BRPI0610278A2 - compostos e composições como inibidores de proteìna cinase - Google Patents

Abstract

A invenção fornece uma nova classe de compostos, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos de empregar tais compostos para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios associados com atividade de cinase desregulada ou anormal, particularmente doenças ou distúrbios que compreendem a ativação anormal de AbI, Bcr-Abi, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKK<sym>, lKK<225>, JNK1<sym>1, JNK2<sym>2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p7OS6K, PAK2, PDGFR<sym>, PKA, PKC<sym>, PKD2, ROCK-lI, Ros, Rskl, SAPK2<sym>, SAPK2<225>, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e TrkB cinases.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS-TOS E COMPOSIÇÕES COMO INIBIDORES DE PROTEÍNA CINASE".

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Campo da Invenção

A invenção refere-se a uma nova classe de compostos, compo-sições farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos de empre-gar tais compostos para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios associadosa atividade de cinase desregulada ou anormal, particularmente doenças oudistúrbios que compreendem ativação anormal de Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKcc, IKKp, JNK1a1, JNK2cc2,Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRoc, PKA, PKCcc, PKD2,ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2B, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 eTrkB cinases.

Antecedentes

As proteínas cinases representam uma ampla família de proteí-nas que desempenham um papel central na regulação de uma ampla varie-dade de processos celulares e mantêm o controle sobre a função celular.Uma parcial, não limitante, lista destas cinases inclui: tirosinas cinases re-ceptoras tais como cinase receptora do fator de crescimento derivado daplaqueta (PDGF-R), receptor do fator de crescimento nervoso, trkB, Met, ereceptor do fator de crescimento de fibroblastos, FGFR3; tirosinas cinasesnão receptoras tal Abi e a cinase de fusão BCR-Abl, Lck, Csk, Fes, Bmx e c-src; e serina/treonina cinases tal como c-RAF, sgk, MAP (por exemplo,MKK4, MKK6, etc.) e SAPK2oc, SAPK2B e SAPK3 cinases. A atividade decinase anormal foi observada em muitos estados de doença incluindo distúr-bios proliferativos malignos e benignos bem como doenças resultantes deativação inapropriada dos sistemas nervoso e imune.

Os novos compostos desta invenção inibem a atividade de umaou mais proteínas cinases e são, portanto, esperados ser úteis no tratamen-to de doenças associadas com cinase.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um aspecto, a presente invenção fornece compostos daFórmula I:

na qual:

n é selecionado de 0,1 e 2;

m é selecionado de 0, 1 e 2;

Yi é selecionado de N e CR5; em que R5 é selecionado dehidrogênio e Ci-6alquila;

Y2 é selecionado de O e S;

Ri é selecionado de hidrogênio e Ci.6alquila;

R2 é selecionado de hidrogênio e Ci.6alquila;

R3 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-6alquila, Ci-6alcóxi, Ci.6alquila substituída por halo e d.6alcóxi substituído por halo;

R4 é selecionado de -NR5C(0)R6 e -C(0)NR5R6; em que R5 éselecionado de hidrogênio e Ci-6alquila; em que R6 é selecionado de C6-10aril-Co-4alquila, C5.i0heteroaril-Co-4alquila, C3-ioCicloalquil-C0-4alquila e C3-10heterocicloalquil-C0-4alquila; em que qualquer arila, heteroarila, cicloalquilaou heterocicloalquila de Re é opcionalmente substituído com de 1 a 3 radi-cais selecionados de halo, hidróxi, -NR5R5, C-i-6alquila, C-i-6alcóxi, Ci-6alquilasubstituída por halo, Ci.6alcóxi substituído por halo C5.ioheteroarilCo-4alquila,C3.8heterocicloCo-4alquila e C3.8heterocicloCo-4alcóxi; em que qualquer hete-roarila ou heterocicloalquila substituinte de R6 é opcionalmente substituídopor de 1 a 3 radicais independentemente selecionados de Ci-6alquila e hi-dróxi-Ci-6alquila;

R7 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci.6alquila, Ci-6alcóxi, Ci.6alquila substituída por halo, Ci-6alcóxi substituído por halo, C6-ioaril-C0-4alquila, Csooheteroaril-Co^alquila, C3-ioCicloalquil-C0-4alquila e C3.i0heterocicloalquil-C0-4alquila; e os derivados de N-óxido, derivados de pró-fármaco, derivados protegidos, isômeros individuais e mistura de isômerosdestes; e os sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos (por exemplo hi-dratos) de tais compostos.

Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece umacomposição farmacêutica que contém um composto da Fórmula I ou um de-rivado de N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros destes; ou umsal farmaceuticamente aceitável destes, uma mistura com um ou mais exci-pientes adequados.

Em um terceiro aspecto, a presente invenção fornece um méto-do de tratar uma doença em um animal no qual a inibição da atividade decinase, particularmente Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC,Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKp, JNK1a1, JNK2oc2, Lck, Met, MKK4, MKK6,p70S6K, PAK2, PDGFRoc, PKA, PKCcc, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1,SAPK2a, SAPK2a, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e/ou atividade de TrkB,pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ou sintomalogia das doenças,método que compreende administrar ao animal uma quantidade terapeuti-camente eficaz de um composto da Fórmula I ou um Derivado de N-óxido,isômeros individuais e mistura de isômeros destes, ou um sal farmaceutica-mente aceitável destes.

Em um quarto aspecto, a presente invenção fornece o empregode um composto da Fórmula I na fabricação de um medicamento para trataruma doença em um animal no qual a atividade de cinase, particularmenteatividade de Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FG-FR3, Flt3, IKKa, IKKp, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K,PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a,SAPK2P, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e/ou TrkB, contribui para a pato-logia e/ou sintomalogia da doença.

Em um quinto aspecto, a presente invenção fornece um proces-so para preparar compostos da Fórmula I e o derivado de N-óxidos, deriva-dos de pró-fármaco, derivados protegidos, isômeros individuais e mistura deisômeros destes, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃODefinições

"Alquila" como um grupo e como um elemento estrutural de ou-tros grupos, por exemplo alquila e alcóxi substituídos por halo, pode ser decadeia reta ou ramificada. Ci-4-alcóxi inclui, metóxi, etóxi, e similares. Alquilasubstituída por halo inclui trifluorometila, pentafluoroetila, e similares.

"Arila" significa um grupo de anel aromático bicíclico fundido oumonocíclico contendo de seis a dez átomos de carbono de anel. Por exem-plo, arila pode ser fenila ou naftila, preferivelmente fenila. "Arileno" significaum radical divalente derivado de um grupo arila.

"Heteroarila" é como definido para arila acima onde um ou maisdos membros de anel é um heteroátomo. Por exemplo a heteroarila incluipiridila, indolila, indazolila, quinoxalinila, quinolinila, benzofuranila, benzopi-ranila, benzotiopiranila, benzo[1,3]dioxol, imidazolila, benzo-imidazoüla, piri-midinila, furanila, oxazolila, isoxazolila, triazolila, tetrazolila, pirazolila, tienila,etc.

"Cicloalquila" significa um grupo de anel policíclico em ponte,monocíclico ou bicíclico fundido, saturado ou parcialmente insaturado con-tendo o número de átomos de anel indicado. Por exemplo, C3-ioCicloalquilainclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, etc.

"Heterocicloalquila" significa cicloalquila, como definido nestepedido, contanto que um ou mais dos carbonos de anel indicados, sejamsubstituídos por uma porção selecionada de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-,-S(O)- ou -S(0)2-, em que R é hidrogênio, Ci-4alquila ou um grupo de prote-ção de nitrogênio. Por exemplo, C3.8heterocicloalquila quando empregadoneste pedido para descrever os compostos da invenção inclui morfolino, pir-rolidinila, pirrolidinil-2-ona, piperazinila, piperidinila, piperidinilona, 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ila, etc.

"Halogênio" (ou halo) preferivelmente representa cloro ou fluoro,porém pode também ser bromo ou iodo.

"Painel de Cinase" é uma lista de cinases compreendendo Abi(humano), Abl(T315l), JAK2, JAK3, ALK, JNK1a1, ALK4, KDR, Aurora-A,Lck, Blk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rato), Met,CDK1/ciclinaB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRa, CK2, PDK1, c-kit,Pim-2, c-RAF, PKA(h), CSK, PKBa, cSrc, PKCa, DYRK2, Plk3, EGFR,ROCK-I, Fes, Ron, FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms, SGK, Fyn, SIK,GSK3P, Syk, IGF-1R, Tie-2, IKKp\ TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK,AMPK(rato), LIMK1, Rsk2, Axl, LKB1, SAPK2p, BrSK2, Lyn (h), SAPK3,BTK, MAPKAP-K3, SAPK4, CaMKIV, MARK1, Snk, CDK2/ciclinaA, MINK,SRPK1, CDK3/ciclinaE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MKK6(h), TBK1,CDK6/ciclinaD3, MLCK, TrkA, CDK7/ciclinaH/MAT1, MRCKp, TSSK1, CHK1,MSK1, Yes, CK1d, MST2, ZIPK, c-Kit (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2,DDR2, NEK6, DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1Ba, EphA1, PDGFRp, EphA2,Pim-1, EphA5, PKBp, EphB2, PKCpl, EphB4, PKC5, FGFR1, PKCr), FGFR2,PKC6, FGFR4, PKD2, Fgr, PKG10, Flt1, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret, IK-Ka, RIPK2, IRR, ROCK-ll(humano), JNK2a2, Rse, JNK3, Rsk1(h), PI3 Ky,PI3 Kô e PI3-KJ3. Os compostos da invenção são analisados contra o painelde cinase (tipo silvestre e/ou mutação deste) e inibir a atividade de pelo me-nos um dos referidos membros do painel.

"Formas mutantes de BCR-Abl" significam alterações de amino-ácido único ou múltiplo da seqüência tipo silvestre. As mutações em BCR-ABL agem rompendo-se pontos de contato críticos entre a proteína e o inibi-dor (por exemplo, Gleevec, e similares), mais freqüentemente, induzindo-seuma transição do inativo ao estado ativo, isto é a uma conformação a qualBCR-ABL e Gleevec são incapazes de ligarem-se. Da análise de amostrasclínicas, o repertório de mutações encontrado em associação com ós fenóti-pos resistentes foi vagarosamente aumentado porém inexorável ao longo dotempo. As mutações parecem agrupar-se em quatro regiões principais. Umgrupo de mutações (G250E, Q252R, Y253F/H, E255KA/) inclui aminoácidosque formam o anel de ligação de fosfato para ATP (também conhecido comoo anel-P). Um segundo grupo (V289A, F311L, T315I, F317L) pode ser en-contrado no sítio de ligação de Gleevec e interage diretamente com o inibi-dor por meio de ligações de hidrogênio ou interações de Van der Waals. Oterceiro grupo de mutações (M351T, E355G) agrupa-se na proximidade fe-chada ao domínio catalítico. O quarto grupo de mutações (H396R/P) estálocalizado no anel de ativação, cuja conformação é a ativação/inativação dacinase de controle de mudança molecular. As mutações de ponto de BCR-ABL associadas com a resistência de Gleevec detectada em pacientes CMLe ALL incluem: M224V, L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, Y253H,Y253F, E255K, E255V, D276G, T277A, V289A, F311L, T315I, T315N,F317L, M343T, M315T, E355G, F359V, F359A, V379I, F382L, L387M,L387F, H396P, H396R, A397P, S417Y, E459K, e F486S (posições de ami-noácido, indicadas pela letra código única, são aquelas para a seqüênciaGenBank, número de acesso AAB60394, e correspondem a ABL tipo 1a;Martinelli e outros, Haematologica/The Hematology Journal, 2005, Abril; 90-4). A não ser que de outro modo estabelecido para esta invenção, Bcr-Ablrefere-se às formas mutantes e tipo silvestre da enzima.

"Tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se a um método dealiviar ou abrandar uma doença e/ou seus sintomas acompanhantes.

