática médica ea condição clínica do paciente individual, levando em consideração, por e-xemplo a idade e peso do paciente, a condição física do paciente e a condi-ção a ser tratada.

Tipicamente, uma dosagem de cerca de 0,001 ug/kg de pesocorporal /dia a cerca de 1000 ug/kg de peso corporal /dia pode ser usada,mas mais ou menos, como um versado na técnica reconhecerá, pode serusado. Doses típicas podem conter de um limite inferior de cerca de 0,5 ug,1 ug, 5 ug, 10 ug, 50 ug a 100 ug até um limite superior de cerca de 100 ug,500 ug, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 50 mg ou 100 mg do composto farmacêutico pordia. Também contempladas são outras faixas de dosagem tal como 0,1 ug a1 mg do composto por dose. Dessa forma, doses exemplares podem ser de30, 60, 120, 240, ou 360 ug do composto por dose. As doses por dia podemser liberadas em doses unitárias discretas ou fornecidas continuamente emum período de 24 horas, ou qualquer porção desse período de 24 horas. Onúmero de doses por dia pode ser de 1 a cerca de 4 doses por dia, emborapossa ser mais. Dosagem pode ser feita uma ou mais vezes ao dia, ou me-nos freqüentemente, tal como uma ou mais vezes por semana ou uma oumais vezes ao mês, e pode ser em conjunto com outras composições comodescrito aqui. Deve ser observado que os presentes métodos e composiçõesnão são limitados às dosagens aqui citadas.

Em algumas modalidades, uma dose eficaz estará tipicamentena faixa de cerca de 0,5 a 30 ug a cerca de 5 mg/dia, cerca de 10 a 30 ug acerca de 2 mg/dia, cerca de 5 a 100 ug a cerca de 1 mg/dia, ou cerca de 5ug a cerca de 500 ug/dia, para um paciente de 50 kg, administrado em umúnica dose ou em doses divididas. Em algumas modalidades, dosagens sãoentre cerca de 0,01 a cerca de 100 ug/kg/dose. Em outras modalidades, acomposição é formulação para liberar uma dose de composto de amilina quevaria de 1 ug/kg a 100 mg/kg peso corporal/dia ou em doses que variam de0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg de peso corporal /dia. Dosagens para certasvias, por exemplo administração oral, pode ser aumentada para compensara biodisponibilidade diminuída, por exemplo, por cerca de 5-100 vezes.

Liberação contínua pode ser na forma de infusões contínuas.Doses e taxas de infusão exemplares incluem de 0,005 nmol/kg a cerca de20 nmol/kg por dose discreta ou de cerca de 0,01/pmol/kg/min a cerca de 10pmol/kg/min em uma infusão contínua. Essas doses e infusões podem serliberadas por administração intravenosa (i.v.) ou administração subcutânea(s.c). Dose/liberação total exemplar da composição farmacêutica dada i.v.pode ser de cerca de 2 ug e cerca de 8 mg por dia, enquanto a do-se/liberação total da composição farmacêutica dada s.c pode ser de cercade 6 ug a cerca de 16 ou 24 mg por dia.

Os seguintes exemplos são fornecidos pata ilustrar, mas nãopara limitar, a invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Síntese dos Polipeptídeos que Diminuem a Ingestão Calórica

A amilina e peptídeos agonistas de amilina podem ser sintetiza-dos usando métodos padronizados de síntese de polipeptídeo. Tais métodosestão descritos abaixo e nas Pat. U.S. Nos. 6.610.824 e 5.686.411, cujasíntegras estão incorporadas aqui por referência.

Os polipeptídeos são agrupados sobre resina de 4-(2'-4'-dimetoxifenil)-Fmoc aminometil fenóxi acetamida norleucina MBHA (Novabi-ochem, 0,55 nmol/g) usando aminoácidos protegidos por Fmoc (Applied Bi-osystems, Inc.). Em geral, ciclos únicos de acoplamento são usados durantea síntese e a química Fast Moc (ativação de HBTU) é empregada. Entretan-to, em algumas posições o acoplamento pode ser menos eficiente do que oesperado e acoplamentos duplos são necessários. A desproteção (remoçãodo grupo Fmoc) da cadeia de peptídeo em crescimento usando piperidina damesma maneira pode nem sempre ser eficiente e requerer desproteção du-pia. A desproteção final da resina de peptídeo completa é obtida usandouma mistura de trietilsilano (0,2 ml_), etanoditiol (0,2 ml_), água (0,2 mL) eácido trifluoroacético (15 mL) de acordo com métodos padronizados (Intro-duction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc.). Os peptídeossão precipitados em éter/água (50 mL) e centrifugados. O precipitado é re-constituído em ácido acético glacial e liofílizado. Os peptídeos liofilizados sãodissolvidos em água e a pureza bruta é então determinada. Solvente A (TFA0,1% em água) e Solvente B (TFA 0,1% em ACN) são usados nas etapas depurificação e análise. Soluções contendo os vários polipeptídeos são aplica-das a uma coluna C-18 preparatória e purificadas (10% a 40% de Solvente Bem Solvente A durante 40 minutos). A pureza das frações é determinadaisocraticamente usando uma coluna C-18 analítica. As frações puras sãoagrupadas armazenando o peptídeo acima identificado. RP-HPLC analítica(gradiente de 30% a 60% de Solvente B em Solvente A durante 30 minutos)do peptídeo liofilizado para determinar o tempo de retenção.

