BRPI0616359B1 - Composição farmacêutica, processo para purificação de um anticorpo de il-13 e uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo - Google Patents

Composição farmacêutica, processo para purificação de um anticorpo de il-13 e uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo Download PDF

Info

Publication number
BRPI0616359B1
BRPI0616359B1 BRPI0616359-9A BRPI0616359A BRPI0616359B1 BR PI0616359 B1 BRPI0616359 B1 BR PI0616359B1 BR PI0616359 A BRPI0616359 A BR PI0616359A BR PI0616359 B1 BRPI0616359 B1 BR PI0616359B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
antibody
pharmaceutical composition
amino acid
seq
acid sequence
Prior art date
Application number
BRPI0616359-9A
Other languages
English (en)
Inventor
Fish Brendan Cormick
Langstone Jeanette Elizabeth
Karen Bannister
Hope Claire Louise
Original Assignee
Medimmune Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37434894&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BRPI0616359(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GBGB0519923.7A external-priority patent/GB0519923D0/en
Application filed by Medimmune Limited filed Critical Medimmune Limited
Publication of BRPI0616359A2 publication Critical patent/BRPI0616359A2/pt
Publication of BRPI0616359B1 publication Critical patent/BRPI0616359B1/pt
Publication of BRPI0616359B8 publication Critical patent/BRPI0616359B8/pt

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39516—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum from serum, plasma
    • A61K39/39525—Purification
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

composição de anticorpo de interleucina-13. a presente invenção se refere a urna composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de interleucina-13, mais particularmente, um anticorpo monoclonal de interleucina-13, especialmente, um anticorpo monoclonal de interleucina-13 humana, também, a um processo para purificação do dito anticorpo e ao uso do dito anticorpo no tratamento de distúrbios correlacionados à interleucina-13, tais como, asma, dermatite atópica, rinite alérgica, fibrose, doença pulmonar obstrutiva crônica, escleroderma, doença inflamatória do intestino e linfoma de hodgkin, particularmente, asma.

