BRPI0618593A2 - combinação de vacina compreendendo um vìrus da diarréia viral bovina atenuado - Google Patents

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BRPI0618593A2
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cattle
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Gregor Myers
Jeff Knittel
Knut Elbers
Rob Tremblay
Craig Jones
Axel Lischewski
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Boehringer Ingelheim Vetmed
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Abstract

COMBINAçãO DE VACINA COMPREENDENDO UM VìRUS DA DIARRéIA VIRAL BOVINA ATENUADO. A presente invenção refere-se a vacinas combinadas para a profilaxia e tratamento de infecções microbiológicas em gado as quais compreendem um vírus da diarréia viral bovina (BVDV) atenuado para a profilaxia e tratamento de infecções causadas pelo BVDV e um outro componente ativo imunológico para a profilaxia e tratamento de outras infecções microbiológicas que não BVDV.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMBINA- ÇÃO DE VACINA COMPREENDENDO UM VÍRUS DA DIARRÉIA VIRAL BOVINA ATENUADO".
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO CAMPO TÉCNICO
A presente invenção refere-se ao campo de saúde animal e, em particular, a vacinas combinadas as quais compreendem um vírus da diar- réia vivai bovina atenuado (BVDV) e pelo menos um outro componente imu- nológico ativo para tratamento ou prevenção de doenças ou distúrbios em gado causado por agentes infecciosos.
INFORMAÇÃO ANTECEDENTE
O vírus da diarréia viral bovina (BVDV) do tipo 1 (BVDV-1) e do tipo 2 (BVDV-2) causam diarréia viral bovina (BVD) e doença mucosal (MD) em gado (Baker, 1987; Moennig e Plagemann, 1992; Thiel e outros, 1996). A divisão de BVDV em 2 espécies é baseada em diferenças significativas a nível de seqüências genômicas (resumido em Heinz e outros, 2000), as quais também são óbvias a partir de reações de anticorpo de neutralização cruzadas limitadas (Ridpath e outros 1994). As proteínas virais de BVDV e quaisquer outros vírus da família pestivírus estão dispostas na poliproteína na ordem NH2-N"pro-C-E"rns-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B- COOH (Lindenbach e Rice, 2001). A proteína C (= núcleo- ou capsidproteí- na) e as glicoproteínas Ems, E1 e E2 representam componentes estruturais do BVDV. Descobriu-se que Ems e E2 são alvos para neutralização de anti- corpo (Donis e outros, 1988; Paton e outros, 1992; van Rijn e outros, 1993; Weiland e outros, 1990,1992). E"rns carece de uma âncora na membrana típi- ca e é secretada em quantidades consideráveis das células infectadas; foi reportado que essa proteína exibe atividade de RNase (Hulst e outros, 1994; Schneider e outros, 1993; Windisch e outros, 1996). A função dessa ativida- de enzimática para o ciclo de vida viral atualmente é desconhecida. A ativi- dade enzimática depende da presença de dois trechos de aminoácidos con- servados entre a E"rns de pestivírus e diferentes RNases conhecidas de ori- gem vegetal e fúngica. Ambas essas seqüências conservadas contêm um resíduo de histidina (Schneider e outros, 1993). Troca de cada um desses resíduos por Iisina na proteína Ems de um cepa de vacina contra o Vírus da Febre Suína Clássica (CSFV) resultou na destruição de atividade de RNase (Hulst e outros, 1998). Similarmente, Meyers e outros mostraram que uma variante RNase negativa da cepa de CSFV virulenta Alfort/Tubingen era completamente viável. Contudo, o respectivo mutante viral não mostrou fe- notipo citopatogênico (Meyers e outros, 1999).
Npro representa a primeira proteína codificada pela rede de leitu- ra aberta longa no RNA de pestivírus Npro representa uma proteína não es- trutural que tem atividade de protease e se cliva da poliproteína nascente (Stark e outros, 1993; Wiskerchen e outros, 1991)presumivelmente já duran- te tradução. Npro é uma protease de cisteína (Rumenapf e outros, 1998) que não é essencial para replicação viral (Tratschin e outros, 1998). Recente- mente, foi mostrado que Npro interfere um pouco com a defesa antiviral celu- lar, de modo que pode ser presumido que ela modula o sistema imune den- tro de um hospedeiro infectado (Ruggli e outros, 2003). Mayer e outros apre- sentaram indicações de uma atenuação dos CFSV em conseqüência de uma deleção do gene de Npro (Mayer e outros, 2004).
As vacinas atuais contra BVDV para prevenção e tratamento de infecções pelo BVDV ainda têm deficiências (Oirschot e outros 1999). Vaci- nas contra o BVDV-1 clássico proporcionam proteção apenas parcial contra infecção pelo BVDV-2 e vacas prenhes produzem bezerros que são persis- tentemente infectados com BVDV-2 virulento (Bolin e outros, 1991, Ridpath e outros, 1994). Esse problema provavelmente é em virtude da grande di- versidade antigênica entre cepas do tipo 1 e do tipo 2 a qual é mais pronun- ciada na glicoproteína E2, o principal antígeno para neutralização de vírus (Tijssen e outros, 1996). A maioria dos anticorpos monoclonais contra cepas do tipo 1 falha em se ligar a vírus do tipo 2 (Ridpath e outros, 1994).
Atualmente, vacinas MLV contra BVDV licenciadas são produzi- das usando vírus atenuados obtidos via passagem repetida em células de bovino ou suíno (Coggins e outros, Cornell Vet. 51: 539- , 1961; Philips e outros, Am. J. Vet. Res. 36: 135-, 1975) ou usando vírus quimicamente mo- dificados os quais exibem um fenótipo sensível à temperatura (Lobmann e outros, Am. J. Vet. Res. 45: 2498-, 1984; 47: 557-561,1986). Uma única do- se de vacina MLV é suficiente para imunização e a duração da imunidade pode durar anos em gado vacinado. Contudo, uma vez que essas vacinas foram desenvolvidas usando cepas de vírus BVDV do tipo I, há proteção contra vírus do tipo I apenas. Além disso, essas vacinas, embora atenuadas, estão mais freqüentemente associadas a problemas de segurança. Os vírus da vacina podem atravessar a placenta de animais prenhes, por exemplo, vacas, e levar a manifestações clínicas no feto e/ou à indução de bezerros persistentemente infectados. Portanto, elas não podem ser aplicadas a re- banhos de criação que contêm vacas prenhes. Vacas prenhes têm de ser mantidas separadas do gado vacinado para proteger os fetos e não devem ser em si vacinadas.
Vírus da Parainfluenza-3 (PI-3) é um vírus de RNA classificado na família paramixovírus. Infecções causadas por PI-3 são mais comuns em gado. Embora PI-3 seja capaz de causar doença, ele está usualmente asso- ciado a infecções subclínicas a brandas. O papel mais importante de PI-3 é servir como um iniciador que pode levar ao desenvolvimento de pneumonia bacteriana secundária. Sinais clínicos incluem pirexia, tosse, descarga Iacri- mal e nasal serosa, taxa respiratória aumentada e sons de respiração au- mentados. A gravidade de sinais piora com o início de pneumonia bacteria- na. Fatalidades provenientes de pneumonia por PI-3 não complicada são raras. Lesões incluem consolidação pulmonar crânio ventral, bronquiolite e alveolite com congestão e hemorragia acentuadas. Corpos de inclusão po- dem ser identificados. A maioria dos casos fatais também terá uma broncop- neumonia bacteriana concorrente.
O Vírus Sincicial Respiratório Bovino (BRSV) é um vírus de RNA classificado como um pneumovírus na família paramixovírus. Além de gado, ovelhas e cabras também podem ser infectadas por vírus sinciciais respirató- rios. Esse vírus foi nomeado por seu efeito citopático característico de for- mação de células sinciciais. Subtipos antigênicos são conhecidos por existir para o BRSV e evidência preliminar sugere que podem haver muitos subti- pos antigênicos de BRSV. O BRSV está distribuído no mundo todo e o vírus é nativo na população bovina. Infecções pelo BRSV associadas à doença respiratória ocorrem predominantemente em gado de corte jovem e gado leiteiro. Imunidade passivamente derivada não parece prevenir infecções pelo BRSV, mas reduzirá a gravidade da doença. Exposições iniciais ao ví- rus estão associadas à doença respiratória grave; exposições subsequentes resultam em doença branda a subclínica. O BRSV parece ser um vírus im- portante no complexo de doença respiratória bovina em virtude de sua fre- qüência de ocorrência, predileção pelo trato respiratório inferior e sua capa- cidade de predispor o trato respiratório à infecção bacteriana secundária. Em surtos, a morbidade tende a ser alta e fatalidade de casos pode ser de 0- 20%. Sinais incluem temperatura retal aumentada de 40-42 0C, depressão, ingestão de alimento diminuída, taxa respiratória aumentada, tosse e des- carga Iacrimal e nasal. Geralmente, sinais respiratórios predominam. Disp- neia pode se tornar pronunciada nos últimos estágios da doença. Enfisema subcutâneo algumas vezes é recortado. Pneumonia bacteriana é uma ocor- rência freqüente. Um padrão de doença bifásico foi descrito, mas não é con- sistente. Lesões a olho nu incluem uma pneumonia intersticial difusa com enfisema subpleural e intersticial junto com edema intersticial. Essas lesões são similares a e devem ser diferenciadas de outras causas de pneumonia intersticial. Exame histológico revela células sinciciais no epitélio bronquiolar e parênquima pulmonar, corpos de inclusão intracitoplásmicos, proliferação e/ou degeneração do epitélio bronquiolar, epitelização alveolar, edema e formação de membrana de hialina.
Herpesvírus Bovino (BHV-1) está associado a várias doenças e sintomas em gado: rinotraqueíte bovina infecciosa (IBR), vulvovaginite pus- tular infecciosa (IPV), balanopostite, conjuntivite, aborto, encefalomielite e mastite. Apenas um único soro tipo de BHV-1 é reconhecido; contudo, três subtipos de BHV-1 foram descritos com base em padrões de clivagem de endonuclease de DNA viral. Esses subtipos são referidos com BHV-1.1 (sub- tipo respiratório) BHV-1.2 (subtipo genital) e BHV-1.3 (subtipo encefalítico). Recentemente o BHV-1.3 foi reclassificado como um herpesvírus distinto designado BHV-5. Infecções pelo BHV-1 são difundidas na população de gado de engorda, a forma respiratória é mais comum. A infecção viral sozi- nha não ameaça a vida, mas predispõe o gado à pneumonia bacteriana se- cundária, a qual pode resultar em morte. Em gado de criação, aborto ou in- fecções genitais são mais comuns. Infecções genitais podem ocorrer em tou- ros (balanopostite postular infecciosa) e vacas (IPV) dentro de 1-3 dias de acasalamento ou contato íntimo com um animal infectado. A transmissão pode ocorrer na ausência de lesões visíveis e através de inseminação artifi- cial com sêmen de touros subclinicamente infectados. Gado com infecções latentes pelo BHV-1 geralmente não mostram sinais clínicos quando o vírus é reativado, mas ele serve como uma fonte de infecção para outros animais suscetíveis e, assim, perpetuam a doença. O período de incubação para as formas respiratória e genital é de 2-6 dias. Na forma respiratória, sinais clíni- cos oscilam de brandos a graves, dependendo da presença de pneumonia bacteriana secundária. Sinais clínicos incluem pirexia, anorexia, tosse, sali- vação excessiva, descarga nasal que progride de serosa para mucopurulen- ta, conjuntivite com descarga lacrimal, narinas inflamadas (consequentemen- te, o nome comum "red nose") e dispnéia se a Iaringe se torna obstruída com material purulento. Pústulas podem se desenvolver sobre a mucosa nasal e depois formam placas difteríticas. Conjuntivite com opacidade cor- neal pode se desenvolver como a única manifestação de infecção pelo BHV- 1. Na ausência de pneumonia bacteriana, a recuperação geralmente ocorre 4-5 dias após o início dos sinais clínicos. Abortos podem ocorrer concorren- temente com doença respiratória, mas também podem ocorrer até 100 dias após a infecção. Abortos podem ocorrer a despeito da gravidade da doença na vaca prenhe. Abortos geralmente ocorrem durante a segunda metade da gravidez, mas morte embriônica precoce também pode ocorrer. Os primeiros sinais de infecções genitais em vacas são urinação freqüente, elevação da base da cauda e uma descarga vaginal branda. A vulva está intumescida e pequenas pápulas, então erosões e úlceras, estão presentes sobre a super- fície mucosal. Se infecção bacteriana ocorre, pode haver inflamação do úte- ro e infertilidade transitória, com descarga vaginal purulenta durante várias semanas. Em touros, lesões similares ocorrem sobre o pênis e prepúcio. Infecção por BHV-1 podem ser graves em bezerros jovens e causa uma do- ença e causa uma doença generalizada. Pirexia, descargas oculares e na- sais, dificuldade respiratória, diarréia, incoordenação e eventualmente con- vulsões e mortes podem ocorrer em um curto período após infecção viral generalizada. IBR raramente é fatal em gado, a menos que complicada por pneumonia bacteriana. Em infecções IBR não complicadas, a maioria das lesões está restrita ao trato respiratório superior e traqueia. Hemorragias pe- tequiais a equimóticos podem ser encontradas nas membranas mucosas da poço nasal e do sino paranasal. Áreas focais de necrose se desenvolvem no nariz, faringe, Iaringe e traqueia. As lesões podem coalescer para formar placas. Os sinos estão freqüentemente cheios de um exsudato seroso ou serofibroso. À medida que a doença progride, a faringe se torna coberta com um exsudato serofibroso e um fluído tingido de sangue pode ser encontrado na traqueia. Os nódulos linfáticos pulmonares e faringeais podem estar agu- damente intumescidos e hemorrágicos. A traqueíte se estende para os brôn- quios e bronquíolos; quando isso ocorre, o epitélio se desprende das vias áreas. As lesões virais são, freqüentemente, mascaradas por infecções bac- terianas secundárias. Em animais jovens com infecção generalizada pelo BHV-1, erosões e úlceras depositadas com resíduos podem ser encontradas no nariz, esôfago e rúmen. Além disso, focos brancos podem ser encontra- dos no fígado, rim, baço e nódulos linfáticos. Os fetos abortados podem ter lesões pálidas, focais, necróticas em todos os tecidos, mas as quais são es- pecialmente visíveis no fígado.
Uma série de outros Vírus Respiratórios foram identificados co- mo estando envolvidos em BRD. O Herpesvírus-4 bovino foi implicado em várias doenças, incluindo BRD. Adenovírus bovino foi associado a um amplo espectro de doenças, com adenovírus bovino do tipo 3 sendo o sorotipo mais freqüentemente associado à BRD. Dois sorotipos de rinovírus bovino foram reconhecidos por causar infecções do trato respiratório pingado. Ou- tros vírus reportados como estando associado a BRD incluem reovírus bovi- no, interovírus e coronavírus. Esses vírus têm um papel similar aos outros vírus previamente discutidos pelo fato de que em combinação com outros estressores eles podem servir como iniciadores de pneumonia bacteriana. Coronavírus bovino é também comumente associado à diarréia em bezerros. Ele se reproduz no epitélio do trato respiratório superior e nos enterócitos do intestino, onde ele produz lesões similares ao rotavírus, mas também infecta as células epiteliais do intestino delgado para produzir atrofia dos sulcos co- lônicos. Vacinas não estão disponíveis para a prevenção dessas doenças respiratórias virais.
O rotavírus bovino é a causa viral mais comum de diarréia em bezerros. Rotavírus do Grupo AeB estão envolvidos, mas o grupo A é mais prevalente e clinicamente importante e contém vários sorotipos de virulência diferente. O rotavírus se replica nos enterócitos que produzem enzima e ab- sorventes maduros sobre as vilosidades do intestino delgado, levando à rup- tura e desprendimento dos enterócitos com liberação de vírus para infectar células adjacentes. Rotavírus não infecta as células imaturas das criptas. Com cepas virulentas de rotavírus, a perda de enterócitos excede a capaci- dade das criptas intestinais de repor os mesmos; consequentemente, a altu- ra das vilosidades é reduzida, com uma diminuição conseqüente na área de superfície absorvente intestinal e atividade de enzima digestiva intestinal.
Outros vírus, incluindo Breda vírus, um vírus cálice-semelhante, Adenovírus, Astrovirus e Parvovírus, foram demonstrados nas fazes de be- zerros com diarréia e podem produzir diarréia em bezerros experimental- mente. Contudo, esses agentes também podem ser demonstrados nas fazes de bezerros saudáveis. A importância desses agentes na síndrome de diar- reia neonatal ainda não foi determinada. Manheimia haemoiytica (formal- mente Pasteureila haemoiytica) biotipo A1 sorotipo 1, é a bactéria mais fre- qüentemente isolada dos pulmões de gado com BRD. Embora menos fre- qüentemente cultivada do que M. haemoiytica, Pasteurella multocida é tam- bém uma causa importante de pneumonia bacteriana. Quando abscesso pulmonar ocorre, geralmente em associação com pneumonia crônica, Acti- nomyces pyogenes é mais freqüentemente isolado. Sob condições normais, M. haemoiytica permanece confinada ao trato respiratório superior, em parti- cular nas criptas tonsilares, e é difícil cultivar a partir de gado saudável. Após estresse ou infecção viral, a taxa de replicação de M. haemolytica no trato respiratório superior aumenta rapidamente, assim como a probabilidade de cultura da bactéria. A taxa de crescimento bacteriana aumentada e coloniza- ção dos pulmões podem ser em virtude da supressão do mecanismo de de- fesa do hospedeiro relacionada a estressores ambientais ou infecções virais. É durante essa fase Iog de crescimento que fatores de virulência são elabo- rados por M. haemolytica, tal como a exotoxina que foi referida como Ieuco- toxina. A interação entre os fatores de virulência das bactérias e defesas do hospedeiro resulta em dano tecidual e desenvolvimento de pneumonia. Si- nais clínicos de pneumonia bacteriana são freqüentemente precedidos por sinais de infecção viral do trato respiratório. Com o início de pneumonia bac- teriana, a gravidade dos sinais clínicos aumenta e são caracterizados por depressão e toxemia. Haverá pirexia (40-41 0C); descarga nasal serosa a mucopurulenta; tosse úmida; e uma taxa respiratória rápida, superficial. Aus- culta do campo pulmonar crânio-ventral revela sons brônquicos aumentados, crepitações e assobios. Em casos graves. Pleurisia pode se desenvolver, a qual é caracterizada por um padrão de respiração irregular e roncos quando de expiração. O animal se tornará de aparência magra se a pneumonia se torna crônica, a qual usualmente está associada à formação de abscessos pulmonares. M. haemolytica causa uma pneumonia aguda fibrinosa grave ou pneumonia fibrinonecrótica. A pneumonia tem um padrão broncopneumôni- co. A olho nu,, existem regiões crânio-ventrais pretas-avermelhadas a mar- rom-acinzentadas extensivas de consolidação com espessamento gelatinoso do septo interlobular e pleurite fibrinosa. Há tromboses extensivas, focos de necrose pulmonar e evidência limitada de bronquite e bronquiolite. P. multo- cida está associada a uma broncopneumonia fibrinosa a fibropurulenta me- nos fulminante. Em contraste à M. haemolytica, P. multocida está associada apenas a pequenas quantidades de exsudação de fibrina, algumas trombo- ses, necrose pulmonar limitada e bronquite e bronquiolite supurativas.
Haemophilus somnus está sendo crescentemente reconhecido como um patógeno importante em BRD; essas bactérias são habitantes normais da nasofaringe do gado. Infecção dos pulmões por H. somnus resul- ta em broncopneumonia purulenta que pode ser seguida por septicemia e infecção de múltiplos órgãos. Ocasionalmente, H. somnus está associada à pleurite extensiva. H. somnus pode causar uma doença septicêmica aguda, usualmente fatal que pode envolver os sistemas nervoso, músculo- esquelético, circulatório e respiratório, quer unicamente ou juntos. O sistema reprodutivo freqüentemente é afetado, mas usualmente sem que os outros sistemas estejam clinicamente envolvidos. A doença pode ser caracterizada por febre, depressão grave, ataxia, fraqueza, cegueira, coma e morte dentro de várias horas e vários dias. Ela ocorre esporadicamente em gado de corte e gado leiteiro individual e é encontrada quase que no mundo todo. H. som- nus é um cocobacilo gram-negativo, não móvel, que não forma esporos, ple- omórfico que requer um meio enriquecido e uma atmosfera microaerofílica para cultura. Ele parece ser idêntico ao Histophilus ovis e Haemophilus agni, agentes etiológicos de septicemia, mastite e epididimite ovina; contudo, a transmissão de H. somnus entre ovelha e gado não foi demonstrada. Cepas patogênicas e não patogênicas foram diferenciadas através de inoculação intracisternal de bezerros jovens com organismos de várias fontes. Cepas patogênicas e não patogênicas de H. somnus são trazidas na glande e pre- púcio de machos, na vagina de bezerros fêmeas e nas passagens nasais de ambos os sexos. O organismo pode colonizar o trato respiratório, presumi- velmente após inalação, e freqüentemente é encontrado na urina. Prevalên- cia do organismo em gado é provavelmente alta porque altas titulações de anticorpos específicos são encontrados em uma grande proporção do gado testado. Várias síndromes doentias causadas por H. somnus foram reconhe- cidas, incluindo trombomeningoencefalite, broncopneumonia fibrinopurulen- ta, pleurite fibrinosa e poliartrite. Necrose do miocárdio e músculo esqueléti- co ocorrem. Vaginite supurativa, cervicite e endometrite foram documenta- das em vacas infectadas experimentalmente e naturalmente após cruzamen- to e o organismo é uma causa de aborto esporádico. Cepas de H. somnus que causam a doença aderem ao endotélio dos vasos, resultando em con- tração, exposição de colágeno, adesão plaquetária e trombose. TME resulta quando isso ocorre no cérebro e membranas associadas, após invasão do organismo na corrente sangüínea de gado suscetível. As cepas podem ade- rir ao endotélio em vasos da pleura, miocárdio, sinóvio ou uma variedade de outros tecidos e produz inflamação nesses locais (por exemplo, infecções da laringe e parte mediana do ouvido foram registradas). A suscetibilidade de animais individuais e variações na preferência de cepas do organismo por vasos em diferentes tecidos pode ser importante no desenvolvimento da forma da divulga, mas os mecanismos envolvidos são incompletamente compreendidos. Problemas reprodutivos podem não ser necessariamente precedidos por bacteremia, mas a patogênese é pobremente definida. Uma febre tão alta quanto 42 0C é freqüentemente o primeiro sinal da doença; contudo, essa usualmente cai para o normal ou subnormal dentro de horas. Outros achados são determinados pelo(s) sistema(s) envolvido(s) e podem incluir respiração rápida, rigidez, pés girados para dentro, depressão grave, ataxia, paralisia e opistotônus, seguido por coma e morte dentro de várias horas. Os animais afetados podem ficar cegos e hemorragias retinais com focos cinzas de necrose retinal são observadas algumas vezes. Sinais tais como hiper-sensibilidade, convulsões, excitação, nistagmo e movimentos circulares com os olhos ocorrem inconsistentemente e podem estar relacio- nados às regiões do CNS afetadas no curso do desenvolvimento da divulga. Ocasionalmente, os animais são encontrados mortos, indicando um curso rapidamente fatal. Uma alteração acentuada na contagem de WBC diferen- cial e total é comum; Ieucopenia e neutropenia ocorrem em doença grave, usualmente aguda, fatal, enquanto que neutrofilia pode estar presente em doença menos grave. Em TME, a contagem de células totais do CSF é a- centuadamente aumentada e neutrófilos predominam. Durante septicemia, o organismo pode ser recuperado de sangue, fluido sinovial, CSF1 cérebro, rins, urina e uma variedade de outros órgãos. As lesões são caracterizadas por trombose vascular e enfarte do tecido circundante. Focos marrons a vermelhos aleatoriamente distribuídos de necrose com hemorragia sobre a superfície e seções de corte do cérebro e coluna espinhal, retina, músculo esquelético, miocárdio, rim, intestino e baço são característicos. Uma me- ningite fibrinopurulenta com CSF turvo pode, algumas vezes, ser observada sobre a superfície do cérebro e coluna espinhal e uma polisserosite, especi- almente das articulações e pleura, pode ocorrer. Uma broncopneumonia fi- brinosa aguda com necrose tecidual pode se desenvolver após infecções trazidas pelo ar.
O papel exato de micoplasmas e ureaplasmas em BRD requer melhor definição. Micoplasmas podem ser recuperados do trato respiratório de bezerros não pneumônicos, mas a freqüência de isolamento é maior do que naqueles com doença do trato respiratório. Os micoplasmas comumente recuperados dos pulmões de bezerros pneumônicos incluem Mycoplasma díspar, Mycoplasma bovis e Ureaplasma spp. Infecções experimentais usu- almente resultam em sinais não evidentes a brandos de doença respiratória. Isso não exclui um papel sinergístico para micoplasmas em conjunto com vírus e bactérias em BRD. Lesões descritas incluem edema e alveolite Iinfoi- de peri-brônquica e peri-bronquiolar. Cultura desses organismos requer mei- os e condições especiais e pode levar até uma semana para crescimento dos organismos.
Chlamydiae foi identificada em várias partes do mundo como uma causa de pneumonia enzoótica em bezerros. O agente causador é C- hlamydia psittaci. Alguns isolados respiratórios de bezerros têm proprieda- des dos imunotipos 1 e 6 e são similares às cepas recuperadas de infecções intestinais e abortos de gado e ovelha. O imunotipo 6 foi recuperado de pul- mões pneumônicos de bezerros e porcos. Assim, o trato Gl deve ser consi- derado como um local importante na patogênese de infecções clamidiais e como um reservatório e fonte naturais dos organismos. Pneumonia clamidial tem afetado bezerros sob uma faixa inteira de condições, bem como em fa- zendas de gado leiteiro. Um sinergismo entre Chlamydia e P. haemolytica foi demonstrado experimentalmente. Bezerros com pneumonia clamidial são usualmente febris, letárgicos e dispnéicos e têm uma descarga nasal serosa e depois mucopurulenta e uma tosse seca. Bezerros com idade de desma- me são afetados mais freqüentemente, mas gado mais velho também pode mostrar sinais. A lesão pulmonar aguda é uma pneumonia bronco- intersticial. As partes anteroventrais dos pulmões são afetadas mas, em ca- sos graves, lobos inteiros podem estar envolvidos. A tosse seca é atribuída à traqueíte. Alterações microscópicas nos pulmões incluem bronquite supura- tiva e alveolite que progride para hiperplasia pneumocítica do tipo Il e espes- samento intersticial.
Canpilobacteriose genital bovina é uma doença venérea do gado caracterizada primariamente por morte embriônica precoce, infertilidade, um período de parto prolongado e ocasionalmente aborto. A distribuição é pro- vavelmente no mundo todo. A causa é a bactéria flagelada polar, curvada ou em espiral, gram-negativa, móvel Campylobacter fetus venerealis ou Camp- ylobacter fetus fetus. Durante muitos anos, acreditou-se que a C. fetus fetus (formalmente C. fetus intestinalis) era geralmente um organismo intestinal, apenas ocasionalmente causando aborto em gado e não era uma causa de infertilidade. Contudo, foi mostrado que C. fetus fetus pode também ser uma causa significativa da síndrome de infertilidade clássica usualmente atribuída à Campylobacter fetus venerealis. Existem várias cepas de C. fetus fetus e a única forma de determinar se uma cepa é uma causa de infertilidade é testar essa possibilidade em um grupo de novilhas. Campylobacter spp são muito sensíveis e são destruídas rapidamente pelo calor, seca e exposição à at- mosfera. A menos que cultivadas rapidamente após coleta do animal e cres- cidas sob condições microaerofílicas ou anaeróbicas, campylobactérias não crescerão. Campylobacter fetus é transmitido venereamente e também atra- vés de instrumentos contaminados, forragem ou através de inseminação artificial usando sêmen contaminado. Touros individuais variam quanto à sua suscetibilidade à infecção porque alguns se tornam portadores permanentes, enquanto que outros parecem ser resistentes à infecção. Touros também podem transmitir a infecção mecanicamente durante várias horas após copu- lação com uma vaca infectada. Em vacas, a duração do estado portador também é variável; algumas eliminam a infecção rapidamente, enquanto que outras trazem a C. fetus durante £ 2 anos. Anticorpos de IgA são dispersos no muco cervical em quantidades significativas em -50% das vacas durante vários meses após infecção e são diagnosticamente úteis. Embora a maior parte do trato genital possa estar isenta de infecção quando uma vaca even- tualmente concebe, a vagina pode permanecer cronicamente infectada, mesmo durante gravidez. Vacas são sistemicamente normais, mas há um grau variável de endometrite mucopurulenta que causa morte embriônica precoce, fases Iuteais prolongadas, ciclos de cio irregulares, sangramento repetido e, como um resultado, períodos de parto prolongados. Abortos ob- servados não são comuns. Em rebanhos não tratados intensivamente, a do- ença pode ser percebida apenas quando exames de gravidez revelam taxas baixas ou marginalmente baixas de gravidez mas, de modo mais importante, grandes variações nas durações de gestação, especialmente quando a do- ença foi recentemente introduzida no rebanho. Em anos subsequentes, infer- tilidade está usualmente confinada a novilhas novas e umas poucas vacas suscetíveis. Touros são assintomáticos e produzem sêmen normal.
Leptospirose é uma doença contagiosa de animais, incluindo o homem, causada por várias soro-variedades Ieptospirais imunologicamente distintas, a maioria das quais é considerada como subgrupos de Leptospira interrogans. Infecções podem ser assintomáticas ou causar vários sinais, incluindo febre, icterícia, hemoglobinúria, insuficiência renal, infertilidade, aborto e morte. Após infecção aguda, as Ieptospiras freqüentemente se loca- lizam nos rins ou órgãos reprodutivos e estão dispersos na urina, algumas vezes em grandes números durante meses ou anos. Em virtude do fato de os organismos sobreviverem em águas superficiais durante períodos prolon- gados, a doença é, freqüentemente, trazida pela água. Nos EUA, a doença é primariamente em virtude das soro-variedades Leptospira hardjo, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa. Contudo, as soro-variedades Leptospi- ra canicola e Leptospira icterohaemorrhagiae também foram isoladas. Os bezerros podem ter febre, anorexia e dispnéia e, em infecções por Leptospi- ra pomona, icterícia, hemoglobinúria e anemia. A temperatura corporal pode se elevar subitamente para 40,5-41 0C. A hemoglobinúria raramente dura mais de 48-72 horas. Icterícia some rapidamente e é seguida por anemia. O número de RBC's começa a aumentar em 4-5 dias e retorna para o normal 7-10 dias depois. Contudo, infecções por Leptospira hardjo usualmente não causam anemia hemolítica, a qual torna o diagnóstico mais difícil. A morbi- dade e mortalidade são mais altas em bezerros do que em gado adulto. Em gado mais velho, os sinais variam grandemente e o diagnóstico é mais difícil. Infecções enzoóticas por Leptospira hardjo, as quais usualmente resultam em leite anormal, são mais óbvias em gado leiteiro do que em gado de corte. Os sinais usualmente estão restritos à produção diminuída de leite e bezer- ro; uma crise hemolítica pode não ocorrer. O leite é espesso, amarelo e tin- gido de sangue; ele pode conter coágulos, embora haja pouca evidência de inflamação mamaria. A produção de leite retorna ao normal em 10-14 dias, mesmo na ausência de tratamento. Aborto e natimortos, os quais são co- muns em infecções por Leptospira pomona e esporádicos em infecções por Leptospira hardjo, geralmente ocorrem 3-10 semanas após infecção inicial. Os abortos são mais comuns durante o terceiro trimestre. Uma onda de a- bortos em um rebanho de criação é freqüentemente a primeira indicação de que há leptospirose, porque os sinais iniciais brandos freqüentemente pas- sam despercebidos. Em rebanhos endemicamente infectados, abortos ocor- rem principalmente em animais mais jovens e são esporádicos ao invés de serem manifestados como ondas de aborto. Os bezerros paridos por vacas previamente infectadas são protegidos pelos anticorpos colostrais durante até 6 meses. Os bezerros geralmente têm uma titulação de anticorpo similar àquela de suas mães no parto. Na forma aguda, anemia, icterícia, hemoglo- binúria e hemorragias submucosais são proeminentes. Os rins estão incha- dos, com hemorragias petequiais e equimóticas multifocais que se tornam pálidas com o tempo. O fígado pode estar inchado, com áreas diminutas de necrose focai. Petéquias em outros órgãos são observadas em casos fulmi- nantes; contudo, nas infecções por Leptospira hardjo mais prevalentes, as lesões estão primariamente restritas aos rins.
Brucelose é causada por bactérias do gênero Brucella e é carac- terizada por aborto, placenta retida e, até um menor grau, orquite e infecção das glândulas sexuais acessórias em machos. A doença em gado, búfalo e bisão é causada quase que exclusivamente por Brucella abortus; contudo, Bruceila suis ou Brucella melitensis ocasionalmente está implicada em al- guns rebanhos de gado. Brucella suis não parece ser contagiosa de vaca para vaca. A infecção se dispersa rapidamente e causa muitos abortos em rebanhos não vacinados. Tipicamente, em um rebanho no qual a doença é endêmica, uma vaca infectada aborta apenas uma vez após exposição; as gestações e lactações subsequentes parecem normais. Após exposição, a maioria do gado se torna bacterêmico durante um curto período e desenvol- vem aglutininas e outros anticorpos; outros resistente à infecção e um pe- queno percentual de vacas infectadas se recupera. Um teste de aglutinação de soro positivo usualmente precede o aborto ou um parto normal, mas pode ser retardado em -15% dos animais. O período de incubação pode ser vari- ável e está relacionado ao estágio de gestação no momento de exposição. Os organismos estão dispersos no leite de descargas uterinas e a vaca pode se tornar temporariamente estéril. Bactérias podem ser encontradas no útero durante a gravidez, involução uterina e, menos freqüentemente, durante um período prolongado no útero não grávido. Disseminação da vagina desapa- rece grandemente com redução dos fluidos após o parto. Algumas vacas infectadas que abortaram anteriormente dispersaram brucellae do útero em partos normais subsequentes. Os organismos estão dispersos no leite du- rante um período de tempo variável - na maioria do gado por toda a vida. Transmissão natural ocorre através de ingestão de organismos, os quais estão presentes em grandes números em fetos abortados, membranas fetais e descargas uterinas. O gado pode ingerir alimento e água contaminados ou lamber genitais contaminados de outros animais. Transmissão venérea atra- vés de touros infectados para vacas suscetíveis parece ser rara. A transmis- são pode ocorrer através de inseminação artificial quando sêmen contami- nado com Brucella é depositado no útero mas, segundo informações, não quando depositado na parte mediana do cérvix. Brucellae pode entrar no corpo através das membranas mucosas, conjuntivas, feridas ou mesmo pele intacta. Vetores mecânicos (por exemplo, outros animais, incluindo o ho- mem) podem disseminar a infecção. Brucellae foi recuperado de fetos e de estrume que permaneceu em um ambiente gelado durante > 2 meses. Ex- posição à luz do sol direta mata os organismos dentro de umas poucas ho- ras. Aborto é a manifestação óbvia. Infecções também podem causar nati- mortos ou bezerros fracos, placentas retidas e rendimento reduzido de leite. Usualmente, a saúde geral não é prejudicada em abortos não complicados. Vesículas seminais, âmbula, testículos e epidídimos podem estar infectados em touros; portanto, os organismos estão no sêmen. Aglutininas podem ser demonstradas em plasma seminal de touros infectados. Abscessos testicula- res podem ocorrer. Infecções de longa duração podem resultar em articula- ções artríticas em alguns gados.
Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes causa aborto esporá- dico no último trimestre. Raramente, a incidência em rebanho pode atingir níveis enzoóticos (64%). As bactérias estão presentes sobre as membranas mucosas de muitas vacas normais, bem como em descargas uterinas e abs- cessos. Elas entram na corrente sangüínea e causam uma endometrite e placentite, a qual é difusa com uma cor marrom a marrom avermelhada. O feto usualmente é autodigerido, com pericardite fibrinosa, pleurite ou possí- vel peritonite.
Clostridia são organismos em formato de bastonete, que formam esporos, anaeróbicos, relativamente grandes. Os esporos são ovais, algu- mas vezes esféricos e são de posição central, subterminal ou terminal. As formas vegetativas de clostridia em fluidos teciduais de animais infectados ocorrem unicamente, em pares ou raramente em cadeias. Diferenciação das várias espécies patogênicas e relacionadas é baseada em características culturais, formato e posição de esporo, reações bioquímicas e a especifici- dade antigênica de toxinas ou antígenos na superfície. Os habitais naturais dos organismos são o solo e trato intestinal de animais, incluindo o homem. Cepas patogênicas podem ser adquiridas por animais suscetíveis quer atra- vés de contaminação por ferimentos ou através de ingestão. As doenças assim produzidas são uma ameaça constante à produção de gado com su- cesso em muitas partes do mundo.
Clostridium haemolyticum é um organismo abrigado no solo que pode ser encontrado naturalmente no trato Gl de gado. Ele pode sobreviver durante longos períodos em solo contaminado ou nos ossos de carcaças de animais que tenham sido infectados. Após ingestão, esporos latentes se tor- nam, por fim, alojados no fígado. O período de incubação é extremamente viável e o início depende da presença de um local de anaerobiose no fígado. Tais ninhos para germinação são mais freqüentemente causados por infec- ção por fascíola, muito menos freqüentemente por um alto teor de nitrato na dieta, punção hepática acidental, biópsia hepática ou qualquer outra causa de necrose localizada. Quando condições para anaerobiose são favoráveis, os esporos germinam e as células vegetativas resultantes se multiplicam e produzem β toxina (fosfolipase C), o que causa hemólise intravascular e su- as seqüelas, incluindo anemia hemolítica e hemoglobinúria. O gado pode ser encontrado morto sem sinais premonitórios. Usualmente, há um início súbito de depressão grave, febre, dor abdominal, dispnéia, disenteria e hemoglobi- núria. Anemia e icterícia estão presentes em graus variados. Edema do peito do animal pode ocorrer. Os níveis de Hgb e RBC são muito baixos. A dura- ção dos sinais clínicos varia de -12 horas em vacas prenhes a -3-4 dias em outro gado. A mortalidade dos animais não tratados é de -95%. Alguns ga- dos sofrem de ataques subclínicos da doença e, após o que, atuar como portadores imunes. Desidratação, anemia e, algumas vezes, edema subcu- tâneo estão presentes. Há fluido sangüíneo nas poços abdominal e torácica.
Os pulmões não são grandemente afetados e a traqueia contém espuma sanguinolenta com hemorragias na mucosa. O intestino delgado e ocasio- nalmente o intestino grosso são hemorrágicos; seus conteúdos freqüente- mente contêm sangue livre ou coagulado. Um enfarte anêmico no fígado é virtualmente patognomônico; ele é ligeiramente elevado, de cor mais clara do que o tecido circundante e delineado por uma zona vermelha-azulada de congestão. Os rins são escuros, friáveis e usualmente salpicados de peté- quias. A bexiga contém urina rosa-avermelhada. Após morte, rigor mortis se apresenta mais rapidamente do que o usual.
Clostridium chauvoei ocorre naturalmente no trato intestinal dos animais. É provável que ele possa permanecer viável no solo durante muitos anos, embora ele não cresça ativamente ali. Pasto contaminado parece ser uma fonte de organismos. Surtos de "blackleg" têm ocorrido em gado em fazendas nas quais escavações recentes ocorreram, o que sugere que per- turbação do solo pode ativar esporos latentes. Os organismos provavelmen- te são ingeridos, passam através da parede do trato Gl e, após obter acesso à corrente sangüínea, são depositados nos músculos e outros tecidos. Em gado, a infecção "blackleg" é endógena, em contraste ao edema maligno. Lesões se desenvolvem sem qualquer história de feridas, embora contusões ou exercício excessivo possa precipitar alguns casos. Comumente1 os ani- mais que contraem "blackleg" são de criações de gado de corte, em excelen- te saúde, ganhando peso e usualmente os melhores animais de seu grupo. Surtos ocorrem nos quais uns poucos novos casos são encontrados a cada dia durante vários anos. A maioria dos casos ocorre em gado de 6 meses a 2 anos de idade, mas bezerros promissores tão jovens quanto 6 semanas e gado tão velho quanto 10-12 anos podem ser afetados. A doença usualmen- te ocorre no verão e outono e é incomum durante o inverno. Em ovelha, a doença não está restrita aos jovens e a maioria dos casos segue alguma forma de lesão, tal como cortes ao tosquiar, embarque, remoção de lã ou castração. Usualmente, o início é súbito e uns poucos gados podem ser en- contrados mortos sem sinais premonitórios. Debilidade aguda e depressão acentuada são comuns. Inicialmente, há uma febre mas, no momento em que os sinais clínicos são óbvios, a temperatura pode estar normal ou sub- normal. Inchaços crepitantes e edematosos característicos se desenvolvem no quadril, ombro, peito, costas, pescoço ou em qualquer parte. A princípio, o edema é pequeno, quente e doloroso. À medida que a doença progride, o inchaço aumenta, há crepitação quando de apalpação e a pele se torna fria e insensível, conforme o suprimento de sangue para a área diminui. Sinais gerais incluem prostração e tremores. Morte ocorre em 12-48 horas. Em al- guns gados, as lesões estão restritas ao miocárdio e ao diafragma, sem ne- nhuma evidência ante mortem confiável da lesão localizada.
Clostridium novyi tem sido suspeito, mas ainda não confirmado, como a causa de morte súbita em gado e porcos alimentados com dietas à base de grãos em alto nível e nos quais lesões preexistentes do fígado não foram detectáveis. As toxinas letais e necrosantes (primariamente α toxina) danificam o parênquima hepático, desse modo, permitindo que as bactérias se multipliquem e produzam uma quantidade letal de toxina. Usualmente, a morte é súbita, sem sinais bem-definidos. Os animais afetados tendem a andar atrás do rebanho, assumem reclinação externai e morrem dentro de umas poucas horas. A maioria dos casos ocorre no verão e início do outono, quando infecção pelo fascíola no fígado está em seu máximo. A doença é mais prevalente em ovelhas de 1 a 4 anos de idade e está limitada a animais infectados com fascíolas no fígado. Diferenciação de fascioliase aguda pode ser difícil, mas mortes peragudas de animais que mostram lesões típicas quando de necropsia levantarão a suspeita de hepatite necrótica infecciosa. As lesões mais características são os focos necróticos amarelo- acinzentados no fígado que freqüentemente seguem os traços migratórios dos fascíolas jovens. Outros achados comuns são saco pericárdico aumen- tado com fluido cor de palha e fluido em excesso nas poços peritoneal e to- rácica. Usualmente, há ruptura extensiva dos capilares no tecido subcutâ- neo, o que faz com que a pele adjacente se torne preta (consequentemente, o nome comum doença negra).
Clostridium septicum é encontrado no solo e conteúdos intesti- nais de animais (incluindo o homem) no mundo todo. A infecção ocorre, co- mumente, através de contaminação de feridas contendo tecido desvitalizado, solo ou algum outro debilitante tecidual. Feridas causadas por acidente, cas- tração, embarque, vacinação sanitária e parto podem se tornar infectadas. Sinais gerais, tais como anorexia, intoxicação e febre alta, bem como lesões locais, se desenvolvem dentro de umas poucas horas a uns poucos dias a- pós lesão de pré-disposição. As lesões locais são inchados moles que se comprimem quando de pressão e se estendem rapidamente em virtude da formação de grandes quantidades de exsudato que se infiltra no tecido co- nectivo subcutâneo e intramuscular das áreas afetadas. O músculo em tais áreas é marrom escuro a preto. Acúmulos de gás são incomuns. Edema gra- ve da cabeça dos carneiros ocorre após infecção de feridas ocasionadas por brigas. Edema maligno associado a lacerações da vulva no parto é caracte- rizado por edema acentuado da vulva, toxemia grave e morte em 24-48 ho- ras. Similaridade à "blackleg" é acentuada e diferenciação feita quando de necropsia não é confiável; confirmação em laboratório é o único procedimen- to certo. Cavalos e porcos são suscetíveis a edema maligno, mas não "blac- kleg".
Doença infecciosa causada por Clostridium sordellii também é caracterizada por um inchado edematoso não gasoso, não hemorrágico da cabeça, face e pescoço de carneiros jovens. Essa infecção é iniciada em carneiros jovens através de sua transmissão contínua de uns para os outros. Os tecidos subcutâneos contundidos e com pancadas proporcionam condi- ções adequadas para crescimento de clostrídios patogênicos e os surtos na pele oferecem uma oportunidade para sua entrada.
Infecção com C. perfringens tipos A, B e C causa enterite grave, desinteria, toxemia e alta mortalidade em bezerros jovens. Os Tipos BeC produzem a toxina β altamente necrosante e letal que é responsável por da- no intestinal grave. Essa toxina é sensível a enzimas proteolíticas e a doen- ça está associada à inibição de proteólise no intestino. Colostro da porca, o qual contém um inibidor de tripsina, foi sugerido como um fator na suscetibi- Iidade de leitões jovens. O Tipo C também causa enterotoxemia em gado adulto. Em bezerros, há diarréia aguda, desinteria, dor abdominal, convul- sões e opistotônus. Morte pode ocorrer em umas poucas horas, mas casos menos graves sobrevivem durante uns poucos dias e recuperação durante um período de vários dias é possível. Enterite hemorrágica com ulceração da mucosa é a principal lesão em todas as espécies. A olho nu, a porção afetada do intestino é rosa-azul profundo e parece, à primeira vista, ser um enfarte associado à torção mesentérica. Esfregaços de conteúdos intestinais podem ser examinados com relação a grandes números de bactérias gram- positivas, em formato de bastonete e infiltrados feitos para detecção de toxi- na e subsequente identificação através de neutralização com antissoro es- pecífico.
Essa enterotoxemia clássica causada por C. perfringens tipo D raramente ocorre em gado. Ela tem distribuição mundial e pode ocorrer em animais de qualquer idade. A doença têm sido suspeita em vacas de alta produção que estão amamentando gados de engorda bem nutridos que se alimentam de pasto rico e em síndrome de morte súbita em gado de engor- da; contudo, evidência de sustentação em laboratório no último é deficiente. Bezerros agudamente afetados que não morrem mostram mania, convul- sões, cegueira e morte em umas poucas horas. Bezerros subagudamente afetados mostram-se debilitados durante uns poucos dias e podem se recu- perar.
Toxemia por tétano é causada por uma neurotoxina específica produzida por Clostridium tetani em tecido necrótico. Quase todos os mamí- feros são suscetíveis a essa doença. Embora o tétano tenha distribuição no mundo todo, há algumas áreas, tal como a parte norte das Montanhas Ro- chosas dos EUA, onde o organismo raramente é encontrado no solo e onde o tétano é quase desconhecido. Em geral, a ocorrência de tetani C no solo e a incidência de tétano no homem e cavalos é maior nas partes com fazenda dos vários continentes. Clostridium tetani, um anaeróbio com esporos esféri- cos terminais, é encontrado no solo e no trato intestinal. Na maioria dos ca- sos, ele é introduzido nos tecidos através de feridas, particularmente feridas por punção profunda, que proporcionam um ambiente anaeróbico adequado.
Infecção por Salmonella spp pode produzir diarréia em animais de todas as idades, especialmente aqueles que estão estressados, presos muito próximos ou expostos a um alimento ou suprimento de água pesada- mente contaminado. Salmonelose é causada por muitas espécies de Salmo- nelas e caracterizada clinicamente por uma ou mais de três principais sín- dromes - septicemia, enterite aguda e enterite crônica. A incidência tem au- mentado com a intensificação da produção de animais de criação. Bezerros jovens usualmente desenvolvem a forma septicêmica. Gado adulto, desen- volve enterite aguda. Enterite crônica pode se desenvolver ocasionalmente em gado. Animais prenhes podem abortar. Em animais mais velhos, a doen- ça é manifestada por desinteria e toxemia e mortalidade pode ser significati- va. Embora muitas outras Salmonella spp possam causar doença, as mais relevantes em gado são S. typhimurium, S. dublin e S. newport. Embora seus padrões clínicos resultantes não sejam distintos, diferentes espécies de Salmonelas tendem a diferir quanto à sua epidemiologia. O perfil de plasmí- deo e padrões de resistência a fármaco são, algumas vezes, marcadores úteis para estudos epidemiológicos. Fezes de animais infectados podem contaminar alimentos e água, leite, carnes fresca e processada de abatedou- ros, produtos vegetais e animais usados como fertilizantes ou gêneros ali- mentícios, pasto e pastagem e muitos materiais inertes. Os organismos po- dem sobreviver durante meses em áreas quentes úmidas, tais como currais de porcos ou em reservatórios de água, mas sobrevivem menos de 1 sema- na em estrume de gado composto. Roedores e pássaros silvestres também são fontes de infecção. A prevalência de infecção varia dentre espécies e países e é muito maior do que a incidência de doença clínica, a qual é co- mumente precipitada por situações estressantes, tais como privação súbita de alimento, transporte, estiagem, inundação, parto e a administração de alguns fármacos.
Outros patógenos gastrointestinais relevantes são Cryptospori- dium parvum e Mycobacterium avium paratuberculosis. Paratuberculose é uma enterite crônica contagiosa caracterizada por diarréia persistente e progressiva, perda de peso, debilitação e eventualmente morte. Ela afeta gado, ovelha, cabras, lhamas, camelos, cervos de criação e outros animais domésticos, exóticos e ruminantes silvestres. Ela também foi reconhecida em coelhos silvestres; cavalos e porcos podem ser infectados experimen- talmente. A distribuição é no mundo todo. Existem dados conflitantes sobre o envolvimento do organismo em doença de Crohn, uma enterite crônica em pessoas. Os animais com paratuberculose deverão ser considerados com riscos zoonóticos potenciais até que a situação esteja esclarecida. O orga- nismo causador é Mycobacterium avium paratuberculosis, formalmente conhecido como M. paratuberculosis ou M. johnei. Ocasionalmente, outras subespécies de M. avium são isoladas dos casos. O organismo é muito re- sistente e pode sobreviver no pasto durante mais de 1 ano, mas luz do sol, solos alcalinos e estiagem reduzem sua taxa de sobrevivência. Ele está dis- perso em grandes números nas fezes de animais infectados e a infecção é adquirida através de ingestão de alimento e água contaminados. Introdução da doença em um rebanho limpo usualmente é através de portadores sub- clinicamente infectados. A infecção é adquirida precocemente na vida, mas sinais clínicos raramente se desenvolvem no gado < 2 anos de idade. A re- sistência aumenta com a idade e é improvável que o gado primeiro exposto como adultos se torne infectado. A maioria dos bezerros é infectada tão logo após o nascimento por suas mães contaminadas com fezes de animais in- fectados ou ao serem alojados em cercados contaminados. O organismo também pode estar presente no colostro e leite de vacas infectadas e infec- ções intrauterinas também foram descritas. Após ingestão, as bactérias in- fectam macrófagos na mucosa do intestino delgado inferior e em nódulos linfáticos associados. A maioria dos animais eliminará a infecção através de uma resposta imune precoce célula-mediada que encoraja a atividade mi- crobicida em macrófagos. Em animais suscetíveis, os organismos se multi- plicam e provocam uma enterite crônica que leva à doença clínica. Essa po- de levar meses a anos para se desenvolver e usualmente está em paralelo com um declínio na imunidade célula-mediada e uma elevação no anticorpo ineficaz no soro. Contudo, disseminação fecal começa antes que os sinais clínicos sejam evidentes. Mycobacterium avium paratuberculosis pode ser isolado de fezes, nódulos linfáticos mesentéricos e íleo-cecais, paredes in- testinais espessadas e, menos freqüentemente, a teta e trato reprodutivo de ambos os sexos.
Criptosporidiose é uma enterocolite de distribuição cosmopolita- na causada pelo parasita coccidiano Cryptosporidium parvum. Ele não é hospedeiro-específico e é comum em ruminantes jovens, particularmente bezerros; ele também é encontrado no homem e porcos e é raro em cães, gatos e cavalos. Outros criptosporídios causam doenças em répteis e pássa- ros. A doença em bezerros, caracterizada por perda de peso e diarréia a- quosa, é clinicamente indistinguível de muitas outras causas de diarréia em bezerro. Cryptosporidium parvum é um protozoário minúsculo que é transmi- tido pela via fecal-oral. Oocistos são esporulados (quatro esporozoitos) quando disseminados nas fezes e, portanto, são imediatamente infectivos. O período médio de incubação é de ~4 dias. Bezerros de 1-3 semanas de ida- de parecem ser mais suscetíveis. Sinais tais como anorexia, perda de peso, diarréia e tenesmo, se assemelham àqueles causados por vários outros pa- tógenos intestinais; contudo, infecções sem sinais podem ocorrer. Criptospo- ridiose não complicada é raramente fatal. A doença pode ser grave em indi- víduos imunocomprometidos. Se doença grave em bezerros é observada, outros agentes de doença ou infecções concorrentes deverão ser descarta- das. Embora o C. parvum possa infectar virtualmente o trato intestinal inteiro, o intestino delgado distai usualmente é afetado mais gravemente. Infecção em cavalos está limitada ao intestino delgado. Lesões a olho nu podem con- sistir em mucosa epitelial hiperêmica e conteúdos intestinais amarelados. Microscopicamente, atrofia vilosa branda a grave com organismos esféricos na borda vilosa é evidente. Diferente de Eimeria e Isospora spp, os quais são parasitas intracelulares, o C. parvum é intramembranoso e reside dentro da borda vilosa das células epiteliais intestinais.
Chlamydia psittaci causa aborto esporádico após o quarto mês de gestação, mas usualmente no último trimestre. A chlamydia causa pla- centite, pneumonia fetal e hepatite. Esfregaços de cotilédones corados po- dem revelar os organismos; se não, tecidos podem ser cultivados em ovos de galinha embriônicos. Aborto usualmente é esporádico em vacas, mas uma vacina clamidial ovina tem sido usada em gado.
Inflamação da glândula mamária (mastite) é quase sempre em virtude dos efeitos de infecção por patógenos bacterianos ou micóticos. Mas- tite pode estar associada à infecção ou muitos outros organismos, incluindo Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalaetiae, Klebsiella spp. Pseudo- monas aeruginosa, Aetinomyees pyogenes, Myeoplasma spp, Noeardia aste- roides, Serratia, Myeobaeterium spp, Clostridium perfringens, Pasteurella spp, Ievedos e Prototheea spp.
Dermatomicoses (Dermatofitose) em animais são doenças an- tropozoonóticas da pele e tecido relacionado. Sintomas clínicos são caracte- rizados por perda de pêlo na área afetada, hiperemia, descamação e crostas semelhantes a amianto. Inflamação é freqüentemente acompanhada por supuração. Dermatomicoses também são freqüentemente caracterizadas por infecção localizada da pele. Dermatomicoses em animais trazem um im- pacto sócio-econômico substancial. Animais doentes requerem tratamento prolongado e podem disseminar a infecção para animais e seres humanos. Dermatofitoses são causadas por infecções micóticas de Trichophyton spp.
ou Microsporum spp. Causas mais relevantes para o gado são Trichophyton verrueosum, Triehophyton mentagrophytes ou Triehophyton sarkisovii.
Uma infecção do trato respiratório inferior, usualmente resultan- do em bronquite ou pneumonia, pode ser causada por qualquer um de vários nematoides parasíticos, incluindo Dietyoeaulus viviparus em gado. Esse pa- rasita do pulmão pertence à superfamília Trichostrongyloidea e tem ciclos de vida diretos. O parasita do pulmão em gado é comum no nordeste da Europa e é a causa de surtos graves de "husk" ou "hoose" em gado jovem no pasto. Em virtude do fato de a infecção por D. viviparus em gado ser a mais eco- nomicamente importante, ela tem sido a mais investigada e muitas das ob- servações provenientes da mesma são aplicáveis a outras espécies. A do- ença clínica usualmente se desenvolve quando de primeira exposição a lar- vas infectivas suficientes. Em gado, isso usualmente ocorre durante sua pri- meira estação no pasto; contudo, um aumento no número de gado mais ve- lho afetado foi reportado. Sinais de infecção por parasita pulmonar oscilam de tosse moderada com taxas respiratórias ligeiramente aumentadas a tosse persistente grave e dificuldade e mesmo insuficiência respiratória. Ganhos de peso reduzidos, rendimentos reduzidos de leite e perda de peso acompa- nham muitas infecções em gado. Infecções subclínicas patentes podem o- correr em todas as espécies. Os sinais mais consistentes em gado são ta- quipineia e tosse.
Tricomoníase é uma doença venérea por protozoário do gado caracterizada primariamente por morte fetal prematura e infertilidade, resul- tando em intervalos prolongados de gestação. A distribuição provavelmente é mundial. O protozoário causador, Triehomonas (Tritriehomonas) foetus, é pireforme e comumente de 10-15 χ 5-10 μm, mas há pleomorfismo conside- rável. Ele pode se tornar esférico quando cultivado em meio artificial. Em sua extremidade anterior, existem três flagelos de cerca do mesmo comprimento que o corpo do parasita. Uma membrana ondulante se estende através do comprimento do corpo e é limitada por um filamento marginal que continua além da membrana como um flagelo posterior. Embora T foetus possa so- breviver ao processo usado para congelamento de sêmen, ele é morto por seca ou altas temperaturas. Trichomonas foetus é encontrado nos tratos ge- nitais do gado. Quando as vacas são cruzadas naturalmente com um touro infectado, 30-90% se tornam infectadas, sugerindo que existem diferenças entre as cepas. Variação nas suscetibilidade à tricomaníase quando de cru- zamento também pode existir. Touros de todas as idades podem ficar infec- tados indefinidamente, mas isso é menos provável em machos mais jovens.
Em contraste, a maioria das vacas está livre de infecção dentro de 3 meses após cruzamento. Contudo, a imunidade não é duradoura e reinfecção ocor- re. A transmissão também pode ocorrer quando o sêmen de touros infecta- dos é usado para inseminação artificial. O sinal mais comum é infertilidade causada por morte embriônica. Isso resulta em cruzamento repetido e um período de gestação prolongado. Morte fetal e abortos também podem ocor- rer, mas não são tão comuns quanto perdas prematuras na gestação. Tri- chomonas foetus foi encontrado em culturas vaginais tomadas tão cedo quanto 8 meses de gestação e, evidentemente, os bezerros vivos podem nascer de mães infectadas. Piometra ocasionalmente se desenvolve após cruzamento.
Neospora caninum é um parasita protozoário intracelular oblíquo que foi anteriormente confundido com Toxoplasma gondii. Apenas estágios assexuais são conhecidos e eles se assemelham ao T gondii. O ciclo de vida completo de N caninum é desconhecido, mas ele pode ser transmitido trans- placentalmente em cães, gado, cabras, ovelha e gatos e a subsequente pro- le pode ser afetada. Taquizoitos têm 5-7 χ 1-5 μm, dependendo do estágio de divisão. Eles se dividem através de endodiogenia. Taquizoitos são encon- trados em miócitos, células neurais, células dérmicas, macrófagos e outras células. Cistos teciduais de até 100 μm de diâmetro são encontrados em células neurais; a parede do cisto é amorfa e tem até 4 μm de espessura. Os cistos não têm septos e encerram bradizoitos delgados de 7 χ 1.5 pm. Em gado leiteiro, N caninum é uma causa principal de aborto em muitos países, particularmente nos EUA. Bezerros podem ser abortados natimortos, nascer abaixo do peso, fracos ou paralisados ou eles podem se tornar paralisados dentro de 4 semanas do nascimento. Encefalite não-suporativa é a principal lesão nos tecidos fetais abortados. Aborto pode ocorrer por toda a gestação e algumas vacas podem abortar novamente; as mães desses bezerros são clinicamente normais.
Babebiose é causada por parasitas protozoários intraeritrocíticos do gênero Babesia. Uma ampla faixa de animais domésticos e silvestres e ocasionalmente o homem são afetados pela doença, a qual é transmitida por carrapatos e tem uma distribuição mundial. Duas espécies importantes em gado - Babesia bigemina e Babesia bovis - são dispersas em áreas tropicais e subtropicais e são o foco dessa discussão. Em áreas endêmicas, duas características são importantes na determinação do risco de doença clínica; 1) bezerros têm um grau de imunidade (relacionado a anticorpos derivados do colostro e a idade) que persiste durante ~6 meses e dois) animais que se recuperam de infecções por Babesia são imunes durante a vida. Assim, em altos níveis de transmissão por carrapato, todos os bezerros recém-nascidos se tornaram infectados com Babesia em torno de 6 meses de idade, mos- trando poucos, se algum, sinais clínicos e subseqüentemente sendo imunes. Essa situação de estabilidade endêmica pode ser acentuada por uma redu- ção natural (por exemplo, climática) ou artificial (por exemplo, tratamento acaricida) nos números de carrapatos para níveis onde a transmissão de Babesia por carrapato para os bezerros é insuficiente para assegurar que todos sejam infectados durante esse período precoce crítico. Outras circuns- tâncias que podem levar a surtos clínicos incluem a introdução de gado sus- cetível em áreas endêmicas e a incursão de carrapatos infectados com Ba- besia. Em áreas previamente sem carrapato. Variação de cepa na imunida- de foi demonstrada mas provavelmente não é de significância no campo. A doença aguda geralmente dura um curso de ~1 semana. O primeiro sinal é febre (freqüentemente 41 °C ou maior), a qual persiste e é acompanhada depois por inapetência, taxa respiratória aumentada, tremores musculares, anemia, icterícia e perda de peso com hemoglobinemia e hemoglobinúria nos estágios finais. Envolvimento do CNS em virtude de agregação de eri- trócitos parasitados nos capilares cerebrais ocorre freqüentemente com in- fecção por B. bovis. Constipação ou diarréia pode estar presente. Vacas prenhes freqüentemente abortam. Com cepas virulentas de B. bovis, uma síndrome de choque hipotensivo, combinada com inflamação não específica generalizada, perturbações da coagulação e estase eritrocítica em capilares, contribuem para patogênese. Com a maioria das cepas de B. bigemina, os efeitos patogênicos referem-se mais diretamente à destruição de eritrócito. Os animais que se recuperam da doença aguda permanecem infectados durante uma série de anos com B. bovis e durante os poucos meses no caso de B. bigemina. Nenhum sinal é evidente durante esse estado de portador. Lesões incluem um baço aumentado e friável; um fígado inchado com uma vesícula biliar aumentada contendo bile granular espessada; rins congestio- nados de cor escura; e anemia e icterícia generalizadas. A urina é, freqüen- temente, mas não invariavelmente, vermelha. Outros órgãos, incluindo o cé- rebro e o coração, podem mostrar congestão ou hemorragias petequiais. A suscetibilidade de criações de gado a infecções por Babesia varia; por e- xemplo, gado Brahman é mais resistente à infecção por B. bovis do que as criações Britânicas.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Figura 1 é uma neutralização no soro contra NY93/C (BVDV tipo II)
Figura 2 é um ensaio de neutralização no soro contra KE9 (BVDV tipo I)
Figura 3 é um ensaio de neutralização no soro contra NY93/C (BVDV tipo II)
Todas as seqüências subsequentes mostram as regiões deleta- das indicadas com traços (-), as quais também são numeradas, enquanto que as seqüências na Listagem de Seqüência em anexo são continuamente numeradas sem as regiões deletadas ou códons de aminoácido. SEQ ID NO:1 seqüência de XIKE-A-cDNA SEQ ID N0:2 seqüência de XlKE-A-NdN-cDNA
SEQ ID NO:3 seqüência de XIKE-B-cDNA
SEQ ID NO:4 XIKE-B-NdN-cDNA
SEQ ID NO:5 seqüência de aminoácido de XIKE-A
SEQ ID NO:6 seqüência de aminoácido de XIKE-A-NdN
SEQ ID NO:7 seqüência de aminoácido de XIKE-B
SEQ ID N0:8 seqüência de aminoácido de XIKE-B-NdN
SEQ ID N0:9 seqüência de aminoácido de XIKE-C-NdN
SEQ ID N0:10 seqüência de XIKE-C-NdN-cDNA
SEQ ID N0:11 seqüência de XIKE-C-cDNA
SEQ ID N0:12 seqüência de aminoácido de XIKE-C
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se à vacinas combinadas para o tra- tamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que uma das infecções é causada por BVDV. A vacina combinada, conforme descrito aqui, compreende pelo menos um BVDV atenuado, em que o referi- do BVDV atenuado compreende uma mutação na seqüência de codificação da glicoproteína Erns e pelo menos uma outra mutação na seqüência de codi- ficação para Npro a qual, de preferência, leva à inativação combinada da ati- vidade de RNase que reside na glicoproteína Erns1 além de inativação da ati- vidade de imunomodulação (suposta) que reside em Npro. A invenção tam- bém refere-se a métodos para produção de tais vacinas combinadas.
De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções do sistema respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende um BVDV atenuado, conforme descrito aqui, e pelo menos um outro componente ativo imunológico eficaz para o trata- mento e/ou profilaxia de infecções causadas por Herpes vírus Bovino (BHV), Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV)1 Vírus da Parainfluenza (PI-3), Campylobacter fetus, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptos- pira borgpetersenii, Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira hardjo, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e/ou Leptospira ponoma. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combina- da compreende um BVDV atenuado conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de BHV1 BRSV, PI-3, Campylobacter fetus, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii Leptospira prajitno, Lep- tospira hardjo (Leptospira hardjo prajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptos- pira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e/ou Leptospira ponoma.
De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente in- venção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais do sistema respiratório e reprodutivo em ga- do causadas por BVDV, PI-3, BRSV, IBR e/ou BHV1 em que a referida vaci- na compreende pelo menos um BVDV atenuado conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente ativo imunológico eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3, BRSV IBR e BHV. De acordo com uma outra modalidade mais preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra in- fecções virais do sistema respiratório e reprodutivo em gado causadas por BVDV, PI-3, IBR, BRSV e/ou BHV, em que a referida vacina compreende pelo menos um BVDV atenuado conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de PI-3, IBR, BRSV e/ou BHV.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
DEFINIÇÕES DE TERMOS USADOS NA DESCRIÇÃO:
Antes que as modalidades da presente invenção sejam mencio- nadas conforme aquelas usadas aqui e nas reivindicações em anexo, as formas no singular "um", "uma", "a" e "o" incluem a referência no plural, a menos que o contexto oriente claramente de outro modo. Assim, por exem- plo, referência a "um BVDV" inclui uma pluralidade de tais BVDV, referência à "célula" é uma referência a uma ou mais células e equivalentes das mes- mas conhecidas por aqueles habilitados na técnica e assim por diante. A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado conforme comumente compreendido por aqueles habilitados na técnica à qual a presente invenção pertence. Em- bora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles usa- dos aqui possam ser usados na prática ou testagem da presente invenção, os métodos, dispositivos e materiais preferidos são agora descritos. Todas as publicações mencionadas aqui são incorporadas aqui por referência em sua totalidade incluindo, para fins de descrição e descrição das linhagens de células, vetores e metodologias, conforme reportado nas publicações, os quais poderiam ser usados com relação à presente invenção. Nada aqui de- ve ser construído como uma admissão de que a invenção não se destina a prever tal descrição em virtude de invenção anterior.
O termo "BVDV", conforme usado aqui, refere-se a todos os ví- rus pertencendo a espécies do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) do tipo 1 (BVDV-1) e BVDV do tipo 2 (BVDV-2), incluindo quaisquer subespécies tais como 1a, 1b, 2a, 2,b e semelhantes no gênero Pestivirus dentro da família Flaviviridae (Heinz e outros, 2000). As cepas de BVDV do tipo 1 mais clássi- cas e as cepas de BVDV do tipo 2 mais recentemente reconhecidas mos- tram algumas diferenças distintivas, mas limitadas, nas seqüências de ami- noácido e nucleotídeo.
"Proteína C" ou "C proteína" ou "C-proteína", conforme usado aqui, refere-se a um componente estrutural do vírion do pestivírus (Thiel e outros, 1991). "Proteína C" é a proteína de núcleo ou capsídeo de pestivírus. O referido termo, dependendo do contexto também pode se referir à "Proteí- na C" com uma ou várias trocas de aminoácido resultantes de mutação da seqüência de codificação de nucleotídeo.
O termo "Npro", conforme compreendido aqui, refere-se à primei- ra proteína codificada pela rede de leitura aberta viral que se cliva do resto da poliproteína sintetizada (Stark, e outros, J. Virol. 67:7088-7093 (1993); Wiskerchen, e outros, Virol. 65:4508-4514 (1991)). O referido termo, depen- dendo do contexto, também pode se referir aos aminoácidos de "Npro" res- tantes após mutação da seqüência de codificação de nucleotídeo ou à se- quência de nucleotídeo de codificação para a referida proteína em si. "Ativi- dade de protease que reside em Npro" refere-se à atividade de clivagem de polipeptídeo da referida "Npro". Inativação de Npro, conforme usado aqui, significa a prevenção ou redução considerável da provável atividade de imunomodulação de Npro através de mutação. Em uma modalidade preferida, essa mutação impede ou reduz consideravelmente a interferência de Npro com a indução de uma resposta ao interferon por células infectadas, conforme descrito por Ruggli e outros, (2003). Nesse caso, a inativação de Npro permitiria que a célula mon- tasse uma resposta normal ao interferon.
