BRPI0622138A2

BRPI0622138A2 - compostos éteis para tratar distérbios neurodegenerativos

Info

Publication number: BRPI0622138A2
Application number: BRPI0622138-6A
Authority: BR
Inventors: Mark A Findeis
Original assignee: Satori Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-11-20
Filing date: 2006-11-20
Publication date: 2011-12-27
Also published as: AU2006350960B2; MX2009005351A; CA2670276A1; EP2073637A1; AU2006350960A1; JP2010510309A; WO2008063165A1; IL198856A0; CN101610673A; KR20090087075A; EP2073637A4

Abstract

COMPOSTOS éTEIS PARA TRATAR DISTéRBIOS NEURODEGENERATIVOS. A presente invenção refere-se a compostos que úteis para tratar ou diminuir a gravidade de um distúrbio neurodegenerativo. A presente invenção proporciona também métodos para tratar ou diminuir a gravidade de tais distúrbios, onde o método compreende administrar a um paciente um composto da presente invenção, ou uma composição deste. O dito método é útil para tratar ou diminuir a gravidade de, por exemplo, mal de Aízheimer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS ÚTEIS PARA TRATAR DISTÚRBIOS NEURODEGENERATIVOS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

O presente pedido é uma continuação em parte do Pedido de Patente US 11/434.726, depositado em 16 de maio de 2006, que reivindica prioridade do Pedido de Patente provisório US 60/681.662, depositado em 17 de maio de 2005, o qual é aqui incorporado a título de referência na ínte- gra.

Campo Técnico da Invenção

A presente invenção refere-se a compostos farmaceuticamente ativos que são úteis no tratamento ou na diminuição da gravidade de distúr- bios neurodegenerativos.

Antecedentes da Invenção

O papel central da forma longa do peptídeo-beta amiloide, em particular Αβ(1-42) na mal de Alzheimer foi estabelecido durante uma série de estudos histopatológicos, genéticos e bioquímicos. Vide Selkoe, DJ, Phy- siol Rev. 2001, 81:741-766, AIzheimer1S disease: genes, proteins, and the- rapy, e Younkin SG, J. Physiol Paris 1998, 92:289-92, The role of A beta 42 in Alzheimer's disease. Especificamente, foi descoberto que a deposição de Αβ(1-42) no cérebro é uma característica inicial e invariável de todas as for- mas do mal de Alzheimer. De fato, isto ocorre antes que um diagnóstico do mal de Alzheimer seja possível e antes do depósito da forma primária mais curta de Α-beta, Αβ(1-40). Vide Parvathy S, et al., Arch. Neurol. 2001, 58:2025-32, Correlation between Abetax-40-, Abetax-42, and Abetax-43- containing amyloid plaques and cognitive decline. Implicações adicionais de Αβ(1-42) na etiologia da doença vêm da observação de que mutações nos genes da presenilina (gama-secretase) associadas a formas do mal de Al- zheimer familiais de início prematuro resultam uniformemente em níveis au- mentados de Αβ(1-42). Vide Ishii K, et al Neurosci Lett. 1997, 228:17-20, Increased A beta 42(43)-plaque deposition in early-onset familial AIzheimer1S disease brains with the deletion of exon 9 and the missense point mutation (H163R) in the PS-1 gene. Mutações adicionais na proteína precursora da amiloide APP aumentam o total de Αβ e em alguns casos, aumentam so- mente Αβ(1-42). Vide Kosaka T1 et al Neurology1 48:741-5, The beta APP717 Alzheimer mutation increases the percentage of plasma amyloid- beta protein end at A beta 42(43). Ainda que as várias mutações de APP possam influenciar o tipo, quantidade e local de Αβ depositada, foi constata- do que espécies predominantes e iniciais depositadas no parênquima do cérebro é Αβ longa (Mann). Vide Mann DM, et al., "Am J Pathol. 1996, 148:1257-66, Predominant deposition of amyloid-beta 42(43) in plaques in cases of Alzheimer's disease and hereditary cerebral hemorrhage associated with mutations in the amyloid precursor protein gene".

Em depósitos iniciais de Αβ, quando a maior parte da proteína depositada está na forma de plaquetas amorfas ou difusas, virtualmente toda a Αβ está na forma longa. Vide Gravina SA1 et al., "J Biol Chemy 270:7013-6, Amyloid beta protein (A beta) in Alzheimer's disease brain. Biochemical and imunocytochemical analysis with antibodies specific for forms ending at A beta 40 or A beta 42(43); Iwatsubo et al., Am J Pathol. 1996, 149:1823-30, Full-Iength amyloid-beta (1-42(43)) and amino-terminally modified and trun- cated amyloid-beta 42(43) deposit in diffuse plaques; e Roher AE1 eta al., Proc Natl Acad Sci USA. 1993, 90:10836-40, beta-Amyloid-(1-42) is a major component of cerebrovascular amyloid deposits: implications for the patho- Iogy of Alzheimer disease. Esses depósitos iniciais de Αβ(1-42) são então capazes de semear o depósito adicional de ambas as formas curta e longa de Αβ. Vide Tamaoka, et al Biochem Biophys Res Commun. 1994, 205:834- 42, Biochemical evidence for the long-tail form (A beta 1-42/43) of amyloid beta protein as a seed molecule in cerebral deposits of Alzheimer's disease.

Em animais transgênicos que expressam Αβ, os depósitos eram associados a níveis elevados de Αβ(1-42), e o padrão do depósito é similar ao visto na doença humana com a Αβ (1-42) sendo depositada inicialmente seguida por deposição de Αβ(1-40). Vide Rockenstein E, et al J Neurosei Res. 2001, 66:573-82, Early formation of mature amyloid-beta protein depo- sits in a mutant APP transgenic model depends on leveis of Abeta(1-42); e Terai K, et al., Neuroscienee 2001, 104:299-310, beta-Amyloid deposits in transgenic mice expressing human beta-amyloid precursor protein have the same characteristics as those in AIzheimer1S disease. Padrões e tempos de depósito similares são encontrados em pacientes de síndrome de Down on- de a expressão de Αβ é elevada e o depósito é acelerado. Vide Iwatsubo T1 et al Ann Neurol. 1995, 37:294-9, Amyloid beta protein (A beta) deposition: A beta 42(43) precedes A beta 40 in Down syndrome.

Em conformidade, a redução seletiva de Αβ(1-42) assim emerge como uma estratégia específica para a doença pela redução do potencial de formação de amiloide de todas as formas de Αβ, atrasando ou parando os novos depósitos de Αβ, inibindo a formação de oligômeros tóxicos solúveis de Αβ, e desta forma atrasando ou parando a progressão da neurodegene- ração.

Sumário da Invenção

Como descrito aqui, a presente invenção fornece compostos úteis para o tratamento ou redução da gravidade de um distúrbio neurode- generativo. A presente invenção também fornece métodos para o tratamento ou redução da gravidade de tais distúrbios onde tal método compreende administrar a um paciente um composto da presente invenção, ou uma com- posição desta. O referido método é útil para o tratamento ou redução da gra- vidade do, por exemplo, mal de Alzheimer.

Breve Descrição dos Desenhos

A figura 1 retrata o espectro de RMN 1H das frações de cromato- grafia sat14-9 e sat14-10.

A figura 2 retrata o espectro de RMN 1H das frações de cromato- grafia sat14-11 e sat14-12.

A figura 3 retrata o espectro de RMN 1H das frações de cromato- grafia sat15-1 e sat15-2.

A figura 4 retrata o espectro de RMN 1H das frações de cromato- grafia sat15-4 e sat15-5.

A figura 5 retrata uma ampliação da separação do cromatogra- ma HPLC de fase reversa C-18 de sat15-5, onde os números 1 a 5 corres- pondem às janelas de tempo para as frações sat 16-1 a sat16-9. A figura 6 retrata o espectro de RMN 1H da porção sat16-3 cor- respondente ao composto 6, 98% puro.

A figura 7 retrata um sumário do fluxograma do protocolo de iso- lação 2.

A figura 8 retrata um traço de HPLC de extrato de erva de São

Cristóvão após HPLC semipreparativa.

A figura 9 retrata um traço de HPLC do composto 6 mostrando um pequeno pico de deacil.

A figura 10 retrata um traço de HPLC do composto 6.

A figura 11 retrata um espectro de massa do Composto-deacil 6.

A figura 12 retrata um RMN1H do Composto-deacil 6.

A figura 13 retrata um traço de HPLC do Composto 6.

A figura 14 retrata um RMN 1H(CD3OD) do Composto 6.

A figura 15 retrata um espectro de massa do Composto 6.

A figura 16 retrata o traço de HPLC do Composto 6 detectado a

205 nm isolado de acordo com o protocolo 2.

A figura 17 retrata o traço de HPLC do Composto 6 detectado a 230 nm isolado de acordo com o protocolo 2.

A figura 18 retrata o HPLC do Composto 6 detectado em ELSD.

A figura 19 retrata o espectro RMN1 H do Composto 6 detectado de acordo com o protocolo 2.

A figura 20 retrata o espectro de massa do Composto 6 isolado de acordo com o protocolo 2.

A figura 21 retrata o efeito determinado de IP-MS do Composto 6 sobre quantidades relativas de amiloide-beta (1-40), (1-42), (1-37), (1-38) e (1-39).

A figura 22 retrata o efeito determinado de IP-MS do Composto 6 sobre as quantidades de amiloide-beta (1-40), (1-42), (1-37), (1-38) e (1-39) no tipo selvagem e 717 células com mutação.

Descrição Detalhada de Certas Modalidades Da Invenção

1. Descrição Geral dos Compostos da Invenção.

De acordo com uma modalidade, a presente invenção fornece um composto da fórmula I:

<formula>formula see original document page 6</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

cada um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é indepen- dentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático; G é S, CH2, NRou O;

R1 e R2 são cada um, independentemente, halogênio, R, OR5 um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido ade- quadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C1^ opcionalmente substituído ou um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcial- mente insaturado ou arila tendo de 0 a 4 heteroátomos selecionados inde- pendentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, onde:

dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado ou arila tendo de 1 a 4 heteroá- tomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; η é 0-2;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR (CO)OR, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2; m é 0-2;

R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rn)3, R, OR1 um grupo hidroxila ade- quadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N (R)2, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2, ou:

quando R5 é T-C(R')3, T-C(R1)2C(R11)3, então R6 e um grupo R1 em R5 são opcionalmente tomados juntos para formar um anel 3 a 8 mem- bros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 heteroáto- mos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada onde até duas unidades de metileno de T são opcio- nal e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-;

cada R1 e R" é independentemente selecionado de R, OR1 SR1 SO2R1 OSO2R1 N(R)2l NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2,

R6 é halogênio, R, OR, SR, SO2R1 OSO2R1 N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados de ha- logênio, R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de

O a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-; e

R10 é R1 um grupo hidroxila adequadamente protegido, um grupo tiol adequadamente protegido, um grupo amino adequadamente protegido, um anel monocíclico de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; um anel bicíclico de 8 a 10 membros, satu- rado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 heteroátomos selecio- nados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; uma porção detectável, um resíduo de polímero, um peptídeo, ou uma porção contendo açúcar ou similar ao açúcar.

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção for- nece um composto da fórmula I:

<formula>formula see original document page 8</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

cada um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é indepen- dentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático;

G é S1CH2, NRou O;

R1 e R2 são cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamen- te protegido, N(R)2 ou um grupo amino adequadamente protegido, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, opcionalmen- te substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 he- teroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou en- xofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C1-6 opcionalmente substituído ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de 0 a 4 hete- roátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre, onde: dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de 1 a 4 hetero- átomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

né 0-2;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2

m é 0-2;

R5 é T-C(R1)3, T-C(R')2C(R")3l R, OR, um grupo hidroxila ade- quadamente protegido, SR1 um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R1 N(R)2l um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2l NR(CO)OR1 (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2Ou:

quando R5 é T-C(R1)3 ou T-C(R1)2C(Rn)3, então R6 e um grupo R' em R5 são opcionalmente tomados juntos para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de O a 2 hetero- átomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de T são op- cional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-;

cada R' e R" é independentemente selecionado de R, OR, SR1 SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R6 é halogênio, R1 OR1 SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N (R)2l NR(CO)OR1 (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados de R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado ou saturado; ou arila tendo de O a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de C-i-6 alquilideno opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, on- de até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-; e

R10 é R, um grupo hidroxila adequadamente protegido, um grupo tiol adequadamente protegido, um grupo amino adequadamente protegido, um anel monocíclico de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; um anel bicíclico de 8 a 10 membros, opcio- nalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; uma porção detectável, um resíduo de polímero, um peptídeo, ou uma porção contendo açúcar ou similar a açúcar, desde que tal composto seja diferente de: <formula>formula see original document page 11</formula>

2. Definições:

Os compostos desta invenção incluem aqueles descritos acima de maneira geral, e são adicionalmente ilustrados pelas modalidades, sub- modalidades e espécies reveladas aqui. Como utilizado aqui, as seguintes definições devem se aplicar a não ser que seja indicado o contrário. Para os propósitos desta invenção, os elementos químicos são identificados de a- cordo com a Tabela Periódica de Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a Ed. Adicionalmente, os princípios gerais de quí- mica orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, Uni- versity Science Books, Sausalito: 1999 e "MarchTs Advanced Organic Che- mistry", 5a edition., Ed. Smith, Μ. B. e March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, cujos conteúdo é aqui incorporado a título, na íntegra.

Como é definido acima de maneira geral, cada um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é independentemente saturado, parcialmen- te insaturado ou aromático. Deve se prezar o fato de que os compostos da presente invenção são contemplados como sendo compostos quimicamente exeqüíveis. Por conseguinte, deve ser entendido por aqueles versados na técnica que quando qualquer um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é insaturado, certos substituintes nesse anel estarão ausentes para que as regras da valência sejam satisfeitas. Por exemplo, se o Anel D é insaturado na ligação entre o Anel Deo Anel E, então R6 estará ausente. Alternativa- mente, se o Anel D é insaturado na ligação entre o Anel Deo Anel C, então R8 e R3 estarão ausentes. Todas as combinações de saturação e insatura- ção de qualquer um de Anel A, Anel B, Anel C1 Anel D e Anel E são contem- pladas pela presente invenção. Assim, para que regras gerais de valência sejam cumpridas, e dependendo do grau de saturação e insaturação de qualquer um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel Ε, o requisito da pre- sença ou ausência de cada um de R11 R21 R3, R41 R5, R6, R71 R8, R91 R9,e QR10 está assim contemplado.

Conforme descrição aqui, os compostos da invenção podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes, conforme ilustra- dos acima de maneira geral, ou exemplificados por classes, subclasses e espécies particulares da invenção. Deve ser notado que a frase "opcional- mente substituído" é utilizada de maneira intercambiável com a frase "substi- tuído ou não-substituído". Em geral, o termo "substituído", precedido ou não pelo termo "opcionalmente", se refere à substituição de radicais hidrogênio em uma dada estrutura por um radical de um substituinte especificado. A não ser que se indique o contrário, um grupo opcionalmente substituído po- de possuir um substituinte em cada posição substituível do grupo, e quando mais de uma posição em uma dada estrutura pode ser substituída por mais de um substituinte selecionado em um grupo especificado, os substituintes podem ser iguais ou diferentes em cada posição. Combinações de substitu- intes contemplados por esta invenção são preferivelmente aquelas que re- sultam na formação de compostos quimicamente exeqüíveis ou estáveis.

O termo "estável", conforme utilizado aqui, se refere a compos- tos que não são substancialmente alterados quando submetidos a condições que permitam sua produção, detecção e, preferivelmente, sua recuperação, purificação e uso para um ou mais dos propósitos revelados aqui. Em algu- mas modalidades, um composto estável ou um composto quimicamente e- xequível é um que não é substancialmente alterado quando mantido a 40°C ou menos, na ausência de umidade ou outras condições quimicamente rea- tivas, por pelo menos uma semana.

O termo "alifático" ou "grupo alifático", conforme utilizado aqui, significa uma cadeia de hidrocarbonetos, linear (ou seja, não-ramificada) ou ramificada, substituída ou não-substituída, que é completamente saturada ou que contenha uma ou mais unidades de insaturação, ou um hidrocarboneto monocíclico ou hid roca rbo neto bicíclico que é completamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, mas que não é aromático (também referido aqui por "carbociclo", "cicloalifático" ou "cicloalquila"), que tem um único ponto de ligação para restante da molécula. A não ser que seja indicado o contrário, grupos alifáticos contêm de 1 a 20 átomos de car- bono alifáticos. Em algumas modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 6 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 4 átomos de carbono alifáticos. Em algumas modali- dades, "cicloalifático" (ou "carbociclo" ou "cicloalquila") se refere a um hidro- carboneto C3-C8 monocíclico ou a um hid roca rbo neto C8-C12 bicíclico com- pletamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, mas que não é aromático, e que tem um único ponto de ligação ao restante da molécula onde qualquer anel individual nesse sistema de anel bicíclico possui de 3 a 7 membros. Grupos alifáticos adequados incluem, mas sem limitação, grupos alquinila, alquenila, alquila substituídos ou não- substituídos, lineares ou ramificados e híbridos destes como (cicloal- quil)alquila, (cicloalquenil)alquila ou (cicloalquil)alquenila. Em outras modali- dades, um grupo alifático pode ter dois átomos de hidrogênio geminais subs- tituídos por 0x0 (um átomo de oxigênio carbonila bivalente =0), ou um subs- tituinte formador de anel, tal como -0-(alquileno ou alquilideno ramificado ou não)-0- para formar acetal ou cetal.

