BRPI0618024A2

BRPI0618024A2 - fármaco terapêutico para supressão de funções de células nkt o qual contém derivado de glicolipìdeo como ingrediente ativo

Info

Publication number: BRPI0618024A2
Application number: BRPI0618024-8A
Authority: BR
Inventors: Sachiko Miyake; Takashi Yamamura; Hirokazu Annoura
Original assignee: Japan Government; Asubio Pharma Co Ltd
Priority date: 2005-10-28
Filing date: 2006-10-27
Publication date: 2011-08-16
Also published as: CA2627640A1; JPWO2007049819A1; EP1952814A1; CN101316599A; WO2007049819A1; US20090048185A1; KR20080059611A

Abstract

<B>FáRMACO TERAPêUTICO PARA SUPRESSãO DE FUNçõES DE CéLULAS NKT O QUAL CONTéM DERIVADO DE GLICOLIPìDEO COMO INGREDIENTE ATIVO<D>. A presente invenção refere-se a um fármaco terapêutico para doenças em que células NKT ou estímulo de células NKT são envolvidos na deterioração de condições de doença contendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo que apresenta a fórmula (I): em que R^ 1^ indica um resíduo de aldopiranose, R~ 2~ indica um átomo de hidrogênio ou um grupo hidróxi, A indica -OH~ 2~-, -CH(OH)-CH~ 2~- ou -CH=CHCH~ 2~-, x indica um número inteiro de 13 a 16 e y indica um número inteiro de O a 25, ou seu hidrato ou solvato farmacologicamente aceitável.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "FÁRMACOTERAPÊUTICO PARA SUPRESSÃO DE FUNÇÕES DE CÉLULAS NKT OQUAL CONTÉM DERIVADO DE GLICOLIPÍDEO COMO INGREDIENTEATIVO".

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se a um novo derivado de glicolipí-deo útil para doenças inflamatórias crônicas tais como esclerose múltipla,miastenia grave, artrite reumatóide crônica, artrite reumatóide juvenil, gotaprimária, lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjorgen, esclerodermasistêmico, doença do tecido conectivo misto, diabetes dependente de insuli-na, púrpura trombocitopênica idiopática, tireoidite de Hashimoto, doença deBasedow, anemia perniciosa, doença de Addison, gastrite atrópica, anemiahemolítica, colite ulcerativa, doença de Crohn, hepatite auto-imune, pênfigo,penfigóide, síndrome de vascuiiíe, anemia hemolítica auto-imune, síndromede Goodpasture, doença de Behçet, sarcoidose, rejeição a transplante deórgão e doenças alérgicas tais como doenças inflamatórias e asma brônqui-ca, asma atópica, dermatite atópica, rinite alérgica, erupção urticária, febredo feno, alergia a fármaco, dermatite de contato e outras doenças alérgicase rejeição a transplante de órgão, e ao hidrato e solvato farmacologicamenteaceitáveis desse derivado e um fármaco que os contém.

Técnica Anterior

Um sistema imune distingue inerentemente homogêneo e não-homogêneo e mantém a homeostase do corpo mediante exclusão de com-ponentes não-homogêneos por meio de uma resposta imune e indução deinsensibilidade imunológica contra componentes homogêneos. Doenças au-to-imunes são consideradas como uma condição em que a ruptura da insen-sibilidade imunológica contra antígenos homogêneos leva ao ataque imuno-lógico a componentes homogêneos, enquanto alergia é considerada comouma condição em que a resposta imune contra antígenos não-homogêneos(isto é, antígenos estranhos) induz problemas no corpo devido à respostaexcessiva.

O método de tratamento convencional para doenças inflamató-rias crônicas, incluindo doenças auto-imunes e doenças alérgicas, concen-tra-se principalmente em terapia imunossupressora não-específica que en-volve glicocorticóides e imunossupressores. Uma vez que esses métodos detratamento apresentam muitos efeitos colaterais, desenvolvimento de imu-nossupressores específicos a auto-antígenos tem sido intensamente deseja-do. Tratamentos com peptídeos auto-antígenos foram recentemente testa-dos com esse objetivo em mente. Uma vez que peptídeos apresentam-seem complexos genéticos de grande histocompatibilidade (MHC) ricos empolimorfismo, há notáveis diferenças individuais de eficácia. Embora hajacasos aperfeiçoados, há também casos grandemente deteriorados. Essesresultados mostram claramente a dificuldade na aplicação clínica do trata-mento com peptídeos.

Células NKT são linfócitos que expressam tanto marcador decélulas NK (isto é, receptores de NKT) quanto receptor de antígenos de célu-las T (TCR).Embora células T reconheçam peptídeos ligados a antígeno degrande histocompabitilidade (MHC), células NKT reconhecem como antíge-nos glicolipídeos apresentados por moléculas CD1d não-polimórficas. Célu-las NKT produzem uma grande quantidade de citocinas em um período detempo extremamente curto, quando estimuladas por meio de TCR.

Por exemplo, a α-galactosil ceramida (α-GC) que apresenta afórmula (II):

<formula>formula see original document page 3</formula>

tem sido relatada como o primeiro Iigante de glicolipídeo a ativar seletiva-mente células NKT restringidas por CD1d. Tem sido mostrado que α-GC e-xibe uma atividade antitumor e atividades imunoestimuladoras (vide T. Ka-wano e outros, Proc. NatL Acad. Sei. USA, 1998, 95, 5690, e Patente Japo-nesa No. 3088461). Adicionalmente, os presentes inventores relataram queo OCH que apresenta a fórmula (III) encurtada no comprimento da cadeia decarbonos da base esfingosina de α-GC:<formula>formula see original document page 4</formula>

promove a produção da citocina tipo Th2 e desloca o equilíbrio imuneTh1/Th2 para Th2, e, portanto, exibe alta eficácia na supressão de doençasno modelo animal de esclerose múltipla: encefalomielite auto-imune de muri-no experimental (EAE) e o modelo animal de artrite reumatóide: artrite indu-zida por colágeno (CIA) (vide K. Miyamoto e outros, Nature 2001, 413, 531,A. Chiba e outros, Arthritis fíheum. 2004, 50, 305, T. Yamamura e outros,Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 561, e W02003/016326). Isto é, a expres-são da ação do OCH que apresenta a fórmula (III) no animal com doençaauto-imune acima pode ser explicada com base na "supressão ativa" pelaprodução das citocinas inibidoras tipo Th2 das células NKT responsáveis porresposta imune.

Por outro lado, tem sido relatado que células NKT atuam comocélulas efetuadoras envolvidas na deterioração de condições de doença emmodelos de doenças auto-imunes tais como modelos de artrite e de asmabronquial (vide O. Akbari e outros, Curr. Opin. Immunol. 2003, 15, 627). Por-tanto, em uma condição de doença tal como esta, se um tratamento comfármaco que suprime a função de células NKT pudesse ser estabelecido,esse tratamento levaria não só à prevenção e tratamento de doenças auto-imunes mas também ao tratamento de doenças alérgicas. Entretanto, não seconhece ainda nenhum fármaco eficaz em suprimir a função de células NKT.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Em vista das circunstâncias acima, o objetivo da presente inven-ção é proporcionar um fármaco terapêutico que suprima a função de célulasNKT para, desse modo, ser eficaz contra doenças inflamatórias crônicas,doenças alérgicas e outras doenças em que se sabe que células NKT sãoenvolvidas na deterioração das condições de doença.

Um outro objetivo da presente invenção é proporcionar um novoderivado de glicolipídeo (I) que atue como Iigante de células NKT restringi-das por CD1d, mas que substancialmente não induza produção de citocinastais como IL-4, IFN-γ ou outra citocina a partir das células NKT e seja útilcomo os produtos farmacêuticos acima e seu hidrato e solvato farmacologi-camente aceitáveis.

Os presentes inventores sintetizaram glicolipídeos que podem con-trolar a resposta auto-imune e desenvolveram um fármaco terapêutico para otratamento de doenças auto-imunes (W02003/016326; W02004/072091; KarlO., A. Yu e outros, Proc. Nati Acad. Sei. USA, 2005, 102, 3383). Entre ou-tras coisas, os presentes inventores descobriram que, em um derivado queapresenta o comprimento da cadeia de carbonos da base esfingosina doglicolipídeo mais longo do que α-GC (II), um efeito supressor surpreenden-temente intenso da artrite induzida por anticorpos é expresso por um deriva-do de glicolipídeo (daqui por diante referido como "SGL (glicolipídeo supres-sor)") que apresenta a fórmula (I):

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que R1 indica um resíduo de aldopiranose, R2 indica um átomo de hidro-gênio ou um grupo hidroxila, A indica -CH2-, -CH(OH)-CH2- ou -CH=CHCH2-,χ indica um número inteiro de 13 a 16 e y indica um número inteiro de O a25.