Descrição das Modalidades Preferidas

BCR-Abl de proteína de fusão é um resultado da translocaçãorecíproca que funde o Abi proto-Oncogene com o gene Bcr. BCR-Abl é emseguida capaz de transformar células B através do aumento da atividademitogênica. Este aumento resulta em uma redução da sensibilidade a apop-tose, bem como altera a adesão e a orientação de células progenitoras deCML. A presente invenção fornece compostos, composições e métodos parao tratamento de doença relacionada com a cinase, particularmente doençasrelacionadas com Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes,FGFR3, Flt3, IKKa, IKKp\ JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6,p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1,SAPK2a, SAPK2p\ SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e TrkB cinase. Por e-xemplo, leucemia e outros distúrbios de proliferação relacionados a BCR-Ablpodem ser tratados através da inibição de formas mutantes e tipo silvestrede Bcr-Abl.

Em uma modalidade, com referência aos compostos da FórmulaI, são compostos da Fórmula Ia:<formula>formula see original document page 8</formula>

na qual:

n é selecionado de O e 1;

Yi é selecionado de N e CH;

Y2 é selecionado de O e S;

Ri é selecionado de hidrogênio e C-i-6alquila;

R2 é selecionado de hidrogênio e C-i-6alquila;

R3 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-6alquila, Çi-6alcóxi, Ci-6alquila substituída por halo e Ci-6'alcóxi substituído por halo;

R4 é selecionado de -NR5C(0)R6 e -C(0)NR5R6; em que R5 éselecionado de hidrogênio e Ci.6alquila; e em que R6 é selecionado de C6-ioaril-Co-4alquila, C5.10heteroaril-Co-4alquila, C3-ioCicloalquil-Co-4alquila e C3.10heterocicloalquil-Co-4alquila; em que qualquer arila, heteroarila, cicloalquilaou heterocicloalquila de R6 é opcionalmente substituído com de 1 a 3 radi-cais selecionados de halo, hidróxi, -NR5R5. Ci.6alquila, Ci-6alcóxi, Ci-6alquilasubstituída por halo, Ci-6alcóxi substituído por halo C5-ioheteroarilCo-4alquila,C3-8heterocicloC0-4alquila e C3-8heterocicloC0-4alcóxi; em que qualquer hete-roarila ou heterocicloalquila substituinte de Rô é opcionalmente substituídopor de 1 a 3 radicais independentemente selecionados de Ci-6alquila e hi-dróxi-Cvealquila.

Em outra modalidade, R2 é selecionado de hidrogênio e metila; e

R3 é selecionado de metila e metóxi.

Em outra modalidade, R4 é selecionado de -NHC(0)R6 e

-C(0)NHR6; em que R6 é selecionado de fenila opcionalmente substituídacom de 1 a 3 radicais selecionados de trifluorometila, dimetil-amino, imidazo-lila, morfolino, morfolino-metila, piperazinila, piperazinil-metila e pirrolidinil-metóxi; em que a referida imidazolila, piperazinila, piperazinil-metila, é op-cionalmente substituída com um grupo selecionado de metila, etila e hidroxi-etila.

Os compostos preferidos da invenção são selecionados de: N-[4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo [2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-benzamida; 4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirro-lo [2,3-d] pirimidin-4-il)-ureído]-N-(4-piperazin-1-ilmetil-3-trifluorometil-fenil)-benzamida; 3-(4-Metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; N-[4-Metil-3-(2-7H-pir-rolo[2,3-d] pirimidin-4-il-acetilamino)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida; N-(3-lmidazol-1-il-5-trifluorometil-fenil)-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimi-din-4-il)-ureído]-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimi-din-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; 4-(2-Metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-meti1-3-(7H-pirrolo[2,3-d]piYimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureí-do]-fenil}-4-morfolin-4-il-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-morfolin-4-ilmetil-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-tri-fluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-3-trifluorometil-benzamida; 4-(4-etil-pi-perazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]piri-midin-4-il)-ureído]-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluorometil-benzamida;3-dimetilamino-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benza-mida; 3-(4-Etil-piperazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimi-din-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; 4-Metil-N-[3-(4-metil-imida-zol-1-il)-5-trifluorometil-fenil]-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureí-do]-benzamida; 3-[4-(2-Hidróxi-etil)-piperazin-1-il]-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; N-{4-Me-til-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-piperazin-1-il-5-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-(pirrolidin-2-ilmetóxi)-5-trifluorometil-benzamida; N-{3-Metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ure^fluorometil-benzamida; N-{3-Metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{3-metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; N-{3-Metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorome-til-benzamida; e N-{3-Metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(2-metil-imidazol-1-il)-3-trifluorometil-benzamida.

Outros compostos preferidos da invenção são detalhados nos E-xemplos e na Tabela I, infra.

Farmacologia e Utilidade

Os compostos da invenção modulam a atividade de cinases e,como tal, são úteis para tratar doenças ou distúrbios nos quais as cinases,contribuem para a patologia e/ou sintomalogia da doença. Os exemplos decinases que são inibidas pelos compostos e composições descritos aqui econtra os quais os métodos descritos aqui são úteis incluem, porém não sãolimitados a, Abi e Bcr-Abl.

Abelson tirosina cinase (isto é, Abi, c-Abl) está envolvida na regu-lação do ciclo celular, na resposta celular ao estresse genotóxico, e natransmissão de informação em torno do ambiente celular através da sinali-zação de integrina. Geralmente, parece que a proteína Abi desempenha umpapel complexo como um módulo celular que integra sinais de várias fontesextracelulares e intracelulares e que influencia as decisões quanto ao ciclocelular e apoptose. Abelson tirosina cinase inclui os derivados de subtipos talcomo BCR-Abl de fusão quimérica (oncoproteína) com atividade de tirosinacinase desregulada ou v-Abl. BCR-Abl é crítica na patogenese de 95% deleucemia mielógena crônica (CML) e 10% de leucemia linfocítica aguda. STI-571 (Gleevec) é um inibidor da BCR-Abl tirosina cinase oncogênica e é em-pregado para o tratamento de leucemia mielóide crônica (CML). Entretanto,alguns pacientes no crise blástica de CML são resistentes a STI-571 devidoas mutações na BCR-Abl cinase. Durante 22 mutações foi relatado até agoracom o mais comum sendo G250E, E255V, T315I, F317L e M351T.

Os compostos da presente invenção inibem a cinase de abi, es-pecialmente a cinase de v-abl. Os compostos da presente invenção tambéminibem a BCR-Abl cinase tipo silvestre e as mutações da BCR-Abl cinase esão desse modo adequados para o tratamento de câncer Bcr-abl-positivo edoenças de tumor, tais como leucemias (especialmente leucemia mielóidecrônica e leucemia linfoblástica aguda, onde especialmente os mecanismosapoptóticos de ação são encontrados), e também exibem efeitos sobre osub-grupo de células tronco leucêmicas bem como potencial para a purifica-ção destas células in vitro após a remoção das referidas células (por exem-plo, remoção da medula óssea) e reimplantação das células uma vez queelas foram clareadas de células de câncer (por exemplo, reimplantação decélulas da medula óssea purificadas).

A trilha de sinalização dé Ras-Raf-MEK-ERK media a respostacelular para sinais de crescimento. Ras é mutada para uma forma oncogêni-ca em -15% de câncer humano. A família Raf pertence à serina/treoninaproteína cinase e inclui três membros, A-Raf, B-Raf e c-Raf (ou Raf-1). Ofoco sobre Raf sendo um alvo de fármaco centralizado na ligação de Rafcomo um efetor a jusante de Ras. Entretanto, dados recentes sugerem queB-Raf pode possuir um papel proeminente na formação de certos tumoressem nenhuma exigência para um alelo de Ras ativado (Nature 417, 949 -954 (01 Julho 2002). Em particular, as mutações de B-Raf foram detectadasem uma grande porcentagem de melanomas malignos.

Os tratamentos médicos existentes para melanoma são limita-dos em sua eficácia, especialmente para melanomas de último estágio. Oscompostos da presente invenção também inibem os processos celulares en-volvendo a b-Raf cinase, fornecendo uma nova oportunidade terapêuticapara o tratamento de cânceres humanos, especialmente para melanoma.

Os compostos da presente invenção também inibem os proces-sos celulares envolvendo a c-Raf cinase. c-Raf é ativado pelo oncogene deras, o qual é mutado em um amplo número de cânceres humanos. Portantoa inibição da atividade de c-Raf cinase pode fornecer uma forma de prevenircrescimento de tumor mediado por ras [Campbell, S. L, Oncogene, 17, 1395 (1998)].

PDGF (Fator de Crescimento Derivado de Plaqueta) é um fatorde crescimento de ocorrência muito comum, que desempenha um papel im-portante igualmente em crescimento normal e também na proliferação celu-lar patológica, tal como visto em carcinogenese e em doenças das célulasdo músculo liso de vasos sangüíneos, por exemplo em aterosclerose etrombose. Os compostos da invenção podem inibir a atividade receptora dePDGF (PDGFR) e são, portanto, adequados para o tratamento de doençasde tumor, tais como gliomas, sarcomas, tumores de próstata, e tumores docólon, mama e ovário.

Os compostos da presente invenção, podem ser empregadosnão apenas como uma substância de inibição de tumor, por exemplo emcâncer de pulmão de célula pequena, porém também como um agente paratratar distúrbios proliferativos não malignos, tais como aterosclerose, trom-bose, psoríase, escleroderma e fibrose, bem como para a proteção de célu-las-tronco, por exemplo para combater o efeito hemotóxico de agentes qui-mioterapêuticos, tal como 5-fluoruracila, e em asma. Os compostos da in-venção podem especialmente ser empregados para o tratamento de doen-ças, que respondem a uma inibição da cinase receptora de PDGF.

Os compostos da presente invenção exibem efeitos úteis no tra-tamento de distúrbios surgindo como um resultado de transplante, por e-xemplo, transplante alogenico, especialmente rejeição de tecido, tal comoespecialmente bronquiolite obliterativa (OB), isto é, uma rejeição crônica detransplantes de pulmão alogênicos. Em contraste aos pacientes sem OB,aqueles com OB freqüentemente exibem uma concentração elevada dePDGF em fluidos de lavagem broncoalveolar.

Os compostos da presente invenção são também eficazes emdoenças associadas à proliferação e migração celular de músculo liso vascu-lar (onde PDGF e PDGF-R freqüentemente também desempenham o papel),tal como restenose e aterosclerose. Estes efeitos e as conseqüências destespara a proliferação ou migração de células de músculo liso vascular in vitro ein vivo podem ser demonstrados por administração dos compostos da pre-sente invenção, e também investigando-se seu efeito sobre o espessamentoda íntima vascular após lesão mecânica in vivo.

A família trk de receptores neurotrofina (trkA, trkB, trkC) promovea sobrevivência, crescimento e diferenciação dos tecidos neuronais e nãoneuronais. A proteína de TrkB é expressa em células tipo neuroendócrinasno cólon e intestino pequeno, nas células alfa do pâncreas, nos monócitos emacrófagos dos linfonodos e do baço, e nas camadas granulares da epider-me (Shibayama and Koizumi, 1996). A expressão da proteína de TrkB foiassociada a uma progressão desfavorável de tumores de Wilms e de neuro-blastomas. TkrB é, além disso, expresso nas células da próstata cancerosasporém não em células normais. A trilha de sinalização a jusante dos recepto-res de trk envolve a cascata de ativação de MAPK através de genes de Shc,Ras ativado, ERK-1 e ERK-2, e a trilha de transdução PLC-gamal (Sugimotoe outros, 2001).

A c-Src cinase transmite sinais oncogênicos de muitos recepto-res. Por exemplo, a super-expressão de EGFR ou HER2/neu em tumoresinduz à ativação constitutiva de c-src, que é característica para a célula ma-ligna porém ausente da célula normal. Por outro lado, camundongos defici-entes na expressão de c-src exibem um fenótipo osteopetrotico, indicandouma participação chave de c-src na função de osteoclasto e um possívelenvolvimento em distúrbios relacionados.