Em certas modalidades, exemplos de grupos alifáticos incluem, mas sem limitação, etinila, 2-propinila, 1-propenila, 2-butenila, 1,3- butadienila, 2-pentenila, vinil (etenila), alila, isopropenila, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, sec- pentila, neo-pentila, terc-pentila, ciclopentila, hexila, isoexila, sec-hexila, ci- cloexila, 2-metil-pentila, terc-hexila, 2,3-dimetilbutila, 3,3-dimetilbutila, 1,3- dimetilbutila, e 2,3-dimetilbut-2-ila.

Os termos "haloalquila", "haloalquenila" e "haloalcóxi" significam alquila, alquenila e alcóxi, conforme o caso, substituídos com um ou mais átomos de halogênio. O termo "halogênio" significa F1 Cl, Br ou I. Tais gru- pos "haloalquila", "haloalquenila" e "haloalcóxi" podem ter dois ou mais subs- tituintes halo que podem ou não ser o mesmo halogênio e podem ou não estar no mesmo átomo de carbono. Exemplos incluem clorometila, periodo- metila, 3,3-dicloropropila, 1,3-difluorbutila, trifluormetila, e 1-bromo-2- cloropropila.

Os termos "heterociclo", "heterociclila", "heterocicloalifático" e "heterocíclico", como utilizados aqui, significam sistemas de anéis tricíclicos, bicíclicos ou monocíclicos, não-aromáticos, onde um ou mais membros do anel são um heteroátomo escolhido de forma independente. Em algumas modalidades, o grupo "heterociclo", "heterociclila", "heterocicloalifático" ou "heterocíclico" tem de 3 a 14 membros no anel onde um ou mais membros no anel é um heteroátomo selecionado de forma independente de oxigênio, enxofre, nitrogênio ou fósforo, e cada anel do sistema contém de 3 a 7 membros no anel.

O termo "heteroátomo" significa um ou mais de oxigênio, enxo- fre, nitrogênio, fósforo ou silício (incluindo-se qualquer forma oxidada de en- xofre, nitrogênio, fósforo ou silício; a forma quaternizada de qualquer nitro- gênio básico; ou um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por e- xemplo, N (como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolila), NH (como em pirrolidinila) ou NR+ (como em pirrolidinila N-substituída).

O termo "insaturado", conforme utilizado aqui, significa que uma porção tem uma ou mais unidades de instauração.

O termo "alcoxi" ou "tioalquila", conforme utilizado aqui, refere-se a um grupo alquila, como definido previamente, anexado à cadeia de carbo- no principal através de um átomo de oxigênio ("alcóxi") ou de enxofre ("tioal- quila").

O termo "arila" utilizado sozinho ou como parte de uma porção maior como em "aralquila", "aralcóxi", ou "ariloxialquila", refere-se a sistemas de anéis monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos que possuem um total de 5 a 14 membros no anel, onde pelo menos um anel no sistema é aromático e onde cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros de anel. O termo "ari- la" pode ser utilizado de forma intercambiável com o termo "anel de arila". O termo "arila" também se refere a sistemas de anéis heteroarila conforme é definido abaixo.

O termo "heteroarila", utilizado sozinho ou como parte de uma porção maior como em "heteroaralquila" ou "heteroaralcóxi", refere-se a sis- temas de anéis monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos que possuem um total de 5 a 14 membros no anel, onde pelo menos um anel no sistema é aromá- tico, pelo menos um anel contém um ou mais heteroátomos e onde cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros no anel. O termo "heteroarila" pode ser utilizado de forma intercambiável com o termo "anel heteroarila" ou com o termo "heteroaromático".

Um grupo arila (incluindo-se aralquila, aralcóxi, ariloxialquila e similares) ou heteroarila (incluindo-se heteroalquila e heteroarilalcóxi e simi- lares) pode conter um ou mais substituintes. Substituintes adequados no átomo de carbono insaturado de um grupo arila ou heteroarila são selecio- nados de halogênio; N3, CN, R01 OR0, SR0; 1,2-metileno-dióxi; 1,2- etilenodióxi; fenila (Ph) opcionalmente substituída com R0; (CH2)1-2 (Ph)1 opcionalmente substituído por R°; CH=CH(Ph), opcionalmente substituído por R0; -O(Ph) opcionalmente substituído por R0; NO2; CN; N(R0)2; N- R0C(O)R0; NR0C(O)N(R0)2; NR0CO2R0; -NR0NR0C(O)R0; NR0N- R0C(O)N(R0)2; NR0NR0CO2R0; C(O)C(O)R0; C(O)CH2C(O)R0; CO2R0; C(O)R0; C(O)N(R0)2; OC(O)N(R0)2; S(O)2R0; SO2N(R0)2; S(O)R0; NR0' SO2N(R0)2; NR0SO2R0; C(=S)N(R°)2; C(=NH)-N(R°)2; ou (CH2)0-2NHC(O)R° onde cada ocorrência independente de R0 é selecionada de hidrogênio, um anel alifático Ci.6 opcionalmente substituído, um anel heteroarila ou hetero- cíclico de 5 a 6 membros não-substituído, fenila, O(Ph) ou CH2(Ph) ou, mesmo com a definição acima, duas ocorrências independentes de R0, no mesmo substituinte ou em substituintes diferentes, tomados juntos com o(s) átomo(s) a que cada grupo R0 está ligado, formam um anel de 3 a 8 mem- bros de cicloalquila, heterociclila, arila ou heteroarila que possui de O a 4 he- teroátomos selecionados de maneira independente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Substituintes opcionais no grupo alifático de R0 são selecionados de N3, CN1 NH2, NH(C1-4 alifático), N(C-m alifático)2, halogênio, C1-4 alifático, OH, 0(0^4 alifático), NO2l CN, CO2H, C02(C1-4 alifático), O(halo)C1-4 alifático) ou halo (C1-4 alifático), onde cada um dos grupos alifáticos C1-4 mencionados acima de R0 é não-substituído.

Um grupo alifático ou heteroalifático ou um anel heterocíclico não-aromático pode conter um ou mais substituintes. Substituintes adequa- dos no carbono saturado de um grupo alifático ou heteroalifático ou de um anel heterocíclico não-aromático são selecionados daqueles listados acima para o carbono insaturado de um grupo arila ou heteroarila e, adicionalmen- te, podem incluir os seguintes: =0, =S1 =NNHR*, =NN(R*)2, =NNHC(O)R*, =NNHC02(alquila), =NNHS02(alquila) ou =NR*, onde cada R* é selecionado de maneira independente de hidrogênio ou de um alifático C-|.6 opcionalmen- te substituído. Substituintes opcionais do grupo alifático de R* são selecio- nados de NH2, NH(Ci-4 alifático), N(C-i-4 alifático)2, halogênio, C-m alifático, OH, O(C1-4) alifático), NO2, CN, CO2H1 C02(C1-4 alifático), 0(halo C-m alifáti- co) ou halo(C1-4 alifático), onde cada um dos grupos alifáticos C1-4 mencio- nados acima de R* é não-substituído.

Substituintes opcionais no nitrogênio de um anel heterocíclico não-aromático são selecionados de R+, N(R+)2, C(O)R+, CO2R+, C(O)C(O)R+, C(O)CH2C(O)R+, SO2R+, S02N(R+)2, C(=S)N(R+)2, C(=NH)-N(R+)2 ou NR+SO2R+; onde R+ é um hidrogênio, um alifático C1-6 opcionalmente substi- tuído, fenila opcionalmente substituída, O(Ph) opcionalmente substituído, CH2(Ph) opcionalmente substituído, (CH2)^2(Ph) opcionalmente substituído, CH=CH(Ph) opcionalmente substituído, ou um anel heteroarila ou heterocí- clico de 5 a 6 membros não-substituído, o qual possui de 1 a 4 heteroátomos selecionados de maneira independente de oxigênio, nitrogênio, ou enxofre, ou, apesar da definição acima, duas ocorrências independentes de R+, no mesmo substituinte ou em substituintes diferentes, tomados juntos com o(s) átomo(s) a que cada grupo R+ está ligado, formam um anel, de 3 a 8 mem- bros, de cicloalquila, heterociclila, arila ou heteroarila que possui de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Substituintes opcionais no grupo alifático ou no anel fenila de R+ são selecionados de NH2, NH(Ci_4 alifático), N(C-i-4 alifático)2, halogênio, C-m alifático, OH1 0(0^4 alifático), NO2, CN1 CO2H, C02(Ci-4 alifático), 0(haloC-,.4 alifático) ou haloC-1-4 alifático, onde cada um dos grupos alifáticos C-m men- cionados acima de R+ é não-substituído.

Conforme detalhado acima, duas ocorrências independentes de R0 (ou de R+, ou qualquer outra variável similarmente definida aqui) são to- madas juntas com o(s) átomos ao(s) qual(quais) cada variável é ligada pra formar um anel de 3 a 8 membros cicloalquila, heterociclila, arila, ou heteroa- rila que possui de O a 4 heteroátomos selecionados de independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Anéis exemplificativos que são formados quando duas ocorrências de R0 (ou R+, ou qualquer outra variável definida aqui de modo similar) são tomadas juntas com (o)s átomo(s) ao(s) qual(quais) cada variável está ligada incluem, sem limitação, os seguintes: a) duas ocorrências independentes de R0 (ou de R+, ou qualquer outra variável definida aqui de modo similar) que são ligadas ao mesmo átomo e são to- madas juntas com tal átomo para que formem um anel, por exemplo, N(R0)2, onde ambas as ocorrências de R0 são tomadas juntas com o átomo de nitro- gênio para que formem um grupo piperidin-1-ila, piperazin-1-ila ou morfolin- 4-iia; e b) duas ocorrências independentes de R0 (ou de R+, ou qualquer ou- tra variável definida aqui de modo similar) que são ligadas a diferentes áto- mos e são tomadas juntas com ambos esses átomos para que formem um anel, por exemplo, onde um grupo fenila é substituído por duas ocorrências de OR <formula>formula see original document page 17</formula> essas duas ocorrências de R0 são tomadas juntas com os átomo de oxigênio aos quais elas são ligadas para formar um anel contendo oxigênio, fundido, de 6 membros:

<formula>formula see original document page 17</formula>

Deve ser notado que vários outros anéis podem ser formados quando duas ocorrências inde- pendentes de R0 (ou de R+, ou qualquer outra variável similarmente definida aqui) são tomadas juntas com o(s) átomo(s) ao(s) qual(quais) cada variável é ligada e que os exemplos detalhados acima não têm por intenção a limita- ção.

Conforme utilizado aqui, o termo "porção detectávei" é utilizado de maneira intercambiável com o termo "marcador" e se refere a qualquer porção capaz de ser detectada, por exemplo, marcadores primários e mar- cadores secundários. Marcadores primários, tais quais radioisótopos (por exemplo, 32P, 33P, 35S ou 14C), marcadores de massa e marcadores fluores- centes são grupos repórter que geram sinais que podem ser detectados sem modificações adicionais.

O termo "marcador secundário" conforme utilizado aqui se refere a frações tal como a biotina e vários antígenos de proteína que requerem a presença de um segundo intermediário para a produção de um sinal detec- távei. Para a biotina, o intermediário secundário pode incluir conjugados da estreptavidina-enzima. Para marcadores de antígenos, intermediários se- cundários podem incluir conjugados de anticorpo-enzima. Alguns grupos fluorescentes agem como maracores secundários porque transferem energia a um outro grupo no processo de transferência de energia de ressonância fluorescente não-radiativa (FRET), e o segundo grupo produz o sinal detec- távei.

Os termos "marcador fluorescente", "corante fluorescente" e "flu- oróforo", conforme utilizados aqui, referem-se a frações que absorvem ener- gia da luz em um comprimento de onda de excitação definido e emitem e- nergia de luz em um comprimento de onda diferente. Exemplos de marcado- res fluorescentes incluem, sem limitação: tintas Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), AMCA, AM- CA-S, corantes BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BO- DIPY TR, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650 e BODIPY 650/665), Carboxir- rodamina 6G, carbóxi-X-rodamina (ROX), Azul Cascata, Amarelo Cascata, Cumarina 343, corantes de Cianina (Cy3, Cy5, Cy3.5 e Cy5.5), Dansil, Da- poxyl, Dialquilaminocumarian, 4',5'-Dicloro-2',7,-dimetóxi-fluoresceína, DM- NERF, Eosina, Eritrosina, Fluoresceína, FAM, Hidroxicumarina, corantes IRDyes (IRD40, IRD 700 e IRD 800), JOE1 Lissamina rodamina Β, Azul Ma- rinho, Metoxicumarina1 Naftofluoresceína, Verde Oregon 488, Verde Oregon 500, Verde Oregon 514, Azul Pacífico, PyMPO, Pireno, Rodamina B, Roda- mina 6G, Verde Rodamina, Vermeho Rodamina, Verde Rodol, 2,,4\5,,7'- Tetra-bromossulfona-fluoresceína, Tetrametil-rodamina (TMR), Carboxite- trametilrodamina (TAMRA), Vermelho do Texas e Vermelho do Texas-X.

O termo "marcador de massa", conforme utilizado aqui, se refere a qualquer porção capaz de ser singularmente detectada graças a sua mas- sa por meio de técnicas de detecção de espectrometria de massa (MS). E- xemplos de marcadores de massa incluem rótulos de liberação de eletrófo- ros como o ácido N-[3-[4'-[(p'-metóxi-tetrafluor-benzil)óxi]fenil]-3- meti!gliceronil]isonipecótico, 4'-[2,3,5,6-tetraflúor-4-(pentafluorfenoxil)]metil acetofenona e seus derivados. A síntese e a utilidade destes marcadores de massa estão descritas nas Patentes US 4.650.750, 4.709.016, 5.360.8191, 5.516.931, 5.602.273, 5.604.104, 5.610.020 e 5.650.270. Outros exemplos de marcadores de massa incluem, sem limitação, nucleotídeos, didesoxinu- cleotídeos, oligonucleotídeos de comprimento e composição base variáveis, oligopeptídeos, oligossacarídeos e outros polímeros sintéticos de compri- mento e composição monomérica variáveis. Uma ampla variedade de molé- cuias orgânicas, tanto neutras quanto carregadas (biomoléculas ou compos- tos sintéticos) em uma faixa de massa apropriada (100 a 2.000 Daltons) po- de também ser utilizada como marcador de massa.

O termo "substrato", conforme utilizado aqui, refere-se a qual- quer material ou complexo macromolecular ou material ao qual um grupo terminal funcionalizado de um composto da presente invenção pode ser li- gado. Exemplos de substratos comumente usados incluem, mas sem limita- ção, superfícies de vidro, superfícies de sílica, superfícies de plástico, super- fícies de metal, superfícies que contêm um revestimento químico ou metáli- co, membranas (por exemplo, náilon, polissulfona ou sílica), microesferas (por exemplo, látex, poliestireno ou outro polímero), matrizes de polímeros porosos (por exemplo, gel de poliacrilamida, polissacarídeo ou polimetacrila- to) e complexos macromoleculares (por exemplo, proteínas ou polissacarí- deos).

A não ser que se indique o contrário, as estruturas retratadas aqui também têm por objetivo incluir todas as formas isoméricas (por exem- plo, enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou conformacionais)) das estruturas; por exemplo, as configurações ReS para cada centro assi- métrico, os isômeros de ligação dupla (Z) e (E) e os isômeros conformacio- nais (Z) e (E). Assim, isômeros estereoquímicos simples assim como mistu- ras enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou conformacional) dos presentes compostos estão dentro do escopo da invenção.

A não ser que se indique o contrário, todas as formas tautoméri- cas dos compostos da invenção estão dentro do escopo da invenção.

Adicionalmente, a não ser que se indique o contrário, as estrutu- ras aqui retratadas também têm por objetivo incluir compostos que diferem somente na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos.

Por exemplo, compostos que possuem as presentes estruturas exceto pela substituição do hidrogênio por deutério ou trítio, ou a substituição de um car- bono por um carbono enriquecido 13C ou 14C estão dentro do escopo desta invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíti- cas ou sondas em ensaios biológicos.

3. Descrição de compostos exemplificativos:

Como definido de maneira geral acima, a porção G da fórmula I é S, CH2, NR ou O. Em certas modalidades, a porção G de fórmula I é O.

Como definido de maneira geral acima, R1 e R2 da fórmula I são cada um independentemente halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de ni- trogênio, oxigênio ou enxofre. Em algumas modalidades, R1 e R2 da fórmula I são cada um independentemente R ou OR. Em outras modalidades, R1 e R2 da fórmula I são cada um independentemente R, onde R é hidrogênio ou um grupo alifático C1-6, opcionalmente substituído. De acordo com um outro aspecto da presente invenção, R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 6 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em ainda um outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto da fórmula I onde R1 e R2 são tomados juntos para que for- mem um anel carbocíclico saturado de 3 a 6 membros. Em outras modalida- des, R1 e R2 da fórmula I são tomados juntos para que formem um anel ci- clopropílico.

Em certas modalidades, a porção η da fórmula I é 0-1. Em ou- tras modalidades a porção η da fórmula I é 1.

Conforme definido de maneira geral acima, o grupo R5 da fórmu- la I é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rn)3, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequa- damente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2 onde cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de Ci.6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramifi- cada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de T são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, - S(O)- ou -S(O)2-. Em algumas modalidades, cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C1.4 alquilideno linear ou ramifi- cada, onde uma unidade de metileno de T é opcionalmente substituída por - O-, -N(R)- ou -S-. Em outras modalidades, cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C-m alquilideno linear ou ramifi- cada. Em outras modalidades, cada T é uma ligação de valência.