O SGL que apresenta a fórmula (I) induz uma ligeira proliferaçãode células NKT e ligeira produção de IFN-γ ou outras citocinas, mas nota-velmente suprime a resposta a reestimulação de células NKT após o pré-tratamento do SGL (isto é, insensibilidade imunológica). Relata-se que ummodelo de artrite induzida por anticorpos desenvolve o início de artrite emcamundongos sem células NKT (J. Exp. Med. 2005, 201, 41-7; ArthritisRheum. 2005, 52, 1941), mas os glicolipídeos descritos na presente inven-ção suprimem fortemente o início da artrite. Adicionalmente, o SGL que a-presenta a fórmula (I) suprime infiltração celular principalmente compreendi-da de eosinófilos nas vias aéreas no modelo animal de asma bronquial, su-prime a produção de IL-5, IL-13 e outras citocinas em lavagens de alvéolos esuprime sensibilidade das vias aéreas. Isto é, os presentes inventores des-cobriram que o SGL que apresenta a fórmula (I) é um derivado de glicolipí-deo eficaz capaz de suprimir a resposta inflamatória induzida por auto-anticorpos e pode formar um ingrediente fármaco terapêutico para doençasauto-imunes tais como artrite auto-imune e doenças alérgicas tal como asmabronquial e, portanto, atinge o objetivo da presente invenção.DESCRIÇÃO CONCISA DOS DESENHOS

A presente invenção será agora explicada com referência aosdesenhos, nos quais:

A figura 1 é um gráfico que mostra os efeitos supressores (regis-tro clínico) de derivados de glicolipídeo sintetizados sobre artrite transferidapor soro K/BxN.

A figura 2 é um gráfico que mostra o efeito (registro clínico) dederivados de glicolipídeo sintetizados sobre artrite transferida por soro K/BxNinduzida em camundongos com deficiência no gene Ja18 que não apresen-tam quaisquer células NKT.

A figura 3 é um gráfico que mostra os efeitos supressores (regis-tro clínico) de derivados de glicolipídeo sintetizados sobre artrite induzida porcolágeno.

A figura 4 é um gráfico que mostra os efeitos supressores dospresentes compostos sobre células NKT.

A figura 5 é um gráfico que mostra os efeitos sobre células NKTde pré-administração do presente composto.

A figura 6 é um gráfico que mostra os efeitos supressores deinfiltração celular em lavagens de alvéolos em um modelo de asma bronquialdo presente composto.

A figura 7 é um gráfico que mostra os efeitos supressores decitocina em lavagens de alvéolos em um modelo de asma bronquial do pre-sente composto.

A figura 8 é um gráfico que mostra os efeitos supressores dopresente composto sobre materiais patológicos pulmonares em um modelode asma bronquial.A figura 9 é um gráfico que mostra os efeitos supressores decitocina em lavagens de alvéolos em um modelo de asma bronquial do pre-sente composto.

MODALIDADE PREFERIDA PARA REALIZAÇÃO DA INVEN-

ÇÃO

Na presente invenção, como doenças inflamatórias crônicas, porexemplo esclerose múltipla, miastenia grave, artrite reumatóide crônica, artri-te reumatóide juvenil, gota primária, lúpus eritematoso sistêmico, síndromede Sjorgen, escleroderma sistêmico, doença do tecido conectivo misto, dia-betes dependente de insulina, púrpura trombocitopênica idiopática, tireoiditede Hashimoto, doença de Basedow, anemia perniciosa, doença de Addison,gastrite atrópica, anemia hemolítica, colite ulcerativa, doença de Crohn, he-patite auto-imune, pênfigo, penfigóide, síndrome de vasculite, anemia hemo-lítica auto-imune, síndrome de Goodpasture, doença de Behçet, sarcoidose,rejeição a transplante de órgão, etc. poderão ser mencionados. Adicional-mente, como doenças alérgicas na presente invenção, por exemplo, asmabrônquica, asma atópica, dermatite atópica, rinite alérgica, erupção urticária,febre do feno, alergia a fármaco, dermatite de contato, etc. poderão sermencionadas.

No composto da presente invenção que apresenta a fórmula (I):

<formula>formula see original document page 7</formula>

em que R1, R2, A, χ e y são como definido acima; como exemplos preferíveisdo resíduo de aldopiranose indicado por R1, a-D-glicosila, α-D-galactosila, a-D-manosila, β-D-glicosila, β-D-galactosila, β-D-manosila, 2-desóxi-2-amino-α-D-galactosila, 2-desóxi-2-amino-3-D-galactosila, 2-desóxi-2-acetilamino-a-D-galactosila, 2-desóxi-2-acetilamino^-D-galactosila, β-D-alopiranosila, β-D-altropiranosila, β-D-indosila, etc. poderão ser mencionadas; particularmentede preferência α substituintes tais como a-D-glicosila, α-D-galactosila, a-D-manosila, 2-desóxi-2-amino-a-D-galactosila, 2-desóxi-2-acetilamino-a-D-galactosila poderão ser mencionados. R2 indica um átomo de hidrogênio ougrupo hidróxi, mas é preferencialmente um átomo de hidrogênio. A indica -CH2-, -CH(OH)-CH2- ou -CH=CHCH2-, mas é preferencialmente -CH2- ou -CH(OH)-CH2-, particularmente de preferência -CH(OH)-CH2-. χ indica um número inteirode 13 a 16, mas é preferencialmente um número inteiro de 14 a 16. y indica umnúmero inteiro de O a 25, mas é preferencialmente 15 a 25, mais preferencial-mente 18 a 25, ainda mais preferencialmente um número inteiro de 20 a 25.

Entre os compostos que apresentam a fórmula (I), os exemplosparticularmente preferíveis poderão ser listados como segue: isto é, 2-hexacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1 -0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol,2-pentacosanoilamino-1-0-a-D-gaiactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol,2-pentacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol,2-pentacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-pentacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol,2-tetracosanoilaminõ-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-tetracosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol, 2-tetracosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-tetracosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol, 2-heptacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-heptacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol,2-heptacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-heptacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol,2-octacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-octacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol, 2-octacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-octacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol, 2-nonacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-nonacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol, 2-nonacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-nonacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol,etc. poderão ser mencionados.

O glicolipídeo que apresenta a fórmula (I) poderá ser sintetizadopor meio de vários métodos, mas, por exemplo, pode ser sintetizado de a-cordo com os métodos descritos abaixo. Esses métodos serão explicadossucessivamente.

Primeiro, o composto (Via) é obtido de uma substância de parti-da conhecida (IVa) (W02004/072091; K. Murata e outros, J. Org. Chem.2005, 70, 2398). Em seguida, de acordo com um método conhecido (por e-xemplo, M. Morita e outros, J. Med. Chem. 1995, 38, 2176), são obtidos oscompostos (IVb) e (IVc), as partes de ligações duplas do composto (IVb) sãoentão reduzidas para que este seja convertido no composto (VIb) (etapa 1).Do composto (Via), (VIb) ou (IVc), é obtido o composto (Vila), (VIIb) ou (VIIc)(etapa 2), em seguida redução seletiva dos grupos azida e uma reação deamidação sãò usadas para obter o composto (VIlia), (VIIIb) ou (VIIIc) (etapa3). Uma reação de glicosilação do composto (Vila), (VIIb) ou (VIIc) e com-posto (IX) é então usada para obter o composto (Xa), (Xb) ou (Xc) (etapa 4).Redução seletiva dos grupos azida e uma reação de amidação do composto(Xa), (Xb) ou (Xc) são usadas para obter o composto (Xla), (XIb) ou (Xlc).Adicionalmente, o composto (Xla), (XIb) ou (XIc) pode ser obtido por meio deuma reação de glicossililação do composto (Vllla), (VIIIb) ou (VIIIc) e docomposto (IX) (etapa 5). Finalmente, os grupos protetores do composto (XI-a), (XIb) ou (XIc) podem ser removidos para obter composto (Ia) (etapa 6).

Etapa 1:

É possível sintetizar o composto (VIa) a partir do material de par-tida (IVa) conhecido. Adicionalmente, é possível obter os compostos (IVb) e(IVc) por meio de um método conhecido. O composto (IVb) pode ser conver-tido no composto (VIb).

