BRPI0609898A2

BRPI0609898A2 - aparelho de recuperação e manchamento de antìgeno in situ, módulo de reação, método para tratar uma lámina de microscópio, e, tira de dispensação de reagente reconfigurável

Info

Publication number: BRPI0609898A2
Application number: BRPI0609898-3A
Authority: BR
Inventors: Lee H Angros; Thomas L Byers
Original assignee: Lee H Angros; Thomas L Byers
Priority date: 2005-05-24
Filing date: 2006-05-24
Publication date: 2011-10-11
Also published as: WO2006127852A3; US20200326266A1; US20140024134A1; US20110150725A1; US8361388B2; WO2006127852A8; CN101228429A; US8541244B2; WO2006127852A2; AU2006249956A1; US9719895B2; US20160274007A1; CA2609453C; MX2007014655A; CN101228429B; US20110229978A1; JP2009506300A; US20170328820A1; JP5335420B2; US11585737B2

Abstract

APARELHO DE RECUPERAçãO E MANCHAMENTO DE ANTìGENO IN SITU, MóDULO DE REAçãO, MéTODO PARA TRATAR UMA LáMINA DE MICROSCóPIO, E, TIRA DE DISPENSAçãO DE REAGENTE RECONFIGURáVEL. E contemplado aqui um aparelho e método de recuperação e manchamento de antigeno de lâmina de microscópio automatizados, que caracterizam uma pluralidade de compartimentos de reação pressurizáveis miniaturizados individualmente operáveis para individual e independentemente processar uma pluralidade de lâminas de microscópio individuais. A aparelho preferivelmente caracteriza elementos de suporte de lâmina independentemente móveis, cada um tendo uma placa de aquecimento individualmente aquecível. Cada elemento de suporte de lâmina preferivelmente suporta uma única lâmina de microscópio. Cada lâmina de microscópio pode ser incluída dentro de um compartimento de reação pressurizável individual. Pressões excedendo 1 atm ou abaixo de 1 atm podem ser criadas e mantidas no compartimento de reação antes do, durante ou após o aquecimento da lâmina começar. Em razão da capacidade de pressurizar e regular a pressão dentro do compartimento de reação e individualmente aquecer cada lâmina, cada lâmina e uma solução ou reagente líquido sobre ela podem ser aquecidos a temperaturas que poderiam não ser obtidas sem o meio-ambiente pressurizado incluído do compartimento de reação. Uma tira de dispensação de reagente, tendo uma pluralidade de módulos reagentes reconfiguráveis, pode também ser usada.

Description

"APARELHO DE RECUPERAÇÃO E MANCHAMENTO DE ANTÍGENO IN SITU, MÓDULO DE REAÇÃO, MÉTODO PARA TRATAR UMA LÂMINA DE MICROSCÓPIO, E, TIRA DE DISPENSAÇÃO DE REAGENTE RECONFIGURÁVEL"

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A presente invenção é relacionada com o campo de amostras de tratamento de lâminas de microscópio incluindo substratos analíticos e, mais especificamente, ao campo de recuperação e manchamento de antígeno induzido por calor.

Em laboratórios de patologia anatômica (por exemplo, histologia, citologia) é sabido que certos procedimentos imuno-histoquímicos, aqui conhecidos como ensaios IHC, são realizados em espécimes biológicos, incluindo, por exemplo, tecidos embutidos por parafina fixada por formalina e preparações celulares. Também são usados na técnica diversos anticorpos IHC (abs) como receptor de Estrogênio abs, receptor da Progesterona abs, Proliferação abs como Ki-67, que requerem o uso de técnicas de desmascaramento de temperatura elevada (isto é, recuperação de antígeno, recuperação de epítopo de temperatura elevada e desmascaramento de antígeno), antes da aplicação do anticorpo para rotular estruturas celulares (antígenos).

Há diversos procedimentos conhecidos na técnica para o "desmascaramento" de antígenos que foram tornados "escondidos" pela fixação de formalina. Os procedimentos conhecidos na técnica incluem tratar o espécime biológico em soluções aquosas (por exemplo, água), que podem incluir tampões (por exemplo, citrato, EDTA, uréia etc.), juntamente com detergentes ou tensoativos (por exemplo, Brij 35, Tween, SDS, NP-40 e Igepal). Estas formulações conhecidas são aquecidas a temperaturas em torno de 60°C a cerca de 120°C. Estas formulações aquecidas estão em contato com o espécime biológico por vários tempos (por exemplo, cerca de 10 minutos a cerca de 90 minutos), desse modo fazendo com que o antígeno "mascarado" se tornasse "desmascarado", de modo que os anticorpos usados nos ensaios IHC pudessem fixar-se em seus correspondentes antígenos, que são associados com o espécime biológico.

Os tipos de aparelhos que são conhecidos e usados para realizar o aquecimento das soluções de recuperação de antígeno e o espécime biológico incluem banhos de água, vapores, caldeiras de pressão, autoclaves, fornos de microondas e fornos de convecção. Uma vez que a água ferve a 100°C em pressão atmosférica normal, as soluções de recuperação de antígeno, mesmo com outros produtos químicos presentes, somente foram capazes de alcançar temperatura de cerca de 98°C a 100°C antes de a perda de calor evaporativo inibir a solução de alcançar temperaturas mais elevadas. As caldeiras de pressão e autoclaves superam isto ao permitir que a pressurização das soluções, de modo que temperaturas mais elevadas podem ser obtidas sem evaporação do fluido aquecido. Uma vez que há anticorpos que requerem que a solução de recuperação de antígeno esteja em temperaturas excedendo 100°C, muitos laboratórios têm que usar caldeiras pressurizadas para aquecer o espécime biológico com sua solução de recuperação de antígeno, para obter temperaturas até 120°C, sem o que o antígeno não seria "desmascarado", evitando que o anticorpo se ligue ao antígeno.

Permanece a necessidade de um aparelho capaz de produzir condições de pressão de elevada temperatura para lâminas simples serem submetidas a condições de recuperação de antígeno individualizadas, sem basear-se em dispositivo desajeitados, difíceis de manejar, tais como caldeiras de pressão e autoclaves.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Fig. 1 é uma vista em planta de topo de uma tira de reagente (tira de dispensação de reagente) da presente invenção. A Fig. 2 é uma vista em seção transversal tomada através da linha 1 - 1 da tira de dispensação de reagente da Fig. 1.

A Fig. 3 é uma vista em seção transversal ao longo da linha 3 - 3 da Fig. 2.

A Fig. 4 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 1, tendo dois módulos reagentes separados dela.

A Fig. 5 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 1, com um módulo reagente refixado via um conector de ladrilho.

A Fig. 6 é uma vista em planta de topo (A), vista lateral (B) e vista em planta de base (C) do conector de ladrilho usado na Fig. 5.

A Fig. 7 é uma vista em planta de base de uma tira de reagente com dois módulos reagentes reconectados via um par de conectores de ladrilho.

A Fig. 8 é uma vista em seção transversal tomada através da linha 8 - 8 de um módulo reagente e conector de ladrilho.

A Fig. 9 é uma vista em planta de topo de uma base de outra tira de reagente da presente invenção.

A Fig. 10 é uma vista em planta de topo da tira de reagente da Fig. 9, com recipientes de reagente dispostos na base.

A Fig. 11 é uma vista lateral em seção transversal tomada através da linha 11 - 11 da Fig. 10.

A Fig. 12 é uma vista em seção transversal tomada através da linha 12 - 12, que mostra como um recipiente reagente encaixa sobre ou é removido da base da tira de reagente da Fig. 11.

A Fig. 13 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 11.

A Fig. 14 é uma vista extrema dianteira da tira de reagente da

Fig. 13.

A Fig. 15 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 10, após o recipiente de reagente "G" ter sido removido e o recipiente de reagente "H" ter sido movido para a posição de "G" anterior.

A Fig. 16 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 10, após o recipiente de reagente "G" ter sido substituído por um recipiente de reagente "G-2".

A Fig. 17 é uma vista em planta de topo de outra tira de reagente da presente invenção, que tem módulos reagentes permutáveis.

A Fig. 18 é uma vista em seção transversal tomada ao longo da linha 18-18 da Fig. 17.

A Fig. 19 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 17.

A Fig. 20 é uma vista extrema frontal da tira de reagente da Fig. 19.

A Fig. 21 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 17, após o módulo reagente "G" ter sido removido.

A Fig. 22 é uma vista em planta de base da tira de reagente da

Fig. 17, após o módulo reagente "G" ter sido trocado pelo módulo reagente "G-2".

A Fig. 23 é uma vista lateral em seção transversal de um módulo de reação (compartimento de reação, lâmina, elemento de suporte e dispositivo de suporte de tira de reagente) da presente invenção antes da tira de reagente ter sido inserida dentro do dispositivo de suporte de tira de reagente e antes de uma lâmina de microscópio ter sido disposta sobre o elemento de suporte de lâmina.

A Fig. 24A é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 23 em operação em uma fase de dispensação de reagente.

A Fig. 24B é uma vista em seção transversal do módulo de reação da Fig. 24A.

A Fig. 25A é uma vista lateral de seção transversal do módulo de reação da Fig. 23 e Fig. 24A em uma fase de drenagem de reagente.

A Fig. 25B é uma vista em seção transversal do módulo de reação da Fig. 25 A.

A Fig. 26A é uma vista lateral de seção transversal do módulo de reação da Fig. 25A em uma fase de dispensação de tampão de enxágüe.

A Fig. 26B é uma vista em seção transversal do módulo de reação da Fig. 26A.

A Fig. 27A é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 26A em uma fase de drenagem de tampão de enxágüe.

A Fig. 27B é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 27A.

A Fig. 28 é uma vista em seção transversal do módulo de reação das Figuras 23 - 27B, após a tira de reagente ser completamente usada e a lâmina de microscópio ser removida do elemento de suporte de lâmina.

A Fig. 29 é uma versão ampliada da versão da Fig. 24A.

A Fig. 30 é uma versão ampliada da versão da Fig. 26A.

A Fig. 31A é uma vista de topo de seção transversal do compartimento de reação e elemento de suporte de lâmina do módulo de reação da Fig. 29, que mostra uma etapa de mistura de ar no sentido de um relógio.

A Fig. 3IB é uma vista em seção transversal dos orifícios de ar do elemento de suporte de lâmina da Fig. 3 IA.

A Fig. 32A é uma vista de topo em seção transversal do compartimento de reação e elemento de suporte de lâmina do módulo de reação da Fig. 29, que mostra uma etapa de mistura de ar no sentido contrário ao de um relógio.

A Fig. 32B é uma vista em seção transversal dos orifícios de ar do elemento de suporte de lâmina da Fig. 32A.

A Fig. 33 é uma vista da lâmina e componentes separados do elemento de aquecimento do elemento de suporte de lâmina da Fig. 28.

A Fig. 34A é uma vista de topo em seção transversal de um suporte de lâmina de um elemento de módulo de reação com a lâmina e elemento de aquecimento separados, para mostrar o fluxo de ar através dos dutos de esfriamento de ar, que são usados para aumentar um esfriamento rápido do elemento de aquecimento.

A Fig. 34B é uma vista em seção transversal através dos dutos de esfriamento de ar do elemento de suporte de lâmina da Fig. 3 4A.

A Fig. 35A é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 34A.

A Fig. 35B é uma vista em seção transversal através dos dutos de esfriamento de ar do elemento de suporte de lâmina da Fig. 3 5 A.

A Fig. 36 é uma vista da lâmina e componentes separados do elemento de aquecimento do elemento de suporte de lâmina da Fig. 28.

A Fig. 37A é uma vista de topo em seção transversal de um suporte de lâmina de um elemento de módulo de reação com a lâmina e elemento de aquecimento separados, para mostrar o fluxo de ar através dos dutos de esfriamento, que são usados para rapidamente esfriar o elemento de aquecimento.

A Fig. 37B é uma vista em seção transversal através dos dutos de esfriamento de ar do elemento de suporte de lâmina de 3 7A.

A Fig. 38A é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 34A.

A Fig. 38B é uma vista em seção transversal através dos dutos de esfriamento de ar do elemento de suporte de lâmina da Fig. 38B.

A Fig. 39 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo furos de ventilação.

A Fig. 40 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 39, tomada através da linha 40.

A Fig. 41 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 39. A Fig. 42 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 39.

A Fig. 43 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo furos de ventilação.

A Fig. 44 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 43, tomada através da linha 44.

A Fig. 45 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 43.

A Fig. 46 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 43.

A Fig. 47 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo furos de ventilação.

A Fig. 48 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 47, tomada através da linha 48.

A Fig. 49 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 47. A Fig. 50 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 47.

A Fig. 51 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma fenda de ventilação.

A Fig. 52 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 51, tomada através da linha 52.

A Fig. 53 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 51.

A Fig. 54 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 51.

A Fig. 55 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma fenda de ventilação e uma janela de esfriamento rápido. A Fig. 56 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 55, tomada através da linha 56.

A Fig. 57 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 55.

A Fig. 58 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 55.

A Fig. 59 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma fenda de ventilação e uma janela de rápido esfriamento.

A Fig. 60 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 59, tomada através da linha 60.

A Fig. 61 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 59.

A Fig. 62 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 59.

A Fig. 63 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma fenda de ventilação.

A Fig. 64 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 63, tomada através da linha 64.

A Fig. 65 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 63.

A Fig. 66 é uma vista em planta de topo da tira de reagente da Fig. 63.

A Fig. 67 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma janela de rápido esfriamento.

A Fig. 68 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Figura 67, tomada através da linha 68.

A Fig. 69 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 67.

A Fig. 70 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 67. A Fig. 71 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo uma fenda de ventilação e uma janela de esfriamento rápido.

A Fig. 72 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 71, tomada através da linha 72.

A Fig. 73 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 71.

A Fig. 74 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 71.

A Fig. 75 é uma vista em planta de topo de uma versão alternativa da tira de reagente da presente invenção, a tira de reagente tendo furos de ventilação e uma janela de esfriamento rápido.

A Fig. 76 é uma vista em seção transversal da tira de reagente da Fig. 75, tomada através da linha 76.

A Fig. 77 é uma vista lateral da tira de reagente da Fig. 75.

A Fig. 78 é uma vista em planta de base da tira de reagente da Fig. 75.

A Fig. 79 é uma vista lateral em seção transversal de uma forma de realização alternativa do módulo de reação da presente invenção.

A Fig. 80 é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 79 em uma configuração de processamento alternativa.

A Fig. 81 é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 79 em uma configuração de processamento alternativa.

A Fig. 82 é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 79 em uma configuração de processamento alternativa.

A Fig. 83 é uma vista lateral em seção transversal do módulo de reação da Fig. 79 em uma configuração de processamento alternativa.

A Fig. 84 é uma vista lateral em seção transversal fragmentada ampliada do módulo de reação da Fig. 79 em uma configuração de processamento alternativa. A Fig. 85 é uma vista em seção transversal frontal de uma pluralidade de módulos de reação da presente invenção combinados em uma câmara, para formar um aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ da presente invenção, em que os módulos de reação estão em várias fases de operação.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

É contemplada aqui um aparelho de manchamento de lâmina de microscópio automatizado, que caracteriza uma pluralidade de compartimentos de reação pressurizáveis miniaturizados individualmente operáveis, para individual e independentemente processar uma pluralidade de lâminas de microscópio individuais (onde usado aqui, o termo "lâmina de microscópio" é também destinado a referir-se a outros dispositivos analíticos de microscopia, que são usados como recipientes ou estruturas de suporte para suportar espécimes biológicas e bioquímicas para teste e análise e que são dimensionadas e conformadas para encaixar dentro de um compartimento de reação como descrito e contemplado aqui e que inclui mas não é limitado a tubos de teste, cápsulas petri e placas de microensaio, bem como lâminas de microscópio padrão). O aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in-situ automatizado da presente invenção preferivelmente caracteriza elementos de suporte de lâmina independentemente móveis, cada um tendo uma placa de aquecimento individualmente aquecível. Cada elemento de suporte de lâmina preferivelmente suporta uma única lâmina de microscópio. Cada elemento de suporte de lâmina com a lâmina de microscópio sobre ele é incluído dentro de seu próprio compartimento de reação pressurizável individual e/ou compreende uma parte dele. Em uma etapa de tratamento, a solução de recuperação de antígeno é disposta na lâmina e a placa de aquecimento aquece a lâmina e a solução de recuperação de antígeno sobre ela a temperaturas de até e em alguns casos excedendo 150°C, regulando a pressão dentro do compartimento de reação, desse modo aumentando a temperatura que a solução pode obter. Em uma forma de realização, cada compartimento de reação tem seu próprio regulador, dispositivo ou comutador de pressão individual, para regular a pressão dentro do compartimento de reação. Pressões excedendo 1 atm (isto é, excedendo 14,7 psi (0,984 kg/cm2), 0 psig ou 101,325 kPa) ou abaixo de 1 atm podem ser criadas e mantidas no compartimento de reação. O compartimento de reação pode reter, por exemplo, 0,1 ml a 100 ml de solução de recuperação de antígeno.

Onde aqui usada, a expressão "espécime biológico" inclui mas não é limitada a espécimes não processados, espécimes processados, tecido embutido em parafina, montagens completas, seções congeladas, preparações celulares, suspensões celulares, preparações de toque, preparações finas, citoespinhas e outros materiais ou moléculas biológicos, incluindo sangue, urina, fluidos cerebroespinhais, fluidos pleurais, preparações microbiológicas incluindo bactérias, vírus, parasitas, protozoários, bioquímicos incluindo mas não limitado a proteínas, DNA, RNA, carboidratos, lipídeos, microssistemas, reagentes e analisados ELISA, macromoléculas sintéticas, fosfolipídeos, estruturas de suporte de moléculas biológicas (por exemplo, metais, contas, plásticos, polímeros, vidro ou qualquer outros materiais ligados a um substrato de teste biológico para processamento, exame ou observação.

Em razão da possibilidade de pressurizar e regular a pressão dentro do compartimento de reação e individualmente aquecer a lâmina, cada lâmina e uma solução líquida ou reagente sobre ela (por exemplo, incluindo mas não limitado a reagentes de recuperação de antígeno, sondas RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímico, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâminas, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquoso e composições de desparafinização de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone) podem ser aquecidos a temperaturas que não poderiam ser obtidas sem o ambiente pressurizado incluído do compartimento de reação. Por exemplo, uma vez que o vapor produzido pela solução é contido dentro do compartimento de reação (ou é liberado em uma maneira regulada), a pressão dentro do compartimento de reação pode ser regulada para produzir uma temperatura requerida pelo usuário. Pressões ("pressão negativa", isto é, vácuos) abaixo de 1 atm (isto é, abaixo de 0,984 kg/cm , 0 psig ou 102,325 kPa) podem também ser criados e mantidos dentro do compartimento de reação. Por exemplo, pressões de vácuo de 100 kPa a 10 kPa a 1 kPa a 100 Pa a 10 Pa a 1 Pa a 0,1 Pa podem ser formadas e mantidas no compartimento de reação.

Cada compartimento de reação de cada módulo de reação pode ser aquecido separadamente e independentemente dos outros compartimentos de reação por um elemento de aquecimento condutivo (ou placa de aquecimento) subjacente ou adjacente à lâmina (por exemplo, em que o elemento de aquecimento é uma parede lateral do compartimento de reação ou em uma cavidade). Em uma forma de realização preferida, como citado acima, o compartimento de reação incluído, contendo pelo menos uma parte da lâmina de microscópio, tem uma solução de recuperação de antígeno depositada sobre a lâmina do compartimento de reação. A lâmina é então aquecida, em uma forma de realização preferida, a uma temperatura de cerca de 100°C - 300°C e sob uma pressão de 0,1 psig (102,016 kPa) a 350 psig (2514 kPa). Em uma forma de realização, a retenção da pressão é proporcional à temperatura da solução de recuperação de antígeno, de modo que tanto regulação da temperatura do elemento de aquecimento do compartimento de reação como a regulação da pressão gerada pela solução sobre a lâmina podem ser ajustadas durante o procedimento de manchamento automatizado.

