BRPI0707173A2

BRPI0707173A2 - composição, uso de 2xcon4(c), e amg 706 ou 4tbppapc, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e, kit

Info

Publication number: BRPI0707173A2
Application number: BRPI0707173-6A
Authority: BR
Inventors: Jonathan Oliner; Richard Kendall; Rakesh Kumar
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2006-01-27
Filing date: 2007-01-19
Publication date: 2011-04-26
Also published as: AU2007210234A1; EP1976529A4; KR20080100810A; JP2009525965A; CN101374522A; JP5615496B2; CA2637836A1; EA200870185A1; TW200738263A; US20090304694A1; ES2441955T3; WO2007089445A3; IL192732A0; EP1976529B1; PE20081187A1; MX2008009196A; NO20083202L; AR059066A1; CR10226A; AU2007210234B2

Abstract

COMPOSIçãO, USO DE 2XCON4(C), E AMG 706 OU 4TBPPAPC, E SEUS SAIS FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEIS, E, KIT. A invenção proporciona métodos de uso de inibidores de Ang2 em combinação com inibidores de VEGF para tratar doença. A invenção também proporciona composições, kits, formulações, e tratamentos específicos de doenças específicas relacionadas com os mesmos.

Description

"COMPOSIÇÃO, MÉTODO PARA TRATAR UMA DOENÇA EM UMINDIVÍDUO, E, KIT"

Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisional dosE.U.A. 60/762.493 depositado em 27 de janeiro de 2006, incorporado aquiintegralmente por referência.

Campo da invenção

A invenção refere-se a combinações de inibidores de Ang2 einibidores de VEGF e a seu uso na formulação de composições farmacêuticase no tratamento de doenças, entre outras coisas.

Fundamentos da invenção

Sabe-se que determinadas doenças são associadas comangiogênese desregulada, por exemplo, neovascularização ocular, comoretinopatias (incluindo retinopatia diabética), degeneração macularrelacionada com a idade, psoríase, hemangioblastoma, hemangioma,arteriosclerose, doença inflamatória, como uma doença inflamatóriareumatóide ou reumática, particularmente artrite (incluindo artritereumatóide), ou outros distúrbios inflamatórios crônicos, como asma crônica,aterosclerose arterial ou pós-transplante, endometriose, e doenças neoplásicas,por exemplo, assim-chamados tumores sólidos e tumores líquidos (comoleucemias).

Por exemplo, angiogênese desempenha um papel crucial naprogressão de tumor. Tumores nascentes e pequenos podem obter nutrientes eoxigênio suficientes para sustentar seu crescimento por meio de difusãosimples. No entanto, acima de um diâmetro de 1 a 2 mm, a difusão não podeproporcionar estes elementos nas quantidades requeridas para crescimentoadicional. Para crescimento além desse tamanho, todos os tumores requeremuma vasculatura, qualquer que seja sua causa, origem, tipo, idade, oulocalização. Assim, crescimento de tumor acima de um diâmetro de 1 a 2 mmrequer angiogênese. Assim, a angiogênese foi considerada um alvo promissorpara o desenvolvimento de um tratamento geral eficaz para tumores.

Três mecanismos principais desempenham uma parteimportante na atividade de inibidores de inibidores de angiogênese contratumores: (i) inibição do crescimento de vasos, particularmente capilares, emtumores avasculares em repouso, oferecendo como resultado que não hácrescimento puro de tumor devido ao balanço que se obtém entre mortecelular e proliferação celular; (ii) prevenção da migração de células de tumordevido à ausência de fluxo sangüíneo para, e de, tumores; e (iii) inibição deproliferação de células endoteliais, evitando com isso o efeito estimulador decrescimento parácrino exercido sobre o tecido circundante por célulasendoteliais que normalmente revestem os vasos. Ver R. Connell e J. Beebe,Exp. Opin. Ther. Patents, 11:77-114 (2001).

Esforços para desenvolver inibidores de angiogêneseterapeuticamente eficazes objetivaram todos os três destes mecanismosprincipais. Como um resultado destes esforços, identificou-se uma variedadede agentes anti-angiogênicos promissores. Embora alguns destes apresentemefeitos inibidores notáveis, nenhum destes provou representar uma maneirainteiramente satisfatória para proporcionar uma modalidade monoterapêuticapara a maior parte dos distúrbios dependentes de angiogênico.

Esforços para obter um perfil terapêutico mais eficazenfocaram a identificação de novos inibidores, modificação de inibidoresconhecidos, aperfeiçoamento da formulação e administração, e uso dosinibidores juntamente com outras modalidades terapêuticas. Assim, até aqui,embora tenha havido algum progresso, há muito mais que necessita ser feito.

Realizou-se uma abordagem de desenvolver uma modalidadede tratamento mais eficaz para combinar agentes que atuam em alvosdiferentes, de preferência objetiva que atuam em vias bem isoladas. Sugeriu-se uma variedade de combinações.

Como se mostrou que a via Tie2 é importante para aangiogênese, houve algumas poucas sugestões que tentam combinar uminibidor de via de Tie2 com um inibidor de via de VEGF. Ver Siemeister G.,et al, Câncer Research, 59:3185-3191 (1999); Jendreyko, N., et ai, Journalof Biological Chemistry, 278:47812-47819 (2003); Jendreyko, N., et al,PNAS, 102:8293-8298 (2005). Há alguma evidência de que as duas viasatuam independentemente uma da outra. No entanto, isto não significa quecombinar um agente que atua em uma via, com um agente que atua na outravia, possa ter um efeito aditivo. Eficazmente, é igualmente provável que,numa dosagem ótima, qualquer um dos agentes (usado sozinho) seja pelomenos tão eficaz como quando usado em combinação.

Os inventores das invenções aqui descritos examinaram osperfis terapêuticos de uma variedade de combinações de agentes que atuamem uma via de VEGF com agentes que atuam na via de Tie2. Eles verificaramque algumas combinações de um inibidor de via de VEGF e de um inibidor devia de Ang2 apresentam utilidade acentuada particular no tratamento depacientes.

Sumário da invenção

Os parágrafos numerados a seguir descrevem algumas poucasconcretizações ilustrativas da invenção que exemplificam alguns de seusaspectos e características. Eles não são exaustivos para ilustrar seus muitosaspectos e concretizações, e, assim, de forma alguma limitam a invenção.Muitos outros aspectos, particularidades, e concretizações da invenção sãodescritos aqui. Muitos outros aspectos e concretizações serão facilmentecompreensíveis por aqueles versados na técnica mediante a leitura do pedidoe considerações à plena luz do estado da técnica e conhecimento no campo.

Os parágrafos numerados abaixo são auto-referentes. Aexpressão "de acordo com qualquer um dos precedentes ou seguintes" refere-se a todos os parágrafos precedentes e a todos os parágrafos numerados aseguir e a seu conteúdo. Da mesma forma, a expressão "de acordo comqualquer um dos precedentes" refere-se a todos os parágrafos numeradosprecedentes e seus conteúdos. A expressão "de acordo com qualquer um dosseguintes" refere-se a qualquer um dos parágrafos numerados a seguir. Todasas expressões da forma "de acordo com #" são referências diretas àqueleparágrafo numerado, p. ex., "de acordo com 46." significa que é de acordocom o parágrafo 46. nesta coletânea de parágrafos numerados. Todas asreferências cruzadas são combinatoriais, exceto no que se refere aredundâncias e inconsistências do escopo. As referências cruzadas são usadasexplicitamente para proporcionar uma descrição concisa mostrando a inclusãodas diversas combinações da matéria-objeto umas com as outras.

A. Composições

A1. Uma composição compreendendo um ou mais inibidoresde Ang2 ou sais dos mesmos e um ou mais inibidores de VEGF ou sais dosmesmos.

A2. Uma composição de acordo com Al, sendo que um oumais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:

I um polipeptídeo não-naturalmente ocorrente que se ligaespecificamente a Ang2, incluindo, embora sem limitação, peptibodies que seligam especificamente a Ang2;

II um anticorpo não-naturalmente ocorrente que se liga aAng2, compreendendo uma ou mais CDRs heterólogas [regiõesdeterminadoras de complementaridade (CDR, complementarity determiningregions); ou

III um polipeptídeo não-naturalmente ocorrentecompreendendo (a) um fragmento de receptor solúvel que se ligaespecificamente a Ang2, e (b) uma região Fc de um anticorpo ou uma porçãodo mesmo.

A3. Uma composição de acordo com Al, sendo que um oumais dos inibidores de VEGF constitui-se de:IV um composto descrito na US2003/0125339 ou Patente dosEstados Unidos n° 6995162 que é incorporada integralmente por referência,particularmente em partes que revelam inibidores de VEGF;

V um derivado de alquilamina substituído descrito naUS2003/0125339 ou US2003/0225106 ou Patente dos Estados Unidos n°6995162 ou Patente dos Estados Unidos n° 6878714, sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente, particularmente em partes que revelaminibidores de VEGF;

VI um anticorpo monoclonal humanizado não-naturalmenteocorrente que se liga a VEGF;

VII uma ômega-carboxiaril difenil uréia substituída ouderivado da mesma como descrito no W000/42012, WOOO/41698,US2005/0038080A1, US2003/0125359A1, US2002/0165394A1,US2001/003447A1, US2001/0016659A1, e US2002/013774A1 que sãoincorporados aqui integralmente por referência, particularmente em partes querevelam os inibidores de VEGF precedentes;

VIII uma anilinoftalazina ou derivado da mesma que se liga a,e inibe a atividade de tirosina quinases de receptores múltiplos incluindoligação ao domínio de proteína quinase de VEGFRl e VEGFR2;

IX (5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-ácido2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico [2-dietilaminoetil]amida) ou derivado damesma que são inibidores de VEGF; ou

X um inibidor de VEGF como descrito na US2006/0241115,incluindo particularmente um inibidor de VEGF de Fórmula IV ali, cujarevelação é incorporada aqui integralmente por referência em partes querevelam os inibidores de VEGF precedentes.

A4. Uma composição de acordo com Al, sendo que um oumais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:

II um anticorpo não-naturalmente ocorrente que se liga aAng2, compreendendo uma ou mais CDRs heterólogas; ou

III um polipeptídeo não-naturalmente ocorrentecompreendendo (a) um fragmento de receptor solúvel que se ligaespecificamente a Ang2, e (b) uma região de Fc de um anticorpo ou umaporção do mesmo; e um ou mais dos inibidores de VEGF constituem-se de:

IV um composto descrito na US2003/0125339 ou Patente dosEstados Unidos n° 6995162 que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente em partes que revelam inibidores de VEGF;

V um derivado de alquilamina substituído descrito naUS2003/0125339 ou US2003/0225106 ou Patente dos Estados Unidos n°6995162 ou Patente dos Estados Unidos n° 6878714 sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente por referência, particularmente em partes querevelam inibidores de VEGF;

VII uma ômega-carboxiaril difenil uréia substituída ouderivado da mesma como descrito no W000/42012, WOOO/41698,US2005/0038080A1, US2003/0125359A1, US2002/0165394A1,US2001/003447A1, US2001/0016659A1, e US2002/013774A1 que sãoincorporadas aqui integralmente por referência, particularmente em partes querevelam os inibidores de VEGF precedentes;

VIII uma anilinoftalazina ou derivado da mesma que se liga a,e inibe a, atividade de tirosina quinases de receptores múltiplos incluindoligação ao domínio de proteína quinase e inibição de VEGFRl e VEGFR2;

IX ([2-dietilaminoetil]amida do ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil] -2,4-dimetil-1 H-pirrol-3 -carboxílico) ouderivado da mesma que são inibidores de VEGF; ou

X um inibidor de VEGF como descrito na US2006/0241115,incluindo particularmente um inibidor de VEGF de Fórmula IV ali.

A5. Uma composição de acordo com qualquer um dosseguintes, sendo que um ou mais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:

I um peptídeo não-naturalmente ocorrente ou peptibody ou quese liga especificamente a Ang2, como descrito no W02004/092215A2 ouW003/05134A2, que são incorporados aqui integralmente por referênciaparticularmente como estes inibidores de Ang2;

II um anticorpo não-naturalmente ocorrente que se liga aAng2, e compreende uma ou mais CDRs heterólogas, como descrito noW003/030833A2 e Pedido dos E.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada um éincorporado aqui integralmente por referência particularmente no que serefere a estes inibidores de Ang2; ou

III um polipeptídeo não-naturalmente ocorrentecompreendendo um fragmento de receptor de Tie2/Tek solúvel nãoapresentando pelo menos parte da região contendo as unidades repetitivasFNIII, como descrito no WOOO/75323A1 ou polipeptídios relacionados comodescrito na Patente dos Estados Unidos n° 6.166.185, sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente por referência particularmente no que serefere a estes inibidores de Ang2.

A6. Uma composição de acordo com Al, sendo que um oumais dos inibidores de VEGF constitui-se de:

IV 4TBPPAPC ou um composto estreitamente relacionadodescrito na US2003/0125339 ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 queé incorporada aqui integralmente por referência, particularmente em partesque revelam 4TBPPAPC e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

V AMG 706 ou um derivado de alquilamina substituídaestreitamente relacionado descrito na US2003/0125339 orUS2003/0225106ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dos Estados Unidos n°6878714 sendo que cada uma é incorporada aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam AMG 706 e estes inibidores de VEGFestreitamente relacionados;

VI Avastina™ ou um anticorpo monoclonal humanizado não-naturalmente ocorrente estreitamente relacionado que se liga a VEGF, é uminibidor de VEGF, e apresenta pelo menos 90 % de identidade de seqüênciascom Avastina™;

VII Nexavar® ou a ômega-carboxiaril difenil uréia substituídaestreitamente relacionada ou derivado da mesma descrito no W000/42012,WOOO/41698, US2005/0038080A1, US2003/0125359A1,US2002/0165394A1, US2001/003447A1, US2001/0016659A1, eUS2002/013774A1 que são incorporadas aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam estes inibidores de VEGF;

VIII PTK/ZK ou uma anilinoftalazina estreitamenterelacionada ou derivado da mesma que se liga a, e inibe, a atividade detirosina quinases de receptores múltiplos incluindo ligação ao domínio deproteína quinase e inibição de VEGFRl e VEGFR2;

IX Sutent® ou um derivado estreitamente relacionado de ([2-dietilaminoetil]amida do ácido 5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico) que é um inibidor deVEGF; ou

X um inibidor de VEGF de Fórmula IV como descrito naUS2006/0241115.

A7. Uma composição de acordo com qualquer um dosprecedentes, sendo que um ou mais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:um peptídeo não-naturalmente ocorrente ou peptibody que seliga especificamente a Ang2, como descrito no W02004/092215A2 ouW003/05134A2, que são incorporados aqui integralmente por referênciaparticularmente no que se refere a estes inibidores de Ang2;

III um polipeptídeo não-naturalmente ocorrentecompreendendo um fragmento de receptor de Tie2/Tek solúvel nãoapresentando pelo menos parte da região contendo as unidades repetitivas

FNIII, como descrito no WOOO/75323A1 ou polipeptídios relacionados comodescrito na Patente dos Estados Unidos n° 6.166.185, sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente por referência particularmente no que serefere a estes inibidores de Ang2;

e um ou mais dos inibidores de VEGF constitui-se de:

V AMG 706 ou um derivado de alquilamina substituídaestreitamente relacionada descrita na US2003/0125339 ou US2003/0225106ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dos Estados Unidos n°6878714 sendo que cada uma é incorporada aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam AMG 706 e estes inibidores de VEGFestreitamente relacionados;

VII Nexavar® ou uma ômega-carboxiaril difenil uréiasubstituída estreitamente relacionada ou derivado da mesma descrita noWOOO/42012, WOOO/41698, US2005/0038080A1, US2003/0125359A1,US2002/0165394A1, US2001/003447A1. US2001/0016659A1, eUS2002/013774A1 que são incorporados aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam estes inibidores de VEGF;

X um inibidor de VEGF de Fórmula IV como descrito naUS2006/0241115.

A8, Uma composição de acordo com qualquer um dosprecedentes, sendo que um ou mais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:

I 2xCon4(C), como descrito no W02004/092215A2 ouW003/05134A2, que são incorporados aqui integralmente por referênciaparticularmente quanto a 2xCon4(C);

II Ab 536, como descrito no W003/030833A2 e Pedido dosE.U.A. n° 10/982,440, sendo que cada um é incorporado aqui integralmentepor referência particularmente quanto ao Ab 536; ou

III Tek472/Fc, como descrito no WOOO/75323A1, que éincorporado aqui integralmente por referência particularmente quanto aTek472/Fc.

A9. Uma composição de acordo com Al, sendo que um oumais dos inibidores de VEGF constitui-se de:

IV 4TBPPAPC, como descrito no US2003/0125339 ou Patentedos Estados Unidos n° 6995162 que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente em partes que revelam 4TBPPAPC;

V AMG 706, como descrito na US2003/0125339 ou Patentedos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dos Estados Unidos n° 6878714que é incorporada aqui integralmente por referência, particularmente empartes que revelam AMG 706;

VI Avastina™;

VII Nexavar®, como descrito no W000/42012, WOOO/41698,US2005/0038080A1, US2003/0125359A1, US2002/0165394A1,US2001/003447A1, US2001/0016659A1, e US2002/013774A1 que sãoincorporadas aqui integralmente por referência, particularmente em partes querevelam Nexavar®;

VIIIPTK/ZK;

IX Sutent®; ou

X um inibidor de VEGF de Fórmula IV como descrita naUS2006/0241115.

A10. uma atividade de composição de acordo com qualquerum dos precedentes, sendo que um ou mais dos inibidores de Ang2 constitui-se de:

I 2xCon4(C), como descrito no W02004/092215 A2 ouW003/05134A2, que são incorporados aqui integralmente por referênciaparticularmente quanto a 2xCon4(C);

II Ab 536, como descrito no W003/030833A2 e Pedido dosE.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada um é incorporado aqui integralmentepor referência particularmente quanto ao Ab 536; ou

III Tek472/Fc, como descrito no WOOO/75323A1, que éincorporado aqui integralmente por referência particularmente quanto aTek472/Fc;

e um ou mais dos inibidores de VEGF constitui-se de:IV 4TBPPAPC, como descrito na US2003/0125339 ou Patentedos Estados Unidos n° 6995162 que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente em partes que revelam 4TBPP APC;

VI Avastina™;

VII Nexavar®, como descrito no W000/42012,WOOO/41698,

US2005/0038080A1, US2003/0125359A1,

US2002/0165394A1, US2001/003447A1, US2001/0016659A1, eUS2002/013774A1 que são incorporadas aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam Nexavar®;

VIIIPTK/ZK;

IX Sutent®; ou

X um inibidor de VEGF de Fórmula IV como descrito naUS2006/0241115.

A11. Uma composição farmaceuticamente aceitável de acordocom qualquer um dos precedentes.

A12. Uma composição de acordo com qualquer um dosprecedentes formulados de forma aceitável para uso terapêutico.

A 13. Uma composição de acordo com qualquer um dosprecedentes, sendo que o uso terapêutico é em um tratamento de um pacientehumano.

A 14. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquerum dos precedentes compreendendo adicionalmente um veículofarmaceuticamente aceitável.

B. KitsB1. Um kit compreendendo, em um ou mais recipientes,separadamente ou em mistura, um ou mais inibidores de Ang2 e um ou maisinibidores de VEGF de acordo com qualquer um dos precedentes.

B2. Um kit de acordo com BI, sendo que os inibidoresconstituem-se de formulações farmaceuticamente aceitáveis.