<formula>formula see original document page 9</formula><formula>formula see original document page 10</formula>

em que Reduction = Redução; or= ou]

em que χ é como definido acima, R3 e R4 poderão ser os mesmos ou dife-rentes e indicam um átomo de hidrogênio, um grupo alquila substituído ounão-substituído por um grupo metila, grupo etila, grupo isopropila, grupo me-tóxi, grupo trifluormetila, átomo de cloro, átomo de flúor, etc., um grupo arilasubstituído ou não-substituído por um grupo metila, grupo etila, grupo iso-propila, grupo metóxi, grupo trifluormetila, grupo metoximetiia, átomo de clo-ro, átomo de flúor, átomo de bromo, átomo de iodo, grupo nitro, etc. ou umgrupo aralquila substituído ou não-substituído por um grupo metila, grupoetila, grupo isopropila, grupo metóxi, grupo trifluormetila, grupo metoximetiia,átomo de cloro, átomo de flúor, átomo de bromo, átomo de iodo, grupo nitro,etc., ou R3 e R4 juntamente se ligam para formar uma estrutura cíclica de umgrupo propileno, grupo butileno ou grupo pentileno, R5 indica um grupo ben-zila, grupo p-metoxibenzila, grupo p-nitrobenzila, grupo p-metoximetil-oxibenzila, grupo p-benziloxibenzila, grupo 3,4-dimetoxibenzila, grupo dife-nilmetila ou grupo di(p-nitrofenil)metila, M indica Li, MgCI, MgBr ou Mgl e ζindica um átomo de cloro, átomo de bromo ou átomo de iodo.

Na etapa do composto (IVa) ao composto (Via), em um solventeinerte tal como éter dietílico, tetraidrofurano, dioxano, tolueno, xileno, hexa-no, cicloexano ou um solvente misto destes contendo iodeto de cobre (I),brometo de cobre (I), cloreto de cobre (I) ou fluoreto de boro, 1 a 6 equiva-lentes de reagente de alquil lítio ou um reagente de Grignard foram adicio-nados ao composto (IVa) a -78°C a 0°C, preferencialmente -50°C a -10°C, amistura foi agitada à mesma temperatura, por exemplo por 1 a 5 horas, ocomposto (IVa) foi adicionado e em seguida a mistura adicionalmente agita-da por 1 a 5 horas para obter o composto (VIa) desejado. Adicionalmente, naetapa do composto (IVb) ao composto (Vlb), o composto (IVb) poderá seragitado em um solvente inerte tal como éter dietílico, dimetoxietano, tetrai-drofurano, dioxano, tolueno, xileno, acetato de etila, clorofórmio, diclorome-tano, metanol; água, etanol, álcool isopropílico ou os solventes mistos des-tes, opcionalmente na presença de uma base tal como acetato de sódio, a-cetato de potássio, carbonato de sódio, hidrogenocarbonato de sódio, junta-mente com hidrazina ou tosil-hidrazina, a 30°C a 150°C, ou é hidrogenadona presença de Pd-C, Pd-CaCO3-Pb, Pd-BaSO4, PtO2, etc. a temperaturaambiente, de modo a converter o composto (VIb) no composto (IVb).

O composto obtido por essa reação poderá ser diretamente usa-do como material para a etapa seguinte, mas, se necessário, um método depurificação geralmente utilizado, por exemplo recristalização ou cromatogra-fia de coluna, poderá também ser usado para purificação.

Etapa 2:

É possível converter o composto (VIa) obtido na etapa 1 nocomposto (Vila) ou (Vllb). Adicionalmente, é possível converter o composto(VIb) ou (VIc) obtido na etapa 1 no composto (Vllc).

<formula>formula see original document page 11</formula>

em que x e R5 são como definidos acima, R5 e R6 poderão ser os mesmosou diferentes e indicam um átomo de hidrogênio, um grupo alquila substituí-do ou não-substituído por um grupo metila, grupo etila, grupo isopropila, gru-po metóxi, grupo trifluormetila, átomo de cloro, átomo de flúor, etc., um grupoarila substituído ou não-substituído por um grupo metila, grupo etila, grupoisopropila, grupo metóxi, grupo trifluormetila, grupo metoximetila, átomo decloro, átomo de flúor, átomo de bromo, átomo de iodo, grupo nitro, etc. ouum grupo aralquila substituído ou não-substituído por um grupo metila, grupoetila, grupo isopropila, grupo metóxi, grupo trifluormetila, grupo metoximetila,átomo de cloro, átomo de flúor, átomo de bromo, átomo de iodo, grupo nitro,etc., ou R5 e R6 juntamente se ligam para formar uma estrutura cíclica de umgrupo propileno, grupo butileno ou grupo pentileno, e A' indica -CH2- ou -CH=CHCH2-.

O composto (VIa) poderá ser reagido em um solvente inerte talcomo cloreto de metileno, 1,2-dicloroetano, clorofórmio, tetracloreto de car-bono, acetonitrila, éter dietílico, tetraidrofurano, dioxano, benzeno, tolueno,xileno, acetato de etila, na presença de uma base tal como trietilamina, dii-sopropiletilamina, piridina, carbonato de sódio, hidrogenocarbonato de sódio,carbonato de potássio, hidrogenocarbonato de potássio a -20°C a 100°C,preferencialmente -10°C a 80°C, com 1 a 5 equivalentes de um agente desulfonilação tal como cloreto de metanossulfonila, anidrido de metanossulfo-nato, cloreto de etanossulfonila, cloreto de 1-propanossulfonila, cloreto de 1-butanossulfonila, cloreto de trifluormetanossulfonila, cloreto de a-toluenos-sulfonila, cloreto de benzenossulfonila, cloreto de p-toluenossulfonila, anidri-do de p-toluenossulfonato, cloreto de 4-metoxibenzenossulfonila, cloreto de4-clorobenzenossulfonila, cloreto de 2-nitrobenzenossulfonila, cloreto de 3-nitrobenzenossulfonila, cloreto de 4-nitrobenzenossulfonila, por exemplo, por1 a 72 horas, e desacetalado por meio de um método comum. Para as con-dições de desacetalação, muitos métodos descritos in "Protective Groups inOrganic Synthesis" (John Wiley & Sons), etc. poderão ser utilizados. Por e-xemplo, o composto poderá ser agitado em uma mistura de um ácido inor-gânico ou ácido orgânico tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido ní-trico, ácido acético, ácido trifluoracético, ácido metanossulfônico, ácido triflu-ormetanossulfônico e um solvente inerte tal como metanol, etanol, 2-propanol, dioxano, cloreto de metileno, 1,2-dicloroetano, clorofórmio, tetra-cloreto de carbono, benzeno, tolueno, xileno, a -10°C a 100°C, preferencial-mente 0 a 50°C, de modo a obter a substância desejada. Em seguida, ocomposto assim obtido é reagido em um solvente inerte tal como acetonitrila,éter dietílico, tetraidrofurano, dioxano, benzeno, tolueno, xileno, sulfóxido dedimetila, dimetilformamida, com 1 a 50 equivalentes de azida de sódio e/ouazida de lítio a 0 a 200°C, preferencialmente 20 a 120°C. Então, se necessá-rio, uma base tal como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, carbonatode sódio, hidrogenocarbonato de sódio, carbonato de potássio, hidrogeno-carbonato de potássio poderá ser adicionada. O composto assim obtido éacetaladó para obter o composto (Vila). Como condições de acetal, os váriosmétodos descritos in "Protective Groups in Organic Synthesis" (John Wiley &Sons), etc. poderão ser utilizados. Isto é, o composto poderá ser reagido napresença de um ácido orgânico ou ácido inorgânico, sob condições sem sol-vente, ou em um solvente inerte tal como éter dietílico, dioxano, benzeno,tolueno, xileno, com um reagente de acetalação, a 0 a 200°C, preferencial-mente 20 a 120°C, de modo a obter o composto (Vila) desejado. Então, co-mo reagentes de acetalação, ace tona, 2,2-dimetoxipropano, 2-metoxipropano, 2-etoxipropano, benzaldeído, benzaldeído dimetil acetal,cicloexanoná, cicloexanona dimetilacetal, ciclopentanona, ciclopentanonadimetilacetal, etc. poderão ser usados. Adicionalmente, o composto obtidoapós a azidação pode ser tritilado no grupo hidroxila primário, em seguida teros outros grupos hidroxila secundários arilmetilados; em seguida, pode serdestritilado de modo a obter o composto (Vllb). Como condições de tritilação,por exemplo, as condições de reação de 0,8 a 2 equivalentes de um solven-te inerte tal como brometo de tritila ou cloreto de tritila em éter dietílico, te-traidrofurano, dioxano, benzeno, tolueno, xileno, dimetilformamida, sulfóxidode dimetila, na presença de uma base tal como carbonato de lítio, carbonatode potássio, carbonato de sódio, hidrogenocarbonato de sódio, hidrogeno-carbonato de potássio, hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, hidróxido depotássio, hidreto de potássio, sódio, potássio, trietilamina, diisopropil etilami-na, piridina, lutidina, a -50°C a 120°C, preferencialmente -20°C a 80°C, pode-rão ser mencionadas. Adicionalmente, como agente de arilmetilação, cloretode benzila, brometo de benzila, cloreto de p-metoxibenzila, cloreto de m-metoxibenzila, cloreto de p-nitrobenzila, brometo de p-nitrobenzila, etc. pode-rão ser mencionados. Como condições de reação de arilmetilação, as condi-ções da tritilação acima poderão ser usadas. Adicionalmente, como condi-ções de destritilação, os vários métodos acima descritos in "ProtectiveGroups in Organic Synthesis" ("Grupos Protetores em Síntese Orgânica")(John Wiley & Sons), etc. poderão ser utilizados. Por exemplo, as condiçõesde reação sob condições sem solvente, ou em um solvente inerte tal como cloreto de metileno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, benzeno, tolueno, xileno,dioxano, água, metanol, etanol, 2-propanol, terc-butanol, na presença de umácido tal como ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoracético, ácido clorí-drico, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou sulfato de cobre (II) a -50°C a 150°C,preferencialmente -20°C a 100°C, poderão ser mencionadas.