Em um exemplo, o elemento de aquecimento poderia aquecer a lâmina a pelo menos 120°C e a pressão dentro do compartimento de reação seria de 16 psig (1,125 kg/cm ), em que a solução sobre a lâmina em contato com o espécime biológico seria de cerca de 130°C. Seria evidente para uma pessoa de habilidade comum na técnica de vasos regulados por pressão que a temperatura obtida pela solução de recuperação de antígeno seria dependente da regulação da pressão gerada ou da temperatura do elemento de aquecimento ou de ambos. Se a regulação da temperatura da solução for para ser determinada pela pressão, a placa de aquecimento pode ser ajustada a 130°C (por exemplo) e a válvula de alívio de pressão poderia ser ajustada a um nível para manter uma pressão de 19 psig (232,3 kPa) dentro do compartimento de reação, por exemplo. Assim, a temperatura da solução de recuperação de antígeno não excederia 13 0°C e permaneceria na faixa de 120°C - 130°C.

Se a regulação da temperatura da solução for determinada pela temperatura do elemento de aquecimento, então a placa de aquecimento pode ser regulada para aquecer até uma desejada temperatura. Uma vez a pressão desejada dentro do compartimento de reação tenha sido alcançada, os dispositivos de pressurização do elemento de aquecimento são ajustados para manter a desejada pressão dentro dos limites preferidos. O compartimento de reação sob algumas condições não necessariamente requer um regulador de pressão, uma vez que a pressão dentro do compartimento de reação é regulada unicamente pela temperatura do elemento de aquecimento. Em algumas formas de realização, seria vantajoso ter-se um regulador para aliviar a pressão, se a pressão exceder os níveis desejados, ou ter-se um regulador de pressão que fizesse com que o elemento de aquecimento fosse ligado e desligado, dependendo da pressão desejada.

Uma vez que a ebulição da solução sobre a lâmina é suprimida pela retenção da pressão, o tampão de recuperação de antígeno do compartimento de reação pode parecer não estar ebulindo, mesmo embora ele realmente alcance uma temperatura acima de 100°C. A eliminação ou redução da perda de vapor devida à ebulição é vantajosa porque ela remove a necessidade de adicionar mais tampão durante o processamento (tal como é necessário quando empregando-se certos outros aparelhos conhecidos na técnica, por exemplo, como mostrado nas U.S. 5.654.200; 5.595.707; 6.296.809; 6.352.861; 6.582.962; 6.096.271; 6.180.061; 6.183.693; 6.541.261; ou 6.783.733), mesmo quando somente pequenas quantidades de tampões são inicialmente usadas (por exemplo, 500 μΐ - 4 ml) e tempos de tratamento são estendidos até 60 minutos em elevadas temperaturas (por exemplo, 130°C). A perda de volume de recuperação de antígeno na presente invenção é mínima devida à retenção dos vapores gerados. Outra importante vantagem para minimização da ebulição em elevadas temperaturas é que o espécime biológico da lâmina não é submetido a extrema agitação pelas bolhas sendo formadas, o que poderia fazer com que o espécime biológico se separe da lâmina de vidro ou seja de outro modo danificado. Além disso, o micro-ambiente pressurizado controlado no compartimento de reação da presente invenção é muito eficiente porque a quantidade de tampão que é usada é mínima e o tempo necessário para aquecer a condições de elevado calor (por exemplo, 120°C - 140°C) é também mínimo, por exemplo, 5 minutos).

As caldeiras de pressão, que são atualmente disponíveis para uso em procedimentos de recuperação de antígeno, são volumosas e requerem uma maior quantidade de tampão e tempo para completar o processo de recuperação de antígeno de elevada temperatura e, além disso, devem ser usadas para tratar muitas lâminas dentro do mesmo recipiente. O procedimento de caldeira de pressão típico do tempo de partida à última etapa (enxágüe) tipicamente dura 45 - 60 minutos. Somente alguns diferentes tampões podem ser aquecidos ao mesmo tempo (da ordem de 5 - 6 recipientes de tratamento de lâmina separados) dentro de um compartimento de reação principal de caldeira de pressão. Cada recipiente de lâmina separado de um caldeira de pressão comercial requer volumes significativos de solução de recuperação de antígeno (por exemplo, 45 - 50 ml por recipiente). O oposto a caldeiras de pressão que são usadas no campo de recuperação de antígeno, o aparelho e método da presente invenção preferivelmente utiliza vapor do reagente sobre a própria lâmina, para produzir uma elevada pressão dentro do compartimento de reação individual. As caldeiras de pressão, ao contrário, baseiam-se em um líquido separado presente dentro do fundo do vaso, para produzir o vapor necessário para provocar pressão aumentada dentro do vaso, para induzir recuperação de antígeno sobre as lâminas ali dentro. Este método requer a etapa adicional de aquecer o líquido separado a uma elevada temperatura, antes do processo de aquecimento da lâmina e do reagente sobre ela poder começar.

Cada um dos compartimentos de reação individuais do aparelho da presente invenção, ao contrário, utiliza quantidades relativamente pequenas de tampão de recuperação de antígeno (por exemplo, 0,5 - 5 ml por lâmina) e aquece rapidamente e esfria rapidamente devido às pequenas quantidades de líquido e área a ser aquecida e esfriada. Mesmo um volume de 0,1 - 1 ml por lâmina pode ser usado com a presente invenção e o tempo típico de início ao fim empregando a presente invenção pode ser tão baixo quanto 20 minutos, por exemplo.

Em uma forma de realização preferida da invenção, para impedir que pequenas quantidades de reagentes líquidos (por exemplo, incluindo mas não limitado a reagentes de recuperação de antígeno, sondas RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, regentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR5 reagentes de sobrelâminas, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone) sejam reduzidas em volume pela conversão de uma fase líquida em uma fase gasosa, e sua perda, durante o aquecimento (como ocorre em outros sistemas comercialmente disponíveis), o compartimento de reação, quando fechado, pode ser pré-pressurizado, individualmente, antes do aquecimento da lâmina e reagente. Esta pré- pressurização por uma fonte de pressurização separada (isto é, em vez de somente pela pressão de vapor produzida pelo líquido aquecido) pode significativamente reduzir a quantidade de perda da fase gasosa (evaporação) de pequenas quantidades de reagentes líquidos (por exemplo, 100 μΐ - 4 ml) sob condições de elevada temperatura (por exemplo, IOO0C - 140°C) por tempos de aquecimento prolongados (por exemplo, 10-60 minutos), desse modo eliminando a exigência de mais reagentes adicional após o processo de tratamento ter começado. Por exemplo, preferivelmente, 0,1-4 mililitros de reagente (por exemplo, reagente de recuperação de antígeno) são colocados na lâmina, o compartimento de reação é então pré-pressurizado e então o elemento de aquecimento começa a aquecer o reagente. A pré-pressurização do compartimento de reação, seguida por aquecimento do reagente, produz um ambiente para o reagente alcançar temperaturas excedendo 100°C, por exemplo, até 140°C, com mínima perda de reagente, devido a formação da fase gasosa (evaporação).

Como é evidente pelo exemplo acima, as temperaturas e pressões poderiam alternativamente ser ajustadas para qualquer nível desejado para qualquer protocolo conhecido na técnica de espécimes biológicos de manchamento. Condições de temperatura super elevada podem também ser conseguidas utilizando-se a presente invenção. Estas condições de aquecimento super elevado podem alcançar e exceder 350°C e 300 psig (2170 kPa) devido à pressurização, pré-pressurização e a construção particular do compartimento de reação (descrita abaixo). Os compartimentos de reação pré- pressurizados individuais da presente invenção podem reter qualquer tipo de vaso ou substrato conhecido na técnica para retenção de um espécime biológico para testar. Os vasos ou substratos incluem mas não são limitados a lâminas de microscópio de vidro e plástico, placas de micro título, tubos, frascos, micro sistemas, pequenos frascos, placas e outros vasos para conter materiais biológicos.

Em uma forma de realização preferida, o compartimento de reação pode ser pré-pressurizado e permanecer pressurizado mesmo sob pressões muito elevadas acima de 300 psig (2170 kPa), para produzir temperaturas muito elevadas, excedendo 300°C, para uso em procedimentos especiais, que requerem tais condições de temperatura muito elevada. Em formas de realização alternativas, o compartimento de reação pode gerar e sustentar temperaturas e pressões, para condições de elevado calor, na faixa de 100 a 150°C a 200°C - 250°C a 300°C. Preferivelmente, uma pressão de pelo menos 15 psig (204,7 kPa) é mantida dentro do compartimento de reação durante o aquecimento.

Como descrito em outra parte aqui, este calor pode ser gerado por um elemento de aquecimento condutivo, posicionado embaixo da lâmina de microscópio, um elemento de aquecimento condutivo na parede do compartimento de reação, outros tipos de dispositivos de aquecimento em locais adjacentes aos reagentes sendo aquecidos e microondas passando através das paredes do compartimento de reação para aquecer os reagentes, por exemplo. Estes tipos de dispositivos de aquecimento podem todos ser incorporados separadamente ou juntos com os sistemas aqui descritos para a regulação da pressão. Em uma forma de realização preferida, a regulação da pressão dentro do compartimento de reação por pré-pressurização ou por pressão produzida por evaporação do reagente aquecido é um componente crítico da invenção.

Em uma forma de realização preferida a presente invenção elimina o uso de um único recipiente grande (por exemplo, uma caldeira de pressão) para tratar uma ou uma pluralidade de lâminas sob pressão. Cada compartimento de reação individualmente operável do aparelho da presente invenção pode tratar uma lâmina individual disposta dentro dele com um reagente individualizado em uma pressão e temperatura individualizadas, sem basear-se em ou afetar qualquer uma das outras diversas lâminas em seus respectivos compartimentos de reação dentro do mesmo aparelho, isto é, cada compartimento de reação pode operar independentemente de cada outro compartimento de reação. A vantagem da presente invenção está em sua capacidade de tratar cada lâmina dentro do instrumento separada e independentemente em uma temperatura individualizada e pressão, sem basear-se em qualquer outros dispositivos de processamento dos outros compartimentos de reação, desse modo aumentando a eficiência na produção e processamento de espécimes e fornecer uma constante vantagem de fluxo de trabalho. Empregando-se a presente invenção, um técnico pode separadamente começar um teste de um lâmina utilizando qualquer protocolo em qualquer temperatura ou pressão, sem afetar ou parar o outro compartimento de reação, mesmo quando aqueles outros compartimentos de reação já estiverem em uso.

Como descrito acima, a temperatura do reagente sobre ou dentro da lâmina (ou vaso) do compartimento de reação pode ser mantida regulando-se a temperatura do elemento de aquecimento ou regulando-se a pressão por um regulador de pressão ou por ambos, em combinação. Em uma forma de realização, por exemplo, o compartimento de reação pode ser pré- pressurizado a 23 psig (259,9 kPa), o elemento de aquecimento pode ser ajustado para alcançar 125°C e a pressão de manutenção pode ser ajustada a 23 psig (259,9 kPa), em que o reagente sobre a lâmina alcança uma temperatura de 125°C pro 10 minutos e é então esfriado para mais processamento. Em uma forma de realização preferida, as condições pré- pressurizadas são definidas como "separadamente pressurizando um compartimento de reação que tem um espécime biológico contido dentro dele". Nesta forma de realização, como citado acima, a pressão não é produzida pela vaporização do líquido contido no compartimento de reação, porém preferivelmente por um sistema ou dispositivo de pressurização separado. O compartimento de reação pode conter um espécime biológico individual ou pode também conter diversos espécimes biológicos. Na forma de realização preferida, um compartimento de reação individual é pré- pressurizável e é construído para conter somente uma lâmina tendo um espécime biológico sobre ela.

Sem querermos ficar presos a teoria, o processo de pré- pressurização, quando incubando reagentes (incluindo quaisquer reagentes descritos em outra parte aqui), caracteriza condições para minimizar perda evaporativa de reagentes e ou fase aquosa (água) ou fase óleo (óleo) de reagentes durante o aquecimento e/ou condições de manchamento em temperatura ambiente. Um outro aspecto da forma de realização caracterizando o compartimento de reação pré-pressurizado individual é que, durante o processo de reação, a pressão faz com que os reagentes entrem em contato próximo, íntimo com o espécime biológico ao serem "pressionados" contra o espécime biológico, em que o contato físico entre eles é aumentado devido à pressão exercida no reagente e, desse modo, no espécime biológico.

Esta força pressurizada do reagente em direção ao espécime biológico preferivelmente diminui o tempo de tratamento pelos reagentes, devido ao contato muito eficiente dos reagentes com o espécime biológico. Os espécimes podem ter seus tempos de processamento significativamente reduzidos devido ao manchamento superior causado pelos reagentes sendo "pressionados" contra o espécime biológico, assim aumentando o contato íntimo com o espécime biológico.

A Reação de Cadeia de Polimerase (PCR), incluindo PCR de tecido, é dependente da retenção dos níveis de água nos reagentes durante o processamento. Concentrações de água específicas, condições de pH e temperaturas têm que ser rigorosamente satisfeitas a fim de a reação PCR ser bem sucedida. As condições pressurizadas do compartimento de reação da presente invenção são ideais para estas condições (baixa evaporação) serem satisfeitas durante o manchamento. Esta baixa evaporação, devida a um microambiente pressurizado individual (o compartimento de reação individual), é ideal para reações PCR sobre lâminas de microscópio de vidro, lâminas de microscópio plásticos, vasos, tubos, micro sistemas, micro placas de título, placas ou qualquer outro vaso usado para a retenção dos espécimes biológicos. Esta pressurização pode também ser usada em temperatura ambiente também (por exemplo, 25°C).

A forma de realização preferida do compartimento de reação pré-pressurizado inclui não somente compartimentos de reação individuais que contenham somente um vaso ou lâmina de contenção biológico, mas também uma câmara pré-pressurizada, que possa conter diversos vasos ou lâminas que possam ser pré-pressurizados para diminuir o tempo de processamento e reduzir a evaporação ou perda de reagente.

Em uma forma de realização adicional, o aquecimento do reagente sobre a lâmina pode ser feito pré-pressurizando-se o compartimento de reação com ar aquecido (abaixo de 100°C) ou super aquecido (acima de 100°C), que manteria a temperatura requerida para o protocolo ou pelo menos pré-aqueceria o compartimento de reação antes do elemento de aquecimento alcançar a temperatura de aquecimento ou ser ligado para aquecer, e manter o aquecimento do reagente sobre a lâmina de microscópio.

Em uma forma de realização particularmente preferida da invenção, um ou mais dos compartimentos de reação do aparelho são pré- pressurizados após as lâminas de microscópio serem colocadas dentro deles.

A pré-pressurização do compartimento de reação pode ocorrer antes, durante ou após o elemento de aquecimento ser acionado para aquecer o lâmina de microscópio e reagente sobre ela.

Em outra forma de realização da invenção, uma pluralidade de lâminas juntas em uma câmara comum pode ser pré-pressurizada e aquecida, desse modo eliminando a necessidade de reagente adicional em cada lâmina durante o processo de recuperação de antígeno. Por exemplo, a pluralidade de lâminas nos aparelhos mostrados nas Patentes U.S. Nos. 5.654.200; 5.595.707; 6.296.809; 6.352.861; 6.582.962; 6.096.271; 6.180.061; 6.183.693; 6.541.261; ou 6.783.733 pode ser incluída dentro de uma câmara pressurizável e pré-pressurizadas antes, durante ou após a etapa de aquecimento começar.

Em uma forma de realização preferida da invenção, uma pluralidade de lâminas é incluída dentro de uma câmara comum, reagente é aplicado nas lâminas (antes ou após colocação dentro da câmara), a câmara é pressurizada a um nível acima da pressão atmosférica e as lâminas são aquecidas de modo que a temperatura do reagente sobre a lâmina exceda 85°C e, mais preferivelmente, exceda 100°C. Além disso, o reagente poderia ser aplicado às lâminas após a câmara ser pressurizada.

As mesmas etapas como acima poderiam ser seguidas em uma inclusão ausente na forma de realização alternativa de um processo de aquecimento. O resultado do processo sem aquecimento é evaporação reduzida do reagente da lâmina, enquanto o reagente está reagindo com o espécime ou amostra sobre a lâmina e um aumento em sua interação física, devido à aumentada pressão do reagente com o espécime ou amostra sobre a lâmina.

Na forma de realização preferida, cada lâmina de microscópio é processada dentro de seu próprio compartimento de reação individual, que pode ser individualmente pressurizado. Cada compartimento de reação é separado de cada outro compartimento de reação, os quais, juntos, compreendem um aparelho de manchamento de lâmina automatizado, para processar uma pluralidade de lâminas simultaneamente, se desejado, embora individualmente. Cada compartimento de reação é funcionalmente independente (isto é, não-interdependente) de cada outro compartimento de reação. A operabilidade independente de cada compartimento de reação é devida a cada compartimento de reação ter separados mecanismos operacionais, incluindo mas não limitado a elementos de suporte de lâmina individualmente móveis, tiras de dispensação de reagente individualmente móveis e orifícios e ministradores individualmente móveis ou estacionários para enxágües, vácuo e descarte de resíduos. Nenhum dispositivo de processamento individual único de qualquer um dos compartimentos de reação é dependente a qualquer tempo da operação dos componentes de processamento de outro compartimento de reação, quer estejam em operação ou não, incluindo, preferivelmente, programas de microprocessamento únicos para cada compartimento de reação. Todos os componentes de processamento (por exemplo, incluindo mas não limitado a dispensadores de reagente, orifícios de enxágüe, orifícios de vácuo, orifícios de pressão, orifícios de refugo, orifícios de mistura, suportes de lâmina, compartimentos de reação, dutos de esfriamento de ar e dutos de esfriamento de líquido) podem ser individual e independentemente móveis e/ou utilizáveis.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, o microprocessador da invenção utiliza um sistema operacional que pode ter múltiplos programas de processamento funcionando individual e/ou simultaneamente, parcial ou completamente específicos para cada compartimento de reação individual. Isto possibilitaria uma única abordagem para programação, pela eliminação da necessidade de o microprocessador ter um programa operacional para determinar o status de todas as etapas de processamento dos instrumentos de manchamento de lâmina atuais (por exemplo, como mostrado nas Patentes U.S. Nos. 5.439.649. 5.595.707; 5.758.033, 5.839.091, 6.296.809, 6.352.861 e 6.783.733). Nos instrumentos de processamento conhecidos na técnica, os microprocessadores têm um programa de processamento que fica a par de todas as etapas para cada lâmina do processo de manchamento e que determina o correto tempo para ativar um dispositivo de processamento comum para um uso particular de lâmina (isto é, dispensador de reagente, enxágües, aplicações de ar etc.). Esta abordagem de "pensar e reagir" para o envolvimento de computador no processamento de uma pluralidade de lâminas é ineficiente. Um tempo de retardo é produzido quando todas as lâminas estão sob o controle de um programa. Este uso ineficiente de tempo provoca aumentado tempo para processamento, exatamente por causa da exigência do microprocessador determinar a próxima etapa para cada lâmina e determinar quais os conflitos com duas ou mais lâminas necessitando ser processadas por um dispositivo comum ao tempo. Este tipo de microprocessamento retarda o término do processamento de uma lâmina, que necessitaria um dispositivo de processamento ao mesmo tempo que outra lâmina ou múltiplas lâminas.

Alguns instrumentos de manchamento conhecidos na técnica caracterizam uma opção de "OPERAÇÃO IMEDIATA". Com este tipo de processamento, o usuário já iniciou uma operação de manchamento e decidiu que uma ou mais lâminas adicionais necessitam ser colocadas no instrumento e processadas, porque o processamento das "lâminas adicionais" é mais urgente. O usuário pode colocar as lâminas "originais" em um cenário de menor prioridade. As "novas lâminas" podem então ser colocadas sobre o instrumento e receberiam o uso prioritário das "novas lâminas" de todos os dispositivos de processamento. No meio do protocolo de manchamento de prioridade, os dispositivos de processamento podem então ser usados para tratar as lâminas "originais" ou "não imediatas" que estavam no instrumento inicialmente. A exigência para este tipo de processamento interrompido é eliminada devido às características da presente invenção.

As vantagens do microprocessador da presente invenção tendo um único programa para cada programa de compartimento de reação eliminam a necessidade de um micropartícuias que seja capaz de planejar as etapas interdependentes para uma pluralidade de lâminas sendo processadas, como requerido pelos sistemas da técnica anterior. Uma outra vantagem de ter-se um programa de microprocessamento separado único para cada compartimento de reação é que, se os microprocessadores de um ou diversos compartimentos de reação falharem não haveria efeito sobre a operação dos outros compartimentos de reação. Uma vantagem para este sistema de microprocessamento é que não há apreciável paralisação no caso de uma falha de microprocessador em um ou alguns compartimentos de reação. Ao contrário, nos instrumentos da técnica anterior, se o microprocessador ou sistema operacional falhar, então o instrumento fica completamente inoperável e deve ser reparado.

