BRPI0707446A2 - composições e métodos para o tratamento de doença oftálmica - Google Patents

Abstract

COMPOSIçõES E MéTODOS PARA O TRATAMENTO DE DOENçA OFTáLMICA. Composições e métodos para tratar distúrbios oculares, compreendendo composições inibidoras de CXCR4.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI-ÇÕES E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇA OFTALMICA".

Esse pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido dePatente US 60/764.892, depositado em 2 de fevereiro de 2006, cujo conteú-do é aqui incorporado a título de referência.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Aproximadamente uma de cada de 247 pessoas (de mais de 1,1milhão) é legalmente cega nos E.U.A. Mundialmente, é estimado que42.000.000 pessoas são afetadas por cegueira - tanto total como quase is-so. Uma quantidade grande adicional de pessoas sofre de outros distúrbiosretinianos graves.

Cegueira no mundo em desenvolvimento é freqüentemente pre-venível. Por exemplo, um estudo sobre cegueira na índia revela que 62%são causadas por cataratas, 19% de erro refrativo, 5,8% por glaucoma nãotratada.

Contudo, distúrbios retinianos, incluindo sem limitação, retinopa-tia diabética, retinite pigmentar (RP), degeneração macular relacionada àidade seca e úmida (ARMD), doença inflamatória que inclui edema macular,oclusão de veia central, uveíte afetando a retina, vitreorretinopatia são cau-sas muitos mais predominantes de cegueira no mundo ocidental.

Retinopatia diabética é uma outra forma comum de doença reti-niana. Embora dieta, exercício e terapia com fármacos possam fazer muitopara diminuir os efeitos oculares do diabetes na retina, não existe cura es-pecífica ou profilática para retinopatia diabética.

Similarmente, glaucoma é uma condição que é mais comumente(embora não exclusivamente) caracterizada por pressão intra-ocular alta eque também envolve degeneração do nervo retiniano e óptico. Embora apressão intra-ocular óptica seja suscetível de monitoramento com, por e-xemplo, antagonistas de receptor β-adrenérgico, tal como timolol e agonistasde receptor α-adrenérgico tal como brimonidina, a degeneração neural queacompanha o glaucoma não é nem reversível nem pode ser definitivamenteinterrompida por apenas redução da pressão intra-ocular.No mundo desenvolvido, a principal doença retiniana causadorade cegueira em adultos com mais de 60 anos de idade é, de longe, a dege-neração macular relacionada à idade (AMD), e com o segmento da popula-ção dentro desta faixa de idade crescendo firmemente nos E.U.A., o númerode casos tem a probabilidade de aumentar na mesma taxa sem um trata-mento eficaz para a condição.

AMD diminui progressivamente a função das camadas neurais eepiteliais específicas da mácula retiniana. A apresentação clínica da condi-ção inclui a presença de drusas, hiperplasia do epitélio pigmentado retiniano(RPE), atrofia geográfica, e neovascularização coróide (CNV). AMD atróficaé caracterizada por atrofia retiniana externa e de RPE e degeneração corio-capilar subjacente, e é responsável por cerca de 25% dos casos com perdavisual central grave.

ADM exsudativa (ou seja, "úmida") é caracterizada pelo cresci-mento de CNV sob o REP e a retina, e hemorragia subseqüente, descola-mento de retina exsudativo, formação de cicatriz diciforme, e atrofia retinia-na. Descolamento epitelial pigmentar pode ocorrer também. AMD exsudativaé responsável por cerca de 75% de casos de AMD com perda de visão cen-tral grave.

Correntemente, a maioria dos tratamentos para essa doençaenvolve terapias que são mais úteis em pacientes que estão sofrendo desintomas da doença relativamente avançados. Essas terapias incluem foto-coagulação a laser, terapia fotodinâmica e cirurgia em casos onde CNV estáenvolvida. Contudo, não há correntemente terapia eficaz para os estágiosprecoces da doença.

É sabido que inflamação, particularmente inflamação cronicrômi-ca desempenha uma grande parte no desenvolvimento de AMD. Drusas, apresença dos quais é uma das marcas de AMD, compreendem proteína ecomponentes celulares incluindo imunoglobulina e componentes das vias decomplementos que estão envolvidas na deposição de imuno-complexos, mo-léculas envolvidas na resposta aguda à inflamação tais como α1 -antitripsinae componente amilóide P; principais antígenos da classe Il do complexo dehistocompatibilidade. Adicionalmente, drusas incluem fragmentos de RPE,melanina e lipofuscina. Alguns pesquisadores têm sugerido que a presençade vitronectina, apolipoproteína E e outras moléculas associadas às drusasindica que a células do RPE são sujeitas a um ataque de complemento sub-letal, crônico, tal ataque pode resultar na eliminação de complexos de ata-que de membrana associados à superfície (tal como por shedding ou endocí-tose de membrana celular) e a formação de depósitos extracelulares de i-muno-complexos e componentes de complementos, macrófagos ativados eoutras células inflamatórias secretam enzimas que danificam as células edegradam a membrana de Bruch (a camada interna do coróide em contatocom o RPE). Por liberação de citocinas, as células inflamatórias podem en-corajar o crescimento de CNV no espaço de sub-RPE.

Interessantemente, a ativação de complementos e eventos in-flamatórios associados ocorre em outras doenças que exibem degeneraçãocelular e acúmulo de depósitos de tecidos anormais, tais como artrosclerosee mal de Alzheimer. Certamente, o peptídeo β-amilóide de Alzheimer é en-contrado junto com os componentes de complementos ativados em umcomponente vesicular subestrutural com drusas.

Administração intravítrea de cortiscosteróide parece reduzir aincidência de infiltração no SNC em primatas. Isso pode ser devido à ativi-dade antiinflamatória conhecida dos esteróides, que pode alterar a atividadecelular na coróide. Contudo, o uso crônico pode ter vários efeitos colateraissérios, incluindo intolerância à glicose, diabetes e aumento de peso.

O início de uma resposta inflamatória envolve a detecção deuma lesão, outro traumatismo, ou infecção por membros do sistema de vigi-lância imune hospedeiro, que compreende células imunes que estão envol-vidas em trafegar em torno do corpo. O tráfego de células imunes envolve acirculação, direcionamento e adesão, extravasão (entrada do leucócito atra-vés da barreira endotelial), e movimento de populações particulares de Ieu-cócitos entre os vasos sangüíneos, Iinfa e órgãos linfáticos e os tecidos.

O tráfego é regulado por uma interação complexa de moléculasde adesão celular (tais como integrinas e selectinas) e de uma família decitocinas, denominadas quimiocinas, e seus receptores.

As quimiocinas compreendem uma grande família de moléculasquimioatrativas que funcionam em parte para guiar leucócitos fagocitóticosdo sistema imunológico para o tecido Iesionado ou infectado. Dois grupos dequimioatrativos foram identificados até hoje; o primeiro grupo compreendequimioatrativos clássicos que incluem N-formil peptídeos derivados de bacté-rias, peptídeos de fragmentos de complementos C5a e C3a, e lipídeos taiscomo Ieucotrieno B4 e fator ativador de plaquetas.

O segundo, grupo de quimioatrativos mais recentemente carac-terizado compreende uma superfamília de citocinas quimiotáticas tendo pe-sos moleculares de cerca de 8 a cerca de 17 kDa. Essas quimiocinas sãoproteínas secretadas que funcionam no tráfego, recrutamento, e recirculaçãode leucócitos. Foi também constatado que eles desempenham um papel crí-tico em muitos processos patofisiológicos tais como respostas alérgicas, do-enças infecciosas e auto-imunes, angiogênese, inflamação, crescimento detumor, e desenvolvimento hematopoiético. Aproximadamente 80% dessasproteínas têm de 66 a 78 aminoácidos em sua forma madura que compre-ende uma região de núcleo de homogeneidade relativa. As quimiocinas re-manescentes são de peso molecular maior, com aminoácidos adicionais o-correndo a montante do "núcleo" de proteína, ou como parte de um segmen-to C-terminal estendido.

Todas as quimiocinas sinalizam através da subfamília de quimi-ocinas de sete receptores acoplados à proteína G de domínio transmembrâ-nico (GPCRs). GPCRs constituem a maior família simples de detectores desinais na superfície celular. Ativação de GPCRRs por Iigantes seletivos ouespecíficos dispara a propagação de sinais via as proteínas G, que, subse-qüentemente, regulam as atividades de moléculas efetoras da célula alvo.As proteínas G são assim denominadas porque elas podem se ligar a e sãoativadas por trifosfato de guanidina (GTP).

A fidelidade de transdução de sinal mediada por GPCR é manti-da em vários níveis. Primeiramente, a interação de receptor-ligante é alta-mente seletiva onde a discriminação de estereoisômeros é comumente ob-servada. Em segundo lugar, cada GPCR pode geralmente interagir somentecom um pequeno subconjunto de proteínas G, que por, seu turno, regula umnúmero limitado de efetores. As proteínas G são classificadas em quatrosubiamílias denominadas Gs1 Gi1 Gq e G12, de acordo com suas seqüênciasde homologiãs.

As holoproteínas G intactas são polipeptídios heterotriméricos. Aforma ligada ao difosfato de guanidina (GDP) da proteína G heterotrimérica éinativa, enquanto a forma ligada à GTP é ativa. Mediante ligação do Iiganteao GPCR, o receptor sofre uma alteração de conformação que resulta norecrutamento da proteína G heterotrimérica inativa ao GPCR ligado ao Iigan-te. Uma vez ligado ao receptor, a subunidade α da proteína G expele o GDPligado, repõe o GDP com GTP e, assim ativada, a subunidade α da proteínaG agora se dissocia do dímero da subunidade Gp e Gy (ou "βγ"). O dímeroβγ está então livre para interagir com e regular os vários efetores. Similar-mente, a subunidade α pode então, por exemplo, se ligar a ou estimular aadenilil ciclase, que, por sua vez, regula a produção catalítica de cAMP. Al-ternativamente, se a proteína G é um trímero Gq, a subunidade α pode seligar a e regular a PLC.

As estruturas primárias de todas as subunidades α da família Gqcompartilham percentagens altas de identidade umas com as outras e tam-bém compartilham propriedades funcionais comuns. Elas podem regular aatividade de isoformas de fosfolipase C (PLC) através de ativação seletivapor GPCRs. Isso leva a um aumento no nível intracelular de fosfatos de ino-sitol (IP).

Os GPCRs são membros da classe de receptores conhecidacomo receptores "serpentina". Domínios helicoidais desses receptores estru-turalmente relacionados cruzam, sete vezes, a membrana plasmática e pos-suem uma terminação amino extracelular e terminação carboxila intracelular.Estima-se que os receptores acoplados à proteína G ocorrem em mais que1.000 variações em mamíferos e regulam alguma atividade em quase todacélula humana. Os membros da superfamília de receptores acoplados à pro-teína G incluem, sem limitação, os receptores alfa-adrenérgicos, beta-adrenérgicos, dopamínicos, muscarínicos, acetilcolina, acetilcolina nicotíníca,rodopsina, opióides, somatotastina, e de serotonina.

Esses são pelo menos dezessete receptores de quimiocina cor-rentemente conhecidos, e muitos destes receptores exibem propriedades deligação promíscuas, pelo que várias quimiocinas diferentes podem sinalizaratravés do mesmo receptor. Os receptores de quimiocina são de aproxima-damente 350 aminoácidos de comprimento e podem ser alinhados uns comos outros somente se lacunas forem introduzidas na seqüência primária "u-niversal". A terminação N é ácida e extracelular, pode ser sulfatada e contémsítios de glicosilação ligados em Ν. A terminação C é intracelular e compre-ende resíduos de serina e treonina capazes de serem fosforiladas para regu-lação de receptores. Os setes domínios transmembrânicos estão ligados portrês alças extracelulares de resíduos hidrofílicos. As cisteínas altamenteconservativas nas 1a e 2a alças extracelulares são unidas em ponte de dis-sulfeto. As proteínas G se acoplam aos receptores por meio da terminação Ce talvez por meio da terceira alça intracelular.

Os ligantes de receptores de quimiocina são divididos em sub-famílias com base nos motivos de seqüências de aminoácidos conservados.A maioria dos membros da família de quimiocinas tem pelo menos quatroresíduos de cisteína conservados que formam duas pontes de dissulfeto in-tracelulares. As subfamílias são definidas pela posição dos dois primeirosresíduos de cisteína. Assim:

a) A subfamília alfa (a), também chamada de quimiocinas CXC1tem um aminoácido ("X", que designa que qualquer aminoácido pode ocuparesta posição) separando os dois primeiros resíduos de cisteína. Esse grupopode ser ainda subdividido com base na presença ou na ausência de ummotivo de aminoácidos Glu-Leu-Arg (ELR) imediatamente precedendo oprimeiro resíduo de cisteína. Existem correntemente cinco receptores espe-cíficos de CXC e eles são designados CXCR1 a CXCR5. Existem quimioci-nas ELR que se ligam ao CXCR2 e/ou ao CXCR2 e agem, geralmente, co-mo quimioatrativos e ativadores de neutrófilos. Presentemente, 14 diferentesgenes humanos que codificam quimiocinas CXC foram reportados na Iitera-tura científica com alguma diversidade adicional contribuída por splicing al-ternativo.

b) Na subfamília beta (β), também chamada de quimiocinas CC1as duas primeiras cisteínas são adjacentes umas às outras sem aminoácidointermediário. Existem, correntemente, 24 diferentes membros distintos dasubfamília β humana. Os receptores desse grupo são designados CCR1 aCCR11. As células alvo para diferentes membros da família CC incluem amaioria dos tipos de leucócitos.

c), Existem duas proteínas conhecidas com homologia de quimi-ocina que se enquadram fora das subfamílias α e β. Linfotactina é o membrosolitário da classe gama (γ) (quimiocina C), que perdeu a primeira e a tercei-ra cisteínas. O receptor de Iinfotactina é designado XCR1. Fractalcina, o úni-co membro correntemente conhecido da classe delta (δ) (quimiocina CXC),tem três aminoácidos intermediários entre os dois primeiros resíduos de cis-teína. Essa molécula é única entre as quimiocinas em que ela é uma proteí-na transmembrânica com o domínio de quimiocina N-terminal fundido a umpedículo similar à mucina longo. O receptor de fractalcina é conhecido comoCXCR1.

Várias abordagens foram usadas para identificar as quimiocinas.As descobertas mais antigas de quimiocinas foram feitas como resultado desua atividade biológica ou através de estudos que buscaram identificar pro-teínas que são supra-reguladas seguinte à ativação celular ou diferenciaçãoexpressa em tipos de células selecionados. A maioria das quimiocinas re-centemente reportadas, contudo, foram identificadas através da bioinformáti-ca. Bases de dados de EST (Marcadores de Seqüências Expressas) contêmas seqüências de um grande número de fragmentos de cDNA de uma varie-dade de tecidos e de organismos. A tradução de ESTs pode proporcionarseqüências de aminoácidos parciais do proteoma. Devido ao fato das quimi-ocinas serem comparativamente pequenas e conterem motivos de aminoá-cidos de assinatura, muitos membros novos da família foram identificadosatravés de buscas de bases de dados de EST.

Os fatores derivados de células estromais SDF-Ia e SDF-Ιβ sãoquimiocinas CXC codificadas por mRNAs alternativamente spliced. As for-mas maduras α e β diferem somente em que a forma β tem quatro átomosadicionais em sua terminação C. Essas proteínas são altamente conserva-das entre as espécies. A maioria dos estudos funcionais foi realizada comSDF-Ia e sugeriu uma variedade de funções para essa molécula. Ela é umquimioatrativo potente para células progenitoras da medula óssea CD34 ecélulas dendríticas. Elas também parecem funcionar no tráfego e adesão delinfócitos e megacariócitos.

Um produto adicional alternativamente spliced de rato, designa-do SDF-1 γ, foi recentemente reportado. O mRNA de SDF-Ιγ é similar àmensagem de SDF-Ιβ, mas com um exon adicional inserido próximo à ex-tremidade C-terminal da região de codificação. Os quatro aminoácidos deSDF-Ιβ que estão normalmente anexados à terminação C do SDF-Ia sãosubstituídos no SDF-Ιγ por um segmento de 30 aminoácidos contendo 17resíduos positivamente carregados. Os transcritos de SDF-Ιβ e 1γβ exibempadrões diferentes de expressão em vários tecidos. Eles são reciprocamenteexpressos no cérebro de rato em desenvolvimento. SDF-Ιβ é expresso emcérebro embrionário e neonatal, ao passo que SDF-yé expresso em cérebrode adultos. A função dessa variante é ainda correntemente desconhecida.

Uma atividade quimiotática única foi reportada recentementepara SDF-1 onde subpopulações de células T foram atraídas por concentra-ções de SDF-Ia de 100 mg/mL, mas repelidas por concentrações de 1μg/mL. A concentração superior que elicitou repulsão é comparável à con-centração de SDF-1 que ocorre na medula óssea. Estudos de inibidores re-velam que a migração em ambas as direções requerem o receptor CXCR4,proteínas G, e fosfatidilinositol 3-quinase. Contudo, os inibidores de tirosinaquinase bloqueiam a quimioatração e não afetam a quimiorrepulsão, ao pas-so que um agonista de cAMP inibe a quimiorrepulsão, mas não afeta a qui-mioatração.

CD34 é um marcador de superfície celular que se correlaciona,em humanos, com os progenitores da medula óssea tendo uma alta respos-ta proliferativa às citocinas hematopoiéticas. Foi observado que células pro-genitores hematopoiéticas (HPC) CD34+ migram tanto in vitro como in vivoem direção a um gradiente de SDF-1 produzido por células estruturais damedula óssea, chamadas células estromais. Nos experimentos, in vivo, oSDF-1 foi administrado ao baço. Vide Aiuti et al., 185 J. Exp. Med. 111 (6 dejaneiro de 1997); esta e todas as outras referências citadas neste relatóriodescritivos são incorporadas aqui a título de referência em sua totalidade.

Células mielóides e eritróides, bem como células linfóides BeTforam encontradas em culturas de células tendo o fenótipo CD34+. As con-centrações de SDF-1 que estimulam uma resposta quimiotática tambémcausam uma elevação transitória de Ca++ em células CD34+ demonstraramserem capazes de reconstituir células sangüíneas em babuínos Ietalmenteirradiados e em humanos. A toxina pertussis inibiu completamente a quimio-taxia induzida por SDF-1, indicando que o receptor de quimiocina presenteem células CD34+ processa sinais de SDF-1 através de Gi. SDF-1 atraiCFU-GM (granulócito/unidades formadoras de colônia de macrófagos), CFU-MIX (unidades formadoras de colônias de linhagem mista) e células progeni-toras de BFU-E (unidades formadoras da explosão de eritróides) da medulaóssea humana (BM), sangue do cordão umbilical (CB) e sangue periféricomobilizado (PB). Há um alto grau de conservação entre SDF-1 humano e decamundongo (uma única diferença de aminoácido), e SDF-1 de camundon-gos causa quimiotaxia transendotelial em ambas as HPC humanas e de ca-mundongos.

Interessantemente, HPCs foram identificadas como sendo capa-zes de se diferenciarem em células do fígado. Quando ocorre o transplanteclínico de fígado ou de medula óssea, foram encontrados ocasionalmentehepatócitos derivados de BM. Embora o número de HPCs que enxertam fí-gado irradiado e se desenvolvem em células produtoras de albumina comohepatócitos seja extremamente baixo, quando o fígado está Iesionado oudesafiado por inflamação viral, o número de tais células aumenta em respos-ta ao estresse. Em camundongos, há uma ampliação muito grande de HPCsque têm pelo menos algumas das características da morfologia e função he-páticas.SDF-1, que é também conhecido como CXCL-12, é largamenteexpresso em vários tecidos durante ambos o desenvolvimento e a idade a-dulta, e esses tecidos incluem o fígado. Estresse, causado por lesão, infec-ção ou trauma, pode facilitar a diferenciação específica de tecido e induz a5 secreção de mediadores de sinalização que aumentam a migração e guiamas células-tronco pluripotentes transplantadas para o tecido lesionado. Tam-bém, há uma expressão aumentada de SDF-1 no fígado depois que o corpointeiro é irradiado. Em humanos, aqueles pacientes injetados com HCV1 aexpressão de SDF-1 é estendida para o tecido dúctil bilioso, canal de Hering,e células ovais.

Esse aumento relacionado à tensão em expressão de SDF-1parece estar associado a alguns fatores que incluem metaloproteases dematriz MMP-9 e MMP-2. Essas proteases são ativadas seguintes à lesão defígado mediada por CCI4, e este fenômeno, por sua vez, desencadeia a mo-bilização de células progenitoras humanas da medula para a circulação ge-ral. Ao mesmo tempo, os níveis de expressão de receptor de CXCR4 au-mentam.

Guerciloini et al., Publicação de Pedido de Patente US2006/0019917 descreve interferência de siRNA de uma isoforma de fator-1derivado de células estromais.

Todas as publicações citadas neste relatório descritivo são aquiincorporadas a título de referência em sua totalidade, independentemente seuma incorporação expressa a título de referência é feita juntamente comuma citação da referência ou não.

Descrição Detalhada da Invenção

Foi aqui constatado que células do RPE, nas quais estresse in-duzido exibiu um aumento significante de transcrição do gene de CXCR4,conforme julgado por análise de série de genes, quando células ARPE-19foram expostas ao estressor químico (hidroperóxido de ter-butila ou t-BH)por 6 horas, sofreram morte celular dentro que 24 horas. Células expostasao estressor por apenas 3 horas, por contraste, têm uma taxa de sobrevi-vência de 70% de pelo menos 14 horas. O grau de expressão de CXCR4dessas últimas células se aproximou daquela de células naive não expostas,de modo algum, ao estressor.

Portanto, em uma modalidade, a presente invenção refere-se aum método para reduzir a taxa de progressão de uma condição oftálmica, talcomo uma condição retiniana inflamatória em um mamífero, que compreen-de: administrar ao tecido oftálmico do dito mamífero uma composição quecompreende um inibidor de atividade de CXCR4.

Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere-sea um método para inibir ou reduzir a taxa de progressão de morte celularretiniana (inclusive morte de células de RPE), tal como por apoptose ou ne-crose, na inibição ou redução da taxa de progressão da morte celular retini-ana por apoptose ou necrose em um mamífero, que compreende: adminis-trar ao tecido retiniano do dito mamífero uma composição que compreendeum inibidor de atividade de CXCR4.

Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere-sea um método para inibir ou reduzir a taxa de progressão de angiogêneseretiniana ou coróide em um mamífero, compreendendo: administrar ao tecidoretiniano do dito mamífero uma composição que compreende um inibidor deatividade de CXCR4. Vide, por exemplo, Tachibana et al., Nature 393:591(junho de 1988); Horuk, NATURE 393:525 Qunho de 1998); Salcedo et al.,AM. J. PATHOLOGY 154:1125 (abril de 1999); Kryczek et al., CÂNCERRES. 65:465 (15 de janeiro de 2005); Zou et al., NATURE 393:595 (Junhode 1998); Gupta et al., J. BIOL. CHEM. 273:4282 (13 de fevereiro de 1998);Schioppa et al., J. EXP. MED. 198:1391 (3 de novembro de 2003). Adicio-nalmente, as seguintes referências discutem os efeitos de SDF-1 na angio-gênese: Grunewald et al., CELL 124:174 (13 de janeiro de 2006); Ruiz deAlmodovar et al., CELL 124:174 (13 de janeiro de 2006); Butler et al., J.CLIN. INVEST. 11586 (janeiro de 2005); Orimo et al., CELL 121 :335 (6 demaio de 2005). Todas essas referências são aqui incorporadas a título dereferência.

Adicionalmente, CXCR4 (juntamente com CCR5) tem sido impli-cado na etiologia de infecção de macrófagos e células T por vírus da imuno-deficiência humana. As seguintes referências, cada uma das quais é aquiincorporada a título de referência em sua totalidade, descrevem agentes ca-pazes de inibir qualquer uma de ou ambas a atividade e a expressão deCXC R4:

Inibidores de CXCR4 de pequena molécula:

"Pequena molécula" significa um composto químico diferente deum polinucleotídeo ou polipeptídio. Moléculas pequenas inibidoras de CX-CR4 são descritas, entre outras fontes, por Bridger et al., Publicação US2002/0077339 A1; Bridger et al., Publicação US2002/0147192 A1 ; Tudan et al., Publicação US 2002/0156034A1; Bridger etal., Publicação US 2003/0220341 A1; Bridger et al., Patente US6.667.320 B2; Bridger et al., Publicação US 2004/0019058 A1; Bridger et al.,Publicação US

2004/0102428 A1; Yanaka et al., Publicação US 2004/0157818; Kishimoto etal., Publicação US 2004/0209837 A1; Bridger et al., Publicação US2004/0209921 A1; Bridger et al., Publicação US 2004/0235814 A1; Yamaza-ki et al., Publicação US 2004/0254221 A1 ; Bridger et al., Patente US6.835.731 B2; Zlotnik et al., Publicação US 2005/0002939 A1; Bridger et al.,Publicação US 2005/0026942 A1; Schols, Patente US 6.872.714 B1; Bridgeret al., Publicação US 2005/0154005 A1; Winchester et al., Publicação US2005/0202005 A1; Kaplan et al., Publicação US 2005/0239898 A1; Hanai etal., Publicação US 2005/0276805 A1; Tudan et al., Publicação US2006/0014682 A1; Shim et al., Publicação US 2006/0264451; Losordo et al.,Publicação US 2006/0194776; e Ochiai et al., Publicação Internacional WO2006/090853.

Por exemplo, e sem limitação, Bridger et al., US 2002/0077339(o pedido '339) depositado em 15 de dezembro 2000, referem-se a modula-dores de ligação de CXCR4 (inclusive antagonistas) que compreendem oscompostos heterocíclicos da estrutura básica:

V-CR2-Ar1-CR2NR-(CR2)x-Ar2

incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis e formas protegidas destes,em que V é um composto de heterociclo substituído de 9 a 24 membros con-tendo 2 a 4 átomos de nitrogênio de amina opcionalmente substituídos eespaçados um do outro por 2 ou mais átomos carbono opcionalmente substi-tuídos, e cujo heterociclo pode compreender opcionalmente um anei aromá-tico ou heteroaromático fundido, e em que

(a) o dito heterociclo contém pelo menos O ou S, o dito O ou Sespaçado de qualquer heteroátomo adjacente por pelo menos 2 átomos decarbono, e em que o dito S é opcionalmente oxidado ou

(b) pelo menos um átomo de carbono no dito anel é substituídopor um substituinte retirador de elétrons, ou

(c) ambos (a) e (b);

e em que cada R é, independentemente, H ou uma alquila de cadeia linear,ramificada ou cíclica contendo 1 a 6 átomos de carbono; χ é de 0 a 4; Ar1uma fração aromática ou heteroaromática não substituída ou substituída; eAr2 é uma grupo aromático ou hèterocíclico não substituído ou substituído.

Exemplos representativos de tais compostos e métodos de pre-paração desses compostos são dados nas figuras 1 a 10 e os Exemplos 1 a8 da publicação '339, que também descreve o uso de compostos para inibi-ção de infecção de HIV, para o tratamento de artrite induzida por colágeno, eseu envolvimento no crescimento de tumor, aterosclerose.