B3 Um kit de acordo com B2, compreendendo 2xCon4(C) eAMG 706.

B4. Um kit de acordo com B2, sendo que os inibidoresencontram-se dispostos em recipientes separados.

B5. Um kit de acordo com qualquer um dos precedentes,compreendendo adicionalmente e integralmente no mesmo, ou como um oumais documentos separados, informação referente ao conteúdo ou ao kit e aouso dos inibidores.

B6. Um kit de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que as composições são formuladas para reconstituição em umdiluente.

B7. Um kit de acordo com qualquer um dos precedentes,compreendendo adicionalmente um recipiente de diluente estéril.

B8. Um kit de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que referidas composições encontram-se dispostas em frascos sobvácuo parcial, fechados hermeticamente com um septo, e vantajosas parareconstituição para formar uma formulação eficaz para administraçãoparenteral.

C. Métodos de tratamento

C1. Um método para tratar um indivíduo, compreendendoadministrar a um indivíduo por uma via eficaz uma quantidade eficaz de (a)um inibidor de Ang2, e (b) um inibidor de VEGF.

C2. Um método de inibir angiogênese indesejada em ummamífero compreendendo administrar a um indivíduo por uma via eficaz umaquantidade eficaz de (a) um inibidor de Ang2, e (b) um inibidor de VEGF.

C3. Um método de tratar câncer em um mamíferocompreendendo administrar a um indivíduo por uma via eficaz umaquantidade eficaz de (a) um inibidor de Ang2, e (b) um inibidor de VEGF.

C4. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A2 I, II, ou III.

C5. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidores de VEGFindicados acima em A3 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C6. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A2 I, II, ou III e o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidoresde VEGF indicados acima em A3 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C7. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A5 I, II, ou III.

C8. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidores de VEGFindicados acima em A6 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C9. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A5 I, II, ou III e o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidoresde VEGF indicados acima em A6 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C10. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A8 I, II, ou III.

C11. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidores de VEGFindicados acima em A9 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C12. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o inibidor de Ang2 é um ou mais dos inibidores de Ang2 indicadosacima em A8 I, II, ou III e o inibidor de VEGF é um ou mais dos inibidoresde VEGF indicados acima em A9 IV, V, VI, VII, VIII, IX, ou X.

C13. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que o indivíduo é um paciente humano.

C14. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que os inibidores são administrados seqüencialmente.

C15. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que os inibidores são administrados em conjunto.

C16. Um método de acordo com qualquer um dos precedentes,sendo que pelo menos uma vez durante o curso da terapia um ou maisinibidores de Ang2 são administrados ao mesmo tempo que um ou maisinibidores de VEGF, e o mesmo ou outro Ang2 e inibidores de VEGF sãoadministrados separadamente e em momentos diferentes.

Breve descrições das figuras

Figura 1 apresenta graficamente volumes de tumor (média ±SEM [erro padrão da média, EPM]) ao longo do curso do estudo descrito noExemplo 1, em que tumores de xenoenxertos de células de câncer colorretalColo205 em camundongos CDl Nu/Nu fêmeas foram tratados comTek472/Fc mais IgG (grupo 4), Avastina® mais Fc (grupo 1), Tek472/Fc eAvastina® (grupo 2), ou IgG mais Fc (controle negativo) (grupo 3).

Figura 2 apresenta graficamente volumes de tumor ao longo docurso do estudo descrito no Exemplo 2, em que tumores de xenoenxerto decélulas de carcinoma epidermóide A431 em camundongos CDl Nu/Nufêmeas foram tratados com: (1) IgGl (controle) (grupo 1); (2) anticorpo anti-Ang2 (Ab 536) e controle (grupo 2); (3) anticorpo anti-VEGF e controle(grupo 3); e (4) ambos, anticorpo anti-VEGF e anticorpo anti-Ang2 (Ab 536)(grupo 4). Cada ponto de dados é a média para um grupo. Cada barra é ±SEM.

Figura 3 ilustra graficamente volumes de tumor ao longo docurso do estudo descrito no Exemplo 3, em que tumores de xenoenxerto decélulas de carcinoma de colo humano HT29 em camundongos nus atímicosfêmeas foram tratados com combinações de: (1) veículo e Fc (grupo 1); (2)veículo e 2xCon4(C) (grupo 2); (3) AMG 706 e Fc (grupo 3); e (4) AMG 706e 2xCon4(C) (grupo 4). Cada ponto de dados é a média para um grupo de dezcamundongos. Cada barra representa a faixa do SEM.

Figuras de 4A a 4D apresentam graficamente resultados doestudo descrito no Exemplo 4, em que tumores de xenoenxertos de células decâncer colorretal Colo205 em camundongos CDl Nu/Nu fêmeas foramtratados com nove combinações de veículos de controle, 2xCon4(C), e/ou4TBPPAPC, como apresentado na Tabela 4A e Tabela 4B. Dadosrepresentam a média ± SEM (n=10 camundongos cada).

Figure 4A ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento para grupos 1, 2, 3, e 6 que foram tratados comveículos de controle (grupo 1), uma dose sub-ótima de 4TBPPAPC (grupo 2),uma dose sub-ótima de 2xCon4(C) (grupo 3), e uma dose sub-ótima de4TBPPAPC e uma dose sub-ótima de 2xCon4(C) (grupo 6).

Figura 4B ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento para grupos 1, 2, 5, e 7 que foram tratados comveículos de controle (grupo 1), uma dose sub-ótima de 4TBPPAPC (grupo 2),uma dose ótima de 2xCon4(C) (grupo 5), e uma dose sub-ótima de4TBPPAPC e uma dose ótima de 2xCon4(C) (grupo 7).

Figura 4C ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento para grupos 1,3,4, e 8 que foram tratados comveículos de controle (grupo 1), dose sub-ótima de 2xCon4(C) (grupo 3), umadose ótima de 4TBPPAPC (grupo 4), e uma dose ótima de 4TBPPAPC e umadose sub-ótima de 2xCon4(C) (grupo 8).

Figura 4D ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento para grupos 1,4,5, e 9 que foram tratados comveículos de controle (grupo 1), uma dose ótima de 4TB PPAPC (grupo 4),uma dose ótima de 2xCon4(C) (grupo 5), e uma dose ótima de 4TB PPAPC euma dose ótima de 2xCon4(C) (grupo 9).

Figura 5 ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento de enxertos de células de câncer colorretalColo205 em camundongos CDl Nu/Nu tratados com AMG 706 (grupo 1),2xCon4(C) (grupo 2), ambos AMG 706 e 2xCon4(C) (grupo 3), e FC/veículo(grupo 4), como descrito no Exemplo 5.

Figura 6 ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento de enxertos de células de câncer colorretalColo205 em camundongos CDl Nu/Nu tratados com 2xCon4(C) (grupo 3),Avastina™ (grupo 2), ambos, 2xCon4(C) e Avastina™ (grupo 4), e controle(grupo 1), como descrito no Exemplo 6.

Figura 7 ilustra graficamente volumes médios de tumor aolongo do curso de tratamento de enxertos de células de câncer colorretalColo205 em camundongos CDl Nu/Nu tratados com 2xCon4(C) (grupo 3),Avastina™ (grupo 2), ambos, 2xCon4(C) e Avastina™ (grupo 4), e controle(grupo 1), como descrito no Exemplo 7.

Definições

Significados ilustrativos de determinados termos e expressõescomo usados aqui são apresentados abaixo.

"2xCon4(C)" é um peptibody seletivo de Ang2, como descritono W003/057134A2 e W02004/092215A2, cada um dos quais incorporadoaqui integralmente por referência, particularmente nas partes pertinentes a2xCon4(C), sua estrutura e propriedades, métodos para preparar e usar omesmo, e outros compostos relacionados. 2xCon4(C) é uma fusão de umfragmento Fc humano e dois cópias de um peptídeo de ligação específico paraAng2. 2xCon4(C) também é referido como 2xCon4(C) 1K. Entre outrosnomes para 2xCon4(C) encontram-se aqueles apresentados nas publicaçõesWEPO precedentes.

"4TBPPAPC" é um inibidor de multi-quinase que interferecom o kit, PDGR, e vias de sinalização de VEGF. Seu nome é N-(4-(l,l-dimetiletil)fenil)-2-((4-piridinilmetil)amino-3-piridinocarboxamida, comodescrito no Pedido de Patente dos E.U.A. US2003/0125339, que éincorporado aqui integralmente por referência particularmente em partespertinentes a 4TBPPAPC, sua estrutura e propriedades, métodos para preparare de usar o mesmo, e outros compostos relacionados. 4TBPPAPC também édenominado N-[4-(t-butil)fenil] {2-[(4-piridinetil)amino](3-piridil) } carboxamida.

"Um" ou "uma" significa aqui um ou mais de; pelo menos um.Onde a forma plural é usada aqui, ela geralmente inclui o singular. O termo"compostos" inclui um composto, e também muitos compostos. O termo"sais" inclui um sal, e também muitos sais.

"Ab 536" é um anticorpo específico para Ang2 humanocompreendendo a cadeia pesada 536 HC e a cadeia leve κ 536, como descritono W003/030833 e Pedido dos E.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada um éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente em partespertinentes a Ab 536, sua estrutura e propriedades, métodos para preparar eusar o mesmo, e outros anticorpos relacionados. Ab 536 e anticorposrelacionados e análogos também são descritos no W004/092215, que éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente em partespertinentes a Ab 536 e proteínas e peptídeos relacionados, suas estruturas epropriedades, e métodos para preparar e usar os mesmos.

"Ang" é uma designação para angiopoietina.

"Ang2" é uma designação para angiopoietina 2."inibidor de Ang2" como usado aqui é qualquer substância quediminui a atividade eficaz de Ang2 em uma dada circunstância.

Inibidores de Ang2 podem compreender, apenas para indicaralguns poucos exemplos, moléculas pequenas, peptídeos, polipeptídios,proteínas, incluindo mais especificamente anticorpos, incluindo anticorposanti-Ang2, intrabodies, maxibodies, minibodies, diabodies, proteínas de fusãoFc, como peptibodies, receptibodies, proteínas de receptor de Tie-3 solúvel efragmentos, e uma variedade de outros. Muitos inibidores de Ang2 atuam pormeio de ligação a Ang2. Outros atuam por meio de ligação a fatores que seligam a, ou que são ligados por meio de Ang2. Outros inibidores de Ang2atuam mais indiretamente, por exemplo, mediante alteração de modificaçõespós-tradução reguladoras, como fosforilação, que controlam a sinalizaçãoproporcionada por Ang2 ou mediante alteração da interação de Ang2 comoutros fatores. Inibidores de Ang2 de acordo com a invenção também podematuar de maneiras mais indiretas para diminuir a atividade de Ang2. Qualquerque seja o mecanismo, como usado aqui, um inibidor de Ang2 diminui aatividade eficaz de Ang2 em uma dada circunstância sobre o que poderia serna mesma circunstância na ausência do inibidor.

"Avastina™" é um anticorpo monoclonal humanizadorecombinante que se liga diretamente a VEGF, e é comercializado pelaGenentech. Ele também é denominado bevacizumab, R-435, rhuMAB-VEGF,e número de registro CAS 216974-75-3.

"BAY 43-9006" - ver Nexavar®.

"Câncer" e "canceroso" referem-se ou descreve a condiçãofisiológica em mamíferos que é caracterizada tipicamente por crescimentodesregulado de células. Exemplos de câncer incluem, embora sem limitação,carcinoma, linfoma, sarcoma, blastoma, e leucemia. Exemplos maisparticulares de referidos cânceres incluem carcinoma de células escamosas,câncer de pulmão, câncer pancreático, câncer cervical, câncer de bexiga,hepatoma, câncer de mama, carcinoma de colo, e carcinoma de cabeça epescoço.

"Coadministrar" significa administrar em conjunto uns com osoutros, juntamente, coordenadamente, incluindo administração simultânea ouseqüencial de dois ou mais agentes.

"Compreendendo" significa, sem outra limitação, incluindo oreferente, necessariamente, sem qualquer qualificação ou exclusão sobre oque mais for incluído. Por exemplo, "uma composição compreendendo χ e y"compreende qualquer composição que contém χ e y, não importando quaisoutros componentes podem estar presentes na composição. De maneiraanáloga, "um método compreendendo a etapa de x" compreende qualquermétodo em que χ é realizado, quer χ seja a única etapa no método ou sejaapenas uma das etapas, não importando quantas outras etapas pode haver, enão importando quão simples ou complexo χ é, em comparação com osmesmos. "Constituído de" e expressões similares com o emprego de palavrasda raiz "compreender" são usados aqui como sinônimos de "compreendendo"e têm o mesmo significado.

"Constituído de" é um sinônimo de compreendendo (veracima).

"Deletério" significa, como usado aqui, nocivo. A título deilustração, processos "deletérios" incluem, por exemplo, efeitos nocivos deprocessos de doença e efeitos colaterais nocivos de tratamentos.

"Disfunção" significa, como usado aqui, um distúrbio, doença,ou efeito deletério de um processo de outra forma normal.

"Quantidade eficaz" significa geralmente uma quantidade queproporciona o efeito local ou sistêmico desejado. Por exemplo, umaquantidade eficaz é uma quantidade suficiente para efetuar um resultadoclínico benéfico ou desejado. As quantidades eficazes podem serproporcionadas todas de uma vez, numa administração única ou emquantidades fracionadas que proporcionam a quantidade eficaz em váriasadministrações. A determinação precisa do que poderia ser considerado umaquantidade eficaz pode basear-se em fatores individuais para cada indivíduo,incluindo seu tamanho, idade, lesão, e/ou doença ou lesão que está sendotratada, e o tempo desde que a lesão ocorreu ou que a doença ocorreu.Alguém versado na técnica será capaz de determinar a quantidade eficaz paraum dado indivíduo com base nestas considerações que são rotina na técnica.Como usado aqui, "dose eficaz" significa o mesmo que "quantidade eficaz".

"Via eficaz" significa geralmente uma via que permite ofornecimento de um agente em um compartimento, sistema ou local desejado.Por exemplo, uma via eficaz é uma através da qual um agente pode seradministrado para proporcionar, no sítio de ação desejado, uma quantidade doagente suficiente para efetuar um resultado clínico benéfico ou desejado."FBS" significa soro bovino fetal.

"Kit" significa uma coleção de itens usados em conjunto paraum determinado fim ou fins, em particular no contexto da presente descrição,um conjunto de itens em uma embalagem (ou mais de uma embalagem) parauso uns com os outros para terapia de combinação compreendendo, porexemplo, 2xCon4(C) e um ou ambos de AMG 706 e 4TBPPAPC.

"Modalidade" significa um tipo, abordagem, avenida, oumétodo, como uma modalidade terapêutica; i.e., um tipo de terapia.

"AMG 706" é um inibidor de multi-quinases que interfere como Kit, PDGF, e vias de sinalização de VEGF, como descrito naUS2003/0125339, que é incorporada aqui integralmente por referência,particularmente em partes pertinentes a AMG 706, sua estrutura epropriedades, métodos de preparação e de uso do mesmo, e outros compostosrelacionados. Seu nome químico é N-(2,3-diidro-3,3-dimetil-lH-indol-6-il)-2-[(4- piridinilmetil)amino]-3-piridinocarboxamida (I). Como usado aqui otermo AMG 706 inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, em particular, o saldifosfato, exceto se indicado de outra forma aqui. AMG 706 também éconhecido como difosfato de motesanib.

"Nexavar®" (também conhecido como BAY 43-9006, tosilatode sorafenib, número de registro CAS 284461-73-0, inibidor de raf quinase,análogos de sorafenib, e IDDBCP150446, entre outros) é uma ômega carbóxidifenil uréia substituída que inibe ativação de RAF e, com isto, diminuifosforilação dependente-de-RAF 1 de MEK-I e ERK-1, como descrito noPedido de Patente dos E.U.A. No. 2003/0125359A1, W003/047523A2, eWilhelm et aL, Current Pharmaceutical Design, vol. 8, pp. 2255-2257(2002), sendo que cada um é incorporado aqui integralmente por referência,particularmente em partes pertinentes a Nexavar®, sua estrutura epropriedades, métodos de preparação e de uso do mesmo, e de outrasmoléculas relacionadas. Seu nome químico é 4-(4-{3-[4-cloro-3-(trifluorometil)fenil]ureído}fenóxi)-N2-metilpiridino-2-carboxamida.Produziu-se uma variedade de derivados. Entre estes derivados fluoradosdescritos no Pedido de Patente U.S. 2005/0038080Al e W02005/009961 A2,que são incorporados aqui integralmente por referência, particularmente noque se refere a estes e outros compostos de difenil uréia farmaceuticamenteativos.

"Dose ótima" significa uma dose específica ou uma faixa dedose ou uma faixa de doses que proporcionam o melhor resultado nascircunstâncias particulares e para o fim de sua administração.

"PBS" significa solução salina tamponada com fosfato.

"Peptibody" refere-se a uma molécula compreendendo umdomínio de anticorpo Fc ligado a pelo menos um peptídeo. A produção depeptibodies é descrita geralmente na publicação PCT WO 00/24782,publicada em 4 de maior 2000, que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente quanto à estrutura, síntese, propriedades, e usos depeptibodies, e dos mesmos, particularmente no que se refere a inibidores deAng2 e inibidores de VEGF.

"Derivado farmaceuticamente aceitável" é qualquer derivadofarmaceuticamente aceitável de um composto da invenção, como um sal, uméster, um metabólito, ou a resíduo de um composto desta invenção.

"PTK/ZK", também conhecido como vatalanib, é um inibidorde tirosina quinase de receptor multi-VEGF que, afirma-se, bloqueia aangiogênese de tumor e linfoangiogênese. Seu nome químico é N-(4-clorofenil)-4-(piridin-4-ilmetil)ftalazin-l-amina. Também é conhecido comonúmeros de registros CAS 212141-54-3 e 212142-18-2, PTK787,PTK787/ZK, PTK-787/ZK-222584, PTK787/ZK222584, ZK-22584, VEGF-TKI, VEGF-RKI, PTK-787A, DE-00268, CGP-79787, CGP-79787D,vatalanib, e ZK-222584. Ver Thomas, A., et al., J. of Clin. Oncology, 23(18):4162-4171 (2005); Pedido de Patente U.S. 20050118600A1, que sãoincorporadas aqui integralmente por referência, particularmente quanto àestrutura, síntese, propriedades, e usos de PTK/ZK e compostos relacionados.

"SEM" significa erro padrão da média.

"Indivíduo" significa um vertebrado, como um mamífero,como um humano. Mamíferos incluem, embora sem limitação, humanos,animais da pecuária, animais esportivos, e animais de companhia.

Indivíduos que necessitam de tratamento por meio de métodose/ou composições da presente invenção incluem aqueles [indivíduos] quesofrem de um distúrbio, disfunção, ou doença, ou de um efeito secundário dosmesmos, ou de um efeito secundário de um tratamento dos mesmos.

"Sutent®" é um inibidor de tirosina quinase de receptor demolécula pequena com o nome químico [2-dietilaminoetil]amida) do ácido(5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico. Sutent® também é conhecido como malato de sunitinib,SUl 1248, SU-11248, SU-Ol 1248, e SU-11248J, e é reportado comoapresentando atividades anti-angiogênicas e anti-tumor. Ver Mendel, D., etal., Clinical Câncer Research, 9:327-337 (2003); Schlessinger, J., TheScientist, 19(7): 17 (2005), que são incorporadas aqui integralmente porreferência, particularmente quanto à estrutura, síntese, propriedades, e usos deSutent® e compostos relacionados.

