BRPI0707666A2 - compostos e composiÇÕes como inibidores de proteÍna cinase - Google Patents

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Qiong Zhang
Xia Wang
Taebo Sim
Pamela A Albaugh
Nathanael S Gray
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Abstract

COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES COMO INIBIDORES DE PROTEÍNA CINASE. A presente invenção refere-se a uma nova classe de compostos, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos de uso de tais compostos para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios associados à atividade anormal ou desregulada de cinase, particulamente doenaçs ou distúrbios que envolvem a atiavação anormal das classes Abl, Bcr-Abl, Bmx, b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR, CSK, FGFR3, JAK2, Lck, Met, PKC<244>, SAPK2<244>, Tie2, TrkB e P70S6K. Estes compostos apresentam a seguinte estrutura (fórmula I), na qual: R~1~ é selecionado de -NR~6~R~7~ e -NR~6~C(O)R~8~; no qual R~6~ é selecionado a partir de hidrogênio e C~1-6~alquila; R~7~ é selecionado a partir de hidrogênio, C~1-6~alquila, -NR~9~R~10~, C~6-10~aril-C~0-4~alquila, C~1-10~heteroaril-C~0-4~alquila, C~3-12~cicloalquil-C~0-4~alquila e C~3-8~heterocicloalquil-C~0-4~alquila; no qual qualquer arila, heteroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila de R~7~ pode ser opcionalmente substituída por 1 a 3 radicais independentemente selecionados a partir de C~1-6~alquila, C~1-6~alcóxi, -QNR~9~R~10~ e C~3-8~heterocicloalquil-C~0-4~alquila; no qual Q é selecionado a partir de uma ligação e C~1-4~alquileno; R~8~ é selecionado a partir de hidrogênio e C~1-6~alquila; R~2~ é selecionado a partir de hidrogênio e C~1-6~alquila; R~3~ é selecionado a partir de hidrogênio, halo, C~1-6~alcóxi substituído por halogênio; R~5~ é selecionado a partir de -C(O)NHR~11~ e -NHC(O)R~11~; na qual quqalquer arila ou hetroarila de R~11~ é opcionalmente substituída por 1 a 3 radicais independentemente selecionados, a partir de halo, C~1-6~alquila, C~1-6~alcóxi, C~1-6~alquila substituída por halogênio, C~1-6~alcóxi substituído por halogênio, di-C~1-4~alquil-amino-C~1-6~ alcóxi, di-C~1-4~alquil-amino-C~1-4~alquil(C~1-4~alquil)amino, C~1-10~heterocicloalquil-óxi; na qual qualquer substituinte heteroarila ou heterocicloalquila de R~11~ é ainda opcionalmente substituída por 1 a 2 radicais independentemente selecionados a partir de C~1-6~alquila e hidróxi-C~1-6~alquila, X e Y são independentemente selecionados a partir de N e CH; e os sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, soolvatos e isômeros dos mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS-TOS E COMPOSIÇÕES COMO INIBIDORES DE PROTEÍNA CINASE".
Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pedidode Patente Provisório US Nq 60/771.045, depositado em 06 de fevereiro de2006. O relatório completo desse pedido está aqui incorporado em sua inte-gridade a título de referência e para todos os fins.
Antecedentes da Invenção
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a uma nova classe de compostos,composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos deuso de tais compostos para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios associ-ados à atividade anormal ou desregulada de cinase, particularmente doen-ças ou distúrbios que envolvem a ativação anormal das cinases Abi, Bcr-Abl,Bmx1 b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR, CSK, FGFR3, JAK2, Lck1 Met1 PKCoc,SAPK2oc, Tie2, TrkB e P70S6K.
Antecedentes
As proteínas cinases representam uma grande família de proteí-nas, que desempenham um papel central na regulação de uma variedade deprocessos celulares e na manutenção do controle do funcionamento celular.Uma lista parcial e não Iimitativa destas cinases incluem: tirosina cinasesreceptoras tais como cinase receptora do fator de crescimento de derivadosplaquetários (PDGF-R), o receptor do fator de crescimento nervoso, trkB, e oreceptor do fator de crescimento de fibroblastos, FGFR3, B-RAF e KDR; tiro-sina cinases não receptoras tais como Abl e a cinase de fusão BCR-Abl, Lck,Bmx e c-src; e serina/treonina cinases tais como as cinases c-RAF, sgk,MAP (por exemplo, MKK4, MKK6, etc.) e SAPK2oc e SAPK2p. atividade decinase aberrante foi observada em muitas doenças incluindo distúrbios proli-ferativos benignos e malignos assim como em doenças resultantes da ativa-ção inadequada dos sistemas imunológico e nervoso.
Os novos compostos desta invenção inibem a atividade de umaou mais proteínas cinases e espera-se, portanto, que sejam úteis no trata-mento de doenças associadas a cinases.
