BRPI0620241A2 - derivados de triazol - Google Patents

Abstract

DERIVADOS DE TRIAZOL. A presente invenção refere-se a novos derivados de triazol quesão inibidores de cinase de receptor I de TGF-beta e podem ser empregados, entre outras coisas, para o tratamento de tumores.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE TRIAZOL". Antecedentes da Invenção

A presente invenção refere-se aos novos compostos tendo pro- priedades valiosas, em particular aquelas que podem ser empregadas para a preparação de medicamentos.

A presente invenção refere-se a compostos e ao uso de com- postos em que a inibição, regulação e/ou modulação de transdução de sinal por cinases, em particular cinases do receptor de TGF-beta, desempenha um papel, além disso à composições farmacêuticas que compreendem es- tes compostos, e ao uso dos compostos para o tratamento de doenças in- duzidas por cinase.

Fator beta de crescimento transformador é o protótipo da super- família de TGF-beta, uma família de fatores de crescimento pleiotróficos, altamente preservados,que realizam funções importantes ambas durante o desenvolvimento do embrião e da mesma forma no organismo do adulto. Em mamíferos, três isoformas de TGF-beta (TGF-beta 1, 2 e 3) foram identi- ficadas, TGF-beta 1 que é a isoforma mais comum (Kingsley (1994) Genes Dev 8:133-146). TGF-beta 3 é expresso, por exemplo, apenas em células mesenquimatosas, considerando que TGF-beta 1 é encontrado em células mesenquimatosas e epiteliais. TGF-beta é sintetizado como pré-proproteína e é libertado em forma inativa na matriz extracelular (Derynck (1985) Nature 316: 701-705; Bottinger (1996) PNAS 93: 5877-5882). Além da proregião clivada, que é da mesma forma conhecida como peptídeo associado à Ia- tência (LAP) e permanece associada com a região madura, uma das 4 iso- formas das proteínas de ligação de TGF-beta latentes (LTBP 1 4) pode ser ligado ao TGF-beta (Gentry (1988) Mol Cell Biol 8: 4162-4168, Munger (1997) Kindey Int 51: 1376-1382). A ativação do complexo inativo que é ne- cessária para o desenvolvimento da ação biológica de TGF-beta não foi ain- da clarificada por completo. Entretanto, processo proteolítico, por exemplo, por plasmina, plasma transglutaminase ou trombospondina, é certamente necessário (Munger (1997) Kindey Int 51: 1376-1382). O TGF-beta de ligan- do ativado media sua ação biológica por três receptores de TGF-beta na membrana, os receptores tipo I e tipo Il ubiqüamente expressos e os recep- tores tipo Ill betaglicano e endoglina, o último sendo apenas expresso em células endoteliais (Gougos (1990) J Biol Chem 264: 8361-8364, Loeps- Casillas (1994) J Cell Biol 124:557-568). Ambos receptores TGF-beta tipo III necessitam de um domínio de cinase intracelular que facilita a transmissão de sinal na célula. Visto que os receptores TGF-beta tipo III ligam todas as três isoformas de TGF-beta com alta afinidade e receptor TGF-beta tipo Il da mesma forma tem afinidade mais alta para Iigandos ligados ao receptor tipo III, pensa-se que a função biológica consiste na regulação da biodisponibili- dade dos Iigandos para receptores TGF-beta tipo I e tipo II (Lastres (1996) J Cell Biol 133:1109-1121; Lopes-Casillas (1993) Cell 73: 1435-1344). Os re- ceptores tipo I e tipo II estruturalmente intimamente relacionados têm um domínio de serina/treonina cinase, que é responsável por transmissão de sinal, na região citoplasmática. O receptor TGF-beta tipo II liga-se ao TGF- beta, depois que o receptor de TGF-beta tipo I é recrutado a este complexo dé transmissão de sinal. O domínio de serina/treonina cinase do receptor tipo II é constitutivamente ativo e é capaz de fosforilar radicais de serila nes- te complexo no assim chamado domínio de GS do receptor tipo I. Esta fos- forilação ativa a cinase do receptor tipo I, que é agora capaz de fosforilar os mediadores de sinal intracelulares as proteínas de SMAD, e desse modo inicia a transmissão de sinal intracelular (resumido em Derynck (1997) Bio- chim Biophys Acta 1333: F105-F150).

As proteínas da família de SMAD servem como substratos para 25 todas as cinases de receptor da família de TGF-beta. Até hoje, 8 proteínas de SMAD foram identificadas, as quais podem ser divididas em 3 grupos: (1) SMADs associados ao receptor (R-SMADs) são substratos diretos das cina- ses do receptor de TGF-β (SMAD1, 2, 3, 5, 8); (2) co-SMADs, com associ- am-se com o R-Smads durante a cascata de sinal (SMAD4); e (3) SMADs inibidores (SMAD6, 7), que inibem a atividade das proteínas de SMAD su- pracitadas. Dos várias R-SMADs, SMAD2 e SMAD3 são os mediadores de sinal específicos de TGF-beta. Na cascata de sinal de TGF-beta, SMAD2/SMAD3 são desse modo fosforilados pelo receptor de TGF-beta tipo I, permitindo-os associar-se com SMAD4. O complexo resultante de SMAD2/SMAD3 e SMAD4 pode agora ser translocado no núcleo de célula, onde pode iniciar a transcrição dos genes regulados por TGF-beta direta- mente ou por outras proteínas (resumidas em Itoh (2000) Eur J Biochem 267: 6954-6967; Shi (2003) Cell 113: 685-700).

O espectro das funções de TGF-beta é de ampla variação e de- pendente do tipo celular e estado de diferenciação (Roberts (1990) Hand- book of Experimental Pharmacology: 419-472). As funções celulares que são influenciadas por TGF-beta incluem: apoptose, proliferação, diferencia- ção, mobilidade e adesão celular. Adequadamente, TGF-beta desempenha um papel importante em uma variedade muito ampla de processos biológi- cos. Durante o desenvolvimento do embrião, é expresso em sítios de morfo- genia e em particular em áreas com interação epitelial-mesenquimatosa, onde induz os processos de diferenciação importantes (Pelton (1991) J Cell Biol 115:1091-1105). TGF-beta da mesma forma realiza uma função funda- mental na auto- renovação e manutenção de um estado não diferenciado de células tronco (Mishra (2005) Science 310: 68-71). Além disso, TGF-beta da mesma forma realiza funções importantes na regulação do sistema imune. Geralmente tem uma ação imunossupressora, visto que inibe, inter alia, a proliferação de linfócitos e restringe a atividade de macrófago do tecido. TGF-beta desse modo permite reações inflamatórias baixar novamente e assim ajuda a prevenir as reações imunes excessivas (Bogdan (1993) Ann NY Acad Sci 685: 713-739, resumido em Letterio (1998) Annu Rev Immunol 16: 137-161). Outra função de TGF-beta é a regulação da proliferação celu- lar. TGF-beta inibe o crescimento de células de origem endoteliais, epiteliais e hematopoiéticas, porém promove o crescimento de células de origem me· senquimatosas (Tucker (1984) Science 226:705-707, Shipley (1986) Câncer Res 46:2068-2071, Shipley (1985) PNAS 82: 4147-4151). Uma outra função importante de TGF-beta é a regulação da adesão celular e interações de célula-célula. TGF-beta promove a formação da matriz extracelular por indu- ção de proteínas da matriz extracelular, tal como, por exemplo, fibronectina e colágeno. Além disso, TGF-beta reduz a expressão de metaloproteases matriz degradantes e inibidores de metaloproteases (Roberts (1990) Ann NY Acad Sci 580: 225-232; Ignotz (1986) J Biol Chem 261: 4337-4345; Overall (1989) J Biol Chem 264: 1860-1869); Edwards (1987) EMBO J 6: 1899- 1904).

O espectro amplo de ação de TGF-beta indica que TGF-beta desempenha um papel importante em muitas situações fisiológicas, tal como cicatrização de ferimento e em processos patológicos, tais como câncer e fibrose. TGF-beta é um dos fatores de crescimento fundamentais na cicatri- zação de ferimento (resumido em O1Kane (1997) Int J Biochem Ceil Biol 29: 79-89). Durante a fase de granulação, TGF-beta é liberada de plaquetas sangüíneas no sítio da lesão. TGF-beta em seguida regula sua própria pro- dução em macrófagos e induz a segregação de outros fatores de crescimen- to, por exemplo, por monócitos. As funções mais importantes durante a cica- trização de ferimento incluem a estimulação de quimiotaxia de células infla- matórias, a síntese de matriz extracelular e regulação da proliferação, dife- renciação e expressão de gene de todos os tipos de célula importantes en- volvidos no processo de cicatrização de ferimento.

Sob condições patológicas, estes efeitos mediados por TGF- beta, em particular a regulação da produção de matriz extracelular (ECM), podem resultar em fibrose ou cicatrizes na pele (Borda (1994) N Engl J Med 331:1286-1292).

Para as doenças fibróticas, nefropatia diabética e glomeronefri- te, foi mostrado que TGF-beta promove a hipertrofia celular renal e acúmulo patogênico da matriz extracelular. Interrupção das séries de reações de si- nalização de TGF-beta por tratamento com anticorpos anti-TGF-beta previne a expansão da matriz mesangial, redução progressiva na função renal e re- duz lesões estabelecidas de glomerulopatia diabética em animais diabéticos (Border (1990) 346: 371-374, Yu (2004) Kidney Int 66: 1774-1784, Fukasa- wah (2004) Kindney Int 65: 63-74, Sharma (1996) Diabetes 45: 522-530).