Description

[001] A presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de interleucina-13, mais particularmente, um anticorpo monoclonal de interleucina-13, especialmente, um anticorpo monoclonal de interleucina-13 humana, também, a um processo para purificação do dito anticorpo e ao uso do dito anticorpo no tratamento de distúrbios correlacionados à interleucina-13, tal como, a asma.
[002] A interleucina-13 (Il-13) é uma citocina de 114 aminoácidos com uma massa molecular não-modificada de aproximadamente 12 kDa. A IL-13 é mais proximamente correlacionada à IL-4, com a qual compartilha 30% de homologia de seqüência ao nível do aminoácido. O gene da IL-13 humana está localizado no cromossomo 5q31, adjacente ao gene da IL-4 [McKenzie, A.N. et al., J. Immunol., 1993, 150(12), 5436-5444; Minty, A. et al., Nature, 1993, 362(6417), 248-50].
[003] Embora inicialmente identificada como citocina derivada do linfócito Th2 CD4+, a IL-13 é também produzida por células-T Th1 CD4+, células NK de linfócitos CD8+ T, e populações de células diferentes da célula T, tais como, as células mastócitos, basófilos, eosinófilos, macrófagos, monócitos e as células do músculo liso das vias aéreas.
[004] A IL-13 tem sido correlacionada a um determinado número de doenças, em particular, doenças que são causadas por uma resposta inflamatória. Por exemplo, a administração da IL-13 recombinante às vias aéreas de roedores simples não-sensibilizados foi mostrada como causadora de diversos aspectos do fenótipo da asma, incluindo a inflamação das vias aéreas, produção de muco e hiper-susceptibilidade das vias aéreas (AHR) [Wills-Karp, M. et al., Science, 1998, 282(5397), 2258-2261; Grunig, G. et al., Science, 1998, 282(5397), 2261-2263; Venkayya, R., et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 26(2), 202-208; Morse, B. et al., Am. J. Physiol., Lung Cell Mol. Physiol., 2002, 282(1), L44-49]. Um fenótipo similar foi observado em um camundongo transgênico no qual a IL-13 foi especificamente sobrexpressa no pulmão. Nesse modelo, uma exposição mais acentuada à IL-13 também resultou em fibrose [Zhu, Z. et al., J. Clin. Invest., 1999, 103(6), 779788].
[005] Um determinado número de polimorfismos genéticos no gene da IL-13 foi também correlacionado a doenças alérgicas. Em particular, uma variante do gene da IL-13, em que o resíduo de arginina no aminoácido 130 é substituído por glutamina (Q130R), foi associada com a asma bronquial, dermatite atópica e níveis elevados de soro de IgE [Heinzmann, A. et al., Hum. Mol. Genet., 2000, 9(4), 549-559; Howard, T. D. et al., Am. J. Hum. Genet., 2002, 70(1), 230-236; Kauppi, P. et al., Genomics, 2001, 77(1-2), 35-42; Graves, P. E. et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2000, 105(3), 506-513]. Esta particular variante da IL-13 é também referida como variante Q110R (resíduo de arginina no aminoácido 110 substituído por glutamina) por alguns grupos que excluem a seqüência de sinal do aminoácido 20 da contagem do aminoácidos.
[006] A produção da IL-13 foi também associada com a asma alérgica [van der Pouw Kraan, T. C. et al., Genes Immun., 1999, 1(1), 61-65] e elevados níveis da IL-13 foram medidos em pessoas humanas com rinite atópica (febre do feno), dermatite alérgica (eczema) e sinusite crônica.
[007] Além da asma, a IL-13 foi associada a outros condicionamentos fibróticos. Os níveis elevados da IL-13, até 1000 vezes maior que da IL-4, foram medidos no soro de pacientes com esclerose sistêmica e em amostras de lavagem interna bronco-alveolar (BAL) de pacientes afetados com outras formas de fibrose pulmonar [Hasegawa, M. et al., J. Rheumatol., 1997, 24(2), 328-332; Hancock, A. et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 1998, 18(1), 60-65].
[008] Foi demonstrado que a sobrexpressão da IL-13 no pulmão de camundongo provocou enfisema, elevada produção de muco e inflamação, refletindo aspectos da doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) [Zheng, T. et al., J. Clin. Invest., 2000, 106(9), 1081-1093].
[009] Foi proposto que a IL-13 pode também desempenhar um importante papel na patogênese da doença inflamatória do intestino [Heller, F. et al., Immunity, 2002, 17(5), 629-38] e elevados níveis da IL- 13 foram detectados no soro de alguns pacientes da doença de Hodgkin, quando comparado aos controles normais [Fiumara, P. et al., Blood, 2001, 98(9), 2877-2878].
[0010] Os inibidores de IL-13 são também acreditados como sendo terapeuticamente úteis na prevenção de reincidência ou metástase de tumores [Terabe, M. et al., Nat. Immunol., 2000, 1(6), 515-520]. A inibição da IL-13 foi também mostrada como reforço de vacinas antivirais em modelos de animais, podendo ser benéfica no tratamento de HIV e outras doenças infecciosas [Ahlers, J. D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2002, 99(20), 13020-13025].
[0011] Uma abordagem dirigida ao anticorpo para inibição da IL-13 foi descrita. Por exemplo, o documento de patente WO 2005/007699 (Cambridge Antibody Technology Limited) descreve uma série de moléculas de anticorpo anti-IL-13 humana, que são mostradas para neutralizar a atividade da IL-13 e que são reivindicadas como sendo de uso potencial no tratamento de distúrbios correlacionados à IL-13,
[0012] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo de IL-13 e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tamponados para um pH entre 4,5-6,0 com um tampão de acetato.
[0013] É normalmente conhecido que procedimentos de purificação de anticorpo, tipicamente, requerem um determinado número de técnicas de separação, tais como, separações por cromatografia (por exemplo, cromatografia da Proteína A, cromatografia por troca de íons e similares). Uma conseqüência desse modo de separação requer o uso de um certo número de diferentes tampões. Por exemplo, o procedimento de purificação de anticorpo descrito no documento de patente WO 2004/076485 requer o uso de glicina/glicinato 50mM, pH de 8,0, para a cromatografia da Proteína A, Tris-HCl 50mM, pH de 8,0 e fosfato de sódio 20mM, pH de 6,5, para a cromatografia de Q-Sefarose, e Tris-HCl 25mM, pH de 8,6, para cromatografia DEAE-sefarose.
[0014] Ao contrário, a presente invenção requer o uso de um simples tampão de acetato em uma concentração fixa e em um predeterminado pH presente na dita composição, o que traz a vantagem de estar presente em todas as etapas de purificação de anticorpo de IL- 13, Assim, o uso desse tampão, não apenas no começo do processo de purificação, mas também em todo o processo de purificação, resulta, portanto, numa redução do tempo de processamento, de custo e aumento de produção do produto.
[0015] Deverá ser observado que as referências ao "anticorpo" incluem as referências a uma imunoglobulina, natural ou produzida parcial ou totalmente sintética. O termo também cobre qualquer polipetídeo ou proteína compreendendo um domínio de ligação a antígeno.
[0016] Fragmentos de anticorpos que compreendem um domínio de ligação a antígeno são moléculas, tais como, Fab, scFv, Fv, dAb, Fd; e diabodies (dímeros de scFv).
[0017] É possível se tomar anticorpos monoclonais e outros anticorpos e se utilizar técnicas de tecnologia de DNA recombinante para produzir outros anticorpos ou moléculas quiméricas que retenham a especificidade do anticorpo original. Essas técnicas podem envolver a introdução de codificação do DNA na região de imunoglobulina variável ou em regiões de determinação de complementaridade (CDRs), de um anticorpo para as regiões constantes ou regiões constantes mais regiões de estrutura de uma diferente imunoglobulina. Consultar, por exemplo, os documentos de patentes EP-A-184187, GB 2,188,638-A ou EP-A-239400, e uma ampla variedade de literatura subseqüente.
[0018] Alternativamente, novas regiões de VH ou VL portadoras de seqüências derivadas de CDR podem ser geradas usando mutagênese aleatória de um ou mais genes selecionados de VH e/ou VL, a fim de gerar mutações em todo o domínio variável. Essa técnica é descrita por Gram et al., PNAS, USA, 1992, 89, 3576-3580, que utiliza PCR de propensão a erro. Outro método que pode ser usado é dirigir a mutagênese para regiões de CDR de genes VH e VL. Essas técnicas sao divulgadas por Barbas et al., PNAS, USA, 1994, 91, 3809-3813 e Schier et al., J. Mol. Biol., 1996, 263, 551-567.
[0019] Como os anticorpos podem ser modificados de diversas maneiras, o termo "anticorpo" deve ser considerado como cobrindo qualquer elemento de ligação específica ou substância tendo um domínio de ligação a antígeno, com a necessária especificidade. Assim, esse termo cobre os fragmentos e derivados de anticorpos, incluindo qualquer polipetídeo que compreenda um domínio de ligação aimunoglobulina, tanto natural como total ou parcialmente sintética. As moléculas quiméricas compreendendo um domínio de ligação aimunoglobulina ou equivalente, fundidas a outro polipetídeo, são, portanto, incluídas. A clonagem e expressão de anticorpos quiméricos são descritas nos documentos de patentes EP-A-0120694 e EP-A- 0125023 e numa ampla variedade de literatura subseqüente.
[0020] Outros procedimentos disponíveis no estado da técnica de engenharia de anticorpos tornou possível se isolar anticorpos humanos e humanizados. Por exemplo, os hibridomas humanos podem ser feitos conforme descrito por Kontermann et al., [2001; Antibody Engineering, Springer Laboratory Manuals]. A exibição do fago, uma outra técnica estabelecida para a geração de elementos de ligação específica, foi descrita em detalhes em diversas publicações, tais como, Kontermann et al. (supra) e documento de patente W0 92/01047, Camundongos transgênicos, em que os genes do anticorpo do camundongo são inativados e funcionalmente substituídos por genes de anticorpo humano, deixando intacto outros componentes do sistema imune do camundongo, podem ser usados para isolamento de anticorpos humanos em antígenos humanos. A exibição do ribossomo, uma tecnologia de translação isento de célula que introduz mutações em seqüências de genes conhecidas, pode também ser usada para gerar e/ou otimizar elementos de ligação específica [Hanes e Plückthun, PNAS, USA, 1994, 94, 4937-4942; He and Taussig Nucleic Acids Res., 1997, 25, 5132-5134; Schaffitzel et al., J. Immunol. Methods, 1999, 231, 119-135; He et al., J. Immunol. Methods, 1999, 231, 105-117; He et al., Methods Mol. Biol., 2004, 248, 177-189].
[0021] As moléculas de anticorpos sintéticos podem ser criadas pela expressão de genes gerados por meio de oligonucleotídeos sintetizados e construídos com adequados vetores de expressão, por exemplo, conforme descrito por Knappik et al., J. Mol. Biol., 2000, 296, 57-86 ou por Krebs et al., Journal of Immunological Methods, 2001, 254, 67-84,
[0022] Foi mostrado que os fragmentos de um anticorpo inteiro podem executar a função de antígenos de ligação. Exemplos de fragmentos de ligação são: (i) o fragmento Fab, consistindo de domínios de VL, VH, CL e CH1; (ii) o fragmento Fd, consistindo de domínios de VH e CH1; (iii) o fragmento Fv, consistindo de domínios de VL e VH de um único anticorpo; (iv) o fragmento dAb [Ward, E. S. et al., Nature, 1989, 341, 544-546; McCafferty et al., Nature, 1990, 348, 552-554; Holt et al., Trends Biotechnol. 2003, 21(11), 484-490] que consiste de um domínio de VH ou VL; (v) regiões de CDR isoladas; (vi) F(ab'), 2 fragmentos, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos de Fab ligados; (vii) moléculas de Fv de cadeia única (scFv), onde um domínio de VH e um domínio de VL são ligados por um ligador de peptídeo que permite aos dois domínios se associarem para formar um local de ligação a antígeno [Bird et al., Science, 1988, 242, 423-426; Huston et al., PNAS, USA, 1988, 85, 5879-5883]; (viii) dímeros de Fv de cadeia bi-específica única (documento de patente PCT/US92/09965); e (ix) "diabodies", fragmentos multivalentes ou multi-específicos construídos por meio de fusão de genes [documento de patente W0 94/13804; P. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 64446448]. As moléculas Fv, scFv ou moléculas de diabody podem ser estabilizadas mediante incorporação de ligações ou pontes de dissulfeto, que ligam os domínios de VH e VL [Y. Reiter et al., Nature Biotech., 1996, 14, 1239-1245]. Minicorpos compreendendo uma scFv unida a um domínio de CH3 podem também ser feitos [S. Hu et al., Cancer Res., 1996, 56, 3055-3061].
[0023] Quando anticorpos bi-específicos devem ser usados, estes podem ser anticorpos bi-específicos convencionais, os quais podem ser fabricados de uma variedade de maneiras [Holliger and Winter Current Opinion Biotechnol., 1993, 4, 446-449], por exemplo, preparados quimicamente ou a partir de hibridomas híbridos ou podem ser quaisquer dos fragmentos de anticorpos bi-específicos mencionados acima. Exemplos de anticorpos bi-específicos incluem aqueles da tecnologia BiTE, em que os domínios de ligação de dois anticorpos com diferente especificidade podem ser usados e diretamente ligados através de curtos peptídeos flexíveis. Isto combina dois anticorpos em uma única cadeia de polipetídeo curta. Os diabodies e scFv podem ser construídos sem uma região de Fc, usando apenas domínios variáveis, reduzindo potencialmente os efeitos da reação anti-idiotípica.
[0024] Os diabodies bi-específicos, que se opõem a todos os anticorpos bi-específicos, podem ser também particularmente úteis, pelo fato de poderem ser facilmente reconstruídos e expressos na E. coli. Os diabodies (e muitos outros polipetídeos, como os fragmentos de anticorpos) de apropriada especificidade de ligação podem ser facilmente selecionados usando a exibição de fagos (conforme descrito no documento de patente W0 94/13804) a partir das bibliotecas. Se um braço do diabody é para ser mantido constante, por exemplo, com uma especificidade dirigida contra a IL-13, então pode ser feita uma biblioteca onde o outro braço é variado, sendo selecionado um anticorpo de apropriada especificidade. Anticorpos inteiramente bi-específicos podem ser feitos através da engenharia do tipo "botões-em-furos" [Ridgeway et al., Protein Eng., 1996, 9, 616-621].
[0025] Deverá ser observado que as referências a um "anticorpo de IL-13" incluem as referências a um inteiro anticorpo ou fragmento de anticorpo que é capaz de neutralizar uma IL-13 de ocorrência natural, numa concentração inferior a 500nM, conforme os ensaios estabelecidos nos Exemplos 2-10 e 25 do documento de patente WO 2005/007699,
[0026] Preferivelmente, o anticorpo de IL-13 neutraliza a IL-13 de ocorrência natural com uma atividade farmacológica que é igual ou melhor que a atividade farmacológica de um local de ligação a um antígeno de IL-13, formado pelo domínio BAK502G9 VH (SEQ ID NO:15, no documento de patente WO 2005/007699) e domínio BAK502G9 VL (SEQ ID NO:16, no documento de patente WO 2005/007699).
[0027] Preferivelmente, o anticorpo de IL-13 é um anticorpo monoclonal de IL-13, mais preferivelmente, um anticorpo monoclonal de IL-13 humano.
[0028] Um anticorpo de IL-13 particularmente preferido é um anticorpo selecionado dentre aqueles descritos nos documentos de patentes WO 2003/035847, WO 2003/086451, WO 2005/007699 ou WO 2005/081873.
[0029] Por exemplo, em uma modalidade particularmente preferida, o anticorpo de IL-13 é BAK278D6 HCDR1-3 e LCDR1-3 (SEQ ID NOS: 1-6, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente). Um conjunto de CDR’s com o conjunto de BAK278D6 de CDR’s, conjunto BAK278D6 de HCDR’s ou BAK278D6 LCDR’s, ou uma ou duas substituições no mesmo, é dito como sendo da linha celular BAK278D6.