Sumário da Invenção
Em um aspecto, a presente invenção fornece compostos de fórmula I:
<formula>formula see original document page 3</formula>
onde:
R1 é selecionado de -NR6R7 e -NR6C(O)R8; onde R6 é selecio-nado de hidrogênio e Ci.6alquila; R7 é selecionado de hidrogênio, Ci-6alquila,-NR9Rio, C6.ioaril-Co-4alquila, Ci-ioheteroaril-Co-4alquila, C3-i2Cicloalquil-C0.4alquila e C3.8heterocicloalquil-C0-4alquila; onde qualquer arila, heteroarila,cicloalquila ou heterocicloalquila de R7 pode ser opcionalmente substituídapor 1 a 3 radicais independentemente selecionados de Ci-6alquila, Ci-6alcóxi,-QNR9Rio e C3.8heterocicloalquil-Co-4alquila; onde Q é selecionado de umaligação e Ci-4alquileno; R8 é selecionado de hidrogênio e Ci-6alquila; R9 eR10 são independentemente selecionados de hidrogênio e Ci-6alquila;
R2 é selecionado de hidrogênio e Ci.6alquila;
R3 é selecionado de hidrogênio e Ci-6alquila;
R4 é selecionado de hidrogênio, halo, Ci-6alquila, Ci-6alcóxi, Ci-6alquila substituída por halogênio e Ci.6alcóxi substituído por halogênio;
R5 é selecionado de -C(O)NHRn e -NHC(O)Rn; onde Rn é se-lecionado de C6.i0arila e Ci-i0heteroarila; onde qualquer arila ou heteroarilade Rn é opcionalmente substituída por 1 a 3 radicais independentementeselecionados de halo, Ci.6alquila, Ci-6alcóxi, Ci.6alquila substituída por halo-gênio, Ci-6alcóxi substituído por halogênio, di-Ci-4alquil-amino-Ci.6alcóxi, di-Ci-4alquil-amino-Ci.6alquil(Ci-4alquil)amino, Ci.ioheteroaril-Co-4alquila, C3.8heterocicloalquil-C0-4alquila e C3.8heterocicloalquil-óxi; onde qualquer substi-tuinte heteroarila ou heterocicloalquila de Rn é ainda opcionalmente substi-tuída por 1 a 2 radicais independentemente selecionados de Ci-6alquila ehidróxi-Ci-6alquila;X e Y são independentemente selecionados de N e CH; e osderivados do tipo N-óxido, derivados do tipo pró-fármaco, derivados protegi-dos, isômeros individuais e mistura de isômeros do mesmo; e os sais farma-ceuticamente aceitáveis e solvatos (por exemplo hidratos) de tais compostos.
Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece umacomposição farmacêutica que contém um composto de fórmula I ou um deri-vado do tipo N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros do mesmo;ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em mistura com um oumais excipientes adequados.
Em úm terceiro aspecto, a presente invenção fornece um méto-do de tratamento de uma doença em um animal onde a inibição da atividadede cinase, particularmente a atividade de Abi, Bcr-Abl, Bmx, b-RAF, c-RAF,c-SRC, KDR, CSK, FGFR3, JAK2, Lck, Met, PKCot, SAPK2cc, Tie2, TrkBe/ou P70S6K, pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ou a sintomato-logia das doenças, método este que compreende administrar ao animal umaquantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I ou de umderivado do tipo N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros domesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Em um quarto aspecto, a presente invenção fornece o uso deum composto de fórmula I na produção de um medicamento para tratamentode uma doença em um animal onde a atividade de cinase, particularmente aatividade de Abi, Bcr-Abl, Bmx, b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR, CSK, FGFR3,JAK2, Lck, Met, PKCa, SAPK2a, Tie2, TrkB e/ou P70S6K, contribui para apatologia e/ou a sintomatologia da doença.
Em um quinto aspecto, a presente invenção fornece um proces-so para preparar compostos de fórmula I e os derivados do tipo N-óxido, de-rivados do tipo pró-fármaco, derivados protegidos, isômeros individuais emistura de isômeros dos mesmos, e os sais farmaceuticamente aceitáveisdos mesmos.
Descrição Detalhada da Invenção
Definições
"Alquila" como um grupo e como um elemento estrutural de ou-tros grupos, por exemplo alquila e alcóxi substituídos por halogênio, podeser de cadeia reta ou de cadeia ramificada. Ci-4-alcóxi inclui, metóxi, etóxi, esimilares. Alquila substituída por halogênio inclui trifluormetila, pentafluoreti-Ia1 e similares.
"Arila" significa um sistema de anel aromático monocíclico oubicíclico fundido contendo seis a dez átomos de carbono no anel. Por exem-plo, arila pode ser fenila ou naftila, de preferência fenila. "Arileno" significaum radical divalente derivado de um grupo arila.
"Heteroarila" é como definida para arila acima onde um ou maisdos membros do anel é um heteroátomo. Por exemplo, Ci-i0heteroarila, con-forme usado neste pedido inclui piridila, indolila, indazolila, quinoxalinila, qui-nolinila, benzofuranila, benzopiranila, benzotiopiranila, benzo[1,3]dioxol, imi-dazolila, benzo-imidazolila, pirimidinila, furanila, oxazolila, isoxazolila, tiazoli-la, triazolila, tetrazolila, pirazolila, tienila, etc.
"Cicloalquila" significa um sistema de anel monocíclico, bicíclicofundido ou policíclico ligado por ponte, saturado ou parcialmente insaturado,contendo o número indicado de átomos de anel. Por exemplo, C3-10 cicloal-quila inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, etc.
"Heterocicloalquila" significa cicloalquila, como definido nestepedido, contanto que um ou mais dos carbonos do anel indicados sejam1 substituídos por uma porção selecionada de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-,-S(O) - ou -S(O)2-, onde R é hidrogênio, C1^alquila ou um grupo protetor denitrogênio. Por exemplo, C3^heterocicloalquila conforme usado neste pedidopara descrever os compostos da invenção inclui morfolino, pirrolidinila, pirro-lidinil-2-ona, piperazinila, piperidinila, piperidinilona, 1,4-dioxa-8-aza-spiro[4,5]dec-8-ila, etc.
"Halogênio" (ou halo) de preferência representa cloro ou flúor,mas também pode ser bromo ou iodo.
"Lista de Cinases" é uma lista de cinases compreendendo Abl(humana), Abl(T315l), JAK2, JAK3, ALK, JNK1a1, ALK4, KDR, Aurora-A,Lck1 Blk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rat), Met,CDK1/ciclinaB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRcc, CK2, PDK1, c-kit,Pim-2, C-RAF1 PKA(h), CSK1 ΡΚΒα, cSrc, PKCa1 DYRK2, Plk3, EGFR1ROCK-I, Fes1 Ron, FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms1 SGK1 Fyn1 SIK1GSK3p, Syk, IGF-1R, Tie-2, IKKB, TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK1AMPK(rato), LIMK1, Rsk2, Axl1 LKB1, SAPK2p, BrSK2, Lyn (h), SAPK3,BTK, MAPKAP-K3, SAPK4, CaMKIV1 MARK1, Snk, CDK2/ciclinaA, MINK,SRPK1, CDK3/ciclinaE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MKK6(h), TBK1,CDK6/ciclinaD3, MLCK, TrkA, CDK7/ciclinaH/MAT1, MRCKp, TSSK1, CHK1,MSK1, Yes, CK1d, MST2, ZIPK, C-Kit (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2,DDR2, NEK6, DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1 Ba, EphAI, PDGFRp, EphA2,Pim-1, EphA5, ΡΚΒβ, EphB2, ΡΚΰβΙ, EphB4, PKCÔ, FGFR1, ΡΚΰη, FGFR2,PKCG, FGFR4, PKD2, Fgr, PKGip, Flt1, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret1IKKa, RIPK2, IRR, ROCK-ll(humana), JNK2a2, Rse, JNK3, Rsk1(h), PI3 Κγ,PI3 Κδ e ΡΙ3'Κβ. Os compostos da invenção são rastreados contra a lista decinases (tipo selvagem e/ou mutação da mesma) e inibem a atividade depelo menos um dos membros da referida relação.
