BRPI0617437A2

BRPI0617437A2 - derivados de ftalazinona substituÍda por 4-heteroarimetila

Info

Publication number: BRPI0617437A2
Application number: BRPI0617437-0A
Authority: BR
Inventors: Muhammad Hashim Javaid; Keith Allan Menear; Sylvie Gomez; Marc Geoffrey Hummerson; Niall Morrisson Barr Martin; Graeme Cameron Murray Smith; Xiao-Ling Fan Cockcroft; Frank Kerrigan
Original assignee: Kudos Pharm Ltd; Maybridge Ltd
Priority date: 2005-10-19
Filing date: 2006-10-19
Publication date: 2011-07-26
Also published as: EP1948642A1; GB0521373D0; JP2009512671A; US7470688B2; TW200800964A; UY29870A1; CA2623703A1; WO2007045877A1; NZ567445A; US20070093489A1; AU2006303038A1; US20090069303A1; AR058124A1; US7902193B2

Abstract

DERIVADOS DE ETALAZINONA SUBSTITUIDA POR 4- HETEROARIMETILA A presente invenção refere-se a compostos da fórmula (1) em que A e E em conjunto representam um anel aromático fundido, opcionalmente substituído; D é escolhido da fórmula (i), onde y^ 2^ é escolhido de CH e N, Y2 é escolhido de CH e N, y^ 3^ é escolhido de CH, CF e N; e as fórmulas (ii), D(A) e (E) onde Q é O ou S; R^ D^ é a fórmula (C) onde R^ NI^ é escolhido de H e alquila C~ 1-10~ opcionalmente substituida; X é escolhido de uma ligação simples, NR^ N2^, CR^ C3^ R^ C4^ e C=O; R^ N2^ é escolhido de H e alquila C~ 1- 10~ opcionalmente substituida; R^ C3^ e R^ C4^ são independentemente escolhidos de H, R, C(=O)OR, onde R é alquila C~ 3-10~ opcionalmente substituida, arila C~ 5- 10~ opcionalmente substituida ou heterociclila C~ 3-20~ opcionalmente substituida; Y é escolhido de NR^ N3^ e CR^ C1^R^ C2^; R^ C1^e R^ C2^ são independentemente escolhidos de H, R, C(=O)OR, onde R é alquila C~ 1-10~ opcionalmente substituida, arila C~ 5-20~ opcionalmente substituida ou heterociclila opcionalmente substituida; R^ C1^ e R^ C2^ em conjunto com o átomo de carbono no qual eles são ligados poderão formar um anel carbociclico ou heterociclilo C~ 5-7~ espiro fundido opcionalmente substituido; e quando x é uma ligação simples, R^ N1^ R^ C2^ e poderão, em conjunto com os átomos N e C nos quais ele são ligados, formar um anel heterociclico C~ 5-7~ opcionalmente substituído; e quando X é CR^ C3^ R^ C4^ , R^ C2^ e R^ C4^ poderão em conjunto formar uma ligação adicional, de tal forma que exista uma ligação dupla entre os átomos substituidos por R^ C1^ e R^ C3^.

Description

"DERIVADOS DE FTALAZINONA SUBSTITUÍDA POR 4-HETEROARIMETILA"

A invenção atual refere-se a derivados deftalazinona, e à sua utilização como fármacos.

Especialmente, a invenção atual refere-se ao uso destescompostos para inibir a atividade da enzima poli(ADP-ribose)polimerase-1, também conhecida como poli(ADP-ribose)sintase e poli ADP-ribosiltransferase, e comumentereferida como PARP-I.

A enzima de mamífero PARP-I (uma proteína commulti domínios 113-kDa) foi envolvida na sinalização dedanos no DNA através da sua habilidade de reconhecer erapidamente ligar-se a rupturas de filamentos simples ouduplos de DNA (D1Amours, et al., Biochem. J., 342, 249 - 268(1999)).

A família das poli (ADP-ribose) polimerases incluiagora cerca de 18 proteínas, que todas apresentam um certonível de homologia nos seus domínios catalíticos, mas sãodiferentes nas suas funções celulares (Ame et al. ,Bioessays., 26 (8), 882 - 893 (2004)). Desta família, aPARP-I (o membro fundador) e a PARP-2 são as únicas enzimascuja atividade catalítica é estimulada pela ocorrência derupturas de filamentos de DNA, fazendo com que eles sejamúnicos na família.

Sabe-se agora que a PARP-I participa de váriasfunções relacionadas com o DNA, incluindo a amplificação dosgenes, a divisão de células, a diferenciação, a apoptose,reparos da excisão da base do DNA assim como os efeitos nocomprimento dos telomero e na estabilidade do cromossomo(d'Adda di Fagagna, et al., Nature Gen., 23(1), 76-80 (1999)).

Estudos sobre o mecanismo pelo qual a PARP-Imodula o reparo do DNA e outros processos identificaram asua importância na formação das cadeias de poli(ADP-ribose)dentro do núcleo celular (Althaus, F. R. and Richter, C.,ADP-Ribosylation of Proteins; Enzymology and BiologicalSignificance, Springer-Verlag, Berlin ( 1987 ) ) . A PARP-Iativada ou, ligada a DNA utiliza as NAD+ para sintetizar apoli(ADP-ribose) sobre uma variedade de proteínas alvonucleares, incluindo as topoisomerases, histonas e a própriaPARP (Rhun, et al., Biochem. Biophys. Res Commun., 245, 1-10(1998 )) .

A poli (ADP-ribosil) ação também tem sidoassociada com a transformação maligna. Por exemplo, aatividade das PARP- 1 é maior no núcleo isolado dosfibroblastos transformados por SV40, enquanto que ambas ascélulas leucêmicas e as células de câncer do cólon mostramuma atividade mais elevada da enzima do que os leucócitosequivalentes normais e a mucosa do cólon (Miwa, et al. ,Arch. Biochem. Biophys., 181, 313 - 321 (1977); Burzio, etal., Proc. Soe. Exp. Biol. Med., 149, 933 - 938 (1975); eHirai, et al. , Câncer res. , 43, 3441 - 3446 (1983 )). Maisrecentemente, em tumores malignos da próstata comparados comcélulas benignas da próstata, aumentos significativos dosníveis de PARP ativo (predominantemente PARP-I) foramidentificados associados com níveis mais elevados deinstabilidade genética (Mcnealy, et al., Anticancer Res.,23, 1473 - 1478 (2003 )).

Tem sido utilizada uma quantidade de inibidoresde PARP-I com peso molecular baixo para explicar a funçãofuncional da poli(ADP-ribosil)ação no reparo do DNA. Emcélulas tratadas com agentes alquilantes, a inibição de PARPleva a um aumento marcante na ruptura dos filamentos de DNAe na morte das células (Durkacz, et al., Nature, 283, 593 -596 (1980); Berger, N.A., Radiation Research, 101, 4-14(1985)).

Posteriormente, tais inibidores mostraram melhoraros efeitos da resposta à radiação através da eliminação doreparo de danos potencialmente letais (Ben-Hur, et al.,British Journal of Câncer, 49 (que uppl. VI), 34 - 42(1984); Schlicker, et al., Int. J. Radiat. Biol., 75, 91 -100 (1999)). Os inibidores de PARP foram relatados comosendo efetivos na rádio-sensibilização de células de tumoreshipoxicos (US 5.032.617; US 5.215.738 e US 5.041.653). Emcertas linhas de células de tumores, a inibição química daatividade de PARP-I (e PARP-2) é também associada com asensibilização marcante a doses muito baixas de radiação(Chalmers, Clin. Oncol., 16(1), 29-39 (2004)).

Alem disso, animais nocauteados pela PARP-I(PARP-/-) apresentaram uma instabilidade genômica emresposta aos agentes alquilantes e à irradiação γ (Wang etal., Genes Dev., 9, 509 - 520 (1995); Menissier de Murcia,et al., Proce Natl. Acad. Sei. USA, 94, 7303-7307 (1997)).Dados mais recentes indicam que a PARP-I e a PARP-2 possuemambas as funções superpostas e não redundantes na manutençãoda estabilidade genômica, e fazendo com que as mesmas sejamalvos interessantes (Menissier de Murcia, et al., EMBO. J.,22 (9), 2255 - 2263 (2003)) .

Foi também demonstrada a função para a PARP-I emcertas doenças vasculares, choque séptico, ferimentosisquêmicos e neurotoxidez (Cantoni, et al., Biochim.Biophys. Acta, 1014, 1-7 (1989); Szabo, et al. , J. Clin.Invest., 100, 723 - 735 (1997)). Os danos no radical de oxigênio do DNA que leva à ruptura dos filamentos em DNA,que são posteriormente reconhecidos pela PARP-I, é um fatormaior de contribuição para tais estados de doença, conformemostrado pelos estudos do inibidor de PARP-I (Cosi, et al. ,J. Neurosci. Res., 39, 38 - 46 (1994); Said, et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 93, 4688- 4692 (1996)). Maisrecentemente, a PARP demonstrou ter um papel na patogênesedo choque hemorrágico (Liaudet, et al., Proc. Natl. Acad.Sei. U.S.A., 97(3), 10.203 - 10.208 (2000)).

Também foi demonstrado que a infecção retroviral eficiente de células de mamíferos é bloqueada pela inibiçãoda atividade doa PARP-I. Tal inibição das infecções do vetorretroviral recombinante mostrou ocorrer em vários tipos decélulas diferentes (Gaken, et al., J. Virology, 70(6), 3992- 4000 (1996)). Os inibidores de PARP-1, portanto foram desenvolvidos para uso em terapias anti-virais e notratamento de câncer (WO 91/18.591).

Além disso, a inibição de PARP-I foi especuladacomo retardando o início das características deenvelhecimento nos fibroblastos humanos (Rattan and Clark,Biochem. Biophys. Res. Comm., 201(2), 665 - 672 (1994)).Isto poderá ser relacionado com a função que a PARP executano controle da função do telomero (d'Adda di Fagagna, etal., Nature Gen., 23(1), 76 - 80 (1999)).

Os inibidores de PARP também serão consideradoscomo sendo relevantes para o tratamento de doençainflamatória do intestino grosso (Szabo C., Role of Poly(ADP-Ribose) Polymerase Activation in the Pathogenesis ofShock and Inflammation, in PARP as a Therapeutic Target; EdJ. Zhang, 2002 by CRC Press; 169 - 204), colites ulcerativas(Ningarelli, B, et al. , Immunology, 113(4), 509 - 517(2004)) e doença de Crohn (Jijon, H. B., et al, Am. J.Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 279, G641-G651 (2000).

Alguns dos inventores atuais descreveramanteriormente (WO 02/36576) uma classe de compostos de1(2H)- ftalazinona que atuam como inibidores de PARP. Oscompostos têm a fórmula geral:

<formula>formula see original document page 6</formula>

onde A e B em conjunto representam um anelaromático fundido, opcionalmente substituído, e onde Rc érepresentado por -L-Rl. Um grande número de exemplos são dafórmula:

<formula>formula see original document page 7</formula>

onde R representa um ou mais substituintesopcionais.

Alguns dos inventores atuais descreveram umaclasse especifica dos compostos acima na WO 03/093261, quetem a fórmula geral conforme acima, e onde R está na posiçãometa, e os exemplos apresentados têm o grupo R escolhido de:

<table>table see original document page 7</column></row><table>

Os inventores atuais descobriram agora quecompostos com grupos substituintes diferentes daqueles acimaapresentam níveis surpreendentes de inibição da atividade daPARP, e/ou de potenciação de células de tumores àradioterapia e várias quimioterapias. Além disso, aestabilidade dos compostos da invenção atual em geral émelhorada em relação àqueles compostos exemplificados na WO03/093261. Alguns dos compostos da invenção atual tambémmostram uma boa solubilidade, tanto em meio aquoso como emsolução tampão de fosfato - a solubilidade melhorada poderáser útil na formulação dos compostos para a administraçãopor uma rota IV, ou para formulações orais (por exemplo,formas liquida e em tabletes pequenos) para uso pediátrico.A biodisponibilidade oral dos compostos da invenção atualpoderá ser aumentada.

Assim sendo, o primeiro aspecto da invenção atualapresenta um composto da fórmula (I):

<formula>formula see original document page 8</formula>

(incluindo isômeros, sais, solvatos, formasquimicamente protegidas, e prodrogas dos mesmos)onde:

A e B em conjunto representam o m anel aromáticofundido, opcionalmente substituído;

D é escolhido de:

<formula>formula see original document page 8</formula>

, onde Y1 é escolhido de CH e N, Y2 éescolhido de CH e N, Y3 é escolhido de CH, CF e N: e^^, onde Q é O ou Si;<formula>formula see original document page 9</formula>

onde

Rn1 é escolhido de H e alquila Ci-I0 opcionalmente substituído;

X é escolhido de uma ligação simples NRn2, CRc3 Rc4e C=O; Rn2 é escolhido de H e alquila C1-I0 opcionalmentesubstituída;

Rc3 e Rc4 são escolhidos independentemente de H, R,C(=0)0R, onde se é alquila Ci-I0 opcionalmente substituída,arila Cs_2o opcionalmente substituída ou heterociclila C3_20opcionalmente substituída;

Y é escolhido de NRn3 e CRcl Rc2;

Rcl é Rc2 são escolhidos independentemente de H, R,C(=0)0R, onde se é alquila C1-10 opcionalmente substituídae, arila Cs-20 opcionalmente substituída ou heterociclila C3-20 opcionalmente substituída; Rcl e Rc2 em conjunto com oátomo de carbono no qual eles são ligados poderá formar umanel carbocíclico ou heterocíclico C5-7 espiro-fundidoopcionalmente substituído; e

quando X é uma ligação simples, um Rn1 e Rc2poderão em conjunto com os átomos NeC com os quais ele sãoligados, formar um anel heterocíclico C5-7 opcionalmentesubstituído;

e quando X é CRc3 Rc4, Rc2 e Rc4 poderão em conjuntoformar uma ligação adicional, de tal forma que exista umaligação dupla entre os átomos substituídos por Rcl e Rc3.As possibilidades para D são:

<table>table see original document page 10</column></row><table><table>table see original document page 11</column></row><table>

Um segundo aspecto da invenção atual apresenta umacomposição farmacêutica composta de um composto do primeiroaspecto e um veiculo ou diluente farmaceuticamenteaceitável.

Um terceiro aspecto da invenção atual apresenta ouso de um composto do primeiro aspecto em um método detratamento do corpo humano ou de animal.

Um quarto aspecto da invenção atual apresenta ouso de um composto conforme definido no primeiro aspecto dainvenção na preparação de um medicamento para:

(a) a prevenção da formação de poli(ADP-ribose)através da inibição da atividade da PARP celular (PARP-Ie/ou PARP-2);

(b) o tratamento de: doença vascular; choqueséptico; ferimento isquêmico, tanto cerebral comocardiovascular; ferimento de reperfusão, tanto cerebral comocardiovascular; neurotoxidez, incluindo tratamentos agudos ecrônicos para AVC e doença de Parkinson; choque hemorrágico;doenças inflamatórias, tais como artrite, doençainflamatória do intestino grosso, colite ulcerativa e doençade Crohn; esclerose múltipla; efeitos secundários dadiabetes; assim como o tratamento agudo de citotoxidez apósa cirurgia cardiovascular ou doenças melhoradas através dainibição da atividade de PARP;

(c) o uso como auxiliar na terapia do câncer oupara a potenciação de células de tumor para o tratamento comradiação ionizante ou agentes quimoterapêuticos.

Especialmente, os compostos conforme definido noprimeiro aspecto da invenção podem ser utilizados emterapias de combinação anti-cancer (ou como auxiliares)juntamente com os agentes alquilantes, como o metil metanosulfonato (MMS), temozolomide e dacarbazine (DTIC),também com inibidores de 1-topoisomerase como Topotecan,Irinotecan, Rubitecan, Exatecan, Lurtotecan, Gimetecan,Diflomotecan (homocamptothecins); assim como não-silatecanssubstituídos em 7; as camptotecinas silil-7, BNP 1350; e osinibidores de topoisomerase-I não camptotecinas tais comoaos indolocarbazolas, também as inibidores de dualtopoisomerase I e II como benzofenazinas, XR 11576/MLN 576 ebenzopiridoindolas. Tais combinações poderiam seradministradas, por exemplo, como preparações intravenosas ouatravés de administração oral, dependendo do métodopreferido de administração para o agente específico.

Outros aspectos adicionais da invenção apresentamo tratamento de doença melhorada através da inibição daPARP, composto da administração a um indivíduo necessitandode tratamento, de uma quantidade terapeuticamente efetiva deum composto conforme definido no primeiro aspecto, depreferência, na forma de uma composição farmacêutica, e otratamento de câncer, composto da administração a umindivíduo necessitando de tratamento, de uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um composto conforme definido noprimeiro aspecto em combinação, de preferência, na forma deuma composição farmacêutica, e simultaneamente ou emseqüência com radioterapia (radiação ionizante) ou agentesquimoterapêuticos .

Em outros aspectos da invenção atual, os compostospoderão ser utilizados na preparação de um medicamento parao tratamento de câncer, que é deficiente em atividade dereparo de ruptura de filamento duplo (DSB) dependente de DNAde recombinação homóloga (HR), ou no tratamento de umpaciente com um câncer que é deficiente na atividade dereparo do DSB de DNA dependente de HR, composto daadministração ao referido paciente de uma quantidadeterapeuticamente efetiva do composto.