Como um outro exemplo, sem limitação, outros compostos inibi-dores de CXCR4 são descritos por Bridger et al., Publicação US2004/0102428 (a publicação '428), depositado em 12 de abril de 2004. Es-ses têm uma estrutura genérica que compreende a fórmula:

<formula>formula see original document page 14</formula>

em que X é (CR32)0--(CR3=CR3)p--(CR32)q--NR52; (CR32), --R4; um anel mo-nocíclico ou bicíclico contendo opcionalmente Ν, O ou S; ou uma benzila,cada uma delas é opcionalmente substituída; com a condição que a ditabenzila não seja substituída com uma arila ou heteroarila de 5-6 membrosvia um Iigante L-NH-L, em que cada L é uma ligação, CO, SO2 ou CH2; Y éuma fração aromática ou parcialmente aromática, monocíclica ou bicíclicacontendo nitrogênio opcionalmente substituído; A e R1 são, cada um, umsubstituinte não interferente, e com a condição que dois As não formem umanel adicional; R2 e R3 são, independentemente, H ou uma alquila opcional-mente substituída; R4 é um anel heterocíclico opcionalmente substituído ouum heterocomposto contendo pelo menos um =O, SO, C=N, ciano, NROR,ou halo, em que o dito heterocomposto é opcionalmente substituído com umanel heterocíclico; R5 é H ou alquila; em que pelo menos um de R1 e R2 nãoé H; e em que R1 e R2 podem ser conectados para formarem um anel adi-cional se Y não contiver um resíduo 2-imidazolila opcionalmente conectado aum anel adicional; I e η são, independentemente, 0-4; ρ é 0-1; o e qsão, independentemente, 1-4; ré 1-6, com a condição que quando X for(CR32), -R4, r será pelo menos dois se R4 for 2-piridinila, quinolinila, imidazo-lila ou furano; e ainda com a condição que se o dito composto não for (1-piridin-2-etil)-2-il-etil)-piridin-2-ilmetil-amina. Os Exemplos 1-441 da publica-ção '428 proporcionam exemplos de compostos específicos englobados poressa fórmula genérica e métodos para preparar tais compostos. Essa publi-cação é aqui incorporada a título de referência em sua totalidade.

Ainda, Yamazaki et al, Publicação de Patente US 2004/054221depositado em 27 de setembro de 2002, descrevem inibidores de CXCR4 daseguinte fórmula geral (1) ou sal farmacologicamente aceitável destes:

<formula>formula see original document page 15</formula>

na fórmula geral (1),

n1 representa um número inteiro de 0 a 3 e n2 representa umnúmero inteiro de 0 a 4;

A representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(2):

A1 e A2 representam, cada um, independentemente, um anelheteroaromático mono ou policíclico, opcionalmente substituído, ou um anelaromático mono ou policíclico opcionalmente substituído;G1 representa uma ligação simples ou um grupo representadopela seguinte fórmula geral (3); e

<formula>formula see original document page 16</formula>

R11 R2 e R3 representam um átomo de hidrogênio, um grupo al-quila opcionalmente substituído tendo de 1 a 6 átomos de carbono, um gru-po alquenila opcionalmente substituído tendo de 2 a 6 átomos de carbono,ou um grupo alquila cíclico tendo de 3 a 6 átomos de carbono;

W representa um grupo alquileno opcionalmente substituído ten-do de 1 a 7 átomos de carbono, um grupo alquileno opcionalmente substituí-do tendo de 2 a 7 átomos de carbono, um grupo alquinileno opcionalmentesubstituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono, um grupo alquileno cíclicoopcionalmente substituído tendo de 3 a 10 átomos de carbono, um anel a-romático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel heteroaro-mático mono ou policíclico opcionalmente substituído, ou um anel heterocí-clico saturado, mono ou policíclico, opcionalmente substituído;

D1 e D2 representam, cada um, independentemente, um átomode hidrogênio ou um grupo representado pela seguinte fórmula geral (4):

--G2--R4 (4)

na fórmula geral (4),

G2 representa um grupo alquileno opcionalmente substituídotendo de 1 a 15 átomos de carbono, um grupo alquenileno opcionalmentesubstituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono, ou um grupo alquinileno op-cionalmente substituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono; e

R4 representa um átomo de hidrogênio, um grupo alquila cíclicoopcionalmente substituído tendo de 3 a 10 átomos de carbono, um anel a-romático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel aromáticopolicíclico opcionalmente substituído e parcialmente saturado, um anel hete-roaromático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel heteroa-romático policíclico opcionalmente substituído e parcialmente saturado, ouum anel heterocíclico mono ou policíclico opcionalmente substituído, satura-do;B representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral (5):

<formula>formula see original document page 17</formula>

Q1 representa S, O1 ou NH e Q2 representa S, O, ou NR8 (excetopara um caso de Qi=NH e Q2=NR8; R5 e R8 representam, cada um, inde-pendentemente, um átomo de hidrogênio, um grupo alquila inferior opcio-nalmente substituído, um grupo alquila cíclica opcionalmente substituído, ouum anel aromático opcionalmente substituído, e R5 e R8 podem formar, op-cionalmente, um anel; e

R6 e R7 representam, cada um, independentemente, um átomode hidrogênio, um substituinte representado pela seguinte fórmula geral (6),um grupo alquila opcionalmente substituído tendo de 1 a 15 átomos de car-bono, um grupo alquila cíclica opcionalmente substituído de 3 a 15 átomosde carbono, um grupo alquenila opcionalmente substituído tendo de 1 a 3duplas ligações e de 2 a 15 átomos de carbono, ou um grupo alquinila op-cionalmente substituído tendo de 1 a 3 triplas ligações e de 2 a 15 átomosde carbono, e R6 e R7 formam, opcionalmente, um anel, em que R6 e R7 sãoopcionalmente ligados um ao outro via um heteroátomo, um grupo alquilacíclica, um anel aromático, um anel heteroaromático, ou um anel heterocícli-co para formarem o anel:

na formula (6)'

m representa 0 ou 1, quando m=0, Q3 representa CH ou N e Q4representa N, S, ou O, e quando m=1, Q3 e Q4 representam, cada um, inde-pendentemente, CH ou N;

G3 representa um grupo alquileno opcionalmente substituídotendo de 1 a 4 átomos de carbono, ou um grupo alquileno opcionalmentesubstituído tendo de 2 a 4 átomos de carbono;

R9 representa um grupo alquila inferior, um grupo alcóxi, umgrupo haloalquila, um grupo haloalcóxi, um grupo hidroxialcóxi, um átomo dehalogênio, um grupo amino, um grupo alquilamino, um grupo carboxila, umgrupo alcoxicarbonila, um grupo carbamoíla, um grupo alquilcarbamoíla, umanel heterocíclico saturado, ou um anel heteroaromático, que é substituídoem qualquer posição em um anel diferente daquele de um átomo de nitrogê-nio existindo opcionalmente no anel, e quando m=1 e Q3 e Q4 representamsimultaneamente CH, R9 representa opcionalmente um átomo de hidrogênio;

R10 representa um átomo de hidrogênio, ou um mesmo grupocomo R5, e opcionalmente ligações com G3 para formarem um anel;

χ representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral (7):

<formula>formula see original document page 18</formula>

na fórmula geral (7),

Z1 e Z2 representam, cada um, independentemente, uma ligaçãosimples, S, O, ou NR13, e m=representa um número inteiro de 1 ou 2;

R11, R12, e R13 representam, cada um, independentemente, umátomo de hidrogênio, um grupo alquila opcionalmente substituído tendo de 1a 6 átomos de carbono, um grupo alquenila opcionalmente substituído tendode 2 a 6 átomos de carbono, um grupo alquinila opcionalmente substituídotendo de 2 a 6 átomos de carbono, ou um grupo alquila cíclica opcionalmen-te substituído tendo de 3 a 6 átomos de carbono;

e

y representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(8):

<formula>formula see original document page 18</formula>

na fórmula geral (8), m2 representa um número inteiro 1 ou 2; e quando háum átomo de carbono assimétrico opcionalmente existente no composto re-presentado pela fórmula geral (1), o composto está em qualquer forma deum isômero óptico puro representado como configuração absoluta de R ouS, uma mistura destes em qualquer razão, e uma mistura racêmica destes, equando existem dois ou mais átomos de carbono assimétricos no composto,o composto está em qualquer forma de um diastereômero opticamente puro,uma mistura racêmica destes, e uma combinação destes em qualquer razão.

Ochiai et al. descrevem, no WO 2006/090853, cujo conteúdo éaqui incorporado a título de referência, antagonistas de CXCR4 tendo a se-guinte fórmula geral (9):

<formula>formula see original document page 19</formula>

o anel A, nesta estrutura, representa um anel heterocíclico contendo nitrogê-nio, de 5 a 10 membros, que pode ter um substituinte; o anel B representaum anel heterocíclico contendo nitrogênio, insaturado, de 5 a 10 membros,que pode ter um substituinte; anel D representa um anel heterocíclico, con-tendo nitrogênio, de 4 a 15 membros, que pode ter um substituinte ; X repre-senta N ou C; Y é Ci-6 alquila substituída ou não substituída; R1 representaH, um grupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte, ou um grupo anelque pode ter um substituinte; R2 e R3 representam, cada um, independente-mente, H, um grupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte, ou umgrupo anel que pode ter um substituinte, ou podem formar juntos com o áto-mo de nitrogênio ligado a qualquer um destes, um anel heterocíclico conten-do nitrogênio que pode ter um substituinte; e R4 representa H ou um grupohidrocarboneto que pode ter um substituinte.

Em uma modalidade do antagonista de CXCR4 de fórmula (9), oantagonista é um composto da fórmula (10):

<formula>formula see original document page 19</formula>

em que o anel B1 representa um anel de piridina ou pirimidina que pode terum substituinte; o anel D1 representa um anel heterocíclico, de 4 a 8 mem-bros, saturado, contendo nitrogênio, monocíclico, que pode ter um substituin-te; Y1 representa uma C1.4 alquila substituída ou não substituída; e A, X1,R2 e R3 têm os significados dados acima.

Em uma outra modalidade do composto de fórmula (10), Y1 é -(CR5R6)n-, em que R5 e R6 representam, cada um, um átomo de hidrogê-nio, ou R5 e R6 representam, juntos, um grupo oxo; η representa um númerointeiro entre 1 e 4, e quando η representa um número inteiro entre 2 e 4, ca-da um de CR5R6 pode ser idêntico ou diferente.

Em uma outra modalidade do composto de fórmula (10), R2 re-presenta -(CO)-R2A, em que R2A é (i) um grupo hidrocarboneto que podeser substituído por um grupo básico e pode ter ainda um substituinte; (ii) umgrupo anel que pode ser substituído por um grupo básico e pode ter aindaum substituinte; ou (iii) um grupo heterocíclico monocíclico, de 5 a 8 mem-bros, contendo nitrogênio, tal como pirrolidina, piperidina ou morfolina; e R3é um grupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte ou um grupo anelque pode ter um substituinte.

Em uma outra modalidade do composto de fórmula (10), o anelformado por R2 e R3 juntos com átomo(s) de nitrogênio ao(s) qual(ais) elesse ligam é um anel heterocíclico que contém nitrogênio, de 5 a 8 membros,que pode ter um substituinte. Em uma outra modalidade do composto defórmula (10), D1 é pirrolidina ou piperidina.

Em uma outra modalidade do antagonista CXCR4 de fórmula(9), o antagonista é um composto de fórmula (11):

<formula>formula see original document page 20</formula>

um composto de fórmula (12):

<formula>formula see original document page 20</formula>

um composto de fórmula (13):

<formula>formula see original document page 20</formula>

ou um composto de fórmula (14):em que, em cada uma das fórmulas 11 a 14, o anel D2 representa pirrolidinaou piperidina; m representa um número inteiro entre 1 e 3; R1A representaum grupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte ou um grupo anelmonocíclico que pode ter um substituinte; R3A representa um grupo hidro-carboneto que pode ter um substituinte ou um grupo anel que pode ter umsubstituinte; anel E representa um heterociclo monocíclico de 5 a 8 mem-bros, contendo nitrogênio, que pode ter um substituinte; e η representa umnúmero inteiro entre 1 e 4.

Em uma outra modalidade do antagonista de CXGR4 de fórmula(9), o antagonista é um composto de fórmula (15),

em que R é Ci-6 alquil-NH2.

Um substituinte de alquila, arila, ou heteroarila deve ser estávele pode ter até 20 átomos não-hidrogênio cada um e tantos átomos de hidro-gênio quanto necessários, em que os átomos de não-hidrogênio são C, N,O, S, P, F, Cl, Br, e/ou I, em qualquer combinação estável. Contudo, o nú-mero total de átomos de não-hidrogênio em todos os substituintes combina-dos deve ser de 20 ou menos. Um substituinte é estável se ele for suficien-temente estável para o composto a ser isolado por pelo menos 12 horas, àtemperatura ambiente, sob condições atmosféricas normais, ou se ele forsuficientemente estável para pelo menos um uso descrito aqui.

Os antagonistas de CXCR4 que se enquadram no escopo deuma ou mais das fórmulas 9-15 incluem N-[(2R,3S)-2-(aminometil)-1-cicloexil-3-prrolidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina, N-[(2R,3S)-2-(2-ami-noetil)-1 -cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina, N-[(2R,3S)-2-(3-aminopropil)-1-cicloexil-3- pirrolidinil]-4-(1-azepanil)-2-pirimidina amina,N-[(2R,3S)-2-(5-aminopentil)-1-cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1-azepanil)-2-pirimi-dina amina, N-[(2R,3S)-2-(aminoetil)-1 -cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2R,3S)-1 -cicloexil-2-[2-(dimetilami-no)etil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2R,3S)-1 -cicloexil-2-[3-(dimetilamino)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1-azepanil)-N-{(2R,3S)-1 -cicloexil-2-[5-(dimetilamino)pentil]-3-pirro!idinil}-2-pirimidina ami-na, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(dipropilamino)propil]-3-pir-rolidinil}-2-pirimidina amina, cis-4-((2RS, 3SR)-2-(3-aminopropii)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -pirrolidinil)cicloexanol, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3- (dietilamino)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina a-mina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(1 -pirrolidinil)propil]-3-pir-rolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(1 -piperidinil)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1-azepanil)-N-{(2RS,3SR)-2-[3-(1 -azepanil)propil]-1 -cicloexil-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, N-[(2RS,3SR)-2-(2-aminoetil)-1 -cicloexil-3-piperidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimi-dina amina, N-{(2RS,3SR)-2-(3-aminopropil)-1 -[1 -(cicloexilcarbonil)-4-piperi-dinil]-3-pirrolidinil}-4-(1-azepanil)-2-pirimidina amina, N-{(2RS, 3SR)-2-(3-aminopropil)-1 -[1 -(ciclopentilcarbonil)-4-piperidinil]-3-pirrolidinil}-4-(1 -aze-panil)-2-pirimidina amina, N-{(2RS,3SR)-2-(3-aminopropil)-1-[1-(3- fluorben-zoil)-4-piperidinil]-3-pirrolidinil}-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina, N-(3-amino-propil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-pipe-ridinil)acetamida, 2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 - ci-cloexil-2-piperidinil)-N-[3-(dimetilamino)propil]acetamida, N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinit]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-4-piperidinacarboxamida, cis-4-{(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-2-[3-(dietilamino)propil]-1 -pirrolidiniljcicloexanol, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepa-niO^-pirimidinillaminoJ-r-ÍS-fluorobenzoiO-l ^'-bipiperidina^-iOetilj-^piperi-din carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1(cicloexil carbonil)-1,4'-bipiperidina-2-il)etil}-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-2-morfolina carboxamida, (3S)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-3-piperidina carboxamida, (3R)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-3-piperidina carboxamida, (3R)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-3-pirrolidina carboxamida, 2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-2-metilpropanamida, N-(4-aminobutil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)acetamida, N-(2-ami-noetil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)acetamida, (3S)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidi-nil]amino}-1 -cicloexil-2- pirrolidinil)etil]-3-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2- pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-pirrolidinil)-etil]-2-morfolina carboxamida, N-[2-(( 2RS,3SR)-3-{[4-azepanil)-2—pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-1 -isopropil-4-piperidina carbo-xamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-N-(tetraidro-2H-piran-4-il)-4- piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-N-(2-metoxietil)-4-piperidina carboxamida, N-[2- ((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-N-(2-hidroxietil)-4-piperidina carboxamida, (2S)-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-piri-midinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-2-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amiho}-1-cicloexil-2-piperidi-ni!)etil]-1 -etil-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2^iperidinil)etil]-4-hidróxi-4-piperidina carboxa-mida, (2R)-2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2- piperidinil)etil]-3-(4-hidroxifenil)propanamida, (2S)-2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-4-hidroxibutanamida, N-(2-aminoetil)-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carbo-xamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -etil-2-pipe-ridinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(tetraidro-2H-tiopiran-4-ií)2-piperidinil]etil}-4-piperidinacarboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -isopropil-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-(2-{(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -[2-hidróxi-1 -(hidroximetil)etil]-2-piperi-dinil}etil)-4-piperidina carboxamida, (2R)-2-amino-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-3-(1 H-imidazol-4-il)propanamida, (2S)-2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidi-nil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]3-(1 H-imidazol-4-il)propanamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(tetraidro-2H-piran-4-il)-2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepa-nil)-2-pirimidinii]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-2-piperidina carboxamida,N-[2-((2RS,3SR)-34[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidi-nil)etil]nicotinamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidiniil)etil]isonicotiniamida, N-{2-[(2RS, 3SR)-3-{[4-(1-aze-panil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(1 -oxidotetraiidro-2H-tiopiran-4-il)-2- piperidi-nil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2- piri-midinil]amino}-1-(1,1-dioxidotetraidro-2H-tiopiran-4-il)-2^iperidipiperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-1-cicloexil-3-{[4-(1-pirrolidinil)-2-pirimidinil]amino}-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -isopropil-2-piperidinil)etil]-1 -etil-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-1-etil-3-{[4-(1-piperidinil)-2-pirimi-dinil]amino}-2- piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-N-(tetraidro-2H-piran-4-il)-2-morfolina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(3-hidroxipropil)-2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxa-mida, N-(2-(3-aminopropil)-1 -cicloexilpirrolidin-3-il)-4-(azepan-1 -il)pirimidin-2-amina, N-((2R,3S)-2-(3-aminopropil)-1 -cicloexilpirrolidin-3-il)-4-(azepan-1 -il)pirimidin-2-amina, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, e pró-fármacos destes.

É para ser entendido por aqueles com conhecimento ordinárioda técnica que os exemplos explícitos fornecidos aqui dos compostos capa-zes de se ligarem ao CXCR4 e capazes de bloquearem os agonistas endó-genos deste receptor, tal como SDF-1 a, não têm o objetivo de significaruma listagem exclusiva ou mesmo representativa das modalidades doscompostos inibidores de CXCR4 descritos aqui. Em particular, aqueles ver-sados na técnica estão cientes que descrições similarmente detalhadas deoutros inibidores de CXCR4 podem ser feitas seguindo-se as diretrizes con-tidas nas referências incorporadas aqui a título de referência.

Inibidores de Proteínas de Atividade de CXCR4

Vários antagonistas de peptídeos e de polipeptídios de atividadede CXCR4 foram descritas; estes incluem, sem limitação, pelo menos umdomínio de peptídeo de ligação de CXCR4 derivado de SDF-1, em que oderivado de SDF-1 não tem a atividade estimuladora de CXCR4 do SDF-1tipo selvagem; e anticorpos ou miméticos de anticorpos (tais como aquelesdescritos sob o nome Adnectins™).

Inibidores adicionais de atividade de CXCR4 são descritos emcada uma das seguintes referências, que são aqui incorporadas a título dereferência em sua totalidade e que proporcionam descrição total e detalhadados peptídeos, bem como do modo de preparar e usar os mesmos. Essasreferências incluem Hoxie, Patente US 5.994.515; Winchester et al., Publica-ção US 2002/0039993 A1; Devico et al., Patente US 6.399.078 B1; Lobo,Publicação US 2003/0099645; Lobo, Patente US 6.610.834 B1; Hua et al.,Publicação US 2003/0165988 A1; Huang et al., Publicação US2003/0220482 A1; Wang et al., Patente US 6.808.877 B2; Clark-Lewis et al.,Patente US 6.875.738B1; Clark-Lewis et al., Patente US 6.946.445 B1; Muel-Ier et al., Patente US 6.949.243 B1; Lobo, Publicação US 2005/0220787 A1;Martinez- Alonzo et al., Publicação US 2005/0221287 A1; Clark-Lewis et al.,Patente US 2005/0265969 A1; Plaksin et al., Publicação US 2005/0266009A1; Mueller et al., Publicação US 2005/0271665 A1.

Inibidores de Ácidos Nucléicos de atividade de CXCR4

Adicionalmente, os inibidores de ácido nucléico de atividade deSDF-1 foram descritos. Esses inibidores com base em ácido nucléico podemfuncionar tanto no nível de ligação de receptor como na expressão gênica eníveis traducionais. Os inibidores de ácido nucléico de atividade de CXCR4incluem, sem limitações, enzimas de ácido nucléico (tais como ribozimas),aptâmeros de ácido nucléico, ácidos nucléicos anti-sentido, e RNAi, tal comosiRNA. Certas modalidades específicas de inibidores de CXCR4 de ácidonucléico exemplares estão contidas nas seguintes referências: Lijima et al.,Patente US 6.429.308 B1; Guerciolini et al., Publicação US 2005/0124569A1; Eagles et al., Patente US 6.916.653 B2; Watson et al., Publicação US2005/0202077 A1.

No relatório descritivo, um "distúrbio retiniano" significa umacondição inflamatória, apoptótica, necrótica ou angiogênica que afeta a reti-na do olho. Tal condição pode envolver outras estruturas ou ainda tecidos,incluindo, sem limitação, a coróide e o epitélio pigmentado retiniano (RPE).

Contudo, em outras modalidades da presente invenção, os oli-gonucleotídeos e polipeptídios da presente invenção podem ser usados notratamento de qualquer condição ocular apropriada. Como usado aqui, uma"condição ocular" é uma doença, enfermidade ou condição que afeta ou en-volve o olho ou uma das partes ou regiões do olho. Falando de forma abran-gente, o olho inclui o globo ocular e os tecidos e fluidos que constituem oglobo ocular, os músculos perioculares (tais como os músculos oblíquos eretos) e a porção do nervo óptico que esta dentro ou adjacente ao globo ocular.

Uma condição ocular anterior é uma doença, enfermidade oucondição, que afeta ou que envolve uma região ou sítio ocular anterior (i.e.frente do olho), tal como um músculo periocular, uma pálpebra ou um tecidodo globo ocular ou fluido que está localizado antes de parede posterior dacápsula de lente ou dos músculos ciliares. Assim, uma condição ocular ante-rior afeta principalmente ou envolve a conjuntiva, a córnea, a câmara anteri-or, a íris, a câmara posterior (atrás da íris, mas em frente da parede posteriorda cápsula da lente), a lente ou a cápsula da lente e vasos sangüíneos enervos que vascularizam ou enervam uma região ou sítio ocular anterior.

Assim, uma condição ocular anterior pode incluir uma doença,enfermidade ou condição, tais como, por exemplo, afaquia; pseudofaquia;astigmatismo; blefaroespasmo; catarata; doenças conjuntivas; conjuntivite;doenças corneanas; úlcera corneana; síndromes do olho seco; doenças dapálpebra; doenças do aparelho lacrimal; obstrução do canal lacrimal; miopia;presbiopia; doenças da pupila; doenças refrativas e estrabismo. Glaucomapode ser considerado como uma condição ocular anterior porque uma metaclínica do tratamento do glaucoma pode ser reduzir a hipertensão do fluidoaquoso na câmara anterior do olho (i.e. reduzir a pressão intra-ocular).

Uma condição ocular posterior é uma doença, enfermidade oucondição que afeta ou envolve, principalmente, uma região ou sitio ocularposterior tal como coróide ou esclera (em uma posição posterior a um planoatravés da parede posterior da cápsula de lente), vítreo, câmara vítrea, reti-na, epitélio pigmentado retiniano, membrana de Bruch1 nervo óptico (i.e, odisco óptico), e vasos sangüíneos e nervos que vascularizam ou enervamuma região ou sítio ocular posterior.

Assim, uma condição ocular posterior pode incluir uma doença,enfermidade ou condição, tais como, por exemplo, neurorretinopatia macularaguda; doença de Behcet; neovascularização coróide; uveíte diabética; his-toplasmose; infecções, tais como infecções causadas por vírus ou fungos;degeneração macular, tais como degeneração macular aguda, degeneraçãomacular relacionada à idade não exsudativa e degeneração macular relacio-nada à idade exsudativa; edema, tais como edema macular, edema macularcistóide e edema macular diabético; coroidite multifocal; trauma ocular queafeta um sítio ou local ocular posterior; tumores oculares; distúrbios retinia-nos, tais como oclusão da veia retiniana central, retinopatia diabética (inclu-indo retinopatia diabética proliferativa), vitreorretinopatia proliferativa (PVR),doença oclusiva arterial retiniana, descolamento da retina, doença retinianauveítica; oftalmia simpática; síndrome de Vogt Koyanagi-Harada (VKH); difu-são uveal; condição ocular posterior causada por ou influenciada por um tra-tamento a laser ocular; condições oculares posteriores causadas por ou in-fluenciadas por uma terapia fotodinâmica, fotocoagulação, retinopatia porradiação, distúrbios da membrana epirretiniana, oclusão do ramo da veiaretiniana, neuropatia óptica isquêmica anterior, disfunção retiniana diabéticade não retinopatia, retinite pigmentosa, e glaucoma. Glaucoma pode serconsiderado uma condição ocular posterior porque a meta terapêutica é pre-venir a perda de ou reduzir a ocorrência de perda de visão devido à lesão ouperda de células retinianas ou de células do nervo óptico (i.e, neuroproteção).

Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere-sea composições para uso nos métodos descritos acima, e ao uso de taiscomposições.

Para "tratar", como usado aqui, significa lidar medicinalmente.Inclui administrar inibidores de atividade de CXCR4 para curar, mitigar, ouprevenir uma condição. Será entendido que um "inibidor de atividade deCXCR4" ou um "inibidor de CXCR4" significa um agente capaz de bloquearou de outro modo prevenir a geração ou propagação de um sinal seletivo deCXCR4 intracelular que seria, exceto pela presença do dito agente, capaz deser gerado ou propagado sob condições fisiológicas. Assim, tal inibidor podecompreender, sem limitação, um antagonista do receptor de CXCR4 ou daexpressão gênica de CXCR, um composto ou complexo capaz de se ligar aoSDF-1, e, portanto, prevenir ou impedir o SDF-1 de ativar o receptor de CX-CR4, ou um agente capaz de reduzir a expressão gênica de SDF-1.

