BRPI0617028A2 - aparelho para coleta de sangue fetal de cordço umbilical e placenta, mÉtodo de uso do mesmo, sistema para um procedimento de coleta em circuito fechado e mÉtodo de uso do sistema - Google Patents

Abstract

APARELHO PARA COLETA DE SANGUE FETAL DE CORDAO UMBILICAL E PLACENTA, MÉTODO DE USO DO MESMO, SISTEMA PARA UM PROCEDIMENTO DE COLETA EM CIRCUITO FECHADO E MÉTODO DE USO DO SISTEMA. CAMPO DA INVENÇçO A presente invenção compreende dispositivos e métodos para coletar sangue fetal de cordão umbilical e placenta após o nascimento do bebê. As concretizações da invenção são dispositivos de circuito aberto e métodos que permitem a coleta de quantidades relativamente grandes de sangue de cordão umbilical enquanto reduz o risco decontaminação a níveis mais baixos do que os atualmente associados aos sistemas em circuito fechado. Outras concretizações consistem em métodos e dispositivos para uso em procedimentos de sistema fechado que aumentam a quantidade de sangue coletado e que também reduzem a quantidade de contaminação nos sistemas fechados atualmente empregados.

Description

APARELHO PARA COLETA DE SANGUE FETAL DE CORDÃO UMBILICALE PLACENTA, MÉTODO DE USO DO MESMO, SISTEMA PARA UMPROCEDIMENTO DE COLETA EM CIRCUITO FECHADO E MÉTODO DEUSO DO SISTEMA.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se à coleta de sangue decordão umbilical. Mais especificamente, a presenteinvenção descreve um aparelho e um método para coletarsangue fetal humano da placenta e do cordão umbilical,após o nascimento do bebê.

HISTÓRICO DA INVENÇÃO

Nos últimos anos, vem se observando um crescenteinteresse na coleta de sangue fetal humano. Esse sangue éfonte de um grande número de fatores sangüíneos cujo usocomercial e terapêutico é importante em diversos campos,tais como cultura de tecidos, transplante de medulaóssea, coleta de célula-tronco, farmacologia e pesquisabiológica. Atualmente, a única fonte comercial de sanguefetal humano é o sangue obtido da placenta e do cordãoumbilical de recém-nascidos após o parto. Esse sangue éfreqüentemente denominado como sangue de cordãoumbilical, sendo tipicamente obtido após drenagem daplacenta e do cordão umbilical através do corte do cordãoapós o parto.

O método comercial mais usado para a coleta de sangue decordão umbilical é a venipuntura, conhecida no estado datécnica como um sistema em circuito fechado. Tipicamente,o sangue do cordão umbilical é coletado para uma bolsaatravés de uma agulha inserida na veia do cordão umbilical, embora em alguns procedimentos, uma seringapossa substituir a bolsa. Ao contrário, em umprocedimento em circuito fechado o sangue flui livrementeda extremidade seccionada do cordão umbilical para dentrode um recipiente. 0 objetivo dos métodos em circuito fechado consiste principalmente em reduzir o risco decontaminação do sangue coletado, que ocorre geralmentedurante os procedimentos em circuito aberto. Porém, aprincipal vantagem dos sistemas em circuito aberto é ofato de não haver resistência ao fluxo de sangue, e,portanto, a quantidade média de sangue coletado atravésde sistemas em circuito aberto é maior que a quantidademédia coletada ao se utilizar métodos em circuitofechado. Conseqüentemente, um método em circuito aberto,no qual a amostra de sangue seja mantida estéril,evitando assim a contaminação, seria muito benéfico noestado da técnica.Para coletar tanto sangue quanto possível, a força dagravidade é explorada. Por conseguinte, a placenta émantida numa posição mais elevada do que o implemento decoleta. Além disso, a placenta é geralmente expelida,seja por contrações do útero, se a placenta ainda estiverno útero materno, ou, caso contrário, pode ser comprimidaatravés de alguma espécie de aparelho, tal como um>recipiente conectado a um balão inflável. Algunsprocedimentos para coleta de sangue de cordão umbilicalcomprimem o cordão umbilical, bem como a placenta.Foram desenvolvidos muitos métodos utilizados na coletade sangue de cordão umbilical. Muitos desses métodos edispositivos relacionados com vários tipos de sistemaspara coleta de sangue de cordão umbilical são descritos,por exemplo, nas seguintes patentes: US 5.372.581, US5.575.796 e US 5.053.025.Paderni descreve na patente americana No. 6.3 02.8 54, ummétodo geral para coletar fluidos, particularmente sanguede cordão umbilical. De acordo com o método de Paderni,uma porção do cordão umbilical é lavada, desinfetada ecortada, o cordão sendo então acoplado a um sistema deconexão que o trava no lugar. Não há descrições napatente de que forma essas etapas são conduzidas.Finalmente, o sistema de conexão é então conectado a umrecipiente de coleta. Depois de expelida do úteromaterno, a placenta é colocada num recipiente ao qual éaplicada pressão positiva. Opcionalmente, Paderni afirma,sem descrever, porém, de que forma essa pressão negativapode ser aplicada ao recipiente de coleta de sangue parafacilitar o fluxo de sangue do cordão umbilical.

Na patente americana No. 6.190.368, de Kuypers, et al., édescrito um aparelho e um método para coletar sangue decordão umbilical. 0 aparelho descrito consisteprincipalmente de um alojamento que possui uma regiãointerna adaptada para reter um cordão umbilical num localdesejado e uma abertura através da qual o cordão seestende dessa região interna para uma região externa aoalojamento. No procedimento, o cordão é cortado com umalâmina acoplada ao alojamento e, através da extremidaderecém-cortada do cordão umbilical o sangue escoa,auxiliado pela gravidade, para uma região de coleta desangue do alojamento. Além disso, descrevem um recipientereceptor para a placenta, equipado com um balão inflávelou outros meios para comprimir a placenta.

Muitos outros métodos e aparelhos para coletar sangue decordão umbilical são descritos no estado da técnica.Alguns desses métodos descrevem sistemas em "circuitoaberto", nos quais o sangue coletado fica vulnerável àcontaminação. Além disso, muitos dos dispositivos sãocaros, e às vezes de uso complicado, requerendo muitadestreza e experiência por parte da pessoa que coleta osangue.