"Sinal de processamento", conforme usado aqui, refere-se a uma substância que assegura a geração de um N-término funcional da proteína C do pestivírus, de preferência, de BVDV , em particular uma substância sele- cionada do grupo de ubiquitina, LC3, SUMO-1, NEDD8, GATE-16 e GA- BA(A)RAP. Também, proteases selecionadas do grupo de Inteína, picornaví- rus 3C, caridovírus 2A e p15 de vírus da doença hemorrágica em coelhos são compreendidas como "sinais de processamento", conforme usado aqui. Qualquer outro sinal de processamento similar conhecido por aqueles habili- tados que assegura a geração de um N-término funcional da proteína C também será compreendido no termo "sinal de processamento".
"Erns", conforme usado aqui, refere-se à glicoproteína Ems a qual representa um componente estrutural do vírion de pestivírus (Thiel e outros, 1991). A Ems carece de uma ancora típica na membrana e é secretada em quantidades consideráveis das células infectadas; essa proteína foi reporta- da como exibindo atividade de RNase (Hulst e outros, 1994; Schneider e outros, 1993; Windisch e outros, 1996). Deverá ser notado que o termo gli- coproteína EO é freqüentemente usado como um sinônimo para glicoproteí- na Erns em publicações. O referido termo, dependendo do contexto pode também se referir à proteína "Erns" com mutação após mutação da seqüência de nucleotídeo de codificação ou à seqüência de nucleotídeo de codificação para a referida proteína em si. "Atividade de RNase que reside em glicopro- teína Ems" refere-se à atividade de clivagem de RNA da referida 2 da referida glicoproteína, isto é, a capacidade da glicoproteína Erns de hidrolisar RNA. O termo "inativação da atividade de RNase que reside na referida glicoproteí- na" refere-se à incapacidade ou capacidade reduzida de uma glicoproteína E modificada de hidrolisar RNA quando comparado com o tipo silvestre não modificado da referida glicoproteína Ems.
Inativação de Ems1 conforme usado aqui, significa atividade de RNase não significativamente acima do nível medido para células de contro- le não infectadas em um ensaio de RNase1 conforme descrito em Meyers e outros, 1999. "Não significativamente acima do nível medido para células de controle não infectadas em um ensaio de RNase, conforme descrito em Me- yers e outros, 1999", significa, por exemplo, que a atividade de RNase é me- nos do que 150% comparado com as células de controle não infectadas.
Atenuação: "um pestivírus ou partícula de BVDV atenuada", con- forme usado aqui, significa que há uma diferença estatisticamente significati- va entre a virulência de um pestivírus ou partículas de BVDV atenuadas da presente invenção, em que as referidas partículas virais atenuadas são ate- nuadas através de um método descrito aqui e um pestivírus do tipo silvestre ou isolados de BVDV dos quais o referido pestivírus ou partículas de BVDV atenuadas tenham sido derivadas, para os parâmetros clínicos predominan- tes, no caso de BVDV para diarréia, pirexia e Ietalidade em animais infecta- dos com a mesma dose, de preferência, 6x106 TCID50. Assim, as referidas partículas de BVDV atenuadas não causam diarréia, pirexia e Ietalidade e, assim, podem ser usadas em uma vacina.
"Patógeno bovino", conforme usado aqui, significa um micro- organismo que tem um impacto sobre a saúde do gado.
"Componente ativo imunológico" ou "Componente imunologica- mente ativo", conforme usado aqui, significa um componente que induz ou estimula a resposta imune em um animal ao qual o referido componente é administrado. De acordo com uma modalidade preferida, a referida resposta imune é dirigida ao referido componente ou a um micro-organismo compre- endendo o referido componente. De acordo com uma outra modalidade pre- ferida, o componente ativo imunológico é um micro-organismo atenuado, incluindo vírus vivo modificado (MLV), um micro-organismo morto ou pelo menos uma parte imunológica ativa de um micro-organismo.
"Parte imunológica ativa de um micro-organismo", conforme u- sado aqui, significa uma fração contendo proteína, açúcar e/ou glicoproteína de um micro-organismo que compreende pelo menos um antígeno que induz ou estimula a resposta imune em um animal ao qual o referido componente é administrado. De acordo com uma modalidade preferida, a referida respos- ta imune é dirigida à referida parte imunológica ativa de um micro-organismo ou a um micro-organismo compreendendo a referida parte imunológica ativa.
O termo "vacina", conforme usado aqui, refere-se a uma compo- sição farmacêutica compreendendo pelo menos um componente imunologi- camente ativo que induz a uma resposta imunológica em um animal e possi- velmente, mas não necessariamente um ou mais componentes adicionais que intensificam a atividade imunológica do referido componente ativo. Uma vacina pode, adicionalmente, compreender outros componentes típicos de composições farmacêuticas. O componente imunologicamente ativo de uma vacina pode compreender partículas virais completas em sua forma original ou como partículas atenuadas em uma assim denominada vacina viva modi- ficada (MLV) ou partículas inativadas através de métodos apropriados em uma assim denominada vacina morta (KV). Em outra forma, o componente imunologicamente ativo de uma vacina pode compreender elementos apro- priados dos referidos organismos (vacinas em subunidade), pelo que esses elementos são gerados através de destruição da partícula inteira ou cresci- mento de culturas contendo tais partículas e, opcionalmente, subsequentes etapas de purificação que proporcionam a(s) estrutura(s) desejada(s) ou a- través de processos sintéticos, incluindo uma manipulação apropriada atra- vés de uso de um sistema adequado baseado, por exemplo, em bactérias, insetos, mamíferos ou outras espécies, mais opcionalmente subsequentes procedimentos de isolamento e purificação ou através de indução dos referi- dos processos sintéticos no animal que precisa de uma vacina através de incorporação direta de material genético usando composições farmacêuticas adequadas (vacinação com polinucleotídeo). Uma vacina pode compreender um ou simultaneamente mais de um dos elementos descritos acima. O ter- mo "vacina" conforme compreendido aqui, é uma vacina para uso veterinário compreendendo substâncias antigênicas e é administrada para fins de indu- ção de uma imunidade específica e ativa contra uma doença provocada por uma infecção microbiológica, de preferência por uma infecção por BVDV. O BVDV conforme descrito aqui, confere imunidade ativa que pode ser transfe- rida passivamente via anticorpos maternos contra os imunogênios que eles contêm e, algumas vezes, também contra organismos antigenicamente rela- cionados. Uma vacina da invenção refere-se a uma vacina conforme definido acima, em que um componente imunologicamente ativo é um BVDV ou deri- vado de uma seqüência de nucleotídeo que é mais de 70% homóloga à qualquer seqüências de BVDV conhecida (senso ou anti-senso).
O termo "vacina viva" refere-se a uma vacina compreendendo um componente de replicação, em particular, um componente de replicação viral ativo.
"Vacina combinada", conforme usado aqui, significa uma vacina que compreende BVDV atenuado conforme descrito aqui junto com uma combinação monovalente, bivalente ou multivalente de componente(s) imu- nológico(s) ativo(s).
"Infecção microbiológica", conforme usado aqui, significa uma infecção quando causada por um micro-organismo que é patogênico para gado. Tais micro-organismos incluem, mas não estão limitados a, bactérias, vírus, Ievedos ou fungos, micoplasmas e parasitas.
Um "fragmento" de acordo com a invenção é qualquer subunida- de de uma molécula de polinucleotídeo de acordo com a invenção, isto é, qualquer subconjunto. Para DNA, o referido fragmento é caracterizado pelo fato de que ele é mais curto do que o DNA abrangendo o genoma viral de comprimento total.
Uma "variante funcional" da molécula de nucleotídeo, conforme usado aqui, é uma molécula de nucleotídeo a qual possui uma atividade bio- lógica (quer funcional ou estrutural) que é substancialmente similar à molé- cula de nucleotídeo de acordo com a invenção. O termo "variante funcional" também inclui "um fragmento", "uma variante funcional", "uma variante ba- seada no código de ácido nucleico degenerativo" ou "um derivado químico". Tal "variante funcional", por exemplo, pode trazer uma ou várias trocas, de- leções ou inserções de nucleotídeo. A referida variante funcional retém, pelo menos parcialmente, sua atividade biológica, por exemplo, funciona como um clone infeccioso ou uma cepa de vacina ou mesmo exibe atividade bioló- gica aperfeiçoada.
"Possui um atividade biológica que é substancialmente similar" significa, com relação aos pestivírus relacionados, por exemplo, que o referi- do pestivírus é atenuado da maneira descrita aqui e resulta em um vírus não patogênico adequado para produção de vírus vivo atenuado, o qual perde a capacidade de atravessar a placenta, mas media uma resposta imune após vacinação.
Uma "variante baseada na natureza degenerativa do código ge- nético" é uma variante resultante do fato de que um determinado aminoácido pode ser codificado por vários trios de nucleotídeo diferentes. A referida va- riante retém pelo menos parcialmente, sua atividade biológica ou mesmo exibe atividade biológica aperfeiçoada.
Uma molécula é "substancialmente similar" à outra molécula se ambas as moléculas têm seqüências de nucleotídeo ou atividade biológica substancialmente similares. Assim, dado que duas moléculas possuem uma atividade similar, elas são consideradas variantes conforme esse termo é usado aqui, se a seqüência de nucleotídeo não é idêntica e duas moléculas as quais têm uma seqüência de nucleotídeo similar são consideradas varian- tes, conforme esse termo é usado aqui, se sua atividade biológica não é i- dêntica.
Uma "mutação", conforme usado aqui, refere-se à modificações nas moléculas de ácido nucleico que codificam as proteínas/aminoácidos de acordo com a invenção. As referidas mutações referem-se a, mas não estão limitadas a substituições (substituição de um ou vários nucleotídeos/pares de base), deleções (remoção de um ou vários nucleotídeos/pares de base) e/ou inserções (adição de um ou vários nucleotídeos/pares de base). Conforme usado aqui, mutação pode se referir a uma única mutação ou várias muta- ções. Portanto, freqüentemente, o termo "mutação(ões)" é usado e refere-se a uma única mutação e a várias mutações. As referidas mutações incluem, mas não estão limitadas a mutações de ponto (mutações de um único nu- cleotídeo) ou mutações maiores em que, por exemplo, partes das moléculas de ácido nucleico de codificação são deletadas, substituídas e/ou ácidos nu- cleicos de codificação adicionais são inseridos. As referidas mutações po- dem resultar em um polipeptídeo expresso modificado em virtude da altera- ção na seqüência de codificação. Tais polipeptídeos modificados são dese- jados, conforme apresentado na descrição da invenção, conforme apresen- tado abaixo.
Componentes adicionais para intensificar a resposta imune são constituintes comumente referidos como "adjuvantes", tais como, por exem- plo, hidróxido de alumínio, óleos minerais ou outros ou moléculas auxiliares adicionadas à vacina ou geradas pelo corpo após a respectiva indução atra- vés de tais componentes adicionais tais como, mas não restrito a, interferon, interleucinas ou fatores de crescimento.
Uma "composição farmacêutica" consiste essencialmente em um ou mais ingredientes capazes de modificar as funções fisiológicas, por e- xemplo, imunológicas, do organismo ao qual ela é administrada ou de orga- nismos que vivem em ou sobre o organismo. O termo inclui, mas não está restrito a, antibiótico s ou antiparasíticos, bem como outros constituintes co- mumente usados para obter algum outro objetivo tal como, mas não limitado a, traços de processamento, esterilidade, estabilidade, facilidade de adminis- tração da composição através da via interal ou parenteral, tal como a via o- ral, intranasal, intravenosa, intramuscular, subcutânea, intradérmica ou outra adequada, tolerância após administração e propriedades de liberação con- trolada. Um exemplo não Iimitativo de tal composição farmacêutica fornecido unicamente para fins de demonstração, poderia ser preparado como segue: o sobrenadante de cultura de célula de uma cultura de célula infectada é misturado com um estabilizante (por exemplo, espermidina e/ou BSA (albu- mina de soro bovino)) e a mistura é subseqüentemente Iiofilizada ou desidra- tada através de outros métodos. Antes de vacinação, a referida mistura é, então, reidratada em soluções aquosas (por exemplo, solução salina, PBS (solução salina tamponada com fosfato)) ou não aquosas (por exemplo, e- mulsão oleosa, adjuvante baseado em alumínio).
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
A solução para o problema técnico acima é obtida pela descrição e as modalidades caracterizadas nas reivindicações.
A presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o
tratamento e/ou profilaxia de uma infecção microbiológica em gado, que compreende um BVDV atenuado vivo conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente ativo imunológico para tratamento ou prevenção de doenças ou distúrbios em gado causados por outros agentes infecciosos que nãoBVDV.
BVDV Atenuado
Foi descrito no WO 99/64604 que o BVDV pode ser atenuado através de introdução de pelo menos uma mutação na seqüência de codifi- cação da glicoproteína Erns1 em que a(s) referida(s) mutação(ões) resulta(m) em uma inativação da atividade de Rnase que reside na região do gene de Erns. Além disso, também descobriu-se, surpreendentemente, que o BVDV pode ser mais eficazmente atenuado através de introdução de pelo menos uma mutação na seqüência de codificação da glicoproteína Erns e pelo me- nos outra mutação na seqüência de codificação para Npro a qual, de prefe- rência, leva à inativação combinada da atividade de RNase que reside na glicoproteína Erns1 além de inativação da atividade de imunomodulação que reside em Npro (W02005/111201). Um efeito de imunomodulação é, em um aspecto, indicado, mas não limitado, à função indicada para um pestivírus de uma maneira exemplificativa por Ruggli e outros (2003). Assim, de acordo com um aspecto a presente invenção proporciona uma vacina combinada que compreende pelo menos um BVDV atenuado tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro. De preferência, em tal BVDV atenuado, a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva a inativação da atividade de RNase que reside em Erns e/ou a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro. O BVDV atenuado, conforme descrito aqui, pode ser vantajosamente usado em vacinas combinadas para o tratamento e/ou profilaxia de infecções microbiológicas em gado. Surpreendentemente, o BVDV conforme descrito aqui, compreendendo qualquer uma das modifica- ções na região do gene de Npro e Ems são seguras para uso em animais pre- nhes uma vez que eles não atravessam a placenta. Isso é exemplificado de uma maneira não Iimitativa par ao BVDV no exemplo 3. Além disso, o BVDV com mutações definidas dentro da Npro e Ems, como uma base para atenua- ção, permitirá evitar o risco de reversão para uma cepa mais patogênica. Uma outra vantagem das referidas mutações de atenuação repousa em sua unicidade molecular, a qual permite usar as mesmas como rótulos distintivos para um BVDV atenuado e distinguir as mesmas de BVDV do campo. Por- tanto, em um outro aspecto, a presente invenção proporciona uma vacina combinada que compreende pelo menos um BVDV atenuado tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns e pelo menos uma outra mutação na seqüência de codificação para Npro. De preferência, em tal BVDV atenuado, a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva à inativação da atividade de RNase que reside em Ems e/ou a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva a inativação da referida Npro. A referida inativação pode ocorrer a- través de qualquer mutação conhecida por aqueles habilitados na técnica da seqüência de codificação de Ems e Npro, em que as mutações são qualquer mutação conforme definido na seção "definições", tais como, deleções, mu- tações por inserção e/ou mutações por substituição. Mais preferivelmente, a(s) mutação(ões) é(são) deleções, uma vez que a probabilidade de rever- são para o tipo silvestre é menor para deleções.
Também, o termo BVDV atenuado ou pestivírus atenuado em geral conforme usado aqui, significa, mas não está limitado a, qualquer BVDV ou pestivírus atenuado tendo pelo menos uma modificação na se- qüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos uma modi- ficação na seqüência de codificação para Npro. A seguir, modalidades espe- cíficas de qualquer uma de tais modificações na Ems e/ou Npro são descritas em maiores detalhes. De acordo com um aspecto preferido, o termo BVDV atenuado ou pestivírus atenuado em geral conforme usado aqui, significa, mas não está limitado a, qualquer BVDV ou pestivírus atenuado tendo pelo menos uma modificação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e pelo menos uma modificação na seqüência de codificação para a Npro.
Contudo, deve ser compreendido aqui que a presente invenção não estará limitada à modificação específica descrita aqui. Aqueles habilitados na técni- ca com conhecimento do ensinamento proporcionado com a mesma é capaz de gerar e introduzir outras modificações dentro da glicoproteína Ems e/ou Npro tendo o efeito de atenuação, conforme descrito aqui.
Modificações da Ems de BVDV
Foi mostrado que a glicoproteína Ems forma um homodímero dis- sulfeto-ligado de cerca de 97 kD, em que cada monômero consiste em 227 aminoácidos, correspondendo aos aminoácidos 268 a 494 da poliproteína de CSFV, conforme descrito por Rumenapf e outros (1993). A seqüência do genoma da cepa Alfort/Tubingen de CSFV está disponível na biblioteca de dados do GenBank/EMBL sob o número de acesso J04358; alternativamen- te, a seqüência de aminoácido para a cepa CP7 de BVDV pode ser acessa- da na biblioteca de dados do GenBank/EMBL (número de acesso U63479); na poliproteína CP7 de BVDV, a proteína Ems corresponde aos resíduos 271 a 497. Duas regiões de aminoácidos são altamente conservadas na glicopro- teína Ems1 bem como em algumas proteínas RNase-ativas de plantas e fun- gos (Schneider e outros, 1993). Essas duas regiões são de importância par- ticular para a atividade enzimática de RNase. A primeira região consiste na região nos aminoácidos na posição 295 a 397 (298 a 310 para a cepa cp7 de BVDV) e a segunda região consiste dos aminoácidos na posição 338 a 357 (341 a 360 para a cepa cp7 de BVDV) da referida poliproteína viral, con- forme exemplificado para a cepa Alfort de CSFV em Meyers e outros, 1999 (numeração de acordo com a seqüência de aminoácido deduzida publicada da cepa Alfort/Tubingen de CSFV (Meyers e outros, 1989)). Os aminoácidos de importância particular para a atividade de RNase conforme mencionado acima não se destinam a estar limitados à posição exata conforme definido para a cepa Alfort/Tubingen de CSFV, mas são simplesmente usados de uma maneira exemplificativa para destacar os aminoácidos preferidos que estão nessa posição ou correspondem a essa posição em outras cepas, tal como encontrado em BVDV1 BDV e pestivírus em geral, uma vez que eles são altamente conservados. Para outros pestivírus que não a cepa Al- fort/Tubingen de CSFV, a numeração das posições dos aminoácidos preferi- dos pode ser diferente, mas um perito no campo de biologia molecular de pestivírus identificará facilmente esses aminoácidos preferidos através do alto grau de conservação dessa seqüência de aminoácido e da posição des- ses motivos no contexto da seqüência. Em um exemplo não Iimitativo em particular, a posição 346 de Alfort/Tubingen de CSFV é idêntica à posição 349 da cepa cp7 de BVDV.
Como uma conseqüência, a presente invenção se refere, de pre- ferência, a um BVDV de acordo com a invenção, em que a(s) referida(s) mu- tação(ões) na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems está(ão) localizada(s) na seqüência de nucleotídeo de codificação correspondendo aos aminoácidos na posição 298 a 310 e/ou posição 341 a 360. De prefe- rência, tal mutação é (os aminoácidos são fornecidos nos símbolos de uma letra; o aminoácido antes do número da posição indica o aminoácido a ser substituído, o aminoácido após o número da posição é o aminoácido substi- tuinte (dei indica deleção, por exemplo, H300L, o qual significa que histidina na posição 300 foi substituída por leucina); modificação adequada da glico- proteína Erns são, por exemplo, as substituições/deleções simples: S298G, H300K, H300L, H300R, H300del, W303G, P304del, E305A, C308G, R343G, E345del, W346G, K348A, H349K, H349L, H349del, H349Q, H349SV (muta- ção de H349S e inserção de V), K348R, W351P, W351G, W351L, W351K, W351H; as substituições/deleções duplas: H300L/H349L, K348del/H349del, H349del/G350del, E345del/H349del, W303G/E305A, H300K/H349K, H300K/H349L e deleções triplas: L299del/H300del/G301del, K348del/H349del/G350del. A numeração é de acordo com a seqüência de aminoácido publicada de CP7 de BVDV para todos os mutantes listados a- cima. Todos os mutantes listados acima foram testados pelo menos como mutantes de BVDV sem mutações na região de Npro. Mutantes adequados da glicoproteína Ems pestiviral, tal como de BVDV1 são proporcionados, por exemplo, pelo WO 99/64604, o qual é incorporado aqui em sua totalidade, deverá ser notado, contudo, que de acordo com uma outra modalidade pre- ferida da presente invenção, pelo menos uma mutação adicional na região de Npro, conforme divulgado em maiores detalhes abaixo, deve estar presen- te.
Descobriu-se particularmente que deleção ou substituição do resíduo de histidina na posição 349 (BVDV) leva a inativação eficaz de Ems e, portanto, leva à vacinas vivas de BVDV particularmente úteis. A presente invenção demonstra que BVDV são viáveis e codificam uma proteína Erns sem atividade de RNase quando o resíduo de histidina na posição 349 (nu- meração de acordo com a seqüência publicada de CP7 de BVDV (Meyers e outros, 1996b)) é deletado. Assim, de preferência, o BVDV conforme usado na vacina combinada traz uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns tem uma deleção ou substituição no resíduo de histidina na posição 349. Ainda mais especificamente, o sítio ativo putativo da RNase é representado pelas seqüências de Erns conservadas SLHGIWPEKICTG (SEQ ID NO 13) e/ou LQRHEWNKHGWCNWFHIEPW (SEQ ID NO 14) (se- qüência da proteína New York'93 de 22-2 é fornecida aqui de uma maneira exemplificativa; alterações mínimas podem possivelmente ser encontradas em outras seqüências de BVDV, mas a identidade do motivo sempre será óbvia para um perito no campo. Como um exemplo, as seqüências de ami- noácido correspondentes de CP7 de BVDV-1 serão SLHGIWPEKICTG (SEQ ID NO 13) e/ou LQRHEWNKHGWCNWYNIEPW (SEQ ID NO 15). Assim, de preferência, o BVDV da vacina combinada traz mutação(ões) na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns está localizado na seqüência de nu- cleotídeo que codifica a seqüência de Erns conservada SLHGIWPEKICTG (SEQ ID NO 13) e/ou LQRHEWNKHGWCNWFHIEPW (SEQ ID NO 14). Es- sas seqüências representam o sítio ativo putativo da RNase. As seqüências SLHGIWPEKIC (SEQ ID NO 16) e RHEWNKHGWCNW (SEQ ID NO 17) do sítio ativo putativo de Ems são ainda mais conservadas através dos pestiví- rus. Assim, de preferência, o BVDV usado para o preparo de uma vacina combinada conforme descrito aqui tem pelo menos uma mutação na se- qüência de codificação da proteína Npro e/ou da glicoproteína Erns, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para a glicoprote- ína Erns está(ão) localizada(s) na seqüências de codificação de nucleotídeo para a seqüência conservada de Erns SLHGIWPEKIC (SEQ ID NO 16) e/ou RHEWNKHGWCNW (SEQ ID NO 15). De preferência, a mutação está loca- lizada em apenas uma das referidas seqüências. Assim, o BVDV da vacina combinada descrito aqui tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação da proteína Npro e/ou da glicoproteína Erns, está(ão) localizada(s) na seqüência de codificação de nucleotídeo para a seqüência conservada de Erns SLHGIWPEKIC (SEQ ID NO 16) e/ou RHEWNKHGWCNW (SEQ ID NO 17). De preferência, tais mutações referem-se a dois aminoácidos diferentes, isto é, são mutações duplas. Assim, as referidas mutações podem ser muta- ções de 1 a 3 nucleotídeos em diferentes trios que codificam dois aminoáci- dos. Assim, a invenção também refere-se a uma vacina combinada um BVDV atenuado vivo tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codi- ficação da proteína Npro e/ou da glicoproteína Erns, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns são du- as mutações localizadas na seqüência de nucleotídeo que codifica a se- quência conservada de Erns SLHGIWPEKIC (SEQ ID NO 16) e/ou RHEWN- KHGWCNW (SEQ ID NO 17). De preferência, tais mutações referem-se a um único aminoácido. Assim, a referida mutação pode ser mutações de 1 a 3 nucleotídeos em um trio que codifica um aminoácido. Assim, a invenção refere-se também a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas compreendendo um BVDV vivo atenuado tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação da proteína Npro e/ou da glicoproteína Erns, em que uma única mutação está lo- calizada na seqüência conservada de Erns SLHGIWPEKIC (SEQ ID NO 16) e/ou RHEWNKHGWCNW (SEQ ID NO 17).
Modificação do gene de Npro de BVDV
Conforme mencionado acima, o BVDV atenuado proporcionado aqui, tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação da glico- proteína E"ms e/ou na seqüência de codificação da proteína N"pro, em que a referida mutação resulta, de preferência, em inativação da atividade de RNase que reside na glicoproteína E"ms e/ou na atividade de imunomodula- ção que reside em N"pro. inativação de N"pro é obtida em BVDV da forma es- pecificada descrita em maiores detalhes abaixo, em que entre 0 e todos os aminoácidos de N"pro estão presentes; ubiquitina ou LC3 ou outra seqüência serve como sinal de processamento (por exemplo, SUMO-1, NEDD8, GATE- 16,GABA(A)RAP ou proteases tais como, por exemplo, Inteína, picornavírus 3C, caridovírus 2A, ou p15 de vírus da doença hemorrágica de coelho) estão presentes ou ausentes. No caso em que um sinal de processamento está presente, a seqüência de codificação do sinal de processamento é inserida em ou próximo da extremidade C-terminal da proteína de N"pro (parte restan- te). Apenas no caso em que um sinal de processamento está presente, qualquer número de aminoácidos que codifica N"pro (= aminoácidos de N"pro) pode estar presente. No caso em que nenhuma seqüência de sinal de pro- cessamento é inserida, o máximo de 12 aminoácidos, de preferência, ami- noácidos amino-terminais, de N"pro pode estar presente, os aminoácidos res- tantes tendo de ser deletados. Além disso, outras mutações que não na Erns conforme divulgado acima (pelo menos uma das quais tem de estar presente no BVDV atenuado, conforme descrito aqui), as seqüências restantes do BVDV atenuado podem permanecer inalteradas, isto é, sem mutação ou po- dem também ter mutações próximas da extremidade N-terminal da C- proteína. Uma série de modalidades mais específicas, conforme divulgado abaixo, exemplificam isso.
Assim, o BVDV atenuado da vacina combinada é modificado nas regiões de codificação da E"rns conforme descrito acima e/ou na N"pro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
[N"pro]x-[PS]y-[C-term]
e em que:
[N"pro] refere-se à porção N"pro da referida poliproteína, em que "x" representa o número de aminoácidos da N"pro presentes na poliproteína: [PS] refere-se a um sinal de processamento selecionado de ubi- quitina, LC3, SUMO-1, NEDD8, GATE-16 ou GABA(A)RAP ou proteases tais como, por exemplo, Inteína, picornavírus 3C, caridovírus 2A, ou p15 do vírus da doença hemorrágica de coelho ou qualquer sinal de processamento co- nhecido por aqueles habilitados na técnica que assegura a geração de uma N-término funcional da C-proteína. "Y" pode ser = 0, o que significa que ne- nhum sinal de processamento está presente (= PS está ausente) ou "Y" po- de ser =1,o que significa que um sinal de processamento está presente (= PS presente);
[C-term] refere-se ao pestivírus completo, em particular a poli- proteína de BVDV completa, exceto quanto a Npro, mas incluindo a (C- proteína de capsídeo e qualquer outra proteína na poliproteína de pestivírus, em particular na poliproteína de BVDV, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. De preferência, a glicoproteína Erns no referido [C-term] tem uma mutação, de modo que a atividade de RNase que reside na glicoproteína Ems é inati- vada. O termo "qualquer outra proteína presente na poliproteína de pestiví- rus/poliproteína de BVDV" refere-se a Erns1 E1, E2, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B e NS5A, em que a glicoproteína Ems sofreu mutação, de preferência, conforme divulgado aqui (veja acima), de tal forma que a atividade de RNase que reside na glicoproteína Erns é inativada. De preferência, o pestivírus em particular o BVDV de acordo com a invenção tem uma C-proteína a qual não sofreu mutação, exceto quanto ao aminoácido na posição glicoproteína, o qual é trocado de D para N. Portanto, esse [C-term*] é o mesmo que o [C- term], mas com uma mutação na posição 2 da C-proteína (N ao invés de D);
se "y" é = 0 (significa que nenhum [PS] presente) então, "x" é 0 a 12 (significa nenhum aminoácido específico de Npro ou 1 a 12 aminoácidos de Npro, de preferência do N-término de Npro estão presentes);
se "y" é = 1 (significa que [PS] presente) então, "x" é 0 a 168; (significa que nenhum aminoácido específico de Npro ou 1 a todos os 168 aminoácidos de Npro, de preferência do N-término de Npro estão presentes).
Também, mais preferivelmente, a(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 47</formula>
e em que as definições são conforme definidas acima.
Um exemplo específico da mesma é divulgado abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida pela C-proteína e qualquer outra proteína presente na poliproteína, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. Consequente- mente, mais preferivelmente o BVDV atenuado conforme descrito aqui é co- dificado por uma poliproteína conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 47</formula>
e em que as definições são conforme definidos acima.
Também mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Npro leva a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 47</formula> e em que as definições são conforme definidas acima. Um outro exemplo específico de um BVDV atenuado é divulgado abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida pela seqüência EL de Npro e a C-proteína e qualquer outra proteína presente na poliproteína, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. Consequentemente, mais preferivelmente, o BVDV atenuado conforme descrito aqui é codificado por uma poliproteína conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
<formula>formula see original document page 47</formula>
e em que as definições são conforme definidas acima.
Também mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Ems leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
[Npro]4-[PS]0-[C-term] e em que as definições são conforme definidas acima.
Um outro exemplo específico de BVDV é divulgado abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida pela seqüência de Ems ELF (SEQ ID NO 18) e a C-proteína e qualquer outra proteína presente na poliproteína, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. Consequentemente, mais preferível men- te, a invenção refere-se a um BVDV em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
MELF-[C-term] e em que as definições são conforme definidas acima.
Também mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV que é mo- dificado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compre- ende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Erns conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) muta- ção(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
[Npra]6-[PS]o-[C-term] e em que as definições são conforme definidas acima.
Um outro exemplo específico de um BVDV atenuado conforme descrito aqui é fornecido abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida pela seqüência de Npro ELFSN (SEQ ID NO 19) e a C-proteína e qualquer outra proteína presente na poliproteína, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. Consequentemente, mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Erns conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
MELFSN-[C-term] e em que as definições são conforme definidas acima.
Um outro exemplo específico de um BVDV atenuado conforme descrito aqui é proporcionado abaixo, em que a metionina N-terminal é se- guida pela seqüência de Npro ELFSNE (SEQ ID NO 20); ELFSNEL (SEQ ID NO 21); ELFSNELL (SEQ ID NO 22); ELFSNELLY (SEQ ID NO 23); ELFS- NELLYK (SEQ ID NO 24); ou ELFSNELLYKT (SEQ ID NO 25) e a Ο- proteína e qualquer outra proteína presente na poliproteína, incluindo a NS5B carbóxi-terminal. Consequentemente, mais preferível mente, a inven- ção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreen- de um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro1 em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pelas seguintes fórmulas:
MELFSN-[C-term].
MELFSNE-[C-term];
MELFSNEL--[C-term];
MELFSNELL-[C-term];
MELFSNELLY-[C-term];
MELFSNELLYK- [C-TERM]
MELFSNELLYKT- [C-TERM]
e em que as definições são conforme definidas acima.
Também mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Erns conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula: [Npro]4-[PS]o-[C-term*]
e em que as definições são conforme definidas acima, exceto quanto ao fato de que a parte amino-terminal da C-proteína é alterada, também conforme descrito acima.
Um outro exemplo específico de BVDV é divulgado abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida pela seqüência de Npro ELF e na se- qüência da C-proteína, o aminoácido na posição 2 é trocado de D para N. Portanto, a seqüência amino-terminal de C-proteína é SNEGSK (SEQ ID NO 26), ao invés de SDEGSK (SEQ ID NO 27). Consequentemente, mais prefe- rivelmente, a invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Erns conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referi- da^) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
MELF-[C-term*],
em que, na C-proteína, o aminoácido na posição 2 é trocado de D para N e em que as definições são conforme definidas acima.
Também, mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma va- cina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pela seguinte fórmula:
[Npro]x-[PS]i-[C-term]
e em que as definições são conforme definidas acima, e em que PS é qualquer um dos PS divulgados acima e, mais preferivelmen- te, selecionado do grupo consistindo de ubiquitina ou LC3.
Um outro exemplo específico de BVDV é divulgado abaixo, em que a metionina N-terminal é seguida por qualquer 21 ou 28 aminoácidos de Npro, ubiquitina ou LC3 e a C-proteína. Consequentemente, mais preferivel- mente, a invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codifica- ção da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro1 em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codificação para Npro leva(m) a uma polipro- teína codificada, conforme caracterizado pelas seguintes fórmulas:
[Npro]22-[PS]i-[C-term] em que, de preferência, o PS é ubiquitina ou LC3 ou
[Npro]29-[PS]r[C-term] em que, de preferência, o PS é ubiquitina ou LC3.
Ubiquitina é uma proteína celular altamente conservada bem conhecida de 76 aminoácidos. Dentre outras funções, a ubiquitina exerce um papel chave no catabolismo de proteína, uma vez que conjugação com ubi- quitina pode tornar uma proteína para degradação via o proteassoma. Ubi- quitina conjugada com ou fundida a outras proteínas via a glicina carbóxi- terminal pode ser clivada através de proteases celulares ubiquitina- específicas. Assim, fusão de uma proteína ao carbóxi-término de ubiquitina usualmente resultará em clivagem proteolítica definida da proteína de fusão em seus componentes quando expressa dentro de uma célula.
LC3 (cadeia leve 3 de proteínas microtúbulo-associadas) repre- senta uma proteína celular de 125 aminoácidos que serve a uma variedade de funções (comprimento fornecido para a LC3 bovina. Recentemente, um papel fundamental da proteína em autofagia foi definido. Durante esse pro- cesso, LC3 é ativada através de clivagem carbóxi-terminal. Desse modo, um novo carbóxi-término é gerado que consiste em glicina. LC3 é, então, conju- gada via a glicina carbóxi-terminal, à fosfatidil etanolamina presente nas membranas de vesículas autofágicas. Em virtude desse processo, uma pro- teína fundida ao carbóxi-término de LC3 será clivada através de uma protea- se celular em uma posição definida.