A cinase da família de Tec, Bmx, uma proteína-tirosina cinasenão receptora, controla a proliferação de células de câncer epitelial mamárias.

O receptor 3 de fator de crescimento de fibroblasto mostrou e-xercer um efeito regulatório negativo sobre o crescimento ósseo e uma inibi-ção da proliferação de condrócito. A displasia tanatoforica é causada pordiferentes mutações no receptor 3 de fator de crescimento de fibroblasto, euma mutação, TDM FGFR3, possui uma atividade de tirosina cinase constitu-tiva que ativa o fator de transcrição Stat 1, induzindo a expressão de inibidorde ciclo celular, desenvolvimento ósseo anormal e interrupção de crescimen-to (Su e outros, Nature, 1997, 386, 288-292). FGFR3 é também freqüente-mente expresso em cânceres tipo mieloma múltiplo. Os inibidores da ativi-dade de FGFR3 são úteis no tratamento de doenças autoimunes ou inflama-tórias mediadas por célula T incluindo porém não limitado a artrite reumatói-de (RA), artrite de colágeno II, esclerose múltipla (MS), lúpus eritematososistêmico (SLE), psoríase, diabetes de início juvenil, doença de Sjogren, do-ença de tiróide, sarcoidose, uveíte autoimune, doença do intestino inflamató-ria (colite ulcerativa e de Crohn), doença celiaca e miastenia grave.

A atividade de cinase regulada por glucocorticóide e soro (SGK),é correlacionada às atividades de canal de íon perturbadas, em particular,aquelas de canais de potássio e/ou sódio e compostos da invenção podemser úteis para tratar hipertensão.

Lin e colaboradores (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 eP. Lin (1998) PNAS 95, 8829-8834, exibiram uma inibição de crescimento detumor e vascularização e também uma diminuição nas metastases de pul-mão durante infecções adenovirais ou durante injeções do domínio extrace-lular de Tie-2 (Tek) em tumor de mama e modelos de xenoenxerto de mela-noma. Os inibidores de Tie2 podem ser empregados em situações onde aneovascularização ocorre inapropriadamente (isto é, em retinopatia diabéti-ca, inflamação crônica, psoríase, sarcoma de Kaposi, neovascularizaçãocrônica devido a degeneração macular, artrite reumatóide, cânceres e he-mangioma infantil).

Lck desempenha um papel na sinalização celular T. Camundon-gos que precisam do gene Lck possuem uma capacidade pobre para desen-volver timócitos. A função de Lck como um ativador positivo de sinalizaçãode célula T sugere que os inibidores de Lck podem ser úteis para tratar do-ença autoimune tal como artrite reumatóide.

JNKs, junto com outros MAPKs, implicaram em ter um papel demediar a resposta celular para câncer, agregação de plaqueta induzida portrombina, distúrbios de imunodeficiência, doenças autoimunes, morte celular,alergias, osteoporose e doença do coração. Os alvos terapêuticos relaciona-dos a ativação da trilha JNK incluem leucemia mielogenosa crônica (CML),artrite reumatóide, asma, osteoartrite, isquemia, câncer e doenças neurode-generativas. Como um resultado da importância da ativação de JNK associ-ada com doença de fígado ou episódios de isquemia hepática, os compostosda invenção podem também ser úteis para tratar vários distúrbios hepáticos.Um papel para JNK na doença cardiovascular tal como infarto do miocárdioou insuficiência cardíaca congestiva também foi reportado quando ele mos-trou que JNK media respostas hipertróficas para várias formas de estressecardíaco. Foi demonstrado que a cascata de JNK também desempenha umpapel na ativação da célula T, incluindo a ativação do promotor de IL-2. Des-se modo, os inibidores de JNK podem possuir valor terapêutico na alteraçãode respostas imunes patológicas. Um papel para ativação de JNK em várioscânceres foi também estabelecido, sugerindo o emprego potencial de inibi-dores de JNK em câncer. Por exemplo, JNK constitutivamente ativado é as-sociado com tumorigênese ativado por HTLV-1 [Oncogene 13:135-42(1996)]. JNK pode desempenhar Um papel no sarcoma de Kaposi (KS). Ou-tros efeitos proliferativos de outras citocinas implicaram na proliferação deKS, tal como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), IL-6 eTNFa, pode também ser mediado por JNK. Além disso, a regulação do genec-jun em células transformadas por p210 BCR-ABL corresponde a atividadede JNK, sugerindo um papel para os inibidores de JNK no tratamento deleucemia mielogenosa crônica (CML) [Blood 92:2450-60 (1998)].

Certas condições proliferativas anormais acredita-se estaremassociadas a expressão raf e são, portanto, acreditadas ser responsáveispela inibição da expressão raf. Níveis anormalmente elevados da expressãoda proteína de raf são também implicados na transformação e proliferaçãocelular anormal. Estas condições proliferativas anormais são também acredi-tadas ser responsáveis pela inibição da expressão de raf. Por exemplo, aexpressão da proteína de c-raf acredita-se desempenhar um papel na proli-feração celular anormal uma vez que foi reportado que 60% de todas as li-nhagens de célula de carcinoma de pulmão expressam extraordinariamenteníveis elevados de c-raf mRNA e proteína. Outros exemplos de condiçõesproliferativas anormais são distúrbios hiperproliferativos tais como cânceres,tumores, hiperplasia, fibrose pulmonar, angiogênese, psoríase, aterosclerosee proliferação celular de músculo liso nos vasos sangüíneos, tal como este-nose ou restenose após angioplastia. A trilha de sinalização celular desse rafé uma parte que foi implicada em distúrbios inflamatórios caracterizados porproliferação de célula T (ativação de célula T e crescimento), tal como rejei-ção a enxerto de tecido, choque de endotóxico e nefrite glomerular, por exemplo.

As proteínas cinases ativadas por estresse (SAPKs) são umafamília de proteínas cinases que representam a penúltima etapa nas trilhasde transduçao de sinal que resultam na ativação do fator de transcrição dec-jun e a expressão de genes regulados por c-jun. Em particular, c-jun estáenvolvido na transcrição de genes que codificam proteínas envolvidas noreparo de DNA que é danificado devido aos insultos genotóxicos. Portanto,agentes que inibem a atividade de SAPK em um DNA de prevenção celularreparam e sensibilizam a célula para agentes que induzem o dano de DNAou inibem a síntese de DNA e induzem a apoptose de uma célula ou queinibem a proliferação celular.

Proteínas cinases ativadas por mitogênio (MAPKs) são membrosde trilhas de transduçao sinal conservadas que ativam os fatores de transcri-ção, fatores de translação e outras moléculas-alvo em resposta a uma varie-dade de sinais extracelulares. MAPKs são ativados por fosforilação em ummotifúe fosforilação dupla tendo a seqüência Thr-X-Tyr por proteína cinasecinases ativadas por mitogênio (MKKs). Em eucariotas superiores, o papelfisiológico de sinalização de MAPK foi correlacionado com eventos celularestal como proliferação, oncogênese, desenvolvimento e diferenciação. Con-seqüentemente, a capacidade de regular a transduçao sinal por meio destastrilhas (particularmente por meio de MKK4 e MKK6) poderia induzir ao de-senvolvimento de tratamentos e terapias preventivas para doenças humanasassociadas com a sinalização de MAPK, tais como doenças inflamatórias,doenças autoimunes e câncer.A família de proteína cinases S6 ribossômica humana consisteem pelo menos 8 membros (RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2,p70S6K e p70S6 Kb). Proteína cinases S6 de proteína ribossômica repre-senta funções pleotrópicas importantes, entre elas está uma papel principalna regulação da translação de mRNA durante a biossíntese de proteína(Eur. J. Biochem 2000 Novembro; 267(21): 6321-30, Exp Cell Res. Nov. 25,1999; 253 (1):100-9, Mol Cell Endocrinol. 25 de maio de 1999;151(1-2):65-77). A fosforilação da proteína ribossômica S6 por p70S6 implicou na regu-lação da motilidade celular (Immunol. Cell Biol. 2000 Agosto;78(4):447-51) ecrescimento celular (Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27), eportanto, pode ser importante na metastase de tumor, a resposta imune ereparo de tecido bem como outras condições de doença.

SAPK's (também chamado "cinases de terminal N de jun" ou"JNK's") são uma família de proteína cinases que representa a penúltimaetapa nas trilhas de transdução sinal que resulta na ativação do fator detranscrição de c-jun e expressão de genes regulada por c-jun. Em particular,c-jun está envolvido na transcrição de genes que codifica as proteínas en-volvidas no reparo de DNA que é danificado devido aos insultos genotóxicos.Os agentes que inibem a atividade de SAPK em um DNA de prevenção celu-lar reparam e sensibilizam a célula para aquelas modalidades terapêuticasde câncer que agem por indução de dano de DNA.

BTK desempenha um papel na doença autoimune e/ou inflama-tória tal como lúpus eritematoso sistêmico (SLE), artrite reumatóide, vasculi-tes múltiplas, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), miastenia grave, easma. Por causa do papel de BTK's na ativação da célula B, os inibidores deBTK são úteis como inibidores da atividade patogênica mediada pela célulaB, tal como produção auto-anticorpo, e são úteis para o tratamento de leu-cemia e linfoma de célula B.

CHK2 é um membro da família de cinase de barreira de seri-na/treonina proteína cinases e é envolvido em um mecanismo empregadopara vigilância de dano de DNA, tal como dano causado por mutagênicosambientais e espécie de oxigênio reativo endogeno. Como um resultado, eleé implicado como um supressor de tumor e alvo para terapia de câncer.

CSK influencia o potencial metastático de células de câncer, par-ticularmente câncer de cólon.

Fes é uma proteína tirosina cinase não receptora que implicouem uma variedade de trilhas de transdução sinal de citocina, bem como adiferenciação de células mielóide. Fes é também um componente principalda maquinaria de diferenciação de granulócito.

A atividade da tirosina cinase receptora de Flt3 é implicada emleucemias e síndrome mielodisplástica. Em aproximadamente 25% de AMLas células de leucemia expressam uma forma constitutivamente ativa de ti-rosina cinase de FLT3 auto-fosforilada (p) sobre a superfície celular. A ativi-dade de p-FLT3 confere vantagem de crescimento e sobrevivência sobre ascélulas leucêmicas. Os pacientes com leucemia aguda, cujas células de leu-cemia expressam atividade de p-FLT3cinase, possuem um resultado clínicoglobal pobre. A inibição da atividade de p-FLT3 cinase induz a apoptose(morte celular programada) das células leucêmicas.

Os inibidores de IKKoc e IKKJ3 (1 & 2) são terapêuticos para do-enças que incluem artrite reumatóide, rejeição a transplante, doença do in-testino inflamatória, osteoartrite, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica,aterosclerose, psoríase, esclerose múltipla, acidente vascular cerebral, lúpuseritematoso sistêmico, mal-de-alzheimer, isquemia cerebral, dano cerebraltraumático, mal-de-Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, hemorragia sub-aracnóide ou outras doenças ou distúrbios associados a produção excessivade mediadores inflamatórios no cérebro e sistema nervoso central.