Por exemplo, amilina e agonistas de peptídeos de amilina po-dem ser agrupados em um sintetizador de peptídeo Symphony (Protein Te-chnologies, Inc.) usando resina de amida Rink (Novabiochem) com um car-regamento de 0,43-0,49 nmol/g em 0,050-0,100 nmol. Resíduos de aminoá-cido Fmoc (5,0 eq, 0,250-0,500 nmol) são dissolvidos em uma concentraçãode 0,10 M em 1-metil-2-pirrolidinona. Todos os outros reagentes (HBTU, hi-drato de 1-hidroxibenzotriazol e N,N-Diisopropiletilamina) são preparadoscomo soluções de dimetilformamida 0,55 M. Aminoácidos protegidos porFmoc são então acoplados ao aminoácido ligado a resina usando HBTU (2,0eq, 0,100-0,200 nmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,8 eq, 0,090-0,18nmol) e N,N-Diisopropiletilamina (2,4 eq, 0,120-0,240 nmol) por 2 horas. A-pós o acoplamento do último aminoácido, o peptídeo é desprotegido usandopiperidina 20% (v/v) em dimetilformamida por 1 hora. Uma vez que a se-qüência do peptídeo está completa, o sintetizador de peptídeo Symphony éprogramado para clivar a resina. A clivagem com Ácido trifluoroacético (TFA)do peptídeo da resina é realizada usando TFA 93%, fenol 3%, água 3% etriisopropilsilano 1 % por 1 hora. O peptídeo clivado é precipitado usando éterterc-butílico metila, precipitado por centrifugação e liofilizado. O pélete é re-dissolvido em água (10-15 ml_), filtrado e purificado através de HPLC de fasereversa usando uma coluna C18 e um gradiente de acetonitrila/água quecontém TFA 0,1%. Os peptídeos resultantes são purificados até a homoge-neização por HPLC de fase reversa e a pureza é confirmada por LCMS.

Um procedimento comum para N-capear os peptídeos da inven-ção com ácidos graxos (por exemplo, ácidos octanóico e esteárico) é o se-guinte: peptídeo sobre resina Rink amida (0,1 mmol) é suspenso em NMP (5mL). Em um frasco separado, HBTU (0,3 mmol), HOBt (0,3 mmol) são dis-solvidos em DMF (5 mL), seguido pela adição de DIEA (0,6 mmol). Essa so-lução é adicionada a resina e essa suspensão é agitada por 2 h. O solventeé filtrado e lavado cuidadosamente com NMP (5 mL x 4) e CH2CI2 (20 mL),seco e é submetido a clivagem com TFA por 1 h. O rendimento do peptídeodesejado é de ca. 40 mg após clivagem e purificação. A modificação comPEG pode ser realizada em solução sobre um grupo épsilon-amino livre delisina ou um grupo amino terminal de um peptídeo purificado usando ésteresde PEG ativados comercialmente disponíveis. Os derivados PEGuilados re-sultantes são purificados até a homogeneização por HPLC de fase reversa ea pureza é confirmada por LC/MS e MALDI-MS.

Exemplo 2: Efeito de Amilina sobre a Preferência Alimentar por Sacarose

A habilidade da amilina de modificar a preferência alimentar foiexaminada em um modelo animal. Ratos Sprague-Dawley® machos foramsubmetidos a um modelo de retirada de açúcar e observados quanto aosefeitos do estresse sobre a ingestão de açúcar. Resumidamente, os ratosforam implantados com bombas osmóticas ALZET® contendo veículo ouamilina de rato (300 ug/kg/d). A todos os ratos foi concedido acesso ad libi-tum a ração padronizada, água e uma bebida com sacarose 30%. Subse-qüentemente, a bebida com sacarose foi removida e metade dos ratos foramsubmetidos, diariamente, a 3 h de estresse de restrição leve por 3 dias su-cessivos. Após 3 dias, a sacarose foi fornecida e sua média de consumodiário foi medida durante 4 dias. A ingestão de ração também foi medida du-rante os 3 dias de restrição e estresse e durante os 4 dias seguintes quandoa sacarose foi reintroduzida. Nenhuma restrição foi aplicada durante os 4dias de reintrodução da sacarose. Os resultados desse ensaio são mostra-dos na figura 1 (A-D) onde * é P<0,05 por análises ANOVA e Fisher LSDpost-hoc.

Nesse modelo, o estresse crônico estimula a proporção de calo-rias totais ingeridas como açúcar (alimentação palatável). Como mostradona figura 1A, o estresse induzido pela restrição aumentou significativamentea proporção de sacarose na taxa de consumo de ração (como% da linha debase) (solução salina, R) sobre o consumo de controle sem indução de es-tresse (solução salina, C). A figura 1A também mostra que a administraçãode amilina previne o aumento da proporção de sacarose na taxa de consu-mo de ração esperada como resultado do estresse induzido pela restrição.Compare a sacarose na taxa de ração (expressa como um percentual dalinha de base) entre ratos induzidos ao estresse tratados com amilina (amili-na, R) e ratos de controle não estressados tratados com amilina (amilina, C).Também compare a sacarose na taxa de ração entre ratos induzidos ao es-tresse tratados com amilina (amilina, R) e ratos induzidos ao estresse (solu-ção salina, R) tratados com veículo (solução salina). Como mostrado, a ad-ministração de amilina reduz a resposta a alimentação palatável induzida porestresse.