[0030] Numa outra modalidade particularmente preferida, oanticorpo de IL-13 é BAK502G9 HCDR1-3 e LCDR1-3 (SEQ ID NOS: 712, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente).
[0031] Ainda numa outra modalidade particularmente preferida, o anticorpo de IL-13 é BAK1111D10 HCDR1-3 e LCDR1-3 (SEQ ID NOS: 91-96, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente).
[0032] Em ainda outra modalidade particularmente preferida, o anticorpo de IL-13 é BAK1167F2 HCDR1-3 e LCDR1-3 (SEQ ID NOS: 61-66, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente).
[0033] Ainda numa outra modalidade particularmente preferida, o anticorpo de IL-13 é BAK1183H4 HCDR1-3 e LCDR1-3 (SEQ ID NOS: 97-102, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente).
[0034] O adequado conjunto de CDR’s é provido dentro de regiões de estrutura de anticorpo ou de outras armações de proteínas, por exemplo, fibronectina ou citocromo B [Koide et al., J. Mol. Biol., 1998, 284, 1141-1151; Nygren et al., Current Opinion in Structural Biology, 1997, 7, 463-469]. Preferivelmente, são empregadas regiões de estrutura de anticorpo, e quando são empregadas, elas são preferivelmente da linha de microorganismos, mais preferivelmente, a região de estrutura de anticorpo para cadeia pesada pode ser a DP14 da família VH1, A região de estrutura preferida para cadeia leve pode ser À3-3H. Para o conjunto BAK502G9 de CDR’s, é preferido que as regiões de estrutura de anticorpo sejam para VH FR1-3, as SEQ ID NOS: 27-29, no documento de patente WO 2005/007699,respectivamente, e para cadeia leve FR1-3, as SEQ ID NOS: 30-32, no documento de patente WO 2005/007699, respectivamente. Numa modalidade preferida, um domínio de VH é provido com a seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, no documento de patente WO 2005/007699, este sendo chamado de "domínio de VH BAK502G9". Numa outra modalidade altamente preferida, é provido um domínio de VL com a seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, no documento de patente WO 2005/007699, este sendo chamado de "domínio de VL BAK502G9".
[0035] Numa modalidade preferida, o anticorpo de IL-13 reage de forma cruzada com o cinomólogo de IL-13 e/ou a variante de IL-13, Q130R.
[0036] Preferivelmente, o anticorpo de IL-13 está presente na composição farmacêutica numa quantidade entre 1 e 200 mg/mL, mais preferivelmente, entre 50 e 100 mg/mL, especialmente, 50 mg/mL.
[0037] Preferivelmente, a composição farmacêutica é tamponada para um pH de 5,2 a 5,7, mais preferivelmente, de 5,5 ± 0,1, A seleção de tal pH confere uma significativa estabilidade para a composição farmacêutica. Exemplos de tampões alternativos que controlam o pH nessa faixa, incluem os tampões de succinato, gliconato, histidina, citrato, fosfato, glutárico, cacodilite, maleato ácido de sódio, tris- (hidroxilmetil)aminometano (Tris), ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico (MES), imidazol e outros tampões de ácidos orgânicos.
[0038] Preferivelmente, o tampão é um tampão de acetato, mais preferivelmente, acetato de sódio.
[0039] Preferivelmente, o tampão de acetato está presente na composição farmacêutica numa quantidade entre 1 e 100mM, mais preferivelmente, entre 30 e 70 mM, especialmente, 50 mM.
[0040] Deverá ser observado que as referências a um "excipiente farmaceuticamente aceitável" inclui as referências a qualquer excipiente convencionalmente usado nas composições farmacêuticas. Esses excipientes podem, tipicamente, incluir um ou mais dentre tensoativos, sal inorgânico ou orgânico, estabilizador, diluente, solubilizador, agente redutor, antioxidante, agente quelante, conservante e similares.
[0041] Exemplos de um tensoativo típico incluem: - tensoativos não-iônicos (HLB 6 a 18), tais como, ésteres de ácido graxo de sorbitan (por exemplo, monocaprilato de sorbitan, monolaurato de sorbitan, monopalmitato de sorbitan), ésteres de ácido graxo de glicerina (por exemplo, monocaprilato de glicerina, monomiristato de glicerina, monoestearato de glicerina), ésteres de ácido graxo de poliglicerina (por exemplo, monoestearato de decaglicerila, diestearato de decaglicerila, monolinoleato de decaglicerila), ésteres de ácido graxo de sorbitan- polioxietileno (por exemplo, monolaurato de sorbitan-polioxietileno, monooleato de sorbitan-polioxietileno, monoestearato de sorbitan- polioxietileno, monopalmitato de sorbitan-polioxietileno, trioleato de sorbitan-polioxietileno, triestearato de sorbitan-polioxietileno), ésteres de ácido graxo de sorbitol-polioxietileno (por exemplo, tetraestearato de sorbitol-polioxietileno, tetraoleato de sorbitol-polioxietileno), ésteres de ácido graxo de glicerina-polioxietileno (por exemplo, monoestearato de gliceril-polioxietileno), ésteres de ácido graxo de polietilenoglicol (por exemplo, diestearato de polietilenoglicol), éteres alquílicos de polioxietileno (por exemplo, éter laurílico de polioxietileno), éteres alquílicos de polioxietileno-polioxipropileno (por exemplo, éter de polioxietileno-polioxipropilenoglicol, éter propílico de polioxietileno- polioxipropileno, éter cetílico de polioxietileno-polioxipropileno), éteres alquilfenílicos de polioxietileno (por exemplo, éter nonilfenílico de polioxietileno), óleos de mamona hidrogenado-polioxietileno (por exemplo, óleo de mamona-polioxietileno, óleo de mamona hidrogenado- polioxietileno), derivados de cera de abelha-polioxietileno (por exemplo, cera de abelha de sorbitol-polioxietileno), derivados de lanolina- polioxietileno (por exemplo, lanolina-polioxietileno), e amidas de ácido graxo de polioxietileno (por exemplo, estearil-amida de polioxietileno);- tensoativos aniônicos, tais como, sais de sulfato de C10-C18 alquila (por exemplo, sulfato de cetil sódico, sulfato de lauril sódico, sulfato de oleil sódico), sais de sulfato de éter de polioxietileno C10-C18 alquila, com uma média de 2 a 4 moles de óxido de etileno (por exemplo, sulfato de lauril- polioxietileno sódico), e sais de éster de sulfosuccinato de C8-C18 alquila (por exemplo, éster de sulfosuccinato de lauril sódico); e tensoativos naturais, tais como, lecitina, glicero-fosfolipídeo, esfingo-fosfolipídeos (por exemplo, esfingo-mielina), e ésteres de sacarose de ácidos C12-C18 graxos.
[0042] Preferivelmente, o tensoativo é selecionado de ésteres de ácido graxo de sorbitan-polioxietileno. Particularmente e preferivelmente, o tensoativo é Polissorbato 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81 e 85, mais preferivelmente, Polissorbato 20 e 80, especialmente, Polissorbato 80,
[0043] Preferivelmente, o tensoativo está presente na composição farmacêutica numa quantidade entre 0,001 e 0,1% (peso/peso), mais preferivelmente, entre 0,005 e 0,05 (peso/peso), especialmente, numa quantidade de 0,01% (peso/peso).
[0044] Exemplos de um sal inorgânico típico incluem: cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, fosfato de sódio, sulfato de sódio, sulfato de amônio, fosfato de potássio e bicarbonato de sódio ou qualquer outro sal de sódio, potássio ou cálcio. Preferivelmente, o sal inorgânico é cloreto de sódio.
[0045] Preferivelmente, o sal inorgânico está presente na composição farmacêutica numa quantidade entre 10 e 200mM, mais preferivelmente, entre 60 e 130mM, especialmente, numa quantidade de 85mM.
[0046] Exemplos de um agente redutor incluem N-acetil-cisteína, N- acetil-homocisteína, ácido tiótico, tiodiglicol, tioetanolamina, tioglicerol, tiossorbitol, ácido tioglicólico e um sal do mesmo, tiossulfato de sódio, glutationa e um ácido C1-C7 tioalcanóico.
[0047] Exemplos de um antioxidante incluem ácido eritórbico, dibutilidroxitolueno, butilidroxianisol, alfa-tocoferol, acetato de tocoferol, ácido L-ascórbico e um sal do mesmo, palmitato de ácido L-ascórbico, estearato de ácido L-ascórbico, bissulfito de sódio, sulfito de sódio, galato de triamila e galato de propila.
[0048] Exemplos de um agente quelante incluem etilenodiamino- tetraacetato dissódico (EDTA), pirofosfato de sódio e metafosfato de sódio.
[0049] Exemplos de um estabilizador incluem creatinina, um aminoácido selecionado de histidina, alanina, ácido glutâmico, glicina, leucina, fenilalanina, metionina, isoleucina, prolina, ácido aspártico, arginina, lisina e treonina, um carboidrato selecionado de sacarose, trealose, sorbitol, xilitol e manose, tensoativos selecionados de polietilenoglicol (PEG; por exemplo, PEG3350 ou PEG4000) ou ésteres de ácido graxo de sorbitan-polioxietileno (por exemplo, Polissorbato 20 ou Polissorbato 80), ou qualquer combinação dos mesmos.
[0050] Numa modalidade preferida, o estabilizador compreende um único carboidrato, conforme anteriormente definido (por exemplo, trealose).
[0051] Numa modalidade alternativamente preferida, o estabilizador compreende uma combinação de aminoácidos com um carboidrato (por exemplo, trealose e alanina ou trealose, alanina e glicina).
[0052] Numa outra modalidade alternativamente preferida, o estabilizador compreende um aminoácido em combinação com um carboidrato e um tensoativo (por exemplo, trealose, alanina e PEG350, ou trealose, prolina e PEG350, ou trealose, alanina e Polissorbato 80, ou trealose, prolina e Polissorbato 80, ou trealose, alanina, glicina e PEG3350, ou trealose, alanina, glicina e Polissorbato 80).
[0053] Ainda numa outra modalidade alternativamente preferida, o estabilizador compreende um aminoácido em combinação com um tensoativo (por exemplo, alanina e PEG3350 ou alanina, glicina e PEG3350).
[0054] Ainda numa outra modalidade alternativamente preferida, o estabilizador compreende um carboidrato em combinação com um tensoativo (por exemplo, trealose e PEG3350 ou trealose e Polissorbato 80).
[0055] Exemplos de um conservante incluem cloreto de octadecildimetilbenzil-amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de cloretos de alquilbenzildimetilamônio, em que os grupos alquila são compostos de cadeia longa), cloreto de benzetônio, alcoóis aromáticos, tais como, fenol, álcool butílico e álcool benzílico, alquil-parabens, tais como, metil ou propil-paraben, catecol, resorcinol, cicloexanol, 3-pentanol e m-cresol.
[0056] Numa modalidade preferida da invenção, a composição farmacêutica compreende um anticorpo de IL-13, um tensoativo e um sal inorgânico, tamponados para um pH de 5,5 ± 0,1, com um tampão de acetato.
[0057] Numa adicional modalidade preferida da invenção, a composição farmacêutica compreende um anticorpo de IL-13 e Polissorbato 80, tamponados para um pH de 5,5 ± 0,1, com, um tampão de acetato de sódio.
[0058] Ainda numa outra modalidade preferida da invenção, a composição farmacêutica compreende 50mg/mL de um anticorpo de IL- 13, cloreto de sódio a 85mM e Polissorbato 80 a 0,01% (peso/peso), tamponados para um pH de 5,5 ± 0,1, com um tampão de acetato de sódio a 50mM.
[0059] De acordo com um segundo aspecto da invenção, é proporcionado um processo para purificação de um anticorpo de IL-13, cujo processo compreende uma ou mais etapas de separação cromatográfica, em que cada das ditas etapas de separação compreende a elução com um tampão de elução, o qual compreende um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tamponados para um pH de 3,5-7,0 com um tampão de acetato.
[0060] Preferivelmente, a um ou mais etapas de separação cromatográfica são selecionadas de cromatografia de afinidade (por exemplo, cromatografia de afinidade da Proteína A ou Proteína G), cromatografia de troca de íons (por exemplo, cromatografia de troca de cátion e anion), cromatografia de interação hidrofóbica (por exemplo, cromatografia de fenila), cromatografia de hidroxiapatita, cromatografia de exclusão de tamanho, cromatografia de afinidade de metal imobilizado, cromatografia de interação hidrofílica, cromatografia de adsorção tiofílica, cromatografia de adsorção de euglobulina, cromatografia de ligando de corante, ou cromatografia de boronato imobilizado. De modo mais preferível, a separação cromatográfica é executada por cromatografia de afinidade da Proteína A, seguida de cromatografia de troca de cátion (por exemplo, usando uma matriz de SP-sefarose), seguido de cromatografia de troca de anion (por exemplo, usando uma matriz de Q-sefarose).
[0061] Preferivelmente, o um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendem um sal inorgânico, tal como, cloreto de sódio.
[0062] Preferivelmente, o sal inorgânico está presente no tampão de elução numa quantidade entre 10 e 200mM, mais preferivelmente, entre 60 e 130mM, especialmente, numa quantidade de 85mM.
[0063] Exemplos de tampões alternativos que controlam o pH na faixa de 3,5-7,0 incluem os tampões de succinato, gliconato, histidina, citrato, fosfato e outros tampões de ácidos orgânicos.
[0064] Preferivelmente, o tampão é um tampão de acetato, mais preferivelmente, de acetato de sódio.
[0065] Preferivelmente, o tampão de acetato está presente no tampão de elução numa quantidade entre 1 e 100mM, mais preferivelmente, entre 30 e 70mM, especialmente, numa quantidade de 50mM.
[0066] Mais preferivelmente, o tampão de elução compreende acetato de sódio a 50mM, e cloreto de sódio a 85mM, tamponados para um pH de 5,5 ± 0,1.
[0067] Um ácido nucléico que codifica qualquer anticorpo de IL-13 da invenção (por exemplo, CDR ou um conjunto de CDRs, ou um domínio de VH ou domínio de VL, ou um local de ligação a antígeno de anticorpo ou molécula de anticorpo, por exemplo, scFv ou IgG4, conforme fornecido), pode ser expresso mediante cultura sob apropriadas condições de células recombinantes hospedeiras contendo o referido ácido nucléico. Após a produção mediante expressão de um domínio de VH ou VL ou de elemento de ligação específica, pode ser isolado e/ou purificado usando qualquer técnica adequada, conforme apropriado.
[0068] Elementos de ligação específica, domínios de VH e/ou VL e moléculas e vetores codificadores de ácido nucléico podem ser fornecidos isolados e/ou purificados, por exemplo, a partir de seu ambiente natural, numa forma substancialmente pura ou homogênea ou, no caso do ácido nucléico, livre ou substancialmente livre de ácido nucléico ou gene de origem diferente da seqüência codificadora de um polipetídeo com a necessária função. O ácido nucléico pode compreender DNA ou RNA e pode ser total ou parcialmente sintético.
[0069] Uma referência a uma seqüência de nucleotídeo conforme aqui estabelecida, inclui uma molécula de DNA com a seqüência especificada e uma molécula de RNA com a seqüência especificada, em que U é substituído por T, a menos que o contexto requeira de outro modo.
[0070] Os sistemas para clonagem e expressão de um polipetídeo em uma variedade de diferentes células hospedeiras são bem conhecidos. Adequadas células hospedeiras incluem as bactérias, células de mamíferos, células de plantas, leveduras e sistemas de baculovirus, e plantas transgênicas e animais.
[0071] As linhas celulares de mamíferos disponíveis no segment da técnica para expressão de um polipetídeo heterólogo incluem as células de ovário de criceto Chinês (CHO), as células HeLa, células de rins de criceto recém-nascido, células de melanoma de camundongo NS0, células de de mieloma de rato YB2/0, células de rins embriônicos humanos, células de retina embriônica humana e muitas outras.