As rupturas dos filamentos duplos (DSBs) dereparos via reparo do DSB do DNA dependente de HR no DNAatravés de mecanismos homólogos para reformar uma hélicecontínua de DNA (K.K. Khanna and S. P. Jackson, Nat. Genet.27(3): 247 - 254 (2001)). Os componentes da via de reparosde DSB de DNA dependente de HR incluem, mas não sãolimitados a, ATM (NM-000051), RAD51 (NM-002875), RAD51L1(NM-002877), RAD51C (NM-002876), RAD51L3 (NM-002878), DMCl(NM-007068), XRCC2 (NM-005431), XRCC3 (NM-005432), RAD52(NM-002879), RAD54L (NM-003579), RAD54B (NM-012415), BRCAl(NM-0072 95) , BRCA2 (NM-000059), RAD50 (NM-005732), MREllA(NM-005590) e NBSl (NM-002485). Outras proteínas envolvidasna via de reparos de DSB de DNA dependente de HR incluemfatores regulatórios tais como o EMSY (Hughes-Davies, etal. , Cell, 115, pp 523 - 535). Os componentes de HR sãotambém descritos em Wood, et al., Science, 291, 1284 - 1289(2001).

Um câncer que é deficiente em reparo de DSB de DNAdependente de que R poderá ser composto ou consistir de umaou mais células de câncer que tem uma habilidade reduzida ouanulada para o reparo dos DSBs de DNA através daquela via,em relação a células normais, i.e., a atividade da via dereparos de DSB do DNA dependente de HR poderá ser reduzidaou abolida em uma ou mais células cancerosas.

A atividade de um ou mais componentes de reparosde DSB de DNA dependente de HR poderá ser abolida em uma oumais células cancerosas de um indivíduo tendo um câncer queé deficiente em reparo de DSB de DNA dependente de HR. Oscomponentes da via de reparos de DSB de DNA dependente de HRsão bem caracterizados na arte (ver, por exemplo, Wood, etal., Science, 291, 1284 - 1289 (2001)) e incluem oscomponentes listados acima.

Em algumas realizações preferidas, as célulascancerosas poderão ter um fenótipo deficiente em BRCAl e/ouBRCA2, i.e., a atividade de BRCAl e/ou BRCA2 é reduzida ouabolida nas células cancerosas. As células cancerosas comestes fenótipo poderão ser deficientes em BRCAl e/ou BRCA2,i.e. a expressão e/ou a atividade da BRCAl e/ou da BRCA2poderá ser reduzida ou abolida nas células cancerosas, porexemplo, por intermédio de mutação ou polimorfismo no ácidonucléico de codificação, ou por intermédio de amplificação,mutação ou polimorfismo em uma codificação de gene de umfator regulatório, por exemplo, o gene EMSY que codifica umfator regulatório BRCA2 (Hughes-Davies, et al. , Cell, 115,523 - 535) ou através de um mecanismo epigenético como umametilação de promotor de gene.

BRCAl e BRCA2 são supressores conhecidos de tumorcujos alelos do tipo selvagem são freqüentemente perdidos emtumores de veículos heterozigosos (Jasin M., Oncogene,21(58), 8981 - 93 (2002); Tutt, et al. , Trends Mol Med.,8(12), 571-6, (2002)). A associação das mutações de BRCAle/ou BRCA2 com o câncer de seio é bem caracterizada na arte(Radice, P.J., Exp Clin Câncer Res., 21(3Suppl), 9-12(2002)). A amplificação do gene EMSY que codifica um fatorde ligação de BRCA2, é também conhecido como sendo associadocom o câncer de seio e do ovário.

Os veículos de mutações em BRCAl e/ou BRCA2 tambémsão de risco elevado de câncer do ovário, e próstata epâncreas.

Em algumas realizações preferidas, o indivíduo éheterozigoso para uma ou mais variações, tais como mutaçõese polimorfismos, em BRCAl e/ou BRCA2 ou um regulador domesmo. A detecção de variação em BRCAl e BRCA2 é bemconhecida na arte e é descrita, por exemplo, na EP 699 754,EP 705 903, Neuhausen, S.L. and Ostrander, Ε. A., Genet.Test, 1, 75-83 (1992); Janatova M., et al., Neoplasma,50(4), 246 -50 (2003). A determinação da amplificação dofator de ligação de BRCA2 EMSY é descrita em Hughes-Davies,et al., Cell, 115, 523 - 535).Mutações e polimorfismos associados com câncerpoderão ser detectados no nível de ácido nucléico através dadetecção da presença de uma seqüência de ácido nucléicovariante ou no nível de proteína através da detecção da presença de um polipeptídio variante (i.e., um variantemutante).

Definições

O termo "anel aromático" é utilizado aqui nosentido convencional para referir-se a uma estrutura aromática cíclica, isto é, uma estrutura cíclica tendoorbitais de elétrons n.

O anel aromático fundido no núcleo principal,i.e., aquele formado por -A-B-, poderá conter mais anéisaromáticos fundidos (resultando, por exemplo, em grupos de naftila ou antracenila). O anel aromático poderá sercomposto somente de átomos de carbono, ou poderá sercomposto de átomos de carbono e um ou mais heteroatomos,incluindo, mas não limitados a, átomos de nitrogênio,oxigênio e enxofre. O anel aromático, de preferência, tem 5 ou 6 átomos no anel.

O anel aromático opcionalmente poderá sersubstituído. Se o próprio substituinte é composto de umgrupo arila, este grupo arila não é considerado como sendoparte do grupo arila no qual ele é ligado. Por exemplo, o grupo bifenila é considerado aqui como sendo um grupo fenila(um grupo arila composto de um só anel aromático)substituído com um grupo fenila. Da mesma forma, o grupobenzilfenila é considerado como sendo um grupo fenila (umgrupo arila composto de um só anel aromático) substituídocom um grupo benzila.

Em um grupo de realizações preferidas, o grupoaromático é composto de um só anel aromático, que tem 5 ou 6átomos no anel, cujos átomos do anel são escolhidos decarbono, nitrogênio, oxigênio, e enxofre, e cujo anel éopcionalmente substituído. Exemplos destes grupos incluem,mas não são limitados a, benzeno, pirazina, pirrola,tiazola, isoxazola, e oxazola. 3-pirona também pode serconsiderada como sendo um anel aromático, mas é menospreferida.

Se o anel aromático tem 6 átomos, então, depreferência, pelo menos 4, ou mesmo 5 ou todos, os átomos doanel são de carbono. Os outros átomos do anel são escolhidosde nitrogênio, oxigênio e enxofre, com o nitrogênio e ooxigênio sendo preferidos. Os grupos adequados incluem umanel com: nenhum heteroatomo (benzeno) ; um átomo denitrogênio no anel (piridina); dois átomos de nitrogênio noanel (pirazina, pirimidina e piridazina); um átomo deoxigênio no anel (pirona) ; e um átomo de um oxigênio e um denitrogênio no anel (oxazina).

Se o anel aromático tem 5 átomos no anel, então depreferência, pelo menos 3 dos átomos do anel são de carbono.Os restantes átomos do anel são escolhidos de nitrogênio,oxigênio e enxofre. Anéis adequados incluem um anel com: umátomo de nitrogênio no anel (pirrola) ; 2 átomos denitrogênio no anel (imidazola, pirazola); e um átomo deoxigênio no anel (furano); um átomo de enxofre no anel(tiofeno) ; um átomo de nitrogênio e um de enxofre no anel(isotiazola, tiazola) ; e um átomo de nitrogênio e um deoxigênio no anel (isoxazola ou oxazola) .

0 anel aromático poderá conter um ou mais grupossubstituintes em qualquer posição disponível no anel. Estessubstituintes são escolhidos de halogênio, nitro, hidroxila,éter, tiol, tioéter, amino, alquila C1-7, heterociclila C3-20e arila C5-20· 0 anel aromático poderá também conter um oumais grupos substituintes os quais em conjunto formam umanel. Especialmente estes poderão ser da fórmula -(CH2)m- ou-0- (CH2) p-0-, onde m é 2, 3, 4 ou 5 e ρ é 1, 2 ou 3.

Anéis espiro-fundidos: o termo "anéis espiro-fundidos" conforme utilizado aqui pertence a um anelcarbocíclico ou heterocíclico que é fundido no restante damolécula em um só átomo de carbono. 0 próprio anel poderáconter somente átomos de carbono no anel, e, portanto ser umanel carbocíclico, ou poderá conter um ou mais heteroatomose, portanto ser um anel heterocíclico. Exemplos de anéiscarbocíclicos e heterocíclicos C5-7 são apresentados aqui.

Anel heterocíclico C5_7 contendo nitrogênio: otermo "anel heterocíclico C5_7 contendo nitrogênio" conformeutilizado aqui, pertence a um anel heterocíclico C5_7,conforme definido abaixo com relação à heterociclila, tendopelo menos um átomo de nitrogênio no anel.

Alquila: o termo "alquila" conforme utilizadoaqui, pertence ao radical monovalente obtido pela remoção deum átomo de hidrogênio de um átomo de carbono de um compostode hidrocarbonetos tendo 1 a 20 átomos de carbono (a não serque seja especificado de outra forma), o qual poderá seralifático ou aliciclico, e o qual poderá ser saturado ouinsaturado (por exemplo, parcialmente insaturado, totalmenteinsaturado). Assim sendo, o termo "alquila" inclui assubclasses alquenila, alquinila, cicloalquila, ciclo-alquenila, cicloalquinila, etc, discutidos abaixo.

No contexto de grupos alquila, os prefixos (porexemplo, C^1-4, C^1-7, C^1-20, C^2-7, C^3-7, etc) significam o númerode átomos de carbono, ou faixa de número de átomos decarbono. Por exemplo, o termo "alquila C^1-4", conformeutilizado aqui, pertence a um grupo alquila tendo um aquatro átomos de carbono. Exemplos de grupos alquila incluemalquila C^1-4 ("alquila menor"), alquila C^1-7, e alquila C^1-20·Notar que o primeiro prefixo poderá variar de acordo comoutras limitações; por exemplo, para os grupos alquilainsaturados, o primeiro prefixo deve ser pelo menos 2; paraos grupos alquila cíclicos, o primeiro prefixo deve ser pelomenos 3; etc.

Exemplos de grupos alquila saturados

(insubstituidos) incluem, mas não são limitados a, metila(C1) , etila (C2) , propila (C3) , butila (C4) , pentila (C5) ,hexila (C6) , heptila (C7) , octila (C8) , nonila (C9) , decila(C10) , undecila (C11) , dodecila (C12) , tridecila (C13) ,tetradecila (C14) , pentadecila (C15) , eicodecila (C20) ·

Exemplos de grupos alquila lineares saturados(insubstituidos) , mas não limitados a, metila (C1) , etila(C2), n-propila (C3), n-butila (C4), n-pentila (amila) (C5),n-hexila (C6) , e n-heptila (C7) .Exemplos de grupos alquila ramificados saturados(insubstituidos) incluem, mas não são limitados a,isopropila (C3), isobutila (C4), sec-butila (C4), terc-butila(C4), isopentila (C5), e neo-pentila (C5).

Alquenila: O termo "alquenila", conforme utilizadoaqui, pertence a um grupo alquila tendo uma ou mais duplasligações carbono-carbono. Exemplos de grupos alquenilaincluem alquenila C2-4, alquenila C2-7, alquenila C2-20·

Exemplos de grupos alquenila insaturados(insubstituidos incluem, mas não são limitados a, etenila(vinil, -CH=CH2), 1-propenila (-CH=CH-CH3), 2-propenila(alila, -CH-CH=CH2), isopropenila(1-metilvinila, -C(CH3)=CH2), butenila (C4), pentenila (C5), e hexenila (C6).

Alquinila: 0 termo "alquinila" conforme utilizadoaqui, pertence a um grupo alquila tendo uma ou mais ligaçõestriplas carbono-carbono. Exemplos de grupos alquinilaincluem alquinila C2-4, alquinila C2-7, alquinila C2-20·

Exemplos de grupos alquinila insaturados(insubstituidos) incluem, mas não são limitados a, etinila(etinila, -C=CH) e 2-propinila (propargil, -CH2=CsCH).

Cicloalquila: O termo "cicloalquila", conformeutilizado aqui, pertence a um grupo alquila que é também umgrupo ciclila; isto é, um radical monovalente obtido pelaremoção de um átomo de hidrogênio de um átomo de anelaliciclico de um anel carbociclico ou de um compostocarbociclico, cujo anel carbociclico poderá ser saturado ouinsaturado (por exemplo, parcialmente insaturado, totalmenteinsaturado), cujo radical tem três a vinte átomos de carbono(a não ser que seja especificado de outra forma), incluindotrês a vinte átomos do anel. Assim sendo, o termo"cicloalquila" inclui as subclasses cicloalquenila ecicloalquinila. De preferência, cada anel tem três a seteátomos no anel. Exemplos de grupos cicloalquila incluemcicloalquila C3-2CW cicloalquila C3-15, cicloalquila C3_10,cicloalquila C3-7.

Exemplos de grupos cicloalquila incluem, mas nãosão limitados àqueles derivados de:

compostos de hidrocarbonetos monociclicossaturados:

ciclopropano (C3) , ciclobutano (C4), ciclopentano(C5) , ciclohexano (C6) , cicloeptano (C7) , metilciclopropano(C4) , dimetilciclopropano (C5) , metilciclobutano (C5) ,dimetil- ciclobutano (C6) , metilciclopentano (C6) , dimetil-ciclopentano (C7) , metilcicloexano (C7) , dimetilcicloexano(C8) , mentano (Ci0) ;

Compostos de hidrocarbonetos monociclicosinsaturados:

Ciclopropeno (C3) , ciclobuteno (C4) , ciclopenteno(C5) , cicloexeno (C6) ,

metilciclopropeno (C4) , dimetilciclopropeno (C5) ,metilciclobuteno (C5) ,dimetilciclobuteno (C6) , metilciclopenteno (C6) ,dimetilciclopenteno (C7) , metilcicloexeno (C7) ,dimetilcicloexeno (Cs) ;

Compostos de hidrocarbonetos policiclicossaturados:tujano (Cio), carano (Ci0), pinano (Cio), bornano(Cio) , norcarano (C7) , norpinano (C7) , norbornano (C7) ,adamantano (Cio) , decalina (decaidronaftaleno) (Cio) ;

Compostos de hidrocarbonetos policiclicosinsaturados:

canfeno (Cio) , limoneno (Cio) , pineno (Cio) :Compostos de hidrocarbonetos policiclicos tendo umanel aromático:

indeno (C9), indano (por ex. 2,3-diidro-lH-indeno) (Cg), tetralina (1, 2 , 3, 4-tetraidronaf taleno) (Cio),acenafteno (C12) , fluoreno (C13) , fenaleno (C13) ,acefenantreno (Ci5) , aceantreno (Ci6) , colantreno (C2o) ·

Heterociclila: o termo "heterociclila", conformeutilizado aqui, pertence a um radical monovalente obtidopela remoção de um átomo de hidrogênio de um átomo do anelde um composto heterociclico, cujo radical tem três a vinteátomos no anel (a não ser que seja especificado de outraforma), dos quais um a dez são heteroatomos do anel. Depreferência, cada anel tem três a sete átomos no anel, dosquais um a quatro são heteroatomos do anel.

Neste contexto, os prefixos (por exemplo, C3-20,C3-7, C5-6, etc.) significam o número de átomos no anel, oufaixa de número de átomos no anel, sejam átomos de carbonoou heteroatomos. Por exemplo, o termo "heterociclila C5-6",conforme utilizado aqui, pertence a um grupo heterociclilatendo cinco a seis átomos no anel. Exemplos de gruposheterociclila incluem heterociclila C3-20, heterociclilaC5-20, heterociclila C3-15, heterociclila C5-15, heterociclilaC3-121 heterociclila 05-12, heterociclila C3-10/ heterociclilaC5-Xo, heterociclila C3-7, heterociclila C5-7, e heterociclilaC5-6 ·

Exemplos de grupos heterociclila monociclicosincluem, mas não são limitados a, àqueles derivados de:

Ni: aziridina (C3), azetidina (C4), pirrolidina(tetraidro-pirrola) (C5) , pirrola (por exemplo, 3-pirrolina,2,5-diidropirrola) (C5), 2H-pirrola . ou 3H-pirrola(isopirrola, isoazola) (C5) , piperidina (C6) , diidropiridina(C6) , azepina (C7) ;

Oi: oxirano (C3) , oxetano (C4), oxolano (tetra-hidrofuran) (C5) , oxola (diidrofurano) (C5) , oxano(tetraidropirano) (C6) , diidropirano (C6) , pirano (Ce) ,oxepina (C7) ;

Si: tiirano (C3), tietano (C4), tiolano(tetraidrotiofeno) (C5) , tiano (tetraidrotiopirano) (C6) ,tiepano (C7) ;

O2: dioxolano (C5), dioxano (C6), e dioxepano (C7);

O3: trioxano (C6);

N2: imidazolidina (C5), pirazolidina (diazolidina)(C5), imidazolina (C5), pirazolina (diidropirazola) (C5),piperazina (Cs) ;

N1O1: tetraidrooxazola (C5), diidrooxazola (C5),tetraidro-isoxazola (C5) , diidroisoxazola (C5) , morfolina(Cs) , tetra-idrooxazina (C6) , diidrooxazina (C6) , oxazina(C6) ;

NiSii tiazolina (C5), tiazolidina (C6),tiomorfolina (C6) ;N2Oi: oxadiazina (C6);

O1S1: oxatiola (C5) e oxatiana (tioxano) (C6);

N1O1S1: oxatiazina (C6).

