BRPI0706745A2

BRPI0706745A2 - sal, processo para preparar um composto, formulação farmacêutica, e, usos de um sal e de um composto

Info

Publication number: BRPI0706745A2
Application number: BRPI0706745-3A
Authority: BR
Inventors: Anna-Lena Berg; Ratan Bhat; Tesfai Sebhatu; Erica Stahle
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2006-02-02
Filing date: 2007-01-31
Publication date: 2011-04-05
Also published as: SG169381A1; JP2009525324A; CA2641900A1; MX2008009719A; ECSP088647A; NZ570849A; EP1981869A4; RU2415137C2; PE20090192A1; WO2007089191A1; ZA200806725B; AR059225A1; UA94251C2; EP1981869A1; MY146102A; TW200800977A; AU2007210336A1; CN101378754A; SA07280004B1; CN101379053A

Abstract

SAL, PROCESSO PARA PREPARAR UM COMPOSTO, FORMULAçãO FARMACêUTICA, E, USOS DE UM SAL E DE UM COMPOSTO A presente invenção refere-se a um novo sal farmaceuticamente aceitável, o citrato de 2-hidróxi-3 -[5 -(morfolin-4-il-metil)- piridin-2-il] lH-indol-5-carbonitrila, a um processo para sua preparação, às formulações farmacêuticas contendo o citado sal e ao uso do citado sal ativo em terapia, e particularmente para distúrbios e condições relacionados com GCK3.

Description

Sal processo para preparar um composto, formulaçãofarmacêutica, e, usos de um sal e de um composto"

campo da invenção

A presente invenção refere-se a um novo salfarmaceuticamente aceitável de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]1H-indol-5-carbonitrila, o citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila, a um processo para a sua preparação, àsformulações farmacêuticas contendo o citado sal e ao uso de citado sal ativoem terapia.

Fundamentos da Invenção

2-Hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila como uma base livre e o sal de cloridrato da mesma são descritosem WO 03/082853. Este composto é útil porque possui atividadefarmacológica pelo fato de exibir efeito inibitório sobre GSK3 (WO03/082853). Este composto poderia ser usado para tratar mal de mal deAlzheimer, demências, doenças neurodegenerativas crônicas e agudas,distúrbios bipolares, esquizofrenia, diabetes, perda de cabelo, distúrbiosrelacionados com osso e todos os distúrbios listados descritos em WO03/082853, que são por meio desta incorporados neste relatório descritivocomo referência.

Glicogênio sintase quinase 3 (GSK3) é uma serina / treoninaproteína quinase composta de duas isoformas (a e β), que são codificadas porgenes distintos mas são elevadamente homólogas dentro do domíniocatalítico. GSK3 é elevadamente expressada no sistema nervoso central eperiférico. GSK3 fosforila vários substratos incluindo tau, β-catenina,glicogênio sintase, piruvato desidrogenase e fator de iniciação dealongamento 2b (eIF2b). Insulina e fatores de crescimento ativam proteínaquinase B, que fosforila GSK3 em resíduo serina 9 e inativa.

Mal de Alzheimer (AD), demências, e taupatias.AD é caracterizado por declínio cognitivo, disfunçãocolinérgica e morte neuronal, emaranhados neurofibrilares e placas senisconsistindo de depósitos de amilóide-β. A seqüência destes eventos em ADnão está clara, mas é crida que está relacionada. Glicogênio sintase quinase 3 β(GSK3P) ou quinase fosforilante de Tau seletivamente fosforila a proteínaTau associada com microtúbulo em neurônios que estão hiperfosforilados emcérebros AD. Tau hiperfosforilada possui afinidade menor por microtúbulos eacumula como filamentos helicoidais pareados, que são os componentesprincipais que constituem emaranhados neurofibrilares e filamentos deneurópilos em cérebros AD. Isto resulta em despolimerização demicrotúbulos, que acarreta degeneração axonal retrógada distai e distrofianeurítica. Emaranhados neurofibrilares são consistentemente encontrados emdoenças tais como AD, esclerose lateral amiotrófica, demência deparkinsonismo de Gaum, degeneração corticobasal, demência pugilística etrauma de cabeça, síndrome de Down, parkinsonismo pós-encefálico,paralisia supranuclear progressiva, Doença de Niemann-Pick e Doença dePick. Adição de amilóide-β em culturas hipocampais primárias resulta emhiperfosforilação de tau e um estado similar a filamentos helicoidais pareadosvia indução de atividade de GSK^, seguida por disrupção de transporteaxonal e morte neuronal (Imahori e Uchida., J. Biochem 121:179-188, 1997).GSK^ preferencialmente marca emaranhados neurofibrilares e tem sidomostrado que está ativa em neurônios pré-emaranhados em cérebros AD.Níveis de proteína GSK3 também estão aumentados em 50% em tecidocerebral de pacientes AD. Ademais, GSK^ fosforila piruvato desidrogenase,uma enzima chave na rota glicolítica e previne a conversão de piruvato emacetil-Co-A (Hoshi et al., PNAS 93:2719-2723, 1996). Acetil-Co-A é críticapara a síntese de acetilcolina, um neurotransmissor com funções cognitivas.Acúmulo de amilóide-β é um evento inicial em AD. Camundongos GSK Tgmostram níveis aumentados de amilóide-β em cérebro. Também,camundongos PDAPP alimentados com Lítio mostram níveis de amilóide-βdiminuídos em hipocampo e área de placa amilóide decrescida (Su et al.,Biochemistry 2004, 43:6899-6908). Assim, inibição de GSK3p pode terefeitos benéficos em progressão bem como em déficits cognitivos com mal deAlzheimer e outros acima referidos às doenças.