TGF-beta da mesma forma desempenha um papel importante na fibrose de fígado. A ativação, essencial para o desenvolvimento de fibro- se de fígado, das células estreladas hepáticas para produzir miofibroblastos, o produtor principal da matriz extracelular no curso do desenvolvimento de cirrose hepática, é estimulado por TGF-beta. Foi da mesma maneira mos- trado aqui que a interrupção das séries de reações de sinalização de TGF- beta reduz a fibrose em modelos experimentais (Yata (2002) Hepatology 35:1022-1030; Arias (2003) BMC Gastroenterol 3:29). TGF-beta da mesma forma desempenha uma função fundamental na formação de câncer (resu- mido em em Derynck (2001) Nature Genetics: 29: 117-129; Elliott (2005) J Clin Onc 23: 2078-2093). Em estágios precoces do desenvolvimento de câncer, TGF-beta combate a formação de câncer. Esta ação supressora de tumor é principalmente baseada na capacidade de TGF-beta inibir a divisão de células epiteliais. Ao contrário, TGF-beta promove o crescimento de cân- cer e a formação de metástase em estágios de tumor recentes. Isto pode ser atribuído ao fato que a maioria dos tumores epiteliais desenvolve uma resistência à ação inibidora de crescimento de TGF-beta, e TGF-beta simul- taneamente suporta o crescimento das células de câncer por outros meca- nismos. Estes mecanismos incluem a promoção de angiogênese, a ação imunossupressora, que suporta as células de tumor evitando-se a função de controle do sistema imune (imunovigilância), e promoção de invasão e a formação de metástase. A formação de um fenótipo invasivo das células de tumor é uma pré-requesito principal para a formação de metástases. TGF- beta promove este processo através de sua capacidade de regular adesão celular, motilidade e a formação da matriz extracelular. Além disso, TGF- beta induz a transição a partir de um fenótipo epitelial da célula ao fenótipo mesenquimatoso invasivo (transiçao mesenquimatosa epitelial). O papel im- portante desempenhado por TGF-beta na promoção de crescimento de cân- cer é da mesma forma demonstrado por investigações que mostram uma correlação entre expressão TGF-beta forte e um prognóstico pobre. Nível de TGF-beta aumentado foi encontrado, inter alia, em pacientes com câncer de próstata, mama, intestinal e pulmonar (Wikstróm (1998) Prostate 37: 19-29; Hasegawa (2001) Câncer 91: 964-971; Friedman (1995), Câncer Epidemiol Biomarkers Prev. 4:549-54). Devido às ações promotoras de câncer de TGF-beta descritas acima, a inibição das séries de reações de sinalização de TGF-beta, por e- xemplo, por inibição do receptor tipo I de TGF-beta, é um possível conceito terapêutico. Foi mostrado em numerosas tentativas pré-clínicas que a inter- rupção das séries de reações de sinalização de TGF-beta na verdade não inibe o crescimento do câncer. Desse modo, o tratamento com receptor tipo II de TGF-beta reduz a formação de metástase em camundongos transgêni- cos, que desenvolvem o câncer de mama invasivo com o passar do tempo (Muraoka (2002) J Clin Invest 109: 1551-1559, Yang (2002) J Clin Invest 109: 1607-1615).

Linhagens celulares de tumor que expressam um receptor tipo Il de TGF-beta defeituoso exibem o crescimento metastático e de tumor redu- zido (Oft (1998) Curr Biol 8: 1243-1252, McEachern (2001) Int J Câncer 91:76-82, Yin (1999) Jclin Invest 103: 197-206).

Condições "caracterizadas por atividade de TGF-β aumentada" inclui aquelas em que a síntese de TGF-β é estimulada de forma que TGF-β esteja presente em níveis aumentados ou em que proteína latente de TGF-β é indesejavelmente ativada ou convertida para ativar a proteína de TGF-β ou em que receptores de TGF-β são supra-regulados ou em que a proteína de TGF-β mostra ligação realçada às células ou matriz extracelular no local da doença. Desse modo, em qualquer caso "atividade realçada" refere-se a qualquer condição em que a atividade biológica de TGF-β é indesejavelmen- te alta, independente da causa.

Várias doenças foram associadas com a superprodução de TGF-βΙ.

Inibidores das séries de reações de sinalização intracelular de TGF-β são tratamentos úteis para doenças fibroproliferativas. Especifica- mente, doenças fibroproliferativas incluem distúrbios renais associados com atividade de TGF-β desregulada e fibrose excessiva incluindo glomerulone- frite (GN), tal como GN proliferativo mesangial, GN imune, e GN crescêntica. Outras condições renais incluem nefropatia diabética, fibrose intersticial re- nal, fibrose renal em pacientes de transplante que recebem ciclosporina, e nefropatia associada ao HIV. Distúrbios vasculares de colágeno incluem es- clerose sistêmica progressiva, polimiosite, sclerorma, dermatomiosite, fasci- te eosinofpilica, morféia, ou aqueles associados com a ocorrência da sín- drome de Raynaud. Fibroses pulmonares que resultam da atividade de TGF- β excessiva incluem síndrome da angústia respiratória do adulto, fibrose pulmonar idiopática, e fibrose pulmonar intersticial freqüentemente associa- das com distúrbios autoimunes, tais como lúpus eritematoso sistêmico e es- clerorma, contato químico ou alergias. Outro distúrbio autoimune associado com características fibroproliferativas é artrite reumatóide.

Doenças oculares associadas com uma condição fibroproliferati- va incluem cirurgia de reinserção retinal que acompanha vitreorretinopatia proliferativa, extração de catarata implante de lente intra-ocular, e cirurgia de drenagem pós-glaucoma estão associadas com a superprodução de TGF-β1.

Doenças fibróticas associadas com superprodução de TGF-βΙ podem ser divididas em condições crônicas, tal como fibrose renal, pulmo- nar e do fígado, e condições mais agudas, tais como cicatrização dérmica e reestenose (Chamberlain, J. Cardiovascular Drug Reviews, 19 (4): 329-344). Síntese e segregação de TGF-βΙ por células de tumor pode da mesma for- ma levar à supressão imune, como visto em pacientes com tumores de ma- ma ou cerebrais agressivos (Arteaga, e outross, (1993) J. Clin. Invist. 92: 2569-2576). O curso de infecção Leishmanial em camundongos é alterado drasticamente por TGF-βΙ (Barral-Netto, e outross (1992) Science 257: 545- 547). TGF-βΙ exacerbou a doença, considerando que anticorpos TGF-βΙ parou o progresso da doença em camundongos geneticamente suscetíveis. Camundongos geneticamente resistentes ficaram suscetíveis a infecção Leishmanial na administração de TGF-βΙ.

Os efeitos profundos de TGF-βΙ sobre deposição de matriz ex- tracelular foram revisados (Rocco e Ziyadeh (1991) em Contemporany Issu- es in Nephrology v. 23, Hormones, autocoids and the Kidney. ed. Jay Stein, Churchill Livingston, New York pp. 391-410; Roberts, e outross, (1988) Rec. Prog. Hormone Res. 44: 157-197) e inclui a estimulação da síntese e da ini- bição da degradação de componentes da matriz extracelular. Visto que a estrutura e propriedades de filtração do glomérulo são largamente determi- nadas pela composição de matriz extracelular da membrana glomerular e mesângio, não é surpreendente que TGF-βΙ tem efeitos profundos no rim. O acúmulo de matriz mesangial em glomerulonefrite proliferativa (Border, e outross (1990) Kidney Int. 37: 689-695) e nefropatia diabética (Mauer, e ou- tros (1984) J. Clin. Invist. 74: 1143-1155) são aspectos patológicos claros e dominantes das doenças. Níveis de TGF-βΙ são elevados em glomeruloes- clerose diabética humana (neuropatia avançada) (Yamamoto, e outros (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. 90: 1814-1818). TGF-β1 é um mediador impor- tante na gênese de fibrose renal em vários modelos animais (Phan, e outros (1990) Kidney Int. 37: 426; Okuda, e outros (1990) J. Clin. Invist. 86: 453). Supressão de glomerulonefrite experimentalmente induzida em ratos foi demonstrada por anti-soro contra TGF-β1 (Border, e outros (1990) Nature 346: 371) e por uma proteína de matriz extracelular, decorina, que pode ligar TGF-β1(Border, e outros (1992) Nature 360: 361-363).

TGF-β1 excessivo leva à formação de tecido-cicatriz dérmica. Anticorpos de TGF-β1 neutralizantes injetados nas margens de ferimentos cicatrizados em ratos foram mostrados para inibir a cicatrização sem interfe- rir com a taxa de cicatrização do ferimento ou a resistência à tração do feri- mento (Shah e outros (1992) Lancet 339: 213-214). Ao mesmo tempo houve angiogênese reduzida, um número reduzido de macrófagos e monócitos no ferimento, e uma quantidade reduzida de deposição de fibra de colágeno desorganizada no tecido com cicatriz.

TGF-β1 pode ser um fator no espessamento progressivo da pa- rede arterial que resulta da proliferação de células do músculo liso e deposi- ção da matriz extracelular na artéria depois de angioplastia por balão. O di- âmetro da artéria com reestenose pode ser reduzido por 90% por este es- pessamento, e visto que a maior parte da redução no diâmetro é devido à matriz extracelular no lugar de corpúsculos de célula do músculo liso, pode ser possível abrir estes vasos em 50% simplesmente reduzindo-se a depo- sição da matriz extracelular extenso. Em artérias de porco não danificadas transfectadas in vivo com um gene de TGF-βΙ, expressão de gene de TGF- β1 estava associada tanto com síntese de matriz extracelular quanto hiper- plasia (Nabel, e outros (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 10759-10763). A hiperplasia induzida por TGF-β1 não foi tão extensa quanto aquela induzi- da com PDGF-BB1 porém a matriz extracelular foi mais extensa com trans- fectantes de TGF-βΙ. Nenhuma deposição de matriz extracelular estava as- sociada com hiperplasia induzida por FGF-1 (uma forma segregada de FGF) neste modelo de porco de transferência de gene (Nabel (1993) Nature 362: 844-846).

Há vários tipos de câncer onde TGF-β1 produzido pelo tumor pode ser danoso. Células de câncer de próstata de rato MATLyLu (Steiner e Barrack (1992) Mol. Endocrinol 6: 15-25) e células de câncer de mama hu- manas MCF-7 (Arteaga, e outros (1993) Cell Growth and Differ. 4: 193-201) ficou mais tumorigênico e metastático depois da transfecção com um vetor expressando o TGF-β1 de camundongo. TGF-β1 foi associado com angio- gênese, metástase e prognóstico pobre em câncer de próstata humano e gástrico avançado (Wikstrom, P., e outros (1998) Prostate 37: 19-29; Saito1 H. e outross, (1999) Câncer 86: 1455-1462). Em câncer de mama, o prog- nóstico pobre é associado com TGF-β elevado (Dickson, e outros (1987) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84: 837-841; Kasid1 e outros (1.987) Câncer Res. 47: 5733-5738; Daly, e outros (1990) J. Cell Biochem. 43: 199-211; Barrett- Lee, e outros (1990) Br. J Câncer 61: 612-617; King1 e outros (1989) o J. Steroid Biochem. 34: 133-138; Welch, e outros (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87: 7678-7682; Walker, e outros (1992) Eur. J. Câncer 238: 641-644) e indução de TGF-β1 por tratamento com tamoxifeno (Butta, e outros (1992) Câncer Res. 52: 4261 - 4264) tem sido associada com o fracasso do trata- mento com tamoxifeno para câncer de mama (Thompson, e outros (1991) Br. J. Câncer 63: 609-614). Anticorpos anti-TGF-β1 inibem o crescimento de células de câncer de mama humanas MDA-231 em ratos atímicos (Arteaga, e outros (1993) J. Clin. Invest. 92: 2569-2576), um tratamento que está cor- relacionado com um aumento na atividade de célula exterminadora natural de baço. Células de CHO transfectadas com TGF-β1 latente da mesma for- ma mostraram atividade de NK diminuída e crescimento de tumor aumenta- do em camundongos nus (Wallick, e outros (1990) J. Exp. Med. 172: 1777- 1784). Desse modo, TGF-β segregado por tumores de mama pode causar uma supressão imune endócrina. Concentrações de plasma altas de TGF- β1 mostraram indicar prognóstico pobre para pacientes com câncer de ma- ma avançado (Anscher, e outros (1993) N. Engl. J. Med. 328: 1592-1598). Pacientes com TGF-β circulante alto antes de quimioterapia em alta dose e transplante de medula óssea autóloga estão em risco alto de doença venoo- clusiva hepática (15-50% de todos os pacientes com uma taxa de mortalida- de até 50%) e pneumonite intersticial idiopática (40-60% de todos os pacien- tes). A implicação destes resultados é 1) que níveis de plasma elevados de TGF-βΙ podem ser empregados para identificar os pacientes em risco e 2) que a redução de TGF-βΙ poderia diminuir a morbidez e mortalidade destes tratamentos comuns para pacientes com câncer de mama.