Exemplos de grupos heterociclicos monocíclicos(não aromáticos) substituídos incluem aqueles derivados desacarideos, na forma cíclica, por exemplo, furanoses (C5),tais como arabinofuranose, lixofuranose, ribofuranose,xilofuranose, e piranoses (C6) , tais como alopiranose,altropiranose, glucopiranose, manopiranose, gulopiranose,idopiranose, galactopiranose, e talopiranose.

Cicloalquila ou heterociclila espiro-C3-7i o termo"cicloalquila ou heterociclila espiro C3-7" conformeutilizado aqui, refere-se a um anel cicloalquila C3-7 ouheterociclila C3-7 unido a outro anel por um só átomo comuma ambos os anéis.

Arila C5-20: 0 termo "arila C5-20" conforme utilizadoaqui, pertence ao radical monovalente obtido pela remoção deum átomo de hidrogênio de um átomo do anel aromático de umcomposto aromático C5_2o, o referido composto tendo um anel,ou dois ou mais anéis (por exemplo, fundidos), e tendo cincoa vinte átomos no anel, onde pelo menos um dos referidosanéis é um anel aromático. De preferência, cada anel temcinco a sete átomos no anel.

Os átomos do anel poderão ser todos átomos decarbono, como nos "grupos carboarila" em cujo caso o grupo,convenientemente, poderá ser referido como um grupo"carboarila C5-20" ·

Exemplos de grupos arila C5-20 que não têmheteroatomos no anel (i.e. grupos carboarila C5-20) incluem,mas não são limitados, àqueles derivados de benzeno (i.e.fenila) (Ce), naftaleno (Cio), antraceno (Ci4), fenantreno(Ci4) , e pireno (Ci6) .

Alternativamente, os átomos do anel poderãoincluir um ou mais heteroatomos, incluindo mas não limitadosa oxigênio, nitrogênio, e enxofre, conforme nos "gruposheteroarila". Neste caso, o grupo, convenientemente, poderáser referido como um grupo "heteroarila C5-20", onde "C5-20"significa átomos do anel, sejam eles átomos de carbono ouheteroatomos. De preferência, cada anel tem cinco a seteátomos do anel, dos quais zero a quatro são heteroatomos doanel.

Exemplos de grupos heteroarila C5-20 incluem, masnão são limitados a, grupos heteroarila C5 derivados defurano (oxola), tiofeno (tiola), pirrola (azola), imidazola(1,3-diazola), pirazola (1,2-diazola), triazola, oxazola,isoxazola, tiazola, isotiazola, oxadiazola, tetrazola eoxatriazola; e grupos heteroarila C6 derivados de isoxazina,piridina (azina), piridazina (1,2-diazona), pirimidina (1,3-diazina; por ex, citosina, timina, uracila), pirazina (1,4-diazina) e triazina.

O grupo heteroarila poderá ser ligado através deum átomo ou heteroatomo de anel de carbono.

Exemplos de grupos heteroarila C5-20 que são

compostos de anéis fundidos incluem, mas não são limitadosa, grupos heteroarila Cg e derivados de benzofurano,isobenzofurano, benzotiofeno, indola, isoindola; gruposheteroarila C10 derivados de quinolina, isoquinolina,benzodiazina, piridopiridina; grupos heteroarila Ci4derivados de acridina e xanteno.

Os grupos alquila, heterociclila e arila acima,sozinhos ou como parte de outro substituinte, poderão elespróprios opcionalmente ser substituídos com um ou maisgrupos escolhidos deles mesmos e os substituintes adicionaislistados abaixo.

Halogênio: -F, -Cl, -Br, e -I.

Hidroxila: -0H.

Éter: -OR, onde R é um substituinte de éter, comopor exemplo, um grupo alquila Ci_7 (também referido comogrupo alcoxila C1-7) , um grupo heterociclila C3-20 (tambémreferido como grupo heterocicliloxila C3-20) , ou grupo arilaC5-20 (também referido como grupo ariloxila C5-20) , depreferência, um grupo alquila Ci_7.

Nitro: -NO2.

Ciano (nitrila, carbonitrila): -CN.

Acila (queto) : -C(=0)R, onde R é um substituinteacila, como por exemplo, H, um grupo alquila C1-7 (tambémreferido como alquilacila C1-7 ou alcanoíla C1-7) , um grupoheterociclila C3-20 (também referido como heterociclilacilaC3-20) r ou um grupo arila C5_2o (também referido como aril-acila C5-20) t de preferência, um grupo alquila C1-7. Exemplosde grupos acila incluem, mas não são limitados a,-C(=0)CH3 (acetila), -c(=0)CH2CH3 (propionila),-C(=0)C(CH3) 3 (butirila), e -C(=0)Ph (benzoila, fenona).

Carboxila (ácido carboxilico) : -C00H.Éster (carboxilato, éster do ácido carboxilico,oxicarbonila): -C(=0)0R, onde R é um substituínte de éster,por exemplo, um grupo alquila C1-7, um grupo heterociclilaC3-20, ou um grupo arila C5-20, de preferência, um grupoalquila C1-7. Exemplos de grupos de éster incluem, mas nãosão limitados a, -C (=0) OCH3, -C (=0) OCH2CH3, -C (=0) OC (CH3) 3, e-C (=0)OPh.

Amido (carbamoila, carbamila, aminocarbonila,carboxamida) : C (=O)NR1R2, onde R1 e R2 são independentementesubstituintes de amino, conforme definido para os gruposamino. Exemplos de grupos amido incluem, mas não sãolimitados a, -C (=0) NH2, -C(=0)NHCH3, -C (=0) N (CH3) 2, -C (=0)NHCH2CH3, e -C (=0) N (CH2CH3)2, assim como os grupos amido nosquais R1 e R2, juntamente com o átomo de nitrogênio no qualeles são ligados, formam uma estrutura heterociclicaconforme, por exemplo, em piperidinocarbonila,

morfolinocarbonila, tiomorfolinocarbonila, e

piperazinilcarbonila.

Amino: -NR1R2, onde R1 e R2 são independentementesubstituintes de amino, como por exemplo, hidrogênio, umgrupo alquila C1-7 (também referido como alquilamino C1-7 oudi-alquilamino C1-7) , um grupo heterociclila C3-20, ou umgrupo arila C5-20, de preferência, H ou um grupo alquila C1-7,ou no caso de um grupo amino "cíclico", R1 e R2,considerados em conjunto com o átomo de nitrogênio no qualeles são ligados, formam um anel heterocíclico tendo quatroa oito átomos de anel. Exemplos de grupos amino incluem, masnão são limitados a, -NH2, -NHCH3, -NHCH(CH3)2, -N(CH3)2,-N(CH2CH3) 2, e -NHPh. Exemplos de grupos amino cíclicosincluem, mas não são limitados a, aziridinila, azetidinila,pirrolidinila, piperidino, piperazinila, peridrodiazepinila,morfolino, e tiomorfolino. Especialmente, os grupos aminocíclicos poderão ser substituídos no seu anel por qualquerdos substituintes definidos aqui, como por exemplo,carboxila, carboxilato e amido.

Acilamido (acilamino) : -N(R1)CONR2, onde R1 é umsubstituínte de amida, como por exemplo, hidrogênio, umgrupo alquila C1-7, um grupo heterocíclico C3-20, ou um grupoarila C5-20, de preferência, H ou um grupo alquila C1-7, maisde preferência, H, e R2 é um substituínte acila, como porexemplo, um grupo, heterociclila C3-20, ou um grupo arilaC5-20, de preferência, um grupo alquila C1-7. Exemplos degrupos acilamida incluem, mas não são limitados a,

NHC (=0) CH3, -NHC (=0) CH2CH3, e -NHC (=0) Ph. R1 e R2 poderão emconjunto formar uma estrutura cíclica, como por exemplo,succinimidila, maleimidila, e ftalimidila:

<formula>formula see original document page 28</formula>

Ureido: -N(R1)CONR2R3 onde R2 e R3 sãoindependentemente substituintes amino, conforme definidopara os grupos amino, e Rl é um substituínte ureido, comopor exemplo, hidrogênio, um grupo alquila C1-7, um grupoheterociclila C3_20, ou um grupo arila C5-20, de preferência,hidrogênio ou um grupo alquila Ci_7. Exemplos de gruposureido incluem, mas não são limitados a, -NHCONH2,-NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHC0NMe2, -NHC0NEt2, -NMeCONH2,NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeC0NMe2, -NMeCONEt2 e -NHCONHPh.

Aciloxila (éster reverso): -0C(=0)R, onde R é umsubstituinte aciloxila, como por exemplo, um grupo alquilaC1-7, um grupo heterociclila C3-20, ou um grupo arila C5-20, depreferência, um grupo alquila C1-7. Exemplos de gruposaciloxila incluem, mas não são limitados a, -0C(=0)CH3(acetoxila) , -OC (=0) CH2CH3, -OC (=0) C (CH3) 3, -OC (=0) Ph,OC (=0) C6H4F, e -OC (=0) CH2Ph.

Tiol: -SH.

Tioeter (sulfeto) : -SR, onde R é um substituintetioéter, como por exemplo, um grupo alquila C1-7 (tambémreferido como um grupo alquiltio C1-7) , um grupoheterociclila C3-20, ou um grupo arila Cs_2o, de preferência,um grupo alquila C1-7. Exemplos de grupos alquiltio C1-7incluem, mas não são limitados a, -SCH3 e -SCH2CH3.

Sulfóxido (sulfinila): -S(=0)R, onde R é umsubstituinte sulfóxido, por exemplo, um grupo alquila C1-7,um grupo heterociclila C3-20, ou um grupo arila C5-20, depreferência, um grupo alquila C1-7. Exemplos de grupossulfóxido incluem, mas não são limitados a, -S(=0)CH3 e-S (=0) CH2CH3.

Sulfonila (sulfona): -S(=0)2R, onde R é umsubstituinte sulfona, por exemplo, um grupo alquila C1-7, umgrupo heterociclila C3-20, ou um grupo arila C3-20, depreferência, um grupo alquila C1-7.

Exemplos de grupos sulfona incluem, mas não sãolimitados a, -S(-0)2CH3 (metanosulfonila, mesila),S (=0)2CF3, -S (=0) 2CH2CH3, e 4-metilfenilsulfonila (tosila) .

Tioamido (tiocarbamila): -C(=SJNR1R2, onde R1 e R2são independentemente substituintes amino, conforme definidopara os grupos amino. Exemplos de grupos amido incluem, masnão são limitados a, -C(=S)NH2, -C (=SJNHCH3, -C ( = S) N (CH3) 2, e-C ( = S) NHCH2CH3.

Sulfonamino: -NR1S (=0) 2R, onde R1 é umsubstituinte amino, conforme definido para os grupos amino,e R é um substituinte sulfoamino, como por exemplo, um grupoalquila C1_7, um grupo heterociclila C3_20, ou um grupo arilaC5-2o, de preferência, um grupo alquila C1-7. Exemplos degrupos sulfoamino incluem, mas não são limitados a,-NHS (=0) 2CH3, -NHS (=0) 2Ph e -N (CH3) S (=0) 2C6H5 .

Conforme mencionado acima, os grupos que formam osgrupos substituintes listados acima, como por exemplo,alquila C1-7, heterociclila C3-2o e arila Cs-2o, poderão eles próprios serem substituidos. Assim sendo, as definiçõesacima cobrem os grupos substituintes que são substituidos.

Outras preferências

As seguintes preferências podem ser aplicadas emcada aspecto da invenção atual, onde sejam aplicáveis.

Na invenção atual, os anéis aromáticos fundidosrepresentados por -A-B- , de preferência, consistem somentede átomos de carbono do anel, e portanto poderão serbenzeno, naftaleno, e mais de preferência, benzeno. Conformedescrito acima, estes anéis poderão ser substituídos, mas emalgumas realizações, de preferência, são insubstituídos.

Se o anel aromático fundido representado por -A-B-suporta um grupo substituínte, ele, de preferência, é ligadono átomo o qual ele próprio é ligado no anel central β noátomo de carbono no anel central. Assim sendo, se o anelaromático fundido é um anel de benzeno, o local preferido desubstituição é mostrado na fórmula abaixo por *:

<formula>formula see original document page 31</formula>

que usualmente é chamado de posição 5 do radicalftalazinona.

O substituínte, de preferência, é um grupoalcoxila, amino, halogeno ou hidroxila, e mais depreferência, um grupo alcoxila C1-7 (por exemplo, -OMe) .

Se o substituínte é um halogeno, ele poderá tambémestar nas posições 6 -, 7 -, ou 8 - do radical ftalazinona,e mais de preferência, estar na posição 8. 0 halogeno, depreferência, é cloro ou flúor e mais de preferência, éflúor.

De preferência, D é escolhido de fenileno, flúor-fenileno, piridileno, o-piridileno, furanileno etiofenileno.

Mais de preferência, D é escolhido de:<formula>formula see original document page 32</formula>

Mais de preferência, D é escolhido de:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Mais de preferência D é:

<formula>formula see original document page 32</formula>

De preferência, X é escolhido de uma ligaçãosimples, de NR^N2 e CR^C3 R^C4 e Y é CR^C1 R^C2.

Em algumas realizações, X é NR^N2. Nestasrealizações, R^C1 e R^C2, de preferência, são H e mais depreferência, R^N2 é H. Em outras realizações, X é CR^C3 R^C4.Nestas realizações, R^C1 e R^C2, de preferência, são H e aindamais de preferência, R^C3 e R^C4 são H.

Em algumas realizações, X, de preferência, é umaligação simples, de tal forma que R^D é um anel com cincomembros. Nestes compostos poderá ser preferível que pelomenos um R^N1, R^C1 e R^C2 não sejam hidrogênio. Em outros destescompostos preferidos, dois ou três dos R^N1, R^Cl e R^C2 não sãohidrogênio.Os grupos preferidos para Rcl ou Rc2 incluem, masnão são limitados a, alquila Ci_4, e de preferência sãoinsubstituidos, como por exemplo, metila, etila, propila,com metila sendo preferida em alguns compostos.

Quando Rn1 não é hidrogênio, Rcl, de preferência,poderá ser metila, com Rc2, de preferência, sendo escolhidode H e metila, e mais de preferência, de metila.

Quando Rn1 é hidrogênio, poderá ser preferível queRc2 também seja hidrogênio, e Rcl seja alquila C1-4 (porexemplo, metila), de preferência, substituído no seu finalcom um grupo carboxila ou amido. Os substituintes amino dogrupo amida, em conjunto com o átomo N no qual eles sãoligados, de preferência, são cíclicos. A parte cíclica dogrupo amido, de preferência, é um grupo heterocí clico C5-7contendo nitrogênio, como por exemplo, pirrolidinila,piperazinila, homopiperazinila, piperidinila, morfolino,todos os quais poderão ser adicionalmente substituídos,conforme descrito acima. Especialmente, os grupossubstituintes poderão incluir, mas não são limitados a,hidroxila, alquila C1-4 substituída e insubstituida (porexemplo, metila, hidroximetila, metoxi-etila, dimetilamino-etila, e heterociclila C5-7 (por exemplo, N-piperidinila,morfolino).

Os grupos preferidos para Rn1 incluem, mas não sãolimitados a, alquila C1-4 (por exemplo, metila) , depreferência, substituídos no seu término com um grupocarboxila ou amido, e adicionalmente, um grupo éster. Ossubstituínte amino do grupo amido, juntamente com o átomo Nno qual eles são ligados, de preferência, são cíclicos. Aparte cíclica do grupo amido, de preferência, é um grupoheterocíclico C5-7 contendo nitrogênio, como por exemplo,pirrolidinila, piperazinila, homopiperazinila, piperidinila,morfolino, todos os quais poderão ser adicionalmentesubstituídos, conforme descrito acima. Especialmente, osgrupos substituintes poderão incluir, mas não são limitadosa, hidroxila, alquila C1-4 substituída e insubstituida (porexemplo, metila, hidroximetila, hidroxietila, metoxi-etila,dimetilamino-etila) e heterociclila C5-7 (por exemplo, N-piperidinila, morfolino).

Quando apropriado, as preferências acima poderãoser consideradas em combinação uma com a outra.

Em algumas realizações, Y é NRw3, e estasrealizações X, de preferência, são C=O. Nestas realizações,Rn1 e Rn2, de preferência, são escolhidos de H, alquila C1-4,e são ambos mais de preferência, H.

Outras Formas Incluídas

Incluídas no acima são as formas bem conhecidasiônicas, salinas, de solvato, e protegidas destessubstituintes. Por exemplo, uma referência ao ácidocarboxilico (-C00H) também inclui a forma aniônica(carboxilato) (-COO-), um sal ou solvato do mesmo, assimcomo as formas convencionais protegidas. Da mesma forma, umareferência a um grupo amino inclui a forma protonizada(-N+HR1R2), um sal ou solvato a o grupo amino, como porexemplo, um sal de hipoclorito, assim como as formasconvencionais protegidas de um grupo amino. Da mesma forma,uma referência a um grupo hidroxila também inclui a formaaniônica (-0-), um sal ou solvato do mesmo, assim como asformas convencionais protegidas de um grupo hidroxila.