A principal limitação do estado da técnica é a quantidadecoletada de sangue de cordão umbilical não contaminado.Essa quantidade é altamente importante já que determina aquantidade de células-tronco que podem ser extraídas daamostra coletada. Atualmente, a quantidade média desangue coletado é de 80 ml, embora um técnico de coletahabilitado possa coletar até 150 ml dos aproximadamente250 ml presentes. A quantidade de células-troncoextraídas da amostra de sangue média é geralmentesuficiente para transplantes em indivíduos pesando atécerca de 44 kg, não permitindo, portanto, condições desolução de tratamento após a infância. A quantidade desangue coletado é geralmente muito dependente dahabilidade do técnico de coleta.

Após o nascimento, há uma rápida deterioração naestrutura do vaso sangüíneo e a coagulação do sangue ocorre muito rapidamente. Visto que a maioria dosprocedimentos de coleta existentes são comparativamentelentos, a maior parte do sangue do cordão umbilicalcoagula na placenta e no cordão umbilical e muitos vasossangüíneos colapsam, levando o sangue a ficar essencialmente retido na placenta e no cordão umbilicalantes que possa ser coletado.

Ê muito desejável desenvolver um procedimento quemaximize a quantidade de sangue não contaminado extraídoda placenta e do cordão umbilical. Tal procedimento seria rápido e estaria concluído antes que a coagulação ecolapso dos vasos reduzissem a quantidade de sanguecoletado, e empregaria um dispositivo de coleta semi-automático que não exigiria nenhuma habilidade especialde uso por parte do técnico de coleta. Além disso, deve- se prevenir a contaminação e o kit de coleta precisa serdescartável e de baixo custo.

Um dos objetos da presente invenção consiste em prover umaparelho que compreenda um dispositivo hermeticamentefechado e desinfetado para coleta de sangue de cordãoumbilical.

Outro objeto da presente invenção consiste em prover ummétodo para uso de dito aparelho para coletar sangue decordão umbilical que possa superar as desvantagens doestado da técnica, principalmente aumentando a quantidade de sangue não contaminado coletado, de forma que o númerode células-tronco extraídas seja suficiente paratransplante numa pessoa adulta.

Outro objeto da presente invenção consiste em prover umaparelho e método melhorado para uma coleta de sangue de cordão umbilical em circuito fechado.Outro objeto da presente invenção consiste em prover umaparelho que até mesmo uma pessoa inexperiente possautilizar com eficiência.

Outro objeto da presente invenção consiste ainda emprover um método comparativamente rápido para coletarsangue de cordão umbilical.

Outro objeto da presente invenção consiste em prover umkit de coleta barato e descartável.

Outras finalidades e vantagens da presente invenção serão descritas a seguir.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Num primeiro aspecto, a invenção é um aparelho de coletapara coletar sangue fetal do cordão umbilical e daplacenta após o nascimento do bebê. O aparelho compreendecomponentes que permitem que um procedimento de coleta emcircuito aberto seja conduzido num ambiente estérilhermeticamente fechado, prevenindo assim a contaminaçãodo sangue fetal através de contato com o ambiente quecerca o aparelho de coleta durante todo o processo decoleta de sangue.

Uma concretização preferida do aparelho de coleta dainvenção compreende:

a. um dispositivo de suporte que pode ser aberto efechado para receber e reter a parte superior da

25 extremidade cortada do cordão umbilical. O dispositivo desuporte compreende elementos que lhe permitem ser ligadode forma reversível ao compartimento de desinfecção.

b. Um compartimento de desinfecção que recebe a parteinferior da extremidade cortada do cordão umbilical. Ocompartimento de desinfecção compreende elementos que lhepermitem ser ligado de forma reversível ao dispositivo desuporte, uma conexão para o exterior através da qual omaterial pode ser introduzido para desinfetar seuinterior, e um bocal adaptado com um filtro e uma válvulaatravés do qual ar puro pode entrar ou sair do interiorda câmara de desinfecção, ec. pelo menos um recipiente de coleta de sangue conectadoa e em comunicação hermética de fluido com o interior docompartimento de desinfecção.

Em algumas concretizações, o recipiente de coleta desangue é parte integrante do aparelho. 0 recipiente decoleta de sangue pode compreender um cubo para conexão aum ou mais objetos externos de coleta de sangue. Emoutras concretizações, o recipiente não faz parteintegrante do aparelho e compreende uma ou mais seringas, bolsas de coleta de sangue ou suporte de tubo a vácuo deamostras múltiplas. O dispositivo de suportepreferivelmente compreende um material absorvente em seuinterior.

Em outro aspecto, a invenção consiste num método de utilizar o aparelho para coletar sangue fetal do cordãoumbilical e da placenta após o nascimento do bebê. Ométodo da invenção compreende as etapas de:

a). pinçar o cordão umbilical utilizando duas pinças decordão;

b). cortar o cordão umbilical entre as duas pinças;

c). abrir o dispositivo de suporte;

d). inserir a extremidade seccionada da porção do cordãoumbilical conectada à placenta no dispositivo desuporte, de forma que a pinça de cordão apoie-se sobre asuperfície superior externa do dispositivo de suporte eparte do cordão fique pendurada abaixo da parte inferiordo dispositivo de suporte;

e) fechar dito dispositivo de suporte;

f) colocar o dispositivo de suporte no topo docompartimento de desinfecção enquanto insere aextremidade suspensa do cordão dentro do compartimento dedesinfecção até que o cordão fique em linha reta e aextremidade do cordão fique posicionada ao lado docompartimento de desinfecção;

g). engatar os elementos no dispositivo de suporte com oselementos no compartimento de desinfecção para uni-los;h). abrir a válvula para permitir o livre fluxo de arpuro para dentro ou para fora do compartimento dedesinfecção através do filtro;

i). abrir a pinça, permitindo que algumas gotas de sangueescoem para fora da ponta do cordão;

j). fechar a pinça;

k) . desinfetar a parte interna do compartimento dedesinfecção e a extremidade do cordão umbilical injetandodesinfetante no compartimento de desinfecção;

l). extrair o sangue e o desinfetante;

m) . opcionalmente repetir as etapas (k) e (l) uma ou maisvezes;

n). fechar a válvula; e

o). remover a pinça do cordão umbilical, permitindo assimque o sangue flua livremente para dentro do recipiente decoleta.