Muitas células malignas segregam o fator de crescimento trans- formador β (TGF-β), um imunossupressor potente, sugerindo que a produ- ção de TGF-β pode representar um mecanismo de fuga de tumor significan- te de imunovigilância de hospedeiro. Estabelecimento de uma sub- população de leucócito com sinalização de TGF-β rompida no hospedeiro de suporte de tumor oferece um meio potencial para imunoterapia de câncer. Um modelo animal transgênico com sinalização de TGF-β rompida em célu- las T é capaz de erradicar um tumor de Iinfoma de expressão de TGF-β normalmente letal, EL4 (Gorelik e Flavell, (2001) Nature Medicine 7 (10): 1118-1122).

Infra-regulação de secreção de TGF-β em células de tumor re- sulta na restauração de imunogenicidade no hospedeiro, enquanto insensi- bilidade de célula T ao TGF-β resulta na diferenciação acelerada e auto- imunidade, elementos dos quais podem ser requeridos para combater tumo- res de expressão de auto-antígeno em um hospedeiro tolerizado. Os efeitos imunossupressores de TGF-β têm sido implicados em uma subpopulação de pacientes com HIV com resposta imune menor do que predita com base em suas contagens de célula T CD4/CD8 (Garba, e outros J. Immunology (2002) 168: 2247-2254). Um anticorpo neutralizador de TGF-β foi capaz de reverter o efeito na cultura, indicando que inibidores de sinalização de TGF- β podem ter utilidade revertendo-se a supressão imune presente neste sub- conjunto de pacientes com HIV.

Durante os estágios mais precoces de carcinogênese, TGF-βΙ pode agir como um supressor de tumor potente e pode mediar as ações de alguns agentes quimiopreventivos. Entretanto, em algum ponto durante o desenvolvimento e progresso de neoplasmas malignos, células de tumor parecem escapar da inibição de crescimento dependente de TGF-β em pa- ralelo com o aparecimento TGF-β bioativo no micro-ambiente. Os papéis de supressão de tumor / promoção de tumor duais de TGF-β foram mais clara- mente esclarecidos em um TGF-β de super-expressão de sistema transgê- nico em ceratinócitos. Enquanto os transgênicos foram mais resistentes à formação de lesões de pele benignas, a taxa de conversão metastática nos transgênicos foi aumentada dramaticamente (Cui, e outros (1996) Cell 86 (4): 531-42). A produção de TGF-βΙ por células malignas em tumores primá- rios parece aumentar com estágios avançados de progressão de tumor. Es- tudos em muitos dentre os cânceres epiteliais sugerem que a produção au- mentada de TGF-β por cânceres humanos ocorrem como um evento relati- vãmente recente durante o progresso de tumor. Além disso, este TGF-β as- sociado ao tumor fornece as células de tumor com uma vantagem seletiva e promove o progresso de tumor. Os efeitos de TGF-βΙ em interações de cé- lula/estroma e célula/célula resultam em uma maior tendência para invasão e metástase.

TGF-β associado ao tumor pode permitir as células de tumor escapar da vigilância imune desde que seja um inibidor potente da expan- são clonal de linfócitos ativados. TGF-β da mesma forma mostrou inibir a produção de angiostatina. Modalidades terapêuticas de câncer, tal como radioterapia e quimioterapia, induzem a produção de TGF-β ativado no tu- mor, desse modo selecionando o crescimento de células malignas que são resistentes aos efeitos inibidores de crescimento de TGF-β. Desse modo, estes tratamentos anticâncer aumentam o risco e aceleram o desenvolvi- mento de tumores com crescimento realçado e invasividade. Nesta situação, agentes que alvejam a transdução de sinal mediada por TGF-β poderiam ser uma estratégia terapêutica muito eficaz. A resistência de células de tu- mor ao TGF-β foi mostrada para negar muitos dos efeitos citotóxicos da ra- dioterapia e quimioterapia, e a ativação dependente de tratamento de TGF-β no estroma pode até mesmo ser prejudicial visto que pode tornar o micro- ambiente mais condutor ao progresso de tumor e contribuir para o dano ao tecido que leva à fibrose. O desenvolvimento de inibidores de transdução de sinal de TGF-β é provável de beneficiar o tratamento de câncer progredido sozinho e em combinação com outras terapias.

Os compostos são adequados para o tratamento de câncer e outros estados de doença influenciados por TGF-β inibindo-se TGF-β em um paciente em necessidade deste por administração do(s) referido(s) com- posto(s) ao referido paciente. TGF-β da mesma forma seria útil contra ate- rosclerose (T. A. McCaffrey: TGF-ps e TGF-β Receptors in Atherosclerosis: Cytokine and Growth Factor Reviews 2000,11,103-114) e doença de Alze- heimer (Masliah, E.; Ho, G.; Wyss-Coray, T.: Functional Role of TGF-β in AIzheimer1S Disease Microvascular Injury: Lessons from Trangenic Mice: Neurochemistry International 2001,39,393-400).

Foi constatado que os compostos de acordo com a invenção e sais destes têm propriedades farmacológicas muito valiosas enquanto sen- do bem-tolerados.

Em particular, eles exibem propriedades inibidoras de cinase do receptor I de TGF-β.

Os compostos de acordo com a invenção preferivelmente exi- bem uma atividade biológica vantajosa, que é demonstrada facilmente em ensaios com base em enzima, por exemplo, ensaios como descrito aqui. Em tais ensaios com base em enzima, os compostos de acordo com a invenção preferivelmente exibem e causam um efeito inibidor, que normalmente é do- cumentado por valores de IC5o em uma faixa adequada, preferivelmente na faixa micromolar e mais preferivelmente na faixa nanomolar.

Como discutido nisto, estas séries de reações de sinalização são relevantes para várias doenças. Conseqüentemente, os compostos de acordo com a invenção são úteis na profilaxia e/ou tratamento de doenças que são dependentes das referidas séries de reações de sinalização por interação com uma ou mais séries de reações de sinalização.

A presente invenção, portanto, se refere aos compostos de a- cordo com a invenção como promotores ou inibidores, preferivelmente como inibidores, das séries de reações de sinalização descritas aqui. A invenção, portanto, preferivelmente refere-se a compostos de acordo com a invenção como promotores ou inibidores, preferivelmente como inibidores, das séries de reações de sinalização de TGF-β.

A presente invenção, além disso, refere-se ao uso de um ou mais compostos de acordo com a invenção no tratamento e/ou profilaxia de doenças, preferivelmente as doenças descritas aqui, que são causadas, mediadas e/ou propagadas por uma atividade de TGF-β aumenta.

A presente invenção, portanto, refere-se a compostos de acordo com a invenção como medicamentos e/ou ingredientes ativos de medica- mento no tratamento e/ou profilaxia das referidas doenças e ao uso de compostos de acordo com a invenção para a preparação de um farmacêuti- co para o tratamento e/ou profilaxia das referidas doenças bem como a um método para o tratamento das referidas doenças que compreendem a ad- ministração de um ou mais compostos de acordo com a invenção a um pa- ciente em necessidade de uma tal administração.

O hospedeiro ou paciente podem pertencer a qualquer espécie de mamífero, por exemplo, uma espécie primata, particularmente seres hu- manos; roedores, incluindo camundongos, ratos e hamsters; coelhos; cava- los, vacas, cachorros, gatos, etc. Modelos de animal são de interesse para investigações experimentais, fornecendo um modelo para tratamento de do- ença humana.

A suscetibilidade de uma célula particular ao tratamento com os compostos de acordo com a invenção pode ser determinada por testes in vitro. Tipicamente, uma cultura da célula é combinada com um composto de acordo com a invenção em várias concentrações durante um período de tempo que é suficiente para permitir os agentes ativos induzir a morte celular ou inibir a migração, normalmente entre cerca de uma hora e uma semana. Teste in vitro pode ser realizado empregando-se células cultivadas a partir de uma amostra de biópsia. As células viáveis que permanecem depois do tratamento são, em seguida, contadas.

A dose varia enquanto dependendo do composto específico empregado, da doença específica, do estado do paciente, etc. A dose tera- pêutica é tipicamente consideravelmente suficiente para reduzir a população celular indesejada no tecido alvo enquanto a viabilidade do paciente é man- tida. O tratamento é geralmente continuado até que" uma redução conside- rável tenha ocorrido, por exemplo, uma redução de pelo menos cerca de 50% na carga de célula, e pode ser continuado até que essencialmente mais nenhuma célula indesejada seja detectada no corpo.

Para identificação de uma série de reação de transdução de si- nal e para detecção de interações entre várias séries de reações de trans- dução de sinal, vários cientistas desenvolveram modelos adequados ou sis- temas modelo, por exemplo, modelos de cultura celular (por exemplo, Khwa- ja e outross, EMBO, 1997, 16, 2783-93) e modelos de animais transgênicos (por exemplo, White e outross, Oncogene, 2001, 20, 7064-7072). Para a determinação de certos estágios na cascata de transdução de sinal, com- postos de interação podem ser utilizados a fim de modular o sinal (por e- xemplo, Stefens e outross, Biochemical J., 2000, 351, 95-105). Os compos- tos de acordo com a invenção podem da mesma forma ser empregados como reagentes para testar séries de reações de transdução de sinal de- pendentes de cinase em animais e/ou modelos de cultura celular ou nas doenças clínicas mencionadas neste pedido de patente.