A figura 1B e 1C descrevem os mesmos resultados a partir deum ensaio de estresse de restrição a partir de uma perspectiva diferente da-quela de consumo de ração e kcals totais, respectivamente. As figuras 1B e1C mostram que a diminuição global induzida por estresse na ingestão deração e kcals totais é menos pronunciada no grupo de tratamento quandocomparado ao grupo de controle. A figura 1D demonstra que a amilina dimi-nui a ingestão de sacarose em ambas as condições estressantes e não es-tressantes, quando comparada aos controles tratados com veículo. Em su-ma, acredita-se que o estresse geralmente desloca o balanço entre dietasricas em açúcares simples ou que são palatáveis e dietas relativamente po-bres em açúcares simples e gordura (por exemplo, ração de rato padroniza-da). O estresse sem administração de amilina diminuiu significativamente oconsumo de ração por animais submetidos a estresse de restrição (figura1B), uma resposta típica ao estresse). Entretanto, o grupo de tratamentocom administração de amilina parece mostrar uma redução específica nasacarose sob ambas as condições estressantes e não estressantes.

Exemplo 3: Efeito da Amilina sobre a Preferência por Alimento Rico em Gordura

A habilidade da amilina de modificar a preferência alimentar foiexaminada em um modelo animal. Ratos adultos machos (490 g) foram tra-tados por 11 semanas com amilina de rato (300 ug/kg/d) através de bombasosmóticas (N°2ML4, Durect Corporation, Cupertino, CA) implantadas subcu-taneamente, sob anestesia, na região interescapular. Os animais tinham a-cesso a ambas as rações com pouca gordura (6% kcal de gordura, 54% kcalde amido de milho; N°7012, Harlan Teklad, Madison, Wl) e rações com mui-ta gordura ("ração palatável") (58% kcal de gordura e 26% kcal de sacarose;N°D12311, Research Diets, New Brunswick, NJ). A ingestão de alimento e opeso corporal foram medidos semanalmente. Logo antes do tratamento e nofinal do tratamento, a quantidade de gordura e tecido magro (expressa comog de tecido por 100 g de peso corporal) foi medida através de MRI (EchoMRI para ratos, EchoMRI, Houston, TX).

Os resultados desses experimentos estão apresentados nas fi-guras 2-5 nas quais os dados são apresentados como média ± SEM e o nú-mero de indivíduos em cada grupo é mostrado entre parênteses. Como mos-trado na figura 2, ratos tratados com amilina consumiram uma percentagemmenor do total de calorias da ração rica em gordura do que os controles a-través das 11 semanas de tratamento (veículo = 6315 ±111 kcal vs. amilina= 5309 ± 202 kcal (P's <0,05)). Em termos de ingestão alimentar total, osratos tratados com amilina ganharam menos calorias com a ração rica emgordura e mais calorias com a ração pobre em gordura, comparados aosratos tratados com veículo como mostrado na figura 3. O efeito principal pararação pobre em gordura foi veículo = 271 ± 42 kcal vs. amilina = 633 ± 145kcal e o efeito principal para o percentual total de calorias foi veículo = 4,3 ±0,6% vs. amilina = 12,2 ± 3,2% (Ps <0.05).

Durante o tratamento, o ganho de peso corpo corporal foi redu-zido com o tratamento com amilina como mostrado na figura 4 (veículo =126 ± 10 g VS. amilina = 50 ± 11 g (P's < 0,05)). Alteração no tecido gordo emagro pré e pós-tratamento foi examinada. Como mostrado na figura 5, aadministração de amilina diminui a massa gorda, mas não tem efeito sobre amassa de tecido magro. Para a massa gorda, a alteração no percentual demassa total foi de 3,7 ± 0,9% com veículo e - 3,6 ± 1,0% com amilina(P<0,05). Para o tecido magro, a alteração no percentual de massa total foide -0,53 ± 0,21% com veículo e 0,08 ± 0,23% com amilina (não significativo).

A administração de amilina também aumentou o consumo deenergia nos animais. O consumo de energia foi obtido usando um sistemade monitoramento animal Oxymax (Columbus Instruments, Columbus, OH)para medir o consumo de oxigênio e a geração de dióxido de carbono aolongo do tempo. A partir dessas medidas, a energia (em kcal) foi calculada e o consumo de energia foi obtido. Em 11 semanas, a amilina aumentou em 24 h o consumo de energia (aumento na fase clara = 9,7%, aumento na fase escura = 6,6%, P's<0,05) em comparação com os controles.

O mesmo estudo realizado com um agonista de amilina demonstrou que o agonista de amilina era mais eficaz do que a amilina na redução da ingestão calórica total. A ingestão calórica de alimento palatável com o agonista de amilina foi aproximadamente equivalente com amilina e a ingestão calórica com ração pobre em gordura foi menor do que aquela com amilina.

Em termos de preferência alimentar, ratos tratados com amilina consumiram um grande número de calorias e um percentual maior de calorias totais a partir da ração pobre em gordura comparados com controles durante o estudo. Esses resultados indicam que a ingestão calórica diminuída, com uma preferência relativa por ração pobre em gordura VS. ração palatável, e um consumo de energia aumentado contribuíram para as propriedades da amilina na redução de peso.