Em outro aspecto, a invenção consiste num sistema paraconduzir um procedimento de coleta em circuito fechadopara coletar sangue fetal do cordão umbilical e da

placenta após o nascimento. O sistema compreende:

a). uma bolsa de coleta de sangue;

b). três ou mais agulhas; e

c). tubulação para conectar as agulhas à bolsa.

Numa concretização preferida do sistema, pelo menos umadas agulhas possui um diâmetro maior do que uma agulha16G. Pelo menos uma das agulhas pode ser uma cânula-IV.Preferivelmente, a bolsa possui capacidade grande osuficiente para coletar pelo menos 200 cc de sangue decordão umbilical. A bolsa pode conter solução ou póanticoagulante.

Em outro aspecto, a invenção consiste num método parautilizar o sistema em circuito fechado da invenção, paracoletar sangue fetal do cordão umbilical e da placenta,após o nascimento do bebê. 0 método compreende as etapas

de:

a). pinçar o cordão umbilical utilizando duas pinças decordão;b). cortar o cordão umbilical entre as duas pinças;c). inserir uma das agulhas na veia próxima à extremidadepinçada da porção do cordão ligada à placenta, permitindoassim que o sangue flua para dentro da bolsa de coleta;d) . inserir outra agulha na veia num local acima daprimeira agulha quando a velocidade do fluxo de sangueatravés da primeira agulha for reduzida;e) . repetir a etapa uma ou mais vezes até que todas asagulhas tenham sido inseridas na veia e o sangue pare defluir para dentro da bolsa; ef). vedar a bolsa.Cada uma das agulhas pode ser removida da veia após umanova agulha ter sido inserida.Em outro aspecto, a invenção consiste num método parautilizar o sistema em circuito fechado da invenção paracoletar sangue fetal do cordão umbilical e da placentaapós o nascimento do bebê utilizando um sistema emcircuito fechado. O método compreende as etapas de:a). cortar o cordão umbilical entre as duas pinças decordão;b). inserir uma das agulhas na veia do cordão;c). inserir outra das agulhas em uma das artérias docordão;d). inserir outra das agulhas em outra artéria do cordão;e) . permitir que o sangue da veia e das artérias fluapara dentro da bolsa de coleta de sangue; ef). vedar a bolsa quando o sangue deixar de fluir para ointerior da mesma.Todas as características e vantagens acima citadas dainvenção e outras serão melhor compreendidas através daseguinte descrição ilustrativa e não restritiva deconcretizações preferidas da mesma, com referência aosdesenhos anexos.BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOSA Figura 1 mostra o aparelho de coleta de sangue dainvenção;As Figuras 2a a 2c mostram um dispositivo de suporte parao cordão umbilical conectado ao topo do aparelho dainvenção;

A Figura 3 mostra outra concretização do aparelho decoleta de sangue da invenção;

A Figura 4 esquematicamente mostra o cordão umbilicalligado à placenta e a três cânulas IV ou agulhas;As Figuras 5A a 5E mostram uma concretização preferida dodispositivo de coleta de sangue da invenção, e

A Figura 6 mostra um sistema em circuito fechado paracoletar sangue de cordão umbilical.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS

A invenção consiste em dispositivos e métodos paracoletar sangue fetal do cordão umbilical e da placentaapós o nascimento de um bebê. As concretizações dainvenção são dispositivos e métodos em circuito abertoque permitem a coleta de quantidades relativamentegrandes de sangue de cordão umbilical enquanto reduz orisco de contaminação a níveis inferiores aos atualmenteassociados com sistemas em circuito fechado. Outrasconcretizações consistem em métodos e dispositivos parauso em procedimentos de sistema fechado que aumentam aquantidade de sangue coletado e que também reduzem aquantidade de contaminação nos sistemas fechadosatualmente empregados. Deve ficar entendido que adescrição a seguir de dispositivo e de métodosespecíficos é provida com a finalidade de apenas ilustraros princípios gerais da invenção. Em especial, asdimensões e materiais específicos são especificados para fins de ilustração apenas.

Geralmente, após o nascimento, o cordão umbilical épinçado utilizando-se duas pinças de cordão, uma pinçareabrível ao lado da mãe e outra ao lado do bebê. 0cordão é então cortado entre essas duas pinças, deixando um cordão solto ao lado da mãe. Após o nascimento ocorrea conhecida "liberação" da placenta, ou seja, a expulsãoda placenta do útero da mãe. A maioria dos métodosconvencionais utilizados em hospitais para coleta desangue de cordão umbilical são otimamente aplicadas antesda liberação da placenta, já que as contrações uterinasfacilitam o escoamento de sangue da placenta através docordão umbilical.