Doenças neurodegenerativas agudas e crônicas

Tem sido mostrado que ativador mediado por fator decrescimento de rota PI3K /Akt desempenha um papel chave em sobrevivêncianeuronal. A ativação desta rota resulta em inibição de GSK3p. Estudosrecentes (Bhat et. al., PNAS 97:11074-11079 (2000)) indicam que a atividadede GSK3P é aumentada em modelos celular e animal de neurodegeneração talcomo isquemia cerebral ou após privação de fator de crescimento. Porexemplo, a fosforilação de sítio ativo foi aumentada em neurônios vulneráveisà apoptose, um tipo de morte celular comumente considerado em ocorrer emdoenças degenerativas agudas e crônicas tais como distúrbios cognitivos, Malde Alzheimer, Mal de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, Doença deHuntington e demência por HIV e lesão cerebral traumática; e como umderrame cerebral isquêmico. Lítio foi neuroprotetor em inibição de apoptoseem células e no cérebro em doses que resultaram na inibição de GSK3p.Assim inibidores de GSK3P poderiam ser úteis em atenuação do curso dedoenças neurodegenerativas.

Distúrbios bipolares (BD)

Distúrbios bipolares são caracterizados por episódios maníacose episódios depressivos. Lítio tem sido usado para tratar BD baseado em seusefeitos estabilizadores de humor. A desvantagem do lítio é a janela terapêuticaestreita e o perigo de overdose que pode levar à intoxicação de lítio. Adescoberta de que o lítio inibe GSK3 em concentrações terapêuticas temaumentado a possibilidade de que esta enzima representa um alvo chave paraa ação de lítio no cérebro (Stambolic et al., Curr. Biol. 6:1664-1668, 1996;Klein e Melton; PNAS 93:8455-8459, 1996; Gould et al.,Neuropsychopharmacology, 1:32-8, 2004). Tem sido mostrado que inibidorde GSK3 reduz o tempo de imobilização em teste de natação forçada, ummodelo para avaliar comportamento depressivo (0'Brien et al., J Neurosci2004, 24:66791-6798) GSK3 tem estado associada com um polimorfismoencontrado em distúrbio bipolar II (Szczepankiewicz et al.,Neuropsychobiology. 2006;5 3(l):51-6). Inibição de GSK3p portanto podeser de relevância terapêutica no tratamento de BD bem como em pacientesAD que possuem distúrbios afetivos.

Esquizofrenia

Evidência acumulada implica atividade anormal de GSK3 emdistúrbios de humor e esquizofrenia. GSK3 está envolvida em cascatas detransdução de sinal de múltiplos processos celulares, particularmente durantedesenvolvimento neural. Kozlovsky et al (Am J Psychiatry 2000 May;157(5):831-3) verificaram que níveis de GSK3P estavam 41% mais baixosnos pacientes esquizofrênicos do que em indivíduos de comparação. Esteestudo indica que esquizofrenia envolve patologia neurodesenvolvimental e aregulação anormal de GSK3 poderia desempenhar um papel eraesquizofrenia. Ademais, níveis reduzidos de β-catenina têm sido relatados empacientes exibindo esquizofrenia (Cotter et al., Neuroreport 9:1379-1383(1998)). Antipsicóticos atípicos tais como olanzapina, clozapina, quetiapina, eziprasidona, inibem GSK3 pelo aumento de fosforilação de ser9 sugerindoque antipsicóticos podem exercer seus efeitos benéficos via inibição de GSK3(Rosborough et al., Int J Neuropsychopharmacol, 4:1-13 2006).

Diabetes

Insulina estimula síntese de glicogênio em músculos esqueléticos via a desfosforilação e assim a ativação de glicogênio sintase.Sob condições de repouso, GSK3 fosforila e inativa glicogênio sintase viadesfosforilação. GSK3 é também sobreexpressada em músculos de pacientesdiabéticos de Tipo II (Nikoulina et al., Diabetes 2000 Feb; 49(2):263-71).Inibição de GSK3 aumenta a atividade de glicogênio sintase diminuindo destemodo os níveis de glicose por sua conversão em glicogênio. Em modelosanimais de diabetes, inibidores de GSK3 abaixaram os níveis de glicose deplasma em até 50 % (Cline et al., Diabetes, 2002, 51:2903-2910; Ring et at.,Diabetes 2003, 52:588-595). Inibição de GSK3 pode portanto ter relevânciaterapêutica no tratamento de diabetes de Tipo I e de Tipo II e neuropatia diabética.

Alopécia

GSK3 fosforila e degrada β-catenina. β-Catenina é um efetorda rota para a síntese de ceratonina. Estabilização de β-catenina pode acarretardesenvolvimento de cabelo. Camundongos expressando uma β-cateninaestabilizada por mutação de sítios fosforilados por GSK3 sofrendo de umprocesso parecendo com morfogênese cabelo de novo (Gat et al., Cell 1998Nov 25;95 (5):605-14)). Os novos folículos formaram glândulas sebáceas epapila dermal, normalmente estabelecidas apenas em embriogênese. Assiminibição de GSK3 pode oferecer tratamento para calvície.