Na presente invenção, em uma forma de realização preferida, pode haver um sistema operacional "mestre" comum, que poderia estar em comunicação com dado programa individualmente único, de modo que o usuário pudesse abrir um programa separado, específico para qualquer um ou todos os compartimentos de reação em qualquer tempo. O programa individual separado operando um compartimento de reação específico teria todos os protocolos carregados dentro dele para completamente processar uma lâmina. O programa separado poderia se atualizado e editado pelo usuário e com a ajuda do programa mestre poderia atualizar todos os outros programas separados, de modo que cada compartimento de reação pudesse ter as mesmas atualizações ou edições de protocolo. No caso de um programa mestre falhar, os programas únicos separados para cada compartimento de reação ainda seriam operacionais para processar as lâminas; eles apenas perderiam a capacidade de comunicarem-se com os programas separados dos outros compartimentos de reação para atualização, baixar ou carregar informações. Em uma variação, cada compartimento de reação pode ser individualmente separado único para si próprio com respeito a seu programa operacional sem ligação com o outros compartimentos de reação. Uma outra vantagem de ter-se um sistema operacional mestre é a capacidade de comunicar-se com os outros programas de compartimento de reação separado para fins diagnósticos, carregar, baixar e comunicações gerais e específicas entre os compartimentos de reação.

Em uma forma de realização da presente invenção, toda exigência de controle de movimento necessária para operação do sistema pode ser na forma de fontes de energia AC, DC, solar e, opcionalmente, outras, como pneumática e de vapor. O microprocessador pode ser operado em AC, DC e solar, por exemplo. O inteiro instrumento é compacto e pode ser configurado com qualquer quantidade ou números de compartimentos de reação necessários. O instrumento pode ser portátil para ser usado no campo (pesquisa por exemplo) ou transportado para uma área de uso. O número de compartimentos de reação tipicamente seria de 10-20 por cento e são empilháveis ou são unidos linearmente ou são conectados de qualquer outra maneira que seja apropriada. Uma unidade de campo portátil poderia ter pouco quantos 1-5 ou 5 - 10 compartimentos de reação, por exemplo, para menor peso. Preferivelmente, os componentes são produzidos de materiais leves, anti-corrosivos. Uma outra vantagem da presente invenção é que o instrumento pode sofrer manutenção em uma abordagem modular. Cada compartimento de reação ou elemento de suporte de lâmina do módulo pode ser removido isoladamente e sofrer manutenção ou descartado por uma unidade completamente nova com acessórios modulares simples. Todos os controles de movimento são preferivelmente modulares e sofrerem manutenção ou serem completamente substituíveis. Uma vantagem para esta possibilidade de manutenção modular é que os outros compartimentos de reação que estão em uso ou poderiam ser usados não são afetados durante a manutenção de qualquer dispositivo ou parte de um diferente compartimento de reação.

Uma vantagem da presente invenção, como explicado anteriormente, é que cada lâmina pode ser tratada com um reagente único separado, inferindo-se que qualquer lâmina pode ter qualquer reagente e ser tratada em pressões e por quantidades variáveis de tempos de tratamento, que são os mesmos ou diferentes dos de todas as outras lâminas carregadas dentro do aparelho. Exemplos de reagentes incluem mas não são limitados a: reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâminas, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafmizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone. Outra vantagem com a presente invenção é que contaminação cruzada de reagentes ou espécimes biológicos de uma lâmina por outra lâmina é eliminada porque cada lâmina é separada e tratada com seu próprio reagente, em um compartimento de reação separado.

Outra importante vantagem da presente invenção é que cada compartimento de reação individual pode ser limpado ou reparado separada e automaticamente ao mesmo tempo que outros compartimentos de reação sendo usados para processar lâminas. Assim, não há paralisação ou interrupção dos outros compartimentos de reação quando um compartimento de reação individual particular está sendo limpado ou reparado. Cada compartimento de reação pode ser separadamente limpado e/ou esterilizado por vapor, com ou sem um detergente ou reagente de esterilização e secado com ar aquecido (abaixo de 100°C) ou superaquecido (acima de 100°C). Este tipo de limpeza esterilizada poderia ser usada por exemplo, se um espécime biológico que estivesse sendo processado tivesse propriedades infecciosas. Cada compartimento de reação essencialmente tem as propriedades de um autoclave miniatura individual auto-regulado e controlado. A esterilização de cada compartimento de reação antes do uso com o próximo processo de espécime biológico pode fornecer uma vantagem técnica inerente, devido à eliminação de contaminação cruzada e contato direto com espécimes biológicos infecciosos. A esterilização pode ser realizada usando-se apenas vapor ou produtos químicos dispensados por uma tira de reagente ou outro elemento de dispensação.

Tiras de reagente

Em uma forma de realização preferida da invenção, os reagentes são supridos ao compartimento de reação por uma tira de reagente (também referida aqui como uma tira de dispensação de reagente), individualizada para um único compartimento de reação, como descrito mais detalhadamente abaixo (Figs. 1 - 22 e 39 - 78).

A tira de reagente compreende pelo menos um e preferivelmente uma pluralidade de recipientes reagentes separados. Os reagentes dos recipientes reagentes podem ser de qualquer tipo conhecido na técnica, incluindo mas não limitado a reagentes de recuperação de antígeno, sondas RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não- iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno- histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone. O reagente pode também ser um reagente seco ou dessecado, que possa ser dispensado sobre um espécime biológico ou um reagente seco ou dessecado que possa ser reconstituído antes da dispensação sobre o espécime biológico. Um reagente seco ou dessecado pode ser dispensado sobre o espécime biológico e então reconstituído por outro reagente, por exemplo. A tira de reagente e recipientes reagentes individuais podem ser produzidas de qualquer material apropriado, incluindo mas não limitado a plásticos, metais, polímeros e compósitos. A tira de reagente, em uma versão preferida, tem uma abertura entre os recipientes reagentes individuais, que pode ser selada por um êmbolo dispensador de reagente no aparelho, para fechar uma abertura superior do compartimento de reação (descrito em mais detalhes abaixo). A tira de reagente pode ser construída de materiais que possibilitem que seja aquecida, se desejado, por um meio de aquecimento localizado sobre ou dentro da tira de reagente e/ou nos recipientes de reagente individuais, ou meio de aquecimento adjacente à tira de reagente e/ou recipiente de reagente para pré-aquecer os reagentes antes de sua dispensação pela tira de reagente para dentro do compartimento de reação e sobre a lâminas de microscópio ou sobre a lâminas de microscópio antes de ser inserida dentro do compartimento de reação. O meio de aquecimento pode se qualquer um conhecido daqueles de habilidade comum na técnica, incluindo mas não limitado a aquecimento infravermelho, tintas condutivas elétricas, cobertor, enrolamentos de fio, luz, aquecedores kapton, aquecedor de lâmina e aquecedores tipo condutivo. A tira de reagente, por exemplo, pode ser diretamente ligada a um suprimento elétrico para ativar os aquecedores ou pode usar tecnologia sem fio para interfacear com os aquecedores localizados na tira de reagente ou recipientes de reagente.

As tiras de reagente, em uma forma de realização preferida, têm a largura de 0,25 polegada (6,35 mm) a 3 polegadas (76,2 mm) e qualquer comprimento para acomodar um número suficiente de recipientes de dispensação de reagente para completar um protocolo de manchamento. O comprimento de uma forma de realização preferida é de 4 polegadas (101,6 mm) a 20 polegadas (508 mm) ou maior, com um comprimento de menos do que 10 polegadas (254 mm) sendo preferido. As tiras de reagente podem ter qualquer número, tamanho, configuração, capacidades de dispensação (isto é, a capacidade de dispensar um reagente da tira de reagente sob uma pressão maior do que aquela da pressão interna do compartimento de reação) dos recipientes de reagente (isto é, cápsulas, pacotes de bolhas, recipientes tipo seringa miniatura, recipientes de dispensação (volume medido) e recipientes de dispensação medidos volumetricamente, que possam dispensar seus reagentes em uma pressão mais elevada do que as pressões internas dos compartimentos de reação).

As tiras de reagente podem ter qualquer número ou configuração (arranjo ou posicionamento) de ventilações de vapor, furos de vapor, dispositivos de liberação de vapor (válvula de pressão ou regulador de pressão), dispositivos de monitoramento de pressão ou janelas de esfriamento baseadas em um protocolo particular, por exemplo, como mostrado nas Figuras 39 - 78 e como descrito e examinado abaixo. Cada tira de reagente pode ter recipientes de reagente dispostos sobre ela em um padrão de modo que o reagente do primeiro recipiente de reagente seja dispensado em uma extremidade da tira de reagente e sucessivos reagentes sejam dispensados por sucessivos recipientes reagentes, à medida que a tira de reagente move-se para a frente em direção ao último recipiente de reagente na extremidade oposta da tira de reagente, sem pular ou mover em uma direção oposta. A tira de reagente pode também ser utilizada dispensando-se reagentes de recipientes de reagente não-sucessivos em um arranjo fora de ordem na tira de reagente, em que a tira de reagente é movida para "trás e para a frente", para "colher" e "dispensar" reagentes de recipientes de reagente particulares. Em uma forma de realização preferida, um ou outro método de dispensação (sucessivo ou não-sucessivo) seria usado para dispensar reagentes de cada recipiente de reagente presente na tira de reagente, sem deixar qualquer um reagente não utilizado.

Alternativamente, o usuário pode deletar ou anular um protocolo pré-estabelecido, com o microprocessador, para pular qualquer recipiente ou recipientes de reagente particular da tira de reagente. A tira de reagente pode ser colocada sobre o dispositivo de suporte de tira de reagente e é capturada e fixamente mantida em posição sobre o dispositivo de suporte por alguns meios conhecidos na técnica de dispositivo de prender. Um exemplo de um dispositivo de prender será um "clipe", tal como usado em um "prancheta de clipe" para prender cada extremidade ou cada lado da tira de reagente ao suporte de tira de reagente. Outros dispositivos de prender que podem ser usados são rodas dentadas, fechos de pressão, agarradores, adesivos de baixa adesão, tira de encaixe "adaptada" ou "confortável" dentro de trilhos de suportes de tira de reagente, ou outros meios descritos aqui ou conhecidos na técnica.

Pressão elevada dentro do compartimento de reação pode fazer com que os reagentes colocados sobre a lâmina, sem ou com calor, sejam empurrados para contato físico mais próximo com o espécime biológico da lâmina, desse modo provendo o manchamento. O meio de pressurização (com ou sem aquecimento adicional), pode ciclar sobre e longe e os jatos de mistura podem ser empregados para misturar o reagente e então repressurizados para empurrar o reagente para baixo sobre a lâmina. Este processo pode ser repetido. Os reagentes (por exemplo, reagentes gasosos e líquidos como descrito em outra parte aqui) e todos os componentes de processamento, incluindo mas não limitado a jatos de ar de mistura, vácuo (aspiração), alívio de pressão, pressão de ar, remoção de resíduos e reagentes líquidos podem ser trazidos para o compartimento de reação (além de ou em lugar dos reagentes supridos por uma tira de reagente) de cada módulo de reação (dentro ou fora do compartimento de reação), via válvulas pneumáticas eletricamente operadas. Estas válvulas podem ser uma válvula separada para cada componente sendo suprido a cada módulo de reação, por exemplo, por válvulas tipo rotativa de 2-orifícios, multi-orifícios (válvula multi-orifícios) e ou válvulas tipo de pressão. A distribuição dos componentes de processamento pode ser via uma ou mais válvulas rotativas por módulo de reação. As válvulas rotativas podem ser usadas juntamente com válvulas de 2- orifícios ou válvulas de pressão em qualquer combinação com ou sem válvulas rotativas. Estas válvulas tipo miniatura (por exemplo, válvulas de multi-portas, válvulas rotativas, válvulas de 2-portas e válvulas de pressão) são comercialmente disponível pelos vendedores, incluindo Bio-Chem Valve Company, 85 Fulton Street, Boonton, NJ 07005, Parker Hannifan, 6035 Parkland Boulevard, Cleveland OH 44124 e Tri-Tech LLC, 56733 Magnetic Drive, Mishawaka, IN 46545.

Formas de realização das Figuras 1-22

Com referência agora aos desenhos, é mostrado nas Figuras 1 - 8 uma tira de dispensação de reagente reconfigurável (tira de reagente) 10, que é construída de uma base 12, preferivelmente construída de um metal, plástico, termoplástico ou material polimérico e uma pluralidade de recipientes de reagente 14 (designados, para facilidade de referência, como A- H), cada um dos quais é posicionado sobre um ladrilho 16 da base 12. A base 12 tem uma superfície superior 18, uma superfície inferior 20, uma primeira extremidade 22 (próxima do primeiro recipiente de reagente A) e uma segunda extremidade 24 (próxima do último recipiente de reagente H). Cada ladrilho 16 preferivelmente tem uma plataforma de recipiente 26, sobre a qual cada recipiente de reagente 14 é posicionado e é preso nela via um conector de recipiente 30. Cada ladrilho 16 tem uma abertura injetora 28, que se estende através dele. Preferivelmente, entre cada plataforma de recipiente 26 é localizada uma abertura de orifício de enxágüe 32, que se estende através da base 12. Como mostrado nas figuras, uma abertura de orifício de enxágüe separada 32 é localizada entre cada plataforma de recipiente 26, porém cada tira de reagente 10 pode ter somente uma ou diversas aberturas de orifício de enxágüe 32. A tira de reagente 10 preferivelmente compreende uma pluralidade de linhas de entalhe 34 (ou linhas de perfuração) individualmente localizadas entre pares de ladrilhos 16, o que possibilita o usuário separar um ladrilho individual 16 da base 12. Cada ladrilho 16 também tem uma pluralidade de furos de recebimento de conector 36 para possibilitar ladrilhos separados 16 serem reconectados a um ladrilho adjacente 16. Cada recipiente de reagente 14 compreende um corpo 40, um espaço interno 42 dentro do corpo 40, um êmbolo 44, um bico injetor 46 e um reagente 48 disposto no espaço interno 42 entre o êmbolo 44 e o bico injetor 46. Em uma forma de realização preferida, os ladrilhos 16 da base 12 são moldados em uma única peça e os recipientes de reagente 14 são moldados ou permanentemente fixados a seus respectivos ladrilhos 16 da base 12.

Como mostrado na Fig. 4, um ladrilho individual 16 pode ser separado ao longo da linha de entalhe 34 a partir de uma linha adjacente 16, em que, por exemplo, os ladrilhos 16, tendo recipientes de reagente GeH, foram separados. Cada ladrilho 16 e recipiente de reagente 14 constitui um único módulo de reagente 50 (por exemplo, o módulo de reagente 50 tendo recipiente de reagente G é referido como módulo de reagente 50G e o módulo de reagente 50, tendo recipiente de reagente H é referido como módulo de reagente 50H. A Figura 5 mostra uma tira de reagente 10a, em que o módulo de reagente 50H foi religado ao módulo de reagente 50F, via um conector de ladrilho 52 (Fig. 6), que compreende dois pares de pés de ligação de conector de ladrilho 54 e tem uma abertura que deixa a abertura de orifício de enxágüe 32 descoberta. Em uma forma de realização alternativa, mostrada nas Figuras 7 e 8, uma tira de reagente IOb é construída da tira de reagente original 10, exceto que o módulo de reagente 5 OG foi substituído por um novo módulo de reagente 50G, posicionado entre o módulo de reagente 5OF e o módulo de reagente 50H e conectado neles via um par de conectores de ladrilho 52.

As configurações das tiras de reagente 10a e 10b são meramente exemplos de como as configurações dos módulos de reagente 50 podem ser rearranjadas, como será bem entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica.

E mostrada nas Figuras 9-16 uma tira de dispensação de reagente reconfigurável (tira de reagente) 60, que é construída de uma base 62, preferivelmente construída de um material metálico, plástico, termoplástico ou polimérico e uma pluralidade de recipientes de reagente 78 (designados, para facilidade de referência como A-H), cada um dos quais é posicionado em uma plataforma de recipiente 72 da base 62. A base 62 tem uma superfície superior 64, uma superfície inferior 66, uma primeira extremidade 68 (próxima do primeiro recipiente de reagente A) e uma segunda extremidade 70 (próxima do último recipiente de reagente H). Cada recipiente de reagente 78 é preso à base 62 via um conector fêmea de recipiente 74. CAda plataforma de recipiente 72 tem um furo injetor 82, que se estende através da base 62. Preferivelmente, entre cada plataforma de recipiente 72 está localizada uma abertura de orifício de enxágüe 76, que se estende através da base 62. Como mostrado nas figuras, uma abertura de orifício de enxágüe 76 é localizada entre cada plataforma de recipiente 72, porém cada tira de reagente 60 pode ter somente uma única ou diversas aberturas de orifício de enxágüe 76. Cada recipiente de reagente 78 compreende um injetor 80 e um conector macho de recipiente 84, que é inserível dentro de um correspondente conector fêmea 74 para prender o recipiente 78 na plataforma de recipiente 72. O conector fêmea de recipiente 74 e o conector macho de recipiente 84 podem compreender um fecho de girar. Cada recipiente de reagente 78 é de outro modo construído em uma maneira similar ao recipiente 14 da tira de reagente 10. Em uma forma de realização preferida, a base 62 é moldada em uma única peça e os recipientes de reagente 78 são fixáveis e removíveis de suas respectivas plataformas de recipiente 72 da base 62.

Como mostrado na Fig. 11 e 13, um recipiente de reagente individual 78 pode ser removido, por exemplo, os recipientes de reagente 78, designados como GeH, foram separados. A Figura 15 mostra uma tira de reagente 60a, em que o módulo de reagente 78H foi refixado à plataforma de recipiente 72 que continha o recipiente de reagente 78G. Em uma forma de realização alternativa, mostrada na Figura 16, uma tira de reagente 60b é construída da tira de reagente original 60, exceto que o recipiente de reagente 78G foi substituído por um novo recipiente de reagente 78G, posicionado entre o módulo de reagente 78F e o recipiente de reagente 78H e conectado nele sobre a plataforma de recipiente 72G.

As configurações das tiras de reagente 60a e 60b são meramente exemplos de como as configurações dos recipientes de reagente 78 podem ser rearranjadas, como será bem entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica.

E mostrada nas Figuras 17-22 uma tira de dispensação de reagente reconfigurável (tira de reagente) 90, que é construída de uma pluralidade de módulos de reagente intertravantes 92, cada um compreendendo um recipiente de reagente 94 (designado para facilidade de referência como A-H) e um ladrilho de intertravamento 96. A tira de reagente 90 tem uma superfície superior 104 e uma superfície inferior 106. Cada ladrilho de intertravamento 96 tem uma abertura injetora 97, que se estende através dele. Preferivelmente, entre cada recipiente de reagente 94 está localizada uma abertura de orifício de enxágüe 102. Como mostrado nas figuras, uma abertura de orifício de enxágüe separada 102 é localizada entre cada recipiente de reagente 94, porém cada tira de reagente 90 pode ter somente uma única ou diversas aberturas de orifício de enxágüe 102. Cada ladrilho de intertravamento 96 da tira de reagente tem uma parte de intertravamento macho como serra tico-tico 98 e parte de intertravamento fêmea semelhante a serra tico-tico 100, cada uma das quais é conectável a uma parte de intertravamento fêmea adjacente e uma parte de intertravamento macho 98, respectivamente. Isto possibilita o usuário separar e refixar os ladrilhos de intertravamento individuais 96. Cada recipiente de reagente 94 é construído de uma maneira similar àquela do recipiente de reagente 14. Em uma forma de realização preferida, cada ladrilho de intertravamento 94 é moldado em uma única peça com o recipiente de reagente 94 ou é permanentemente fixada de qualquer maneira conhecida na técnica.