Tais agentes podem compreender, por exemplo, e sem limita-ção, peptídeo ou componentes macromoleculares de oligonucleotídeo. Otermo "peptídeo" ou polipetídeo significa um composto que pode incluir umacadeia de dois ou mais aminoácidos, de ocorrência natural, não modificadosou não naturais ligados por pelo menos uma ligação peptídica. Um peptídeo,de acordo com a presente invenção, pode consistir também em, consistiressencialmente em, ou compreender um peptídominético. Como usado aqui,o termo "peptidomimético" é usado amplamente para significar uma moléculasimilar a peptídeo que é capaz de servir como modelo para um substrato depeptídeo sobre o qual ele é estruturalmente baseado. Tais peptidomiméticosincluem peptídeos quimicamente modificados, moléculas similares a peptí-deo contendo aminoácidos de ocorrência natural, e peptóides, que são mo-léculas similares a peptídeo resultantes da montagem oligomérica de glici-nas N-substituídas (vide, por exemplo, Goodman e Ro1 Peptidomimetics forDrug Design, em BURGERiS MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG DIS-COVERY Vol. 1 (ed. Μ. E. Wolff; John Wiley & Sons 1995), pp. 803-861),todos os volumes são aqui incorporados a título de referência.

Uma variedade de peptidomiméticos é conhecida da técnica in-cluindo, por exemplo, moléculas similares a peptídeo, que contêm um ami-noácido constrito, um componente não peptídico que mimetiza a estruturasecundária de peptídeo, ou um isóstero de ligação de amida. Um peptido-mimético que contém um aminoácido que não ocorre naturalmente pode in-cluir, por exemplo, um aminoácido α-metilado; uma α,α-dialquil-glicina ouácido α-aminocicloalcano carboxílico; um aminoácido Na-Ca-ciclizado; umaminoácido Να-metilado; um ácido β- ou γ-amino cicloalcano carboxílico; umaminoácido α,β-insaturado; um β, β-dimetil ou β-metil aminoácido; um 2,3-metano aminoácido β-substituído; um NCô ou Ccc-Cô ciclizado; ou uma proli-na substituída ou um outro mimético de aminoácido.

Além disso, um peptidomimético que mimetiza estrutura secun-dária de peptídeo pode conter, por exemplo, um mimético β-volta não peptí-dico; mimético de estrutura de β-folha; ou mimético de estrutura helicoidal,cada um dos quais é bem conhecido da técnica. Um peptidomimético podeser também uma molécula similar a peptídeo que contém, por exemplo, umisóstero de ligação de amida tal como uma modificação retroinversa; umaligação de amida reduzida; uma ligação de metilenotioéter ou de sulfóxido demetileno; ligação de metileno éter; ligação de etileno; ligação de tioamida;ligação de transolefina ou de fluorolefina; anel de tetrazol 1,5-dissubstituído;ligação de cetometileno ou fluorcetometileno ou um outro isóstero de amida.Aquele versado na técnica entende que esses e outros componentes pepti-domiméticos estão englobados no significado do termo "peptidomimético"como usado aqui. O termo "polipeptídeo" ou "peptídeo" deve incluir peptido-miméticos a menos que expressamente indicado de outro modo. Além disso,uma proteína ou um polipeptídeo, de acordo com a presente invenção, deveser entendido como consistindo em, consistindo essencialmente e, ou com-preendendo um ou mais peptídeos.

Um "oligonucleotídeo" ou "ácido nucléico", de acordo com a pre-sente invenção, pode compreender dois ou mais desorribonucleotídeos ouribonucleotídeos naturais ou não naturais ligados por uma ligação de fosfo-diéster, ou por uma ligação que mimetiza uma ligação de fosfodiéster paraum grau terapeuticamente útil. De acordo com a presente invenção, um oli-gonucleotídeo será normalmente considerado como sendo de fita simples amenos que estabelecido ao contrário ou de outro modo óbvio do contexto, eum ácido nucléico pode ser de fita simples ou de fita dupla. Adicionalmente,um oligonucleotídeo ou ácido nucléico pode conter um ou mais nucleotídeosmodificados; tal modificação pode ser feito de modo a aperfeiçoar a resis-tência à nuclease do oligonucleotídeo, para aperfeiçoar a capacidade de hi-bridização (por exemplo, elevar a temperatura de fusão ou Tm) do oligonu-cleotídeo resultante, para auxiliar a alvejar ou imobilizar o oligonucleotídeoou ácido nucléico, para uma mistura com tais propósitos, ou para algum ou-tro propósito.

Tais modificações podem incluir derivados de oligonucleotídeostendo modificações na base nitrogenada, incluindo substituição do grupoamino na posição 6 da adenosina por hidrogênio para render purina; substi-tuição do oxigênio 6-ceto de guanosina com hidrogênio para render 2-aminopurina, ou com enxofre para render 6-tioguanosina, e substituição dooxigênio 4-ceto da timidina ou com enxofre ou com hidrogênio para produzir,respectivamente, 4-tiotimidina ou 4-hidrotimidina. Todos esses análogos denucleotídeo podem ser usados como reagentes para a síntese de oligonu-cleotídeos. Outras bases substituídas são conhecidas na técnica. Vide, porexemplo, Cook et al., Publicação Internacional WO 92/02258, intitulado "Nu-clease Resistant, Pyrimidine Modified Oligonucleotídes that Detect and Mo-dulate Gene Expression", que é aqui incorporada a título de referência. Deri-vados de nucleotídeos modificados com base podem ser comercialmenteobtidos para síntese de oligonucleotídeos.

Similarmente, vários derivados de nucleotídeos são reportadostendo modificações da fração ribofuranosila ou desorribofuranosila. Vide, porexemplo, Cook et al., Publicação Internacional WO 94/19023, intitulado "Cy-clobutyl Antisense Oligonucleotídes, Methods of Making and Use Thereof";McGee et al., Publicação Internacional WO 94/02501, intitulado "Novel 2'-0-Alkyl Nucleosides and Phosphoramidites Processes for the Preparation andUses Thereof", e Cook, Publicação Internacional WO 93/13121, intitulado"Gapped 2'-Modified Oligonucleotides". Por exemplo, grupos 2'-amino, 2'-C-alil, 2'-flúor, 2'-0-metil, e 2Ή tendem a conferir resistência à nuclease e per-mitir a hibridização entre o nucleotídeo modificado e uma nucleotídeo inalte-rado na fita anelada. Cada uma dessas publicações é aqui incorporada atítulo de referência.A maioria dos oligonucleotídeos compreendendo tais bases mo-dificadas foi formulada com absorção celular aumentada, resistência à nu-clease, e/ou, tendo em mente, ligação de substrato. Em outras palavras, taisoligonucleotídeos são descritos como agentes moduladores de genes tera-pêuticos.

Ácidos nucléicos tendo resíduos de nucleotídeos modificadosexistem na natureza. Assim, dependendo do tipo ou da fonte, bases modifi-cadas em RNA podem incluir bases metiladas ou dimetiladas, bases desa-minadas, bases carboxiladas, bases tioladas e bases tendo várias combina-ções dessas modificações. Adicionalmente, bases 2'-0-alquiladas são co-nhecidas por estarem presentes em ácidos nucléicos de ocorrência natural.Vide, por exemplo, Adams et al., The Biochemistry of the Nucleic Aeids (11aEd., 1992), aqui incorporada a título de referência.

Seqüências de Aminoácidos e Nucleotídeos de CXCR4a presente exposição não tem a intenção de ser uma listagemexclusiva de formas de peptídeos e ácidos nucléicos de CXCR4 ou seus ini-bidores, mas é fornecida para aumentar a descrição proporcionada em outrolocal neste relatório descritivo, tal como, por exemplo, em publicações incor-poradas a título de referência como parte desta exposição.

Seqüências de aminoácidos de CXCR4 humano foram determi-nadas e são uma questão de registro público. As seqüências de aminoáci-dos de CXCR4 humano foram determinadas e é uma questão de registropúblico. A seguinte seqüência de CXCR4 humano tem número de acessoNCBI P61073. Todas as seqüências de aminoácidos mostradas são de ter-minação N à terminação C e todas as seqüências de nucleotídeos mostra-das são de 5' a 3', a menos que de outro modo indicado.

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SEQ ID NO:1

Seqüências de cDNA de CXCR4 humano são como a seguir.cDNA de CXCR4 - Variante 1:ttttttttct tccctotagt gggcggggca gaggagtlag ccaagatgtg actttgaaaccclcagcgtc tcagtgcoct tttgUclaa acaaagaatí ttgtaattgg Uctaccaaagaaggatata atgaagtcac tatgggaaaa gatggggagg agagttgtag gattcteeattaattctctt glgcccttag cocactactt cagaatttcc tgaagaaagc aagcctgaattggtttttta aattgcttta aaaatttttt ttaactgggt taatgcttgc tgaattggaagtgaatgtcc eitoctttgc ctcttttgca gatatacaot tcagatsact acaccgaggaaa Igggctca ggggactatg actócatgaa ggaaccctgt ttccgtgaag aaastgctaatttceataea atcttcctgc ccaccateta ctccatcatc Hcttaactg gcattgtgggcaatggattg gfcatoctgg tcatgggtta ccagaagaaa ctgagaagca tgacggacaaglacaggttg caoctgtcag tggcogaoct cctctttgtc atcacgcttc ccttctgggc

agttgatgcc gtggcaaact ggfactttgg gaacttccta tgcaeggcag tecatgtcatctacacagte eacctctaca gcagtgtcd catcctggcc ttcateagte tggacogctaoclggccatc gtccaogcca ccaacagtca gaggccaagg aagctgttgg ctgaaaaggtgglclatgU ggogtcígga tooctgcoct ccígcígact attcccgact tcatctttgccaaogtcag» gaggcagatg acagatatat ctgtgaccgc ttctacccca atgacttgtgggtggttgtg ttccagtttc agcacatcat ggttggoctt atectgoctg gtgttgtcatoctglccigc tatigcatts tcatctooaa gctgtcacac tccaagggco accagaagcgcaaggccctc aagaccaceg tcatoctcat cctggctttc ttcgcctgtt ggcígocttactòcattggg atcagcateg adccttcat cctccíggaa atcatcaagc aagggtgtgagtltgagaac actgtgcaca agtggatttc catcaocgag gcoctagctt tcttccaclgUgtctgaac eccatectct atgctttcet tggagccaaa tüaaaacct ctgcccagcacgeactcacc Ictgtgagca gagggiccag cetcaagate ctctecaaag gaaagcgaggtggacatlca tctgtttcca clgagtctga gtetteaagt ttteacteca gcJaacacagatgtaaaaga ctítttttta tacgataaat aacttítttt taagttaeac atttttcagatataaaagae tgaoeaatât tgtacagttí ttattgcttg ttggatfflt gtcttgtgtttctttagttt ttgtgaagtt taattgac» aütatataa attttttttg tttcatattgatgtgtgtct aggcaggacc tgtggccaag ttcttagttg ctgtatgtct cgtggtaggactgtagaaaa gggaacígaa eattecagag cgtgtagtga etcacgtaaa gctegaaatgatccccagct gtttatgcat agataatctc tcoattcccg tggaacgttt ttccigttcttaagacgtga tttlgctgta gaagatggea cttataacca aagcccaaag tggtatagaaatgctggttt tícagltttc aggagtgggt tgatttcagc acctacagtg tacagtcttgtattaagttg tiaataaaag tacatgttea acttaaaaaa aaaaaaaaaa aa

SED ID NO:2

Número de Acesso no GenBank MN_001008540 (9 de dezem-bro de 2005).

Este cDNA codifica uma proteína de CXCR4 tendo uma seqüên-cia de aminoácidos mais longa que o CXCR4 mostrado na SEQ ID NO:1.Códons iniciadores no quadro (+2) são encontrados nas posições 131 e 152,com um códon de terminação na posição 220. Um códon iniciador adicionalé encontrado na posição 305, em cujo ponto a seqüência de nucleotídeospermanece idêntica àquela da SEQ ID NO:3, mostrada abaixo, que codificaa SEQ ID NO:1. Outros códons iniciadores no quadro são encontrados nasposições 362, 386, 506, 530, e 929. O códon iniciador presentemente prefe-rido nesta porção do quadro é localizado na posição 1372. Dadas essas ca-racterísticas, um gênero de isoformas possíveis é descrito ou sugerido nestaexposição, tendo vários 5'-terminais, mas com cada um com uma extremi-dade C terminando nos aminoácidos SSFHSS.

cDNA de CXCR4 humano - Variante 2:

Nessa seqüência de variante de CXCR4, o códon iniciador ATGque codifica a SEQ ID NO:1 começa no resíduo 96 e prossegue para o resí-duo 1151. A região 5' não traduzida e a terminação N da proteína traduzidasão diferentes daquela da seqüência de DNA de, e a respectiva proteínacodificada por, SEQ ID NO:2, mas começando com o resíduo 6 da proteínacodificada por este cDNA (correspondente ao resíduo de nucleotídeo 108),as seqüências de aminoácidos são novamente idênticas.

aacttcagtt tgttggctgc ggcagcaggt agcaaagtga cgccgagggc ctgagtgctccagtagccac cgcatctgga gaaccagcgg ttaocatggs ggggalcagi etatacacttcagataacta caccgaggaa atgggctcag gggactatga ctccatgaag gaaoccígtttccgtgaaga aaatgetaat ttcaatâaaa ícttccágcc caccatctac tccatcatcttettaactgg cattgtgggc aatggattgg ícatcctggt catgggttac cagaagaaactgagaagcat gacggacaag tacaggcígc acctgtcagt ggccgacctc ctctttgtcatcacgcttcc cttetgggca gltgatgccg tggcaaactg g laotttggg aacttcçtatgoaaggcagt ccalgtcatc tacacagíca acctctacag cagtgtocta atcctggccttcatcagtdggaccgctac ctggocatcg tccacgccac caacagteag aggccaaggaagctgtiggc tgaaaaggtg gtctatgttg gcgtctggat ccclgccclc clgdgactattcccgactt catctttgcc aacgtcagtg aggcagatga cagatatatc tgtgaccgcttçtaccecaa tgacttgtgg gtggttgtgt tocagtttca gcacataatg gttggocttatcctgcctgg tatigtcatc ctgtcctgct attgcattat catclccaag ctgtcacactccaagggcca ccagaagcgc aaggcctíca agaccacagt catectcatc Cíggctacttcg cctgttg gctgccttac tacattgggs tcagcatcga ctccttcatc ctoctggaaatcatcaagca agggtgtgag tttgagasca ctgtgcacaa gtggatttce atoaccgaggccctagcttt cttccactgt tgtctgaacc ccatccteta tgctttcctt ggagccaaatUaeaacctc tgcccagcac gcactcacct cigtgagcag agggtccagc Ctcaagatcctctocaaagg SBagcgaggt ggacatioat ctgtttccac tgagtctgag tcttcaagtttícactccag ctaacscaga tgtaaaagac ttttttttat acgataaata acttttmtaagttacaca tttttcagat ataaaagact gaccaatatt gtacagtttt tattgcttgttggafitttg tcttglgttt ctttagtttt tgtgaagít! aattgactta tttatataaattttttttgt ttcatattga tglgtgtcta ggcaggacct gtggccaagt tcttagttgctgtatgtctc gtggtaggac igtagaaaag ggaactgaac sttooagago gtgtagtgaatcacgtaaag ctagaaatga tccccagctg tttatgcata gstaatctct ccattccogtggaacgtttt tcctgttctt aagaogtgat tttgctgtag eagatggcac ttataaccaaagocoaaagt ggtatagaaa ^etggIta tcagttttca ggagtgggtt gatttcagcacetaesgtgt acagtcttgt attaagttgt taataaaagt acatgttaaa cttaaaaaaaaaaaaaaaaa a

SEQ ID N0:3

Número de Acesso no GenBank MN_003467 (9 de dezembro de2005).

A partir de 25 de novembro de 2005 o National Center For Biote-chnology Information (NCBI) passou a manter um catálogo, na internet, NC-BI, publicamente disponível, de 1.125 entradas de seqüências de aminoáci-dos de várias espécies relacionadas ao CXCR4. Todas as seqüências deCXCR4 e SDF-1 listadas nele são aqui incorporadas a título de referência.Seqüências de Aminoácidos e Nucleotídeos de SDF-1

Em vários relatos, o primeiro resíduo de SDF-1 maduro é o resí-duo de lisina, correspondente à posição 21 da SEQ ID N0:4, 5, e 6 das se-guintes seqüências de aminoácidos de SDF-1. O seguinte resíduo de prolinamostrou ser importante para a atividade de SDF-1, pois uma substituiçãodeste resíduo com, por exemplo, glicina conserva a atividade de ligação deCXCR4 enquanto SDF-1 é convertido em um antagonista de CXCR4. Videtambém Crump et al., The EMBO J. 16:6996-7007 (1997), aqui incorporadoa título de referência em sua totalidade.SDF-1 α Humano

mnakwwlv Mtalcted gkpvslsyrc pcrffeshva ranvkhlkil nípacalqiv arlknnnrqv cidpkikwiqGylekalnk

SEQ ID NO:4

Número de Acesso no NCBI: NP_954637 (25 de novembro de2005)

SDF-1 β Humano

mnakwwlv IvftaIqlsd gkpvslsyrc pcrffesbva rarwkhlkil ntpncalqtv arlknnnrqv cidpklkwíqeytekalnkr fkm

SEQ ID NO:5

Número de Acesso no NCBI: NP_000600 (25 de novembro de2005)

SDF-1 γ Humano

mnakwwlv Mtalclsd gkpvslsyrc pcrffestwa ranvkhlkB ntpncalqrv arlknnnrqv ctdpklkwiqSEQ ID NO:6

Número de Acesso no NCBI: NP_001029058 (25 de novembrode 2005)

Seqüências de cDNA de SDF-1Variante 1 de cDNA de SDF-1 (SDF-Ia)

gcactUcac tctcogtcag ccgcattgcc cgctcggogt ccggcccccg acccgogctctcqgcecgc ccgcccgccç gcccgegcca tgaacgccaa ggtcgtggtc gtgctggtcctegtgctgac cgogctalgc ctcagcgacg ggeagcccgí cagcctgagc tacagatgcecatgcegait CttDgaaagc catgttgoca gagccaacgt caagcatctc aaaetictcaacactccaaa ctgtgccctt cagattgtag cceggctgaa gaacaacaac agacaagtgtgcattgaccc gaagcíaaag tggattcagg agiacctgga gaasgcttta aacaagtaagcacaacgpcc aaaaaggact ttccgctaga cccactcgag gaaaactaaa acctlgtgagagatgaaagg gcaaagacgt gggggagggg gccttaacca tgaggaceag gtgtglgtgtggggtgggca cattgstctg ggaíogggoc tgaggtttgc cageatttag aoeçtgcatttatagcatac ggtatgatat Igcagcttat aKcatccat gcoctgtacc tgtgcacgttggaactttta ttactggggt tUtctaaga aagaaattgt attatcaace gcattttcaagcagttagtt cctlcatgal catcacaatc atcatcattc tcattctcat tttttaaatcaacgagtact tcaagatctg aatttggctt gtttggagca tctcctctgc tcccctggggagtctgggca cagtcaggtg gtggcttaac agggagctgg eaaaagtgie ctttcttcagacactgaggc tcccgcsgca gcgcccctcc caagaggaag gcctctgtgg cactcagataocgactgggg ctgggcgccg ccactgoctt caoctcctct ttcaacctca gtgattggctctgtgggctc catgtagaag ccactattac tgggacigtg ctcagagacc cctctcocagctattoctac tctctccccg actccgagag catgcttaet ettgcttctg cttctcatitctgiagcctg atcagcgccg caccagccgg gaagagggtg attgctgggg ctcgtgccctgcatccctct ccteccaggg Cctgccccac agetcgggcc ctcágtgaga tcegtctttggodtectcca gaatggagct ggccctctcc tggggatgtg taatggtcoc cctgctíacccgcaaaagac aagtctttac agaatcaaat gcaatttíaa atotgagagc tcgctttgagtgactgggtt ttgtgattgc ctctgsagcc tatgtaigcc etggaggçac taacaaactcIgaggtttoG gaaatcagaa Qegaaaaaat cagtgaataa accatcatct tgcoactacccoctcctgaa gccacagcag ggütcaggt tccaatcaga actgttggca aggtgaca»Iccatgcata aatgogatcc acagaaggtc ctggtggíaí ttgtaacttt ttgcaaggcaUtttttata tatatttttg tgcacatttt tttttacgtt tçtttagaaa acaaatgtatttcaaaatat atttatagtc gescaattca tatatttgaa gtggagccat atgaatglcsgiagtttata cttoctati stctcaaact sctggcaatt tgtaaagaaa tatatatgataíataeatgt gattgcagct Ittcaatgtt agccacagtg tattttttca cttgtactaaaattgtatca aatgígaest tatatgcact agcaataaaa tgctaattgtttcatggtataaacgtccta ctgíatgtgg gaatttattt acctgaaata aaattcatta gttgttagtgatggagcttã aaaaaaaSEQ ID Ν0:7

Número de Acesso no GenBanK: MN_099068 (9 de dezembrode 2005)

Variante 2 de cDNA de SDF-1 (SDF-13)

geaetttcac tetccgtcag ccgcattgcc cgctcggcgt ocggcooocg acoogcgctcgtccgoccgc ccgccogccc gcccgcgcca tgaacgccaa ggíogtggtc gtgctggtcctcgtgctgac cgcgctctgc ctcagcgacg ggaagcccgt cagcctgago tacagatgoccatgccgatt cttcgaaagc catgttgcca gagccaacgt ceagostcte aaaaUctcaacactccaaa ctgtgççctt cagattgtag cocggctgaa gaacaacaac agacaagtgtgcattgaccc gaagctaaag tggattcagg agtactígga gaaagctaa aacaagaggttcaagaigtg agagggtcag acgcctgagg aaocctiaca glaggagocc agctetgaaaccagtgttag ggaagggcct gccacagcct cqcctgccag ggcagggccc caggcattgccaagggcttl gttttgcaca ctttgocata Kttcacca t Bgattatgt agcaaaatacatgacaltía MUcattt agtttgatta tteagtgtca ctggogaoac gtagcagcttagactaaggc cattattgta cttgccttat tagagtgtct ttocacggeg ccactodtctgactcagggc tccigggU! tgtattetct gagctgtgca ggtggggaga ctgggctgagggagcctggc occatggtca gcccSagggt ggagagccac caagagggac gcctgggggtgocaggacca gtcaaoctgg gcaaagccta gtgaaggctt ctctctgtgg gatgggatggtggagggcca catgggaggc tcaccccctt ctocatccac atgggagccg ggtctgcctcttctgggagg gcagcagggc tacoctgagc tgaggcagca gtgtgaggcc agggcagagtgagacccagc cctcatcccg agcacctcca catcctccac gttctgctca tcatfctctgtctcatccat catcatgtgt glccacgact gtctccatgg ccccgcaaaa ggactctcaggaccaaagct ücatgtaaa ctgtgcacca agcaggaaat gaaaatgtet tgtgtlaoctgaaaacactg tgcacatctg tgtcttgtit ggaatattgt ccattgtcca atcctatgtttttgttcaaa gccagcgtcc tccíctgtga ceaatgtctt gatgcatgca cígítccccctgtgcagccg ctgagcgagg aga Igctcct tgggeccttt gagtgcagtc ctgatcagagccgtggtect ttggggtgaa ciaccttggt tcccccactg atcacaaaaa catggtgggtccatgggcag agcccaaggg aattcggtgt gcaccagggt tgaccccaga ggattgctgccccatoagtg ctccctcsca tgtcagtacc ttcaaácteg ggccaagccc agcactgcttgaggaaaaca agcaitcaca settgttm ggtttttaaa eeccagtcca caaaataaccaatcctggac atgaagatte Utcocaatt cacatctaac cteatcttat tcaccatttggcaatgccat catctcctgc cttcctcctg ggoccíctot gctctgcgtg tcacctgfgcttegggcocí tcccacagga catttctcta agagaacaat gtgctatgtg aagagtaagtcaacctgeet gacatttgga gtgltoccct tocaotgagg gcagtcgata gagctgtattaagccaetta aaatgttcao Wgacaaa ggcaagcact tgtgggtttt tgtttlgtttttcattoagt cttacgaata ctülgccct ttgattaaag actccagtta aaaaaaattttaatgaagaa agtggaaaao aaggaagtca aagcaaggaa actatglaac atgtaggaag

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SEQ ID N0:8

Número de acesso no GenBank: MN_000609 (9 de dezembro de2005)

Variante 3 de cDNA de SDF-1gcactttcac íçtccglcag ccgcatígcc cgctcggcgt ccggcccccg acccgcgctcgicogcccgc ccgccçgçcc gcccgcgcca tgaacgccaa ggtcgtgglc gtgcíggtcctogtgctgac cgogctçtge çtcagcgaog ggaagcccgt cagcctgagc lacagatgcccatgccgatt cttcgaaagc catgiígcca gagccaacgí caagcatctc aaaaflctcaacactccasa ctgtgcoctt cagaügtag cccggctgaa gaacaacaac agacaagtgtgcattgaccc gaegctaaag tggattcagg agtacctgga gaaagcttta aacaaggggcgcagagaaga aaaagtgggg aaaaaagaaa agataggaaa aaagaagcga cagaagaagagaaaggctgc ccagaaaagg saaaactagt tatctgccac ctcgagatgg a

SEQ ID NO:9

Número de acesso no GenBank: MN_001033886 (9 de dezem-bro de 2005)

A translação de SDF-1 das SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:3, ecomparação dos peptídeos resultantes mostram que enquanto a maioria dosdois peptídeos é idêntica (até o resíduo 89 do peptídeo do SDR-1), os C-terminais dos dois peptídeos variam, sendo o peptídeo traduzido da Variante2 de 93 aminoácidos de comprimento e o peptídeo traduzido da Variante 3sendo de 119 aminoácidos de comprimento. O peptídeo resultante da Vari-ante 1 é idêntico a esses dois peptídeos ao longo da mesma região de iden-tidade, mas termina no resíduo 89.

Aqueles versados na técnica reconhecerão que já que os primei-ros 89 aminoácidos de SEQ ID NO: 4, 5, e 6 são idênticos, o desenho decertos inibidores, tais como, por exemplo, inibidores de RNAi, das isoformasde SDF-1 seria de rotina à luz da invenção no relatório descritivo.

Aqueles versados na técnica estão também cientes que inibido-res podem ser direcionados no total ou em parte para as regiões 5' e 3' nãotraduzidas (UTRs) de uma ou mais variantes de cDNA. É comumente co-nhecido que RNAi e oligonucleotídeos anti-sentido são capazes de inibir atradução de mRNA na região de codificação, na UTR 5' e na UTR 3', e mo-delos de RNAi podem ser feitos que são complementares a estas regiões,ou a regiões que ligam duas de tais regiões. Naturalmente, mais que ummodelo de RNAi pode ser usado, com vários locais no mRNA sendo marca-dos para digestão de mRNA induzida por RNA e inibição de tradução.