"Formas mutantes de BCR-Abl" significa alterações simples oumúltiplas de aminoácidos da seqüência do tipo selvagem. As mutações naBCR-ABL agem rompendo pontos de contato críticos entre a proteína e oinibidor (por exemplo, Gleevec, e similares), com maior freqüência, induzindouma transição do estado inativo para o estado ativo, isto é, para uma con-formação à qual BCR-ABL e Gleevec são incapazes de se ligar. A partir deanálises de amostras clínicas, o repertório de mutações encontradas em as-sociação ao fenótipo resistente vem crescendo lenta, porém inexoravelmen-te com o tempo. As mutações parecem se agrupar em quatro regiões princi-pais. Um grupo de mutações (G250E, Q252R, Y253F/H, E255K/V) inclui a-minoácidos que formam a alça fixadora de fosfato para ATP (também co-nhecida como a alça P). Um segundo grupo (V289A, F311L, T315I, F317L)pode ser encontrado no sítio de ligação de Gleevec e interage diretamentecom o inibidor via ligações de hidrogênio ou interações de Van der Waals. Oterceiro grupo de mutações (M351T, E355G) se agrupa bem próximo aodomínio catalítico. O quarto grupo de mutações (H396R/P) fica localizado naalça de ativação, cuja conformação é a chave molecular que controla a ati-vação/inativação das cinases. Mutações pontuais BCR-ABL associadas àresistência de Gleevec detectada em pacientes com CML e ALL incluem:M224V, L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, Y253H, Y253F, E255K,E255V, D276G, T277A, V289A, F311L, T315I, T315N, F317L, M343T,M315T, E355G, F359V, F359A, V379I, F382L, L387M, L387F, H396P,H396R, A397P, S417Y, E459K, e F486S (as posições dos aminoácidos, in-dicadas pelo código de uma letra, são aquelas para a seqüência do Gen-Bank, número de acesso AAB60394, e correspondem ao ABL tipo 1a; Marti-nelli et al., Haematologica/The Hematology Journal, 2005, Abril; 90-4). Amenos que de outra forma especificado nesta invenção, Bcr-Abl refere-se aotipo selvagem e às formas mutantes da enzima.
"Tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se a um método dealívio ou melhora de uma doença e/ou seus conseqüentes sintomas.
Descrição das Modalidades Preferidas
A proteína de fusão BCR-AbI é o resultado de uma translocaçãorecíproca que funde o proto-oncogene Abl com o gene Bcr. BCR-AbI é entãocapaz de transformar células B através do aumento da atividade mitogênico.Este aumento resulta em uma redução da sensibilidade à apoptose, assimcomo na alteração da adesão e alojamento de células progenitoras de CML.
A presente invenção fornece compostos, composições e métodos para otratamento de doenças associadas a cinases, particularmente doenças as-sociadas às cinases Abi, Bcr-Abl, Bmx, b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR, CSK,FGFR3, JAK2, Lck, Met, PKCoc, SAPK2oc, Tie2, TrkB e P70S6K. Por exem-plo, leucemia e similares distúrbios proliferativos associados a BCR-AbI po-dem ser tratados através da inibição do tipo selvagem e de formas mutantesde Bcr-Abl.
Em uma modalidade, com referência aos compostos de fórmulaI, X é CH e Y é selecionado de CH e N; R2 é hidrogênio e R3 é hidrogênio.
Em uma outra modalidade, Ri é selecionado de -NHR7 e-NHC(O)R8; onde R7 é selecionado de: hidrogênio; amino; metila; etila; iso-propila; ciclopropila; morfolino-etila; benzila opcionalmente substituída porradicais 1-3 metóxi; piridinila substituída por um grupo selecionado de morfo-lino-metila, dimetil-amino-etila e dimetil-amino-metila; metil-piperazinil-etila;piperazinil-etila; metil-piperazinil-propila; pirrolidinil-etila; pirrolidinil-metilaopcionalmente substituída por etila; piperidinil-metila; piperidinila opcional-mente substituída por metila; e metil-piperazinila; e R8 é metila.
Em uma outra modalidade, R4 é metila; e R5 é selecionado de-C(O)NHRn e -NHC(O)Rn; onde Rn é selecionado de fenila, 2-oxopirroli-din-1-ila, 1,3,4-tiadiazolila, piridinila, pirazolila, tienila, isoxazolila e tiazolila;onde o referido fenila, pirazolila, tienila, 2-oxopirrolidin-1-ila, 1,3,4-tiadiazolila,piridinila, isoxazolila ou tiazolila é opcionalmente substituída por 1 a 3 radi-cais independentemente selecionados de halo, trifluormetila, metil-pipera-zinila, etil-piperazinila, 2-oxoazetidin-1-ila, morfolino, morfolino-metila, hidró-xi-etil-piperazinila, dimetilamino-etil-(metil)amino, dimetilamino-propil-(metil)amino, metil-imidazolila, metila, isopropila, t-butila, metóxi, metil-piperidinil-óxi, metil-piperazinil-metila, etil-piperazinil-metila, etila e ciclopropila.