Como mostrado na Fig. 17 - 19, os ladrilhos de intertravamento individuais 96 podem ser separados de ladrilhos de intertravamento adjacentes 96, em que, por exemplo, os ladrilhos de intertravamento 96, tendo recipientes de reagente GeH, foram separados. Cada ladrilho de intertravamento 96 e recipiente de reagente 94 constitui um único módulo de reagente de intertravamento 92 (por exemplo, o módulo de reagente de intertravamento 92, tendo recipiente de reagente G, é referido módulo 92G e o módulo de reagente 92, tendo o recipiente de reagente H, é referido como módulo de reagente 92H. A Figura 21 mostra uma tira de reagente 90a, em que o módulo de reagente 92H foi refixado ao módulo de reagente 92F via parte de intertravamento macho 98 e parte de intertravamento fêmea 100 e tem uma abertura de orifício de enxágüe 102. Em uma forma de realização alternativa, mostrada na Figura 22, uma tira de reagente 90b é construída da tira de reagente original 90, exceto que o módulo reagente 92G foi substituído por um novo módulo de reagente 92G, posicionado entre o módulo de reagente 92H e módulo de reagente 92F e conectado nele.

As configurações das tiras de reagente 90a e 90b são meramente exemplos de como as configurações dos módulos de reagente de intertravamento 92 podem ser rearranjados, como será bem entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica.

Como descrito acima e em outra parte aqui, em uma forma de realização preferida, a tira de reagente da presente invenção pode ser reconfigurada de uma configuração original ou anterior, pelo usuário, desse modo fornecendo ao usuário a capacidade de dispor sob medida os recipientes de reagente 14 na tira de reagente 10, por exemplo, como mostrado para as tiras de reagente 10a e 10b.

Por exemplo, se um usuário não desejar ou necessitar utilizar todos os recipientes de reagente 14 presentes em uma tira de reagente pré- montada 10, ou o usuário querer adicionar um ou mais recipientes de reagente 14 a uma tira de reagente particular ou rearranjá-los sobre ela, o usuário terá a possibilidade de reconfigurar os recipientes de reagente 14 sobre a tira de reagente.

Como mostrado nas Figuras 1 - 4, em uma forma de realização, os ladrilhos pré-montados 16, tendo recipientes de reagente 14 posicionados sobre eles na tira de reagente 10, podem ser perfurados ou facilmente separados via linhas de entalhe 34, para produzir módulos de reagente 50, desse modo possibilitando a reconfiguração dos módulos de reagente 50, como descrito em outra parte aqui. Os ladrilhos de reagente 16 podem ser qualquer tamanho, porém, preferivelmente, aqueles da mesma tira de reagente 10-10b são todos do mesmo tamanho, embora certas tiras de reagente possam ter ladrilhos 16 que são de diferentes tamanhos. Por exemplo, em uma tira de reagente da presente invenção, tal como uma tira de reagente 10, que tem 5 polegadas (12,7 cm) de comprimento e tem 10 ladrilhos individuais 16 presentes, cada ladrilho 16 teria 0,5 polegada (1,27 cm) de comprimento. Na forma de realização da Fig. 1, os ladrilhos separados 16 são manufaturados juntos em uma série e são separáveis via linhas de entalhe 34, tais como sulcos, perfurações ou outros meios de separação entre os ladrilhos individuais 16, como examinado em outra parte aqui.

Como indicado acima, uma tira de reagente 10 tem quatro furos receptores de conector de ladrilho 36 em cada ladrilho 16. Os ladrilhos adjacentes 16 podem ser unidos e presos por um conector de ladrilho 52, similar a um elo de corrente de bicicleta mestre. Há muitas maneiras conhecidas por aqueles de habilidade comum na técnica de como separar e unir pequenas partes que poderiam ser usadas para ligar os ladrilhos 16 entre si, de maneira a produzir as tiras de reagente reconfiguradas da presente invenção.

O "encaixe entre si sob pressão" ou "peça quebra-cabeça" se aproximam se as tiras de reagente 90-9b tornarem a tira de reagente contínua em que ela possa ser puxada ou empurrada sobre o compartimento de reação do aparelho, sem deslocar um dos ladrilhos de reagente e sem requerer um meio de fixação separado para prender a tira junto (por exemplo, um conector).

Qualquer uma das tiras de reagente aqui pode incluir qualquer uma ou todas as características citadas acima e pode também ter recipientes de reagente vazios 14, que podem ser enchidos pelo usuário. De fato, em uma forma de realização, a tira de reagente da presente invenção pode compreender recipientes vazios 14 para o usuário "produzir sob medida" sua própria tira de reagente sob medida, utilizando módulos de reagente e/ou ladrilhos separados vazios para construir uma tira de reagente. Em uma forma de realização, a tira de reagente da presente invenção pode ter um número predeterminado de recipientes de reagente em uma seqüência predeterminada, que não pode ser alterada pelo usuário (por exemplo, vide Figuras 39 - 78, como descrito abaixo mais detalhadamente).

A tira de reagente é assim não reconfigurável. Em uma forma de realização preferida, a tira de reagente não configurável é avançada em uma direção intermitentemente como dirigido pelo microprocessador ou outro meio até todos os reagentes da tira de reagente terem sido posicionados. A tira de reagente é preferivelmente descartável e é em uma forma de realização preferida jogada fora e não recarregada ou reusada outra vez. Cada recipiente de reagente pode ser posicionado consecutivamente ou um ou mais recipientes poderiam ser pulados, em seguida poder-se-ia retornar para eles. A tira de reagente poderia ser rotulada com um símbolo ou código de caractere óptico legível por computador (código de barra, símbolo opticamente legível, código, caractere), para identificar o tipo de protocolo de tratamento que programaria então o computador quanto ao tipo de protocolo a ser usado e quando o reagente seguinte da série seria dispensado sobre a lâmina.

Uma vez o microprocessador, juntamente com a leitora óptica sobre o instrumento, tenha varrido o caractere óptico sobre a tira de reagente, o usuário então colocaria a tira de reagente sobre o dispositivo de suporte da e comprimiria o botão de partida, localizado próximo da abertura do compartimento de reação individual ou no ícone correspondente da tela de computador, para iniciar o procedimento. O dispositivo de suporte de tira reagente preferivelmente teria um dispositivo residente, de modo que o computador "soubesse" onde o primeiro recipiente de reagente é localizado em relação ao êmbolo dispensador. Em uma forma de realização preferida, a distância entre os recipientes de reagente sobre a tira de reagente ficaria a uma igual distância (por exemplo, 0,5 polegadas (1,27 cm), de modo que uma vez a posição de residência seja reconhecida pelo microprocessador, ele saberá onde o primeiro recipiente de reagente está sobre a tira de reagente e a tira de reagente será movida para a posição do dispensador de reagente, onde o reagente será dispensado sobre o espécime biológico da lâmina de microscópio. A tira de reagente será então movida 0,5 polegadas (1,27 cm) (ou outra predeterminada distância igual) para o próximo recipiente de reagente (ou para um orifício de enxágüe entre eles), após o apropriado tempo. O tipo de protocolo, tempos de tratamento por reagente, etapas de enxágüe, secagem, mistura de ar etc. são todos estimados na ocasião em que o caractere óptico é varrido e reconhecido pelo microprocessador.

Nesta forma de realização, é preferivelmente predeterminado que todos os reagentes sobre a tira de reagente tenham que ser dispensados sobre a lâmina dentro de uma dada duração de tempo e condições de processamento. O microprocessador moverá e ativará todos os dispositivos de processamento independentemente para todos os compartimentos de reação, até a última etapa do protocolo estar completada.

A distância entre os recipientes de reagente da tira de reagente pode ser qualquer distância que o microprocessador possa identificar (por exemplo, de 0,001 pol. (0,00254 cm) a cerca de 4,00 pol. (10,16 cm) ou mais). A identificação de um recipiente de reagente individual pelo microprocessador pode ser por distâncias consistentes após volta à origem inicial, cada recipiente de reagente opcionalmente tendo seu próprio dispositivo de orientação à origem sobre a tira de reagente ou sobre o dispositivo de suporte de tira reagente, reconhecimento óptico e qualquer outro tipo conhecido na técnica para reconhecer múltiplos recipientes por um microprocessador.

Em uma outra forma de realização, a tira ou recipientes de reagente ou seus módulos de reagente poderiam ter símbolos numéricos (números) ou outros símbolos (caracteres) impressos neles, que o usuário simplesmente introduziria dentro do microprocessador para identificação dos recipientes de reagente da tira de reagente e protocolos associados com eles.

Em uma forma de realização preferida, a tira de reagente da presente invenção é um dispositivo de uso único, que é descartada após seu uso, em que a tira de reagente de uso único é completa ou parcialmente preparada pelo usuário (por exemplo, o usuário enche um ou mais recipientes da tira de reagente) ou é completamente preparada por um fabricante.

Alternativamente, a tira de reagente poderia ser reutilizável, em que recipientes individuais poderiam ser reenchidos por um usuário ou fabricante ou novos recipientes ou módulos de reagente poderiam ser adicionados a uma tira de reagente usada ou poderiam substituir recipientes ou módulos de reagente usados de uma tira de reagente usada. Além disso, um único recipiente usado poderia ainda ter diversas "doses" ou "aplicações" de reagente, em que seria vantajoso para o usuário trocar uma tira de reagente usada por uma diferente tira de reagente do recipiente usado. Além disso, como descrito em outra parte aqui, a tira de reagente poderia ser reconfigurável, de modo que um ou mais recipientes ou módulos de reagente poderiam ser substituídos, rearranjados ou trocados por um ou mais recipientes alternativos.

Formas de Realização das Figuras 23-38B

E mostrado nas Figs. 23-38B um módulo de reação 110, tendo um compartimento de reação cilíndrico 112, um elemento de suporte de lâmina 114 e um dispositivo de suporte de tira reagente 116, como anteriormente descrito. Preferivelmente, o compartimento de reação 112 tem um diâmetro interno de 2 - 5 cm e, mais preferivelmente, 27 mm e tem uma espessura de parede de 2 mm a 3 mm. O comprimento do elemento de suporte de lâmina 114 é preferivelmente de 10 - 20 cm e, mais preferivelmente, 12 cm. O comprimento do compartimento de reação 112 é preferivelmente de 15 -30cm e, mais preferivelmente, 20 cm. O dispositivo de suporte de tira de reagente 116 é operativamente conectado (por exemplo, fixado ao topo) do compartimento de reação 112, via um conduto de reagente 122, que abre-se para o espaço interno 120 do compartimento de reação 112. Há um orifício porta de injetor 124 no dispositivo de suporte de tira de reagente 116, que é adaptado para receber o bico injetor de um recipiente de reagente de uma tira de reagente. O dispositivo de suporte de tira de reagente 116 tem uma extremidade frontal 126 e uma extremidade traseira 128. O dispositivo de suporte de tira de reagente 116 funciona para receber, suportar e ejetar uma tira de reagente da presente invenção. O elemento de suporte de lâmina 114 tem uma base 134 que pode reciprocamente ser movida para dentro e para fora do compartimento de reação 112. O elemento de suporte de lâmina 114 compreende um elemento de aquecimento 136, sobre o qual uma lâmina 140 é colocada. O elemento de suporte de lâmina 114 pode ter um cabo 142, que possibilita a um técnico mais facilmente inserir e retirar a base 134 do compartimento de reação 112. O elemento de suporte de lâmina 114 preferivelmente compreende ainda um meio de vedação que, na presente forma de realização, é um anel-O dianteiro 144 e um anel-O traseiro 145, para fornecer uma selagem resistente a pressão da base 134 contra a superfície interna 118 do compartimento de reação 112. O elemento de suporte de lâmina pode ser construído de materiais que incluem mas não são limitados vidro, quartzo, Pyrex®, borossilicato, aço, metais, alumínio, compósitos, polímeros tais como policarbonato e plásticos ou combinações deles.

O elemento de suporte de lâmina 114 preferivelmente também tem um orifício de drenagem 146 para receber e drenar reagentes e líquidos refugo do compartimento de reação 112. O elemento de suporte de lâmina 114 preferivelmente tem ainda um ou mais dutos de esfriamento 148, que são operativamente conectados a um espaço de esfriamento de sub-aquecimento 148a embaixo do elemento de aquecimento 136, e uma ou mais saídas de duto de esfriamento 148b, que evacua o ar ou líquido de esfriamento do espaço de esfriamento de elemento de sub-aquecimento 148a. O elemento de suporte de lâmina 114, preferivelmente compreende ainda um primeiro duto de ar/pressão 150 e um segundo duto de ar/pressão 152 para regulação da pressão dentro do compartimento de reação 112, como examinado em outra parte aqui. O duto 150 e/ou duto 152 ou um duto adicional (não mostrado) podem ser usados para liberar e/ou regular a pressão do compartimento de reação 112. O elemento de suporte de lâmina 114, como citado acima, compreende um elemento de aquecimento 136, sobre o qual o lâmina de microscópio 140 é colocada para aplicação de reagentes sobre ela. O módulo de reagente 110 pode compreender ainda um par térmico ou outro dispositivo de medição de temperatura, para medir as temperaturas dos componentes de lâmina ou outros dentro dele. Antes da operação, o elemento de suporte de lâmina 114 é inserido por um movimento deslizante dentro do espaço interno 120 do compartimento de reação 112 (vide Fig. 24A). Também antes da operação, a tira de reagente 10 (ou qualquer outra tira de reagente descrita pó capacitada aqui) é inserida dentro do dispositivo de suporte de tira de reagente 116, por exemplo, inserindo-se a primeira extremidade 22 da tira de reagente 10 dentro da extremidade dianteira de 126 do dispositivo de suporte de tira de reagente 116, em que, durante a operação, a tira de reagente 10 é movida em uma direção para a extremidade traseira 128 do dispositivo de suporte de tira de reagente 116. A tira de reagente 10 pode ser avançada manual ou automaticamente via um dispositivo de puxar ou empurrar, incluindo rolos ou uma esteira que incrementalmente avança a tira de reagente 10, como instruído pelo microprocessador. O módulo de reagente 110 compreende ainda um conduto reagente 122 no compartimento de reação 112 para permitir a passagem de um reagente da tira de reagente 10 para dentro do compartimento de reação 112. O módulo de reagente 110 também compreende um êmbolo de dispensação 154 (também referido aqui como um elemento de dispensação), que tem um canal de dispensação 156 nele, para permitir a passagem de outro reagente ou solução através dele, preferivelmente de uma fonte remota. O dispositivo de suporte de tira de reagente 116 preferivelmente tem um orifício de porta de injetor 124, para receber pelo menos uma parte de um bico injetor 46 de um recipiente de reagente 14 da tira de reagente 10, durante seu uso.

O elemento de suporte de lâmina 214 pode ainda opcionalmente compreender um ou mais condutos de drenagem e/ou suprimento, que conduz à cavidade de base 252 para suprir a cavidade de base 252 com um líquido ou outra solução e para drenar líquido usado da cavidade de base 252 após seu uso (por exemplo, por aspiração). Outros orifícios, condutos e dutos de suprimento podem suprir os compartimentos de reação da presente invenção como descrito na anteriormente na U.S. 6.534.008 e 6.855.292.

Durante a operação, como mostrado nas Figs. 24A-24B e 29, uma tira de reagente 10 (ou qualquer outra tira de reagente descrita ou habilitada em outra parte aqui) é inserida dentro do dispositivo de suporte de tira de reagente 116, como anteriormente descrito, e um recipiente de reagente 14 é posicionado sobre o orifício de porta de injetor 124. O êmbolo de dispensação 154 é estendido para baixo para dentro do espaço interno 42 do recipiente de reagente 14, em que ele encaixa no pistão 44, forçando o pistão 44 para baixo e provocando ejeção do reagente 48 através do bico injetor 46, através do conduto de regente 122 e fornecendo o reagente 158 depositado sobre a lâmina 140. Quando o êmbolo de dispensação 154 força o pistão 44 para baixo, uma vedação é mantida dentro do recipiente de reagente 14 e em uma forma de realização preferida possibilita a pressurização do compartimento de reação 112. O reagente 158 pode ser misturado na lâmina de microscópio 140 suprindo-se surtos de ar 162 através do primeiro duto de ar/pressão 150 e do segundo duto de ar/pressão 152, como examinado mais detalhadamente abaixo. Em uma subseqüente etapa, o êmbolo de dispensação 154 pode ser retirado (Fig. 25A-B) e a base 134 do elemento de suporte de lâmina 114 inclinada dentro do compartimento de reação 112, para permitir que o reagente drene da lâmina 140, formando uma drenagem de reagente 160, que é coletada dentro do orifício de drenagem 146, removido do compartimento de reação 112 e coletado em um recipiente de armazenagem de refugo (não mostrado). Em uma etapa posterior (Figs. 26A-B) a lâmina 140 é retornada para uma posição vertical, horizontal e a tira de reagente 10 é avançada até a abertura de orifício de enxágüe 32 ser posicionada acima do orifício de porta de injetor 124, em que a solução de enxágüe 163 é suprida de um reservatório de solução de enxágüe (não mostrado). Além disso, ar ou líquido podem ser supridos através do canal de dispensação 156 do êmbolo de dispensação 154, para causar mistura do reagente 158 ou para remover o reagente 158 da lâmina, ou para aumentar o enxágüe do reagente 158 ou solução de enxágüe 163 da lâmina 140 (por exemplo, vide Figs. 27A-B). Finalmente, como mostrado na Fig. 28, após todos os reagentes da tira de reagente 10 terem sido dispensados, a parte do elemento de suporte de lâmina 114, que contém a lâmina 140, é retirada do compartimento de reação 112, em que a lâmina 140 é então removida do elemento de suporte de lâmina 114. Observe-se que as Figs. 29 - 30 são versões ampliadas das Figs. 24A e 26A, respectivamente e são providas aqui para a finalidade de mais facilmente mostrar as etapas ali.

As Figs. 31A-32B fornecem uma descrição mais detalhada de como os surtos de ar 162 supridos formam o primeiro duto de ar/pressão 150 e o segundo duto de ar/pressão 152 pode ser usado para provocar a mistura do reagente 158 sobre a lâmina 140. Preferivelmente, o primeiro duto de ar/pressão 150 e o segundo duto de ar/pressão 152 são operados alternadamente para prover rajadas de ar 162 em direções no sentido e contrárias ao sentido de um relógio, para agitar o reagente 158. O primeiro duto de ar/pressão 150 e o segundo duto de ar/pressão 152 podem ser usados simultaneamente para pressurizar o compartimento de reação 112. A qualquer tempo desejado, o elemento de aquecimento 164 pode ser usado para aquecer a lâmina 140 e o reagente 158 sobre ela, como examinado com maiores detalhes em outra parte aqui. Como mostrado nas Figs. 33 - 35B, após a lâmina 140 ser aquecida, ela pode ser rapidamente esfriada direcionando-se ar ou líquido via os dutos de esfriamento 148 para dentro dos espaços de esfriamento do elemento de aquecimento 148a, que são localizados embaixo do elemento de aquecimento 164, que em uma forma de realização é localizado embaixo e é usado para aquecer uma placa quente 166, sobre a qual a lâmina 140 é posicionada. O ar ou líquido usados para esfriar podem então passar através das saídas do duto de esfriamento 148b. Em outra forma de realização, mostrada nas Figs. 36 - 38B, um espaço de esfriamento de sub- elemento de aquecimento 148c é similar ao espaço de esfriamento do elemento de sub-aquecimento 148a, exceto que o ar ou líquido de esfriamento, que passa através do espaço de esfriamento do elemento de sub- aquecimento 148c, é suprido via um dos dutos de esfriamento 148 e deixa o elemento de suporte de lâmina 114 via o duto de esfriamento externo 148.

Outras formas de realização de tiras de reagente das Figs. 23- 38B, que têm características similares àquelas das Figs. 39 - 78, tendo várias combinações de furos de ventilação, fendas de ventilação e janelas de rápido esfriamento, podem prontamente ser imaginadas, particularmente com referência a tamanhos, formatos e locais dos furos de ventilação, fendas de ventilação e janelas de rápido esfriamento.

Cada recipiente de reagente individual da presente invenção, por exemplo, recipientes de reagente 14, 78 e 94, pode ser um recipiente cujo espaço interno foi evacuado para reter um vácuo. Para encher o recipiente de reagente, uma fonte de reagente pode ser contatada com um orifício de enchimento do recipiente de reagente (não mostrado), em que o vácuo então puxa o reagente para dentro do espaço interno do recipiente de reagente. O volume d recipiente de reagente limita a quantidade de reagente puxada para dentro do recipiente de reagente da fonte de reagente.