[0072] Preferivelmente, a dita linha celular de mamífero é uma cultura de célula de mieloma, tal como, células de NS0 [Galfre and Milstein Methods Enzymology, 1981, 73, 3]. As células de mieloma são células de plasmacitoma, isto é, células da linhagem de célula de linfóide. Um exemplo da linha celular NS0 é, por exemplo, a linha celular ECACC No. 85110503, livremente disponível da European Collection of Cell Cultures (ECACC), Centre for Applied Microbiology & Research, Salisbury, Wiltshire, SP4 0JG, Reino Unido. A linha celular NS0 foi descoberta como sendo capaz de proporcionar o surgimento de rendimentos de produtos extremamente altos, em particular, se usada para a produção de anticorpos recombinantes.
[0073] Uma linha celular de mamífero alternativamente preferida inclui as células de ovário de criceto Chinês (CHO). Estas células podem ser deficientes de diidrofolato redutase (dhfr) e, assim, dependentes da timidina e hipoxantina para o crescimento [PNAS, 1990, 77, 4216-4220]. A linha celular parental de CHO dhfr é transfectada com o gene de anticorpo e o gene dhfr, o que possibilita a seleção de transformantes de célula CHO de fenótipo positivo de dhfr. A seleção é realizada mediante cultura de colônias em um meio desprovido de timidina e hipoxantina, cuja ausência impede que as células não-transformadas cresçam e as células transformadas tornem a se recuperar do caminho de folato, dessa forma, escapando do sistema de seleção. Esses transformantes normalmente expressam baixos níveis do gene produto, em virtude da co-integração de ambos os genes transfectados. Os níveis de expressão do gene de anticorpo podem ser aumentados através de ampliação, usando metotrexato (MTX). Esta droga é um inibidor direto da enzima dhfr e permite o isolamento de colônias resistentes que amplificam seu número de cópias de gene de dhfr de modo suficiente, para sobreviver sob essas condições. Uma vez que a diidrofolato redutase (dhfr) e os genes de anticorpo estão mais proximamente ligados nos transformantes originais, ocorre uma ampliação normalmente concomitante e, portanto, um aumento de expressão do desejado gene de anticorpo.
[0074] Outro sistema de seleção para uso com células de CHO ou células de mieloma é o sistema de ampliação de glutamina sintetase (GS) descrito no documento de patente WO 87/04462, Esse sistema envolve a transfecção de uma célula com um gene codificador da enzima GS e o desejado gene de anticorpo. As células são depois selecionadas, crescendo em um meio isento de glutamina. Estas células selecionadas são depois submetidas à inibição da enzima GS usando metionina-sulfoximina (MSX). As células, a fim de sobreviverem, irão ampliar o gene GS com a simultânea ampliação do gene codificador do anticorpo.
[0075] A expressão de anticorpos e fragmentos de anticorpos em células procarióticas, tais como, E. coli, é bem estabelecida no segmento da técnica. Para uma melhor análise, consultar, por exemplo, Pluckthun A., Bio/Technology, 1991, 9, 545-551, A expressão emcélulas eucarióticas na cultura é também disponível para os especialistas versados na técnica como uma opção de produção de um elemento de ligação específica, por exemplo, conforme descrito por [Chadd H.E. e Chamow S.M., Current Opinion in Biotechnology, 2001, 12, 188-194; Andersen D.C. e Krummen L., Current Opinion inBiotechnology, 2002, 13, 117; Larrick J.W. e Thomas D.W., Current opinion in Biotechnology 2001, 12, 411-418].
[0076] Adequados vetores podem ser escolhidos ou construídos, contendo apropriadas seqüências reguladoras, incluindo seqüências promotoras, seqüências terminadoras, seqüências de poliadenilação, seqüências reforçadoras, genes marcadores e outras seqüências, caso apropriado. Os vetores podem ser plasmídeos, por exemplo, "fago ou fagemídeo", caso apropriado. Para maiores detalhes, consultar, por exemplo, a publicação "Molecular Cloning: a Laboratory Manual"; 3a. edição, Sambrook e Russell, 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Diversas técnicas e protocolos conhecidos para manipulação de ácido nucléico, por exemplo, na preparação de construções de ácido nucléico, em mutagênese, sequenciamento, introdução de DNA em células e expressão de gene, e análise de proteínas, são descritas em detalhes nas publicações "Current Protocols in Molecular Biology", 2a. Edição, Ausubel et al., editores, John Wiley & Sons, 1988; "Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology", Ausubel et al., editores, John Wiley & Sons, 4a. Edição, 1999, As divulgações de Sambrook et al. E de Ausubel et al. (ambas) são aqui incorporadas por meio dessas referências.
[0077] A introdução de um ácido nucléico em uma célula hospedeira pode utilizar qualquer técnica disponível. Para as células eucarióticas, técnicas adequadas podem incluir a transfecção de fosfato de cálcio, eletroporação por DEAE-Dextrano, transfecção e transdução mediadas por lipossomo usando retrovírus ou outros vírus, por exemplo, vacina, ou para células de insetos, baculovirus. A introdução de ácido nucléico na célula hospedeira, em particular, numa célula eucariótica, pode utilizar um sistema viral ou à base de plasmídeo. O sistema de plasmídeo pode ser mantido epissomalmente ou pode ser incorporado na célula hospedeira ou em um cromossomo artificial [Csonka E. et al., Journal of Cell Science, 2002, 113, 3207-3216; Vanderbyl S. et al., Molecular Therapy, 2002, 5 (5), 10]. A incorporação pode ser aleatória ou uma integração almejada de uma ou mais cópias em um lugar específico único ou múltiplo. Para as células bacterianas, técnicas adequadas podem incluir transformação com cloreto de cálcio, eletroporação e infecção, usando bacteriófagos.
[0078] A introdução pode ser seguida por provocação ou permissão de expressão do ácido nucléico, por exemplo, mediante cultura de células hospedeiras, sob condições para expressão de gene.
[0079] Em uma modalidade, o ácido nucléico da invenção é integrado ao genoma (por exemplo, cromossomo) da célula hospedeira.
[0080] A integração pode ser promovida através da inclusão de seqüências que promovem a recombinação com o genoma, em conformidade com técnicas padrões.
[0081] De acordo com um terceiro aspecto da invenção, é proporcionado o uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo, conforme anteriormente definido, na fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio correlacionado à IL-13,
[0082] Preferivelmente, o distúrbio correlacionado à IL-13 é selecionado de asma, dermatite atópica, rinite alérgica, fibrose, doença pulmonar obstrutiva crônica, escleroderma, doença inflamatória do intestino e linfoma de Hodgkin. A composição da invenção pode também ser usada no tratamento de tumores e infecções virais, na medida em que os anticorpos de IL-13 irão inibir a imunossupressão mediada pela IL-13, Mais preferivelmente, o distúrbio correlacionado à IL-13 é a asma.
[0083] A invenção proporciona ainda um método de tratamento ou profilaxia de um distúrbio correlacionado à IL-13, cujo método compreende a administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente efetiva de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo, conforme anteriormente definido.
[0084] A invenção proporciona ainda uma composição farmacêutica contendo um anticorpo, conforme anteriormente aqui definido, para uso no tratamento de um distúrbio correlacionado à IL-13,
[0085] A composição farmacêutica da invenção pode ser uma formulação líquida ou uma formulação liofilizada, a qual é reconstituída antes de ser usada. Como excipientes para uma formulação liofilizada, podem ser usados, por exemplo, alcoóis de açúcar ou sacarídeos (por exemplo, manitol ou glicose). No caso de uma formulação líquida, a composição farmacêutica da invenção é normalmente provida na forma de frascos com volume definido, incluindo frascos de plástico ou de vidro lacrados e esterilizados, ampolas e seringas, assim como, na forma de recipientes de grande volume, como, por exemplo, garrafas. Preferivelmente, a composição da invenção é uma formulação líquida.
[0086] A composição farmacêutica da invenção pode ser administrada oralmente, mediante injeção (por exemplo, pelas vias subcutânea, intravenosa, intraperitoneal ou intramuscular), através de inalação ou topicamente (por exemplo, pelas vias intraocular, intranasal, retal, dentro de feridas ou sobre a pele). A rota de administração pode ser determinada pelas características físico-químicas do tratamento, por especiais considerações quanto à doença ou pela necessidade de otimização da eficácia ou minimização dos efeitos colaterais.
[0087] Preferivelmente, a composição da invenção é administrada por meio de injeção subcutânea. É pretendido que o tratamento não se restrinja ao uso em uma clínica. Portanto, uma injeção subcutânea usando um dispositivo isento de agulha pode ser também preferida.
[0088] De acordo com a invenção, as composições providas podem ser administradas em indivíduos. A administração, preferivelmente, se faz numa "quantidade terapeuticamente efetiva", esta quantidade sendo suficiente para mostrar benefício a um paciente. Tal benefício pode ser pelo menos uma melhora de pelo menos um sintoma. A quantidade administrada em questão e a velocidade e período de tempo de administração irão depender da natureza e gravidade da doença que está sendo tratada. A prescrição do tratamento, por exemplo, decisões sobre a dosagem, etc., é de responsabilidade dos clínicos gerais e de outros médicos. Doses apropriadas de anticorpos são bem conhecidas no segmento da técnica, consultar, por exemplo, as publicações de [Ledermann J.A. et al., Int. J. Cancer, 1999, 47, 659-664; Bagshawe K.D. et al., Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals, 1991, 4, 915-922].
[0089] A dose exata irá depender de um determinado número de fatores, incluindo o tamanho e a localização da área a ser tratada, da exata natureza do anticorpo (por exemplo, anticorpo integral, fragmento ou diabody) e da natureza de qualquer rótulo detectável ou outra molécula fixada ao anticorpo. Uma dose de anticorpo típica será na faixa de 100pg a 10g para aplicações sistêmicas e de 1μg a 100mg para aplicações tópicas.
[0090] Tipicamente, o anticorpo será um anticorpo integral, preferivelmente, o isótipo de IgG4, Uma dose para um único tratamento de um paciente adulto pode ser proporcionalmente ajustada para meninos e crianças e também ajustada para outros formatos de anticorpo na proporção relativa ao peso molecular. Os tratamentos podem ser repetidos em intervalos diários, de duas vezes por semana, semanais ou mensais, de acordo com a orientação do médico. Em modalidades preferidas da presente invenção, o tratamento é periódico e o intervalo entre as administrações é de cerca de duas ou mais semanas, preferivelmente, de cerca de três ou mais semanas, mais preferivelmente, de cerca de quatro ou mais semanas ou cerca de uma vez ao mês.
Breve Descrição das Figuras
[0091] A figura 1 mostra os resultados da análise de SDS-PAGE de amostras no dia 1 de um exame de estabilidade de 28 dias, com relação à composição da invenção.
[0092] A figura 2 mostra os resultados da análise de SDS-PAGE de amostras no dia 21 de um exame de estabilidade de 28 dias, com relação à composição da invenção.
[0093] A figura 3 mostra os resultados da análise de GP-HPLC de amostras no dia 1 de um exame de estabilidade de 28 dias, com relação à composição da invenção.
[0094] A figura 4 mostra um amálgama dos resultados obtidos da análise de GP-HPLC de diversas amostras, durante uma determinação de estabilidade de 28 dias da composição da invenção, a uma temperatura de 2-8°C.
[0095] A figura 5 mostra um amálgama dos resultados obtidos da análise de GP-HPLC de diversas amostras, durante uma determinação de estabilidade de 28 dias da composição da invenção, a uma temperatura de 25°C.
[0096] A figura 6 mostra um amálgama dos resultados obtidos da análise de GP-HPLC de diversas amostras, durante uma determinação de estabilidade de 28 dias da composição da invenção, quando neutralizadas com diferentes tampões.
[0097] A figura 7 mostra os resultados da análise de IEF de diversas amostras, no dia 28 de uma determinação de estabilidade de 28 dias da composição da invenção.
[0098] A figura 8 mostra os resultados da análise de HPLC por filtração de gel de uma determinação de estabilidade de 12 meses, de diferentes formulações armazenadas à temperatura de -70°C.
[0099] A figura 9 mostra os resultados da análise de HPLC por filtração de gel de uma determinação de estabilidade de 12 meses, de diferentes formulações armazenadas à temperatura de +5°C.
[00100] A figura 10 mostra os resultados da análise de HPLC por filtração de gel de uma determinação de estabilidade de 12 meses, de diferentes formulações armazenadas à temperatura de +25°C.
[00101] A figura 11 mostra os resultados da análise de HPLC por filtração de gel de uma determinação de estabilidade de 8 semanas, de diferentes formulações armazenadas à temperatura de +37°C.
[00102] A figura 12 mostra os resultados da análise de HPLC por filtração de gel de uma determinação de estabilidade de 5 dias, de diferentes formulações armazenadas à temperatura de +45°C.
[00103] A figura 13 mostra os resultados da análise de SDS-PAGE em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações armazenadas à temperatura de -70°C.
[00104] A figura 14 mostra a percentagem abundante de cadeias pesadas e leves de BAK502G9, após uma análise reduzida de SDS- PAGE, como mostrado na figura 13, quando armazenadas à temperatura de -70°C.
[00105] A figura 15 mostra os resultados da análise reduzida de SDS- PAGE, em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +5°C.
[00106] A figura 16 mostra a percentagem abundante de cadeias pesadas e leves de BAK502G9, após uma análise reduzida de SDS- PAGE, como mostrado na figura 15, quando armazenadas à temperatura de +5°C.
[00107] A figura 17 mostra os resultados da análise reduzida de SDS- PAGE, em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +25°C.
[00108] A figura 18 mostra a percentagem abundante de
[00109] cadeias pesadas e leves de BAK502G9, após uma análise reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 17, quando armazenadas à temperatura de +25°C.
[00110] A figura 19 mostra os resultados da análise reduzida de SDS- PAGE, em 0 e 8 semanas, durante uma determinação de estabilidade de 8 semanas de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +37°C.
[00111] A figura 20 mostra a percentagem abundante de
[00112] cadeias pesadas e leves de BAK502G9, após uma análise reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 19, quando armazenadas à temperatura de +37°C.
[00113] A figura 21 mostra os resultados da análise reduzida de SDS- PAGE, em 0 e 5 dias, durante uma determinação de estabilidade de 5 dias de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +45°C.
[00114] A figura 22 mostra a percentagem abundante de cadeias pesadas e leves de BAK502G9, após uma análise reduzida de SDS- PAGE, como mostrado na figura 21, quando armazenadas à temperatura de +45°C.
[00115] A figura 23 mostra os resultados da análise não-reduzida de SDS-PAGE, em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de -70°C.
[00116] A figura 24 mostra a percentagem abundante do monômero intacto de BAK502G9, após uma análise não-reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 23, quando armazenadas à temperatura de - 70°C.
[00117] A figura 25 mostra os resultados da análise não-reduzida de SDS-PAGE, em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +5°C.