Condições e distúrbios relacionados com osso

Inibidores de GSK3 poderiam ser usados para o tratamento dedistúrbios ou outras condições relacionados com osso, que envolve umanecessidade de formação de osso nova e aumentada. Remodelagem doesqueleto é um processo contínuo, controlado por hormônios sistêmicos taiscomo hormônio de paratireóide (PTH), fatores locais (e.g. prostaglandina E2),citocinas e suas substâncias biologicamente ativas. Dois tipos de célula são deimportância chave: osteoblastos (responsáveis pela formação de osso) eosteoclastos (responsáveis pela reabsorção de osso). Via o RANK, sistemaregulatório de osteoprotegerina e ligante RANK estes dois tipos de célulainteragem para manter a renovação óssea normal (Bell NH, Current DrugTargets - Immune, Endocrine & Metabolic Disorders, 2001, 1:93-102).Osteoporose é um distúrbio esquelético no qual massa ósseabaixa e deterioração da microarquitetura óssea levam à fragilização óssea e aorisco de fratura aumentados. Para tratar osteoporose, as duas estratégiasprincipais são quer inibir a reabsorção óssea quer estimular a formação óssea.

A maioria das drogas correntemente no mercado para o tratamento deosteoporose atua para aumentar a massa óssea por inibição de reabsorçãoóssea osteoclástica. E reconhecido que uma droga com a capacidade paraaumentar a formação de osso seria de grande valor no tratamento deosteoporose bem como teria o potencial para aumentar a cicatrização defratura em pacientes.

O uso de inibidores de GSK3 e osteoporose primária esecundária, onde osteoporose primária inclui osteoporose pós-menopausal eosteoporose senil em ambos homens e mulheres, e osteoporose secundáriainclui osteoporose induzida por cortisona, bem como qualquer outro tipo deosteoporose secundária induzida. Em adição a isto, inibidores de GSK3também podem ser usados em tratamentos de mieloma. Os inibidores deGSK3 podem ser local ou sistemicamente administrados, em regimes deformulação diferentes, para tratar estas condições.

Doença inflamatória

A descoberta de que inibidores de GSK3 proporcionam efeitosantiinflamatórios tem aumentado a possibilidade do uso de inibidores deGSK3 para intervenção terapêutica em doenças inflamatórias. (Martin et al.,Nat Immunol 2005, 6:777-784; rev. em Jope et al., Neurochem Res 2006,Aug 30). Inflamação é uma característica comum de uma ampla variedade decondições incluindo Mal de Alzheimer e distúrbios de humor.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

O objetivo da presente invenção é proporcionar um sal docomposto de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila (composto (I)), a saber o citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]1H-indol-5-carbonitrila,

<formula>formula see original document page 8</formula>

possuindo um efeito inibidor seletivo em GSK3, umabiodisponibilidade boa, uma solubilidade boa e uma higroscopicidade baixaque o torna adequado para ser formulado em formulações farmacêuticas.

Tem sido verificado de modo surpreendente que o sal decitrato do composto de fórmula (I) de acordo com a presente invenção mostrauma estabilidade química melhorada sobre o sal de cloridrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] 1H-indol-5-carbonitrila preparado comodescrito em WO 03/082853 que o torna particularmente adequado para serformulado em formulações farmacêuticas.

Na formulação de formulações farmacêuticas, é importanteque o composto farmaceuticamente aceitável (o composto de droga ativa)esteja em uma forma na qual ele pode ser convenientemente manuseado eprocessado. Isto é importante, não apenas do ponto de vista de obtenção deprocesso de manufatura comercialmente viável, mas também do ponto devista de manufatura subseqüente de formulações farmacêuticascompreendendo o composto de droga ativa.

A estabilidade química, a estabilidade no estado sólido, e a"vida-de-prateleira" dos ingredientes ativos também são fatores muitoimportantes. O composto de droga e as formulações contendo-o devem sercapazes de serem eficazmente armazenados durante períodos de tempoapreciáveis, sem exibirem uma mudança significativa em característicasfísico-químicas do componente ativo, e.g. suas composição química,densidade, higroscopicidade e solubilidade.

O termo "estabilidade química" significa que o composto podeser armazenado em uma forma isolada, ou na forma de uma formulação naqual ele é proporcionado em mistura com veículos, dilientes ou adjuvantesfarmaceuticamente aceitáveis (e.g., em uma forma de dosagem oral, tal comoum tablete, uma cápsula, etc.), sob condições de armazenagem normais, compouca ou nenhuma decomposição ou degradação química.

Assim, na manufatura de formulações de drogafarmaceuticamente aceitáveis e comercialmente viáveis é importante, sempreque possível, proporcionar o composto de droga em uma formasubstancialmente cristalina e estável.

Como aqui usado, o termo "substancialmente cristalino"significa pelo menos cerca de 50% cristalino e variando até 100% cristalino.A presente invenção proporciona citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila que é pelo menos cerca de 50%cristalino, pelo menos cerca de 60% cristalino, pelo menos cerca de 70%cristalino, pelo menos cerca de 80% cristalino, pelo menos cerca de 90%cristalino, pelo menos cerca de 95% cristalino, pelo menos cerca de 98%cristalino, ou cerca de 100% cristalino em forma.

FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

De acordo com um aspecto da presente invenção sãoproporcionadas formulações farmacêuticas compreendendo o sal de citrato decomposto (I), 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila, para uso na prevenção e/ou no tratamento de condiçõesassociadas com glicogênio sintase quinase-3.