Alternativamente, o recipiente de reagente pode ter um êmbolo ou pistão presente em uma posição abaixo (dispensação). O orifício de dispensação (por exemplo, o bico injetor) do recipiente de reagente é conectado a uma fonte de reagente. O reagente é puxado para dentro do recipiente de reagente movendo-se o êmbolo ou pistão dentro do recipiente de reagente para cima. Uma vez o êmbolo ou pistão tenha alcançado sua posição mais elevada, o recipiente de reagente individual é enchido. O enchimento de um recipiente de reagente poderia ser tão simples quanto um método de encher uma seringa comum com um reagente e afixar a saída da seringa no fundo do recipiente de reagente individual e empurrar o reagente para dentro do recipiente de reagente, assim movendo o êmbolo ou pistão do recipiente de reagente para cima e enchendo o recipiente de reagente. O fundo do bico injetor de cada recipiente de reagente seria então selado ou tampado com sua própria tampa ou selagem individual. A pluralidade de tampas ou selagens de uma tira de reagente podem ser removíveis juntas. Esta ligação é útil em uma forma de realização para remover as tampas em um movimento para expor os bicos injetores antes de colocar a tira de reagente sobre o dispositivo de suporte de tira de reagente. Em uma forma de realização alternativa da selagem dos bicos injetores (isto é, o lado de dispensação da tira de reagente) uma cobertura feita de folha metálica, plástico ou outro meio de cobertura pode ser usada que pode ser descascada antes do uso, para expor os bicos injetores.

Em uma forma de realização preferida, os bicos injetores, tiras de reagente e o êmbolo ou pistão dispensador ou outros dutos conduzindo ao módulo de reação podem dispensar reagentes utilizando uma pressão que é maior do que a pressão interna do compartimento de reação para dentro do qual o reagente é dispensado. Por exemplo, se um compartimento de reação for pressurizado a 30 psig (308,1 kPa), um reagente tem que ser dispensado dentro do compartimento de reação com força excedendo 30 psig (308,1 kPa) para superar a pressão do compartimento de reação. De outro modo, o compartimento de reação teria que ser despressurizado para adicionar o reagente. Tal etapa de despressurização provavelmente seria nociva porque a despressurização faria com que o reagente sobre a lâmina ebulisse para longe, devido à extrema evaporação em elevada temperatura. A presente invenção pode dispensar seus reagentes sob pressão na faixa de acima de 0 a 350 psig (101,3 kPa - 2514 kPa), preferivelmente na faixa de 0,5 - 100 psig (104,8 kPa - 790,6 kPa) e, mais preferivelmente, 5-50 psig (135,8 kPa - 446,0 kPa) e o compartimento de reação pode ser pressurizado a estes níveis também.

As tiras de reagente da presente invenção são usadas para fornecer reagentes sobre lâminas de microscópio posicionadas em, ou antes de serem posicionadas em, um compartimento de reação pressurizável do aparelho recuperável por antígeno da presente invenção, como mostrado, por exemplo, nas Figs.23 - 38B.

Como mostrado nas Figs. 23 - 38B, cada compartimento de reação do aparelho preferivelmente compreende um cilindro oco, preferivelmente construído de uma resina ou polímero termoplástico (incluindo mas não limitado a policarbonato ou qualquer outro material polimérico capaz de suportar elevadas temperaturas e pressões), vidro, Pyrex®, quartzo, outros materiais cristalinos e metais e ligas metálicas. A natureza tubular do compartimento de reação é preferida porque as pressões elevadas criadas dentro do compartimento de reação durante seu uso são mais uniformemente distribuídas ali.

A selagem entre o elemento de suporte de lâmina e o compartimento de reação pode ser formada usando-se anéis-O, como mostrado nas Figuras 23-38B ou pode ser formada utilizando-se um anel-0 inflável, uma vedação, ou uma vedação inflável, dependendo do formato das superfícies de união. A selagem pode ser construída de plástico, polímero, termoplástico, resina, cerâmica, borracha, vidro metálico, ou compósito, por exemplo. Em uma forma de realização preferida, as superfícies de união do elemento de suporte de lâmina e do compartimento de reação são de uma superfície de selagem esmerilada ou polida de baixa tolerância. Estas superfícies de selagem, quando unidas entre si, eliminam a necessidade de selagem elevada acima da superfície de união. Nesta forma de realização, a superfície de união esmerilada ou polida apenas, quando unida entre si, produz uma vedação de microscópio com uma grande área de superfície para selar o compartimento de reação e manter uma pressão elevada ali (acima da atmosférica), mesmo sob condições de alta temperatura acima de 100 graus centígrados. O material do elemento de suporte de lâmina e o compartimento de reação tubular podem caracterizar uma selagem esmerilada ou polida de muito elevada tolerância nas superfícies de união. Na forma de realização preferida, o elemento de suporte de lâmina e o compartimento de reação são feitos de um material de vidro altamente temperado como Pyrex® ou qualquer material que possa produzir uma superfície de união esmerilada ou polida, para formar uma selagem que mantenha uma pressão acima da pressão atmosférica. A superfície de vidro esmerilada ou superfície polida do elemento de suporte de lâmina contra a superfície esmerilada ou polida do compartimento de reação produz uma selagem hermética a ar e hermética a pressão, quando as duas superfícies esmeriladas ou polidas são unidas entre si, em que não há selagem substituível ou elevada separada para encher o vazio das superfícies de união. Esta forma de realização da presente invenção elimina a necessidade de selagens elevadas (por exemplo, anéis-O), assim reduzindo o custo de manutenção para a substituição de componentes separados selagem, tais como anéis-O e aumenta a simplicidade e eficiência e sela o compartimento de reação mesmo sob pressões acima dos níveis atmosféricos (por exemplo, acima de 14,7 psig (101,325 kPa), isto é, acima de 0 psig (101.325 kPa)) e condições de temperatura elevada acima de 100°C. O aparelho da presente invenção preferivelmente compreende uma pluralidade de módulos de reação, tais como o módulo de reação 110 mostrado na Figura 23. Cada módulo de reação 110 compreende um compartimento de reação tubular 112, um elemento de suporte de lâmina 114 e um dispositivo de suporte de tira de reagente 116. O compartimento de reação tem uma superfície interna 118 e um espaço interno 120, dentro dos quais o elemento de suporte de lâmina 114 pode ser para tratar uma amostra biológica em uma lâmina de microscópio 140 sobre ele. O elemento de suporte de lâmina 114 é capaz de deslizar para dentro do para fora do compartimento de reação 112 de uma maneira similar a um pistão dentro de um cilindro. Quando o elemento de suporte de lâmina 114 é retirado do compartimento de reação 112, uma lâmina 140 pode ser colocada nele ou removida dele. O elemento de suporte de lâmina 114 pode ser inserido dentro do compartimento de reação 112 para tratamento do material sobre a lâmina 140, como descrito em outra parte aqui. Como mostrado abaixo, o elemento de suporte de lâmina 114 pode ser virado (de ponta) dentro do compartimento de reação 112, para facilitar a remoção de reagentes ou fluidos da lâmina 140, após a lâmina 140 ter sido tratada, como mostrado nas figuras (por exemplo, vide Fig. 25B). Os reagentes ou fluidos sobre a lâmina 140 podem ser misturados por circulação de ar, como mostrado nas Figuras 31A-32B, por exemplo. Após aquecer, a lâmina 140 pode ser esfriada por circulação de ar ou fluido sob ela, plataforma de recipiente, como mostrado nas Figuras 3 4 A- 38B. Em outra forma de realização, a lâmina 140 poderia ser esfriada utilizando-se um líquido de circulação, tal como um reagente que se torne pré-aquecido ao passar sob a lâmina aquecida 140, assim transferindo calor para o regente circulante, que poderia então ser dispensado sobre a lâmina 140.

O compartimento de reação 112 pode ser construído de qualquer material conhecido na técnica de dispositivos compatíveis de altas temperatura e pressão. Estes materiais também incluem mas não são limitados a plástico, compósitos, cerâmicas, metais e metais revestidos. O instrumento pode ser revestido para resistência à porosidade, para aumentar as propriedades hidrofóbicas e hidrofílicas, para facilidade de limpeza, resistência química e resistência a mancha. Estes revestimentos poderiam ser, por exemplo, Teflon®, fluoropolímeros, qualquer outro revestimento conhecido que concedesse estas propriedades desejáveis a todas as superfícies do compartimento de reação 112 e estruturas circundantes, com um diferente revestimento estando presente em diferentes partes do aparelho. Em uma forma de realização, por exemplo, a superfície interna 118 do compartimento de reação 112 é revestida com um revestimento hidrofóbico, químico e resistente a mancha, para auxiliar na drenagem dos reagentes condensados sobre a superfície interna 118 do compartimento de reação 112 e facilidade de remoção de reagentes dela.

O elemento de suporte de lâmina 114 do módulo de reação 110 preferivelmente compreende um elemento de aquecimento 136 e uma placa quente (que podem ser o mesmo) e que podem incluir clipes guia 138 ou cavilhas ou elementos para localizar e prender a lâmina 140 sobre eles. Os topos dos clipes 138 podem ser posicionados para ficar abaixo de uma superfície superior da lâmina de microscópio 140, a fim de evitar que o reagente sobre a lâmina 140 seja absorvido pelos clipes 138 por ação capilar.

Em uma forma de realização particularmente preferida, subjacente ao elemento de aquecimento 136 há uma ou mais rebaixos (espaços de esfriamento do elemento de sub-aquecimento 148a), que são conectados via dutos de esfriamento 148 a uma fonte de suprimento de gás ou líquido, para rapidamente esfriar o elemento de aquecimento 136, desse modo rapidamente esfriando a lâmina de microscópio 140 e o reagente sobre ela.

O elemento de suporte de lâmina 114 e o compartimento de reação 112 podem ser construídos de qualquer material adequado para uso sob condições pressurizadas e resistente a corrosão por reagentes de laboratório, incluindo mas não limitado a aço inoxidável, metais, plásticos (transparentes ou opacos), polímeros (por exemplo, policarboneto), vidro temperado e Pyrex®.

A contenção de refugo e reagentes usados do módulo de reação 110 será agora brevemente examinada e será discutida com maiores detalhes abaixo.

Em uma forma de realização preferida, o aparelho da presente invenção tem um recipiente de refugo (não mostrado), que pode ser conectado a todos os módulos de reação 110 por uma montagem (não mostrada) que pode ser unida ao recipiente de refugo (que preferivelmente são descartáveis ou não-reutilizáveis) por uma junta rompível, presente no recipiente de refugo. Esta montagem sobre o recipiente de refugo encaixa sob pressão junto com a principal montagem do instrumento. Esta fixação é presa e não vaza sob pressão. Quando separado, esta montagem sobre o recipiente de refugo parcialmente "rompe-se" e deixa atrás sobre o recipiente de refugo uma selagem não-removível, estanque a ar, a prova de vazamentos, a prova de adulteração. A peça residual que foi separada do recipiente de refugo é removida pelo técnico e então está pronta para ser refixada a um novo recipiente de refugo. O recipiente de refugo está agora pronto para ser depositado em sua totalidade pelo pessoal de refugo médico. Não é necessária outra selagem. A selagem a prova de adulteração da montagem separada protege o pessoal de refugo médico de entrar em contato com qualquer refugo dentro do recipiente de refugo selado.

Em uma forma de realização alternativa, a montagem separável sobre o recipiente de refugo pode não ter qualquer pedaço residual sobre a montagem do instrumento principal, porém preferivelmente "rompe" ou "desloca-se" para longe do pedaço separável sobre o recipiente de refugo descartável limpamente. Em uma forma de realização alternativa o instrumento poderia ter dois ou mais recipientes de refugo, em que é possível remover um recipiente de refugo completo, enquanto retendo um ou mais dos outros recipiente de refugo fixados para receber resíduos dos módulos de reação de trabalho. O microprocessador poderia alertar o técnico de que um recipiente de refugo está precisando substituição por um sensor localizado no recipiente de refugo. Se o técnico escolher ignorar o alerta do instrumento, ele poderia desviar o refugo para outro recipiente de refugo, até o tempo ser conveniente para substituir o recipiente de refugo cheio. Uma vez que o dispositivo de processamento opera cada módulo de reação 110 independentemente, os recipientes de refugo são instalados para receber refugo de qualquer um dos módulos de reação de trabalho 110, eliminando a necessidade de parar o instrumento para mudar qualquer recipiente de refugo cheio. Os recipiente de refugo podem ser pendurados em uma série ou em paralelo, para manter pelo menos um recipiente de refugo ativo, enquanto qualquer outro recipiente de refugo está sendo trocado. O microprocessador fica em comunicação direta com todos os recipientes de refugo e paralisará as rotas de refugo que estão indo para uma montagem que foi separada e está no processo de substituição.

Em uma forma de realização alternativa, o instrumento poderia ter um recipiente de refugo principal que, quando cheio, alertaria o técnico para começar o procedimento de recuperação de refugo. O recipiente de refugo principal poderia ser drenado para um recipiente de refugo secundário a ser descartado.

O recipiente de refugo pode ser carregado com carvão vegetal ativado ou outros produtos químicos neutralizantes, para auxiliar na descontaminação. O recipiente de refugo pode ter uma ventilação que tem um filtro neutralizante para liberar o acúmulo de vapores pressurizados.

Voltando novamente para as figuras, será mostrado com maiores detalhes como o módulo de reação 110 (e outros aqui descritos) opera.

Como explicado acima, a seqüência de operação da tira de reagente 10 com o módulo de reação 110 é genericamente mostrada nas Figuras 23 - 38B.

A lâmina 140 é carregada sobre o elemento de aquecimento 136 ou a placa quente 166 do elemento de suporte de lâmina 114 e posicionada por clipes de localização 138 ou cavilhas guias ou outros elementos de orientação, para verificar a localização apropriada das lâmina de microscópio 140 sobre o elemento de suporte de lâmina 114. O elemento de suporte de lâmina 114 e um lâmina 140 são então movidos para dentro do compartimento de reação 112, em que são selados via os anéis-O 144 e 145.

A tira de reagente 10 é colocada sobre o dispositivo de suporte de tira de dispensação de reagente 116. O protocolo é introduzido automática ou manualmente (descrito em outra parte aqui) e o instrumento com a pluralidade de módulos de reação 110 é instruído a começar. Dependendo do protocolo, o elemento de aquecimento 136 pode começar a aquecer a lâmina 140 ou o protocolo instrui a dispensação de um reagente da tira de reagente 10 ou de outra fonte, via o êmbolo dispensador 154.

Se um recipiente de reagente individual 14, localizado sobre a tira de reagente 10, for selecionado, aquele recipiente de reagente particular 14 será posicionado sobre o orifício da porta de injetor 124 e o êmbolo dispensador 154 e comprime o pistão 44 dentro do recipiente de reagente 14, para expelir o reagente 48 dele sobre a lâmina de microscópio 140. A tira de reagente 10 seria então movida para posicionar a abertura de orifício de enxágüe 76 dentro da tira de reagente 10 (por exemplo, genericamente localizada entre os recipientes de reagente adjacentes 14) sobre o orifício de orifício de injetor 124, em que o êmbolo dispensador 154 seria abaixado para vedar o orifício de porta injetora 124 ou ar ou reagente adicional poderia ser injetado dentro do compartimento de reação 112. Uma vez o reagente 158, que foi aplicado à lâmina 140, é removido da lâmina 140 pela inclinação da lâmina 140 ou por enxágüe, a lâmina 140 pode ser ainda enxaguada com um reagente ou tratada com ar pressurizado do êmbolo de dispensação 154.

Como descrito nas Patentes U.S. Nos. 6.534.008 e 6.855.292, o aparelho da presente invenção, usado para tratar a lâmina de microscópio, compreende uma pluralidade de módulos de reação 110, cada um tendo um compartimento de reação 112 que é incluível em um envoltório para reduzir a perda de calor evaporativa pelos vapores sendo contidos dentro do compartimento de reação 112 durante as condições de aquecimento.

Como examinado em outra parte aqui, os compartimentos de reação dos módulos de reação da presente invenção podem ser pressurizados (positiva ou negativamente) durante o aquecimento do compartimento de reação ou pressurizados sem aquecimento, ou pré-pressurizados (positiva ou negativamente) antes da lâmina de microscópio ou outro componente do módulo de reação ser aquecido. O compartimento de reação pode ser pré- pressurizado, então aquecido, então repressurizado para manter um nível de pressão preferido dentro do compartimento de reação. O compartimento de reação pode ser pressurizado por vapor, gás ou vapor produzidos por um reagente, solução ou líquido dentro do compartimento de reação ou por ar, vapor, gases inertes, N2 ou qualquer outro gás tipicamente usado para pressurizar vasos, que é tipicamente provido por uma fonte externa e é suprido via dutos ou condutos de ar/pressão ou linhas de vácuo para dentro do compartimento de reação. Formas de reação das Figuras 39 - 78

Várias formas de realização das tiras de reagente, que podem ser usadas com a presente invenção e que podem também ser usadas no aparelho das Patente U.S. No. 6.534.008 e 6.855.292, são mostradas nas Figuras 39- 78. Estas tiras de reagente têm vários furos, aberturas, fendas e janelas para controlar a ventilação de vapores produzidos dentro dos compartimentos de reação 112, como descrito abaixo.

Formas de realização alternativas das tiras de reagente que podem ser usadas na presente invenção são mostradas nas Figs. 39 - 78 aqui e são similares a formas de realização de tiras de reagente usadas e descritas nas Patentes U.S. Nos. 6.534.008 e 6.855.292 e U.S. Nos. de Série 10/245.035 e 10/943.386.

Mostrado nas Figs. 39 - 42 há uma tira de reagente 170, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo dispensador, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170 tem um base 172, uma superfície superior 171, uma superfície inferior 173, uma pluralidade de cápsulas reagentes 174, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176 sob ela, e uma pluralidade de furos de ventilação 178 posicionados entre um par das cápsulas de reagente 174. Os furos de ventilação 178 permitem que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo de pressão excessivo dentro do compartimento de reação.

Mostrado nas Figs. 43 - 46 há outra tira de reagente 170a, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170a tem uma base 172a, uma superfície superior 171a, uma superfície inferior 173 a, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174a, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176a sob ela e uma pluralidade de furos de ventilação 178a posicionados entre adjacentes das cápsulas de reagente 174a. Os furos de ventilação 178a permitem que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo excessivo de pressão dentro do compartimento de reação.

Mostrado nas Figs. 47-50 está outra tira de reagente 170b, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170 tem uma base 172b, uma superfície superior 171b, uma superfície inferior 173b, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174b, cada uma tendo sob ela um orifício de dispensação de reagente 176b e uma pluralidade de furos de ventilação 178 b posicionados entre próximo de uma extremidade da tira de reagente 170b. Os furos de ventilação 178b permitem que excesso de vapor escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo de pressão excessiva dentro do compartimento de reação.

Outra tira de reagente 170c é mostrada nas Figs. 51 - 54, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. Uma tira de reagente 170c tem uma base 172c uma superfície superior 171c, uma superfície inferior 173c, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174c, cada uma tendo sobe ela um orifício de dispensação de reagente 176c, e uma fenda de ventilação 180c, posicionada entre um par das cápsulas de reagente 174c. A fenda de ventilação 180c permite que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo de pressão excessiva dentro do compartimento de reação.

Outra tira de reagente 170 é mostrada nas Figs. 55 - 58, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. Uma tira de reagente 170d tem um base 172d, uma superfície superior 171d, uma superfície inferior 173d, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174d, cada uma tendo sob ela um orifício de dispensação de reagente 176d, uma fenda de ventilação 180d e uma janela de rápido esfriamento 182d, posicionada entre um par de cápsulas de reagente 174d. A fenda de ventilação 180d permite que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo de pressão excessiva dentro do compartimento de reação e a janela de esfriamento rápido 182d aumentando a velocidade em que a lâmina de microscópio e o compartimento de reação esfriam após uma etapa de aquecimento.

Mostrado nas Figs. 59 - 62 há outra tira de reagente 170e, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170e tem uma base 172e, uma superfície superior 171e, uma superfície inferior 173e, uma pluralidade de cápsulas reagentes 174e, cada uma tendo sob ela um orifício de dispensação de reagente 176e, e uma fenda de ventilação 180e e uma janela de rápido esfriamento 182e. A fenda de ventilação 180e permite que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando excessivo acúmulo de pressão dentro do compartimento de reação e a janela de esfriamento rápido 182e aumenta a taxa em que a lâmina de microscópio e o compartimento de reação esfriam após uma etapa de aquecimento.