Met é associado com a maioria dos tipos de cânceres humanosprincipais e a expressão é freqüentemente correlacionada com metastase eprognose pobre. Os inibidores de Met são terapêuticos para doenças queincluem cânceres tais como câncer de pulmão, NSCLC (câncer de pulmãode célula não pequena), câncer ósseo, câncer pancreático, câncer de pele,câncer do pescoço e cabeça, melanoma intraocular ou cutâneo, câncer ute-rino, câncer de ovário, câncer retal, câncer da região anal, câncer de estô-mago, câncer de cólon, câncer de mama, tumores ginecológicos (por exem-pio, sarcomas uterino, carcinoma das trompas de falópio, carcinoma do en-dométrio, carcinoma do cérvix, carcinoma da vagina ou carcinoma da vulva),doença de Hodgkin, câncer do esôfago, câncer do intestino pequeno, câncerdo sistema endócrino (por exemplo, câncer da tiróide, paratiróide ou glându-las supra renais), sarcomas de tecidos moles, câncer da uretra, câncer dopênis, câncer da próstata, leucemia aguda ou crônica, tumores sólidos deinfância, linfomas linfocíticos, câncer da bexiga, câncer do rim ou ureter (porexemplo, carcinoma de célula renal, carcinoma da pélvis renal), malignidadepediátrica, neoplasmos do sistema nervoso central (por exemplo, linfoma doCNS primário, tumores do eixo espinhal, glioma do tronco cerebral ou ade-nomas pituitários), cânceres do sangue tal como leucemia mielóide aguda,leucemia mielóide crônica, etc, doença cutânea neoplástica do esôfago deBarrett (síndrome pre-maligna), psoríase, micoses fungóides e hipertrofiaprostática benigna, doenças relacionadas a diabetes tal como retinopatiadiabética, isquemia retinal e neovascularização retinal, cirrose hepática, do-ença cardiovascular tal como aterosclerose, doença imunológica tal comodoença autoimune e doença renal. Preferivelmente, a doença é câncer talcomo leucemia mielóide aguda e câncer coloretal.

A cinase 2 relacionada com Nima (Nek2) é uma proteína cinaseregulada por ciclo celular com atividade máxima no início da mitose que lo-caliza-se no centrossoma. Estudos funcionais envolveram Nek2 na regula-ção da separação de centrossoma e formação de fuso. A proteína Nek2 éelevada de 2 a 5 vezes em linhagens celulares derivadas de uma variedadede tumores humanos incluindo aqueles de cervical, ovário, próstata e parti-cularmente mama.

As condições ou doenças mediadas por p70S6K incluem, porémnão são limitadas a, distúrbios proliferativos, tais como câncer e esclerosetuberosa.

Existe evidência crescente que a terapia inibidora de cinase ageconsistentemente e seguramente contra cânceres nos quais o alvo de fár-maco de cinase é constitutivamente ativado por mutações de gene. Existemmúltiplos relatos de mutações encontradas em cinases resultantes de umprocesso de seleção de tumor natural. Uma lista não limitante de exemplosdestes incluiria: b-raf V599E mutante em mais de 60% de casos de melano-ma; Flt3-ITD mutantes em 30% de casos de AML; mutações de c-kit em pa-cientes de GIST; PDGFRa em GIST e HES; PDGFRp em CMML; mutantesde Pi3K em cânceres gástricos e de cólon e glioblastomas; e mutantes deEGFR em 10% de cânceres de pulmão (Iressa® responsivo) e em glioblas-tomas.

De acordo com o precedente, a presente invenção também for-nece um método para prevenir ou tratar qualquer uma das doenças ou dis-túrbios descritos acima em um indivíduo em necessidade de tal tratamento,método qual compreende administrar ao referido indivíduo uma quantidadeterapeuticamente eficaz (Ver, "Administration and Pharmaceutical Composi-tions", infra) de um composto da fórmula I ou um sal farmaceuticamente a-ceitável deste. Para qualquer um dos empregos acima, a dosagem requeridavariará dependendo do método de administração, a condição particular a sertratada e o efeito desejado.

Administração e Composições Farmacêuticas

Em geral, os compostos da invenção serão administrados emquantidades terapeuticamente eficazes por meio de qualquer dos métodosaceitáveis e usuais conhecidos na técnica, isoladamente ou em combinaçãocom um ou mais agentes terapêuticos. Uma quantidade terapeuticamenteeficaz pode variar amplamente dependendo da severidade da doença, a i-dade e a saúde relativa do indivíduo, a potência do composto empregado eoutros fatores. Em geral, os resultados satisfatórios são indicados ser obti-dos sistemicamente em dosagens diárias de cerca de 0,03 a 2,5mg/kg porpeso corporal. Uma dosagem diária indicada no mamífero maior, por exem-plo humanos, está na faixa de cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg, conveni-entemente administrado, por exemplo em doses divididas até quatro vezespor dia ou de forma retardada. As formas de dosagem unitária adequadaspara administração oral compreendem de aproximadamente 1 a 50 mg de ingrediente ativo.

Os compostos da invenção podem ser administrados como com-posições farmacêuticas por qualquer rotina convencional, em particular ente-ralmente, por exemplo, oralmente, por exemplo, na forma de comprimidos oucápsulas, ou parenteralmente, por exemplo, na forma de suspensão ou solu-ções injetáveis, topicamente, por exemplo, na forma de loções, géis, un-güentos ou cremes, ou em uma forma de supositório ou nasal. As composi-ções farmacêuticas compreendendo um composto da presente invenção naforma livre ou em uma forma de sal farmaceuticamente aceitável em associ-ação com pelo menos um diluente ou portador farmaceuticamente aceitávelpodem ser fabricadas de uma maneira convencional por métodos de mistu-ra, granulação ou revestimento. Por exemplo, as composições orais podemser comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingrediente ativojunto com a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, manitol,sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, áci-do esteárico, seu sal de cálcio ou magnésio e/ou polietilenoglicol; para com-primidos também c) aglutinantes, por exemplo, silicato de alumínio de mag-nésio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelu-lose de sódio e ou polivinilpirrolidona; se desejado d) desintegrantes, porexemplo, amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efer-vescentes; e/ou e) absorventes, colorantes, aromatizantes e adoçantes. Ascomposições injetáveis podem ser suspensões ou soluções isotônicas aquo-sas e os supositórios podem ser preparados de suspensões ou emulsõesgraxas. As composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, talcomo conservante, estabilizante, agentes umectantes ou emulsificantes,promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões.Além disso, elas podem também conter outras substâncias terapeuticamentevaliosas. As formulações adequadas para aplicações transdérmicas incluemuma quantidade eficaz de um composto da presente invenção com um por-tador. Um portador inclui solventes farmacologicamente aceitáveis absorví-veis para ajudar a passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo,dispositivos transdermicos são na forma de uma bandagem compreendendoum membro de reforço, um reservatório contendo o composto opcionalmentecom portadores, opcionalmente uma barreira de controle de taxa para liberaro composto à pele do hospedeiro em uma taxa predeterminada e controladadurante um período de tempo, e meios de prender o dispositivo à pele. Asformulações transdérmicas de matriz podem também ser empregadas. Asformulações adequadas para aplicação tópica, por exemplo, à pele e olhos,são preferivelmente soluções aquosas, ungüentos, cremes ou géis bem-conhecidos na técnica. Tais podem conter solubilizantes, estabilizantes, a-gentes realçadores de tonicidade, tampões e conservantes.

Os compostos da invenção podem ser administrados em quanti-dades terapeuticamente eficazes em combinação com um ou mais agentesterapêuticos (combinações farmacêuticas). Por exemplo, efeitos sinergísti-cos podem ocorrer com outras substâncias imunomoduladoras ou antiinfla-matórias, por exemplo quando empregadas em combinação com ciclospori-na, rapamicina, ou ascomicina, ou análogos imunossupressivos destes, porexemplo, ciclosporina A (CsA), ciclosporina G, FK-506, rapamicina, ou com-postos comparáveis, corticosteróides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexa-to, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato mofe-til, 15-deoxispergualina, anticorpos imunossupressivos, especialmente anti-corpos monoclonais para receptores de leucócito, por exemplo MHC, CD2,CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58 ou seus ligandos, ou outroscompostos imunomoduladores, tal como CTLA41g. Onde os compostos dainvenção são administrados em conjunto com outras terapias, as dosagensdos compostos co-administrados variará claro dependendo do tipo de co-fármaco empregado, do fármaco específico empregado, da condição sendotratada e assim por diante.

A invenção também fornece combinações farmacêuticas para,por exemplo, um kit compreendendo a) um primeiro agente que é um com-posto da invenção como descrito aqui, na forma livre ou na forma de sal far-maceuticamente aceitável e b) pelo menos um co-agente. O kit pode com-preender instruções para sua administração.

Os termos "co-administração" ou "administração combinada" ousimilares como utilizado aqui são destinados abranger administração dosagentes terapêuticos selecionados a um único paciente, e são destinadosincluir regime de tratamento no qual os agentes não são necessariamenteadministrados pela mesma rotina de administração ou ao mesmo tempo.

O termo "combinação farmacêutica" como empregado aqui signi-fica um produto que resulta da mistura ou combinação de mais do que umingrediente ativo e inclui igualmente combinações fixas e não fixas dos in-gredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientesativos, por exemplo um composto da fórmula I e um co-agente, são igual-mente administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma do-sagem ou entidade única. O termo "combinação não fixa" significa que osingredientes ativos, por exemplo, um composto da fórmula I e um co-agente,são igualmente administrados a um paciente como entidades separadas si-multaneamente, concorrentemente ou seqüencialmente sem nenhum limitede tempo específico, em que tal administração fornece níveis terapeutica-mente eficazes dos 2 compostos no corpo do paciente. O último tambémaplica-se à terapia de coquetel, por exemplo, a administração de 3 ou maisingredientes ativos.

Processos para Preparar os Compostos da Invenção

A presente invenção também inclui processos para a preparaçãode compostos da invenção. Nas reações descritas, pode ser necessário pro-teger grupos funcionais reativos, por exemplo grupos hidróxi, amino, imino,tio ou carbóxi, onde estes são desejados no produto final, para evitar suaparticipação indesejável nas reações. Os grupos de proteção convencionaispodem ser empregados de acordo com a prática padrão, por exemplo, verT.W. Greene and P. G. M. Wuts em "Protective Groups in Organic Chemis-try", John Wiley and Sons, 1991.

Os compostos da Fórmula I podem ser preparados procedendo-se como no seguinte Esquema de Reação I:Esquema de Reação I

<formula>formula see original document page 24</formula>

no qual n, R2, R3, R4, R7, Y1 e Y2 são como definidos no Su-mário da Invenção. Um composto da fórmula I pode ser sintetizado reagindo-se um composto da fórmula 2 com um composto da fórmula 3 na presençade um solvente adequado (por exemplo, diclorometano, e similares) e umabase adequada (por exemplo, diisopropiletilamina, e similares). A reaçãoprocede em uma faixa de temperatura de cerca de 0 °C a cerca de 40 °C epode levar até cerca de 10 horas para ser concluída. A mistura de reação éopcionalmente também reagida para remover quaisquer grupos de proteção.

Exemplos detalhados da síntese de um composto da fórmula Ipodem ser encontrados nos Exemplos, infra.

Processos Adicionais para Preparar os Compostos da Invenção

Um composto da invenção pode ser preparado como um sal deadição de ácido farmaceuticamente aceitável reagindo-se a forma de baselivre do composto com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamenteaceitável. Alternativamente, um sal de adição de base farmaceuticamenteaceitável de um composto da invenção pode ser preparado reagindo-se aforma de ácido livre do composto com uma base orgânica ou inorgânica far-maceuticamente aceitável.

Alternativamente, as formas de sal dos compostos da invençãopodem ser preparadas empregando-se sais dos materiais de partida ou in-termediários.

As formas de base livre ou de ácido livre dos compostos da in-venção podem ser preparadas a partir da correspondente forma de sal deadição de base ou de sal de adição de ácido, respectivamente. Por exemplo,um composto da invenção em uma forma de sal de adição de ácido pode serconvertido à base livre correspondente tratando-se com uma base adequada(por exemplo, solução de hidróxido de amônio, hidróxido de sódio e simila-res). Um composto da invenção em uma forma de sal de adição de base po-de ser convertido ao ácido livre correspondente tratando-se com um ácidoadequado (por exemplo, ácido clorídrico, etc).

Os compostos da invenção na forma não oxidada podem serpreparados de N-óxidos dos compostos da invenção tratando-se com umagente de redução (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenil fosfina,boroidreto de lítio, boroidreto de sódio, tricloreto de fósforo, tribrometo ousimilares) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, acetoni-trilo, etanol, dioxano aquoso ou similares) de 0 a 80°C.