Etapa 3:

Os grupos azida dos compostos (Vila), (VIIb) e (VIIc) obtidos naetapa 2 poderão ser reduzidos a grupos amino, em seguida convertidos agrupos amida para obter os compostos (VIIIa)1 (VIIIb) e (VIIlc).

<formula>formula see original document page 14</formula>

em que R2, R5, R6, R7, x, y e A' são como definidos acima.

Primeiro, o composto (VIIa), (VIIb) ou (VIIc) é tratado por um re- agente metálico tal como zinco/ácido clorídrico, hidreto de Iftio alumínio ouuma triaril fosfina ou tiralquil fosfina tal como trifenil fosfina, trimetil fosfina,trietil fosfina, tributil fosfina, ou é hidrogenado na presença de Pd-C, Pd-CaCO3-Pb1 Pd-BaSO4, PtO2, etc. à temperatura ambiente, para reduzir sele-tivamente os grupos azida a grupos amino, em seguida uma reação de ami-dação com ácido carboxílico é usada para obter o composto (Vllla), (VIIIb)ou (Vlllc). Para a reação de amidação, os vários métodos descritos in uCom-pendium for Organic Syrithesisn (Wiley-Interscience; Uma Divisão da JohnWiley & Sons), etc. poderão ser utilizados. Como exemplo, reagindo umaporção de amina em um solvente inerte tal como cloreto de metileno, cloro-fórmio, 1,2-dicloroetano, éter dietílico, tetraidrofurano, dioxano, acetonitrila,benzeno, tolueno, xileno, dimetilformamida na presença de um agente deativação de ácido carboxílico a -50°C a 120°C, preferencialmente -20°C a80°C, com um ácido carboxílico correspondente, o composto (Vllla), (VIIIb)ou (Vlllc) desejado pode ser obtido. Como reagente de ativação de ácidocarboxílico, tetracloreto de silício, anídrico acético, cloreto de acetila, cloro-carbonato de etila, iodeto de 2-iodo-1 -metilpiridínio, iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio, cloreto de difenilfosfinila, Ν,Ν'-dicicloexil carbodiimida (DCC),N-hidroxibenzotriazol/DCC, cloridreto de 1-etil-3-(3-dietilaminopropil) carbodi-imida, etoxiacetileno, trimetilsililetoxiacetileno, carbodiimidazol, difenilfos-foril azida, cianidato de dietilfosforila, etc. poderão ser mencionados. A-dicionalmente, se necessário, um ácido tal como ácido p-toluenos-sulfônico, ácido polifosfórico, ou uma base tal como trietilamina, diiso-propiletilamina, N-metilmorfolina, piridina, 2,6-lutidina, 4-dimetilami-nopiridina poderão ser adicionados.

Etapa 4:

A reação de glicosilação do composto (Vila), (VIIb) ou (VIIc) e docomposto (IX) obtidos na etapa 2 pode ser usada para obter o composto(Xa),(Xb)ou(Xc).<formula>formula see original document page 16</formula>

em que R2, R5, R6, R7, χ e A1 são como definidos acima, R8 indica um resí-duo de aldopiranose protegido com um grupo hidróxi ou grupo amino e Lindica um átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de flúor ou átomo de iodo.

O composto (VIIa), (VIIb) ou (VIIc) pode ser reagido em um sol-vente inerte tal como hexano, cicloexano, cloreto de metileno, clorofórmio,1,2-dicloroetano, éter dietílico, tetraidrofurano, acetonitrila, benzeno, tolueno,xileno, dioxano, dimetiiformamida, diclorometano ou um solvente misto des-tes na presença de ácido de Lewis tal como trifluoreto de boro, perclorato deprata, cloreto estanho (II), tetracloreto de titânio, tetracloreto de estanho, ouna presença de um sal de amônio halogenado tal como brometo de tetra-n-butilamônio, por exemplo a -100ºC a 50°C, preferencialmente -78°C a 30°C,com o composto (IX), para obter o composto (Xa), (Xb) ou (Xe). O ácido deLewis ou sal de amônio halogenado usado nessa reação poderá ser usadoisoladamente ou em combinações de diversos tipos. Adicionalmente, então,se necessário, um peneira molecular poderá ser adicionada.

Além disso, como resíduo de aldopiranose protegido com umgrupo hidróxi ou grupo amino que forma R8, 2,3,4,6-tetra-O-benzil-D-gli-cosila, 2,3,4,6-tetra-O-benzil-D-galactosila, 2,3,4,6-tetra-O-benzil-D-mono-sila, 3,4,6-tri-0-benzil-2-desóxi-2-desóxi-2-(terc-butoxicarbonilamino)-D-ga-lactosila, 3,4,6-tri-0-benzil-2-desóxi-2-acetilamino-D-galactosila, 2,3,4,6-tetra-O-benzil-D-alopiranosila, 2,3,4,6-tetra-0-benzil-p-D-altropiranosila,2,3,4,6-tetra-0-benzil-p-D-indosila, 3,4,6-tri-0-benzil-2-desóxi-2-(dibenzila-mino)-D-galactosila, etc. poderão ser mencionadas.

O composto (Xa), (Xb) ou (Xc) obtido por essa reação poderáser diretamente usado como material para a etapa seguinte, mas, se neces-sário, um método de purificação geralmente utilizado, por exemplo recristali-zação ou cromatografia de coluna, poderá também ser usado para purifica-ção.

Etapa 5:

Reduzindo o grupo azida do composto (Xa), (Xb) ou (Xc) obtidona etapa 4 a um grupo amino, em seguida convertendo o grupo amino emum grupo amida, é possível obter um composto (Xla), (XIb) ou (Xlc). Adicio-nalmente, uma reação de glicosilação do composto (Vllla), (VIIIb) ou (VIIIc)obtidos na etapa 3 e do composto (IX) pode ser usada para obter o compos-to (XIa), (XIb) ou (XIc).

<formula>formula see original document page 17</formula>

em que R2, R5, R6, R7, R8, x, y e A' são como definidos acima.

O composto (Xa), (Xb) ou (Xc) pode ser convertido no composto(XIa), (XIb) ou (XIc) pelo mesmo método da etapa 3. Adicionalmente, o com-posto (VIIIa), (VIIIb) ou (VIIIc) pode ser convertido no composto (XIa), (XIb)ou (XIc) pelo mesmo método da etapa 4.

Etapa 6:

O composto (Xla) obtido na etapa 5 pode ser desacetalado edesarilmetilado, ou o composto (XIb) ou (XIc) pode ser desarilmetilado paraobter o composto (I).

<formula>formula see original document page 18</formula>

em que R1, R21 R51 R61 R71 R81 x, y, A e A' são como definidos acima.

Como condições de desproteção de grupos acetal e arilmetila,os vários métodos descritos in " Protective Groups in Organic Synthesis"(John Wiley & Sons), etc. poderão ser utilizados. Por exemplo, como condi-ções de desacetalação, o método mostrado na etapa 2 poderá ser usado.Adicionalmente, como condições de desarilmetilação, as condições de adi-ção de 4-metilcicloexeno em um solvente que não participa da reação, talcomo metanol, etanol, 2-propanol, acetato de etila, tetraidrofurano, dimetil-formamida, na presença de Pd-C, Pd(OH)2, PtO2, etc., para aquecimento erefluxo ou hidrogenação à temperatura ambiente, poderão ser mencionadas.