[00118] A figura 26 mostra a percentagem abundante do monômero intacto de BAK502G9, após uma análise não-reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 25, quando armazenadas à temperatura de +5°C.
[00119] A figura 27 mostra os resultados da análise não-reduzida de SDS-PAGE, em 0, 6 e 12 meses, durante uma determinação de estabilidade de 12 meses de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +25°C.
[00120] A figura 28 mostra a percentagem abundante do monômero intacto de BAK502G9, após uma análise não-reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 27, quando armazenadas à temperatura de +25°C.
[00121] A figura 29 mostra os resultados da análise não-reduzida de SDS-PAGE, em 0 e 8 semanas, durante uma determinação de estabilidade de 8 semanas de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +37°C.
[00122] A figura 30 mostra a percentagem abundante do monômero intacto de BAK502G9, após uma análise não-reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 29, quando armazenadas à temperatura de +37°C.
[00123] A figura 31 mostra os resultados da análise não-reduzida de SDS-PAGE, em 0 e 5 dias, durante uma determinação de estabilidade de 5 dias de diferentes formulações, quando armazenadas à temperatura de +45°C.
[00124] A figura 32 mostra a percentagem abundante do monômero intacto de BAK502G9, após uma análise não-reduzida de SDS-PAGE, como mostrado na figura 31, quando armazenadas à temperatura de +45°C.
[00125] A presente invenção será agora ilustrada, simplesmente por meio de exemplos, fazendo-se referência aos métodos e exemplos seguintes.
Exemplo 1: Expressão do Anticorpo BAK502G9
[00126] O anticorpo BAK502G9 foi expresso em uma linha celular GS NS0, de maneira análoga aos procedimentos descritos nos documentos de patentes WO 87/04462 e WO 2004/076485 e produziu uma cultura de sobrenadante contendo 598 mg/L do anticorpo BAK502G9, Exemplo 2: Purificação do Anticorpo BAK502G9
(a) Purificação por Sefarose da Proteína A rmp
[00127] A coluna usada para a etapa de cromatografia de fluxo rápido por Sefarose de Proteína A rmp foi de 2,6 cm de diâmetro, empacotada em 0,9% (peso/volume) de cloreto de sódio, em uma altura de leito de 14,5 cm, proporcionando um volume de coluna de 77 mL. A resina foi fornecida pela GE Healthcare/Amersham Biosciences, 175138, A cromatografia foi executada usando uma bomba P-50, Amersham Biosciences, um detector UV1 e um fluxo celular. A coluna foi limpa com cloridrato de guanidina 6M, antes de ser usada.
[00128] A coluna de cromatografia de fluxo rápido por Sefarose de Proteína A rmp foi balanceada com 350 mL de uma solução salina tamponada de fosfato, pH de 7,2, seguido de lavagem com água e limpeza. Em seguida, 2,6 L de cultura de sobrenadante foram introduzidos diretamente na coluna a uma velocidade de 200 cm/h e sob a temperatura ambiente.
[00129] A coluna foi depois lavada com 567 mL de uma solução salina tamponada de fosfato, pH de 7,2, seguido de 568 mL de acetato de sódio 50mM, pH de 5,55, O anticorpo BAK502G9 foi eluído da coluna mediante lavagem com 380 mL de acetato de sódio 50mM, pH de 3,75, Após a elução, a coluna foi lavada com ácido acético 50mM, pH de 3,0.
[00130] O pico da elução foi coletado entre uma deflexão de UV de um máximo de 2%, na inclinação ascendente e descendente do pico. Em seguida, 1,5 g do anticorpo BAK502G9 foram recuperadas em 217 mL.
(b) Inativação Viral de Baixo pH
[00131] O eluato de fluxo rápido de Sefarose de Proteína A rmp foi ajustado para um pH de 3,0 com 173 mL de ácido acético 100mM. O eluato ajustado foi mantido depois por 60 minutos para inativação viral. Após esse período, o eluato ajustado foi neutralizado com 473 mL de hidróxido de sódio 50mM para um pH de 5,50, e filtrado (0,22μm), usando um dispositivo de filtração da Millipore (número do produto, SCGPU11RE). Em seguida, foram recuperadas 1,4g do anticorpo BAK502G9 em 823 mL.
(c) Purificação por SP Sefarose
[00132] A coluna usada para a etapa de cromatografia de fluxo rápido por SP Sefarose foi de 1,6 cm de diâmetro, empacotada em uma solução salina de fosfato, pH de 7,2, em uma altura de leito de 15,5 cm, proporcionando um volume de coluna de 31 mL. A resina foi fornecida pela GE Healthcare/Amersham Biosciences, 17-0729, A cromatografia foi executada usando uma bomba P-50, Amersham Biosciences, um detector UV1 e um fluxo celular. A coluna foi limpa com hidróxido de sódio 0,5M, antes de ser usada.
[00133] A coluna de cromatografia de fluxo rápido por SP Sefarose foi balanceada com 145 mL de acetato de sódio 50mM, pH de 5,50, seguido de lavagem com água e limpeza.
[00134] Em seguida, 400 mL do anticorpo BAK502G9 na forma de eluato de Proteína A rmp neutralizado, foram introduzidas na coluna a uma velocidade de 200cm/h e sob a temperatura ambiente.
[00135] A coluna foi depois lavada com 302 mL de uma mistura de acetato de sódio 50mM/cloreto de sódio 30mM, pH de 5,50.
[00136] O anticorpo BAK502G9 foi eluído da coluna mediante lavagem com 150 mL de acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 85mM, pH de 5,50. Após a elução, a coluna foi lavada com acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 2M, pH de 5,50.
[00137] O pico da elução foi coletado entre uma deflexão de UV de um máximo de 2%, na inclinação descendente do pico. O eluato foi filtrado (0,22 μm) usando um dispositivo de filtração da Millipore (número do produto, SCGPOO525). Em seguida, 0,67 g do anticorpo BAK502G9 foram recuperadas em 54 mL. Esta etapa do processo foi repetida com os restantes 392 mL do anticorpo BAK502G9, na forma do eluato de Proteína A rmp neutralizado. Uma quantidade adicional de 0,67 g do anticorpo BAK502G9 foi recuperada em 54 mL. Os dois eluatos filtrados de SP Sefarose foram agrupados, antes de seguir para a próxima etapa. (d) Cromatografia de Fluxo Rápido por Q Sefarose
[00138] A coluna usada para a etapa de cromatografia de fluxo rápido por Q Sefarose foi de 1,6 cm de diâmetro, empacotada em uma solução salina de fosfato, pH de 7,2, em uma altura de leito de 13,3 cm, proporcionando um volume de coluna de 27 mL. A resina foi fornecida pela GE Healthcare/Amersham Biosciences, 17-0510. A cromatografia foi executada usando uma bomba P-50, Amersham Biosciences, um detector UV1 e um fluxo celular. A coluna foi limpa com hidróxido de sódio 0,5M, antes de ser usada.
[00139] A coluna de cromatografia de fluxo rápido por Q Sefarose foi balanceada com 138 mL de acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 85mM, pH de 5,50, seguido de lavagem com água e limpeza.
[00140] Em seguida, 44 mL do anticorpo BAK502G9 na forma de eluato de SP Sefarose foram introduzidas diretamente na coluna a uma velocidade de 200cm/h e sob a temperatura ambiente.
[00141] A elução isocrática do anticorpo BAK502G9 foi tomada através de lavagem da coluna com 124 mL de acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 85mM, pH de 5,50. Após a elução, a coluna foi lavada com acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 2M, pH de 5,50.
[00142] O pico da elução foi coletado entre uma deflexão de UV de um máximo de 2% na inclinação ascendente e de 2% na inclinação descendente do pico. O eluato foi filtrado (0,22 μm) usando um dispositivo de filtração da Millipore (número do produto, SCGPU01RE). Em seguida, 0,52 g do anticorpo BAK502G9 foram recuperadas em 88 mL. Esta etapa do processo foi repetida com os restantes 44 mL do anticorpo BAK502G9, na forma do eluato de SP Sefarose. Uma quantidade adicional de 0,54 g do anticorpo BAK502G9 foi recuperada em 51 mL. Os dois eluatos filtrados de Q Sefarose foram depois agrupados.
(e) Concentração
[00143] O produto foi obtido em acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 85mM, pH de 5,50 e não precisou de diafiltração. 95,31 g do anticorpo BAK502G9 na forma de eluato de Q Sefarose em 17,5 L, foram concentradas para o volume de 1,5 L. Um sistema Pellicon 2 TFF da Millipore e uma membrana 0,1 M2 30KDa (Millipore P2B030A01) foram usados para executar a concentração. O anticorpo BAK502G9 foi então recuperado do equipamento, o equipamento foi depois descarregado do tampão com acetato de sódio 50mM + cloreto de sódio 85mM, pH de 5,50. O anticorpo concentrado foi depois misturado com a descarga do tampão. Em seguida, foram adicionados 1,67 mL de Polissorbato 80 a 10% (peso/volume) à mistura acima, proporcionando uma concentração final do Polissorbato 80 de 0,01% (peso/volume). A mistura foi depois filtrada (0,22 μm). Em seguida, 91,6 g do anticorpo BAK502G9 foram recuperadas em 1,67 L.
(f) Materiais Usados
[00144] Os produtos químicos usados para preparar os tampões descritos acima foram os seguintes:- Cloridrato de Guanidina; Sigma Aldrich, G4505;- Orto-fosfato ácido dissódico; VWR, 1038349;- Orto-fosfato ácido dissódico; VWR, 102454R;- Acetato de sódio triidratado; VWR, 102354X;- Cloreto de sódio; VWR, 10241AP;- Ácido acético; VWR, 10001CU;- Polissorbato 80; J. T. Baker, 7394.
Exemplo 3: Análise de Estabilidade de 28 Dias Metodologia
[00145] A cromatografia de Proteína A rmp foi executada conforme estabelecido na Tabela 1, abaixo. Tabela 1: Parâmetros de Cromatografia da Proteína A
Figure img0001
Figure img0002
[00146] 1,6 CV do tampão de elução foram necessários para eluir o pico e para a absorbância retornar a uma deflexão de escala integral < 2% (AuFS). Após isso, o tampão foi trocado para um tampão de extração. A inativação do vírus com um baixo pH foi depois realizada usando o eluato de Proteína A, conforme estabelecido na Tabela 2, abaixo. Tabela 2: Inativação do Vírus com baixo pH
Figure img0003
[00147] Todas as amostras foram armazenadas em recipientes de 200 mL da Hyciclone BioProcess, que são feitos de polietileno com tubulação fixada C-flex de entrada e saída.
[00148] Além disso, um amostra de 50 mL de eluato de Proteína A inativada de vírus foi neutralizada com o tampão original (hidróxido de sódio 50mM) e armazenada em um recipiente de bioprocesso à temperatura de 2 a 8°C durante vinte e oito dias, antes da análise.
[00149] Todas as amostras foram armazenadas em uma sala fria de classificação 100.000 (2 a 8°C, monitorada com registrador de gráfico e alarme) ou em uma incubadora controlada termostaticamente e ajustada a uma temperatura de 25°C, conforme apropriado.
[00150] Ocorreram cinco pontos de tempo e duas temperaturas de armazenamento (2 a 8°C e 25°C), isto é, dez pontos de amostragem separados.
[00151] O filtrado neutralizado do eluato de Proteína A foi separado em dez lotes, cinco lotes sendo armazenados em cada temperatura. Um adicional recipiente de material não-filtrado do eluato de Proteína A neutralizado foi armazenado na temperatura de 2 a 8°C.
[00152] Para preencher cada recipiente de bioprocesso, o eluato de Proteína A neutralizado foi bombeado através do filtro Millipak de 0,2 μm para dentro de um recipiente de bioprocesso 200 mL. Cada recipiente de bioprocesso foi enchido com aproximadamente 100 mL, de modo a se aproximar da proporção de produto para superfície de contato, idealizada para a produção em escala final de 2000 L.
[00153] Um recipiente de bioprocesso foi usado para amostragem em cada temperatura e em cada ponto de tempo, tendo sido tomado cuidado para não deixar material na tubulação durante o armazenamento.
[00154] Um recipiente de bioprocesso de cada temperatura foi removido nos dias 1, 3, 15, 21 e 28, Os conteúdos de cada recipiente de bioprocesso foram deixados alcançar a temperatura ambiente antes da amostragem.
[00155] As amostras foram tomadas em recipientes Bijoux ou tubos Falcon de 50 mL. Os primeiros mililitros da amostra foram descartados, tendo em vista a possibilidade dos mesmos terem tido algum contato com a tubulação durante o armazenamento.
[00156] A posterior amostragem dos recipientes contendo o material restante foi armazenada a uma temperatura de -70°C.
[00157] A análise seguinte foi realizada no dia de cada ponto de tempo e para cada temperatura de armazenamento, d edmodo a determinar a comparação dessas amostras em ter si, e o padrão de referência. Um frasco de material fresco de BAK502G9 padrao foi usado em cada ponto de tempo para comparar a estabilidade do material em estudo. O material de referência foi congelado na temperatura ambiente do armazenamento sob temperatura de -70°C. Sabe-se que níveis de multímero podem ser ligeiramente elevados depois do congelamento desse anticorpo, de modo que finalmente possa se realizar a análise de GP-HPLC.
(A) Análise de Turbidez
[00158] A turbidez foi determinada como uma medida de decomposição da proteína no decorrer do tempo e, portento, serve como uma conveniente determinação de estabilidade da composição da invenção.
[00159] A turbidez foi medida ao se tomar a absorbância média da amostra, entre 340 e 360 nm (Eckhardt et al. 1993). Este ensaio foi realizado sem posterior filtração.
[00160] Os dados obtidos da cromatografia da Proteína A rmp são resumidos na Tabela 3 e o cromatograma é mostrado na figura 1.Tabela 3: Dados de Cromatografia da Proteína A rmp
Figure img0004
Figure img0005
*50 mL removido do eluato inativado de virus, para ajuste com hidróxido de sódio 50mM. O volume final é de amostragem posterior.
[00161] A cromatografia de Proteína A rmp executada conforme previsto gerou volumes de tampões comparáveis aos observados em larga escala. O eluato neutralizado foi visivelmente mais turvo do que normalmente observado com o eluato neutralizado com hidróxido de sódio 50mM. Durante a filtração nos recipientes de bioprocesso, começou a se observar uma precipitação, isso ocorrendo depois de uma hora da neutralização. A turbidez não foi testada até depois desse tempo. A recuperação ocorreu dentro da faixa esperada de pós-filtração.
[00162] Todas as amostras do eluato foram examinadas quanto à turbidez no dia 1, Os eluatos filtrados armazenados em ambas as temperaturas foram examinados quanto à turbidez nos dias: 1, 3, 15, 21 e 28, Além disso, os eluatos armazenados não-filtrados (ajustados com hidróxido de sódio 50 mM ou hidróxido de sódio 100 mM) foram testados quanto à turbidez tanto antes como depois da filtração, no dia 28, Os resultados da análise de turbidez são mostrados na Tabela 4, onde pode ser observado que embora tenha ocorrido um acentuado aumento na turbidez da amostra armazenada à temperatura de 25°C no dia 28, as amostras foram, de um modo geral, estáveis à temperatura de 25°C durante pelo menos 21 dias. Tabela 4: Medições de Turbidez do Processo e Estabilidade das Amostras de Estudo
Figure img0006
B) Análise da Concentração da Proteína
[00163] A concentração de IgG foi medida e calculada usando absorbância em 280nm e um coeficiente de extinção de E^ = 1.723.
[00164] Os eluatos que foram filtrados no período de neutralização não foram novamente filtrados antes da absorbância ser medida em 280nm para o cálculo de concentrações da proteína. Na medida em que as características de turbidez foram todas baixas, acredita-se que isso não afetaria os resultados. A absorbância em 280nm foi consistente entre as temperaturas de armazenamento e os pontos de tempo que são mostrados na Tabela 5.Tabela 5: Concentrações de Proteína de Amostras de Eluato Concentração da Proteína (mg/mL)
Figure img0007
(C) Análise de SDS-PAGE
[00165] A análise reduzida e nao-reduzida de SDS-PAGE foi processada usando 4 a 12% de géis Bis-Tris NuPage. Os géis foram processados usando tampão de corrida de MES e tingimento com gel Pierce, código azul.