Medida da atividade de cinase é uma técnica que é bem- conhecida pela pessoa versada na técnica. Sistemas de teste genéricos para a determinação da atividade de cinase empregando-se substratos, por exemplo, histona (por exemplo, Alessi e outross, FEBS Lett. 1996, 399, 3, páginas 333-338) ou a proteína de mielina básica, são descritos na literatura (por exemplo, Campos-González, R. e Glenney, Jr., J.R. 1992, J. Biol. Chem. 267, página 14535).

Para a identificação de inibidores de cinase, vários sistemas de ensaio estão disponíveis. Em ensaio de proximidade por cintilação (Sorg e outross, J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19) e ensaio em placa instantânea , a fosfoforilação radioativa de uma proteína ou peptídeo como substrato com γΑΤΡ é medida. Na presença de um composto inibitório, um sinal radioativo diminuído, ou absolutamente nenhum, é detectável. Além disso, transferência de energia de ressonância de fluorescência resolvida com o tempo homogênea (HTR-FRET) e tecnologias de polarização de fluo- rescência (FP) são adequadas como métodos de ensaio (Sills, e outros J. of. Biomolecular Screening, 2002, 191-214).

Outro método de ensaio ELISA não radioativo usa fosfo- anticorpos específicos (fosfo-ABs). O fosfo-AB liga apenas o substrato fosfo- rilado. Esta ligação pode ser detectada por quimioluminescência empregan- do um segundo anticorpo anti-ovelha conjugado por peroxidase (Ross e ou- tross, 2002, Biochem. J.) justamente a cerca de ser publicado, manuscrito BJ20020786).

Técnica Anterior

Compostos " B2", " B3", " B4", " B5", " B8", " B9", " B10", " B12", " B14", "B16", "B17", "B19", "B20" são descritos em DE 2 409 308 como in- gredientes ativos de medicamento que têm um efeito analgésico e/ou infla- matório.

Compostos "B1", "B6", "B7", "B11", "B13", "B15", "B18", "B21", "B22" foram descritos por E. Szarvasi e outross, em Eur. J. Med. 1978, 13, 113-119, como ingredientes ativos de medicamento que têm um ação anal- gésico e/ou antiinflamatória.

Outras triazolo-1,5-benzodiazepinas são conhecidas a partir de DE 2 318 673.

L. Kosychova e outross, in Chemistry of Heterocyclic Com- pounds, Vol. 40, 811-815 (2004) descrevm outros 5,6-diidro-4H-1,2,4- triazolo-a]-1,5benzodiazepina para combater tumores.

V. Ambrogi e outross, em J. Heterocyclic Chem. 31, 1349-1352 (1994) descrevem derivados de 4,5-diidro-s-triazolo[3,4-d]-1,5- benzotiazepina contendo enxofre.

V. Ambrogi e outross, em Il Farmaco 48, 665-676 (1993) des- crevem 1,4-benzotiazinas e 1,5-benzotiazepinas tendo uma ação no sistema nervoso central.

Outros derivados de triazol são descritos como inibidores de TGF-beta em WO 03/042211 A1.

Ainda outros derivados triazol são conhecidos como inibidores de TGF-beta em WO 2004/026307 A1.

Derivados de pirrol bicíclicos são descritos como inibidores de TGF-beta em WO 02/094833.

Sumario da Invenção

A invenção se refere aos compostos selecionados a partir do grupo

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e derivados farmaceuticamente utilizáveis, solvatos, sais, tautômeros e este- reoisômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações.

A invenção da mesma forma se refere às formas opticamente ativas (estereoisômeros), os enantiômeros, os racematos, os diastereôme- ros e os hidratos e solvatos destes compostos. O termo solvatos dos com- postos é empregado para indicar aduções de moléculas de solvente inertes sobre os compostos que formam-se devido à sua força atrativa mútua. Sol- vatos são, por exemplo, mono ou diidratos ou alcóxidos.

O termo derivados farmaceuticamente utilizáveis é empregado para indicar, por exemplo, os sais dos compostos de acordo com a invenção e da mesma forma assim chamados compostos de pró-fármaco.

O termo derivados de pró-fármaco é empregado para indicar os compostos de acordo com a invenção que foram modificados por meios de, por exemplo, grupos alquila ou acila, açúcares ou oligopeptídeos e que são rapidamente clivados no organismo para formar os compostos eficazes de acordo com a invenção. Estes da mesma forma incluem derivados de polí- mero biodegradáveis dos compostos de acordo com a invenção, como des- crito, por exemplo, em Int. J. Pharm. 115. 61 -67 (1995).

A expressão "quantidade eficaz" denota a quantidade de um medicamento ou de um ingrediente ativo farmacêutico que causa em um tecido, sistema, animal ou ser humano uma resposta biológica ou médica que é buscada ou desejada, por exemplo, por pesquisador ou médico.

Além disso, a expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" denota uma quantidade que, comparada com um indivíduo correspondente que não recebeu esta quantidade, tem a seguinte conseqüência: tratamento melhorado, cura, prevenção ou eliminação de uma doença, sín- drome, condição, enfermidade, distúrbio ou efeitos colaterais ou da mesma forma a redução no avanço de uma doença, enfermidade ou distúrbio.

A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" da mesma forma abrange as quantidades que são eficazes para aumentar a função fisiológica normal.

A invenção da mesma forma se refere ao uso de misturas dos compostos de acordo com a invenção, por exemplo, misturas de dois diaste- reômeros, por exemplo, na relação 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 ou 1:1000.

Estas são particularmente preferivelmente misturas de compos- tos estereoisoméricos.

Os compostos de acordo com a invenção e da mesma forma os materiais de partida para sua preparação são, além disso, preparados por métodos conhecidos por si próprios, como descrito na literatura (por exem- plo, nos trabalhos padrão, tal como Houben-Weyl, Methoden der organis- chen Chemie [Methods of Organic Chemistry], Georg-Thieme-Verlag, Stutt- gart), precisos sob condições de reação que são conhecidas e adequadas para as referidas reações. Uso pode da mesma forma ser feito aqui a partir de variantes conhecidas por si próprias que não são mencionadas aqui em maiores detalhes.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser preferivel- mente obtidos reagindo-se derivados de tetraidrobenzo[b][1,4]diazepina-2- tiona com carboidrazidas

A reação geralmente é realizada em um solvente inerte.

Dependendo das condições empregadas, o tempo de reação está entre alguns minutos e 14 dias, a temperatura de reação está entre cerca de 15° e 150°, normalmente entre 30° e 130°, particularmente preferi- velmente entre 60° e 120°C.

Solventes inertes adequados são, por exemplo, hidrocarbone- tos, tais como hexano, éter de petróleo, benzeno, tolueno ou xileno; hidro- carbonetos clorados, tal como tricloroetileno, 1,2-dicloroetano, tetracloreto de carbono, clorofórmio ou diclorometano; álcoois, tal como metanol, etanol, isopropanol, n-propanol, n-butanol ou terc-butanol; éteres, tal como éter die- tílico, éter diisopropílico, tetraidrofurano (THF) ou dioxano; éteres de glicol, tais como éter monoetílico ou monometílico de etileno glicol, éter dimetílico de etileno glicol (diglima); cetonas, tal como acetona ou butanona; amidas, tal como acetamida, dimetilacetamida ou dimetilformamida (DMF); nitrilos, tal como acetonitrila; sulfóxidos, tal como dimetil sulfóxido (DMSO); dissulfe- to de carbono; ácidos carboxílicos, tal como ácido fórmico ou ácido acético; compostos de nitro, tal como nitrometano ou nitrobenzeno; ésteres, tal como acetato de etila, ou misturas dos referidos solventes.

Preferência particular é dada a 1-butanol.

Adequado para a clivagem de éteres é o tratamento com tribro- meto de boro sob condições padrão. Sais farmacêuticos e outras formas

Os referidos compostos de acordo com a invenção podem ser empregados em sua forma de não sal final. Por outro lado, a presente in- venção da mesma forma abrange o uso destes compostos na forma de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que podem ser derivados a partir de vá- rios ácidos orgânicos e inorgânicos e bases por procedimentos conhecidos na técnica. Formas de sal farmaceuticamente aceitável dos compostos de acordo com a invenção são a maior parte preparadas por métodos conven- cionais. Se o composto de acordo com a invenção contém um grupo carbo- xila, um de seus sais adequados pode ser formado reagindo-se o composto com uma base adequada para produzir o sal de adição de base correspon- dente. Tais bases são, por exemplo, hidróxidos de metal alcalino, incluindo hidróxido de potássio, hidróxido de sódio e hidróxido de lítio; hidróxidos de metal alcalino-terroso, tais como hidróxido de bário e hidróxido de cálcio; alcóxidos de metal alcalino, por exemplo, etóxido de potássio e peróxido de sódio; e várias bases orgânicas, tal como piperidina, dietanolamina e N- metilglutamina. Os sais de alumínio dos compostos de acordo com a inven- ção são igualmente incluídos. No caso de certos compostos de acordo com a invenção, sais de adição de ácido podem ser formados tratando-se estes compostos com ácidos orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitá- veis, por exemplo, haletos de hidrogênio, tal como cloreto de hidrogênio, brometo de hidrogênio ou iodeto de hidrogênio, outros ácidos minerais e sais correspondentes destes, tal como sulfato, nitrato ou fosfato e similares, e alquil e monoarilsulfonatos, tais como etanossulfonato, toluenossulfonato e benzenossulfonato, e outross ácidos orgânicos e sais correspondentes destes, tais como acetato, trifluoroacetato, tartarato, maleato, succinato, ci- trato, benzoato, salicilato, ascorbato e similares. Desta maneira, sais de adi- ção de ácido farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção incluem os seguintes: acetato, adipato, alginato, arginato, asparta- to, benzoato, benzenossulfonato (besilato), bissulfato, bissulfito, brometo, butirato, canforato, canforsulfonato, caprilato, cloreto, clorobenzoato, citrato, ciclopentanopropionato, digliconato, diidrogenofosfato, dinitrobenzoato, do- decilsulfato, etanossulfonato, fumarato, galacterato (de ácido múcico), galac- turonato, glicoeptanoato, gliconato, glutamato, glicerofosfato, hemissuccina- to, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato, iodeto, isetionato, isobutirato, lactato, lactobionato, malato, maleato, malonato, mandelato, metafosfato, metanos- sulfonato, metilbenzoato, monoidrogenofosfato, 2-naftalenossulfonato, nico- tinato, nitrato, oxalato, oleato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilacetato, 3-fenilpropionato, fosfato, fosfonato, ftalato, porém estes não representam uma restrição.