A formulação pode estar em uma forma adequada paraadministração oral, por exemplo como um tablete, para injeção parenteralcomo uma solução ou suspensão estéril, para administração local em umacavidade corporal ou em uma cavidade óssea, por exemplo como umasuspensão ou solução de injeção estéril.

Em geral a formulação acima pode ser preparada em umamaneira convencional usando diluentes ou veículos farmaceuticamenteaceitáveis. Doses diárias adequadas do composto de fórmula (I) no tratamentode um mamífero, incluindo homem, são aproximadamente de 0,01 a 250mg/kg de peso corporal em administração peroral e cerca de 0,001 a 250mg/kg de peso corporal em administração parenteral. A dose diária típica dosingredientes ativos dentro de uma faixa ampla dependerá de vários fatores taiscomo a indicação relevante, a rota de administração, a idade, o peso e o sexodo paciente e pode ser determinado por um médico.

Para o uso veterinário as quantidades de componentesdiferentes, a forma de dosagem e a dose do medicamento podem variar edependerão de vários fatores como por exemplo o requerimento individual doanimal tratado.

Um sal farmaceuticamente aceitável de composto de fórmula(I), pode ser usado como tal mas normalmente será administrado na forma deuma formulação farmacêutica na qual o sal de composto de fórmula (I)(ingrediente ativo) está em associação com um diluente ou veículofarmaceuticamente aceitável. Dependente do modo de administração, aformulação farmacêutica pode compreender de 0,05 a 99%p (por cento empeso), por exemplo de 0,10 a 50%p, de ingrediente ativo, todas aspercentagens sendo baseadas na composição total.

Um diluente ou veículo inerte inclui água, poli(etileno-glicol)aquoso, carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, um açúcar (talcomo lactose), pectina, dextrina, amido, tragacanto, celulose microcristalina,metil-celulose, sódio-carbóxi-metil-celulose ou manteiga de cacau.

Uma formulação da invenção pode estar na forma de tableteou injetável. O tablete pode compreender adicionalmente um desintegrantee/ou pode estar revestido (por exemplo com um revestimento entérico ourevestido com um agente de revestimento tal como hidróxi-propil-metil-celulose).

A invenção adicionalmente proporciona um processo para apreparação de uma formulação farmacêutica da invenção que compreendemisturar um sal farmaceuticamente aceitável de composto de fórmula (I),como definido aqui antes com um veículo inerte ou diluentefarmaceuticamente aceitável.

Um exemplo de uma formulação farmacêutica da invenção éuma solução injetável contendo um composto da invenção, ou um salfarmaceuticamente aceitável, como definido aqui antes, e água estéril, e, senecessário, quer hidróxido de sódio quer ácido clorídrico para trazer o pH daformulação final para cerca de pH 5, e opcionalmente um tensoativo paraauxiliar na dissolução.

Um exemplo de uma formulação adequada é uma soluçãolíquida compreendendo citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila a 5,0% mg/mL dissolvido em água pura para100%.

USOS MÉDICOS

Surpreendentemente, tem sido verificado que o novo citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitriladefinido na presente invenção, é bem adequado para inibir glicogênio sintasequinase-3 (GSK3). Conseqüentemente, é esperado que o citado composto dapresente invenção seja útil na prevenção e/ou no tratamento de condiçõesassociadas com atividade de glicogênio sintase quinase-3, i.e. os compostospodem ser usados para produzir um efeito inibitório de GSK3 em mamíferos,incluindo humano, em necessidade de tal prevenção e/ou tratamento.

GSK3 é elevadamente expressada nos sistemas nervososcentral e periférico e em outros tecidos. Assim, é esperado que o composto dainvenção seja bem adequado para a prevenção e/ou o tratamento de condiçõesassociadas com glicogênio sintase quinase-3 nos sistemas nervosos central eperiférico. Em particular, é esperado que o composto da invenção sejaadequado para a prevenção e/ou o tratamento de condições associadas comdistúrbios cognitivos e estados pré-dementes, especialmente demência, Malde Alzheimer (AD), Déficit Cognitivo em Esquizofrenia (CDS),Enfraquecimento Cognitivo Suave (MCI), Enfraquecimento de MemóriaAssociado com a Idade (AAMI), Declínio Cognitivo Associado com a Idade(ARCD) e Enfraquecimento Cognitivo Sem Demência (CIND), doençasassociadas com patologias de emaranhados neurofibrilares, DemênciaFrontotemporal (FTD), Demência Frontotemporal do Tipo Parkinson (FTDP),paralisia supranuclear progressiva (PSP), Doença de Pick, Doença de Pick-Niemann, degeneração corticobasal (CBD), lesão cerebral traumática (TBI) edemência pugilística.

Uma modalidade da invenção refere-se à prevenção e/ou aotratamento de Mal de Alzheimer, especialmente ao uso no atraso daprogressão de doença de Mal de Alzheimer.

Outras condições são selecionadas do grupo consistindo desíndrome de Down, demência vascular, Mal de Parkinson (PD),parkinsonismo pós-encefálico, demência com corpos de Lewy, demência porHTV, Doença de Huntington, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doençasneuromotoras (MND, doença de Creuztfeld-Jacob e doenças de prion.

Outras condições são selecionadas do grupo consistindo dedistúrbio de déficit de atenção (ADD), distúrbio de hiperatividade com déficitde atenção (ADHD) e distúrbios afetivos, nos quais distúrbios afetivos sãoDistúrbio Bipolar incluindo mania aguda, depressão bipolar, manutençãobipolar, distúrbios depressivos maiores (MDD) incluindo depressão,depressão maior, estabilização de humor, distúrbios esquizoafetivos incluindoesquizofrenia, e distimia.