Mostrado nas Figs. 63 - 66 há outra tira de reagente 170f, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170f tem uma base 172f, uma superfície superior 17lf, uma superfície inferior 173f, uma pluralidade de cápsulas reagentes 174f, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176f sob ela e uma fenda de ventilação 180f posicionada no centro da base 172f, entre adjacentes das cápsulas de reagente 174f. A fenda de ventilação 180f permite que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando excessivo acúmulo de pressão dentro do compartimento de reação.

Mostrada nas Figs. 67 - 70 há outra tira de reagente 170g, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170g tem uma base 172b, uma superfície superior 171g, uma superfície inferior 173g, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174g, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176g sob ela, e uma pluralidade de furos de ventilação 178g, posicionados adjacentes a um par das cápsulas de reagente 174. Os furos de ventilação 178 g permitem que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando excessivo acúmulo de pressão dentro do compartimento de reação. A tira de reagente 170g compreende ainda uma janela de esfriamento rápido 182 g para acelerar o esfriamento da lâmina de microscópio e o compartimento de reação.

Outra tira de reagente 170h é mostrada nas Figs. 71 - 74, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um êmbolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170h tem uma base 172h, uma superfície superior 171h, uma superfície inferior 173h, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174h, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176h sobre ela, uma fenda de ventilação 180h e uma janela de esfriamento rápido 182h. A fenda de ventilação 180h permite que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando excessivo acúmulo de pressão dentro do compartimento de reação e a janela de esfriamento rápido 182h aumenta a taxa em que a lâmina de microscópio e compartimento de reação esfriam após uma etapa de aquecimento.

E mostrada nas Figs. 75 - 78 outra tira de reagente 170i, que pode ser usada em uma forma de realização alternativa do aparelho presentemente descrito, que tem um embolo de dispensação, que pode esmagar uma cápsula contendo um reagente. A tira de reagente 170i tem uma base 172i, uma superfície superior 171i, uma superfície inferior 173i, uma pluralidade de cápsulas de reagente 174i, cada uma tendo um orifício de dispensação de reagente 176i sobre ela, uma pluralidade de orifícios de ventilação 178i e uma janela de esfriamento rápido 182i. Os orifícios de ventilação 178i permitem que vapor em excesso escape do compartimento de reação, desse modo evitando acúmulo de pressão excessiva dentro do compartimento de reação e a janela de esfriamento rápido 182i aumenta a taxa em que a lâmina de microscópio e o compartimento de reação esfriam após a etapa de aquecimento.

As estruturas de ventilação das tiras de reagente das Figs. 39 - 78 são projetadas para permitir que suficiente calor seja contido dentro do compartimento de reação 112 controlando-se a quantidade de perda de vapor do reagente para produzir e manter as condições de ebulição dos reagentes. Sabe-se que os reagentes aquosos ebulirão em diferentes temperaturas em relação à quantidade de soluto contido na solução. Sabe-se também que, quando pequenas quantidades ebulindo de líquidos aquosos (por exemplo, 500 microlitros a 100 ml) a solução alcançará um ponto de ebulição particular, em que sua fase líquida passará para sua fase gasosa. Esta progressão deve ser controlada para reduzir a quantidade de perda de calor evaporativo do compartimento de reação.

Um exemplo de porque a capacidade de controlar a liberação dos vapores evaporativos é importante para manter as condições de ebulição é demonstrada colocando-se uma câmara de topo aberto próximo de uma lâmina. Durante o aquecimento a condições de ebulição, pequenas bolhas gasosas formar-se-ão na superfície da lâmina, onde o reagente é mais quente. Estas bolhas, quando elas alcançam um tamanho que não possa mais grudar na superfície da lâmina de microscópio, separam-se e elevam-se até as camadas superiores do refrigerante do reagente aquecido. As bolhas então estouram na superfície do reagente para liberar a fase gasosa para a atmosfera. Esta liberação de energia esfria a camada superior do reagente. Esta propriedade permite que somente a camada inferior alcance o ponto de ebulição e o resto do reagente somente alcança temperaturas abaixo do ponto de ebulição do reagente, devido à perda de calor evaporativo, e subseqüente redução da temperatura líquida do reagente. O reagente perde lentamente seu volume para a evaporação e nunca alcança uma condição de ebulição vigorosa constante, necessária para a maioria dos protocolos de recuperação de antígeno.

Ao contrário, como ocorre durante o processo da presente invenção, o compartimento de reação é selado ou substancialmente selado, de modo que o reagente rapidamente entrará em equilíbrio em um estado de ebulição por todas as camadas de reagente e manterá uma condição de ebulição constante vigorosa e acumulará pressão dentro do compartimento de reação fechado. Se não regulada, a pressão poderia exceder níveis de segurança e o compartimento de reação poderia eventualmente falhar sob pressão. Para se terem os benefícios de um efeito de ebulição vigoroso constante do reagente da lâmina, a perda de calor evaporativo deve ser regulada envolvendo-se o compartimento de reação suficientemente, a fim de liberar a fase gasosa em uma taxa que mantenha uma condição de ebulição vigorosa.

As tiras de reagente mostradas nas Figuras 39-78 compreendem uma pluralidade de cápsulas dimensionadas para conter várias quantidades de reagentes, fluidos ou tampões, por exemplo, 10 μΐ a 2 - 5 ml. As cápsulas podem conter reagentes tais como corantes, sondas, enxágües, anticorpos, tampões, produtos químicos ou solventes e a tira de reagente preferivelmente tem pelo menos um respiradouro, fenda ou janela. Cada respiradouro pode ser preferivelmente de 10 μιη a 20 mm de diâmetro e estende-se entre uma superfície superior e uma superfície inferior da tira de reagente. Há tipicamente de um a vinte respiradouros em cada tira de reagente, porém pode haver mais em outras formas de realização. Uma tira de reagente pode ser construída com somente uma única cápsula para dispensar um tampão de recuperação de antígeno ou outro reagente.

O número e diâmetros dos respiradouros e fendas das tiras de reagente podem ser variados, dependendo dos tipos de reagentes e tampões de recuperação de antígeno usados e de o grau de pressão, vapor ou gases que são prováveis serem liberados durante o processo de aquecer o tampão de recuperação de antígeno aplicado à lâmina de microscópio.

Quando o respiradouro é uma fenda ou uma ranhura ou janela, em vez de um "furo", o respiradouro pode ser de 10 μm a 10 mm de largura, por exemplo. Pode haver tipicamente de um a vinte respiradouros em uma tira de reagente, porém pode haver mais em outras formas de realização. Os respiradouros ou fendas são preferivelmente localizados em uma posição da tira de reagente que fica entre cápsulas adjacentes ou aos lados das cápsulas. Preferivelmente, qualquer uma das tiras de dispensação de reagente da presente invenção aqui contemplada compreende somente 1 a 25 recipientes de reagente, somente 1-20 recipientes de reagente, somente 1-15 recipientes de reagente ou somente 1-10 recipientes de reagente. Formas de realização das figuras 79 - 85

Como mostrado nas Figs. 79 - 85 em uma versão alternativa de um módulo de reação do aparelho da presente invenção, o módulo de reagente 210 é similar ao módulo de reação 110 em compreender um compartimento de reação 212 similar a compartimento de reação 112, um elemento de suporte de lâmina 214 similar ao elemento de suporte de lâmina 114 e um dispositivo de suporte de tira de reagente 216 similar ao suporte de tira de reagente 116. O compartimento de reação 212 compreende um aquecedor de compartimento de reação 218 para aquecer o compartimento de reação 212 e, opcionalmente, o elemento de suporte de lâmina 214, quando dispostos dentro dele ou outros gases ou líquidos ali. O aquecedor de compartimento de reação 218 tem fios 220 para conectarem-se a uma fonte de energia elétrica (não mostrada). O compartimento de reação 212 compreende ainda um conduto de reagente 222 e um orifício de porta injetora 224, para suprir um reagente ou outra solução dentro do compartimento de reação 212. O módulo de reação 210 compreende ainda um aquecedor de tira de reagente 226 incorporado dentro do dispositivo de suporte de tira de reagente 216, para aquecer uma tira de reagente (tal como qualquer uma das tiras de reagente aqui descritas) disposta sobre ele. Os fios 228 conectam o aquecedor de tira de reagente 226 a uma fonte de energia elétrica (não mostrada). O módulo de reação 210 compreende ainda um aquecedor de conduto de reagente 230 para aquecer o conduto de reagente 222, desse modo funcionando para aquecer um reagente quando ele passa através do conduto de reagente 222 para dentro do compartimento de reação 212 simplesmente sobre a lâmina de microscópio, se o reagente for aplicado quando a lâmina estiver do lado de fora do compartimento de reação 212. Os fios 232 conectam o aquecedor de conduto de reagente 230 a uma fonte de energia elétrica (não mostrada). O elemento de suporte de lâmina 214 compreende uma base 240, um cabo 242 e um anel- O dianteiro 244 e um anel-O traseiro 246 para selar a base 240 e lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação 212. O elemento de suporte de lâmina 214 compreende ainda uma plataforma/aquecedor de lâmina de microscópio 248 e, em operação, tem uma lâmina de microscópio 250 disposta nele, a lâmina de microscópio 250 tendo uma superfície superior 251. A base 240 compreende ainda uma cavidade de base 252, posicionada embaixo da plataforma de lâmina/aquecedor 248 e tem um aquecedor de cavidade de base 254 posicionado ali e conectado via fio 256 a uma fonte de energia elétrica (não mostrada). O aquecedor de cavidade de base 254 funciona para aquecer um reagente 258 disposto dentro da cavidade de base 252 a uma temperatura suficiente para aquecer a lâmina de microscópio 250 e espécime biológico e reagente 258 dispostos sobre ela, como descrito em outra parte aqui pra outras formas de realização da invenção. O reagente 258, em uma forma de realização preferida, imerge a lâmina de microscópio 250 completamente como mostrado na Fig. 79. O dispositivo de suporte de tira de reagente 216 desta forma de realização compreende uma fenda 260 (que pode também ser incluída no dispositivo de suporte de tira de reagente 116) para possibilitar que um êmbolo dispensador (isto é, elemento dispensador) 264 supra um reagente 262 diretamente sobre a lâmina de microscópio 250, quando estiver posicionado dentro do compartimento de reação 212 (Figs. 79, 82, 83) ou fora do compartimento de reação (Figs. 80, 81). Como mostrado nas Figs. 80, 82 e 84, o reagente pode ser aplicado a ou removido da lâmina de microscópio 250, quando a lâmina de microscópio 250 for posicionada fora do compartimento de reação 212 sobre o elemento de suporte de lâmina 214. O reagente pode ser removido da lâmina de microscópio 250 pelo êmbolo dispensador 264, movendo-se a ponta 266 do êmbolo dispensador 264 sobre a lâmina de microscópio 250 e aspirando o reagente dela. O reagente pode ser suprido a ou removido da lâmina de microscópio 250 através de um ou mais condutos 268 do êmbolo dispensador 264 (Fig. 84). Os condutos 268 podem funcionar para fornecer reagentes ou soluções, para remover reagentes (via aspiração, por exemplo) ou pode prover ar, gases ou líquidos sob pressão.

Em outras formas de realização, os módulos de reação da presente invenção podem ter qualquer um ou qualquer combinação de elementos de aquecimento de lâmina 136 ou 248, aquecedor de compartimento de reação 218, aquecedor de tira de reagente 226, aquecedor de conduto de reagente 230 e aquecedor de cavidade de base 254 e, quando presente, qualquer um dos sistemas de aquecimento aqui descritos pode funcionar individual e independentemente entre si.

Como representado na Fig. 85, uma pluralidade de módulos de reação 210 são preferivelmente posicionados dentro de uma única câmara 282, em que uma ou mais de tais câmaras 282 podem ser combinadas para prover um aparelho de manchamento 280 compreendendo, por exemplo, 5 a 50 módulos de reação 210.

Em uma forma de realização preferida, o compartimento de reação e/ou elemento de suporte de lâmina de um módulo de reação da presente invenção podem ser expostos a condições de esterilização, que podem incluir elevado calor (por exemplo, acima de 100°C ou, mais preferivelmente, acima de 130°C, e podem usar vapor e/ou produtos químicos para remover ou desnaturar patógenos ou produtos químicos ou materiais residuais, tais como ácidos nucléicos, anticorpos, toxinas ou outras proteínas que permaneçam no compartimento de reação e elemento de suporte de lâmina, após o módulo de reação ser usado. Em uma forma de realização preferida, o compartimento de reação e/ou elemento de suporte de lâmina, após aquecimento, são rapidamente esfriados a próximo da temperatura ambiente ou abaixo de 50°C dentro de 3 s, 5 s, 10 s ou 20 s, por exemplo, para desnaturar ou inativar mais as proteínas ou substâncias residuais.

Em uma forma de realização alternativa da invenção, uma pluralidade de lâminas é processada (separadamente ou dentro de um vaso comum), pela aplicação de um reagente ou solução à lâmina e pressurizando- se o vaso acima da pressão atmosférica a níveis como examinados em outra parte aqui, em que os espécimes biológicos, bioquímicos ou outra entidade biológica sobre a lâmina não é submetida a aquecimento adicional.

Como descrito em outra parte aqui, preferivelmente o elemento de suporte de lâmina, compartimento de reação, tira de reagente, dispositivo de suporte de tira de reagente, elemento de dispensação, orifícios, condutos, jatos de mistura, meios de pressurização, meios de esfriamento, dispositivos de aspiração, orifícios de drenagem, dispositivos de aquecimento e condutos reagentes são independentemente operáveis e independentemente móveis.

O aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ da presente invenção preferivelmente tem como um componente um dispositivo para ler ou detectar um caractere ou código óptico, que identifica uma tira de reagente ou componente de tira de reagente como um ladrilho ou recipiente.

Várias formas de realização do processo da presente invenção incluem mas não são limitadas a (1) aplicação de um reagente a uma lâmina, empregando-se o presente aparelho, e aquecimento da lâmina, com ou sem uma etapa de pressurizar o compartimento de reação, (2) enchimento da cavidade de base com um reagente ou solução, de modo que submirja a lâmina, pré-pressurizar o compartimento de reação, em seguida aquecer a lâmina e solução de reagente na cavidade de base, (3) encher a cavidade de base com um reagente ou solução, em seguida aquecer a lâmina e reagente ou solução, sem pré-pressurização antes da etapa de aquecimento ou (4) colocar um líquido no fundo da cavidade de base, sem que o líquido diretamente toque a lâmina, em seguida aquecer o líquido dentro da cavidade de base para causar formação de vapor que pressurize o compartimento de reação e, secundariamente, aquecer a lâmina e reagente ali (a lâmina também pode opcionalmente ser aquecida pelo aquecedor de lâmina).

Outras formas de realização da presente invenção são mostradas e descritas na Patente U.S. No. 6.534.008; U.S. No. de Série 10/245.035; Patente U.S. No. 6.855.292; e Provisionais U.S. 60/142.789; 60/684.047; 60/689.386 e 60/730.744, a totalidade de cada um dos quais é por este meio expressamente incorporada aqui por referência.

Embora a invenção tenha sido descrita acima e em mais detalhes abaixo com relação a certas formas de realização preferidas aqui, de modo que seus aspectos possam ser mais totalmente entendidos e apreciados, não se pretende limitar a invenção a estas formas de realização particulares. Ao contrário, pretende-se cobrir todas as alternativas, modificações e equivalentes que possam ser incluídos dentro do escopo da invenção, como definido pelas reivindicações anexas. Assim, estes exemplos e formas de realização, que incluem formas de realização preferidas, servirão para ilustrar a prática desta invenção, sendo entendido que os particulares mostrados são por meio de exemplo e para fins de discussão ilustrativa das formas de realização preferidas da presente invenção somente e são apresentados no caso de prover o que se acredita ser a mais útil e prontamente entendida descrição dos procedimentos de formulação, bem como dos princípios e aspectos conceituais da invenção.

Exemplos

Exemplo 1

(1) Colocar a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina e incluir dentro do compartimento de reação;

(2) Adicionar tampão de recuperação de antígeno;

(3) Ajustar o aquecedor de lâmina a 130°C;

(4) Regulador de pressão ajustado a 23 psig (259,9 kPa);

(5) Tampão de recuperação de antígeno alcançar 125°C;

(6) Incubar a 1250C por 10 minutos;

(7) Desligar o aquecedor e ligar o sistema de esfriamento de ar ou líquido;

(8) Esfriar 5 minutos; e

(9) Enxaguar com tampão e prosseguir com protocolo de manchamento.

Exemplo 2

(1) Colocar a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte;

(2) Incluir a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação individual;

(3) Dispensar 1 - 2 ml de reagente de recuperação de antígeno sobre a lâmina de microscópio;

(4) Fechar todos os orifícios; (5) Abrir o orifício de pressão para pré-pressurizar o compartimento de reação a cerca de 25 psig (273,7 kPa);

(6) Ligar a placa de aquecimento para alcançar cerca de 120°C sobre a lâmina;

(7) Ajustar o regulador de pressão para manter a temperatura de 120°C regulando a pressão do compartimento de reação;

(8) O reagente alcança uma temperatura de 120°C;

(9) O aquecimento é mantido por 30 minutos a cerca de 120°C;

(10) Desligar o aquecedor e ligar o sistema de esfriamento de ar ou líquido;

(11) Esfriar 5-10 minutos;

(12) Liberar a pressão à pressão atmosférica;

(13) Esfriar o reagente de recuperação de antígeno;

(14) Enxaguar a lâmina com tampão de lavagem PBS; e

(15) Prosseguir com o protocolo de manchamento.

Exemplo 3

Três ml de tampão de recuperação de antígeno presentes no compartimento de reação podem ser aquecidos a uma temperatura de reação particular em uma pressão particular, incluindo, por exemplo: 100°C @ 8 psig (156,6 kPa), 106 °C @ 10 psig (170,3 kPa), 100°C @ 12 psig (184,0 kPa), 115°C @ 15 psig (204,7 kPa), 120°C @ 16 psig (211,6 kPa), 125°C @ 23 psig (259,9 kPa) ou 130°C @ 30 psig (308,1 kPa), 140°C @ 40: tampão de recuperação após um tempo de tratamento de 60 minutos.

Exemplo 4

Temperatura ambiente com protocolo de manchamento pressurizado:

1) Colocar a lâmina sobre o suporte de lâmina;

2) Fechar a câmara para selar o suporte de lâmina na câmara;

3) Dispensar reagente pela tira de reagente ou outro elemento de dispensação;

4) Pressurizar a câmara com um gás separado à desejada pressão (50- 100 psig: 446 - 790,6 kPa);

5) Incubar o reagente por um tempo desejado (10 - 120

minutos);

6) Despressurizar a câmara pela abertura do orifício de

refugo;

7) Enxaguar a lâmina do reagente enxaguando e/ou inclinando e enxaguando a lâmina;

8) Repetir as etapas 3 - 7 até todos os reagentes serem

dispensados para um protocolo particular por um tempo desejado. Exemplo 5

Protocolo de Recuperação de Antígeno de Elevada Temperatura com pré- pressurização:

1) Colocar a lâmina sobre o suporte de lâmina;

2) Fechar a câmara para selar o suporte de lâmina na câmara;

3) Dispensar reagente pela tira de reagente ou outro elemento de dispensação sobre a lâmina de microscópio;

4) Pressurizar a câmara com um gás separado à pressão desejada (15-30 psig: 204,7 - 308,1 kPa);

5) Ligar pelo menos um elemento de aquecimento (isto é, aquecedor de lâmina, aquecedor de câmara, aquecedor de cavidade) e aquecer a 125°C;

6) A pressão é mantida a 15-20 psig (204,7 - 239,2 kPa) pela válvula de liberação de pressão ou modulação de aquecimento (isto é,

elementos de aquecimento desligando e ligando);

7) Incubar o reagente a 1250C por 10-30 minutos;

8) Desligar os aquecedores e ligar os dutos de esfriamento (líquido ou ar) até o reagente cair abaixo de 5 0°C; 9) Despressurizar a câmara enviando a condensação e pressão para fora através do orifício de refugo;

10) Enxaguar a lâmina do reagente enxaguando e/ou inclinando e enxaguando a lâmina;

11) Dispensar reagente e incubar com ou sem pressão e/ou com ou sem calor por um tempo desejado;

12) Repetir as etapas 9-10, até todos os reagentes serem dispensados.