O composto que apresenta a fórmula (I) da presente invençãopoderá ser administrado isoladamente ou poderá ser, conforme desejado,preparado juntamente com um outro veículo comum farmacologicamenteaceitável, comumente conhecido e usado, em uma preparação com o objeti-vo de aperfeiçoamento ou tratamento de uma doença inflamatória crônica,doença alérgica ou doença em que se sabe que células NKT ou estímulo decélulas NKT são participantes na deterioração de condições de doença. Porexemplo, o ingrediente ativo poderá ser administrado isolada ou juntamentecom um excipiente comumente usado como cápsula, comprimido, injeção ououtra forma adequada, oral ou parenteralmente. Por exemplo, cápsulas sãopreparadas misturando o material em pó com lactose, amido ou seus deriva-dos, um derivado de celulose, ou outro excipiente, e acondicionando a mistu-ra em cápsulas de gelatina. Adicionalmente, além do excipiente, carboxime-tilcelulose sódica, ácido algínico, goma arábica ou outro aglutinante e águasão adicionados e amassados, a mistura é granulada, se necessário, emseguida talco, ácido esteárico, ou outro lubrificante, é adicionalmente acres-centado e uma prensa usual de comprimidos é utilizada para preparação.Quando de administração parenteral por meio de injeção, o ingrediente ativopoderá ser dissolvido juntamente com um auxiliar de solubilidade em águadestilada esterilizada ou solução salina fisiológica esterilizada e selado emampolas para preparação de injeções. Se necessário, um estabilizante outampão poderá ser incluído.

A dosagem do fármaco para aperfeiçoamento ou tratamento dedoenças auto-imunes, doenças alérgicas ou doenças em que células NKTou estímulo de céiuias NKT são sabidos ser participantes na deterioraçãodas condições de doença da presente invenção depende de vários fatores,tais como sintomas, idade, via de administração, forma do fármaco, númerode dosagens, etc., do paciente a ser tratado, mas usualmente uma dosagemde 0,001 mg a 5.000 mg/dia/pessoa, preferencialmente de 0,01 mg a 500mg/dia/pessoa, mais preferencialmente de 0,1 mg a 100 mg/dia/pessoa, pre-ferencialmente de 0,01 mg a 500 mg/dia/pessoa, é adequada.

EXEMPLOS

Exemplos de Referência e Exemplos serão agora usados paraexplicar a presente invenção mais especificamente, mas o escopo da pre-sente invenção não se limita da modo algum a esses Exemplos.Exemplo de Referência 1: Síntese de 1,3-O-benzilideno-D-arabitol (Compos-to 1)

D-arabitol (300 g, 1,97 mol) e benzaldeído (261 g, 2,46 moles)foram misturados, gás cloreto de hidrogênio foi borbulhado neles por 50 mi-nutos, em seguida a mistura foi agitada sob uma corrente de argônio. A mis-tura foi deixada em repouso da noite para o dia, em seguida a massa sólidacristalina obtida foi fragmentada, uma solução aquosa de amônia a 5% (900ml) e tolueno (600 ml) foram adicionados e a mistura agitada por 1 hora. Ocristal foi obtido por filtração, em seguida lavado sucessivamente com águaresfriada (600 ml) e tolueno (600 ml χ 2) e secado a vácuo para obter ocomposto acima identificado, 295 g (rendimento de 62,4%).

p.f. de 130-1310C; 1H-RMN (CD3OD) δ: 7,51-7,30 (m, 5H), 5,58(s, 1H), 4,18 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,11 (d, 1H, J = 12 Hz), 3,87-3,28 (m, 5H);HRMS-FAB (m/z): calculado para C12Hi7O5 [M+H]+, 241,1076; encontrado241,1086.

Exemplo de Referência 2: Síntese de t.3-0-benzilideno-5-0-toluenossulfonil-D-arabitol (Composto 2)

A uma solução do composto 1 sintetizado no Exemplo de Refe-rência 1 (30 g, 125 mmoles) dissolvido em cloreto de metileno (240 ml), oxi-do de di-n-butilestanho (653 mg, 2,50 mmoles), cloreto de p-toluenossulfonila (23,8 g, 125 mmoles) e trietilamina (12,9 g, 127 mmoles)foram adicionados sob uma corrente de argônio. A mistura foi agitada à tem-peratura ambiente por 20 horas, em seguida a camada orgânica foi lavadacom água (100 ml χ 3) e secada sobre sulfato de sódio. O solvente foi con-centrado e o resíduo obtido purificado por cromatografia de coluna (cloretode metileno:metanol = 40:1) para obter um cristal bruto. Finalmente, o cristalbruto foi recristalizado (n-hexano:acetato de etila = 1:1) para obter o com-posto acima identificado, 39,7 g (rendimento de 80,8%).

1H-RMN (DMSO-de) δ: 7,73 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,37-7,24 (m,7H), 5,43 (s, 1H), 5,34 (d, 1H, J = 6,1 Hz), 4,77 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 4,11 (dd,1H, J = 9,8; 1,9 Hz), 4,04-3,85 (m, 4H), 3,71 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 3,59 (d, 1H,J = 5,7 Hz), 2,32 (s, 3H).

13C-RMN (CDCI3) δ: 145,1; 137,3; 132,5; 129,9; 129,1; 128,2;128,0; 125,8; 101,0; 77,9; 72,4; 70,9; 67,6; 62,7; 21,6; MS-ESI (m/z): 395[M+H]+; HRMS-FAB (m/z): calculado para C19H23O7S [M+H]+, 395,1164; en-contrado 395,1189.

Exemplo de Referência 3: Síntese de 4.5-anidro-1,3-O-benzilideno-D-arabitol(Composto 3)

Uma solução do composto 2 sintetizado no Exemplo de Refe-rência 2 (30 g, 76 mmoles) dissolvido em tetraidrofurano anidro (191 ml) foiresfriada com gelo sob uma corrente de argônio. Nessa solução, enquantose mantinha uma temperatura de 3 a 5 ºC, t-butóxido de potássio (9,11 g,81,2 mmoles) foi adicionado por 20 minutos. Nessa mesma temperatura, amistura foi agitada por 1,5 hora, em seguida água (76 ml) foi adicionada, en- quanto se resfriava com gelo, e a mistura foi neutralizada com ácido clorídri-co a 1 M (pH = 7,5) e o produto extraído sobre cloreto de metileno (76 ml χ3). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, em seguida o sol-vente foi concentrado. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia decoluna (cloreto de metileno:metanol = 50:1) para obter um cristal bruto. Fi- nalmente, n-hexano (90 ml) foi adicionado ao cristal bruto e a mistura resul-tante agitada à temperatura ambiente por 30 minutos para obter o compostoacima identificado, 15,9 g (rendimento de 94%).

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,52-7,34 (m, 5H), 5,57 (s, 1H), 4,25 (dd, 1H,J = 12; 1,8 Hz), 4,08 (ad, 1H, J = 12; 1,2 Hz), 3,78-3,75 (m, 2H), 3,35-3,31 (m, 1H), 2,93-2,84 (m, 3H).

13C de RMN (CDCI3) δ: 137,4; 129,3; 128,4; 126,0; 101,4; 79,7;72,3; 64,4; 50,8; 45,9; MS-ESI (m/z): 223 [M+H]+; HRMS-FAB (m/z): calcula-do para C12H15O4 [M+H]+, 223,0971; encontrado 223,0895.Exemplo 1: Síntese de 1.3-0-benzilideno-D-arabino-1,2.3,4-docosanotetraol (Composto 4)

A uma suspensão de iodeto de cobre (I) (3,2 g, 16,8 mmoles) emtetraidrofurano anidro (210 ml), n-heptadecil brometo de magnésio a 1,58 m(67 mmoles em solução de tetraidrofurano) foi adicionado gota a gota sob -40°C. A mistura foi agitada a -15°C por 30 minutos. Em seguida, uma solu- ção do composto 3 sintetizado no Exemplo de Referência 3 (5 g, 22,5 mmo-les) dissolvido em tetraidrofurano anidro (100 ml) foi adicionada gota a gotasob -20°C, a mistura foi agitada à mesma temperatura por 4,5 horas, em se-guida a mistura foi agitada à temperatura ambiente da noite para o dia. Amistura reacional, uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada, o produto foi extraído por meio de acetato de etila, em seguida acamada orgânica foi lavada com solução salina saturada, secada sobre sul-fato de sódio, em seguida concentrada a vácuo. O resíduo obtido foi purifi-cado por cromatografia de coluna em sílica-gel (clorofórmio:acetato de etila= 2:1 a 1:2) para obter o composto acima identificado, 3,75 g (rendimento de36%). Pó branco.