Aqueles versados na técnica reconhecerão que a revelação aquidas seqüências de aminoácidos proporcionam descrição escrita explícita decada e de todas as seqüências de nucleotídeo que codificam essas seqüên-cias de aminoácidos. Além disso, aqueles versados na técnica reconhecemque é agora uma questão de rotina para aquele versado na técnica obter umácido nucléico usando códons selecionados para expressão ótima, em umdado hospedeiro, de modo a otimizar a produção de tais seqüências.

Inibidores de CXCR4 Polipeptídicos

Inibidores de polipeptídeos de atividade de CXCRA podem inclu-ir peptídeos, polipeptídeos, e proteínas. Em modalidades particularmentepreferidas da invenção, o agente terapêutico pode compreender uma proteí-na, um derivado de SDF-1 modificado que compreende uma região de liga-ção de CXCR4 (mas carecendo de atividade estimuladora de CXCR4), umanticorpo policlonal ou monoclonal, um fragmento de anticorpo, tal como,sem limitação, um fragmento de papaína de ligação ao antígeno de fraçãomonovalente (Fab) ou um fragmento de pepsina de ligação ao antígeno defração bivalente (Pab2). Adicionalmente, os anticorpos ou fragmentos deanticorpo podem ser naturais ou geneticamente engenheirados.

Por exemplo, o termo "anticorpos" pode incluir anticorpos quimé-ricos compreendendo regiões humanas Lc e Hc e regiões Lv e Hv de outrasespécies, por exemplo, de células de camundongo, bode, coelho e carneiro.Preferivelmente, a espécie não humana é um camundongo. Anticorpos qui-méricos são úteis no desenho de fármacos com base em anticorpos, já queo uso de anticorpos de camundongo não alterados induz à produção de i-munoglobulinas anti-camudongo humanas e depuração resultante e reduçãoda eficácia.

Contudo, anticorpos quiméricos, embora tenham imunogenicida-de reduzida em comparação com o anticorpo de roedor, não resolvem osproblemas que existem no uso de anticorpos como fármacos. Por exemplo,para minimizar a variação alotípica nas regiões constantes uma seqüênciade consenso humana pode ser usada representado o alótipo mais comumna população geral. Um outro refinamento tem sido usado, chamado de en-xerto de região determinadora de complementaridade (CDR). Nesse método,somente três sítios de ligação de antígeno (formados pelas três CDRs dacadeia pesada e as três CDRs da cadeia leve) são excisados dos anticorposde murino e as regiões de ácido nucléico que codificam estas CDRs foraminseridas (ou "enxertadas") em uma seqüência de codificação de ácido nu-cléico que codifica a região de estrutura do anticorpo humano.

Outros refinamentos podem compreender aquele que foi deno-minado "remodelagem", "envernizamento" e "hiperquimerização". Na remo-delagem, a região variável de roedor é comparada à seqüência de consensodo subgrupo de seqüências de proteínas ao qual ela pertence, como é a es-trutura humana em comparação com um consenso da seqüência de estrutu-ra para a família de anticorpos à qual ela pertence. Essa análise pode identi-ficar resíduos de aminoácidos que podem ser o resultado de mutação duran-te o processo de maturação de afinidade; esses resíduos são chamados de"idiossincráticos". Por incorporação dos resíduos humanos mais comunsnessas posições, os problemas de imunogenicidde resultantes dos resíduosidiossincráticos podem ser minimizados.

A humanização por hiperquimerização envolve uma comparaçãodas seqüências de região de não CDR humanas e de murino e aquela com amaior homologia é selecionada como a estrutura de aceptor. Novamente, osresíduos idiossincráticos são substituídos com aqueles humanos mais alta-mente conservados. Aqueles resíduos não CDR que podem interagir com osresíduos são identificados e inseridos na seqüência da estrutura.

Envernizamento envolve determinar a conformação dimensionalde um anticorpo de murino humanizado e substituição dos aminoácidos ex-postos na superfície com aqueles comumente encontrados em anticorposhumanos. Na primeira etapa, as regiões variáveis humanas mais homólogassão selecionadas e comparadas com as regiões variáveis de camundongocorrespondentes. Na segunda etapa, os resíduos de estrutura de camun-dongo diferindo da estrutura humana são substituídos com os resíduos hu-manos; somente aqueles resíduos integral ou parcialmente expostos na su-perfície dos anticorpos são alterados.

No presente caso, o inibidor desejado pode ser direcionado parase ligar, por exemplo, a uma molécula de SDF-1 ou a uma molécula de re-ceptor de CXCR4. No primeiro caso, um polipeptídeo de ligação anti-SDF-1,quando deixado contatar o SDF-1 em um tecido ou célula, impedirá que amolécula de SDF-1 ative um receptor de CXCR4 em tal tecido ou célula. Deoutro modo, o inibidor pode ser um polipeptídeo anti-CXCR4, tal como umantagonista de CXCR4 ou antagonista reverso.

Um exemplo de tal inibidor pode ser, por exemplo, o anticorpoanti-CXCL12/SDF-1 β vendido por R&D Systems (614 McKinIey Place NE,Mineápolis, MN 55413) sob o número de catálogo AF-351-NA e descrito co-mo um IgG CXCL12/SDF-ip. Essa preparação de anticorpo policlonal foipreparado em bodes imunizados com CXCL12/SDF-1p humano, recombi-nante, derivado de E. coli, purificado. Esse anticorpo foi primeiramente puri-ficado por passagem do mesmo em soros de bode em uma coluna de afini-dade por SDF-1 β, e então a fração não ligada foi posteriormente purificadapor ligação a uma coluna de afinidade por SDF-1 β .

Essa preparação de anticorpo tem uma dose de neutralização(ND50) (aquela concentração requerida para produzir 1/2 de inibição máximada atividade de citocina em uma linhagem de célula responsiva, quando a-quela citocina está presente em uma concentração somente alta o suficientepara elicitar uma resposta máxima) de aproximadamente 10-30 μg/mL empresença de 10 ng/mL de CXCL12, como ensaio que mede a quimiotaxia decélulas BaF/3 transfectadas com CXCR4 humano.

Além disso, conforme explicado acima, é agora rotineiro usarvários métodos, incluindo, sem exceção, métodos de modelagem computa-dorizada, para construir anticorpos humanizados derivados originalmente de,por exemplo, anticorpo de bode, rato, camundongos, ou de coelho. A regiãovariável de anticorpos tendo mais que um nível de limite de avidez para o mRNA de CXCR4 ou de SDF-1 pode ser seqüenciada e usada para propor-cionar a base para um anticorpo ou derivado de anticorpo terapêutico. Vide,por exemplo, Hodxie et al., Patente US 5.994.515 (que descreve anticorposdirecionados para CXCR4); Mueller et al., Patente US 6.949.243 (que des-creve preparações de anticorpos tendo atividade anti-CXCR4 e anti-SF-1);Plaskin et al., Publicação de Patente US 2005/0266009 (descrevendo anti-corpos direcionados contra CXCR4).

Derivados de SDF-1 carecendo de atividade estimuladora deCXCR4 foram descritos, por exemplo, por Clark-Lewis et ai., Patente US6.875.738 (que descreve derivados inibidores de CXCR4 de SDF-Ia e SDF-1β). Huang et al., Publicação US 2003/0220482, descrevem peptídeo anti-CXCR4 derivados de Proteína Il Inflamatória de Macrófago de vírus HHV8(herpesvírus 8 humano).

Inibidores de CXCR4 adicionais são conhecidos da técnica. E-xemplos são descritos, por exemplo, por Tudan et al., na Publicação US2006/0014682; Clark-Iewis et al, na Patente US 2005/0265969.Inibidores de CXCR4 de Ácido Nucléico

Inibidores de atividade de CXCR4 podem compreender tambémcomposições que contêm um componente de ácido nucléico. Tais ácidosnucléicos podem incluir, sem exceção, moléculas de RNAi, tais como dsRNAe siRNA.

Ácidos nucléicos inibidores podem compreender, por exemplo,um oligonucleotídeo de fita simples suficientemente complementar a umaregião de mRNA alvo de modo que o dito oligonucleotídeo impede a tradu-ção do dito mRNA. Em certas modalidades, a dita região compreende a 5'-UTR, o sítio de ligação de ribossomo do dito mRNA, a região de codificaçãodo dito mRNA, e podem incluir o códon iniciador 5' do dito mRNA. Outrosalvos podem incluir o 3'-UTR.

O dito oligonucleotídeo pode compreender um ou mais resíduosde nucleotídeos modificados (tal como, sem limitação, um nucleotídeo 2Όalquila); preferivelmente, o dito resíduo de nucleotídeo modificado conferepelo menos um de resistência à nuclease ou atividade de ligação superior.Será entendido que, como usado aqui, um oligonucleotídeo pode compreen-der um ácido nucléico de peptídeo, ou outro mimético de ácido nucléico. Deacordo com um aspecto da presente invenção, o mRNA alvo pode ser ummRNA de CXCR4; de acordo com um outro aspecto da presente invenção, omRNA alvo pode ser um mRNA de SDF-1.

Além dos oligonucleotídeos anti-sentido, um outro ácido nucléicoinibidor pode compreender um componente de RNAi. RNAi é RNA inibidor.Restrição de ácidos nucléicos estranhos, tais como vírus e elementos trans-poníveis (transposons) por mecanismos de RNAi1 é um fenômeno inerente eque ocorre naturalmente em muitas plantas, vertebrados e invertebrados, econstitui um "sistema imunológico" no nível genético. RNAi é um fenômenono qual um RNA de fita dupla (dsRNA) que está relacionado em seqüência aum mRNA específico pode causar uma degradação seletiva daquele RNA.

Um aspecto do mecanismo de RNAi envolve uma molécula deRNA de fita dupla (dsRNA), que é clivada dentro da célula por uma enzimadenominada "Dicer", resultando em fragmentos do dsRNA original que com-preende cerca de 21 a cerca de 23 nucleotídeos de comprimento, ou queconsiste em um fragmento de RNA de fita dupla de 21 a 23 nucleotídeos decomprimento. Esses fragmentos de RNA de interferência curto (siRNA) têmum 5'fosfato e 3' hidroxila e um 3' pendente que compreende normalmente 2a 3 nucleotídeos em cada extremidade. Em outros aspectos da invenção, osiRNA é desenhado e usado sem um precursor de dsRNA. Certos aspectospodem ser pendentes mais longos, incluindo 3 ou 4 nucleotídeos.

O siRNA então se associa a um complexo de proteína chamadoo complexo silenciador induzido por RNA (RISC). Esse complexo compreen-de múltiplos componentes, e é ativado por ATP. As atividades associadas aocomplexo incluem uma helicase, um dsRNA nuclease e uma atividade deRNA polimerase dependente de RNA; verificou-se que todas essas ativida-des eram essenciais para RNAi em Drosophila, C. elegans, e Neurospora. OsiRNA permite que o complexo seja alvejado a um mRNA particular. Umavez que o RISC tenha se ligado ao mRNA alvo, há uma clivagem indepen-dente de ATP do RNA alvo por uma atividade de RNAse associado ao RISCdenominada Slicer.

Relativamente, umas poucas moléculas de dsRNA são requeri-das para silenciar gene induzido. Assim, parece ser um mecanismo catalíticoou de ampliação no trabalho. A atividade de RNAse dependente de RNAparece produzir siRNAs secundários através de um processo de ampliaçãono qual o siRNA original é iniciador estendido usando o mRNA alvo comoum molde de um modo similar à PCR.

A distribuição de espécies de RNA longo (dsRNA) ou curto (siR-NA) às células resulta em uma certa quantidade de toxidez através da indu-ção da via de resposta ao estresse (também chamada de resposta ao inter-feron) em vertebrados; contudo, siRNA parece ser mais lento para induzir atoxidez e o grau de tal toxidez é geralmente menos grave que o dsRNA. Adi-cionalmente, a maioria dos estudos que mostram a toxidez do dsRNA em-pregou lipídios catiônicos como um dispositivo de distribuição. Outros méto-dos de distribuição, tais como aqueles envolvendo síntese de dsRNA intra-celular usando vetores de expressão, parecem induzir silenciamento de ge-ne em indução da resposta ao estresse.

A introdução de ácidos nucléicos dentro de células marcadastem, tradicionalmente, envolvido lipofecção, eletroporação, e microinjeção.Mais recentemente, sistemas de expressão de RNAi com base em vetor, taiscomo aqueles descritos por Lee et al„ em 19 NATURE BIOTECHNOLOGY500 (maio de 2002); Miyagishi et al., 19 NATURE BIOTECHNOLOGY 497(maio de 2002); e Tuschi, 20 NATURE BIOTECHNOLOGY 446 (maio de2002), demonstraram que são capazes de produzir siRNA para infra-regularexpressão gênica em células de mamíferos. Essas referências são aqui in-corporadas a título de referência em sua totalidade.

Como um meio de silenciar a expressão gênica de qualquer umou ambos o CXCR4 e o SDF-1, RNAi pode ser bastante útil como um agenteterapêutico (um inibidor de atividade de CXCR4). RNAi pode, sem limitação,ser administrado por injeção como dRNA ou siRNA "naked" ou em um Iipos-somo, implante, vetor de expressão, vetor viral, e similares (ou uma combi-nação de um ou mais destes métodos) direcionado para o vítreo do olho.

Como o fármaco não é dado sistemicamente, haveria menos toxidez espe-rada que para fármacos administrados sistemicamente. Também, a naturezacatalítica ou ampliada do fenômeno silenciador de gene descrito acima tor-na, em geral, o RNAi um método terapêutico bastante atraente. Por exem-plo, relativamente poucas moléculas de dsRNA e/ou de siRNA podem serrequeridas para induzir um fenômeno silenciador de gene em qualquer teci-do ao qual o RNA é aplicado.

Condições Exemplares Tratáveis através da Inibicão de CXCR4 e/ou deSDF-1

Os inibidores da atividade de CXCR4 têm um efeito terapêuticoocular desejado. Um efeito terapêutico ocular desejado inclui a capacidadede prevenir ou reduzir a extensão da morte celular ocular; por exemplo, semlimitação, morte celular neural ou morte de células de RPE por, por exemplo,necrose ou apoptose. Adicionalmente, os compostos terapêuticos da presen-te invenção podem ser usados para prevenir ou diminuir a extensão ou taxada neovascularização no segmento posterior do olho. Ainda, os compostosterapêuticos dâ presente invenção podem ser usados para tratar condições,particularmente, embora não exclusivamente, condições retinianas, impli-cando inflamação aguda ou crônica no olho.

Tais condições podem incluir, neurorretinopatia macular aguda;doença de Behcet; neovascularização coróide; uveíte diabética; degenera-ção macular, tais como degeneração macular aguda, degeneração macularrelacionada à idade não exsudativa e degeneração macular relacionada àidade exsudativa; edema, tais como edema macular, edema macular cistóidee edema macular diabético; coroidite multifocal; tumores oculares; distúrbiosretinianos, tais como oclusão da veia retiniana central, retinopatia diabética(incluindo retinopatia diabética proliferativa), vitreorretinopatia proliferativa(PVR), doença oclusiva arterial retiniana, doença retiniana uveítica; oclusãodo ramo da veia retiniana. Essas e outras condições podem ser agrupadasjuntas como a seguir:

MACULOPATIAS/DEGENERAÇÃO RETINIANA: DegeneraçãoMacular Relacionada à Idade Não Exsudativa (ARMD), Degeneração Macu-lar Relacionada à Idade Exsudativa (ARMD), Neovascularização Coróide,Retinopatia Diabética, Neurorretinopatia Macular Aguda, CoriorretinopatiaSerosa Central, Edema Macular Cistóide, Edema Macular Diabética.

UVEÍTE/RETINITE/COROIDITE: Epiteliopatia de Pigmento Pla-cóide Multifocal Aguda, Doença de Behcet, Retinocoroidopatia do tipochumbo de caça, Uveíte Infecciosa (Sífilis, Lime, Tuberculose, Toxoplasmo-se), Uveíte Intermediária (Pars Planitis), Coroidite Multifocal, Síndrome dePontos Brancos Evanescentes (MEWD), Sarcoidose Ocular, Esclerite Poste-rior, Coróide Serpignosa1 Fibrose Sub-retiniana e Síndrome de Uveíte, Sin-drome de Vogt-Koyanagi-Harada.

DISTÚRBIOS PROLIFERATIVOS: Retinopatia Vítrea Proliferati-va e Membranas Epirretinianas, Retinopatia Diabética Proliferativa, Retino-patia de Prematuridade (fibroplasia retrolental).

TUMORES: Doença Retiniana Associada aos Tumores, Tumo-res Sólidos, Metástase Tumoral1 Tumores Benignos, por exemplo, hemangi-omas, neurofibromas, tracomas, e granulomas piogênicos, Hipertrofia Con-genital do REP, Melanoma Uveal Posterior, Hemangioma Coróide, OsteomaCoróide, Metástase Coróide, Hamartoma Combinada da Retina e EpitélioPigmentado Retiniano1 Retinoblastoma, Tumores Vasoproliferativos do Fun-do Ocular, Astrocitoma Retinal, Tumores Linfóides Intra-Oculares.

MISCELÂNEAS: Coroidopatia Interna Pontuada, EpiteliopatiaPigmentar Placóide Multifocal Posterior Aguda, Epitelite Pigmentar RetinianaAguda, Distúrbios Inflamatórios Oculares e Imunes, disfunções vascularesoeulares, Rejeição a Enxerto da Córnea, Glaucoma Neovascular e similares.

Os compostos terapêuticos de, e usados em, a presente inven-ção podem ser administrados de um modo adequado para alcançar de modoeficaz o efeito terapêutico ocular desejado. Assim, métodos de administra-ção podem incluir, sem limitação, a via tópica, intra-ocular (inclusive intraví-trea), transdérmica, oral, intravenosa, subconjuntival, sub-retiniana, ou peri-toneal.

Geralmente, métodos de administração tópica e intra-ocular (porexemplo, intravítrea, subconjuntival e sub-retiniana) dos inibidores de CX-CR4 da presente invenção podem ser freqüentemente preferidos; como tal,meios de administração evitam muitos das desvantagens possíveis de admi-nistração sistêmica, tais como efeitos colaterais indesejados em tecidos quenão do olho. Sem esses, e sem referência a qualquer química particular en-volvida com cada agente ou classe de agentes, a administração tópica podeem geral ser inicialmente preferível do pontos de vista de facilidade de uso,uma grau comparativamente baixo de trauma ocular, e relativamente poucosriscos associados ao próprio meio de administração.Contudo, agentes que são aplicados topicamente à superfícieocular podem ter um tempo de residência muito curto na córnea. Geralmen-te, e dependendo em parte de fatores tais como hidrofilicidade, suprimentode sangue, atividade específica, e natureza do fármaco (tais como tamanho,estabilidade e forma), a distribuição tópica de fármaco pode distribuir con-centrações terapêuticas do fármaco às características de segmento anteriortais como a córnea, câmara anterior, íris, lente e corpo ciliar do olho, mas adistribuição de fármacos às características de segmento posterior tais comoo humor vítreo, epitélio pigmentado retiniano, retina e coróide é menos efi-caz. Teoricamente, fármaco aplicado topicamente ao olho pode se difundiratravés da conjuntiva e esclera, e então penetra no olho através da rota daíris ou do epitélio pigmentado retiniano (RPE). Contudo, isso gera um com-primento de percurso difusivo muito grande e os tecidos criam uma barreiraconsiderável, com o fluxo sangüíneo coróide e a resistência da conjuntiva eo RPE. Na prática, fármacos oftálmicos aplicados topicamente freqüente-mente não atingem concentrações terapêuticas nos tecidos do segmentoposterior. Adicionalmente, inibidores de CXCR4 macromoleculares aplicadostopicamente podem ser, em muitos casos, muitos grandes para se difundi-rem rapidamente no tecido do segmento posterior.

Veículos de Formulação

Independentemente do modo ou forma de administração (porexemplo, sem limitação, em solução, em suspensão, creme, gel, como umagente tópico, injetável ou implantável), as composições terapêuticas dapresente invenção serão administradas em um componente de veículo far-maceuticamente aceitável. O agente terapêutico (ou agentes) pode ser tam-bém combinado com um componente de veículo farmaceuticamente aceitá-vel na fabricação de uma composição. Em outras palavras, uma composi-ção, conforme descrita aqui, pode compreender um inibidor de CXCR4 euma quantidade eficaz de um componente de veículo farmaceuticamenteaceitável. Em pelo menos uma modalidade, o componente de veículo é ba-seado em água. Por exemplo, a composição pode compreender água.

Em certas modalidades, tal como na colocação no vítreo, ou soba conjuntiva ou retina, o inibidor de CXCR4 é administrado em um compo-nente de veículo, e pode incluir também uma quantidade eficaz de pelo me-nos um de um componente indutor de viscosidade, um componente de re-suspensão, um componente de conservante, um componente de tonicidadee um componente de tampão. Em algumas modalidades, as composiçõesdescritas aqui não incluem nenhum componente de conservante adicionado.Em outras modalidades, uma composição pode incluir, opcionalmente, umcomponente de conservante adicionado. Além disso, a composição pode serincluída sem qualquer componente de re-suspensão.

Presentemente, a distribuição subconjuntival é uma possibilida-de bastante atraente, pois a difusão retiniana parece ser maior que o vistocom a distribuição tópica, e a administração do fármaco não é tão traumáticaquanto a distribuição intra-ocular (tal como colocação ou injeção intravítreaou sub-retiniana). A distribuição subconjuntival pode incluir injeção de uma solução ou suspensão contendo o inibidor de CXCR4, e/ou a administraçãode um implante, tal como uma matriz de material biodegradável que com-preende, por exemplo, um copolímero de polilactosídeo e poliglicosídeo de-senhando para liberar o fármaco ativo sobre um período de tempo predeter-minado.

Contudo, isso não quer dizer que os meios de administração in-travítrea e sub-retiniana não sejam também eficazmente usados. Certamen-te, os meios intra-oculares são o meio mais direto de contatar o tecido retini-ano afetado com o agente terapêutico. Em tais casos, como com a distribui-ção conjuntival, soluções líquidas ou suspensões, tendo, usualmente, umaviscosidade e um índice refrativo maiores que aquele da água (para prevenirafetar adversamente a viscosidade do humor vítreo e assim a visão do paci-ente).

Meios de distribuição adicionais podem incluir a injeção aos teci-dos musculares da órbita ou à pálpebra superior ou inferior. Embora essesmeios possam ser certamente eficazes na distribuição de inibidores de CX-CR4 da presente invenção (particularmente no caso de compostos peque-nos e/ou lipofílicos), estes meios não são agora correntemente preferidos.Em modalidades preferidas da presente invenção, formulaçõespara administração tópica, subconjuntival, sub-retiniana ou intra-ocular dosagentes terapêuticos (incluindo, sem limitação, implantes ou partículas con-tendo tais agentes) incluirão, preferivelmente, uma quantidade maior de á-gua líquida. Tais composições são preferivelmente formuladas em uma for-ma estéril, por exemplo, antes de ser usada no olho. O componente de tam-pão mencionado acima, se presente nas formulações, está presente em umaquantidade eficaz para controlar o pH da composição. As formulações po-dem conter tanto além de, como em vez do componente de tampão, pelomenos um componente de tonicidade em uma quantidade eficaz para con-trolar a tonicidade ou osmolalidade das composições. Certamente, o mesmocomponente pode servir tanto como um componente de tampão como umcomponente de tonicidade. Mais preferivelmente, as presentes composiçõespodem incluir tanto um componente de tampão como um componente detonicidade.

O componente de tampão e/ou um componente de tonicidade,se qualquer destes está presente, pode ser escolhido daqueles que sãoconvencionais e bem conhecidos da técnica oftálmica. Exemplos de taiscomponentes de tampão incluem, mas sem limitação, tampões de acetato,tampões de citrato, tampões de fosfato, tampões de borato, e similares emisturas destes. Tampões de fosfato são particularmente úteis. Componen-tes de tonicidade úteis incluem, mas sem limitação, sais, particularmentecloreto de sódio, cloreto de potássio, qualquer outro componente de tonici-dade oftalmicamente adequado e misturas destes. Componentes de tonici-dade não iônicos podem compreender polióis derivados de açúcares, taiscomo xilitol, sorbitol, manitol glicerol e similares.

A quantidade de componente de tampão empregado é preferi-velmente suficiente para manter o pH da composição em uma faixa de cercade 6 a cerca de 8, mais preferivelmente de cerca de 7 a cerca de 7,5. Aquantidade de componente de tonicidade empregado é preferivelmente sufi-ciente para proporcionar uma osmolalidade para as presentes composiçõesem uma faixa de cerca de 200 a cerca de 400, mais preferivelmente de cer-ca de 250 a cerca de 350, mOsmol/kg, respectivamente. As presentes com-posições são, vantajosamente, substancialmente isotônicas.

As composições de, e usadas em, a presente invenção podemincluir um ou mais de outros componentes em quantidades eficazes paraproporcionar uma ou mais propriedades úteis e/ou benefícios às presentescomposições. Por exemplo, embora as presentes composições possam sersubstancialmente isentas de componentes de conservantes adicionados, emoutras modalidades, as presentes composições incluem quantidades efica-zes de componentes de conservante, preferivelmente tais componentes quesão mais compatíveis com ou amigáveis para o tecido no segmento posteriordo olho no qual a composição é colocada que o álcool benzílico. Exemplosde tais componentes de conservante incluem, sem limitação, conservantesde amônio quaternário ("BAC" ou "BAK") e polioxâmero; conservantes debiguanida tais como poliexametileno biguanida (PHMB); metil e etil parabe-nos; hexetidina; componentes de cloreto, tais como dióxido de cloro estabili-zado, cloritos de metal e similares; outros conservantes oftalmicamente acei-táveis e similares e mistura destes. A concentração do componente de con-servante, se algum, nas presentes composições é uma concentração eficazpara conservar a composição, e (dependendo da natureza do conservanteparticular usado) é freqüente e geralmente usado em uma faixa de cerca de0,00001% a cerca de 0,05% (p/v) ou cerca de 0,1% (p/v) da composição.Distribuição intravítrea de agentes terapêuticos pode ser efetuada

injetando-se um composição contendo líquido no vítreo, ou colo-cando-se sistemas de distribuição de fármacos poliméricòs, tais como im-plantes e micropartículas compreendendo o agente terapêutico, tais comomicroesferas, ou um bastão, waferde outro implante conformado, no vítreo.Exemplos de implantes compatíveis para colocação no olho foram descritosem várias patentes, tais como as Patentes US 4.521.210; US 4.853.224; US4.997.652; US 5.164.188; US 5.443.505; US 5.501.856; US 5.632.984; US5.766.242; US 5.824.072; US 5.869.079; US 6.074.661; US 6.331.313; US6.369.116; US 6.699.493; US 6.726.918, aqui incorporadas a título de refe-rência.Métodos similares podem ser usados para distribuição subcon-juntival ou sub-retiniana do fármaco. Se um implante é usado, o implantepode ser colocado (por exemplo, injetado) sob a conjuntiva em um local pró-ximo da parte de trás do olho. Uma suspensão ou formulação com base emlíquido seria administrada de modo a permanecer sob a membrana conjunti-val, usando este eficazmente como um depósito para liberação constante doinibidor de CXCR4. Em qualquer caso, a liberação do inibidor de CXCR4ocorrerá em um período de tempo e não terá que percorrer tão longe quantoem torno da circunferência da esclera ou através do segmento anterior comoum fármaco topicamente aplicado necessitaria percorrer. Uma vantagemdesta modalidade de aplicação é que não requer punção do próprio olho.