Exemplo 4: Efeito de Agonista de Amilina sobre a Saciedade e sobre a Compulsão Alimentar

A habilidade do agonista de amilina pramlintida em controlar ou influenciar o comportamento alimentar foi examinada em indivíduos humanos. Para a avaliação, a ingestão alimentar em 24 horas (Fl, refeições ad libitum), peso, sensação de fome e saciedade e compulsão alimentar (Binge Eating Scale, BES) foram medidas em um estudo cego, controlado com placebo. Indivíduos obesos sem distúrbios da alimentação 50/50% mulheres/homens; IMC 35,61 ±3,98 kg/m2, média ± SD) foram randomizados para seis semanas de tratamento com pramlintida ou placebo. Pramlintida (180 ug) foi administrado subcutaneamente três vezes por dia (TID) antes das refeições por seis semanas e nenhuma intervenção no modo de vida foi fornecida (TID avaliado N = 59, placebo avaliado N = 25). Em outra ramificação do estudo, pramlintida foi administrado através de infusão subcutânea contínua (CSI) 50 ug/h por seis semanas e nenhuma intervenção no modo devida foi fornecida (CSI avaliado N = 53, placebo avaliado N = 22). Uma avaliação de evolução dos indivíduos foi realizada quatro semanas após o término do tratamento. Além da medida da ingestão alimentar e do peso, os indivíduos também foram avaliados quanto as sensações de fome e saciedade durante um período de observação de 12 horas no dia anterior ao tratamento, no primeiro dia de tratamento e no dia 43. Durante o estudo, os indivíduos foram classificados pela severidade da compulsão alimentar como leve, moderada ou severa baseado nos escores totais de BES.

Após 6 semanas, indivíduos tratados com pramlintida TID experimentaram reduções significativas corrigidas por placebo da linha de base em 24 horas de ingestão alimentar (-489±183 kcal; P<0,01) r de peso(-2,2±0,5%; P<0,0001). Em geral, os perfis de graduação média da fome e saciedade foram similares dentro de cada grupo de tratamento (pramlintida TID, pramlintida CSI e grupo de placebo) no dia anterior ao tratamento, no primeiro dia de tratamento e no Dia 43 e eles também foram similares através dos grupos de tratamento. As graduações de fome e saciedade foram similares apesar do fato de que a ingestão calórica média total estava reduzida em aproximadamente 17% no primeiro dia de tratamento e em 15% no dia 43 em indivíduos pramlintida TID e em aproximadamente 22% no primeiro dia de tratamento e 7% no dia 43 em indivíduos pramlintida CSI comparados com o grupo de placebo. Portanto, foi necessária menor ingestão de alimento em indivíduos tratados com pramlintida para suprimir a fome e induzir níveis de saciedade similares a aqueles de indivíduos tratados com placebo. Conseqüentemente, a pramlintida intensifica o efeito de satisfação das refeições.

Indivíduos tratados com pramlintida também experimentaram reduções no escore BES médio total e reduções significativas corrigidas por placebo da linha de base no escore BES médio (-45+13%; P<0,01) como mostrado nas figuras 6 e 7. Houve uma alteração significativa na severidade da compulsão alimentar (P < 0,05) em uma proporção maior de indivíduos tratados com pramlintida do que em indivíduos tratados com placebo que mudaram para uma categoria de severidade de compulsão alimentar maisbaixa (24,6% vs. 12,5%). Após 6 semanas de tratamento TID, 83,1% dos indivíduos tratados com pramlintida e 56% dos indivíduos tratados com pla-cebo foram classificados como leves (comparados com 64,4% e 52,0%, respectivamente, na linha de base). Veja Tabela 1 da classificação de severidade da escala de compulsão alimentar baseada no escore total das ramificações TID e CSI do estudo. Quatro semanas após o término do tratamento com pramlintida, as reduções da linha de base no escore total de BES não eram mais estatisticamente significativas (figura 7). Esses resultados indicam que o agonista de amilina fornece um controle melhorado do comportamento alimentar, em particular nos aspectos compulsivos do comportamento alimentar.

Tabela 1. Graduação de Severidade da Escala de Compulsão Alimentar.

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Porcentagens são baseadas no número de indivíduos avaliados em cada tratamento.

Exemplo 5: Efeito de Agonista de Amilina sobre Parâmetros Antropométricos A habilidade do agonista de amilina pramlintida de afetar o peso e parâmetros antropométricos, tais como circunferência da cintura e circunferência do quadril, foi examinada em indivíduos humanos. Em um estudo randomizado, duplo-cego placebo-controlado, alterações no peso corporal eem parâmetros antropométricos, assim como indicadores de controle glicê-mico (por exemplo, HbA1c), lipídios séricos e tolerância a glicose foram avaliados em resposta a administração de pramlintida a indivíduos obesos (IMC > 30kg/m2 a < 50 kg/m2) não diabéticos e indivíduos obesos com diabetes mellitus tipo 2 tratado com insulina. O estudo consistiu em 204 indivíduos, doses de pramlintida de 120 ug, 180 ug ou 240 ug de pramlintida TID e períodos de estudo de 1 semana de introdução de placebo, período de medicação de 16 semanas e um período de 8 semanas de acompanhamento sem medicação.

Em suma, após 16 semanas de tratamento uma perda de peso média corrigida por placebo, estatisticamente significativa de 3,52 kg (3,6%) do peso corporal inicial (p < 0,0001, população avaliada) foi experimentada e 31% dos indivíduos perderam > 5% de peso corporal comparados com apenas 2% daqueles tratados com placebo (p < 0,0001, população avaliada). A perda de peso foi evidente em ambos os indivíduos não diabéticos e indivíduos com diabetes tipo 2.