Concretizações da invenção são métodos e aparelhos paraexecutá-las, que podem ser descritos como procedimentosem circuito aberto, já que envolvem a coleta de sangue docordão umbilical, permitindo-lhe ser drenado livremente apartir da extremidade aberta e recém-cortada do cordãoumbilical. O sangue flui para dentro de uma câmara decoleta desinfetada e hermeticamente fechada. O método,portanto, combina a principal vantagem do método aberto,ou seja, permite que a quantidade de sangue de cordãoumbilical coletado seja suficientemente grande de formaque o número de células-tronco presentes na amostra sejasuficiente para uma futura implantação num adulto, com ode circuito fechado, ou seja, a amostra de sangue não écontaminada. Além disso, o aparelho é fácil de usar,permitindo que bons resultados sejam obtidos por pessoalinexperiente; baratos e preferivelmente descartáveissendo rápido o processo de coleta de sangue. A coleta desangue pode iniciar-se antes ou após a expulsão daplacenta, porém, preferivelmente inicia-se antes daexpulsão da placenta para reduzir a quantidade decoagulação e colapso dos vasos sangüíneos, maximizandoassim a quantidade de sangue recolhido. A Figura 1 é umavista transversal mostrando uma primeira concretização doaparelho de coleta de sangue da invenção 800. 0 aparelho800 é projetado para ser utilizado apenas uma vez e vemesterilizado, sendo vedado hermeticamente durante todo oprocesso. O aparelho 800 pode ser feito com vários tiposde materiais, tais como plástico ou vidro. O aparelho 800compreende um compartimento de desinfecção 12 0, quepossui um volume de, por exemplo, 50 ml e que é conectadona parte inferior a um dispositivo de coleta de sangue,por exemplo, mas não necessariamente, uma seringa 270,conforme mostra a figura. A abertura 24, através da qualo cordão umbilical é inserido no aparelho 800, é vedadahermeticamente pela tampa 32, que pode ser feito, porexemplo, de borracha ou plástico. A configuração destatampa pode variar, contanto que sua função de manter oaparelho estéril seja cumprida. Desde que o compartimento12 0 seja hermeticamente vedado em todos os processos dedesinfecção e coleta de sangue, o aparelho 800 incluimeio, por exemplo, uma válvula e/ou um filtro de ar e/ouconexão a um suprimento de ar puro 20, para controlar apressão dentro do compartimento 12 0 mesmo quando aquantidade de líquido no compartimento 12 0 muda. Outrosdetalhes do aparelho serão descritos abaixo.Para garantir que os vasos sangüíneos do cordão umbilicalestejam desobstruídos, a extremidade seccionada do cordãoumbilical pode ser encurtada, por exemplo, em 1 cmmediante corte com uma lâmina afiada. O cordão é entãolevemente comprimido para expelir uma pequena quantidadede sangue e o sangue coagula em sua extremidade, e entãodesinfetado através de limpeza e/ou lavagem comdesinfetante. Antes da inserção do cordão umbilical noaparelho 800, o dispositivo de suporte 50, mostrado naFig. Ia está mais próximo em torno da extremidade soltado cordão umbilical. As finalidades do dispositivo desuporte 50 consiste em impedir o vazamento decontaminantes para o interior do aparelho 800, manter ocordão umbilical no lugar, e atuar como um meio paraprender firmemente o aparelho 800.A Fig. 2b é uma vista em corte transversal de umdispositivo de suporte 50 em sua configuração aberta. 0dispositivo de suporte 50 pode ser feito com qualquermaterial adequado, por exemplo, de plástico. Conformemostra a Fig. 2b, o dispositivo de suporte 50 consiste deduas partes 51 conectadas entre si através da conexão 52,por exemplo, uma conexão fina de borracha flexível ou umaarticulação de metal ou plástico. A conexão 52 permiteque o dispositivo de suporte 50 seja aberto e fechado. 0interior de cada parte 51 do dispositivo de suporte 50 érevestido com um material absorvente flexível 54, porexemplo, uma esponja ou papel ou almofada absorvente. 0material absorvente 54 absorve quaisquer contaminantes, tal como sangue materno, impedindo que escoem pelo cordãoumbilical para dentro do aparelho 800. A Figura 2c é umavista em corte transversal do dispositivo de suporte 50,na configuração fechada. A passagem 56 possui um diâmetrode aproximadamente 10 mm, permitindo que o cordão umbilical transite pela via de passagem 56 enquanto éretido levemente, de forma a permitir o livre fluxo desangue através do cordão umbilical. Logo que o cordãoumbilical é fixado no dispositivo de suporte 50, a tampa32 é removida da abertura 24. 0 dispositivo de suporte 50 é então conectado ao topo do aparelho 800 através demeios convencionais, inserindo assim o cordão pelaabertura 24. Voltando agora à Fig. 1, uma luva 36, que éligada em seu topo ao topo da abertura 24, é mostrada naabertura interna 24. A luva 36 é inicialmente retida firmemente contra as laterais da abertura 24 através degrampos (não mostrados na figura). A conexão dodispositivo de suporte 50 ao aparelho 800 solta osgrampos que mantém a luva 3 6 no lugar. Associado à luva3 6 encontra-se um mecanismo, por exemplo, molas radiais (não mostradas na Figura) que empurra levemente aslaterais da luva 36 contra o cordão umbilical. A luva 36é feita de material flexível fino, como por exemplo,diversos tipos de látex, silicone ou borracha e cria umavedação hermética em torno do cordão enquanto ao mesmotempo exerce uma pressão sobre as paredes do cordão baixoo suficiente para permitir que o sangue flua livrementeda extremidade cortada do cordão umbilical para dentro docompartimento 120. Uma vez que diferentes cordõesumbilicais possuem diâmetros diferentes e que o diâmetro do mesmo cordão varie devido às variações na pressãosangüínea dentro dele, a luva 3 6 tem a capacidade deadaptar-se ao tamanho e formato do cordão durante oprocesso de coleta de sangue. Quando a luva 3 6 é vedadaem torno do cordão umbilical, a abertura 24 possui umformato cônico que, na concretização preferida, estreita-se de um diâmetro de aproximadamente 2 5 mm no topo paracerca de 5-10 mm no fundo.

Após o compartimento de desinfecção 12 0 ter sido abertoao ar durante a inserção do cordão umbilical pelaabertura 24, existe a necessidade de desinfetar essecompartimento, juntamente com a extremidade solta docordão inserido no mesmo.