Colocação sub-retiniana de um implante envolve algum traumaao olho, mas não requer punção do globo ocular como acontece com a inje-ção intravítrea. O risco de conseqüências graves de infecção não é tãogrande quando o vítreo não é perfurado.

As formulações contendo os agentes terapêuticos da presenteinvenção podem ser produzidas usando técnicas convencionais rotineira-mente conhecidas de pessoas com conhecimento ordinário da técnica. Porexemplo, um inibidor de CXCR4 pode ser combinado com um veículo líqui-do. A composição pode ser esterilizada ou os componentes estéreis mistu-rados. Em certas modalidades, tais como modalidades isentas de conser-vantes, as composições podem ser pré-embaladas em dispensadores quepodem ser dispostos depois de uma única administração da dose unitáriadas composições.

As composições compreendendo os inibidores de atividade deCXCR4 podem ser preparadas usando técnicas de combina-ção/processamento, por exemplo, uma ou mais técnicas convencionais. Oprocessamento da preparação deve ser escolhido para proporcionar tais ini-bidores em implantes tendo formas úteis para colocação ou injeção intraví-trea, subconjuntival, sub-retiniana ou periocular, nos olhos de humanos oude animais.

Por exemplo, em uma modalidade útil, uma dispersão de com-ponente terapêutico concentrada é feita por combinação do componente te-rapêutico com água, e os excipientes (diferentes de um componente indutorde viscosidade) a serem incluídos na composição final. Os ingredientes sãomisturados para dispersarem os componentes terapêuticos e então autocla-vados. O componente indutor de viscosidade pode ser adquirido estéril ouesterilizado por processamento convencional, por exemplo, por filtragem deuma solução diluída e então hidrofilização para produzir um pó estéril. Ocomponente indutor de viscosidade estéril é combinado com água para fazerum concentrado aquoso. A dispersão de componente terapêutico concentra-da é misturada e adicionada como uma lama ao concentrado de componen-te indutor de viscosidade. A água é adicionada em uma quantidade suficien-te (q.s.) para proporcionar a composição desejada e a composição é mistu-rada até ficar homogênea.

Em uma modalidade, uma suspensão viscosa estéril adequadapara administração é feita usando um inibidor de atividade de CXCR4. Umprocesso para produzir tal composição pode compreender formulação volú-mica da suspensão estéril e preenchimento asséptico.

Outras modalidades dos presentes materiais estão nà forma deum sistema de distribuição de fármaco polimérico que é capaz de proporcio-nar distribuição de fármaco constante por períodos prolongados de tempodepois de uma administração única. Por exemplo, os presentes sistemas dedistribuição de fármaco podem liberar o inibidor de atividade de CXCR4 porpelo menos cerca de duas semanas, ou cerca de três semanas, ou 1 mês,ou cerca de 3 meses, ou cerca de 6 meses, ou cerca de í ano, ou cerca de5 anos ou mais. Assim, tais modalidades dos presentes materiais podemcompreender um componente polimérico associado ao componente terapêu-tico na forma de um sistema de distribuição de fármaco polimérico adequadopara administração a um paciente por pelo menos um ano de administraçãointravítrea, subconjuntival, sub-retiniana e periocular.

O sistema de distribuição de fármaco polimérico pode estar naforma de implantes poliméricos biodegradáveis, implantes poliméricos nãobiodegradáveis, micropartículas poliméricas biodegradáveis, e combinaçõesdestes. Os implantes podem estar na forma de bastões, wafers, folhas, fila-mentos, esferas e similares. As partículas são geralmente menores que osimplantes descritos aqui, e podem variar de configuração. Por exemplo, cer-tas modalidades da presente invenção utilizam partículas substancialmenteesféricas. Essas partículas podem estar na forma de microesferas. Outrasmodalidades podem utilizar partículas configuradas aleatoriamente, tais co-mo partículas que têm ou mais superfícies achatadas ou planas. O sistemade distribuição de fármaco pode compreender uma população de tais partí-culas com uma distribuição de tamanho predeterminada. Por exemplo, umamaior proporção da população pode compreender partículas tendo uma me-dida de diâmetro desejada.

Como discutido aqui, o componente polimérico dos sistemas dedistribuição de fármaco polimérico pode compreender um polímero selecio-nado do grupo que consiste em polímeros biodegradáveis, polímeros nãobiodegradáveos, copolímeros biodegradáveis, copolímeros não biodegradá-veis, e combinações destes. Em certas modalidades, o componente polimé-rico compreender um polímero de poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA). Emoutras modalidades, o componente polimérico compreende um polímero se-lecionado do grupo que consiste em poli(ácido láctico) (PLA), poli(ácido gli-cólico) (PGA), poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA), poliésteres, poli(ortoéster),poli(fosfazina), poli(éster de fosfato), policaprolactonas, gelatina, colágeno,derivados destes, e combinações destes. O componente polimérico pode serassociado ao componente terapêutico para formar um implante selecionadodo grupo que consiste em implantes sólidos, implantes semi-sólidos, e im-plantes viscoelásticos.

Em modalidades adicionais, o componente polimérico podecompreender qualquer material polimérico útil no corpo de um mamífero, sederivado de fonte natural ou sintética. Alguns exemplos adicionais de mate-riais poliméricos úteis para os propósitos desta invenção incluem polímerosbaseados em carboidratos tais como metilcelulose, carboximetilcelulose,hidroximetilcelulose, hidroxipropil celulose, hidroxietilcelulose, etil celulose,dextrina, ciclodextrinas, alginato, ácido hialurônico e quitosana, polímeroscom base em proteína tais como gelatina, colágeno e glicoproteínas, e poli-ésteres de hidróxi-ácido tais como poliglicolídeo, poli(ácido hidroxibutírico),policaprolactona, polivalerolactona, polifosfazeno, e poliortoésteres. Os po-límeros podem ser também reticulados, combinados ou usados como copo-límeros no implante. Outros veículos de polímero incluem albumina, poliani-dridos, polietilenoglicóis, polivinil poli(metacrilatos de hidròxialquila), pirroli-

dona e poli(álcool vinílico).

Alguns exemplos de polímeros não erodíveis incluem silicone,policarbonatos, poli(cloretos de vinila), poliamidas, polissulfonas, po-li(acetatos de vinila), poliuretano, derivados de acetato de etilvinila, resinasacrílicas, poli(álcool vinílico) reticulado e polivinilpirrolidona reticulada, polies-tireno e derivados de acetato de celulose.

Esses materiais poliméricos adicionais podem ser úteis comqualquer um dos inibidores de CXCR4 descritos aqui. Por exemplo, e semlimitação, as partículas de PLA ou de PLGA podem ser acopladas a um ini-bidor de CXCR4. Esses conjugados tripartites insolúveis erodirão lentamentecom o tempo, liberando, assim, continuamente o inibidor de CXCR4.

O inibidor de atividade de CXCR4 pode estar integral ou parci-almente em forma de particulado ou de pó e contido em uma matriz de polí-mero biodegradável. Se em uma forma de particulado (por exemplo, umaforma cristalina ou microcristalina), partículas em implantes intra-oculares,subconjuntivais ou sub-retinianos terão geralmente um tamanho médio efi-caz medindo menos que cerca de 3.000 nanômetros. Contudo, em outrasmodalidades, as partículas podem ter um tamanho médio máximo maior quecerca de 3.000 nanômetros. Em certos implantes, as partículas podem terum tamanho médio de partícula eficaz de cerca de uma ordem de magnitudemenor que 3.000 nanômetros. Por exemplo, as partículas podem ter um ta-manho médio de partícula de menos que cerca de 500 nanômetros. Em im-plantes adicionais, as partículas podem ter um tamanho médio de partículaeficaz de menos que cerca de 400 nanômetros, e em ainda outras modali-dades, um tamanho menor que cerca de 200 nanômetros. Além disso,quando tais partículas são combinadas com um componente polimérico, aspartículas poliméricas resultantes podem ser usadas para proporcionar umefeito terapêutico desejado.

Se formulado como parte de um implante ou de outro sistema dedistribuição de fármaco, (e particularmente se não na forma de um vetor deexpressão) o inibidor de atividade de CXCR4 pode ser preferivelmente decerca de 1% a 90% em peso do sistema de distribuição de fármaco. Maispreferivelmente, tal inibidor de atividade de CXCR4 é de cerca de 20% acerca de 80% em peso do sistema. Em uma modalidade preferida, o GD ini-bidor de CXCR4 compreende cerca de 40% em peso do sistema (por exem-pio, 30%-50%). Em uma outra modalidade, o GD inibidor de CXCR4 com-preende cerca de 60% em peso do sistema.

Os materiais ou composições poliméricas adequadas para usonos sistemas de distribuição de fármaco incluem aqueles materiais que sãocompatíveis, por exemplo, biocompatíveis, com o olho de modo a não pro-vocar interferência substancial no funcionamento ou fisiologia do olho. Taismateriais incluem, preferivelmente, polímeros que são, pelo menos parcial-mente e de modo mais preferível, substancial e completamente biodegradá-veis ou bioerodíveis.

Além do acima, exemplos de materiais poliméricos úteis incluem,sem limitação, tais materiais derivados de e/ou incluindo ésteres orgânicos eéteres orgânicos, que quando degradados resultam em produtos de degra-dação fisiologicamente aceitáveis, inclusive monômeros. Também, materiaispoliméricos derivados de/ou incluindo anidridos, amidas, ortoésteres e simi-lares, por eles mesmos ou em combinação com outros monômeros, podemser úteis. Os materiais poliméricos podem ser polímeros de adição ou decondensação, vantajosamente polímeros de condensação. Os materiais po-liméricos podem ser reticulados ou não reticulados, por exemplo, não maisque levemente reticulados, tal como menos que cerca de 5%, ou menos quecerca de 1% do material polimérico que está sendo reticulado. Para a maiorparte, além de carbono e hidrogênio, os polímeros incluirão pelo menos umde oxigênio e nitrogênio, vantajosamente oxigênio. O oxigênio pode estarpresente como oxi, por exemplo, hidróxi ou éter, carbonila, por exemplo, nãooxocarbonila, tal como éster de ácido carboxílico, e similar. O nitrogênio po-de estar presente como amida, ciano e amino. Os polímeros mostrados porHeller1 em Biodegradable Polymers in Controlled Drug Delivery, CRC CRI-TICAL REVIEWS IN THERAPEUTIC DRUG CARRIER SYSTEMS, Vol. 1,CRC Press, Boca Raton, FL 1987, pp. 39-90, aqui incorporado a título dereferência, que descreve a encapsulação para distribuição de fármaco con-trolada, podem ser úteis nos presentes sistemas de distribuição de fármaco.

De interesse adicional são os polímeros de ácidos carboxílicoshidróxi alifáticos, tanto homopolímeros como copolímeros, e polissacarídeos.Poliésteres de interesse incluem polímero de ácido D-láctico, ácido L-láctico,ácido láctico racêmico, ácido glicólico, policaprolactona, e combinações des-tes. Geralmente, empregando-se o L-Iactato ou D-lactato, um polímero oumaterial polimérico que erode lentamente é obtido, embora a erosão sejasubstancialmente intensificada com o racemato de lactato.

Dentre os polissacarídeos úteis, estão, sem limitação, alginatode cálcio, e celuloses funcionalizadas, particularmente ésteres de carboxi-metilceluiose caracterizados por serem solúveis em água, com um peso mo-lecular de cerca de 5kD a 500 kD, por exemplo.

Outros polímeros de interesse incluem, sem limitação, poliéste-res, poliéteres e combinações destes, que são biocompatíveis e podem serbiodegradáveis e/ou bioerodíveis.

Algumas características preferíveis dos polímeros ou materiaispoliméricos para uso nos presentes sistemas podem incluir biocompatibilida-de, compatibilidade com o componente terapêutico, facilidade de uso do po-límero em fazer os sistemas de distribuição de fármaco da presente inven-ção, uma meia vida no ambiente fisiológico de pelo menos cerca de 6 horas,preferivelmente maior que cerca de 1 dia, não aumentando significantemen-te a viscosidade do vítreo, e insolubilidade em água.

Os materiais poliméricos biodegradáveis, que estão incluídospara formarem a matriz estão desejavelmente sujeitos à instabilidade enzi-mática ou hidrolítica. Polímeros solúveis em água podem ser reticuladoscom reticulações instáveis hidrolíticas ou biodegradáveis para proporciona-rem polímeros insolúveis em água úteis. O grau de estabilidade pode servariado largamente, dependendo da escolha do monômero, se um homopo-límero ou copolímero é empregado, empregando-se misturas de polímeros,e se o polímero inclui grupos ácido-terminais.

Também importante para controlar a biodegradação do polímeroe, logo, o perfil de liberação prolongada dos sistemas de distribuição de fár-maco e o peso molecular médio relativo da composição polimérica empre-gada nos presentes sistemas. Pesos moleculares diferentes das mesmas oudas diferentes composições podem ser incluídos nos sistemas para modularo perfil de liberação. Em certos sistemas, o peso molecular médio relativo dopolímero variará de cerca de 9 a cerca de 64 kD, usualmente de cerca de 10a cerca de 54 kD, e, mais usualmente, de cerca de 12 a cerca de 45 kD.

Em alguns sistemas de distribuição de fármaco, os copolímerosde ácido glicólico e ácido lactídeo são usados, onde a taxa de biodegrada-ção é controlada pela razão de ácido glicólico para ácido láctico. O copolí-mero mais rapidamente degradado tem de modo grosseiro quantidades i-guais de ácido glicólico e ácido láctico. Homopolímeros ou copolímeros ten-do razões que não iguais são mais resistentes à degradação. A razão deácido glicólico para ácido láctico afetará também a fragilidade do sistema,onde um sistema ou implante mais flexível é desejável para geometrias mai-ores. A % de copolímero de poli(ácido láctico) poli(ácido glicólico) (PLGA)pode ser de cerca de 0 a 100%, preferivelmente de cerca de 15 a 85%, maispreferivelmente de cerca de 35-65%. Em alguns sistemas, um copolímero de50/50 de PLGA é usado.

A matriz de polímero biodegradável pode compreender uma mis-tura de dois ou mais polímeros biodegradáveis. Por exemplo, o sistema podecompreender uma mistura de um primeiro polímero biodegradável e um se-gundo polímero biodegradável diferente. Um ou mais dos polímeros biode-gradáveis podem ter grupos ácido-terminais.

A liberação de um fármaco de um polímero erodível é a conse-qüência de vários mecanismos e combinações de mecanismos. Alguns des-ses mecanismos incluem a dessorção da superfície dos implantes, dissolu-ção, difusão através dos canais porosos do polímero hidratado e erosão. Aerosão pode ser volúmica ou superficial ou uma combinação de ambos. Po-de ser entendido que o componente polimérico neste aspecto da presenteinvenção está associado ao inibidor de CXCR4 de modo que a liberação docomponente terapêutico no olho é por uma ou mais de difusão, erosão, dis-solução, e osmose. Como discutido aqui, a matriz de um sistema de distribu-ição de fármaco intra-ocular, subconjuntival, periocular ou sub-retiniano podeliberar o fármaco em uma taxa efetiva para suster a liberação de uma quan-tidade do agente terapêutico por mais que uma semana depois de implanta-ção no olho. Em certos sistemas, as quantidades terapêuticas do inibidor deCXCR4 são liberadas por mais que cerca de um mês, e mesmo por cerca dedozes meses ou mais. Por exemplo, o componente terapêutico pode ser li-berado no olho por um período de tempo de cerca de noventa dias a cercade um ano depois que o sistema é colocado no interior do olho.

A liberação do inibidor de CXCR4 dos sistemas de distribuiçãode fármaco compreendendo uma matriz de polímero biodegradável podeincluir uma explosão inicial de liberação (por exemplo, de cerca de 20%, oucerca de 30%, ou cerca de 40%, ou cerca de 50%, ou cerca de 60%, ou cer-ca de 70%, ou cerca de 80% do inibidor de CXCR4 são liberados nos trêsprimeiros dias após implantação), seguido por um aumento gradual da quan-tidade do inibidor liberada, ou a liberação pode incluir uma demora inicial naliberação do inibidor de CXCR4 seguido por um aumento na liberação.Quando o sistema está degradado de forma substancialmente completa, apercentagem do agente terapêutico que foi liberado é de cerca de cem.

Pode ser desejável proporcionar uma taxa relativamente cons-tante do agente terapêutico do sistema de distribuição de fármaco durante avida do sistema. Por exemplo, pode ser desejável para o inibidor de CXCR4ser aumentado em quantidades de cerca de 0,01 μg a cerca de 2 μg por diapara a vida do sistema. Contudo, a taxa de liberação pode se alterar ou paraaumentar ou para diminuir dependendo da formulação da matriz de polímerobiodegradável. Além disso, o perfil de liberação do inibidor de CXCR4 podeincluir uma ou mais porções lineares e/ou uma ou mais porções não Iinea-res. Preferivelmente1 a taxa de liberação é maior que zero uma vez que osistema tenha começado a se degradar ou erodir.

Os sistemas de distribuição de fármaco, tais como implantes in-tra-oculares, podem ser monolíticos, i.e., têm o agente ou agentes ativoshomogeneamente distribuídos através da matriz polimérica, ou encapsula-dos, onde um reservatório do agente ativo é encapsulado pela matriz polimé-rica. Devido à facilidade de fabricação, os implantes monolíticos são usual-mente preferidos em formas encapsuladas. Contudo, o maior controle permi-tido pelo implante do tipo reservatório, encapsulado, pode ser benéfico emalgumas circunstâncias, onde o nível terapêutico do inibidor de CXCR4 seenquadre dentro de uma janela estreita. Além disso, o componente terapêu-tico, incluindo o(s) agente(s) terapêutico(s) descrito(s) aqui, pode ser distri-buído em um padrão não homogêneo na matriz. Por exemplo, o sistema dedistribuição de fármaco pode incluir uma porção que tem uma concentraçãomaior do inibidor de CXCR4 com relação a uma segunda porção do sistema.

Os implantes poliméricos descritos aqui podem ter um tamanhoentre cerca de 5 μ e cerca de 2 mm, ou entre cerca de 10 μπι e cerca de 1mm para administração com uma agulha, maior que 1 mm, ou maior que 2mm, tal como 3 mm ou até 100 mm, para administração por implantação. Acâmara de vítreo (e a subconjuntiva) nos humanos é capaz de acomodarimplantes relativamente grandes, de geometrias variáveis, tendo comprimen-tos de, por exemplo, 1 a 10 mm. O implante pode ser uma pelota cilíndrica(por exemplo, um bastão) com dimensões de cerca de 2 mm χ 0,75 mm dediâmetro. Ou o implante pode ser uma pelota cilíndrica com um comprimentode cerca de 7 mm a cerca de 10 mm, e um diâmetro de cerca de 0,75 mm acerca de 1,5 mm.

Os implantes podem ser também um pouco flexíveis de modo afacilitar tanto a inserção do implante no olho, tal como no vítreo, sob a con-juntiva, ou sob a retina, e acomodação do implante. O peso total do implanteé usualmente de cerca de 250-5.000 μg, mais preferivelmente de cerca de500-1.000 μg. Por exemplo, um implante pode ser de cerca de 500 μg, oucerca de 1.000 μg. Contudo, implantes maiores podem ser também confor-mados e ainda processados antes da administração a um olho. Além disso,implantes maiores podem ser desejáveis quando quantidades maiores doinibidor de CXCR4 são colocadas no implante.

Os sistemas de distribuição de fármaco podem ser preparadosquando o centro pode ser de um material e a superfície por ter uma ou maiscamadas da mesma ou de uma composição diferente, em que as camadaspodem ser reticuladas, ou de um peso molecular diferente, densidade ouporosidade diferentes, ou similares. Por exemplo, quando é desejável liberarrapidamente um bolo inicial do inibidor de CXCR4, o centro pode ser um po-Iilactato revestido com um copolímero de polilactato-poliglicolato, de modo aintensificar a taxa de degradação inicial. Alternativamente, o centro pode serde poli(álcool vinílico) revestido com polilactato, de modo que mediante de-gradação do exterior do polilactato, o centro dissolver-se-ia e seria rapida-mente lavado do olho.

Os sistemas de distribuição de fármaco podem ser de qualquergeometria adequada para o meio de distribuição, incluindo fibras, folhas, fil-mes, microesferas, esferas, discos circulares, placas e similares. O limitesuperior do sistema para o tamanho de sistema será determinado por fatorestais como tolerância ao sistema, limitações de tamanho na inserção, facilida-de de manuseio, etc. Quando folhas ou filmes são empregados, as folhas oufilmes estarão na faixa de pelo menos cerca de 0,5 mm χ 0,5 mm, usualmen-te cerca de 3-10 mm χ 5-10 mm com uma espessura de cerca de 0,1-1,0mm para facilidade de manuseio. Quando as fibras são empregadas, o diâ-metro da fibra estará geralmente na faixa de cerca de 0,05 a 3 mm e o com-primento da fibra estará geralmente na faixa de cerca de 0,5 a 10 mm. Asesferas podem estar na faixa de cerca de 0,5 μιτι a 4 mm de diâmetro, comvolumes comparáveis para outras partículas conformadas.

O tamanho e a forma do sistema podem ser também usadospara controlar a taxa de liberação.

Outra via de administração dos inibidores de CXCR4 da presen-te invenção ao interior do olho pode incluir distribuição periocular de fárma-cos a um paciente. As barreiras de sangue-retina freqüentemente restringema penetração de fármacos sistemicamente administrados diretamente nosegmento posterior do olho. A barreira de sangue-retina é anatomicamenteseparada em barreiras sangüíneas internas e externas. O movimento de so-lutos ou fármacos no interior do olho a partir do espaço periocular é restrin-gido pelo epitélio pigmentado retiniano (RPE), a barreira externa de sangue-retina. Junções intracelulares denominadas oclusores ou "junções firmes"unem as células deste tecido. O RPE é uma barreira transportadora de íonsfirme que restringe o transporte para-celular de solutos através do RPE. Apermeabilidade da maioria dos compostos através das barreiras de sangue-retina é muito baixa. Contudo, o próprio RPE possui a capacidade singularde absorver rapidamente agentes extracelulares por fagocitose, esse fato,assim, vicia em favor do transporte extra-sistêmico para a retina.

Formulações Contendo Inibidores de CXCR4

Os inibidores de CXCR4 (inclusive vetores, oligonucleotídeos epolipeptídeos e/ou conjugados destes) da presente invenção podem sersuspensos em uma formulação viscosa tendo uma viscosidade relativamen-te alta, tal como uma que se aproxima daquela do humor vítreo. Tal formula-ção viscosa compreende um componente indutor de viscosidade. Além douso de implantes, os inibidores de CXCR4 da presente invenção podem seradministrados via subconjuntival, sub-retiniana, ou intravítrea, como semlimitação, uma injeção aquosa, uma suspensão, uma emulsão, uma soluçãoe um gel.

O componente indutor de viscosidade compreende preferivel-mente um componente polimérico e/ou pelo menos um agente viscoelástico,tais como aqueles materiais que são úteis em procedimentos cirúrgicos of-tálmicos.

Exemplos de componentes indutores de viscosidade úteis inclu-em, mas sem limitação, ácido hialurônico, carbômeros, poli(ácido acrílico),derivados celulósicos, policarbofil, polivinilpirrolidona, gelatina, dextrina, po-lissacarídeos, poliacrilamida, poli(álcool vinílico), poli(acetato de vinila), deri-vados destes e misturas destes.

O peso molecular dos componentes indutores de viscosidadeúteis pode estar em uma faixa de até cerca de 2 milhões de Daltons1 tal co-mo cerca de 10.000 Daltons ou menos a cerca de 2 milhões de Daltons oumais. Em uma modalidade particularmente útil, o peso molecular do compo-nente indutor de viscosidade está em uma faixa de cerca de 100.000 Daltonsou cerca de 200.000 Daltons a cerca de 1 milhão de Daltons ou cerca de 1,5milhão de Daltons.

Em uma modalidade bastante útil, um componente indutor deviscosidade é um componente de hialuronato polimérico, por exemplo, umcomponente de hialuronato de metal, preferivelmente selecionado de hialu-ronatos de metal alcalino, hialuronatos de metal alcalino terroso e misturas,e, ainda mais preferivelmente selecionado de hialuronatos de sódio, e mistu-ras destes. O peso molecular de tal componente de hialuronato está preferi-velmente na faixa de cerca de 50.000 Daltons ou cerca de 100.000 Daltons acerca de 1,3 milhão de Daltons ou cerca de 2 milhões de Daltons.

Em uma modalidade, as presentes composições estão compre-endidas em, ou compreendem, um componente de hialuronato poliméricoem uma quantidade em uma faixa de cerca de 0,05% a cerca de 0,5% (p/v).Em ainda uma outra modalidade útil, o componente de hialuronato está pre-sente em uma quantidade na faixa de cerca de 1 % a cerca de 4% (p/v) dacomposição. Nesse último caso, a viscosidade de polímero muito alta formaum gel que retarda a sedimentação de qualquer fármaco suspenso, e previ-ne formação de poça do produto de fármaco injetado.

Os inibidores de CXCR4 desse aspecto da invenção reivindicadapodem incluir, dependendo de suas características físico-químicas, qualquerum ou todos os sais, pró-fármacos, conjugados, ou precursores de agentesterapeuticamente úteis, incluindo aqueles especificamente identificados aqui.

Em certas modalidades, os inibidores de CXCR4 da composiçãopodem estar contidos em uma composição que compreende mais que umagente terapêutico, contanto que pelo menos um agente terapêutico sejacapaz de inibir a atividade de CXCR4. Em outras palavras, o componenteterapêutico da composição pode incluir um primeiro inibidor de CXCR4, umsegundo inibidor de CXCR4, ou uma combinação de agentes terapêuticos,em que pelo menos um destes é um inibidor de CXCR4.

O componente indutor de viscosidade está presente em umaquantidade eficaz para aumentar de modo substancialmente vantajoso aviscosidade da composição. Sem desejar limitar a invenção a qualquer teoriaparticular de operação, acredita-se que o aumento da viscosidade das com-posições para valores bastante em excesso da viscosidade da água, porexemplo, pelo menos cerca de 100 cps em uma taxa de cisalhamento de0,1/segundo, composições que são altamente eficazes para colocação, porexemplo, por injeção, no segmento posterior do olho de um ser humano ouanimal, são obtidas. Juntamente com a colocação ou injetabilidade vantajosadas presentes composições no segmento posterior do olho, acredita-se quea viscosidade relativamente alta das presentes composições intensifique acapacidade das presentes composições da presente invenção.