"Tek472/Fc" é uma fusão dos 472 aminoácidos N-terminais deTek à porção de 232 aminoácidos da região Fc de IgGl humana, comodescrito no WOOO/75323A1, que é incorporado aqui integralmente porreferência, particularmente em partes pertinentes a Tek472/Fc, sua estrutura epropriedades, métodos de preparação e de uso do mesmo, e outrospolipeptídeos de fusão relacionados. O fragmento de Tek N-terminal constituium peptídeo Tek solúvel a que faltam unidades repetitivas de fibronectina detipo III. Ele apresenta uma afinidade muito maior por ligantes de Tek do queoutros polipeptídeos de Tek que compreendem domínios extra-celulares decomprimento pleno.

"Terapeuticamente eficaz" é usado geralmente para qualificara quantidade de um agente para compreender aquelas quantidades queproporcionar um melhoramento da gravidade do distúrbio. Por exemplo,agentes terapêuticos neoplásicos eficazes prolongam a capacidade desobrevivência do paciente, inibem o crescimento celular rapidamenteproliferante associado com o neoplasma, ou efetuam uma regressão doneoplasma. Tratamentos que são terapeuticamente eficazes dentro dosignificado do termo como usado aqui, incluem tratamentos que melhoram aqualidade de vida do indivíduo, mesmo que não melhorem o desfecho dadoença per se.

"Tratar", "tratando" ou "tratamento" são usados amplamenteem relação com a invenção e cada termos destes compreende, entre outros,prevenir, melhorar, inibir, ou curar uma deficiência, disfunção, doença, ououtro processo deletério, incluindo aqueles que interferem com e/ou resultamde uma terapia."Inibidor de VEGF" como usado aqui é qualquer substânciaque diminui a sinalização pela via de VEGF-VEGFR. Inibidores de VEGFpodem ser, apenas para nomear alguns poucos exemplos, moléculas pequenas,peptídeos, polipeptídios, proteínas, incluindo mais especificamenteanticorpos, incluindo anticorpos anti-VEGF, anticorpos anti-VEGFR,intrabodies, maxibodies, minibodies, diabodies, proteínas de fusão de Fc,como peptibodies, receptibodies, proteínas e fragmentos de receptor de VEGFsolúvel, e uma variedade de outros. Muitos inibidores de VEGF atuamligando-se a VEGF ou a um receptor de VEGF. Outros atuam maisindiretamente mediante ligação a fatores que se ligam a VEGF ou a umreceptor de VEGF ou a outros componentes da via de sinalização de VEGF.Outros inibidores de VEGF adicionais atuam alterando as modificações pós-tradução reguladoras que modulam a sinalização da via de VEGF. Inibidoresde VEGF de acordo com a invenção também podem atuar por meio demecanismos mais indiretos. Qualquer que seja o mecanismo envolvido, comousado aqui, um inibidor de VEGF diminui a atividade eficaz da via desinalização de VEGF em uma dada circunstância relativamente ao quepoderia ocorrer na mesma circunstância na ausência do inibidor.

Descrição da invenção

Os inventores das invenções aqui descritas examinaram osperfis terapêuticos de várias combinações de inibidores de VEGF e inibidoresde Ang2. Eles verificaram, de acordo com determinados aspectos econcretizações preferidas da invenção, que combinando-se inibidores épossível obter vantagens relativamente ao uso de um ou de outro sozinhos. Atítulo de introdução a este e outros aspectos da invenção apresenta-se, abaixo,uma breve revisão da via de VEGF e da via de Ang2.

Via de VEGF

Uma via central na rede que regula o crescimento e adiferenciação do sistema vascular e de seus componentes, tanto durante odesenvolvimento embrionário e o crescimento normal, e numa grandevariedade de anomalias patológicas e doenças, é mediada pelo Fator deCrescimento Endotelial Vascular ("VEGF", Vascular Endothelial GrowthFactor) (originalmente denominado Fator de Permeabilidade Vascular ouVPF [ Vascular Permeability Factor]) e os receptores de VEGF celulares("VEGFRs"). (Ver G. Breier et al., Trends in Cell Biology, 6:454-456(1996)). Tem sido, portanto, um foco de estudo e um alvo para odesenvolvimento de drogas.

VEGF é uma glicoproteína de 46 kDa ligada a dissulfeto,dimérica, relacionada com o fator de crescimento derivado de plaquetas("PDGF" [Platelet-Derived Growth FactorJ). Ela é produzida por linhas decélulas normais e linhas de células de tumor; é um mitógeno seletivo paracélulas endoteliais; mostra atividade angiogênica em sistemas de teste in vivo(p. ex., córnea de coelho); é quimiotáctica para monócitos e célulasendoteliais; e induz ativadores de plasminogênio em células endoteliais, queestão envolvidos na degradação proteolítica da matriz extracelular durante aformação de capilares. Conhece-se diversas isoformas de VEGF que, emboraapresentem atividade biológica comparável, diferem quanto ao tipo de célulasque as secretam, e quanto a sua capacidade de ligação de heparina.Adicionalmente, há outros membros da família de VEGF, como Fator deCrescimento de Placenta ("PGF" [.Placenta Growth Factor]) e VEGF-C.

Os receptores celulares de VEGFs (VEGFRs) são tirosinaquinases de receptor de transmembrana. Eles são caracterizados por umdomínio extracelular com sete domínios similares a imunoglobulina e umdomínio de tirosina quinase intracelular. Caracterizou-se vários tipos dereceptor de VEGF, incluindo VEGFR-I (também conhecido como flt-1),VEGFR-2 (também conhecido como KDR), e VEGFR-3.

Um grande número de tumores humanos, particularmentegliomas e carcinomas, expressam altos níveis de VEGF e VEGFRs. Isto levouà hipótese de que VEGF liberado por células de tumor estimula o crescimentode capilares do sangue e a proliferação de endotélio de tumor de uma maneiraparácrina e, através do suprimento sangüíneo melhorado, acelera crescimentode tumor. Expressão incrementada de VEGF poderia explicar a ocorrência deedema cerebral em pacientes com glioma.

Verificou-se evidência direta do papel do VEGF como umfator de angiogênese de tumor in vivo em estudos em que se inibiu expressãoou atividade de VEGF. Isto foi obtido com anticorpos anti-VEGF, commutantes de VEGFR-2 negativos-dominantes que inibiram transdução desinal, e com RNA de VEGF anti-sentido. Todas as abordagens levaram àredução no crescimento de linhas de células de glioma ou outras linhas decélulas de tumor in vivo como um resultado da angiogênese de tumor inibida.

VEGFs contribuem para a hiperpermeabilidade vascular e paraa formação de edema. Eficazmente, a hiperpermeabilidade vascular e edemaque está associado com a expressão ou a administração de muitos outrosfatores de crescimento parece ser mediada via produção de VEGF.

Citocinas inflamatórias estimulam a produção de VEGF.Hipóxia resulta numa marcante regulação-para-cima de VEGF em numerosostecidos. Assim, situações que envolvem infarto, oclusão, isquemia, anemia,ou prejuízo circulatório evocam tipicamente respostas mediadas comVEGFArPF. Hiperpermeabilidade vascular, edema associado, troca trans-endotelial alterada e extravasão macromolecular, que é freqüentementeacompanhada de diapedese, podem resultar em excessiva deposição dematriz, proliferação aberrante de estroma, fibrose, etc. Assim, ahiperpermeabilidade mediada com VEGF pode contribuir significativamentepara distúrbios com estas características etiológicas. Assim, estes reguladoresde angiogênese tornaram-se um importante alvo terapêutico. Ver Hicklin eEllis, J. Clin Oncology, 23:1011-1027 (2005).Via de Tie2/TEK

A tirosina quinase de receptor de Tie2 (referida como "Tie2","Tie2R", "ORK", "Tie2/Tek", e "Tek murina") e seus ligantes (asangiopoietinas) também são conhecidos como sendo componentes desinalização críticos em uma via reguladora de angiogênese (Gale, N.W. eYancopoulos, G.D., Genes Dev. 13:1055-1066 (1999)). Há 4 angiopoietinasconhecidas, angiopoietina-1 ("Angl") até angiopoietina-4 ("Ang4"), etambém são referidas como "ligantes de Tie2". (Davis, S., et al., Cell,87:1161-1169 (1996); Grosios, K., et al., Cytogenet Cell Genet, 84:118-120(1999); Holash, J., et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science,42:1617-1625 (1999); Koblizek, T. L, et al., Current Biology, 8:529-532(1998); Lin, P., et al., Proc Natl Acad Sci USA, 95:8829-8834 (1998);Maisonpierre, P. C, et al., Science, 277:55 60 (1997); Papapetropoulos, A., etal., Lab Invest, 79:213-223 (1999); Sato, T. N., et al., Nature, 375:70- 74(1998); Shyu, K. G., et al., Circulation, 98:2081-2087 (1998); Suri, C, et al.,Cell, 87:1171-1180 (1996); Suri, C, et al., Science, 282:468-471 (1998);Valenzuela, D. M., et al., Proc Natl to AcadSci USA, 96: 1904-1909 (1999);Witzenbichler, B., et al., JBiol Chem, 273:18514-18521 (1998)). Mostrou-seque a ligação de Angl a Tie2 estimula fosforilação de receptor em célulasendoteliais cultivadas. Mostrou-se que Ang2 é tanto agonista comoantagonista da fosforilação de receptor de Tie2 (Davis, S., et al., (1996),supra·, Maisonpierre, P.C., et al., (1997), supra·, Kim, I., J.H. Kim, et al.,Oncogene 19(39):4549-4552 (2000)).

Os fenótipos de camundongos knockouts de Tie2 e Angl sãosimilares e sugerem que a fosforilação de Tie2 estimulada com Angl media aremodelação e estabilização de vasos que se desenvolvem no útero por meioda manutenção da adesão de células de suporte de células endoteliais(Dumont, D. J., et al., Genes & Development, 8:1897 1909 (1994); Sato, T.N.,et al., Nature, 376:70-74 (1995); Suri, C, et al., (1996), supra). O papel deAngl na estabilização de vasos é considerada conservada no adulto, onde éexpressa amplamente e constitutivamente (Hanahan, D., Science, 277:48-50(1997); Zagzag, D., et al., Experimental Neurology, 159:391-400 (1999)). Emcontraste, a expressão de Ang2 é limitada primariamente a sítios deremodelação vascular, onde ser considera que bloqueia a função de Ang 1,induzindo com isso um estado de plasticidade vascular capaz de conduzir àangiogênese (Hanahan, D., (1997), supra·, Holash, J., et al., Science,284:1994-1998 (1999); Maisonpierre, P. C, et al., (1997), supra).

Diversas publicações reportou acerca da expressão seletiva deAng2 em vasos, em estados de doença que apresentam um componenteangiogênico associado. Ang2 foi reportado com relação a isto na psoríase,degeneração macular, e câncer, por exemplo (Bunone, G., et al., AmericanJournal of Pathology, 155:1967-1976 (1999); Etch, T., et al., CâncerResearch, 61:2145-2153 (2001); Hangai, M., et al., InvestigativeOphthalmology & Visual Science, 42:1617-1625 (2001); Holash, J., et al.,(1999) supra', Kuroda, K., et al., Journal of Investigative Dermatology,116:713-720 (2001); Otani, A., et al., Investigative Ophthalmology & VisualScience, 40:1912-1920 (1999); Stratmann, A., et al., American Journal ofPathology, 153:1459-1466 (1998); Tanaka, S., et al., JClin Invest, 103:34-345 (1999); Yoshida, Y., et al., International Journal of Oncology, 15:1221-1225 15 (1999); Yuan, K., et al., Journal of Periodontal Research, 35: 165-171 (2000); Zagzag, D., et al., (1999) supra). A maior parte destes estudos foidirigida a neoplasmas e, em suma, eles estabelecem expressão de Ang2vascular numa ampla variedade de tipos de tumor.

Em contraste com sua expressão na angiogênese patológica, aexpressão de Ang2 em tecidos normais é extremamente limitada(Maisonpierre, P. C, et al., (1997), supra·, Mezquita, J., et al., Biochemicaland Biophysical Research Communications, 260:492-498 (1999)).Eficazmente, há três sítios principais de angiogênese em um adulto normal,que são o ovário, placenta, e útero, e estes são os três sítios em que mRNA deAng2 foi detectado preponderantemente em tecidos adultos não-neoplásicos.

Estudos funcionais proporcionam evidência adicional de que Ang2 é um fatorna angiogênese associada com tumor. Ahmad et al. {Câncer Res., 61: 1255-1259 (2001)) reportaram que a superexpressão de Ang2 em um modelo dexenoenxerto de camundongo aumentou o crescimento de tumor. Etoh et al.,supra, e Tanaka et al., supra, reportaram de maneira análoga que asuperexpressão de Ang2 resulta em hipervascularidade de tumor. Emcontraste, Yu et al. {Am. J. Path., 158:563-570 (2001)) reportaram que asuperexpressão de Ang2 em carcinoma do pulmão de Lewis e células decarcinoma mamário TA3 prolongou a sobrevida de camundongos quereceberam injeções com os transfectantes correspondentes.

Como um resultado, sugeriu-se que Ang 1, Ang2, e/ou Tie2 éum alvo possível para terapia anti-câncer. Por exemplo, cada uma dasPatentes dos Estados Unidos nums. 6.166.185, 5.650.490, e 5.814.464 divulgao conceito de anticorpos anti-ligante de Tie2 e corpos receptores. Lin et al.{Proc. Natl. Acad. Sci USA, 95:8829-8834 (1998)) injetaram um adenovírusexpressando Tie2 solúvel em camundongos, e reportaram que isto resultou naprodução de Tie2 solúvel e diminuiu o número e o tamanho dos tumores noscamundongos. Em um estudo relacionado, Lin et al {J. Clin. Invest.,100:2072-2078 (1997)) injetaram uma forma solúvel de Tie2 em ratos, econcluíram que este agente reduziu o tamanho do tumor nos ratos. Siemeisteret al. {Câncer Res., 59:3185-3189 (1999)) injetaram linhas de células demelanoma humano expressando o domínio extracelular de Tie2 emcamundongos nus, e reportaram acerca da produção de Tie2 solúvel nosanimais que resultou numa "significativa inibição" do crescimento de tumor eangiogênese de tumor.

Eficazmente, embora tenha havido notável progresso nodesenvolvimento de agentes monoterapêuticos que objetivam uma via, atéaqui não se desenvolveu agentes para a objetivação de ambas as vias queproporcionam resultados melhores do que as monoterapias correspondentes.Adicionalmente, como ilustrado pelos exemplos apresentados aqui,contrariamente à visão prevalente com base na independência da via, muitascombinações de agentes que, em conjunto, objetivam ambas as vias nãoatuam melhor do que monoterapias com cada um dos agentes individuais.

A invenção aqui descrita proporciona, contudo, terapias decombinação que podem ser usadas para tratar doenças com eficácias que seequiparam e, em alguns casos podem exceder os resultados obtidos com o usode monoterapias. Inibidores de Ang2 e inibidores de VEGF úteis emcombinação de acordo com a invenção aqui descrita são discutidos abaixo.Inibidores de Ang2. inibidores de VEGF e Combinações dos mesmos

A invenção aqui divulgada em vários de seus aspectospreferidos e concretizações dos mesmos proporciona o tratamento de umavariedade de indicações e doenças usando uma combinação de pelo menosum inibidor de Ang2 em conjunto com pelo menos um inibidor de VEGF.

Inibidores de Ang-2

Entre os inibidores de Ang2 preferidos na invençãoencontram-se os seguintes: (a) um polipeptídeo não-naturalmente ocorrenteque se liga especificamente a Ang2, incluindo, embora sem limitação,peptibodies que se ligam especificamente a Ang2; (b) um anticorpo não-naturalmente ocorrente que se liga a Ang2, compreendendo uma ou maisCDRs heterólogas; e (c) um polipeptídeo não-naturalmente ocorrentecompreendendo um fragmento de receptor solúvel que se liga especificamentea Ang2 e uma região de Fc de um anticorpo ou uma porção do mesmo.

Entre os inibidores de Ang2 particularmente preferidosencontram-se os seguintes: (a) um peptídeo ou peptibody não-naturalmenteocorrente que se liga especificamente a Ang2, como descrito nosW02004/092215A2 ou W003/05134A2, que são incorporados aquiintegralmente por referência, particularmente no que se refere a estesinibidores de Ang2; (b) um anticorpo não-naturalmente ocorrente que se ligaa Ang2, e compreende uma ou mais CDRs heterólogas, como descrito noW003/030833A2 e Pedido dos E.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada um éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente no que serefere a estes inibidores de Ang2; e (c) um polipeptídeo não-naturalmenteocorrente compreendendo um fragmento de receptor de Tie2/Tek solúvel nãoapresentando pelo menos parte da região contendo as unidades repetitivas deFNIII, como descrito no WOOO/75323A1 e polipeptídios relacionados comodescrito na Patente dos Estados Unidos n° 6.166.185, sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente por referência particularmente no que serefere a estes inibidores de Ang2.

Entre os inibidores de Ang2 mui particularmente preferidossão os seguintes: (a) 2xCon4(C), como descrito no W02004/092215A2 ouWÕ03/05134A2, que são incorporados aqui integralmente por referência,particularmente no que se refere a 2xCon4(C); (b) Ab 536, como descrito noW003/030833A2 e Pedido dos E.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada uma éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente quanto ao Ab536; e (c) Tek472/Fc, como descrito no WOOO/75323A1, ou polipeptídiosrelacionados como descrito na Patente dos Estados Unidos n° 6.166.185,sendo que cada um é incorporado aqui integralmente por referênciaparticularmente quanto a Tek472/Fc.

Com relação a isto, determinados dos inibidores de Ang2 muialtamente particularmente preferidos são descritos adicionalmente abaixo,entre estes 2xCon4(C) compreende os inibidores de Ang2 mais altamentepreferidos.

m 2xCon4(C)

2xCon4(C) é um peptibody seletivo para Ang2, como descritono W003/057134A2 e W02004/092215A2, sendo que cada um éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente em partespertinentes a 2xCon4(C), sua estrutura e propriedades, métodos de preparaçãoe de uso do mesmo, e outros compostos relacionados. 2xCon4(C) é uma fusãode um fragmento de Fc humano e duas cópias de um peptídeo de ligaçãoespecífico para Ang2. 2xCon4(C) também é referido como 2xCon4(C) 1K.

(2) Ab 536

Ab 536 é um anticorpo específico para Ang2 humanocompreendendo a cadeia pesada 536 HC e a cadeia leve 536 κ, como descritono W003/030833 e Pedido dos E.U.A. n° 10/982.440, sendo que cada um éincorporado aqui integralmente por referência, particularmente em partespertinentes a Ab 536, sua estrutura e propriedades, métodos de preparação ede uso do mesmo, e outros anticorpos relacionados.

(3) Tek472/Fc

Tek472/Fc é uma fusão dos 472 aminoácidos N-terminais deTek a uma porção de 232 aminoácidos da região Fc da IgGl humana, comodescrito no WOOO/75323A1, que é incorporado aqui integralmente porreferência, particularmente em partes pertinentes a Tek472/Fc, sua estrutura epropriedades, métodos de preparação e de uso do mesmo, e outrospolipeptídeos de fusão relacionados. O fragmento Tek N-terminal constituium peptídeo de Tek solúvel a que faltam unidades repetitivas de fibronectinatipo III. Ele apresenta muito mais afinidade por ligantes de Tek do que outrospolipeptídeos de Tek que compreendem domínios extracelulares decomprimento pleno.