Para realizar essa desinfecção, o compartimento 120 podecompreender dois cubos, mostrados na figura 1, com, porexemplo, conexões do tipo "luer-lock" 16 e 18. Em umaconcretização da presente invenção, os cubos são feitosdo mesmo tipo de plástico do aparelho 800. Nessaconcretização, o cubo 16 está localizado próximo ao topodo compartimento 120 e comunica-se com o interior atravésde uma válvula de via única 17. A válvula 17 permite ofluxo apenas para o interior do compartimento 120. O cubo18 é conectado no lado inferior do compartimento 120,também através de uma válvula de via única 19. A válvula19 permite apenas o fluxo para fora do compartimento 12.Durante o processo de desinfecção, duas seringas 2 8 e 3 0são usadas nos cubos 16 e 18, respectivamente. Em uma concretização da invenção, as seringas 28 e 30 possuemconexões do tipo "luer-lock", de forma a adaptar-se deforma justa aos cubos 16 e 18, respectivamente. Asválvulas 17 e 19 permitem que o aparelho 800 permaneçahermeticamente fechado, quer uma seringa apropriadaesteja ou não conectada ao cubo em qualquer dado momento.Em outra concretização da presente invenção, as seringas28 e 30 possuem agulhas em suas extremidades. Os cubos 16e 18 compreendem uma tampa de borracha ou plástico, quesubstitui as válvulas 17 e 19 e que permitem que ocompartimento 120 permaneça hermeticamente fechado quandouma agulha for inserida através da tampa para dentro docompartimento 12 0 ou for retirada.O processo de desinfecção é conduzido conforme a seguirdescrito: a pinça reabrível no cordão umbilical é abertapara permitir que aproximadamente 1 ml de sangue sejadrenado para dentro do compartimento de desinfecção 12 0,sendo então fechada. A seringa 28, que pode ser deplástico ou vidro, é então utilizada para injetardesinfetante, por exemplo, álcool de clorexidina, nocompartimento 120 através do cubo 16. A quantidade dedesinfetante injetada no compartimento 12 0 deve sersuficiente para encher o compartimento. Apósaproximadamente 3 0 segundos, a seringa 3 0 é conectadaatravés do cubo 18 para o interior do compartimento 12 0 eusada para drenar completamente o sangue e o desinfetantepara fora do compartimento 120. Esse procedimento dedesinfecção pode ser repetido uma ou mais vezes paragarantir a esterilidade da parte interna do compartimento120 .Em uma concretização da presente invenção, um cubo 260,por exemplo, uma conexão do tipo "luer-lock", é conectadaao compartimento de desinfecção 12 0 através de umaválvula de via única 262, que permite o fluxo apenas parafora do compartimento 120. Um recipiente de coleta desangue, por exemplo, uma seringa 270(conforme mostra afigura) ou uma bolsa de coleta de sangue (não mostrada nodesenho), ambos contendo anticoagulante seco ou líquido(não mostrado na figura) é conectada ao cubo 260. Quandoo processo de coleta de sangue está perto de começar, oaparelho 800 é colocado numa posição mais baixa do que aplacenta. Realizada a desinfecção, conforme acimadescrito, a pinça de cordão reabrível é removida docordão umbilical, a válvula 2 62 é aberta e o sanguedrenado com a ajuda da gravidade pelo compartimento 12 0para dentro do recipiente de coleta de sangue.Em outra concretização da presente invenção, uma válvulade segurança de três vias (não mostrada na figura)substitui a válvula 262. Essa válvula de segurança podeter conexões a uma bolsa de coleta de sangue e a umaseringa, sendo utilizadas em conjunto para coleta desangue.

Em outra concretização da presente invenção, um suportede tubo a vácuo de amostras múltiplas (não mostrado nasfiguras) é ligado ao cubo 260. Esse suporte pode serusado para coletar o sangue ou, por exemplo, para removerpequenas amostras de sangue do sangue coletado,utilizando, por exemplo, tubos padronizados para coletade sangue a vácuo.

A Figura 3 é uma vista em corte transversal de outraconcretização da invenção. Nesta concretização, oaparelho 8 compreende dois compartimentos: umcompartimento de desinfecção 12 e um compartimento decoleta 14 separados entre si por uma divisória 13 . Osdois compartimentos podem ser isolados um do outro, oucolocados em comunicação de fluido um com o outro pormeio de válvula 26 na divisória 13. A válvula de viaúnica operada manualmente 2 6 que é feita de plástico oumetal na concretização preferida, provê uma passagematravés da divisória 13. A válvula 26 permanece fechada,por questões de esterilidade, até o início da coleta desangue de cordão umbilical. 0 compartimento de coleta 14possui um volume de aproximadamente 300 ml, podendo-secolocar nesse compartimento anticoagulante 44, porexemplo, Heparina ou CPD.

Na Figura 3 também é mostrado que o compartimento decoleta 14 compreende um cubo 22, preferivelmente com umaconexão do tipo "luer-lock" localizado em sua parteinferior. O cubo 22 pode ser usado para conectar ocompartimento 14 do aparelho 8 a objetos externos.

Em uma concretização, o compartimento de coleta de sangue14 do aparelho 8 não é conectado a nenhum objeto externo.Quando o processo de coleta de sangue está para começar,o aparelho 8 é colocado numa posição mais baixa em relação à placenta. Após o processo de desinfecção,conforme descrito acima, a válvula 26 é aberta e a pinçade cordão reabrível é removida do cordão umbilical.Enquanto o sangue escoa para dentro do aparelho 8, oaparelho é sacudido, para assim misturar o sanguecoletado com o anticoagulante 44. Uma vez coletado osangue, a válvula 2 6 é fechada, isolando assim ocompartimento de coleta 14 do compartimento dedesinfecção 12. 0 cordão é removido do aparelho 8, e osangue coletado estocado dentro do compartimento decoleta 14, e aproveitado para processamento posterior.Em outra concretização da invenção, o cubo 2 2 é conectadoa uma válvula de segurança de três vias (não mostrada nafigura). Essa válvula de segurança pode ter conexões auma bolsa de coleta de sangue e a uma seringa utilizadaem conjunto para a coleta do sangue.

Uma concretização preferida da invenção é mostrada nasFigs. 5A a 5E. Nesta concretização, o aparelho de coleta300 compreende duas partes: dispositivo de suporte 50 ecompartimento de desinfecção 120. Como na concretizaçãoacima descrita, o dispositivo de suporte 50 (vide Fig.5B) é de formato cilíndrico e compreende duas partes 51conectadas por uma articulação 52 que permite que aspartes oscilem para as posições aberta e fechada. 0interior de cada parte 51 é revestido com materialabsorvente 54. Quando o dispositivo de suporte 50 está emsua configuração fechada, conforme mostra a Figura 5B,uma passagem livre na qual o cordão umbilical é inseridoexiste ao longo de seu eixo geométrico longitudinal. Nofundo do dispositivo de suporte 50 estão diversas peçassalientes 3 02 que são usadas para ligar o dispositivo desuporte 50 ao compartimento de desinfecção. No fundo decada parte 51 do lado de dentro está localizado umsemidisco de material flexível que forma um colar 316para impedir que qualquer fluido deslize para baixo pelasuperfície externa do cordão (vide Fig. 5D) .O colar 316pode ser feito de qualquer material flexível, como porexemplo, borracha, que pode formar uma vedação herméticaem torno do cordão, impedindo a passagem de qualquerfluído para baixo da superfície externa do cordão, emboranão restringindo o fluxo de sangue pelo cordão.A Figura 5C mostra o compartimento de desinfecção 120. Naconcretização representativa mostrada nas Figuras, o compartimento de desinfecção 12 0 é feito com duas porçõesem formato cilíndrico, a porção superior 120a e 120b,permanentemente fixadas uma à outra, por exemplo, comajuda de parafusos 318 (Fig. 5E) para formar umrecipiente que possa ser hermeticamente fechado. Antes do uso, a parte interna do compartimento de desinfecção émantida estéril vedando-se a entrada no topo da porçãosuperior 120a com a tampa (cobertura) 32. No topo fora daseção superior 120a estão diversas saliências 304compreendendo fendas nas quais as peças salientes 302 nodispositivo de suporte 50 podem ser inseridas para unirambas as partes do aparelho de coleta 300. Dentro daporção superior 120a está localizada uma luva 36 (Fig.5E) similar à descrita em relação as Figs. 1 e 2a. Naparte externa da seção superior encontra-se um bocal que conecta a parte interna da seção inferior 120b aoambiente externo. O bocal é adaptado com um filtro 306 ecoberto com uma válvula 3 08 para permitir que a pressãotanto dentro como fora do aparelho 300 seja equalizadapela transferência de ar filtrado. No fundo da porçãoinferior 120b do compartimento de desinfecção 120 estálocalizada a conexão tipo "luer" 260 para permitir que osfluidos sejam introduzidos ou retirados da seção inferior120b.