Uma perda de peso significativa foi alcançada em indivíduos em todas classes de obesidade, sendo a perda de peso mais pronunciada em indivíduos na classe de obesidade I (BHI < 35 kg/m2). A perda de peso corrigida por placebo em indivíduos por classe de obesidade são as seguintes: 4,24 + 0,91 kg (4,78 + 1,0%, p < 0,0001) para aqueles com um BMI < 35 kg/m2, 2,84 + 1,45 kg (2,63 + 1,39%, p < 0,05) para aqueles com uma BMI > 35 kg/m2 a < 40 kg/m2 e 1,36 ± 1,30 kg (1,29 + 1,09%, p < 0,05) para aqueles com uma BMI > 40 kg/m2. A percentagem de indivíduos que alcançaram uma redução > 5% no peso corporal basal por estrato de BMI basal (população avaliável N = 945) é resumida na tabela 2.Tabela 2

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A perda de peso progressiva observada no grupo de pramlitida foi acompanhada por uma redução progressiva da circunferência da cintura, uma medida de obesidade abdominal. Após 16 semanas de tratamento, o grupo de pramlintida tinha uma redução corrigida por placebo na circunferência da cintura de 2,69 ± 1,08 cm (p < 0,01), e uma redução corrigida por placebo na circunferência do quadril de 2,69 ± 0,82 cm (p < 0,01) (média por mínimos quadrados ± SE). Conseqüentemente, o tratamento com pramlintida resultou em perda de peso significativa em indivíduos obesos e diminuições significativas nas circunferências da cintura e do quadril. Exemplo 6: Efeito da amilina sobre a composição corporal

Obesidade induzida por dieta (DIO) no rato Sprague-Dawley é um modelo valioso para o estudo de obesidade de regulação da homeostase de energia. Ratos DIO (Levin) endogâmicos propensos de Charles River Laboratories, Inc. (Wilmington, MA) (n=6/grupo) foram usados para estudar os efeitos da administração de amilina. Os ratos foram mantidos em uma dieta moderadamente alta em gordura (32% kcal provenientes de gordura; Research Diets D1226B) por aproximadamente 6 semanas antes do tratamento com o fármaco. No final do período de engorda eles tinham um peso corporal médio de ~ 550 g. Todos os ratos foram alojados em gaiolas de caixa de sapato a 22 -C em um ciclo de claridade/escuridão de 12/12-horas. A amilina foi administrada por minibomba subcutânea (Durect Corp, CA). Amilina de Rato (Peptisyntha, Torrance, CA) foi dissolvida em DMSO 50% em água estéril e infundida em uma taxa de 100 ug/kg/d (-23 nmol/kg/d). No dia 14, asminibombas foram removidas e recolocadas com bombas contendo veículo. Para a composição corporal, os ratos foram escaneados em uma máquina para roedores especializada RMN (Echo Medicai Systems) antes do tratamento com o fármaco, e na conclusão do experimento, que permitiu o cálculo de alterações de percentual em gordura e composição magra (por exemplo,% de gordura corporal após o tratamento -% de gordura corporal basal = alteração no% de gordura corporal).

Como mostrado nas figuras 8 e 9, durante o tratamento, a amili-na diminuiu significativamente a ingestão de alimento cumulativa e o peso corporal (dias 2-14; p < 0,05 vs. controles com veículo). Durante o período de "washout" com as bombas contendo apenas veículo, a ingestão de alimento e o peso corporal rapidamente retornaram aos níveis dos controles com veículo. A análise da composição corporal na conclusão do estudo revelou que apesar dos pesos corporais similares (no dia 28), os animais que foram tratados com amilina (dias 1-14) ainda tinham um percentual de gordura no corpo menor do que aqueles animais que não receberam amilina (figura 10A). Ainda, os animais que foram tratados com amilina também tinham um percentual de massa corporal magra maior do que aqueles animais que tinham recebido apenas veículo (figura 10B).

Exemplo 7. Efeito da amilina no desejo por alimento

O efeito da amilina e agonistas de amilina sobre o desejo por alimento pode ser investigado como segue. Um desenho de estudo rando-mizado, cego, controlado por placebo é usado. Aproximadamente 180 indivíduos humanos obesos podem ser arrolados no estudo, com um terço randomizados para placebo, e dois terços randomizados para uma agonista de análogo de amilina, tal como pramlintida. O estudo inclui uma fase "in-patient" inicial de uma semana para avaliar a ingestão de alimento basal, padrões de alimentação, saciedade/fome, hedonismo de alimento, alimentação compulsiva, peso corporal, composição corporal, etc. O estudo estão passa para uma fase "out-patient" de cinco semanas durante cujo tempo o peso corporal, a composição corporal, e o questionário de Controle de Alimentação podem todos ser usados para avaliar vários parâmetros. A fase detratamento ativa do estudo é então concluída com uma fase in-patientàe 2-3 dias para avaliar acompanhamento de ingestão de alimento, padrões de refeição, saciedade/fome, hedonismo de alimento, desejo por alimento, alimentação compulsiva, peso corporal, composição corporal, etc. Geralmente, por todo o estudo, as condições de estresse não são induzidas, e as alterações ou restrições de estilo de vida e/ou dieta não são implementadas. Os pontos finais do estudo a ser monitorados podem incluir o peso corporal, a composição corporal (por exemplo, circunferência da cintura, massa de gordura, massa livre de gordura), ingestão de alimento, fome/saciedade, desejo por alimento, eficiência de satisfação, alimentação compulsiva, etc.

Em tal estudo, foi surpreendentemente descoberto que, indivíduos de estudo experimentaram uma diminuição na freqüência e intensidade de desejo por alimento por todo o curso de administração, tanto através de injeção como infusão. Também foi descoberto que os indivíduos relataram uma redução na dificuldade de resistir ao desejo por alimento, assim como a freqüência de alimentação em resposta ao desejo por alimento por todo o curso da administração, tanto através de injeção como infusão. Os indivíduos de estudo também relataram uma redução acentuada no desejo por alimentos doces, a alimentos de chocolate em particular por todo o curso de administração, tanto através de injeção como infusão. Indivíduos de estudo também relataram uma redução no desejo por alimentos condimentados por todo o curso de administração, tanto através de injeção como infusão, embora em uma extensão menor. Esses resultados do estudo demonstram a surpreendente descoberta de que amilina e agonistas de amilina modificam as preferências alimentares particularmente preferências alimentares por doce, chocolate, e alimentos condimentados.