Exemplo 6

Protocolo de Recuperação de Antígeno de Elevada Temperatura sem pré- pressurização:

1) Colocar a lâmina no suporte de lâmina;

2) Fechar a câmara para selar o suporte de lâmina na câmara;

3) Dispensar reagente pela tira de reagente ou outro elemento de dispensação e encher a câmara com reagente imergindo totalmente a inteira lâmina no reagente (isto é, reagente de recuperação de antígeno);

4) Ligar pelo menos um elemento de aquecimento (isto é, aquecedor de lâmina, aquecedor de câmara, aquecedor de cavidade) e aquecer a 125°C;

5) A pressão é produzida pelo reagente ebulindo;

6) A pressão é mantida a 25 psig (273,7 kPa) pela válvula de liberação de pressão ou modulação de aquecimento (isto é, elementos de aquecimento desligando e ligando);

7) O reagente é incubado em uma temperatura de 1250C por 10-30 minutos;

8) Desligar os aquecedores e ligar os dutos de esfriamento (líquido ou ar) até o reagente cair abaixo de 50°C;

9) Despressurizar a câmara remetendo a condensação, reagente e pressão para fora através do orifício de refugo; 10) Enxaguar a lâmina ou reagente enxaguando e/ou inclinando e enxaguando a lâmina;

11) Dispensar reagente e incubar com ou sem pressão e/ou com ou sem aquecer por um tempo desejado;

12) Repetir as etapas 10 - 11 até todos os reagentes serem dispensados.

Exemplo 7

Protocolo de Recuperação de Antígeno de Elevada Temperatura - a cavidade produz vapor para manter elevadas condições de calor com pressurização:

1) Colocar a lâmina sobre o suporte de lâmina;

2) Fechar a câmara para selar o suporte de lâmina na câmara;

4) Adicionar água deionizada (D.I.) ou outro reagente líquido à cavidade abaixo da lâmina (água deionizada não contatando a lâmina de microscópio);

5) Ligar o elemento de aquecimento de lâmina e aquecedores de cavidade e aquecer a 125°C;

6) A pressão é produzida pela água deionizada ebulindo na cavidade e produzindo vapor para aquecer o reagente sobre a lâmina de microscópio;

7) A pressão é mantida a 25 psig (273,7 kPa) pela válvula de liberação de pressão ou modulação de aquecimento (isto é, elementos de aquecimento desligando e ligando);

8) O reagente é incubado em uma temperatura de 1250C por 10-60 minutos;

9) Desligar os aquecedores e ligar os dutos de esfriamento (líquido ou ar) até o reagente cair abaixo de 50°C;

10) Despressurizar a câmara remetendo condensação, água deionizada e pressão para fora através do orifício de água;

11) Enxaguar a lâmina de reagente enxaguando e/ou inclinando e enxaguando a lâmina;

12) Dispensar reagente e incubar com ou sem pressão e/ou com ou sem calor por um tempo desejado;

13) Repetir as etapas 10 - 11 até todos os reagentes serem dispensados.

Em resumo, a invenção em uma forma de realização contempla um aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ, compreendendo uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, com cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, em que o compartimento de reação é pressurizável (ou opcionalmente despressurizável) para manter uma pressão interna que excede (ou fica abaixo) da pressão atmosférica e um elemento de dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é pressurizado e pode ainda compreender um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação.

A presente invenção contempla um módulo de reação, compreendendo: um compartimento de reação tempo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, em que o compartimento de reação pode então ser pressurizado (ou opcionalmente despressurizado) para manter uma pressão interna que excede (ou é baixo) da pressão atmosférica e um elemento de dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é pressurizado. O módulo de reação pode opcionalmente ter um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio e/ou um dispositivo de suporte de tira de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contém ou é capaz de conter um reagente nele, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa a e adjacente ao compartimento de reação e o elemento de dispensação pode ser adaptado par encaixar com o recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido do recipiente de reagente para dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio.

Mais particularmente, a invenção contempla um aparelho de recuperação e manchamento de antígeno, compreendendo uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, em que cada módulo de reagente compreende: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio nele, em que o compartimento de reação pode então ser pressurizado (ou, opcionalmente, despressurizado) para manter uma pressão interna que excede (ou é abaixo) da pressão atmosférica, um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio, um dispositivo de suporte de ladrilhos de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contém ou é capaz de conter um reagente, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa e adjacente ao compartimento de reação, e um elemento de dispensação para encaixar com o recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido do recipiente de reagente para dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio e em que cada um dos compartimentos de reação da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente pressurizável (ou, opcionalmente, despressurizável) e em que cada um dos elementos de aquecimento da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente aquecível.

No aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ, o compartimento de reação pode ser pressurizável antes, durante ou após o elemento de aquecimento aquecer a lâmina de microscópio, o elemento de aquecimento pode ser um componente do elemento de suporte de lâmina e pode ser posicionável diretamente embaixo da lâmina de microscópio, o compartimento de reação pode ter um formato cilíndrico, tubular, em que o elemento de suporte de lâmina tem um formato cilíndrico ou o compartimento de reação pode ter um formato retangular, de modo que o elemento de suporte de lâmina tem um formato retangular.

No aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ, o elemento de suporte de lâmina de cada módulo de reação pode ser independentemente móvel em relação a cada outro elemento de suporte de lâmina, a tira de reagente de cada módulo de reação pode ser independentemente móvel em relação a cada outra tira de reagente, o compartimento de reação de cada módulo de reação pode ser independentemente móvel em relação a cada outro compartimento de reação e o elemento de dispensação de cada módulo de reação pode ser independentemente móvel em relação a cada outro elemento de dispensação, o compartimento de reação é preferivelmente pressurizável para manter uma pressão acima da pressão atmosférica, tal como 0 a 350 psig (101,3 - 2514 kPa), a uma pressão atmosférica de 1 a 1000 psig (108,2 - 790,6 kPa), a uma pressão de 5 a 50 psig (135,8 - 446,0 kPa) ou a uma pressão de 10 a 40 psig (170,3 - 377,0 kPa) ou é despressurizável para manter uma pressão abaixo da pressão atmosférica a um nível tão baixo quanto 100 kPa a 10 kPa a 1 kPa a 100 Paa 10 Pa a 1 Pa aO,1 Pa. No aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situo, o reagente disposto sobre ou próximo da lâmina de microscópio pode ser aquecido a uma temperatura de 25°C a 37 °C, 37 °C a 56 °C, 56 °C a 85°C, 85°C a 100°C, 1OO°C a 125°C, 125°C a 135°C, 135°C a 150°C, 150°C a 175°C, 175°C a 200°C, 200°C a 225°C, 225°C a 250°C, 250°C a 275°C, 275°C a 300°C, 300°C a 325°C ou 325°C a 350°C. Quando o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação é móvel, o compartimento de reação pode ser estacionário ou móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser estacionário ou móvel, quando o elemento de suporte de lâmina do módulo de reagente for estacionário, o compartimento de reação é móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser estacionário ou móvel. Quando o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação for móvel ou estacionário e o compartimento de reação for móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente for móvel, o compartimento de reação pode ser móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente. Além disso, o dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser móvel em uma direção avante ou inversa, para transportar a tira de reagente quando carregada nele em uma direção para a frente ou inversa e quando o dispositivo de suporte de tira de reagente for estacionário, a tira de reagente pode ser móvel em uma direção para a frente ou inversa, quando carregada nele. O dispositivo de suporte de tira de reagente e o compartimento de reação são conectados entre si ou não conectados. O módulo de reação pode compreender pelo menos um duto de ar par pressurizar o compartimento de reação ou provocar mistura do reagente sobre a lâmina ou um duto de esfriamento para aumentar a taxa de esfriamento do elemento de aquecimento após aquecimento, um orifício de suprimento para suprir um líquido ao elemento de suporte de lâmina e um duto de drenagem para remover reagentes supridos à lâmina de microscópio. O aparelho pode compreender um conduto de reagente no módulo de reação, para possibilitar suprimento de reagente da tira de reagente para dentro do compartimento de reação, um dispositivo de aquecimento disposto em torno do conduto de reagente para aquecer o reagente suprido através dele, um dispositivo de aquecimento para aquecer o compartimento de reação e um dispositivo de aquecimento no dispositivo de suporte de tira de reagente para aquecer a tira de reagente ou partes dela.

O elemento de suporte de lâmina do aparelho pode ter uma cavidade em uma posição abaixo da lâmina de microscópio para conter uma quantidade da solução e a cavidade pode ter um aquecedor de cavidade para aquecer a solução dentro da cavidade. O elemento de dispensação pode ser operável independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente e o elemento de dispensação preferivelmente funciona para provocar expulsão do reagente de um recipiente de reagente da tira de reagente e para dispensar um reagente ou solução de uma fonte de reagente ou solução remota da tira de reagente. O elemento de suporte de lâmina pode receber reagente da tira de reagente ou reagente ou solução de uma fonte remota, quando o elemento de suporte de lâmina for disposto dentro ou fora do compartimento de reação. O elemento de dispensação é preferivelmente capaz de aplicar sucção ou é capa de aplicar líquido, ar ou gás sob pressão. O elemento de suporte de lâmina pode ser encerrável dentro do compartimento de reação movendo-se o elemento de suporte de lâmina para dentro do compartimento de reação ou movendo-se o compartimento de reação em torno do elemento de suporte de lâmina. O elemento de suporte de lâmina pode ser inclinável, para permitir drenagem do reagente ou solução da lâmina de microscópio. A pluralidade de módulos de reação pode ser montada em pelo menos uma câmara para formar um aparelho de reação. Cada elemento de suporte de lâmina, dispositivo de suporte de tira de reagente, elemento de dispensação e compartimento de reação do aparelho é preferivelmente separadamente substituível ou trocável e o módulo de reação preferivelmente tem meios para liberar pressão do ou regular pressão dentro do compartimento de reação.

A presente invenção também contempla uma tira de dispensação de reagente reconfigurável, compreendendo uma pluralidade de módulos de reagente, cada módulo de reagente compreendendo um ladrilho e um recipiente de reagente preso nela, cada módulo de reagente adaptado para ser fixável a e separável do módulo de reagente adjacente, de modo que uma vez a pluralidade de módulos de reagente seja fixada junta em uma primeira seqüência, um ou mais dos módulos de reagente podem ser separados e religados para reconfigurar a pluralidade de módulos de reagente em uma segunda seqüência diferente da primeira seqüência. A tira de dispensação de reagente reconfigurável pode ter um elo conectante para conectar módulos reagentes adjacentes e um injetor para possibilitar que um reagente, dentro do recipiente de reagente, seja dispensado pelo recipiente de reagente e o recipiente de reagente possa ser removível do ladrilho. Além disso, pelo menos um dos recipientes de reagente contém um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes de PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.

Alternativamente, a tira de dispensação de reagente reconfigurável pode compreender uma base tendo uma pluralidade de plataformas de recipiente e uma pluralidade de recipientes de reagente, com cada plataforma de recipiente tendo um recipiente de reagente fixado nele, em que cada recipiente de reagente é adaptado para ser fixável à e separável da plataforma de recipiente, de modo que, uma vez a pluralidade de recipientes de reagente sejam fixados entre si em uma primeira seqüência, um ou mais dos recipientes de reagente podem ser separados e religados a uma diferente plataforma de recipiente, para reconfigurar a pluralidade de recipientes de reagente em uma segunda seqüência diferente da primeira seqüência, desse modo formando uma tira de dispensação de reagente reconfigurada. O recipiente de reagente pode ser posicionado sobre um ladrilho que é separável da base. O recipiente de reagente ou plataforma de recipiente pode compreender ainda um injetor para possibilitar que um reagente dentro do recipiente de reagente seja dispensado pelo recipiente de reagente. Pelo menos um dos recipientes de reagente contém um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes de PCR, reagentes de sobrelâminas, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.

Alternativamente, a tira de dispensação de reagente reconfigurável pode compreender uma pluralidade de módulos reagentes, cada módulo reagente compreendendo um ladrilho e um recipiente de reagente preso nele, em que os ladrilhos são inicialmente construídos em uma configuração unitária, integral e cada ladrilho é adaptado para ser fixável a e separável de um ladrilho adjacente, de modo que os módulos reagentes são conectados em uma primeira seqüência e em que, quando um ou mais dos ladrilhos for separado, o um ou mais ladrilhos podem ser religados para reconfigurar a pluralidade de módulos de reagente em uma segunda seqüência diferente da primeira seqüência e pode ainda compreender um elo de conexão para reconectar ladrilhos de módulos de reagente adjacentes. O módulo de reagente pode ainda compreender um injetor para possibilitar que um reagente dentro do recipiente de reagente seja dispensado pelo recipiente de reagente e o recipiente de reagente possa ser removível do ladrilho. Além disso, pelo menos um dos recipientes de reagente contém um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes de PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquoso e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.

Em outra forma de realização, a presente invenção contempla um método para tratar uma lâmina de microscópio, compreendendo: fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio nele e um elemento de dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, em seguida dispensar a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação, pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que excede a pressão atmosférica e acionar o elemento de dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é pressurizado e em que o reagente é suprido em uma pressão que excede a pressão dentro do compartimento de reação e, opcionalmente, aquecer a lâmina de microscópio e reagente dentro do compartimento de reação. O método pode compreender fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis cada módulo de reação compreendendo um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio nele, e um elemento de dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, em seguida dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação e incluir a lâmina de microscópio ali, acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido para dentro do compartimento de reação e pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que excede a pressão atmosférica ou, opcionalmente, despressurizar o compartimento de reação abaixo da pressão atmosférica e, opcionalmente, aquecer a lâmina de microscópio e reagente dentro do compartimento de reação.

O método da invenção pode compreender fornecer um módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno e um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, em seguida dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionar o elemento de suporte de lâmina e a lâmina de microscópio sobre ele dentro do compartimento de reação, pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que exceda pressão atmosférica e dispor um reagente sobre a lâmina de microscópio, enquanto o compartimento de reação é pressurizado e, opcionalmente, aquecer a lâmina de microscópio e o reagente dele.

O método pode compreender fornecer uma pluralidade de módulo de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali e um elemento de dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, em seguida dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação, despressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que é menor do que a pressão atmosférica e acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é despressurizado.

O método pode compreender fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, em seguida dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionando a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação e encerrando a lâmina de microscópio ali, acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação e despressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que é menor do que a pressão atmosférica.

Preferivelmente, a invenção compreende um método para tratar uma lâmina de microscópio, compreendendo prover uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reagente compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno, um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio, um dispositivo de suporte de tira de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contém ou é capaz de conter um reagente, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa e adjacente ao compartimento de reação e um elemento da dispensação para encaixar no recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido pelo recipiente de reagente dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio e em que cada um dos compartimentos de reação da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente pressurizável (ou, opcionalmente, despressurizável) e em que cada um dos elementos de aquecimento dos elementos de suporte de lâmina da pluralidade dos módulos de reação é individual e independentemente aquecível, em seguida dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina, posicionar o elemento de suporte de lâmina e lâmina de microscópio sobre ele dentro do compartimento de reação, colocar a tira de reagente sobre o dispositivo de suporte de tira de reagente, acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido sobre a lâmina de microscópio, acionar o elemento de aquecimento para aquecer a lâmina, pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que exceda a pressão atmosférica e remover o reagente da lâmina de microscópio.

No método, a etapa de pressurizar (ou despressurizar) o compartimento de reação pode ocorrer antes, durante ou após o aquecimento da lâmina de microscópio pelo elemento de aquecimento. O compartimento de reação pode ter um formato cilíndrico, tubular para aumentar a distribuição de pressão dentro do compartimento de reação, o elemento de suporte de lâmina de cada módulo de reagente pode ser movido independentemente em relação a cada outro elemento de suporte de lâmina, a tira de reagente de cada módulo de reação pode ser movida independentemente em relação a cada outra tira de reagente e o elemento da dispensação de cada módulo de reação pode ser movida independentemente em relação a cada outro elemento da dispensação. O compartimento de reação pode ser pressurizado a uma pressão acima de 0 a 350 psig (101,3 - 2514 kPa), a uma pressão de 1 a 100 psig (108,2 - 790,6 kPa) a uma pressão de 5 a 50 psig (135,8 - 446,0 kPa) ou a uma pressão de 10 a 40 psig (170,3 - 377,0 kPa). O compartimento de reação pode ser despressurizado para manter uma pressão abaixo da pressão atmosférica a um nível tão baixo quanto 100 kPa a 10 kPa a 1 kPa a 100 Pa a 10 Pa a 1 Pa a 0,1 Pa. O reagente disposto sobre ou próximo da lâmina de microscópio pode ser aquecido a uma temperatura de 25°C a 37°C, 37°C a 56°C, 56°C a 85°C, 85°C a 100°C, 100°C a 125°C, 125°C a 135°C, 135°C a 150°C, 150°C a 175°C, 175°C a 200°C, 200°C a 225°C, 225°C a 250°C, 250°C a 275°C, 275°C a 300°C, 300°C a 325°C, a 325°C a 350°C. A etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina pode compreender mover elemento de suporte de lâmina do módulo de reação para dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação está estacionário, ou a etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina pode compreender mover o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação e mover o compartimento de reação. A tira de reagente pode ser posicionada em uma posição de dispensação, movendo-se o dispositivo de suporte de tira de reagente, desse movendo-se a tira de reagente para a posição de dispensação, ou movendo-se a tira de reagente enquanto o dispositivo de suporte de tira de reagente está estacionaria. O método pode compreender mover o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação, mover o compartimento de reação e mover o dispositivo de suporte de tira de reagente, em que o compartimento de reação é móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

A etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina pode compreender manter o elemento de suporte de lâmina do módulo de reagente estacionário e mover o compartimento de reação para incluir o elemento de suporte de lâmina. O compartimento de reação pode ser móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente e em que o dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser móvel independentemente do compartimento de reação. O dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser movido em uma direção para a frente ou inversa, para transportar a tira de reagente em uma direção para a frente ou inversa. O dispositivo de suporte de tira de reagente pode ser mantido estacionário e a tira de reagente sobre ele pode ser movida em uma direção avante ou inversa. O módulo de reação pode compreender pelo menos um de um duto de ar para pressurizar o compartimento de reação ou provocar mistura do reagente sobre a lâmina, um duto de esfriamento para aumentar a taxa de esfriamento do elemento de aquecimento após o aquecimento, um orifício de suprimento para suprir um líquido ao elemento de suporte de lâmina e um duto de drenagem para remover reagentes supridos à lâmina de microscópio.

O método pode compreender suprir reagente da tira de reagente para dentro do compartimento de reação via um conduto de reagente do módulo de reação, aquecer o conduto de reagente para aquecer o reagente suprido através dele, aquecer o compartimento de reação, aquecer a tira de reagente ou partes dela utilizando-se um dispositivo de aquecimento do dispositivo de suporte de tira de reagente, dispensar uma solução em uma cavidade do elemento de suporte de lâmina embaixo da lâmina de microscópio e aquecer a solução da cavidade. O elemento da dispensação pode ser operável independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente. O método pode compreender a utilização do elemento da dispensação para dispensar um reagente ou solução de uma fonte de reagente ou solução remota da tira de reagente, aplicar reagente pela tira de reagente ou reagente ou solução por uma fonte remota, quando o elemento de suporte de lâmina estiver disposto dentro ou fora do compartimento de reação e/ou aplicar sucção ou líquido, ar ou gás sob pressão à lâmina de microscópio via o elemento da dispensação, para provocar remoção de um reagente ou solução da lâmina de microscópio. A etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina dentro do compartimento de reação pode ocorrer movendo-se o elemento de suporte de lâmina para dentro do compartimento de reação ou movendo-se o compartimento de reação em torno do elemento de suporte de lâmina, desse modo incluindo o elemento de suporte de lâmina dentro do compartimento de reação, e pode compreender a etapa de inclinar o elemento de suporte de lâmina, para permitir drenagem do reagente ou solução da lâmina de microscópio.