[00166] A análise de SDS-PAGE demonstrou variações em níveis de meio anticorpo, mas não existe uma tendência aparente, sendo provável que esteja dentro da variação do ensaio (ver as Figuras 1 e 2 e as Tabelas 6 e 7). No dia vinte e um, algumas adicionais faixas menores foram observadas na amostra à temperatura de 25°C. Essas faixas não foram observadas no dia vinte e oito. Portanto, essas faixas podem se encontrar nos limites de detecção do ensaio. Essas faixas podem corresponder aos pequenos picos adicionais observados no ensaio de GP-HPLC (ver o Exemplo 3D).
[00167] As amostras não foram processadas ao final do estudo pelo fato de que não seria possível se distinguir as mesmas entre as diferenças que se faziam presentes na amostra original ou, então, foram resultado de um maior período de armazenamento. Um frasco recém- congelado de referência padrão foi processado para cada gel. Isto foi comparável entre os pontos de tempo diferentes, indicando que a análise foi realizada conforme o esperado. Foi também observado que as faixas extras observadas no dia vinte e um, a amostra à temperatura de 25°C, não foram observadas no padrão de referência ou amostra à temperatura de 2 a 8°C, processada no mesmo gel. Por razões de melhor clareza, todas as faixas na Figura 2 são indicadas com um cículo.Tabela 6: Resultados de Densitometria de SDS-PAGE, Amostras Reduzidas
Figure img0008
Tabela 7: Resultados de Densitometria de SDS-PAGE, Amostras Não- Reduzidas
Figure img0009
(D) Amálise de GP-HPLC
[00168] As amostras foram analisadas usando uma coluna de exclusão de tamanho TSK GS3000SW com fosfato de sódio 200mM e azida de sódio a 0,05%, pH de 7,0, como fase móvel e detecção em 280nm.
[00169] Todas as frações da cromatografia de Proteína A foram examinadas no dia 1. Os eluatos armazenados em ambas as temperaturas foram depois examinados nos dias 1, 3, 15, 21 e 28. As amostras de referência foram também processadas em todos os pontos de tempo. Os eluatos foram separadamente neutralizados com hidróxido de sódio 100 mM ou hidróxido de sódio 50 mM no dia 1, mas não foram filtrados até o dia 28; nesse dia 28, foram testados pelo procedimento de GP-HPLC.
[00170] Os cromatogramas da análise de GP-HPLC do dia 1 são mostrados na Figura 3. Estes são como esperado, o eluato final sendo > 95% do monômero, o que atende a especificação final para o BAK502G9.
[00171] A análise de GP-HPLC das amostras durante todo o curso do estudo revelou um ligeiro aumento no aspecto truncado (em particular, um pequeno pico eluindo entre 9,9 e 10,3 minutos) de BAK502G9 à temperatura de 25°C (Tabela 8 e Figuras 4 e 5). Os níveis de monômero foram consistentes entre 97,0 e 98,2% durante todo o estudo.
[00172] Os eluatos foram neutralizados com hidróxido de sódio 50 mM e níveis mais altos do monômero (99,2% do monômero) do que o eluato neutralizado com hidróxido de sódio 100 mM (97,4% de monômero), ambos sendo superiores ao nível solicitado de 95% de monômero para o produto final (Tabela 9 e Figura 6).
[00173] Os resultados obtidos da integração automática foram encontrados como sendo imprecisos, portanto, os cromatogramas de GP-HPLC foram reintegrados manualmente.Tabela 8: GP-HPLC de Eluatos Armazenados em Diferentes Temperaturas
Figure img0010
Tabela 9: GP-HPLC de Eluatos Neutralizados com Hidróxido de Sódio
Figure img0011
(E): Análise de IEF
[00174] As amostras foram analisadas usando géis de IEF, pH de 3 a 10, da Invitrogen, usando tampões da Invitrogen.
[00175] A análise de IEF do BAK502G9 mostrou um aspecto consistente em todo o estudo (Figura 7). Três faixas maiores e duas faixas menores, entre pIs aproximados de 7,1 e 6,4, são observadas. (E) Análise de Endotoxina
[00176] As amostras tomadas no dia 28 de ambas as temperaturas foram examinadas quanto aos níveis de endotoxina, usando um ensaio de LAL.
[00177] Os níveis de endotoxina nas amostras armazenadas em ambas as temperaturas foram baixos. Isso demonstra que não ocorreu contaminação por bactéria gram-negativa em todo o curso do estudo.
[00178] Eluato armazenado à temperatura de 2 a 8°C = 0,87 EU/mg.
[00179] Eluato armazenado à temperatura de 25°C < 0,44 EU/mg.
Resumo dos Resultados da Análise de Estabilidade de 28 Dias
[00180] O anticorpo BAK502G9 armazenado por até quinze dias à temperatura de 2 a 8°C ou 25°C é equivalente em todos os ensaios realizados no Exemplo 3. Após vinte e um dias, algumas pequenas diferenças são observadas pelas análises de SDS-PAGE (Exemplo 3C) e GP-HPLC (Exemplo 3D), mas o produto permanece comparável até vinte e oito dias.
Exemplo 4: Análise de Estabilidade de 12 Meses
[00181] A análise de estabilidade de 12 meses foi executada de maneira análoga à descrita na análise de estabilidade de 28 dias do Exemplo 3.
[00182] O estudo foi idealizado para investigar a estabilidade de diferentes concentrações de BAK502G9, quando armazenado em diferentes temperaturas (por exemplo, -70, +5, +25, +37 e +45°C). As diferentes formulações usadas nessa análise sao apresentadas na Tabela 10, abaixo.Tabela 10: Composição das formulações usadas na análise de estabilidade de 12 meses.
Figure img0012
[00183] A análise das amostras foi verificada em pontos de tempo variados, por exemplo, as formulações armazenadas às temperaturas de -70, +5, +25°C foram medidas em 0, 3, 6, 9 e 12 meses, as formulações armazenadas à temperatura de +37°C foram medidas em 0, 1, 2, 4 e 8 semanas e as formulações armazenadas à temperatura de +45°C foram medidas em 0, 1, 2 e 5 dias.
(A) Análise de pH
[00184] O pH foi medido usando um medidor de pH PHM220 (Radiometer Analytical), adaptado com um eletrodo de pH de pequeno volume de (BDH) e os resultados da medição de pH das formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Tabelas 11-15, abaixo.Tabela 11: pH após Armazenamento à Temperatura de -70°C
Figure img0013
Tabela 12: pH após Armazenamento à Temperatura de +5°C
Figure img0014
Tabela 13: pH após Armazenamento à Temperatura de +25°C
Figure img0015
Tabela 14: pH após Armazenamento à Temperatura de +37°C
Figure img0016
Tabela 15: pH após Armazenamento à Temperatura de +45°C
Figure img0017
NT = Não Testado
(B) Análise da Concentração
[00185] As amostras foram diluídas em um nível apropriado com o tampão adequado e sua absorbância determinada em 280 nm usando um espectrofotômetro visível à UV, HP8453 (Agilent Technologies). Os valores de absorbância foram convertidos para as concentrações de BAK502G9 usando o conhecido coeficiente de extinção de 1,723. Os resultados da medição da absorbância das formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Tabelas 16-20, abaixo. Tabela 16: Concentração do BAK502G9 após Armazenamento à
Figure img0018
Tabela 17: Concentração do BAK502G9 após Armazenamento à
Figure img0019
Tabela 18: Concentração do BAK502G9 após Armazenamento à
Figure img0020
Tabela 19: Concentração do BAK502G9 após Armazenamento à
Figure img0021
Tabela 20: Concentração do BAK502G9 após Armazenamento à
Figure img0022
a) n=3NT = Não Testado
1. ) Análise de HPLC por Filtração de Gel
[00186] O procedimento de HPLC por filtração de gel foi executado em um sistema HP1100 (Agilent Technologies). Uma coluna TSK-Gel 3000S foi balanceada com fosfato de sódio 0,2M, pH de 7,5. As amostras foram diluídas para 1 mg/mL com o tampão adequado e centrifugadas a 13.000 rpm durante 10 minutos para remover qualquer matéria particulada. Em seguida, foram feitas injeções de 3 x 20 μL de cada amostra na coluna, que foi processada a uma vazão de 1 mL/min. Um detector de comprimento de onda variável foi usado para monitorar a absorbância em 220 e 280nm.
[00187] Os resultados da análise de filtração de gel das formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Figuras 8-12.
2. ) Análise de SDS-PAGE de Amostras Reduzidas
[00188] As amostras foram diluídas para 1 mg/mL com um tampão adequado e foram adicionados 16,7 μL a 12,5 μL de tampão de amostra (4X LDS) (Invitrogen), 15,8 μL de água Milli-Q e 5 μL de agente redutor (Invitrogen). As amostras foram aquecidas à temperatura de 95°C por um minuto e depois colocadas em gelo. Em seguida, 15 μL de cada amostra foram misturados em um gel BisTris a 4-12% (Invitrogen), em um tanque contendo o tampão de processamento de MES SDS (1x) e o gel foi processado durante 35 minutos sob uma corrente constante de 500 mA. Após a eletroforese, o gel foi removido de seu invólucro, lavado (3x) por 10 minutos com água Milli-Q, tingido com o reagente de tingimento Gelcode® Blue (Pierce) por um mínimo de uma hora e depois descolorido com água Milli-Q. O gel foi fotografado e analisado usando um sistema de documentação de gel UVP GDS8000. A relativa abundância de cadeias pesadas e leves de BAK502G9 em cada amostra foi determinada.
[00189] Os resultados da análise de SDS-PAGE de amostra reduzida das formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Figuras 13, 15, 17, 19 e 21. As medições de abundância de cadeias pesadas e leves de BAK502G9 em cada temperatura são também mostradas nas Figuras 14, 16, 18, 20 e 22.
3. ) Análise de SDS-PAGE de Amostras Não-Reduzidas
[00190] As amostras foram diluídas para 1 mg/mL com um tampão adequado e foram adicionados 16,7 μL a 25 μL de tampão de amostra não-redutor SDS (2X) (Tris 0,125M, pH 6,8, 4% (peso/volume), glicerol 30% (vol/vol), azul de bromofenol 0,004% (peso/vol), 3,3 μL de água Milli-Q e 5 μL de iodoacetamida 1M. As amostras foram aquecidas à temperatura de 95°C por um minuto e depois colocadas em gelo. Em seguida, 15 μL de cada amostra foram misturados em um gel BisTris a 4-12% (Invitrogen), em um tanque contendo o tampão de processamento de MES SDS (1x) e o gel foi processado durante 35 minutos sob uma corrente constante de 500 mA. Após a eletroforese, o gel foi removido de seu invólucro, lavado (3x) por 10 minutos com água Milli-Q, tingido com o reagente de tingimento Gelcode® Blue (Pierce) por um mínimo de uma hora e depois descolorido com água Milli-Q. O gel foi fotografado e analisado usando um sistema de documentação de gel UVP GDS8000. A relativa abundância de cadeias pesadas e leves de BAK502G9 em cada amostra foi determinada.
[00191] Os resultados da análise de SDS-PAGE de amostra não- reduzida das formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Figuras 23, 25, 27, 29 e 31. As medições de abundância do monômero intacto de BAK502G9 em cada temperatura são também mostradas nas Figuras 24, 26, 28, 30 e 32. (F) Análise de Foco Iselétrico
[00192] Antes da introdução da amostra, o leito de eletroforese foi resfriado e um gel de IEF, pH de 3-10 (Cambrex) foi pré-focado durante 10 minutos em 1 W, 2000 V, 150 mA, usando um sistema de energia Apelex PS9009TX. As amostras foram diluídas para a concentração de 1 mg/mL com um tampão apropriado. Uma máscara de amostra foi colocada sobre a superfície do gel e foram introduzidos 5 μL de cada amostra. O gel foi pré-focado novamente e a máscara de amostra removida. O gel foi então focado por 60 minutos a 25 W, 1500 V, 50 mA. Após a eletroforese, o gel foi fixado com metanol 50% (vol/vol), ácido tricloroacético 6% (peso/volume), ácido 5-sulfossalicílico 3,6% (peso/volume) por 30 minutos, depois, lavado com água e seco em um forno à temperatura de 40-50°C por uma hora. O gel foi tingido por 30 minutos usando PhastGel Blue R (Pharmacia; um comprimido dissolvido em metanol 60% (vol/vol)), lavado com água Milli-Q para remover o excesso de tingimento e depois descolorido por aproximadamente 3 minutos com ácido acético glacial 9% (vol/vol) e uma solução de etanol 25% (vol/vol). O gel foi seco em um forno à temperatura de 40-50°C por uma hora. O gel seco foi fotografado e analisado usando um sistema de documentação de gel UVP GDS8000. O número e a variação de pI das isoformas em cada amostra foi determinado e os resultados observados nas formulações CF, TF1A, TF1B e TF1C em cada temperatura são mostrados nas Tabelas 21-25, abaixo.Tabela 21: Variação de pI e Número de Isoformas por IEF após
Figure img0023
Tabela 22: Variação de pI e Número de Isoformas por IEF após
Figure img0024
Tabela 23: Variação de pI e Número de Isoformas por IEF após
Figure img0025
Tabela 24: Variação de pI e Número de Isoformas por IEF após
Figure img0026
Tabela 25: Variação de pI e Número de Isoformas por IEF após
Figure img0027
NT = Não Testado
Resumo dos Resultados da Análise de Estabilidade Estabilidade à Temperatura de -70°C
[00193] As formulações CF e TF1A se mostraram estáveis por 12 meses à temperatura de -70°C. Os perfis analíticos foram similares em 0 e 12 meses, exceto quanto ao % de IgG intacto medido por SDS- PAGE de amostra não-reduzida, que diminuiu de 95,9% no t=0 para 89,9% em 12 meses para a CF, e de 96,2% no t=0 para 89,2% em 12 meses para a TF1A. Mediante o procedimento de HPLC, após 12 meses, a percentagem de monômero para ambas as formulações CF e TF1A foi de 100%. Ambas as formulações CF e TF1A exibiram 4 faixas no ensaio de IEF após 12 meses. Os resultados indicaram que as formulações CF e TF1A são comparáveis nessa temperatura.
Estabilidade à Temperatura de 5°C
[00194] As formulações CF e TF1A se mostraram estáveis por 12 meses à temperatura de 5°C. Os perfis analíticos foram similares em 0 e 12 meses, exceto quanto ao % de IgG intacto medido por SDS-PAGE de amostra não-reduzida, que diminuiu de 95,9% no t=0 para 89,5% em 12 meses para a CF, e de 96,2% no t=0 para 88,9% em 12 meses para a TF1A. Mediante o procedimento de HPLC, após 12 meses, a percentagem de monômero para ambas as amostras de formulações CF e TF1A foi de 100%. Ambas as formulações CF e TF1A exibiram 4 faixas no ensaio de IEF após 12 meses. Os resultados indicaram que as formulações CF e TF1A são comparáveis nessa temperatura.
Estabilidade à Temperatura de 25°C
[00195] As formulações CF e TF1A se mostraram estáveis por 12 meses à temperatura de 25°C. O % de IgG intacto medido por SDS- PAGE de amostra não-reduzida diminuiu de 95,9% no t=0 para 89,1% em 12 meses para a CF, e de 96,2% no t=0 para 87,5% em 12 meses para a TF1A. Ocorreu também uma faixa menor de alto peso molecular (> 220 kDa) em ambas as formulações no gel de SDS-PAGE de amostra não-reduzida que não foi detectada no t=0. Mediante o procedimento de HPLC, após 12 meses, a percentagem de monômero para ambas as amostras de formulações CF e TF1A foi de 98,9 e 96,42%, respectivamente. Ambas as amostras de formulações CF e TF1A exibiram 4 faixas no ensaio de IEF após 12 meses. Os resultados indicaram que as formulações CF e TF1A são comparáveis nessa temperatura.
Estabilidade à Temperatura de 37°C
[00196] As formulações CF e TF1A se mostraram estáveis por 4 semanas à temperatura de 37°C, mas falharam no atendimento à especificação projetada para alguns parâmetros após 8 semanas, notadamente, quanto à pureza, mediante SDS-PAGE de amostra não- reduzida (ambas as formulações) e % de monômero mediante GF- HPLC (somente a formulação TF1A; resultado da linha marginal). Os resultados indicaram que a formulação CF é mais estável que TF1A nessa temperatura durante um período de 8 semanas.
Estabilidade à Temperatura de 45°C
[00197] As formulações CF e TF1A se mostraram estáveis por 5dias à temperatura de 45°C, embora tenham ocorrido pequenas mudanças nos perfis analíticos depois desse período (algumas adicionais faixas menores no ensaio de SDS-PAGE e géis de IEF). Os resultados indicaram que as formulações CF e TF1A são comparáveis nessa temperatura durante um período de 5 dias.