As Figs. 5D e 5E ilustram as etapas principais do protocolo médico que foi proposto para coleta de sangueutilizando esta concretização da invenção. Após onascimento do bebê, o cordão umbilical é comprimido comuma pinça próxima ao bebê e então uma segunda pinçareabrível 312 é fixada ao cordão cerca de 10 cm acima da primeira pinça. 0 cordão umbilical é então cortado entreas duas pinças nas proximidades da pinça posicionada aolado do bebê e a extremidade livre do cordão debaixo dapinça 312 é desinfetada, por exemplo, através de limpezacom um tecido suave ensopado com solução desinfetante.Agora com referência à Figura 5D, que mostra odispositivo de suporte 50 em sua configuração aberta, aextremidade livre do cordão 314, é colocada na passagem56 ao longo do dispositivo de suporte 50. Para garantir oadequado posicionamento do cordão 314, a pinça reabrível312 apoia-se sobre o topo do dispositivo de suporte 50 eé mantida no lugar mediante retenção do grampo retentor310 (o grampo 310 não é mostrado em nenhuma outra figura,para fins de simplificação, mas deve ser considerado comopresente nas três concretizações preferidas dodispositivo de suporte). As duas partes 51 do dispositivode suporte 50 são agora fechadas e travadas naconfiguração fechada por um mecanismo apropriado (nãomostrado nas figuras). Neste estágio, a parte superior daextremidade livre do cordão umbilical 314 é mantidafirmemente no lugar pelo material absorvente 54, sendoque o colar 316 e a parte inferior da extremidade livrefica pendurada abaixo do dispositivo de suporte 50.

Agora a tampa 32 é removida da abertura no topo docompartimento de desinfecção 120 e a válvula 308 éaberta. A extremidade do cordão pendurada abaixo doaparelho de coleta 50 é cuidadosamente inserida pela luva36 na porção superior 102a até que o dispositivo desuporte 50 se apoie no topo do compartimento dedesinfecção 120 e a ponta (~1 cm) do cordão 314 seprojete para dentro da porção inferior 120b docompartimento de desinfecção. 0 dispositivo de suporte 50é agora girado em relação ao compartimento de desinfecção120 até que as peças salientes 302 entrem nas fendas dassaliências 304, travando assim juntos os dois componentesdo aparelho de coleta 300.

Após conectar o dispositivo de suporte 50 aocompartimento de desinfecção 120, a pinça 312 é abertabrevemente para permitir que algumas gotas de sanguefluam para dentro da parte inferior 12 0b do compartimentode desinfecção e então a pinça é fechada. A soluçãodesinfetante é agora injetada na parte inferior 120b pormeio de uma seringa conectada à conexão tipo , "luer" 260até que a parte inferior 120b esteja completamente cheia.

0 desinfetante é deixado permanecer dentro do aparelho dedesinfecção por um curto espaço de tempo, como, porexemplo, 3 0 segundos, sendo então drenado utilizando amesma seringa que foi utilizada para encher o aparelho. Aseringa com o desinfetante é agora desconectada doconector tipo "luer" 260 e uma seringa que será utilizadapara coletar o sangue do cordão é conectada em seu lugar.A válvula 308 é agora fechada, o dispositivo de coleta éabaixado e sustentado debaixo da placenta e a pinça 312 éaberta. 0 sangue flui para dentro da porção inferior 120b, sendo continuamente puxado para dentro da seringa,com ajuda da leve pressão negativa criada puxando-selentamente o embolo da seringa. Se necessário, a seringade coleta pode ser substituída por uma nova quandoestiver cheia, sem interromper o processo de coleta ou por em risco a esterilidade do sangue coletado. Durante oprocesso de coleta, é geralmente necessário sacudirlevemente a seringa para misturar o agente anticoagulantecom o sangue nela contidos.

De modo ideal, o procedimento acima é conduzido antes da expulsão da placenta. Porém, se a placenta é expelidadurante o processo de coleta, ou mesmo antes que seinicie a coleta do sangue umbilical, o procedimento érealizado conforme acima descrito, contanto que se tenhao cuidado de apoiar a placenta acima do aparelho de coleta. Pessoas experientes reconhecerão que o aparelhoda invenção permite um método muito rápido de coleta desangue do cordão umbilical. É necessária uma curva deaprendizagem extremamente curva, mesmo para o pessoal quetenha recebido treinamento médio mínimo, para se obter ótimos resultados utilizando o método da invenção.

Em métodos fechados convencionais, o cordão umbilical épinçado em dois lugares e cortado entre as pinças após onascimento do bebê, e uma agulha 16G padrão é inserida naveia logo acima da pinça na extremidade livre do cordão.O sangue é então drenado pelo tubo para uma bolsa decoleta de sangue convencional. Uma ocorrência freqüentedurante o procedimento de coleta é que a taxa de fluxosangüíneo cai drasticamente e até mesmo pára devido àcoagulação do sangue na veia. Para contornar esseproblema, a agulha é retirada da veia e reintroduzida naveia num local do cordão mais próximo à placenta. É muitocomum ter de retirar e reinserir a agulha duas ou maisvezes para tentar maximizar a quantidade de sangue decordão recolhido. O cordão umbilical é limpo comdesinfetante antes de introduzir a agulha, podendo ser aagulha lavada com desinfetante antes de serreintroduzida. Alguns procedimentos não comumenteutilizados requerem desconectar a agulha original datubagem e reconectar uma nova agulha estéril em seulugar. Porém, toda vez que a agulha for removida ereinserida na veia ou desconectada e reconectada atubagem, haverá uma probabilidade relativamente alta deentrada de contaminantes na tubagem e da tubagem paradentro da bolsa de coleta.