Outras condições são selecionadas do grupo consistindo dediabetes de Tipo I, diabetes de Tipo II, neuropatia diabética, alopecia edoenças inflamatórias.

Uma modalidade da invenção refere-se à prevenção e/ou aotratamento de distúrbios relacionados com osso em mamíferos.

Outro aspecto da invenção é direcionado ao uso de citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila naprevenção e/ou no tratamento de para tratar osteoporose em mamíferos.

Um aspecto da invenção é direcionado ao uso de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila parapromover e/ou aumentar formação de osso em mamíferos.

Um aspecto da invenção é direcionado ao uso de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila paraaumentar a densidade mineral óssea em mamíferos.

Outro aspecto da invenção é direcionado ao uso de citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] lH-indol-5-carbonitrila parareduzir a velocidade de fratura e/ou para aumentar a velocidade decicatrização de fratura em mamíferos.

Outro aspecto da invenção é direcionado ao uso de citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila paraaumentar a formação de osso poroso e/ou a formação de osso novo emmamíferos.

A dose requerida para tratamento terapêutico ou preventivo deuma doença particular ou de uma condição particular necessariamente serávariada dependendo do hospedeiro tratado, da rota de administração e daseveridade da doença ou lesão sendo tratada.

A presente invenção refere-se ao uso de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila na manufatura deum medicamento para a prevenção e/ou o tratamento de condições associadascom glicogênio sintase quinase-3.No contexto do presente relatório descritivo, o termo "terapia"também inclui "prevenção" a não ser haja indicações específicas do contrário.Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser entendidoscorrespondentemente.

A invenção também proporciona um método de tratamentoe/ou de prevenção de condições associadas com glicogênio sintase quinase-3compreendendo administrar a um mamífero, incluindo homem ou animal emnecessidade de tal tratamento e/ou prevenção uma quantidadeterapeuticamente eficaz do citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila.

MÉTODO DE FORMAÇÃO DE SAL

A formação de sal do composto de fórmula (I), sal de citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila, podeser preparada pela misturação de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila com ácido cítrico na presença de um solvente. Oequivalente de ácido cítrico pode variar entre 1 e 3 equivalentes em mol.

A reação pode ser realizada em um solvente, solventesadequados são éteres tais como 1,4-dioxano, dietil-éter ou alcoóis tais comometanol, etanol, propanol, ou cetonas tais como acetona, isobutil-metil-cetona, ou acetatos tais como acetato de etila, acetato de butila, ou ácidosorgânicos tais como ácido acético, ou suas misturas, opcionalmente usandoágua como um aditivo. O solvente, que é uma mistura de etanol e água ouácido acético é adequado.

O volume total de solventes usado pode variar entre 1 (v/p) e1OO (v/p) partes em volume por peso de material inicial, preferivelmente entre10 (v/p) e 45 (v/p) partes em volume por peso de material inicial. Atemperatura da reação pode estar entre -3O°C e +150°C, preferivelmente entre-5°Ce+100°C.

O composto de fórmula (!) puro, citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila, pode ser obtido porcristalização com ou sem um aditivo em solventes adequados para obter umsólido cristalino possuindo uma pureza de cerca de 95% e preferivelmentecerca de 98%

Outro objetivo da presente invenção é o processo paraformação de sal como descrito acima.

EXEMPLOS DE TRABALHO

Os seguintes exemplos descreverão, mas não limitarão, ainvenção.

Exemplo 1

Sal de citrato de 2-hidróxi-3-r5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] lH-indol-5-carbonitrila

2-Hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila (5,14 kg, 15,4 mol) foi suspensa em etanol (54 L) na temperaturaambiente. A suspensão foi aquecida para uma temperatura interna de 70°C euma solução de ácido cítrico (3,424 kg, 17,82 mol) em água (103 L) foiadicionada mantendo a temperatura interna acima de 65°C. A mistura foiaquecida para refluxar. Após isto a solução resultante foi misturada comcarvão ativo (0,412 kg) e refluxo foi continuado por 3,5 h após as quais amistura reacional foi clarificada por filtração a 83 0C seguido por esfriamentopara a temperatura ambiente durante 20 h. Após filtração o precipitado foilavado duas vezes com uma mistura fria de etanol/água (6,9 L/13,7 L).Secagem sob vácuo a 50°C deu 6,648 kg, rendimento de 82,2% de citrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrilapossuindo uma pureza de pelo menos 98%. O conteúdo de paládio foi menordo que 1 ppm e o conteúdo de zinco foi menor do que 10 ppm. 1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz) δ 14,7 (br s, 1 H), 11,55 (s, 1 H), 10,98 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,08 (br d, J= 1,84Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,90 (br d, J = 8,92Hz, 1 H), 7,31(d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,02 (d, J= 8,0Hz), 4,28 (s, 2 H), 3,97 (m, 2 H), 3,94 (m,2Η), 3,35 (m, 9Η), 3,32 (m, 2Η) ppm; 13C NMR (afó-DMSO, 400MHz) δ168,9, 148,5, 142,7, 139,8, 137,5,126,4, 124,9, 124,8, 120,9, 119,4, 118,4,113,3, 109,0, 101,6, 85,7, 63,1, 55,5, 50,3, 40,1, 39,9, 39,7, 39,2, 39,0,38,8ppm; MS (ES) m/z [M++!] 335.