Claims (26)

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um anticorpo de IL-13, tampão de acetato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 85mM e 0,01% (peso/peso) de Polissorbato 80 tamponados para um pH de 4,5 a 6,0 com dito tampão de acetato de sódio.
2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o anticorpo de IL-13 é um anticorpo monoclonal de IL-13 humano.
3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o anticorpo de IL- 13 está presente na composição farmacêutica numa quantidade entre 1 e 200 mg/mL.
4. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o anticorpo IL- 13 compreende um conjunto de regiões de determinação de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, em queHCDRl possui a sequência de aminoácidos NYGLS (SEQ ID NO: 1);HCDR2 possui a sequência de aminoácidosWISANNGDTNYGQEFQG (SEQ ID NO: 2);HCDR3 possui a sequência de aminoácidosDSSSSWARWFFDL (SEQ ID NO: 9);LCDRl possui a sequência de aminoácidos GGNIIGSKLVH (SEQ ID NO: 10);LCDR2 possui a sequência de aminoácidos DDGDRPS (SEQ ID NO: 5); eLCDR3 possui a sequência de aminoácidos QVWDTGSDPVV (SEQ ID NO: 12).
5. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o anticorpo IL- 13 compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) tendo a sequência de aminoácidos:QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGLSWVR QAPGQGLEWMGWISANNGDTNYGQEFQGRVTMTTDTSTSTAYMEL RSLRSDDTAVYYCARDSSSSWARWFFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15);e uma região variável da cadeia leve (VL) tendo a sequência de aminoácidos:SYVLTQPPSVSVAPGKTARITCGGNIIGSKLVHWYQQKPG QAPVLVIYDDGDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYC QVWDTGSDPVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 16).
6. Composição farmacêutica, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de ser tamponada para um pH de 5,2 a 5,7.
7. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de ser tamponada para um pH de 5,5 ± 0,1.
8. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de compreender 50 mg/mL de um anticorpo IL-13.
9. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de compreender 100 mg/mL de um anticorpo IL-13.
10. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de compreender 150 mg/mL de um anticorpo IL-13.
11. Processo para purificação de um anticorpo de IL-13, o qual compreende uma ou mais etapas de separação cromatográfica, caracterizado pelo fato de que cada uma das ditas etapas de separação compreende a eluição com um tampão de eluição que compreende um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tamponados para um pH de 3,5 a 7,0 com um tampão de acetato.
12. Processo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as etapas de separação cromatográfica são selecionadas de cromatografia por afinidade e cromatografia por troca de íons.
13. Processo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a separação cromatográfica é realizada mediante cromatografia por afinidade com a Proteína A, seguido de cromatografia por troca de cátion e seguida por cromatografia por troca de anion.
14. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que os ditos um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendem um sal inorgânico.
15. Processo, de acordo com areivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o sal inorgânico é cloreto de sódio, presente no tampão de eluição numa quantidade entre 10 e 200mM.
16. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 15, caracterizado pelo fato de que o tampão de acetato é acetato de sódio, presente no tampão de eluição numa quantidade entre 1 e 100mM.
17. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 16, caracterizado pelo fato de que o tampão de eluição compreende acetato de sódio 50mM e cloreto de sódio 85mM tamponados para um pH de 5,5 ± 0,1.
18. Uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 to 10, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio correlacionado a IL-13.
19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o distúrbio correlacionado à IL-13 é selecionado de asma, dermatite atópica, rinite alérgica, fibrose, doença pulmonar obstrutiva crônica, escleroderma, doença inflamatória do intestino e linfoma de Hodgkin.
20. Uso, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o distúrbio correlacionado à IL-13 é dermatite atópica.
21. Composição farmacêutica contendo um anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de um distúrbio relacionado à IL-13.
22. Composição farmacêutica contendo um anticorpo, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o distúrbio relacionado à IL-13 é selecionado do grupo que consiste em asma, dermatite atópica, rinite alérgica, fibrose, doença pulmonar obstrutiva crônica, escleroderma, doença inflamatória do intestino e linfoma de Hodgkin.
23. Composição farmacêutica contendo um anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que o distúrbio correlacionado à IL-13 é dermatite atópica.
24. Processo, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que anticorpo IL-13 é um anticorpo monoclonal humano.
25. Processo, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo IL-13 compreende um conjunto de regiões de determinação de complementaridade (CDRs) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, em queHCDRl possui a sequência de aminoácidos NYGLS (SEQ ID NO: 1);HCDR2 possui a sequência de aminoácidos WISANNGDTNYGQEFQG (SEQ ID NO: 2);HCDR3 possui a sequência de aminoácidos DSSSSW ARWFFDL (SEQ ID NO: 9);LCDRl possui a sequência de aminoácidos GGNIIGSKLVH (SEQ ID NO: 10);LCDR2 possui a sequência de aminoácidos DDGDRPS (SEQ ID NO: 5); eLCDR3 possui a sequência de aminoácidosQVWDTGSDPVV (SEQ ID NO: 12).
26. Processo, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo IL-13 compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) tendo a sequência de aminoácidos:QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGLSWVR QAPGQGLEWMGWISANNGDTNYGQEFQGRVTMTTDTSTSTAYMEL RSLRSDDTAVYYCARDSSSSWARWFFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15);e uma região variável da cadeia leve (VL) tendo a sequência de aminoácidos:SYVLTQPPSVSVAPGKTARITCGGNIIGSKLVHWYQQKPG QAPVLVIYDDGDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYC QVWDTGSDPVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 16).
BRPI0616359A 2005-09-30 2006-09-29 Composição farmacêutica, processo para purificação de um anticorpo de il-13 e uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo BRPI0616359B8 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US72197405P 2005-09-30 2005-09-30
GB0519923.7 2005-09-30
US60/721,974 2005-09-30
GBGB0519923.7A GB0519923D0 (en) 2005-09-30 2005-09-30 Interleukin-13 antibody composition
PCT/GB2006/003650 WO2007036745A2 (en) 2005-09-30 2006-09-29 Interleukin-13 antibody composition