Os derivados de pró-fármaco dos compostos da invenção po-dem ser preparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técni-ca (por exemplo, para outros detalhes ver Saulnier e outros, (1994), Bioor-ganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985). Por exemplo, os pró-fármacos apropriados podem ser preparados reagindo-se um composto dainvenção não derivatizado com um agente de carbamilação adequado (porexemplo, 1,1-aciloxialquilcarbanocloridato, carbonato de para-nitrofenila, ou similares).

Os derivados protegidos dos compostos da invenção podem serpreparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Umadescrição detalhada das técnicas aplicáveis à criação de grupos de proteçãoe sua remoção pode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Groups inOrganic Chemistry", 3" edição, John Wiley and Sons, Inc., 1999.

Os compostos da presente invenção podem ser conveniente-mente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como sol-vatos (por exemplo, hidratos). Os hidratos dos compostos da presente in-venção podem ser convenientemente preparados por recristalizaçao de umamistura de solvente aquosa/orgânica, empregando-se solventes orgânicostal como dioxina, tetraidrofurano ou metanol.

Os compostos da invenção podem ser preparados como seusestereoisomeros individuais reagindo-se uma mistura racemica do compostocom um agente de resolução opticamente ativo para formar um par de com-postos diaestereoisoméricos, separando os diaestereômeros e recuperandoos enantiômeros opticamente puros. Enquanto a resolução dos enantiôme-ros pode ser realizada empregando-se derivados diaestereoméricos cova-lentes dos compostos da invenção, complexos dissociáveis são preferidos(por exemplo, sais diaestereoméricos cristalinos). Os diaestereômeros pos-suem propriedades físicas distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontosde ebulição, solubilidades, reatividade, etc.) e podem ser facilmente separa-dos levando as vantagens destas dissimilaridades. Os diaestereômeros po-dem ser separados por cromatografia, ou preferivelmente, por técnicas deseparação/resolução com base nas diferenças em solubilidade. O enantiô-mero opticamente puro é em seguida recuperado, junto com o agente deresolução, por quaisquer meios práticos que não resultaria em racemização.Uma descrição mais detalhada das técnicas aplicáveis à resolução dos este-reoisômeros dos compostos de sua mistura racêmica pode ser encontradaem Jean Jacques, André Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racematesand Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

Em resumo, os compostos da Fórmula I podem ser preparadospor um processo, que envolve:

(a) aquele do esquema de reação I; e

(b) opcionalmente converter um composto da invenção em umsal farmaceuticamente aceitável;

(c) opcionalmente converter uma forma de sal de um compos-to da invenção em uma forma de não sal;

(d) opcionalmente converter uma forma não oxidada de umcomposto da invenção em um N-óxido farmaceuticamenteaceitável;

(e) opcionalmente converter uma forma de N-óxido de umcomposto da invenção a sua forma não oxidada;

(f) opcionalmente resolver um isômero individual de um com-posto da invenção de uma mistura de isômeros;

(g) opcionalmente converter um composto da invenção nãoderivatizado em um derivado de pró-fármaco farmaceuti-camente aceitável; e

(h) opcionalmente converter um derivado de pró-fármaco deum composto da invenção a sua forma não derivatizada.

A medida que a produção dos materiais de partida não é particu-larmente descrita» os compostos são conhecidos ou podem ser preparadosanalogamente aos métodos conhecidos na técnica ou como descrito nosExemplos a seguir.

Alguém versado na técnica apreciará que as transformaçõesacima são apenas representativas de métodos para a preparação dos com-potos da presente invenção, e que outros métodos bem-conhecidos podemsimilarmente ser empregados.Exemplos

A presente invenção é também exemplificada, porém não limita-da, pelos seguintes exemplos que ilustram a preparação dos compostos da

Fórmula I de acordo com a invenção.

Exemplo1

Síntese de 3-(4-Metil-imidazol-1 -il)-N-(4-metil-3-r3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-dlpirimidin-4-il)-ureídol-fenil)-5-trifluorometil-benzamida.

<formula>formula see original document page 27</formula>4-Cloro-7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolof2,3-dlpirimidina

<formula>formula see original document page 24</formula>

A uma solução de 6-cloro deazapurina (2,0 g, 13 mmols, 1,0 eq.)em diclorometano (65 ml) é adicionado trietilamina (1,98 ml, 14,3 mmols, 1,1eq.) e 4-dimetilamino piridina (catalítico). Cloreto de tosila (2,55 g, 13,4mmols, 1,03 eq.) é adicionado em porções na mistura de reação que é tam-bém equilibrada durante 30 minutos. A mistura de reação é em seguida divi-dida entre diclorometano e água. A camada orgânica é separada e a cama-da aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinadossão lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados parafornecer o produto título 2. O composto título é empregado na etapa seguintesem outra purificação.

Metil-f7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolof2,3-d1pirimidin-4-in-amina

<formula>formula see original document page 24</formula>

Metil amina (6,6 ml de 2,0 M em THF, 13,1 mmols, 2,4 eq.) é adicio-nado a uma solução de 2 (1,7 g, 5,5 mmols, 1,0 eq.) em THF (5 ml) a 23°C.A reação é também agitada durante 3 horas em temperatura ambiente, apóso que o resíduo sólido é dividido entre acetato de etila e água. As camadasorgânicas são separadas, secadas sobre Na2S04, filtradas e concentradaspara fornecer o produto título. O resíduo é empregado na etapa seguintesem outra purificação.

N-Clorocarbonil-N-metil-r7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolor2.3-dlpirimidin-4-in-amina '

<formula>formula see original document page 24</formula>

Um frasconete Smith (2,5 ml) contendo 3 (0,250 g, 0,82 mmol,1,0 eq.), trifosgênio (0,24 g, 0,82 mmol, 1,0 eq.) e dioxano (2 ml) é submeti-do a aquecimento em microondas empregando-se um sintetizador Smith a150°C durante um período de 20 minutos. A mistura de reação é em seguidadividida entre diclorometano e água. A camada orgânica é separada e a ca-mada aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combi-nados são lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentra-dos para fornecer o produto título que é empregado na etapa seguinte semoutra purificação.

Ester de terc-butila de ácido (4-Metil-3-(3-metil-3-f7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolor2,3-d1pirimidin-4-ill-ureído)-fenil)-carbâmico.

<formula>formula see original document page 29</formula>

A uma solução de 5 (0,182 g, 0,82 mmol, 1,0 eq.), e diisopropile-tilamina (0,14 ml, 0,82 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano (2,0 ml) a 23°C éadicionado cloreto de carbamoila 4 (0,3 g, 0,82 mmol, 1,0 eq.) em gotas du-rante um período de 15 minutos. A mistura de reação é também agitada emtemperatura ambiente durante um período de 8 horas após o que, ela é divi-dida entre diclorometano e água. A camada orgânica é separada e a cama-da aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinadossão lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados parafornecer o produto título que é empregado na etapa seguinte sem outra puri-ficação.

3-(5-Amino-2-metil-fenil)-1-metil-1-(7H-pirrolof2.3-dlpirimidin-4-il)-uréia.

<formula>formula see original document page 29</formula>

À uréia bruta 6 (3,2 g, 5,8 mmols, 1,0 eq.) em diclorometano (30 ml)é adicionado 5-6 N de HCI em isopropanol (11,6 ml, 58 mmols, 10,0 eq.) for-necendo uma solução clara. A mistura de reação é também agitada a 23°Cdurante 30 minutos induzindo a precipitação do produto. A massa de reaçãoé concentrada em vácuo e neutralizada pela solução de bicarbonato de só-dio aquosa saturada. Os orgânicos são extraídos empregando-se acetato deetila como solvente, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados parafornecer o produto "deboc".

A uma solução da amina primária bruta (2,3 g, 5,1 mrnols, 1,0 eq.)dissolvida em (1:1 THF: MeOH) é adicionado Na-Hg (3,5 g, 3,0 eq com baseem Na). A reação é agitada durante 15 minutos, após o que a mistura dereação é decantada para remover os sais de mercúrio e o líquido sobrena-dante é concentrado sob pressão reduzida. O resíduo sólido é dividido entreacetato de etila e água. A camada orgânica é separada, secada sobreNa2S04, filtrada e concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bru-to é purificado por cromatografia de coluna instantânea empregando-se 9:1volume/volume CH2Cl2:MeOH como solvente para fornecer o composto título7 como um sólido.

3-(4-Metil-imidazol-1-il)-N-(4-metil-3-r3-metil-3-(7H-pirrolor2.3-d1pirimidin-4-il)-ureídol-fenil)-5-trifluorometil-benzamida.

A uma solução de 7 (7 mg, 0,23 mmol, 1,0 eq.), ácido 3-(4-Metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-benzóico (7,6 mg, 0,27 mmol, 1,2 eq.), e DIPEA(40 nl, 0,27 mmol, 1,2 eq.) em DMF (0,5 ml) é adicionado HATU (9,9 mg,0,25 mmol, 1,1 eq.). Após agitar durante 1 hora em temperatura ambiente, osolvente é removido sob vácuo. O resíduo é dissolvido em DMSO (1 ml). Asolução resultante é submetida a purificação por LC-MS de fase reversa pa-ra produzir o composto título como um sal de TFA: 1H RMN 400 MHz (DM-SO-d6) 8 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) ô 12,81 (bs, 1H), 12,28 (bs, 1H),10,52 (bs, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,40 (d, J = 2,0 Hz,1H), 8,36 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,19 (d, J = 8,32 Hz, 1H), 6,78(m, 1H) 3,05 (s, 3H), 2,30 (s, 3H) 2,27 (s, 3H); MS m/z 549,2 (M + 1).

Exemplo 2

Síntese de N-r4-Metil-3-(2-7H-pirroloí2.3-d1pirimidin-4-il-acetila-mino)-fenin-3-trifluorometil-benzamida.<formula>formula see original document page 31</formula>

Ester de dimetila de ácido 2-f7-(Tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolor2,3-d1pirimidin-4-in-malônico

<formula>formula see original document page 31</formula>

À suspensão de NaH (25 mg, 0,62 mmol, 3,1 eq.) em DMSO(2,0 ml) é adicionado malonato de dimetila (0,071 ml, 0,62 mmol, 3,1 eq.) a23°C. Após a evolução de hidrogênio ter cessado, 2 (64 mg, 20 mmols, 1,0eq.) é adicionado. A reação é também equilibrada a 80°C durante 3 horas. Areação é em seguida resfriada à temperatura ambiente, e saciada comNH4CI saturado. Os orgânicos são extraídos empregando-se acetato de etilacomo solvente, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados para forne-cer o produto desejado (79 mg, 94%).

Ester de metila de ácido 7-(Tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolof2.3-dlpirimidin-4-ill-acético

<formula>formula see original document page 31</formula>

Uma mistura de 10 (0,63 g, 1,56 mmol, 1,0 eq) e metóxido desódio (0,038 ml de 25% de solução peso/volume, 0,16 mmol, 0,1 eq.) emMeOH (15 ml) é aquecida a 60 °C durante 1 hora. Após o que, a reação éconcentrada e o resíduo é extraído com acetato de etila após saciar comNH4CI. A camada orgânica é secada sobre Na2S04, filtrada e concentrada.O produto bruto é purificado empregando-se hexanos: acetato de etila (2:1)como solvente para fornecer o produto desejado.

N-(1-Metileno-3-(2-r7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-Dirrolof2.3-dlpirimi-din-4-ill-acetilamino)-pent-2-enil)-3-trifluorometil-benzamida.

<formula>formula see original document page 32</formula>

Uma mistura de 11 (60 mg, 0,17 mmol, 1,0 eq) e 12 (153 mg, 0,51mmol, 3,0 eq.) é aquecida a 150°C durante um período de 4 horas. Nestahora a reação é concluída, após o que a massa de reação é resfriada à tem-peratura ambiente. O produto bruto é purificado empregando-se hexanos:acetato de etila (2:1) como solvente para fornecer o produto desejado.

f4-metil-3-(2-7H-pirrolor2.3-dlpirimidin-4-il-acetilamino)-fenin-amida de ácido 5,5,5-Trifluoro-2-metil-pent-2-enóico.