Além disso, os sais de base dos compostos de acordo com a invenção incluem sais de alumínio, amônio, cálcio, cobre, ferro(III), ferro(II), lítio, magnésio, manganês(III), manganês(II), potássio, sódio e zinco, porém estes não são pretendido representar uma restrição. Dos sais mencionados acima, preferência é dada a amônio; os sais de metal alcalino, sódio e po- tássio, e os sais de metal alcalino-terroso, cálcio e magnésio. Sais dos com- postos de acordo com a invenção que são derivados a partir de bases não tóxicas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas pri- márias, secundárias e terciárias, da mesma forma aminas substituídas, in- cluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, e resinas de troca iônica básica, por exemplo, arginina, betaína, cafeína, cloroprocaí- na, colina, Ν,Ν'-dibenziletilenodiamina (benzatina), dicicloexilamina, dietano- lamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glicamina, glicosamina, his- tidina, hidrabamina, isopropilamina, lidocaína, lisina, meglumina, N-metil-D- glicamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietanolamina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina e tris(hidroximetil)metilamina (trometamina), porém estas não estão destina- das a representar uma restrição.

Compostos da presente invenção que contém grupos contendo nitrogênio básicos podem ser quaternizados empregando-se agentes tais como haletos de (C1-C4)alquila, por exemplo, metila, etila, isopropila e clore- to de terc-butila, brometo e iodeto; sulfatos de di(C1-C4)alquila, por exemplo, dimetil, dietil e diamil sulfato; haletos de (C10-C18)alquila, por exemplo, clore- to de decila, dodecila, laurila, miristila e estearila, brometo e iodeto; e hale- tos de aril(C1-C4)alquila, por exemplo, cloreto de benzila e brometo de feneti- la. Tanto os compostos solúveis em água quanto em óleo de acordo com a invenção podem ser preparados empregando-se tais sais.

Os sais farmacêuticos mencionados acima que são preferidos incluem acetato, trifluoroacetato, besilato, citrato, fumarato, gliconato, he- missuccinato, hipurato, cloridrato, bromidrato, isetionato, mandelato, me- glumina, nitrato, oleato, fosfonato, pivalato, fosfato de sódio, estearato, sul- fato, sulfossalicilato, tartarato, tiomalato, tosilato e trometamina, porém estes não estão destinados a representar uma restrição.

Os sais de adição de ácido de compostos básicos de acordo com a invenção são preparados trazendo-se a forma de base livre em con- tato com uma quantidade suficiente do ácido desejado, causando a forma- ção do sal de uma maneira convencional. A base livre pode ser regenerada trazendo-se a forma de sal em contato com uma base e isolando-se a base livre de uma maneira convencional. As formas de base livre diferem-se em um certo respeito das formas de sal correspondentes destas com respeito à certas propriedades físicas, tal como solubilidade em solventes polares; para o propósito da invenção, entretanto, os sais de outra maneira correspondem às formas de base livre respectivas destes.

Como mencionado, os sais de adição de base farmaceutica- mente aceitáveis dos compostos de acordo com a invenção são formados com metais ou aminas, tais como metais alcalinos e metais alcalino-terrosos ou aminas orgânicas. Metais preferidos são sódio, potássio, magnésio e cál- cio. Aminas orgânicas preferidas são Ν,Ν'-dibenziletilenodiamina, cloropro- caína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, N-metil-D-glicamina e procaína.

Sais de adição de base de compostos ácidos de acordo com a invenção são preparados trazendo-se a forma de ácido livre em contato com uma quantidade suficiente da base desejada, causando a formação do sal de uma maneira convencional. O ácido livre pode ser regenerado trazendo- se a forma de sal em contato com um ácido e isolando-se o ácido livre de uma maneira convencional. As formas de ácido livre diferem-se em um certo respeito das formas de sal correspondentes destes com respeito à certas propriedades físicas, tal como solubilidade em solventes polares; para o propósito da invenção, entretanto, os sais de outra maneira correspondem às formas de ácido livre respectivas destes.

Se um composto de acordo com a invenção contém mais do que um grupo que é capaz de formar sais farmaceuticamente aceitáveis deste tipo, a invenção da mesma forma abrange sais múltiplos. Formas de sal múltiplas típicas incluem, por exemplo, bitartarato, diacetato, difumarato, dimeglumina, difosfato, dissódio e triid rocio reto, porém estes não estão des- tinados a representar uma restrição.

Com respeito a isto acima declarado, pode ser visto que a ex- pressão "sal farmaceuticamente aceitável" no presente contexto é emprega- da para indicar um ingrediente ativo que compreende um composto de a- cordo com a invenção na forma de um de seus sais, em particular se esta forma de sal concede propriedades farmacocinéticas melhoradas no ingre- diente ativo comparadas com a forma livre do ingrediente ativo ou qualquer outra forma de sal do ingrediente ativo empregado anteriormente. A forma de sal farmaceuticamente aceitável do ingrediente ativo pode da mesma forma fornecer este ingrediente ativo pela primeira vez com uma proprieda- de farmacocinética desejada que não teve anteriormente e pode ainda ter uma influência positiva nas farmacodinâmicas deste ingrediente ativo com respeito a sua eficácia terapêutica no corpo.

A invenção, além disso, se refere aos medicamentos que com- preendem pelo menos um composto de acordo com a invenção e/ou deriva- dos farmaceuticamente utilizáveis, solvatos e estereoisômeros destes, inclu- indo misturas destes em todas as relações, e opcionalmente excipientes e/ou adjuvantes.

Formulações farmacêuticas podem ser administradas na forma de unidades de dosagem que compreendem uma quantidade predetermina- da de ingrediente ativo por unidade de dosagem. Uma tal unidade pode compreender, por exemplo, 0,5 mg a 1 g, preferivelmente 1 mg a 700 mg, particularmente preferivelmente 5 mg a 100 mg, de um composto de acordo com a invenção, dependendo da condição tratada, do método de adminis- tração e da idade, peso e condição do paciente, ou formulações farmacêuti- cas podem ser administradas na forma de unidades de dosagem que com- preendem uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo por unidade de dosagem. Formulações de unidade de dosagem preferidas são aquelas que compreendem uma dose diária ou dose em parte, como indicado acima, ou uma fração correspondente deste de um ingrediente ativo. Além disso, formulações farmacêuticas deste tipo podem ser preparadas empregando- se um processo que é geralmente conhecido na técnica farmacêutica.

Formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para adminis- tração por meio de qualquer método adequado desejado, por exemplo, por métodos orais (incluindo bucal ou sublingual), retal, nasal, tópico (incluindo bucal, sublingual ou transdérmico), vaginal ou parenteral (incluindo subcutâ- neo, intramuscular, intravenoso ou intradérmico). Tais formulações podem ser preparadas empregando-se todos os processos conhecidos na técnica farmacêutica, por exemplo, combinando-se o ingrediente ativo com o(s) ex- cipiente(s) ou adjuvante(s).

Formulações farmacêuticas adaptadas podem ser administradas para administração oral como unidades separadas, tais como, por exemplo, cápsulas ou comprimidos; pós ou grânulos; soluções ou suspensões em líquidos aquosos ou não aquosos; espumas comestíveis ou alimentos com espuma; ou emulsões líquidas de óleo-em-água ou emulsões líquidas de água-em-óleo.

Desse modo, por exemplo, no caso de administração oral na forma de um comprimido ou cápsula, o componente de ingrediente ativo pode ser combinado com um excipiente inerte farmaceuticamente aceitável oral, não tóxico, tais como, por exemplo, etanol, glicerol, água e similares. Pós são preparados fragmentando-se o composto em um tamanho fino a- dequado e misturando-se com um excipiente farmacêutico fragmentado de uma maneira similar, tal como, por exemplo, um carboidrato comestível, tal como, por exemplo, amido ou manitol. Um flavorizante, conservante, disper- sante e tintura podem igualmente estar presentes.

Cápsulas são produzidas preparando-se uma mistura em pó como descrito acima e preenchendo-se as cascas de gelatina moldadas com esta. Deslizantes e lubrificantes, tais como, por exemplo, ácido silícico altamente disperso, talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio ou polietileno glicol em forma sólida, podem ser adicionados à mistura em pó antes da operação de preenchimento. Um desintegrante ou solubilizante, tal como, por exemplo, ágar-ágar, carbonato de cálcio ou carbonato de sódio, pode igualmente ser adicionado a fim de melhorar a disponibilidade do me- dicamento depois que a cápsula foi tomada.

Além disso, se desejado ou necessário, aglutinantes adequados, lubrificantes e desintegrantes bem como tinturas podem igualmente ser in- corporados na mistura. Aglutinantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais, tal como, por exemplo, glicose ou beta-lactose, adoçan- tes feitos a partir de milho, borracha natural e sintética, tal como, por exem- plo, acácia, tragacanto ou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietileno glicol, ceras, e similares. Os lubrificantes empregados nestas formas de do- sagem incluem oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio e similares. Os desin- tegrantes incluem, sem estar restrito a estes, amido, metilcelulose, ágar, bentonita, goma xantana e similares. Os comprimidos são formulados por, por exemplo, preparando-se uma mistura em pó, granulando-se ou pres- sando-se à seco a mistura, adicionando-se um lubrificante e um desinte- grante e pressando-se a mistura total para produzir os comprimidos. Uma mistura em pó é preparada misturando-se o composto fragmentado de uma maneira adequada com um diluente ou uma base, como descrito acima, e opcionalmente com um aglutinante, tal como, por exemplo, carboximetilcelu- lose, um alginato, gelatina ou polivinilpirrolidona, um retardante de dissolu- ção, tal como, por exemplo, parafina, um acelerador de absorção, tal como, por exemplo, um sal quaternário, e/ou um absorvente, tal como, por exem- plo, bentonita, caulim ou fosfato de dicálcio. A mistura em pó pode ser gra- nulada umedecendo-se com um aglutinante, tal como, por exemplo, xarope, pasta de amido, acadia mucilagem ou soluções de celulose ou materiais de polímero e pressando-se através de uma peneira. Como uma alternativa para granulação, a mistura em pó pode ser conduzida através de uma má- quina de comprimido, produzindo-se pedaços de forma não uniforme, que são quebrados para formar grânulos. Os grânulos podem ser lubrificados por adição de ácido esteárico, um sal de estearato, talco ou óleo mineral a fim de prevenir aderência aos moldes de fundição de comprimido. A mistura lubrificada é em seguida prensada para produzir os comprimidos. Os com- postos de acordo com a invenção podem da mesma forma ser combinados com um excipiente inerte de fluxo livre e em seguida prensados diretamente para produzir comprimidos sem realizar as etapas de granulação ou pren- sando-se à seco. Uma camada protetora transparente ou opaca consistindo em uma camada de selagem de goma-laca, uma camada de açúcar ou ma- terial de polímero e uma camada de brilho de cera pode estar presente. Tin- turas podem ser adicionadas a estes revestimentos para que possam ser capazes de diferenciar-se entre unidades de dosagem diferentes.