Isômeros, Sais, Solvatos, Formas Protegidas eProdrogas

Certos compostos poderão existir em uma ou maisformas geométrica, ótica, enanciomérica, diastereoisomérica,epimérica, estereoisomérica, tautomérica, conformacional, ouanomérica, incluindo, mas não limitadas a, formas eis etrans; formas E e Z; formas c-, t-, e r-; formas endo- e)exo-; meso-formas R-, S-; formas D- e L-; formas d- e 1-;formas(+) e (-); formas queto, enol-, e enolato-; formassin- e anti-; formas sinclinais e anticlinais; formas a- eβ-; formas axial e equatorial; formas de barco, cadeira,torcido, envelope, e meia cadeira; e combinações dos mesmos,referidos coletivamente daqui por diante como "isômeros"(ou "formas isoméricas").

Se o composto está na forma cristalina, ele poderáexistir em uma quantidade de formas polimórficas diferentes.

Notar que, exceto conforme discutido abaixo paraas formas tautoméricas, são excluídas especificamente dotermo "isômeros", conforme usado aqui, os isômerosestruturais (ou constitucionais) (i.e. isômeros que sãodiferentes nas ligações entre os átomos ao invés demeramente pela posição dos átomos no espaço). Por exemplo,uma referência a um grupo metoxila, -OCH3, não deve serconsiderado como uma referência ao seu isômero estrutural,um grupo hidroximetila, -CH2OH. Da mesma forma, umareferência a orto-cloro- fenila não deve ser consideradocomo uma referência ao seu isômero estrutural, meta-clorofenila. No entanto, uma referência a uma classe deestrutura poderá incluir perfeitamente as formasestruturalmente isoméricas que se enquadram dentro daquelaclasse (por exemplo, alquila C1-7 inclui n-propila e iso-propila; butila inclui n-, iso-, sec-, e terc-butila;metoxifenila inclui orto, meta, e para-metoxi -fenila).

A exclusão acima não pertence a formastautoméricas, por exemplo, às formas queto, enol, e enolatocomo, por exemplo, os seguintes pares tautoméricos:queto/enol, imina/enamina, álcool amida/imino,

amidina/amidina, nitroso/oxima, tioquetona/enetiol, N-nitroso/hiroxiazo, e nitro/aci-nitro.

Especialmente relevante para a invenção atual é opar de tautoméricos ilustrado abaixo:

<formula>formula see original document page 36</formula>

Notar que especificamente incluído no termo"isômero" estão os compostos com uma ou mais substituiçõesisotópicas. Por exemplo, H poderá estar em qualquer formaisotópica, incluindo 1H, 2H(D), e 3H(T); C poderá serqualquer forma isotópica, incluindo 12C, 13C, e 14C; 0poderá ser qualquer forma isotópica, incluindo 16O e 18O; esemelhantes.A não ser que seja especificado de outra forma,uma referência a um composto especifico inclui todas essasformas isoméricas, incluindo (totalmente ou parcialmente) aracêmica e outras misturas dos mesmos. Métodos para apreparação (por exemplo, síntese assimétrica) e separação(por exemplo, cristalização fracionada e meioscromatográficos) de tais formas isoméricas são conhecidos naarte ou são rapidamente obtidos adaptando-se os métodosensinados aqui, ou os métodos conhecidos, de uma formaconhecida.

A não ser que seja especificado de outra forma,uma referência a um composto específico também inclui aforma iônica, de sal, solvato, e protegida do mesmo, comopor exemplo, conforme discutido abaixo, assim como as suasformas polimórficas diferentes.

Poderá ser conveniente ou desejável preparar-se,purificar-se, e/ou manipular-se um sal correspondente docomposto ativo, por exemplo, um sal farmaceuticamenteaceitável. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveissão discutidos em Berge, et al. , "PharmaceuticallyAcceptable Salts", J. Pharm Sci., 66, 1-19 (1977).

Por exemplo, se o composto é aniônico, ou tem umgrupo funcional que poderia ser aniônico (por exemplo, -COOHpoderá ser -C00") , então um sal poderá ser formado com umcátion adequado. Exemplos de cátions inorgânicos adequadosincluem, mas não são limitados a, íons alcalino metálicos,tais como Na+ e K+, cátions alcalino terrosos, tais como Ca2+e Mg2+, e outros cátions, tais como Al3+. Exemplos decátions orgânicos adequados incluem, mas não são limitadosa, ion de amônio (i.e., NH4+) e ions de amônio substituído(por exemplo, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+) . Exemplos de algunsions de amônio substituído adequados são aqueles derivadosde: etilamina, dietilamina, dicicloexilamina, trietilamina,butilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina,piperazina, benzilamina, fenil-benzilamina, colina,meglumina, e trometamina, assim como aminoácidos, tais comolisina e arginina. Um exemplo de um ion de amônioquaternário comum é o N (CH3) 4+.

Se o composto é catiônico, ou tem um grupofuncional gue poderia ser catiônico (por exemplo, -NH2poderia ser -NH3+) , então poderá ser formado um sal com umanion adequado. Exemplos de anions inorgânicos adequadosincluem, mas não são limitados a, àqueles derivados dosseguintes ácidos inorgânicos: clorídrico, bromico,hidroiodico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso,fosfórico, e fosforoso. Exemplos de anions orgânicosadequados incluem, mas não são limitados a, àquelesderivados dos seguintes ácidos orgânicos: acético,propiônico, succínico, glicólico, esteárico, palmítico,lático, málico, pamoico, tartárico, cítrico, glucônico,ascórbico, maleico, hidroxi-maleico, fenil acético,glutâmico, aspártico, benzóico, cinâmico, pirúvico,salicílico, sulfanilico, 2-acetioxi-benzóico, fumárico,toluenosulfônico, metanosulfônico, etanosulfônico, etanodisulfônico, oxálico, isetiônico, valérico e glucônico.Exemplos de anions poliméricos adequados incluem, mas nãosão limitados a, àqueles derivados dos seguintes ácidospoliméricos: ácido tânico, carboximetil celulose.

Poderá ser conveniente ou desejável preparar-se,purificar-se, e/ou manipular-se um solvato correspondente docomposto ativo. 0 termo "solvato" é utilizado aqui nosentido convencional para referir-se a um complexo de soluto(por exemplo, um composto ativo, sal do composto ativo) e umsolvente. Se o solvente é água, o solvato poderá serreferido, de forma conveniente, como um hidrato, porexemplo, um monoidrato, um di-hidrato, um tri-hidrato, etc.

Poderá ser conveniente ou desejável preparar-se,purificar-se, e/ou manipular-se o composto ativo em umaforma quimicamente protegida. O termo "forma quimicamenteprotegida" conforme utilizado aqui, pertence a um compostono qual um ou mais grupos funcionais reativos são protegidosde reações químicas indesejáveis, isto é, estão na forma deum grupo protegido ou de proteção (também conhecidos como umgrupo mascarado ou de mascaramento, ou um grupo bloqueado oude bloqueamento) . Protegendo-se um grupo funcional reativo,as reações envolvendo outros grupos funcionais reativos nãoprotegidos podem ser executadas, sem afetar o grupoprotegido; o grupo de proteção poderá ser removido,usualmente em uma etapa subseqüente, sem afetarsubstancialmente o restante da molécula. Ver, por 'exemplo,"Protective Groups in Organic Synthesis" (T. Green and P.Wuts; 3rd Edition; John Wiley and Sons, 1999) .

Por exemplo, um grupo hidroxila poderá serprotegido como um éter (-0R) ou um éster (-0C(=0)R), porexemplo como: t-butil éter; uma benzila, benzidril(difenilmetila), ou triil (tri fenilmetil) éter; umtrimetilsilil ou t-butildimetilsilil éter; ou um acetiléster (OC (=0) CH3, -OAc).

Por exemplo, um grupo aldeído ou cetona poderá serprotegido como um acetal ou cetal, respectivamente, no qualo grupo carbonila (>C=0) é convertido em um diéter (>C(0R)),pela reação com, por exemplo, um álcool primário. 0 grupoaldeido ou cetona é rapidamente regenerado por hidróliseutilizando-se um grande excesso de água na presença de ácido.

Por exemplo, um grupo amina poderá ser protegido,por exemplo, como uma amida ou uma uretana, por exemplo,como: uma metil amida (-NHCO-CH3) ; uma benziloxi amida (-NHCO-OCH2C6H5, -NH-Cbz); como uma t-butoxi amida (-NHC0-OC(CH3)3, -NH-Boc); uma 2-bifenil-2-propoxi amida (-NHCO-OC(CH3)2CsH4CeH5, -NH-Bpoc) , como uma 9-fluorenilmetoxi amida(-NH-Fmoc), como uma β-nitroveratriloxi amida (-NH-Nvoc),como uma 2-trimetilsilil- etiloxi amida (-NH-Teoc), como uma2,2,2-tricloroetiloxi amida (-NH-Troc), como uma aliloxiamida (-NH-Alloc) , como uma 2 (-fenilsulfonil)etiloxi amida(-NH-Psec); ou em casos adequados, como uma N-oxido (>N0·).

Por exemplo, um grupo de ácido carboxilico poderáser protegido como um éster, por exemplo, como: um alquiléster C1-7 (por exemplo, um metil éster; um t-butil éster) ;um haloalquil éster C1-7 (por exemplo, um trialoalquil ésterC1-7) ; um triCi-7 alquil silil -C1-7 alquil éster; ou um C5_2oaril-Ci-7 alquil éster (por exemplo, um benzil éster; umnitro benzil éster) ; ou uma amida, por exemplo, como umametil amida.

Por exemplo, um grupo tiol poderá ser protegidocomo um tioéter (-SR), por exemplo, como: um benzil tioéter;um acetamidometil éter (-S-CH2NHC(=O)CH3).

Poderá ser conveniente ou desejável preparar-se,purificar-se, e/ou manipular-se o composto ativo na forma deuma prodroga. O termo "prodroga", conforme usado aqui,pertence a um composto que, quando metabolizado (porexemplo, in vivo), produz o composto ativo desejado.Tipicamente, a prodroga é inativa, ou menos ativa do que ocomposto ativo, mas poderá produzir propriedades vantajosasde manipulação, administração, ou metabólicas.

Por exemplo, algumas prodrogas são ésteres docomposto ativo (por exemplo, um éster labil metabolicamente,fisiologicamente aceitável) . Durante o metabolismo, o grupoéster (-C(=O)OR) é clivado para produzir a droga ativa. Taisésteres poderão ser formados por esterificação, por exemplo,de qualquer dos grupos de ácido carboxilico (-C)=O)OH) nocomposto principal, com, quando apropriado, uma proteçãoprevia de qualquer dos outros grupos reativos presentes nocomposto principal, seguido pela desproteção, se requerido.Exemplos de tais ésteres metabolicamente lábeis incluem, masnão são limitados a, àqueles onde R é alquila C1-20 (porexemplo, -Me, -Et) ; aminoalquila C1-7 (por exemplo, amino-etila; 2-(N,N-dietilamino)etila; 2-(4-morfolino)etila); eaciloxi-C1-7 alquila (por exemplo, aciloximetila ;aciloxietila; como por exemplo, pivaloiloximetila;acetoximetila; 1-acetoxietila; 1-(1-metoxi-l-metil) etil -carboxiloxietila; -(benzoiloxi)etila; isopropoxicarboniloximetila; 1-isopropoxi-carboniloxietila; cicloexil-carboniloximetila; 1-cicloexil-carboniloxietiIa;cicloexiloxi-carboniloximetila; 1-cicloexiloxi-carboniloxietila; (4-tetraidropiraniloxi) carboniloximetila;1-(4-tetraidropiraniloxi) carboniloxietila; (4-

tetraidropiranil)carboniloximetila; e 1-(4-tetraidropiranil)carboniloxietila).

Outras formas de prodrogas adequadas incluem saisde fosfonato e glicolato. Especialmente, os grupos hidroxila(-0H), podem ser preparados como prodrogas de fosfonato pelareação com clorodibenzilfosfito, seguido pela hidrogenação,para formar um grupo fosfato -O-P(=0)(OH)2- Tal grupo podeser clivado por enzimas de fosfatase durante o metabolismopara produzir o fármaco ativo com o grupo hidroxila.

Algumas prodrogas são também ativadasenzimaticamente para produzirem o composto ativo, ou umcomposto que, após uma reação química adicional, produz ocomposto ativo. Por exemplo, a prodroga poderá ser umderivado de açúcar derivado ou outro conjugado deglicosídeo, ou poderá ser um derivado de éster deaminoácido.

Acrônimos

Por conveniência, vários radicais químicos sãorepresentados utilizando-se abreviaturas bem conhecidas,incluindo, mas não limitados a, metila (Me), etila (Et), n-propila (nPr), isopropila (iPr), n-butila (nBu), terc-butila(tBu), n-hexila (nHex), cicloexila (cHex), fenila (Ph),bifenila (biPh), benzila (Bn), naftila (naft), metoxila(MeO), etoxila (EtO), benzoila (Bz), e acetila (Ac).

Por conveniência, muitos compostos químicos sãorepresentados utilizando-se abreviaturas bem conhecidas,incluindo, mas não limitados a, metanol (MeOH), etanol(EtOH), isopropanol (i-PrOH), metil etil cetona (MEK), éterou dietil éter (Et2O), ácido acético (AcOH), diclorometano(cloreto de metileno, DCM), ácido trifluoracético (TFA),dimetilformamida (DMF), tetra-hidrofuran (THF), e dimetil-sulfóxido (DMSO).

Síntese

Compostos da fórmula I da invenção atual:

<formula>formula see original document page 43</formula>

podem ser sintetizados a partir de um precursor dafórmula 2:

<formula>formula see original document page 43</formula>

Fórmula 2

onde OProt representa um grupo hidroxilaprotegido. Os vários grupos substituintes mostrados poderãoser o mesmo conforme definido para os compostos da fórmulaI, ou poderão ser versões protegidas ou precursores daquelesgrupos definidos, de tal forma que é necessária umatransformação adicional para se obter o composto desejado. Asíntese dos compostos da invenção pode prosseguir pelaremoção do grupo de proteção hidroxila seguido pela formaçãoda ligação de amida, utilizando-se técnicas standard, comopor exemplo, catalização de base, acoplamento HBTU.

Os compostos da fórmula 2 podem ser sintetizadosacoplando-se um composto da fórmula 3 ou da fórmula 4:

<formula>formula see original document page 44</formula>

com um composto da fórmula 5 ou 6,respectivamente:

<formula>formula see original document page 44</formula>

A formação da ligação de uréia é executada sobcondições standard. Os compostos das fórmulas 5 e 6 poderãoser sintetizados de acordo com métodos conhecidos, eexemplos são apresentados abaixo. 0 mesmo se aplica acompostos das fórmulas 3 e 4.

Uso

A invenção atual apresenta compostos ativos,especificamente, ativos na inibição da atividade de PARP-I.

0 termo "ativo" conforme usado aqui, pertence acompostos que são capazes de inibir a atividade de PARP-I, eincluem especificamente ambos os compostos com atividadeintrínseca (fármacos) assim como prodrogas de taiscompostos, cujas prodrogas poderão elas próprias apresentarpouca ou nenhuma atividade intrínseca.

Um ensaio que pode ser utilizado convenientementepara avaliar a inibição de PARP-I oferecida por um compostoespecífico é descrito nos exemplos abaixo.

A invenção atual apresenta ainda um método deinibição da atividade de PARP-I em uma célula, que écomposto do contato da referida célula com uma quantidadeativa de um composto ativo, de preferência, na forma de umacomposição farmaceuticamente aceitável. Tal método poderáser praticado in vitro ou in vivo.

Por exemplo, uma amostra de células poderá sercultivada in vitro e um composto ativo ser colocado emcontato com as referidas células, e o efeito do compostosobre aquelas células ser observado. Como exemplos do"efeito", poderá ser determinada a quantidade de reparo deDNA efetuado em um certo tempo. Quando se descobre que ocomposto ativo exerce uma influência sobre as células, istopoderá ser utilizado como um marcador de prognóstico ou dediagnóstico da eficácia do composto em métodos de tratamentode um paciente que contém células do mesmo tipo celular.

O termo "tratamento", conforme usado aqui nocontexto do tratamento de uma condição, geralmente pertencea um tratamento e a uma terapia, de um ser humano ou de umanimal (por exemplo, em aplicações veterinárias), nas quaisé obtido algum efeito terapêutico desejado, por exemplo, nainibição do progresso da condição, e inclui uma redução navelocidade do progresso, uma interrupção na velocidade doprogresso, uma melhora da condição, e a cura da condição. Étambém incluído o tratamento como uma medida profilática(i.e. profilaxia) .

O termo "derivado" conforme utilizado aqui refere-se ao uso de compostos ativos em conjunto com meiosterapêuticos conhecidos. Tais meios incluem regimescitotóxicos de fármacos e/ou radiação ionizante conformeutilizado no tratamento de tipos diferentes de câncer.Especialmente, os compostos ativos são conhecidos comopotencializando as ações de uma quantidade de tratamentos dequimioterapia de câncer, que incluem a classe detopoisomerase de venenos e a maioria dos agentes alquilantesconhecidos usados no tratamento de câncer.