<formula>formula see original document page 32</formula>

A uma solução de 13 (61 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) dissolvido em(1:1 THF: MeOH) é adicionado Na-Hg (172 mg, 7,0 eq com base em Na). Areação é agitada durante 30 minutos, após o que a mistura de reação é de-cantada para remover os sais de mercúrio e o líquido sobrenadante é con-centrado sob pressão reduzida. O resíduo sólido é dividido entre acetato deetila e água. A camada orgânica é separada, secada sobre Na2SC>4, filtradae concentrada para fornecer o produto bruto. Após agitar durante 1 hora emtemperatura ambiente, o solvente é removido sob vácuo. O resíduo é dissol-vido em DMSO (1 ml). A solução resultante é submetida a purificação porLC-MS de fase reversa para produzir o composto título como um sal de TFA:MS m/z 454,2 (M + 1).Exemplo 3

Síntese de N-(3-lmidazol-1 -il-5-trifluorometil-fenil)-4-metil-3-f3-metil-3-(7H-pirrolor2,3-d1pirimidin-4-il)-ureídol-benzamida.

<formula>formula see original document page 33</formula>

4-Metil-N-r3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-fenin-3-{3-metil-3-r7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolof2,3-dlpirimidin-4-in-ureído)-benzamida.

<formula>formula see original document page 33</formula>

A uma solução de 15 (15 mg, 0,04 mmol, 1,0 eq.). e diisopropiletila-mina (6,8 0,04 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano (0,5 ml) a 23°C é adicio-nado cloreto de carbamoila 4 (14,5 mg, 0,04 mmol, 1,0 eq.) em gotas duran-te um período de 15 minutos. A mistura de reação é também agitada emtemperatura ambiente durante um período de 8 horas após o que, ela é divi-dida entre diclorometano e água. A camada orgânica é separada e a cama-da aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinadossão lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados parafornecer o produto título 16. O resíduo é empregado na etapa seguinte semoutra purificação.

4-Metil-N-r3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-fenin-3-f3-metil-3-(7H-pirroloí2.3-d1pirimidin-4-il)-ureído1-benzamida.<formula>formula see original document page 34</formula>

A uma solução de 16 (22 mg, 0,031 mmol, 1,0 eq.) dissolvido em(1:1 THF: MeOH) é adicionado Na-Hg (22 mg, 2,0 eq com base em Na). Areação é agitada durante 30 minutos, após o que a mistura de reação é de-cantada para remover os sais de mercúrio e o líquido sobrenadante é con-centrado sob pressão reduzida. O resíduo sólido é dividido entre acetato deetila e água. A camada orgânica é separada, secada sobre Na2S04, filtradae concentrada para fornecer o produto bruto. Após agitar durante 1 hora emtemperatura ambiente, o solvente é removido sob vácuo. O resíduo é dissol-vido em DIVISO (1 ml). A solução resultante é submetida a purificação porLC-MS de fase reversa para produzir o composto título como um sal de TFA:MS m/z 549,2 (M + 1).

Exemplo 4

Síntese de N-r4-(4-Etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenin-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirroloí2.3-dlpirimidin-4-il)-ureído1-benzamida.

<formula>formula see original document page 34</formula>1. 1 -Etil-4-(4-nitro-2-trif luorometil-benzil)-piperazina.

<formula>formula see original document page 35</formula>

Em uma solução de 1-Metil-4-nitro-2-trifluorometil-benzeno (1;15 g, 73 mmols, 1,0 eq.) em tetracloreto de carbono (250 ml) são adiciona-dos NBS (13 g, 98 ml, 73 mmols, 1,0 eq.) e AIBN (1,19 g, 7,3 mmols, 0,1eq.) como um iniciador. A reação é refluxada durante a noite e em seguidadividida com água. A camada orgânica é separada e a camada aquosa éextraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados são lavadoscom água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados para fornecer ossólidos. Os sólidos são dissolvidos em diclorometano (300 ml). A soluçãoclara é tratada com Dl EA (12,55 ml, 73 mmols, 1,0 eq.) e A/-Etilpiperazina(8,25 g, 73 mmol, 1,0 eq.). A mistura de reação é agitada em temperaturaambiente durante 30 minutos (até a conclusão da reação de acordo comLCMS). A mistura de reação é lavada com água, secada sobre Na2S04, fil-trada e concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto é purifi-cado por cromatografia de coluna instantânea empregando-se 1:1 v/v hexa-nos: acetato de etila como solvente para fornecer o composto título 2 comoum sólido.

2. 4-(4-Etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trif luorometil-fenilamina.

<formula>formula see original document page 35</formula>

Em uma solução 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenilamina (10 g, 31,54 mmols, 1,0 eq.) em MeOH (250 ml) é adicionado ní-quel de Raney (1,0 g, 10% em peso). A suspensão é agitada sob atmosferade hidrogênio (1 atmosfera) durante 24 horas. No fim da reação como indi-cado por LCMS, a massa de reação é filtrada sobre celita e o filtrado é con-centrado sob pressão reduzida para produzir o produto desejado.

3. N-[4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-metil-3-nitro-benzamida.

<formula>formula see original document page 36</formula>

Em uma solução de 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenilamina (8,0 g, 27,9 mmols, 1,0 eq.) em diclorometano (140 ml) é adicio-nado diisopropiletil amina (5,27 ml, 30,69 mmols, 1,1 eq.). A solução é resfri-ada a 0°C, após o que cloreto de 4-Metil-3-nitrobenzoila (4,18 ml, 28,73mmols, 1,03 eq.) é adicionado em porções na mistura de reação que é tam-bém equilibrada durante 30 minutos. A mistura de reação é em seguida divi-dida entre diclorometano e água. A camada orgânica é separada e a cama-da aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos combinadossão lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados e concentrados parafornecer o produto desejado que é empregado na etapa seguinte sem outrapurificação.

4. 3-Amino-N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-metil-benzamida.

<formula>formula see original document page 36</formula>

Em uma solução N-[4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-metil-3-nitro-benzamida (10 g, 22,2 mmols, 1,0 eq.) em MeOH (250ml) é adicionado níquel de Raney (1,0 g, 10% em peso). A suspensão é agi-tada sob atmosfera de hidrogênio (1 atmosfera) durante 24 horas. No fim dareação como indicado por HPLC, a massa de reação é filtrada sobre celita eo filtrado é concentrado sob pressão reduzida para produzir o produto dese-jado 3: 1H RMN 400 MHz (DMSO-afe) ô 10,24 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,02 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,66 (d, J= 8,8 Hz, 1H, 7,16 (s, 1H), 7,13 (m, 2H), 5,1 (s,2H), 3,55 (s, 2H), 2,37 (m, 10H) 2,11 (s, 3H), 1,05 (t, 3H).

5. 4-Cloro-7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidi-

<formula>formula see original document page 37</formula>

Em uma solução de 6-cloro deazapurina (4, 10,0 g, 65 mmols,1,0 eq.) em diclorometano (325 ml) são adicionados trietilamina (9,9 ml,71,5 mmols, 1,1 eq.) e 4-dimetilamino piridina (catalítico). Cloreto de tosila(12,76 g, 66,9 mmols, 1,03 eq.) é adicionado em porções na mistura de rea-ção que é também equilibrada durante 30 minutos. A mistura de reação éem seguida dividida entre diclorometano e água. A camada orgânica é sepa-rada e a camada aquosa é extraída com diclorometano. Os extratos orgâni-cos combinados são lavados com água, secados sobre Na2S04, filtrados econcentrados para fornecer o produto título que é empregado na etapa se-guinte sem outra purificação.

6. Metil-[7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-amina.

<formula>formula see original document page 37</formula>

Metil amina (66 ml de 2,0 M em THF, 13,1 mmols, 2,4 eq.) é adi-cionado a uma solução de 4-Cloro-7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (17 g, 55 mmols, 1,0 eq.) em THF (50 ml) a 23°C. A reação é tam-bém agitada durante 3 horas em temperatura ambiente. Após a reação serconcluída, THF é removido sob pressão reduzida e o resíduo sólido é dividi-do entre acetato de etila: THF (1:1) e água. As camadas orgânicas são sepa-radas, secadas sobre Na2S04, filtradas e concentradas para fornecer o pro-duto título 5 que é empregado na etapa seguinte sem outra purificação.7. /V-Clorocarbonil-/V-metil-[7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-amina.

<formula>formula see original document page 38</formula>

Um frasconete Smith (20 ml) contendo 5 (2,50 g, 8,2 mmols, 1,0eq.), trifosgênio (2,4 g, 8,2 mmols, 1,0 eq.) e dioxano (15 ml) é submetido aaquecimento em microondas empregando-se um sintetizador Smith a 150°Cdurante um período de 20 minutos. A mistura de reação é concentrada. Oresíduo é em seguida dividido entre diclorometano e água. A camada orgâ-nica é separada e a camada aquosa é extraída com diclorometano. Os ex-tratos orgânicos combinados são lavados com água, secados sobre Na2S04,filtrados e concentrados para fornecer o produto título 6 que é empregado naetapa seguinte sem outra purificação.

8. N-[4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-me-til-3-{3-metil-3-[7-(tolueno-4-sulfonil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-ureí-do}-benzamida.

<formula>formula see original document page 38</formula>

A uma solução de 3 (3,45 g, 8,2 mmols, 1,0 eq.),) e piridina (0,66ml, 0,82 mmol, 1,0 eq.), em diclorometano (40 ml) a 23°C é adicionado clore-to de carbamoila 6 (3 g, 8,2 mmols, 1,0 eq.) em gotas durante um período de15 minutos. A mistura de reação é também agitada em temperatura ambien-te durante um período de 8 horas após o que, ela é dividida entre diclorome-tano e água. A camada orgânica é separada e a camada aquosa é extraídacom diclorometano. Os extratos orgânicos combinados são lavados com á-gua, secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados para fornecer o produtobruto 7. O resíduo é purificado empregando-se cromatografia de coluna comMeOH/ CH2CI2 (5:1) como eluente para fornecer o produto título 7.

9. /V-[4-(4-Etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-me-til-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-benzamida.

<formula>formula see original document page 39</formula>

À uréia tosilada 7 (1,5 g, 2,0 mmols, 1,0 eq.) dissolvida em THF(10 ml) é adicionado Na-Hg (0,92 g, 2,0 eq com base em Na) seguido portrifluoroetanol (291 pL, 4,0 mmols, 2,0 eq.)- A reação é agitada durante 15minutos, decantada para remover os sais de mercúrio e o líquido sobrena-dante, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo sólido é dividido entreacetato de etila e água. As camadas orgânicas são separadas, secadas so-bre Na2S04, filtradas e concentradas para fornecer o produto bruto. O produ-to bruto é purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto título 8:1H RMN 400 MHz (DMSO-afe) ô 12,98 (bs, 1H), 12,42 (bs, 1H), 10,52 (bs,1H), 8,68 (s, 1H) 8,65 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,11 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 7,76 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,6 (m, 1H), 7,47 (d, J= 8,3 Hz,1H), 6,9 (m, 1H), 3,78 (s, 3H) 3,62 (s, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,43-2,35 (m, 10H),1,04 (t, J= 6,9 Hz, 3H), MS m/z 595,3 (M + 1).

Repetindo-se os procedimentos descritos nos exemplos acima,empregando-se os materiais de partida apropriados, os seguintes compostosda Fórmula I, como identificados na Tabela I, são obtidos.Tabela 1

<table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table><table>table see original document page 42</column></row><table><table>table see original document page 43</column></row><table><table>table see original document page 44</column></row><table>

Ensaios

Os compostos da presente invenção são ensaiados para avaliarsua capacidade de seletivamente inibir a proliferação celular de BCR-Ablexpressando células 32D (32D-p210) comparado com as células 32D paren-tal. Os compostos seletivamente inibindo a proliferação destas células trans-formadas por BCR-Abl são testados para atividade antiproliferativa sobre ascélulas Ba/F3 expressando as formas mutantes ou tipo silvestre de Bcr-abl.Inibição da proliferação dependente de BCR-Abl celular (método deprodutividade elevada).