Publications (3)

Publication Number Publication Date
BRPI0616359A2 BRPI0616359A2 (pt) 2011-06-14
BRPI0616359B1 true BRPI0616359B1 (pt) 2021-09-08
BRPI0616359B8 BRPI0616359B8 (pt) 2022-08-30

Family

ID=37434894

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0616359A BRPI0616359B8 (pt) 2005-09-30 2006-09-29 Composição farmacêutica, processo para purificação de um anticorpo de il-13 e uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo

Country Status (21)

Country Link
US (3) US20080248048A1 (pt)
EP (1) EP1942939B2 (pt)
JP (2) JP2009510046A (pt)
KR (1) KR101363777B1 (pt)
AU (1) AU2006296399B2 (pt)
BE (1) BE2021C552I2 (pt)
BR (1) BRPI0616359B8 (pt)
CA (1) CA2623429C (pt)
CY (2) CY1120874T1 (pt)
FI (1) FIC20210042I1 (pt)
FR (1) FR21C1055I2 (pt)
GB (1) GB2430883B (pt)
HU (1) HUS2100053I1 (pt)
IL (3) IL189983A (pt)
LT (1) LTC1942939I2 (pt)
LU (1) LUC00239I2 (pt)
NL (1) NL301143I2 (pt)
NO (2) NO344859B1 (pt)
PL (1) PL1942939T5 (pt)
SI (1) SI1942939T2 (pt)
WO (1) WO2007036745A2 (pt)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8420086B2 (en) * 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
SG10201404273QA (en) 2003-12-23 2014-10-30 Genentech Inc Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof
RU2421464C2 (ru) 2005-10-21 2011-06-20 Новартис Аг Человеческие антитела к il-13 и их терапевтическое применение
KR20140071452A (ko) 2006-04-05 2014-06-11 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 항체 정제
CA2674608A1 (en) * 2007-01-09 2008-07-17 Wyeth Anti-il-13 antibody formulations and uses thereof
EP2170268A2 (en) 2007-06-25 2010-04-07 Amgen, Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
UA107557C2 (xx) * 2007-07-06 2015-01-26 Композиція антитіла офатумумабу
WO2009009406A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-15 Smithkline Beecham Corporation Antibody formulations
EP2050764A1 (en) 2007-10-15 2009-04-22 sanofi-aventis Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof
EP2631302A3 (en) 2008-03-31 2014-01-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
GB0904214D0 (en) 2009-03-11 2009-04-22 Ucb Pharma Sa Biological products
ES2813398T3 (es) 2009-10-20 2021-03-23 Abbvie Inc Aislamiento y purificación de anticuerpos anti-IL-13 usando cromatografía de afinidad a Proteína A
TWI732259B (zh) 2010-12-16 2021-07-01 美商建南德克公司 關於th2抑制作用之診斷及治療
US20130344074A1 (en) 2011-03-16 2013-12-26 Sanofi Uses of a dual v region antibody-like protein
CA2832560A1 (en) * 2011-04-07 2012-10-18 Glaxosmithkline Llc Formulations with reduced viscosity
EP2734236A4 (en) * 2011-07-13 2015-04-15 Abbvie Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING ASTHMA WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
RU2665810C2 (ru) 2011-10-31 2018-09-04 Дженентек, Инк. Содержащие антитела составы
EP3725892A1 (en) 2012-03-27 2020-10-21 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of prognosing, diagnosing and treating idiopathic pulmonary fibrosis
UA117466C2 (uk) 2012-12-13 2018-08-10 Мерк Шарп Енд Доме Корп. СТАБІЛЬНИЙ СКЛАД У ВИГЛЯДІ РОЗЧИНУ АНТИТІЛА ДО IL-23p19
US10023608B1 (en) 2013-03-13 2018-07-17 Amgen Inc. Protein purification methods to remove impurities
EP4331605A3 (en) 2013-09-13 2024-05-22 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
ES2915378T3 (es) 2013-09-13 2022-06-22 Hoffmann La Roche Procedimientos para detectar y cuantificar una proteína de célula huésped en líneas celulares
SG11201603127WA (en) 2013-10-23 2016-05-30 Genentech Inc Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders
JP2014062100A (ja) * 2013-11-05 2014-04-10 Glaxosmithkline Llc 抗体処方
JP2017507939A (ja) 2014-02-21 2017-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−１３／ｉｌ−１７二重特異性抗体及びその使用
NZ723336A (en) 2014-02-27 2017-04-28 Univ Texas Methods and compositions for isolating exosomes
EP3129497B1 (en) 2014-04-11 2021-09-08 Novartis AG Methods of selectively treating asthma using il-13 antagonists
AR103173A1 (es) 2014-12-22 2017-04-19 Novarits Ag Productos farmacéuticos y composiciones líquidas estables de anticuerpos il-17
JP6247241B2 (ja) * 2015-02-27 2017-12-13 ノバルティス アーゲー 抗体処方
EP3271723A1 (en) 2015-03-16 2018-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2017139290A1 (en) * 2016-02-10 2017-08-17 Medimmune, Llc Tralokinumab delivery device
KR102460040B1 (ko) 2016-04-27 2022-11-01 애브비 인코포레이티드 항-il-13 항체를 이용한 il-13 활성이 유해한 질환의 치료 방법
KR102557643B1 (ko) 2016-09-23 2023-07-20 제넨테크, 인크. 아토피성 피부염을 치료하기 위한 il-13 길항제의 용도
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
AU2018263868A1 (en) 2017-05-02 2019-12-12 Merck Sharp & Dohme Llc Formulations of anti-LAG3 antibodies and co-formulations of anti-LAG3 antibodies and anti-PD-1 antibodies
AU2019218128A1 (en) 2018-02-09 2020-09-17 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
KR102885113B1 (ko) 2018-10-18 2025-11-13 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 항-rsv 항체의 제제 및 그의 사용 방법
CN120842406A (zh) 2018-10-31 2025-10-28 默沙东有限责任公司 抗人pd-1抗体晶体及其使用方法
WO2020092015A1 (en) 2018-11-02 2020-05-07 University Of Rochester Therapeutic mitigation of epithelial infection
CN113316458B (zh) 2018-11-07 2024-08-02 默沙东有限责任公司 抗lag3抗体和抗pd-1抗体的共制剂
JP2023534576A (ja) 2020-03-23 2023-08-10 メドイミューン・リミテッド アトピー性皮膚炎及び関連する障害の治療方法
US12187788B2 (en) 2020-03-23 2025-01-07 Medimmune Limited Methods for treating atopic dermatitis and related disorders
GB202108379D0 (en) 2021-06-11 2021-07-28 Medlmmune Ltd Methods for treating a topic dermatitis and related disorders
JP2024531300A (ja) 2021-08-16 2024-08-29 メディミューン，エルエルシー 抗ｉｌ－１３抗体製剤
WO2023044313A1 (en) 2021-09-15 2023-03-23 Dermira, Inc. Il-13 inhibitors for the treatment of prurigo nodularis
US20240400669A1 (en) 2021-09-28 2024-12-05 Medimmune Limited Methods for treating atopic dermatitis and related disorders
WO2025128990A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 Dermira, Inc. Il-13 antibodies for the treatment of perennial allergic rhinitis
WO2025128984A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 Dermira, Inc. Il-13 antibodies for the treatment of chronic rhinosinusitis with nasal polyps
TW202600591A (zh) 2024-03-01 2026-01-01 美商德米拉股份有限公司 用於治療發炎後皮膚色素過多或色素過少之ｉｌ—１３抗體

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU217099B (hu) * 1991-03-29 1999-11-29 Elf Sanofi Sa. Eljárás citokin típusú aktivitással rendelkező fehérje, azt kódoló rekombináns DNS-szekvencia és a megfelelő transzformált sejtek és mikroorganizmusok előállítására
FR2685919B1 (fr) * 1992-01-08 1994-04-08 Elf Sanofi Proteine a activite de type cytokine, adn recombinant codant pour cette proteine, cellules animales transformees.
US5596072A (en) * 1992-08-21 1997-01-21 Schering Corporation Method of refolding human IL-13
JPH07267994A (ja) * 1994-03-31 1995-10-17 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 新規蛋白質及びその製造法
JP3414856B2 (ja) * 1994-08-09 2003-06-09 株式会社ヤトロン ジフェニルエーテル化合物の免疫学的測定方法
US5866154A (en) 1994-10-07 1999-02-02 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Stabilized naloxone formulations
US6428788B1 (en) * 1995-03-15 2002-08-06 Penn State University Compositions and methods for specifically targeting tumors
SK150298A3 (en) 1996-05-04 1999-04-13 Zeneca Ltd Monoclonal antibody to cea, conjugates comprising said antibody, and their therapeutic use in an adept system
GB9610992D0 (en) * 1996-05-24 1996-07-31 Glaxo Group Ltd Concentrated antibody preparation
US6991790B1 (en) * 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
NZ509135A (en) 1998-06-09 2002-10-25 Statens Seruminstitut A third generation intravenous immunoglobulin G (IVIG) purified using column chromatographic ion exchange methods
JP3537331B2 (ja) * 1998-11-17 2004-06-14 積水化学工業株式会社 Ｉｖ型コラーゲンの免疫測定法及び試薬
BRPI0108923B8 (pt) 2000-03-03 2021-05-25 Cambridge Antibody Tech Limited elemento de ligação específico, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos para produzir um elemento de ligação específico ou domínio vh ou vl de anticorpo, e, para obter um elemento de ligação específico que liga eotaxina
EP1175931A1 (en) 2000-07-25 2002-01-30 Computer Cell Culture Center S.A. Integration of high cell density bioreactor operation with ultra fast on-line downstream processing
WO2003010512A2 (en) 2001-07-23 2003-02-06 Accurate Polymers, Inc. High-speed, solid-liquid separation
US20040248260A1 (en) 2001-10-26 2004-12-09 Heavner George A. IL-13 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
US20030235555A1 (en) 2002-04-05 2003-12-25 David Shealey Asthma-related anti-IL-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20040023337A1 (en) * 2001-10-26 2004-02-05 Heavner George A. IL-13 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
US20040234499A1 (en) 2001-10-26 2004-11-25 David Shealy Asthma-related anti-IL-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
WO2004001007A2 (en) * 2002-06-21 2003-12-31 Idec Pharmaceuticals Corporation Buffered formulations for concentrating antibodies and methods of use thereof
AU2004215653B2 (en) 2003-02-28 2011-03-17 Lonza Biologics Plc. Antibody purification by protein A and ion exchange chromatography
WO2004087761A1 (ja) 2003-03-31 2004-10-14 Kirin Beer Kabushiki Kaisha ヒトモノクローナル抗体およびヒトポリクローナル抗体の精製
CN1798575A (zh) * 2003-04-04 2006-07-05 健泰科生物技术公司 高浓度抗体和蛋白制剂
GB0407315D0 (en) * 2003-07-15 2004-05-05 Cambridge Antibody Tech Human antibody molecules
TW200530269A (en) * 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Mpl antibodies
SG10201404273QA (en) * 2003-12-23 2014-10-30 Genentech Inc Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof
CN1234725C (zh) 2004-04-07 2006-01-04 陈志南 一种高效快速纯化制备片段抗体的方法
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
AU2005277236A1 (en) * 2004-08-20 2006-03-02 Amgen Inc. Methods and compositions for treating allergic inflammation
JP2008520684A (ja) * 2004-11-17 2008-06-19 アブジェニックス・インコーポレーテッド Ｉｌ−１３に対する完全ヒトモノクローナル抗体
US20060171943A1 (en) * 2005-02-01 2006-08-03 Amgen Inc. Compositions and methods of treating fibrotic disorders
MX2013004132A (es) † 2010-10-14 2013-09-02 Ticona Gmbh Polioximetileno plastificado.

Also Published As

Publication number Publication date
JP2014040461A (ja) 2014-03-06
NO20081946L (no) 2008-06-27
IL189983A0 (en) 2008-08-07
JP5820450B2 (ja) 2015-11-24
CY2021033I1 (el) 2022-03-24
AU2006296399B2 (en) 2011-01-20
LTPA2021528I1 (pt) 2021-12-27
PL1942939T5 (pl) 2021-10-11
SI1942939T1 (sl) 2018-10-30
CA2623429C (en) 2015-01-13
GB0619204D0 (en) 2006-11-08
SI1942939T2 (sl) 2021-11-30
BRPI0616359B8 (pt) 2022-08-30
LUC00239I2 (pt) 2025-02-03
IL189983A (en) 2016-11-30
CY1120874T1 (el) 2019-12-11
GB2430883B (en) 2008-03-19
PL1942939T3 (pl) 2018-10-31
IL246674A0 (en) 2016-08-31
AU2006296399A1 (en) 2007-04-05
US20110086038A1 (en) 2011-04-14
EP1942939A2 (en) 2008-07-16
FR21C1055I1 (pt) 2021-12-24
LTC1942939I2 (pt) 2023-10-10
HK1210724A1 (en) 2016-05-06
IL230005A0 (en) 2014-01-30
US20080248048A1 (en) 2008-10-09
WO2007036745A3 (en) 2007-08-02
US9107945B2 (en) 2015-08-18
JP2009510046A (ja) 2009-03-12
NO2021050I1 (no) 2021-11-12
FIC20210042I1 (fi) 2021-11-23
BE2021C552I2 (pt) 2026-01-14
KR20080054429A (ko) 2008-06-17
IL230005A (en) 2016-05-31
NL301143I1 (pt) 2021-11-10
FR21C1055I2 (fr) 2022-11-18
NL301143I2 (nl) 2022-02-10
KR101363777B1 (ko) 2014-02-14
GB2430883A (en) 2007-04-11
EP1942939B2 (en) 2021-07-07
US10358488B2 (en) 2019-07-23
WO2007036745A2 (en) 2007-04-05
AU2006296399A8 (en) 2008-07-17
EP1942939B1 (en) 2018-05-30
NO344859B1 (no) 2020-06-02
HUS2100053I1 (hu) 2021-12-28
CA2623429A1 (en) 2007-04-05
BRPI0616359A2 (pt) 2011-06-14
IL246674B (en) 2019-09-26
US20160002327A1 (en) 2016-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0616359B1 (pt) Composição farmacêutica, processo para purificação de um anticorpo de il-13 e uso de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo
EP2473191B1 (en) Antibody coformulations
CN101721362B (zh) 包含抗体的溶液制剂
US8821879B2 (en) Anti-botulism antibody coformulations
JP6588922B2 (ja) ヒト化百日咳抗体及びその使用
KR20150075083A (ko) Gm-csf를 중화하는 화합물을 포함하는 액체 제제
DK1942939T3 (en) Interleukin-13 antibody composition
CN114832102B (zh) 一种稳定的抗egfr抗体组合物
HK1210724B (zh) 白介素-13抗体组合物
CN120586040A (zh) 一种抗nkg2a抗体组合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]

Free format text: NOTIFICACAO DE ANUENCIA RELACIONADA COM O ART 229 DA LPI

B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B09W Correction of the decision to grant [chapter 9.1.4 patent gazette]

Free format text: RETIFICA-SE O DEFERIMENTO NOTIFICADO NA RPI NO 2626 DE 04/05/2021.

B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 29/09/2006, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO.

B16C Correction of notification of the grant [chapter 16.3 patent gazette]

Free format text: REF. RPI 2644 DE 08/09/2021 QUANTO AO QUADRO REIVINDICATORIO.