Os compostos preferidos da invenção são selecionados de: N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-[4-(2-hidróx -il]-5-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-piri-midin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ami-no-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metil-imida-zol-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-2-me-til-2H-pirazol-3-carboxílico; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metil-imidazol-1 -il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-feni^metil-piperidin-4-ilóxi)-5-trifluormetil-benzamida; {3-[3-(6-ciclopropilamino-piri-midin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-amida do ácido 1-t-Butil-5-metil-1H-pirazol-3-carboxílico; {3-[3-(6-ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilami-no]-4-metil-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-tiofeno-2-carboxílico; 3-[3-(6-Ciclo-propilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-N-(3-trifbenzamida; 3-[3-(6-Ciclopropilamino^irimidin-4-il)^iridin-2-ilamino]-4-metil-N-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluormetil-fenil]-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclo-propilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenimida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino^irimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluormetil-benzamida; 4-Cloro-N-{3-[3-(6-ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenitil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)^irimidin-4-il]-piri-din-2-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; 4-Cloro-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-^benzamida; 3-(4-Metil-imidazol-1 -il)-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilami-no)^irimidin-4-il]-piridin-2Hlamino}fenil)-5-trifluormetil-benzam N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-itamin -metil-piperidin-4-ilóxi)-5-trifluormetil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-1 -il)-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-i3-trifluormetil-benzamida; (4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-amida do ácido 1-t-Butil-5-metil-1H-pirazol-3-car-boxílico; (4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)^irimidin-4-il]^iridin-2-il-amino}-fenil)-amida do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; 4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-i1 trifluormetil-fenil)-benzamida; N-(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]^iridin-2-ilamino}-benzam 3-[3-(6-Amino^irimidin-4-il)^iridin-2-ilamino]-4-metil-N-(3-trifluormmida; 3-[3-(6-Amino^irimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-N-(4-cloro-3-trifluormetil-fenil)-4-metil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-feníl}-3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ami-no-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-etil-piper^ -il)-5-tri-fluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(1-metil-pi^xi)-5-trifluormetil-benzamida; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-amida do ácido 1-t-Butil-5-metil-1H-pirazol-3-carboxílico; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-amid do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilami-no]-4-metil-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-tiofeno-2-carboxílico; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil4enil}-3^iperazi^metil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fe-nil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-piri-midin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-[4-(2-hidróxi-etil)-pi -il]-5-trifluormetil-benzamida; 3-[3-(6-Acetilamino-pirimidin-4-il)-pÍridin-2-ilamino]-N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-4-metil-benzamida; N-(4-Me-til-3^3-[6-(5-morfolin-4-ilmetil-piridin-2-ilamino)-pirimidin-4-ino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(4-morfolin-4-ilmetil-piridin-2-ilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-3da; N-(3-{3-[6-(5-Dimetilaminometil-piridin-2-ilamino)-pirimidinilamino}-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(3-{3-[6-(4-Dimetilamino-metH-piridin-2-ilamino)-pirimidin-4-il]-pm^metil-benzamida; N-IS-íe-Ciclopropilamino-^.S^bipirimidinil^-ilaminoH-me-til-fenil]-3-trifluormetil-benzâmida; N-(4-Metil-3-{6-[2-(4-metil-piperazin-1 -il)-etilamino]-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{6-[3-(4-metil-piperazin-1 -ilj-propilaminol-^.õ^bipirimidinil^^ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-ilam[4,5']bipirimidinil-4'-ilamCiclopropilamino-[4,5']b
ino]-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Amino-ino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-pirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-(4-metil-pipera-zin-1 -il)-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-(4-etil-piperazin-1 -il)-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5]bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-[4-(2-hidró-xi-etil)-piperazin-1-il]-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5']bipinmidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluorme-til-benzamida; 4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-ilami-no]-N-(3-trifluormetil-fenil)-benzamida; 4-Metil-3-{6-[2-(4-metil-piperazin-1 -il)-etilamino]-[4,5l]bipirimidinil-4'-ilamino}-N-(3-trifluormetil-fenil)-benzam^ 4-Metil-3-[6-(2-piperazin-1 -il-etilaminoJ-K.õ^bipirimidinil^^ilaminol-N-tS-trifluor-metil-fenil)-benzamida; N-tS-íe-Hidrazino-K.õ^bipirimidinil^^ilaminoJ-^metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-lsopropilamino-[4, S1JbipirimidiniI-^-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; N-[4-Metil-3-(6-metilamino-^,S^bipirimidinil-^-ilaminoJ-fenill-S-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Etilamino-^.õ^bipirimidinil-^-ilaminoí^-metil-fenill-S-trifluormetil-benzamida; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4>5,]bipirimidinil-4,-ilamino]-fenil^ do ácido3-t-Butil-isoxazol-5-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5']bipinmidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-isoxazol-3-carboxílico;{4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-ilamino]da do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfo-lin-4-il-etiiamino)-[4,5,]bipirimidinil-4,-ilamino]-feni^^ do ácido 5-t-Butil-tiof e no-2-carbox íl ico; N-(4-t-Butil-tiazol-2-il)-4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etil-amino)-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino]-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(2-pirrolidin-1-il-etilamino)-[4,5]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-3-trifluormetil-benz N-(3-{6-[(1 -Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-amino]-[4,5]bipirimidinil-4'-ilamino}-4-m3-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{6-[(piperidin-4-ilmetil)-amino]-[4,5']bi-pirimidinil-4'-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(piperi-din-4-ilamino)-[4,5']bipirimidinÍI-4'-ita N-{4-Metil-3-[6-(1 -metil-piperidin-4-ilamino)-[4,5l]bipirimidinil-4l-ilamino]-fenitrifluormetil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(4-metil-piperazin-1 -ilamino)-[4,5']bi-pirimidinil-4,-ilamino]-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4)5,]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-Ciclopropil-isoxazol-3-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimi-dinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-Ciclopropil-2H-pirazol-3-carboxílico;3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-metoxip4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-cloropiridin-4-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(4-(trifluormetil)tiazol-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(3-(6-(metilami-no)pirimidin-4-il)piridin-2-ilamino)-N-(2-(3-(dimetilamino)propóxi)-5-(trmmetil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(3-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)piridin-2-ilami-no)-N-(2-(N-(2-(dimetilamino)etil)-N-metilamino)-5-(trifluormetil)fenibenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(trifluormetil)-2-(morfolinometil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)piri-midin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-t-butil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-4-metilbenzami-da; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(trifluormetil)-2-(2-oxopirrolidin-1-il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-(N-(2-(dimemetilamino)propóxi)-5-(trifluor-metil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(6-etilpiridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-t-butil-4-metiltiazol-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(4-t-butiltiazol-2-il)-4-metil-benzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(6-(trifluormetil)piridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(4-(trifluormetil)piridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-4-metil-N-(piridin-4-il)benzami-da; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(3-(trifluormetil)-4-(2-oxoazetidin-1 -il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-4-metil-N-(piridin-2-il)benzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(1 -etil-1 H-pirazol-4-il)-4-metilbenzamida;3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(triflourmetil)-2-morfolinofenil)-4-metilbenzamida; N-(2-(3-(dimetilamino)propoxi)-5-(triflour-metil)fenil)-3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-4-metilben-zamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(trifluorme-til)-2-(2-oxoazetidin-1-il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimi-din-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(trifluormetil)-2-(4-metilpiperazin-1 -il)fenil)-4-metilbenzamida; e 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-(N-(3-(dimetilamino)propil)-N-metilamino)-5-(trifluormetil)fenil)-4-metilbenza-mida.