Os compostos ativos poderão também ser utilizadoscomo aditivos de cultura de célula para inibir PARP, comopor exemplo, para sensibilizar células em relação a agentesquimioterapeuticos conhecidos ou tratamentos de radiaçãoionizante in vitro.

Os compostos ativos poderão também ser utilizadoscomo parte de um ensaio in vitro, por exemplo, para sedeterminar se um hospedeiro candidato tem propensão a sebeneficiar do tratamento com o composto em questão.

Administração

O composto ou composição farmacêutica ativa

composta do composto ativo poderá ser administrado a umindivíduo por qualquer rota conveniente de administração,sistêmicamente/perifericamente ou no local da ação desejada,incluindo mas não limitado a, administração oral (porexemplo, através de ingestão); tópica (incluindo, porexemplo, transdérmica, intra-nasal, ocular, bucal esublingual); pulmonar (por exemplo, através de terapia deinalação ou insuflação utilizando, por exemplo, um aerossol,como por exemplo, através da boca ou nariz); retal; vaginal;parenteral, por exemplo, através de injeção, incluindosubcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intra-cardiaca, intra-tecal, intra-espinal, intra-capsular, subcapsular, intra-orbital, intra-peritoneal,intra- traqueal, subcuticular, intra-articular, sub-aracnóide, intra-external; através de implante de umdepósito, por exemplo, subcutaneamente ou

intramuscularmente.

O indivíduo poderá ser um eucariote, um animal, umanimal vertebrado, um mamífero, um roedor (por exemplo, umporco da Guiné, um hamster, um rato, um camundongo), ummurino (por exemplo, um camundongo), canino (por exemplo umcachorro), felino (por exemplo, um gato), eqüino (porexemplo um cavalo), um primata, simio (por exemplo um macacoou ape) , um macaco (por exemplo um sagüi, um babuino) e umape (por exemplo, um gorila, chimpanzé, orangotango, gibão),ou um ser humano.

Formulações

Embora seja possível que o composto ativo sejaadministrado sozinho, é preferível que ele seja apresentadocomo uma composição farmacêutica (uma formulação) compostapelo menos de um composto ativo, conforme definido acima,juntamente com um ou mais veículos farmaceuticamenteaceitáveis, auxiliares, excipientes, diluentes, cargas,soluções tampão, estabilizantes, conservantes,lubrificantes, ou outros materiais bem conhecidos poraqueles adestrados na arte e opcionalmente outros agentesterapêuticos ou profiláticos.

Assim sendo, a invenção atual apresenta aindacomposições farmacêuticas, conforme definido acima, emétodos para a produção de uma composição farmacêutica,composto da administração de pelo menos um composto ativo,conforme definido acima, juntamente com um ou mais veículos,excipientes, soluções tampão, auxiliares, estabilizantes, ououtros materiais farmaceuticamente aceitáveis, conformedescrito aqui.

O termo "farmaceuticamente aceitável" conformeusado aqui pertence a compostos, materiais, composições,e/ou formas de dosagem que estão, dentro do escopo dojulgamento médico abalizado, adequados para uso em contatocom os tecidos de um indivíduo (por exemplo, um ser humano)sem toxidez excessiva, irritação, resposta alérgica, ououtro problema ou complicação, de acordo com uma relaçãorazoável de beneficio/risco. Cada veículo, excipiente, etcpoderá também ser "aceitável" no sentido de ser compatívelcom os outros ingredientes da formulação.

Veículos, diluentes, excipientes, etc, aceitáveis,podem ser encontrados em textos farmacêuticos standard.Veja, por exemplo, "Handbook of Pharmaceutical Additives",2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (SynapseInformation Resources, Inc., Endicott, New York, USA), "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th edition, pub.Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; e Handbook ofPharmaceutical Excipients", 2nd edition, 1994.

As formulações poderão ser apresentadasconvenientemente na forma de dosagem unitária e poderão serpreparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na artefarmacêutica. Tais métodos incluem a etapa de colocar emassociação o composto ativo com o veículo que constitui umou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulaçõessão preparadas colocando-se em associação uniforme e intimao composto ativo com veículos líquidos ou veículos sólidosfinamente divididos ou ambos, e então, se necessário,formatando o produto.

As formulações poderão estar na forma de líquidos,soluções, suspensões, emulsões, elixires, xaropes, tabletes,losangos, grânulos, pós, cápsulas, pílulas, ampolas,supositórios, pessários, ungüentos, gels, pastas, cremes,aspersões, névoas, espumas, loções, óleos, cápsulas,eletuários, ou aerossóis.Formulações adequadas para a administração oral(por exemplo, através de ingestão) poderão ser apresentadascomo unidades distintas tais como cápsulas, tabletes, cadaum deles contendo uma quantidade pré-determinada do compostoativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou suspensãoem um liquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsãoliquida óleo-em-água ou uma emulsão liquida água-em-óleo;como uma cápsula; como um eletuário; ou como uma pasta.

Um tablete poderá ser feito através de meiosconvencionais, como por exemplo, através de compressão oumoldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientesacessórios. Tabletes comprimidos poderão ser preparadosatravés de compressão do composto ativo em uma máquinaadequada de uma forma de livre escoamento como um pó ougrânulos, opcionalmente misturados com um ou maisaglutinantes (por exemplo, povidona, gelatina, acacia,sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetil celulose); cargasou diluentes (por exemplo, lactose, celulosemicrocristalina, hidrogênio fosfato de cálcio);lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco,silica); desintegrantes (por exemplo, amido glicolato desódio, povidona reticulada, carboximetil celulose de sódioreticulado); agentes de umidificação ou ativos na superfícieou de dispersão (por exemplo, lauril sulfato de sódio); econservantes (por exemplo, metil p- hidroxi benzoato, propilp-hidroxi benzoato, ácido sórbico). Tabletes moldadospoderão ser feitos através de moldagem em uma máquinaadequada de uma mistura do composto em pó umidificado com umdiluente liquido inerte. Os tabletes, opcionalmente poderãoser revestidos ou marcados e poderão ser formulados paraproduzirem uma liberação lenta ou controlada do compostoativo no mesmo utilizando, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose em proporções variadas, para produzir o perfil deliberação desejado. Os tabletes, opcionalmente, poderão serproduzidos com um revestimento entérico, para produzirem umaliberação em partes do intestino em vez do estômago.

As formulações adequadas para administração tópica(por exemplo, transdérmicas, intra-nasais, oculares, bucaise sublinguais) poderão ser formuladas como um unguento,creme, suspensão, loção, pó, solução, pasta, gel, aspersão,aerossol, ou óleo. Alternativamente, uma formulação poderáser composta de um emplastro ou uma cobertura, como umabandagem ou uma fita adesiva impregnada com os compostosativos e opcionalmente um ou mais excipientes ou diluentes.

Formulações adequadas para administração tópica naboca incluem losangos compostos do composto ativo em umabase com sabor, usualmente sacarose e acacia ou tragacanto;pastilhas compostas do composto ativo em uma base inertecomo gelatina e glicerina, ou sacarose e acacia; e soluçõesde lavagem da boca compostas do composto ativo em um veiculoliquido adequado.

Formulações adequadas para administração tópicapara os olhos também incluem gotas para os olhos, onde ocomposto ativo é dissolvido ou colocado em suspensão em umveiculo adequado, especialmente um solvente aquoso para ocomposto ativo.Formulações adequadas para administração nasal,onde o veiculo é um sólido, incluem um pó grosso tendo umtamanho de partícula, por exemplo, na faixa de cerca de 20 acerca de 500 mícrons que é administrado de forma na qual éinalado, i.e., através de uma inalação rápida pela passagemnasal a partir de um recipiente do pó mantido próximo donariz. Formulações adequadas onde o veículo é um líquidopara administração, por exemplo, por aspersão nasal, gotasnasais, ou através de administração de aerossol porintermédio de um nebulizador, incluem soluções aquosas ouoleosas do composto ativo.

Formulações adequadas para a administração porintermédio de inalação incluem aquelas apresentadas como umaaspersão de aerossol a partir de uma embalagem pressurizada,com o uso de um propelente adequado, comodiclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluor-etano, dióxido de carbono ou outros gases adequados.

Formulações adequadas para administração tópicaatravés da pele incluem ungüentos, cremes e emulsões. Quandoformulada em um unguento o composto ativo opcionalmentepoderá ser utilizado com uma base de unguento miscível emágua ou parafínica. Alternativamente, os compostos ativospoderão ser formulados em um creme com uma base cremosaóleo-em-água. Se desejado, a fase aquosa da base cremosapoderá incluir, por exemplo, pelo menos cerca de 30%,peso/peso, de um álcool poliídrico, i.e., um álcool tendodois ou mais grupos hidroxila, tais como propileno glicol,butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietilenoglicol e misturas dos mesmos. As formulações tópicas,desejavelmente, poderão incluir um composto que melhora aabsorção ou penetração do composto ativo através da pele ououtras áreas afetadas. Exemplos de promotores de talpenetração dérmica incluem dimetil-sulfóxido e análogosrelacionados.

Quando formulado como uma emulsão tópica, a faseoleosa opcionalmente poderá ser composta meramente de umemulsificante (conhecido de outra forma como um emulgente),ou ela poderá ser composta de uma mistura pelo menos de umemulsif icante e uma gordura ou um óleo ou ambos uma gordurae um óleo. De preferência, é incluído um emulsificantehidrófilos juntamente com um emulsificante lipofilico queatua como um estabilizante. Também é preferível incluir-seambos um óleo e uma gordura. Em conjunto, o emulsif icantecom ou sem o estabilizante constitui a assim chamada ceraemulsif icante, e a cera juntamente com o óleo e/ou gorduraconstitui a assim chamada base de ungüento emulsificante queforma a fase dispersa oleosa das formulações cremosas.

Os emulgentes e os estabilizantes de emulsãoincluem Tween 60, Span 80, cetoestearil álcool, miristilálcool, monoestearato de glicerila e lauril sulfato desódio. A escolha dos óleos ou gorduras adequados para aformulação é baseada na obtenção das propriedades cosméticasdesejadas, porque a solubilidade do composto ativo namaioria dos óleos que parecem ser utilizados em formulaçõesfarmacêuticas em emulsão poderá ser muito baixa. Assimsendo, o creme, de preferência, deve ser sem graxa, semsujeira e um produto lavável com consistência adequada paraevitar vazamentos dos tubos ou de outros recipientes. Osalquil ésteres de cadeia linear ou ramificada, mono- oudibásicos tais como di-isoadipato, isocetil estearato,propileno glicol diéster de ácidos graxos de coco, isopropilmiristato, decil oleato, isopropil palmitato, butilestearato, 2-etilexil palmitato ou uma mistura de ésteres decadeia ramificada conhecida como Crodamol CAP poderá serutilizada, os últimos três sendo os ésteres preferidos.

Estes poderão ser utilizados sozinhos ou em combinação,dependendo das propriedades requeridas. Alternativamente,podem ser utilizados lipidios com alto ponto de fusão, taiscomo parafina branca macia e/ou parafina liquida ou outrosóleos minerais.

Poderão ser apresentadas formulações adequadaspara administração retal como um supositório com uma baseadequada que é composta, por exemplo, de manteiga de cacauou um salicilato.

Formulações adequadas para administração vaginalpoderão ser apresentadas como pessários, tampões, cremes,gels, pastas, espumas ou formulações de aspersão contendo,além do composto ativo, veículos, conforme são consideradosna arte como sendo apropriados.

As formulações adequadas para administraçãoparenteral (por exemplo, por injeção, incluindo a cutânea,subcutânea, intramuscular, intravenosa e intradérmica)incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosasisotônicas, livres de pirogênio, as quais poderão conterantioxidantes, soluções tampão, conservantes,estabilizantes, bacteriostáticos, e solutos, que fazem comque a formulação se torne isotônica com o sangue dorecipiente pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que poderão incluir agentes em suspensão e agentesde espessamento, e liposomas ou outros sistemasmicroparticulados que são projetados para visarem o compostopara componentes do sangue ou um ou mais órgãos. Exemplos deveículos isotônicos adequados para uso em tais formulações incluem injeção de cloreto de sódio, solução de Ringer, ouinjeção de Ringer lactada. Tipicamente, a concentração docomposto ativo na solução é de cerca de 1 ng/ml e até cercade 10 µg/ml, por exemplo, de cerca de 10 ng/ml a cerca de 1µg/ml. As formulações poderão ser apresentadas em recipientes selados de dose única ou de doses múltiplas, porexemplo, ampolas e frascos, e poderão ser estocadas nacondição de seca por congelamento (Iiofilizada) e requerendosomente a adição do veículo líquido estéril, por exemplo,água para injeções, imediatamente antes do uso. As soluções e suspensões extemporâneas de injeção poderão ser preparadasa partir de pós estéreis, grânulos, e tabletes. Asformulações poderão estar na forma de liposomas ou outrossistemas de microparticulados que são projetados paravisarem o composto ativo e para componentes do sangue ou umou mais órgãos.

Dosagem

Será visto que dosagens apropriadas dos compostosativos, e das composições compostas dos compostos ativos,podem variar de paciente para paciente. A determinação dadosagem ótima geralmente envolverá o equilíbrio entre onível de benefício terapêutico contra qualquer risco ouefeitos colaterais prejudiciais dos tratamentos da invençãoatual. 0 nível de dosagem escolhido dependerá de umavariedade de fatores, incluindo, mas não limitado a,atividade do composto específico, a rota de administração, otempo de administração, a velocidade de excreção docomposto, a duração do tratamento, outros fármacos,compostos, e/ou materiais usados em combinação, e a idade,sexo, peso, condição, saúde geral, e histórico médicoanterior do paciente. A quantidade de composto e a rota deadministração no final ficarão a critério do médico, apesarde geralmente a dosagem se destinar a alcançar concentraçõeslocais no local de ação que obteve o efeito desejado semcausar danos substanciais ou efeitos colateraisprejudiciais.

A administração in vivo pode ser efetuada em umadose, continuamente ou intermitentemente (por exemplo, emdoses divididas em intervalos apropriados) durante o cursodo tratamento. Métodos de determinação do meio mais efetivoda dosagem de administração são bem conhecidos por aquelesadestrados na arte e variarão com a formulação utilizadapara a terapia, a finalidade da terapia, a célula visada queestá sendo tratada, e o indivíduo que está sendo tratado.Administrações únicas ou múltiplas podem ser executadas como nível de dose e o padrão sendo escolhidos pelo médico queexecuta o tratamento.Em geral, uma dose adequada do composto ativo estána faixa de cerca de 100 yg a cerca de 250 mg/kg de peso docorpo do indivíduo por dia. Quando o composto ativo é umsal, um éster, prodroga, ou semelhante, a quantidadeadministrada é calculada com base no composto principal eassim sendo, o peso real a ser utilizado é aumentadoproporcionalmente.

Exemplos

Métodos Gerais de Execução das ExperiênciasHPLC Preparativo

As amostras foram purificadas com um sistema depurificação direcionado por massa Wa'ters, utilizando umabomba Waters 600 LC, uma coluna de 4μ 500 mm χ 4,6 mmGenesis AQ 120A e um espectrômetro de massa Micromass ZQ,operando no modo de ionização por eletro- aspersão de íonspositivos. As fases móveis A (0,1% de ácido fórmico em água)e B (0,1% de ácido fórmico em acetonitrila) foram utilizadasem um gradiente:

<table>table see original document page 57</column></row><table>

Vazão: 2,0 ml/minHPLC-MS Analítico

0 HPLC analítico foi tipicamente executado com umabomba P4000 Spectra System e uma coluna C18 Jones Genesis (4μπι, 50 mm χ 4,6 mm) . As fases móveis A (0,1% de ácidoformico em água) e B (0,1% de ácido fórmico em acetonitrila)foram utilizadas em um gradiente conforme descrito abaixo.

A detecção foi através de um detector TSP UV 6000LP a 254 nm UV e faixa de 210 - 600 nm PDA. 0 espectrômetrode massa era um sistema Waters ZMD LC-MS no. LD352 operandono modo de ionização por eletro-aspersão.

<table>table see original document page 58</column></row><table>

Vazão: 1,0 ml/min

NMR

1H NMR e 13C NMR foram registrados tipicamenteutilizando-se um espectrômetro Bruker DPX 300 a 300 MHz e 75MHz respectivamente. As trocas químicas foram relatadas empartes por milhão (ppm) na escala δ em relação ao standardinterno de tetrametilsilano. A não ser que seja afirmado deoutra forma, todas as amostras foram dissolvidas em DMSO-d6.Exemplo 1

<formula>formula see original document page 59</formula>

onde X é uma só ligação NH.

O composto 1 foi sintetizado conforme descrito noexemplo 23 da WO 03/0932 61, que é incorporada aqui comoreferência.

(a) 4-(4-flúor-3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-1-ona (2) .

Em uma suspensão de 4-(3-amino-4-fluor-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (1) ( 4,0 g, 14,8 mmols) em DCM anidro (1,6litros) e trietilamina (4,62 ml, 40,86 mmols) foi adicionadauma solução formada previamente de trifosgeno (2,75 g, 9,28mmols), gota a gota, em DCM anidro (327 ml) e agitadadurante 70 minutos e na temperatura ambiente. A mistura dareação foi então concentrada até a secura a vácuo produzindoum sólido cinza. Um só pico na análise LC-MS, (rendimentoconsiderado como sendo quantitativo) e não foi executadanenhuma purificação, m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,49 min,(M+MeOH) 328,0.(b) {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-ureido]-amino etil ester (4).