Inibidores de VEGF

Descreveu-se na literatura uma grande quantidade deinibidores de VEGF que podem ser usados nas diversas concretizações dapresente invenção. Adicionalmente àquelas descritas mais detalhadamenteabaixo, inibidores de VEGF, que podem ser usados com relação a isto sãodescritos nos seguintes documentos de patente a seguir: US 2003/0105091,US2006/0241115, US 5.521.184, US 5.770.599, US 5.990.141, US6.235.764, US 6.258,812, US 6.515.004, US 6.630.500, US 6.713.485,W02005/070891, WO 01/32651, WO 02/68406, WO 02/66470, WO02/55501, WO 04/05279, WO 04/07481, WO 04/07458, WO 04/09784, WO02/59110, WO 99/450029, WO 00/59509, WO 99/61422, WO 00/12089, WO00/02871, e WO 01/37820, sendo que todos estes são incorporados aquiintegralmente por referência, particularmente em partes pertinentes ainibidores de VEGF úteis na invenção aqui descrita.

Os seguintes encontram-se entre inibidores de VEGFespecíficos que podem ser usados na invenção com relação ao exposto:

ABT-869 (Abbott) incluindo formulações para administraçãooral e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

AEE-788 (Novartis) (também denominado AE-788 e NVP-AEE-788, entre outros) incluindo formulações para administração oral einibidores de VEGF estreitamente relacionados;

AG-13 736 (Pfizer) (também denominado AG-01373 6)incluindo formulações para administração oral e inibidores de VEGFestreitamente relacionados;

AG-028262 (Pfizer) e inibidores de VEGF estreitamenterelacionados;

Angiostatina (EntreMed) (também denominado 'número deregistro CAS' 86090-08-6, Kl-4, e rhuAngiostatina, entre outros) e inibidoresestreitamente relacionados como descrito, entre outros, nas Patentes dosEstados Unidos nums. 5.792.825 e 6.025.688 que são incorporadas aquiintegralmente por referência, particularmente em partes relativas àAngiostatina e inibidores de VEGF estreitamente relacionados, suas estruturase propriedades, e métodos de preparação e uso dos mesmos;

Avastina™ (Genentech) (também denominado bevacizumab,R-435, rhuMAB-VEGF, e número de registro CAS 216974-75-3, entreoutros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

AVE-8062 (Ajinomoto Co. e Sanofi-aventis) (tambémdenominado AC-7700 e análogo de combretastatina A4, entre outros), einibidores de VEGF estreitamente relacionados;

AZD-2171 (AstraZeneca) e inibidores de VEGF estreitamenterelacionados;

Nexavar® (Bayer AG e Onyx) (também denominado númerode registro CAS 284461-73-0, BAY-43-9006, inibidor de raf quinase,sorafenib, análogos de sorafenib, e IDDBCP 150446, entre outros) einibidores de VEGF estreitamente relacionados;

BMS-387032 (Sunesis e Bristol-Myers Squibb) (tambémdenominado SNS-032 e número de registro CAS 345627-80-7, entre outros) einibidores de VEGF estreitamente relacionados;

CEP-7055 (Cephalon e Sanofi-aventis) (também denominadoCEP-11981 e SSR- 106462, entre outros) e inibidores de VEGF estreitamenterelacionados;

CHIR-258 (Chiron) (também denominado número de registroCAS 405169-16-6, GFKI, e GFKI-258, entre outros) e inibidores de VEGFestreitamente relacionados;

CP-547632 (OSI Pharmaceuticals e Pfizer) (tambémdenominado número de registro CAS 252003-65-9, entre outros) e inibidoresde VEGF estreitamente relacionados, como, por exemplo, CP-564959;

E-7080 (Eisai Co.) (também denominado número de registroCAS 417716-92-8 e ER-203492-00, entre outros) e inibidores de VEGFestreitamente relacionados; 786034 (GlaxoSmithKline) e inibidores de VEGFestreitamente relacionados;

GW-654652 (GlaxoSmithKline) e inibidores de Kdrindazolilpirimidina estreitamente relacionado;

IMC-ICll (ImClone) (também denominado DC-IOl e c-ρICl 1, entre outros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

KRN-951 (Kirin Brewery Co.) e outros inibidores de VEGFquinolina-uréia estreitamente relacionados;

PKC-412 (Novartis) (também denominado número de registroCAS 120685-11-2, benzoilstaurosporina, CGP-41251, midostaurina, e STI-412, entre outros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

PTK-787 (Novartis e Schering) (também denominadosnúmeros de registros CAS 212141-54-3 e 212142-18-2, PTK/ZK, PTK-787/ZK-222584, ZK-22584, VEGF-TKI, VEGF-RKI, PTK-787A, DE-00268,CGP-79787, CGP-79787D, vatalanib, ZK-222584, entre outros) e inibidoresde VEGF de derivado de anilinoftalzina estreitamente relacionados;

SUl 1248 (Sugen e Pfizer) (também denominado SU-11248,SU-Ol 1248, SU-Il248J, Sutent®, e malato de sunitinib, entre outros) einibidores de VEGF estreitamente relacionados;

SU-5416 (Sugen e Pfizer/Pharmacia) (também denominadonúmero de registro CAS 194413-58-6, semaxanib, 204005-46-9, entre outros)e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

SU-6668 (Sugen e Taiho) (também denominado número deregistro CAS 252916-29-3, SU-006668, e TSU-68, entre outros) e inibidoresde VEGF estreitamente relacionados como descrito em, entre outros, WO-09948868, W0-09961422, e W0-00038519, que são incorporados aquiintegralmente por referência, particularmente em partes relativas ao SU-6668e inibidores de VEGF estreitamente relacionados, suas estruturas epropriedades, e métodos de preparação e uso dos mesmos;

VEGF Trap (Regeneron e Sanofi-aventis) (tambémdenominado AVE-0005 e Systemic VEGF Trap, entre outros) e inibidores deVEGF estreitamente relacionados como descrito em, entre outros, WO-2004110490, que é incorporado aqui integralmente por referência,particularmente em partes relativas a VEGF Trap e inibidores de VEGFestreitamente relacionados, suas estruturas e propriedades, e métodos depreparação e uso dos mesmos;

Talidomida (Celgene) (também denominado número deregistro CAS 50-35-1, Sinovir, Talidomida Farmion, e Talomida, entreoutros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

XL-647 (Exelixis) (também denominado EXEL-7647, entreoutros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

XL-999 (Exelixis) (também denominado EXEL-0999, entreoutros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;XL-880 (Exelixis) (também denominado EXEL-2880, entre

outros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

ZD-6474 (AstraZeneca) (também denominado número deregistro CAS 443913-73-3, Zactima, e AZD-6474, entre outros) e inibidoresde VEGF anilinoquinazolina estreitamente relacionados; eZK-3 04709 (Schering) (também denominado CDK inibidores

(derivados de indirubina), ZK-CDK, MTGI, e inibidor de crescimento detumor multi-alvos, entre outros) e outros compostos estreitamenterelacionados incluindo os inibidores de VEGF derivado de indirubina descritono W0-00234717, W0-02074742, W0-02100401, W0-00244148, WO-02096888, W0-03029223, W0-02092079, e W002094814 que sãoincorporados aqui integralmente por referência particularmente em partespertinentes a estes e inibidores de VEGF estreitamente relacionados, suasestruturas e propriedades, e métodos de preparação e uso dos mesmos.

Também entre inibidores de VEGF com relação a istocompreende-se: Pazopanib, CDP791, Enzastaurina, BIBF 1120, BAY573952, BAY 734506, XL 184, IMC-1121B, CEP 701, SU 014813, SU10944, SU 12662, OSI-930, e BMS 582664, e inibidores de VEGFestreitamente relacionados.

Adicionalmente aos inibidores precedentes que atuamdiretamente sobre VEGF ou VEGFR, os inibidores a seguir apresentampropriedades anti-angiogênicas e podem ser usados na invenção de maneiramuito parecida com inibidores que atuam diretamente:

ZD-6126 (AstraZeneca e Angiogene) (também denominadonúmero de registro CAS 219923-05-4, fosfato de N-acetilcolquinol, ANG-453, AZD-6126, derivados de ZD-6126 e ZM-445526, entre outros) einibidores de VEGF estreitamente relacionados, como outros inibidores nasérie ANG-400;

Imatinib (Novartis) (também denominado números deregistros CAS 152459-95-5 e 220127-57-1, Glivec, Gleevec, STI-571, eCGP-57148, entre outros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados;

RAD-001 (Novartis) (também denominado número de registroCAS 159351-69-6, RAD- 001, SDZ-RAD, Certican, e everolimus, entreoutros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados; e

BMS-354825 (Bristol-Myers Squibb) (também denominadonúmero de registro CAS 302962-49-8, inibidor de Src/Abl quinase, edasatinib, entre outros) e inibidores de VEGF estreitamente relacionados.

Também são úteis na invenção, neste aspecto, Volociximab,CCI-779, 17- AAG, DMXAA, CI-1040, e CI-1033.

Entre os inibidores de VEGF preferidos na invenção conta-seos seguintes: (a) um composto descrito na US2003/0125339 ou Patente dosEstados Unidos n° 6995162 que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente em partes que revelam inibidores de VEGF; (b)um derivado de alquilamina substituído descrito na US2003/0125339 ouUS2003/0225106 ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dosEstados Unidos n° 6878714 sendo que cada uma é incorporada aquiintegralmente por referência, particularmente em partes que revelaminibidores de VEGF; (c) um anticorpo monoclonal humanizado não-naturalmente ocorrente que se liga a VEGF; (d) uma ômega-carboxiarildifenil uréia substituída ou derivado do mesmo como descrito noWOOO/42012, WOOO/41698, US2005/0038080A1, US2003/0125359A1,US2002/0165394A1, US2001/003447A1, US2001/0016659A1, eUS2002/013774A1 que são incorporadas aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam os inibidores de VEGF precedentes;(e) uma anilinoftalazina ou derivado do mesmo que se liga a, e inibe aatividade de tirosina quinases de receptores múltiplos incluindo ligação aodomínio de proteína quinase e inibição de VEGFRl e VEGFR2; (f) (5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-[2-dietilaminoetil]amida deácido 2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico) ou derivados do mesmo que sãoinibidores de VEGF; e (g) inibidores de VEGF como descrito naUS2006/0241115, incluindo aqueles de Fórmula IV ali.

Entre os inibidores de VEGF particularmente preferidosencontram-se os seguintes: (a) 4TBPPAPC ou um composto estreitamenterelacionado descrito na US20Õ3/0125339 ou Patente dos Estados Unidos n°6995162 que é incorporada aqui integralmente por referência, particularmenteem partes que revelam 4TBPPAPC e inibidores de VEGF estreitamenterelacionados; (b) AMG 706 ou um derivado de alquilamina substituídaestreitamente relacionada descrita na US2003/0125339 ou US2003/0225106ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dos Estados Unidos n°6878714 sendo que cada uma é incorporada aqui integralmente por referência,particularmente em partes que revelam AMG 706 e estes inibidores de VEGFestreitamente relacionados; (c) Avastina™ ou um anticorpo monoclonalhumanizado não-naturalmente ocorrente estreitamente relacionado que se ligaa VEGF, é um inibidor de VEGF, e apresenta pelo menos 90 % de identidadede seqüências com Avastina™; (d) Nexavar® ou uma ômega-carboxiarildifenil uréia substituída estreitamente relacionada ou derivado da mesmadescrito no W000/42012, WOOO/41698, US2005/0038080A1,US2003/0125359A1, US2002/0165394A1, US2001/003447A1,US2001/0016659A1, e US2002/013774A1 que são incorporadas aquiintegralmente por referência, particularmente em partes que revelam estesinibidores de VEGF; (e) PTK/ZK ou uma anilinoftalizina estreitamenterelacionada ou derivado da mesma que se liga a, e inibe a atividade de tirosinaquinases de receptores múltiplos incluindo ligação ao domínio de proteínaquinase e inibição de VEGFRl e VEGFR2; (f) Sutent® ou um derivadoestreitamente relacionado de (5-[5-fluoro-2-oxo-l,2-diidroindol-(32)-ilidenometil]-ácido 2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico [2-dietilaminoetil]amida) que é um inibidor de VEGF; e (g) inibidores de VEGFcomo descrito na US2006/0241115, incluindo aqueles de Fórmula IV ali.

Entre os inibidores de VEGF mui particularmente preferidosencontram-se os seguintes: (a) 4TBPPAPC, como descrito naUS2003/0125339 ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 que éincorporada aqui integralmente por referência, particularmente em partes querevelam 4TBPPAPC; (b) AMG 706, como descrito na US2003/0125339 ouPatente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dos Estados Unidos n°6878714 que é incorporada aqui integralmente por referência, particularmenteem partes que revelam AMG 706; (c) Avastina™; (d) Nexavar®, comodescrito no W000/42012, WOOO/41698, US2005/0038080A1,US2003/0125359A1, US2002/0165394A1, US2001/003447A1,US2001/0016659A1, e US2002/013774A1 que são incorporadas aquiintegralmente por referência, particularmente em partes que revelamNexavar®; (e) PTK/ZK; (f) Sutent®, e (g) inibidores de VEGF de FórmulaIV como descrito na US2006/0241115.

Neste aspecto, determinados dos inibidores de VEGF muiparticularmente referidos são descritos adicionalmente abaixo, sendo queentre estes AMG 706 encontra-se entre os inibidores de VEGF mais altamentepreferidos.

(I)AMG 706AMG 706 é um inibidor de multi-quinases que interfere com oKit, PDGF, e vias de sinalização de VEGF, como descrito naUS2003/0125339, ou Patente dos Estados Unidos n° 6995162 ou Patente dosEstados Unidos n° 6878714 que é incorporada aqui integralmente porreferência, particularmente em partes pertinentes a AMG 706, sua estrutura epropriedades, métodos de preparação e de uso do mesmo, e outros compostosrelacionados. Ele tem um nome de N-(2,3-diidro-3,3-dimetil-lH-indol-6-il)-2-[(4-piridinilmetil)amino]-3-piridinocarboxamida (I). Como usado aqui otermo AMG 706 inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, em particular, o salde difosfato, exceto se indicado de outra forma aqui. AMG 706 também éconhecido como difosfato de motesanib.

(2) 4TBPPAPC

4TBPPAPC é um inibidor de multi-quinases que interfere como Kit, PDGR, e vias de sinalização de VEGF. Seu nome é N-(4-(l,l-dimetiletil)fenil)-2-((4-piridinilmetil)amino-3-piridinocarboxamida, comodescrito no Pedido de Patente dos E.U.A. US2003/0125339, que éincorporado aqui integralmente por referência particularmente em partespertinentes a 4TBPPAPC, sua estrutura e propriedades, métodos depreparação e de uso do mesmo, e outros compostos relacionados. 4TBPPAPCtambém é denominado N-[4-(t-butil)fenil]{2-[(4-piridilmetil)amino](3-piridil)}carboxamida, como apresentado no parágrafo [0649] do pedido depatente precedente.

(3) Avastina™

Avastina™" é um anticorpo monoclonal humanizadorecombinante que se liga diretamente a VEGF, e é comercializado pelaGenentech. Ele também é conhecido como bevacizumab.

(4) Nexavar®

Nexavar® (também conhecido como BAY 43-9006 esorafenib) é uma ômega carbóxi difenil uréia substituída que inibe a ativaçãode RAF-1, diminuindo com isso a fosforilação dependente-de-RAF 1 deMEK-I e ERK-1, como descrito no Pedido de Patente dos E.U.A. No.2003/01253 59A1, W003/047523A2, e Wilhelm et al., CurrentPharmaceutical Design, vol. 8, pp. 2255-2257 (2002), sendo que cada uma éincorporada aqui integralmente por referência, particularmente em partespertinentes a Nexavar®, sua estrutura e propriedades, métodos de preparaçãoe de uso do mesmo, e outras moléculas relacionadas. Seu nome químico é 4-(4- { 3 - [4-cloro-3 -(trifluorometil)fenil]ureído} fenóxi)-N2-metilpiridino-2-carboxamida. Produziu-se uma variedade de derivados deste composto. Entreestes derivados fluorados descritos no Pedido de Patente U.S.2005/0038080A1 e W02005/009961A2, incorporados aqui integralmente porreferência, particularmente no que se refere a estes e outros compostos dedifenil uréia farmaceuticamente ativos.

(5) PTK/ZK

PTK787, também conhecido como vatalanib, é um inibidor detirosina quinase de receptor multi-VEGF que, afirma-se, bloqueia aangiogênese de tumor e linfoangiogênese. Sua estrutura química é N-(4-clorofenil)-4-(piridin-4-ilmetil)ftalazin-l-amina. Ele também é conhecidocomo PTK787/ZK, PTK787/ZK222584, e PTK/ZK. Ver Thomas, A., et al., J.of Clin. Oncology, 23(18): 4162-4171 (2005); Pedido de Patente U.S.20050118600A1.

(6) Sutent®

Sutent® é um inibidor de tirosina quinase de receptor demolécula pequena com a estrutura química a seguir, (ácido [2-dietilaminoetil]amida 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2-diidroindol-(3Z)-ilidenometil]-2,4-dimetil-lH-pirrol-3-carboxílico). Sutent® também é conhecido comomalato de sunitinib e SUl 1248, e reporta-se que apresenta atividades anti-angiogênicas e antitumor. Ver Mendel, D., et al., Clinicai Câncer Research,9:327-337 (2003); Schlessinger, J., The Scientist, 19(7): 17 (2005).Combinações de Ang2 e inibidores de VEGF

A invenção aqui descrita refere-se particularmente ao uso deum ou mais inibidores de Ang2 em conjunto com um ou mais inibidores deVEGF. Em particular, com relação a isto, a invenção refere-se ao uso emcombinação com um ou mais dos inibidores de Ang2 descritos na seçãoprecedente e, alhures aqui, em combinação com um ou mais dos inibidores deVEGF descritos na seção precedente e alhures aqui. Deve-se considerar quequalquer um dos inibidores de Ang2 aqui descritos pode ser usado comqualquer um dos inibidores de VEGF aqui descritos. De acordo com ainvenção, combinações preferidas empregam pelo menos um inibidor deAng2 preferido ou pelo menos um inibidor de VEGF preferido. Além disso,combinações mais altamente preferidas compreendem inibidores de Ang2mais altamente preferidos ou inibidores de VEGF ou ambos.

Entre as combinações particularmente preferidas da invenção,neste aspecto, encontram-se aquelas que compreendem um ou mais dosseguintes inibidores de Ang 2:

2xCon4(C), Ab 536, ou Tek472/Fc, e um ou mias dosseguintes inibidores de VEGF: AMG 706, 4TBPPAPC, Avastina™, Sutent®,PTK/ZK, ou Nexavar®.

Neste aspecto, em determinadas das combinações maisaltamente preferidas, o inibidor de Ang2 é 2xCon4(C) e the inibidor de VEGFé AMG 706.

Indicações e Doenças

Uma variedade de distúrbios e doenças e análogos pode sertratada de acordo com vários aspectos e concretizações da invenção. Emparticular, de acordo com determinados de seus aspectos e concretizações, ascomposições, métodos e outras características da invenção são usados paratratar doenças que envolvem um efeito prejudicial de, ou sobre a angiogênesee/ou vascularização, incluindo aquelas que requerem angiogênese e/ouvascularização.