A linhagem celular de murino empregada é a linhagem celularprogenitora hemopoiética 32D transformada com BCR-Abl cDNA (32D-p210). Estas células são mantidas em RPMI/10% de soro de bezerro fetal(RPMI/FCS) suplementadas com penicilina 50 jig/mL, estreptomicina 50 jxg/mL e L-glutamina 200 mM. As células 32D não transformadas são similar-mente mantidas com a adição de 15% de meio condicionado WEHI comouma fonte de IL3.

50 jlxI de uma suspensão de células 32D ou 32D-p210 sãosemeados em microplacás de 384 cavidades Greiner (preto) em umadensidade de 5000 células por cavidade. 50 nl de composto teste (1 mM emsolução de matéria-prima DMSO) é adicionado a cada cavidade (STI571 éincluído como um controle positivo). As células são incubadas durante 72horas a 37°C, 5% de C02. 10 jul de uma solução azul alamar a 60% (diag-nósticos Tek) é adicionado a cada cavidade e as células são incubadas du-rante mais 24 horas. A intensidade fluorescência (Excitação a 530 nm, E-missão a 580 nm) é quantificada empregando-se o sistema Acquest® (Dis-positivos Moleculares).Inibição de proliferação dependente de BCR-Abl celular

As células 32D-p210 são semeadas em placas TC de 96cavidades em uma densidade de 15.000 células por cavidade. 50 u,L de dilu-ições seriais em duas vezes do composto teste (Cmax é 40 DM) são adicio-nados a cada cavidade (STI571 é incluído como um controle positivo). Apósincubar as células durante 48 horas a 37°C, 5% de C02, 15 liL de MTT(Promega) é adicionado a cada cavidade e as células são incubadas durantemais 5 horas. A densidade óptica a 570 nm é quantificada espectrofotometri-camente e os valores de IC50, a concentração do composto requerida para50% de inibição, determinados de uma curva de resposta de dose.

Efeito sobre a distribuição de ciclo celular

As células 32D e 32D-p210 são semeadas em placas TC de 6cavidades a 2,5 x 106 células por cavidade em 5 ml de meio e compostoteste a 1 ou 10 DM é adicionado (STI571 é incluído como um controle). Ascélulas são em seguida incubadas durante 24 ou 48 horas a 37°C, 5% deC02. 2 ml de suspensão celular é lavado com PBS, fixado em 70% de EtOHdurante 1 hora e tratado com PBS/EDTA/RNase A durante 30 minutos. Iode-to de propídio (Cf = 10 Lig/ml) é adicionado e a intensidade de fluorescênciaé quantificada por citometria de fluxo sobre o sistema FACScalibur® (BD Bi-osciences). Os compostos de teste da presente invenção demonstram umefeito apoptótico sobre as células 32D-p210 porém não induzem a apoptosenas células parentais 32D.

Efeito sobre a autofosforilação de BCR-Abl celular

A autofosforilação de BCR-Abl é quantificada com Elisa de cap-tura empregando-se um anticorpo de captura específico de c-abl e um anti-corpo antifosfotirosina. As células 32D-p210 são semeadas em placas TC de96 cavidades em 2 x 105 células por cavidade em 50 uL de meio. 50 u,L dediluições seriais em duas vezes dos compostos de teste (Cmaxé 10 u.M) sãoadicionados a cada cavidade (STI571 é incluído como um controle positivo).As células são incubadas durante 90 minutos a 37°C, 5% de CO2. As célulassão em seguida tratadas durante 1 hora sobre gelo com 150 ui. de tampãode lise (50 mM de Tris-HCI, pH 7,4, 150 mM de NaCI, 5 mM de EDTA, 1 mMde EGTA e 1% de NP-40) contendo inibidores de protease e fosfatase. 50 uLde lisato celular é adicionado a optiplacas de 96 cavidades previamente re-vestidas com anticorpo específico de anti-abl e bloqueado. As placas sãoincubadas durante 4 horas a 4°C. Após lavar com tampão TBS-Tween 20,50 DL de anticorpo anti-fosfotirosina conjugado com alcalino-fosfatase é adi-cionado e a placa é também incubada durante a noite a 4°C. Após lavar comtampão TBS-Tween 20, 90 \iL de um substrato luminescente são adiciona-dos e a luminescência é quantificada empregando-se o sistema Acquest®(Dispositivos Moleculares). Os compostos de teste da invenção que inibem aproliferação das células expressando BCR-Abl, inibem a autofosforilação deBCR-Abl celular de uma maneira dependente de dose.

Efeito sobre a proliferação de células expressando formasmutantes de Bcr-abl

Os compotos da invenção são testados para seu efeito antiproli-ferativo sobre as células Ba/F3 expressando as formas mutantes ou tipo sil-vestre de de BCR-Abl (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T) que confereresistência ou sensibilidade diminuída para STI571. O efeito antiproliferativodestes compostos sobre as células expressando mutante-BCR-Abl e sobreas células não transformadas foi testado a 10, 3,3, 1,1 e 0,37 (iM como des-crito acima (em IL3 desprovido de meios). Os valores de IC5o dos compostossem toxicidade nas células não transformadas foram determinados das cur-vas de resposta de dose obtidas como acima descrito.

FGFR3 (Ensaio Enzimático)

O ensaio de atividade de cinase com FGFR3 purificado (Upsta-te) é realizado em um volume final de 10 jiL contendo 0,25 |ig/ml_ de enzimaem tampão de cinase (30 mM de Tris-HCI pH 7,5, 15 mM de MgCI2, 4,5 mMde MnCI2, 15 jiM de Na3V04 e 50 u.g/mL de BSA), e substratos (5 |j.g/mL bio-tin-poli-EY(Glu, Tyr) (CIS-US, Inc.) e 3uJv1 ATP). Duas soluções são prepara-das: a primeira solução de 5 jul contém a enzima FGFR3 em tampão de ci-nase foi primeiro dispensada em ProxiPlate® de formato 384 (Perkin-Elmer)seguido adicionando-se 50 nL de compostos dissolvidos em DMSO, em se-guida 5 uJ da segunda solução contém o substrato (poli-EY) e ATP em tam-pão de cinase foi adicionado a cada cavidade. As reações são incubadas emtemperatura ambiente durante uma hora, interrompidas adicionando-se 10uL de mistura de detecção de HTRF, que contém 30 mM de Tris-HCI pH 7,5,0,5 M de KF, 50 mM de ETDA, 0,2 mg/mL de BSA, 15 |ig/mL de estreptavi-din-XL665 (CIS-US, Inc.) e 150 ng/mL de anticorpo anti-fosfotirosina conju-gado por criptato (CIS-US, Inc.). Após uma hora de incubação em tempera-tura ambiente para permitir durante a interação de estreptavidin-biotina, ossinais florescentes resolvidos pelo tempo são lidos em Analyst GT (Molecu-lar Devices Corp.). Os valores de IC50 são calculados por análise de regres-são linear da porcentagem de inibição de cada composto em 12 concentra-ções (1:3 diluição de 50 (iM a 0,28 nM). Neste ensaio, os compostos da in-venção possuem um IC50 na faixa de 10 nM a 2 uM.

FGFR3 (Ensaio Celular)

Os compostos da invenção são testados para sua capacidadede inibir a proliferação de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, que de-pende da atividade de cinase celular FGFR3. Ba/F3-TEL-FGFR3 são culti-vadas até 800.000 células/mL em suspensão, com RPMI 1640 suplementa-do com 10% de soro bovino fetal como o meio de cultura. As células sãodispensadas em placa de formato de 384 cavidades em 5000 células/cavi-dade em 50 uL de meio de cultura. Os compostos da invenção são dissolvi-dos e diluídos em dimetilsufóxido (DMSO). Diluições seriais 1:3 em dozepontos são feitas em DMSO para criar gradiente de concentrações variandotipicamente de 10 mM a 0,05 |j.M. As células são adicionadas com 50 nl_ decompostos diluídos e incubados durante durante 48 horas em incubador decultura celular. AlamarBIue® (TREK Diagnostic Systems), que pode ser em-pregado para monitorar o ambiente de redução criado pelas células de proli-feração, é adicionado às células em uma concentração final de 10%. Apósmais quatro horas de incubação em um incubador de cultura celular a 37°C,sinais de fluorescência de AlamarBIue® reduzido (Excitação a 530 nm, E-missão a 580 nm) são quantificados sobre Analyst GT (Molecular DevicesCorp.). Os valores de IC5o são calculados por análise de regressão linear daporcentagem de inibição de cada composto em 12 concentrações.FLT3 e PDGFRp (Ensaio Celular)

Os efeitos dos compostos da invenção sobre a atividade celularde FLT3 e PDGFRp são conduzidos empregando-se métodos idênticos co-mo acima descrito para atividade celular de FGFR3, exceto que em vez deempregar Ba/F3-TEL-FGFR3, Ba/F3-FLT3-ITD e Ba/F3-Tel-PDGFRp sãoempregados, respectivamente.

Ensaio b-Raf - enzimático

Os compostos da invenção são testados para sua capacidadede inibir a atividade de b-Raf. O ensaio é realizado em placas MaxiSorp de384 cavidades (NUNC) com base clara e paredes escuras. O substrato, IkBké diluído em DPBS (1:750) e 15 \i\ é adicionado a cada cavidade. As placassão incubadas a 4°C durante a noite e lavadas 3 vezes com TBST (25 mMde Tris, pH 8,0, 150 mM de NaCI e 0,05% de Tween-20) empregando-se olavador de placa EMBLA. As placas são bloqueadas por Superblock (15ul/cavidade) durante 3 horas em temperatura ambiente, lavadas 3 vezescom TBST e secadas por pancadinha. O tampão de ensaio contendo 20 |j.Mde ATP (10 fil) é adicionado a cada cavidade seguido por 100 nl ou 500 nl decomposto. B-Raf é diluído no tampão de ensaio (1 em 25 jllI) e 10-uJ de b-Raf diluído é adicionado a cada cavidade (0,4 jig/cavidade). As placas sãoincubadas em temperatura ambiente durante 2,5 horas. A reação de cinaseé interrompida lavando-se as placas 6 vezes com TBST. O anticorpo Phos-ph-lKBx:Ser32/36) é diluído em Superblock (1:10,000) e 15 \ú é adicionado acada cavidade. As placas são incubadas a 4°C durante a noite e lavadas 6vezes com TBST. IgG anti-camundongo de cabra AP-conjugado é diluído emSuperblock (1:1,500) e 15 nl é adicionado a cada cavidade. As placas sãoincubadas em temperatura ambiente durante 1 hora e lavadas 6 vezes comTBST. 15 fxl de substrato Attophos fluorescente (Promega) é adicionado acada cavidade e as placas são incubadas em temperatura ambiente durante15 minutos. As placas são lidas em Acquest ou Analyst GT empregando-seum Programa de Intensidade de Fluorescência (Excitação 455 nm, Emissão 580 nm).

b-Raf - Ensaio celularOs compostos da invenção são testados em células A375 parasua capacidade de inibir a fosforilação de MEK. A linhagem celular de A375(ATCC) é derivada de um paciente de melanoma humano e possui uma mu-tação de V599E sobre o gene de B-Raf. Os níveis de MEK fosforilado sãoelevados devido à mutação de B-Raf. As células A375 subconfluentes a con-fluentes são incubadas com os compostos durante 2 horas a 37°C em meiolivre de soro. As células são em seguida lavadas uma vez com PBS frio elisadas com o tampão de lise contendo 1% de Triton X100. Após a centrifu-gação, os sobrenadantes são submetidos a SDS-PAGE, e em seguida trans-feridos às membranas de nitrocelulose. As membranas são em seguidasubmetidas a mancha do oeste com o anticorpo anti-fosfo-MEK (ser217/221)(Sinalização celular). A quantidade de MEK fosforilado é monitorada peladensidade de bandas de fosfo-MEK sobre as membranas de nitrocelulose.Upstate KinaseProfiler® - Ensaio de ligação de filtro Radio-enzimático