Os cristais foram analisados por difração de raios-X em pó(XRPD). O difratograma da Forma A mostra os seguintes valores-d emAngstrom e intensidades relativas: 12,7(vs), 7,6(w), 6,8(vs), 6,3(s), 5,9(w),5,7(m), 5,l(m), 4,87(w), 4,57(m), 4,38(s), 4,23(s), 4,16(w), 4,07(m), 3,80(w),3,69(m), 3,65(w), 3,41(m), 3,37(w), 3,32(m), 3,17(m), 3,12(m), 2,88(w),2,86(m), 2,78(w), 2,65(w), 2,50(w), 2,45(w).

Os valores-d significativos em Angstrom e de intensidadesrelativas são: 12,7(vs), 6,8(vs), 6,3(s), 4,38(s), 4,23(s), 3,41(m).

Cristalinidade de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila foi analisada usando difração deraios-X em pó (XRPD) como descrito abaixo:

Os picos, identificados com valores-d calculados da fórmulade Bragg e intensidades, têm sido extraídos do difratograma de sal de citratocristalino. Apenas os picos principais, que são mais característicos,significativos, distintos e/ou reproduzíveis, têm sido tabulados, mas picosadicionais podem ser extraídos, usando métodos convencionais, dodifratograma. A presença destes picos principais, reproduzíveis e dentro dolimite de erro, é para a maioria das circunstâncias suficiente para estabelecer apresença de citado sal cristalino. As intensidades relativas (int. rei.) são menosconfiáveis e em vez delas valores numéricos das seguintes definições sãousados:

vs (muito forte): >60% int. rei.

s (forte): 23-60% int. rei.

m (médio): 9-23% int. rei.

w (fraco): 4-9% int. rei.vw (muito fraco): <4% int. rei.

Análises por difração de raios-X foram realizadas usando umdifratômetro PANalytical XTert Pro MPD por 64 minutos de 1 a 40° 2Θ come sem referência de padrão interno. Os ângulos 20 foram corrigidos comrelação aos valores padrão depois que foi feito o cálculo de valores-d (valoresde distância). Os valores-d podem variar dentro da faixa de ±2 sobre a últimacasa decimal dada. A preparação de amostra foi realizada de acordo commétodos padrão, por exemplo aqueles descritos em Giacovazzo, C. et al(1995), Fundamentais of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins,R. e Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry,John Wiley & Sons, New York; Bunn, C. W. (1948), ChemicalCrystallography, Clarendon Press, London ou Klug, Η. P. & Alexander, L. E.(1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York.

FARMACOLOGIA

Determinação de competição de ATP em ensaio de GSK3Pde proximidade de cintilação

Ensaio de proximidade de cintilação de GSK3p.

Os exemplos de competição foram realizados em duplicadacom 10 concentrações diferentes do inibidor em placas de microtítulo defundo transparente (Wallac, Finlândia). Um substrato de peptídeo biotinilado,Biotina-Ala-Ala-Glu-Glu-Leu-Asp-Ser-Arg-Ala-Gly-Ser(PO3H2)-Pro-Gln-Leu (AstraZeneca, Lund), foi adicionado em uma concentração final de 1 μΜem um tampão de ensaio contendo 1 mU de GSK3 β recombinante de humano(Dundee University, UK), ácido morfolino-propano-sulfônico (MOPS) 12mM, pH 7,0, EDTA 0,3 mM, β-mercapto-etanol 0,01%, Brij 35 0,004 % (umdetergente natural), glicerol 0,5 % e 0,5 μg BSA/25 μι. A reação foi iniciadapela adição de 0,04 μΟί [γ- P]ATP (Amersham, UK) e ATP não marcado emuma concentração final de 1 μΜ e o volume de ensaio de 25 μί. Apósincubação por 20 minutos na temperatura ambiente, cada reação foi terminadapela adição de 25 μL de solução de interrupção contendo EDTA5 mM, ATP50 μΜ, Triton X-100 0,1 % e 0,25 mg de glóbulos de Ensaio de Proximidadede Cintilação (SPA) revestidos com estreptavidina (Amersham, UK). Após 6horas a radioatividade foi determinada em um contador de cintilação líquida(1450 MicroBeta Trilux, Wallac). As curvas de inibição foram analisadas porregressão não-linear usando GraphPad Prism, USA. O valor Km de ATP paraGSK3P, usado para calcular as constantes de inibição (Ki) do composto, foi20 μΜ.

As seguintes abreviações têm sido usadas:

MOPS Ácido morfolino-propano-sulfônico

EDTA r Acido etileno-diamino-tetraacético

BSA Albumina de Soro Bovino

ATP Adenosina Trifosfato

SPA Ensaio de Proximidade de Cintilação

GSK3 Glicogênio sintase quinase 3 Resultados O valor de Ki para citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila da presente invenção está dentro dafaixa de 0,001 nM a 300 nM.

ESTABILIDADE QUÍMICA

Higroscopicidade

Análise de sorção de vapor dinâmico (DVS)

Os estudos foram realizados usando Aparelhagem de Sorçãode Vapor Dinâmico (DVS, Surface Measurement Systems, Londres UK). Aaparelhagem consiste de uma microbalança Cahn alojada dentro de umacabine de temperatura controlada. Todos os experimentos foram realizados a25°C. O DVS foi usado para caracterizar captação de umidade (p/p%) emdiferentes umidades relativas (RH). Amostras (5-10 mg) foram pesadasdiretamente para dentro do copo de amostra de DSV e expostas às umidadesrelativas diferentes.