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,53 (d, 2H), 7,39 (m, 3H), 5,60 (s, 1H), 4,28(dd, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,00-3,80 (m, 2H), 3,27 (d, 1H), 2,39 (d, 1H), 1,85-1,20 (m, 34H), 0,89 (t, 3H).

Exemplo 2: Síntese de 1.3-Q-benzilideno-2-0-metanossulfonil-D-arabino-1.2.3.4-docosanotetraol (Composto 5)

A uma solução do composto 4 sintetizado no Exemplo 1 (1 g, 2,2mmoles) em piridina anidra (30 ml) e tetraidrofurano anidro (20 ml), cloretode metanossulfonila (0,38 g, 3,3 mmmoles) foi gradualmente adicionado gotaa gota sob -5°C. A mistura foi agitada nessa temperatura por 18 horas; emseguida, cloreto de metanossulfonila em excesso foi extinto mediante umaadição de 5 mi de metanol, em seguida agitado a temperatura ambiente danoite para o dia. A mistura reacional foi concentrada a vácuo, em seguidaheptano foi usado para provocar remoção azeotrópica de solventes em ex-cesso (2 vezes), depois o resíduo obtido foi dissolvido em clorofórmio (500ml) e lavado com água (2 vezes). A camada orgânica foi separada, secadasobre sulfato de sódio, filtrada, em seguida concentrada a vácuo. O resíduoobtido foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (clorofór-mio:acetato de etila = 10:1 a 1:2) para obter o composto acima identificado,780 mg (rendimento de 66,7%). Pó branco.

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,49 (d, 2H), 7,37 (m, 3H), 5,59 (s, 1H), 4,99(m, 1H), 4,52 (dd, 1H), 4,16 (d, 1H), 3,90-3,70 (m, 2H), 3,19 (s, 3H), 2,78 (d,1H), 1,90-1,20 (m, 34H), 0,88 (t, 3H).

Exemplo 3: Síntese de 2-0-metanossulfonil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol(Composto 6)

A uma solução do composto 2 sintetizado no Exemplo 2 (10 g,18,5 mmoles) dissolvido em metanol (110 ml), clorofórmio (180 ml) e tetrai-drofurano anidro (150 ml), Pd(OH)2 20%/C (1,7 g) foi adicionado. A misturafoi hidrogenada sob pressão atmosférica a 45°C. Após a completação dareação, clorofórmio (200 ml) foi adicionado, o catalisador foi removido porfiltração e o filtrado concentrado a vácuo para obter o composto acima identi-ficado, 8,27 g (rendimento de 98,8%). Pó branco.

1H-RMN (DMSO-de) δ: 4,73 (t, 1H), 3,64 (m, 2H), 3,38 (m, 2H),3,16 (s, 3H), 1,75-1,15 (m, 34H), 0,86 (t, 3H).

Exemplo 4: Síntese de 2-azido-D-ribo-1,2,3.4-docosanotriol (Composto 7)

A uma solução do composto 6 sintetizado no Exemplo 3 (8,26 g,18,24 mmoles) dissolvido em dimetilformamida anidra (150 ml), azida de só-dio (2,37 g, 36,41 mmoles) foi adicionada. A mistura foi agitada a 95°C por 5horas, em seguida agitada à temperatura ambiente da noite para o dia. Àmistura reacional, água (1 L) foi adicionada, em seguida o produto foi extraí-do com acetato de etila (2 L). O extrato foi secado sobre sulfato de sódio,filtrado, em seguida concentrada a vácuo. O cristal bruto obtido foi purificadopor cromatografia de coluna em sílica-gel (n-hexano:acetato de etila = 3:2)para obter o composto acima identificado, 5,33 g (rendimento de 70%). Sóli-do de cor marrom-claro.

1H-RMN (DMSO-de) δ: 4,99 (d, 1H), 4,87 (t, 1H), 4,51 (m, 1H),3,80-3,70 (m, 1H), 3,65-3,45 (m, 2H), 1,65-1,15 (m, 34H), 0,85 (t, 3H).

Exemplo 5: Síntese de 2-azido-3.4-0-isopropilideno-D-ribo-1.3.4-docosanotriol (Composto 8)

A uma solução do composto 7 sintetizado no Exemplo 4 (7,19 g,18 mmoles) dissolvido em acetona (150 ml), ácido sulfúrico concentrado (0,1g) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas.Após a completação da reação, trietilamina (3,64 g, 36 mmoles) foi adiciona-da, a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora, em seguida á-gua (800 ml) foi adicionada à mistura reacional e o produto extraído com a-cetato de etila (800 ml) e tolueno (400 ml). O extrato foi secado sobre sulfatode sódio, filtrado, em seguida concentrada a vácuo. O cristal bruto obtido foipurificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (n-hexano:acetato deetila = 8:1 a 6:1) para obter o composto acima identificado, 44,0 g (rendimen-to de 50,5%). Pó branco.

1H-RMN (CDCI3) δ: 4,17 (m, 1H), 4,05-3,91 (m, 2H), 3,86 (m,1H), 3,46 (m, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,65-1,15 (m, 34H), 1,43 (s, 3H), 1,34 (s,3Η), 0,88 (t, 3Η).

Exemplo 6: Síntese de 2-azido-1-0-(2,3.4,6-tetra-0-benzil-a-D-qalactopi-ranosil)-3,4-0-isopropilideno-D-ribo-1,3.4-docosanotriol (Composto 9)

A peneira molecular seca (4 Á, pó) (250 mg), foi adicionada umasolução do composto 8 sintetizado no Exemplo 5 (101 mg, 0,23 mmol) ebrometo de 2,3,4,6-tetra-O-benzil-a-D-galactopiranosila (280 mg, 0,46 mmol)dissolvido em tolueno (4,5 ml) e dimetilformamida (4,5 ml). Em seguida,brometo de tetra-n-butil amônio (218 mg, 0,68 mmol) foi adicionado e a mis-tura agitada por 4 dias. À mistura reacional, acetato de etila (200 ml) foi adi-cionado. A mistura foi lavada com solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato desódio, filtrada, em seguida concentrada a vácuo. O resíduo obtido foi purifi-cado por cromatografia de coluna em sílica-gel (n-hexano:acetato de etila =25:1 a 8:1) para obter o composto acima identificado, 107 mg (rendimento de 48%).

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,39-7,23 (m, 20H), 4,96-4,92 (m, 2H), 4,85(d, 1H, J = 12 Hz), 4,80 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,73-4,68 (m, 2H), 4,57 (d, 1H, J= 12 Hz), 4,48 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,12-3,91 (m, 7H),3,72 (dd, 1H, J = 10,8; 6,6 Hz), 3,54-3,44 (m, 3H), 1,59-1,20 (m, 40H), 0,88(t, 3H, J = 6,8 Hz); MS-ESI (m/z): 985 (M+Na).

Exemplo 7: Síntese de 2-amino-1-0-(2.3,4.6-tetra-0-benzil-g-D-aalactopiranosin-3.4-0-isopropilideno-D-ribo-1.3.4-docosanotriol (Composto 10)

A uma solução do composto 9 sintetizado no Exemplo 6 (87 mg,0,09 mmol) dissolvido em etanol (9 ml) e cloreto de metileno (3 ml), foi adi-cionado paládio-carbonato de cálcio (desintoxicado de chumbo) (catalisadorde Lindlar) (280 mg). A mistura foi agitada à pressão atmosférica e tempera-tura ambiente da noite para o dia para hidrogenação. O catalisador foi remo-vido por filtração e o filtrado concentrado a vácuo para obter o composto a-cima identificado, 80 mg (rendimento de 94%).

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,39-7,13 (m, 20H), 4,95-4,92 (m, 2H), 4,83-4,78 (m, 2H), 4,74 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,68 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,47 (d, 1H, J= 12 Hz), 4,40 (d, 1Η, J = 12 Hz), 4,11-4,04 (m, 2H), 3,99-3,91 (m, 4H), 3,87(dd, 1H, J = 9,0; 5,5 Hz), 3,55-3,52 (m, 2H), 3,39 (dd, 1H, J = 10,2; 7,6 Hz),3,07-3,02 (m, 1H), 1,53-1,20 (m, 40H), 0,88 (t, 3H, J = 6,8 Hz); MS-ESI(m/z): 937 (M+H).