Exemplo 8: Ensaios de ligação ao receptor

Inicialmente, os polipeptídeos podem ser usados em ensaios para determinar a habilidade de ligação a amilina, calcitonina e receptores CGRP receptores. Ensaios de ligação para determinar interações com o receptor de amilina, o receptor de calcitonina, e o receptor de CGRP são descritos por exemplo na Pat. U.S. N°. 5.264.372, a totalidade da qual está in-corporada aqui por referência.

Em mais detalhe, a avaliação da ligação de compostos da invenção a receptores de amilina pode ser realizada como segue. Amilina de rato-125l (Bolton-Hunter marcada na lisina N-terminal) é adquirida de Amersham Corporation (Arlington Heights, IL). Peptídeos não marcados são obtidos de BACHEM Inc. (Torrance, CA) e Península Laboratories (Belmont, CA).

Ratos Sprague-Dawley® machos (200-250) gramas são sacrificados por decapitação. Os cérebros são removidos para solução salina tamponada com fosfato (PBS) gelada. Da superfície ventral, cortes são feitos rostrais ao hipotálamo, ligados lateralmente pelos tratos olfatórios e estendendo em um ângulo de 45 graus medialmente a partir desses tratos. Esse tecido de prosencéfalo basal, contendo o nucleus accumbens e regiões cir-cundantes, é pesado e homogeneizado em tampão HEPES 20 mM (ácido HEPES 20 mM, pH ajustado para 7.4 com NaOH a 23°C) gelado. As membranas são lavadas três vezes em um tampão novo por 15 minutos a 48.000 x g. O pélete de membrana final é ressuspenso em tampão HEPES 20 mM contendo fluoreto de fenilmetilsulfonila 0,2 mM (PMSF).

Para medir a ligação de amilina 125l, as membranas de peso úmido original de 4 mg de tecido são incubadas com amilina-125! a 12-16 pM em tampão HEPES 20 mM contendo 0,5 mg/ml de bacitracina, 0,5 mg/ml de albumina sérica bovina, e 0,2 mM de PMSF. As soluções são incubadas por 60 minutos a 2°C. As incubações são terminadas por filtração através de filtros de fibra de vidro GF/B (Whatman Inc., Clifton, N.J.) que haviam sido pré-embebidos por 4 horas em poiletilenoimina 0,3% a fim de reduzir a ligação inespecífica de peptídeo radiomarcados. Os filtros são lavados imediatamente antes da filtração com 5 ml de PBS gelado, e imediatamente após a filtração com 15 ml de PBS gelado. Os filtros são removidos e a radioatividade testada em um contador gama a uma eficiência de contagem de 77%. As curvas de competição são geradas pela medição da ligação na presença de 10"12 a 10"6 M de composto de teste não marcado e são analisados por regressão não linear usando uma equação logística de 4 parâmetros (progra-ma Inplot; GraphPAD Software, San Diego, CA).

Nesse ensaio, amilina humana purificada se liga ao seu receptor em uma IC5o medida de cerca de 50 pM. Os resultados para os compostos de teste da invenção são descritos na Tabela 3 mostrando que cada um dos compostos tem atividade de ligação ao receptor significante.

A avaliação da ligação dos compostos da invenção aos receptores CGRP foi essencialmente como descrita para amilina exceto usando 1251 hCGRP e membranas preparadas a partir de células SK-N-MC, conhecidas por expressar receptores CGRP (Muff et. al. ,(1992) Ann N YAcad Sei. 657:106-116). Ensaios de ligação foram realizados como descrito para amilina exceto usando 13,500 cpm de 1251-hCGRP /cavidade ou 21,7 pM/cavidade (Amersham).

A ligação ao receptor de calcitonina pode ser investigada usando células CHO ou células T47D, que também expressam o receptor de calcitonina (Muff et.al. ,(1992) Ann N Y Acad Sei. 657:106-116 e Kuestner et. al. (1994) Mol. Pharmacol. 46:246-255), como conhecido na técnica.

Tabela 3. Valores de ECgn (nM) para polipeptídeos

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Exemplo 9: Atividade dos Polipeptídeos sobre a ingestão de alimento

Camundongos NIH/Swiss fêmeas (8-14 semanas de idade) foram alojados em com um ciclo de claridade:escuridão de 12:12 horas. Água 20 e uma dieta de ração de camundongo granulada padrão são disponíveis adlibitum, exceto quando observado. Os animais são deixados em jejum começando em aproximadamente 1500 hrs, 1 dia antes do experimento.

No tempo = 0, a todos os animais é dada uma injeção intraperitoneal de veículo ou polipeptídeo em um volume de 200uL/camundongo e imediatamente dada uma quantidade pré-pesada (10-15g) da ração padrão. O alimento é removido e pesado a 30, 60, 120 e 180 minutos para determinar a quantidade de alimento consumido. Os efeitos do tratamento sobre a ingestão de alimento são expressos como uma% de alteração em relação ao controle.

Como mostrado na figura 11, o Composto 2, em doses de 25-300 nmol/kg, reduziu a ingestão de alimento de forma dependente da dose 30 minuto após a injeção a Tabela 4 representa ingestão de alimento reduzida com polipeptídeos administrados periferalmente (injeção intraperitoneal) em doses de 25 nmol/kg. Os dados nos pontos de tempo 30, 60, 120, e 180 minutos representam a diminuição percentual na ingestão de alimento cumulativa em comparação ao veículo. Tabela 4.