Também mais preferivelmente, a invenção refere-se a uma vaci- na combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina compreende um BVDV atenuado que é modificado nas regiões de codificação da Ems conforme descrito acima e/ou na Npro, em que a(s) referida(s) mutação(ões) na seqüência de codifica- ção para Npro leva(m) a uma poliproteína codificada, conforme caracterizado pelas seguintes fórmulas selecionadas do grupo de:
[Npro]2-[PS]y-[C-term] e, de preferência, ME-[PS]y-[C-term];
[Npro]5-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFS-[PS]y[C-term];
[Npro]7-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNE-[PS]y-[C-term];
[Npro]8-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNEL-[PS]y-[C-term];
[Npro]9-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNELL-[PS]y-[C-term];
[Npro]io-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNELLY-[PS]y-[C-term];
[Npr0]i r[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNELLYK-[PS]y-[C-term]; e
[Npro]i2-[PS]y-[C-term] e, de preferência, MELFSNELLYKT-[PS]y-[C-term]
e em que as definições são conforme definidas acima. As modalidades pre- feridas divulgadas referem-se ao BVDV.
Mais preferivelmente, y é 0 (nenhum PS presente).
Mutantes duplos de Erns Npro de BVDV adequados incluem a- queles listados na tabela abaixo: Tabela: Mutantes duplos de ERns Npro de BVDV:
<table>table see original document page 53</column></row><table> <table>table see original document page 54</column></row><table> <table>table see original document page 55</column></row><table> <table>table see original document page 56</column></row><table> <table>table see original document page 57</column></row><table>
As mutações Npro são definidas por suas seqüências amino ter- minais restantes. Por exemplo, mutante MELF significa que a região de codi- ficação de Npro é completamente deletada, exceto quanto aos aminoácidos amino terminais de MELF.
De acordo com uma modalidade da presente invenção, o BVDV atenuado da vacina combinada conforme proporcionado aqui é um BVDV do tipo 1. De preferência, o BVDV atenuado é baseado em uma das seguintes cepas de BVDV do tipo 1: NADL, Osloss, SD-1, CP7 ou KE9, em que cada uma das cepas compreende pelo menos uma das mutações em Ems e/ou Npro conforme descrito acima e, de preferência, pelo menos um dos mutan- tes duplos dentro da região de Ems e Npro conforme listado na tabela acima. De acordo com uma outra modalidade, o referido BVDV atenuado da vacina combinada conforme proporcionado aqui é um BVDV do tipo 2. De preferên- cia, o BVDV atenuado é baseado em um das seguintes cepas de BVDV do tipo 2: 890, C413, ou New York'93C, em que cada uma das cepas compre- ende pelo menos uma das mutações em Ems e/ou Npro conforme descrito acima e, de preferência, pelo menos um dos mutantes duplos dentro da re- gião de Ems e Npro conforme listado na tabela acima.
BVDV-1 e BVDV-2 são diferenciados de acordo com as caracte- rísticas de suas seqüências genômicas (Heinz e outros, 2000 e referências no mesmo). BVDV-1, conforme divulgado aqui, pode ser usado na fabrica- ção de uma composição para uso na prevenção e/ou tratamento de infec- ções por BVDV do tipo 1 em estoques de criação de gado, em vacas pre- nhes e na indução de proteção fetal contra infecção por BVDV do tipo 1 em vacas prenhes. Surpreendentemente, um BVDV-2 conforme divulgado aqui pode ser usado na fabricação de uma vacina combinada para uso na pre- venção e/ou tratamento de infecções por BVDV do tipo 1 em estoques de criação de gado. Em particular, a invenção refere-se ao uso de um BVDV do tipo 2, conforme descrito aqui, na fabricação de uma vacina combinada para uso na prevenção e/ou tratamento de infecções por BVDV do tipo 1 em va- cas prenhes. De preferência, o BVDV do tipo 2, conforme proporcionado a- qui, pode ser usado na fabricação de uma vacina combinada para uso na indução de proteção fetal contra infecções por BVDV do tipo 1 em vacas prenhes. Surpreendentemente também, um BVDV-1, conforme divulgado aqui, pode ser usado na fabricação de uma vacina combinada para uso na prevenção e/ou tratamento de infecções por BVDV do tipo 2 em estoques de criação de gado. Em particular, a invenção refere-se ao uso de um BVDV do tipo 1, conforme descrito aqui, na fabricação de uma vacina combinada para uso na prevenção e/ou tratamento de infecções por BVDV do tipo 2 em va- cas prenhes. De preferência, o BVDV do tipo 1 de acordo com a invenção pode ser usado na fabricação de uma vacina combinada para uso na indu- ção de proteção fetal contra infecções por BVDV do tipo 2 em vacas pre- nhes.
Mais preferido é o uso de BVDV do tipo 1 e do tipo 2 em combi- nação para a fabricação das vacinas combinadas descritas aqui para uso na prevenção e/ou tratamento de infecções por BVDV do tipo 1 e/ou do tipo 2 em estoques de criação de gado, em vacas prenhes e na indução de prote- ção fetal contra infecções por BVDV do tipo 1 e/ou do tipo 2 em vacas pre- nhes. Assim, de preferência, as vacinas combinadas proporcionadas aqui compreendem um ou mais BVDV atenuados do tipo 1 e do tipo 2, conforme descrito acima. Por exemplo, as vacinas combinadas proporcionadas aqui compreendem um BVDV atenuado do tipo 1 e do tipo 2, baseado nas cepas: NADL/890; NADL/C413; NADL/NewYork'93/C; CP7/890; CP7/C413; CP7/NewYork'93/C; KE9/890; KE9/C413; KE9/NewYork'93/C, em que cada uma das cepas compreende pelo menos uma das mutações em Erns e/ou Npro conforme descrito acima e, mais preferivelmente, pelo menos um dos mutantes duplos dentro da região de Ems e Npro , conforme listado na tabela acima. Mais preferivelmente, qualquer uma das vacinas combinadas propor- cionadas aqui pode incluir um ou mais dos subtipos de BVDV atenuado do tipo 1 e um ou mais dos subtipos de BVDV-2 atenuado, por exemplo, um ou mais BVDV atenuados dos subtipos 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 1g, 1h e seme- lhantes e um ou mais BVDV atenuados dos subtipos 2a, 2b e semelhantes. Mais preferida é uma vacina combinada compreendendo BVDV atenuado dos subtipos 1a, 1b e 2a. Assim, de acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, a frase "BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2)" inclui, mas não está limitado a combinações de dois vírus de BVD compreendendo um ou mais BVDV atenuados do tipo 1, de preferência do subtipo 1B e um ou mais BVDV atenuados do tipo 2, de preferência do subtipo 2a. De acordo com uma outra modalidade da presente invenção, a frase "BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2)" inclui, mas não está limitada a, combinações de vírus BVD compreendendo um ou mais "BVDV atenuados do subtipo 1a, um ou mais BVDV atenuados do subtipo 1 b e um ou mais BVDV atenuados do tipo 2, de preferência do subtipo 2a.
Se mais de um BVDV atenuado é usado nas vacinas combina- das conforme descrito aqui, cada um dos BVDV atenuados sofrerá mutação no mesmo sítio genômico da Ems e/ou Npro1 de modo que nenhum dos BVDV atenuados pode se recombinar com qualquer um dos outros para eliminar as mutações, as quais são essenciais e responsáveis pela atenuação dos vírus. Por exemplo, se BVDV do tipo 1a com uma das seguintes mutações em Erns é usado: H349K, H349L, H349del, H349Q, H349SV (mutação H349S e in- serção de V) um BVDV do tipo 1b e/ou do tipo 2 deverá ser usado, o qual sofreu uma mutação no mesmo sítio da Erns isto é, na posição 349 ou na po- sição de aminoácido a qual corresponde à posição 349 de BVDV do tipo 1, de forma a evitar reversão de BVDV do tipo 1 ou do tipo 2. Esse princípio também se aplica a qualquer mutação dentro da região de Npro. Assim, de acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, a frase "BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2)" inclui, mas não está limitado a, combinações de vírus BVDV compreendendo um ou mais BVDV atenuado do tipo Erns e um ou mais BVDV atenuados do tipo 2, em que cada um dos BVDV atenuados sofre mutação no mesmo sítio genômico da Erns e/ou da Npro, de modo que nenhum dos BVDV atenuados pode se recombinar com quaisquer um dos outros para eliminar as mutações dentro da Ems e Npro , as quais são essen- ciais e responsáveis pela atenuação dos vírus. De acordo com outra modali- dade da presente invenção, a frase "BVDV atenuado (tipo 1 e/ou 2)" inclui, mas não está limitado a, uma combinação de vírus BVD compreendendo um ou mais "BVDV atenuados do subtipo 1a, um ou mais BVDV atenuados do subtipo 1 b e um ou mais BVDV atenuados do tipo 2, de preferência do subti- po 2a", em que cada um dos BVDV atenuados sofre mutação no mesmo sítio genômico da Erns e/ou da Npro , de modo que nenhum dos BVDV atenu- ados pode se recombinar com quaisquer dos outros para eliminar as muta- ções dentro da Erns e/ou da Npro , as quais são essenciais e responsáveis pela atenuação dos vírus. Preparo de BVDV atenuado
Outro aspecto importante da invenção é um método para atenu- ação de um pestivírus, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma mu- tação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro é gerada no genoma do BVDV.
De acordo com uma modalidade mais preferida, o referido méto- do compreende as etapas:
a) transcrição reversa de uma seqüência de nucleotídeo de pes- tivírus do tipo silvestre em um cDNA;
b) clonagem do referido cDNA;
c) introdução de mutações selecionadas do grupo de deleções, mutações por inserção e/ou mutações por substituição no referido cDNA, em que as referidas mutações estão localizadas na seqüência de codificação que codifica a glicoproteína Ems e/ou a protease Npro;
d) incorporação do cDNA em um plasmídeo ou em um vírus de DNA capaz de direcionar a transcrição de cDNA de BVDV em RNA in vitro ou quando de infecção de células adequadas.
Com relação ao método para atenuação de um BVDV de acordo com a invenção, o referido método preferido compreende as etapas de:
a) transcrição reversa de uma seqüência de nucleotídeo de pes- tivírus do tipo silvestre em um cDNA;
b) clonagem do referido cDNA;
c) introdução de mutações selecionadas do grupo de deleções, mutações por inserção e/ou mutações por substituição no referido cDNA, em que as referidas mutações estão localizadas na seqüência de codificação que codifica a glicoproteína Erns e/ou a protease Npro;
d) incorporação do cDNA em um plasmídeo ou em um vírus de DNA capaz de direcionar a transcrição de cDNA de BVDV em RNA in vitro ou quando de infecção de células adequadas.
Existem várias seqüências de nucleotídeo conhecidas na técni- ca, as quais representam a base para a produção de uma molécula de poli- nucleotídeo que codifica um BVDV atenuado conforme descrito aqui, tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação de Npro e/ou pelo menos uma na seqüência de codificação de glicoproteína Ems1 em que as referidas mutações resultam em uma inativação combinada da atividade de RNase que reside na glicoproteína Ems e na inativação da atividade de imu- nomodulação que reside em Npro. Exemplo de seqüências de ácido nucleico do tipo silvestre de várias cepas de BVDV são listados abaixo:
Vírus da diarréia viral bovina 1
Cepa NADL N° de Acesso ao NCBI GenBank [M31182]
Cepa Osloss N° de Acesso ao NCBI GenBank [M96687]
Cepa SD-1 N° de Acesso ao NCBI GenBank [M96751]
Cepa CP7 N° de Acesso ao NCBI GenBank [U63479]
Cepa KE9 (SEQIDNO:1)
Vírus da diarréia viral bovina 2
Cepa 890 N° de Acesso ao NCBI GenBank [U18059]
Cepa C413 N° de Acesso ao NCBI GenBank [AF002227]
Cepa NewYork'93/C N° de Acesso ao NCBI GenBank [AF502399]
As mutações/modificações referentes às seqüências de codifica- ção de Npro e Erns são descritas acima em maiores detalhes. Tendo essa in- formação, aqueles habilitados na técnica são capazes de realizar a fabrica- ção de qualquer ácido polinucleico/polinucleotídeo que codifica um BVDV atenuado conforme proporcionado aqui. Métodos moleculares para introdu- ção de uma mutação em uma seqüência de polinucleotídeo, bem como a clonagem e amplificação do referido polinucleotídeo com mutação são pro- porcionados, por exemplo, por Sambrook e outros 1989 ou Ausubel e outros 1994.
Mais preferivelmente, o BVDV do tipo silvestre o qual tem de sofrer mutação conforme divulgado aqui corresponde à seqüência de ami- noácido SEQ ID No. 5 (denominada XIKE A) ou é uma variante funcional da mesma. Mais preferivelmente também, o BVDV tem uma mutação em Npro, conforme descrito aqui, correspondendo à seqüência de aminoácido SEQ ID No. 6 (denominada XIKE-A-NdN) ou é uma variante funcional da mesma. De preferência, tal variante funcional é pelo menos 65% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui. A nível de aminoácido, homologias são muito próximos de: BVDV-1/-BVDV-1: 93%; BVDV-1/-BVDV-2: 84%; BVDV-2/- BVDV-2: 98%. Portanto, mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% ou 90% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui. Mais preferivelmente também, tal variante funcional é pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% ou 98% ho- móloga à seqüência de aminoácido divulgado aqui. Mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 99% ou 99,9% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui.
Mais preferivelmente também, o BVDV atenuado conforme des- crito aqui tem uma mutação em Erns, a qual tem uma deleção do códon que codifica histidina 349 (denominada XIKE-B), ou é uma variante funcional da mesma. Mais preferivelmente também, o BVDV atenuado tem uma mutação em Ems e/ou uma mutação em Npro, conforme descrito aqui, em que o códon que codifica histidina 349 de Erns é deletado e também a região de codifica- ção de Npro completa é deletada, exceto quanto aos códons 1 a 4, assim, os aminoácidos MELF de Npro permanecem. O referido mutante duplo corres- ponde à seqüência de aminoácido SEQ ID No. 8 (denominada XIKE-B-NdN) ou é uma variante funcional da mesma. De preferência, tal variante funcional é pelo menos 65% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui. Mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% ou 90% homóloga à seqüência de aminoácido divul- gada aqui. Mais preferivelmente também, tal variante funcional é pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% ou 98% homóloga à seqüência de aminoácido divulgado aqui. Mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 99% ou 99,9% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui.
Mais preferivelmente também, o BVDV de acordo com a inven- ção tem uma mutação em Ems de acordo com a invenção, a qual tem uma substituição do códon que codifica histidina 300 pelo códon que codifica Ieu- cina (denominada XIKE-C), ou é uma variante funcional da mesma. Mais preferivelmente também, o BVDV de acordo com a invenção tem uma muta- ção em Ems e uma mutação em Npro de acordo com a invenção, em que o códon que codifica histidina 300 é substituído pelo códon que codifica Ieuci- na e também a região de codificação de Npro completa é deletada, exceto quanto aos códons 1 a 4, assim, os aminoácidos MELF de Npro permane- cem. O referido mutante corresponde à seqüência de aminoácido SEQ ID No. 10 (denominada XIKE-C NdN) ou é uma variante funcional da mesma.
De preferência, tal variante funcional é pelo menos 65% homóloga à se- qüência de aminoácido divulgada aqui. Mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% ou 90% ho- móloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui. Mais preferivelmente também, tal variante funcional é pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% ou 98% homóloga à seqüência de aminoácido divulgado aqui. Mais preferivelmente, tal variante funcional é pelo menos 99% ou 99,9% homóloga à seqüência de aminoácido divulgada aqui.
Parceiros de combinação
Conforme descrito acima, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que referida vacina combinada compreende BVDV ate- nuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito acima e pelo menos um outro com- ponente imunológico ativo para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno bovino que não o BVDV. Conforme men- cionado acima a vacina combinada compreende, de preferência, BVDV ate- nuado do tipo 1 e BVDV do tipo 2, ambos tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro, em que a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns leva à inativação de atividade de RNase que reside em Ems e/ou a referida mutação na seqüên- cia de codificação para Npro leva a inativação da referida Npro. Ainda mais preferivelmente, cada um dos BVDV atenuados sofre mutação no mesmo sítio genômico da Erns e/ou da Npro1 de modo que nenhum dos BVDV atenu- ados pode se recombinar com qualquer uns dos outros para eliminar as mu- tações dentro da Ems e/ou da Npro1 as quais são essenciais e responsáveis pela atenuação dos vírus. Ainda mais preferivelmente, a vacina combinada compreende BVDV atenuado do tipo 1 e BVDV do tipo 2, ambos tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro, em que a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva à inativação de atividade de RNase que reside em Ems e/ou a referida muta- ção na seqüência de codificação para Npro leva a inativação da referida Npro. Mais preferivelmente, cada um dos BVDV atenuados sofre mutação no mesmo sítio genômico da Erns e da Npro, de modo que nenhum dos BVDV atenuados pode se recombinar com qualquer uns dos outros para eliminar as mutações dentro da Erns e/ou da Npro1 as quais são essenciais e respon- sáveis pela atenuação dos vírus.
Outros patógenos bovinos relacionados que não BVDV incluem, mas não estão limitados a: i) patógenos de origem viral, tais como Vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da Rinotraqueíte Bovina Infecciosa (IBR), Vírus Sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesvírus bovino (BHV), Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coronovírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus Bovino (PPV) e Adenovírus e Astrovírus; ii) patóge- nos de origem bacteriana, tais como Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (His- tophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Acti- nomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C fetus intestinalis), Leptospira in- terrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira cani- cola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella meli- tensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridi- um sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratubereulosis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae e Streptococcus uberus iii) patógenos de outra origem, tais como Myeoplasma dispar, Myeoplasma bovis e Ureaplasma spp., Tritriehomonas foetus, Triehophyton verrucosum, Triehophyton menta- grophytes, Triehophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxo- plasma gondii), Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do parasita do pulmão).
Assim, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a referida vacina compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2), conforme descrito aqui, e um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas pelo vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da Rinotraqueíte Bovina Infecciosa (IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesvírus bovino (BHV), Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coronovírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus bovino (PPV), Adenovírus Astrovírus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobac- ter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C fetus intesti- nalis), Leptospira interrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotypho- sa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Lep- tospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clos- tridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridi- um novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimu- rium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratubereulosis, Cryptspo- ridium parvum, Cryptsporidium hominis, Staphylococcus aureus, Streptococ- eus dysgalactiae, Streptococcus uberus, Mycoplasma spp, Myeoplasma dís- par, Myeoplasma bovis e Ureaplasma spp., Tritrichomonas foetus, Tricho- phyton verrueosum, Triehophyton mentagrophytes, Triehophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do parasita do pulmão).
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a referida vacina com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo me· nos um antígeno de vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da Rinotraqueíte Bovina Infecciosa (IBR)1 Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesví- rus bovino (BHV), Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coro- novírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus Bovino (PPV), Adeno- vírus Astrovírus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella hae- molytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira hardjo, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Lep- tospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridi- um septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sor- dellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptspori- dium hominis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Strepto- coccus uberus, Mycoplasma spp, Mycoplasma dispar, Mycoplasma bovis e Ureaplasma spp., Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrueosum, Tricho- phyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (for- malmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyo- caulus viviparous (Doença do parasita do pulmão) De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR [combo 001]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR [combo 002]. De acordo com uma modalidade preferida, o antígeno de IBR é um vírus vivo modificado [combo 003]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada de BVDV atenuado e IBR contém um antibiótico, por exemplo, neomicina, para conservação [combo 004],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 [combo 005]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de PI-3 [combo 006].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BRSV [combo 007]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de BRSV [combo 008].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BHV [combo 009]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de BHV [combo 010].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e Pl- 3 [combo 011]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combi- nada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e PI-3 [combo 012].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e BRSV [combo 013]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e BRSV [combo 014].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e BHV [combo 015]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e BHV [combo 016].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 e BRSV [combo 017]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de PI-3 e BRSV [combo 018].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 e BHV [combo 019], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de PI-3 e BHVfcombo 020].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e BRSV [combo 021], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e BRSV [combo 022]. De prefe- rência, todos os antígenos virais são vírus vivos modificados [combo 023], De acordo com uma outra modalidade da referida vacina combinada, os an- tígenos IBR e PI-3 são vírus vivos modificados e o antígeno BRSV é um ví- rus morto [combo 024]. De acordo com uma outra modalidade da referida vacina combinada, os antígenos IBR1 PI-3 e são vírus mortos [combo 025].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, BRSV e BHV [combo 026]. De acordo com uma modalidade preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, BRSV e BHV [combo 027],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3, BRSV e BHV [combo 028]. De acordo com uma modalidade preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos um antígeno de PI-3, BRSV e BHV [combo 029].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e BHV [combo 030]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e BHV [combo 031].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV e BHV [combo 032]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 PI-3, BRSV e BHV [combo 033],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por H. som- nus [combo 034], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 035].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e H. somnus [combo 036]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 037].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e Η. somnus [combo 038]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e H. somnus [combo 039].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV e H. somnus [combo 040]. De acordo com uma modalidade mais pre- ferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV e H. somnus [combo 041], De preferência, todos os antígenos virais são vírus vivos modificados. De acordo com uma outra modalidade da referida vacina combinada, os antígenos de IBR e PI-3 são vírus vivos modificados, enquan- to que o antígeno de BRSV é um vírus morto [combo 038], De acordo com uma outra modalidade da referida vacina combinada, os antígenos de IBR1 PI-3 e BRSV são vírus mortos [combo 042]. De acordo com uma outra mo- dalidade, qualquer uma das referidas vacinas combinadas, de preferência a vacina combinada que compreende IBR morto, PI-3 morto e BRSV morto como antígenos, contém neomicina e timerosal como conservantes [combo 043].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV e H. somnus [combo 044]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BHV e Η. somnus [combo 045].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionadas de Leptos- pira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospi- ra hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira in- terrogans e Leptospira pomona. [combo 046]. De acordo com uma modali- dade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (ti- pos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de pelo menos uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Lep- tospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptos- pira interrogans e Leptospira pomona [combo 047].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Lep- tospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptos- pira interrogans e Leptospira pomona. [combo 048]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenua- do (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecio- nadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpe- tersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo- bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bo- vis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 049].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e Leptospi- ra pomona [combo 050]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, de preferência um vírus vivo modificado e Leptospira pomona bacterin [combo 51].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Lep- tospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptos- pira interrogans e Leptospira pomona [combo 052], De acordo com uma mo- dalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência se- lecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptos- pira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 053].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, Lep- tospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 054]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohae- morrhagiae e Leptospira pomona [combo 055].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecio- nadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpe- tersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo- bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bo- vis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 056]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Lep- tospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grip- potyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira prajitno, Leptospira ictero- haemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira po- mona [combo 057]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icteroha- emorrhagiae e Leptospira pomona [combo 058]. De acordo com uma moda- lidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (ti- pos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 Pl- 3, BRSV, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icteroha- emorrhagiae e Leptospira pomona [combo 059]. De acordo com uma moda- lidade preferida, os antígenos virais são vírus mortos e os antígenos bacteri- anos são bacterinas [combo 060]. De preferência, as referidas vacinas com- binadas conforme descrito nesse parágrafo ainda contêm neomicina e time- rosal como conservantes [combo 061].
De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui, vírus vivos modificados de IBR, PI-3, BRSV e bacterina de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira po- mona [combo 062]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a vaci- na combinada descrita nesse parágrafo compreende neomicina como um conservante [combo 063].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV1 BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira1 de prefe- rência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Lep- tospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptos- pira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona. [combo 064]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo me- nos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogê- nicas de Leptospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Lep- tospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptos- pira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Lep- tospira pomona [combo 065].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogêni- cas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 066]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo me- nos antígeno de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 067].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies pato- gênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 068]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptos- pira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 069].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [com- bo 070]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combina- da compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 071].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Lep- tospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 072]. De acordo com uma modali- dade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (ti- pos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, Pl- 3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptos- pira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemor- rhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 073].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira1 conforme mencionado acima e H. som- nus [combo 074]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 PI-3, BRSV e uma ou mais espécies pa- togênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 075].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjo prajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira ictero- haemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 076], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 077].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 078]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 079].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogêni- cas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 080]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacterfetus [combo 081].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção re- fere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Lep- tospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Lep- tospira Icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e Campylobacter fetus [combo 082]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospi- ra hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira Icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e Campylobacter fetus [combo 083]. De acordo com uma modalidade mais preferida, os antígenos bacteria- nos são quimicamente inativados, adsorvidos em hidróxido de alumínio, cul- turas inteiras das referidas bactérias [combo 084]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende gentamicina e Anfotericina B como conservantes [combo 085].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies pato- gênicas de Leptospira1 conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 086]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina com- binada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus[combo 087].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 088]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e uma ou mais espécies pato- gênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 089].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Camp- ylobacter fetus [combo 090], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira1 conforme mencionado acima e Camp- ylobacter fetus [combo 091].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV, uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 092]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 093], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogêni- cas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobac- ter fetus [combo 094]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos antígeno de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 095].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, uma ou mais espécies pato- gênicas de Leptospira1 conforme mencionado acima, H. somnus e Campylo- bacter fetus [combo 096]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, uma ou mais espécies pa- togênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Camp- ylobacter fetus [combo 097].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 098]. De acordo com uma modalidade preferi- da, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. som- nus e Campylobacter fetus [combo 099].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagia- e, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacterfetus [combo 100]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hard- jo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira ictero- haemorrhagiae, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 101]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira1 conforme mencionado acima, H. som- nus e Campylobacter fetus [combo 102]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira1 conforme men- cionado acima, H. somnus e Campylobacterfetus [combo 100].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV1 Leptospira cani- cola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira Pomona1 H. somnus e Campylobacter fetus [combo 103]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 PI-3, BRSV1 Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hard- jo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira ictero- haemorrhagiae, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 104].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacterfetus [combo 105], De acordo com uma modalida- de mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacterfetus [combo 106].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BHV, BRSV, Pl- 3, IBR, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpeter- senii Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo- bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bo- vis, Leptospira interrogans e Campylobacter fetus [combo 107], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de BHV, BRSV, IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptos- pira borgpetersenii, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Campylobac- ter fetus [combo 108].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 109]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de Pasteurella haemolytica bacterina e Pasteurella mul- tocida bacterin. [combo 110] De acordo com uma outra modalidade preferi- da, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 111].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 Pasteurella haemolytica e Pasteurella multoci- da [combo 112]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combi- nada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica bacterina e Pasteurella multocida bacterina [combo 113]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 114],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 115]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica bacterina e Pasteurella multocida bacterina [combo 116]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conser- vantes [combo 117],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV1 Pasteurella haemolytica e Pasteu- rella multocida [combo 118]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV1 de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica bacterina e Pasteurella multocida bacterina [combo 119]. De acordo com uma outra modalidade pre- ferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 120].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, BRSV1 BHV1 Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 121]. De acordo com uma modalidade preferi- da, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV1 de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica bacterina e Pasteurella multocida bacterina [combo 122]. De acordo com uma outra mo- dalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 123].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Mycoplasma bovis [combo 124]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenua- do (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de Myco- plasma bovis [combo 125].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e Mycoplasma bovis [combo 126]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV a- tenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de IBR, de preferência as vírus vivos modificados e Mycoplasma bovis [combo 127],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e Mycoplasma bovis [combo 128]. De a- cordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, de preferência as vírus vivos modificados e Myco- plasma bovis [combo 129].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV e Mycoplasma bovis [combo 130]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, de preferência as vírus vivos modificados e Mycoplasma bovis [combo 131].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV1 BHV e Mycoplasma bovis [combo 132]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo me- nos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV, de preferência as vírus vivos modificados e Mycoplasma bovis [combo 133].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 134]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de Pasteurella haemolytica, Pasteu- rella multocida e Mycoplasma bovis [combo 135].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 136]. De acordo com uma modalidade preferi- da, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, de preferência as vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 137].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR1 PI-3, Pasteurella haemolytica, Pasteurella mul- tocida e Mycoplasma bovis [combo 138], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 PI-3, de preferên- cia as vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multoci- da e Mycoplasma bovis [combo 139].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV1 Pasteurella haemolytica, Pasteu- rella multocida e Mycoplasma bovis [combo 140]. De acordo com uma moda- lidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, de preferência as vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 141].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 140]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (ti- pos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, Pl- 3, BRSV, BHV, de preferência as vírus vivos modificados, Pasteurella hae- molytica, Pasteurella multocida e Mycoplasma bovis [combo 141].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 142], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de Pasteurella haemolytica, Pasteurella mul- tocida e H. somnus [combo 143].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 144]. De acordo com uma modalidade preferida, a va- cina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme des- crito aqui e pelo menos um antígeno de IBR1 de preferência como um vírus vivo modificado e Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. som- nus [combo 145].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Pasteurella haemolytica, Pasteurella mul- tocida e H. somnus [combo 146]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 147],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, Pasteurella haemolytica, Pasteu- rella multocida e H. somnus [combo 148]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 149].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 150]. De acordo com uma moda- lidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, PI-3, BRSV, BHV, de preferência as vírus vivos modificados e Pasteurella hae- molytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 151].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compre- ende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profi- laxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Lep- tospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grip- potyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo, Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 152]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qual- quer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende um antígeno de uma ou mais espécies de Lep- tospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grip- potyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjo- prajitno e Leptospira hardjo-bovis),, Leptospira prajitno, Leptospira icteroha- emmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomo- na. [combo 153].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compre- ende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profi- laxia de infecções causadas por Campylobacterfetus [combo 154]. De acor- do com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende antígeno de Campylobacterfetus [combo 155].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compre- ende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profi- laxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Lep- tospira, de preferência selecionadas de Leptospira canicola, Leptospira grip- potyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjo- prajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icteroha- emmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomo- na e Campylobacterfetus [combo 156]. De acordo com uma outra modalida- de, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende antígeno de Campylobacter fetus e de uma ou mais espécies de Leptospira, de preferência selecionadas de Lep- tospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Lep- tospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospi- ra prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona e [combo 157].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium perfringens, de prefe- rência Tipos A, C e/ou D [combo 158]. De acordo com uma modalidade pre- ferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e toxinas de Clostridium perfringens Tipos CeD [combo 254]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida va- cina compreende antígenos, de preferência toxinas, de Clostridium perfrin- gens, de preferência Tipos A, B, C, e/ou D [combo 159].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um componente i- munológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções cau- sadas por infecções causadas por Clostridium perfringens, de preferência Tipos A, C e/ou D [combo 160]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qual- quer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compre- ende antígeno de Clostridium perfringens, de preferência, Tipos A, C, e/ou D [combo 161]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antígeno de Clostridium perfringens Tipos, B, C, e/ou D [combo 162].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe-
re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 163]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e toxinas de Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 164]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina compreende antígenos, de preferência toxinas, de Clostridium perfringens Tipos A, B, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 165],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um componente i- munológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções cau- sadas por infecções causadas por Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 166]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qual- quer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compre- ende antígeno de Clostridium perfringens Tipos A, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 167]. De acordo com uma outra modalidade, a presente inven- ção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antí- geno de Clostridium perfringens Tipos A, B, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 168].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 169]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e antígenos, de preferência toxinas, de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 170].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um componente i- munológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções cau- sadas por infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septi- cum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 171]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antí- geno de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clos- tridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 172]. De acordo com uma outra modalidade, a preseríte invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antígeno de Clostridium per- fringens Tipos, A, B, C, e/ou D, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium tetani [combo 173].
De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente in- venção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combi- nada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Ti- pos A, C e/ou D e Mycoplasma bovis [combo 174]. De acordo com uma mo- dalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e antígenos, de preferência uma toxina de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Mycoplasma bovis [combo 175]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente in- venção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combi- nada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Ti- pos A, C e/ou DeH. somnus. [combo 176]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e antígenos, de preferência uma toxina de Clostridi- um chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos CeDeH. somnus. [combo 177].
De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente in- venção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combi- nada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Ti- pos A, C e/ou D, Mycoplasma bovis e H.somnus [combo 178]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV a- tenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e antígenos, de preferência uma toxina de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D, Mycoplas- ma bovis e H.somnus [combo 179]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Salmonella, de preferência Salmo- nella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 180]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e toxinas de Salmo- nella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 181].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178 e 179], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o trata- mento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmo- nella typhimurium [combo 182]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qual- quer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178 e 179], que ainda compreende antigen, de preferência uma toxina, de Salmonella, de preferência Salmonella dublin, salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 183].
De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteu- rella multocida, Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 184]. De acordo com uma moda- lidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e Bacterina-Toxoide de Pasteurella haemoly- tica, Pasteurella multocida, Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 185]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina combinada compreende múltiplos isolados de Pasteurella haemolytica Tipo A1 e uma fração toxoide associada e isolados simples de P multocida, S dublin e S typhimurium [combo 186],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 187]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenua- do (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e toxinas de Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp. De preferência Klebsiella pneumoniae [combo 188].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185 e 186], que ainda compreende um componente i- munológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções cau- sadas por infecções causadas por Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 189]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de a - cordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 163, 164, 165, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 184, 185 e 186], que ainda compreende antigen, de preferência uma toxina, de Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência, Klebsiella pneumo- niae [combo 190].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Escherichia coli [combo 191], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e toxinas de Esche- richia coli [combo 192].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189 e 190], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Eschericia coli [combo 193]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189 e 190], que ainda compreende antigen, de preferência uma toxina, de Escherichia coli [combo 194].