Em uma solução de amino éster apropriado (3) (0,026g, 0,17 mmols) em DCM anidro (16,7 ml) foram adicionadostrietil- amina (24 μΐ, 0,170 mmols) e 4-(4-flúor-3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (2) (0,05 g, 0,17mmols). A mistura da reação foi agitada durante 2h e entãofoi lavada com água (2 χ 15 ml) e secada sobre MgSO4 ,filtrada e concentrada para produzir o ureido éstercorrespondente. Os ureido ésteres correspondentes foramutilizados sem necessidade de purificação.

(c) 3- [2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-imidazolidina substituída-2,4-diona (5).

(i) Método catalisado por base (5a-5e, 5g-5i) .

Foram adicionados no 3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-ureido ester (4)(0,065mmols) em dimetilacetimida anidra (0,5 ml), hidróxido desódio (2,6 mg, 0, 065 mmols) e aquecidos a 50°C durante 30minutos. A mistura da reação foi então diluída com DCM (2ml) e lavada com salmoura (2,5 ml). As amostras brutas foramsubmetidas ao HPLC preparativo.

(ii) Método de acoplamento HBTU (5f, 5j).

Foram adicionados no 3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-ureido ester (4) (0,065mmols) em etanol (0,5 ml), hidróxido de sódio (2,6 mg, 0,065mmols) e agitados na temperatura ambiente durante 30minutos. A mistura da reação foi então neutralizada pelaadição de ácido clorídrico (0,065 mmols) e foi concentradaaté a secura a vácuo.

O sólido resultante foi então colocado emsuspensão em DCM (0,5 ml) e tratado com N1N'diisopropiletilamina (10,5 μL, 0,06 mmols) e benzotriazola-1-il)-1, 1,3,3-tetrametiluronio hexafluorfosfato (0, 024 g,0,06 mmols). A mistura da reação foi agitada durante 18h eentão foi submetida a HPLC preparativo.

<table>table see original document page 61</column></row><table><table>table see original document page 62</column></row><table>

onde X é uma só ligação NH.

O composto 6 foi sintetizado conforme descrito noexemplo 1, da WO 03/093261, que é incorporada aqui comoreferência.

(a) 4-(3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (7).

Em uma solução de 4-(3-amino-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (6)(1,0 g, 4,0 mmols) em DCM seco (415 ml) etrietilamina (1,5 ml, 10,9 mmols) foi adicionada, gota agota, uma solução formada previamente de triofosgeno (0,73g, 2,5 mmols) em DCM seco (85 ml) durante 30 minutos. Depoisde mais 2h, a mistura da reação foi concentrada até a securaproduzindo um pó amarelo claro. Um só pico na análise LC-MS,(rendimento considerado como sendo quantitativo) e não foiexecutada nenhuma purificação; m/z (LC-MS, ESP), RT= 3,90min, (M+MeOH) 310,0.

(b) { 3 - [5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-ureido}-amino etil ester (8).

Em uma solução do amino éster apropriado (0,026 g,0,17 mmols) em DCM anidro (16,7 ml) foram adicionadostrietilamina (24 μΐϋ, 0,170 mmols) e 4-(3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (7) (0,05 g, 0,17 mmols). A mistura dareação foi agitada durante 2h e então foi lavada com água (2χ 15 ml) e secada sobre MgSO4, foi filtrada e concentradapara produzir o ureido éster correspondente. Os ureidoésteres correspondentes foram utilizados sem a necessidadede qualquer purificação.

(c) 3-[5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-imidazolidina substituída-2,4-diona (9).

Foram adicionados nos ésteres {1-[3[(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenilcarbamoil] - substituído} -carbamicos (0,065 mmols) em dimetilacetimida (0,5 ml),hidróxido de sódio (2,6 mg, 0,065 mmols) e aquecidos a 50 °C durante 0,5 - 6h. A mistura da reação foi então diluídacom DCM (2 ml) e lavada com salmoura (2,5 ml) . As amostrasbrutas foram submetidas a HPLC preparativo.

<formula>formula see original document page 64</formula>

<table>table see original document page 64</column></row><table>

<formula>formula see original document page 64</formula>(a) ácido carbonilmetil-amino acético bis (terc-butilsilil éster) (11).

Uma suspensão de ácido (carboximetil-amino)acético (10) (0,6 g, 4,51 mmols) em bis(trimetilsilil)-trifluoracetamida (45 ml,169 mmols) foi aquecida até adissolução completa, (ca 1 hr) . A mistura da reação foientão concentrada a vácuo resultando em um óleo amarelo (1,6g). O óleo foi utilizado sem a necessidade de qualquerpurificação.

(b) Ácido 3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-acético (12) .

Em uma suspensão de 4-(4-flúor-3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (2) (4,51 mmols) em dioxano anidro(180 ml) foi adicionada trietilamina (617 μΐι, 4,51 mmols)seguido pelo ácido carbonilmetil-amino acético bis (terc-butilsilil ester) (11) (1,25 g, 4,51 mmols). A suspensão foiagitada na temperatura ambiente durante 48h.

A mistura da reação foi concentrada até a secura eentão foi diluída com água (150 ml) e o pH foi ajustado para10 utilizando-se solução de hidróxido de sódio (ca 2N 10ml). A fase aquosa foi então extraída com acetato de etila(2 χ 20 ml). O pH da fase aquosa foi acidulado até 1utilizando-se (HCl 2N) e extraída com acetato de etila (2 χ100 ml). As últimas camadas de acetato de etila foram entãocombinadas, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas avácuo para produzir um sólido amarelo. 92% de pico naanálise LC-MS, (1,0 g,57%) não foi executada nenhumapurificação, m/z (LC-MS, ESN), RT= 3,47 min, (M-H) 409,0.(c) Amidas 3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-acéticas (13)Foram adicionados em uma suspensão de ácido 3-[2-flúor- 5 -(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-acético (12) (0,05 g, 0,122 mmols)em DCM seco (0,5 ml) a amina apropriada (0,150 mmols)juntamente com N'N'diisopropiletilamina (0,150 mmols) e 2-(lH-benzotriazola-l-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio hexafluor-fosfato (0,057 g, 0,150 mmols) e agitados na temperaturaambiente durante 7h. A mistura da reação foi agitada durante18h e então foi submetida a HPLC preparativo.

<formula>formula see original document page 66</formula>

<table>table see original document page 66</column></row><table>Exemplo 4

<formula>formula see original document page 67</formula>

(a) 2-metil-4-nitro-piridin-l-ol (15).

2-picolino-N-oxido (14) (21,9 g, 0,2 mmols) foramadicionados em ácido sulfúrico concentrado (76 ml),mantendo-se a temperatura abaixo de 40°C. A mistura foiresfriada a 5°C; ácido nitrico fumegante (60 ml foi entãoadicionado, gota a gota, durante 15 minutos, mantendo atemperatura da reação abaixo de IO0C. Depois que a adiçãofoi completada, a mistura da reação foi aquecida a 100 °Cdurante 1,5 horas. A reação foi então resfriada até atemperatura ambiente e foi derramada sobre gelo (ca 500 g),a solução resultante verde/amarelo foi neutralizada pelaadição de carbonato de sódio (ca 205 g durante 1 hora). Amistura foi então filtrada e lavada com água (2 litros). Atorta sólida foi então dissolvida em DCM (500 ml) e secadasobre Na2SO4. Foi adicionado hexano (100 ml) na solução deDCM resultando em uma suspensão amarela que foi filtrada esecada. Análise LC-MS de um só pico, (25,40 g, 82,5%) nãofoi executada nenhuma purificação e foi utilizada crua paraa etapa seguinte.

(b) Ácido acético 4-nitro-piridin-2-ilmetil éster(16) .

Foi adicionado anidrido acético (60 ml, 0,635mols) a IlO0C sob atmosfera de nitrogênio, 2-metil-4-nitro-piridin-l-ol (15) (17,1 g, 111 mmols), porção por porção,durante 1 minuto. Depois de aproximadamente 2 minutos asolução começou a escurecer e o aquecimento foi mantido a100 - 120°C durante 30 minutos e então deixada resfriar-se a80°C. Foi adicionado etanol (60 ml) e a solução foiconcentrada sob vácuo; o resíduo foi colocado em suspensãoem água (140 ml) e a mistura foi neutralizada com NaHC03(ca. 40 g). O licor aquoso foi extraído com acetato de etila(4 χ 100 ml) , os extratos combinados foram lavados comsalmoura ( 2 χ 100 ml, secados sobre Na2S04, concentrado avácuo até um óleo cru. O material foi submetido acromatografia por expansão, eluente hexano:TBME (2:1). Foiisolado um óleo marrom, um só pico na análise LC-MS, (6,44 g30%); m/z (LC-MS, ESP), RT= 3,65 min, (M+H) 197.

(c) (4-Nitro-piridin-2-il)-metanol (17).

Em uma solução de ácido acético 4-nitro-piridin-2-ilmetil éster (16) (0,49 g, 2,5 mmols) em metanol (5 ml),foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (2N, 1,625 ml) e a reação foi agitada durante 30 minutos e entãoconcentrada a vácuo. O resíduo foi diluído com água (10 ml)e extraído com acetato de etila (2 χ 10 ml) . Os extratoscombinados foram lavados com salmoura (10 ml) e concentradosa vácuo para produzir um óleo cru que se solidificou emrepouso. Pico único na análise LC-MS, (0,13 g 33%); m/z (LC-MS, ESP), RT= 2,67 min, (M+H) 155.

(d) 4-nitro-piridina-2-carbaldeido (18).

Em uma solução resfriada de cloreto de oxalila(0,533 g, 4,18 mmols) em DCM (2 ml) a -78°C sob nitrogêniofoi adicionado dimetil sulfóxido (0,593 ml, 8,37 mmols),gota a gota. Depois de 30 minutos foi adicionado, gota agota (4-nitro-piridin-2-il)-metanol (17) (0,129, 0,837mmols) em DCM (2 ml) mantendo-se a temperatura a -78°C.Depois de 2h a mistura foi aquecida a -55°C. Foi entãoadicionada trietilamina (1,74 ml, 12,55 mmols) e a misturafoi deixada aquecer-se até a temperatura ambiente durante2h. Foi então adicionada salmoura (10 ml) e a mistura foiextraída com DCM (4 χ 10 ml) . Os orgânicos combinados foramentão secados sobre MGSO4 e concentrados a vácuo até aobtenção de um óleo. 0 material foi utilizado diretamentesem a necessidade de purificação considerando-se conversãoquantitativa.

(e) 3-(4-Nitro-piridin-2-ilmetileno)-3H-isobenzofuran-l-ona (19).

Em uma solução resfriada de (4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-il)-ácido fosfônico dimetil éster (0,202 g, 0,837mmols) em THF (4 ml) a 10°C foi adicionado 4-nitro-piridina-2-carbaldeido (0,837 mmols) sob uma atmosfera de nitrogênio.Foi adicionada trietilamina (0,174 ml, 1,25 mmols), gota agota, durante 10 minutos e então deixada sob agitação natemperatura ambiente durante 18h. A suspensão amarela foiderramada em água (9 ml), e então foi filtrada, o sólido foilavado com água (2x2 ml), e hexano (2x2 ml) e entãodietil éter (2x2 ml) e então foi secada a vácuo paraproduzir 0,73 g dos produtos desejados. Dois picos naanálise LC-MS, (0,13 g, 18% em duas etapas) e não foirequerida nenhuma purificação adicional, m/z (LC-MS, ESP) ,RT= 4,26 min (M+H) 269, & RT= 4,52 min (M+H) 269.

(f) 4-(4-Amino-piridin-2-ilmetil)2H-ftalazin-l-ona(20).

Uma suspensão de 3-(4-nitró-piridin-2-ilmetileno)-3H-isobenzofuran-l-ona (0,67 g, 2,5 mmols) em monoidrato dehidrazina (0,25 g, 5,0 mmols) foi aquecida a 90°C durante 1hora e então foi resfriada até a temperatura ambiente. Foiadicionado etanol (5 ml), seguido por cloreto de amônio(0,16 g, 3,0 mmols) e pó de ferro (0,28 g, 5,0 mmols), amistura foi então aquecida a 90°C durante 3h. A mistura dareação foi filtrada a quente através de celite e foi lavadacom acetato de etila (20 ml). O filtrado foi concentrado avácuo e então foi diluído com acetato de etila (10 ml),lavado com salmoura (10 ml), secado sobre sulfato demagnésio e secado a vácuo para produzir o composto títulocomo um pó amarelo claro. Pico único na análise LCMS (0,20g, 31% de rendimento) não requerendo nenhuma purificaçãoadicional, m/z (LC-MS, ESP), RT=I,58 (M+H) 253;

(g) 1,5,5-substituída-3-[2-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-il metil)-piridin-4-il]-imidazolidina-2,4-diona(23).

Em uma solução de amino éster isocianatoapropriado (0,026 g, 0,17 mmols) em DCM anidro (16,7 ml) foiadicionado trietilamina (24 microlitros, 0,170 imoles) e 4-(4-amino-piridin-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona (21) (0,05 g,0,17 mmols). A mistura da reação foi agitada durante 8h efoi concentrada a vácuo para produzir o correspondenteureido éster. Foi adicionada dimetilacetimida anidra (0,5ml), seguido por hidróxido de sódio (2,6 mg, 0,065 mmols) ea mistura foi aquecida a 50°C durante 30 minutos. A misturada reação foi então diluída com DCM (2 ml) e lavada comsalmoura (2,5 ml). As amostras cruas foram submetidas a HPLCpreparativo.

(xi) Rota alternativa para 1,5,5-substituida-3-[2-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-il metil)-piridin-4-il]-imidazolidina-2,4-diona (23).

(a) 4-(4-isocianato-piridin-2-ilmetil)-2H-ftalazin-1-ona (22).

Em uma suspensão de 4-(4-amino-piridin-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona (21)

(0,40 g, 1,48 mmols) em DCM anidro (160 ml) etrietilamina (0,46 ml, 4,09 mmols), foi adicionada gota agota uma solução formada previamente de trifosgeno (0,27 g,0,93 mmols) em DCM anidro (30 ml) . A reação foi agitadadurante 6h na temperatura ambiente. A mistura da reação foientão concentrada até a secura a vácuo produzindo um sólidocinza. Pico único na análise LC-MS, (rendimento consideradocomo sendo quantitativo) não foi executada nenhumapurificação formada previamente, m/ζ (LC-MS, ESP), RT= 3,79min, (M+MeOH) 329,0.(b) Em uma solução de amino éster apropriada(0,026 g, 0,17 mmols) em DCM anidro (16,7 ml) foi adicionadatrietilamina (24 microlitros, 0,170 mmols) e 4-(4-isocianato-piridin-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona (22) (0,05g, 0,18 mmols). A mistura da reação foi agitada durante 8h efoi concentrada a vácuo para produzir o ureido éstercorrespondente. Foi adicionada dimetilacetimida anidra (0,5ml), seguido por hidróxido de sódio (2,6 mg, 0,065 mmols) eaquecida a 50°C durante 30 minutos. A mistura da reaçãofoi então submetida a HPLC preparativo.

<formula>formula see original document page 72</formula>

<table>table see original document page 72</column></row><table>

Exemplo 5

<formula>formula see original document page 72</formula>(a) 4-Nitro-tiofeno-2-carbaldeido (25).

Em ácido nitrico concentrado (15 ml) foiadicionado ácido sulfúrico concentrado (15 ml), a misturafoi resfriada até -10 0Ce foi adicionado gota a gota 2-tiofencarboxialdeido (24) (10,0 g, 89,2 mmols) durante 15minutos, mantendo-se a temperatura da reação entre -5 0 C e0 ° C. A mistura foi agitada por mais 1 hora antes de serentornada em água (200 ml) e extraída com DCM (3 x 100 ml) .As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4 econcentradas a vácuo. O óleo cru foi submetido acromatografia de expansão, eluente hexano:éter 10:1. Oisômero desejado (rf 0,32 em 2:1 hexano:éter) foi recolhido.Pico único na análise LC-MS, (11,5 g, rendimento de 82%) nãorequerendo nenhuma purificação adicional; m/z (LC-MS, ESP),RT= 3,55 min, não foi observada nenhuma ionização em ms; 1HNMR (300 MHz, D6-DMSO) 10,0 (1H, s), 9,2 (1H, s), 8,6 (1H,s).

(b) 3-(4-Nitro-tiofen-2-ilmetileno)-3H-isobenzofuran-l-ona (26).

Em uma solução de (4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-il)-ácido fosfônico dimetil éster (3,85 g, 15,9 mmols) emTHF (30 ml) foi adicionado 4-nitro-tiofeno-2-carbaldeido(25) (2,5 g, 15,9 mmols) sob nitrogênio. Foi adicionadatrietilamina (2,2 ml 15,9 mmols) gota a gota durante 10minutos e então foi agitada na temperatura ambiente durante4h. A suspensão amarela foi derramada em água (80 ml), eentão filtrada, o sólido foi lavado com água (15 ml), hexano(10 ml) e então dietil éter (10 ml) e então secada a vácuopara produzir 4,1 g dos produtos desejados. Dois picos naanálise LC-MS, (4,1 g, 94%) e não foi requerida nenhumapurificação adicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 4,71 min, (M+H)274, & RT= 4,84 min (M+H) 274;

(c) 4-(4-Nitro-tiofen-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona(27) .