Vantajosamente, as composições deste aspecto da invençãotêm viscosidades de pelo menos cerca de 100 cps ou pelo menos cerca de100 cps ou pelo menos cerca de 1.000 cps, mais preferivelmente pelo me-nos cerca de 10.000 cps, e ainda, mais preferivelmente, pelo menos cercade 70.000 cps ou mais, por exemplo, cerca de 200.000 cps ou cerca de250.000 cps, ou cerca de 300.000 cps ou mais, em um taxa de cisalhamentode 0,1/segundo. Em modalidades particulares, as presentes composiçõesnão somente têm a viscosidade relativamente alta citada acima, mas têmtambém a capacidade ou são estruturadas ou constituídas de modo a seremeficazmente capazes de serem colocadas, por exemplo, injetadas, em umsegmento posterior do olho de um humano ou animal, preferivelmente atra-vés de uma agulha de calibre 27, ou mesmo através de calibre 30.

Os componentes indutores de viscosidade preferivelmente sãocomponentes redutores de cisalhamento de modo que a formulação é pas-sada através ou injetada no segmento posterior de um olho, por exemplo,através de uma abertura estreita, tal como agulha de calibre 27, sob condi-ções de alto cisalhamento, a viscosidade da composição é substancialmentereduzida durante tal passagem.

Qualquer componente indutor de viscosidade oftalmicamenteaceitável pode ser empregado de acordo com a presente invenção. Váriosde tais componentes indutores de viscosidade têm sido propostos e/ou usa-dos em composições oftálmicas usados sobre ou no olho. O componenteindutor de viscosidade está presente em uma quantidade eficaz para propor-cionar a viscosidade desejada da composição. Vantajosamente, o compo-nente indutor de viscosidade está presente em uma quantidade em uma fai-xa de cerca de 0,5% ou cerca de 1,0% a cerca de 5% ou cerca de 10% oucerca de 20% (p/v) da composição. A quantidade específica do componenteindutor de viscosidade empregado depende de vários fatores que incluem,por exemplo, e sem limitação, o componente indutor de viscosidade especí-fico que está sendo empregado, o peso molecular do componente indutor deviscosidade que está sendo empregado, a viscosidade desejada da presentecomposição que está sendo produzida e/ou usada e fatores similares.

Em uma outra modalidade da invenção, o inibidor de CXCR4pode ser distribuído via intra-ocular ou subconjuntival em uma composiçãoque compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em, um agenteterapêutico que compreende um agente bioativo (o inibidor de CXCR4), umsubstrato transportador, e um polímero biocompatível para administração aosegmento posterior do olho. Por exemplo, a composição pode compreender,sem limitação, um implante subconjuntival, sub-retiniano, ou intra-ocular.

A presente invenção é, em geral, direcionada a métodos para otratamento do segmento posterior do olho. Preferivelmente, o segmento pos-terior do olho compreende, sem limitação, o trato uveal, o vítreo, a retina, acoróide, o nervo óptico, e o epitélio pigmentado retiniano (RPE). A doençaou condição relacionada a esta invenção pode compreender qualquer doen-ça ou condição associada à morte celular, inflamação, ou angiogênese, queé potencializada pela estimulação do receptor de CXCR4.

Embora não se tenha o objetivo de limitar o escopo desta inven-ção, de nenhum modo, alguns exemplos de doenças ou condições, que po-dem ser prevenidas ou tratadas pela ação de um fármaco ativo mediante aparte posterior do olho, de acordo com a presente invenção, incluem macu-lopatias/degeneração retiniana tais como edema macular, degeneração ma-cular relacionada à idade não exsudativa (ARMD)1 degeneração macularrelacionada à idade exsudativa (ARMD), neovascularização coróide, retino-patia diabética, neurorretinopatia macular aguda, coriorretinopatia serosacentral, edema macular cistóide, e edema macular diabético; uveí-te/retinite/coroidite tais como epiteliopatia de pigmento placóide multifocalaguda, doença de Behcet, retinocoroidopatia do tipo chumbo de caça, infla-mação da retina, uveíte intermediária (pars planitis), coroidite multifocal, fi-brose sub-retiniana e síndrome de uveíte, doenças vasculares/doenças ex-sudativas tais como doença oclusiva arterial retiniana, oclusão da veia retini-ana central, coagulopatia intravascular disseminada, oclusão do ramo daveia retiniana, alterações de fundo hipertensivo, síndrome isquêmica ocular,microaneurismas arteriais retinianos, doença de Coat, telangiectase parafo-aveal, oclusão de veia hemi-retiniana, papiloflebite, oclusão de artéria retini-ana central, oclusão do ramo da artéria retiniana, doença da artéria carótida(CAD), angiite de ramo congelado, retinopatia de células falciformes e outrashemoglobinopatias, veias angióides, vitreorretinopatia exsudativa familial, edoença de Eales; condições traumáticas/cirúrgicas tais como oftalmia simpá-tica, doença retiniana uveítica, descolamento da retina, trauma, hamartomacombinado da retina e epitélio pigmentado retiniano, retinoblastoma, tumoresvasoproliferativos do fundo ocular, astrocitoma retiniano, e tumores linfóidesintra-oculares; e miscelâneas de outras doenças que afetam a parte posteri-or do olho tais como coroidopatia interna perfurada, epiteliopatia de pigmen-to placóide multifocal aguda, degeneração retiniana miópica, e epitelite dopigmento retiniano aguda. Preferivelmente, a doença ou condição é retinopa-tia vítrea proliferativa (PVR), degeneração macular relacionada à idade(ARMD), retinopatia diabética, edema macular diabético, descolamento daretina, edema macular, ou uveíte.

Os seguintes exemplos ilustram a presente invenção, e não alimitam de modo nenhum. A invenção é definida apenas pelas reivindicaçõesque concluem este relatório descritivo.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Transfeccão de células com RNAiCélulas ARPE (American Type Tissue Collection (ATCC) Núme-ro CRL2302) foram plaqueadas em uma densidade de células de 6x104 célu-las por placa de tecido de cultura de 10 cm, em Meio de Eagle Modificadopor Delbecco (DMEM) F12 contendo 10% de soro bovino fetal (FBS) e 1%de solução antibiótica/antimicótica (10.000 unidades de penicilina G (sal desódio), 10,000 μοΛηΙ- de sulfato de estreptomicina, e 25 μς/ηιΙ- de anfoterici-na B em solução salina a 0,85%) incubada a 37°, durante a noite.

Os oligonucleotídeos de RNAi anti-CXCR4, desenhados parapreparar um siRNA de dupla fita, compreende as seguintes seqüências:

5' AACAGUGGAAGAAAGCUAGGGGCUC 3'(SEQ ID NO: 10)

S1 GAGGCCCUAGCÜUUCUUCCACUGUU 3'(SEQ ID NO: 11)

Esses oligonucleotídeos ou oligonucleotídeos de controle (CGMed de controle negativo para RNAi, Stealth) (Invitrogen, Inc.)) foram adicio-nados em 1,5 mL de meio OptMem® (Gibco BRL) para uma concentraçãofinal de 25nM. Em um volume igual separado de meio OptiMem®, 15 μί dereagente de Iipofectamina (Lipofectamina® 2000, Invitrogen, Inc.) foram simi-larmente adicionados a igual volume de meio OptiMem® e incubados à tem-peratura ambiente por 5 minutos.

Ambas as soluções foram então misturadas juntas e depois in-cubadas, por 20 minutos, à temperatura ambiente. As células forma lavadasuma vez com meios OptiMem® (Gibco BRL) e então adicionadas às células.As células foram deixadas incubar durante a noite a 37°C. Vinte e quatrohoras depois da transfecção, a mistura de transfecção foi removida e 10 mLde meio de DMEM F12 fresco foram adicionados às células.

EXEMPLO 2: Ensaio de Estresse Oxidativo/Viabilidade das Células

Seguinte à transfecção das células com a construção de SEQ IDNO: 10 e 11 (figura 1), ou SEQ ID N0:10-15 (figura 3), células ARPE-19 fo-ram mantidas em meio DMEM F12 contendo 10% de FBS, e solução antibió-tica/antimicótica a 1% (10.000 unidades de penicilina G (sal de sódio),10.000 μ^/πιί de sulfato de estreptomicina, e 25 μg/mL de anfotericina B emsolução salina a 0,85%) por 48 horas. As células foram plaqueadas a umadensidade de 1x104 células por 100 μΙ_ de poço em uma placa de 96 poços eincubadas, durante a noite, a 37°C e 5% de CO2. No dia seguinte, as célulasforam lavadas duas vezes com DMEM F12 contendo 0,1% de FBS e 1% desolução antibiótica/antimicótica a 1% (10.000 unidades de penicilina G (salde sódio), 10.000 μς/ιηΙ- de sulfato de estreptomicina, e 25 μ9/ΓηΙ_ de anfote-ricina B em solução salina a 0,85%).

Depois da lavagem, as células foram deixadas famintas por 24horas nos mesmos meios, a 37°C, por 24 horas. Seguinte a esse período, ascélulas foram expostas a hidroperóxido de ter-butila (t-BH) em uma concen-tração final de 300μΜ, por 6 horas. As células foram lavadas duas vezescom meio DEMEM F12 contendo 0,1% de FBS e solução antibióti-ca/antimicótica a 1% (10.000 unidades de penicilina G (sal de sódio), 10.000μg/mL de sulfato de estreptomicina, e 25 μg/mL de anfotericina B em solu-ção salina a 0,85%). Meios frescos foram adicionados e as células incuba-das ainda em um volume de 100 μΙ_, a 37°C, por um total de 24 horas a par-tir do início do tratamento com t-BH.

A viabilidade celular foi medida usando ensaio WST (ChemiconInternational, Inc.), de acordo com as instruções do fabricante. O ensaioWST é baseado na clivagem do sal de tetrazólio WST-1 para formazano pordesidrogenases mitocondriais celulares. Expansão no número de célulasviáveis resulta no aumento da atividade global das desidrogenases mitocon-driais na amostra. Um aumento na atividade enzimática devido aos maioresnúmeros de células leva a um aumento da quantidade de pigmento de for-mazano formado. Assim, o pigmento de formazano produzido por célulasviáveis pode ser quantificado por um espectrofotômetro de poços múltiplos(leitura de microplacas) por medição da absorbância da solução de pigmentoem 440 nm.

Nesse caso, 10 μΐ_ de reagente WST-1 foi adicionado a cadapoço depois de 24 horas. O tempo de desenvolvimento de ensaio ótimo foideterminado como sendo de 1,5 h. As placas foram então lidas em um Spec-tramax M2 Platereader®, em 450 nm.Para isolar RNA das células, 1 mL de Qiazol® (um tampão deIise inibidor de RNAse com base em fenol/isotiocianato de guanidínio vendi-do por Qiagen, Inc.) foi adicionado às células ARPE-19 e os Iisados foramraspados em tubos de 2 mL. 200 μ!_ de clorofórmio por mL de Qiazol® foramentão adicionados, os tubos misturados e centrifugados a 12.000 χ g por 15minutos, a 4°C. A fase aquosa foi removida e aplicada a um mini-coluna N-Reasy® (Qiagen), lavada e a coluna eluída com água. Cinco microgramas doeluato foram usados para subseqüentes reações de RT-PCR. As reações deRT-PCR foram efetuadas usando o Sistema de Síntese de Primeira Fita S-tratascript® (Stratagene). O RNA foi desnaturado a 65°C, por 5 minutos, res-friado à temperatura ambiente por 10 minutos e então incubado a 42°C por60 minutos com transcriptase reversa.

PCR quantitativa foi conduzida usando 5 μί de cDNA geradospor RT-PCR. O ensaio Platinum pPCR Supermix®-UDG (Invitrogen) foi usa-do para a ampliação. A reação de PCR foi efetuada por 45 ciclos usandoas seguintes condições: 50°C por 2 minutos, 95°C por 2 minutos, 95°C por15 minutos, 60°C por 45 segundos. GAPDH foi usado para normalizar osníveis de expressão. As reações e análise foram efetuadas usando um De-tectar de Seqüência ABRI Prism 7700.

Exemplo 3: Série de Genoma Inteiro

Uma série de oligonucleotídeos de DNA de genoma inteiro (Agi-Ient Technologies, série G4112A) foi usada para hibridizar contra amostrasde RNA preparadas de células ARPE-19 tratadas com t-BH. Esse formato delâmina 44K contém uma coleção de oligonucleotídeos de 60 meros com se-qüências representando genes humanos 41 k e transcritos.

A marcação de RNA foi realizada usando kit de Ampliação Line-ar Fluorescente de Entrada de RNA Baixo (LIK®) da Agilent Technologies(#5184-3523) seguindo as recomendações do fabricante. Em resumo, 200ng de RNA total das células ARPE-19 isoladas conforme descrição no E-xemplo 2 foram reverso-transcritas em um volume de 20 μί usando 1 μί detranscriptase reversa de Vírus de Leucemia Murina Moloney (MMLV-RT) e1,2 μL de iniciador de promotor T7 em um 1x de Tampão de Primeira Fita, a40°C, por 2 horas. Da preparação de DNA de dupla fita, transcrição e mar-cação direta foram preparadas em 80 μL a 40°C, por 2 horas, usando 0,8 μLde T7 RNA polimerase, 0,6 μL de pirrofosfatase inorgânica, 2,4 μL de cadapigmento Cy-CTP a 10mM (PerkinElmer/Nen Life Sciences Cianina-3-CTP#NEL580 e Cianina-5-CTP #NEL581) e solução de PEG a 4% e 1x de tam-pão de Transcrição. Pigmentos de cianina são pigmentos fluorescentes al-tamente sensitivos.

cRNA ampliado e marcado foi purificado em mini-colunas Rne-asy® (Qiagen, Inc.) de acordo com o protocolo do fabricante. cRNA foi quan-tifiçado por absorbância a 260 nm, 550 nm e 650 nm. Estando completa amarcação, ambas as amostras de RNA Cy3 e Cy5 são combinadas e hibridi-zadas para a micro-série usando kit de Hibridização in situ (#5184-3568) se-guindo as recomendações da Agilente.

Em resumo, 750 ng de cRNA ampliado linearmente marcadocom cianina 3 e 750 ng de cRNA ampliado linearmente e marcado com cia-nina 5 são combinados para 1X de alvos de controle, 0,5X de tampão defragmentação. Essa solução alvo 2X é desnaturada a 60°C, por 30 minutos e1x de tampão de hibridização em um volume final de 500 μL é adicionadopara finalizar a reação de fragmentação.

A solução alvo é então dispensada sobre uma micro-série 44K.

O tempo de incubação foi de 17 horas, a 60°C, em um forno de hibridizaçãocom rotação a 4 rpm (Agilent Technologies #G2545A). Lavagens foram rea-lizadas por 5 minutos em 6X de SSPE, 0,005% de N-Iauroil sarcosina, àtemperatura ambiente, então por 5 minutos em 0,06X de SSPE, 0,005% deN-Iauroil sarcosina, à temperatura ambiente, e, finalmente, por 30 segundosem Solução de Estabilização e Secagem Agilent®. As lâminas secas foramescaneadas usando um scanner de micro-série.

A figura 1 demonstra a expressão de mRNA de CXCR4 em célu-las ARPEa-19 em modelo de estresse oxidativo (exposição ao t-BH por 30minutos, 3 horas, e 6 horas). RNA foi coletado imediatamente após a expo-sição ao t-BH, exceto as alíquotas de células expostas ao t-BH por 3 horasforam incubadas por um total de três horas adicionais (3/3) ou 24 horas(3/24) depois da sua exposição ao t-BH, o RNA foi, então, coletado. Sériesde genoma humano inteiro foram deixadas hibridizarem, usando células nãotratadas como a linha base.

Os resultados indicam que a expressão de RNA de CXCR4 au-menta rapidamente em células expostas ao estresse, com um aumento de20 vezes, em tal expressão, imediatamente após exposição de três horas aot-BH, e expressão de 30 vezes na linha base imediatamente depois de seishoras de incubação com t-BH. Quase não há redução da expressão de CX-CR4 nas células expostas ao t-BH, por três horas, mediante uma posteriorincubação de três horas em meio isento de t-BH, mas um decréscimo deaproximadamente 35% de RNA de CXCR4 pode ser visto nas células expos-tas ao t-BH, por três horas, mediante uma posterior incubação de vintes ho-ras em meio isento de t-BH, em comparação com os níveis presentes imedi-atamente depois da exposição ao t-BH.

Adicionalmente, células expostas ao t-BH por 6 horas resultaramem morte celular por 24 horas. Contudo, dentre as células expostas a t-BH,por 3 horas, seguido por incubação de células em meios que não contêm t-BH, aproximadamente 70% sobreviveram, por pelo menos 24 horas.

A figura 2 mostra que inibição de siRNA de expressão de CX-CR4 em células ARPE-19 inibe a morte celular induzida por estresse oxidati-vo (exposição ao t-BH 300μΜ) em um modo dependente de dose. Um en-saio de viabilidade celular WST foi realizado em células naive ou células ex-postas ao t-BH, por 6 horas, e transfectas ou com oligonucleotídeos de con-trole ou com oligonucleotídeos de siRNA de SEQ ID No: 10 e SEQ IDNO:11, a 10nM ou 25 mM.

A figura 3 mostra os resultados de um experimento, no qual aexpressão de células transfectadas com Par 1 de SiRNA (siRNA; SEQ IDN0:10, SEQ ID NO:11), Par 2 (siRNA2; SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13), ePar 3 (siRNA3; SEQ ID NO:14; SEQ ID NO:15) foi examinada. Oligonucleo-tídeos de siRNA de Par 2 e de Par 3 são mostrados abaixo:

Par 25' aaceguggeagaaagcuagggoojc 3'(SEQ ID NO: 12)

5' gaggcccuagcuüutajuccacugua 3'(SEQ ID NO: 13)

Par 3

5'cuuggagugugacagcuuggagaug 3'(SEQ ID NO: 14)

5' eaucuccaagcugucacacuccaag 3'{SEQ ID NO: 15)

RNA total foi isolado das células (não induzidas com t-BH) e aquantidade de RNA de CXCR4 foi determinada por hibridização de série gê-nica. A quantidade de CXCR4 nas células naive é padronizada como"100%". Como mostrado, todos os pares de siRNA (Pares 1, 2, e 3) reduzema expressão de RNA de CCR4 intracelular em comparação com ambas ascélulas não tratadas com siRNA, ou com as células dadas como um siRNAde controle "não funcional". Esses resultados, combinados com aqueles ilus-trados na figura 2, mostram que a apoptose diminuiu com e decréscimo daexpressão de CXCR4, e que o tratamento de células de expressão de CX-CR4 estressadas com siRNA ani-CXCR4 restaura a viabilidade celular paraníveis que se aproximam do normal.

EXEMPLO 4

Um conjunto de experimentos similar àqueles descritos nos E-xemplos 1-3 acima são conduzidos usando cada um dos seguintes siRNAsanti-CXCR4:

Par 4

5'-cccaccaucuBcuccaiicaiKaiucu{SEQ ID NO: 36)S-ageegaugauâgsguagaugguggg(SEQ ID NO: 37)

Par 5

5'-3CC9UCuacuocatJcaücuucuuaa(SEQ ID NO: 38)S^-uuáagaagaugauggaguagauggu(SEQ ID NO: 39)Par 6

S^caucauajucLiuaacuggcsuugug(SEQ ID NO: 40}S'-cacaaugcc3guuaagaagaugaug(SEQ ID NO: 41}

Par 7

5'-ggcaauggeuuggucauccugguca(SEQ JD NO: 42)Sl-UgeccaQgaugaccaauccauugoc(SEQ «O NO: 43)

Par 8

S-ugouuggoctJuaucaigccuggüau(SEQ JO NO: 44)5'-0ueccag9Gaggauaaggccaacca(SEQ ID NO; 45)

Par 9

5'-iicuucgcfx»guuggcugGcuuacija(SEQ ID NO: 46)5'-uaguaaggcagccaacaggcgaaga

(SEQ ID NO: 47}

ParIO

5*-cgccuguüggcugtx;uuacu8cauu(SEQ !D NO: 48)s^aauguaguaaggcsgccaacaggcg(SEQ ID NO: 49}

Par 11

5'-gaggccx;uagcuuucuuccaciJ<guu(SEQtDNO: 50)5'-aacaguggaagaa8gcuagggccuc(SEQ ID NO: 51}

Par 125'-caaaggaaagcg3gguggacauuca(SEO. ID NO: 52)

5'-ugaauguccaccucg cu uuccu uug(SEQ tD NO; 53)

Par 13

5'«aaagcgagguggacauucaucugLJU(SEQ ID NO: 54)

5'-aacaga ugaauguocaccucgcuuu(SEQ ID NO: 55)

Esses pares de oligonucleotídeos são incubados com as célulasARPE4-19 contendo CXCR4 transfectadas com oligonucleotídeos de cadapar listado acima, conforme descrição acima. A inibição de siRNA da ex-pressão de CXCR4 em células ARPE-19 inibe a morte celular induzida porestresse oxidativo (exposição ao t-BH 300μΜ) em um modo dependente dedose. Um ensaio de viabilidade celular WST é realizado usando células nai-ve ou células expostas ao t-BH por 6 horas e transfectadas ou com oligonu-cleotídeos de controle ou com oligonucleotídeos de siRNA a 10nM ou 25nM.

Adicionalmente, os pares de siRNA tendem a diminuir ou inibir substancial-mente a expressão de CXCR4 em células tratadas conforme em oposição acélula de controle em que os oligonucleotídeos de siRNA não foram dados.Isso sugere que os oligonucleotídeos de siRNA anti-CXCR4 serão um agen-te útil na prevenção de RPE e neurodegeneração retiniana.

Exemplo 5

A linhagem de células de câncer de mama humanas MDA-MB-435s (que expressa SDF-1) é cultivada em placas de microtítulo e alíquotastransfectadas com um dos seguintes pares de oligonucleotídeos de siRNAanti-SDF-1.

Par a

5'-ocagagccaacgucaagcaucucaa{SEQ !D NO: 16)

S^ugagaugcuugacguuQgcücugg(SEQ ID NO: 17)

Par b5'-cagagccaac9ucaagcaucucaaa(SEQ !D NO: 18}5'-uuu9agaugcsuugacguuggcucug(SEQ ID NO: 19)

Par c

5'-acacuccaaacugugcccuucagau(SEQ ID NO; 20)

5-aucugaagggcâcaguuuggagugu;

(SEQ ID NO: 21)

Pard

5'-caagLigügcaüugacccgaagcuaa

(SEQ ID NO: 22)5'-uyagcuucgggucaaugcacacuüg(SEQ ID NO: 23)

Par e

5'-aagi>gugaauugacccgaaocuaaa(SEQ ID NO: 24)

5-uuuagcuucgggucaaugcacacuu(SEQ ID NO: 25)

Parf

5'-cauugaoccgaagcuaaaguggauu(SEQ ÍD NO: 26)S-aauccacuuuagcuucgggucaaug(SEQ ID NO: 27)

Parg

5'-cgaagpuaaaguggauucaggagua(SEQ ID NO: 28)5'-«acucaigB8üocacuuuagajuGg(SEQ ID NO: 29)

Par h

5'-ucaggaguaccuggagaaagcuuua(SEQ ID NO: 30)5'-usaagcx)uucuccafl2uacucx'.uga(SEQ ID NO: 31)Par i

5'-c©ggsgu8íx3uggBgaaagcuuuaa(SEQ ID NO: 32)5'-uuaaagcin»ucuccaggu8euccug(SEQ ID NO: 33)

Par j

5'-aggaguaccuggagaaagc»juuaag(SEQ ID NO: 34)S-uuusaagcuuucvccagguacuccu{SEQ ID NO: 36)

Depois da transfecção, as células são preparadas para análisede mRNA de SDF-1 total por série de DNA. Os resultados mostram quemRNA específico de SDF-1 está substancialmente reduzido em transfectan-tes de siRNA anti-SDF-1.

Exemplo 6

A um paciente sofrendo de degeneração macular relacionada àidade exsudativa, no olho direito, é dada uma injeção sub-retiniana de umimplante biodegradável contendo 1 μg total de quantidades eqüimolares dopar 4 de oligonucleotídeos (SEQ ID NO:36 e SEQ ID NO:37) em um volumede 100 μΙ_. O olho é monitorado semanalmente por 16 semanas. Na semana3, o paciente exibe um aperfeiçoamento de duas linhas na acuidade visual;esse aumento é mantido por todo o período de teste. No final do período de16 semanas, nenhuma extensão da degeneração macular é observada.

Exemplo 7

Células ARPE-19 foram cultivadas conforme descrição no E-xemplo 1 acima. As células foram exposta ao SDF-Ia humano recombinanteem 10, 100, e 500 ng/ml_, por 1 hora antes da adição do estressor. t-BH foientão adicionado por 0,30 minuto, 3 horas e 6 horas. O meio foi então mu-dado e as células incubadas por um total de 24 horas a partir do início dotratamento com t-BH, depois do que um ensaio de viabilidade celular WSTfoi conduzido. Como mostrado na figura 4, a adição de SDF-Ia humano re-combinante não teve nenhum efeito sobre o decréscimo estimulado por t-BHna viabilidade das células ARPE-19.Exemplo 8

Um paciente, masculino, de 72 anos de idade, é diagnosticadocom degeneração macular relacionada à idade exsudativa. Com visitas demonitoramento a cada três meses, a progressão da doença aumenta, com oolho esquerdo mostrando uma perda significante de acuidade visual entre asvisitas, e o olho direito sem mostrar alteração.

Ao paciente é dada uma injeção subconjuntival de uma soluçãocontendo 10 mg de 1,1'-[1,4-fenileno-bis(metileno)]-bis-1,4,8,11-tetraazaciclotetradecano (AMD3100), (vide Bridger et al., US 2004/0209921,aqui incorporado a título de referência) em cada olho, uma vez a cada duassemanas, por 6 meses. O paciente é monitorado, bimensalmente, e a acui-dade visual testada.

No final do período de seis meses de tratamento, o paciente étestado, e exibe um aumento da acuidade visual de duas linhas no olho direi-to e de uma linha no olho esquerdo. Angiografia com fluoresceína não revelavazamento detectável de sangue nos tecidos da retina dos vasos sangüí-neos circundantes, e não há aumento na extensão visivelmente aparente dedegeneração retiniana a partir do começo do estudo.

Exemplo 9

Uma mulher idosa de 69 anos se queixa de perda de visão noolho esquerdo. O paciente relata um início de diabetes Tipo II aos 40 anosde idade, e tem sido tratada com cloridrato de metformina por 10 anos. Oexame da retina do olho esquerdo sob dilatação revela neovascularizaçãoexsudativa e edema macular aparente consistente com o diagnóstico de re-tinopatia diabética proliferativa. Exame do olho direito mostra pequenas he-morragias e microaneurismas nos vasos sangüíneos da retina, consistentescom um diagnóstico de retinopatia diabética não proliferativa.

Ao paciente é dada uma injeção intravítrea que compreende 150μL de uma solução de ácido hialurônico na qual microesferas de PLGA bio-degradáveis (diâmetro médio de partícula de cerca de 40 μm; razão de lactí-deo para glicolídeo de 72:25) estsão suspensas. Vide o Pedido de PatenteUS 11/368.845, depositado em 6 de março de 2006, aqui incorporado a títulode referência em sua totalidade. O peso aproximado de microesferas pordose era de 20 mg. Além do polímero de PLGA, as microesferas compreen-dem aproximadamente 5% em peso de um derivado de SDF-Ia que com-preende um dímero de ligado a dissulfeto que compreende dois peptídeosidênticos, em que cada peptídeo compreende aminoácidos 1-9 de SDF-1(essas posições correspondem aos aminoácidos 22-47 da SEQ ID NO: 4, 5,e 6), com a glicina substituindo a prolina em cada posição 2 (correspondenteà posição 23 da SEQ ID NO:4, 5, e 6).