De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteu- rella multocida, Salmonella dublin,Salmonella typhimurium e Escherichia coli [combo 195]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e Bac- terina-Toxoide de Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Salmonel- Ia dublin,Salmonella typhimurium e Escherichia coli [combo 196]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina combinada compre- ende múltiplos isolados de Pasteurella haemolytica Tipo A1 e uma fração toxoide associada e isolados simples de P multocida, S dublin e S typhimuri- um [combo 197].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por rotavírus bovino [combo 198]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de rotavírus bovino [combo 199].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 195, 196 e 197], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tra- tamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por rotavírus bovino [200]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende antígeno de rotavírus bo- vino [combo 201].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Coronavírus bovino [combo 202]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Coronavírus bovino [combo 203].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções cau- sadas por Coronavírus bovino [combo 204]. De acordo com uma outra mo- dalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188,189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende antígeno de Coronavírus bovino [combo 205].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Coronavírus bovino e rotavírus bovino [combo 206]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Coronavírus bovino e rotavírus bovino [combo 207],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções cau- sadas por Coronavírus bovino e rotavírus bovino [combo 208]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197 ], que ain- da compreende antígeno de Coronavírus bovino e rotavírus bovino [combo 209].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum [combo 210]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antí- geno de Cryptosporidium parvum [combo 211].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o trata- mento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium parvum [combo 212]. De acordo com uma outra modalida- de, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende antígeno de Cryptospori- dium parvum [combo 213].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium hominis [combo 214]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antí- geno de Cryptosporidium hominis [combo 215].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o trata- mento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium hominis [combo 216]. De acordo com uma outra modalida- de, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende antígeno de Cryptospori- dium hominis [combo 217].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum e Cryp- tosporidium hominis [combo 218]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 219].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o trata- mento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 220]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende antígeno de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 221].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Mycobacterium avium paratuber- culosis [combo 222]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 223].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 e 221], que ainda compre- ende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profi- laxia de infecções causadas por infecções causadas por Mycobacterium avi- um paratuberculosis [combo 224], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qual- quer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 e 221], que ainda compreende antígeno de Mycobacterium avium paratubercu- losis [combo 225].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Adenovírus [combo 226]. De acor- do com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Adenoví- rus [combo 227],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224 e 225], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tra- tamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Adenovírus [combo 228]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223,224 e 225], que ainda compreende antígeno de Adenovírus [combo 229].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Astrovírus [combo 230]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV a- tenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Astrovírus [combo 231].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 e 229], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por in- fecções causadas por Astrovírus [combo 232]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de a - cordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 e 229], que ainda compreende antígeno de Astrovírus [combo 233].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Parvovírus Bovino [combo 234]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Parvovírus Bovino [combo 235], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232 e 233], que ainda compreende um com- ponente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infec- ções causadas por infecções causadas por Parvovírus Bovino [combo 236]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232 e 233], que ainda compreende antígeno de Parvoví- rus Bovino [combo 237].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum, Adenoví- rus, Astrovírus, Parvovírus Bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 238]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Cryptosporidium parvum, Adenovírus, Astrovírus, Parvovírus Bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 239].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Escherichia coli, Salmonella spp., de preferência Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Salmonella newport, rotavírus bovino e Coronavírus bovino, Cryptosporidium parvum, Adenovírus, Astrovírus, Parvovírus Bovino e Mycobacterium avium paratu- berculosis [combo 240]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Escherichia coli, Salmonella spp., de preferência Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Salmonella newport, rotavírus bovino e Coronavírus bovino, Cryptosporidium parvum, Adenovírus, Astroví- rus, Parvovírus Bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 241],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e /ou Streptococcus dysgalactiae [combo 242]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococ- cus dysgalactiae, [combo 243]. De acordo com uma modalidade mais prefe- rida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e um antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococcus dysgalactiae [combo 244],
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e /ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococ- cus aureus [combo 245]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoc- coccus uberus e/ou Streptococcus dysgalactiae, e/ou Staphylococcus aureus [combo 246].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 e 241], que ainda compreende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococ- cus dysgalactiae, e/ou Staphylococcus aureus [combo 247]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combi- nada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 30 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 e 241], que ainda compreende antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococcus dysgalactiae, e/ou Staphylococcus aureus [com- bo 248]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 e 241], que ainda compreende antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococcus dysgalactiae, e/ou Staphylococ- cus aureus [combo 249].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus, Klebsiella spp. e Mycoplasma spp. [combo 250]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende BVDV atenua- do (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antígeno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus, Streptococcus dysgalactiae, e/ou Streptococcus aureus, Klebsiella spp. e Mycoplasma spp. [combo 251]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada com- preende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e um antí- geno de Streptococcus spp., de preferência Streptoccoccus uberus e/ou S- treptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Myco- plasma spp. e endotoxina [combo 252].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Trichophyten e Microsporus, de preferência selecionadas de Trichophyton verrucosum, Trichophyton menta- grophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum ca- nis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Mi- crosporum gypseum [combo 253]. De acordo com uma modalidade preferi- da, a vacina combinada compreende BVDV atenuado (tipos 1 e/ou 2) con- forme descrito aqui e um antígeno de Trichophyten e Microsporus, de prefe- rência selecionadas de Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagro- phytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Micros- porum gypseum [combo 254].
De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe- re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250 e 251], que ainda compre- ende um componente imunológico ativo eficaz para o tratamento e/ou profi- laxia de infecções causadas por infecções causadas por Trichophyten e Mi- crosporus, de preferência selecionadas de Trichophyton verrucosum, Tri- chophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 255]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de a- cordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251 e 252], que ainda compreende antígeno de Trichophyten e Microsporus, de preferência selecionadas de Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkiso- vii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 256],
De acordo com uma outra modalidade, a fonte da vacina combi- nada é Alpha 7®, ALPHA-7/MB®, ALPHA-CD®, BAR-VAC® 7, BAR-VAC® 7/SOMNUS, BAR-VAC® 8, BAR-VAC® CD, BAR-VAC® C/DT, BREED- BACK® FP 10, BREED-BACK® FP 10 HS, BREED-BACK® FP 5, BREED- BACK® FP 5 HS, BREED-BACK-10®, CALIBER® 3, CALIBER® 7, ELITE 4®, ELITE 9®, ELITE 9-HS®, EXPRESS® 10, EXPRESS® 10-HS, EXPRESS® 3, EXPRESS® 3/Lp, EXPRESS 4®, EXPRESS® 5, EXPRESS® 5-HS, EX- PRESS® 5-PHM, EXPRESS® I, EXPRESS® l/LP, OCU-GUARD® MB, PUL- MO-GUARD® MpB, PULMO-GUARD® PH-M, PULMO-GUARD® PH-M/SDT, PULMO-GUARD® PHM-1, TETGUARD®, VIBRIO-LEPTO-5® (todos da Boe- hringer Ingelheim, St. Joseph, MO); Cobalt® 7, l-Site®, Lepto 5, Master Guard® Preg 5, Master Guard® 10, Master Guard® 10 + Vibrio, Master Guard® J5, P.H.M. Bac® 1, Pre-vent 6™, Respromune® 4, Respromune® 4 + Somnumune® (IM, SC), Respromune® 5 l-B-P+BRSV, Respromune® 5+L5, Respromune® 5+L5 Somnus, Respromune® 5+Somnumune, Res- promune® 5+VL5, Respromune® 8, Respromune® 9, Respromune® 10, Scour Vac™ 4, Scour Vac™ 9, Scour Vac™ E coli + C, Somnumune®, Tita- nium™ 3, Titanium™ 4, Titanium™ 4 L5, Titanium™ 5, Titanium™ 5 L5, Ti- tanium® 5+P.H.M. Bac®-1, Titanium™ BRSV 3, Titanium™ IBR, Titanium™ IBR-LP (todos da Agri Laboratories Inc., St. Joseph, MO); Herd-Vac® 3, Herd -Vac® 3 S, Herd -Vac® 8, Herd -Vac® 9, Surround™ 4, Surround™ 4+HS, Surround™ 8, Surround™ 9, Surround™ 9+HS, Surround™ HS1 Sur- round™ L5, Surround™ V-L5 (todas da BioCor1 Omaha, NE (Pfizer)); Myco- mune® (Biomune Co., Lenexa, KS); vacina Bluetongue, Vacina contra o ví- rus da diarréia bovina, bacterina-bovina de Campylobacter fetus, Essential 1, Essential 2, Essential 2+P, Essential 3, Essential 3+T, Essential 4, Lepto-5, bacterina de Mannheimia haemolytica-Pasteurella multocida, Pre-breed 6, Pre-breed 8, Respira-1, Respira-3, Vacina Wart (todas da Colorado Serum Company, Denver, CO); Pyramid® 3, Pyramid® 4, Pyramid® 4 + Prespon- se® SQ1 Pyramid® 5, Pyramid® 8, Pyramid® 9, Pyramid® IBR, Pyramid® IBR+Lepto, Triangle® 1 + Tipo Il BVD, Triangle® 3 + VL5, Triangle® 4 + HS, Triangle® 4 + PH/HS, Triangle® 4 + PH-K, Triangle® 4 + Tipo Il BVD, Trian- gle® 9 + HS, Triangle® 9 + PH-K, Triangle® + Tipo Il BVD1 Trichguard®, Tri- chguard® + V5L, TriVib 5L® (todas da Fort Dodge Animal Health, Overland Park, KS (Wyeth)); Bacterina J-5 de Escherichia coli, Bacterina de Espécies de Serpentes; Bacterina-Toxoide de Staphylococcus aureus (todas da Hygi- eia Biological Laboratories, Woodland, CA); Endovac-Bovi® com Immune- plus® (Immvac, Inc., Columbia, MO); 20/20 Vision® com Spurfs), L5 SQ, Ne- oguard™, MasterGuard® Preg 5, Once PMH®, Once PMH® SQ, Vibralo- ne™-L5, Vision® 7 Somnus com Spur®, Vision® 7 com Spur®, Vision® 8 Somnus com Spur®, Vision® 8 com Spur®, Vision® CD-T com Spur®, Visi- on® CD com Spur®, Vista™ IBR SQ, Vista™ 3 SQ, Vista™ 5 SQ, Vista™ 5 L5 SQ, Vista™ Once SQ, VL5 SQ, Volar®, (todos da Intervet Inc., Millsboro, DE); Vac®, Reliant® 3, Reliant® 4, Reliant® IBR, Reliant® IBR/BVD, Reli- ant® IBR/Lepto, Reliant® Plus BVD-K (Dual IBR™), Reliant® Plus (Dual I- BR™), Respishield ™ 4, Respishield ™ 4 L5, Respishield ™ HM (todos da Me- rial LTD, Duluth, GA); Arsenal® 4.1, Arsenal® IBR, Arsenal® IBR BVD, Bo- vine Pili Shield™, Bovine Pili Shield™+C, Clostri Shield® 7, Clostri Shield® BCD, Fusogard®, Lepto Shield™ 5, Pinkeye Shield™ XT4, Salmo Shield® T, Salmo Shield® TD, Scour Bos™ 4, Scour Bos™ 9, Somnu Shield™, Trep Shield™ HW, Vib Shield® L5, Vib Shield® Plus, Vib Shield® Plus L5, Vira Shield® 2, Vira Shield® 2+BRSV, Vira Shield® 3, Vira Shield® 3+VL5, Vira Shield® 4, Vira Shield® 4+L5, Vira Shield® 5, Vira Shield® 5+L5, Vira Shi- eld® 5+L5 Somnus, Vira Shield® 5+Somnus, Vira Shield® 5+VL5, Vira Shi- eld® 5+VL5 Somnus, Vira Shield® 6, Vira Shield® 6+Somnus, Wart Shield™ (todos da Novartis Animal Health, Basel, Switzerland); Bovi-K® 4, Bovi- Shield™ 3, Bovi-Shield™ 4, Bovi-Shield™ BRSV, Bovi-Shield® FP™ 4+L5, Bovi-Shield® GOLD 3, Bovi-Shield® GOLD 5, Bovi-Shield® GOLD FP™ 5 L5, Bovi-Shield® GOLD FP™ 5 VL5, Bovi-Shield® Gold IBR-BVD, Bovi- Shield® Gold IBR-BVD-BRSV-LP, Bovi-Shield™ IBR1 Bovi-Shield™ IBR- BRSV-LP, Bovi-Shield™ IBR-BVD, Bovi-Shield™ IBR-BVD-BRSV-LP, Bovi- Shield™ IBR-PI3-BRSV, Calf-Guard®, CattleMaster® 4, CattleMaster® 4+L5, CattleMaster® 4+VL5, CattIeMasteKs) BVD-K1 CattleMaster® Gold FP™ 5, CattleMaster® Gold FP™ 5 L5, Defensor® 3, Fortress® 7, Fortress® 8, Fortress® CD, Leptoferm®-5, One Shot®, One Shot Ultra™ 7, One Shot Ultra™ 8, PregGuard™ FP 9, PregGuard® Gold FP™ 10, Resvac® BRSV/Somubac®, Resvac® 4/Somubac®, ScourGuard 3® (K), ScourGuard 3® (K)/C, Somubac®, Spirovac®, Spírovac® L5, Spirovac® VL5, StayBred ™ VL5, TSV-2™, Ultrabac® 7, Ultrabac® 7/Somubac®, Ultrabac® 8, Ultrabac® CD, UItraChoiee™ 7, UltraChoiee™ 8, UltraChoiee™ CD, Upjohn J-5 Baete- rin™, Vibrin® (ali de Pfizer Inc., New York, NY); Vacina Covexin® 8, Vacina Electroid® 7, Electroid® D, Guardian™, Jencine® 2, Jencine® 3, Jencine® 4, Nasalgen® IP Vacina, Piliguard® Pinkeye-1 Trivalent1 Piliguard® Pinkeye + 7, Piliguard® Pinkeye Triview®, Siteguard® G, Vacina Siteguard® MLG (todos da Schering-Plough Animal Health Corporation, Kenilworth, NJ); My- co-Bac™ B, Poly-Bac B® 3, Poly-Bac B® Somnus, Super Poly-Bac B® Somnus (todos da Texas Vet Lab, Inc., San Ângelo, TX), Virabos™-3 com Immunostim®, Virabos™-4 + H. somnus com Immunostim®, Virabos™-4 com Immunostim® (todos da Bioniche Animal Health, Athens, GA), em que BVDV atenuado, conforme descrito aqui, é adicionado. Alternativamente, quando antígeno de BVDV está presente em qualquer uma dessas vacinas, BVDV atenuado, conforme descrito aqui, é adicionado ou BVDV presente em qualquer uma dessas vacinas é substituído por BVDV atenuado, confor- me descrito aqui. Formulações:
Um aspecto importante da presente invenção é o preparo da(s) vacina(s) combinada. Aqueles habilitados na técnica saberão quais compo- nentes adicionais podem estar compreendidos na referida composição (veja também Remington's Pharmaceutical Sciences. (1990). 18a ed. Mack Publ., Easton). O perito pode usar soluções injetáveis estéreis fisiologicamente a- ceitáveis. Para o preparo de uma solução pronta para uso para injeção ou infusão parenteral, soluções isotônicas aquosas tais como, por exemplo, so- lução salina ou soluções correspondentes de proteína do plasma estão pron- tamente disponíveis. As composições farmacêuticas podem ser apresenta- das como Iiofilizados ou preparados secos, os quais podem ser reconstituí- dos com uma solução injetável conhecida diretamente antes de uso sob condições estéreis, por exemplo, como um kit de partes.
Além disso, as composições de vacina imunogênica da presente invenção podem incluir um ou mais veículos veterinariamente aceitáveis. Conforme usado aqui, um "veículo veterinariamente aceitável" inclui qual- quer e todos os solventes meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes para retardado de absorção e se- melhantes.
Diluentes podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol e semelhantes. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e Iactose dentre outros. Estabilizantes incluem albumina e sais alcalinos de ácido etileno diamina tetraacético, dentre ou- tros.
Adjuvantes incluem, mas não estão limitados a, o sistema de adjuvante RIBI (Ribi Inc.), alume, gel de hidróxido de alumínio, colesterol, emulsões óleo-em-água, emulsões água-em-óleo tais como, por exemplo, adjuvantes completo e incompleto Freund, copolímero em bloco (CytRx, A- tlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), CARBOPOL®, adjuvante AM- PHIGENO, saponina, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL) ou outras frações de saponina, monofosforil lipídio A, adjuvante de lipídio - amina Avri- dine, enterotoxina sensível ao calor de E. coli (recombinante ou de outro modo), toxina do cólera ou dipeptídeo de muramila, dentre muitos outros.
As composições imunogênicas podem ainda incluir um ou mais de outros agentes imunomodulatórios tais como, por exemplo, interleucinas, interferons ou outras citocinas. As composições imunogênicas podem tam- bém incluir Gentamicina Mertiolate. Embora as quantidades e concentrações de adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presente invenção possam ser prontamente determinados por aqueles habilitados, a presente invenção considera composições compreendendo de cerca de 50 ug a cerca de 2000 ug de adjuvante e, de preferência, cerca de 250 ug/ml de dose da composi- ção de vacina. Em outra modalidade preferida, a presente invenção conside- ra composições de vacina compreendendo de cerca de 1 ug/ml a cerca de 60 ug/ml de antibiótico e, mais preferivelmente, menos do que cerca de 30 ug/ml de antibiótico.
Por exemplo, em uma composição de acordo com a invenção, 104 a 106 TCID50 de BVDV atenuado podem ser decompostos em SGS a 25% (v/v) (75 mg de sacarose, 20 mg de gelatina, 0,274 mg de hidróxido de potássio, 0,72 mg de ácido L-glutâmico, 0,516 mg de dihidrogeno fosfato de potássio, 1,254 mg de fosfato de dipotássio e 2 ml com água para injeção) e meio de cultura de célula a 5% (v/v) e 1 ml com água para injeção. Essa é ainda misturada com pelo menos um outro antígeno de um patógeno bovino, conforme listado acima.
De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada é primeiro desidratada. Se a composição é primeiro Iiofilizada ou desidratada através de outros métodos, então, antes de vacinação, a referida composi- ção é reidratada em soluções aquosas (por exemplo, solução salina, PBS (solução salina tamponada com fosfato)) ou não aquosas (por exemplo, e- mulsão de óleo (óleo mineral ou óleo vegetal/metabolizado baseado em uma única ou uma emulsão dupla), adjuvante baseado em alumínio, baseado em carbômero). Dose e administração De acordo com a presente invenção, uma quantidade eficaz de uma vacina combinada administrada a gado, incluindo vacas prenhes e va- cas prenhes amamentando bezerros, proporciona imunidade eficaz contra infecções microbiológicas causadas por BVDV e pelo menos um outro pató- geno conforme listado acima. Combinações preferidas de antígenos para o tratamento e profilaxia de doenças microbiológicas em gado são listadas acima.
De acordo com uma modalidade, a vacina combinada é adminis- trada a bezerros em duas doses em um intervalo de cerca de 3 a 4 sema- nas. Por exemplo, a primeira administração é realizada quando o animal tem cerca de 1 a cerca de 3 meses de idade. A segunda administração é realiza- da cerca de uma a cerca de 4 semanas após a primeira administração da vacina combinada. De acordo com uma outra modalidade, revacinação é realizada em um intervalo de 6 a 12 meses após administração da segunda dose. Em uma modalidade preferida, a primeira administração é realizada cerca de 5 semanas antes de cruzamento do animal. A segunda administra- ção é realizada cerca de 2 semanas antes de cruzamento do animal. A ad- ministração de doses subsequentes da vacina é, de preferência, feita em uma base de 6 meses a anual. Em outra modalidade preferida, os animais vacinados antes da idade de cerca de 6 meses deverão ser revacinados a - pós 6 meses de idade. A administração de doses subsequentes da vacina é, de preferência, feita em uma base de 6 meses a anual.
A quantidade de vacina combinada que é eficaz depende dos ingredientes da vacina e do esquema de administração. Tipicamente, quan- do um preparado de vírus inativado ou de vírus vivo modificado é usado na vacina combinada, uma quantidade da vacina contendo de cerca de 102 a cerca de 109 TCID50 por dose, de preferência de cerca de 103 a cerca de 108 TCID50 por dose, mais preferivelmente, cerca de 104 a cerca de 108 TCID50 por dose. Por exemplo, cerca de 105 a cerca de 108 TCID50 por dose de BVDV atenuado (tipos 1 e 2) é eficaz quando administrada duas vezes ao animal durante um período de cerca de 3 a 4 semanas. Em geral, antígeno inativado é normalmente usado em quantidades maiores do que vírus vivos modificados. Tipicamente, quando antígeno bacteriano é usado na vacina combinada, a vacina contém uma quantidade de cerca de 103 a cerca de 109 unidades de formação de colônia (CFU) por dose, de preferência, cerca de 104 a cerca de 108 (CFU) por dose, mais preferivelmente, cerca de 105 a cerca de 106 (CFU) por dose.
No caso em que a vacina combinada compreende IBR vivo mo- dificado, a quantidade de antígeno IBR está, de preferência, em uma faixa de cerca de 105 a 107 5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combina- da compreende PI3 modificado vivo, a quantidade de antígeno PI3 está, de preferência, em uma faixa de cerca de 107 a 109 TCID5O por dose. No caso em que a vacina combinada compreende BRSV vivo modificado, a quanti- dade de antígeno BRSV está, de preferência, em uma faixa de cerca de 1045 a 106,5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina compreende IBR morto, a quantidade de antígeno IBR está, de preferência, em uma faixa de cerca de 107,0 a 109 0 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende PI3 morto, a quantidade de antígeno PI3 está, de preferência, em uma faixa de cerca de 107,2 a 109,2 TCID5O por dose. No caso em que a vacina combinada compreende BRSV morto, a quantidade de antígeno BRSV está, de preferência, em uma faixa de cerca de 105,0 a107'5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende Leptospira spp mor- to, a quantidade de antígeno Leptospira spp está, de preferência, em uma faixa de cerca de 107,0 a 1010 (CFU) por dose. No caso em que a vacina compreende H. somnus morto, a quantidade de antígeno H. somnus está, de preferência, em uma faixa de 106 ° a 109 (CFU) por dose.
A composição de acordo com a invenção pode ser aplicada in- tradermicamente, intratraquealmente, intravaginalmente, intramuscularmente ou intranasalmente e, de preferência, intramuscularmente ou intranasalmen- te. No corpo de um animal, pode provar ser vantajoso aplicar as composi- ções farmacêuticas conforme descrito acima via uma injeção intravenosa ou direta aos tecidos-alvo. Para aplicação sistêmica, as vias intravenosa, intra- vascular, intramuscular, intranasal, intra-arterial, intraperitoneal, oral ou intra- tecal são preferidas. Uma aplicação mais local pode ser realizada subcuta- neamente, intradermicamente, intracutaneamente, intracardialmente, intralo- balmente, intramedularmente, intrapulmonarmente ou diretamente em ou próximo do tecido a ser tratado (tecido conectivo, ósseo, muscular, nervoso, epitelial). Dependendo da duração desejada e eficácia de tratamento, as composições de acordo com a invenção podem ser administradas uma ou várias vezes, bem como intermitentemente, por exemplo, em uma base diá- ria, durante vários dias, semanas ou meses e em diferentes dosagens. Métodos de tratamento
Ainda outra modalidade importante da invenção é um método para a profilaxia ou tratamento de doenças causadas pelo BVDV e outro(s) micro-organismo(s) patogênico(s) bovino(s), em que um BVDV atenuado conforme descrito aqui e outros componentes ativos imunológicos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia da infecção causada pelo referido outro micro-organismo patogênico bovino é administrado a um animal que precisa do mesmo em uma dose adequada, conforme conhecido por aqueles habili- tados na técnica. EXEMPLOS
Os exemplos a seguir servem para ilustrar adicionalmente a pre- sente invenção; mas os mesmos não deverão ser construídos como Iimitan- do o escopo da invenção divulgada aqui.
EXEMPLO 1
BVDV XIKE-B: avaliação de feto-patoqenicidade em novilhas prenhes
BVDV XIKE-B, um mutante RNase-negativo do isolado de BVDV do tipo 2 altamente patogênico NewYork'93/C foi recuperado do clone de cDNA infeccioso pKANE40B e mostrou características de crescimento do tipo silvestre (wt-semelhante) em cultura tecidual. Em experimentos com a- nimais, descobriu-se que o vírus mutante estava consideravelmente atenua- do, de modo que ele representava um candidato promissor para desenvol- vimento de um vírus de vacina viva atenuada (Meyer e outros, 2002). Para testar se esse vírus atenuado ainda é capaz de atravessar a placenta e in- fectar o feto, novilhas prenhes foram infectadas com XIKE-B. Como um con- trole, BVDV do tipo silvestre recuperado do clone de cDNA pKANE40A foi usado. O respectivo vírus denominado XIKE-A expressa uma RNase de Ems ativa na célula infectada. O estudo objetivava avaliar a segurança de XIKE-A e XIKE-B em animais prenhes.
DESIGN EXPERIMENTAL
Dez novilhas prenhes foram selecionadas de um rebanho BVDV- negativo. Os seguintes grupos de 5 novilhas foram incluídos no experimento:
<table>table see original document page 135</column></row><table>
As novilhas foram movidas para as unidades experimentais 8 dias antes das inoculações. O estado de gravidez foi confirmado após trans- porte para a unidade experimental. As novilhas tinham entre 60 e 90 dias de gestação no dia de inoculação. Inoculação ocorreu para todos os animais em um ponto de tempo.
As novilhas foram monitoradas com relação à presença de sinais clínicos de infecção por BVDV, incluindo abortos durante o período de ob- servação. Amostras de sangue foram coletadas dos animais para sorologia, detecção de antígeno e as células sangüíneas brancas foram contadas. O experimento foi terminado 9 dias após infecção. Vacas sem aborto foram abatidas, o útero examinado e coletado. Amostras de órgão fetal foram cole- tadas durante necropsia de rotina e examinadas com relação à infecção por BVDV.
A presença de infecção fetal foi o principal parâmetro de avalia- ção, composto do número de mortalidades das vacas relacionadas ao BVDV, o número de abortos relacionados ao BVDV e o número de fetos BVDV-positivos ao término. Além desse parâmetro principal, sinais clínicos característicos para infecção por BVDV, viremia e contagens de células brancas em vacas e a temperatura retal após estímulo foram avaliados.
Animais
Novilhas foram adquiridas de uma fazendo sem BVDV. Apenas animais os quais reúnem os critérios de inclusão foram usados. Critérios de Inclusão
- Isentos de anticorpos ao BVD; cada indivíduo foi testado no teste de anticorpo no soro antes de transporte e no início do estudo (na uni- dade de teste animal).
- Sem BVDV; plasma e/ou preparado de camada Ieuco- plaquetária de cada indivíduo foi testado em um teste adequado.
- Clinicamente saudável no início de estudo, julgado quando de exame físico. O exame de saúde dos animais foi realizado de acordo com a prática veterinária atual geralmente aceita.
- Gravidez confirmada através de exame físico antes de inocula- ção. A gravidez estava entre 60-90 dias no momento de inoculação, provado através de registros de inseminação. Cepa de Teste A
<table>table see original document page 137</column></row><table> Cepa de teste B
<table>table see original document page 138</column></row><table>
Controle de gravidez
Gravidez foi confirmada imediatamente antes de inoculação. Inoculacão de Novilhas
A data de inoculação é o Dia 0 do experimento. Em cada narina, 3 ml do material de teste foram administrados intranasalmente através de uma seringa sem agulha. Cada vez, uma nova seringa estéril foi usada. A administração foi realizada durante a fase de as- piração de forma a minimizar a perda de fluido via expiração do material.
Observações pós-inoculação
Coleta e exame de amostras de sangue
Sangue foi coletado após procedimentos assépticos padrões (desinfecção do local de coleta do sangue). Uma nova seringa e agulha es- téreis foram usadas para cada animal.
Coleta de sangue para preparo de soro
Pelo menos 10 ml de sangue foram coletados das novilhas ime- diatamente antes de inoculação, então, semanalmente após infecção e ao término do estudo. Soro foi armazenado a -20 °C até requerido.
Coleta de sangue para contagens de leucócitos e preparo de camada Ieuco- plaquetária
Para contagem de leucócitos, 3 ml de sangue foram transferidos imediatamente após coleta para vasos estéreis adequados (Venoject, Teru- mo Europe N.V., Leuven, Bélgica), pré-enchidos com 0,06 ml de EDTA (0,235 MOL/L).
Para preparo de camadas leuco-plaquetárias, pelo menos 15 ml de sangue foram transferidos imediatamente após coleta para vasos estéreis adequados, pré-enchidos com 0,1 ml de solução de heparina (Na-heparina para inj., 5 000 lU/ml lote. A7B163A data de exp.: 11/2000: Gedeon Richter RT, Budapeste, Hungria) proporcionando pelo menos 20 IU de heparina por ml de sangue na amostra de sangue. O conteúdo foi cuidadosamente mistu- rado depois.
Para preparo de camadas leuco-plaquetárias e contagem de leucócitos, sangue foi coletado das novilhas:
• a cada dia, entre o Dia O e o Dia 14 após infecção;
• a cada dois dias, entre o Dia 15 e o Dia 40 ou até que todos os animais fossem negativos para isolamento de vírus para três pontos de tem- po de amostragem consecutivos. Preparo de soro
Sangue foi deixado coagular em temperatura ambiente e sepa- rado através de centrifugação. Cada amostra de soro foi dividida em duas alíquotas de pelo menos 2 ml cada. Um conjunto de alíquotas foi avaliado com relação a anticorpos BVDV-específicos através de ELISA. O resto do soro foi congelado e armazenado a -20°C até requerido.
Contagens de leucócitos
As contagens de leucócitos foram determinadas com um disposi- tivo eletrônico semi-automático Coulter-counter (Diatron Minicell-16, Messte- chnik GmbH, Wien, Áustria) com uma precisão reivindicada de 0,1 χ 10^9 /1, 100 / μl. O instrumento foi usado (calibração e contagens de leucócitos) de acordo com as recomendações do fabricante.
Preparo de camadas leuco-plaquetárias
Amostras de sangue em heparina foram transportadas para o laboratório tão logo possível. O procedimento de preparo de camada Ieuco- plaquetária, seguindo um procedimento padrão de laboratório, foi realizado sob condições assépticas (pipetas estéreis, manipulação, bancada limpa, etc.).
As camadas leuco-plaquetárias obtidas foram resuspensas em um pequeno volume (2 ml) de RPMI 1640 e congeladas a -70°C em duas alíquotas de 0,5 ml. As camadas leuco-plaquetárias residuais de 1 ml foram imediatamente usadas para determinação do BVDV célula-associada atra- vés de cocultura em uma cultura de células permissiva.
Teste ELISA de anticorpo ao BVD no soro
Cada amostra de soro foi testada com relação à presença de anticorpos ao2 glicoproteína usando um teste ELISA adequado e validado (teste de anticorpo ao BVDV Svanovir™ Cat# 10-2200-10). Cada teste foi validado e realizado de acordo com as recomendações do fabricante. Amos- tras positivas foram diluídas de acordo com a escala log2 para determinar as titulações de anticorpo ao BVDV.
Ensaio(s) ao antíqeno BVD
Cada amostra de camada leuco-plaquetária foi ensaiada com relação à presença de BVDV através de co-cultura das camadas Ieuco- plaquetárias recentemente preparadas com células ou uma linhagem de cé- lula suscetível. Nenhum congelamento foi permitido antes de co-cultura.
O plasma foi coletado e fornecido ao Man-Gene de cada amos- tra.
Observações clínicas
Observação de novilhas
Os animais foram examinados diariamente do Dia 0-42 pós- inoculação com relação à presença de sintomas clínicos por um veterinário suficientemente treinado.
Todos os sinais clínicos foram registrados e descritos por sua natureza, consistência/toque, gravidade (brando, médio ou grave), localiza- ção, tamanho da área afetada e eles foram classificados de acordo com de- finições consensuais e padrões. Atenção especial foi dada aos sinais respi- ratórios (respiração, sua taxa; descarga nasal ou ocular; conjuntivite, espir- ros, tosse, etc.) e diarréia.
Temperaturas retais
As temperaturas foram medidas diariamente em cada novilha, na mesma hora do dia (de preferência pela manhã) a partir de 5 dias antes de inoculação até 21 dias pós-infecção.
Medição diária da temperatura retal foi continuada até que cada animal tivesse temperaturas retais abaixo de ou igual a 39 0C durante pelo menos 3 dias consecutivos.
Detecção de gravidez interrompida
Gravidez foi confirmada e suspeita de aborto ou reabsorção do feto foi estabelecida através de exame retal. Um veterinário treinado exami- nou todos os animais na inoculação, 1 e 2 meses pós-inoculação. O exame foi realizado de acordo com a prática veterinária geralmente aceita.
As novilhas foram examinadas diariamente com relação a qual- quer sinal de aborto até término do estudo (8-12 semanas pós-estímulo).
Término do Estudo
O estudo foi terminado através de abate das novilhas e extração dos fetos. Fetos e material fetal foram transferidos para recipientes de trans- porte fechados marcados com o número da vaca e a data/tempo. Os recipi- entes foram transportados para uma sala de necropsia selecionada.
Necropsia das novilhas não foi requerida. Necropsia foi realizada sobre os fetos, os achados registrados e um painel de amostras coletado conforme descrito abaixo.
Exame Pós-Morte
Uma necropsia detalhada dos animais experimentais foi feita em cada caso de morte. Exames pós-morte foram realizados por um cirurgião
veterinário experiente e os dados foram registrados em folhas de dados a - propriadas. Outros testes de laboratório foram realizados de acordo com os sinais e lesões clínicas observados. Se o diagnóstico da necropsia se referia a uma doença causada por agente microbiano, o diagnóstico foi verificado através de um teste apropriado, específico para o agente. Cada amostra te-
cidual foi coletada em pelo menos 2 recipientes rotulados distintos e conge- lados em pedaços em nitrogênio líquido. As amostras foram armazenadas a -70 °C até requeridas.
Fetos abortados e término do estudo
Pelo menos as seguintes amostras teciduais foram coletadas dos fetos:
• exudato da poço peritoneal ou tórax, se presente,
• nódulos linfáticos mesentéricos,
• baço,
• timo,
• cerebelo,
• rim,
• medula óssea do esterno,
• amostra da placenta, se disponível.
Novilhas mortas ou sacrificadas
Pelo menos as seguintes amostras teciduais foram coletadas:
• sangue para camada leuco-plaquetária, se disponível,
• sangue para soro, se disponível, • placas de Peyer1
• nódulos linfáticos mesentéricos,
• baço,
• rim,
· útero, incluindo uma amostra da placenta, se disponível.
Armazenamento e Transporte de Amostras
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As amostras foram enviadas para análise em laboratório, con- forme requerido pelo patrocinador. A escolha de amostras e o momento de transporte estavam em concordância com o monitor do estudo ou o adminis- trador do projeto. Como um assunto de princípio geral, amostras provenien- tes de material abortado ou de bezerros recém-nascidos foram investigadas tão logo possível.
RESULTADOS
Sumário de dados clínicos relacionados ao BVD e de laboratório Grupo 1
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NT: não testado Grupo 2
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* Fetos foram auto-digeridos no momento de amostragem
Conclusão:
O estudo objetivou avaliar a segurança de XIKE-A e XIKE-B em animais prenhes. Dez novilhas prenhes foram selecionadas de um rebanho BVDV-negativo. Dois grupos de 5 novilhas foram incluídos no experimento: um foi inoculado com a cepa viral XIKE-A, o outro com XIKE-B. As novilhas estavam entre os dias 60 e 90 de gestação no dia de inoculação. As novilhas foram monitoradas com relação à presença de sinais clínicos de infecção por BVDV, incluindo abortos durante o período de observação. Amostras de sangue foram coletadas dos animais para sorologia, detecção de antígeno e as células sangüíneas brancas foram contadas. O experimento foi terminado 9 semanas após infecção. As vacas sem aborto foram abatidas, o útero e- xaminado e coletado. Amostras de órgão fetal foram coletadas durante ne- cropsia de via e examinadas com relação à infecção por BVDV.
O vírus XIKE-B provou ser menos patogênico do que o XIKE-A, todavia, aborto e infecção do feto relacionados ao BVD foram observados no grupo XIKE-B também. Portanto, pode ser concluído que a inativação da RNase de Erns não previne infecção fetal.