Os compostos da invenção são avaliados pela sua capacidadede inibir membros individuais do painel de cinase. Os compostos são testa-dos em duplicatas em uma concentração final de 10 jxM seguindo-se esteprotocolo genérico. Observar que a composição de tampão de cinase e ossubstratos variam para as diferentes cinases incluídas no painel de "UpstateKinaseProfiler®". O tampão de cinase (2,5 iiL, 10x - contendo MnCI2 quandorequerido), cinase ativa (0,001-0,01 Unidades; 2,5 uL), específico ou Po-li(Glu4-Tyr) peptídeo (5 - 500 |iM ou .01 mg/ml) em tampão de cinase e tam-pão de cinase (50 u.M; 5 uL) são misturados em um microtubo tipo "eppen-dorf" em gelo. Uma mistura Mg/ATP (10 ^L; 67,5 (ou 33,75) mM de MgCI2,450 (ou 225) fiM de ATP e 1 u.Ci/uJ [D-32P]-ATP (3000Ci/mmol)) é adicionadoe a reação é incubada a cerca de 30°C durante cerca de 10 minutos. A mis-tura de reação é manchada (20 uL) em um 2 cm x 2 cm P81 (fosfocelulose,para substratos de peptídeo positivamente carregados) ou papel quadradoWhatman Ns 1 (para substrato de peptídeo Poli (Glu4-Tyr)). Os quadradosde ensaio são lavados 4 vezes, durante 5 minutos cada, com 0,75% de áci-do fosfórico e lavados uma vez com acetona durante 5 minutos. Os quadra-dos de ensaio são transferidos a um frasconete de cintilação, 5 ml de coque-tel de cintilação são adicionados e a incorporação P (cpm) ao substrato depeptídeo é quantificada com uma registradora de cintilação Beckman. A por-centagem de inibição é calculada para cada reação.

Os compostos da Fórmula I, na forma livre ou na forma de salfarmaceuticamente aceitável, exibem propriedades farmacológicas valiosas,por exemplo, como indicado pelos testes in vitro descritos neste pedido. Porexemplo, os compostos da Fórmula I preferivelmente exibem um IC5o na fai-xa de 1 x 10"10 a 1 x 10'5 M, preferivelmente menos do que 500 nM, 250 nM,100 nM e 50 nM para BCR-Abl mutante e tipo silvestre.

Por exemplo, N-f4-(4-Etil-Diperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenin-4-metil-3-r3-metil-3-(7H-pirrolor2.3-dlpirimidin-4-il)-ureído1-benzamida(Exemplo 4) possui um IC5o de <5nM, <5nM, <5nM, <5nM, <5nM e <5nMpara tipo silvestre, G250E, E255V, T315I, F317L e M351T Bcr-abl, respecti-vamente.

Por exemplo, N-r4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fe-nill-4-metil-3-r3-metil-3-(7H-pirrolof2.3-d1pirimidin-4-il)-ureído1-benzamida(Exemplo 4) possui um IC50 de 36 nM, 15 nM, 3,8 nM e 100 nM para FGFR3,FLT-3, PDGFR-p e B-RAF, respectivamente.

Os compostos da invenção inibem algumas das cinases listadasno perfil de cinase maior do que 40%, preferivelmente maior do que 50% emais preferivelmente maior do que 60%. Por exemplo, N-r4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-fenil1-4-metil-3-r3-metil-3-(7H-pirrolof2,3-d1pirimidin-4-il)-ureído1-benzamida (Exemplo 4) exibe o seguinte perfil de inibição (a ci-nase é mostrada com porcentagem de inibição em parênteses): Abl(T315L)(98%); Abl(m) (98%); Bmx(h) (100%); BTK(h) (99%); c-RAF(h) (97%);CSK(h) (100%); cSRC(h) (99%); Fes(h) (97%); FGFR3(h) (98%); Flt3(h)(96%); IKKa (h) (98%); IKKP(h) (96%); JNK1a1(h) (81%); JNK2a2(h) (99%);Lck(h) (100%); Met(h) (70%); MKK4(m) (87%); MKK6(h) (98%); p70S6K(h)(94%); PAK2(h) (62%); PDGFRa (h) (93%); PKA(h) (92%); PKCa (h) (61%);PKD2(h) (94%); ROCK-ll(h) (78%); Ros(h) (62%); Rsk1(h) (95%); SAPK2a(h) (92%); SAPK2a (h) (85%); SAPK3(h) (92%); SAPK4(h) (82%); SGK(h)(81%); Syk(h) (63%); Tie2(h) (98%); e TrkB(h) (99%).Entende-se que os exemplos e as modalidades descritos aquisão apenas para propósitos ilustrativos e que várias modificações ou altera-ções na compreensão destes, serão sugeridas por pessoas versadas natécnica e devem ser incluídas dentro do espírito e perspectiva deste pedidoe escopo das reivindicações anexas. Todas as publicações, patentes, e pe-didos de patente citados aqui são desse modo incorporados por referênciapara todos os propósitos.

Claims (9)

1. Composto selecionado da Fórmula I: <formula>formula see original document page 52</formula> na qualn é selecionado de 0, 1 e 2;m é selecionado de 0, 1 e 2;é selecionado de N e CR5; em que R5 é selecionado dehidrogênio e d.6alquila;Y2 é selecionado de O e S;Ri é selecionado de hidrogênio e Ci-6alquila;R2 é selecionado de hidrogênio e Ci-6alquila;R3 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-6alquila, d-ealcóxi, Ci.6alquila substituída por halo e Ci-6alcóxi substitu-ído por halo;R4 é selecionado de -NR5C(0)R6 e -C(0)NR5R6; em que R5 éselecionado de hidrogênio e Ci-6alquila;em que R6 é selecionado de C6-ioaril-Co-4alquila, C5-ioheteroaril-C0-4alquila, C3-i0cicloalquil-Co-4alquila e C3-ioheterocicloalquil-C0-4alquila; emque qualquer arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila de R6 sejaopcionalmente substituído com de 1 a 3 radicais selecionados de halo, hi-dróxi, -NR5R5, Ci.6alquila, Ci-6âlcóxi, Ci-6alquila substituída por halo, Ci-6 al-cóxi substituído por halo C5-ioheteroarilCo-4alquila, C3-8heterocicloCo-4alquilae C3.8heterocicloCo-4alcóxi; em que qualquer heteroarila ou heterocicloalquilasubstituinte de seja opcionalmente substituído por de 1 a 3 radicais inde-pendentemente selecionados de Ci-6alquila e hidróxi-Ci.6alquila;R7 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-6alquila, d-6alcóxi, Ci-6alquila substituída por halo, Ci-6alcóxi substituído por halo, C6-ioaril-C0-4alquila, C5.ioheteroaril-Co-4alquila, C3-i0cicloalquil-Co-4alquila e C3-10heterocicloalquil-Co-4alquila; e os sais farmaceuticamente aceitáveis, hidra-tos, solvatos e isômeros destes.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, da Fórmula Ia:<formula>formula see original document page 53</formula>na qual:n é selecionado de 0 e 1;é selecionado de N e CH;Y2 é selecionado de O e S;Ri é selecionado de hidrogênio e Ci.6alquila;R2 é selecionado de hidrogênio e C^alquila;R3 é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, Ci-6alquila, Ci-6alcóxi, Ci-6alquila substituída por halo e Ci-6alcóxi substitu-ído por halo;R4 é selecionado de -NR5C(0)R6 e -C(0)NR5R6; em que R5 éselecionado de hidrogênio e Ci-6alquila; eem que R6 é selecionado de C6-ioaril-Co-4alquila, C5-ioheteroaril-Co-4alquila, C3-ioCicloalquil-Co-4alquila e C3-ioheterocicloalquil-C0-4alquila; emque qualquer arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila de R6 sejaopcionalmente substituído com de 1 a 3 radicais selecionados de halo, hi-dróxi, -NR5R5, C^alquila, Ci-6alcóxi, C-i.6alquila substituída por halo, C-i-ôalcóxi substituído por halo C5-ioheteroarilCo-4alquila, C3.8heterocicloCo-4alquila e C3.8heterocicloCo.4alcóxi; em que qualquer heteroarila ou heteroci-cloalquila substituinte de R6 seja opcionalmente substituído por de 1 a 3 ra-dicais independentemente selecionados de C^alquila e hidróxi-Ci-6alquila.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, na qual R2 é selecionado de hidrogênio e metila; e R3 é selecionado de metila e metóxi.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, na qual R4 é se-lecionado de -NHC(0)R6 e -C(0)NHR6; em que R6 é selecionado de fenilaopcionalmente substituída com de 1 a 3 radicais selecionados de trifluorome-tila, dimetil-amino, imidazolila, morfolino, morfolino-metila, piperazinila, pipe-razinil-metila e pirrolidinil-metóxi; em que o referido imidazolila, piperazinila,piperazinil-metila, é opcionalmente substituído com um grupo selecionado demetila, etila e hidróxi-etila.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, selecionado de:N-[4-(4-Etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorometil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-benzamida; 4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-N-(4-piperazin-1-ilmetil-3-trifluorometil-fenil)-ben-zamida; 3-(4-Metil-imidazol-1 -il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d] pi-rimidin-4-ÍI)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; N-[4-Metil-3-(2-7H-pirro-lo[2,3-d]pirimidin-4-il-acetilamino)-fenil]-3-trifluorometil-benzamida; N-(3-lmi-dazol-1-il-5-trifluorometil-fenil)-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin--4- il)-ureído]-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; 4-(2-Metil-imidazol-1-il)-N-{4-me-til-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-morfolin-4-il-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-tri-fluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4-morfolin-4-ilmetil-3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureí-do]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-3-trifluorometil-benzamida; 4-(4-Etil-pipe-razin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}--3-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin--4-il)-ureído]-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1 -il)-5-trifluorometil-benzamida; 3-dime-tilamino-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}--5- trifluorometil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{4-metil-3-[3-metil-- 3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; 3-(4-Etil-piperazin-1-il)-N-{4-mettl-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; 4-metil-N-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluorometil-fenil]-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-benza-mida; 3-[4-(2-Hidróxi-etil)-piperazin-1-il]-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo [2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-5-trifluorometil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-- 3- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-piperazin-1-il-5-trifluorometil-benzamida; N-{4-Metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fe-nil}-3-(pirrolidin-2-ilmetóxi)-5-trifluGrometil-benzamida; N-{3-metóxi-5-[3-metil-- 3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-t^benzamida; N-{3-metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-3-(4-metil-imidazol-1 -il)-5-trifluorometil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{3-metóxi-5-[3-metil-3-nil}-3-trifluorometil-benzamida; N-{3-metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo[2,3-d] piri-midin-4-il)-ureído]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluorometil-benza-mida; e N-{3-metóxi-5-[3-metil-3-(7H-pi>rolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-ureído]-fenil}-4- (2-metil-imidazol-1-il)-3-trifluorometil-benzamida.

6. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1,em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

7. Método para tratar uma doença em um animal em que a inibi-ção da atividade de cinase pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ousintomalogia da doença, método qual compreende administrar ao animaluma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com areivindicação 1.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a cinase éselecionada de Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes,FGFR3, Flt3, IKKcc, IKKp, JNK1a1, JNK2oc2, Lck, Met, MKK4, MKK6,p70S6K, PAK2, PDGFRcc, PKA, PKCoc, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1,SAPK2ct, SAPK2(3, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e TrkB.

9. Emprego de um composto de acordo com a reivindicação 1,na fabricação de um medicamento para tratar uma doença em um animal emque a atividade de cinase de Abi, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK,cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKB, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4,MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1,SAPK2a, SAPK2B, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 e TrkB contribui para apatologia e/ou sintomalogia da doença.