Ingestão Cumulativa de Alimento

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nt = não realizado

Exemplos 10: Atividade de Compostos da Invenção sobre a Redução de Peso e Ingestão Calórica

Ratos Sprague-Dawley® machos alojados individualmente (350g; ciclo de claridade/escuridão de 12-h) foram mantidos em uma dieta altamente gordurosa (58% kcal provenientes de gordura) por 4 semanas. No final do período de engorda, bombas osmóticas de 14 dias (Durect Corp.) foram implantadas interescapularmente sob anestesia. Os ratos receberam bombas liberando veículo continuamente (DMSO 50%) ou polipeptídeo em uma dose de 2,9 nmol/kg/dia. As medidas de ingestão de alimento e de peso corporal foram obtidas semanalmente. As figuras 12A e 12B mostram que o Composto 3, Composto 4, ou Composto 5 de polipeptídeos produziram uma diminuição na ingestão calórica e ganho de peso corporal, respectivamente, por todo o período de teste de 14 dias. (*P<0,05 em comparação ao respectivo grupo de veículo-muita gordura). A tabela 5 apresenta o percentual de perda de peso corporal na semana 1 e 2 para vários compostos.

Tabela 5. Perda de peso corporal após administração de compostos exemplares da invenção

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Exemplo 11: Composição Corporal

Ratos Sprague-Dawley ® machos alojados individualmente (420 g; ciclo luz/escuro de 12-h) foram mantidos em uma dieta altamente gordurosa (58% kcal provenientes de gordura) por 4 semanas. No final do período de engorda, bombas osmóticas de 14 dias (Durect Corp.) foram implantadas interescapularmente sob anestesia. Os ratos receberam bombas que liberavam veículo continuamente (50% DMSO) ou Composto 1 em uma dose de 70 nmol/kg/dia. Os animais foram sacrificados no Dia 12. As carcaças foram imediatamente congeladas e a composição corporal (gordura e proteína) medida por análise química (Covance Laboratories, Madison, Wl). A figura 13 mostra que, como um percentual de massa corporal total, o conteúdo de gordura foi reduzido em ratos tratados com o Composto 1 em comparação aos controles. Além disso, o Composto 1 aumentou o percentual de conteúdo de massa magra.

Exemplo 12: Esvaziamento Gástrico e íon Cálcio

O esvaziamento gástrico foi monitorado pela medição do aparecimento no plasma de glicose tritiada gavageada. Os indivíduos eram ratos Sprague Dawley® machos, conscientes (7-9 semanas de idade, cilco de luz:escuro de 12:12 h) com acesso ad libitum a comida e água até o início do experimento. Antes da dosagem, o alimento a água foram remividos. Em t = -5 min, o peptideo ou veículo (200ul de solução salina) foi administrado subcutaneamente. Em t = 0 min, uma solução de 1 ml de água estéril contendo 5uCi D-[3-3H] glicose (Dupont, Wilmington, DE) foi dada por tubo orofaringeal. Em t = 20 min, um anestésico tópico (Hurricaine®, benzocaína líquida 20%) foi aplicado à ponta da cauda. Em t = 40 min, a ponta da cauda foi ligada com um escalpelo ~250ul de sangue por coletado em tubos heparinizados. O plasma foi então imediatamente testado para cálcio ionizado usando um analisador Ciba/Corning 634 Ca/pH (Ciba/Corning, Inc.,Medfield, MA). Uma amostra de plasma de 10ul foi pipetada em frascos de cintilação preparados (0,5 ml de água + 2 ml de coquetel de cintilação (Ecolite scintillation cocktail ICN, Costa Mesa, CA)), vortexado e contado em um contador-B (1209 Rack-beta; LKB-Wallac, Gaithersburg, MD) por 1 minuto/frasco.

Na figura 14A, os pontos representam a média ± sd de 6 ratos (alimentados, conscientes). A dose indicada de peptídeo foi injetada subcu-taneamente em t=0. O sangue foi coletado 35 minutos mais tarde para análise de cpm. *Todos os pontos p<0,001 vs. controle de solução salina; ANOVA, teste de Dunnett. Da regressão não linear: ED50 = 2,3 ug/kg. Abaixo= 25cpm/10ul; Acima= 328cpm/10ul. Diminuição máxima em com do plasma: -92%. Qualidade do ajuste: r2 =0,9992.

Na figura 14B, os pontos representam a média ± sd de 6 ratos (alimentados, conscientes). A dose indicada de peptídeo foi injetada subcutaneamente em t=0. O sangue foi coletado 35 minutos mais tarde para anélise de cpm. *P<0.001 vs. controle de solução salina; ANOVA, teste de Dunnett. Da regressão não linear: ED50 = 1,1 ug/kg. Abaixo= 1,2 mmol/L; Acima= 1,3 mmol/L. Diminuição máxima no iCa do plasma:-14% Qualidade do ajuste: r2 =0,9936.