Uma suspensão de 3-(4-nitro-tiofen-2-ilmetileno)-3H-isobenzofuran-l-ona (26) (1,95 g, 5,17 mmols) emmonoidráto de hidrazina (0,6 ml, 12,0 mmols) foi aquecida a90°C durante 1 hora e então foi resfriada até a temperaturaambiente. A mistura foi filtrada e a torta filtrada foilavada com água (3 χ 40 ml), e hexano (2 χ 40 ml) e secada avácuo a 50°C. Dois picos na análise LC-MS, (1,0 g, 61%) enão foi requerida nenhuma purificação adicional; m/z ( LC-MS, ESP), RT= 4,05 min, (M+H) 289, & RT= 3,71 min (M+H) 289;

(d) 4-(4-Amino-tiofen-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona(28) .

Em uma suspensão de 4-( 4-nitro-tiofen-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona (27) (0,90 g, 5,71 mmols) em etanol (25ml) sob um lençol de nitrogênio foi adicionada gota a gotauma solução de cloreto de amônio (0,31 g, 5,7 mmols) em água(18 ml). Depois de agitação da solução resultante durante 5minutos, foi adicionado pó de ferro (0,64 g, 11,5 mmols) emuma porção. A mistura amarela foi agitada a 80°C durante 3h.A mistura da reação foi filtrada a quente através de celite,a qual foi lavada com acetato de etila (80 ml) . Oconcentrado a vácuo foi então diluído com acetato de etila(20 ml), lavado com salmoura (20 ml) , secado sobre sulfatode magnésio e secado a vácuo para produzir o composto títulocomo um pó amarelo brilhante. Pico único na análise LC-MS,(0,68 g, 84% de pureza e não foi requerida nenhumapurificação adicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 2,94 (M+H) 258.

(e) substituído(3-[5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-tiofen-3-il]-ureido}-ácido acético etil éster (29).

Em uma suspensão de 4-(4-amino-tiofen-2-ilmetil)-2H-ftalazin-l-ona (28) (75 mg, 0,29 mmols) em DCM (1,5 ml) esob nitrogênio, foi adicionado o isocianato apropriado(0,380 mmols). Depois de agitação durante 3h a reação foiresfriada com água e o precipitado resultante foi filtrado esecado. Os sólidos isolados foram utilizados sem necessidadede purificação.

(f) {1-[3-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)fenilcarbamoil imidazolidina substituida-2,4-diona (30).

Em {3[5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-tiofen-3-il]-ureido}-ácido acético metil éster (29) (0,065mmols) em dimetilacetimida anidra (0,5 ml) foi adicionadohidróxido de sódio (2,6 mg, 0,065 mmoles) e aquecida até50°C durante 0,5 - 6 hr. A mistura da reação foi entãodiluída com DCM (2 ml) e lavada com salmoura (2,5 ml) . Asamostras cruas foram submetidas a HPLC preparativo.<table>table see original document page 76</column></row><table>

Exemplo 6

<formula>formula see original document page 76</formula>

A: Rc2 = H

B : Rc2 = Me

a) 2-(terc-butoxicarbonilmetil-amino)-ácidopropiônico metil éster (33A).Em uma solução de terc-butil cloroacetato (31)(4,5 g, 29,7 mmols) em DMF seco (50 ml) foi adicionada abase de Hunig (6,28 ml, 36,0 mmols) seguido por carbonato depotássio (5,24 g, 38,0 mmols). A mistura foi aquecida a 90°Cantes da adição de. DL-alanina metil éster (32A) (4,55 g,37,2 mmols), dissolvida em DMF (10 ml) ser adicionada gota agota durante 1 hora. O aquecimento foi continuado durantemais 1 hora e a reação foi resfriada até a temperaturaambiente. A mistura da reação foi então diluída com água (70ml) e foi extraída com DCM (3 χ 50 ml) . Os orgânicoscombinados foram então secados sobre sulfato de sódio econcentrados até a secura a vácuo. O óleo resultante foipurificado através de cromatografia de expansão, eluente 5:1hexano/acetato de etila, Rf de 0,19, azul manchado com"Anisaldehyde stain". Foram obtidos 3,5 g de óleo incolor.Considerado como sendo 100% puro e levado para a etapaseguinte sem qualquer análise adicional.

"Receita do anisaldehyde stain" - Em 135 ml deetanol absoluto foram adicionados 5 ml de ácido sulfúricoconcentrado, 1,5 ml de ácido acético glacial e 3,7 ml de p-anisaldeído. A solução foi então agitada vigorosamente paraassegurar a homogeneidade.

b) {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil}-fenil]-5-metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il} - ácidoacético terc-butil éster (35A).

Em uma suspensão de 4-(3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (2) (3,12 mmols) em DCM seco (80 ml) napresença de peneiras moleculares 4A ativadas (ca 5 g) foiadicionado 2-(terc-butoxicarbonilmetil-amino)-ácidopropiônico metil éster (33A) (1,07 g, 4,7 mmols). A reaçãofoi então agitada durante 48h na temperatura ambiente. Aanálise HPLC mostrou que havia uma mistura de uréiasciclisadas e não ciclisadas com a relação 1:1. A mistura foifiltrada e concentrada a vácuo. O óleo cru foi entãosubmetido a cromatografia de expansão, eluente: 1:1 hexanoacetato de etila, Rf=O,09. Um só pico na análise LC-MS, (1,3g, 95% de pureza) e não requereu nenhuma purificaçãoadicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 3,66 min (M+H) 481 -composto ciclisado sobre a coluna.

c) {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-1-ilmetil}-fenil]- 5 -metil-2 , 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácidoacético (36A).

Em uma solução de {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil}-fenil]-5-metil-2, 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético terc-butil éster (35A) (1,3 g, 2,7 mmols)em DCM seco (20 ml) foi adicionado ácido trifluoracético (2ml, ca 27 mmols) gota a gota durante 2 minutos. Depois deagitação durante a noite a mistura da reação foi concentradaaté a secura e submetida a cromatografia de expansão.Eluente 1% de ácido acético em acetato de etila. O compostotitulo foi isolado como um sólido branco. Um só pico naanálise LC-MS, (0, 680 mg, 100% de pureza) e não requereunenhuma purificação adicional; m/z (LC-MS, ESN), RT= 2,95min (M-H ) 423.

d) Síntese de compostos de coleção.

Em uma suspensão de {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro - ftalazin - 1 - ilmetil} - fenil]-5-metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético (36A) (145 mg, 0,34 mmols)em DCM (5 ml) foi adicionado HBTU (0,32 g, 0,85 mmols), basede Hunig (0,85 mmols) e amina apropriada (0,85 mmols). Amistura da reação foi agitada durante 18h e então oscompostos resultantes foram purificados através de HPLCpreparativo.

<formula>formula see original document page 79</formula>

<table>table see original document page 79</column></row><table>

e) Uma rota análoga utilizando 2-amino-2-metil-ácido propiônico metil éster ao invés de DL-alanina metiléster levou a {3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil}-fenil] - 5,5 -dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético (36B), o qual foi então ligado na aminaapropriada conforme discutido na parte d) acima. Oscompostos resultantes foram purificados através de HPLCpreparativo.

<formula>formula see original document page 80</formula>

<table>table see original document page 80</column></row><table><table>table see original document page 81</column></row><table>

* método Iong: sistema Waters ZQ LC-MS no. LAA 254 operandono modo de ionização por eletro-aspersão; fase móvel A: 0,1%de ácido fórmico em água; fase móvel B: 0,1% de ácidoformico em acetonitrila; coluna: Genesis C18 4 μπι 51 χ 4,6 mm.

Gradiente:

<table>table see original document page 81</column></row><table>

Vazão: 2,0 ml/min.

f) 1- [2-flúor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-[l,3,5]triazina-2,4, 6-triona (38)Em uma suspensão de 4-(3-isocianato-benzil)-2H-f talazin-l-ona (2) (0,37 mmols) em DMA seco (1 ml) foiadicionado etil alofanato (52 mg, 0,34 g) . A suspensão foiaquecida a 160°C durante 1 hora e então resfriada até atemperatura ambiente produzindo uma suspensão marrom escura.O sólido foi filtrado e amostrado, mostrando seraproximadamente 80% puro, RT= 3,56 min. O material foi entãopurificado através de purificação por HPLC preparativo.

<table>table see original document page 82</column></row><table>

*método Iong (ver acima)

g) 2-{3-[2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil ) -fenil ]-5-metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-acetamida (40a).

<formula>formula see original document page 82</formula>

(i) 3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil) -fenil]- 5 -metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácidoacético metil éster (39) .

Em uma solução de 3-[ 2-flúor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-5-metil-2, 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético (36A) (0,04 g, 0,094 mmols) em metanol (4ml) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (1 ml) eagitado a 70°C durante 90 minutos antes de ser resfriado atétemperatura ambiente. A mistura da reação foi entãoconcentrada a vácuo, diluída com água (10 ml) e extraída comacetato de etila (2 χ 10 ml). A camada orgânica foi entãosecada sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo paraproduzir um óleo incolor. Um só pico em LC-MS, (52 mg, 95%de pureza) e não foi requerida nenhuma purificaçãoadicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 3,24 min (M+H) 439;

(ii) 3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil] - 5 -metil-2, 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácidoacético (40).

3- [2-Fluor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-5-metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acéticometil éster (39) (0,03 g, 0,068 mmols) foi dissolvido emsolução de amônia a 7N em metanol (2 ml, 14 mmols) ecolocado em um tubo selado. A reação foi então aquecida a60°C durante 18h. A solução resultante foi concentrada avácuo, e absorvida sobre um cartucho de silica de 1 mm. Omaterial foi eluído com acetato de etila puro. RF de 0,65produzindo um produto de amida puro. Um só pico em LC-MS, (8mg, 100% de pureza, e não requereu nenhuma purificaçãoadicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 2,84 min (M+H) 424;

h) 2-{3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-5-metil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-N-metil-acetamida (40b) e 2-{3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-5-metil-2, 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-N, N-dimetil-acetamida (40c).<formula>formula see original document page 84</formula>

Em uma suspensão de 3- [2-fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-5-metil-2, 4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético (36A), (14 mg, 0,032 mmols) em DCM (0,5ml) foi adicionado HBTU (15 mg, 0,04 mmols), base de Hunig(0,85 mmols) e a amina apropriada (0,05 mmols). A mistura dareação foi agitada durante 18h e então foi submetida apurificação por HPLC preparativo.

<table>table see original document page 84</column></row><table>

* método Iong (ver acima).

i) 2-{3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil ) -fenil ] - 5,5 -dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il} -acetamida (40d).

<formula>formula see original document page 84</formula>(i) 3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]- 5,5 -dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético metil éster.

Em uma solução de {3-[ 2-fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin - 1 - ilmetil) - fenil] - 5,5 - dimetil -2,4-dioxo-imidazolidin-l-il } -ácido acético (36B)(0,044 g, 0,10 mmols)em metanol (2 ml) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado(0,25 ml) e aquecido a 70°C durante 90 minutos antes de serresfriado até a rt. A mistura da reação foi entãoconcentrada a vácuo, diluída com água (5 ml) e extraída comacetato de etila (2 χ 10 ml) . A camada orgânica foi entãosecada sobre sulfato de magnésio e foi concentrada a vácuopara produzir um óleo incolor. Um só pico em LC-MS (42 mg,91% de pureza) e não foi requerida nenhuma purificaçãoadicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 3,31 min (M+H) 453;

(ii) 2-{3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]- 5,5 -dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-acetamida (40d).

3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-5,5-dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il} - ácidoacético metil éster (0,025 g, 0,055 mmols) foi dissolvido emsolução de amônia 7N em metanol (3 ml, 21 mmols) e aquecidoem um tubo selado a 60°C durante 18h. A solução resultantefoi concentrada a vácuo e submetida a purificação por HPLCpreparativo.

<table>table see original document page 85</column></row><table>* método Iong (ver acima)

j ) 2-{3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]- 5,5-dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-N-metil-acetamida (40e) e 2-{3-[2-fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin - 1 - ilmetil) - fenil]- 5,5 - dimetil - 2,4-dioxo-imidazolidin -1-il}-N,N-dimetil-acetamida (4Of) .

<formula>formula see original document page 86</formula>

Em uma suspensão de {3-[2-fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin - 1 - ilmetil)-fenil]-5,5-dimetil-2,4-dioxo-imidazolidin-l-il}-ácido acético (36B) (20 mg, 0,045 mmols)em DCM (1 ml) foi adicionado HBTU (19 mg, 0,05 mmols), basede Hunig (0,85 mmols) e a amina apropriada (0,06 mmols). Amistura da reação foi agitada durante 18h e então foisubmetida à purificação por HPLC preparativo.

<table>table see original document page 86</column></row><table>

* método Iong (ver acima).Exemplo 7

<formula>formula see original document page 87</formula>

(a) 2 —{3—[2-Fluor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil ]-ureido} ácido succinico (42).

(i) em uma suspensão de 4-(3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (2) (1,4 g, 4,75 mmols) em DCM seco (30 ml)na presença de peneiras moleculares 4Â ativadas (ca 2 g) foiadicionado ácido DL-aspártico (0,60 g, 5,0 mmols), seguidopor trietilamina (10,0 mmols). A reação foi agitada natemperatura ambiente durante 18h. A mistura da reação foientão diluída com solução de bicarbonato (20 ml) e a misturafoi filtrada removendo o subproduto de uréia indesejável. Afase aquosa continha o composto título e foi lavada com DCM(2 χ 10 ml) . A camada aquosa foi então concentrada a vácuopara produzir um sólido bege, o HPLC mostrou que isto erauma mistura de componentes (41 & 42) .

(ii) A mistura de componentes (41 & 42) foidiluída com água (100 ml) e HCl (ca 1 ml, IN) e aquecida emum becher aberto, evaporando até a secura. Isto produziu umsólido marrom, LC-MS com mais de 90% de pureza para ocomposto título. Um só pico em LC-MS, (1,8 g, pureza de 90%)e não requereu nenhuma purificação adicional; m/z (LC-MS,ESP), RT= 3,54 min (M+H) 411.(b) Síntese de compostos de coleção

Em uma suspensão de -{1-[2-fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-l-ilmetil) -fenil]-2,5-dioxo-imidazolidin-4 -il} -ácido acético (42) (145 mg, 0,34 mmols) em DCM (5 ml)foi adicionado HBTU (0,32 g, 0,85 mmols), base de Hunig(0,85 mmols) e a amina apropriada (0,85 mmols). A mistura dareação foi agitada durante 18h na temperatura ambiente eentão foi purificada através de purificação por HPLCpreparativo.

<table>table see original document page 88</column></row><table><formula>formula see original document page 89</formula>

Exemplo 8

<formula>formula see original document page 89</formula>

(a) 2 —{3 —[2-Fluor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil) -fenil]-ureido} ácido propiônico (45).

Em uma suspensão de 4-(3-isocianato-benzil)-2H-ftalazin-l-ona (2) (1,4 g, 4,7 mmols) em DCM seco (40 ml)foi adicionado ácido D-aspartico (0,455 g, 5,0 mmols),seguido por trietilamina (1,4 ml, 10,0 mmols) . A reação foiagitada na temperatura ambiente durante 4 dias. A mistura dareação foi então filtrada. 0 filtrado foi então diluído comágua (20 ml) e lavado duas vezes com DCM (2 χ 20 ml) . Ascamadas combinadas de DCM foram secadas sobre sulfato desódio e então foram concentradas a vácuo para produzir umóleo cru que foi submetido a cromatograf ia por expansão,eluente de acetato de etila puro para remover as impurezas eentão 1:1 acetato de etila/metanol para remover o componentedesejado. (Rf de 0,2 em 1:1 acetato de etila metanol). Um sópico na análise LC-MS, (0,79 g) não requerendo nenhumapurificação adicional; m/z (LC-MS, ESP), RT= 2,70 (Μ+ H)38 4;

(b) 3-[2-Fluor-5-(4-oxo-3,4-diidro-ftalazin-1-ilmetil)-fenil]-5-metil-imidazolidina-2,4-diona (5b').

Em uma solução previamente misturada de cloreto detrimetil acetila (240 mg, 2,0 mmols) e trietilamina (0,35ml, 2,5 mmols) foi adicionado 2-{3-[2-fluor-5-(4-oxo-3, 4-diidro-ftalazin-l-ilmetil)-fenil]-ureido} ácido propiônico(45) (0,76 g, 2,0 mmols). A reação foi agitada natemperatura ambiente durante 4 dias com uma lenta progressãopara o produto desejado. A mistura da reação foi entãoconcentrada a vácuo e o material foi submetido a HPLCpreparativo (40 mg isoladas, pureza de 95%, RT (min):4,35) .

Exemplo 9

Para avaliar a ação inibidora dos compostos, foiutilizado o seguinte ensaio para a determinação dos valoresde IC50 (Dillon, et al., JBS., 8(3), 347 - 352 (2003)).

PARP de mamífero, isolado do extrato nuclear decélula Hela, foi incubado com solução tampão Z (25 mM deHepes (Sigma); 12,5 mM de MgCl2 (Sigma); 50 mM de KCl(Sigma); 1 mM DTT (Sigma); 10% de glicerol (Sigma) 0,001% deNP-40 (Sigma); pH 7,4) em placas de expansão com 96 poços(marca) (NEN, UK) e foram adicionadas concentrações variadasdos referidos inibidores. Todos os compostos foram diluídosem DMSO e produziram concentrações finais de ensaio entre 10e 0,01 μΜ, com o DMSO estando em uma concentração final de1% por poço. O volume total do ensaio por poço foi de 40 μΐ.