Resultados

<table>table see original document page 19</column></row><table>

Está claro dos resultados acima que o sal de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila mostrauma higroscopicidade menor do que o seu sal de cloridrato e é portantoadequado para preparar formulações farmacêuticas.

Estabilidade de solução

Soluções isotônicas do sal de citrato e do sal de cloridrato de2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila (0,1mg/mL), respectivamente, contendo ácido ascórbico (0,5% (p/v)) e ajustadapara pH 2 e 4 com HCl (2 M) e NaOH (2 M) foram preparadas e armazenadaspor quatro semanas entre 4 e 8°C.

Método de análise

HPLC: HPllOO

Coluna: Symmetry C18, 5 μιη, 3,9 mm χ 150 mm

Tempo de terminação: 5 min

Comprimento de onda: 361 nm

Volume de injeção: 10 μΐ.

Fluxo: 1 ml/min

Fase móvel tampão fosfato 0,05 M pH 3: acetonitrila: tampãofosfato (80:20).

Resultados

Após análise foi mostrado que o sal de cloridrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila degradou emaproximadamente 10% enquanto que o sal de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila foi estável e nãomostrou produtos de degradação.

Fotoestabilidade da substância a granel

A base livre e os correspondentes sal de cloridrato e sal decitrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] l//-indol-5-carbonitrila foram testados para estabilidade à luz em uma cabine SuntestCPS+. A exposição foi 250 Wh/m e 1,2 milhão de Iux hora durante 29 horas.

Resultados

<table>table see original document page 20</column></row><table>

Está claro dos resultados acima que o sal de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]l//-indol-5-carbonitrila mostrauma fotoestabilidade muito maior do que ambos o sal de cloridrato e a baselivre do mesmo e assim é mais adequado para preparar formulaçõesfarmacêuticas.

Conclusão.

Está claro das comparações entre a base livre, o sal decloridrato, e o sal de citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]1H-indol-5-carbonitrila que o sal de citrato da mesma é mais estável contradecomposição comparado com o sal de cloridrato e assim é mais adequadopara preparar formulações farmacêuticas.

Claims

1. Sal, caracterizado pelo fato de ser citrato de 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il]lH-indol-5-carbonitrila.

2. Sal de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fatode estar na forma substancialmente cristalina.

3. Sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2,que está na Forma A caracterizada por valores-d de difração de raios-X em póe intensidade relativa de 12,7(vs), 6,8(vs), 6,3 (s), 4,3 8(s), 4,23(s) e 3,4 l(m) Á.

4. Processo para preparar um composto sendo citrato de 2-hidróxi-3 - [5 -(morfolin-4-il-metil)-piridin-2-il] 1 H-indol-5 -carbonitrila deacordo com a reivindicação 1 a 3, caracterizado pelo fato de compreenderreagir 2-hidróxi-3-[5-(morfolin-4-il-metil)^iridin-2-il]l H-indol-5-carbonitrilacom ácido cítrico em um solvente.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de que o solvente usado é selecionado do grupo consistindo deéteres, alcoóis, cetonas, acetatos ou ácidos orgânicos, ou suas misturas,opcionalmente usando água como um aditivo.

6. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que o solvente é uma mistura de etanol e água ou ácido acético.

7. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 4a 6, caracterizado pelo fato de que é realizado em temperatura de entre -5°C e+100°C.

8. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender como ingrediente ativo uma quantidade terapeuticamente eficazdo sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1-3, opcionalmenteem associação com diluentes, recipientes ou veículos inertes.

9. Sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3,caracterizado pelo fato de ser para uso em terapia.

10. Uso de um sal como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de condições associadas comglicogênio sintase quinase-3.

11. Uso de um sal como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de distúrbios cognitivos.

12. Uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelofato de que o distúrbio cognitivo é demência, Déficit Cognitivo emEsquizofrenia (CDS), Enfraquecimento Cognitivo Suave (MCI),Enfraquecimento de Memória Associado com a Idade (AAMI), DeclínioCognitivo Associado com a Idade (ARCD) ou Enfraquecimento CognitivoSem Demência (CIND).

13. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelofato de que a doença é Déficit Cognitivo em Esquizofrenia.

14. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelofato de que a demência está associada com patologias de emaranhadosneurofibrilares.

15. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelofato de que a demência é Demência Frontotemporal (FTD), DemênciaFrontotemporal do Tipo Parkinson (FTDP), paralisia supranuclear progressiva(PSP), Doença de Pick, Doença de Pick-Niemann, degeneração corticobasal,lesão cerebral traumática (TBI) ou demência pugilística.

16. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelofato de que a demência é Mal de Alzheimer (AD), síndrome de Down,demência vascular, Mal de Parkinson (PD), parkinsonismo pós-encefálico,demência com corpos de Lewy, demência por HIV, Doença de Huntington,esclerose lateral amiotrófica (ALS), doenças neuromotoras (MND, doença deCreuztfeld-Jacob ou doenças de prion.

17. Uso de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelofato de que a doença é Mal de Alzheimer.

18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelofato de ser no atraso da progressão de doença de Mal de Alzheimer.

19. Uso de um sal como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de distúrbio de déficit deatenção (ADD), distúrbio de hiperatividade com déficit de atenção (ADHD)ou distúrbios afetivos.