Como discutido abaixo em maior detalhe, referidas doenças,em vários aspectos e concretizações preferidas da invenção, incluem, emborasem limitação doenças envolvendo neovascularização ocular, comoretinopatias (incluindo retinopatia diabética), degeneração macularrelacionada com a idade, psoríase, hemangioblastoma, hemangioma,arteriosclerose, doenças inflamatórias, como uma doença inflamatóriareumatóide ou reumática, particularmente artrite (incluindo artritereumatóide), e outros distúrbios inflamatórios crônicos, como asma crônica,aterosclerose arterial ou pós-transplante, endometriose, e doenças neoplásicas,por exemplo, assim-chamados tumores sólidos e tumores líquidos, comoleucemias, incluindo leucemias hematopoiéticas, e distúrbios e neoplasmasmieloproliferativos.

Adicionalmente, em vários aspectos e concretizaçõespreferidas, a invenção proporciona composições, métodos, kits e análogos,entre outros, úteis para tratar, por exemplo, cânceres, e outras condiçõeshiperproliferativas, como hiperplasia, psoríase, dermatite de contato,distúrbios imunológicos, e infertilidade, sendo que alguns destes sãoindicados acima.

A invenção também é útil nestes aspectos e em outros, aoproporcionar composições, métodos, kits e análogos como descrito aqui parainibir crescimento de células de câncer, incluindo inibir processos deproliferação celular, invasividade, e metástase em um indivíduo, incluindopacientes humanos.

Cânceres tratáveis por meio de métodos da presente invençãoincluem aqueles que ocorrem em mamíferos, incluindo aqueles que ocorremem humanos e outros primatas, e também em animais de estimação ou decompanhia, como cães e gatos, animais de laboratório, como ratos,camundongos e coelhos, e animais da pecuária, como cavalos, porcos,ovelhas, e gado. Em determinados dos aspectos particularmente preferidos dainvenção e concretizações preferidas da mesma, humanos são altamentepreferidos, particularmente, pacientes humanos que sofrem de uma variedadede condições, como aquelas particularmente indicadas aqui.

Tumores ou neoplasmas incluem crescimentos de células detecido em que a multiplicação das células é descontrolada e progressiva.Alguns dos crescimentos são benignos, mas outros são denominados malignose podem levar à morte. Cânceres ou neoplasmas malignos distinguem-se decrescimentos benignos pelo fato de que, adicionalmente a apresentaremproliferação celular agressiva, eles podem invadir tecidos adjacentes e entrarem metástase. Além disso, neoplasmas são caracterizados por mostrarem umaperda maior de diferenciação (maior des-diferenciação), e de sua organizaçãoentre si e seus tecidos circundantes. Esta propriedade também é denominada"anaplasia".

Neoplasma e cânceres cuja invasividade ou metástase éassociada com expressão ou atividade de Ang-2, e com expressão ouatividade de VEGF, encontram-se particularmente entre as doenças nas quaisa invenção pode ser aplicada com vantagem.

Neoplasmas tratáveis por meio da presente invenção incluemtumores sólidos, i.e., carcinomas e sarcomas. Carcinomas incluem aquelesneoplasmas malignos derivados de células epiteliais que se infiltram(invadem) os tecidos adjacentes e dão origem a metástases. Adenocarcinomassão carcinomas derivados de tecido glandular, ou que formam estruturaglandulares reconhecíveis. Outra categoria ampla de cânceres em que ainvenção pode ser aplicada com vantagem inclui sarcomas, que são tumorescujas células se encontram embutidas em uma substância fibrilar ouhomogênea, como tecido conectivo embrionário. A invenção também podeser usada para tratamento de cânceres dos sistemas mielóide ou linfóide,incluindo leucemias, linfomas e outros cânceres que tipicamente não estãopresentes como uma massa de tumor, mas que se encontram distribuídos nossistemas vascular e linforreticular.

Os tipos de câncer e células de tumor passíveis do tratamentode acordo com a invenção incluem, sem limitação, células de: tumoresprodutores de ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia não-linfocíticaaguda, câncer do córtex adrenal, câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncerde mama, câncer cervical, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocíticacrônica, câncer colorretal, linfoma de células T cutâneas, câncer endometrial,câncer esofagal, sarcoma de Ewing, câncer de vesícula biliar, leucemia decélulas peludas, carcinoma de cabeça e pescoço, linfoma de Hodgkin,sarcoma de Kaposi, câncer de rim, câncer de fígado, câncer de pulmão (decélulas pequenas e não pequenas), efusão peritoneal maligna, efusão pleuralmaligna, melanoma, mesotelioma, mieloma múltiplo, neuroblastoma, glioma,linfoma não Hodgkin, osteossarcoma, câncer do ovário, câncer ovariano(células germinativas), câncer pancreático, câncer peniano, câncer de próstata,retinoblastoma, câncer de pele, sarcoma de tecidos moles, carcinomas decélulas escamosas, câncer de estômago, câncer testicular, câncer da tireóide,neoplasmas trofoblásticos, câncer uterino, câncer vaginal, câncer da vulva, etumor de Wilms.

A presente invenção proporciona, portanto, composições emétodos úteis para o tratamento de uma ampla variedade de cânceres,incluindo tumores sólidos e leucemias. Tipos de câncer que podem sertratados incluem, embora sem limitação: adenocarcinoma da mama, próstata,e colo; todas as formas de carcinoma broncogênico do pulmão; mielóide;melanoma; hepatoma; neuroblastoma; papiloma; apudoma; coristoma;branquioma; síndrome carcinóide maligna; doença carcinóide do coração;carcinoma (p. ex., Walker, células basais, basoescamosas, Brown-Pearce,ductal, tumor de Ehrlich, Krebs 2, células de merkel, mucinoso, do pulmão decélulas não-pequenas, células que parecem com aveia, papilar, cirroso,bronquiolar, broncogênico, células escamosas, e células transicionais);distúrbios histiocíticos; leucemia; histiocitose maligna; doença de Hodgkin;carcinoma imunoproliferativo de células do pulmão pequenas; linfoma nãoHodgkin; plasmacitoma; reticuloendoteliose; melanoma; condroblastoma;condroma; condrossarcoma; fibroma; fibrossarcoma; tumores de célulasgigantes; histiocitoma; lipoma; lipossarcoma; mesotelioma; mixoma;mixossarcoma; osteoma; osteossarcoma; cordoma; craniofaringioma;disgerminoma; hamartoma; mesenquimoma; mesonefroma; miossarcoma;ameloblastoma; cementoma; odontoma; teratoma; timoma; tumortofoblástico.

Adicionalmente, também é possível tratar os seguintes tipos decânceres: adenoma; colangioma; colesteatoma; ciclindroma;cistadenocarcinoma; cistadenoma; tumor de células granulosas;ginandroblastoma; hepatoma; hidradenoma; tumor de células ilhotas; tumorde células de Leydig; papiloma; tumor de células de Sertoli; tumor de célulasteçais; leiomioma; leiomiossarcoma; mioblastoma; mioma; miossarcoma;rabdomioma; rabdomiossarcoma; ependimoma; ganglioneuroma; glioma;meduloblastoma; meningioma; neurilemoma; neuroblastoma;neuroepitelioma; neurofibroma; neuroma; paraganglioma; paragangliomanão-cromafma; angioceratoma; hiperplasia angiolinfóide com eosinofilia;angioma esclerosante; angiomatose; glomangioma; hemangioendotelioma;hemangioma; hemangiopericitoma; hemangiossarcoma; linfangioma;linfangiomioma; linfangiossarcoma; pinealoma; carcinossarcoma;condrossarcoma; cistossarcoma filódico; fibrossarcoma; hemangiossarcoma;leiomiossarcoma; leucossarcoma; lipossarcoma; linfangiossarcoma;miossarcoma; mixossarcoma; carcinoma do ovário; rabdomiossarcoma;sarcoma; neoplasmas; nerofibromatose; e displasia cervical.

Outra aspecto da presente invenção compreende o uso dosmateriais e métodos da presente invenção para prevenir e/ou tratar qualquercondição hiperproliferativa da pele, incluindo psoríase e dermatite de contatoou outras doenças hiperproliferativas.

Outros aspectos da presente invenção incluem tratar váriasretinopatias (incluindo retinopatia diabética e degeneração macularrelacionada com a idade) em que a angiogênese está envolvida, e tambémdistúrbios/doenças do trato reprodutivo feminino, como endometriose,fibróide uterino, e outras condições associadas com proliferação vasculardisfuncional (incluindo crescimento microvascular endometrial) durante ociclo reprodutivo feminino.

Outro aspecto adicional da presente invenção refere-se a tratarcrescimento vascular anormal incluindo más formações arteriovenosascerebrais (AVMs, cerebral arteriovenous malformations), lesão da mucosagastrintestinal e reparo, ulceração da mucosa gastroduodenal em pacientescom uma história de doença de úlcera péptica, incluindo isquemia resultantede acidente vascular, um amplo espectro de distúrbios vasculares pulmonaresem doença do fígado e hipertensão portal em pacientes com hipertensão portalnão-hepática.

A invenção também é útil para tratar síndromemielodisplásica, incluindo anemia refratária, que está associada com umdecréscimo em células sangüíneas vermelhas, e leucemia mielomonocíticacrônica, que é associada com um decréscimo das células sangüíneas brancas.A invenção também é útil para tratar distúrbio mieloproliferativo, incluindoleucemia mielóide crônica, que é associada com um incremento dosgranulócitos, policitemia veva, associada com um aumento das célulassangüíneas vermelhas, trombocitose essencial, que é associada com umaumento das plaquetas, e mielofibrose, uma condição em que a medula ósseapropriamente dita se enche com células fibróticas.

Outro aspecto da presente invenção é a prevenção de cânceresusando as composições e métodos proporcionados pela presente invenção.A invenção também é útil para tratar cânceres definidosexperimentalmente, e também aqueles que ocorrem naturalmente. Nesteaspecto, particularmente usando-se modelos in vitro e in vivo do estado datécnica, vários aspectos da invenção são úteis para identificar agentes, sendoque pode-se esperar razoavelmente que apresentem resultados eficazes notratamento de doença eficaz in vivo como os que foram obtidos nos sistemasem modelos.

Vias de administração

Inibidores de acordo com a invenção, em váriosconcretizações, podem ser administrados através de uma variedade de viasvantajosas bem conhecidas por aqueles versados na técnica da administraçãode terapêuticos a um indivíduo. Em concretizações da invenção neste aspecto,um ou mais inibidores, como descrito alhures aqui, são administrados o canalalimentar. Em outras concretizações, um ou mais inibidores como descritoalhures aqui são administrados parenteralmente. Em várias concretizações,um ou mais inibidores podem ser administrados via o canal alimentar emconjunto com um ou mais outros inibidores administrados parenteralmente.

Em uma variedade de concretizações, referidas vias incluem,embora sem limitação, administração das composições oralmente,ocularmente, pela mucosa, topicamente, por via retal, pulmonar, como pormeio de spray para inalação, e epicutaneamente. As vias de administraçãoparenterais a seguir também são úteis em várias concretizações da invenção:administração por meio de injeção intravenosa, intraarterial, intracardíaca,intraespinhal, intratecal, intraóssea, intraarticular, intrasinovial, intracutânea,intradérmica, subcutânea, peritoneal, e/ou intramuscular. Em algumasconcretizações usa-se injeção intravenosa, intraarterial, intracutânea,intradérmica, subcutânea e/ou intramuscular.

Em determinadas concretizações da invenção as composiçõessão administradas localmente, por exemplo por meio de injeção intra-ocularpara tratar neovascularização ocular, retinopatia, ou degeneração macularrelacionada com a idade.

Doses

A quantidade de compostos que são administrados e o regimede dosagem para tratar uma condição de doença com os compostos e/oucomposições desta invenção dependem de uma variedade de fatores,incluindo a idade, peso, sexo, e condição clínica do indivíduo, o tipo dedoença, a gravidade da doença, a via e freqüência de administração, e ocomposto particular empregado. Assim, o regime de dosagem pode variaramplamente.

A dosagem apropriada de VEGF e de inibidores de Ang2 a serusada em combinação de acordo com a invenção pode ser determinada com ouso de técnicas bem conhecidas empregadas mais geralmente nas técnicasfarmacêuticas e relacionadas para determinar as dosagens de agentesindividuais e/ou de combinações de outros agentes para usos terapêuticos.

Em determinadas concretizações neste aspecto a dose de umou ambos inibidores para uso em uma combinação de acordo com a invençãopode ser baseada parcialmente ou totalmente na dose ótima estabelecida paraum ou para ambos os inibidores usados sozinhos. A dose ótima para cadaagente pode ser a dose recomendada ou determinada pela autoridaderesponsável por alimentos e drogas, a FDA {Food and Drug Administration)dos E.U.A. (particularmente no que se refere a formulações para uso nosE.U.A.), e/ou por outras autoridades com jurisdição sobre assuntos deste tipofora dos E.U.A. (particularmente no que se refere a formulações para uso forados E.U.A.), para o uso do agente propriamente dito ou em outrasformulações de combinação.

Deve-se compreender que a dose ótima em alguns casos é adose que proporciona o efeito terapêutico máximo, porém, em outros casos,pode ser maior ou menor. Por exemplo, a administração de qualquer agente nadose que proporciona máximo efeito terapêutico pode produzir, ao mesmotempo, efeitos secundários inaceitáveis, como toxicicidade, de modo que adose ótima é inferior àquela que tem o efeito terapêutico máximo.

Assim, em algumas combinações de acordo com a invenção,um ou ambos os agentes estarão presentes na dose que proporciona o máximoefeito terapêutico quando usada apenas e/ou quando usada na combinação.Em outras combinações de acordo com a invenção, um ou o outro, ou ambosos agentes estarão presentes na quantidade que proporciona o efeitoterapêutico ótimo quando o agente é usada sozinho. Em outras concretizaçõesadicionais, um ou ambos os agentes estarão presentes a uma dose queproporciona o efeito terapêutico máximo para aquele agente quando usado nacombinação, representando um equilíbrio entre efeitos terapêuticos e efeitossecundários indesejáveis, como toxicicidade.

Deve-se considerar adicionalmente que, entre as vantagens dasterapias de combinação de acordo com a invenção, uma é que não só emalgumas concretizações a combinação opera melhor do que qualquer agenteindividual sozinho (nas mesmas doses), mas também que a combinaçãoproporciona pelo menos o efeito terapêutico igual ou melhor do que qualqueragente sozinho, usando-se uma dose de um ou ambos os agentes, menor doque aquela requerida para obter o mesmo efeito quando qualquer agente éusado sozinho. Em concretizações, referidas dosagens resultam em menosefeitos secundários e/ou menor toxicidade.

As mesmas considerações aplicam-se quando mais de doisagentes são usados em combinação um com o outro, como quando se usa três,quatro, cinco ou mais agentes em combinação.

De acordo com o precedente, as doses de agentes a seremusadas em combinação em concretizações são as doses recomendadas,determinadas, ou prescritas pela agência responsável por alimentos e drogas, aFDA dos E.U.A., ou por uma agência com autoridade similar fora dos E.U.A..Em concretizações, adicionalmente, a dose de um agente usado em umaterapia de combinação de acordo com a invenção também pode ser menor, oumaior, do que as doses previamente recomendadas, determinadas, ouprescritas, como, em particular, quando o perfil terapêutico do agente naterapia de combinação é ótimo a uma referida dose menor ou maior. Emconcretizações, neste aspecto, a dose de um ou mais dos agentes na terapia decombinação é de 10 %, 25 %, 50 %, 75 %, 85 %, 95 %, 105 %, 110 %, 125 %ou mais, das doses recomendadas, determinadas, ou prescritas por umareferida agência para o uso do agente sozinho, particularmente para o uso doagente sozinho para a mesma indicação.

No caso de agentes que são administrados parenteralmente,como por meio de injeção IV, em concretizações da invenção, a dose doagente para terapia de combinação é de 0,05 mg/kg a 100 mg/kg. Emconcretizações, ela é de 0,01 a 50 mg/kg. Em concretizações, ela é de 0,02 a40 mg/kg. Em concretizações, ela é de 0,3 a 30 mg/kg. Em concretizações, elaé de 0,5 a 25 mg/kg. Em concretizações, ela é de 1,0 a 15 mg/kg. Tambémneste aspecto, em concretizações a dose é qualquer uma ou mais dentre 0,05,0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 5,0, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 100mg/kg ou mais. Neste aspecto as doses podem ser administradas em qualquerintervalo, incluindo, embora sem limitação, mais de uma vez por dia, uma vezpor dia, a cada dois, três, quatro, cinco, seis ou mais dias, uma vez porsemana, a cada uma, duas, três, ou quatro semanas, ou em intervalos maislongos.

Por exemplo, em concretizações neste aspecto, doses de2xCon4(C) em terapias de combinação de acordo com a invenção,adicionalmente ao indicado acima, são para de 0,1 a 50 mg/kg IV uma vez porsemana. Em concretizações, as doses são de 0,3 mg/kg a 30 mg/kg IV umavez por semana. Em concretizações, a dose é de 3 mg/kg IV uma vez porsemana. Em concretizações, ela é de 5 mg/kg IV uma vez por semana. Emconcretizações, ela é de 10 mg/ml IV uma vez por semana. Emconcretizações, ela é de 15 mg/kg IV uma vez por semana.

Aproximadamente as mesmas considerações que aquelasdescritas imediatamente acima aplicam-se também à dose de um agente paraadministração oral em uma terapia de combinação de acordo com a invenção.

Como observado alhures aqui, para administração oral a composiçãofarmacêutica pode ser em forma de, por exemplo, um tablete, cápsula,suspensão, ou líquido. A composição farmacêutica é preparada, depreferência, em forma de uma unidade de dosagem contendo uma quantidadeparticular do ingrediente ativo. Exemplos de referidas unidades de dosagemsão tabletes ou cápsulas. Princípios e métodos gerais para a formulação deagentes para administração oral são bem conhecidos por aqueles com práticana técnica.

Formulações de agentes para administração oral na terapia decombinação de acordo com a invenção em concretizações da mesma contêm oingrediente ativo numa quantidade inferior a de 1 a cerca de 2.000 mg, oumais. Em concretizações, a quantidade é de 1 a 1.000, de 10 a 1.000, de 50 a500, de 75 a 750 mg, entre outras. Por exemplo, sem limitação, emconcretizações, a quantidade é de 1, 10, 25, 50, 75, 100, 200, 250, 300, 400,500, 600, 700, 800, 1.000, ou 2.000 mg por forma de dosagem.

Em concretizações, o agente é administrado em terapia decombinação de acordo com a invenção em doses de 0,01 ou menos a 2.000mg/kg ou mais. Em concretizações, a dose é de 1 a 1.000 mg/kg. Emconcretizações, ela é de 15 a 750 mg/kg. Em concretizações, ela é 25 a 700mg/kg. Em concretizações, ela é de 50 a 500 mg/kg. Por exemplo, emconcretizações, ela é de 1, 10, 25, 50, 75, 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600,700, 800, 1.000, ou 2.000 mg/kg.

Quanto às outras formas de administração, doses paraadministração oral podem ser administradas uma, duas, três, quatro, cinco,seis, sete ou mais vezes por dia, ou em intervalos de mais de uma vez ao dia,como a cada dois, três, quatro, cinco, seis, ou sete dias, ou em intervalosmaiores.