Esse dímero é designado SDF-1 (1-9[P2G]2) (vide, por exemplo,Clark-Lewis, Publicação de Patente US 2005/0164935, que é aqui incorpo-rada a título de referência). A substituição prolina para a glicina, em SDF-Iaou β parece suficiente para converter um agonista de CXCR4 em um anta-gonista de CXCR4.

As micropartículas são formuladas para liberar cerca de 40% deSDF-1 (1-9[P2G]2) nos poucos primeiros dias, com uma liberação subse-qüente de cerca de 1% a cerca de 2% sobre a vida remanescente das mi-croesferas.

A acuidade visual do paciente (e condição da retina sob dilata-ção) é monitorada a cada duas semanas por oito semanas. No final desseperíodo de tempo, o edema macular do paciente é percebido como tendocedido bastante, enquanto nenhuma nova neovascularização é observadano olho esquerdo. A angiografia de fluoresceína revela que a hemorragia foiinterrompida, e que a acuidade visual aumentou de três linhas no olho es-querdo e de 1 linha no olho direito.

Exemplo 10

O paciente do Exemplo 9 é tratado com injeção subconjuntivalem cada olho (100 μΙ_ de volume em solução de ácido hialurônico) de umimplante intra-ocular de PLGA, monolítico, simples (aproximadamente 20 μg;diâmetro de aproximadamente 3 mm) compreendendo 50% em peso de umcomposto inibidor de CXCR4: N-[(S)-1-(1-naftil)etil]-5-(2-ilmetil)aminome-til]benzoil]aminopentanoilamida (vide Yamzaki et al., Publicação US2004/0254221).Depois de 6 semanas, o paciente é monitorado, e o edema ma-cular é apenas observável. A angiografia de fluoresceína na revela qualquervazamento de sangue na retina. Depois de 8 semanas, a acuidade visual étestada, e tem 2 linhas de aperfeiçoamento em cada olho.

Exemplo 11

À paciente do Exemplo 9 é administrada uma injeção intravítreaem cada olho compreendendo 150 μΙ_ de ácido hialurônico no qual microes-feras de PLGA biodegradáveis (diâmetro médio de partícula de cerca de 40μm; razão de lactídeo para glicolídeo de 75:25) estão suspensas. O pesoaproximado das microesferas por dose era de 20 mg. Além do polímero dePLGA, as microesferas compreendem aproximadamente 5% em peso de umanticorpo monoclonal inibidor de CXCR4 (denominado 12G5; vide Hoxie,Patente US 5.994.515, aqui incorporada a título de referência). Aproxima-damente, 40% deste anticorpo são liberados nos 3 primeiros dias depois dainjeção, e, depois disso, cerca de 1% por dia.

Depois de 6 semanas, o tratamento é repetido. No final de 18semanas, a paciente é testada. Angiografia com fluoresceína não mostranenhum vazamento de sangue na retina, e a extensão de neovascularizaçãofoi reduzida. A acuidade visual foi aumentada de 3 linhas no olho esquerdo e2 linhas no olho direito.

Será entendido que uma variedade de modificações ou de deri-vados pode ser efetuada nos oligonucleotídeo descritos aqui, tal como esta-bilização contra atividade de nuclease usando, por exemplo, fosforotioato,fosfonato de metila, modificações no 2'O-metil açúcar, ácidos nucléicos depeptídeo e similares. Todas de tais variações se enquadram no escopo dapresente invenção.

Similarmente, conforme mencionado acima, agentes de peptídeoe de polipeptídeo podem compreender aminoácidos de ocorrência natural,isômeros ópticos, ou aminoácidos que não ocorrem na natureza ou raros oupeptidomiméticos.

Os exemplos acima servem somente para melhorar a descriçãode outras partes do relatório descritivo, inclusive as reivindicações. Comotais, esses exemplos ilustram certas modalidades da invenção, mas não alimitam.

Todas as publicações, patentes e pedidos de patente menciona-dos neste relatório descritivo são indicativos do nível de expertise daquelesversados na técnica à qual esta invenção pertence. Todas as publicações,patentes e pedidos de patente são aqui incorporados a título de referênciaaté a mesma extensão como se cada publicação ou pedido de patente indi-vidual fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada, atítulo de referência.

Embora a invenção acima tenha sido descrita em algum detalhea título de ilustração e exemplo para os propósitos de clareza e entendimen-to, será óbvio para aqueles versados na técnica que certas alterações e mo-dificações tornar-se-ão imediatamente aparentes para, e podem ser pratica-das por, aquele com conhecimento ordinário da técnica dentro do escopodas reivindicações seguintes a esta descrição.

Será entendido que uma variedade de modificações ou deriva-dos pode ser feita nos oligonucleotídeos descritos aqui, tal como estabiliza-ção contra a atividade da nuclease usando, por exemplo, fosforotioato, fos-fonato de metila, modificações do 2'0-metil açúcar, e similares. Todas detais variações se enquadram no escopo da presente invenção.

Os exemplos acima servem somente para ilustras certas moda-lidades da invenção, que não é limitada por eles, mas é definida apenas pe-las reivindicações que concluem este relatório descritivo.Listagem de Seqüência

<110> Rodregues , Gerard A.Donello, John E.McLaughlin, Anne P.Schweighoffer, Fabien P.

<120> COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇA OFTÁLMICA<130> D-3225 P2<160> 55

<170> Patente na versão 3.3<210> 1<211> 352<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 1

Met Glu Gly Ile Ser Ile Tyr Thr ser Asp Asn Tyr Thr Glu Glu Met1 5 10 15

Gly Ser Gly Asp Tyr Asp Ser Met Lys Glu Pro Cys Phe Arg Glu Glu

20 25 30

Asn Ala Asn Phe Asn Lys Ile Phe Leu Pro Thr Ile Tyr ser Ile Ile35 40 45

Phe Leu Thr Gly Ile vai Gly Asn Gly Leu vai Ile Leu vai Met Gly

50 55 60

Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met Thr Asp Lys Tyr Arg Leu His Leu65 70 75 80

ser vai Ala Asp Leu Leu Phe Val Ile Thr Leu Pro Phe Trp Ala vai

85 90 95

Asp Ala vai Ala Asn Trp Tyr Phe Gly Asn Phe Leu Cys Lys Ala vai

100 105 HO

His vai Ile Tyr Thr vai Asn Leu Tyr Ser Ser Val Leu Ile Leu Ala115 120 125

Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu Ala Ile vai His Ala Thr Asn Ser130 135 140Gln Arg Pro Arg Lys Leu Leu Ala Glu Lys Val Val Tyr vai Gly vai145 150 155 160

Trp Ile Pro Ala Leu Leu Leu Thr Ile Pro Asp Phe Ile Phe Ala Asn165 170 175

vai Ser Glu Ala Asp Asp Arg Tyr Ile Cys Asp Arg Phe Tyr Pro Asn180 185 190

Asp Leu Trp vai vai vai Phe Gln Phe Gln His lie Met vai Gly Leu

195 200 205

Ile Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile ser 210 215 220

Lys Leu Ser His Ser Lys Gly His Gln Lys Arg Lys Ala Leu Lys Thr225 230 235 240

Thr vai Ile Leu Ile Leu Ala Phe Phe Ala Cys Trp Leu Pro Tyr Tyr245 250 255

Ile Gly Ile Ser Ile Asp Ser Phe Ile Leu Leu Glu Ile Ile Lys Gln260 265 270

Gly Cys Glu Phe Glu Asn Thr Val His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu

275 280 285

Ala Leu Ala Phe Phe His Cys Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Ala Phe 290 295 300

Leu Gly Ala Lys Phe Lys Thr Ser Ala Gln His Ala Leu Thr Ser vai305 310 315 320

Ser Arg Gly Ser Ser Leu Lys Ile Leu Ser Lys Gly Lys Arg Gly Gly325 330 335

His Ser Ser vai Ser Thr Glu Ser Glu Ser Ser Ser Phe His Ser Ser340 345 350

<210> 2<211> 1912<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 2

ttttttttct tccctctagt gggcggggca gaggagttag ccaagatgtg actttgaaac 60cctcagcgtc tcagtgccct tttgttctaagaaggatata atgaagtcac tatgggaaaataattctctt gtgcccttag cccactactttggtttttta aattgcttta aaaattttttgtgaatgtcc attcctttgc ctcttttgcaaatgggctca ggggactatg actccatgaatttcaataaa atcttcctgc ccaccatctacaatggattg gtcatcctgg tcatgggttagtacaggctg cacctgtcag tggccgacctagttgatgcc gtggcaaact ggtactttggctacacagtc aacctctaca gcagtgtcctcctggccatc gtccacgcca ccaacagtcaggtctatgtt ggcgtctgga tccctgccctcaacgtcagt gaggcagatg acagatatatggtggttgtg ttccagtttc agcacatcatcctgtcctgc tattgcatta tcatctccaacaaggccctc aagaccacag tcatcctcatctacattggg atcagcatcg actccttcatgtttgagaac actgtgcaca agtggatttcttgtctgaac cccatcctct atgctttcctcgcactcacc tctgtgagca gagggtccagtggacattca tctgtttcca ctgagtctgaatgtaaaaga ctttttttta tacgataaattataaaagac tgaccaatat tgtacagttttctttagttt ttgtgaagtt taattgacttatgtgtgtct aggcaggacc tgtggccaagctgtagaaaa gggaactgaa cattccagagatccccagct gtttatgcat agataatctctaagacgtga ttttgctgta gaagatggcaatgctggttt ttcagttttc aggagtgggttattaagttg ttaataaaag tacatgttaa

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<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 3

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Met Asn Ala Lys Val vai Val Val Leu Val Leu Val Leu Thr Ala Leu1 5 10 15

Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro vai Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys20 25 30

Arg Phe Phe Glu Ser His vai Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys

35 40 45

Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys50 55 60

Asn Asn Asn Arg Gln vai Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln65 70 75 80

Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys85

<210> 5<211> 93<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 5

Met Asn Ala Lys vai vai vai vai Leu vai Leu vai Leu Thr Ala Leu1 5 10 15

Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys

20 25 30

Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys35 40 45

Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile vai Ala Arg Leu Lys50 55 60

Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln

169165 70 75 80

Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys Arg Phe Lys Met85 90

<210> 6<211> 119<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 6

Met Asn Ala Lys Val vai vai Val Leu Val Leu Val Leu Thr Ala Leu1 5 10 15

Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys

20 25 30

Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn vai Lys His Leu Lys35 40 45

Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile vai Ala Arg Leu Lys50 55 60

Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln65 70 75 80

Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys Gly Arg Arg Glu Glu Lys Val85 90 95

Gly Lys Lys Glu Lys Ile Gly Lys Lys Lys Arg Gln Lys Lys Arg Lys

100 105 HO

Ala Ala Gln Lys Arg Lys Asn115

<210> 7

<211> 1937<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 7

gcactttcac tctccgtcag ccgcattgcc cgctcggcgt ccggcccccg acccgcgctc 60gtccgcccgc ccgcccgccc gcccgcgcca tgaacgccaa ggtcgtggtc gtgctggtcc 120tcgtgctgac cgcgctctgc ctcagcgacg ggaagcccgt cagcctgagc tacagatgcc 180catgccgatt cttcgaaagc catgttgcca

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<210> 8

<211> 3542

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ttcgggccct tcccacagga catttctcta

cgctcggcgt ccggcccccg acccgcgctc 60tgaacgccaa ggtcgtggtc gtgctggtcc 120ggaagcccgt cagcctgagc tacagatgcc 180gagccaacgt caagcatctc aaaattctca 240cccggctgaa gaacaacaac agacaagtgt 300agtacctgga gaaagcttta aacaagaggt 360aacccttaca gtaggagccc agctctgaaa 420cccctgccag ggcagggccc caggcattgc 480ttttcaccat ttgattatgt agcaaaatac 540ttcagtgtca ctggcgacac gtagcagctt 600tagagtgtct ttccacggag ccactcctct 660gagctgtgca ggtggggaga ctgggctgag 720ggagagccac caagagggac gcctgggggt 780gtgaaggctt ctctctgtgg gatgggatgg 840ctccatccac atgggagccg ggtctgcctc 900tgaggcagca gtgtgaggcc agggcagagt 960catcctccac gttctgctca tcattctctg 1020gtctccatgg ccccgcaaaa ggactctcag 1080agcaggaaat gaaaatgtct tgtgttacct 1140ggaatattgt ccattgtcca atcctatgtt 1200ccaatgtctt gatgcatgca ctgttccccc 1260tgggcccttt gagtgcagtc ctgatcagag 1320tcccccactg atcacaaaaa catggtgggt 1380gcaccagggt tgaccccaga ggattgctgc 1440ttcaaactag ggccaagccc agcactgctt 1500ggtttttaaa acccagtcca caaaataacc 1560cacatctaac ctcatcttct tcaccatttg 1620ggccctctct gctctgcgtg tcacctgtgc 1680agagaacaat gtgctatgtg aagagtaagt 1740caacctgcct gacatttgga gtgttcccct aagccactta aaatgttcac ttttgacaaa ttcattcagt cttacgaata cttttgccct taatgaagaa agtggaaaac aaggaagtca taggaagtaa attatagtga tgtaatcttg gtagggtaat tagtaacatg tgttaagtat ggcagaaggc aaacccatca acaaaaattg cagctatgtt atattgaaaa aatagagcct aactctttca aaaccttttg aaattaacct tggggcagtc attatccagg taatccaaga tgtacctgcc cccaatccat gaaccaagac gaccctaaat cttgactaca gtcaggaaag aaatagataa gagtagaaac tgcagggaaa atcagctcct tcctggagac tgcccagcta tttgcaaggg aaaagtctct tgtaatccga gtgcgtccac gagctgttta ctagggatcc ctctacctga cactcccttg ggctccctgt tgtatcagga cccagaggaa ggggccagag gtctgtgcca cgtgtttgtg ctgtggtgtg cgaggaggct ccagagggca ctctgcttgt tccgcttgga gcagaggggc tgaatagcag ctaagtcttt ccattggatc tcattggacc atcaccgtgg gctccctgac tgggagttga agctggatga gaatttgagt gctctgatcc ggagccccat tcctgggaaa tattccctag ataaaaccat gtagaaaatt tgttattttg gtgaatgatt cagtgttaaa tgtgatgaat cccagataat gtgaaaatgg tccaggagaa aaataaataa gaaacaactc tttgagaaac aaaaaatgta tatgcactta taattttcct aa <210> 9

tccactgagg gcagtcgata gagctgtatt 1800ggcaagcact tgtgggtttt tgttttgttt 1860ttgattaaag actccagtta aaaaaaattt 1920aagcaaggaa actatgtaac atgtaggaag 1980aattgtaact gttcttgaat ttaataatct 2040tttcataagt atttcaaatt ggagcttcat 2100tcccttaaac aaaaattaaa atcctcaatc 2160gagggatctt tactagttat aaagatacag 2220ctcactatac cagtataatt gagttttcag 2280tattttaaaa tctgtcacgt agaacttgga 2340cattgaattc ttggttgagg aaacaaacat 2400gaatcatttc tatttctcct ccatgggaga 2460attatttgca taacaattcc tctactaaca 2520aagcaatatg catttaaata cagtcttcca 2580atctcttttt gctttcgaac tgctagtcaa 2640ctcatctgtc cctccgggac ctggtgctgc 2700aacctcttca gaggccctcg ctgccagctc 2760gctcgttgac tggctgtgtg ttgggattga 2820tccccctctg tccaggcact gagataccag 2880tattagagat tacctcctga gaaaaaaggt 2940aaggttgcac ctcccccaac cttagatgtt 3000cttccatggt gtgatcgtct gactggtgtt 3060tcgcctttcc caggtgctac acccttttcc 3120ctctacagag cttccctgac tcattctgaa 3180aaacttccaa atcccctaag cagaccactg 3240caacctcgct ggactctcag tctctgagca 3300actgtatttt gtattgtttc aattgcatct 3360ggccaattcc tatacgcagc gtgctttaaa 3420aacaatttct actttgaagt cataccaatg 3480aataaagttc tgtactcaaa tgtagccacc 3540 3542<211> 471

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 9

gcactttcac tctccgtcag ccgcattgcc cgctcggcgt ccggcccccg acccgcgctc 60 gtccgcccgc ccgcccgccc gcccgcgcca tgaacgccaa ggtcgtggtc gtgctggtcc 120 tcgtgctgac cgcgctctgc ctcagcgacg ggaagcccgt cagcctgagc tacagatgcc 180 catgccgatt cttcgaaagc catgttgcca gagccaacgt caagcatctc aaaattctca 240 acactccaaa ctgtgccctt cagattgtag cccggctgaa gaacaacaac agacaagtgt 300 gcattgaccc gaagctaaag tggattcagg agtacctgga gaaagcttta aacaaggggc 360 gcagagaaga aaaagtgggg aaaaaagaaa ,agataggaaa aaagaagcga cagaagaaga 420 gaaaggctgc ccagaaaagg aaaaactagt tatctgccac ctcgagatgg a 471

<210> 10

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 10aacaguggaa gaaagcuagg ggcuc

<210> 11

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti CXCR4 siRNA

<400> 11

gaggcccuag cuuucuucca cuguu

<210> 12

<211> 2 5

<212> RNA

<213> seqüência Artificial<220>

<223> anti CXCR4 si RNA

<400> 12

aacaguggaa gaaagcuagg gccuc

<210> 13

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti -CXCR4 si RNA

<400> 13

gaggcccuag cuuucuucca cuguu

<210> 14

<211> 25

<212> RNA

<213> seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 14

cuuggagugu gacagcuugg agaug 25

<210> 15

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 15

caucuccaag cugucacacu ccaag

<210> 16

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 16

ccagagccaa cgucaagcau cucaa

<210> 17

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<22B> anti-SDF-I si RNA

<400> 17

uugagaugcu ugacguuggc ucugg

<210> 18

<211> 25

<212> RNA

<21B> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I si RNA

<400> 18

cagagccaac gucaagcauc ucaaa 25

<210> 19

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 19

uuugagaugc uugacguugg cucug

<210> 20

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 20

acacuccaaa cugugcccuu cagau

<210> 21

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<22B> anti-SDF-I si RNA

<400> 21

aucugaaggg cacaguuugg agugu

<210> 22

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<22B> anti-SDF-I si RNA

<400> 22

caagugugca uugacccgaa gcuaa

<210> 23

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 23

uuagcuucgg gucaaugcac acuug

<210> 24

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I si RNA

<400> 24

aagugugcau ugacccgaag cuaaa

<210> 25

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 25

uuuagcuucg ggucaaugca cacuu

<210> 26

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 26

cauugacccg aagcuaaagu ggauu 25

<210> 27

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<22B> anti-SDF-I siRNA

<400> 27

aauccacuuu agcuucgggu caaug

<210> 28

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I si RNA

<400> 28

cgaagcuaaa guggauucag gagua 25

<210> 29

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<22B> anti-SDF-I siRNA

<400> 29

uacuccugaa uccacuuuag cuucg 25

<210> 30

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 30

ucaggaguac cuggagaaag cuuua 25

<210> 31

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 31

uaaagcuuuc uccagguacu ccuga 25

<210> 32

<211> 2 5

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial25

25

<220>

<223> anti-SDF-I si RNA

<400> 32

caggaguacc uggagaaagc uuuaa

<210> 33

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 33

uuaaagcuuu cuccagguac uccug

<210> 34

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 34

aggaguaccu ggagaaagcu uuaaa 25

<210> 35

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-SDF-I siRNA

<400> 35

uuuaaagcuu ucuccaggua cuccu

<210> 36

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial25

25

<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 36

Gccaccaucu acuccaucau cuucu

<210> 37

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 37

agaagaugau ggaguagaug guggg

<210> 38

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 38

accaucuacu ccaucaucuu cuuaa 25

<210> 39

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 39

uuaagaagau gauggaguag auggu

<210> 40

<211> 25

<212> RNA

<213> seqüência Artificial

25<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 40

caucaucuuc uuaacuggca uugug

<210> 41

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 41

cacaaugcca guuaagaaga ugaug

<210> 42

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 42ggcaauggau uggucauccu gguca

<210> 43

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 43

ugaccaggau gaccaaucca uugcc

<210> 44

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA<400> 44

ugguuggccu uauccugccu gguau<210> 45

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 45

auaccaggca ggauaaggcc aacca

<210> 46

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 46

ucuucgccug uuggcugccu uacua 25

<210> 47

<211> 2 5

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 47

uaguaaggca gccaacaggc gaaga

<210> 48

<211> 2 5

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 48

cgccuguugg cugccuuacu acauu

<210> 49

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 49

aauguaguaa ggcagccaac aggcg

<210> 50

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 50

gaggcccuag cuuucuucca cuguu 25

<210> 51

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 51

aacaguggaa gaaagcuagg gccuc

<210> 52

<211> 25

<212> RNA

<213> seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 52

caaaggaaag cgagguggac auuca

<210> 53

<211> 25

<212> RNA

<21B> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 si RNA

<400> 53

ugaaugucca ccucgcuuuc cuuug

<210> 54

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA

<400> 54

aaagcgaggu ggacauucau cuguu 25

<210> 55

<211> 25

<212> RNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> anti-CXCR4 siRNA<400> 55

aacagaugaa uguccaccuc gcuuu1

17862(AP)

25

Claims (97)

1. Método para tratar um distúrbio retiniano em um mamífero,compreendendo:administrar ao tecido retiniano de um mamífero, que necessitede tal tratamento, uma composição que compreende um inibidor de atividadede CXCR4.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o inibidorde atividade de CXCR4 é selecionado do grupo que consiste em i) um inibi-dor de atividade traducional de mRNA de CXCR4, e ii) um inibidor de ativi-dade translacional de mRNA de SDF-1.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, em que o inibidorde atividade de CXCR4 compreende i) uma primeira região de ácido nucléi-co que tem pelo menos 12 nucleotídeos contíguos exatamente complemen-tares a uma região contígua de uma seqüência de nucleotídeos que codificaa seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 1, ou ii) uma segunda região deácido nucléico de pelo menos 12 nucleotídeos contínuos exatamente com-plementares à dita primeira região de ácido nucléico.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o inibidorde atividade de CXCR4 compreende ainda tanto a dita primeira como a ditasegunda região de ácido nucléico.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, em que a dita pri-meira e a dita segunda região de ácido nucléico formam um híbrido de ácidonucléico estável sob temperatura e pH fisiológicos.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, em que pelo menosuma de a dita primeira e a dita segunda região de ácido nucléico é de pelomenos 21 nucleotídeos de comprimento.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que tanto a ditaprimeira como a dita segunda regiões de ácido nucléico são de pelo menos-21 nucleotídeos de comprimento.

8. Método, de acordo com a reivindicação 3 ou 5, em que pelomenos um de a dita primeira e a segunda região de ácido nucléico é de pelomenos 21 nucleotídeos de comprimento.

9. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que ambas asditas primeira e segunda regiões de ácido nucléico são de pelo menos 25nucleotídeos de comprimento.

10. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que pelo me-nos uma de a dita primeira e a segunda região de ácido nucléico é de pelomenos 25 nucleotídeos de comprimento.

11. Método, de acordo com a reivindicação 5, em que pelo me-nos uma de a dita primeira e a segunda região de ácido nucléico é de pelomenos 25 nucleotídeos de comprimento.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3, 8 ou 10, em que pelo menos uma da dita região de ácido nucléico compre-ende uma seqüência de ribonucleotídeos.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, em que o ditoinibidor de expressão de CXCR4 compreende RNA interferente pequeno(siRNA).

14. Método, de acordo com a reivindicação 12, em que o ditoRNA compreende pelo menos uma das seguintes seqüências de nucleotí-deos: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO:- 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO:- 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQID NO: 31 , SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO:- 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQID NO: 40, SEQ ID NO: 41 , SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO:- 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO:- 53, SEQ ID NO: 54, e SEQ ID NO: 55.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, em que o ditosiRNA compreende pelo menos uma das seguintes seqüências de nucleotí-deos: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 , SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ IDNO: 38, SEQ ID NO: 39, SEO ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42,SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ IDNO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51,SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, e SEQ ID NO: 55.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que o ditosiRNA compreende pelo menos uma das seguintes seqüências de nucleotí-deos: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQID NO: 13, SEQ ID NO: 14, e SEQ ID NO: 15.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que o ditosiRNA compreende pelo menos uma das seguintes seqüências de nucleotí-deos: SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 11.

18. Método, de acordo com a reivindicação 14, em que o ditosiRNA compreende pelo uma das seguintes seqüências de nucleotídeos:SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ IDNO: 20, SEQ ID NO: 21 , SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24,SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ IDNO: 20 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 , SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35.

19. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o dito ini-bidor de atividade de CXCR4 compreende um ácido nucléico que compre-ende um ou mais resíduos de nucleotídeos resistentes à nuclease.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, no qual pelo me-nos um de o dito um ou mais resíduos de nucleotídeos compreendem, inde-pendentemente, uma fração selecionada do grupo que consistem em 2' ami-no, 2'-C-alila, 2'-flúor-, 2'-0-metila, e 2Ή.

21. Método para reduzir a taxa de progressão de um distúrbioretiniano em um mamífero, que compreende:administrar ao tecido retiniano de um mamífero, que necessitede tal redução, uma composição inibidora que compreende um componentede polipeptídio que se ligará seletivamente ao sítio alvo seletivo de SDF-1 oude CXCR4, em que a ligação do dito componente de polipeptídio inibe a ati-vidade celular de SDF-1 ou de CXCR4.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, em que o ditoinibidor se liga seletivamente ao CXCR4.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, em que o ditoinibidor compreende um derivado de SDF-1 que inibe o receptor de CXCR4.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, em que o ditoderivado de SDF-1 compreende uma substituição de aminoácido para a pro-Iina em uma posição no dito derivado de SDF-1 correspondente à posição-23 das SEQ ID NO: 4, 5, e 6.

25. Método, de acordo com a reivindicação 23, em que a ditaprolina é substituída com um resíduo de glicina.

26. Método, de acordo com a reivindicação 23, em que o ditoderivado de SDF-1 compreende uma substituição de aminoácido para a Iisi-na em uma posição no dito derivado de SDF-1 que corresponde à posição-22 das SEQ ID NO: 4, 5, e 6.

27. Método, de acordo com a reivindicação 23, em que o ditoderivado de SDF-1 compreende um dímero.

28. Método, de acordo com a reivindicação 22, em que o ditoinibidor compreende um antagonista de CXCR4 que compreende uma regi-ão de ligação de um anticorpo policlonal ou monoclonal natural ou sintético.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28, em que o ditoinibidor compreende um fragmento de anticorpo selecionado do grupo queconsiste em um fragmento Fab anti-CXCR4, um fragmento Fab' anti- CXCR4e derivados recombinantes de um destes.