Embora a invenção tenha sido descrita aqui com relação a certas formas de realização, de modo que seus aspectos possam ser mais totalmente entendidos e apreciados, não se pretende que a invenção seja limitada a estas formas de realização particulares. Ao contrário, pretende-se que todas alternativas, modificações e equivalentes sejam incluídos dentro do escopo da invenção, como definida pelas reivindicações anexas. Assim, os exemplos e formas de realização aqui descritos, que incluem formas de realização preferidas, servirão pra ilustrar a prática desta invenção, sendo entendido que os particulares mostrados são por meio de exemplo e para fins de discussão ilustrativa de formas de realização preferidas da presente invenção somente e são apresentados para prover o que se acredita ser a descrição mais útil e prontamente entendida dos procedimentos, bem como dos princípios e aspectos conceituais da invenção.

Mudanças podem ser feitas na construção e operação dos vários componentes, elementos e montagens aqui descritos ou nas etapas ou na seqüência de etapas dos métodos descritos aqui, sem desvio do espírito e escopo da invenção, como definida nas seguintes reivindicações.

Claims

1. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ, caracterizado pelo fato de compreender: uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro do ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selagem da lâmina de microscópio ali, em que o compartimento de reação pode então ser pressurizado para manter uma pressão interna que exceda a pressão atmosférica; um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio; um dispositivo de suporte de tira de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contendo ou sendo capaz de conter um regente, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa a e adjacente ao compartimento de reação; e um elemento de dispensação para encaixar no recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido do recipiente de reagente para dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio; e em que cada um dos compartimentos de reação da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente pressurizável e em que cada um dos elementos de aquecimento da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente aquecível.

2. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do compartimento de reação poder ser pressurizado antes, durante ou após o elemento de aquecimento aquecer a lâmina de microscópio.

3. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de aquecimento ser um componente do elemento de suporte de lâmina e ser posicionado diretamente embaixo da lâmina de microscópio.

4. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ter um formato cilíndrico, tubular.

5. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina ter um formato cilíndrico.

6. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ter um formato retangular.

7. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina ter um formato retangular.

8. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina de cada módulo de reação ser independentemente móvel em relação a cada outro elemento de suporte de lâmina, a tira de reagente de cada módulo de reação ser independentemente móvel em relação a cada outra tira de reagente, o compartimento de reação de cada módulo de reação ser independentemente móvel em relação a cada outro compartimento de reação e o elemento da dispensação de cada módulo de reação ser independentemente móvel em relação a cada outro elemento da dispensação.

9. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser pressurizável para manter uma pressão acima da pressão atmosférica.

10. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser pressurizável a uma pressão acima de 0 a 350 psig (101,3-2514 kPa), a uma pressão de 1 a 100 psig (108,2-790,6 kPa), a uma pressão de 5 a 50 psig (135,8 - 446,0 kPa) ou a uma pressão de 10 a 40 psig (170,3-377,0 kPa).

11. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser negativamente despressurizável, para manter uma pressão abaixo da pressão atmosférica a um nível tão baixo quanto 100 kPa a 10 kPA a 1 kPa a 100 Pa a 10 Pa a 1 Pa a 0,1 Pa.

12. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do reagente disposto sobre ou próximo da lâmina de microscópio poder ser aquecido a uma temperatura de 25°C a 37°C, 37 °C a 56 0C, 56 °C a 85°C, 85°C a -100°C, 100°C a 125°C, 125°C a 135°C, 135°C a 150°C, 150°C a 175°C, -175°C a 200°C, 200°C a 225°C, 225°C a 250°C, 250°C a 275°C, 275°C a -300°C, 300°C a 325°C ou 325°C a 350°C.

13. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reagente ser móvel, o compartimento de reação ser estacionário e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser estacionário.

14. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reação ser móvel, o compartimento de reação ser móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser estacionário.

15. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reação ser móvel, o compartimento de reação ser estacionário e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser móvel.

16. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reação ser móvel, o compartimento de reação ser móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser móvel e o compartimento de reação ser móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

17. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reação ser estacionário, o compartimento de reação ser móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser estacionário.

18. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina do módulo de reação ser estacionário, o compartimento de reação ser móvel e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser móvel e o compartimento de reação ser móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

19. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do dispositivo de suporte de tira de reagente ser móvel em uma direção para a frente ou inversa, para transportar a tira de reagente quando carregada sobre ele em uma direção para a frente ou inversa.

20. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do dispositivo de suporte de tira de reagente ser estacionário e a tira de reagente poder ser movida em uma direção para a frente ou inversa, quando carregada sobre ele.

21. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do dispositivo de suporte de tira de reagente e o compartimento de reação serem conectados entre si.

22. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do dispositivo de suporte de tira de reagente e o compartimento de reação não serem conectados entre si.

23. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do módulo de reação compreender pelo menos um de um duto de ar para pressurizar o compartimento de reação ou provocar mistura do reagente sobre a lâmina ou um duto de esfriamento para aumentar a taxa de esfriamento do elemento de aquecimento após aquecimento, um orifício de suprimento para suprir um líquido ao elemento de suporte de lâmina e um duto de drenagem para remover reagentes suprido à lâmina de microscópio.

24. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda um conduto de reagente no módulo de reação, para possibilitar suprimento de reagente pela tira de reagente para dentro do compartimento de reação.

25. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda um dispositivo de aquecimento disposto próximo do conduto de reagente, para aquecer o reagente suprido através dele.

26. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda um dispositivo de aquecimento para aquecer o compartimento de reação.

27. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda um dispositivo de aquecimento no dispositivo de suporte de tira de reagente, para aquecer a tira de reagente ou partes dela.

28. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina ter uma cavidade em uma posição debaixo da lâmina de microscópio, para conter uma quantidade de solução e em que a cavidade tem um aquecedor de cavidade para aquecer a solução dentro da cavidade.

29. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento da dispensação ser operável independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

30. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento da dispensação funcionar para provocar expulsão do reagente de um recipiente de reagente da tira de reagente e para dispensar um reagente ou solução de uma fonte de reagente ou solução remota da tira de reagente.

31. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina poder receber reagente da tira de reagente ou reagente ou solução de uma fonte remota, quando o elemento de suporte de lâmina é disposto dentro ou fora do compartimento de reação.

32. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento da dispensação ser capaz de aplicar sucção ou ser capaz de aplicar líquido, ar ou gás sob pressão.

33. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina poder ser encerrado dentro do compartimento de reação movendo-se o elemento de suporte de lâmina para dentro do compartimento de reação ou movendo-se o compartimento de reação em torno do elemento de suporte de lâmina.

34. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina poder ser inclinado para permitir drenagem do reagente ou solução da lâmina de microscópio.

35. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato da pluralidade de módulos de reação ser montada dentro de pelo menos uma câmara, para formar um aparelho de reação.

36. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina, dispositivo de suporte de tira de reagente, elemento da dispensação e compartimento de reação serem separadamente substituíveis ou trocáveis.

37. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do módulo de reação compreender meios para liberar pressão do ou regular pressão dentro do compartimento de reação.

38. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ, caracterizado pelo fato de compreender: uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro do ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação, para selagem da lâmina de microscópio nele, em que o compartimento de reação é pressurizável para manter uma pressão interna que excede a pressão atmosférica; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é pressurizado.

39. Aparelho de recuperação e manchamento de antígeno in situ de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de compreender ainda um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação.

40. Módulo de reação, caracterizado pelo fato de compreender: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio ali, em que o compartimento de reação pode então ser pressurizado para manter uma pressão interna que excede a pressão atmosférica; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é pressurizado.

41. Módulo de reação de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de compreender ainda um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio.

42. Módulo de reação de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de compreender ainda um dispositivo de suporte de tira de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contém ou é capaz de conter um reagente, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa e adjacente ao compartimento de reação.

43. Módulo de reação de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato do elemento da dispensação ser adaptado para encaixar no recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido pelo recipiente de reagente para dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio.

44. Método para tratar uma lâmina de microscópio tendo um espécime biológico, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer uma pluralidade de módulo de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação, para selagem da lâmina de microscópio nele; um elemento de aquecimento para aquecer a lâmina de microscópio; um dispositivo de suporte de tira de reagente para suportar uma tira de reagente tendo uma pluralidade de recipientes de reagente, cada um dos quais contém ou é capaz de conter um reagente, em que o dispositivo de suporte de tira de reagente suporta a tira de reagente em uma posição externa e adjacente ao compartimento de reação; e um elemento da dispensação para encaixar no recipiente de reagente, desse modo fazendo com que o reagente seja suprido do recipiente de reagente para dentro do espaço interno do compartimento de reação e sobre a lâmina de microscópio; e em que cada um dos compartimentos de reação da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente pressurizável e cada um dos elementos de aquecimento dos elemento de suporte de lâmina da pluralidade de módulos de reação é individual e independentemente aquecível; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar o elemento de suporte de lâmina e lâmina de microscópio sobre ele dentro do compartimento de reação; colocar a tira de reagente sobre o dispositivo de suporte de tira de reagente; acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido sobre a lâmina de microscópio; acionar o elemento de aquecimento par aquecer a lâmina; e pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que exceda a pressão atmosférica.

45. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da etapa de pressurizar o compartimento de reação ocorre antes, durante ou após o aquecimento da lâmina de microscópio pelo elemento de aquecimento.

46. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ter um formato cilíndrico, tubular para aumentar a distribuição de pressão dentro do compartimento de reação.

47. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do elemento de suporte de lâmina de cada módulo de reação ser movido independentemente em relação a cada outro elemento de suporte de lâmina, a tira de reagente de cada módulo de reação ser movida independentemente em relação a cada outra tira de reagente e o elemento da dispensação de cada módulo de reagente ser movido independentemente em relação a cada outro elemento da dispensação.

48. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser pressurizado a uma pressão acima de O a 350 psig (101,3 - 2514 kPa), a uma pressão de 1 a 100 psig (108,2 - -790,6 kPa) a uma pressão de 5 a 50 psig (135,8 - 446,0 kPa) ou a uma pressão de 10 a 40 psig (170,3 - 377,0 kPa).

49. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser pressurizado, a pressurização ser negativa para manter uma pressão abaixo da pressão atmosférica a um nível tão baixo quanto 100 kPa a 10 kPa a 1 kPa a 100 Pa a 10 Pa a 1 Pa a 0,1 Pa.

50. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do reagente disposto sobre ou próximo da lâmina de microscópio ser aquecido a uma temperatura de 25°C a 37°C, 37°C a 56°C, 56°C a 85°C, -85°C a 100°C, 100°C a 125°C, 125°C a 135°C, 135°C a 150°C, 150°C a -175°C, 175°C a 200°C, 200°C a 225°C, 225°C a 250°C, 250°C a 275°C, -275°C a 300°C, 300°C a 325°C, 325°C a 350°C.

51. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina compreender mover o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação para dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação está estacionário.

52. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina compreender mover o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação e mover o compartimento de reação.

53. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da tira de reagente ser posicionada em uma posição de dispensação movendo-se o dispositivo de suporte de tira de reagente, desse modo movendo-se a tira de reagente para a posição de dispensação ou movendo-se a tira de reagente enquanto o dispositivo de suporte de tira de reagente está estacionário.

54. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender mover o elemento de suporte de lâmina do módulo de reação, mover o compartimento de reação e mover o dispositivo de suporte de tira de reagente, e o compartimento de reação ser móvel independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

55. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina compreender manter o elemento de suporte de lâmina do módulo de reagente estacionário e mover o compartimento de reação para encerrar o elemento de suporte de lâmina.

56. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do compartimento de reação ser móvel, independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente e o dispositivo de suporte de tira de reagente ser móvel independentemente do compartimento de reação.

57. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de mover o dispositivo de suporte de tira de reagente em uma direção para a frente ou inversa, para transportar a tira de reagente em uma direção para a frente ou inversa.

58. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender manter o dispositivo de suporte de tira de reagente estacionário e mover a tira de reagente sobre ele em uma direção para a frente ou inversa.

59. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do módulo de reação compreender pelo menos um de um duto de ar para pressurizar o compartimento de reação ou provocar mistura do reagente sobre a lâmina, um duto de esfriamento para aumentar a taxa de esfriamento do elemento de aquecimento após o aquecimento, um orifício de suprimento para suprir um líquido ao elemento de suporte de lâmina e um duto de drenagem para remover reagentes supridos à lâmina de microscópio.

60. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender suprir reagente pela tira de reagente para dentro do compartimento de reação, via um conduto de reagente do módulo de reação.

61. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender aquecer o conduto de reagente para aquecer o reagente suprido através dele.

62. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender aquecer o compartimento de reação.

63. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender aquecer a tira de reagente ou partes dela, empregando-se um dispositivo de aquecimento no dispositivo de suporte de tira de reagente.

64. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender dispensação uma solução em uma cavidade do elemento de suporte de lâmina embaixo da lâmina de microscópio e aquecer a solução dentro da cavidade.

65. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato do elemento da dispensação ser operável independentemente do dispositivo de suporte de tira de reagente.

66. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender a utilização do elemento da dispensação para dispensar um reagente ou solução de uma fonte de reagente ou solução remota da tira de reagente.

67. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender aplicar reagente pela tira de reagente ou reagente ou solução de uma fonte remota, quando o elemento de suporte de lâmina estiver disposto dentro ou fora do compartimento de reação.

68. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender aplicar sucção, ou líquido, ar ou gás sob pressão à lâmina de microscópio via o elemento da dispensação, para provocar remoção de um reagente ou solução da lâmina de microscópio.

69. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato da etapa de posicionar o elemento de suporte de lâmina dentro do compartimento de reação ocorrer movendo-se o elemento de suporte de lâmina para dentro do compartimento de reação ou movendo-se o compartimento de reação próximo do elemento de suporte de lâmina, desse modo encerrando o elemento de suporte de lâmina dentro do compartimento de reação.

70. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de inclinar o elemento de suporte de lâmina, para permitir drenagem do reagente ou solução da lâmina de microscópio.

71. Método para tratar uma lâmina de microscópio, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selar a lâmina de microscópio; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação; pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que exceda a pressão atmosférica; e acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação está pressurizado e o reagente seja suprido em uma pressão que excede a pressão dentro do compartimento de reação.

72. Método de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de compreender aquecer a lâmina de microscópio e reagente dentro do compartimento de reação.

73. Método para tratar uma lâmina de microscópio, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer um pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação, para selar a lâmina de microscópio nele; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação e encerrar a lâmina de microscópio ali; acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação; e pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que exceda a pressão atmosférica.

74. Método de acordo com a reivindicação 73, caracterizado pelo fato de compreender aquecer a lâmina de microscópio e reagente dentro do compartimento de reação.

75. Método para tratar uma lâmina de microscópio, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer um módulo de reagente compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; e um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selagem da lâmina de microscópio nele; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar o elemento de suporte de lâmina e lâmina de microscópio sobre ele, dentro do compartimento de reação; pressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que excede a pressão atmosférica; e dispor um reagente sobre a lâmina de microscópio, enquanto o compartimento de reação é pressurizado.

76. Método de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de compreender a etapa adicional de aquecer a lâmina de microscópio e o reagente sobre ela.

77. Método para tratar uma lâmina de microscópio, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação para selagem da lâmina de microscópio nele; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação; despressurizar o compartimento de reação para manter uma pressão interna que é menor do que a pressão atmosférica; e acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação, enquanto o compartimento de reação é despressurizado.

78. Método para tratar uma lâmina de microscópio, caracterizado pelo fato de compreender: fornecer uma pluralidade de módulos de reação independentemente operáveis, cada módulo de reação compreendendo: um compartimento de reação tendo um espaço interno; um elemento de suporte de lâmina capaz de suportar uma lâmina de microscópio em uma posição horizontal, o elemento de suporte de lâmina posicionável dentro ou adjacente ao espaço interno do compartimento de reação, para selagem da lâmina de microscópio nele; e um elemento da dispensação para dispensar um reagente dentro do compartimento de reação; dispor a lâmina de microscópio sobre o elemento de suporte de lâmina; posicionar a lâmina de microscópio dentro do compartimento de reação e encerrar a lâmina de microscópio nele; acionar o elemento da dispensação para fazer com que o reagente seja suprido dentro do compartimento de reação e despressurizar o compartimento de reação pra manter uma pressão interna que é menor do que a pressão atmosférica.

79. Tira de dispensação de reagente reconfigurável, caracterizada pelo fato de compreender uma pluralidade de módulos de reagente, cada módulo de reagente compreendendo um ladrilho e um recipiente de reagente preso nele, cada módulo de reagente adaptado para ser fixável a e separável de um módulo de reagente adjacente, de modo que, uma vez a pluralidade de módulos de reagente sejam fixados entre si em uma primeira seqüência, um ou mais dos módulos de reagente podem ser separados e religados para reconfigurar a pluralidade de módulos de reagente em uma segunda seqüência, diferente da primeira seqüência.

80. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 79, caracterizada pelo fato de compreender ainda um elo de conexão para conectar módulos de reagente adjacentes.

81. Tira de dispensação de reagente reconfigurável 79, caracterizada pelo fato do módulo de reagente compreender ainda um injetor para possibilitar que um reagente, dentro do recipiente de reagente, seja dispensado pelo recipiente de reagente.

82. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 79, caracterizada pelo fato do recipiente de reagente ser removível do ladrilho.

83. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 79, caracterizada pelo fato de pelo menos um dos recipientes de reagente conter um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não-iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in-situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos; reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquosos e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.

84. Tira de dispensação de reagente reconfigurável, caracterizada pelo fato de compreender uma base, uma pluralidade de plataformas de recipiente e uma pluralidade de recipientes de reagente, com cada plataforma de recipiente tendo um recipiente de reagente preso nela, em que cada recipiente de reagente é adaptado para ser fixável a e separável da plataforma de recipiente, de modo que, uma vez a pluralidade de recipientes de reagente estejam ligados entre si em uma primeira seqüência, um ou mais dos recipientes de reagente podem ser separados e religados a uma diferente plataforma de recipiente, para reconfigurar a pluralidade de recipientes de reagente em uma segunda seqüência diferente da primeira seqüência, desse modo formando uma tira de dispensação de reagente reconfigurada.

85. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 84, caracterizada pelo fato do recipiente de reagente ser posicionado em um ladrilho, que é separável da base.

86. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 84, caracterizada pelo fato do recipiente de reagente ou plataforma de recipiente compreender ainda um injetor para possibilitar que um reagente, dentro do recipiente de reagente, seja dispensado pelo recipiente de reagente.

87. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 84, caracterizada pelo fato de pelo menos um dos recipientes de reagente conter um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não iônicos, e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não aquoso e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.

88. Tira de dispensação de reagente reconfigurável, caracterizada pelo fato de compreender uma pluralidade de módulos de reagente, cada módulo de reagente compreendendo um ladrilho e um recipiente de reagente preso nele, em que os ladrilhos são inicialmente construídos em uma configuração unitária, integral e cada ladrilho é adaptado para ser fixável a e separável de um ladrilho adjacente, de modo que os módulos de reagente sejam conectados em uma primeira seqüência e, quando um ou mais dos ladrilhos forem separados, o um ou mais ladrilhos podem ser religados para reconfigurar a pluralidade de módulos de reagente em uma segunda seqüência diferente da primeira seqüência.

89. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 88, caracterizada pelo fato de compreender ainda um elo conectante para reconectar ladrilhos de módulos de reagente adjacentes.

90. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 88, caracterizada pelo fato do módulo de reagente compreender ainda um injetor para possibilitar que um reagente dentro do recipiente de reagente seja dispensado pelo recipiente de reagente.

91. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 88, caracterizada pelo fato do recipiente de reagente ser removível do ladrilho.

92. Tira de dispensação de reagente reconfigurável de acordo com a reivindicação 88, caracterizada pelo fato de pelo menos um dos recipientes de reagente conter um reagente selecionado do grupo consistindo de reagentes de recuperação de antígeno, sondas de RNA e DNA, tampão de citrato, EDTA, TRIS, PBS, com ou sem tensoativos ou detergentes como SDS, Tween, Brij, detergentes iônicos e não iônicos e aditivos de silicone, tampões de enxágüe, reagentes imuno-histoquímicos, reagentes histoquímicos, reagentes de hibridização in situ, reagentes PCR, reagentes de sobrelâmina, óleos de silicone, óleos minerais, reagentes de detecção e reagentes de processamento, reagentes líquidos, reagentes secos reconstituídos, reagentes biológicos e reagentes aquosos e não-aquoso e composições desparafinizantes de água com um ou mais tensoativos de silicone ou aditivos de silicone.