A administração oral de um agente em terapia de combinaçãode acordo com a invenção como indicado acima variará dependendo demuitos fatores, incluindo o agente exato, e a indicação e a condição imediatado paciente, apenas para indicar alguns. Apenas a título de ilustração,considerando esta variabilidade, em concretizações neste aspecto, o agente éadministrado oralmente em uma forma de dosagem contendo 1, 10, 25, 50,75, 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 1.000, ou 2.000 mg cada. Emconcretizações neste aspecto, o agente é administrado oralmente em uma oumais das quantidades precedentes, uma, duas, três, quatro ou mais vezes pordia, ou em intervalos menores. Em concretizações neste aspecto, uma, duas,três, ou quatro unidades de dosagem são administradas ao mesmo tempo. Emconcretizações incluindo concretizações em que a administração é parenteral,oral, ou por outros meios, os intervalos de dosagem são variados, como entreduas, três ou mais freqüências de administração, ou por meio de salto de umadose ou adição de administrações em intervalos predeterminados ou de acordocom a resposta do paciente.

Em concretizações, doses são alteradas entres respostas, comovariação regular entre duas, três, quatro ou mais regimes de dosagem, ou deacordo com a resposta do paciente.

As considerações precedentes aplicam-se tanto a inibidores deAng2 como também a inibidores de VEGF usados na terapia de combinaçãode acordo com a invenção, entre outros. Regimes de dosagem são discutidosmais detalhadamente abaixo.

Regimes de dosagem

Composições podem ser administradas em dosagens e pormeio de técnicas bem conhecidas por aqueles com prática nas técnicasmédicas e veterinárias considerando fatores, como a idade, sexo, peso, econdição do paciente particular, a formulação que será administrada (p. ex.,sólidos versus líquida). Doses para humanos ou outros mamíferos podem serdeterminadas pela pessoa versada na técnica, sem experimentaçãodesnecessária, a partir desta revelação, dos documentos aqui indicados, e oconhecimento da técnica.

De acordo com várias concretizações, dosagens apropriadas eplanos de dosagem dependerão de numerosos fatores, e podem variar emcircunstâncias diferentes. Os parâmetros que determinarão os planos dadosagem ótima a ser administrada incluirão tipicamente alguns ou todos osseguintes: a doença que está sendo tratada, e seu estágio; a espécie doindivíduo, sua saúde, sexo, idade, peso, e taxa metabólica; outras terapiassendo administradas; e complicações potenciais esperadas considerando ahistória do indivíduo ou seu genótipo.

O plano de dosagem ótima em uma dada situação tambémconsiderará a forma pela qual as composições são formuladas, a maneiracomo são administradas, sua via de distribuição após administração, e a taxa àqual serão eliminadas tanto dos sítios de ação como também do corpo doindivíduo. Finalmente, a determinação da dosagem ótima proporcionaránecessariamente uma dose eficaz que nem se encontra abaixo do limiar deefeito benéfico máximo, nem acima do limiar em que os efeitos deletériosassociados com a dose dos agentes ativos superam as vantagens da doseincrementada.

Deve-se considerar que uma "dose" pode ser fornecida de umasó vez, de maneira fracionada, ou continuamente ao longo de um determinadotempo. A dose inteira também pode ser fornecida em um único local ouespalhada fracionadamente em vários locais. Adicionalmente, doses podempermanecer as mesmas ao longo do tratamento, ou podem variar.

Em várias concretizações, composições da invenção sãoadministradas em uma dose inicial e, em seguida, conservadas por meio deadministrações adicionais. Uma composição da invenção, em algumasconcretizações, é administrada por meio de um método inicialmente e, emseguida, administrada por meio do mesmo método ou por meio de um ou maismétodos diferentes. As dosagens de administrações em andamento podem serajustadas para se manter em valores determinados os níveis dos ingredientesativos no indivíduo. Em algumas concretizações, as composições sãoadministradas inicialmente e/ou de forma a manter seu nível no indivíduo pormeio de injeção intravenosa. Em uma variedade de concretizações, usa-seoutras formas de administração, dependendo da condição do paciente e deoutros fatores, discutido alhures aqui.

Regimes vantajosos para administração inicial e dosesadicionais para administrações seqüenciais podem ser iguais ou podem servariáveis. Regimes apropriados podem ser determinados pela pessoa versadana técnica a partir desta revelação, dos documentos aqui indicados, e doconhecimento na técnica. A dose, freqüência, e duração do tratamentodependerão de muitos fatores, incluindo a natureza da doença, o indivíduo, eoutras terapias que podem ser administradas.

Assim, é possível usar uma ampla variedade de regimes paraadministrar as composições. Em algumas concretizações, elas podem seradministradas a um indivíduo em uma dose. Em outras, elas podem seradministradas a um indivíduo em uma série de duas ou mais dosessucessivamente. Em algumas outras concretizações em que elas sãoadministradas em uma dose individual, em duas doses, e/ou mais de duasdoses, as doses podem ser iguais ou diferentes, e elas podem seradministradas com intervalos iguais ou diferentes entre as mesmas.

Composições da invenção podem ser administradas em muitasfreqüências numa ampla faixa de tempos, incluindo qualquer freqüênciavantajosa e faixa de tempos que proporcione uma relação entre dose eficaz etratamento. Doses podem ser fornecidas continuamente, administradas a cadapoucas horas, uma ou mais vezes por dia, todo dia, em dias alternados ouvárias vezes por semana, ou menos freqüentemente. Em algumasconcretizações, elas são administradas ao longo de períodos de um, duas, três,quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze, treze, quatorze, ou maisdias. Em algumas concretizações, elas são administradas ao longo de períodosde um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze, ou maismeses. Em uma variedade de concretizações, elas são administradas duranteum período de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, ou maisanos. Geralmente, durações de tratamento serão proporcionais à duração doprocesso de doença, efetividade das terapias sendo aplicadas, e condição eresposta do indivíduo que está sendo tratado.

Em várias concretizações da invenção, inibidores sãoadministrados de uma a quatro vezes por dia, em quantidades iguais, emintervalos iguais.

Formulações

Composições farmacêuticas de acordo com váriasconcretizações da invenção podem compreender um ou mais veículos e/oudiluentes e/ou adjuvantes não-tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis(referidos coletivamente aqui como materiais "veículo") e, se desejado, outrosingredientes ativos. Os compostos farmaceuticamente ativos desta invençãopodem ser processados de acordo com métodos convencionais da farmáciapara produzir agentes medicinais para administração a pacientes humanos e aoutros indivíduos.

Formulações para administração de biologias, como proteínas,incluindo anticorpos, são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, ver US6.171.586; WO 2005/044854; US 6.288,030; US 6.267.958; WO2004/055164; US 4.597.966; US 2003/0138417; US 6.252.055; US5.608,038; US 6.875.432; US 2004/0197324; WO 02/096457; US 5.945.098;US 5.237.054; US 6.485.932; US 6.821.515; US 5.792.838; US 5.654.403;US 5.908,826; EP 0 804 163; e WO 2005/063291, sendo que cada uma destasé incorporada aqui integralmente por referência, em particular em partespertinentes à formulação, estabilização, e fornecimento de drogas à base deproteína. Como descrito previamente e alhures, entre agentes tamponadorespreferidos para proteínas conhecidas na técnica compreende-se acetato,succinato, gluconato, glutamato, ácido glutâmico, histidina, citrato, ácidoaspártico, e outros tamponadores de ácido orgânico.

Para administração oral, a composição farmacêutica podeencontrar-se em forma de, por exemplo, um tablete, cápsula, suspensão, oulíquido. A composição farmacêutica é preparada, de preferência, em forma deuma unidade de dosagem contendo uma quantidade particular do ingredienteativo. Exemplos de referidas unidades de dosagem compreendem tabletes oucápsulas.

Para fins terapêuticos, os compostos ativos desta invenção sãocombinados ordinariamente com um ou mais adjuvantes apropriados para avia de administração indicada. Se administrados via os, os compostos podemser misturados com lactose, sacarose, pó de amido, ésteres de celulose deácidos alcanóicos, alquil ésteres de celulose, talco, ácido esteárico, estearatode magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e cálcio de ácidos fosfórico esulfurico, gelatina, goma acácia, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, e/ouálcool de polivinila, e, então, tabletizado ou encapsulado para administraçãovantajosa. Referidas cápsulas ou tabletes podem conter uma formulação deliberação controlada como se pode proporcionar em uma dispersão decomposto ativo em hidroxipropilmetil celulose.

Formulações para administração parenteral podem ser emforma de suspensões ou soluções para injeção estéreis isotônicas aquosas ounão-aquosas. Estas soluções e suspensões podem ser preparadas a partir depós ou grânulos estéreis empregando-se um ou mais dos veículos ou diluentesindicados para uso nas formulações para administração oral ou por meio douso de outros agentes de suspensão e agentes dispersantes ou umectantesvantajosos. Os compostos podem ser dissolvidos em água, polietileno glicol,propileno glicol, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo deamendoim, óleo de gergelim, álcool de benzila, cloreto de sódio, gomatragacanto, e/ou vários tamponadores. Outros adjuvantes e modos deadministração são bem e amplamente conhecidos na técnica farmacêutica. Oingrediente ativo também pode ser administrado por meio de injeção comouma composição com veículos vantajosos incluindo solução salina, dextrose,ou água, ou com ciclodextrina (i.e., Captisol), solubilização de co-solvente(i.e., propileno glicol), ou solubilização micelar (i.e., Tween 80).

A preparação injetável estéril também pode ser uma suspensãoou solução estéril em um solvente ou diluente parenteralmente aceitável não-tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículose solventes aceitáveis que podem ser empregados encontram-se a água,solução de Ringer, e solução isotônica de cloreto de sódio. Adicionalmente,emprega-se convencionalmente óleos fixos estéreis como um solvente oumeio de suspensão. Para tal fim é possível empregar qualquer óleo fixobrando, incluindo mono- e diglicerídeos sintéticos. Adicionalmente, épossível usar ácidos graxos, como ácido oléico, na preparação de injetáveis.

Para administração pulmonar, a composição farmacêutica podeser administrada em forma de um aerossol ou com um inalador incluindoaerossol em pó seco.

As composições farmacêuticas podem ser submetidas aoperações farmacêuticas convencionais, como esterilização e/ou podemconter adjuvantes convencionais, como conservantes, estabilizadores, agentesumectantes, emulsificantes, tamponantes etc. Adicionalmente, é possívelpreparar tabletes e pílulas com revestimentos entéricos. Referidascomposições também podem compreender adjuvantes, como agentesumectantes, adoçantes, aromatizantes, e perfumadores.

Composições farmacêuticas de acordo com o precedente eoutros aspectos da invenção podem conter materiais de formulação paramodificar, manter ou conservar, por exemplo, o pH, osmolalidade,viscosidade, transparência, cor, isotonicidade, odor, esterilidade, estabilidade,taxa de dissolução ou de liberação, adsorção ou penetração da composição.

Materiais de formulação vantajosos incluem, embora semlimitação, aminoácidos (como glicina, glutamina, asparagina, arginina oulisina); antimicrobianos; antioxidantes (como ácido ascórbico, sulfito de sódioou hidrogenossulfito de sódio); tamponadores (como borato, bicarbonato,Tris-HCl, citratos, fosfatos, outros ácidos orgânicos); agentes encorpantes(como manitol ou glicina), agentes quelantes [como ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA)]; agentes complexadores (como cafeína,polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina ou hidroxipropil-beta-ciclodextrina);cargas; monossacarídeos; dissacarídeos e outros carboidratos (como glucose,manose, ou dextrinas); proteínas (como albumina de soro, gelatina ouimunoglobulinas); corantes; agentes aromatizantes e diluentes; agentesemulsificantes; polímeros hidrofílicos (como polivinilpirrolidona);polipeptídeos com baixo peso molecular; contra-íons formadores de sal (comosódio); conservantes (como cloreto de benzalcônio, ácido benzóico, ácidosalicílico, timerosal, álcool de fenetila, metilparabeno, propilparabeno,cloroexidina, ácido sórbico ou peróxido de hidrogênio); solventes (comoglicerina, propileno glicol ou polietileno glicol); alcoóis de açúcar (comomanitol ou sorbitol); agentes de suspensão; tensoativos ou agentes umectantes(como pluronics, PEG, ésteres de sorbitol, polisorbatos, como polisorbato 20,polisorbato 80, triton, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentesincrementadores de estabilidade (sacarose ou sorbitol); agentesincrementadores de tonicidade (como halogenetos de metal alcalino (depreferência cloreto de sódio ou potássio, manitol sorbitol); veículos defornecimento; diluentes; excipientes e/ou adjuvantes farmacêuticos.(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edição, A.R. Gennaro, ed., MackPublishing Company, 1990).

A composição farmacêutica ótima será determinada poralguém versado na técnica, dependendo, por exemplo, da via deadministração desejada, formato de fornecimento, e dosagem desejada. Ver,por exemplo, Remington1S Pharmaceutical Sciences, supra. Referidascomposições podem influenciar o estado físico, a estabilidade, a taxa deliberação in vivo, e taxa de eliminação in vivo do agente de ligação específico.

O veículo ou suporte primário em uma composiçãofarmacêutica pode ser de natureza aquosa ou não aquosa. Por exemplo, umveículo ou suporte vantajoso pode ser água para injetáveis, solução salinafisiológica ou fluido cerebroespinhal artificial, possivelmente suplementadocom outros materiais comuns em composições para administração parenteral.Solução salina tamponada neutra ou solução salina misturada com albuminado soro são veículos exemplares adicionais. Outras composiçõesfarmacêuticas exemplares compreendem tamponador Tris de cerca de pH 7,0-8,5, ou tamponador de acetato de cerca de pH 4,0-5,5, que pode incluiradicionalmente sorbitol ou um substituto vantajoso para o mesmo. Em umaconcretização da presente invenção, composições de agente ligante podem serpreparadas para armazenamento por meio de mistura da composiçãoselecionada apresentando o grau desejado de pureza com agentes deformulação opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences, supra) na formade uma torta liofilizada ou de uma solução aquosa. Adicionalmente, o produtode agente ligante pode ser formulado como um liofilizado usando-seexcipientes apropriados, como sacarose.

As composições farmacêuticas podem ser selecionadas parafornecimento parenteral. Alternativamente, as composições podem serselecionadas para inalação ou para fornecimento enteral, como oral, aural,oftálmico, retal, ou vaginal. A preparação de referidas composiçõesfarmaceuticamente aceitáveis encontra-se dentro da prática da técnica.

Os componentes de formulação estão presentes emconcentrações apropriadas no sítio de administração. Por exemplo, usa-setamponadores para manter a composição em pH fisiológico ou em pHligeiramente menor, tipicamente dentro de uma faixa de pH de cerca de 5 acerca de 8.

Quando se considera administração parenteral, as composiçõesterapêuticas para uso nesta invenção podem ser em forma de uma soluçãoaquosa isenta de pirógeno, parenteralmente aceitável, compreendendo oagente de ligação específico desejado em um veículo farmaceuticamenteaceitável. Um veículo particularmente vantajoso para injeção parenteralcompreende água destilada estéril em que um agente de ligação é formuladocomo uma solução isotônica estéril adequadamente conservada.

Outra preparação adicional pode envolver a formulação damolécula desejada com um agente, como microesferas injetáveis, com umagente, como microesferas injetáveis, partículas bio-erodíveis, compostospoliméricos (ácido poliláctico, ácido poliglicólico), pérolas, ou liposomas, queproporciona a liberação controlada ou sustentada do produto que pode, então,ser fornecido via uma injeção de depósito. Também é possível usar ácidohialurônico, e isto pode ter o efeito de promover duração sustentada nacirculação. Outros meios vantajosos para a introdução da molécula desejadaincluem dispositivos implantáveis de fornecimento de drogas.

Em outro aspecto, formulações farmacêuticas vantajosas paraadministração parenteral podem ser formuladas em soluções aquosas, depreferência em tamponadores fisiologicamente compatíveis, como solução deHanks, solução de Ringer, ou solução salina tamponada fisiologicamente.Suspensões injetáveis aquosas podem conter substâncias que aumentam aviscosidade da suspensão, como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol, oudextrano. Adicionalmente, é possível preparar suspensões dos compostosativos como suspensões injetáveis oleosas apropriadas. Solventes ou veículoslipofílicos vantajosos incluem óleos graxos, como óleo de gergelim, ouésteres de ácido graxo sintéticos, como oleato de etila, triglicerídeos, ouliposomas. Também é possível usar amino-polímeros policatiônicos não-lipídicos para fornecimento. Opcionalmente, a suspensão também pode conterestabilizantes vantajosos ou agentes para incrementar a solubilidade doscompostos e permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

Uma composição farmacêutica de acordo com determinadasconcretizações da invenção pode ser vantajosa para inalação. Por exemplo, épossível formular um agente de ligação como um pó seco para inalação.Soluções para inalação de polipeptídeos ou moléculas de ácido nucleicotambém podem ser formuladas com um propelente para fornecimento emaerossol. Em outra concretização adicional, soluções podem ser nebulizadas.Administração pulmonar é descrita adicionalmente no Pedido PCT n°PCT/US94/001875, que descreve fornecimento pulmonar de proteínasquimicamente modificadas.

Considera-se também que determinadas formulações podemser administradas oralmente. Em uma concretização da presente invenção,moléculas de agente de ligação que são administradas desta maneira podemser formuladas com ou sem estes veículos que são usados habitualmente nacompostação de formas de dosagem sólidas, como tabletes e cápsulas. Porexemplo, uma cápsula pode ser projetada de forma a liberar a porção ativa daformulação no ponto do trato gastrintestinal em que a biodisponibilidade émaximizada e a degradação pré-sistêmica é minimizada. É possível incluiragentes adicionais para facilitar a absorção da molécula de agente ligante.Também é possível usar diluentes, aromatizantes, ceras com baixo ponto defusão, óleos vegetais, lubrificantes, agentes de suspensão, agentes dedesintegração de tabletes, e ligantes.Composições farmacêuticas para administração oral tambémpodem ser formuladas empregando-se veículos farmaceuticamente aceitáveisbem conhecidos na técnica, em dosagens vantajosas para administração oral.Referidos veículos permitem que as composições farmacêuticas sejamformuladas como tabletes, pílulas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes,caldas, suspensões, e análogos, para ingestão por parte do paciente.

Preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas pormeio da combinação de compostos ativos com excipiente sólido, e deprocessamento da mistura resultante de grânulos (opcionalmente, apósmoagem) para se obter núcleos de drágeas ou tabletes. Se desejado, é possíveladicionar auxiliares vantajosos. Excipientes vantajosos incluem cargas deproteínas ou carboidratos, como açúcares, incluindo lactose, sacarose,manitol, e sorbitol; amido de milho, trigo, arroz, batata, ou outras plantas;celulose, como metil celulose, hidroxipropilmetil-celulose, oucarboximetilcelulose de sódio; gomas, incluindo arábica e tragacanto; eproteínas, como gelatina e colágeno. Se desejado, é possível adicionar agentesdesintegradores ou solubilizadores, como a polivinil pirrolidona reticulada,agar, e ácido algínico ou um sal do mesmo, como alginato de sódio.

E possível usar núcleos de drágeas em conjunto comrevestimentos vantajosos, como soluções concentradas de açúcar, que tambémpodem conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel carbopol,polietileno glicol, e/ou dióxido de titânio, soluções de laca, e solventesorgânicos ou misturas de solventes vantajosos. É possível adicionar corantesou pigmentos aos tabletes ou revestimentos de drágeas para a identificação doproduto, ou para caracterizar a quantidade de composto ativo, i.e., dosagem.

Preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmentetambém incluem cápsulas de encaixe push-fit confeccionadas em gelatina, etambém cápsulas moles, fechadas hermeticamente, confeccionadas emgelatina e um revestimento, como glicerol ou sorbitol. Cápsulas de encaixepush-fit podem conter ingredientes ativos misturados com cargas ou ligantes,como lactose ou amidos, lubrificantes, como talco ou estearato de magnésio,e, opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas moles, os compostos ativospodem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos vantajosos, como óleosgraxos, polietileno glicol sólido ou líquido, com ou sem estabilizadores.

Outra composição farmacêutica pode envolver uma quantidadeeficaz de agente ligante em uma mistura com excipientes não-tóxicos que sãovantajosos para a fabricação de tabletes. Dissolvendo os tabletes em águaestéril, ou outro veículo apropriado, é possível preparar soluções em forma dedosagem unitária. Excipientes vantajosos incluem, embora sem limitação,diluentes inertes, como carbonato de cálcio, carbonato ou bicarbonato desódio, lactose, ou fosfato de cálcio; ou agentes ligantes, como amido, gelatina,ou acácia; ou agentes lubrificantes, como estearato de magnésio, ácidoesteárico, ou talco.

Composições farmacêuticas adicionais serão evidentes paraaqueles com prática na técnica, incluindo formulações envolvendo moléculasde agente ligante em formulações de fornecimento sustentado ou controlado.Técnicas para formular uma variedade de outros meios de fornecimentosustentado ou controlado, como veículos de liposomas, micropartículas bio-erodíveis ou pérolas porosas e injeções de depósito, também são conhecidaspor aqueles com prática na técnica. Ver, por exemplo, PCT/US93/00829 quedescreve a liberação controlada de micropartículas poliméricas para ofornecimento de composições farmacêuticas. Exemplos adicionais depreparações de liberação sustentada incluem matrizes poliméricas semi-permeáveis em forma de artigos modelados, p. ex. películas, oumicrocápsulas. Matrizes de liberação sustentada podem incluir poliésteres,hidrogéis, polilactídeos (U.S. 3.773.919, EP 58.481), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama etil-L-glutamato [Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556(1983)], poli(2-hidroxietil-metacrilato) [Langer et al., J. Biomed. Mater. Res.,15:167-277, (1981)] e [Langer et al, Chem. Tech., 12:98- 105(1982)], acetatode vinil etileno (Langer et al, supra) ou ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (EP133.988). Composições de liberação sustentada também incluem liposomas,que podem ser preparados por meio de vários métodos conhecidos na técnica.Ver p. ex., Eppstein et al, Proc. Natl. Acad. Sei. (USA), 82:3688-3692(1985); EP 36.676; EP 88.046; EP 143.949.

Tipicamente, a composição farmacêutica a ser usada paraadministração in vivo precisa ser estéril. Isto pode ser realizado por meio defiltração através de membranas de filtração estéreis. Quando a composição éliofilizada, é possível realizar esterilização usando este método, seja antes ouapós a liofilização e reconstituição. A composição para administraçãoparenteral pode ser armazenada em forma liofilizada ou em solução.Adicionalmente, de uma maneira geral composições parenterais são colocadasem um recipiente que possui uma abertura de acesso estéril, por exemplo,uma bolsa de solução intravenosa, ou um frasco possuindo uma tampa quepode ser perfurada com uma agulha de injeção hipodérmica.

O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" compreende saiscomumente usados para formar sais de metal alcalino e para formar sais deadição de ácidos livres ou bases livres. A natureza do sal não é crítica, desdeque seja farmaceuticamente aceitável. Sais de adição de ácidofarmaceuticamente aceitáveis de compostos podem ser preparadas a partir deum ácido inorgânico ou de um ácido orgânico. Exemplos de referidos ácidosinorgânicos são ácidos clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, carboxílico,sulfurico e fosfórico. Ácidos orgânicos apropriados podem ser selecionadosdentre alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, arilalifáticos, heterocíclicos,carboxílicos e classes sulfônicas de ácidos orgânicos, sendo que exemploscompreendem o ácido fórmico, acético, adípico, butírico, propiônico,succínico, glicólico, glucônico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico,glucurônico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutâmico, benzóico,\

antranílico, mesílico, 4-hidroxibenzóico, fenilacético, mandélico, embônico(pamóico), metanossulfônico, etanossulfônico, etanodisulfônico,benzenossulfônico, pantotênico, 2-hidroxietanossulfônico, toluenossulfônico,sulfanílico, cicloexilaminossulfônico, cafórico, canforsulfônico, diglucônico,ciclopentanopropiônico, dodecilsulfônico, glucoeptanóico, glicerofosfônico,heptanóico, hexanóico, 2-hidróxi-etanossulfônico, nicotínico, 2-naflalenossulfônico, oxálico, palmóico, pectínico, persulfurico, 2-fenilpropiônico, pícrico, piválico propiônico, succínico, tartárico, tiociânico,mesílico, undecanóico, esteárico, algênico, β-hidroxibutírico, salicílico,galactárico e galacturônico. Sais de adição de base farmaceuticamenteaceitáveis vantajosos de compostos incluem sais metálicos, como saispreparados de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio e zinco, ousais preparados de bases orgânicas incluindo aminas primárias, secundárias eterciárias, aminas substituídas incluindo aminas cíclicas, como cafeína,arginina, dietilamina, N-etil piperidina, aistidina, glucamina, isopropilamina,lisina, morfolina, N-etil morfolina, piperazina, piperidina, trietilamina,trimetilamina. Sendo que todos estes sais podem ser preparados com meiosconvencionais do composto correspondente da invenção por meio de reação,por exemplo, do ácido ou base apropriada com o composto.

Uma vez que a composição farmacêutica foi formulada, elapode ser armazenada em frascos estéreis como uma solução, suspensão, gel,emulsão, sólido, ou um pó desidratado ou liofilizado. Referidas formulaçõespodem ser armazenadas em uma constitui de pronto-emprego, ou em umaforma (p. ex., liofilizada) que requer reconstituição antes da administração.

Kits

A invenção também proporciona kits compreendendo um oumais inibidores de Ang2 e um ou mais inibidores de VEGF de acordo com oprecedente. Os inibidores podem ser alojados nos kits em um ou maisrecipientes. Cada recipiente do tipo referido pode conter, separadamente ouem mistura, um ou mais inibidores de Ang2 e um ou mais inibidores deVEGF de acordo com qualquer um dos precedentes. Tipicamente, referidoskits são projetados para uso médico, e os inibidores são compreendidos emformulações farmaceuticamente aceitáveis. Entre kits mui altamentepreferidos neste aspecto encontram-se aqueles compreendendo 2xCon4(C) eAMG 706. Também entre concretizações altamente preferidas neste aspectoencontram-se kits, sendo que os inibidores encontram-se dispostos emrecipientes separados.

Kits preferidos adicionalmente são aqueles que compreendemintegralmente nos mesmos, ou como um ou mais documentos separados,informação referente ao conteúdo ou ao kit e ao uso dos inibidores. Tambémentre kits preferidos adicionais são aqueles em que as composições sãoformuladas para reconstituição em um diluente. Neste aspecto, kitscompreendendo adicionalmente um ou mais recipientes de diluente estéril sãoparticularmente preferidos. Outras concretizações preferidas adicionais, nesteaspecto, incluem kits em que pelo menos um dos inibidores encontra-sedisposto em frascos que se encontram sob vácuo parcial e fechadoshermeticamente com um septo, e vantajosos para reconstituição de modo aformar uma formulação eficaz para administração parenteral.

Concretizações preferidas da presente invenção tambémincluem kits que proporcionam empacotamento de doses simples de um oumais dos inibidores. Kits preferidos também incluem aqueles queproporcionam seringas previamente enchidas de câmara única e de câmarasmúltiplas (p. ex., seringas líquidas e lio-seringas) para administrar um ou maisdos inibidores. Prefere-se particularmente, neste aspecto, kits em que asseringas são previamente carregadas.

A presente invenção é descrita adicionalmente por meio dosexemplos ilustrativos, não limitantes, a seguir. Variações e alterações que sãoóbvias para alguém com prática na técnica devem se consideradas comocompreendidas pelo escopo e natureza da invenção e que são definidas nasreivindicações anexas.

Exemplos

EXEMPLO 1: Tek472/Fc e Avastina™

Xenoenxertos de células Colo205 injetados em camundongosCDl Nu/Nu fêmeas foram tratados com: (1) Avastina™ (grupo 1); (2) ambos,Avastina™ e Tek472/Fc (grupo 2); (3) HuIgGl e controle de Fc (grupo 3), e(4) Tek472/Fc (grupo 4), como descrito mais detalhadamente abaixo.

Induziu-se tumores injetando células Colo205 em quarentacamundongos CDl Nu/Nu fêmeas, com de 6 a 8 semanas de vida, pesandoentre 20 e 22 gramas. Todos os camundongos foram obtidos do Charles RiverLaboratories (Raleigh, NC, APR# 245658). Células Colo205 para injeçãoforam cultivados em suspensão a 37°C em meio McCoy5A (Gibco/BRL,Grand Island, NY) suplementado com 10 % de FBS (Hyclone, Logan, Utah).Para injeção, células foram colhidas da cultura e misturadas com Matrigel™(BD Bioscience, Bedford, MA, Cat#3 54234) a uma concentração de 1 χ 10células/ml. 0,2 ml da mistura de células-Matrigel™ contendo 2 χ IO6 célulasColo205 foi injetado subcutaneamente no flanco direito de cada camundongo.Camundongos foram então atribuídos randomicamente aos grupos de controlee de tratamento (resumidos na Tabela IA), marcados, e pesados.

Duas vezes por semana, durante o estudo, mediu-se ocomprimento, a altura, e a largura de cada tumor, e os camundongos forampesados. Calculou-se os volumes de tumor a partir das medições dimensionais(comprimento vezes largura, vezes altura) que foram expressosuniformemente em mm3.

Antes do uso, as preparações de Tek472/Fc, Fe, HuIgGl, eAvastina™ foram diluídas em PBS a uma concentração de 1 mg/ml (0,1 %).Administrou-se doses de 100 μΐ ip ou sc. Quantidades de tratamento e vias deadministração são indicadas na Tabela IA para todos os grupos.Tabela IA

<table>table see original document page 71</column></row><table>

Todos os tratamentos foram iniciados 21 dias após as célulasterem sido injetadas nos camundongos, quando os volumes de tumor foram deaproximadamente 450 mm.

Usou-se um procedimento duplamente cego em todo o estudo,sendo que as pessoas que mediram os volumes de tumor e que administraramas drogas não conheciam o tratamento.

Todos os resultados são expressos como média ± erro padrãoda média (EPM). Dados foram analisados estatisticamente com ANOVAfatorial para medições repetidas, empregando o programa StatView v5.0.1(SAS Institute, Cary, NC). Usou-se o teste de Scheffe post hoc paradeterminar valores ρ para medições repetidas. Grupos de comparação comvalores ρ de 0,05 ou menos foram considerados como sendosignificativamente diferentes.

Resultados são apresentados graficamente nas Figuras 1, quemostra os volumes de tumor (média ± SEM) para cada um dos quatro gruposao longo do curso do estudo. Tratamento com Avastina™ apenas (grupo 1) ouTek472/Fc apenas (Group 4) inibiu significativamente o crescimento detumor quando comparado com tratamento com o controle propriamente dito(grupo 3): p<0,0001 para Avastina™ e p=0,0175 para Tek472/Fc. Tratamentocom ambos, Tek472/Fc e Avastina™ (grupo 2), foi significativamente maiseficaz do que tratamento com o controle (grupo 3): p<0,0001. Ele também foisignificativamente mais eficaz, p<0,0001, do que tratamento com Tek472/Fcapenas (grupo 1). No entanto, tratamento com Avastina™ sozinha foi tãoeficaz quanto tratamento com ambos, Tek472/Fc e Avastina™.

Os pesos médios dos animais para cada grupo não diferem deuma maneira estatisticamente significativa ao longo do curso do estudo.

Em suma, conforme medido pelo volume do tumor, cadaagente sozinho e a combinação inibiram significativamente o crescimento detumor, em comparação com o controle. O grupo de combinação foiestatisticamente superior ao tratamento com Tek472/Fc apenas (p<0,0001)mas não com Avastina™ apenas.

EXEMPLO 2: Anti-Ang2 (Ab 536) e Anti-VEGF

Xenoenxertos de células A431 injetados em camundongosCDl Nu/Nu fêmeas foram tratados com: (1) IgGl humana de controle (k); (2)anticorpo anti-Ang2 (Ab 536); (3) anticorpo anti-VEGF; e (4) ambos,anticorpo anti-VEGF e anticorpo anti-Ang2 (Ab 536), como apresentado commaior detalhe nas Tabelas 2A e 2B e na discussão abaixo.

Tabela 2A

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Tabela 2B

<table>table see original document page 72</column></row><table>

As células A431 foram cultivadas em frascos T-225. Após 40passagens, células para o estudo foram desenvolvidas até apresentarem de 80a 85 % de confluência e, depois, colhidas usando tripsina/EDTA. Célulascolhidas foram suspensas em meio RPMI 1740 a uma concentração de 5 χ IO7células/ml. Mais de 95 % das células na preparação usada para este estudo semostraram viáveis, conforme determinado por meio de exclusão com azul detripano.

Tumores foram induzidos injetando-se

1 x 10 células A431

suspensas em 0,2 ml de meio isento de soro, subcutaneamente, no flancodireito de 40 camundongos CDl Nu/Nu fêmeas, com de 6 a 8 semanas devida, pesando entre 20 e 22 gramas.

Antes do uso, os anticorpos anti-Ang2, HuIgG 1, e anti-VEGFforam diluídos em PBS. Todos os tratamentos foram iniciados três dias apósas células terem sido injetadas, antes que os tumores fossem palpáveis.

Para iniciar o tratamento, os camundongos em cada grupoforam injetados com uma dose inicial que foi três vezes maior do que as dosessubseqüentes no estudo. Os grupos, as doses iniciais, e as doses decontinuação são indicadas detalhadamente nas Tabelas 2A e 2B.

Tumores foram medidos e camundongos foram pesados aolongo do estudo como descrito no Exemplo 1.

Resultados são expressos e os dados foram analisados comodescrito no Exemplo 1.

Dados do estudo são apresentados nas Figuras 2.

O gráfico na Figura 2 apresenta o volume médio do tumor paracada um de grupo 1 (controle), grupo 2 (anticorpo anti-Ang2, Ab 536), grupo3 (anticorpo anti-VEGF), e grupo 4 (ambos anticorpos), ao longo do curso doestudo. As barras verticais representam o ± SEM. Os valores ρ referem-se acomparações com o controle (IgGl) (grupo 1) com base nos volumes detumor como uma função do tempo usando ANOVA de medição repetida comteste de Scheffe post hoc.

Pesos dos animais foram medidos ao longo do curso do estudo.Todos os grupos conservaram seus pesos, e, de acordo com esta medição, nãohouve evidência de que qualquer um dos tratamentos fosse significativamenteprejudicial para a condição geral do animal.

Como mostrado na Figura 2, tratamento com o anticorpo anti-Ang2 (Ab 536) apenas (grupo 2) e o anticorpo anti-VEGF apenas (grupo 3)inibiu o crescimento dos xenoenxertos significativamente mais do que otratamento com controle (grupo 1): p=0,0012 e p=0,0004, respectivamente.Tratamento com ambos os anticorpos em conjunto também efetuou umainibição estatisticamente significativa do crescimento do tumor, relativamenteao controle, p<0,0001. No entanto, tratamento com ambos os anticorpos nãofoi significativamente mais eficaz do que tratamento com qualquer umsozinho.

EXEMPLO 3: Xenoenxertos 2xCon4(C) e AMG 706-HT29

Xenoenxertos de células HT29 injetadas em camundongos nusatímicos fêmeas foram tratados com 2xCon4(C) apenas, AMG 706 apenas, ouuma combinação dos dois, como descrito abaixo.

Tumores foram induzidos injetando-se células HT29subcutaneamente em 90 camundongos nus atímicos, com de 6 a 8 semanas devida, pesando entre 21 e 23 gramas. Todos os camundongos foram obtidos deHarlan Sprague Dawley. Células HT29 para injeção foram cultivadas emsuspensão a 37°C em meio McCoy5Al (Gibco/BRL, Grand Island, NY)suplementado com 10 % de FBS (Hyclone, Logan, Utah). Após 26 passagens,células para o estudo foram desenvolvidas até que fossem semi-confluentes(aproximadamente 40 %) e então colhidas usando tripsina/EDTA. Célulasforam misturadas com Matrigel™ (BD Bioscience, Bedford, MA, N0 decatálogo 354234) em uma relação de 2:1 a uma concentração de 1 χ 10células/ml. Mais de 95 % das células foram viáveis de acordo com exclusãocom azul de tripano. 0,2 ml da mistura de células-Matrigel™ contendo 2 χ IO6células HT29 foi injetado no flanco direito de cada mouse, subcutaneamente.

Vinte e um dias após a injeção, 40 dos 90 camundongos foramselecionados para o estudo por meio de computador, usando-se programas derandomização e seleção por computador, e iniciou-se o tratamento.

Duas vezes por semana, ao longo do estudo, mediu-se ocomprimento, a altura, e a largura de cada tumor, e os camundongos forampesados. Volumes de tumor foram calculados a partir de mediçõesdimensionais de comprimento χ largura χ altura e expressos uniformementeem mm3.

Antes do uso, cada um de 2xCon4(C) e controle de Fc foramdiluídos à concentração de trabalho (dose/0,1 ml) em PBS. AMG 706 foidiluído à concentração de trabalho com Ora-Plus® ajustado com ácidometanossulfônico a pH 2,0 (dose/0,2 ml). Todos os compostos foramarmazenados a 4°C.

O regime de tratamento para cada grupo de camundongos éindicado na Tabela 3 A. Tratamento começou no dia 21 após o implante dotumor. Grupos foram tratados com: (1) veículo e controle de Fc (grupo 1), (2)AMG 706 e Fc (grupo 3), (3) 2xCon4(C) mais veículo (grupo 2), e (4) AMG706 e 2xCon4(C) (grupo 4). 2xCon4(C) foi dado a 14 μg/dose,subcutaneamente, duas vezes por semana (grupo 2). AMG 706 foi dadooralmente a uma dose de 75 mg/kg de QD (grupo 3). Usou-se as mesmasdoses e o mesmo programa de dosagem do tratamento de combinação com2xCon4(C) e AMG 706 (grupo 4). Veículo serviu como o controle para AMG706. Fc serviu como o controle para 2xCon4(C). Grupo 1 foi tratada apenascom os dois controles.

Tabela 3A

<table>table see original document page 75</column></row><table>

Dados são apresentados na Figura 3.

O gráfico na Figura 3 apresenta o volume de tumor para cadaum do grupo 1 (controle), grupo 2 (2xCon4(C)), grupo 3 (AMG 706), e grupo4 (2xCon4(C) e AMG 706) ao longo do curso do estudo. As barras verticaisrepresentam ± SEM. Como indicado por uma seta vertical grossa, otratamento começou no dia 21 após o implante e terminou no dia 41.

Os pesos dos animais foram medidos ao longo do curso doestudo. Os pesos corporais permaneceram relativamente estáveis para todosos grupos. De acordo com esta medida, nenhum dos tratamentos foisubstancialmente deletério ou tóxico.

Conforme medido pelo volume de tumor e ilustrado na Figura3, todos os três grupos de tratamento, comparados com o controle,apresentaram um efeito inibidor estatisticamente significativo sobre ocrescimento do tumor: p<0,0001 (grupos 3 e 4), e p=0,0078 (grupo 2).Adicionalmente, conforme medido por meio do volume do tumor e ilustradona Figura 3, tratamento de combinação (grupo 4) foi significativamente maiseficaz do que tratamento com um dentre 2xCon4(C) sozinho (grupo 2),p=0,03 85, ou AMG 706 sozinho (grupo 3), p<0,0001.