Quando o grupo R5 da fórmula I é T-C(R')3, T-C(R1)2C(Rm)3, cada R' e R" é independentemente selecionado de R, OR, SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2. Em certas modalidades, cada R1 e R" é independentemente R, OR, OC(O)R, SR ou N(R)2. Em outras modalidades, cada R1 e R" é independentemente R, OR ou OC(O)R. Grupos exemplificati- vos de R1 e R" incluem hidrogênio, CH3, OH e OC(O)CH3. Como definido acima de maneira geral, quando o grupo R5 é T- C(R1)3, T-C(R1)2C(Rn)3, então R6 e um grupo R' em R5 são opcionalmente tomados juntos para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados inde- pendentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em certas modalidades, R5 é T-C(R1)3 ou T-C(R1)2C(Rn)3, e R6 e um grupo R' em R5 são tomados jun- tos para formar um anel saturado com 5 a 7 membros tendo de 1 a 2 hetero- átomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em outras modalidades, R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(R11)3, e R6 e um grupo R1 em R5 são tomados juntos para formar um anel saturado com 6 membros tendo 1 átomo de oxigênio. Tais compostos, quando T é uma ligação de va- lência, têm a fórmula lia, quando R5 é T-C(R1)3, e llb, quando R5 é T- C(R1)2C(R11)3:

<formula>formula see original document page 22</formula>

onde cada R', R", R1, R2, R3, R4, R51 R6, R7, R8, R9, R9', Q e R10 são como definidos de maneira geral acima e nas classes e subclasses defi- nidas aqui e acima. Conforme definido aqui de maneira geral, o grupo R5 da fórmula I é, entre outros, um grupo hidroxila protegido adequadamente, um grupo tiol protegido adequadamente, ou um grupo amino protegido adequadamente. Grupos protetores de hidroxila são bem-conhecidos no estado da técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3a Edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Exem- plos de grupos hidroxila protegidos adequadamente do grupo R5 da fórmula I também incluem, mas sem limitação, ésteres, éteres alílicos, éteres, éteres silílicos, éteres alquílicos, éteres arilalquílicos e éteres alcoxialquílicos. E- xemplos de tais ésteres incluem formiatos, acetatos, carbonatos, e sulfona- tos. Exemplos específicos incluem o formiato, formiato de benzoíla, cloroa- cetato, trifluoracetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, p- clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato, 4,4- (etilenoditio)pentanoato, pivaloato (trimetil-acetila), crotonato, 4- metoxicrotonato, benzoato, p-benil-benzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato e carbo- natos tais como metila, 9-fluorenilmetila, etila, 2,2,2-tricloroetila, 2- (trimetilsilil)etila, 2-(fenilsulfonil)etila, vinila, alila e p-nitrobenzila. Exemplos de tais éteres silílicos incluem éteres de de trimetil-silila, trietil-silila, t-butil- dimetil-silila, t-butil-difenil-silila, triisopropilsilílicos e outros éteres tri- alquilsilícos. Éteres alquílicos incluem éteres metílicos, benzílicos, p- metoxibenzílicos, 3,4-metoxibenzílicos, tritílicos, t-butílicos, alílicos e de alilo- xicarbonílicos ou derivados. Éteres alcoxialquílicos incluem acetais como metoximetila, metil-tiometila, (2-metoxietóxi)metila, benzilóxi-metila, beta- (trimetilsilil)etóximetila e tetra-hidropiranila. Exemplos de éteres de aril- alquílicos incluem benzílicos, p-metoxibenzílicos (MPM), 3,4-dimetóxi- benzílicos, O-nitro-benzílicos, p-nitrobenzílicos, p-halobenzílicos, 2,6- diclorobenzílicos, p-cianobenzílicos e 2- e 4-picolílicos.

Grupos protetores de tiol são bem-conhecidos do estado da téc- nica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Or- ganic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3a Edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Grupos de tiol protegidos adequadamente da porção R5 da fórmula I inclu- em, sem limitação, dissulfetos, tioéteres, silil tioéteres, tioésteres, tiocarbona- tos, tiocarbamatos e similares. Exemplos de tais grupos incluem, sem limita- ção, tioéteres alquílicos, benzílicos e tioéteres benzílicos substituídos, tioéte- res trifenilmetílicos, tricloroetoxicarbonílicos, citando apenas alguns.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, a porção R5 da fórmula I é um grupo protetor de tiol que é removível sob condições neu- tras, por exemplo, com AgNO3, HgCI2 e similares. Outras condições neutras incluem redução utilizando-se um agente redutor apropriado. Agentes redu- tores apropriados incluem ditiotreitol (DTT), mercaptoetanol, ditionita, glutati- ona reduzida, glutarredoxina reduzida, tiorredoxina reduzida, fosfinas substi- tuídas tais como a tris-carboxietil fosfina (TCEP) e qualquer outro agente redutor com base orgânica ou em peptídeos, ou outros reagentes conheci- dos daqueles com conhecimento ordinário versado na técnica. Ainda, de acordo com outro aspecto da presente invenção, a porção R5 da fórmula I é um grupo protetor de tiol que é "fotoclivável". Tais grupos protetores de tiol adequados são conhecidos do estado da técnica e incluem, mas sem limita- ção, um grupo nitrobenzila, um grupo tetra-hidropiranila (THP), um grupo tritila, -CH2SCH3 (MTM), dimetilmetoximetila, ou -CH2-S-S-piridin-2-ila. A- queles versados na técnica é capaz de reconhecer que muitos grupos prote- tores de hidroxila adequados, como descritos aqui, são também grupos pro- tetores de tiol adequados.

Em certas modalidades, o grupo R5 da fórmula I é um grupo a- mino protegido adequadamente. Grupos protetores de amino são bem- conhecidos do estado da técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3a Edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Grupos amino protegidos adequadamente da porção R5 incluem, mas sem limitação, aralquilaminas, carbamatos, imidas cíclicas, alil aminas, amidas e similares. Exemplos de tais grupos incluem t- butiloxicarbonila (BOC), etiloxicarbonila, metiloxicarbonila, tricloroetiloxicar- bonila, aliloxicarbonila (Alloc), benziloxocarbonila (CBZ), alila, ftalimida, ben- * zila (Bn)1 fluorenilmetilcarbonila (Fmoc)1 formila, acetila, cloroacetila, dicloro- acetila, tricloroacetila, fenil-acetila, triflúoracetila, benzoíla e similares. Em certas modalidades, o grupo protetor de amino da porção R5 é ftalimido. Em ainda outras modalidades, o grupo protetor de amino da porção R5 é um gru- po terc-butiloxicarbonila (BOC).

Como definido acima de maneira geral, o grupo Q da fórmula I é uma ligação de valência ou uma cadeia de C-m alquilideno, saturada ou in- saturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, onde até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-. Em certas modalidades, Q é uma cadeia de C-i-2 alquilideno, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, onde até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-. Em outras modalidades, Q é -O-.

Como definido acima de maneira geral, o grupo R10 da fórmula 1 é R, um grupo hidroxila protegido adequadamente, um grupo tiol protegido adequadamente, um grupo amino protegido adequadamente, um anel mo- nocíclico de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados inde- pendentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; um anel bicíclico de 8 a 10 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; uma porção detectável, um resíduo de polí- mero, um peptídeo, ou uma porção contendo açúcar ou similar a açúcar.

Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é um grupo que contém açúcar. Tais grupos que contêm açúcar são bem-conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em "Essentials of Glycobiology" Editado por Varki, A., et al, Cold Spring Har- bor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, N. Y., 2002. Em certas modalida- des, o grupo R10 da fórmula I é um glicosídeo. Exemplos de grupos R10 in- cluem arabinopiranosídeos e xilopiranosídeos. Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é uma xilopiranosídeo. Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é um arabinopiranosídeo. Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é um xilopiranosídeo. Em certas modalidades, o gru- po R10 da fórmula I é uma arabinopiranosida. Em ainda outra modalidade, o HO.

grupo R10 da fórmula I é <formula>formula see original document page 26</formula>

De acordo com outra modalidade, o

Outra modalidade fornece um com-

posto da fórmula I onde R10 é <formula>formula see original document page 26</formula>

De acordo com outro aspecto da presente invenção, o grupo R10 da fórmula I é açúcar-mimético. Tais açúcar-miméticos são bem-conhecidos por um técnico no assunto e incluem aqueles descritos em detalhes em "Es- sentials of Glycobiology". Por exemplo, grupos açúcar-miméticos contempla- dos pela presente invenção incluem ciclitóis e similares. Em certas modali- dades, R10 é uma porção ciclitol, onde tal ciclitol é um cicloalcano que con- tém um grupo hidroxila em cada um dos três ou mais átomos do anel, con- forme definido pela convenção IUPAC. Em outras modalidades, tais frações ciclitol incluem inositóis tal qual o cilo-inositol.

Adicionalmente, frações similares a açúcar adequadas do grupo R10 da fórmula I incluem grupos de açúcares acíclicos. Tais grupos incluem alquitóis lineares e eritritóis, para citar apenas alguns. Deve ser notado que grupos de açúcar podem existir tanto na forma cíclica quanto na forma ací- clica. Assim, formas acíclicas de um grupo de açúcar são contempladas pela presente invenção como uma porção similar a açúcar adequada do grupo R10 da fórmula I.

Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é uma porção detectável. Em outras modalidades, o grupo R10 da fórmula I é um marcador fluorescente, um corante fluorescente, ou um fluoróforo como definido aqui, supra.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, o grupo R10 da fórmula I é um resíduo de polímero. Resíduos de polímero são bem- conhecidos da técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em "Che- mistry of Protein Conjugation and Cross-Linking" Shan S. Wong, CRC Press. Boca Raton, Florida. 1991. Resíduos de polímero adequados do grupo R10 da fórmula I incluem poli(óxidos de alquileno), como PEG, poli(aminoácidos) e outros resíduos de polímero capazes de conjugar um composto da presen- te inveção.

Como definido de maneira geral acima, o grupo R10 da fórmula I é, entre outros, um grupo hidroxila protegido adequadamente, um grupo tiol protegido adequadamente, ou um grupo amino protegido adequadamente. Grupos protetores de hidroxila são bem-conhecidos da técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts, 3a edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Exemplos de grupos hidroxila protegidos adequados do grupo R10 da fórmula I também incluem, mas sem limitação, ésteres, éteres alílicos, éteres, éteres silílicos, éteres alquílicos, éteres arilalquílicos e éteres alcoxialquílicos. Exemplos de tais ésteres incluem formiatos, acetatos, carbonatos, e sulfonatos. Exemplos es- pecíficos incluem formiato, formiato de benzoíla, cloroacetato, trifluoracetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, 3-fenilpropionato, 4-oxopentanoato, 4,4-(etilenoditio)pentanoato, pivaloato (trimetil-acetila), cro- tonato, 4-metoxicrotonato, benzoato, p-benilbenzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato e carbonatos de tais quais metila, 9-fluorenilmetila, etila, 2,2,2-tricloroetila, 2- (trimetil-silil)etila, 2-(fenil-sulfonil)etila, vinila, alila e p-nitrobenzila. Exemplos de tais éteres silílicos incluem éteres trimetil-silílicos, trietil-silílicos, t-butil- dimetil-silílicos, t-butil-difenil-silílicos, triisopropilsilílicos e outros éteres de trialquil-silílicos. Éteres alquílicos incluem éteres metílicos, benzílicos, p- metoxibenzílicos, 3,4-dimetoxibenzílicos, tritílicos, t-butílicos, alílicos e de aliloxicarbonílicos ou derivados. Éteres alcoxialquílicos incluem acetais tais como metoximetilílicos, metil-tiometilílicos, (2-metoxietóxi)metilílicos, benzi- loximetílicos, beta-(trimetilsilil)etoximetílicos e tetra-hidropiranílicos. Exem- plos de éteres arilalquílicos incluem benzílicos, p-metoxibenzílicos (MPM), 3,4-dimetoxibenzílicos, O-nitro-benzílicos, p-nitro-benzílicos, p- halobenzílicos, 2,6-dicloro-benzílicos, p-cianobenzílicos e 2- e 4-picolílicos.

Grupos protetores de tiol são bem-conhecidos da técnica e in- cluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Syn- thesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts1 3a edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Grupos de tiol protegidos adequados da porção R10 da fórmula I incluem, mas sem Iimita- ção, dissulfetos, tioéteres, silil tioéteres, tioésteres, tiocarbonatos, tiocarba- matos e similares. Exemplos de tais grupos incluem, mas sem limitação, tio- éteres alquílicos, benzílicos e tioéteres benzílicos substituídos, tioéteres tri- fenil-metílicos, tricloro-etóxi-carbonílicos, para citar apenas alguns.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, a por- ção R10 da fórmula I é um grupo protetor de tiol que é removível sob condi- ções neutras, por exemplo, com AgNO3, HgCI2 e similares. Outras condições neutras incluem redução utilizando-se um agente redutor apropriado. Agen- tes redutores apropriados incluem ditiotreitol (DTT), mercaptoetanol, ditioni- ta, glutationa reduzida, glutarredoxina reduzida, tiorredoxina reduzida, fosfi- nas substituídas tal como a tris carboxíetil fosfina (TCEP) e qualquer outro agente redutor com base orgânica ou em peptídeos, ou outros reagentes conhecidos daqueles com conhecimento ordinário da técnica. Ainda, de a- cordo com um outro aspecto da presente invenção, a porção R10 da fórmula I é um grupo protetor de tiol que é "fotoclivável". Tais grupos protetores de tiol adequados são conhecidos da técnica e incluem, sem limitação, um gru- po nitrobenzila, um grupo tetra-hidropiranila (THP), um grupo tritila, - CH2SCH3 (MTM), dimetilmetoximetila, ou -CH2-S-S-piridin-2-ila. Aqueles versados na técnica é capaz de reconhecer que muitos grupos protetores de hidroxila adequados, como descritos aqui, são também grupos protetores de tiol adequados.

Em certas modalidades, o grupo R10 da fórmula I é um grupo amino protegido adequadamente. Grupos protetores de amino são bem- conhecidos da técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protec- ting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene e P. G. M. Wuts1 3a edição, John Wiley & Sons, 1999, cujo teor é incorporado aqui a título de referência, na íntegra. Grupos de amino protetores adequados da dita porção R10 inclu- em ainda, mas sem limitação, aralquilaminas, carbamatos, imidas cíclicas, alil aminas, amidas e similares. Exemplos de tais grupos incluem t- butiloxicarbonila (BOC), etiloxicarbonila, metiloxicarbonila, tricloroetiloxicar- bonila, aliloxicarbonila (Alloc), benziloxocarbonila (CBZ), alila, ftalimida, ben- zila (Bn), fluorenil-metil-carbonila (Fmoc), formila, acetila, cloroacetila, diclo- roacetila, tricloroacetila, fenilacetila, trifluoracetila, benzoíla e similares. Em certas modalidades, o grupo protetor de amino da porção R10 é ftalimido. Em outras modalidades, o grupo protetor de amino da porção R10 é um grupo terc-butilóxi-carbonila (BOC).

Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um composto da fórmula I, onde tal composto é outro que qualquer um de, dois ou três dos que seguem:

<formula>formula see original document page 29</formula>

OU <formula>formula see original document page 30</formula>

incluindo-se cada estereoisomero destes Como descrito acima de maneira geral, a presente invenção proporciona um composto da fórmula I:

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima em classes e subclasses descritas aqui e acima. Em certas modalida- des, a presente invenção proporciona um composto da fórmula I tendo a es- tereoquímica retratada na fórmula l-a:

<formula>formula see original document page 30</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I.

Em algumas modalidades, os grupos R1 e R2 da fórmula I são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados inde- pendentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em outras modalidades, os grupos R1 e R2 da fórmula I são tomados juntos para formar um anel car- bocíclico saturado com 3 a 6 membros. Ainda, de acordo com outro aspecto da presente invenção, um composto da fórmula l-b é proporcionado:

<formula>formula see original document page 31</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I. Em outras modalidades, a presente invenção proporciona um composto da fórmula l-c:

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I.

Como definido acima de maneira geral, cada um de Anel A, Anel B1 Anel C, Anel D e Anel E é independentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático. Em certas modalidades, o Anel B é insaturado e R1 e R2 estão ausentes, formando assim um composto da fórmula II: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I.

Em certas modalidades, o grupo η da fórmula Il é 0-1 e o grupo G da fórmula Ill é oxigênio.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula II-a:

<formula>formula see original document page 32</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes em subclasses descritas aqui e acima para os compos- tos de fórmula I.

Em certas modalidades, o grupo η da fórmula II-a é 0-1 e o gru- po G da fórmula ll-a é oxigênio.

Em outras modalidades, o Anel Beo Anel D são ambos insatu- rados e R1, R2 e R3 estão ausentes, formando assim um composto de fórmu- la III: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I.

Em certas modalidades, o grupo η da fórmula Ill é 0-1 e o grupo G da fórmula Il é oxigênio.

De acordo com outras modalidades, a presente invenção pro- porciona um composto de fórmula IV:

<formula>formula see original document page 33</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da fórmula I. Como utilizado aqui, == designa uma ligação simples ou dupla.

Deve ser entendido por aqueles versados na técnica que quando == desig- na uma ligação dupla, então R6 estará ausente. Em contraste, quando == designa uma ligação simples, então R6 estará presente. Por conseguinte, em certas modalidades, =^= designa uma ligação dupla e R6 está ausente. Em outras modalidades, designa uma ligação simples e R6 é como definido acima.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula IV-a.

IV-a

Em certas modalidades, o grupo G de fórmula IV-a é oxigênio. Em outras modalidades, o grupo R4 de fórmula IV-a é R, OR ou um grupo hidroxila protegido adequadamente. Ainda, em outras modalidades, o grupo R4 de fórmula IV-a é R.