30. Método, de acordo com a reivindicação 28, em que o ditoantagonista de CXCR4 compreende uma região variável de anticorpo anti-CXCR4.

31. Método, de acordo com a reivindicação 22, em que o ditoantagonista compreende um fragmento de anticorpo sintético humanizado.

32. Método, de acordo com a reivindicação 21, em que o ditoinibidor se liga seletivamente ao SDF-1.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, em que o ditoinibidor compreende uma forma inativa de CXCR4.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33, em que a ditaforma inativa de CXCR4 carece em pelo menos uma porção do domínio in-tracelular do CXCR4 ativo.

35. Método, de acordo com a reivindicação 32, em que o ditoinibidor compreende um antagonista de SDF-1 que compreende uma regiãode ligação de anticorpo natural ou sintético.

36. Método, de acordo com a reivindicação 35, em que o ditoinibidor compreende um fragmento de anticorpo selecionado do grupo queconsiste em um fragmento Fab anti-SDF e um fragmento Fab anti- SDF-1.

37. Método, de acordo com a reivindicação 32, em que o ditoinibidor de SDF-1 compreende uma região variável de anticorpo anti-SDF-1.

38. Método, de acordo com a reivindicação 32, em que o ditoantagonista compreende um fragmento de anticorpo sintético humanizado.

39. Método para tratar um distúrbio retiniano, que compreende:administrar ao tecido retiniano de um mamífero, que necessitede tal tratamento, uma composição que compreende um inibidor de oligonu-cleotídeo de atividade de CXCR4.

40. Método, de acordo com a reivindicação 39, em que o ditoinibidor de CXCR4 compreende um oligonucleotídeo de RNAi.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, em que o ditooligonucleotídeo de RNAi é administrado diretamente aos tecidos oculares.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditooligonucleotídeo de RNAi é administrado por colocação de um ácido nucléi-co no segmento posterior do olho.

43. Método, de acordo com a reivindicação 42, em que o ditoácido nucléico é injetado no segmento posterior do olho.

44. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditosiRNA é administrado por distribuição subconjuntival.

45. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditosiRNA é administrado por distribuição subretinal.

46. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditosiRNA é administrado em um veículo selecionado do grupo que consiste emum implante, uma microesfera, e um líquido.

47. Método, de acordo com a reivindicação 46, em que o ditosiRNA é administrado em um veículo selecionado do grupo que consiste emum implante biodegradável e uma microesfera biodegradável.

48. Método, de acordo com a reivindicação 47, em que o ditosiRNA é administrado intravitrealmente.

49. Método, de acordo com a reivindicação 47, em que o ditosiRNA é administrado subconjuntivalmente.

50. Método, de acordo com a reivindicação 47, em que o ditosiRNA é administrado subretinalmente.

51. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditoRNAi compreende uma seqüência de nucleotídeos complementar a umaregião de seqüência de nucleotídeos de pelo menos 12 nucleotídeos contí-guos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 e SEQ ID NO: 9.

52. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditoRNAi compreende uma seqüência de nucleotídeos suplementar a uma regi-ão de seqüência de nucleotídeos de pelo menos 18 nucleotídeos contíguosde SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO:-6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 e SEQ ID NO: 9.

53. Método, de acordo com a reivindicação 41, em que o ditoRNAi compreende uma seqüência de nucleotídeos complementar a umaregião de seqüência de nucleotídeos de pelo menos 22 nucleotídeos contí-guos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 e SEQ ID NO: 9.

54. Método, de acordo com a reivindicação 42, em que o ditoRNAi compreende uma seqüência de nucleotídeos suplementar a uma regi-ão de seqüência de nucleotídeos de pelo menos 25 nucleotídeos contíguosde SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 e SEQ IDNO: 9.

55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51a 54, em que a dita região de seqüência de nucleotídeos é compreendida deSEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3.

56. Método, de acordo com a reivindicação 55, em que a ditaregião de seqüência de nucleotídeos está pelo menos parcialmente contidaem um quadro de leitura aberta que codifica um polipeptídio de CXCRA.

57. Método, de acordo com a reivindicação 56, em que a ditaregião de seqüência de nucleotídeos não está contida em um quadro de lei-tura aberta que codifica um polipeptídio de CXCR4.

58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 55a 55, em que a dita região de seqüência de nucleotídeos está compreendidana SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 ou SEQ ID NO: 9.

59. Método, de acordo com a reivindicação 58, em que a dita re-gião de seqüência de nucleotídeos está pelo menos parcialmente contida emum quadro de leitura abertura de codificação de um polipeptídio de SDF-1.

60. Método, de acordo com a reivindicação 59, em que a ditaregião de seqüência de nucleotídeos não está contida em um quadro de lei-tura aberta que codifica um polipeptídio.

61. Método, de acordo com a reivindicação 42, em que o ditoácido nucléico compreende um vetor de expressão que expressa o dito RNAiin situ.

62. Método, de acordo com a reivindicação 42, em que o ditoácido nucléico está contido em um implante intra-ocular.

63. Método, de acordo com a reivindicação 62, em que o ditoimplante intra-ocular é pelo menos parcialmente biodegradável.

64. Método, de acordo com a reivindicação 61, em que o ditoácido nucléico compreende siRNA tendo uma seqüência de nucleotídeosselecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 ,SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ IDNO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20,SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ IDNO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29,SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 , SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ IDNO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38,SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ IDNO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47,SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51 , SEQ IDNO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, e SEQ ID NO: 55.

65. Método para tratar um distúrbio retiniano, que compreendeadministrar ao tecido retiniano de um mamífero, em necessidadede tal tratamento, uma composição inibidora de CXCR4 que compreendecompostos heterocíclicos da seguinte fórmula:<formula>formula see original document page 106</formula>incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis e formas protegidas destes,em que V é um composto de heterociclo substituído de 9 a 24 membros con-tendo 2 a 4 átomos de nitrogênio de amina opcionalmente substituídos es-paçados um dos outros por 2 ou mais átomos carbono opcionalmente substi-tuídos, e cujo heterociclo pode compreender opcionalmente um anel aromá-tico ou heteroaromático, e em que(a) o dito heterociclo contém pelo menos O ou S, o dito O ou Sespaçado de qualquer heteroátomo adjacente por pelo menos 2 átomos decarbono, e em que o dito S é opcionalmente oxidado ou(b) pelo menos um átomo de carbono no dito anel é substituído por um substituinte retirador de elétron, ou(c) ambos (a) e (b);e em que cada R é, independentemente, H ou uma alquila de cadeia linear,ramificada ou cíclica contendo de 1 a 6 átomos de carbono; χ é 0-4; Ar1 éuma fração aromática ou heteroaromática não substituída ou substituída; e Ar2 é um grupo aromático ou heterocíclico não substituído ou substituído.

66. Método, de acordo com a reivindicação 65, em que a ditacomposição é administrada intravitrealmente.

67. Método, de acordo com a reivindicação 65, em que a ditacomposição é administrada subconjuntivalmente.

68. Método, de acordo com a reivindicação 65, em que a ditacomposição é administrada subretinalmente.

69. Método, de acordo com a reivindicação 65, em que a ditacomposição compreende um implante.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, em que o ditoimplante compreende uma microesfera.

71. Método, de acordo com a reivindicação 75, em que a ditacomposição compreende um líquido.

72. Método para tratar um distúrbio retiniano, que compreendeadministrar ao tecido retiniano do dito mamífero, que necessite de tal trata-mento, uma composição inibidora de CXCR4 que compreende um compostotendo a fórmula:<formula>formula see original document page 107</formula>em queX é (R32)0--(CR3=CR3)p--(CR32)q--NR52; (CR32), -R4; um anelmonocíclico ou bicíclico contendo opcionalmente Ν, O ou S; ou uma benzila,cada uma delas é opcionalmente substituída; com a condição que a ditabenzila não seja substituída com uma arila ou heteroarila de 5-6 membrosvia um Iigante L-NH-L, em que cada L é uma ligação, CO, SO2 ou CH2; Y éuma fração aromática ou parcialmente aromática, monocíclica ou bicíclicacontendo nitrogênio opcionalmente substituído;A e R1 são, cada um, um substituinte não interferente, e com acondição que dois As não formem um anel adicional;R2 e R3 são, independentemente, H ou uma alquila opcionalmen-te substituída;R4 é um anel heterocíclico opcionalmente substituído ou um he-terocomposto contendo pelo menos um =0, SO, C=N, ciano, NROR, ou ha-lo, em que o dito heterocomposto é opcionalmente substituído com um anelheterocíclico; R5 é H ou alquila;em que pelo menos um de R1 e R2 não é H; eem que R1 e R2 podem ser conectados para formarem um aneladicional se Y não contiver um resíduo 2-imidazolila opcionalmente conecta-do a um anel adicional;I e η são, independentemente, 0-4;ρ é 0-1;ο e q são, independentemente, 1-4;ré 1-6;e sais farmacologicamente aceitáveis e ésteres destes.

73. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que o com-posto é 1,1 '-[1,4-fenileno-bis(metileno)]-bis-1,4,8,11 -tetraazaciclotetradecano.

74. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que a ditacomposição é administrada intravitrealmente.

75. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que a ditacomposição é administrada subconjuntivalmente.

76. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que a ditacomposição é administrada subretinalmente.

77. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que a ditacomposição compreende um implante.

78. Método, de acordo com a reivindicação 77, em que do ditoimplante compreende uma microesfera.

79. Método, de acordo com a reivindicação 72, em que a ditacomposição compreende um líquido.

80. Método para tratar um distúrbio retiniano, que compreendeadministrar ao tecido retiniano de um mamífero, que necessitede tal tratamento, uma composição inibidora de CXCR4 que compreende umcomposto da seguinte fórmula geral (1) ou um sal farmacologicamente acei-tável ou éster deste: <formula>formula see original document page 108</formula> na fórmula geral (1),n1 representa um número inteiro de 0 a 3 e n2 representa umnúmero inteiro de 0 a 4;A representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(2);<formula>formula see original document page 109</formula>na fórmula geral (2),A1 e A2 representam, cada um, independentemente, um anelheteroaromático mono ou policíclico opcionalmente substituído;G1 representa uma ligação simples ou um grupo representadopela seguinte fórmula geral (3); e<formula>formula see original document page 109</formula>R1,R2 e R3 representam um átomo de hidrogênio, um grupo al-quila opcionalmente substituído tendo de 1 a 6 átomos de carbono, um gru-po alquenila opcionalmente substituído tendo de 2 a 6 átomos de carbono,um grupo alquinila opcionalmente substituído tendo de 2 a 6 átomos de car-bono, ou um grupo alquila cíclica opcionalmente substituído tendo de 3 a 6átomos de carbono;W representa um grupo alquileno opcionalmente substituído ten-do de 1 a 7 átomos de carbono, um grupo alquenileno opcionalmente substi-tuído tendo de 2 a 7 átomos de carbono, um grupo alquinileno opcionalmen-te substituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono, um grupo alquileno cíclicoopcionalmente substituído tendo de 3 a 10 átomos de carbono, um anel a-romático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel heteroaro-mático mono ou policíclico opcionalmente substituído ou um anel heterocícli-co saturado mono ou policíclico opcionalmente substituído;D1 e D2 representam, cada um, independentemente, um átomode hidrogênio ou um grupo representado pela seguinte fórmula geral (4):<formula>formula see original document page 109</formula>na fórmula geral (4),G2 representa um grupo alquileno opcionalmente substituídotendo de 1 a 15 átomos de carbono, um grupo alquenileno opcionalmentesubstituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono, ou um grupo alquinileno op-cionalmente substituído tendo de 2 a 7 átomos de carbono; eR4 representa um átomo de hidrogênio, um grupo alquila cíclicoopcionalmente substituído tendo de 3 a 10 átomos de carbono, um anel a-romático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel aromáticopolicíclico opcionalmente substituído e parcialmente saturado, um anel hete-roaromático mono ou policíclico opcionalmente substituído, um anel heteroa-romático policíclico opcionalmente substituído e parcialmente saturado, ouum anel heterocíclico mono ou policíclico opcionalmente substituído, satura-do;B representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(5):<formula>formula see original document page 110</formula>na fórmula geral (5),Q1 representa S, O, ou NH e Q2 representa S, O, ou NR8 (excetopara um caso de Qi=NH e Q2=NR8; R5 e R8 representam, cada um, inde-pendentemente, um átomo de hidrogênio, um grupo alquila inferior opcio-nalmente substituído, um grupo alquila cíclica opcionalmente substituído, ouum anel aromático opcionalmente substituído, e R5 e R8 podem formar, op-cionalmente, um anel; eR6 e R7 representam, cada um, independentemente, um átomode hidrogênio, um substituinte representado pela.seguinte fórmula geral (6),um grupo alquila opcionalmente substituído tendo de 1 a 15 átomos de car-bono, um grupo alquila cíclica opcionalmente substituído de 3 a 15 átomosde carbono, um grupo alquenila opcionalmente substituído tendo de 1 a 3duplas ligações e de 2 a 15 átomos de carbono, ou um grupo alquinila op-cionalmente substituído tendo de 1 a 3 triplas ligações e de 2 a 15 átomosde carbono, e R6 e R7 formam, opcionalmente, um anel, em que R6 e R7 sãoopcionalmente ligados um ao outro via um heteroátomo, um grupo alquilacíclica, um anel aromático, um anel heteroaromático, ou um anel heterocícli-co para formarem o anel:<formula>formula see original document page 110</formula>na fórmula (6),m representa O ou 1, quando m=0, Q3 representa CH ou N e Q4representa N1 S1 ou O1 e quando m=1, Q3 e Q4 representam, cada um, inde-pendentemente, CH ou N;G3 representa um grupo alquileno opcionalmente substituídotendo de 1 a 4 átomos de carbono, ou um grupo alquileno opcionalmentesubstituído tendo de 2 a 4 átomos de carbono;R9 representa um grupo alquila inferior, um grupo alcóxi, umgrupo haloalquila, um grupo haloalcóxi, um grupo hidroxialcóxi, um átomo dehalogênio, um grupo amino, um grupo alquilamino, um grupo carboxila, umgrupo alcoxicarbonila, um grupo carbamoíla, um grupo alquilcarbamoíla, umanel heterocíclico saturado, ou um anel heteroaromático, que é substituídoem qualquer posição em um anel diferente daquele de um átomo de nitrogê-nio existindo opcionalmente no anel, e quando m=1 e Q3 e Q4 representamsimultaneamente CH, R9 representa opcionalmente um átomo de hidrogênio;Rio representa um átomo de hidrogênio, ou um mesmo grupocomo R5, e opcionalmente ligações com G3 para formarem um anel;χ representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(7):<formula>formula see original document page 111</formula>na fórmula geral (7),Z1 e Z2 representam, cada um, independentemente, uma ligaçãosimples, S, O, ou NR13, e mi representa um número inteiro de 1 ou 2;R11, R12, e R13 representam, cada um, independentemente, umátomo de hidrogênio, um grupo alquila opcionalmente substituído tendo de 1a 6 átomos de carbono, um grupo alquenila opcionalmente substituído tendode 2 a 6 átomos de carbono, um grupo alquinila opcionalmente substituídotendo de 2 a 6 átomos de carbono, ou um grupo alquila cíclica opcionalmen-te substituído tendo de 3 a 6 átomos de carbono;y representa um grupo representado pela seguinte fórmula geral(8):<formula>formula see original document page 112</formula>na fórmula geral (8), m2 representa um número inteiro 1 ou 2; e quando háum átomo de carbono assimétrico opcionalmente existente no composto re-presentado pela fórmula geral (1), o composto está em qualquer forma deum isômero óptico puro representado como configuração absoluta de R ouS, uma mistura destes em qualquer razão, e uma mistura racêmica destes, equando existem dois ou mais átomos de carbono assimétricos no composto,o composto está em qualquer forma de um diastereômero opticamente puro,um mistura racêmica destes, e uma combinação destes em qualquer razão.

81. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que o ditocomposto compreende N-[(S)-1 -(1 -naftil)etil]-5-(2-metilbenzil)amino-2-(S)-[4-[N-(imidazol-2-ilmetil)aminoemtil]benzoil]aminopentanoilamida.

82. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que a ditacomposição é administrada intravitrealmente.

83. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que a ditacomposição é administrada subconjuntivalmente.

84. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que a ditacomposição é administrada subretinalmente,

85. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que a ditacomposição compreende um implante.

86. Método, de acordo com a reivindicação 85, em que o ditoimplante compreende uma microesfera.

87. Método, de acordo com a reivindicação 80, em que a ditacomposição compreende um líquido.

88. Método para tratar um distúrbio retiniano em um mamífero,em que o método compreende a etapa de administrar a um mamífero, quenecessite de tal tratamento, um composto tendo a fórmula<formula>formula see original document page 113</formula>e sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-fármacos destes,em que A representa um anel heterocíclico contendo nitrogênio,de 5 a 10 membros, que pode ter um substituinte; anel B representa um anelheterocíclico contendo nitrogênio, insaturado, de 5 a 10 membros, que podeter um substituinte; anel D representa um anel heterocíclico, contendo nitro-gênio, de 4 a 15 membros, que pode ter um substituinte ; X representa N ouC; Y é C1-6 alquila substituída ou não substituída; R1 representa H, um grupohidrocarboneto que pode ter um substituinte, ou um grupo anel que pode terum substituinte; R2 e R3 representam, cada um, independentemente, H, umgrupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte, ou um grupo anel quepode ter um substituinte, ou podem formar juntos com o átomo de nitrogênioligado a qualquer um destes, um anel heterocíclico contendo nitrogênio quepode ter um substituinte; e R4 representa H ou um grupo hidrocarboneto quepode ter um substituinte; e sais farmaceuticamente aceitáveis deste.

89. Método, de acordo com a reivindicação 88, em que o com-posto tem a seguinte fórmula:<formula>formula see original document page 113</formula>em que B1 representa um anel de piridina ou pirimidina que pode ter umsubstituinte; o anel D1 representa um anel heterocíclico, de 4 a 8 membros,saturado, contendo nitrogênio monocíclico, que pode ter um substituinte, eY1 representa uma C1-4 alquila substituída ou não substituída.

90. Método, de acordo com a reivindicação 89, em que Y1 é -(CR5R6)n-, R5 e R6 são, cada um, H ou juntos representam um grupo oxo;η representa um número inteiro entre 1 e 4, e quando η representa um nú-mero inteiro entre 2 e 4, cada um do CR5R6 pode ser idêntico ou diferente.

91. Método, de acordo com a reivindicação 88, em que cada R2representa -(CO)-R2A, em que R2A é (i) um grupo hidrocarboneto que podeser substituído por um grupo básico e pode ter ainda um substituinte; (ii) umgrupo anel que pode ser substituído por um grupo básico e pode ter aindaum substituinte; ou (iii) um grupo heterocíclico monocíclico, de 5 a 8 mem-bros, contendo nitrogênio; e R3 é um grupo hidrocarboneto que pode ter umsubstituinte ou um grupo anel que pode ter um substituinte.

92. Método, de acordo com a reivindicação 91, em que R2A épirrolidina, piperidina ou morfolina.

93. Método, de acordo com a reivindicação 89, em que o anelformado por R2 e R3 juntos é um anel heterocíclico de 5 a 8 membros, con-tendo nitrogênio, que pode ter um substituinte.

94. Método, de acordo com a reivindicação 89, em que D1 é pir-rolidina ou piperidina.

95. Método, de acordo com a reivindicação 88, em que a com-posto tem a fórmula geral selecionada de<formula>formula see original document page 114</formula>em que o anel D2 representa pirrolidina ou piperidina; m representa um nú-mero inteiro entre 1 e 3; R1A representa um grupo hidrocarboneto que podeter um substituinte ou um grupo anel monocíclico que pode ter um substituin-te; R3A representa um grupo hidrocarboneto que pode ter um substituinte ouum grupo anel que pode ter um substituinte; anel E representa um heteroci-clo monocíclico de 5 a 8 membros, contendo nitrogênio, que pode ter umsubstituinte; e η representa um número inteiro entre 1 e 4.

96. Método, de acordo com a reivindicação 88, em que o com-posto tem a seguinte fórmula<formula>formula see original document page 114</formula>em que R é Ci-6 alquil-NH2.

97. Método, de acordo com a reivindicação 88, em que o com-posto é selecionado do grupo que consiste em N-[(2R,3S)-2-(aminometil)-1-cicloexil-3-prrolidinil]-4-(1-azepanil)-2-pirimidina amina, N-[(2R,3S)-2-(2-ami-noetil)-1-cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1-azepanil)-2-pirimidina amina, N-[(2R, 3S)-2-(3-aminopropil)-1 -cicloexil-3- pirrolidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina,N-[(2R,3S)-2-(5-aminopentil)-1 -cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1 -azepanil)-2-pirimi-dina amina, N-[(2R,3S)-2-(aminoetil)-1 -cicloexil-3-pirrolidinil]-4-(1 -azepanil)--2-pirimidina amina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2R,3S)-1 -cicloexil-2-[2-(dimetilamino)-etil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1-azepanil)-N-{(2R, 3S)-1-cicloexil-2-[3-(dimetilamino)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1-azepanil)-N-{(2R,3S)-1-cicloexil-2-[5-(dimetilamino)pentil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina ami-na, 4-(1 -azepanilj-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(dipropilamino)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, cis-4-((2RS, 3SR)-2-(3-aminopropil)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-pirrolidinil)cicloexanol, 4-(1-azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(dietilamino)propil]-3-pirrolidini}}-2-pirimidina ami-na, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1 -cicloexil-2-[3-(1 -pirrolidinil)propil]-3-pirroli-dinil}-2-pirimidina amina, 4-(1-azepanil)-N-{(2RS,3SR)-1-cicloexil-2-[3-(1-pi-peridinil)propil]-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, 4-(1 -azepanil)-N-{(2RS,-3SR)-2-[3-(1 -azepanil)propil]-1 -cicloexil-3-pirrolidinil}-2-pirimidina amina, N-[(2RS,3SR)-2-(2-aminoetil)-1-cicloexil-3-piperidinil]-4-(1-azepanil)-2-pirimi-dina amina, N-{(2RS,3SR)-2-(3-aminopropil)-1-[1-(cicloexilcarbonil)-4-piperi-dinil]-3-pirrolidinil}-4-(1-azepanil)-2-pirimidina amina, N-{(2RS, 3SR)-2-(3-aminopropil)-1 -[1 -(ciclopentilcarbonil)-4-piperidinil]-3-pirrolidinil}-4-(1 -azepa-nil)-2-pirimidina amina, N-{(2RS,3SR)-2-(3-aminopropil)-1-[1-(3- fluorbenzoil)--4-piperidinil]-3-pirrolidinil}-4-(1 -azepanil)-2-pirimidina amina, N-(3-amino-propil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-pipe-ridinil)acetamida, 2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 - ci-cloexil-2-piperidinil)-N-[3-(dimetilamino)propil]acetamida, N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-4-piperidinacarboxamida, cis-4-{(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-2-[3-(dietilamino)propil]-1-pirrolidinil}cicloexanol, N-{2-[(2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1'-(3-fluorobenzoil)-1,4'-bipiperidina-2-il)etil}-4-piperidin carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]ami-no}-1 '-(cicloexil carbonil)-1,4'-bipiperidina-2-il)etil}-4-piperidina carboxamida,N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperi-dinil)etil]-2-morfolina carboxamida, (3S)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)--2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-3-piperidina carboxamida,(3R)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-pi-peridinil)etil]-3-piperidina carboxamida, (3R)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepa-nil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-3-pirrolidina carboxamida,- 2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexipiperidinN)etil]-2-metilpropanamida, N-(4-aminobutil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)acetamida, N-(2-ami-noetil)-2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil)acetamida, N-(2-ami-ridinil)acetamida, (3S)-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]ami-no}-1-cicloexil-2- pirrolidinil)etil]-3-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-- 3-{[4-(1 -azepanil)-2- pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-pirrolidinil)etil]-2-morfolinacarboxamida, N-[2-(( 2RS,3SR)-3-{[4-azepanil)-2—pirimidinil]amino}-1-ci-cloexil-2-piperidinil)etil]-1 -isopropil-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,- 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-N-(te-traidro-2H-piran-4-il)-4- piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2^irimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etiÍ]-N-(2-metoxietiOpiperidina carboxamida, N-[2- ((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]ami-no}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-N-(2-hidroxietil)-4-piperidina carboxamida,(2S)-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-2-piperidina carboxamida, N-[2- ((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-- 2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]-1 -etil-4-piperidina carboxami-da, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2- pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-4-hidróxi-4-piperidina carboxamida, (2R)-2-amino-N-[2-((2RS,- 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2- piperidinil)etil]-3-(4-hidroxifenil)propanamida, (2S)-2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-- 2^irimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]-4-hidroxibutanamida, N-(2-aminoetil)-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-- 2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-aze-panil)-2-pirimidinil]amino}-1 -etil-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-(tetraidro-2H-tiopiran-- 4-il)2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -aze-panil)-2-pirimidinil]amino}-1-isopropil-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxa-mida, N-(2-{(2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -[2-hidróxi-1 -(hidroximetil)etil]-2-piperidinil}etil)-4-piperidina carboxamida, (2R)-2-amino-N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-3-(1 H-imidazol-4-il)propanamida, (2S)-2-amino-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidinil)etil]3-(1 H-imida-zol-4-il)propanamida, N-{2-[(2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}--1-(tetraidro-2H-piran-4-il)-2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS, 3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)-etil]-2-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimi-dinil]amino}-1-cicloexil-2-piperidinil)etil]nicotinamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidiniil)etil]isonicotiniamida,-N-{2-[(2RS, 3SR)-3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(1 -oxidotetraiidro--2H-tiopiran-4-il)-2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)--3-{[4-(1 -azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(1,1 -dioxidotetraidro-2H-tiopiran-4-il)--2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS, 3SR)-1-cicloexil-3-{[4-(1 -pirrolidinil)-2-pirimidinil]amino}-2-piperidinil)etil]-4-piperid carboxamida,-N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -isopropil-2-piperi-dinil)etil]-1-etil-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS, 3SR)-1-etil-3-{[4-(1-piperidinil)-2-pirimidinil]amino}-2-piperidinil)etil]-4-piperidina carboxamida, N-[2-((2RS,3SR)-3-{[4-(1-azepanil)-2- pirimidinil]amino}-1 -cicloexil-2-piperidi-nil)etil]-N-(tetraidro-2H-piran-4-il)-2-morfolina carboxamida, N-{2-[(2RS,3SR)--3-{[4-(1-azepanil)-2-pirimidinil]amino}-1 -(3-hidroxipropil)-2-piperidinil]etil}-4-piperidina carboxamida, N-(2-(3-aminopropil)-1-cicloexilpirrolidin-3-il)-4-(azepan-1 -il)pirimidin-2-amina, N-((2R,3S)-2-(3- aminopropil)-1-cicloexilpir-rolidin-3-il)-4-(azepan-1-il)pirimidin-2-amina, e sais farmaceuticamente acei-táveis destes, e pró-fármacos destes.