Outros compostos preferidos da invenção estão detalhados nosExemplos e na Tabela I, infra.
Farmacologia e Utilidade
Os compostos da invenção modulam a atividade das cinases e,como tais, são úteis para tratar doenças ou distúrbios em que as cinasescontribuem para a patologia e/ou a sintomatologia da doença. Exemplos decinases que são inibidas pelos compostos e composições descritos nestainvenção e contra as quais os métodos descritos neste relatório são úteisincluem, porém sem limitação, Abl1 BCR-AbI (tipo selvagem e formas mutan-tes), Bmx, b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR, CSK1 FGFR3, JAK2, Lck, Met,PKCa, SAPK2a, Tie2, TrkB e P70S6K.
A Abelson tirosina cinase (isto é, Abi, c-Abl) está envolvida naregulação do ciclo celular, na resposta celular ao estresse genotóxico, e natransmissão de informações sobre o ambiente celular através da sinalizaçãode integrina. De um modo geral, parece que a proteína Abl tem um papelcomplexo como um módulo celular que integra sinais de várias fontes extra-celulares e intracelulares e que influencia decisões referentes ao ciclo celulare à apoptose. A Abelson tirosina cinase inclui derivados subtipos tais como aBCR-AbI de fusão quimérica (oncoproteína) com atividade de tirosina cinasedesregulada ou a v-Abl. A BCR-AbI é crítica na patogênese de 95% das Ieu-cemias mielogênicas crônicas (CML) e 10% das Ieucemias linfocíticas agu-das. STI-571 (GIeevec) é um inibidor da tirosina cinase BCR-AbI oncogênicae é usado para o tratamento de leucemia mielóide crônica (CML). No entan-to, alguns pacientes no estágio de crise blástica da CML são resistentes aoSTI-571 devido a mutações na cinase BCR-Abl. Foram reportadas até hojemais de 22 mutações com as mais comuns sendo G250E, E255V, T315I,F317L e M351T.
Os compostos da presente invenção inibem a cinase abi, espe-cialmente a cinase v-abl. Os compostos da presente invenção também ini-bem a cinase BCR-AbI do tipo selvagem e as mutações da BCR-AbI e sãoportanto adequados para o tratamento de câncer e de doenças tumorais po-sitivos para Bcr-abl, tais como Ieucemias (especialmente leucemia mielóidecrônica e leucemia linfoblástica aguda, onde são encontrados especialmentemecanismos de ação apoptóticos), e também apresentam efeitos sobre osubgrupo de células-tronco leucêmicas assim como potencial para a purifi-cação dessas células in vitro depois da remoção das referidas células (porexemplo, remoção da medula óssea) e reimplantação das células depois deterem sido clarificadas das células cancerosas (por exemplo, reimplantaçãodas células da medula óssea purificadas).
A via de sinalização Ras-Raf-MEK-ERK medeia a resposta celu-lar a sinais de crescimento. A Ras é mutada para uma forma oncogênica em-15% dos cânceres humanos. A família Raf pertence à serina/treonina cina-se e inclui três membros, A-Raf1 B-Raf e c-Raf (ou RaM). O foco sobre aRaf sendo um alvo medicamentoso foi concentrado na relação da Raf comoum efetor descendente da Ras. No entanto, dados recentes sugerem que aB-Raf pode ter um papel proeminente na formação de certos tumores semnecessidade de um alelo de Ras ativado (Nature 417, 949 - 954 (01 Jul2002). Em particular, mutações de B-Raf foram detectadas em um grandepercentual de melanomas malignos.
Os tratamentos médicos existentes para melanoma são de efi-cácia limitada, especialmente para melonomas no estágio final. Os compos-tos da presente invenção também inibem processos celulares envolvendo acinase b-Raf, oferecendo uma nova oportunidade terapêutica para tratamen-to de cânceres humanos, especialmente para melanoma.
Os compostos da presente invenção também inibem processoscelulares envolvendo a cinase c-Raf. A c-Raf é ativada pelo oncogene ras,que é mutado em inúmeros cânceres humanos. Portanto a inibição da ativi-dade de cinase da c-Raf pode proporcionar uma maneira de prevenir o cres-cimento tumoral mediado por ras [Campbell, S. L., Oncogene, 17, 1395(1998)].
PDGF (fator de crescimento de derivados plaquetários) é um fa-tor de crescimento muito comum, que desempenha um papel importante tan-to no crescimento normal como também na proliferação celular patológica,tal como se observa na carcinogênese e em doenças de células dos múscu-los lisos dos vasos sangüíneos, por exemplo na aterosclerose e na trombo-se. Os compostos da invenção podem inibir a atividade do receptor dePDGF (PDGFR) e são, portanto, adequados para o tratamento de doençastumorais, tais como gliomas, sarcomas, tumores de próstata, e tumores decólon, mama, e ovário.