Exemplo 8: Síntese de 2-hexacosanoilamino-1-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzil-α-D-aalactopiranosin-3.4-0-isopropilideno-D-ribo-1,3,4-docosanotriol (Composto11)

A uma suspensão mista do composto 10 sintetizado no Exemplo7 (560 mg, 0,6 mmol), ácido n-hexacosânico (270 mg, 0,69 mmol) e 1-hidroxiazabenzotriazol (12 mg, 0,087 mmol) em dimetilformamida (45 ml) ecloreto de metileno (25 ml), trietilamina (0,2 ml, 1,4 mmol) e cloridreto 1-etil-3-(3-dimetilaminopropol)carbodiimídico (210 mg, 1,1 mmol) foram adiciona-dos sob resfriamento com gelo, em seguida a mistura foi agitada à tempera-tura ambiente por 5 dias. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila(1,5 L), em seguida lavada com solução aquosa saturada de hidrogenocar-bonato de sódio e água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de só-dio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cro-matografia de coluna em sílica-gel (n-hexano:acetato de etila = 4:1) para ob-ter o composto acima identificado, 340 mg (rendimento de 43%). Pó branco.

1H-RMN (CDCI3) δ: 7,41-7,23 (m, 20H), 6,27 (d, 1H, J = 8,7 Hz),4,92 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,90 (d, 1H, J = 3,7 Hz), 4,83-4,78 (m, 2H), 4,75 (d,1H, J = 12 Hz), 4,66 (d, 1H, J = 11 Hz), 4,58 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,49 (d, 1H,J = 12 Hz), 4,37 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,12-4,02 (m, 4H), 3,98 (t, 1H, J = 6,2Hz), 3,93-3,88 (m, 3H), 3,62-3,52 (m, 2H), 3,36 (dd, 1H, J = 9,4; 5,5 Hz);2,08-1,96 (m, 2H), 1,54-1,39 (m, 7H), 1,31 -1,22 (m, 79H), 0,90-0,86 (m, 6H);MS-ESI (m/z): 1.338 (M+Na).

Exemplo 9: Síntese de 2-hexacosanoilamino-1-0-(2.3.4,6-tetra-Q-benzil-a-D-qalactopiranosil)-D-ribo-1.3,4-docosanotriol (Composto 12)

Uma solução do composto 11 sintetizado no Exemplo 8 (53 mg,0,04 mmol) dissolvido em metanol (1,5 ml) / cloreto de metileno (6 ml) / ácidoclorídrico a 4 N-dioxano (120 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 2horas, em seguida concentrada a vácuo. O resíduo obtido foi purificado porcromatografia de coluna em sílica-gel (hexano:acetato de etila = 2:1) paraobter o composto acima identificado, 35 mg (rendimento de 68%). Pó bran-co.

1H-RMN (CDCI3)™: 7,40-7,25 (m, 20H), 6,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz),4,93-4,87 (m, 2H), 4,84 (d, 1Ή, J = 3,8 Hz), 4,79-4,73 (m, 2H), 4,67 (d, 1H1 J= 12 Hz), 4,56 (d, 1H, J = 11 Hz), 4,47 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,38 (d, 1H, J = 12Hz), 4,21-4,18 (m, 1H), 4,04 (dd, 1H, J = 10; 3,8 Hz), 3,97 (d, 1H, J = 1,9Hz), 3,89-3,84 (m, 4H), 3,81 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,51-3,43 (m, 4H), 2,13-2,10(m, 3H), 1,62-1,54 (m, 4H), 1,46-1,25 (m, 76H), 0,90-0,86 (m, 6H); MS-ESI(m/z): 1.275 (M+H).

Exemplo 10: Síntese de 2-hexacosanoilamino-1-Q-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1.3.4-docosanotriol (Composto 13)

A uma solução do composto 12 sintetizado no Exemplo 9 (325mg, 0,255 mmol) dissolvido em metanol (70 ml) / cloreto de metileno (40 ml),foi adicionado hidróxido de paládio (150 ml). A mistura foi agitada a pressãoatmosférica e temperatura ambiente por 4 horas para hidrogenação. O cata-lisador foi removido por filtração e o filtrado concentrado a vácuo para obtero composto acima identificado, 206 mg (rendimento de 88%). Pó branco (re-cristalizado por etanol): valor de Rf (TLC) = 0,22 (clorofórmio:metanol = 7:1).

1H-RMN (py-d5) δ: 8,50 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 6,98 (s largo, 1H),6,64 (s largo, 1H), 6,56 (s largo, 1H), 6,46 (s largo, 1H), 6,34 (s largo, 1H),6,10 (s largo, 1H), 5,60 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 5,32-5,25 (m, 1H), 4,71-4,67 (m,2H), 4,57-4,51 (m, 2H), 4,44-4,33 (m, 6H), 2,45 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,35-2,25(m, 1H), 2,00-1,62 (m, 5H), 1,50-1,18 (m, 74H), 0,90-0,85 (m, 6H); MS-ESI(m/z): 915 (M+H); MS-MALDI (m/z): [M+Na]+; calculado para C54Hi07NO9-Na[M+Na]+, 937,418; encontrado 937,09.

<formula>formula see original document page 26</formula>

Efeito Supressor de Glicolipídeo Sintetizado em Artrite Transferi-da por Soro K/Bxn(A) Camundongos C57BL/6J (8 semanas de idade, fêmeas) fo-ram administrados intraperitonealmente com soro K/BxN em quantidades de150 μΙ para induzir artrite. A classificação de artrite foi julgada mediante ob-servação da maneira seguinte.

A artrite foi classificada como segue:

0: sem sintomas,

1: inchaço ou vermelhidão de um dedo,

2: inchaço ou vermelhidão de dois ou mais dedos ou uma articu-lação relativamente grande tal como pulso ou tornozelo,

3: inchaço e vermelhidão de membros superiores ou inferiores,

4: inchaço máximo de membros superiores ou inferiores.

O total dos dois membros superiores e de dois membros inferio-res foi usado como classificação.

O composto foi dissolvido em DMSO/PBS 10% e administradointraperitonealmente como 2 µg/camundongo duas vezes por semana a par-tir do dia de administração do soro. Para o grupo de controle, foi administra-do somente DMSO/PBS 10%. A administração do composto suprimiu nota-velmente a classificação de artrite (vide figura 1).

(B) O efeito supressor do composto não foi observado em ca-mundongos com knockout no gene Jα18 deficientes de células NKT. Essesresultados indicaram que células NKT são exigidas para o efeito supressordo composto sobre artrite (vide figura 2).

Efeito Supressor de Glicolipídeo Sintetizado em Artrite Induzidapor Coláqeno

Camundongos DBA1 (8 semanas de idade, machos) foram imu-nizados subcutaneamente com colágeno bovino tipo Il emulsifiçado com Ad-juvante Completo de Freund; em seguida, 3 semanas mais tarde, imuniza-dos subcutaneamente com colágeno bovino tipo Il juntamente com Adjuvan-te Incompleto de Freund para induzir artrite. A classificação de artrite foi ava-liada mediante observação da maneira seguinte.

A artrite foi classificada como segue:

0: sem sintomas,1: inchaço ou vermelhidão de um dedo,

3: inchaço e vermelhidão de membros superiores ou inferiores,

4: inchaço máximo de membros superiores ou inferiores.

O total dos dois membros superiores e dos dois membros inferi-ores foi usado como classificação.

O composto foi dissolvido em DMSO/PBS 10% e administradointraperitonealmente como 2 pg/camundongo duas vezes por semana a par-tir do dia de administração do soro. Para o grupo de controle, foi administra-do somente DMSO/PBS 10%. A administração do composto suprimiu nota-velmente a classificação de artrite (vide figura 3).

Efeito de Composto em Células NKT

Células mononucleares foram isoladas do fígado de camunaon-gos C57BL/6J (8 semanas de idade, fêmeas) e incubadas com o compostopor 48 horas. A citocina no sobrenadante foi medida pelo método ELISA e aresposta de proliferação celular foi medida pela absorção de trítio timidina. a-GC induziu proliferação celular, produção de IFN-γ e produção de IL-4, maso composto não reagiu de maneira alguma (ver figura 4).

Efeito de Pré-Administracão do Composto em Células NKTCamundongos C57BL/6J (8 semanas de idade, fêmeas) foramadministrados intraperitonealmente com soro K/BxN em uma quantidade de150 μl para induzir artrite. O composto foi administrado três vezes a cadadois dias em uma quantidade de 2 pg/camundondo. Para o grupo de contro-le, foi administrado somente DMSO/PBS 10%. Dois dias após a administra-ção final, células mononucleares foram isoladas do fígado e incubadas jun-tamente com α-GC por 48 horas, a citocina no sobrenadante foi medida pelométodo ELISA e a resposta de proliferação celular, pela absorção de trítiotimidina. No grupo pré-administrado com o composto, proliferação celular,produção de IFN-γ e produção de IL-4 pelo tratamento de α-GC não pude-ram ser observados. Esses resultados indicaram claramente que o compostoda presente invenção suprimiu a estimulação de células NKT por antígenos(vide figura 5).