Ainda um outro aspecto da presente invenção se refere a um composto da fórmula IV-b:

<formula>formula see original document page 34</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é definida acima e em classes e subclasses descritas aqui e acima para compostos da formulai.

Em algumas modalidades, os grupos R1 e R2 da fórmula IV-b são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parci- almente insaturado, ou arila tendo de O a 2 heteroátomos selecionados inde- pendentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em outras modalidades, os grupos R1 e R2 da fórmula IV-b são tomados juntos para formar um anel saturado com 3 a 6 membros tendo de O a 2 heteroátomos selecionados in- dependentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Em outras modalida- des, os grupos R1 e R2 da fórmula IV-b são tomados juntos para formar um anel carbocíclico saturado com 3 a 6 membros. De acordo ainda com um outro aspecto da presente invenção, um composto de fórmula IV-c é propor- cionado:

<formula>formula see original document page 35</formula>

Em certas modalidades, o grupo R7 da fórmula IV-c é -OH. De acordo ainda com um outro aspecto da presente invenção, um composto de fórmula IV-d é proporcionado:

<formula>formula see original document page 35</formula>

Em certas modalidades, o grupo R7 da fórmula IV-d é -OH. Em outras modalidades, a presente invenção fornece um com- ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

cada um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é independentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático;

GéS, CH2, NRou O;

R1 e R2 são cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido ade- quadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C-i-6 opcionalmente substituído, ou um anel de 3 a 8 membros saturado opcio- nalmente substituído parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre, onde:

dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 1 a 4 hetero- átomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

η é 0-2;

R3, R4, R7 e R8 são cada um independentemente selecionados de halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R1 OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

m é 0-2;

R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rm)3, R1 OR, um grupo hidroxila protegi- do adequadamente, SR1 um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N (R)2, NR(CO)OR, (CO)OR1 O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2:

cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, op- cionalmente substituída, onde até duas unidades de metileno de T são op- cional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-;

cada R' e R" é independentemente selecionado de R, OR, SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R6 é halogênio, R, OR, SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9', são, cada um, independentemente, selecionados de R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado ou, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; e

Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, on- de até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-.

As modalidades descritas aqui para os compostos da fórmula I se aplicam a cada variável dos compostos da fórmula V, tanto unicamente quanto em combinação.

Em certas modalidades, Q é -O-. Em outras modalidades. Q é - NH-; Em outras modalidades, a presente invenção fornece um méto- do para preparar de um composto de formula V-a:

<formula>formula see original document page 38</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

G é S, CH2, NR ou O;

R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C1-6 substituído opcionalmente, ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre, onde:

η é 0-2;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR, O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

m é 0-2;

R5 é T-C(R1)3l T-C(R')2C(R")3, R1 OR1 um grupo hidroxila protegi- do adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2; ou

cada R' e R" é, independentemente, selecionado de R, OR, SR1 SO2R1 OSO2R1 N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R6 é halogênio, R, OR, SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2; e

R9 e R9 são cada um independentemente selecionados de R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre,

compreendendo as etapas de:

(a) proporcionar um composto da fórmula V-b: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

cada um de Anel A, Anel B1 Anel C1 Anel D e Anel E é indepen- dentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático;

G é S, CH2, NR ou O;

R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR1 um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C^6 opcionalmente substituído ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre, onde:

dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 áto- mos de carbono, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

η é 0-2;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, independentemente selecionado de halogênio, R, OR1 um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R1 OSO2R1 N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2l NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

m é 0-2;

R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rh)3i R1 OR1 um grupo hidroxila protegi- do adequadamente, SR1 um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2l NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2: ou

cada R' e R" é independentemente selecionado de R, OR, SR1 SO2R1 OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R6 é halogênio, R, OR1 SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados de R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre; e

R10 é uma porção contendo açúcar ou similar a açúcar, e (b) tratamento do composto da fórmula V-b com uma enzima adequada para formar um composto da fórmula V-a.

Modalidades descritas aqui se aplicam às variáveis dos compos- tos das fórmulas V-a e V-b sozinhas ou em combinação.

Como utilizado aqui, o termo "enzima adequada" se refere a qualquer enzima capaz de remover a porção de açúcar de R10 de um com- posto da fórmula V-b para formar um composto da fórmula V-a, ou seja, ca- paz de hidrolisar ligações de glicosídeo. Tais enzimas são conhecidas por aqueles versados na técnica. Em certas modalidades, uma enzima adequa- da é uma celulase, uma xilanase, uma xilosidase, hidrolase de ácido glicirri- zínico ou glucuronidase. Em certas modalidades, a enzima adequada é a celulase. Em outras modalidades, a porção de açúcar do grupo R10 de fór- mula V-b é um arabinopiranosídeo ou uma xilopiranosídeo. Detalhes desta transformação são revelados na seção de exemplos, a seguir. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um com- posto de qualquer uma das fórmulas V-c, V-d, V-e, V-f, V-g ou V-h:

<formula>formula see original document page 42</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é como definida aqui para os compostos da fórmula I.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção fornece um composto de fórmula VI: <formula>formula see original document page 43</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde:

cada um de Anel A, Anel B, Anel C, Anel D e Anel E é indepen- dentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático; G é S1 CH2, NRou O;

R1 e R2 são cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido ade- quadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático Cv6 opcionalmente substituído ou um anel tendo de 3 a 8 membros, opcional- mente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, onde:

dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila de 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR1 um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R1 N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R6 é halogênio, R1 OR1 SR1 SO2R1 OSO2R1 N(R)2l NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N (R)2, NR (CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9' são cada um independentemente selecionados dentre halogênio, R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxi- gênio ou enxofre;

Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de Ci.6 alquilideno, opcionalmente substituída, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, on- de até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-; e

R10 é R, um grupo hidroxila protegido adequadamente, um grupo tiol protegido adequadamente, um grupo amino protegido adequadamente, um anel monocíclico de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, satura- do, parcialmente insaturado, saturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; um anel bicíclico de 8 a 10 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogê- nio, oxigênio ou enxofre; uma porção detectável, um resíduo de polímero, um peptídeo, ou uma porção contendo açúcar ou similar ao açúcar.

As modalidades descritas aqui com respeito aos compostos da fórmula I se aplicam a compostos da fórmula VI, tanto simplesmente quanto em combinação.

Em outras modalidades, a presente invenção proporciona um método para a preparação de um composto de fórmula VI:

<formula>formula see original document page 44</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde: cada um de Anel A, Anel B, Anel C1 Anel D e Anel E é indepen- dentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático;

G ê S, CH2, NRou O;

R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR1 um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, N(R)2 ou um grupo amino protegido adequadamente, ou Ri e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C1-6 substituído opcionalmente ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre, onde:

dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com tal átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 mem- bros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de 1 a 4 heteroáto- mos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

R3, R4, R7 e R8 são, cada um, selecionados independentemente de halogênio, R, OR, um grupo hidroxila protegido adequadamente, SR, um grupo tiol protegido adequadamente, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino protegido adequadamente, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2 ou O(CO)N(R)2;

R9 e R9' são, cada um, independentemente, selecionados de R, OR, SR ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado; ou arila tendo de O a 2 hete- roátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxo- fre;

Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, on- de até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substituídas por-O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)- ou -S(O)2-; e

R10 é R, um grupo hidroxila protegido adequadamente, um grupo tiol protegido adequadamente, um grupo amino protegido adequadamente, um anel monocíclico de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; um anel bicíclico de 8 a 10 membros, satu- rado, parcialmente insaturado, ou arila tendo O a 4 heteroátomos seleciona- dos independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre; uma porção de- tectável, um resíduo de polímero, um peptídeo, ou uma porção contendo açúcar ou similar ao açúcar,

compreendendo as etapas de:

(a) proporcionar um composto da fórmula IV-a:

<formula>formula see original document page 46</formula>

ou um sal deste, onde cada variável é como definida para os compostos de fórmula Vl acima, e

(b) remover o grupo acetila da fórmula Vl-a para formar um composto da fórmula VI.

As modalidades descritas aqui com respeito aos compostos da fórmula I se aplicam aos compostos da fórmula Vl-a, tanto simplesmente quanto em combinação.

Em certas modalidades, a remoção do grupo acetila na etapa (b) é realizada através de tratamento com uma base adequada. Em outras mo- dalidades, a remoção do grupo acetila na etapa (b) é realizada através de aquecimento com um solvente adequado. Ainda, em outras modalidades, a remoção do grupo acetila na etapa (b) é realizada através do aquecimento a de cerca de 40 a cerca de 115°C. Em outras modalidades, a etapa (b) é rea- lizada a de cerca de 60 a cerca de 90°C.

Um solvente adequado é um solvente único ou uma mistura de solventes que podem facilitar o progresso da reação. O solvente adequado pode solubilizar um ou mais dos componentes da reação ou, alternativamen- te, o solvente adequado pode facilitar a agitação de uma suspensão de um ou mais componentes da reação. Exemplos de solventes adequados úteis para a presente invenção são um solvente prático, um hidrocarboneto halo- genado, um éter, um éster, um hidrocarboneto aromático, um solvente apró- tico polar ou não-polar ou qualquer mistura destes. Tais misturas incluem, por exemplo, misturas de solventes práticos e apróticos como benze- no/metanol/água; benzeno/água; DME/água; e similares. Em certas modali- dades, o solvente adequado é um solvente aprótico polar, como um álcool.

Uma base adequada é um reagente que é suficientemente bási- co para conseguir a remoção do grupo acetila de um composto da fórmula VI-a para formar um composto da fórmula VI. Em certas modalidades, a ba- se adequada é o próprio solvente adequado. A título de exemplo, verificou- se que uma solução metanólica de um composto da fórmula VI-a era sufici- entemente básico para conseguir realizar a remoção do grupo acetila de um composto da fórmula VI. Detalhes desta transformação são revelados na seção de exemplos a seguir. Em outras modalidades, o solvente adequado é uma base orgânica. Ainda, em outras modalidades, a base adequada é um hidróxido ou alcóxido alcalino ou alcalino terroso. Tais bases incluem o me- tóxido de sódio ou o hidróxido de sódio. Em outras modalidades, a base a- dequada é amônia.

Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um composto de fórmula VII ou VIII: <formula>formula see original document page 48</formula>

Em outras modalidades, a presente invenção proporciona um composto de formula IX ou X:

<formula>formula see original document page 48</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde cada variável é como definida aqui para os compostos da fórmula I. Compostos que exemplificam a presente invenção são mostra- dos na Tabela 1 a seguir:

Tabela 1. Exemplos de compostos da fórmula I

<formula>formula see original document page 49</formula> <formula>formula see original document page 50</formula> <formula>formula see original document page 51</formula>

Exemplos de compostos de formulas IV-a e V-g são mostrados na Tabela 2, abaixo:

<formula>formula see original document page 51</formula> <formula>formula see original document page 52</formula> 4. Métodos Gerais Para Proporcionar os Presentes Compostos:

Os compostos desta invenção podem ser preparados ou isola- dos em geral através de métodos sintéticos e/ou semisintéticos conhecidos pelos versados na técnica para compostos análogos e pelos métodos descri- tos em detalhes nos Exemplos a seguir.

Isolamento dos componentes ativos

Certos compostos da presente invenção foram isolados da raiz de erva de São Cristóvão, também conhecida como cimicífuga racemosa ou acteia racemosa, e a estrutura destes compostos foi elucidada. Cápsulas, pós e extratos de raiz de erva de São Cristóvão, comerciais, são úteis na modulação e/ou inibição da produção do peptídeo beta-amiloide. Em particu- lar, certos compostos foram isolados da raiz de erva de São Cristóvão e i- dentificados, sendo esses compostos úteis na modulação e/ou inibição da produção do peptídeo amiloide-beta, especialmente do peptídeo amiloide- beta (1-42). Tais compostos são englobados pela fórmula I. Esses compos- tos podem ser isolados e utilizados em uma forma substancialmente livre de qualquer outro composto normalmente encontrado na raiz. Alternativamente, um extrato pode ser preparado a partir da raiz, onde tal extrato é enriquecido com um composto da presente invenção.

Como descrito aqui e acima, certos compostos da presente in- venção são isolados de extratos padrão da raiz e rizomas da erva de São Cristóvão, cultivada ou selvagem. Também é contemplado que os presentes compostos podem ser isolados do tecido da raiz da planta cultivada em uma cultura ou do meio da cultura do tecido de planta de cultura. Tais métodos de cultivo de tecido de raiz de planta em cultura são bem-conhecidos por aque- les versados na técnica incluem os descritos em Hairy Roots, Culture and Applications, editado por Pauline M. Doran, publicado por Harwood Acade- mic Publishers, Amsterdã, Holanda. Copyright 1997 OPA (Overseas Publi- shers Association) Amsterdã Β. V. ISBN 90-5702-117-X, cujo teor é aqui in- corporado a título de referência.

Alternativamente, os compostos da presente invenção podem ser preparados por processos semisintéticos a partir de outros compostos encontrados em extratos de erva de São Cristóvão e espécies de cimicífuga relacionadas, seja de raízes e rizomas ou de partes aéreas destas plantas.

Aquele versado na técnica reconhecerá que precursores sintéticos podem ser obtidos a partir de uma ou mais espécies de cimicífuga incluindo, sem limitação, Cimicífuga racemosa, Cimicífuga dahurica, Cimicífuga foetida, Ci- micífuga heracleifolia, Cimicífuga japonica, Cimicífuga acerina, Cimicífuga acerima, Cimicífuga simplex, e Cimicífuga eiata, Cimicífuga caíthaefoiia, Ci- micífuga frigida, Cimicífuga íaciniata, Cimicífuga mairei, Cimicífuga rubifoiia, Cimicífuga americana, Cimicífuga biternata e Cimicífuga bifida ou uma varie- dade destas. Isso pode ser realizado tanto por transformação química quan- to biológica de um composto isolado e uma porção do extrato ou mistura de compostos. A transformação química pode ser realizada, mas sem limitação, por manipulação da temperatura, pH, e/ou tratamento com vários solventes.

A transformação biológica pode ser realizada, sem limitação, por tratamento de um composto isolado ou uma porção do extrato ou mistura de compostos com o tecido da planta, extratos do tecido da planta, outros organismos mi- crobiológicos ou uma enzima isolada de qualquer organismo.

Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um extrato de raiz de erva de São Cristóvão onde tal extrato compreende pelo menos 10% em peso de um composto da presente invenção. Em outras mo- dalidades, a presente invenção proporciona um extrato de raiz de erva de São Cristóvão onde tal extrato compreende de cerca de 10% a cerca de 50% em peso de um composto da presente invenção. Ainda, em outras mo- dalidades, a presente invenção proporciona um extrato de raiz de erva de São Cristóvão onde tal extrato compreende de cerca de 10% em peso a cer- ca de 50% em peso de um composto da presente invenção, onde tal extrato é substancialmente isento de acteína.

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção pro- porciona um composto de fórmula I substancialmente isento de outros com- postos encontrados na raiz de erva de São Cristóvão. Como utilizado aqui, o termo "substancialmente isento" significa que o composto é feito de uma proporção significativamente maior de um composto da fórmula I quando comparado com o composto encontrado na raiz da erva de São Cristóvão ou extratos desta. Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um composto da fórmula I em uma quantidade que vai de cerca de 1% em peso a 99% em peso. Em certas modalidades, o composto da fórmula I é fornecido com uma pureza química superior a 80%. Em outras modalidades, o composto da fórmula I é fornecido com uma pureza química superior a 90%. Em outras modalidades, o composto da fórmula I contém não mais do que cerca de 10,0 de área percentual no cromatograma de HPLC de outros componentes de erva de São Cristóvão relativo à área total do cromatogra- ma de HPLC, e, ainda, em outras modalidades, não mais do que 3% de área percentual.

Métodos para determinar se os compostos da presente invenção estão em uma forma substancialmente isenta de outros compostos normal- mente encontrados na raiz de erva de São Cristóvão são conhecidos por aquele com conhecimento ordinário na técnica, conforme descrição abaixo. Compostos que foram previamente isolados e identificados a partir da erva de São Cristóvão incluem certos triterpenos baseados em cicloartanol, inclu- indo-se o acteol, acetilacteol, 26-deoxiacteol, cimigenol, acteína, 26- desoxiacteína e cimicifugosídeo. Ácido (E)-isoferúlico e a formononetina de isoflavona também foram isolados e identificados. As seguintes estruturas representam estes compostos:

<formula>formula see original document page 55</formula> <formula>formula see original document page 56</formula>

Por conseguinte, uma outra modalidade da presente invenção proporciona um composto de fórmula I substancialmente isento de um ou mais de acteol, acetilacteol, 26-desoxiacteol, cimigenol, acteína, 26- desoxiacteína e cimicifugosídeo. Em certas modalidades, a presente inven- ção fornece um composto de fórmula I substancialmente isento de acteol, acetilacteol, 26-desoxiacteol, cimigenol, acteína, 26-desoxiacteína e cimici- fugosídeo.

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção for- nece um extrato de raiz de erva de São Cristóvão enriquecido com o com- posto da fórmula I com uma quantidade diminuída de um ou mais de acteol, acetilacteol, 26-desoxiacteol, cimigenol, acteína, 26-desoxiacteína e cimici- fugosídeo. De acordo com ainda outra modalidade, a presente invenção for- nece um extrato de raiz de São Cristóvão enriquecido com o composto da fórmula I com uma quantidade diminuída de cada um de acteol, acetilacteol, 26-desoxiacteol, cimigenol, acteína, 26-desoxiacteína e cimicifugosídeo.

Várias técnicas são bem-conhecidas da técnica para extrair, iso- lar e/ou purificar componentes ativos individuais de raiz de erva de São Cris- tóvão. A presente invenção engloba tanto a identificação de tais componen- tes ativos conforme descritos aqui, como também a incorporação de tais componentes às composições da presente invenção conforme descritos a - qui.