Na Figura 6 é mostrado um sistema de coleta fechado 4 00que permite um aperfeiçoamento na quantidade eesterilidade de sangue do cordão umbilical coletado, secomparado com os métodos de sistema fechado atualmenteempregados. O sistema 400 compreende uma bolsa de coletade sangue 4 02 à qual são conectadas pelo menos trêsagulhas ou cânulas IV 4 06 - todas com tampas estéreis, por meio de tubagem 404 e da junção cruzada 408. 0 usodesse sistema reduz significativamente o risco decontaminação. Como no estado da técnica, a primeiraagulha é inserida na veia próxima à parte inferior docordão. Quando a taxa de escoamento do sangue diminui, asegunda agulha é inserida e em seguida a terceira. Asagulhas não precisam ser retiradas, sendo, portantomantida a integridade do circuito de coleta fechado eimpedida a entrada de contaminantes na bolsa de coleta desangue 402. Caso se deseje retirar uma ou mais agulhasenquanto o sangue ainda estiver sendo coletado utilizandouma ou mais das outras agulhas, então podem ser providasválvulas, seja na extremidade proximal das agulhas 4 06 ouna junção cruzada 408. Outras configurações para osistema 400 são previstas pelo inventor. Por exemplo, apeça de tubagem 404 conectada a cada uma das agulhas 406pode ser conectada diretamente â bolsa de coleta 402.O sistema 4 00 da invenção possui duas outrascaracterísticas que o distinguem dos sistemas do estadoda técnica. Em primeiro lugar, todos os sistemas doestado da técnica conhecidos do inventor utilizam umaagulha 16G, que possui um diâmetro externo de l,7mm.Considerando que o diâmetro da veia do cordão umbilical étipicamente de 4mm quando cheia de sangue e de 2mm quandovazia, podem ser vantajosamente utilizadas seringas ouagulhas de cânulas IV 406 com diâmetro maior, porexemplo, 10G ou 12G, que possuam diâmetros externos de3,2mm e 2,6mm respectivamente. Ao utilizar agulhasmaiores, o sangue será coletado mais rapidamente,permitindo que mais sangue seja recolhido antes queocorra a coagulação significativa do sangue na veia. Asegunda característica do sistema 400 é que, devido à quantidade maior de sangue de cordão umbilical coletado,a bolsa de coleta 402 será muito maior do que as bolsasde coleta utilizadas no estado da técnica. A bolsa 400 égrande o bastante para coletar pelo menos 2 00 ml desangue de cordão umbilical, além de qualquer solução oupó anticoagulante que estiver presente.

O sistema 400 da invenção pode ser usado em outro métodoem circuito fechado de coleta de sangue. Nesse método, éfeita uma conexão a todos os três vasos sangüíneos docordão umbilical para poder coletar sangue do maiornúmero possível de vasos. No estado da técnica, porexemplo, conforme descrito na patente americana No.6.302.854, acredita-se geralmente que devido ao cortetransversal limitado das duas artérias do cordãoumbilical, a coleta de sangue utilizando um sistema emcircuito fechado só é possível através da veia do cordãoumbilical. Em comparação com o estado da técnica, aquantidade de sangue coletado pode ser significativamentereduzida coletando-se o sangue de todos os três vasos docordão umbilical.

A Figura 4 mostra uma visão geral do cordão umbilical2 00, conectado a uma extremidade das três cânulas IV(intravenosa e arterial) ou agulhas 202, 204 e 206 e àoutra extremidade da placenta 208. 0 cordão umbilical 200é comprimido com uma pinça 210 de cordão, feita, porexemplo, de plástico ou metal. Para iniciar oprocedimento de coleta de sangue, cânulas 2 02, 2 04, e206, compreendendo agulhas (não mostradas na Figura) sãoinseridas em cada um dos três vasos do cordão umbilicalcom auxílio de ditas agulhas. Após inserir as cânulas, asagulhas são removidas, deixando a extremidade distai deuma cânula dentro das duas artérias e veia do cordãoumbilical. As cânulas IV 202, 204 e 206 são então fixadasao cordão umbilical, utilizando fita, por exemplo, paraevitar que se desconectem do cordão. As cânulas são entãoconectadas a um meio de coleta de sangue através deválvulas e conectores (não mostrados na figura) localizados em sua extremidade distai.

Em uma concretização da invenção, o sangue é coletadosimultaneamente de todos os três vasos sangüíneos atravésdo conector 2 03, que compreende uma abertura 2 05, quepode ser feita, por exemplo, de plástico. A abertura 205conecta-se âs três cânulas-IV ou agulhas em sua lateralde entrada e em sua lateral de saída a um recipiente decoleta de sangue (não mostrado na figura), por exemplo,uma seringa, uma bolsa de coleta de sangue, ou ambos,através de uma válvula de segurança de três vias. Asválvulas sobre as cânulas 202, 204, e 206 são abertas,permitindo assim que o sangue flua do cordão umbilicalatravés da cânula para o interior de dito recipiente(s)de coleta de sangue.

Em outra concretização da invenção, um recipiente decoleta de sangue (não mostrado na figura), por exemplo,uma seringa ou uma bolsa de coleta de sangue, é conectadoà extremidade livre de cada uma das três cânulas 2 02, 2 04e 206. 0 processo de coleta de sangue é conforme descritoacima, com exceção de que o sangue é coletadoindependentemente de cada um dos três vasos sangüíneospara dentro dos recipientes de coleta de sangueseparados.

Em outra concretização da invenção ainda, entre ascânulas 202, 204 e 206, e o recipiente de coleta desangue (ou recipientes) um ou mais suportes de tubo avácuo para amostras múltiplas (não mostrados na figura)são conectados por meio de conectores padrão "T" ou "Y" .Esses suportes podem ser usados para coletar o sangue epara remover pequenas amostras do sangue coletadoutilizando, por exemplo, tubo a vácuo padronizado paracoleta de sangue.

Embora as concretizações da invenção tenham sidodescritas por meio de ilustração, fica entendido que asmesmas pode ser executadas com muitas variações,modificações e adaptações, sem fugir do escopo dasreivindicações.