Os compostos da presente invenção inibem a atividade de KDRque foi identificado como um dos principais receptores de VEGF de alta afi-nidade. KDR apresenta expressão celular endotelial mais abundante e acre-dita-se que ele domina a resposta angiogênica o que o torna de grande inte-resse terapêutico e diagnóstico. A expressão de KDR é altamente supra-regulada nos vasos angiogênicos, especialmente em tumores que induzemuma forte resposta angiogênica.
Os compostos da presente invenção podem ser usados não a-penas como uma substância inibidora de tumor, por exemplo em câncer depulmão de células pequenas, mas também como um agente para tratar dis-túrbios proliferativos não malignos, tais como aterosclerose, trombose, pso-ríase, escleroderma e fibrose, assim como para a proteção das células-tronco, por exemplo para combater o efeito hemotóxico de agentes quimiote-rápicos, tais como 5-fluoruracila, e na asma. Os compostos da invenção po-dem ser usados especialmente para o tratamento de doenças, que respon-dem a uma inibição da cinase receptora de PDGF.
Os compostos da presente invenção apresentam efeitos úteis notratamento de distúrbios que surgem como resultado de transplante, por e-xemplo, transplante alogênico, especialmente rejeição de tecido, tal comoespecialmente bronquiolite obliterativa (OB), isto é, uma rejeição crônica detransplantes de pulmão alogênicos. Ao contrário de pacientes sem OB, a-queles com OB freqüentemente apresentam uma concentração elevada dePDGF nos fluidos de lavagem bronquioalveolar.
Os compostos da presente invenção também são eficazes emdoenças associadas à migração e proliferação de células dos músculos lisosvasculares (onde PDGF e PDGF-R geralmente desempenham um papel im-portante), tais como restenose e ate roscle rose. Estes efeitos e suas conse-qüências para a proliferação ou migração de células dos músculos lisos vas-culares in vitro e in vivo podem ser demonstrados pela administração doscompostos da presente invenção, e também pesquisando-se seus efeitossobre o espessamento da íntima vascular subseqüente a uma lesão mecâni-ca in vivo.
A família trk de receptores de neurotrofina (trkA, trkB, trkC) pro-move a sobrevivência, o crescimento e a diferenciação dos tecidos neuro-nais e não-neuronais. A proteína TrkB é expressa em células do tipo neuro-endócrino no intestino delgado e no cólon, e nas células alfa do pâncreas,nos monócitos e nos macrófagos dos nódulos linfáticos e do baço, e nascamadas granulares da epiderme (Shibayama & Koizumi1 1996). A expres-são da proteína TrkB foi associada a uma progressão desfavorável de tumo-res de Wilms e de neuroblastomas. A TkrB é, além disso, expressa em célu-las prostáticas cancerosas mas não em células normais. A via de sinalizaçãodescendente dos receptores de trk envolve a cascata de ativação de MAPKatravés dos genes Shc, Ras ativado, ERK-1 e ERK-2 genes, e a via detransdução de PLC-gama (Sugimoto et al., 2001).
A cinase c-Src transmite sinais oncogênicos de muitos recepto-res. Por exemplo, a superexpressão de EGFR ou HER2/neu em tumoresleva à ativação constitutiva de c-src, que é característica para a célula ma-ligna, mas que está ausente na célula normal. Por outro lado, camundongosdeficientes na expressão de c-src apresentam um fenótipo osteopetrótico,indicando uma participação essencial de c-src na função de osteoclastos eum possível envolvimento em distúrbios associados.
A cinase da família Tec, Bmx, uma tirosina proteína cinase nãoreceptora, controla a proliferação de células cancerosas epiteliais mamárias.
Foi mostrado que o receptor do fator de crescimento de fibro-blastos 3 exerce um efeito regulador negativo sobre o crescimento ósseo euma inibição da proliferação de condrócitos. A displasia tanatofórica é cau-sada por diferentes mutações no receptor do fator de crescimento de fibro-blastos 3, e uma mutação, TDII FGFR3, tem uma atividade de tirosina cinaseconstitutiva que ativa o fator de transcrição Statl, levando à expressão deum inibidor do ciclo celular, interrupção do crescimento e desenvolvimentoósseo anormal (Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292). FGFR3 também égeralmente expresso em vários cânceres do tipo mieloma. Inibidores da ati-vidade de FGFR3 são úteis no tratamento de doenças inflamatórias ou auto-imunes mediadas pelas células T incluindo, porém sem limitação artrite reu-matóide (RA), artrite induzida por colágeno II, esclerose múltipla (MS), lúpuseritematoso sistêmico (SLE), psoríase, diabetes de início na juventude, do-ença de Sjogren, doença da tireóide, sarcoidose, uveíte auto-imune, doençade intestino inflamado (colite de Crohn e colite ulcerativa), doença celíaca emiastenia grave.
A atividade da cinase regulada por soro e glicocorticóide (SGK)está correlacionado a atividades de canais tônicos perturbados, em particu-lar, aquelas dos canais de sódio e/ou de potássio e os compostos da inven-ção podem ser úteis para tratar hipertensão.
Lin et al. (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 e P. Lin (1998)PNAS 95, 8829-8834, mostraram uma inibição de crescimento e vasculari-zação tumoral e também uma redução em metástases de pulmão duranteinfecções adenovirais ou durante injeções do domínio extracelular de Tie-2(Tek) em modelos de tumor de mama e de xenoenxerto de melanoma. Inibi-dores de Tie2 podem ser usados em situações nas quais a neovasculariza-ção ocorre de forma inadequada (isto é, em retinopatia diabética, inflamaçãocrônica, psoríase, sarcoma de Kaposi, neovascularização crônica devido àdegeneração macular, artrite reumatóide, hemangioma infantil e cânceres).
O Lck desempenha um papel na sinalização de células T. Ca-mundongos sem o gene Lck possuem pobre capacidade de desenvolver ti-mócitos. A função do Lck como ativador positivo de sinalização de células Tsugere que inibidores de Lck podem ser úteis para o tratamento de doençasauto-imunes tais como artrite reumatóide.