20. Uso de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelofato de que os distúrbios afetivos são Distúrbio Bipolar incluindo maniaaguda, depressão bipolar, manutenção bipolar, distúrbios depressivos maiores(MDD) incluindo depressão, depressão maior, estabilização de humor,distúrbios esquizoafetivos incluindo esquizofrenia, ou distimia.

21. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de diabetes de Tipo I, diabetesde Tipo II, neuropatia diabética, alopécia ou doenças inflamatórias.

22. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de condições ou distúrbiosrelacionados com osso em mamíferos.

23. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para prevenção e/ou tratamento de osteoporose em mamíferos.

24. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para aumentar a formação de osso em mamíferos.

25. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para aumentar a formação de osso poroso e/ou a formação deosso novo em mamíferos.

26. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para aumentar a densidade mineral óssea em um mamífero.

27. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para reduzir a incidência de fratura em um mamífero.

28. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de ser na manufatura de ummedicamento para intensificar a cicatrização de fratura em um mamífero.

29. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 28, caracterizado pelo fato de que o citado mamífero é um humano.

30. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 28, caracterizado pelo fato de que o citado mamífero é um animal.

31. Método para prevenir e/ou tratar uma condição sendocondições associadas com glicogênio sintase quinase-3, caracterizado pelofato de compreender administrar a um mamífero, incluindo homem emnecessidade de tal prevenção e/ou tratamento, uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um sal como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3.

32. Método para prevenir e/ou tratar um distúrbio sendodistúrbios cognitivos, caracterizado pelo fato de compreender administrar aum mamífero, incluindo homem em necessidade de tal prevenção e/outratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal como definidoem qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

33. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizadopelo fato de que o distúrbio cognitivo é demência, Déficit Cognitivo emEsquizofrenia (CDS), Enfraquecimento Cognitivo Suave (MCI),Enfraquecimento de Memória Associado com a Idade (AAMI), DeclínioCognitivo Associado com a Idade (ARCD) ou Enfraquecimento CognitivoSem Demência (CIND).

34. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é Déficit Cognitivo em Esquizofrenia.

35. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a demência está associada com patologias de emaranhadosneurofibrilares.

36. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a demência é Demência Frontotemporal (FTD), DemênciaFrontotemporal do Tipo Parkinson (FTDP), paralisia supranuclear progressiva(PSP), Doença de Pick, Doença de Pick-Niemann, degeneração corticobasal,lesão cerebral traumática (TBI) ou demência pugilística.

37. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a demência é Mal de Alzheimer (AD), Síndrome de Down,demência vascular, Mal de Parkinson (PD), parkinsonismo pós-encefálico,demência com corpos de Lewy, demência por HIV, Doença de Huntington,esclerose lateral amiotrófica (ALS), doenças neuromotoras (MND), doença deCreuztfeld-Jacob ou doenças de prion.

38. Método de acordo com a reivindicação 37, caracterizadopelo fato de que a doença é Mal de Alzheimer.

39. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizadopelo fato de que o tratamento é o atraso da progressão da doença de Mal deAlzheimer.

40. Método para prevenir e/ou tratar um distúrbio sendodistúrbio de déficit de atenção (ADD), distúrbio de hiperatividade com déficitde atenção (ADHD) ou distúrbios afetivos, caracterizado pelo fato decompreender administrar a um mamífero, incluindo homem em necessidadede tal prevenção e/ou tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz deum sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

41. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que os distúrbios afetivos são Distúrbio Bipolar incluindo maniaaguda, depressão bipolar, manutenção bipolar, distúrbios depressivos maiores(MDD) incluindo depressão, depressão maior, estabilização de humor,distúrbios esquizoafetivos incluindo esquizofrenia, ou distimia.

42. Método para prevenir e/ou tratar uma doença sendodiabetes de Tipo I, diabetes de Tipo II, neuropatia diabética, alopécia oudoenças inflamatórias, caracterizado pelo fato de compreender administrar aum mamífero, incluindo homem em necessidade de tal prevenção e/outratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal como definidoem qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

43. Método para prevenir e/ou tratar uma condição sendocondições ou distúrbios relacionados com osso, caracterizado pelo fato decompreender administrar a um mamífero, em necessidade de tal prevençãoe/ou tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal comodefinido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

44. Método para prevenir e/ou tratar uma doença sendoosteoporose, caracterizado pelo fato de compreender administrar a ummamífero, em necessidade de tal prevenção e/ou tratamento, uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3.

45. Método para aumentar a formação de osso, caracterizadopelo fato de compreender administrar a um mamífero, em necessidade de talprevenção e/ou tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de umcomposto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

46. Método para aumentar a formação de osso poroso e/ou aformação de osso novo, caracterizado pelo fato de compreender administrar aum mamífero, em necessidade de tal prevenção e/ou tratamento, umaquantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 3.

47. Método para aumentar a densidade mineral óssea,caracterizado pelo fato de compreender administrar a um mamífero, emnecessidade de tal prevenção e/ou tratamento, uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3.

48. Método para reduzir a incidência de fratura, caracterizadopelo fato de compreender administrar a um mamífero em necessidade de talprevenção e/ou tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de umcomposto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

49. Método para intensificar a cicatrização de fratura,caracterizado pelo fato de compreender administrar a um mamífero, emnecessidade de tal prevenção e/ou tratamento, uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 3.

50. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 49, caracterizado pelo fato de que o citado mamífero é um humano.

51. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 49, caracterizado pelo fato de que o citado mamífero é um animal.