Componentes ativos individuais do extrato de erva de São Cris- tóvão podem ser identificados conforme aqui descrito e podem ser isolados e/ou purificados utilizando-se quaisquer técnicas conhecidas da técnica. O componente ativo pode ser purificado a partir da própria raiz em qualquer forma de decocção de uma mistura de um extrato da presente invenção ou extrato comercialmente disponível, entre outros. Várias técnicas podem ser empregadas na purificação, incluindo filtração, precipitação seletiva, extra- ção com solventes orgânicos, extração com solventes aquosos, cromatogra- fia em coluna (sílica-gel), cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e outros métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.

De acordo com certas modalidades, os presentes extratos são aqueles que utilizam uma porção isolada a partir da raiz de erva de São Cris- tóvão. Uma porção isolada significa uma quantidade subsidiária de substân- cias da raiz que foram removidas, por exemplo, através de cromatografia, destilação, precipitação, extração, filtração ou de outras formas da própria raiz. Em outras modalidades, os extratos e frações da raiz são removidos desta por meio de cromatografia, destilação, precipitação ou extração. Tais técnicas de isolação e extração são bem-conhecidas por uma pessoa versa- da na técnica. Os detalhes de algumas destas técnicas são descritos na se- ção de Exemplos a seguir.

De acordo com outras modalidades da presente invenção, a presença e a pureza do composto ativo são avaliadas por métodos químicos incluindo a espectroscopia magnética nuclear (RMN), espectroscopia de massa, espectroscopia no infravermelho (IR), espectroscopia no ultravioleta visível, análise elementar e polarimetria, refractometria, para citar somente alguns. Tais métodos de análise são conhecidos por uma pessoa versada na técnica. Em outras modalidades, a estrutura química do composto ativo iso- lado a partir da raiz de erva de São Cristóvão é determinada por métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica, incluindo-se RMN, espec- troscopia de massa, espectroscopia no infravermelho (IR), espectroscopia no ultravioleta visível, análise elementar, polarimetria, refractometria e crista- lografia de raios X, para citar somente alguns.

Ainda que certas modalidades exemplares sejam descritas aci- ma e aqui, deve ser notado que os extratos de raiz da presente invenção podem ser preparados de acordo com os métodos descritos acima utilizando materiais de partida apropriados por métodos geralmente disponíveis a uma pessoa versada na técnica.

5. Usos, Formulação e Administração

Composições farmaceuticamente aceitáveis

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, compo- sições farmaceuticamente aceitáveis são proporcionadas, onde essas com- posições compreendem quaisquer compostos descritos aqui, e compreen- dem opcionalmente um veículo ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, essas composições também compreendem opcio- nalmente um ou mais agentes terapêuticos adicionais.

Também será notado que certos compostos da presente inven- ção podem existir na forma livre para tratamento ou, onde apropriado, como um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Como utilizado aqui, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" se refere àqueles sais que são, dentro do escopo do critério médico justo, adequados para uso em contato com os tecidos humanos e animais inferio- res sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares, e pro- porcionam uma razão risco/benefício razoável. Um "sal farmaceuticamente aceitável" significa qualquer sal ou sal de éster atóxico de um composto des- ta invenção que, ao ser administrado a um recipiente, é capaz de prover, seja direta ou indiretamente, um composto dessa invenção ou um metabólito farmaceuticamente aceitável ou um resíduo deste. Como utilizado aqui, o termo "metabólito farmaceuticamente ativo ou resíduo deste" significa que um metabólito ou resíduo deste também é um composto farmaceuticamente ativo em conformidade com a presente invenção.

Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem-conhecidos da téc- nica. Por exemplo, S. M. Berge et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, aqui incorporado a título de referência. Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos desta invenção incluem aqueles derivados de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos. Exemplos de sais de adição de ácido atóxicos, far- maceuticamente aceitáveis, são sais de um grupo amino formado com áci- dos inorgânicos como o ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico, ou com ácidos orgânicos como o ácido acético, ácido oxálico, ácido maléico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido suc- cínico ou ácido malônico ou através do uso de outros métodos utilizados na técnica como troca iônica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissul- fato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentenoproprio- nato, digliconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formiato, fumarato, glico- eptonato, glicerofosfato, gliconato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hi- droiodeto, 2-hidroxietanossulfonato, Iactobionato1 lactato, laurato, sulfato de laurila, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, sais de valera- to e similares. Sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metais alcalinos, metais alcalino-terrosos, amônio e N+(C-m alquila)4. Esta invenção também prevê a quaternização de qualquer grupo que contém nitrogênio básico dos compostos revelados aqui. Produtos solúveis em água ou em óleo ou dispersáveis podem ser obtidos através da dita quaternização. Sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e similares. Sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais incluem, quando apropriado, amônio atóxico, amônio quaternário e cátions de amina formados utilizando-se contraíons como o haleto, hidróxido, carboxilato, sul- fato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila.

As composições da presente invenção podem adicionalmente compreender um adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável, que, como utilizados aqui, incluem quaisquer e todos os solventes, diluentes e outros veículos líquidos, auxiliares de dispersão ou de suspensão, agentes tensoativos, agentes isotônicos, agentes espessantes ou emulsificantes, conservantes, Iigantes sólidos, lubrificantes e similares, conforme adequado à forma de dosagem em particular desejada. Remington1S Pharmaceutical Sciences, 16a Edição, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton1 Pa., 1980) descreve vários veículos utilizados na formulação de composições farma- ceuticamente aceitáveis e técnicas conhecidas de preparação destas. Exce- to quando qualquer meio veicular convencional for incompatível com os com- postos da presente invenção, tal como quando é produzido qualquer efeito biológico indesejável ou ao interagir de maneira prejudicial com qual- quer(quaisquer) outro(s) componente(s) da composição farmaceuticamente aceitável, o seu uso é contemplado pelo escopo da presente invenção. Al- guns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceutica- mente aceitáveis incluem, sem limitação, trocadores de íons, alumina, estea- rato de alumínio, lecitina, proteínas do soro, tais como a albumina sérica humana, substâncias tampão tal como fosfatos, glicina, ácido sórbico ou sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeos de ácidos graxos ani- mais saturados, água, sais ou eletrólitos, como o sulfato de protamina, hi- drogeno-fosfato de dissódico, difosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, poliacrila- tos, ceras, polímeros bloqueadores de polietileno-polipropileno, gordura de lã, açúcares como a lactose, glicose e sacarose; amidos como o amido de milho e amido de batata; celulose e seus derivados como a sódio carboxime- til celulose, etilcelulose e acetato de celulose; tragancanto em pó; malte; ge- latina; talco; excipientes como manteiga de cacau e ceras para supositórios; óleos com óleo de amendoim; óleo de girassol; óleo de gergelim; óleo de oliva; óleo de milho e óleo de soja; glicóis como o propileno glicol ou o polie- tileno glicol; ésteres como oleato de etila e laurato de etila; ágar; agentes tampões como o hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio. Ácido algí- nico e água isenta de pirogênio; soro isotônico; solução de Ringer; álcool etílico e soluções de tampão de fosfato assim como outros lubrificantes compatíveis atóxicos como o lauril sulfato de sódio e o estearato de magné- sio, bem como agentes corantes, agentes de liberação, agentes de revesti- mento, agente adoçantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e an- tioxidantes, também podem estar presentes na composição, de acordo com o critério do formulador.

As composições fornecidas pela presente invenção podem ser empregadas em terapias de combinação, significando que as presentes in- venções podem ser administradas concorrentemente, anteriormente, subse- qüentemente a um ou mais agentes terapêuticos ou procedimentos médicos desejáveis. A combinação particular de terapias (procedimentos ou agentes terapêuticos) a ser empregada em um regime de combinação levará em consideração a compatibilidade dos procedimentos e/ou agentes terapêuti- cos e o efeito terapêutico que se deseja conseguir. Deve ser também notado que as terapias empregadas podem conseguir um efeito desejado para o mesmo distúrbio (por exemplo, um composto descrito aqui pode ser adminis- trado concorrentemente com um outro agente terapêutico usado para tratar o mesmo distúrbio) ou podem conseguir efeitos distintos (por exemplo, con- trole de qualquer efeito colateral).

Por exemplo, agentes conhecidos úteis para o tratamento de distúrbio neurodegenerativos podem ser combinados com as composições desta invenção para tratar distúrbios neurodegenerativos, como o mal de Alzheimer. Exemplos de tais agentes conhecidos úteis para o tratamento de distúrbios neurodegenerativos incluem, mas sem limitação, tratamentos para o mal de Alzheimer como inibidores de acetilcolinesterase, incluindo done- pezil, memantina (e compostos relacionados como os inibidores de NMDA), Exelon®; tratamento para o mal de Parkinson como a L-DOPA/carbidopa, entacapona, ropinerol, pramipexol, bromocriptina, pergolida, triexofendila e amantadina; agentes para o tratamento da esclerose múltipla (MS) tais como beta-interferon (por exemplo, Avonex® e Rebif®), Copaxone® e mitoxantro- na; riluzol e agentes antiParkinson. Para uma discussão mais ampla sobre terapias atualizadas úteis para o tratamento de distúrbios neurodegenerati- vos, vide uma lista dos fármacos aprovados pela FDA em http://www.fda.gov, e The Merck Manual, 17a Edição, 1999, cujo teor é aqui incorporado a título de referência.

Em outras modalidades, os compostos da presente invenção são combinados com outros agentes úteis para o tratamento de distúrbios neurodegenerativos, como o mal de Alzheimer, onde tais agentes incluem inibidores de beta-secretase, inibidores de gama-secretase, inibidores de agregação, quelantes de metais, antioxidantes e neuroprotetores. Como utilizado aqui, os termos "combinação", "combinado" e termos relacionados se referem à administração simultânea ou seqüencial de agentes terapêuticos em conformidade com esta invenção. Por exemplo, um composto da presente invenção pode ser administrado com um outro agente terapêutico simultânea ou seqüencialmente em formas de dosagens unitárias separadas ou juntas em uma única forma de dosagem unitária. Por conseguinte, a presente invenção proporciona uma forma de dosagem unitá- ria compreendendo um composto da fórmula I, um agente terapêutico adi- cional e um veículo ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.

Outros exemplos de agentes inibidores desta invenção podem também ser combinados com, por exemplo: tratamentos para asma tais co- mo albuterol e Singulair®; agentes para o tratamento da esquizofrenia tais como zyprexa, risperdal seroquel e haloperidol; agentes antiinfpasta fluidató- rios tais como corticosteroides, bloqueadores de TNF, IL-I RA1 azatioprina, ciclofosfamida e sulfasalazina; agentes imunomoduladores e imunossupres- sores como a ciclosporina, tacrolimus, rapamicina, micofenolato mofetil, in- terferons, corticosteroides, ciclofosfamida, azatioprina, e sulfasalazina; fato- res neurotróficos tais como inibidores de acetilcolinesterase, inibidores de ΜΑΟ, interferons, anticonvulsivos, bloqueadores de canal de íons, agentes para o tratamento de doenças cardiovasculares tais como beta- bloqueadores, inibidores da ECA, diuréticos, nitratos, bloqueadores de canal de cálcio e estatinas; agentes para o tratamento de doenças do fígado tais como corticosteroides, colestiramina, interferons e agentes antivirais; agen- tes para o tratamento de distúrbios do sangue como corticosteroides, agen- tes antileucemia e fatores do crescimento e agentes para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência como a gamaglobulina.

A quantidade de agente terapêutico adicional presente nas com- posições dessa invenção não será maior que a quantidade que seria nor- malmente administrada em uma composição compreendendo aquele agente terapêutico como o único agente ativo. Em certas modalidades, a quantidade de agente terapêutico nas presentes composições estará na faixa de cerca de 50% a 100% da quantidade normalmente presente em uma composição compreendendo aquele agente como o único agente terapeuticamente ativo.

Em uma modalidade alternativa, os métodos desta invenção que utilizam composições que não contêm um agente terapêutico adicional, compreendem a etapa adicional de administrar separadamente ao paciente um agente terapêutico adicional. Quando esses agentes terapêuticos adicio- nais são administrados separadamente, eles podem ser administrados ao paciente antes, seqüencialmente ou depois da administração das composi- ções da presente invenção.

As composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser administradas a seres humanos e outros animais de forma oral, retal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como pó, pomadas ou gotas), bucal como um spray oral ou nasal; ou similares, de- pendendo da gravidade do distúrbio sendo tratado. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser administrados de forma oral ou paren- teral em níveis de dosagonde vão de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 50 mg/kg e preferivelmente de cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, do peso corporal do paciente por dia, uma ou mais vezes por dia, para que se obte- nha o efeito terapêutico desejado.

Formas de dosagem líquidas para administração incluem, sem limitação, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixi- res farmaceuticamente aceitáveis. Além dos compostos ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica tal como, por exemplo, água ou outros solventes, emulsificantes e agentes solubilizadores tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbona- to de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetil-formamida, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, oliva, rícino e gergelim), glicerol, álcool tetra-hidrofurfurílico, polietileno glicóis e éteres de ácidos gra- xos de sorbitano e misturas destes. Além de diluentes inertes, as composi- ções orais também podem incluir adjuvantes como agentes molhantes, a- gentes emulsificantes e suspensores, agentes perfumantes, flavorizantes e adoçantes. Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis podem ser formuladas de acordo com as técnicas co- nhecidas utilizando-se agentes molhantes ou dispersantes e agentes sus- pensores. A preparação injetável estéril pode também ser uma emulsão, suspensão ou solução injetável, estéreis, em um diluente ou solvente paren- teralmente aceitável tal como, por exemplo, uma solução em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer, U.S.P e solução de cloreto de sódio isotônica. Adi- cionalmente, óleos fixos e estéreis podem ser empregados, incluindo-se mo- no ou diglicerídeos. Adicionalmente, ácidos graxos, tal como o ácido oléico, são utilizados na preparação de injetáveis.

As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro que retém bactérias ou por incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis, as quais podem ser dissolvidas ou dispersas em água estéril ou outro meio estéril injetável antes do uso.

Para que se prolongue o efeito de um composto da presente invenção, é freqüentemente desejável que se desacelere a absorção do composto a partir de injeções subcutâneas ou intramusculares. Isto pode ser conseguido pelo uso de uma suspensão líquida de material amorfo ou crista- lino com baixa solubilidade em água. A taxa de absorção do composto de- pende então de sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, absorção demo- rada de um composto administrado de forma parenteral é conseguida ao se dissolver ou suspender o composto em um veículo de óleo. Formas de de- pósitos injetáveis são feitas formando-se matrizes microencapsuladas do composto em polímeros biodegradáveis como polilactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da taxa de composto para polímero e da natureza do polímero empregado, a taxa de liberação do composto pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e po- li(anidridos). Formulações de depósitos injetáveis também são preparadas ao se reter o composto em Iipossomos ou microemulsões que são compatí- veis com os tecidos do corpo.

Composições para administração retal ou vaginal são preferi- velmente supositórios que podem ser preparados pela mistura de compostos desta invenção com excipientes ou veículos não irritantes adequados, tais como manteiga de cacau, polietileno glicol ou uma cera para supositório, os quais são sólidos à temperatura ambiente, mas líquidos à temperatura do corpo, e, portanto, derretem na cavidade vaginal ou retal e liberam o com- posto ativo.

Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas sólidas de dosagem, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável inerte tal qual citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou a) cargas ou diluentes como amidos, lactose, sacarose, gli- cose, manitol e ácido silicílico, b) Iigantes tais como, por exemplo, carboxi- metilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil-pirrolidona, sacarose e goma ará- bica, c) umectantes como glicerol, d) agentes desintegradores como ágar— ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, cer- tos silicatos e carbonato de sódio, e) agentes retardadores de solução tal como a parafina, f) aceleradores de absorção tais como compostos de amô- nio quaternário, g) agentes molhantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, h) absorventes tais como caulim e argila de bentonita, e i) lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, Iauril sulfato de sódio e misturas destes. No caso das cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tampão.

Composições sólidas de tipo similar podem também ser empre- gadas como cargas em cápsulas de gelatina preenchida dura e mole utili- zando-se tais excipientes como a lactose ou açúcar de leite bem como polie- tileno glicóis de alto peso molecular, e similares. As formas sólidas de dosa- gem de comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser pre- paradas com revestimentos e invólucros tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem-conhecidos na técnica de formulação farmacêuti- ca. Elas podem opcionalmente conter agentes opacificantes e também po- dem ser uma composição que libera o ingrediente ativo somente, ou preferi- velmente em uma determinada parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada. Exemplos de composições incorporadas que podem ser usadas incluem ceras e substâncias poliméricas.

Formas de dosagem para administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pomadas, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, sprays, inalantes e adesivos. O composto ativo é mistu- rado sob condições estéreis com um veículo farmaceuticamente aceitável e quaisquer conservantes necessários ou tampões conforme requeridos. For- mulação oftálmica, gotas auriculares e colírios também são contemplados por esta invenção. Adicionalmente, a presente invenção contempla o uso de adesivos transdérmicos, que têm a vantagem adicional de proverem libera- ção controlada de um composto ao corpo. Tais formas de dosagem podem ser feitas ao se dissolver ou dispensar o composto em um meio adequado. Intensificadores de absorção também podem ser utilizados para aumentar o fluxo do composto através na pele. A taxa pode ser controlada pelo forneci- mento de uma membrana controladora da taxa ou pela dispersão do com- posto em um gel ou matriz de polímero.

Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição contendo um composto de quaisquer das fórmulas I, Il1 III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X em uma quantidade de cerca de 1% em peso a cerca de 99% em peso. Em outras modalidades, a composição con- tendo um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X contém não mais que cerca de 10,0 de área percentual no cromatograma da HPLC de outros componentes de raiz de erva de São Cris- tóvão em relação à área total do cromatograma da HPLC. Em outras moda- lidades, a composição contendo um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X contém não mais que cerca de 8,0 de área percentual HPLC de outros componentes de raiz de São Cristó- vão em relação à área total do cromatograma da HPLC, ainda, em outras modalidades, não mais que 3 de área percentual. Usos dos Compostos e Composições Farmaceuticamente Aceitáveis

Os compostos da presente invenção são úteis para modular e/ou inibir a produção do petídeo beta-amiloide (1-42) em um paciente. Por con- seguinte, os compostos da presente invenção são úteis para tratar ou dimi- nuir a gravidade de distúrbios associados à produção do peptídeo beta- amiloide (1-42) em um paciente.

Os compostos, extratos e composições de acordo com o método da presente invenção podem ser administrados utilizando-se qualquer quan- tidade e qualquer via de administração eficaz para tratar ou diminuir a gravi- dade de um distúrbio neurodegenerativo. A quantidade exata exigida vai va- riar de paciente para paciente, dependendo da espécie, idade e condição geral do paciente, gravidade da infecção, o agente em particular, seu modo de administração e similares.

Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um método para modular e/ou inibira produção do peptídeo beta-amiloide (1-42) em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo tal composto. Em outras modalidades, a presente invenção fornece um mé- todo para modular e/ou inibir seletivamente a produção do peptídeo beta- amiloide (1-42) em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Ainda, em outras modalidades, a presente invenção fornece um mé- todo para reduzir os níveis do peptídeo beta-amiloide (1-42) em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalida- des, a presente invenção fornece um método para reduzir os níveis do pep- tídeo beta-amiloide (1-42) em uma célula, compreendendo contatar tal célula com um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X. Uma outra modalidade fornece um método para reduzir o beta-amiloide (1-42) em uma célula sonde os níveis do peptídeo beta- amiloide (1-40) na célula sejam substancialmente reduzidos, compreenden- do contatar a dita célula com um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X. Ainda, uma outra modalidade for- nece um método para diminuir o beta-amiloide (1-42) em uma célula e au- mentar pelo menos um de beta-amiloide (1-37) e beta-amiloide (1-39) na célula, compreendendo contatar tal célula com um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma compo- sição farmaceutícamente aceitável deste.

Como utilizado aqui, o termo "reduzindo" ou "reduzir" se refere à diminuição relativa em uma quantidade de beta-amiloide atingida através da administração de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X quando comparada com a quantidade de beta- amiloide na ausência da administração de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X. Como exemplo, uma redução de beta-amiloide (1-42) significa que a quantidade de beta-amiloide (1-42) na presença de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X é menor que a quantidade de beta-amiloide (1-42) na ausência de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X.

Ainda, em outras modalidades, a presente invenção proporciona um método para reduzir os níveis do peptídeo beta-amiloide (1-42) em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um com- posto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceutícamente aceitável deste. Em determinadas modalidades, a presente invenção proporciona um método para diminuir os níveis do peptídeo beta-amiloide (1-42) em um paciente sonde os níveis do peptídeo beta-amiloide (1-40) sejam substancialmente reduzidos, onde tal método compreende administrar ao paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceutícamente aceitável deste. Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um método para reduzir o beta-amiloide (1-42) em um paciente e aumentar pelo menos um de beta-amiloide (1-37) e beta-amiloide (1-39), onde tal método compreende administrar ao paciente um composto de quaisquer das fórmu- las I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição far- maceuticamente aceitável deste.

Como utilizado aqui, o termo "aumentando" ou "aumentar" em referência a uma quantidade de beta-amiloide refere-se ao aumento relativo na quantidade de um beta-amiloide obtido através da administração de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X (ou contatando uma célula com um composto de quaisquer das fór- mulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X) em comparação com a quantidade de beta-amiloide na ausência da administração de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X (ou contatando uma célula com um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X). Como exemplo, um aumento de be- ta-amiloide (1-37) significa que a quantidade de beta-amiloide (1-37) na pre- sença de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X é maior que a quantidade de beta-amiloide (1-37) na ausência de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X. Por exemplo, as quantidades relativas tanto de beta- amiloide (1-37) quanto de beta-amiloide- (1-39) podem ser aumentadas tanto por uma maior produção aumentada tanto de beta-amiloide-(1-37) quanto de beta-amiloide (1-39) ou por uma diminuída produção de peptídeos beta- amiloide mais longos, por exemplo, beta-amiloide (1-40) e/ou beta-amiloide (1-42). Adicionalmente, deve ser apreciado que o termo "aumentar" ou "au- mentando", como utilizado aqui em referência a uma quantidade de beta- amiloide-, refere-se ao aumento relativo em uma quantidade de beta- amiloide obtida através da administração de um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X. Assim, em certas modalidades, a presente invenção fornece um método para aumentar o nível absoluto de pelo menos um de beta-amiloide (1-37) e beta-amiloide (1-39), onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalida- des, a presente invenção proporciona um método para aumentar o nível de pelo menos um de beta-amiloide(1-37) e beta-amiloide (1-39), onde o au- mento é relativo à quantidade de peptídeos beta-amiloides mais longos, por exemplo, beta-amiloide (1-40) e/ou beta-amiloide (1-42), onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fór- mulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste.

Uma pessoa versada na técnica notará que a taxa geral de pep- tídeos beta-amiloides é significante onde a redução seletiva de beta-amiloide (1-42) é especialmente vantajosa. Em certas modalidades, os presentes compostos reduzem a razão geral do peptídeo beta-amiloide (1-42) para peptídeo beta-amiloide (1-40). Assim, um outro aspecto da presente inven- ção proporciona um método para reduzir a razão do peptídeo beta-amiloide (1-42) para o peptídeo beta-amiloide (1-40) em um paciente, compreenden- do administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceutica- mente aceitável deste. Em certas modalidades, a razão do peptídeo beta- amiloide (1-42) para o peptídeo beta-amiloide (1-40) é reduzida de uma faixa de cerca de 0,1 a cerca de 0,4 a uma faixa de cerca de 0,05 a cerca de 0,08.

Em outras modalidades, a presente invenção proporciona um método para reduzir a razão do peptídeo beta-amiloide (1-42) para o peptí- deo beta-amiloide (1-40) em uma célula, compreendendo contatar tal célula com um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Em certas modalidades, a razão do peptídeo beta-amiloide (1-42) para o peptí- deo beta-amiloide (1-40) é reduzida de uma faixa de cerca de 0,1 a cerca de 0,4 a uma faixa de cerca de 0,05 a cerca de 0,08.

De acordo com um aspecto, a presente invenção proporciona um método para tratar ou diminuir a gravidade de um distúrbio associado ao peptídeo beta-amiloide (1-42), onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Tais distúrbios incluem distúrbios neurodegenerativos como o mal de Al- zheimer, mal de Parkinson e síndrome de Down.

Tais distúrbios também incluem miosite corporal inclusiva (depo- sição de Α-beta nos músculos periféricos, resultando em neuropatia periféri- ca), angiopatia amiloide cerebral (amiloide nos vasos sangüíneos no cére- bro) e comprimentimento cognitivo leve.

"A-beta42 alto" é uma condição mensurável que precede a do- ença sintomática, especialmente em pacientes familiais, baseado no plasma, medições de CSF e/ou monitoramento genético. Esse conceito é análogo à relação entre o colesterol elevado e a doença cardíaca. Assim, outro aspecto da presente invenção fornece um método para prevenir um distúrbio associ- ado ao peptídeo beta-amiloide (1-42), onde tal método compreende adminis- trar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitá- vel deste.

Em outras modalidades, a presente invenção proporciona um 120 método para o tratamento de doenças onde a amiloidose Α-beta pode ser um agente subjacente ou um fator co-existente e exacerbador, onde tal mé- todo compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste.

Ainda, em outras modalidades, a presente invenção proporciona um método para o tratamento de distúrbios em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fór- mulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste, e onde tal distúrbio é a demência corpo- ral de Lewy (associada à deposição de alfa-sinucleína nos corpos de Lewy em neurônios cognitivos; a a-sinucleína é mais comumente associada às deposições nos neurônios motores e à etiologia do mal de Parkinson), mal de Parkinson, catarata (onde a-beta se agrega às lentes do olho), Tauopati- as (por exemplo, demência frontotemporal), doença de Huntington, doença de ALS/Lou Gerhig, diabetes do tipo 2 (agregados de IAPP em ilhotas pan- creáticas, é similar em tamanho e seqüência ao Α-beta e possuindo diabetes tipo 2 aumenta o risco de demência), doença amiloide transtirretiniana (TTR, um exemplo desta doença é o músculo cardíaco contribuindo para a cardio- miopatia), doença de príon (incluindo a doença de Creutzfeldt-Jakob, a sín- drome de Gerstmann-Stráussler-Scheinker, insônia familial fatal e kuru) e doença de CJD.

Em outras modalidades, a presente invenção fornece um méto- do para tratar ou diminuir a severidade do mal de Alzheimer em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste.

Sonderer se prender a qualquer teoria em particular, acredita-se que os presentes compostos sejam moduladores da gama-secretase, a qual seletivamente reduz os níveis de beta-amiloide (1-42). Por conseguinte, ou- tra modalidade da presente invenção proporciona um método para modular a gama-secretase em um paciente, compreendendo administrar a tal pacien- te um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Em certas modalidades, os presentes compostos são inibidores da gama- secretase. Tal método é útil para tratar ou diminuir a gravidade de qualquer distúrbio ligado à gama-secretase. Tais distúrbios incluem, sem limitação, distúrbios neurodegenerativos como, por exemplo, o mal de Alzheimer.

A via de sinalização "Notch7Delta é altamente conservada entre as espécies e é amplamente utilizada durante o desenvolvimento tanto de vertebrados quanto de invertebrados para regular o destino celular no em- brião em desenvolvimento. Vide Gaiano e Fishell, "The Role of "Notch" in Promoting Glial and Neural Stem Cell Fates" Annu. Rev. Neurosci. 2002, 25:471-90. ""Notch"" interage com o complexo gama-secretase e possui inte- rações com várias outras proteínas e vias sinalizadoras. "Notch"1 compete com a proteína precursora de amiloide para a gama-secretase e a ativação da via de sinalização "Notch" infrarregula a expressão do gene PS-1. Vide Lleo et al, ""Notch"1 with the Amyloid Precursor Protein for γ-Secretase and Down-regulates Presenilin-1 Gene Expression" Journal of Biological Chemis- try 2003, 48:47370-47375 . Receptores "Notch" são processados pela gama- secretase agindo em sinergia com a sinalização de receptores de célula T e assim sustentam a ativação de células T periféricas. "Notch"1 pode regular diretamente Tbx21 através de complexos formados no promotor de Tbx21. Vide Minter et al., "Inhibitors of γ-secretase block in vivo and in vitro T helper type 1 polarization by preventing "Notch" upregulation of Tbx21", Nature Im- munology 2005, 7:680-688. In vitro, inibidores de gama-secretase extingui- ram a expressão de "Notch", interferon-gama e Tbx21 em células CD4+ po- larizadas TH1. In vivo, a administração de inibidores de gama-secretase im- pediu substancialmente a progressão da doença mediada porTHI no mode- lo encefalomielite autoimune experimental em camundongos de esclerose mútlipla, sugerindo a possibilidade de uso de tais compostos para tratar au- toimunidade mediada por TH1. Vide ld. Inhibition of gamma-secretase can alter Iymphopoiesis and intestinal cell differentiation (Wong et al., "Chronic Treatment with the γ-Secretase Inhibitor LY-411,575 Inhibits β-Amyloid Pep- tide Production and Alters Lymphopoiesis and Intestinal Cell differentiation (Wong et al., "Chronic Treatment with the γ-Secretase Inhibitor LY-411,575 Inhibits β-Amyloid Peptide Production and Alters Lymphopoiesis and Intesti- nal Cell Differentiation" Journal of Biological Chemistry 2004, 26:12876- 12882), including the induction of goblet cell metaplasia. Vide Milano et al., "Modulation of "Notch" Processing by g-Secretase Inhibitors Causes Intesti- nal Goblet Cell Metaplasia and Induction of Genes Known to Specify Gut Se- cretory Lineage Differentiation" Toxicological Sciences 2004, 82:341-358.

Estratégias que podem alterar o processamento da proteína pre- cursora de amiloide ("APP") e reduzir a produção de formas patogênicas de beta-amiloide sem afetar o processamento de "Notch" são altamente desejá- veis. Ademais, conforme descrito acima, mostrou-se que a inibição de gama- secretase in vitro e in vivo inibe a polarização de células Th e é, assim, útil para tratar distúrbios associados às células Th1. Células Th1 estão envolvi- das na patogênese de vários distúrbios autoimunes específicos de órgãos, doença de Crohn, úlcera péptica induzida por Helicobacter pylori, rejeição a aloenxerto nos rins aguda e abortos recorrentes não explicados, para citar alguns.

De acordo com uma modalidade, a invenção se refere a um mé- todo para inibir a formação de células Th1 em pacientes, compreendendo a etapa de administrar ao paciente um composto da presente invenção, ou uma composição contendo tal composto. Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um método para tratar um ou mais distúrbios autoimu- nes, incluindo distúrbio da bexiga irritável, doença de Crohn, artrite reuma- toide, psoríase, úlcera péptica induzida por Helicobacter pylori, rejeição a aloenxerto nos rins aguda, esclerose múltipla ou lúpus eritematoso sistêmi- co, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X, pre- parado de acordo com a presente invenção, ou uma composição farmaceuti- camente aceitável compreendendo tal composto.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método para modular e/ou inibir a produção do peptídeo beta-amiloide, sem afetar o processamento de ""Notch"" em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X, ou uma composição farmaceutica- mente aceitável compreendendo tal composto.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método para inibir a produção do peptídeo beta-amiloide, sem afetar o processamen- to de "Notch" em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X, ou uma composição farmaceuticamente aceitável com- preendendo tal composto.

Em certas modalidades, a presente invenção proporciona um método para reduzir os níveis do peptídeo beta-amiloide-(1-42) em um paci- ente e aumentar pelo menos um de beta-amiloide (1-37) e beta-amiloide (1- 39), sem afetar o processamento de "Notch" em um paciente, onde tal méto- do compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X, ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste.

Por conseguinte, outro aspecto da presente invenção proporcio- na um método para reduzir a taxa do peptídeo beta-amiloide (1-42) para o peptídeo beta-amiloide (1-40) em um paciente, sem afetar o processamento de "Notch" em um paciente, onde tal método compreende administrar a tal paciente um composto de quaisquer das fórmulas I, II, III, IV-a, IV-b, IV-c, V, VI, VII, VIII, IX ou X, ou uma composição farmaceuticamente aceitável deste. Em certas modalidades, a taxa do peptídeo beta-amiloide (1-42) para o pep- tídeo beta-amiloide (1-40) é reduzida de uma faixa de cerca de 0,1 a cerca de 0,4 a uma faixa de cerca de 0,05 a cerca de 0,08.

Os compostos da presente invenção são preferivelmente formu- lados em uma forma de dosagem unitária para facilitar a administração e uniformidade da dose. A expressão "forma de dosagem unitária" como utili- zada aqui, refere-se a uma unidade fisicamente discreta do agente apropria- do para o tratamento do paciente. Deve ser entendido, entretanto, que a do- sagem diária total dos compostos e composições da presente invenção será decidida pelo médico assistente dentro do escopo do critério médico seguro. O nível da dose eficaz específico para qualquer paciente ou organismo em particular vai depender de vários fatores, incluindo o distúrbio que está sen- do tratado e a gravidade do distúrbio; a atividade do composto específico empregado; a composição específica empregada; a idade, peso do corpo, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, via de ad- ministração e taxa de excreção do composto especificamente empregado; a duração do tratamento; fármacos usados em combinação ou concomitante- mente com o composto especifico empregado e fatores similares bem- conhecidos na área médica. O termo "paciente", como aqui utilizado, signifi- ca um animal, preferivelmente um mamífero e, mais preferivelmente, um ser humano.

Exemplos A erva de São Cristóvão, utilizada no protocolo de separação descrito abaixo, foi obtido por um pedido padrão para Boehringer Ingelheim Nutriceuticals. Esse extrato é substancialmente equivalente à preparação USP de extrato de erva de São Cristóvão, onde cerca de 50% de etanol a - quoso é utilizado para extrair raiz e rizoma em pó e é então concentrado até quase secura.

Como utilizado aqui, os números de compostos citados abaixo correspondem aos seguintes compostos:

Composto 1: β-D-Xilopiranosídeo, (3,12,16,23R,24R,25S,26S)- 12-(acetilóxi)-16,23:23,26:24,25-triepóxi-26-hidróxi- 9,19-ciclolanostan-3-ila.

Também conhecido como "acteína." C37H56011; Peso molecu- lar: 676,83; Registro 18642-44-9.

<formula>formula see original document page 76</formula>

Composto 2: Cimigenol 3-p-D-xilopiranosida; C35H5609, Peso molecular: 620,81; Registro 27994-11 -2.

<formula>formula see original document page 76</formula>

Composto 3: Cimigenol 3-a-L-arabinosídeo. C35H5609, Peso molecular: 620,81; Registro 256925-92-5. <formula>formula see original document page 77</formula> Composto 4: 24-O-Acetil-hidroshengmanol 3-p-D-xilopiranosídeo. C37H60011, Peso molecular: 680,87; Registro 78213-32-8.