JNKs, junto com outros MAPKs, foram implicados em ter um pa-pel na mediação de resposta celular para câncer, agregação plaquetária in-duzida por trombina, distúrbios imunodeficientes, doenças auto-imunes, mor-te celular, alergias, osteoporose e doenças cardíacas. Os alvos terapêuticosassociados à ativação da via de JNK incluem leucemia mielogênica crônica(CML), artrite reumatóide, asma, osteoartrite, isquemia, câncer e doençasneurodegenerativas. Como resultado da importância da ativação de JNKassociada a doenças hepáticas ou episódios de isquemia hepática, os com-postos da invenção também podem ser úteis para tratar vários distúrbioshepáticos. Um papel para JNK em doenças cardiovasculares tais como infar-to do miocárdio ou insuficiência cardíaca congestiva também foi reportadovisto que foi demonstrado que JNK medeia respostas hipertróficas a váriasformas de estresse cardíaco. Já foi demonstrado que a cascata de JNK tam-bém desempenha um papel na ativação de células T1 incluindo a ativação dopromotor para IL-2. Por conseguinte, inibidores de JNK podem ter valor tera-pêutico na alteração de respostas imunes patológicas. Um papel para a ati-vação de JNK em vários cânceres já foi estabelecido, sugerindo o uso po-tencial de inibidores de JNK em câncer. Por exemplo, JNK constitutivamenteativado é associado à tumorigênese mediada por HTLV-1 [Oncogene13:135-42 (1996)]. JNK pode desempenhar um papel no sarcoma de Kaposi(KS). Outros efeitos proliferativos de outras citocinas envolvidas na prolifera-ção de KS, tais como fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), IL-6 eTNFa, também podem ser mediados por JNK. Além disso, a regulação dogene c-jun nas células transformadas de p210 BCR-ABL corresponde à ati-vidade de JNK, sugerindo um papel para os inibidores de JNK no tratamentode leucemia mielogênica crônica (CML) [Blood 92:2450-60 (1998)].
Acredita-se que certas condições proliferativas anormais estejamassociadas à expressão de raf e, portanto, se acredita que sejam sensíveis àinibição da expressão de raf. Níveis anormalmente altos de expressão daproteína raf também estão envolvidos na transformação e na proliferação decélulas anormais. Acredita-se que essas condições proliferativas anormaissejam sensíveis à inibição da expressão de raf. Por exemplo, acredita-seque a expressão da proteína c-raf desempenha um papel na proliferação decélulas anormais uma vez que já foi relatado que 60% das linhagens celula-res de carcinoma de pulmão expressão níveis incomumente altos de c-rafmRNA e proteína. Outros exemplos de condições proliferativas anormais sãodistúrbios hiperproliferativos tais como cânceres, tumores, hiperplasia, fibro-se pulmonar, angiogênese, psoríase, aterosclerose e proliferação de célulasdos músculos lisos nos vasos sangüíneos, tais como estenose ou restenosesubseqüente à angioplastia. A via de sinalização celular da qual raf faz partetambém foi envolvida em distúrbios inflamatórios caracterizados por prolife-ração de células T (ativação e crescimento de células T), tais como rejeiçãode enxerto de tecido, choque endotóxico, e nefrite glomerular, por exemplo.
As proteínas cinases ativadas por estresse (SAPKs) são umafamília de proteínas cinases que representam a penúltima etapa nas vias detransdução de sinal que resultam na ativação do fator de transcrição c-jun ena expressão de genes regulados por c-jun. Em particular, o c-jun está en-volvido na transcrição de genes que codificam proteínas envolvidas no repa-ro de DNA que é danificado devido a insultos genotóxicos. Por conseguinte,agentes que inibem a atividade de SAPK em uma célula previnem o reparode DNA e tornam a célula sensível a agentes que induzem danos em DNAou inibem a síntese de DNA e induzem a apoptose de uma célula ou queinibem a proliferação celular.
Proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPKs) são mem-bros de vias de transdução de sinal conservadas que ativam fatores detranscrição, fatores de tradução e outras moléculas alvo em resposta a umavariedade de sinais extracelulares. As MAPKs são ativadas por fosforilaçãoem um motivo de fosforilação dual tendo a seqüência Thr-X-Tyr por cinaseproteínas cinases ativadas por mitógenos (MKKs). Nos eucariotas superio-res, o papel fisiológico da sinal sinalização de MAPK foi correlacionado aeventos celulares tais como proliferação, oncogênese, desenvolvimento ediferenciação. Por conseguinte, a capacidade de regular a transdução desinal por meio destas vias (particularmente via MKK4 e MKK6) pôde levar aodesenvolvimento de tratamentos e terapias preventivas para doenças huma-nas associadas à sinalização de MAPK, tais como doenças inflamatórias,doenças auto-imunes e câncer.
A família das proteínas cinases S6 ribossômicas humanas con-siste em pelo menos 8 membros (RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2,p70S6K e p70S6 Kb). As proteínas cinases S6 protéicas ribossômicas de-sempenham funções pleotrópicas importantes, entre elas está um papel es-sencial na regulação da tradução de mRNA durante a biossíntese de proteí-nas (Eur. J. Biochem Novembro 2000; 267(21): 6321-30, Exp Cell Res. Nov.25, 1999; 253 (1):100-9, Mol Cell Endocrinol. 25 de maio de 1999;151(1-2):65-77). A fosforilação da proteína ribossômica S6 por p70S6 também estáenvolvida na regulação da motilidade celular (lmmunol. Cell Biol. 2000 Au-gust;78(4):447-51) e do crescimento celular (Prog. Nucleic Acid Res. Mol.Biol., 2000;65:101-27), e por conseguinte, pode ser importante em metásta-ses tumores, na resposta imune e no reparo de tecidos assim como em ou-tras doenças.
As SAPKs (também chamadas "cinases N-terminais jun" ou"JNKs") são uma família de proteínas cinases que representam a penúltimaetapa nas vias de transdução de sinal que resultam na ativação do fator detranscrição de c-jun e na expressão de genes regulados por c-jun. Em parti-cular, o c-jun está envolvido na transcrição de genes que codificam proteínasenvolvidas no reparo de DNA que é danificado devido a insultos genotóxi-cos. Agentes que inibem a atividade de SAPK em uma célula previnem oreparo de DNA e tornam a célula sensível á modalidades terapêuticas decâncer que agem induzindo danos no DNA.