Exemplo 13: Terapia de Combinação: Amilina + Sibutramina

Ratos propensos DIO endogâmicos foram obtidos de Charles Rivers Labs. Esses ratos foram desenvolvidos a partir de uma linhagem de ratos Crl:CD®(SD)BR que são propensos a se tornar obesos em uma dieta relativamente alta em gordura e energia (Levin, 1997). Os ratos foram alojados individualmente em gaiolas de caixa de sapato a 22° C em um ciclo de claridade escuridão de 12/12-horas. Os ratos foram mantidos ad-libitum em uma dieta moderadamente alta em gordura (32% kcal proveniente de gordura; Research Diets D1226B) por 6 semanas antes do tratamento com o fár-maco; no final do período de engorda eles têm tipicamente um peso corporal médio de 500 g. Os ratos foram então divididos em grupos de tratamento eimplantados com duas bombas subcutaneas (Durect Corp). Uma bomba continha ou veículo (50% de DMSO em água) ou amilina (100 ug/kg/dia) enquanto a outra bomba continha ou água estéril ou sibutramina (3 mg/kg/dia).Como mostrado na figura 15, uma alteração de aproximadamen-te 5% no peso corporal (corrigido pelo veículo) foi observada tanto com asibutramina sozinha ou com a amilina sozinha, enquanto a combinação deamilina e sibutramina produziu aproximadamente uma alteração de 12% nopeso corporal (corrigido pelo veículo). A perda de massa de gordura tambémfoi evidente com o tratamento tanto com amilina sozinha ou com sibutraminasozinha, e um efeito sinérgico foi obtido quando tanto amilina quanto sibu-tramina foram administradas em combinação (figura 16A). Quando a amilinafoi administrada sozinha, a massa magra (proteína) foi aumentada, enquantoa massa magra (proteína) ficou relativamente inalterada quando sibutraminafoi administrada sozinha ou em combinação com amilina (figura 16B).

Exemplo 14. Terapia de Combinação: Amilina + Antaqonista CB-1

Ratos DIO propensos (obtidos de Charles Rives Labs) foramalojados individualmente em gaiolas semelhantes a uma caixa de sapato a22° C em um ciclo de claridade escuridão de 12/12-horas. Os ratos forammantidos ad-libitum em uma dieta moderadamente alta em gordura (32%kcal provenientes de gordura; Research Diets D1226B) por 6 semanas antesdo tratamento com o fármaco. No final do período de engorda eles têm tipi-camente um peso corporal médio de 500 g. Os ratos foram então divididosem grupos de tratamento e implantados com uma minibomba subcutânea(Durect Corp) e inseridos com uma gavagem oral. A minibomba continha ouveículo (50% de DMSO em água) ou amilina (100 ug/kg/dia) enquanto a ga-vagem oral administrou ou água estéril ou uma variação de doses de umantagonista CB-1 (0,1; 0,3; 1,0; 3,0; 10,0 mg/kg/dia). A alteração no pesocorporal após 2 semanas é demonstrada na figura 17 e duas dessas combi-nações (circuladas) estão destacadas nas Figs 18A e 18B em mais detalhes.

Enquanto a descrição anterior descreve a presente invenção,com exemplos fornecidos para a finalidade de ilustração, será entendido quea prática da presente invenção abrange todas as variações, adaptações, oumodificações usuais como estando dentro do escopo da invenção reivindi-cada. Portanto, as descrições e exemplos não devem ser considerados co-mo limitantes do escopo da invenção.

Claims

1. Método de controlar compulsão alimentar em um indivíduoque compreende administrar a um indivíduo que necessite disso, uma amili-na ou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para controlar ou redu-zir compulsão alimentar pelo indivíduo.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a amilina ouagonista de amilina é administrado em uma quantidade eficaz para reduzirpontuação total da Escala de Compulsão Alimentar (BES) quando compara-da com a pontuação total da BES na ausência da administração de amilinaou agonista de amilina.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a amilina ouagonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para alterar acategoria da Escala de Compulsão Alimentar (BES) do indivíduo quandocomparado com a categoria da BES na ausência da administração de amili- na ou agonista de amilina, em que a categoria da BES é alterada de severapara moderada, de severa para leve e de moderada para leve.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a amilina ouagonista de amilina é administrada em momentos do dia quando o indivíduoé mais propenso a ter compulsão alimentar.

5. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduotem compulsão alimentar quando estressado emocionalmente.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduofoi diagnosticado com um distúrbio de ansiedade.

7. Método de modificar a preferência alimentar de um indivíduoque compreende administrar a um indivíduo que tem desejo de modificarpreferências alimentares, uma amilina ou agonista de amilina em uma quan-tidade eficaz para modificar as preferências alimentares do indivíduo.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a amilina ouagonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para diminuira preferência do indivíduo por alimentos altamente gordurosos.

9. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a amilina ouagonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para aumentara preferência do indivíduo por alimentos pouco gordurosos.

10. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a amilinaou agonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para dimi-nuir a preferência do indivíduo por alimentos doces.

11. Método de tratar, reduzir ou prevenir ansiedade por alimentode um indivíduo que compreende administrar a um indivíduo que deseja tra-tar, reduzir ou prevenir ansiedade por alimento, uma amilina ou agonista deamilina em uma quantidade eficaz para tratar, reduzir, ou prevenir ansiedadepor alimento do indivíduo.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, em que o indiví-duo está sob condições de estresse.

13. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a amilinaou agonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para redu-zir a ansiedade por alimentos altamente gordurosos do indivíduo.

14. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a amilinaou agonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para redu-zir a ansiedade por alimentos doces do indivíduo.

15. Método de modular uma taxa metabólica de um indivíduoque compreende administrar a um indivíduo que necessite disso uma amilinaou agonista de amilina em uma quantidade eficaz para modular a taxa meta-bólica do indivíduo.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, em que a amilinaou agonista de amilina é administrada em uma quantidade eficaz para au-mentar a taxa metabólica.

17. Método de acordo com a reivindicação 16, em que a massamagra do indivíduo não é reduzida.

18. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o indiví-duo tem uma ingestão calórica reduzida quando comparado na ausência deadministração de amilina ou agonista de amilina.

19. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o peso cor-poral e circunferência da cintura do indivíduo estão diminuídos quando compa-rados na ausência de administração do amilina ou agonista de amilina.

20. Método de acordo com a reivindicação 15, em que o indivíduoé obeso.