<formula>formula see original document page 77</formula>

Composto 5: 24-O-Acetil-hidroshengmanol 3-a-L-arabinopiranosídeo. C37H60011, Peso molecular: 680,87.

<formula>formula see original document page 77</formula>

Composto 6: Éter 24-O-acetil-hidroshengmanol 3-p-D-xilopiranosídeo (delta- 16,17)-enólico. C37H58010, Peso molecular: 662,85.

<formula>formula see original document page 77</formula>

Composto 7: Éter 24-O-acetil-hidroshengmanol 3-a-L-arabinopiranosídeo (delta-16,17)-enólico. C37H58010, Peso molecular: 662,85.

<formula>formula see original document page 78</formula>

Composto 8: 24-epi-24-0-Acetil-hidroshengmanol 3-b-D-xilopiranosídeo. C37H60011, Peso molecular: 680,87.

<formula>formula see original document page 78</formula>

Composto 9: Éter 24-epi-24-0-acetil-hidroshengmanol 3-p-D-xilopiranosida (delta-16,17)-enólico. C37H58010, Peso molecular: 662,85.

<formula>formula see original document page 78</formula>

Protocolo de isolamento 1

Cromatografia em coluna instantânea

Extrato de erva de São Cristóvão (15,6 g) foi suspenso em 150 mL de uma mistura de metanol-água 4:1 (v/v) a 25°C. Utilizando-se um agi- tador mecânico, a pasta fluida resultante foi agitada vigorosamente por 30 minutos a esta temperatura, o que resultou em uma emulsão marrom. A es- sa emulsão, 51 g de sílica-gel (sílica ICN 32-63 60 A) foi adicionada com agitação contínua. A mistura foi concentrada a 25°C in vácuo utilizando-se um evaporador rotativo, até que um pó marrom-bege bem homogêneo foi obtido. Este material foi submetido à cromatografia em coluna de sílica-gel (sílica ICN 32-63 60 A) utilizando-se uma coluna longa de vidro de 60 cm com 50 mm de diâmetro interior.

Na preparação para a cromatografia em coluna de sílica-gel, 500 ml de uma mistura 20:1 de diclorometano-metanol e a pasta fluida resultan- te foram vertidos na coluna de vidro. A sílica-gel ficou 30 minutos em repou- so, e foi coberta com uma camada de areia de 1 cm de espessura. A seguir, o extrato absorvido pela sílica foi vertido na mistura 20:1 de diclorometano- metanol, e a pasta fluida resultante foi vertida na camada de areia no topo da coluna. A coluna de sílica foi então eluída com as seguintes misturas de solventes sob uma pressão de 40 kPa (0,4 bar) (argônio);

1,0 mL de diclorometano-metanol 20 a 1, seguido por

770 mL de diclorometano-metanol 10 a 1, seguido por

800 mL de diclorometano-metanol 7 a 1, seguido por

550 mL de diclorometano-metanol 5 a 1.

Oito frações de 200 mL (rotulados como sat14-0 a sat14-7) fo- ram coletadas, seguido por onze frações de 100 mL (rotuladas sat14-8 a sat14-18). Todas as frações foram analisadas por cromatografia xs camada fina (TLC), utilizando-se placas de sílica Bakerflex eluída com uma mistura de solvente 5:1 de diclorometano-metanol. Após a revelação, as placas de sílica-gel foram coloridas com corante de anisaldeído. Baseado nos resulta- dos das análises por TLC, as frações sat14-9 a sat14-12 foram evaporadas até secar in vácuo a 25°C, e amostras de 10 mg dessas frações foram anali- sadas por espectroscopia de RMN 1H, utilizando-se CD3OD como solvente. Vide as Figuras 1 e 2, respectivamente. O espectro foi analisado com rela- ção à presença de amplos picos múltiplos a 2,53 ppm e um pico duplo a 2,2 Hz e 4,86 ppm, porque esses sinais são característicos dos compostos 7 e 6. O espectro dqf-COSY adicional dessas quatro amostras confirmou que os sinais a 2,53 e 4,86 ppm de fato pertenciam aos compostos 7 e 6. Do espec- tro de RMN 1H da porção sat14-10, conclui-se que esta amostra continha a maior concentração de compostos 7 e 6, enquanto quantidades ligeiramente menores dos compostos foram detectadas nas frações sat14-9. A porção sat-14-11 pareceu conter traços de 7 e 6 enquanto tais compostos não foram detectados na amostra sat14-12. Baseado nesses resultados, a porção sat14-10 foi escolhida para purificação adicional por HPLC. Alternativamen- te, a amostra sat14-9 poderia ser usada, para obter quantidades adicionais dos compostos 4 a 7 conforme necessário.

O principal componente da porção sat14-10 era a acteína (1) (JNP 2002, 65, 601-605), que se cristalizou a partir de uma solução metanó- lica na amostra. Acteína pura foi obtida através de recristalização. Os princi- pais componentes das amostras sat14-11 eram cimigenl beta-D- xilopiranosida (2) e cimigenol alfa-L-arainosida (3), que se cristalizou desta amostra como uma mistura de cerca de 2:1 (JNP 2000, 65, 905-910 e 1391- 1397).

Fracionamento por HPLC de fase reversa em coluna C-18

A porção sat14-10 foi dissolvida em 3,5 mL de metanol. Esta solução foi fracionada por HPLC usando-se uma coluna SUPELCO Disco- very 18 (25 cm de comprimento, 10 mm de diâmetro interno) e o sistema de HPLC série AGILENT 1100, incluindo um autoinjetor e um detector de diodo em série, utilizado para detecção de comprimentos de onda de 190 a 400 nm. Um gradiente de solvente foi empregado, começando com 30% (v/v) de água em metanol pelos primeiros 2 minutos, seguido por uma diminuição linear da quantidade de água até que 100% de metanol fossem atingidos aos 20 minutos. Após 2 minutos, a 100% de etanol, a quantidade de água foi elevada para 30% e mantida nessa concentração por 8 minutos. Para a se- paração da amostra sat14-10 inteira, 100 injeções de 35 μΙ cada foram ne- cessárias. Nove frações foram coletadas e rotuladas sat15-1 a sat15-9. Vide as Figuras 3 e 4, respectivamente. Os compostos 4 a 7 foram eluídos nas frações sat15-1, sat15-2, sat15-4 e sat15-5: Os espectros de RMN 1H das frações sat15-1, sat15-2, sat15-4 e sat15-5 são mostrados nas figuras 4a e 4b.

Fracionamento por HPLC de fase reversa em coluna C-8 para o isolamento de 6,4 e 9 A porção sat15-5 foi dissolvida em 1,5 mL de metanol. Esta so- lução foi fracionada por HPLC usando-se uma coluna SUPELCO supelcosil LC-8 (25 cm de comprimento, 10 mm de diâmetro interno) e o sistema de HPLC série AGILENT 1100 descrito acima. Um gradiente de solvente foi empregado, começando com 40% (v/v) de água em metanol pelos primeiros 2 minutos, seguido por uma diminuição linear da quantidade de água até que 100% de metanol fossem atingidos aos 20 minutos. Após 2 minutos a 100% de etanol, a quantidade de água foi elevada para 40% e mantida nessa con- centração por 8 minutos. Para a separação da amostra sat15-5 inteira, 50 injeções de 30 μΙ cada foram necessárias. Cinco frações foram coletadas e rotuladas sat16-1 a sat16-5 (figura 5). O composto 6 foi eluído na amostra sat16-3, enquanto o composto 4 foi eluído na amostra sat16-1. Uma peque- na quantidade de 9 puro foi obtida na amostra sat15-5. A Figura 6 mostra o espectro de RMN 1H de 9,8 mg do composto 6 com 98% de pureza obtido.

Fracionamento por HPLC de fase reversa em coluna C-8 para o isolamento de 8

A porção sat15-8 foi dissolvida em 0,65 mL de metanol. Esta solução foi fracionada por HPLC usando-se uma coluna SUPELCO supelco- sil LC-8 (25 cm de comprimento, 10 mm de diâmetro interno) e o sistema de HPLC série AGILENT 1100 descrito acima. Um gradiente de solvente foi empregado, começando com 40% (v/v) de água em metanol pelos primeiros 2 minutos, seguido por uma diminuição linear da quantidade de água até que 100% de metanol fossem atingidos aos 20 minutos. Após 2 minutos a 100% de etanol, a quantidade de água foi elevada para 40% e mantida nessa con- centração por 8 minutos. Sete frações foram coletadas e rotuladas sat18-1 a sat18-7. O composto 8 foi eluído na porção sat18-6. A análise por espec- troscopia de RMN, incluindo os espectros NOESY, mostrou que em solução metabólica, o composto 8 se interconverte com a cetona correspondente.

Soluções metanólicas diluídas contêm cerca de 4% de cetona e 96% da forma hemicetal.

Fracionamento por HPLC de fase reversa em coluna C-8 para o isolamento de 7 e 5 A porção sat15-2 foi dissolvida em 0,5 mL de metanol. Esta so- lução foi fracionada por HPLC usando-se uma coluna SUPELCO supelcosil LC-8 (25 cm de comprimento, 10 mm de diâmetro interno) e o sistema de HPLC série AGILENT 1100 descrito acima. Um gradiente solvente foi em- pregado, começando com 40% (v/v) de água em metanol pelos primeiros 2 minutos, seguido por uma diminuição linear da quantidade de água até que 100% de metanol fossem atingidos aos 20 minutos. Após 2 minutos a 100% de etanol, a quantidade de água foi elevada para 40% e mantida nessa con- centração por 8 minutos. Cinco frações foram coletadas e rotuladas sat19-3 a sat19-7. O composto 7 puro foi obtido na porção sat19-7, enquanto o com- posto 5 puro foi obtido na porção sat19-5. Protocolo de Isolamento 2

Um protocolo alternativo de isolamento/purificação é revelado abaixo para isolar o composto 6. Uma pessoa versada na técnica verá que durante o isolamento do composto 6, outros compostos da presente inven- ção são enriquecidos e/ou isolados por esse processo. O sumário do pro- cesso de isolamento é retratado na figura 7.

Esse protocolo de purificação utilizou o seguinte equipamento:

(a) Sistema de HPLC Hitachi com detector de diodo em série (DAD)

(b) Nova Prep™ 8000 Semipreparative HPLC Semipreparativa com Controlador Remoto PC usando LC ReSponder™ Application Software

(c) Detector UV Hitachi L-7400

(d) Detector de difusão luminosa evaporativa (ELSD) Sedex 55

(e) Coluna de sílica 75L Biotage (KP-Sil; P/N FKO-1107-19073; Lote 027075L)

(f) Coluna C18 75L Biotage (Bakerbond, 40 μ)

(g) Coluna C18 75S Biotage (Vydac, 40 μ)

(h) Coluna HPLC analítica: Phenomenex Luna C18, 3μ, 4,6 χ 100 mm

(i) Coluna HPLC semipreparativa : coluna Phenomenex Luna C8 HPLC], 20 χ 250 mm G) Coluna HPLC semipreparativa : coluna YMC AQ C18 HPLC, 21,2 χ 250 mm; e

(k) Coluna HPLC preparativa: ES Industries Coluna C18 de 5 χ 25 cm de HPLC preparativa.

O método analítico utilizado para determinar a pureza do com- posto 6 é o que segue:

Coluna: Phenomenex Luna C18, 3m, 4,6 χ 100 mm

Fase móvel: Eluição isocrática com A. 35% Acetonitrila; B.

30% água Nanopura contendo 0,05% de ácido acético; e C. 35% de MeOH Vazão: 1 mL/min

Detecção: 205, 230 nm, DAD; e ELSD

Tempo de execução: 8 min

Temperatura da coluna: 32°C

Esse método foi usado para a análise do extrato, amostras e produto final.

O composto 6 elui a cerca de 5,5 minutos sob essas condições. 50 g de extrato de erva de São Cristóvão ("BCE") foi fracionado em um cartucho Biotage Silica (7,5 χ 30 cm). Após o carregamento, o cartu- cho foi eluído com 5% de MeOH/DCM (10L) e 10% de MeOH/DCM (5L), e amostras de 500 mL foram coletadas. A vazão foi de 150 a 200 mL/min. O HPLC (UV a 230 nm) revelou que o composto 6 estava presente nas amos- tras 23 (2,6 g) e 24 (2,3 g). A amostra 23 (F23) foi selecionada para purifica- ção adicional em uma coluna C8 semipreparativa.

Dez corridas foram realizadas para que se obtivesse aproxima- damente 10 mg do composto 6. 50 mg de F23 em 0,3 mL de MeOH foram carregados em uma coluna semiprep Phenomenex Luna C-8 (21,2 χ 250 mm, 10μ, 100 A). A coluna foi eluída a uma taxa de escoamento de 9,9 mL/min com MeOH a 70% em H2O com monitoramento de UV a 205 nm. Os picos eluindo em 35 min. e 38 min. como mostrados pelo traço de HPLC semi-prep (figura 8) foram separadamente coletados.

As frações coletadas para os picos aos 35 min das 10 corridas foram reunidas e os solventes evaporaram à temperatura ambiente. Os sóli- dos resultantes foram secos em um Iiofilizador para que rendessem 10,3 mg do composto 6 (2609-165-7). O HPLC (Figura 9) do produto 2609-165-7 re- velou um pico de impureza polar (11,3%) com tempo de retenção (RT) em 4,5 min. embora o HPLC de amostras individuais tenha mostrado somente um pico principal (Figura 10). Aparentemente, o composto 6 se converteu vagarosamente durante o processo em um composto mais polar. Descobriu- se que o composto mais polar era o derivado de deacetila do composto 6, como deixa claro o SSI-MS que mostrou um pico de [M+Na]+ intenso a m/z 643 (Figura 11) e RMN de próton (Figura 12) da impureza isolada a 4,5 min onde o pico único para a acetil metila estava ausente.

Alguns experimentos de estabilidade com o composto 6 indica- ram que a desacetilação ocorreu na solução de MeOH, que é ligeiramente básico. Entretanto, era estável em solução ligeiramente ácida. Assim, 2609- 165-7 foi reprocessado na coluna C8 Luna usando 70% de MeOH/30% de água contendo 0,05% de AcOH como eluente para render 3,4 mg do com- posto 6 (2609-172-11). Um cromatograma de HPLC de 2609-172-11 é mos- trado na Figura 13. O RMN de próton (em CD3OD) e SSI-MS são mostrados nas Figuras 14 e 15.

Em um outro processo, 250 g de extrato de erva de São Cristó- vão (BCE) foram agitadas com 1.250 mL de MeOH por 1 hora à temperatura ambiente em um béquer. Nem todos os sólidos se dissolveram mas a análi- se HPLC do filtrado indicou que todo o composto 6 no extrato inicial se dis- solveu (-250 mg). Não obstante a mistura não filtrada foi adicionada a 750 g de sílica-gel (ICN, 60-200 μ) em um balão de fundo redondo de 5 L. O Me- OH foi removido do rotovap com a ajuda de vácuo para um pó seco pesando 1.100 g com 9% de MeOH residual.

O BCE secou na preparação de sílica foi dividido em quatro par- tes de aproximadamente 270 g cada. A mistura foi carregada no SIM e pri- meiramente lavada com 500-600 mL de cloreto de metileno para remover MeOH residual e apoiar. O SIM foi conectado à coluna de sílica de 75 L (KP- Sil; P/N FK0-1107-19073; Lote 027075L; 7,5 χ 25 cm ou 1.750 mL). A coluna principal foi comprimida radialmente a 413,69 kPa (60 psi). O sistema foi elu- ido com acetona a uma vazão de 100 mL/min, e amostras de 500 a 1.000 mL foram coletadas. Após a eluição do composto 6, a coluna foi lavada com 1,0 L de MeOH e re-equilibrada com 2L de acetona. Observou-se que o composto 6 eluiu primariamente a amostra 3 (1.000 mL) depois que aproxi- madamente 900 a 1.000 mL de acetona havia eluído da coluna nas frações 1 e 2. As primeiras 4 corridas renderam aproximadamente 224 mg do com- posto 6. Uma segunda batelada de material partida para a sílica Biotage foi preparada a partir de 100 g de BCE e 500 mL de MeOH e 300 g de sílica. Duas corridas adicionais de Biotage (5 e 6) foram feitas de modo similar às primeiras quatro, com o material de partida rendendo outros 93 mg do com- posto 6. As reuniões do produto das 6 corridas foram combinadas e evapo- raram, transformando-se em um sólido seco sob pressão reduzida.

Os sólidos secos (90 g) da sílica Biotage foram dissolvidos em 720 mL de MeOH e 480 mL de H2O foram adicionados vagarosamente com agitação. Alguns sólidos escuros semelhantes a alcatrão se precipitaram e foram removidos com um filtro. O filtrado turvo foi carregado em uma coluna C18 Bakerbond 60 A, 40 μ Biotage (7,5 χ 25 cm) de 75 L. Após o carrega- mento, que no teste deu negativo para o composto 6, a coluna foi lavada com 5 L de 60% (v/v) Me0H/H20 seguido por 4L de 70% Me0H/H20, e en- tão eluída com o composto 6 utilizando-se 4 L de 80% de Me0H/H20. Após a eluição, a coluna foi lavada com 2L de MeOH. A vazão foi de cerca de 60 mL/min total e as fases móveis de Me0H/H20 continham 0,05% de ácido acético para prevenir a degradação do composto 6. A união de produtos (4L) foi concentrada sob pressão reduzida até que essencialmente todo o Me- OH tivesse sido retirado, e os sólidos precipitados resultantes foram coleta- dos com um funil Buchner e secos com a ajuda de alto vácuo à temperatura ambiente.