Líquidos orais, tais como, por exemplo, solução, xaropes e elixi- res, podem ser preparados na forma de unidades de dosagem de forma que uma determinada quantidade compreenda uma quantidade pré-especificada do composto. Xaropes podem ser preparados dissolvendo-se o composto em uma solução aquosa com um flavorizante adequado, enquanto elixires são preparados empregando-se um veículo alcoólico não tóxico. Suspen- sões podem ser formuladas por dispersão do composto em um veículo não tóxico. Solubilizantes e emulsificantes, tais como, por exemplo, álcoois de isoestearila etoxilados e éteres de sorbitol de polioxietileno, preservativos, aditivos de sabor, tal como, por exemplo, óleo de hortelã-pimenta ou ado- çantes naturais ou sacarina,, ou outros adoçantes artificiais e similares, po- dem igualmente ser adicionados.

As formulações de unidade de dosagem para administração oral podem, se desejado, ser encapsuladas em microcápsulas. A formulação pode da mesma forma ser preparada de uma tal maneira que a liberação é prolongada ou retardada, tal como, por exemplo, por revestimento ou com- binação de material particulado em polímeros, cera e similares.

Os compostos de acordo com a invenção e sais, solvatos e deri- vados fisiologicamente funcionais destes podem da mesma forma ser admi- nistrados na forma de sistemas de liberação de lipossoma, tais como, por exemplo, vesículas unilamelares pequenas, vesículas unilamelares grandes e vesículas multilamelares. Lipossomas podem ser formados a partir de vá- rios fosfolipídios, tal como, por exemplo, colesterol, estearilamina ou fosfati- dilcolinas.

Os compostos de acordo com a invenção e os sais, solvatos e derivados fisiologicamente funcionais destes podem da mesma forma ser liberados empregando-se anticorpos monoclonais como veículos individuais aos quais as moléculas de composto são acopladas. Os compostos podem da mesma forma ser acoplados a polímeros solúveis como veículos de me- dicamento alvejado. Tais polímeros podem abranger polivinilpirrolidona, co- polímero de pirano, poliidroxipropilmetacrilamidofenol, poliidroxietilasparta- midofenol ou polilisina de oxido de polietileno, substituídos por radicais de palmitoíla. Os compostos podem, além disso, ser acoplados a uma classe de polímeros biodegradáveis que são adequados para obter a liberação con- trolada de um medicamento, por exemplo, ácido poliláctico, poli-épsilon- caprolactona, ácido poliidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetais, polidiidro- xipiranos, policianoacrilatos e copolímeros de bloco antipáticos ou reticula- dos de hidrogéis.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração transdérmica podem ser administradas como emplastros independentes pa- ra contato íntimo, prolongado com a epiderme do recipiente. Desse modo, por exemplo, o ingrediente ativo pode ser liberado a partir do emplastro por iontoforese, como descrito em termos gerais em Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Compostos farmacêuticos adaptados para administração tópica podem ser formulados como ungüentos, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, sprays, aerossóis ou óleos.

Para o tratamento do olho ou outro tecido externo, por exemplo, boca e pele, as formulações são preferivelmente aplicadas como ungüento tópico ou creme. No caso de formulação para produzir um ungüento, o in- grediente ativo pode ser empregado com uma base parafínica ou em creme miscível em água. Alternativamente, o ingrediente ativo pode ser formulado para produzir um creme com uma base em creme de óleo-em-água ou uma base de água-em-óleo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para aplicação tópica ao olho incluem colírios, em que o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso em um veículo adequado, em particular um solvente aquoso.

Formulações farmacêuticas adaptadas para aplicação tópica na boca abrangem trociscos, pastilhas e anti-séptico-bucal.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração retal podem ser administradas na forma de supositórios ou enemas.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração nasal em que a substância de veículo é um sólido compreendem um pó áspero tendo um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa 20-500 mícrons, que são administradas da maneira em que a inalação é empregada, isto é, por inalação rápida pelas passagens nasais a partir de um recipiente contendo o pó sustentado próximo ao nariz. Formulações adequadas para administra- ção como spray nasal ou gotas para o nariz com um líquido como substân- cia de veículo abrange soluções de ingrediente ativo em água ou óleo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração por inalação abrangem névoas ou pós finamente particulados, que podem ser geradas por vários tipos de dispensadores pressurizados com aerossóis, nebulizadores ou insufladores.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração vagi- nal podem ser administradas como pessários, tampões, cremes, géis, pas- tas, espumas ou formulações em spray.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração pa- renteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosas com- preendendo antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos por meio dos quais a formulação é tornada isotônica com o sangue do recipiente a ser tratado; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem compre- ender meios de suspensão e espessantes. As formulações podem ser ad- ministradas em recipientes de múltiplas doses e dose única, por exemplo, ampolas seladas e frascos , e armazenadas em estado de secagem por congelamento (liofilizada), de forma que apenas a adição do líquido de veí- culo estéril, por exemplo, água para propósitos de injeção, imediatamente antes do uso se necessário. Suspensões e soluções de injeção preparadas de acordo com a receita podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grâ- nulos e comprimidos.

Subentende-se que, além dos constituintes particularmente mencionados acima, as formulações podem da mesma forma compreender outros agentes habituais na técnica com respeito ao tipo particular de formu- lação; desse modo, por exemplo, formulações que são adequadas para ad- ministração oral podem compreender flavorizantes.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a invenção depende de vários fatores, incluindo, por exemplo, a idade e peso do animal, a condição precisa que requer tratamento, e sua severidade, a natureza da formulação e o método de administração, e é fi- nalmente determinado pelo veterinário ou doutor do tratamento. Entretanto, uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a invenção para o tratamento de crescimento neoplástico, por exemplo, carcinoma de cólon ou mama, está na faixa de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal do recipiente (mamífero) por dia e particularmente tipicamente na faixa de 1 a 10 mg/kg de peso corporal por dia. Desse modo, a quantidade atual por dia para um mamífero adulto pesando 70 kg normalmente está entre 70 e 700 mg, onde esta quantidade pode ser administrada como uma única dose por dia ou normalmente em uma série de doses em partes (tais, como, por exemplo, dois, três, quatro, cinco ou seis) por dia, de forma que a dose diária total se- ja a mesma. Uma quantidade eficaz de um sal ou solvato ou de um derivado fisiologicamente funcional deste pode ser determinada como a fração da quantidade eficaz do composto de acordo com a invenção por si próprio. Pode ser assumido que doses similares são adequadas para o tratamento de outras condições mencionadas acima.

A invenção, além disso, se refere aos medicamentos compreen- dendo pelo menos um composto de acordo com a invenção e/ou derivados farmaceuticamente utilizáveis, solvatos e estereoisômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações, e pelo menos um outro ingrediente ativo de medicamento.

A invenção da mesma forma se refere a um conjunto {kit) con- sistindo em pacotes separados de

(a) uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a invenção e/ou derivados farmaceuticamente utilizáveis, solvatos e esteroi- sômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações,

e

(b) uma quantidade eficaz de um outro ingrediente ativo de me- dicamento.

O conjunto compreende recipientes adequados, tais como cai- xas, frascos individuais, bolsas ou ampolas. O conjunto pode, por exemplo, compreender ampolas separadas, cada qual contendo uma quantidade efi- caz de um composto de acordo com a invenção e/ou derivados farmaceuti- camente utilizáveis, solvatos e esteroisômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações,

e uma quantidade eficaz de um outro ingrediente ativo de medicamento na forma dissolvida ou liofilizada.

USO

Os presentes compostos selecionados a partir do grupo

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e derivados farmaceuticamente utilizáveis, sais, solvatos, tautômeros e este- reoisômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações, são adequados como ingredientes ativos farmacêuticos para mamíferos, em particular para humanos, para a preparação de um medicamento para o tra- tamento e/ou combate de câncer, crescimento de tumor, crescimento metas- tático, fibrose, reestenose, infecção por HIV, Alzheimer, aterosclerose e/ou para promover a cicatrização de ferimento.

Preferência particular é dada ao uso para o tratamento de uma doença onde a doença é um tumor sólido.

O tumor sólido é preferivelmente selecionado a partir do grupo de tumores do epitélio escamoso, da bexiga, do estômago, dos rins, da ca- beça e pescoço, do esôfago, de cérvice, de tireóide, do intestino, do fígado, do cérebro, da próstata, do trato urogenital, do sistema linfático, do estôma- go, da Iaringe e/ou do pulmão.

O tumor sólido é, além disso, preferivelmente selecionado a par- tir do grupo adenocarcinoma pulmonar, carcinomas pulmonares de célula pequena, câncer pancreático, glioblastomas, carcinoma de cólon e carcino- ma de mama. Preferência é, além disso, dada ao uso para o tratamento de um tumor do sangue e sistema imune, preferivelmente para o tratamento de um tumor selecionado a partir do grupo de leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crônica, leucemia linfática aguda e/ou leucemia linfática crônica.

Os presentes compostos são da mesma forma adequados para combinação com agentes anti-câncer conhecidos. Estes agentes anti-câncer conhecidos incluem o seguinte: moduladores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor retinóide, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativos, inibidores de prenil-proteína transferase, inibidores de HMG-CoA reductase, inibidores de HIV protease, inibidores de transcriptase reversa e outros inibidores de angiogênese. Os presentes compostos são particularmente adequados para administraçao ao mesmo tempo que radioterapia. Os efeitos sinergísticos de inibição de VEGF em combinação com radioterapia foram descritos na técnica (vide WO 00/61186).

"Moduladores de receptor de estrogênio" se referem a compos- tos que interferem com ou inibem a ligação de estrogênio ao receptor, inde- pendente do mecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de estro- gênio incluem, porém não são limitados a, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY 117081, toremifeno, fuIvestranto, 2,2-dimetil propanoato de 4- [7-(2,2-dimetil-1 -oxopropóxi-4-metil-2-[4-[2-(1-piperidinil)etóxi]fenil]-2H-1 - benzopiran-3-il]fenila, 4,4'-diidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenilidrazona e SH646

"Moduladores de receptor de androgênio" se referem a compos- tos que interferem com ou inibem a ligação de androgênio ao receptor, in- dependente do mecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de an- drogênio incluem finasterida e outros inibidores de 5a-reductase, nilutamida, flutamida, bicalutamida, Iiarozol e acetato de abiraterona.