EXEMPLO 4: 2xCon4fO e 4TBPPAPC

Como descrito abaixo, xenoenxertos de células Colo205injetados em camundongos CDl Nu/Nu fêmeas foram tratados com: (1)controle de veículo, (2) 4TBPPAPC (dose baixa), (3) 2xCon4(C) (dosebaixa), (4) 4TBPPAPC (dose alta), (5) 2xCon4(C) (dose alta), (6) 4TBPPAPCe 2xCon4(C) (ambos doses baixas), (7) 4TBPPAPC (dose baixa) e 2xCon4(C)(dose alta), (8) 4TBPPAPC (dose alta) e 2xCon4(C) (dose baixa), e (9)4TBPPAPC e 2xCon4(C) (ambos com altas doses).

Tumores foram induzidos injetando-se células Colo205subcutaneamente em 120 camundongos CDl Nu/Nu fêmeas, com de 8 a 10semanas de vida, pesando entre 22 e 25 gramas. Todos os camundongosforam obtidos de Charles River Laboratories (Raleigh, NC). Células Colo205(passagem #Xp9) para injeção foram cultivadas em frascos de cultura T-225até apresentarem 70 % de confluência. Células foram colhidas para injeçãousando tripsina/EDTA. As células foram >95 % viáveis segundo exclusãocom azul de tripano. As células foram ressuspensas em meio isento de sorocontendo 1/3 volume de Matrigel™ a 1 χ IO7 células/ml. 0,2 ml da mistura decélulas-Matrigel™ contendo 2 χ IO6 células Colo205 foi injetadosubcutaneamente no flanco direito de cada camundongo.

Vinte e um dias após a injeção, quando os volumes de tumorforam de aproximadamente 500 mm , 90 dos 120 camundongos foramselecionados para o estudo por meio de randomização e seleçãocomputadorizada, e tratamento foi iniciado no mesmo dia nestes camundongos.Houve 10 camundongos em cada grupo. Duas vezes por semana ao longo doestudo mediu-se o comprimento, altura, e largura de cada tumor, e oscamundongos foram pesados começando no dia 12 após o implante. Volumes detumor foram calculados a partir das medições dimensionais, como comprimentox largura x altura, e expressos uniformemente em mm .

Antes do uso, 2xCon4(C) foi diluído a uma concentração detrabalho (dose/0,1 ml) em PBS. 4TBPPAPC foi diluído a uma concentraçãode trabalho (dose/0,2 ml) em Ora-Plus® ajustado com ácido metanossulfônicoem pH 2,0. Tratamento iniciou no dia 21 após o implante do tumor. Regimesde dosagens encontram-se detalhados nas Tabelas 4A e 4B.

Tabela 4A

<table>table see original document page 77</column></row><table>

Tabela 4B

<table>table see original document page 77</column></row><table>Resultados são expressos e os dados foram analisados comodescrito no Exemplo 1.

Dados são apresentados nas Figuras 4A até 4D. Em todas asfiguras, os dados de pontos são os valores médios de grupo e as barrasverticais representam ± SEM.

O gráfico na Figura 4A mostra os volumes médios de tumorpara os camundongos tratados com o controle de veículo (grupo 1),4TBPPAPC (dose baixa) (grupo 2), 2xCon4(C) (dose baixa) (grupo 3), eambos, 4TBPPAPC (dose baixa) e 2xCon4(C) (dose baixa) (grupo 6).

O gráfico na Figura 4B mostra os volumes médios de tumorpara os camundongos tratados com o controle de veículo (grupo 1),4TBPPAPC (dose baixa) (grupo 2), 2xCon4(C) (dose alta) (grupo 5), eambos, 4TBPPAPC (dose baixa) e 2xCon4(C) (dose alta) (grupo 7).

O gráfico na Figura 4C mostra os volumes médios de tumorpara os camundongos tratados com o controle de veículo (grupo 1),2xCon4(C) (dose baixa) (grupo 3), 4TBPPAPC (dose alta) (grupo 4), eambos, 4TBPPAPC (dose alta) e 2xCon4(C) (dose baixa) (grupo 8).

O gráfico na Figura 4D mostra os volumes médios de tumorpara os camundongos tratados com o controle de veículo (grupo 1),4TBPPAPC (dose alta) (grupo 4), 2xCon4(C) (dose alta) (grupo 5), e ambos,4TBPPAPC (dose alta) e 2xCon4(C) (dose alta) (grupo 9).

Todos os grupos tratados com uma único agente ou com umacombinação de agentes experimentou uma redução significativa docrescimento de tumor em comparação com o controle de veículo (p<0,0001para todos os grupos de tratamento, em comparação com o grupo de controlede veículo).

A combinação de ambos os agentes em subdoses ótimas foisignificativamente mais eficaz do que subdoses ótimas de qualquer agentesozinho: p=0,01 para a combinação, em comparação com 4TBPPAPC, eρ=0,0026 para a combinação, em comparação com 2xCon4(C).

O grupo tratado com uma dose ótima de 2xCon4(C)combinada com uma dose sub-ótima de 4TBPPAPC experimentou reduçãosignificativamente maior do volume do tumor do que o grupo tratado com4TBPPAPC sozinho (p<0,0001). No entanto, este tratamento de combinaçãonão foi significativamente mais eficaz do que tratamento com a dose ótima de2xCon4(C) sozinho.

Tratamento com uma dose sub-ótima de 2xCon4(C)combinada com uma dose ótima de 4TBPPAPC foi significativamente maiseficaz do que tratamento com uma dose sub-ótima de 2xCon4(C) (p<0,0001).No entanto, esta combinação não foi significativamente diferente detratamento com a dose ótima de 4TB PP APC.

Tratamento com uma dose ótima de 2xCon4(C) combinadocom uma dose ótima de 4TBPPAPC foi significativamente mais eficaz do quetratamento com uma dose ótima de 2xCon4(C) (p=0,0216). No entanto, otratamento de combinação não foi significativamente mais eficaz do quetratamento com uma dose ótima de 4TBPPAPC (p=0,0527). Este valor ρsitua-se imediatamente acima do limiar de significância de 0,05.

EXEMPLO 5: Xenoenxertos de 2xCon4CC) e AMG 706-Colo205

Xenoenxertos de células Colo205 injetadas em camundongosnus atímicos fêmeas foram tratados com 2xCon4(C) sozinho, AMG 706sozinho, ou uma combinação dos dois como descrito abaixo. Tumores foraminduzidos por meio de injeção de células Colo205 subcutaneamente emcamundongos nus atímicos fêmeas (CDl Nu/Nu), com de 8 a 10 semanas devida. Todos os camundongos foram obtidos de Charles River Laboratories(Raleigh, NC). Células Colo205 para injeção foram cultivadas em frascos decultura T-225. Células foram colhidas de culturas sub-confluentes usando-setripsina/EDTA. As células superaram 95 % de viabilidade de acordo comexclusão com azul de tripano. As células foram suspensas em 33 % deMatrigel™ em RPMI (isento de FBS & PSG) a 10 χ IO6 células/ml. 2 χ IO6células em 0,2 ml foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de cadacamundongo.

No dia 17 após a injeção os tumores mediram em média 200mm , e os camundongos foram divididos randomicamente em quatro gruposde 10 camundongos cada. Grupo 1 recebeu AMG 706 a uma dose de 24,4mg/kg e controle de fragmento Fc a uma dose de 2,8 μg. Grupo 2 recebeu2xCon4(C) a uma dose de 2,8 μg e o pH 2 veículo água. Grupo 3 recebeuAMG 706 a uma dose de 24,4 mg/kg e 2xCon4(C) a 2,8 μg. Grupo 4 recebeupH 2 veículo água mais controle de fragmento Fc a 2,8 μg e serviu como umcontrole negativo. Grupos de 2xCon4(C) e de controle de fragmento Fcreceberam administrações subcutâneas duas vezes por semana. Grupos deAMG 706 e pH 2 veículo água receberam administrações orais duas vezes pordia, exceto nos dias 25 e 26.

O experimento foi realizado "às cegas" de acordo com asdiretrizes de estudo cego de farmacologia para câncer [Câncer PharmacologyBlinded Study Guidelines]. Tumores foram medidas e pesos corporais foramdeterminados duas vezes a cada semana. Tumores foram medidas com umpaquímetro digital eletrônico. Volumes de tumor foram calculados comomedições de comprimento χ largura χ altura e expressos em mm3.

Os dados foram analisados com ANOVA de medidas repetidaspara determinação dos volumes de tumor ao longo do tempo usandoSTATVIEW v. 5.0.1. Usou-se o teste de Scheffe post-hoc para determinarvalores ρ para medidas repetidas do dia 17 ao dia 37 em todos os quatrogrupos, e também do dia 17 ao dia 48 para grupos 1, 2, e 3.

Tratamento com 2xCon4(C) em combinação com AMG 706(grupo 3) inibiu significativamente o crescimento de tumor em comparaçãocom AMG 706 (grupo 1) ou 2xCon4(C) (grupo 2) (p<0,05 no dia 37).Adicionalmente, 2xCon4(C) em combinação com AMG 706 e o grupo deagente sozinho, 2xCon4(C), inibiu significativamente o crescimento de tumorem comparação com o grupo de controle no dia 37 (p<0,05). Administraçãode AMG 706 e 2xCon4(C) em conjunto (grupo 3) incrementousignificativamente a inibição de tumor em comparação com agente sozinho(p<0,0005 no dia 48). O decurso do tempo do tamanho do tumor para todosos quatro grupos é mostrado na Figura 5.

Não se observou efeito sobre o peso corporal de qualquer umdos grupos.

EXEMPLO 6: 2xCon4(O (2,8 MK) e Avastina™ (30 ug)

Xenoenxertos de células Colo205 injetadas em camundongosnus atímicos fêmeas foram tratados com 2xCon4(C) sozinho, Avastina™, ouuma combinação dos dois como descrito abaixo.

Tumores foram induzidos injetando-se células Colo205subcutaneamente em camundongos nus atímicos fêmeas (CDl Nu/Nu), comde 8 a 10 semanas de vida. Todos os camundongos foram obtidos de CharlesRiver Laboratories (Raleigh, NC). Células Colo205 para injeção foramcultivadas em frascos de cultura T-225. Células foram colhidas de culturassub-confluentes usando tripsina/EDTA. As células apresentaram mais de 95% de viabilidade segundo exclusão com azul de tripano. As células foramressuspensas em 33 % de Matrigel™ em RPMI (livre de FBS & PSG) a 10 χ106/ml. 2 χ IO6 células em 0,2 ml foram injetadas subcutaneamente no flancodireito de cada camundongo.

No dia 16 após a injeção os tumores mediram em média 300mm3, e os camundongos foram divididos randomicamente em quatro gruposde 10 camundongos cada. Grupo 1 recebeu IgGl a uma dose de 30 μg econtrole de fragmento Fc a uma dose de 2,8 μg e serviu como um controlenegativo. Grupo 2 recebeu Avastina™ a uma dose de 30 μg e controle defragmento Fc a 2,8 μg. Grupo 3 recebeu 2xCon4(C) a uma dose de 2,8 μg eIgGl humana a uma dose de 30 μg. Grupo 4 recebeu 2xCon4(C) a uma dosede 2,8 μg e. Avastina™ a 30 μ§. Todos os camundongos receberam2xCon4(C) e o controle de fragmento Fc subcutaneamente duas vezes porsemana. Todos os camundongos que receberam Avastina™ e a IgGl humanareceberam administrações IP duas vezes por semana.

O experimento foi realizada "às cegas" de acordo com asdiretrizes de Câncer Pharmacology Blinded Study Guidelines. Tumores forammedidos e os pesos corporais foram determinados duas vezes por semana.Tumores foram medidos com um paquímetro digital eletrônico. Volumes detumor foram calculados como as medições de comprimento χ largura χ alturae expressos em mm3.

Os dados foram analisados com ANOVA de medidas repetidaspara volumes de tumor ao longo do tempo usando STATVIEW v. 5.0.1.Usou-se teste de Scheffe post-hoc para determina valores ρ para medidasrepetidas do dia 16 ao dia 51 para todos os grupos. Tratamento comAvastina™ sozinho (grupo 2) apresentou significativa inibição de tumor emcomparação com o controle (grupo 1) (p<0,001). Tratamento com 2xCon4(c)sozinho resultou numa inibição de 24 % do crescimento de tumor que não foiestatisticamente significativo em comparação com o controle. Tratamentocom 2xCon4(C) e Avastina™ em conjunto resultou em significativa inibiçãode tumor em comparação com o controle (p<0,0001) e em comparação comtratamento com 2xCon4(C) sozinho (p<0,0001). Tratamento com 2xCon4(C)e Avastina™ em conjunto apresentou inibição ligeiramente maior decrescimento de tumor do que a obtida com Avastina™ sozinho, mas adiferença não foi estatisticamente significativa. O curso do tempo do tamanhodo tumor para todos os grupos é mostrado na Figura 6.

Não se observou efeito sobre o peso corporal dos grupos.EXEMPLO 7: 2xCon4fC) (2,8 qg) e Avastina™ (10 ug)

Tumores foram induzidos induzindo-se células Colo205subcutaneamente em camundongos nus atímicos fêmeas (CDl Nu/Nu), comde 8 a 10 semanas de vida. Todos os camundongos foram obtidos de CharlesRiver Laboratories (Raleigh, NC). Células foram colhidas de culturas sub-confluentes usando-se tripsina/EDTA. As células apresentaram mais de 95 %de viabilidade segundo exclusão com azul de tripano. 2 χ IO6 células em 0,2ml foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de cada camundongo.

No dia 14 após a injeção os tumores mediram em média 250mm3 , e os camundongos foram divididos randomicamente em quatro gruposde 10 camundongos cada. Grupo 1 recebeu IgGl a uma dose de 10 μg econtrole de fragmento Fc a uma dose de 2,8 μg e serviu como um controlenegativo. Grupo 2 recebeu Avastina™ a uma dose de 10 μg e controle defragmento Fc a 2,8 μg. Grupo 3 recebeu 2xCon4(C) a uma dose de 2,8 μg eIgGl humana a uma dose de 10 μg. Grupo 4 recebeu 2xCon4(C) a uma dosede 2,8 μg e Avastina™ a 10 μg. Todos os camundongos que receberam2xCon4(C) e o controle de fragmento Fc receberam administraçõessubcutâneas duas vezes por semana. Todos os camundongos que receberamAvastina™ e a IgGl humana receberam administrações IP duas vezes porsemana.

O experimento foi realizado "às cegas" de acordo com asdiretrizes de Câncer Pharmacology Blinded Study Guidelines. Tumores forammedidas e pesos corporais foram determinados duas vezes a cada semana.Tumores foram medidos com um paquímetro digital eletrônico. Volumes detumor foram calculados como as medições de comprimento χ largura χ alturae expressos em mm3.

Os dados foram analisados com ANOVA de medidas repetidaspara volumes de tumor ao longo do tempo usando STATVIEW v. 5.0.1.Usou-se o teste de Scheffe post-hoc para determinar valores ρ para medidasrepetidas do dia 14 ao dia 42 para todos os grupos.

Tratamento com Avastina™ sozinho apresentou uma reduçãode 18 % no crescimento de tumor em comparação com o controle. Tratamentocom 2xCon4(c) sozinho resultou numa inibição de 22 % do crescimento detumor. Tratamento com 2xCon4(C) e Avastina™ em conjunto resultaram emsignificativa inibição de tumor, em comparação com o controle (p<0,0001) eem comparação com o tratamento com 2xCon4(C) sozinho ou Avastina™sozinho (p<0,0001 para ambos). O curso do tempo do tamanho do tumor paratodos os grupos é mostrado na Figura 7.

Não se observou efeito sobre o peso corporal de qualquer umdos grupos.

A partir da descrição precedente, alguém com prática natécnica poderá determinar facilmente as características essenciais destainvenção, e, sem afastar-se do espírito e escopo da mesma, poderá realizarvárias alterações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos econdições.

Todas as referências, patentes, pedidos e publicações indicadossão incorporados aqui integralmente por referência, como se estivessem aquiescritos.

Claims

1. Composição, caracterizada pelo fato de quecompreendendo:(a) 2xCon4(C) e(b) AMG 706 ou 4TBPPAPC;e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizadapelo fato de que compreende 2xCon4(C) e AMG 706; e seus saisfarmaceuticamente aceitáveis.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizadapelo fato de que compreende 2xCon4(C) e 4TBPPAPC; e seus saisfarmaceuticamente aceitáveis.

4. Composição de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 1 a 3, caracterizada pelo fato de que compreende um salfarmaceuticamente aceitável de 2xCon4(C), 4TBPPAPC, ou AMG 706.

5. Composição de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição évantajosa para administração a um paciente humano para tratar uma doença.

6. Método para tratar uma doença em um indivíduo,caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo poruma via e numa quantidade eficaz para tratar uma doença em que:(a) 2xCon4(C), e(b) AMG 706 ou 4TBPPAPC;e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que 2xCon4(C) e AMG 706 são administrados ao indivíduo.

8. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que 2xCon4(C) e 4TBPPAPC são administrados ao indivíduo.

9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de-6 a 8, caracterizado pelo fato de que um sal de um ou mais de 2xCon4(C),-4TBPPAPC, ou AMG 706 é administrado ao indivíduo.

10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de-6 a 9, caracterizado pelo fato de que formulações farmaceuticamenteaceitáveis de 2xCon4(C), 4TBPPAPC ou AMG 706 são administradas aoindivíduo.

11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de-6 a 10, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um paciente humano.

12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de-6 a 10, caracterizado pelo fato de que (a) e (b) são administrados emmomentos diferentes, seqüencialmente.

13. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de-6 a 10, caracterizado pelo fato de que (a) e (b) são administrados ao mesmotempo.

14. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende, em um oumais recipientes:(a) 2xCon4(C), e(b) AMG 706 ou 4TBPPAPC.

15. Kit de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelofato de que compreende 2xCon4(C) e AMG 706.

16. Kit de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelofato de que compreende 2xCon4(C) e 4TBPPAPC.

17. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 16, caracterizado pelo fato de que compreende uma formulaçãofarmaceuticamente aceitável de qualquer um ou todos de 2xCon4(C),-4TBPPAPC, ou AMG 706.

18. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 17, caracterizado pelo fato de que (a) 2xCon4(C), e (b) AMG 706 ou4TBPPAPC encontram-se dispostos no mesmo, em um ou mais recipientes,em uma dose unitária ou numa dose integral de uma dose unitária.

19. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 18, caracterizado pelo fato de que (a) e (b) são compreendidos emformulações aceitáveis para uso no tratamento de doenças em humanos.

20. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 19, caracterizado pelo fato de que compreende um sal farmaceuticamenteaceitável de (a) ou (b).

21. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 20, caracterizado pelo fato de que compreendendo adicionalmente umdiíuente estéril.

22. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14a 21, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente informaçãosobre o conteúdo do kit e sobre a natureza e uso apropriado de (a) e (b).

23. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 6 a 10, caracterizado pelo fato de que a doença é câncer.

24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 6 a 10, caracterizado pelo fato de que a doença é câncer de colo.

25. Método de acordo com a reivindicação 6 caracterizadopelo fato de que AMG 706 é administrado a uma dose de cerca de 25 mg acerca de 125 mg uma vez por dia.