EXEMPLO 2
BVDV XIKE-A-NdN: avaliação de feto-patoaenicidade em novilhas prenhes Foi mostrado que o gene de Npro não é essencial para o cresci- mento de CSFV em cultura tecidual (Tratschin e outros, 1998). Mesmo em- bora uma prova para atenuação de BVDV em conseqüência de deleção de Npro esteja faltando, um papel dessa proteína na interação entre o vírus e o hospedeiro é observado como sendo possível e foi, na verdade, indicado através de experimentos recentes para CSFV (Mayer e outros, 2004; Ruggli e outros, 2003). Portanto, investigou-se se a deleção da principal parte da seqüência de codificação de Npro leva a um vírus que não infecta mais o feto em novilhas prenhes. O gene de Npro1 exceto quanto aos 4 códons 5' termi- nais, foi deletado do clone de cDNA de comprimento total pKANE40A de acordo com procedimentos padrão. O clone mutante de comprimento total resultante foi usado como template para transcrição in vitro e o cRNA resul- tante foi transfectado em células MDBK conforme descrito (Meyer e outros, 2002). O vírus recuperado foi amplificado em cultura tecidual e, então, usado no experimento com animal descrito abaixo. BVDV XIKE-B serviu como um controle, uma vez que foi mostrado antes que ele é capaz de atravessar a placenta (EXEMPLO 1). OBJETIVO(SVFINALIDADE DO ESTUDO
O estudo objetiva avaliar a segurança de um BVDV vivo atenua- do com uma deleção genômica da maioria da região de codificação de Npro em animais prenhes.
Os materiais e métodos aplicados são descritos no Exemplo 1. DESIGN DE ESTUDO
Oito novilhas prenhes foram atribuídas a dois grupos aleatoria- mente. Elas foram tratadas e observadas de acordo com o seguinte esque- ma:
<table>table see original document page 145</column></row><table> <table>table see original document page 146</column></row><table>
RESULTADOS
Todas as novilhas eram saudáveis e estavam prenhes no início do estudo. Todos os animais provaram ser isentos de BVDV e anticorpos ao BVDV antes de início do estudo.
Preparo e Controle dos vírus usados para a infecção
Amostras foram coletadas através das etapas de diluição e en- saiadas no dia de preparo, isto é, sem congelamento, através de cocultura sobre cultura tecidual adequada. Os resultados da titulação viral são mostra- dos na tabela a seguir.
<table>table see original document page 146</column></row><table>
Sintomas clínicos de infecção por BVDV
A tabela abaixo proporciona um sumário sobre os animais que tiveram sinais clínicos durante o período de observação. Sinais clínicos e os dias pós-inoculacão (DPI) quando eles foram observados
<table>table see original document page 147</column></row><table>
Apenas sinais clínicos brandos e transitórios foram observados em alguns dos animais em cada grupo. No Grupo 1, uma das 5 novilhas ti- nha perdido o apetite no dia 8 PI. No Grupo 2, dois dos 3 animais tinham sinais clínicos. Ambas as novilhas experimentaram tosse em torno do dia 21 PI que era acompanhada de perda de apetite em um dos animais.
Temperaturas retais
Nenhuma alteração na temperatura normal foi detectada antes de inoculação dos animais. Os poucos casos de temperaturas elevadas me- didas após a inoculação são resumidos na tabela abaixo.
<table>table see original document page 147</column></row><table>
Um animal em cada grupo tinha temperatura ligeiramente eleva- da e também um animal em cada grupo tinha febre. Febre foi detectada no dia 8 ou 9 PI. Os valores de temperatura sempre retornavam para os valores normais no dia seguinte. Contagens de leucócitos
Alguma Ieucopenia foi observada em todos os grupos entre os dias 3-8 PI. O número de animais com uma redução de pelo menos 40% na contagem de células sangüíneas brancas é mencionado abaixo:
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Soroloqia (anticorpos ao BVDV)
Em conformidade com o protoloco de estudo, todas as novilhas eram isentas de anticorpos ao BVDV antes de vacinação. No Grupo 1 (ino- culado com XIKE-A NdN) e no Grupo 2 (inoculado com XIKE-B), soro- conversão completa foi detectada apenas no término do estudo (2 meses após inoculação).
Isolamento de vírus BVD de camadas leuco-plaquetárias
Nenhuma viremia foi detectada.
Isolamento de vírus BVD de amostras de tecido fetal
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Conclusão
A deleção Npro resultou em uma atenuação considerável do BVDV em comparação com o vírus precursor XIKE-A que foi mostrado ser altamente patogênico (Meyer e outros, 2002). Contudo, a deleção Npro sozi- nha não impede a transmissão de um vírus recombinante baseado em NY93 para o feto após inoculação de vacas prenhes. EXEMPLO 3
BVDV XIKE-B-NdN: avaliação de feto-patogenicidade em novilhas prenhes
Para ser capaz de testar o potencial de uma combinação de ina- tivação de RNase e deleção de Npro com relação à atenuação de BVDV e transmissão fetal, diferentes mutantes de BVDV-2 com deleções dentro da região de codificação de Npro foram estabelecidos baseado no clone de cD- NA infeccioso pKANE40B, o mutante RNase-negativo de pKANE40A com uma deleção do códon 349. Os vírus recuperados foram analisados com relação à presença das mutações desejadas, a ausência das segundas mu- tações de sítio nas regiões que flanqueiam as alterações introduzidas e suas características de crescimento em cultura tecidual. XIKE-B-NdN (V-pK88C), uma variante contendo uma deleção da região de codificação de Npro com- pleta, exceto para os códons 1 a 4, além da deleção de inativação de RNase do códon 349, foi escolhido para um experimento com animal, uma vez que ele combinava as mutações desejadas com características de crescimento aceitáveis. O objetivo do estudo foi avaliar a segurança de um isolado de BVDV vivo atenuado em animais prenhes.
Cinco novilhas prenhes BVDV-negativas foram inoculadas intra- nasalmente com uma dose infectiva de 105 TCID5o/animal de XIKE-B-NdN. Dados clínicos foram registrados diariamente. Amostras de sangue foram coletadas para contagem de células sangüíneas brancas, preparo de cama- da leuco-plaquetária e sorologia. Após término do estudo, tecidos fetais fo- ram coletados para isolamento de vírus.
MATERIAL E MÉTODOS:
Conforme detalhado para o Exemplo 1:
RESULTADOS
Nenhum dado clínico foi observado (dados não mostrados). As contagens de leucócitos permaneceram virtualmente inalteradas, exceto quanto a uma diminuição significativa de aproximadamente 40% abaixo do valor de linha de base (dia 0) na novilha no. 1015 em um único dia (dia 6 p.i.) (dados não mostrados). a) Análise de preparados de camada leuco-plaquetária:
Aproximadamente 106 leucócitos foram cultivados em duplicata com células MDBK em lâminas de cultura tecidual com 24 poços durante 5 dias. As amostras foram congeladas e descongeladas duas vezes. Alíquotas de cem microlitros de amostras descongeladas foram inoculadas sobre lâmi- nas de cultura tecidual com 24 poços recentemente cultivadas e testadas com relação ao vírus através de coloração por imunofluorescência indireta (mAb Código 4, dirigido contra um epítopo conservado em proteína NS3 não estrutural). Nenhum BVDV pôde ser isolado dos preparados de camada Ieu- co-plaquetária dos animais # 921, 1013, 1015, 1055 e 1075, enquanto que controles positivos mostraram claramente a condução correta do teste.
b) Exame Pós-morte de tecidos fetais
Após término do estudo, os seguintes tecidos fetais foram cole- tados para isolamento do vírus: baço, rim, timo, esterno, cerebelo, placenta, intestino e fluido abdominal. Resumidamente, suspensões teciduais foram feitas em um pilão usando areia do mar estéril e PBS gelado sem Ca2+ e Mg2+. Os pilões foram enxaguados com 1 ml de PBS gelado sem Ca2+ e Mg2+ e as suspensões foram centrifugadas durante 10 minutos a 2000 χ g (4°C). O sobrenadante foi primeiro passado através de um contentor de filtro de 0,45 μηι descartável, seguido por uma segunda passagem em filtro (ta- manho de poro de 0,2 μίτι). O isolamento de vírus foi realizado em duplicata (400 μΙ de suspensão de tecido fetal ou 100 μΙ de fluido abdominal fetal) so- bre uma monocamada de células MDBK em uma lâmina de cultura tecidual com 24 poços (37 0C, 5% de CO2). Amostras teciduais foram controladas diariamente com relação aos efeitos citopáticos ou contaminação bacteriana e, após um período de incubação de 5 dias, as lâminas foram congeladas e descongeladas duas vezes. 100 μΙ de amostras foram passados para células MDBK recentemente cultivadas. O vírus foi detectado através de coloração por imuno-fluorescência indireta (mAb Código 4). Nenhum BVDV pôde ser detectado nas amostras teciduais ou fluido abdominal fetal. c) Achados Sorológicos
As titulações de neutralização foram determinadas antes de ino- culação, 1 mês pós-inoculação e ao término do estudo. Soro de todos os animais foi testado em triplicata para anticorpos de neutralização contra NY93/C e a diluição de endpoint foi lida através de coloração por imunofluo- rescência direta. Os resultados foram expressos como a diluição de endpo- int, a qual neutralizou aproximadamentelOO TCID50 e calculada através do método de Kaerber. Nenhum dado definido pôde ser obtido para o dia O e 1 e 2 semanas pós-infecção, uma vez que os soros eram tóxicos para células MBDK em diluições de até 1:16 e nenhuma neutralização pôde ser detecta- da em maiores diluições. Começando com a terceira semana pós-vacinação, todos os animais desenvolveram anticorpos de neutralização contra o vírus de BVDV-2 homólogo ΝΥ'93/C durando até o final do experimento (Fig. 1).
d) Conclusões
Os dados obtidos durante o estudo com animal mostram clara- mente que BVDV XIKE-B-NdN representa um vírus altamente atenuado. Em contraste ao vírus do tipo silvestre ou os mutantes simples XIKE-B ou XIKE- A-NdN que mostram transmissão fetal em novilhas prenhes em altas taxas, o mutante duplo não cruza a placenta. BVDV XIKE-B-NdN1 bem como mu- tantes duplos similares, são extremamente adequados para uso em uma vacina viva atenuada. Estudo de eficácia e proteção cruzada
Dois possíveis problemas têm de ser enfrentados com relação à vacinação com mutantes virais atenuados BVDV XIKE-B ou BVDV XIKE-B- NdN. Primeiro, há um problema geral referente à proteção cruzada entre BVDV-1 e BVDV-2. Pelo menos vacinação com vacinas de BVDV-1 inativa- do não previnem a transmissão de BVDV-2 para o feto em animais prenhes. Uma vez que proteção contra infecção fetal representa o principal objetivo de vacinação anti-BVDV, tais vacinas não podem ser consideradas como induzindo a uma imunidade protetora em uma ampla faixa. A questão, por- tanto, foi se vacinação com BVDV-2 vivo atenuado pode prevenir transmis- são de vírus para o feto. Segundo, as taxas de crescimento reduzidas de BVDV XIKE-B-NdN poderiam resultar em apenas um baixo nível de proteção não capaz de prevenir infecção transplacentária do feto em novilhas pre- nhes. Para se dirigir a esses problemas, um estudo com animal foi iniciado. Os animais (2 grupos de 10 animais cada) foram vacinados com BVDV Xl- KE-B ou XIKE-B-NdN (dosagem pretendida: 1 ml de sobrenadante com 105 TCID50 de vírus). Nenhum dos animais mostrou sinais clínicos significativos após a vacinação, exceto quanto a um animal do grupo de controle não va- cinado com tosse branda durante um dia. Os valores de temperatura retal estavam abaixo de 39 °C, exceto para um animal do grupo de controle não vacinado, que tinha 39,1 °C durante um dia. Amostras de camada Ieuco- plaquetária preparadas após vacinação foram analisadas com relação à pre- sença de vírus, conforme descrito acima. Os experimentos mostraram que apenas 5 dos 20 animais continham vírus no sangue durante 1 ou 2 dias a 4 a 8 dias pós-infeccção.
Quatro semanas após vacinação, inseminação dos animais foi realizada. Infecções de estímulo foram realizadas 60 a 90 dias depois usan- do uma cepa de BVDV-1 (BVDV KE-9, estímulo heterólogo, animais vacina- dos com XIKE-B) ou uma cepa de BVDV-2 heteróloga (BVDV KE-13, estí- mulo homólogo, animais vacinados com XIKE-B-NdN) (dosagem pretendida: 105 TCID50 em 6 ml). De cada grupo de animais vacinados, 5 novilhas pre- nhes foram aleatoriamente selecionadas para a infecção de estímulo. Ani- mais vacinados com BVDV XIKE-B foram estimulados com BVDV-2 KE-13. Além disso, 2 animais de controle não vacinados foram infectados com cada um dos vírus de estímulo. Os animais vacinados não mostraram viremia ou sintomas clínicos quando de infecção de estímulo. O estímulo obteve suces- so, uma vez que todos os controles não vacinados eram BVDV-positivos. Apenas sinais brandos de doença foram observados nos grupos de controle. As contagens de células sangüíneas brancas estavam próximo do normal (não mostrado).
Titulações de neutralização no soro foram determinadas antes de inoculação, 1 mês pós-inoculação, antes de estímulo, 1 mês após estímu- lo e ao término do estudo. Soro de todos os animais foi testado em triplicata para anticorpos de neutralização contra KE9 e NY93/C (1456Nase) e a dilui- ção de endpoint foi lida através de coloração por imunofluorescência indire- ta. Os resultados são expressos como a diluição de endpoint, a qual neutra- lizou aproximadamente 100 TCID50 e calculada através do método de Kaer- ber. Em algumas das titulações mais altas de anticorpo, a diluição de endpo- int usada não era alta o bastante. Contra KE9, apenas animais vacinados com XIKE-B desenvolveram baixas titulações de anticorpo, começando em torno da semana 4. No estímulo, todos os animais tinham titulações de anti- corpo, as quais aumentaram consideravelmente começando em torno da semana 4 pós-estímulo. Animais vacinados com XIKE-B tinham titulações de anticorpo maiores do que aqueles vacinados com XIKE-B-NdN. Todos os animais desenvolveram cerca da mesma titulação de neutralização contra NY93/C cerca de quatro semanas pós-vacinação, com titulações marginal- mente menores em animais vacinados com XIKE-B-NdN. Após estímulo, todos os animais tinham altas titulações de anticorpo. A Fig. 2 mostra o en- saio de neutralização no soro contra KE9 (BVDV-1) e a Fig. 3 mostra o en- saio de neutralização no soro contra NY93/C (BVDV-2).
Análise de amostras teciduais obtidas após término do estudo dos fetos revelou que o material obtido dos animais vacinados proporcionou resultados negativos, enquanto que a transmissão tinha ocorrido em todos os 4 animais de controle. Assim, está claro que os mutantes de BVDV-2 es- tabelecidos são bem adequados como vírus de vacina com proteção cruza- da eficientes.
Conclusão
O estímulo obteve sucesso, uma vez que todos os controles não vacinados eram virêmicos para o BVDV e os fetos de todos os controles não vacinados eram BVDV-positivos. Ambos os isolados proporcionaram prote- ção completa sob as presentes condições de teste e ensaio. Foi mostrado que o isolado XIKE-B, com o único marcador genético, protege cruzadamen- te contra estímulo com BVDV do tipo 1 em termos de viremia pelo BVD e transmissão aos fetos após estímulo. O isolado XIKE-B-NdN com o marca- dor genético duplo foi capaz de proteger completamente contra uma cepa de estímulo de BVDV do tipo 2 heteróloga em termos de viremia pelo BVD e transmissão ao feto após estímulo:
1. Foi mostrado que o isolado XIKE-B (isolado do tipo 2) protege cruzadamente contra estímulo por BVDV do tipo 1 em termos de viremia pe- Io BVD e transmissão ao feto após estímulo sob as presentes condições de teste e ensaio (n = 4).
2. O isolado XIKE-B-NdN (isolado do tipo 2) protegeu completa- mente contra uma cepa de estímulo de BVDV do tipo 2 heteróloga em ter- mos de viremia pelo BVD e transmissão ao feto após estímulo sob as pre- sentes condições de teste e ensaio (n = 5).
EXEMPLO 4
Estabelecimento de mutantes de Npro
Esse Exemplo ainda análise mutantes de BVDV-2 com deleções de Npro. Diferentes mutantes com deleções na região de codificação de Npro do genoma foram estabelecidos. Inicialmente, apenas deleções verdadeiras ou uma deleção acompanhada por uma mutação de ponto foram introduzi- das.
A: [Npro]r[C-term];
B: [Npro]3-[C-term];
C: [Npro]4-[C-term];
D: [Npro]6-[C-term];
E: [Npro]4-[C-term*]
Nas fórmulas, [Npr0]x representa o número de resíduos do amino término de Npro que são deixados nos aminoácidos de poliproteína com mu- tação, [C-term] é a poliproteína completa, exceto para Npro (começando com a C proteína e terminando com NS5B) e [C-term*] é o mesmo que [C-term], mas com uma mutação na posição 2 da C proteína (N ao invés de D). As taxas de crescimento dos vírus recuperados eram consideravelmente meno- res do que aquelas do XIKE-A do tipo silvestre ou o mutante RNase-negativo XIKE-B. Existem duas possíveis explicações para essa descoberta: (i) de- pendendo da cepa viral, seqüências de comprimento variável da região de codificação de Npro são necessárias para início de tradução eficiente (Mayers e outros, 2001; Tautz e outros, 1999) e (ii) a fusão das seqüências adicionais ao amino término da proteína de capsídeo interfere com a função da proteí- na de capsídeo. Para obter mutantes com deleção de Npro com melhor cres- cimento, um segundo conjunto de mutantes foi gerado com um gene de ubi- quitina bovina ou um fragmento da seqüência de codificação LC3 bovina substituindo a principal parte do gene de Npro . Essas estruturas permitem tradução eficiente e geram uma proteína de capsídeo com o amino término correto.
[Npro]22-[PS]- [C-term]
em que PS é ubiquitina ou LC3, C-term é a poliproteína completa, exceto para Npro (começando com a C proteína e terminando com NS5B).
As taxas de crescimento desses mutantes eram mais similares àquela que foi determinada para XIKE-A. Parece mesmo que os dois vírus RNase-positivos de acordo com a fórmula [ Npro]22-[PS]- [C-term], denomina- dos V-pK87F e V-pK87G, não mostraram retardo de crescimento significati- vo em geral, enquanto que a contraparte RNase-negativa, V-pK88G, mais uma vez mostrou uma propagação um pouco atrasada, mas em um grau menor do que os mutantes formalmente descritos.
Outros exemplos de mutantes com deleção de Npro podem ser:
<table>table see original document page 155</column></row><table>
MELFSNELL YKT representa a seqüência amino terminal de Npro do isolado de BVDV NewYork93/C.
Também pode ser possível usar variantes dessa seqüência com uma ou várias mutações. Especialmente, pode ser esperado que as varia- ções que ocorrem naturalmente, conforme encontrado em outros pestivírus, sejam funcionais. Portanto, a lista completa das variantes testadas ou pro- postas com as diferentes partes da extremidade amino-terminal de Npro po- dem ser aumentadas através de conjuntos equivalentes com trocas de ami- noácido. Abaixo, exemplos típicos das respectivas seqüências são forneci- dos para vários pestivírus, mas as possíveis variações não estão limitadas a esses exemplos.
Assim, essas variantes podem incluir, por exemplo:
MEL/-[PS]0-[C-term];
MELIS-[ PS]0-[C-term];
MELISN-[ PS]0-[C-term];
MELISNE-[ PS]0-[C-term];
MELISNEL-[PS] 0-[C-term];
MELISNELL-[ PS]0-[C-term];
MELISNELL Y-[PS]0-[C-term];
MELISNELL YK-[PS]0-[C-term];
MELI SNELL YK7-[PS]o-[C-term];
MEL/T-[PS]0-[C-term];
MELITN-[PS]0-[C-term];
MELITNE-[PS]0-[C-term];
MELITNEL-[PS]0-[C-term];
MELITNELL-[PS]0-[C-term];
MELITNELL Y-[PS]0-[C-term];
MELITNELL YK-[PS]0-[C-term];
MELITNELL YKT-[PS]0-[C-term];
Essas fórmulas também podem ter [PSj1, isto é, PS também po- deria ser um dos PS conforme descrito aqui. Seqüências pertencendo à pro- teína Npro estão em itálico. Trocas de aminoácido com relação à seqüência
BVDV NewYork93/C: MELFSNELLYKT
BVDV CP13: BVDV SD1: CSFV Brescia:
MELISNELLYKT (SEQ ID NO 36)
MELITNELLYKT (SEQ ID NO 37)
MELNHFELLYKT (SEQ ID NO 38)
MELNKFELLYKT (SEQ ID NO 39)
BDV X818: do BVDV NewYork93/C estão em negrito.
Outros exemplos podem ser encontrados, por exemplo, usando os números de acesso ao GenBank fornecidos em Becher e outros, 2003, Virology 311, 96-104 ou através de buscas em bancos de dados de sequên- cia padrões.
Uma outra possibilidade poderia ser o uso de um sinal de pro- cessamento (PS) inserido entre a seqüência de Npro (residual) e o amino- término da proteína de capsídeo. O PS leva a uma clivagem que gera uma proteína de capsídeo funcional. A configuração de tais estruturas poderia ser como segue:
[Npro]22-PS[C-term]
PS: Sinal de processamento. Pode ser um alvo para uma prote- ase (por exemplo, ubiquitina, LC3 conforme definido aqui ou uma protease ou um peptídeo instável que leva a processamento em seu próprio carbóxi- término tal como, por exemplo, Inteína (Chong e outros 1998 e referências no mesmo) ou 3C de picornavírus, 2A de cardiovírus ou aptovírus, p15 do vírus da doença hemorrágica de coelho ou a protease correspondente de outros calicivírus (Proter 1993 e referências no mesmo; Meyers e outros, 2000 e referências no mesmo). Quando usando um PS, um grande número de diferentes variantes é possível, uma vez que o PS assegura a geração do amino término correto da proteína C de capsídeo. Assim, quando usando uma estrutura de PS, espera-se que todos os tipos de deleções ou mutações da seqüência de Npro resulte em mutantes viáveis, na medida em que a rede de leitura não seja desviada ou a tradução cessada por um códon terminal em rede. Como um exemplo, nós estabelecemos um mutante com deleção de Npro de CSFV viável de acordo com a fórmula:
[Npro]29-PS[C-term]
Especialmente interessante poderiam ser mutações de Npro que bloqueiam a atividade proteolítica da proteína. Rumenapf e outros (1998) publicaram a identificação dos resíduos de sítio ativo da protease para CSFV Alfort Tubingen. Os respectivos aminoácidos (ácido glutâmico na posição 22, histidina na posição 49 e cisteína na posição 69) são conservados para ou- tros pestivírus. Assim, trocas de qualquer aminoácido, exceto quanto à seri- na ou treonina, por cisteína na posição 69 resultará em destruição da ativi- dade de protease. Similarmente, troca do ácido glutâmico na posição 22 mais provavelmente resultará em inativação da protease, a menos que o novo aminoácido seja ácido aspártico. Similarmente, a maioria, se não to- das, as trocas na posição 49 levará a uma protease inativa.
EXEMPLO 5
Preparo de vacinas combinadas de acordo com a invenção
Vacina A
IBR, BVDV tipos 1 e 2, BRSV
Cepas atenuadas de BVDV tipo 1 e 2, tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro, em que a refe- rida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns leva à inativação de atividade de RNase que reside em Ems e/ou a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro, são crescidas em células MDBK até uma TCID50 de cerca de 105,0 a 108,1 por ml de fluido de cultura de célula. Uma cepa viva atenuada de IBR é crescida em células MDBK até uma TCID5O de cerca de 105 0 a 108,6 por ml de fluido de cultura de célula. Uma cepa viva atenuada de BRSV é crescida em células MDBK até uma TCID50 de cerca de 105 ° a 107,2 por ml de fluido de cultura de célula. Cada fluido de cultura contendo vírus é coletado e liofilizado. Quantidades iguais dos antígenos Iiofilizados são misturadas. Para reconsti- tuição, uma solução aquosa contendo 1 a 3% : 0,8 ml de Alhydrogel é usa- da. Uma dose da vacina combinada contém 4 ml dos antígenos reconstituí- dos. Uma dose final inclui IBR (1050 a 108·6 TCID50), BVDV-1 (1050 a 108'1 TCID50), BVDV-2 (105 0 a 108·1 TCID50) e BRSV (1050 a 107,2 TCID50).
Vacina B
IBR, BVDV tipos 1 e 2. PI3 BRSV
O preparo dos antígenos IBR, BVDV 1 e 2 e BRSV é realizado conforme descrito para a vacina A. Além disso, uma cepa viva atenuada de PI3 é crescida sobre células MDBK até uma TCID50 de cerca de 104,2 a 106·5 por ml de fluido de cultura de célula. Após o que, o fluido de cultura contendo PI3 é coletado e liofilizado. Uma quantidade de 104·2 ao 106·5 (TCID50) do antígeno liofilizado é misturada com os antígenos Iiofilizados IBR1 BVDV ti- pos 1 e 2 e BRSV. A mistura é, então, reconstituída em 4 ml conforme des- crito para a Vacina A. Uma dose final inclui IBR (105,0 a 108·6 TCID50), BVDV- 1 (1050 a 108·1 TCID50), BVDV-2 (1050 a 108·1 TCID50), BRSV (1050 a 107·2 TCID50) e PI3 (104-2 a IO6 5TCID50). Vacina C
BVDV tipos 1 e 2, PI3. BRSV. Mannheimia (PasteureIIa) haemolvtica
Os vírus BVDV 1 e 2, BRSV e PI3 são crescidos conforme des- crito para as vacinas AeB. Após os fluidos de cultura serem coletados, os vírus são inativados e liofilizados. Mannheima (PasteureIIa) haemalytica é crescida até 108,0 a 10110 células por ml de cultura. As bactérias são inativa- das e o fluido de cultura é liofilizado ou congelado a seco. Uma quantidade de 108·0 a 1011,0 células bacterianas Iiofilizadas ou congeladas a seco é mis- turada com o antígeno BVDV liofilizado dos tipos 1 e 2 (cada um em uma quantidade de 105 0 a 108·1 TCID50), antígeno PI3 (107-3 a IO8-3TCID50) e an- tígeno BRSV (1050 a 107,2 TCID50). A suspensão reconstituída (5 ml por do- se) ainda contém 30 a 50 mg de Hidróxido de alumínio, 0,4 a 0,8 mg de Quil A (Saponina), 0,04 a 0,06 mg de timerfonato de sódio e vestígios de neomi- cina. As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (105° a 108,1 TCID50), BVDV-2 (1050 a 108-1 TCID50), PI3 (107'3 a IO8-3TCID50) BRSV (1050 a IO7-2TCID50) e Mannheima (PasteureIIa) haemalytica (1080 a 10110 célu- las).
Vacina D
BVDV tipos 1 e 2. IBR. BRSV, PI3, Leptospira canicola. Leptospira grippo, Leptospira hardio, Leptospira ponoma. Leptospora borgpetersenii hardio- bovis
Vírus vivos modificados de BVDV 1 e 2, BRSV, IBR e PI3 são crescidos conforme descrito para as vacinas AeB. Após os fluidos de cultu- ra serem coletados, os vírus são liofilizados. Leptospira canicola, Leptospira grippo, Leptospira hardjo, Leptospira ponoma, Leptospora borgpetersenii hardjo-bovis são separadamente cultivados até atingir 108° a 1011,0 células por ml de cultura. As culturas de bactérias são inativadas e os fluidos de cul- tura são Iiofilizados ou congelados a seco. Cada uma de 108,0 a 1011,0das células bacterianas Iiofilizadas ou congeladas a seco são reconstituídas com o BVDV modificado Iiofilizado dos tipos 1 e 2 (cada um em uma quantidade de 105 0 a 107 0 TCID50), PI3 vivo modificado (107-3 a IO8 3TCID50), BRSV vivo modificado (1050 a 1070 TCID50) e IBR vivo modificado (106-1 a 107·7 TCID50). A suspensão reconstituída (2 ml por dose) contém vestígios de neomicina como conservante. As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (1050 a IO70TCID50), BVDV-2 (1050 a IO70TCID50), PI3 (107-3 a IO83TCID50) BRSV (105·0 a IO70TCID50), PI3 (107·3 a IO8-3TCID50) e Leptospira canicola, Leptospira grippo, Leptospira hardjo, Leptospira ponoma e Leptospora borg- petersenii hardjo-bovis (cada um 108,0 a 1011° células).
Vacina E
BVDV tipos 1 e 2. IBR. BRSV. PI3 e H. somnus
Vírus vivos modificados de BVDV 1 e 2, BRSV, IBR e PI3 são crescidos conforme descrito para as vacinas AeB. Após os fluidos de cultu- ra serem coletados, os vírus são liofilizados. H. somnus é cultivado até obter 107,1 a 109'2 células por ml de cultura. A cultura de bactérias é inativada e o fluido de cultura é Iiofilizado ou congelado a seco. 107,1 a 109'2 das bactérias Iiofilizadas ou congeladas a seco são reconstituídos com o BVDV modificado Iiofilizado dos tipos 1 e 2 (cada um em uma quantidade de 105,0 a 1070 TCID50), PI3 vivo modificado (107-3 a IO83TCID50), BRSV vivo modificado (1050 a IO70TCID50) e IBR vivo modificado (106-1 a IO7-7TCID50). A suspen- são reconstituída (2 ml por dose) contém vestígios de neomicina como con- servante. As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (105 ° a IO70TCID50), BVDV-2 (1050 a IO70TCID50), PI3 (107·3 a IO8-3TCID50) BRSV (1050 a IO70TCID50), PI3 (107-3 a IO8-3TCID50) e H. somnus (107-1 a 109-2 células).
REFERÊNCIAS:
Os ensinamentos e conteúdos de todas as referências (artigos, patentes, partes de livro, apresentações e semelhantes) citados aqui, inclu- indo aqueles listados abaixo, são expressamente incorporados por referên- cia aqui.