Os sólidos, tipo semelhantes a alcatrão, removidos por filtração da primeira preparação C18 em larga escala, contendo cerca de 32 mg do composto 6 foi dissolvido em 2L de mistura de lavagem de MeOH do primei- ro experimento em larga escala, e que continha cerca de 22 mg do Compos- to 6. A mistura foi evaporada até 1L e misturada com 0,67L de água. Al- guns sólidos escuros semelhantes a alcatrão precipitaram e foram coletados com um filtro, dissolvidos em 200 mL de MeOH e misturados com 134 mL de água. Esta mistura também foi filtrada para remover uma pequena quantida- de de semelhantes a alcatrão, e o filtrado foi combinado com o primeiro fil- trado e carregado em uma coluna C18 75S (7,5 χ 9,0 cm; 400 mL) Vydac 300 A, 40 μ Biotage. A coluna foi lavada com 1 L de Me0H/H20 a 80% (fa- ses móveis também continham 0,05% de ácido acético). A união de produtos foi evaporado e os sólidos foram coletados por filtração de modo similar ao experimento em larga escala de Biotage.

A primeira combinação de produto (16,69 g) da coluna de Biota- ge C18 foi misturada com 70 mL de MeOH. A mistura foi sonicada e o preci- pitado foi removido por filtração. O filtrado foi cromatografado (5 corridas, 14 mL cada) em uma coluna C18 ES Industries Chromegabond WR a uma va- zão de 177 mL/min utilizando-se 70% de MeOH/30% de água contendo 0,05% de AcOH como eluente. As frações dos minutos 6-14 de cada corrida foram combinadas e evaporadas para remover o MeOH. O precipitado após a remoção do MeOH foi coletado por centrifugação, e seco em um Iiofilizante para render 6,6 g dos sólidos secos 2609-173-16 (composto 6, 3,2%).

A segunda combinação de produtos (4,3 g) da coluna C18 Bio- tage foi processado de maneira similar para render 2,0 g dos sólidos secos 2609-173-27 (composto 6, 3,06%). 2609-173-16 e 2609-176-27 foram com- binados para que rendessem 8,6 g de 2609-174-6.

2609-174-6 (400 mg) foi dissolvido em 1,3 mL de MeOH conten- do 0,1% de AcOH. A solução foi carregada em uma coluna C8 Phenomenex Luna, a qual foi eluída a uma vazão de escoamento de 24 mL/min com 68% MeOH/32% água contendo 0,05% de AcOH.

Baseado no HPLC analítico, as frações a partir dos minutos 15,8 a 19,8 de cada corrida (total de 22 corridas) foram combinadas, evaporadas para remover o MeOH, e Iiofilizadas até a secura para render 2609-174-28 (1,4 g contendo 12,6% do composto 6). 2609-174-28 foi utilizado para o iso- lamento final do composto 6 em uma coluna C18 YMC-AQ. Um total de 28 corridas foi realizado. 2609-174-28 (50 mg) foi dissolvido em 0,25 mL de MeOH con- tendo 0,1% de AcOH. A solução foi injetada na coluna C18 YMC AQ. A co- luna foi eluída a 9,9 mL/min. com 70% de MeOH/30% de água contendo 0,05% de AcOH. Baseado nos perfis de HPLC analítico, as amostras sele- cionadas de 28 corridas, tipicamente entre os minutos 48,4 a 50,5, foram reunidas, evaporadas e Iiofilizadas para que rendessem o composto 6 (2609- 176-30, 85 mg).

As frações que foram coletadas imediatamente antes dos 48,4 minutos e continham principalmente o composto 6 também foram combina- das e secas, para que rendessem 2609-176-35 (50 mg). 2609-176-35 foi reprocessado (3 corridas) utilizando a mesma coluna e fase móvel para ren- der outro lote do composto 6, que foi combinado com 2609-176-30 para ren- der 102 mg de produto (2609-177-10) com -95% de pureza de cromatogra- fia. Os cromatogramas de HPLC (UV a 205, 230 nm e ELSD) e espectro de RMN de próton do composto 6 (2609-176-10) são mostrados nas figuras 16, 17, 18 e 19, respectivamente. O RMN de próton de 2609-176-10 foi consis- tente com aquele de uma amostra padrão do composto 6. O SSI-MS do composto 6 (Figura 20) mostrou um pico de [M+Na]+ intenso a m/z 685, con- sistente com a fórmula C37H58O10 do composto 6.

Remoção de Carboidratos Enzimáticos

O composto 6 (10 mg) foi dissolvido em 5 mL de MeOH. Um tampão de fosfato de potássio (50 mM, pH 6,0, 10 mL) foi adicionado à solu- ção de MeOH. Celulase (produto Sigma # C0615, 20 mg) foi dissolvido em 10 mL da solução tampão de fosfato de potássio. A solução do composto 6 foi então adicionada à solução de celulase e a mistura foi incubada por 3 dias a 37°C.

A progressão da reação foi monitorada por HPLC da maneira como a seguir: uma alíquota da mistura de reação (20 mL) foi adicionada a MeOH (80 mL) contendo 0,1% de ácido acético (v/v). A amostra foi então analisada em uma coluna HPLC de fase reversa ID SUPELCOSIL LC-8 de 25 cm χ 4,6 mm empregando-se um gradiente de MeOH-água de 20 minu- tos. Após a incubação de 3 dias, 20 mL de CH2Cl2 foram adicionados à mistura reacional, que foi agitada vigorosamente seguido por centrifugação a 2.000 rpm por 3 minutos. A camada aquosa foi retirada e extraída por mais duas vezes com 20 mL de CH2CI2. As camadas orgânicas foram combina- das e o solvente foi removido para render 9,6 mg de produto bruto. O produ- to bruto foi dissolvido em um volume mínimo de CH2Cl2-MeOH a 20:1 e cro- matografado sobre uma coluna de sílica eluída com a mesma mistura de solvente. O desenvolvimento da coluna foi monitorado por TLC utilizando-se o corante de molibdato de cério (1% de CeSO4, 5% de (NH4)Mo7024.4H20 (p/v) e 10% de H2SO4 concentrado (v/v)) e uma mistura de solvente CH2Cl12- MeOH a 15:1. As frações contendo material com um Rfde 0,26 foram reuni- das para que rendessem o composto 1-16 (número do composto da Tabela 1 acima).

Desacetilação do Composto 6

O composto 6 (88% de pureza por cromatografia) foi tratado com 1% de amônia para produzir o composto 1-13 (número do composto da Ta- bela 1, acima).

O composto 6 (88% de pureza por cromatografia) foi aquecido a 85°C por 1 hora para render o composto 1-13 (número do composto da Tabe- la 1 acima).

Ensaios biológicos

A. Ensaio para Determinar a Capacidade de um Composto da Fórmula I de Inibir Aβ-42

Os compostos da presente invenção e extratos contendo tais compostos podem ser ensaiados como inibidores do peptídeo beta-amiloide (1-42) in vitro ou in vivo. Tais métodos de ensaio são descritos em detalhes na Patente US 6.649.196, cujo teor é aqui incorporado a título de referência, na íntegra.

Descobriu-se que os compostos da presente invenção reduzem o peptídeo beta-amiloide (1-42) de forma seletiva, de acordo com ensaio baseado em célula realizado substancialmente da mesma forma que descri- to em US 6.649.196. Β. Ensaio para Determinar a Capacidade de um Composto da Fórmula I de Afetar a Razão total de A3.

Os compostos da presente invenção foram ensaiados pra que se determinassem seus efeitos razão total do peptídeo beta-amiloide (1-42) in vitro utilizando-se um protocolo de ensaio substancialmente similar ao des- crito por Wang et al, J. Biol. Chem. 1996, 50:31894-31902, The Profile of Soluble Amyloid b Protein in Cultured Cell Media, cujo teor é aqui incorpora- do a título de referência. Esse ensaio quantifica a proteína beta-amiloide u- sando espectrometria de imunoprecipitação e de massa (IP-MS). Utilizando o composto 6 para exemplificar, descobriu-se que este composto reduziu o peptídeo beta-amiloide (1-42), ao mesmo tempo onde aumentou o peptídeo beta-amiloide (1-37) e o peptídeo beta-miloide (1-39). Esses resultados são retratados na Figura 21.

O composto 6 foi ensaiado também de acordo com o método descrito por Wang et al, 7 cavidades de células (APPp) e células 7PA2 (APPv717f). As mutações APP7-I7 aumentam o nível relativo do peptídeo be- ta-amiloide (1-42). Nesse ensaio, mostrou-se que o composto 6 reduz o pep- tídeo beta-amiloide-β (1-42), ao mesmo tempo onde aumenta o peptídeo beta-amiloide (1-39). Esses resultados são retratados na figura 22.

Embora tenhamos descrito diversas modalidades desta inven- ção, é aparente que nossos exemplos básicos podem ser alterados para que forneçam outras modalidades que utilizam os compostos e métodos desta invenção. Assim, deve ser notado que o escopo desta invenção deve ser definido pelas reivindicações anexadas e não pelas modalidades específicas que foram aqui apresentadas como exemplos.

Claims

1. Composto de fórmula I: <formula>formula see original document page 90</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde: cada um de Anel A, Anel B, Anel C1 Anel D, e Anel E é independentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático; G é S, CH2, NR, ou O; R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hi- droxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente prote- gido, N(R)2, ou um grupo amino adequadamente protegido, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; cada R é, independentemente, hidrogênio, um grupo alifático C1-6 opcional- mente substituído, ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 heteroátomos in- dependentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, onde: dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 1 a 4 hetero- átomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxo- fre; η é 0 a 2; R3, R4, R7, e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogê- nio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequa- damente protegido, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; m é O a 2; R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rn)3, R, OR1 um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R1 OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR1 O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; cada T é, independentemente, uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de T são opcional e inde- pendentemente substituídas por -O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)-, ou -S(O)2-; cada R' e R" é, independentemente, selecionado de R1 OR1 SR1 SO2R1 O- SO2R, N(R)2l NR(CO)R, NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2l NR(CO)OR1 (CO)OR1 O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; R6 é halogênio, R1 OR1 SR1 SO2R1 OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, N(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R1 (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados dé halogênio, R, OR, SR, ou N(R)2, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 he- teroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; e Q é uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcional- mente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de Q são opcional e independentemente substi- tuídas por-O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)-, ou -S(O)2-.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, onde: G é O; e R1 e R2 são, cada um, independentemente, R ou OR.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, onde R1 e R2 são, cada um, independentemente, R onde R é hidrogênio ou um grupo ali- fático C-i-6 opcionalmente substituído.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 2, onde R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 6 membros, saturado, parcial- mente saturado, ou arila tendo de O a 2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, onde: R5 é T-C(R')3 ou T-C(R')2C(R")3; cada T é independentemente uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-4 alquilideno, linear ou ramificada, onde uma unidade de metileno de T é opcionalmente substituída por -O-, -N(R)-, ou -S-; e cada R' e R" é independentemente R, OR, OC(O)R, SR, ou N(R)2.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, onde: Q é uma cadeia de C1-2 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ra- mificada, saturada ou insaturada, onde até um unidade de metileno de Q é opcionalmente substituída por-O-, -N(R)-, ou -S-. -6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, onde: Q é uma cadeia de C1-2 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ra- mificada, saturada ou insaturada, onde até uma unidade de metileno de Q é opcionalmente substituída por-O-, -N(R)-, ou -S-.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, onde Q é -O-.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, onde o dito com- posto é de fórmula V-c: <formula>formula see original document page 92</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, onde o dito com- posto é de fórmula V-d ou V-e: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, onde o dito composto é de fórmula V-f: <formula>formula see original document page 93</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, onde o dito composto é de fórmula V-g ou V-h: <formula>formula see original document page 93</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, onde R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel carbocíclico de 3 a 6 membros, sa- turado e R7 é-OH.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, onde o dito composto é selecionado de um composto de fórmula VII, VIII, IX, ou X: <formula>formula see original document page 93</formula> X OU X.

14. Composto selecionado de: <formula>formula see original document page 94</formula>

15. Composto de acordo com a reivindicação rido composto é selecionado de: -14, em que o refe- <formula>formula see original document page 95</formula>

16. Método para preparar um composto de fórmula V-a: <formula>formula see original document page 95</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde: cada um de Anel A, Anel B1 Anel C1 Anel D, e Anel E é independentemente saturado, parcialmente insaturado ou aromático; G é S, CH2, NR, ou O; R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hi- droxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente prote- gido, N(R)2, ou um grupo amino adequadamente protegido, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; cada R é, independentemente, hidrogênio, um grupo alifático C1-6 opcional- mente substituído, ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 0 a 4 heteroátomos in- dependentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, onde: dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 1 a 4 hetero- átomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxo- fre; η é 0 a 2; R3, R4, R7, e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogê- nio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R1 OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequa- damente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R1 NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; m é O a 2; R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rn)3l R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR1 um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R1 N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R1 NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR1 (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; cada T é, independentemente, uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de T são opcional e inde- pendentemente substituídas por-O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)-, ou -S(O)2-; cada R' e R" é, independentemente, selecionado de R, OR1 SR, SO2R, O- SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; R6 é halogênio, R, OR, SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2l ou O(CO)N(R)2; R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR, SR1 ou N(R)2l ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 he- teroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, compreendendo as etapas de: (a) proporcionar um composto de fórmula V-b: <formula>formula see original document page 97</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde: cada um de Anel A1 Anel B, Anel C, Anel D, e Anel E é, independentemente, saturado, parcialmente insaturado ou aromático; G é S, CH2, NR, ou O; R1 e R2 são, cada um, independentemente, halogênio, R, OR, um grupo hi- droxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente prote- gido, N(R)2, ou um grupo amino adequadamente protegido, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcial- mente insaturado, ou arila tendo de 0 a 2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; Cada R é independentemente hidrogênio, um grupo alifático C1-6 opcional- mente substituído, ou um anel de 3 a 8 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 4 heteroátomos in- dependentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, onde: dois R no mesmo átomo de nitrogênio são opcionalmente toma- dos juntos com o dito átomo de nitrogênio para formar um anel de 3 a 8 membros, saturados, parcialmente insaturado, ou arila tendo de 1 a 4 hete- roátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; η é O a 2; R3, R4, R7, e R8 são, cada um, independentemente, selecionados de halogê- nio, R, OR, um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR, um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R, OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequa- damente protegido, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; m é O a 2; R5 é T-C(R1)3, T-C(R1)2C(Rm)3, R1 OR1 um grupo hidroxila adequadamente protegido, SR1 um grupo tiol adequadamente protegido, SO2R1 OSO2R, N(R)2, um grupo amino adequadamente protegido, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R1 (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; cada T é, independentemente, uma ligação de valência ou uma cadeia de C1-6 alquilideno, opcionalmente substituída, linear ou ramificada, saturada ou insaturada, onde até duas unidades de metileno de T são opcional e inde- pendentemente substituídas por-O-, -N(R)-, -S-, -C(O)-, -S(O)-, ou -S(O)2-; cada R' e R" é, independentemente, selecionado de R, OR, SR, SO2R, O- SO2R, N(R)2, NR(CO)R, NR(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR, O(CO)R, (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; R6 é halogênio, R, OR1 SR, SO2R, OSO2R, N(R)2, NR(CO)R, N(CO)(CO)R, NR(CO)N(R)2, NR(CO)OR, (CO)OR1 O(CO)R1 (CO)N(R)2, ou O(CO)N(R)2; R9 e R9 são, cada um, independentemente, selecionados de halogênio, R, OR, SR, ou N(R)2, ou ReR são tomados juntos para formar um anel de 3 a 7 membros, saturado, parcialmente insaturado, ou arila tendo de O a 2 he- teroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; e R10 é uma porção contendo açúcar ou similar ao açúcar, e (b) tratar o composto de fórmula V-b com uma enzima adequada para formar o composto de fórmula V-a.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, onde a enzima adequada é uma celulase, uma xilanase, uma xilosidase, ácido glicirrizínico hidrolase, ou uma glucuronidase.

18. Composição que compreende um composto como definido na reivindicação 1, e um carreador, adjuvante, ou veículo farmaceuticamente aceitável.

19. Método para inibição de produção de peptídeo beta-amiloide em um paciente, onde o dito método compreende administrar ao dito pacien- te uma composição como definida na reivindicação 18.

20. Método para inibir a produção de peptídeo beta-amiloide (1- -42) em um paciente, onde o dito método compreende administrar ao dito paciente uma composição como definida na reivindicação 18.

21. Método, de acordo com a reivindicação 19, onde o dito mé- todo não afeta o processamento do "Notch".

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, onde níveis de peptídeos beta-amiloide (1-42) são reduzidos e níveis de beta-amiloide (1- -40) não são substancialmente reduzidos.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, onde o nível de pelo menos um de beta-amiloide (1-37) e beta-amiloide (1-39) é aumentado.

24. Método para tratar ou diminuir a gravidade de um distúrbio associado a um peptídeo beta-amiloide (1-42), onde o método compreende administrar a um paciente uma composição como definido na reivindicação 18.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, onde o distúrbio é mal de Alzheimer, mal de Parkinson, síndrome de Down, miosite do corpo incluso, angiopatia amiloide cerebral, comprometimento cognitivo moderado, demência do corpo de Lewy, catarata, uma tauopatia, doença de Huntington, esclerose lateral amiotrófica (ALS/doença de Lou Gerhig), diabetes tipo 2, doença transtirretina amiloide, doença de príon (inclusive doença de Creutz- feldt-Jakob, síndrome de Gerstmann-Stràussler-Scheinker, insônia familial fatal, e Kuru).

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, onde o dito dis- túrbio é mal de Alzheimer, mal de Parkinson, ou síndrome de Down.

27. Método para reduzir níveis de peptídeo beta-amiloide (1-42) em uma célula, que compreende contatar a dita célula com um composto como definido na reivindicação 1.