Depois de 10 minutos de incubação a 30 ° C asreações foram iniciadas pela adição de uma mistura da reaçãode 10 μl, contendo NAD (5 μΜ), 3H-NAD e 30 mer oligos de DNAcom segmentos duplos. Os poços designados de reação positivae negativa foram feitos em combinação com os poços docomposto (não conhecidos) para se calcular a percentagem deatividade das enzimas. As placas foram então agitadasdurante 2 minutos e incubadas a 30°C durante 45 minutos.

Após a incubação, as reações foram resfriadas pelaadição de 50 μΐ de ácido acético a 30% em cada poço. Asplacas foram então agitadas durante 1 hora na temperaturaambiente.

As placas foram transferidas para um TopCount NXT(marca comercial) (Packard, UK) para a contagem decintilação. Os valores registrados são contagens por minuto(cpm) após uma contagem de 30 segundos em cada poço.

A % de atividade da enzima para cada composto éentão calculada utilizando-se a seguinte equação:<formula>formula see original document page 92</formula>

Os valores de IC50 (a concentração na qual 50% daatividade da enzima é inibida) foram calculados, os quaissão determinados ao longo de uma faixa de concentraçõesdiferentes, normalmente de 10 μΜ para baixo até 0,001 μΜ.

Tais valores de IC50 são utilizados como valorescomparativos para a identificação das potências aumentadasdo composto.

Todos os compostos testados tinham um IC50 menor doque 0,1 μΜ. Os compostos seguintes tinham um IC50 menor doque 0,01 μΜ: 5e-5j, 9a, 9c, 13a-d, 35B, 37Aa-Ac, 37Ba, 37Bb,37Be-Bg, 37Bi, 37B1, 39, 40a, 43a, 43c, 43d, 43f, 43g, 5b'.

0 fator de potenciação (PF50) para os compostos écalculado como a relação do crescimento da célula decontrole do IC50 dividido pelo crescimento da célula do IC50+0 inibidor de PARP. As curvas de inibição de crescimentopara ambas as células do controle e do composto tratadoestão na presença do agente alquilante metanosulfonato demetila (MMS). Os compostos de teste foram utilizados em umaconcentração fixada de 0,2 ou 0,5 micromolar. Asconcentrações de MMS eram ao longo de uma faixa de 0 a 10μg/ml. 0 crescimento da célula foi avaliado utilizando-se oensaio de sulforodamina B (SRB) (Skehan, P., et al., (1990)novo ensaio de citotoxidez colorimétrica para a pesquisa defármacos anti-cancer. J. Nati. Câncer Inst. 82, 11071112). 2000 células HeLa foram semeadas em cada poço de umaplaca de microtitulação com 96 poços com fundo plano em umvolume de 100 μΐ e incubadas durante 6h a 37°C. As célulasforam substituídas somente com o meio ou com o meio contendoo inibidor de PARP em uma concentração final de 0,5, 1 ou 5μΜ. As células foram deixadas crescerem por mais Ih antes daadição de MMS com uma faixa de concentrações (tipicamente 0,1, 2, 3, 5, 7 e 10 μς/πιΐ) para células não tratadas ou paracélulas tratadas pelo inibidor de PARP. As células tratadascom o inibidor de PARP sozinho foram usadas para a avaliaçãoda inibição do crescimento pelo inibidor de PARP.

As células foram deixadas em repouso por mais 16hantes da substituição do meio permitindo que as células sedesenvolvessem por mais 72h a 37°C. O meio foi entãoremovido e as células foram fixadas com 100 μΐ de ácidotricloroacético a 10% (peso/volume) resfriado por gelo. Asplacas foram incubadas a 40C durante 20 minutos e entãolavadas 4 vezes com água. Cada poço de células foi entãomanchado com 100 μΐ de SRB a 0,4% (peso/volume) em ácidoacético a 1% durante 20 minutos antes da lavagem quatrovezes com ácido acético a 1%. As placas foram então secadasdurante 2h na temperatura ambiente. O corante das célulasmanchadas foi solubilizado pela adição de 100 μΐ de baseTris 10 mM em cada poço. As placas foram agitadas suavementee deixadas na temperatura ambiente durante 30 minutos antesda medição da densidade ótica a 564 nM em um leitor de placade microtitulação Microquant.

A maioria dos compostos testados tinham um PF5O a200 nM de 1 ou mais.Ensaio de Solubilidade

Um ensaio típico que poderia ser utilizado paraavaliar a solubilidade dos compostos da invenção atual écomo se segue. A solubilidade do composto é avaliada em águae solução salina tamponada por fosfato (pbs) em um pH de7,4. As amostras foram todas equilibradas no solvente (comagitação) durante 20h na temperatura ambiente. Depoisdaquele período, as amostras serão examinadas visualmentepara a determinação da presença/ausência de sólidos nãodissolvidos. As amostras serão centrifugadas ou filtradasconforme seja necessário para a remoção de materialinsolúvel, e a solução é analisada para a determinação dasolubilidade do DS, diluindo ambas as amostras aquosa e deDMSO até uma concentração semelhante com DMSO. A área dopico obtido por HPLC (utilizando o detector de serie dediodo) da amostra será comparado com a área do pico dasolução de DMSO (diluída até a mesma concentração que aamostra) e quantificada levando-se em conta o peso daamostra utilizado para a dissolução inicial. Será assumidoque a amostra será completamente solúvel em DMSO nos níveisutilizados para o teste.

Comparando-se a relação entre as áreas de pico, esabendo-se a concentração das amostras originais, poderá sercalculada a solubilidade.

Preparação de Amostras

Cerca de 1 mg da amostra é pesada com precisão emum frasco de vidro de 4 ml e exatamente 1,0 ml de água,solução tampão aquosa ou DMSO, é adicionada na mesma atravésde pipeta. Cada frasco é ultrasonicado durante até 2 minutospara auxiliar a solubilização do sólido. As amostras sãoretidas na temperatura ambiente durante 20h, e são agitadasem um agitador orbital. Os frascos são examinados depoisdeste período para a determinação da presença/ausência desólidos não dissolvidos. As amostras devem ser centrifugadasou filtradas através de um filtro de 0,45 μπι, para remover omaterial insolúvel, se necessário, e o filtrado é analisadopara determinar a concentração do composto em solução,depois da diluição de todas as amostras, conforme sejaapropriado, com DMSO. São injetados 20 μΐ no HPLC utilizandoo método mostrado abaixo, injetando todas as amostras emduplicata. A solubilidade máxima que pode ser determinadautilizando este método é nominalmente 1,0 mg/ml, o pesoconsiderado é dividido pelo volume do solvente utilizado.

Técnicas Analíticas

As amostras são submetidas a LC/MS utilizando uminstrumento Waters Micromass ZQ (ou equivalente) comparâmetros de teste tipicamente como se segue.

Waters Micromass SQ no modo de íon positivo.

Varredura m/z 100 a 800

Fase móvel A - ácido fórmico aquoso a 0,1%.

Fase móvel B - ácido fórmico a 0,1% emacetonitrila

Coluna - coluna Jones Chromatography Genesis 4μC18, 4,6 χ 50 mm

Vazão: 2,0 ml/min

Volume de injeção: injeção de 30 μΐ em um circuitode 20 μl.

Gradiente - começando a 95% A/ em 5% de B, eelevando até 95% de B depois de 4 minutos, mantendo durante4 minutos, e então voltando para as condições iniciais,(isto poderá ser modificado, se necessário, para a obtençãode uma separação melhor dos picos).

Varredura de detecção de PDA de 210 a 400 nm.

Quantificação de Amostras

O exame inicial dos frascos de amostra contendo adiluição aquosa indica se o composto é ou não é solúvelnaquela solução tampão naquela concentração. Se ele não ésolúvel, isto poderia ser refletido na concentração obtidana solução por intermédio de HPLC/MS. Se a solução é clara,então a concentração no solvente aquoso deve ser semelhanteàquela no DMSO, a não ser que tenha ocorrido a degradação docomposto; isto deve ser visível no cromatograma.

Supõe-se que as amostras serão completamentesolúveis em DMSO, e dessa forma o tamanho do pico obtido apartir daquela amostras refletirá 100% de solubilidade.Assumindo-se que as diluições de todas as amostras eram asmesmas, então a solubilidade em mg/ml = (área da solução depbs/área da solução de DMSO) χ (peso original nasolução/diluição de DMSO).

Ensaio de Estabilidade

Um ensaio típico que poderá ser utilizado paraavaliar a estabilidade dos compostos da invenção atual écomo se segue. A estabilidade dos compostos é avaliada emvárias soluções aquosas e solução salina tamponada porfosfato (pbs). As amostras serão testadas em um pH nominalde 2, 7, 4 (pbs) e 9. Estes valores são escolhidos pararefletirem as condições encontradas no intestino grossodurante a digestão (pH em torno de 2 até cerca de um pH 9),e no plasma do sangue (pH nominal 7,4) . As amostras sãodissolvidas em metanol/DMSO para preparar uma solução deestoque. A solução de estoque é então diluída para produzirsoluções aquosas em um pH nominal de 2, 7,4 e 9. As amostrassão analisadas imediatamente para produzirem valoresiniciais para a pureza e compostos relacionados possíveis.As amostras são então retidas na (usualmente) temperaturaambiente, e analisadas outra vez depois de 2h, 6h, 24h e 2dias (nominal).

A estabilidade dos compostos nesta solução tampãoaquosa durante o período de teste pode ser avaliada porcomparação do cromatograma da amostra no início com aquelana solução tampão aquosa depois de um período determinado detempo.

Preparação e Análise de Amostras

Cerca de 5 - 6 mg da amostra são medidos comprecisão em um frasco de vidro de 4 ml e são adicionadosaproximadamente 2 ml de metanol. Se a solução não estácompleta neste solvente orgânico, são adicionados mais 0,5 -1,0 ml de DMSO; a concentração final da solução deve ser emtorno de 2,0 mg/ml. Esta solução orgânica de 2 mg/ml é entãodiluída 1 + 3 com (a) água, para utilização como amostra"inicial", (b) HCl muito diluído com pH em torno de 2, (c)pbs em um pH de 7,4, e (d) NaOH muito diluído com um pH emtorno de 9. 0 pH de cada diluição é então verificado eregistrado; se ele não está próximo do valor desejado, o pHpoderá ser ajustado com ácido diluído ou álcali, conformeseja apropriado. Estas diluições são feitas em intervalosapós a amostra "inicial", para permitir o retardo devido áanálise de HPLC. Todas as amostras devem ser diluídas a50/50 com DMSO antes da injeção no HPLC.

As amostras inicialmente são retidas natemperatura ambiente durante 2h, e então tais sub-amostrasconforme acima são diluídas a 50/50 com DMSO antes dainjeção. São injetados 20 μl no HPLC utilizando o métodomostrado abaixo, injetando-se todas as amostras emduplicata. 0 procedimento acima é repetido depois de 6h, 24he 2 dias (intervalos de tempo nominais)

Técnicas Analíticas

As amostras serão submetidas a LC/MS utilizando uminstrumento Waters Micromass ZQ (ou equivalente) comparâmetros de teste tipicamente como se segue.

Waters Micromass ZQ no modo de íon positivo.

Varredura a partir de m/z 150 a 900

Fase móvel A - ácido fórmico aquoso a 0,1%

Fase móvel B - ácido fórmico a 0,1% emacetonitrila

Coluna - coluna Jones Chromatography Genesis 4 μC10, 4,6 x 50 mm

Vazão de 2,0 ml/min

Volume de injeção de 30 μΐ de injeção em umcircuito de 20 μΐ.Gradiente - começando a 95% de A/5% de B,elevando-se até 95% de B depois de 5 minutos, mantendo-se ládurante 4 minutos, e então retornando para as condiçõesiniciais (isto poderá ser modificado, se necessário, paraobter-se uma melhor separação de picos).

Varredura de detecção de PDA de 210 a 400 nm

Avaliação de Estabilidade

As áreas de pico do cromatograma das amostras dosvários pHs são comparadas depois de um determinado intervalode tempo com aquelas da análise inicial no tempo zero. Opico DS deve ser quantificado como uma percentagem daamostra inicial, e os valores devem ser tabulados.

Claims

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ter afórmula (1):<formula>formula see original document page 100</formula>onde:A e B em conjunto representam um anel aromáticofundido, opcionalmente substituído;D é escolhido de:<formula>formula see original document page 100</formula>onde Y1 é escolhido de CH e N, Y2 éescolhido de CH e N, Y3 é escolhido de CH, CF e N; e(ii)<formula>formula see original document page 100</formula>e Q , onde Q é O ou S;<formula>formula see original document page 100</formula>ondeRn1 é escolhido de H e alquila C1-10 opcionalmente substituída;X é escolhido de uma ligação simples, de NRn2,CRc3Rc4 e C=O;Rn2 é escolhido de H e alquila C1-10 opcionalmentesubstituída;Rc3 e Rc4 são escolhidos independentemente de H, R,C(=0)0R, onde R é alquila C1-10 opcionalmente substituída,arila C5-20 opcionalmente substituída ou heterociclila C3-2oopcionalmente substituída;Y é escolhido de NRn3 e CRclRc2;Rcl e Rc2 são escolhidos independentemente de H, R,C(=0)0R, onde R é alquila C1-10 opcionalmente substituída,arila C5-20 opcionalmente substituída, heterociclila C3-20opcionalmente substituído; Rcl e Rc2 em conjunto com o átomode carbono no qual eles são ligados poderão formar um anelcarbocíclico ou heterocíclico C5-7 espiro-fundidoopcionalmente substituído; equando X é uma ligação simples, Rn1 e Rc2 poderão,em conjunto com os átomos NeC nos quais eles são ligados,formar um anel heterocíclico C5-7 opcionalmente substituído;e quando X é CRc3Rc4, Rc2 e Rc4 poderão em conjuntoformar uma ligação adicional, de forma que haja uma duplaligação entre os átomos substituídos por Rcl e Rc3.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato do anel aromático fundidorepresentado por -A-B- ser benzeno.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2,CARACTERIZADO pelo fato do anel de benzeno fundido sersubstituído por halógeno.

4. Composto, de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de D serescolhido de fenileno, fluor-fenileno, piridileno, fluor-piridileno, furanileno e tiofenileno.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de D ser escolhido de:

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5,CARACTERIZADO pelo fato de D ser escolhido de:

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6,CARACTERIZADO pelo fato de D ser:

8. Composto, de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 7, CARACTERIZADO pelo fato de X serescolhido de uma ligação simples, de NRn2 e CRc3Rc4 e Y serCRclRc2.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 8,CARACTERIZADO pelo fato de X ser uma ligação simples.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 9,CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um dos Rn1, Rcl e Rc2não ser hidrogênio.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 9 oureivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos umdos Rcl e Rc2 ser escolhido de alquila C1_4.

12. Composto, de acordo com qualquer dasreivindicações 9 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de Rn1 seralquila C1_4, substituído no seu final com umacarboxila,grupo amido ou grupo éster.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 12,CARACTERIZADO pelo fato do substituinte de amino do referidogrupo amido, em conjunto com o átomo de nitrogênio no qualeles são ligados, é cíclico.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 8,CARACTERIZADO pelo fato de X ser Nr2, e Rcl, Rc2 e Rn2 seremH.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 8,CARACTERIZADO pelo fato de X ser CRc3Rc4 , e Rcl, Rc2, Rc3 e Rc4serem H.

16. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelofato de compreender um composto de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 15 e um veículo ou diluentefarmaceuticamente aceitáveis.

17. Uso de um composto, de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de ser napreparação de um medicamento para o tratamento de um corpode ser humano ou de animal.

18. Uso de um composto, de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de ser napreparação de um medicamento para: (a) prevenir a formação de cadeia de poli(ADP-ribose) através da inibição da atividade de PARP (PARP-Ie/ou PARP-2)celular; (b) o tratamento de: doença vascular; choqueséptico; danos isquêmicos, tanto cerebral comocardiovascular; danos de reperfusão, tanto cerebral comocardiovascular; neuro- toxidez, incluindo tratamentos agudose crônicos para AVC e doença de Parkinson; choquehemorrágico; doenças inflamatórias, como artrite e, doençainflamatória do intestino delgado, colite ulcerativa edoença de Crohn; esclerose múltipla; e efeitos secundáriosde diabetes; assim como o tratamento agudo de citotoxidezapós cirurgia cardiovascular ou doenças melhoradas pelainibição da atividade de PARP; (c) uso como um auxiliar na terapia do câncer oupara a potenciação de células de tumor para o tratamento comradiação ionizante ou agentes quimioterapêuticos.

19. Uso de um composto de acordo com qualquer dasreivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de ser napreparação de um medicamento para o tratamento de câncer queé deficiente em Recombinação Homóloga (HR) dependente daatividade de reparo (DSB) de ruptura de segmento duplo deDNA.

20. Método de tratamento de uma doença melhoradapela inibição de PARP, CARACTERIZADO pelo fato de sercomposto da administração a um indivíduo necessitando detratamento de uma quantidade terapeuticamente efetiva de umcomposto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 15.