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<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
<120> COMBINAÇÃO DE VACINA COMPREENDENDO UM VÍRUS DA DIARRÉIA VIRAL BOVINA ATENUADO
<130> Case 1/1947
<160> 12
<170> PatentIn versão 3.1
<210> 1
<211> 12332
<212> DNA
<213> Wildtyp BVDV: XIKE-A
<400> 1
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gctaggggga gtggtgaagg ccagcagaat 3300
atgctttctt ctcgtgacag gcgtagtggc 3360
cacattacca ctgattgtag cattgctagc 3420
tagcattgat gtaactgtag cagtagtatt 3480
agactacttt agatataaaa agtggcttca 354 0
tattataagg agcttaaaac atatcaacca 3600
ttggagacct ctagctctgg tccttttcta 3660
ggacattgac ttagcaggct tcctgctgca 3720
catgtgggca gactttttga ctctgatcat 3780
ttacttccta aagaacgtca ggacagacgt 3840
cagacagatc agttcagttt atgacatctg 3900
atcaaggcat aagagtggaa gcaggccaga 3960
aataagctgc atcagcagcc aatggcaagt 4020 ggtttacatt tcttacctaa tactggaaat tacatactat atgcacagga aaatcataga 4080
tgaggtgtca ggaggagcaa attttctatc aagactcata gcagccatca tagaattaaa 4140
ttgggccata gatgatgagg aatgtaaagg actgaagaaa ctgtatctct tgtcagggag 4200
agcgaagaat ttgatagtta aacataaggt aagaaatgaa gccgtccaca gatggtttgg 4260
tgaggaggaa atatacgggg cacccaaggt gatcactatc ataaaagcta gtaccctaag 4320
taaaaacagg cactgcataa tctgcacgat ctgtgaaggg aaagaatgga atggagccaa 4380
ctgcccaaag tgtggaagac aaggaaagcc cataacatgt ggaatgacac tcgcagactt 4440
tgaggagaaa cattacaaaa agatatttat aagagaagaa tcttcttgtc ctgtgccttt 4500
tgatccttct tgccattgta attattttcg ccacgatggg cctttcagga aagagtataa 4560
gggttacgtc caatacacag ccagaggaca actctttctg aggaacctac caattctagc 4620
gacgaagatg aagctattaa tggtgggaaa cctcggcgca gaaattggcg acctggaaca 4680
tctaggatgg gtactgagag ggccagccgt gtgcaaaaaa attaccaacc atgagaagtg 4740
ccacgtaaac atcatggata agctaactgc attttttgga atcatgccta gaggcacgac 4800
ccctagggca cctgtgaggt tccccacagc actactaaaa gtgagaaggg ggctagagac 4860
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tgaagagatg aaaggcaaca tgctcgtgtt cgcgccaact aggaacatgg cagtagaaac 5940 agctaagaaa ttgaaggcta agggatacaa agagaacttg agggtggtaa cctcgcaatc agagtcaggt gtgacattac cagacttaga gaagagggtg aggatttctt caaaaatgcc agtcacaatc ggagagcaag cccagcgcag gtactatagg agtcaagaaa cagcttcagg agcccagagg tacggaatag aagatggaat ctatgattgg agcctttacg aagaggacag caacctcctt atatcagaag acctgcctgc tcacccagaa cccatacaac tggcctataa cccaaagatc aaaaatggtg aggtgacaga aagaaaatta ggagaggacg tgccggcata agtggatctt ctgggtatgg attggccgga gagggcatta aaacaagtaa ctggcttatc attcggctac gtcgggtacc agacactttc ctatacactt gaagaccaca ggcttgagga tataaggacc gacggcaagg actcagagtt atatgtggac gcactggtag actactccaa tgaaaaggtc agagactccc agtctacgaa ggataagttt atacaatcac taacagagaa gggagttcac acggcactct acaaaagctt tgcaacttta gtggtaaaat ggttggcttt gcaagtagca gttgatctag tagtatatta tacagagacc caacaagagg ggaggaagtt aacatacaca tataaaacct ggaattacaa agcttacctc ccatatgcta caagtgcctt tgtggtcata ctcagttcta caatttacaa tgacggcttg ttaggtacag gcataagtgc ctcagtaggt atatctgtga tgctgggggt atctagtgaa cagaaaagaa ctttgctgat agcagcaaca gatgagctag tcaaagagaa agcagtccag accataggaa accccctaag
ctctggatac tattacagtg gggaaaaccc 6000 cccgtatgtg gtagtagcca ccaatgccat 6060 cacagttgta gacactggac taaagtgtga 6120 cttcattgta acaggactta agagaatggc 6180 gggtagagta ggaagagtca agccaggtag 6240 gtcaaaagat taccattacg acctactgca 6300 taatgtaaca aagtcattca gggagatgaa 6360 cttgatgata actcaactcg aggtccttaa 6420 cgcagtgaag aacatcatgg cccggaccga 6480 cagttatgaa aaccaaattc cagtgctgtt 6540 cagttatgag aattacacat atctcaatgc 6600 tgtgtacgcc acagaggatg aggatctagc 6660 cccaggcaac caacaggtgg tagagacagg 6720 cacagcagaa aacgccctct tgatagccct 6780 aaaaaggcac atacccatga ttactgacat 6840 cacaacccac ctccagtttg ccccaaacgc 6900 gaaggaatta gctgtgggag accttgataa 6960 acaagggatg aaattcatca aagtccaagc 7020 ggaaggcttg caaaccatta aggagtatgt 7080 taaggaggag atcatcaggt atggactatg 7140 ggcagcgaga ctggggcatg aaacagcttt 7200 tgggggcgaa acggtatctg ctcacatcaa 7260 tatcatcaac aaaccatctt ttcctggaga 7320 tgtggctagt ctttttatat ctgcactagc 7380 caatctgcaa cgggttgtcg aacctgcctt 7440 gaagttgttc acacccacaa gattagagag 7500 gacatacctc tctataagga agggtaagag 7560 agccatggag atcttaaacc aaaacccaat 7620 aggtgccatc gccgcccata atgcaataga 7680 gaaggtcttt gtaaaaaact tcttagacca 7740 ccctgaaaaa ataatcatgg ctctatttga 7800 actcatctac catctgtacg gggtgtacta 7860 taaggggtgg gaagcaaaag aactcgcaga gatcatgttt gaggcctttg agcttttagg gtcaggcaac tacatactgg acttaatctt caaaaaacta gtccttgggt gggctcctgc tgagagaata agcctacctc ataacaacta ctatgagatg aaggcaataa aaaatgttgc gtccttccta tgcaggaata gattagggag ctatgatgat aacttgatag aagtcaagcc ctattacaag ggagtaacag ctaagttaga caacaagtgg gaggtggacc acgctttcct aggttttaaa ggtgcatatt tgggtgaccg ttgtgcaact ataacgaaga actcagtaca cacatatgac ctaacaatct ctaaccttgt tttacaagaa agagagatcc ctaccgtgac caatgaagac ctggggacta tcaagcctgt cgaggagttg agtctccaac ccaccgtgag aacaggggag gctgaagtga tgacgacagg acctcagctg gaccaccagt caactaccct agggccagga gttaacccta accatttagc ttttgtccta atcatcggta acaaaggttc tatacggctg tacaaaggaa acaacccaag aatattgacg gttgctctaa aagagttgga ggggaccttt ctcaataggg aagctttaga gaaaaccaca acagcaatga tcaggaggtt agattgttc caagcggaag aacccctatt ccacctaatt ggcagtgtag atagtataaa taacacaaag atagtgaagg aagttggggc gagcacacaa gttacaaaaa aacagatgag aaagtgccct ccatgtagta aaatttcaaa tcaaggaaac tgggaacccc tcgggtgtgg tctcaagatc cacccttatg aggcttacct ttcgagggcc actgcaaaag aatccatcat 188 gaaaactgct ggccgcaact tattcacatt 7920 tatggactca gaaggaaaga taagaaactt 7980 caacttgcat aataaattaa acaaggggct 8040 acctttgagc tgtgattgga caccaagtga 8100 cttaagggta gaaaccaggt gtccttgtgg 8160 tggtaaattg acaaaagttg aagaaaaggg 8220 aggacctcca aacttcaaag taacaaagtt 8280 agtagctagg ctagaaggcc aggtggacct 8340 ctacaacaat gggaaagtac tgttagctac 8400 gaccagacta gtaaagaagc acacagggat 8460 accagaccat caagatcttg tcgatagaga 8520 gttcctaaaa atgaagaagg gttgcgcttt 8580 caggcttatt gaactagtcc ataagaataa 8640 agtaactact tggcttgcat attcttttgt 8700 attgggggag aaagtcatcc cagaaccccc 8760 actagtcacc actgaaacag caataaccat 8820 gatcacacca gtggtagaga tgaaagaaga 8880 aaaggtaggg ttgaaggaag gggaatatcc 8940 agaggtgata gatgagaaag atgacaggcc 9000 tacctcgaac agagcaagaa cggccaagaa 9060 agagatcagg gatctgatga gccaaggaag 9120 cccggaatta aaagaattag tagattacaa 9180 agccctaagc ttaggtaagc caatcaagag 9240 aatagagcca gaggttgagg aggaactacc 9300 tttggaagca aaaatacaga atgacttata 9360 aagcaaagca aaggaattag gggccacaga 9420 taggacctat acgatgaaat tgagcagctg 9480 tctagcccct ctctttgaag agctgttatt 9540 gggacatatg gtgtcagcat accaactggc 9600 ggtctatatg ggaaccatac cagctaggcg 9660 taaactcaaa gagctggtgg aagttgaatc 9720 aagagaacat aacacctgga tcctgcggaa 9780 ggtgagacat gaagggaacc taagaaccaa tcagctatgc agagatggac acaaaagaaa ggcctctgct ggtattaggc tggagaaact cagtttccac caagccataa gagaaaaaat attgcatgaa gaactaatga aggtcttcga gtatgatgaa gtttcatggg aacaattaga ctatctagag agcaagaaca taggggaagt gctgatcaag gatctgagga aggggaagaa gaatgagaag agagacgtca gcgacgactg accaagagta atccagtacc cggacgccaa caaatgggta aagcaaaaac cagtggtgat tgacatattc aacaaagtga agaaggaatg ctttgacacc aaagcgtggg atacacaagt tatccagaaa tattatttca agagaagtat catggtggag gtacctgtca ttacagcaga gggtagtggc caacccgaca caagtgctgg atatgctttc tgtaaaagta caggcatacc ccatgtgtgt ggtgatgatg gctttttgat tgagaagggt atgcagatat tacatgaggc caaaatgaaa gtggcataca gattcgagga agtcagatgg gcagataaca ccagtagtta agctaagatg gcaaccaggc tggattccag ggccgtagcc ttcagcttcc ttttgatgta cttactggtg ttgtcacagt ttccagaaat ccaaggggat cccatagctg cgtacagaga aagaacagga tttgagaagc tggctggtct gacaaaacat actagtaaaa gactaatcca tacctggtta gttaatgctg acagactgat aagcactggt gtcactctgt tgggaaaaca ggcacaaccg ccgatagagg gggttgacag cttgagaagg ctgagggtga tgctgatgac ggagcgtcgt gccctcactc aaggttttta
atcaatgatc aaccctggga aaatatcaga 9840 catatataat aagatcatag gctcaacaat 9900 gccagtagtc cgagcccaaa ctgacacaac 9960 tgataaaaca gaaaacaagc agacccctga 10020 ctgcttaaag atcccagagc tgaaggaatc 10080 agccgggata aaccgtaagg gtgcagcagg 10140 cctagacaca gagaaacaca tagtagagca 10200 gattaggtac tatgaaacag ccatccccaa 10260 ggaagccgga gagttcgttg atgaaaagaa 10320 ggtgagactg gccattacaa aagtgatgta 10380 acccggctat gaaggtaaaa cacctctatt 10440 ggattcattc caggaccccg tagcagtgag 10500 caccagtaga gacctaatgt tgataaagga 10560 acacaaattt ttagatacaa taacagaaca 10620 cggtgaagtt tacataagga atggtcagag 10680 taatagtatg ttgaatgtcc taaccatgat 10740 ttacagggga ttcagcagag tggcaagaat 10800 aacagagaga ggactgggac tgaaattctc 10860 cgggaagccc cagaaaataa ctgaagggga 10920 catagagttt tgttcccata ctcccgtgcc 10980 catggcaggg aggagcacag ccactatact 11040 cggagagagg ggtagcacag cttatgagaa 11100 ctcatggaat cccgtagtta gaaggatctg 11160 atccccatcc aaaaacacaa tatactacta 11220 agtgataggg aaacagctgt gtgaactgaa 11280 gaatttgagt atgaccactc taggcatctg 11340 agcctgtgta gaaataggta agagagaagg 11400 tgcaggaaag actgggaagt tttacatccc 11460 ctatgaggaa attaacttaa agcaaaaggc 11520 atataagttg ggccccatag ttaatgttat 11580 agttgccagc ggaagctggt gaatccgtcc 11640 attgtaaata ttgtaaatag acagctaaga 11700 tatttattgt agttggatag taatgcagtg atagtaaata ccccaattta acactacctc 11760 caatgcacta agcactttag ctgtgtgagg ttaactcgac gtccacggtt ggactaggga 11820 agacctctaa cagcccc 11837
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<211> 3913
<212> PRT
<213> Wildtyp BVDV: XIKE-A
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Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr Tyr Lys Gln Lys 1 5 10 15
Pro Ala Gly Val Val Glu Pro Val Tyr Asp Val Asn Gly Arg Pro Leu
20 25 30
Phe Gly Glu Ser Ser Asp Leu His Pro Gln Ser Thr Leu Lys Leu Pro 35 40 45
His Gln Arg Gly Ser Ala Asn Ile Leu Thr Asn Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
Arg Lys Gly Asp Cys Arg Arg Gly Asn Val Tyr Gly Pro Val Ser Gly 65 70 75 80
Ile Tyr Ile Lys Pro Gly Pro Ile Tyr Tyr Gln Asp Tyr Val Gly Pro 85 90 95
Val Tyr His Arg Ala Pro Leu Glu Leu Cys Arg Glu Ala Ser Met Cys
100 105 110
Glu Thr Thr Arg Arg Val Gly Arg Val Thr Gly Ser Asp Gly Lys Leu 115 120 125
Tyr His Ile Tyr Ile Cys Ile Asp Gly Cys Ile Leu Leu Lys Arg Ala 130 135 140
Thr Arg Asn Gln Pro Glu Val Leu Lys Trp Val Tyr Asn Arg Leu Asn 145 150 155 160
Cys Pro Leu Trp Val Thr Ser Cys Ser Asp Glu Gly Ser Lys Gly Ala 165 170 175
Thr Ser Lys Lys Gln Pro Lys Pro Asp Arg Ile Glu Lys Gly Lys Met 180 185 190 Lys Ile Ala Pro Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Lys Thr Arg Pro Pro
195 200 205
Asp Ala Thr Ile Val Val Glu Gly Val Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys
210 215 220
Gly Lys Val Arg Gly Lys Asn Thr Gln Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys 225 230 235 240
Asn Lys Pro Pro Glu Ser Arg Lys Lys Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala
245 250 255
Trp Ala Ile Leu Ala Ala Val Leu Leu Gln Leu Val Thr Gly Glu Asn
260 265 270
Ile Thr Gln Trp Asn Leu Met Asp Asn Gly Thr Glu Gly Ile Gln Gln
275 280 285
Ala Met Phe Leu Arg Gly Val Asn Arg Ser Leu His Gly Ile Trp Pro
290 295 300
Glu Lys Ile Cys Thr Gly Val Pro Thr His Leu Ala Thr Asp Tyr Glu 305 310 315 320
Leu Lys Glu Ile Val Gly Met Met Asp Ala Ser Glu Lys Thr Asn Tyr
325 330 335
Thr Cys Cys Arg Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys
340 345 350
Asn Trp Phe His Ile Glu Pro Trp Ile Trp Leu Met Asn Lys Thr Gln
355 360 365
Asn Asn Leu Thr Glu Gly Gln Pro Leu Arg Glu Cys Ala Val Thr Cys
370 375 380
Arg Tyr Asp Lys Glu Thr Glu Leu Asn Ile Val Thr Gln Ala Arg Asp 385 390 395 400
Arg Pro Thr Thr Leu Thr Gly Cys Lys Lys Gly Lys Asn Phe Ser Phe
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450 455 460
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485 490 495
Ala Ala Ser Pro Tyr Cys Gly Val Glu Arg Lys Ile Gly Tyr Val Trp
500 505 510
Tyr Thr Lys Asn Cys Thr Pro Ala Cys Leu Pro Arg Asn Thr Arg Ile
515 520 525
Ile Gly Pro Gly Lys Phe Asp Thr Asn Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu
530 535 540
His Glu Met Gly Gly His Leu Ser Glu Phe Val Leu Leu Ser Leu Val 545 550 555 560
Val Leu Ser Asp Phe Ala Pro Glu Thr Ala Ser Val Ile Tyr Leu Val
565 570 575
Leu His Phe Ala Ile Pro Gln Ser His Val Asp Val Asp Thr Cys Asp
580 585 590
Lys Asn Gln Leu Asn Leu Thr Val Ala Thr Thr Val Ala Glu Val Ile
595 600 605
Pro Gly Thr Val Trp Asn Leu Gly Lys Tyr Val Cys Ile Arg Pro Asp
610 615 620
Trp Trp Pro Tyr Glu Thr Thr Thr Val Phe Val Ile Glu Glu Ala Gly 625 630 635 640
Gln Val Ile Lys Leu Met Leu Arg Ala Ile Arg Asp Leu Thr Arg Ile
645 650 655
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Leu Arg Gly Gln Leu Ile Gln Gly Leu Leu Trp Leu Met Leu Ile Thr
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Thr Gly Asp His Ser Arg Leu Lys Asp Gly Pro Ile Lys Lys Cys Lys
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Trp Cys Gly His Asp Phe Val Asn Ser Glu Gly Leu Pro His Tyr Pro
900 905 910
Ile Gly Lys Cys Met Leu Ile Asn Glu Ser Gly Tyr Arg Tyr Val Asp
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Asp Thr Ser Cys Asp Arg Gly Gly Val Ala Ile Val Pro Ser Gly Thr
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Val Lys Cys Arg Ile Gly Asn Val Thr Val Gln Val Ile Ala Thr Asn 945 950 955 960 Asn Asp Leu Gly Pro Met Pro Cys Ser Pro Ala Glu Val Ile Ala Ser
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Leu Pro Asn Lys Tyr Tyr Glu Pro Arg Asp Arg Tyr Phe Gln Gln Tyr
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Met Leu Lys Gly Glu Trp Gln Tyr Trp Phe Asp Leu Asp Ser Val
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Asp His His Lys Asp Tyr Phe Ser Glu Phe Ile Ile Ile Ala Val
1025 1030 1035
Val Ala Leu Leu Gly Gly Lys Tyr Val Leu Trp Leu Leu Ile Thr
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Tyr Thr Ile Leu Ser Glu Gln Met Ala Met Gly Ala Gly Val Asn
1055 1060 1065
Thr Glu Glu Ile Val Met Ile Gly Asn Leu Leu Thr Asp Ser Asp
1070 1075 1080
Ile Glu Val Val Val Tyr Phe Leu Leu Leu Tyr Leu Ile Val Lys
1085 1090 1095
Glu Glu Leu Ala Arg Lys Trp Ile Ile Leu Val Tyr His Ile Leu
1100 1105 1110
Val Ala Asn Pro Met Lys Thr Ile Gly Val Val Leu Leu Met Leu
1115 1120 1125
Gly Gly Val Val Lys Ala Ser Arg Ile Asn Ala Asp Asp Gln Ser
1130 1135 1140
Ala Met Asp Pro Cys Phe Leu Leu Val Thr Gly Val Val Ala Val
1145 1150 1155
Leu Met Ile Ala Arg Arg Glu Pro Ala Thr Leu Pro Leu Ile Val
1160 1165 1170
Ala Leu Leu Ala Ile Arg Thr Ser Gly Phe Leu Leu Pro Ala Ser
1175 1180 1185
Ile Asp Val Thr Val Ala Val Val Leu Ile Val Leu Leu Leu Ala 1190 1195 1200 Ser Tyr Ile Thr Asp Tyx Phe Arg Tyr Lys Lys Trp Leu Gln Leu
1205 1210 1215
Leu Phe Ser Leu Ile Ala Gly Ile Phe Ile Ile Arg Ser Leu Lys
1220 1225 1230
His Ile Asn Gln Met Glu Val Pro Glu Ile Ser Met Pro Ser Trp
1235 1240 1245
Arg Pro Leu Ala Leu Val Leu Phe Tyr Ile Thr Ser Thr Ala Ile
1250 1255 1260
Thr Thr Asn Trp Asp Ile Asp Leu Ala Gly Phe Leu Leu Gln Trp
1265 1270 1275
Ala Pro Ala Val Ile Met Met Ala Thr Met Trp Ala Asp Phe Leu
1280 1285 1290
Thr Leu Ile Ile Val Leu Pro Ser Tyr Glu Leu Ser Lys Leu Tyr
1295 1300 1305
Phe Leu Lys Asn Val Arg Thr Asp Val Glu Lys Asn Trp Leu Gly
1310 1315 1320
Lys Val Lys Tyr Arg Gln Ile Ser Ser Val Tyr Asp Ile Cys Asp
1325 1330 1335
Ser Glu Glu Ala Val Tyr Leu Phe Pro Ser Arg His Lys Ser Gly
1340 1345 1350
Ser Arg Pro Asp Phe Ile Leu Pro Phe Leu Lys Ala Val Leu Ile
1355 1360 1365
Ser Cys Ile Ser Ser Gln Trp Gln Val Val Tyr Ile Ser Tyr Leu
1370 1375 1380
Ile Leu Glu Ile Thr Tyr Tyr Met His Arg Lys Ile Ile Asp Glu
1385 1390 1395
Val Ser Gly Gly Ala Asn Phe Leu Ser Arg Leu Ile Ala Ala Ile
1400 1405 1410
Ile Glu Leu Asn Trp Ala Ile Asp Asp Glu Glu Cys Lys Gly Leu
1415 1420 1425
Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Ser Gly Arg Ala Lys Asn Leu Ile Val 1430 1435 1440 Lys His Lys Val Arg Asn Glu Ala Val His Arg Trp Phe Gly Glu 1445 1450 1455
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Lys Leu Thr Ala Phe Phe Gly Ile Met Pro Arg Gly Thr Thr Pro 1625 1630 1635
Arg Ala Pro Val Arg Phe Pro Thr Ala Leu Leu Lys Val Arg Arg 1640 1645 1650
Gly Leu Glu Thr Gly Trp Ala Tyr Thr His Gln Gly Gly Ile Ser 1655 1660 1665
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1685 1690 1695
Thr Asp Glu Thr Glu Tyr Gly Ile Lys Thr Asp Ser Gly Cys Pro
1700 1705 1710
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1715 1720 1725
Ser Gly Thr Lys Gly Ala Met Val His Leu Gln Lys Thr Gly Gly
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Glu Phe Thr Cys Val Thr Ala Ser Gly Thr Pro Ala Phe Phe Asp
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Leu Lys Asn Leu Lys Gly Trp Ser Gly Leu Pro Ile Phe Glu Ala
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Ser Ser Gly Arg Val Val Gly Arg Val Lys Val Gly Lys Asn Glu
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Lys Asn Gln Thr Asp Leu Ala Asp Ile Val Lys Lys Leu Thr Ser
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1820 1825 1830
Gly Lys Thr Thr Glu Leu Pro Arg Ser Val Ile Glu Glu Ile Gly
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<212> PRT
<213> Seqüência artificial: BVDV mutado: XIKE-A-NdN
<400> 6
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Asp Leu Lys Asn Leu Lys Gly Trp Ser Gly Leu Pro Ile Phe Glu
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Ala Ser Ser Gly Arg Val Val Gly Arg Val Lys Val Gly Lys Asn
1610 1615 1620
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Ser Lys Asn Gln Thr Asp Leu Ala Asp Ile Val Lys Lys Leu Thr
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Ser Met Asn Arg Gly Glu Phe Lys Gln Ile Thr Leu Ala Thr Gly
1655 1660 1665
Ala Gly Lys Thr Thr Glu Leu Pro Arg Ser Val Ile Glu Glu Ile
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Gly Arg His Lys Arg Val Leu Val Leu Ile Pro Leu Arg Ala Ala
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Ser Phe Asn Leu Arg Ile Gly Asp Met Lys Glu Gly Asp Met Ala
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Thr Gly Ile Thr Tyr Ala Ser Tyr Gly Tyr Phe Cys Gln Leu Pro
1730 1735 1740
Gln Pro Lys Leu Arg Ala Ala Met Val Glu Tyr Ser Tyr Ile Phe
1745 1750 1755
Leu Asp Glu Tyr His Cys Ala Thr Pro Glu Gln Leu Ala Ile Ile
1760 1765 1770
Gly Lys Ile His Arg Phe Ala Glu Asn Leu Arg Val Val Ala Met
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Thr Ala Thr Pro Ala Gly Thr Val Thr Thr Thr Gly Gln Lys His
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1820 1825 1830
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Tyr Asp Leu Leu Gln Ala Gln Arg Tyr Gly Ile Glu Asp Gly Ile
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1985 1990 1995
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2015 2020 2025
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<211> 3912
<212> PRT
<213> Seqüência artificial: BVDV mutado: XIKE-B
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Val Pro Phe Asp Pro Ser Cys His Cys Asn Tyr Phe Arg His Asp
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Gly Pro Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Gly Tyr Val Gln Tyr Thr Ala
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Arg Gly Gln Leu Phe Leu Arg Asn Leu Pro Ile Leu Ala Thr Lys
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Met Lys Leu Leu Met Val Gly Asn Leu Gly Ala Glu Ile Gly Asp
1580 1585 1590
Leu Glu His Leu Gly Trp Val Leu Arg Gly Pro Ala Val Cys Lys
1595 1600 1605
Lys Ile Thr Asn His Glu Lys Cys His Val Asn Ile Met Asp Lys
1610 1615 1620
Leu Thr Ala Phe Phe Gly Ile Met Pro Arg Gly Thr Thr Pro Arg
1625 1630 1635
Ala Pro Val Arg Phe Pro Thr Ala Leu Leu Lys Val Arg Arg Gly
1640 1645 1650
Leu Glu Thr Gly Trp Ala Tyr Thr His Gln Gly Gly Ile Ser Ser
1655 1660 1665
Val Asp His Val Thr Ala Gly Lys Asp Leu Leu Val Cys Asp Ser
1670 1675 1680
Met Gly Arg Thr Arg Val Val Cys His Ser Asn Asn Lys Met Thr
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Gly Ala Arg Cys Tyr Val Leu Asn Pro Glu Ala Val Asn Ile Ser
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Lys Asn Leu Lys Gly Trp Ser Gly Leu Pro Ile Phe Glu Ala Ser
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Ser Gly Arg Val Val Gly Arg Val Lys Val Gly Lys Asn Glu Asp
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Ser Lys Pro Thr Lys Leu Met Ser Gly Ile Gln Thr Val Ser Lys
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Asn Gln Thr Asp Leu Ala Asp Ile Val Lys Lys Leu Thr Ser Met
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Asn Arg Gly Glu Phe Lys Gln Ile Thr Leu Ala Thr Gly Ala Gly
1820 1825 1830
Lys Thr Thr Glu Leu Pro Arg Ser Val Ile Glu Glu Ile Gly Arg
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His Lys Arg Val Leu Val Leu Ile Pro Leu Arg Ala Ala Ala Glu
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Ser Val Tyr Gln Tyr Met Arg Val Lys Tyr Pro Ser Ile Ser Phe
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Asn Leu Arg Ile Gly Asp Met Lys Glu Gly Asp Met Ala Thr Gly
1880 1885 1890
Ile Thr Tyr Ala Ser Tyr Gly Tyr Phe Cys Gln Leu Pro Gln Pro
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Lys Leu Arg Ala Ala Met Val Glu Tyr Ser Tyr Ile Phe Leu Asp
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Glu Tyr His Cys Ala Thr Pro Glu Gln Leu Ala Ile Ile Gly Lys
1925 1930 1935
Ile His Arg Phe Ala Glu Asn Leu Arg Val Val Ala Met Thr Ala
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Thr Pro Ala Gly Thr Val Thr Thr Thr Gly Gln Lys His Pro Ile
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1985 1990 1995
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2015 2020 2025
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Gly Lys Ser Asp Gly Leu Leu Gly Thr Gly Ile Ser Ala Ala Met
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3725 3730 3735
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3740 3745 3750
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3905 3910
<210> 8 <211> 3748
<212> PRT
<213> Seqüência artificial: BVDV mutado: XIKE-B-NdN
<400> 8
Met Glu Leu Phe Ser Asp Glu Gly Ser Lys Gly Ala Thr Ser Lys Lys 15 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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100 105 110
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165 170 175
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210 215 220
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245 250 255
Asp Gly Pro Cys Asn Phe Lys Val Ser Val Glu Asp Val Leu Phe Lys
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Phe Asp Thr Asn Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu His Glu Met Gly Gly
370 375 380
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420 425 430
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725 730 735
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740 745 750
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770 775 780
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820 825 830
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850 855 860
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885 890 895
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900 905 910
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915 920 925
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1010 1015 1020
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Gln Gly Lys Pro Ile Thr Cys Gly Met Thr Leu Ala Asp Phe Glu
1340 1345 1350
Glu Lys His Tyr Lys Lys Ile Phe Ile Arg Glu Glu Ser Ser Cys
1355 1360 1365
Pro Val Pro Phe Asp Pro Ser Cys His Cys Asn Tyr Phe Arg His
1370 1375 1380
Asp Gly Pro Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Gly Tyr Val Gln Tyr Thr
1385 1390 1395
Ala Arg Gly Gln Leu Phe Leu Arg Asn Leu Pro Ile Leu Ala Thr
1400 1405 1410
Lys Met Lys Leu Leu Met Val Gly Asn Leu Gly Ala Glu Ile Gly
1415 1420 1425
Asp Leu Glu His Leu Gly Trp Val Leu Arg Gly Pro Ala Val Cys
1430 1435 1440
Lys Lys Ile Thr Asn His Glu Lys Cys His Val Asn Ile Met Asp 1445 1450 1455
Lys Leu Thr Ala Phe Phe Gly Ile Met Pro Arg Gly Thr Thr Pro
1460 1465 1470
Arg Ala Pro Val Arg Phe Pro Thr Ala Leu Leu Lys Val Arg Arg
1475 1480 1485
Gly Leu Glu Thr Gly Trp Ala Tyr Thr His Gln Gly Gly Ile Ser
1490 1495 1500
Ser Val Asp His Val Thr Ala Gly Lys Asp Leu Leu Val Cys Asp
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Ser Met Gly Arg Thr Arg Val Val Cys His Ser Asn Asn Lys Met
1520 1525 1530
Thr Asp Glu Thr Glu Tyr Gly Ile Lys Thr Asp Ser Gly Cys Pro
1535 1540 1545
Glu Gly Ala Arg Cys Tyr Val Leu Asn Pro Glu Ala Val Asn Ile
1550 1555 1560
Ser Gly Thr Lys Gly Ala Met Val His Leu Gln Lys Thr Gly Gly
1565 1570 1575
Glu Phe Thr Cys Val Thr Ala Ser Gly Thr Pro Ala Phe Phe Asp
1580 1585 1590
Leu Lys Asn Leu Lys Gly Trp Ser Gly Leu Pro Ile Phe Glu Ala
1595 1600 1605
Ser Ser Gly Arg Val Val Gly Arg Val Lys Val Gly Lys Asn Glu
1610 1615 1620
Asp Ser Lys Pro Thr Lys Leu Met Ser Gly Ile Gln Thr Val Ser
1625 1630 1635
Lys Asn Gln Thr Asp Leu Ala Asp Ile Val Lys Lys Leu Thr Ser
1640 1645 1650
Met Asn Arg Gly Glu Phe Lys Gln Ile Thr Leu Ala Thr Gly Ala
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Gly Lys Thr Thr Glu Leu Pro Arg Ser Val Ile Glu Glu Ile Gly
1670 1675 1680
Arg His Lys Arg Val Leu Val Leu Ile Pro Leu Arg Ala Ala Ala 1685 1690 1695
Glu Ser Val Tyr Gln Tyr Met Arg Val Lys Tyr Pro Ser Ile Ser
1700 1705 1710
Phe Asn Leu Arg Ile Gly Asp Met Lys Glu Gly Asp Met Ala Thr
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Gly Ile Thr Tyr Ala Ser Tyr Gly Tyr Phe Cys Gln Leu Pro Gln
1730 1735 1740
Pro Lys Leu Arg Ala Ala Met Val Glu Tyr Ser Tyr Ile Phe Leu
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Asp Glu Tyr His Cys Ala Thr Pro Glu Gln Leu Ala Ile Ile Gly
1760 1765 1770
Lys Ile His Arg Phe Ala Glu Asn Leu Arg Val Val Ala Met Thr
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Ala Thr Pro Ala Gly Thr Val Thr Thr Thr Gly Gln Lys His Pro
1790 1795 1800
Ile Glu Glu Phe Ile Ala Pro Glu Val Met Lys Gly Glu Asp Leu
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Gly Ser Glu Tyr Leu Asp Ile Ala Gly Leu Lys Ile Pro Thr Glu
1820 1825 1830
Glu Met Lys Gly Asn Met Leu Val Phe Ala Pro Thr Arg Asn Met
1835 1840 1845
Ala Val Glu Thr Ala Lys Lys Leu Lys Ala Lys Gly Tyr Asn Ser
1850 1855 1860
Gly Tyr Tyr Tyr Ser Gly Glu Asn Pro Glu Asn Leu Arg Val Val
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Thr Ser Gln Ser Pro Tyr Val Val Val Ala Thr Asn Ala Ile Glu
1880 1885 1890
Ser Gly Val Thr Leu Pro Asp Leu Asp Thr Val Val Asp Thr Gly
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Leu Lys Cys Glu Lys Arg Val Arg Ile Ser Ser Lys Met Pro Phe
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Ile Val Thr Gly Leu Lys Arg Met Ala Val Thr Ile Gly Glu Gln 1925 1930 1935
Ala Gln Arg Arg Gly Arg Val Gly Arg Val Lys Pro Gly Arg Tyr
1940 1945 1950
Tyr Arg Ser Gln Glu Thr Ala Ser Gly Ser Lys Asp Tyr His Tyr
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Asp Leu Leu Gln Ala Gln Arg Tyr Gly Ile Glu Asp Gly Ile Asn
1970 1975 1980
Val Thr Lys Ser Phe Arg Glu Met Asn Tyr Asp Trp Ser Leu Tyr
1985 1990 1995
Glu Glu Asp Ser Leu Met Ile Thr Gln Leu Glu Val Leu Asn Asn
2000 2005 2010
Leu Leu Ile Ser Glu Asp Leu Pro Ala Ala Val Lys Asn Ile Met
2015 2020 2025
Ala Arg Thr Asp His Pro Glu Pro Ile Gln Leu Ala Tyr Asn Ser
2030 2035 2040
Tyr Glu Asn Gln Ile Pro Val Leu Phe Pro Lys Ile Lys Asn Gly
2045 2050 2055
Glu Val Thr Asp Ser Tyr Glu Asn Tyr Thr Tyr Leu Asn Ala Arg
2060 2065 2070
Lys Leu Gly Glu Asp Val Pro Ala Tyr Val Tyr Ala Thr Glu Asp
2075 2080 2085
Glu Asp Leu Ala Val Asp Leu Leu Gly Met Asp Trp Pro Asp Pro
2090 2095 2100
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Gly Tyr Val Gly Tyr Gln Thr Leu Ser Lys Arg His Ile Pro Met
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2150 2155 2160
Thr His Leu Gln Phe Ala Pro Asn Ala Ile Arg Thr Asp Gly Lys 2165 2170 2175
Asp Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ala Val Gly Asp Leu Asp Lys Tyr
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Val Asp Ala Leu Val Asp Tyr Ser Lys Gln Gly Met Lys Phe Ile
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Lys Val Gln Ala Glu Lys Val Arg Asp Ser Gln Ser Thr Lys Glu
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Gly Leu Gln Thr Ile Lys Glu Tyr Val Asp Lys Phe Ile Gln Ser
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Leu Thr Glu Asn Lys Glu Glu Ile Ile Arg Tyr Gly Leu Trp Gly
2240 2245 2250
Val His Thr Ala Leu Tyr Lys Ser Leu Ala Ala Arg Leu Gly His
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Glu Thr Ala Phe Ala Thr Leu Val Val Lys Trp Leu Ala Phe Gly
2270 2275 2280
Gly Glu Thr Val Ser Ala His Ile Lys Gln Val Ala Val Asp Leu
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Val Val Tyr Tyr Ile Ile Asn Lys Pro Ser Phe Pro Gly Asp Thr
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Glu Thr Gln Gln Glu Gly Arg Arg Phe Val Ala Ser Leu Phe Ile
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Ser Ala Leu Ala Thr Tyr Thr Tyr Lys Thr Trp Asn Tyr Asn Asn
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Leu Gln Arg Val Val Glu Pro Ala Leu Ala Tyr Leu Pro Tyr Ala
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Thr Ser Ala Leu Lys Leu Phe Thr Pro Thr Arg Leu Glu Ser Val
2360 2365 2370
Val Ile Leu Ser Ser Thr Ile Tyr Lys Thr Tyr Leu Ser Ile Arg
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Lys Gly Lys Ser Asp Gly Leu Leu Gly Thr Gly Ile Ser Ala Ala
2390 2395 2400
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Met Leu Gly Val Gly Ala Ile Ala Ala His Asn Ala Ile Glu Ser
2420 2425 2430
Ser Glu Gln Lys Arg Thr Leu Leu Met Lys Val Phe Val Lys Asn
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Phe Leu Asp Gln Ala Ala Thr Asp Glu Leu Val Lys Glu Asn Pro
2450 2455 2460
Glu Lys Ile Ile Met Ala Leu Phe Glu Ala Val Gln Thr Ile Gly
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Asn Pro Leu Arg Leu Ile Tyr His Leu Tyr Gly Val Tyr Tyr Lys
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Gly Trp Glu Ala Lys Glu Leu Ala Glu Lys Thr Ala Gly Arg Asn
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Leu Phe Thr Leu Ile Met Phe Glu Ala Phe Glu Leu Leu Gly Met
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Asp Leu Ile Phe Asn Leu His Asn Lys Leu Asn Lys Gly Leu Lys
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Lys Leu Val Leu Gly Trp Ala Pro Ala Pro Leu Ser Cys Asp Trp
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Asn Asp Leu Tyr His Leu Ile Gly Ser Val Asp Ser Ile Lys Ser
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Ile Lys Asp Leu Arg Lys Gly Lys Lys Ile Arg Tyr Tyr Glu Thr
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Thr Pro Leu Phe Asp Ile Phe Asn Lys Val Lys Lys Glu Trp Asp
3350 3355 3360
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3380 3385 3390