"Moduladores de receptor retinóide" se referem a compostos que interferem com ou inibem a ligação de retinóides ao receptor, indepen- dente do mecanismo. Exemplos de tais moduladores de receptor retinóide incluem bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cisretinóico, ácido 9-cisretinóico, a- difluorometiiornitina, ILX23-7553, trans-N-(4'-hidroxifenil)retinamida e N-4- carboxifenil-retinamida.

"Agentes citotóxicos" se referem a compostos que resultam na morte celular principalmente através de ação direta na função celular ou ini- bem ou interferem com miose celular, incluindo agentes de alquilação, fato- res de necrose de tumor, intercaladores, inibidores de microtubulina e inibi- dores de topoisomerase.

Exemplos de agentes citotóxicos incluem, porém não são limita- dos a, tirapazimina, sertenef, caquectina, ifosfamida, tasonermina, Ionidami- na, carboplatina, altretamina, prednimustina, dibromooduícitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatina, oxaliplatina, temozolomida, heptaplatina, estra- mustina, tosilato de improssulfano, trofosfamida, nimustina, cloreto de di- brospídio, pumitepa, lobaplatina, satraplatina, profiromicina, cisplatina, iro- fulveno, dexifosfamida, cis-aminadicloro(2-metilpiridina)platina, benzilguani- na, glufosfamida, GPX100, tetracloreto (trans,trans,trans)bismu-(hexano-1,6- diamina)-mu-[diamina-platina(ll))]bis[diamina(cloro)platina(ll)], diarizidiniles- permina, trióxido arsênico, 1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7- dimetilxantina, zorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina, bisantreno, mitoxan- trona, pirarrubicina, pinafídeo, valrubicina, anrubicina, antineoplastona, 3'- deamino-S^morfolino^lS-deoxo-IO-hidroxicarminomicina,. anamicina, galar- rubicina, elinafídeo, MEN10755 e 4-demetóxi-3-deamino-3-aziridinil-4- metilsulfonildaunorrubicina (veja WO 00/50032).

Exemplos de inibidores de microtubulina incluem paclitaxel, sul- fato de vindesina, 3,,4,-didesidro-4,-desóxi-8'-norvincaleucoblastina, doceta- xol, rizoxina, dolastatina, isetionato de mivobulina, auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina, criptoficina, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3- flúor-4-metoxifenil)benzenossulfonamida, anidrovimblastina, N,N-dimetil-L- valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolinet-butilamida, TDX258 e BMS188797.

Inibidores de topoisomerase são, por exemplo, topotecano, hi- captamina, irinotecano, rubitecano, 6-etoxipropionil-3',4'-0-exobenzilideno- cartreusina, 9-metóxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5-kl]acridina-2-(6H) pro- panamina, 1-amino-9-etil-5-flúor-2,3 diidro-9-hidróxi-4-metil-1 H,12H- benzofdelpirano13',4':b,7]indolizino[1,2b]quinolina-10,13(9H,15H-diona, lur- totecano, 7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)camptotecina, BNP1350, BN- PM100, BN80915, BN80942, fosfato de etoposídeo, teniposídeo, sobuzoxa- no, 2'-dimetilamino-2'-desoxietoposídeo, GL331, N-[2-(dimetilamino)etil]-9- hidróxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a,5aB,8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidróxi- 3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a, 9-hexoidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3 d)-1,3 dioxol- 6-ona, 2,3-(metilenodióxi)-5-metil-7-hidróxi-8-metoxibenzo[c]fenantridínio, 6,9-bis[(2-aminoetil)amino]benzo[g]isoquinolina-5,10-diona, 5-(3-aminopro- pilamino)-7,10-diidróxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazolo[4,5,1-del· acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metóxi-9-oxo-9H-tioxanten-4- ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridina-4-carboxamida, 6-[[2- (dimetilamino)etil]amino]-3-hidróxi-7H-indeno[2,1 -c]quinolin-7-ona e dimesna.

"Agentes antiproliferativos" incluem oligonucleotídeos de RNA e DNA anti-sentido tais como G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 e INX3001 e antimetabólitos tais como enocitabina, carmofur, tegafur, pentos- tatina, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, oc- fosfato de citarabina, hidrato sódico de fosteabina, raltitrexed, paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nelzarabina, 2'- desóxi-2'-metilidenocitidina, 2'-fluorometileno-2'-deoxicitidina, N-[5-(2,3- diidrobenzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)uréia, N6-[4-desóxi-4-[N2- [2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-manoeptopiranosil]ade- nina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8- tetraidro-3H-pirimidino[5,4-b]-1,4-tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-L-glutâmico, aminopterina, 5-fluorouracila, alanosina, éster de ácido 11 -acetil-8- (carbamoiloximetil)-4-formil-6-metóxi-14-oxa-1,11-diazatetraciclo- (7,4,1,0,0)tetradeca-2,4,6-trien-9-ilacético, swainsonina, lometrexol, dexra- zoxano, metioninase, 2'-cianoo-2'-desóxi-N4-palmitoil-1-B-D-arabinofuranosil citosina e 3-aminopiridina-2-carboxaldeídotiosemicarbazona. "Agentes anti- proliferativos" da mesma forma incluem anticorpos monoclonais a fatores de crescimento diferentes daqueles listados sob "inibidores de angiogênese", tal como trastuzumab, e genes supressores de tumor, tal como p53, que pode ser liberado por meio de transferência de gene mediada por vírus re- combinante (vide Patente U.S. Nq 6.069.134, por exemplo).

Ensaio in-vitro (enzima) para determinação da eficácia de inibidores da inibi- ção de efeitos mediados por TGF-beta

Como um exemplo, a capacidade dos inibidores eliminar a inibi- ção de crescimento mediada por TGF-beta é testada.

Células da linhagem celular epitelial pulmonar MvILu são mos- tradas em uma densidade de célula definida em uma placa de microtítulo de 96 cavidades e cultivadas durante a noite sob condições padrões. No dia seguinte, o meio é substituído por meio que compreende 0,5% de FCS e 1 ng/ml de TGF-beta, e as substâncias teste são adicionadas em concentra- ções definidas, geralmente na forma de séries de diluição com etapas de 5 vezes. A concentração do DMSO de solvente é constante a 0,5%. Depois de mais dois dias, o manchamento com Crystal Violet das células é realizado. Depois da extração do Crystal Violet a partir das células fixas, a absorção é espectrofotometricamente medida em 550 nm. Pode ser empregado como uma medida quantitativa das células aderentes presentes e desse modo da proliferação celular durante a cultura.

Tabela 1: Inibicão de TGF-beta

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Ensaio celular para testar inibidores de cinase de receptor I de TGF-beta

O ensaio de cinase é realizado como ensaio de placa "flash" de 384 cavidades.

31,2 nM de GST-ALK5, 439 NM de GST-SMAD2 e 3 mM de ATP (com 0,3μ0ΐ de 33P-ATP/cavidade) são incubados em um volume total de 35μl (20 mM de HEPES, 10 mM de MgCI, 5 mM de MnCI, 1 mM de DTT1 0,1% de BSA, pH 7,4) sem ou com substância teste (5-10 concentrações) a 30°C durante 45 minutos. A reação é interrompida empregando-se 25μl de 200 mM de solução de EDTA, filtrada com sucção em temperatura ambiente depois de 30 minutos, e as cavidades são lavadas com 100 μl de solução de NaCI a 0,9% 3 vezes. Radioatividade é medida na TopCount. Os valores de IC50 são calculados empregando-se RS1.

Acima e abaixo, todas as temperaturas são indicadas em °C. Nos seguintes exemplos, "preparação convencional" indica: água é adicio- nada se necessário, o pH é ajustado, se necessário, a um valor entre 2 e 10, dependendo da constituição do produto final, a mistura é extraída com ace- tato de etila ou diclorometano, as fases são separadas, a fase orgânica é secada em sulfato de sódio e evaporada, e o produto é purificado por cro- matografia em sílica-gel e/ou por cristalização. Valores de Rf em sílica-gel; eluente: acetato de etila / metanol 9:1.

Espectrometria de massa (MS): El (ionização de impacto de elétron) M+

FAB (bombardeio de átomo rápido) (M+H)+ ESI (ionização de electrovaporização) (M+H)+

APCI-MS (ionização química de pressão atmosférica - espectrometria de massa) (M+H)+.

Tempo de retenção Rt [mini: Determinação é realizada por HPLC Coluna: Chromolith SpeedROD1 50 χ 4,6 mm2 (Ordem N9 1.51450.0001) de Merck

Gradiente: 5,0 min, t = 0 min, A:B = 95:5, t = 4.4 min: A:B = 25:75,

t = 4,5 min a t = 5,0 min: A:B = 0:100

Taxa de fluxo: 3,00 ml/min

Eluente A: água + 0,1 % de TFA (ácido trifluoroacético),

Eluente B: acetonitrila + 0,08% de TFA

Comprimento de onda: 220 nm

Exemplo 1

A preparação de (R,S)-8-hidróxi-4-metil-1-(6-metilpiridin-2-il)-5,6 diidro-4H-2,3,6,10b tetraazabenzo[e]azuleno (" A1") é analogamente reali zada ao seguinte esquema:

<formula>formula see original document page 92</formula>

1.1 Preparação de 5-metóxi-2-nitroanilina 10 g de 5-cloro-2-nitroanilina são dissovidos em 100 ml de me- tanol, e 32,3 g de metóxido de sódio são adicionados. A mistura de reação é aquecida na ebulição sob refluxo durante 18 horas. Depois de resfriar, a mistura é evaporada até a secura, 500 ml de água são adicionados, e o pro- duto bruto é isolado por filtração. A secagem produz 9,15 g de 5-metóxi-2- nitroanilina.

1.2 Preparação de ácido (R,S)-3-(5-metóxi-2-nitrofenilamino)-2- metilpropiônico

9,15 g de 5-metóxi-2-nitroanilina são dissolvidos em 60 ml de THF1 e 6,5 ml de 2-metacrilonitrila e 1,35 ml de uma solução a 40% de hi- dróxido de benziltrimetilamônio em metanol são adicionados. A mistura de reação é aquecida na ebulição durante cerca de 20 horas e, depois de res- friar, evaporada para produzir um resíduo oleoso. O produto bruto é dissol- vido em 400 ml de metanol e 150 ml de solução de hidróxido de sódio a 32% são adicionados. A mistura é aquecida na ebulição durante 3 horas, resfriada, evaporada e preparada, produzindo 8,9 g de ácido (R,S)-3-(5- metóxi-2-nitrofenilamino)-2-metilpropiônico como produto bruto.