Claims (15)

1. Aparelho para coletar sangue fetal de cordão umbilicale de placenta, após o nascimento do bebê, caracterizadopelo fato de compreender componentes que permitem que umprocedimento de coleta em circuito aberto seja conduzidonum ambiente estéril hermeticamente fechado, impedindoassim a contaminação de dito sangue fetal por contato como ambiente que cerca dito aparelho de coleta durante todoo processo de coleta de sangue.

2. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de compreender:a. um dispositivo de suporte que pode ser aberto efechado para receber e reter a parte superior daextremidade cortada do cordão umbilical, dito dispositivode suporte compreendendo elementos que lhe permitem serligado de forma reversível a dito compartimento dedesinfecção;b. um compart imento de desinf ecção que recebe a parteinferior da extremidade cortada do cordão umbilical, ditocompartimento de desinfecção compreendendo elementos quelhe permitem ser ligado de forma reversível a ditodispositivo de suporte, uma conexão para o exterioratravés da qual o material pode ser introduzido paradesinfetar seu interior, e um bocal adaptado com umfiltro e uma válvula através do qual ar puro pode entrarou sair do interior da câmara de desinfecção, ec. pelo menos um recipiente de coleta de sangue conectadoa e em comunicação hermética de fluido com o interior docompartimento de desinfecção.

3. Aparelho, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de o recipiente de coleta desangue ser parte integrante de dito aparelho.

4. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de o recipiente de coleta desangue compreender um cubo para conexão a um ou maisobjetos externos de coleta de sangue.

5. Aparelho, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de o recipiente de coleta desangue não ser parte integrante de dito aparelho ecompreender um ou mais itens selecionados do grupoconsistindo de:a. uma seringa;b. uma bolsa de coleta de sangue; ec. um suporte de tubo a vácuo para amostras múltiplas.

6. Aparelho, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de o dispositivo de suportecompreender um material absorvente em seu interior.

7. Método para utilizar o aparelho, conforme definido nareivindicação 2, para a coleta de sangue fetal de cordãoumbilical e da placenta após nascimento do bebê,caracterizado pelo fato de compreender:a) . pinçar dito cordão umbilical utilizando duas pinçasde cordão;b). cortar o cordão umbilical entre ditas duas pinças;c). abrir o dispositivo de suporte;d) . inserir a extremidade seccionada da porção de ditocordão umbilical que está conectada a dita placenta nodispositivo de suporte, de forma que a pinça de cordãoapoie-se sobre a superfície superior externa de ditodispositivo de suporte e parte de dito cordão fiquependurada abaixo da parte inferior do dispositivo desuporte;e). fechar dito dispositivo de suporte;f) . colocar dito dispositivo de suporte no topo docompartimento de desinfecção enquanto insere aextremidade pendurada de dito cordão dentro de ditocompartimento de desinfecção até que o cordão fique emlinha reta e a ponta do cordão fique posicionada ao ladode dito compartimento de desinfecção;g) . engatar os elementos em dito dispositivo de suportecom os elementos em dito compartimento de desinfecçãopara uni-los;h) . abrir a válvula para permitir o livre fluxo de arpuro para dentro ou para fora de dito compartimento dedesinfecção através do filtro;i) . abrir dita pinça, permitindo que algumas gotas desangue escoem para fora de dita ponta de dito cordão;j). fechar dita pinça;k) . desinfetar a parte interna de dito compart imento dedesinfecção e de dita extremidade de dito cordãoumbilical injetando desinfetante em dito compartimento dedesinfecção;l). extrair o sangue e o desinfetante;m). opcionalmente repetir as etapas (k) e (1) uma ou maisvezes;n). fechar dita válvula; eo) . remover dita pinça de dito cordão umbilical,permitindo assim que o sangue flua livremente para dentrodo recipiente de coleta.

8. Sistema para um procedimento de coleta em circuitofechado, para coletar sangue fetal de cordão umbilical ede placenta após o nascimento do bebê, caracterizado pelofato de compreender:a. uma bolsa para coleta de sangue;b. três ou mais agulhas; ec. tubagem para conectar ditas agulhas a dita bolsa.

9. Sistema, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de pelo menos uma de ditasagulhas ter um diâmetro maior do que uma agulha 16G.

10. Sistema, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de pelo menos uma das agulhas seruma cânula-IV.

11. Sistema, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de a bolsa ter uma capacidadegrande o bastante para coletar pelo menos 2 00 cc desangue de cordão umbilical.

12. Sistema, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de a bolsa conter solução ou póanticoagulante.

13. Método para utilizar o sistema, conforme definido nareivindicação 8, para coletar sangue fetal do cordãoumbilical e da placenta, após o nascimento do bebê,utilizando um sistema em circuito fechado, caracterizadopelo fato de compreender as etapas de:a) . pinçar dito cordão umbilical utilizando duas pinçasde cordão;b). cortar dito cordão umbilical entre ditas duas pinças;c) . inserir uma de ditas agulhas na veia próxima àextremidade pinçada da porção de dito cordão ligada àdita placenta, permitindo assim que dito sangue flua paradentro da bolsa de coleta;d) . inserir outra agulha em dita veia num local acima dedita primeira agulha quando a velocidade do fluxo desangue através de dita primeira agulha for reduzida;e). repetir a etapa d uma ou mais vezes até que todas asagulhas tenham sido inseridas em dita veia e o sanguepare de fluir para dentro de dita bolsa; ef). vedar dita bolsa.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13,caracterizada pelo fato de cada agulha ser removida daveia após uma nova agulha ter sido inserida.

15. Método para utilizar o sistema, conforme definido nareivindicação 8, para coletar sangue fetal do cordãoumbilical e da placenta após o nascimento do bebê,utilizando um sistema de circuito fechado, caracterizadopelo fato de compreender as etapas de:a) . pinçar dito cordão umbilical utilizando duas pinçasde cordão;b). cortar dito cordão umbilical entre ditas duas pinçasde cordão;c). inserir uma de ditas agulhas na veia em dito cordão;d). inserir outra de ditas agulhas em uma das artérias dedito cordão;e) . inserir outra de ditas agulhas em outra artéria dedito cordão;f) . permitir que o sangue de dita veia e de ditasartérias flua para dentro da bolsa de coleta de sangue; eg). vedar dita bolsa guando o sangue deixar de fluir paraseu interior.