Gln Lys Tyr Tyr Phe Lys Arg Ser Ile His Lys Phe Leu Asp Thr
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Ile Thr Glu His Met Val Glu Val Pro Val Ile Thr Ala Asp Gly
3410 3415 3420
Glu Val Tyr Ile Arg Asn Gly Gln Arg Gly Ser Gly Gln Pro Asp
3425 3430 3435
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3440 3445 3450
Ala Phe Cys Lys Ser Thr Gly Ile Pro Tyr Arg Gly Phe Ser Arg
3455 3460 3465
Val Ala Arg Ile His Val Cys Gly Asp Asp Gly Phe Leu Ile Thr
3470 3475 3480
Glu Arg Gly Leu Gly Leu Lys Phe Ser Glu Lys Gly Met Gln Ile
3485 3490 3495
Leu His Glu Ala Gly Lys Pro Gln Lys Ile Thr Glu Gly Asp Lys
3500 3505 3510
Met Lys Val Ala Tyr Arg Phe Glu Asp Ile Glu Phe Cys Ser His
3515 3520 3525
Thr Pro Val Pro Val Arg Trp Ala Asp Asn Thr Ser Ser Tyr Met
3530 3535 3540
Ala Gly Arg Ser Thr Ala Thr Ile Leu Ala Lys Met Ala Thr Arg
3545 3550 3555
Leu Asp Ser Ser Gly Glu Arg Gly Ser Thr Ala Tyr Glu Lys Ala
3560 3565 3570
Val Ala Phe Ser Phe Leu Leu Met Tyr Ser Trp Asn Pro Val Val
3575 3580 3585
Arg Arg Ile Cys Leu Leu Val Leu Ser Gln Phe Pro Glu Ile Ser
3590 3595 3600
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Ala Tyr Arg Glu Val Ile Gly Lys Gln Leu Cys Glu Leu Lys Arg
3620 3625 3630
Thr Gly Phe Glu Lys Leu Ala Gly Leu Asn Leu Ser Met Thr Thr
3635 3640 3645
Leu Gly Ile Trp Thr Lys His Thr Ser Lys Arg Leu Ile Gln Ala
3650 3655 3660
Cys Val Glu Ile Gly Lys Arg Glu Gly Thr Trp Leu Val Asn Ala
3665 3670 3675
Asp Arg Leu Ile Ala Gly Lys Thr Gly Lys Phe Tyr Ile Pro Ser
3680 3685 3690
Thr Gly Val Thr Leu Leu Gly Lys His Tyr Glu Glu Ile Asn Leu
3695 3700 3705
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3710 3715 3720
Lys Leu Gly Pro Ile Val Asn Val Ile Leu Arg Arg Leu Arg Val
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Met Leu Met Thr Val Ala Ser Gly Ser Trp
3740 3745
<210> 9
<211> 3913
<212> PRT
<213> Seqüência artificial:Seqüência XIKE-C BVDV
<400> 9
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr Tyr Lys Gln Lys 1 5 10 15
Pro Ala Gly Val Val Glu Pro Val Tyr Asp Val Asn Gly Arg Pro Leu
20 25 30
Phe Gly Glu Ser Ser Asp Leu His Pro Gln Ser Thr Leu Lys Leu Pro
35 40 45
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Ile Tyr Ile Lys Pro Gly Pro Ile Tyr Tyr Gln Asp Tyr Val Gly Pro
85 90 95
Val Tyr His Arg Ala Pro Leu Glu Leu Cys Arg Glu Ala Ser Met Cys
100 105 110
Glu Thr Thr Arg Arg Val Gly Arg Val Thr Gly Ser Asp Gly Lys Leu
115 120 125
Tyr His Ile Tyr Ile Cys Ile Asp Gly Cys Ile Leu Leu Lys Arg Ala
130 135 140
Thr Arg Asn Gln Pro Glu Val Leu Lys Trp Val Tyr Asn Arg Leu Asn 145 150 155 160
Cys Pro Leu Trp Val Thr Ser Cys Ser Asp Glu Gly Ser Lys Gly Ala
165 170 175
Thr Ser Lys Lys Gln Pro Lys Pro Asp Arg Ile Glu Lys Gly Lys Met
180 185 190
Lys Ile Ala Pro Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Lys Thr Arg Pro Pro
195 200 205
Asp Ala Thr Ile Val Val Glu Gly Val Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys
210 215 220
Gly Lys Val Arg Gly Lys Asn Thr Gln Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys 225 230 235 240
Asn Lys Pro Pro Glu Ser Arg Lys Lys Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala
245 250 255
Trp Ala Ile Leu Ala Ala Val Leu Leu Gln Leu Val Thr Gly Glu Asn
260 265 270
Ile Thr Gln Trp Asn Leu Met Asp Asn Gly Thr Glu Gly Ile Gln Gln
275 280 285
Ala Met Phe Leu Arg Gly Val Asn Arg Ser Leu Leu Gly Ile Trp Pro
290 295 300
Glu Lys Ile Cys Thr Gly Val Pro Thr His Leu Ala Thr Asp Tyr Glu 305 310 315 320 Leu Lys Glu Ile Val Gly Met Met Asp Ala Ser Glu Lys Thr Asn Tyr
325 330 335
Thr Cys Cys Arg Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys
340 345 350
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355 360 365
Asn Asn Leu Thr Glu Gly Gln Pro Leu Arg Glu Cys Ala Val Thr Cys
370 375 380
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Arg Pro Thr Thr Leu Thr Gly Cys Lys Lys Gly Lys Asn Phe Ser Phe
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420 425 430
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435 440 445
Ala Ile Gln Leu Leu Asp Gly Ala Thr Asn Thr Ile Glu Gly Ala Arg
450 455 460
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485 490 495
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515 520 525
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530 535 540
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580 585 590
Lys Asn Gln Leu Asn Leu Thr Val Ala Thr Thr Val Ala Glu Val Ile
595 600 605
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610 615 620
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645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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690 695 700
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Thr Trp His Leu Pro Thr Lys Lys Ile Val Asp Ser Met Val His Val
725 730 735
Trp Cys Glu Gly Lys Asp Leu Lys Ile Leu Lys Met Cys Thr Lys Glu
740 745 750
Glu Arg Tyr Leu Val Ala Val His Glu Arg Ala Leu Ser Thr Ser Ala
755 760 765
Glu Phe Met Gln Ile Ser Asp Gly Thr Ile Gly Pro Asp Val Ile Asp
770 775 780
Met Pro Asp Asp Phe Glu Phe Gly Leu Cys Pro Cys Asp Ser Lys Pro 785 790 795 800
Val Ile Lys Gly Lys Phe Asn Ala Ser Leu Leu Asn Gly Pro Ala Phe
805 810 815
Gln Met Val Cys Pro Gln Gly Trp Thr Gly Thr Ile Glu Cys Thr Leu 820 825 830 Ala Asn Gln Asp Thr Leu Asp Thr Thr Val Ile Arg Thr Tyr Arg Arg
835 840 845
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850 855 860
Gly Glu Asp Ile Tyr Glu Cys Ile Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Ile 865 870 875 880
Thr Gly Asp His Ser Arg Leu Lys Asp Gly Pro Ile Lys Lys Cys Lys
885 890 895
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900 905 910
Ile Gly Lys Cys Met Leu Ile Asn Glu Ser Gly Tyr Arg Tyr Val Asp
915 920 925
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930 935 940
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965 970 975
Glu Gly Pro Val Glu Lys Thr Ala Cys Thr Phe Asn Tyr Ser Arg Thr
980 985 990
Leu Pro Asn Lys Tyr Tyr Glu Pro Arg Asp Arg Tyr Phe Gln Gln Tyr
995 1000 1005
Met Leu Lys Gly Glu Trp Gln Tyr Trp Phe Asp Leu Asp Ser Val
1010 1015 1020
Asp His His Lys Asp Tyr Phe Ser Glu Phe Ile Ile Ile Ala Val
1025 1030 1035
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1055 1060 1065
Thr Glu Glu Ile Val Met Ile Gly Asn Leu Leu Thr Asp Ser Asp 1070 1075 1080 Ile Glu Val Val Val Tyr Phe Leu Leu Leu Tyr Leu Ile Val Lys
1085 1090 1095
Glu Glu Leu Ala Arg Lys Trp Ile Ile Leu Val Tyr His Ile Leu
1100 1105 1110
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1115 1120 1125
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Thr Leu Ile Ile Val Leu Pro Ser Tyr Glu Leu Ser Lys Leu Tyr
1295 1300 1305
Phe Leu Lys Asn Val Arg Thr Asp Val Glu Lys Asn Trp Leu Gly 1310 1315 1320 Lys Val Lys Tyr Arg Gln Ile Ser Ser Val Tyr Asp Ile Cys Asp
1325 1330 1335
Ser Glu Glu Ala Val Tyr Leu Phe Pro Ser Arg His Lys Ser Gly
1340 1345 1350
Ser Arg Pro Asp Phe Ile Leu Pro Phe Leu Lys Ala Val Leu Ile
1355 1360 1365
Ser Cys Ile Ser Ser Gln Trp Gln Val Val Tyr Ile Ser Tyr Leu
1370 1375 1380
Ile Leu Glu Ile Thr Tyr Tyr Met His Arg Lys Ile Ile Asp Glu
1385 1390 1395
Val Ser Gly Gly Ala Asn Phe Leu Ser Arg Leu Ile Ala Ala Ile
1400 1405 1410
Ile Glu Leu Asn Trp Ala Ile Asp Asp Glu Glu Cys Lys Gly Leu
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Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Ser Gly Arg Ala Lys Asn Leu Ile Val
1430 1435 1440
Lys His Lys Val Arg Asn Glu Ala Val His Arg Trp Phe Gly Glu
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Glu Glu Ile Tyr Gly Ala Pro Lys Val Ile Thr Ile Ile Lys Ala
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Ser Thr Leu Ser Lys Asn Arg His Cys Ile Ile Cys Thr Ile Cys
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Glu Gly Lys Glu Trp Asn Gly Ala Asn Cys Pro Lys Cys Gly Arg
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Gln Gly Lys Pro Ile Thr Cys Gly Met Thr Leu Ala Asp Phe Glu
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Glu Lys His Tyr Lys Lys Ile Phe Ile Arg Glu Glu Ser Ser Cys
1520 1525 1530
Pro Val Pro Phe Asp Pro Ser Cys His Cys Asn Tyr Phe Arg His
1535 1540 1545
Asp Gly Pro Phe Arg Lys Glu Tyr Lys Gly Tyr Val Gln Tyr Thr 1550 1555 1560 Ala Arg Gly Gln Leu Phe Leu Arg Asn Leu Pro Ile Leu Ala Thr
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Lys Met Lys Leu Leu Met Val Gly Asn Leu Gly Ala Glu Ile Gly
1580 1585 1590
Asp Leu Glu His Leu Gly Trp Val Leu Arg Gly Pro Ala Val Cys
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Lys Lys Ile Thr Asn His Glu Lys Cys His Val Asn Ile Met Asp
1610 1615 1620
Lys Leu Thr Ala Phe Phe Gly Ile Met Pro Arg Gly Thr Thr Pro
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Arg Ala Pro Val Arg Phe Pro Thr Ala Leu Leu Lys Val Arg Arg
1640 1645 1650
Gly Leu Glu Thr Gly Trp Ala Tyr Thr His Gln Gly Gly Ile Ser
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Ser Val Asp His Val Thr Ala Gly Lys Asp Leu Leu Val Cys Asp
1670 1675 1680
Ser Met Gly Arg Thr Arg Val Val Cys His Ser Asn Asn Lys Met
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Thr Asp Glu Thr Glu Tyr Gly Ile Lys Thr Asp Ser Gly Cys Pro
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Ser Gly Thr Lys Gly Ala Met Val His Leu Gln Lys Thr Gly Gly
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Leu Lys Asn Leu Lys Gly Trp Ser Gly Leu Pro Ile Phe Glu Ala
1760 1765 1770
Ser Ser Gly Arg Val Val Gly Arg Val Lys Val Gly Lys Asn Glu
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Gly Lys Thr Thr Glu Leu Pro Arg Ser Val Ile Glu Glu Ile Gly
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Arg His Lys Arg Val Leu Val Leu Ile Pro Leu Arg Ala Ala Ala
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1955 1960 1965
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1970 1975 1980
Gly Ser Glu Tyr Leu Asp Ile Ala Gly Leu Lys Ile Pro Thr Glu
1985 1990 1995
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Gly Tyr Tyr Tyr Ser Gly Glu Asn Pro Glu Asn Leu Arg Val Val 2030 2035 2040 Thr Ser Gln Ser Pro Tyr Val Val Val Ala Thr Asn Ala Ile Glu
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Ile Val Thr Gly Leu Lys Arg Met Ala Val Thr Ile Gly Glu Gln
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<210> 10 <211> 12332
<212> DNA
<213> Seqüência artificial:Seqüência XIKE-C BVDV
<400> 10
gtatacgaga ttagctaaag aactcgtata tggattggac gtcaacaaat ttttaattgg caacgtaggg aaccttcccc tcagcgaagg gactagcaaa agtaggggac tagcggtagc gtacagggga gtcgtcaatg gttcgacact tggacgaggg catgcccacg gcacatctta ctattcgtgg cgttatggac acagcctgat gtaaaaactc tgctgtacat ggcacatgga atataaacaa aaaccagcag gcgtcgtgga gtttggagag agcagtgact tgcacccgca cagcgccaac atcctgacca atgctaggtc taatgtgtat ggaccggtga gtggcatcta ttatgtgggc cccgtctatc atagagcccc cgaaacaact aggagagttg gcagagtgac catctgcata gatgggtgta tcctcctgaa gaaatgggta tacaacagat taaattgtcc gagcaagggt gctacaagta agaagcagcc gaaaatagcc ccaaaagaga cagaaaaaga agtagtagaa ggggttaagt accaggtgaa tcaagatggg ttatatcaca acaagaataa ggcactgctg gcttgggcca tcttagcagc tatcacccag tggaacttga tggacaacgg aagaggggtg aacaggagtc tattaggaat aactcactta gcaacagact atgagcttaa gaagaccaac tacacgtgtt gcaggttgca taactggttt catatagaac cgtggatatg agaagggcaa ccgcttaggg agtgtgctgt gaacatcgtg acacaggcta gggacagacc gaatttctct ttcgcaggtg ttatactgga agatgtgctg ttcaaggagc acgattgcgg actcgatggg gcaaccaaca ccattgaggg ctggttaggg aagcaattag ggatccttgg gtttggtgca catgcagcaa gtccatactg gtatacaaaa aactgcactc cagcttgcct
ccgaaaagag gctagccatg cccttagtag 120
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caacatgctg caagagaccg cgatacagct ■ 174 0
agcaagggta gggacggcca agttgacaac 1800
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cggagtggag aggaagatcg gttacgtatg 1920
tccaagaaac actagaataa taggccccgg 1980 gaaatttgat accaacgccg aagatggaaa agaatttgtc ctattgtcct tggtggttct catctacttg gttctacatt ttgcgatccc caagaaccag ctgaatttaa cggtagcaac gtggaaccta gggaagtatg tctgcataag agtcttcgtc atagaggaag cagggcaagt cttaactagg atatggaatg ctgccactac actgagggga caactaatcc aagggctatt cttccctgaa tgcaaagagg gcttccaata attggggcca gagagcttaa ctacaacatg catggtgcat gtatggtgtg aaggaaaaga agagaggtat ctagtggctg tgcacgagag gatcagtgat gggacaatag gcccagacgt actctgccct tgtgactcaa aaccagtgat tggaccagct ttccagatgg tatgcccaca agcgaaccaa gacaccttgg acacaactgt tcagcggaga aaatggtgta cctatgaaaa tctaggtgga aactggacat gcataaccgg caagaagtgt aagtggtgtg gccatgactt aataggcaag tgcatgctca tcaacgagag cgataggggt ggtgtagcca tagttccatc cacggtgcaa gttatcgcta ctaacaatga agtgatagca agtgaaggac cagtggaaaa tctacctaat aagtattatg agccaaggga ggagtggcaa tattggttcg acctggattc gttcataatc atagcagtgg tcgccttgtt aacatacaca atactgtctg agcagatggc agtcatgata ggcaatttgc tgacagacag tctgtactta atagttaaag aggaactggc ccttgtagcc aaccctatga aaacaattgg gaaggccagc agaatcaatg ctgatgacca gacaggcgta gtggctgttt tgatgatcgc
aatactccat gagatggggg ggcacctctc 2040
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<211> 11840
<212> DNA
<213> Seqüência artificial:
<400> 11
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276
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Seqüência XIKE-C-NdN BVDV
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Glu Gly Leu Gln Thr Ile Lys Glu Tyr Val Asp Lys Phe Ile Gln
2225 2230 2235
Ser Leu Thr Glu Asn Lys Glu Glu Ile Ile Arg Tyr Gly Leu Trp 2240 2245 2250
Gly Val His Thr Ala Leu Tyr Lys Ser Leu Ala Ala Arg Leu Gly
2255 2260 2265
His Glu Thr Ala Phe Ala Thr Leu Val Val Lys Trp Leu Ala Phe
2270 2275 2280
Gly Gly Glu Thr Val Ser Ala His Ile Lys Gln Val Ala Val Asp
2285 2290 2295
Leu Val Val Tyr Tyr Ile Ile Asn Lys Pro Ser Phe Pro Gly Asp
2300 2305 2310
Thr Glu Thr Gln Gln Glu Gly Arg Arg Phe Val Ala Ser Leu Phe
2315 2320 2325
Ile Ser Ala Leu Ala Thr Tyr Thr Tyr Lys Thr Trp Asn Tyr Asn
2330 2335 2340
Asn Leu Gln Arg Val Val Glu Pro Ala Leu Ala Tyr Leu Pro Tyr
2345 2350 2355
Ala Thr Ser Ala Leu Lys Leu Phe Thr Pro Thr Arg Leu Glu Ser
2360 2365 2370
Val Val Ile Leu Ser Ser Thr Ile Tyr Lys Thr Tyr Leu Ser Ile
2375 2380 2385
Arg Lys Gly Lys Ser Asp Gly Leu Leu Gly Thr Gly Ile Ser Ala
2390 2395 2400
Ala Met Glu Ile Leu Asn Gln Asn Pro Ile Ser Val Gly Ile Ser
2405 2410 2415
Val Met Leu Gly Val Gly Ala Ile Ala Ala His Asn Ala Ile Glu
2420 2425 2430
Ser Ser Glu Gln Lys Arg Thr Leu Leu Met Lys Val Phe Val Lys
2435 2440 2445
Asn Phe Leu Asp Gln Ala Ala Thr Asp Glu Leu Val Lys Glu Asn
2450 2455 2460
Pro Glu Lys Ile Ile Met Ala Leu Phe Glu Ala Val Gln Thr Ile
2465 2470 2475
Gly Asn Pro Leu Arg Leu Ile Tyr His Leu Tyr Gly Val Tyr Tyr 2480 2485 2490
Lys Gly Trp Glu Ala Lys Glu Leu Ala Glu Lys Thr Ala Gly Arg
2495 2500 2505
Asn Leu Phe Thr Leu Ile Met Phe Glu Ala Phe Glu Leu Leu Gly
2510 2515 2520
Met Asp Ser Glu Gly Lys Ile Arg Asn Leu Ser Gly Asn Tyr Ile
2525 2530 2535
Leu Asp Leu Ile Phe Asn Leu His Asn Lys Leu Asn Lys Gly Leu
2540 2545 2550
Lys Lys Leu Val Leu Gly Trp Ala Pro Ala Pro Leu Ser Cys Asp
2555 2560 2565
Trp Thr Pro Ser Asp Glu Arg Ile Ser Leu Pro His Asn Asn Tyr
2570 2575 2580
Leu Arg Val Glu Thr Arg Cys Pro Cys Gly Tyr Glu Met Lys Ala
2585 2590 2595
Ile Lys Asn Val Ala Gly Lys Leu Thr Lys Val Glu Glu Lys Gly
2600 2605 2610
Ser Phe Leu Cys Arg Asn Arg Leu Gly Arg Gly Pro Pro Asn Phe
2615 2620 2625
Lys Val Thr Lys Phe Tyr Asp Asp Asn Leu Ile Glu Val Lys Pro
2630 2635 2640
Val Ala Arg Leu Glu Gly Gln Val Asp Leu Tyr Tyr Lys Gly Val
2645 2650 2655
Thr Ala Lys Leu Asp Tyr Asn Asn Gly Lys Val Leu Leu Ala Thr
2660 2665 2670
Asn Lys Trp Glu Val Asp His Ala Phe Leu Thr Arg Leu Val Lys
2675 2680 2685
Lys His Thr Gly Ile Gly Phe Lys Gly Ala Tyr Leu Gly Asp Arg
2690 2695 2700
Pro Asp His Gln Asp Leu Val Asp Arg Asp Cys Ala Thr Ile Thr
2705 2710 2715
Lys Asn Ser Val Gln Phe Leu Lys Met Lys Lys Gly Cys Ala Phe 2720 2725 2730
Thr Tyr Asp Leu Thr Ile Ser Asn Leu Val Arg Leu Ile Glu Leu
2735 2740 2745
Val His Lys Asn Asn Leu Gln Glu Arg Glu Ile Pro Thr Val Thr
2750 2755 2760
Val Thr Thr Trp Leu Ala Tyr Ser Phe Val Asn Glu Asp Leu Gly
2765 2770 2775
Thr Ile Lys Pro Val Leu Gly Glu Lys Val Ile Pro Glu Pro Pro
2780 2785 2790
Glu Glu Leu Ser Leu Gln Pro Thr Val Arg Leu Val Thr Thr Glu
2795 2800 2805
Thr Ala Ile Thr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Val Met Thr Thr Gly
2810 2815 2820
Ile Thr Pro Val Val Glu Met Lys Glu Glu Pro Gln Leu Asp His
2825 2830 2835
Gln Ser Thr Thr Leu Lys Val Gly Leu Lys Glu Gly Glu Tyr Pro
2840 2845 2850
Gly Pro Gly Val Asn Pro Asn His Leu Ala Glu Val Ile Asp Glu
2855 2860 2865
Lys Asp Asp Arg Pro Phe Val Leu Ile Ile Gly Asn Lys Gly Ser
2870 2875 2880
Thr Ser Asn Arg Ala Arg Thr Ala Lys Asn Ile Arg Leu Tyr Lys
2885 2890 2895
Gly Asn Asn Pro Arg Glu Ile Arg Asp Leu Met Ser Gln Gly Arg
2900 2905 2910
Ile Leu Thr Val Ala Leu Lys Glu Leu Asp Pro Glu Leu Lys Glu
2915 2920 2925
Leu Val Asp Tyr Lys Gly Thr Phe Leu Asn Arg Glu Ala Leu Glu
2930. 2935 2940
Ala Leu Ser Leu Gly Lys Pro Ile Lys Arg Lys Thr Thr Thr Ala
2945 2950 2955
Met Ile Arg Arg Leu Ile Glu Pro Glu Val Glu Glu Glu Leu Pro 2960 2965 2970
Asp Trp Phe Gln Ala Glu Glu Pro Leu Phe Leu Glu Ala Lys Ile
2975 2980 2985
Gln Asn Asp Leu Tyr His Leu Ile Gly Ser Val Asp Ser Ile Lys
2990 2995 3000
Ser Lys Ala Lys Glu Leu Gly Ala Thr Asp Asn Thr Lys Ile Val
3005 3010 3015
Lys Glu Val Gly Ala Arg Thr Tyr Thr Met Lys Leu Ser Ser Trp
3020 3025 3030
Ser Thr Gln Val Thr Lys Lys Gln Met Ser Leu Ala Pro Leu Phe
3035 3040 3045
Glu Glu Leu Leu Leu Lys Cys Pro Pro Cys Ser Lys Ile Ser Lys
3050 3055 3060
Gly His Met Val Ser Ala Tyr Gln Leu Ala Gln Gly Asn Trp Glu
3065 3070 3075
Pro Leu Gly Cys Gly Val Tyr Met Gly Thr Ile Pro Ala Arg Arg
3080 3085 3090
Leu Lys Ile His Pro Tyr Glu Ala Tyr Leu Lys Leu Lys Glu Leu
3095 3100 3105
Val Glu Val Glu Ser Ser Arg Ala Thr Ala Lys Glu Ser Ile Ile
3110 3115 3120
Arg Glu His Asn Thr Trp Ile Leu Arg Lys Val Arg His Glu Gly
3125 3130 3135
Asn Leu Arg Thr Lys Ser Met Ile Asn Pro Gly Lys Ile Ser Asp
3140 3145 3150
Gln Leu Cys Arg Asp Gly His Lys Arg Asn Ile Tyr Asn Lys Ile
3155 3160 3165
Ile Gly Ser Thr Met Ala Ser Ala Gly Ile Arg Leu Glu Lys Leu
3170 3175 3180
Pro Val Val Arg Ala Gln Thr Asp Thr Thr Ser Phe His Gln Ala
3185 3190 3195
Ile Arg Glu Lys Ile Asp Lys Thr Glu Asn Lys Gln Thr Pro Glu 3200 3205 3210
Leu His Glu Glu Leu Met Lys Val Phe Asp Cys Leu Lys Ile Pro
3215 3220 3225
Glu Leu Lys Glu Ser Tyr Asp Glu Val Ser Trp Glu Gln Leu Glu
3230 3235 3240
Ala Gly Ile Asn Arg Lys Gly Ala Ala Gly Tyr Leu Glu Ser Lys
3245 3250 3255
Asn Ile Gly Glu Val Leu Asp Thr Glu Lys His Ile Val Glu Gln
3260 3265 3270
Leu Ile Lys Asp Leu Arg Lys Gly Lys Lys Ile Arg Tyr Tyr Glu
3275 3280 3285
Thr Ala Ile Pro Lys Asn Glu Lys Arg Asp Val Ser Asp Asp Trp
3290 3295 3300
Glu Ala Gly Glu Phe Val Asp Glu Lys Lys Pro Arg Val Ile Gln
3305 3310 3315
Tyr Pro Asp Ala Lys Val Arg Leu Ala Ile Thr Lys Val Met Tyr
3320 3325 3330
Lys Trp Val Lys Gln Lys Pro Val Val Ile Pro Gly Tyr Glu Gly
3335 3340 3345
Lys Thr Pro Leu Phe Asp Ile Phe Asn Lys Val Lys Lys Glu Trp
3350 3355 3360
Asp Ser Phe Gln Asp Pro Val Ala Val Ser Phe Asp Thr Lys Ala
3365 3370 3375
Trp Asp Thr Gln Val Thr Ser Arg Asp Leu Met Leu Ile Lys Asp
3380 3385 3390
Ile Gln Lys Tyr Tyr Phe Lys Arg Ser Ile His Lys Phe Leu Asp
3395 3400 3405
Thr Ile Thr Glu His Met Val Glu Val Pro Val Ile Thr Ala Asp
3410 3415 3420
Gly Glu Val Tyr Ile Arg Asn Gly Gln Arg Gly Ser Gly Gln Pro
3425 3430 3435
Asp Thr Ser Ala Gly Asn Ser Met Leu Asn Val Leu Thr Met Ile 3440 3445 3450
Tyr Ala Phe Cys Lys Ser Thr Gly Ile Pro Tyr Arg Gly Phe Ser
3455 3460 3465
Arg Val Ala Arg Ile His Val Cys Gly Asp Asp Gly Phe Leu Ile
3470 3475 3480
Thr Glu Arg Gly Leu Gly Leu Lys Phe Ser Glu Lys Gly Met Gln
3485 3490 3495
Ile Leu His Glu Ala Gly Lys Pro Gln Lys Ile Thr Glu Gly Asp
3500 3505 3510
Lys Met Lys Val Ala Tyr Arg Phe Glu Asp Ile Glu Phe Cys Ser
3515 3520 3525
His Thr Pro Val Pro Val Arg Trp Ala Asp Asn Thr Ser Ser Tyr
3530 3535 3540
Met Ala Gly Arg Ser Thr Ala Thr Ile Leu Ala Lys Met Ala Thr
3545 3550 3555
Arg Leu Asp Ser Ser Gly Glu Arg Gly Ser Thr Ala Tyr Glu Lys
3560 3565 3570
Ala Val Ala Phe Ser Phe Leu Leu Met Tyr Ser Trp Asn Pro Val
3575 3580 3585
Val Arg Arg Ile Cys Leu Leu Val Leu Ser Gln Phe Pro Glu Ile
3590 3595 3600
Ser Pro Ser Lys Asn Thr Ile Tyr Tyr Tyr Gln Gly Asp Pro Ile
3605 3610 3615
Ala Ala Tyr Arg Glu Val Ile Gly Lys Gln Leu Cys Glu Leu Lys
3620 3625 3630
Arg Thr Gly Phe Glu Lys Leu Ala Gly Leu Asn Leu Ser Met Thr
3635 3640 3645
Thr Leu Gly Ile Trp Thr Lys His Thr Ser Lys Arg Leu Ile Gln
3650 3655 3660
Ala Cys Val Glu Ile Gly Lys Arg Glu Gly Thr Trp Leu Val Asn
3665 3670 3675
Ala Asp Arg Leu Ile Ala Gly Lys Thr Gly Lys Phe Tyr Ile Pro 3680 3685 3690
Ser Thr Gly Val Thr Leu Leu Gly Lys His Tyr Glu Glu Ile Asn
3695 3700 3705
Leu Lys Gln Lys Ala Ala Gln Pro Pro Ile Glu Gly Val Asp Arg 3710 3715 3720
Tyr Lys Leu Gly Pro Ile Val Asn Val Ile Leu Arg Arg Leu Arg
3725 3730 3735
Val Met Leu Met Thr Val Ala Ser Gly Ser Trp 3740 3745
<210> 13
<211> 13
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 13
Ser Leu His Gly Ile Trp Phe Glu Lys Ile Cys Thr Gly 1 5 10
<210> 14
<211> 20 <212> PRT
20 <213> Seqüência artificial BVDV
<400> 14
Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys Asn Trp Phe His 1 5 10 15
Ile Glu Pro Trp
20
<210> 15
<211> 20 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 15
Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys Asn Trp Tyr Asn 1 5 10 15 Ile Glu Pro Trp 20
<210> 16 <211> 11 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 16
Ser Leu His Gly Ile Trp Pro Glu Lys Ile Cys 1 5 10
<210> 17
<211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 17
Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys Asn Trp
1 5 10
<210> 18
<211> 4
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 18
Met Glu Leu Phe 1
<210> 19
<211> 6 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 19
Met Glu Leu Phe Ser Asn 1 5
<210> 20 <211> 7 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 20
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BTOV
<400> 21
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 22
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu
1 5
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 23
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr
15 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BTOV
<400> 24
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys 1 5 10
<210> 25
<211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 25
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr 1 5 10
<210> 26 <211> 6
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 26
Ser Asn Glu Gly Ser Lys
1 5
<210> 27
<211> 6
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<4 00> 27
Ser Asp Glu Gly Ser Lys 1 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 28
Met Glu Ser Asp Gln Gly Ser Lys 1 5
<210> 29
<211> 11 <212> PRT <213> Seqüência artificial BVDV
<400> 29
Met Glu Leu Phe Ser Ser Asp Gln Gly Ser Lys 1 5 10
<210> 30
<211> 13
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 30
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Ser Asp Gln Gly Ser Lys
15 10
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 31
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Ser Asp Gln Gly Ser Lys 15 10 15
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 32
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Ser Asp Gln Gly Ser Lys 1 5 10 15
<210> 33
<211> 16 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 33
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Gln Gly Ser Lys 15 10 15
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 34
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Ser Asp Gln Gly Ser 15 10 15
Lys
<210> 35
<211> 18 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 35
Met Glu Leu Phe Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr Ser Asp Gln Gly 15 10 15
Ser Lys <210> 36
<211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 36
Met Glu Leu Ile Ser Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr 15 10
<210> 37
<211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 37
Met Glu Leu Ile Thr Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Thr 15 10
<210> 38 <211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 38
Met Glu Leu Asn His Phe Glu Leu Leu Tyr Lys Thr 1 5 10
<210> 39
<211> 12 <212> PRT
<213> Seqüência artificial BVDV
<400> 39
Met Glu Leu Asn Lys Phe Glu Leu Leu Tyr Lys Thr 1 5 10

Claims (7)

1. Vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que a referida vacina combinada com- preende: a. um ou mais BVDV atenuados tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e/ou pelo menos outra mutação na seqüência de codificação para Npro, em que a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva à inativação de atividade de RNase que reside na Erns e/ou a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro; e b. um ou mais componentes ativos imunológicos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno bovino que não BVDV.
2. Vacina de acordo com a reivindicação 1, em que a referida combinação compreende: a. um ou mais BVDV atenuados tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns1 em que a referida mu- tação na seqüência de codificação para a glicoproteína Erns leva à inativação de atividade de RNase que reside em Erns; e b. um ou mais componentes ativos imunológicos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno bovino que não BVDV.
3. Vacina de acordo com a reivindicação 1, em que a referida combinação compreende: a. um ou mais BVDV atenuados tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para Npro1 a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro; e b. um ou mais componentes ativos imunológicos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno bovino que não BVDV.
4. Vacina de acordo com a reivindicação 1, em que a referida combinação compreende: a. um ou mais BVDV atenuados tendo pelo menos uma mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems e pelo menos uma ou- tra mutação na seqüência de codificação para Nprol em que a referida muta- ção na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva à inativação de atividade de RNase que reside em Ems e/ou a referida mutação na se- qüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro; e b. um ou mais componentes ativos imunológicos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno bovino que não BVDV.
5. Vacina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a referida vacina combinada compreende BVDV atenuado do tipo 1 e BVDV atenuado do tipo 2, ambos tendo pelo menos uma mutação na se- qüência de codificação para a glicoproteína Ems e pelo menos uma outra mu- tação na seqüência de codificação para Npro1 em que a referida mutação na seqüência de codificação para a glicoproteína Ems leva à inativação de ativi- dade de RNase que reside em Erns e/ou a referida mutação na seqüência de codificação para Npro leva à inativação da referida Npro.
6. Vacina combinada de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 5, em que a referida infecção em gado que não BVDV é causada por pelo menos um patógeno selecionado do grupo consistindo de: vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), vírus da rinotraqueíte bovina in- fecciosa (IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesvírus bovi- no (BHV)1 Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coronovírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus bovino (PPV), Adenovírus As- trovírus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaei, Campylobaeter fetus venerealis e Campylobaeter fetus fetus (for- malmente C fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira hardjo, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira eanieola, Leptos- pira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brueella abortus, Brueella suis e Brueella melitensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septi- cum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clos- tridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Kleb- siella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobac- terium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium ho- minis, Staphylococcus aureus, Streptoeoceus dysgalaetiae, Streptoeoecus uberus, Myeoplasma spp, Myeoplasma dispar, Myeoplasma bovis e Urea- plasma spp., Tritriehomonas foetus, Triehophyton verrueosum, Triehophyton mentagrophytes, Triehophyton sarkisovii, Neospora eaninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e DietyoeauIus vivi- parous (doença do parasita do pulmão).
7. Vacina combinada de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 6, em que o referido componente ativo imunológico é um antíge- no de pelo menos um patógeno selecionado do grupo consistindo de: vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), vírus da rinotraqueíte bovina in- fecciosa (IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesvírus bovi- no (BHV)1 Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coronovírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus bovino (PPV), Adenovírus As- trovírus, Mannheimia haemolytiea (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multoeida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Aetinomyees (Corynebacterium), Aetinomyees pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobaeter fetus venerealis e Campylobaeter fetus fetus (for- malmente C fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira hardjo, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira eanieola, Leptos- pira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brueella abortus, Brueella suis e Brueella melitensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septi- cum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clos- tridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Kleb- siella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobac- terium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium ho- minis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalaetiae, Streptoeoceus uberus, Mycoplasma spp, Mycoplasma díspar, Mycoplasma bovis e Urea- plasma spp., Tritriehomonas foetus, Triehophyton verrueosum, Triehophyton mentagrophytes, Triehophyton sarkisovii, Neospora eaninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e Dietyoeaulus vivi- parous (doença do parasita do pulmão).
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