1.3 Preparação de (R,S)-8-metóxi-4-metil-1-(6-metilpiridin-2-il)-5,6-diidro-4H- 2,3,6,10btetraazabenzo[e]azuleno

8,9 g do ácido (R,S)-3-(5-metóxi-2-nitrofenilamino)-2- metilpropiônico obtido são dissolvidos em 40 ml de água e 40 ml de ácido acético, 8,4 g de zinco (grosseiramente pulverizado) são adicionados, e a mistura é aquecida na ebulição durante 18 horas. Preparação aquosa pro- duz 2,35 g de (R,S)-7-metóxi-3-metil-1,3,4,5-tetraidrobenzo[b]-1,4-diazepin- 2-ona, que é reagido também sem purificação. Para esta finalidade, o produ- to bruto é dissolvido em 25 ml de piridina, 5,1 g de 2,4-bis(4-metoxifenil)- 2,4-ditioxo-1,3,2,4-ditiadifosfetano são adicionados, e a mistura é aquecida a 110°C durante 3 horas. Depois de resfriar, a mistura é submetida à prepara- ção aquosa, e o produto bruto é precipitado por adição de éter dietílico. A secagem produz 2,34 g de (R,S)-7-metóxi-3-metil-1,3,4,5-tetraidrobenzo[b]- 1,4-diazepina-2-tiona. Isto é aquecido a 110°C durante 17 horas junto com 6-metilpiridina-2-carboidrazida em 5 ml de 1 butanol. Depois do resfriamento e preparação aquosa, o produto bruto oleoso é purificado por meios de H- PLC preparativa, produzindo 78 mg de (R,S)-8-metóxi-4-metil-1-(6- metilpiridin-2-il)-5,6-diidro-4H-2,3,6,10btetraazabenzo[e]azuleno.

1.4 60 mg de (R,S)-8-metóxi-4-metil-1-(6-metilpiridin-2-il)-5,6-diidro- 4H-2,3,6,10btetraazabenzo[e]azuleno são dissolvidos em 2,5 ml de dicloro- metano, e 162 μΙ de tribrometo de boro são adicionados gota a gota. Depois. de 6 horas em temperatura ambiente, a mistura foi evaporada até a secura, e o produto bruto foi purificado por meios de HPLC preparativa, produzindo 40 mg de UA1D,

Os seguintes compostos são analogamente obtidos

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Os seguintes exemplos se referem aos medicamentos:

Exemplo A: Frascos de injeção

Uma solução de 100 g de um ingrediente ativo da fórmula I e 5 g de hidrogenofosfato dissódico em 3 I de água bidestilada é ajustada em pH 6,5 empregando-se 2 N de ácido clorídrico , filtrada estéril, transferida em frascos de injeção, liofilizada sob condições estéreis e selada sob con- dições estéreis. Cada frasco de injeção contém 5 mg de ingrediente ativo.

Exemplo B: Supositórios

Uma mistura de 20 g de um ingrediente ativo da fórmula I com 100 g de Iecitina de soja e 1400 g de manteiga de cacau é fundida, derra- mada em moldes e permitida resfriar. Cada supositório contém 20 mg de ingrediente ativo.

Exemplo C: Solução

Uma solução é preparada a partir de 1 g de um ingrediente ativo da fórmula I, 9,38 g de NaH2PO4 · 2 H2O, 28,48 g de Na2HPO4 · 12 H2O e 0,1 g de cloreto de benzalcônio em 940 ml de água bidestilada. O pH é ajus- tado em 6,8, e a solução é preparada em 1 I e esterilizada por irradiação. Esta solução pode ser empregada na forma de colírios.

Exemplo D: Ungüento

500 mg de um ingrediente ativo da fórmula I são misturados com 99,5 g de Vaselina sob condições assépticas. Exemplo Ε: Comprimidos

Uma mistura de 1 kg de ingrediente ativo da fórmula I, 4 kg de lactose, 1,2 kg de amido de batata, 0,2 kg de talco e 0,1 kg de estearato de magnésio é prensada de uma maneira convencional para produzir compri- midos de uma tal maneira que cada comprimido contém 10 mg de ingredien- te ativo.

Exemplo F: Dráqeas

Comprimidos são prensados analogamente ao Exemplo E e subseqüentemente revestidos de uma maneira convencional com um reves- timento de sacarose, amido de batata, talco, tragacanto e tintura. Exemplo G: Cápsulas

2 kg de ingrediente ativo da fórmula I são introduzidos em cáp- sulas de gelatina duras de uma maneira convencional de uma tal maneira que cada cápsula contenha 20 mg do ingrediente ativo. Exemplo H: Ampolas

Uma solução de 1 kg de ingrediente ativo da fórmula I em 60 I de água bidestilada é filtrada estéril, transferida em ampolas, Iiofilizada sob condições estéreis e selada sob condições estéreis. Cada ampola contém 10 mg de ingrediente ativo.

Claims (7)

1. Com postos selecionados a partir do grupo <table>table see original document page 125</column></row><table> Continuação. .. <table>table see original document page 126</column></row><table> <table>table see original document page 127</column></row><table> <table>table see original document page 128</column></row><table> <table>table see original document page 129</column></row><table> <table>table see original document page 130</column></row><table> <table>table see original document page 131</column></row><table> <table>table see original document page 132</column></row><table> <table>table see original document page 133</column></row><table> <table>table see original document page 134</column></row><table> <table>table see original document page 135</column></row><table> <table>table see original document page 136</column></row><table> <table>table see original document page 137</column></row><table> <table>table see original document page 138</column></row><table> <table>table see original document page 139</column></row><table> <table>table see original document page 140</column></row><table> <table>table see original document page 141</column></row><table> <table>table see original document page 142</column></row><table> <table>table see original document page 143</column></row><table> <table>table see original document page 144</column></row><table> <table>table see original document page 145</column></row><table> <table>table see original document page 146</column></row><table> <table>table see original document page 147</column></row><table> <table>table see original document page 148</column></row><table> <table>table see original document page 149</column></row><table> <table>table see original document page 150</column></row><table> e derivados farmaceuticamente utilizáveis, solvatos, sais, tautômeros e este- reoisômeros dos mesmos, incluindo misturas destes em todas as relações.

2. Medicamentos compreendendo pelo menos um composto como definido na reivindicação 1 e/ou derivados farmaceuticamente utilizá- veis, sais, solvatos, tautômeros e estereoisômeros destes, incluindo mistu- ras destes em todas as relações, e opcionalmente excipientes e/ou adjuvantes.

3. Uso de compostos selecionados a partir do grupo <table>table see original document page 150</column></row><table> <table>table see original document page 151</column></row><table> <table>table see original document page 152</column></row><table> <table>table see original document page 153</column></row><table> <table>table see original document page 154</column></row><table> <table>table see original document page 155</column></row><table> <table>table see original document page 156</column></row><table> <table>table see original document page 157</column></row><table> <table>table see original document page 158</column></row><table> <table>table see original document page 159</column></row><table> <table>table see original document page 160</column></row><table> <table>table see original document page 161</column></row><table> <table>table see original document page 162</column></row><table> <table>table see original document page 163</column></row><table> <table>table see original document page 164</column></row><table> <table>table see original document page 165</column></row><table> <table>table see original document page 166</column></row><table> <table>table see original document page 167</column></row><table> <table>table see original document page 168</column></row><table> <table>table see original document page 169</column></row><table> <table>table see original document page 170</column></row><table> <table>table see original document page 171</column></row><table> <table>table see original document page 172</column></row><table> <table>table see original document page 173</column></row><table> <table>table see original document page 174</column></row><table> <table>table see original document page 175</column></row><table> <table>table see original document page 176</column></row><table> <table>table see original document page 177</column></row><table> <table>table see original document page 178</column></row><table> <table>table see original document page 179</column></row><table> <table>table see original document page 180</column></row><table> <table>table see original document page 181</column></row><table> e derivados farmaceuticamente utilizaveis,sais, solvatos,tautomeros e este- reoisômeros destes, incluindo misturas destes em todas as relações, para a preparação de um medicamento para o tratamento e/ou combate de câncer, crescimento de tumor, crescimento metastático, fibrose, reestenose, infec- ção por HIV, Alzheimer, aterosclerose, e/ou para promover cicatrização de ferimento.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, onde o tumor é sele- cionado a partir do grupo de tumores do epitélio escamoso, da bexiga, do estômago, dos rins, da cabeça e pescoço, do esôfago, da cérvice, da tiróide, do intestino, do fígado, do cérebro, da próstata, do trato urogenital, do sis- tema linfático, do estômago, da laringe, do pulmão, adenocarcinoma pulmo- nar, carcínoma pulmonar de célula pequeno, câncer pancreático, glioblas- toma, carcinoma de cólon, carcinoma de mama, tumor do sangue e sistema imune, leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crônica, leucemia linfáti- ca aguda, leucemia linfática crônica.

5. Uso, de compostos de acordo com a reivindicação 3, e/ou sais fisiologicamente aceitáveis e solvatos destes para a preparação de um medicamento para o tratamento de tumores sólidos, onde uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 3 é administrada em combinação com um composto a partir do grupo 1) mo- dulador de receptor de estrogênio, 2) modulador de receptor de androgênio, 3) modulador de receptor retinóide, 4) agente citotóxico, 5) agente antiproli- ferativo, 6) inibidor de prenil-proteína transferase, 7) inibidor de HMG-CoA reductase, 8) inibidor de HIV protease, 9) inibidor de transcriptase reversa e 10) outro inibidor de angiogênese.

6.

Uso, de compostos de acordo com a reivindicação 3, e/ou sais fisiologicamente aceitáveis e solvatos destes para a preparação de um medicamento para o tratamento de tumores sólidos, onde uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a Reivindicação 3 é administrada em combinação com radioterapia e um composto a partir do grupo 1) modulador de receptor de estrogênio, 2) modulador de receptor de androgênio, 3) modulador de receptor retinóide, 4) agente citotóxico, 5) a- gente antiproliferativo, 6) inibidor de prenil-proteína transferase, 7) inibidor de HMG-CoA reductase, 8) inibidor de HIV protease, 9) inibidor de transcrip- tase reversa e 10) outro inibidor de angiogênese.