Supressão de Infiltração Celular em Lavagens de Alvéolos emModelo de Asma Bronquial (Camundongos C57BL6J)

Camundongos C57BL/6J (8 semanas de idade, fêmeas) foramadministrados intraperitonealmente com ovoalbumina (OVA) em quantidadesde 50 µg/camundongo após mistura com alume em uma quantidade de 2,25mg/camundongo no Dia O e no 7-Dia.

Partindo do 18s dia, os camundongos foram levados a inalar OVA portrês dias consecutivos sob uma concentração de 10 mg/ml. O composto foiadministrado intraperitonealmente antes de inalação em uma quantidade de2 µg/camundondo. Um dia após a inalação final, os alvéolos foram lavados eas composições de células estudadas. A infiltração celular no grupo tratadocom composto foi notavelmente suprimida em comparação com o grupo decontrole (OVA/DMSO). Adicionalmente, a característica de asma por infiltra-ção de eosiriófilos foi notavelmente suprimida (vide figura 6).

Supressão de Citocina em Lavagens de Alvéolos em Modelo deAsma Bronquial (Camundongos C57BL6J)

Camundongos C57BL76J (8 semanas de idade, fêmeas) foramadministrados intraperitonealmente com OVA em quantidades de 50µg/camundongo após mistura com alume em uma quantidade de 2,25mg/camundongo no Dia 0 e no 7° Dia.

Partindo do 18° dia, os camundongos foram levados a inalarOVA por três dias consecutivos sob uma concentração de 10 mg/ml. O com-posto foi administrado intraperitonealmente antes de inalação em uma quan-25 tidade de 2 µg/camundondo. Um dia após a inalação final, os alvéolos foramlavados e a citocina nas lavagens de alvéolos foi medida usando o métodoELISA. Em comparação com o grupo de controle (OVA/DMSO), tanto IL-5quanto IL-3 foram notavelmente suprimidas no grupo tratado com composto(vide figura 7).

30 Materiais Patológicos de Pulmões em Modelo de Asma Bronoui-

al (Camundongos C57BL6J)

Camundongos C57BL/6J (8 semanas de idade, fêmeas) foramadministrados intraperitonealmente com OVA em quantidades de 40μg/camundongo após mistura com alume em uma quantidade de 2,25mg/camundongo no Dia 0 e no 7- Dia.

Partindo do 18- dia, os camundongos foram levados a inalarOVA sob uma concentração de 10 mg/ml. O composto foi administrado in-traperitonealmente antes de inalação em uma quantidade de 2μg/camundondo. No dia após o dia de inalação final, o tecido pulmonar foiexcisado e analisado patologicamente. Em comparação com o grupo de con-trole (OVA/DMSO), infiltração celular e a proliferação de células caliciformes

positivas PAS foram preferencialmente suprimidas no grupo tratado comcomposto (vide figura 8). A classificação histológica foi julgada como segue,isto é, a infiltração celular é classificada como

0: normal,

1: pequena quantidade de infiltração celular,

2: uma camada de infiltração celular,

3: uma a quatro camadas de infiltração celular, e

4: mais de quatro camadas de infiltração celular.Adicionalmente, o PAS foi avaliado em sua classificação como

0: células caliciformes menores que 5% da circunferência dos

alvéolos,

1: células caliciformes 5% a 25% da circunferência dos alvéolos,

2: células caliciformes 25% a 50% da circunferência dos alvéo-los,

3: células caliciformes 50% a 75% da circunferência dos alvéo-los,

4; células caliciformes maiores que 75% da circunferência dosalvéolos.

Supressão de Citocina em Lavagens de Alvéolos em Modelo de Asma Bron-quial

Camundongos Balb/c (8 semanas de idade, fêmeas) foram ad-ministrados intraperitonealmente com OVA em quantidades de 20μg/camundongo após mistura com alume em uma quantidade de 2,25mg/camundongo no Dia 0 e no Ί- Dia.

Partindo do 189 dia, os camundongos foram levados a inalarOVA por três dias consecutivos sob uma concentração de 5 mg/ml. O com-posto foi administrado intraperitonealmente antes de inalação em uma quan-tidade de 2 pg/camundondo. Um dia após a inalação final, os alvéolos foramlavados e a citocina nas lavagens de alvéolos medida usando o método E-LISA. Em comparação com o grupo de controle (OVA/DMSO), tanto IL-5quanto IL-3 foram notavelmente suprimidas no grupo de composto (vide figu-ra 9).

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

O derivado de glicolipídeo SGL que apresenta a fórmula (I) aci-ma de acordo com a presente invenção suprime reações inflamatórias indu-zidas por auto-anticorpos e é útil como fármaco terapêutico para artrite auto-imune e outras doenças inflamatórias crônicas, asma bronquiai e outras do-enças alérgicas, e outras doenças em que células NKT são envolvidas nadeterioração das condições de doença.

Claims

1. Fármaco terapêutico para doenças, em que células NKT ouestímulo de células NKT são envolvidos na deterioração de condições dedoença, compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipí-deo que apresenta a fórmula (I):<formula>formula see original document page 32</formula>em que R1 indica um resíduo de aldopiranose, R2 indica um átomo de hidro-gênio ou um grupo hidróxi, A indica -CH2-, -CH(OH)-CH2- ou -CH=CHCH2-, χindica um número inteiro de 13 a 16 e y indica um número inteiro de O a 25,ou seu hidrato ou solvato farmacologicamente aceitável.

2. Fármaco terapêutico para uma doença alérgica, o compreen-dendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seu hidrato ousolvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1.

3. Fármaco terapêutico para uma doença inflamatória crônica,compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seuhidrato ou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindi-cação 1.

4. Fármaco terapêutico para uma doença em que células NKTou estímulo de células NKT são envolvidos na deterioração de condições dedoença compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeoou seu hidrato ou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo com areivindicação 1, em que R1 na fórmula (I) indica a-D-galactopiranosila.

5. Fármaco terapêutico para uma doença alérgica, compreen-dendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo, de acordo com areivindicação 1, em que R1 na fórmula (I) indica α-D-galactopiranosila ou seuhidrato ou solvato farmacologicamente aceitável.

6. Fármaco terapêutico para uma doença inflamatória crônica,contendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seu hidratoou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1,em que R1, na fórmula (I), indica a-D-galactopiranosila.

7. Fármaco terapêutico para doenças em que células NKT ouestímulo de células NKT são envolvidos na deterioração de condições dedoença compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeoou seu hidrato ou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo com areivindicação 1, em que, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila e AIndica-CH2-Ou-CH(OH)-CH2-.

8. Fármaco terapêutico para uma doença alérgica, compreen-dendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seu hidrato ousolvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1, emque, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila e A indica -CH2- ou -CH(OH)-CH2-.

9. Fármaco terapêutico para uma doença inflamatória crônica, oqual compreende, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ouseu hidrato òu solvato farmacologicamente aceitáveis, de acordo com a rei-vindicação 1, em que, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila e A in-dica -CH2- ou -CH(OH)-CH2-.

10. Fármaco terapêutico para doenças em que células NKT ouestímulo de células NKT são envolvidos na deterioração de condições dedoença, compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipí-deo ou seu hidrato ou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo coma reivindicação 1, em que, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila, R2indica um átomo de hidrogênio e A indica-CH2-ou-CH(OH)-CH2-.

11. Fármaco terapêutico para uma doença alérgica, compreen-dendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seu hidrato ousolvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1, emque, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila, R2 indica um átomo dehidrogênio e A indica -CH2- ou -CH(OH)-CH2-.

12. Fármaco terapêutico para uma doença inflamatória crônica,compreendendo, como ingrediente ativo, um derivado de glicolipídeo ou seuhidrato ou solvato farmacologicamente aceitável, de acordo com a reivindi-cação 1, em que, na fórmula (I), R1 indica α-D-galactopiranosila, R2 indicaum átomo de hidrogênio e A indica -CH2- ou -CH(OH)-CH2-.

13. Glicolipídeo que apresenta a fórmula (I):<formula>formula see original document page 34</formula>em que R1 indica α-D-galactopiranosila, R2 indica um átomo de hidrogênio, Aindica -CH(OH)-CH2-, χ indica um número inteiro de 13a 16 e y indica umnúmero inteiro de O a 25,e seus hidratos ou solvatos farmacologicamente aceitável.

14. Derivado de glicolipídeo e seus hidratos ou solvatos farma-cologicamente aceitáveis, como definidos na reivindicação 13, em que o ditoderivado de glicolipídeo é 2-hexacosanoilamino-l-O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-docosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-henicosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1 -O-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-icosanotriol, 2-hexacosanoilamino-1-0-a-D-galactopiranosil-D-ribo-1,3,4-nonadecanotriol.