BTK desempenha um papel em doenças auto-imunes e/ou in-flamatórias tais como lúpus eritematoso sistêmico (SLE), artrite reumatóide,vasculite múltipla, púrpurai trombocitopênica idiopática (ITP), miastenia gra-ve, e asma. Devido ao papel das BTKs na ativação de células B, inibidoresde BTK são úteis como inibidores da atividade patogênica mediada por célu-Ias B, tal como produção de auto-anticorpo, e são úteis para o tratamento deIinfoma de células B e leucemia.
CHK2 é um membro da família de cinases de controle ("check-point kinase") das serina/treonina proteínas cinases e está envolvida em ummecanismo usado para a fiscalização de danos no DNA, tais como danoscausados por mutágenos ambientais e espécies reativas ao oxigênio endó-geno. Como resultado, ela é considerada um supressor de tumor e é um al-vo para terapia de câncer.
CSK influencia o potencial metastático das células cancerosas,particularmente câncer de cólon.
Fes é tirosina proteína cinase não receptora que está envolvidaem uma variedade de vias de transdução de sinal de citocina, assim comona diferenciação de células mielóides. Fes também é um componente es-sencial do mecanismo de diferenciação de granulócitos.
A atividade da tirosina cinase receptora de Flt3 está envolvidaem Ieucemias e síndrome mielodisplásica. Em aproximadamente 25% dasAML as células leucêmicas expressam uma forma constitutivamente ativa detirosina cinase FLT3 fosforilada (p) na superfície celular. A atividade de p-FLT3 confere a vantagem de crescimento e sobrevivência às células leucê-micas. Pacientes com leucemia aguda, cujas células leucêmicas expressamatividade da cinase p-FLT3, apresentam um resultado clínico geral pobre.Inibição da atividade da cinase p-FLT3 induz a apoptose (morte celular pro-gramada) das células leucêmicas.
Inibidores de IKKa e ΙΚΚβ (1 & 2) são terápicos para doençasque incluem artrite reumatóide, rejeição de transplante, doença do intestinoinflamado, osteoartrite, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, ateroscle-rose, psoríase, esclerose múltipla, acidente vascular cerebral, lúpus eritema-toso sistêmico, mal de Alzheimer, isquemia cerebral, lesão cerebral traumá-tica, mal de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, hemorragia subaracnói-de ou outras doenças ou distúrbios associados à produção excessiva demediadores inflamatórios no cérebro e no sistema nervoso central.
Met é associada à maioria dos tipos de cânceres humanos im-portantes e sua expressão freqüentemente é correlacionada a um prognósti-co ruim e metástase. Inibidores de Met são terapêuticos para doenças queincluem cânceres tais como câncer de pulmão, NSCLC (câncer de pulmãonão-pequenas células), câncer ósseo, câncer de pâncreas, câncer de pele,câncer da cabeça e pescoço, melanoma cutâneo ou intra-ocular, câncer deútero, câncer de ovário, câncer retal, câncer da região anal, câncer de estô-mago, câncer de cólon, câncer de mama, tumores ginecológicos (por exem-plo, sarcomas uterinos, carbinoma das trompas de Falópio, carcinoma doendométrio, carcinoma cervical, carcinoma da vagina ou carcinoma da vul-va), doença de Hodgkin, câncer de esôfago, câncer do intestino delgado,câncer do sistema endócrino (por exemplo, câncer da tireóide, paratireóideou glândulas adrenais), sarcomas dos tecidos moles, câncer de uretra, cân-cer de pênis, câncer de próstata, leucemia crônica ou aguda, tumores sóli-dos da infância, Iinfomas linfocíticos, câncer de bexiga, câncer renal ou cân-cer de ureter (por exemplo, carcinoma de células renais, carcinoma da pélvisrenal), malignidade pediátrica, neoplasmas do sistema nervoso central (porexemplo, Iinfoma do SNC primário, tumores do eixo espinhal, glioma dotronco cerebral ou adenomas pituirários), cânceres do sangue tais como leu-cemia mielóide aguda, leucemia mielóide crônica etc., esôfago de Barrett(síndrome pré-maligna), doenças cutâneas neoplásicas, psoríase, micoses,fungóides, e hipertrofia prostática benigna, doenças associadas ao diabetestais como retinopatia diabética, isquemia retinal e neovascularização retinal,cirrose hepática, doenças cardiovasculares tais como aterosclerose, doen-ças imunológicas tais como doenças auto-imunes e doenças renais. De pre-ferência, a doença é câncer tal como leucemia mielóide aguda e câncer co-lorretal.
A cinase associada a Nima 2 (Nek2) é uma proteína cinase regu-Iada pelo ciclo celular com atividade máxima no início da mitose que se loca-liza no centrossoma. Estudos funcionais envolveram a Nek2 na regulação daseparação de centrossomas e formação de fusos. A proteína Nek2 é 2 a 5vezes mais alta em linhagens celulares derivadas de uma gama de tumoreshumanos incluem tumores cervical, de ovário, de próstata, e particularmentede mama.
Doenças ou condições mediadas por p70S6K incluem, porémsem limitação, distúrbios proliferativos, tais como câncer e esclerose tuberosa.
Os compostos da invenção são úteis no tratamento de malária.
O filo, Apicomplexa, contém muitos membros que são patógenos humanosou animais incluindo, porém sem limitação, Plasmodium spp. (Malária), To-xoplasma gondii (defeitos neurológicos congênitos em humanos), Eimeriaspp. (patógenos de aves e gado), Cryptosporidia (patógenos humanos e a-nimais oportunistas), Babesia (parasitas de gado) e Theileria (parasitas degado). A patogênese associada a estas doenças parasitárias deve-se a ci-clos repetidos de invasão da célula hospedeira, replicação intracelular e Iiseda célula hospedeira. Por conseguinte, entender a proliferação parasitária éessencial para o desenvolvimento de novos fármacos e vacinas, por exem-plo, para tratar malária.
A malária é causada por parasitas protozoários do gênero Plas-modium. Quatro espécies de Plasmodium podem produzir a doença em suasvárias formas: Plasmodium falciparum; Plasmodium vivax; Plasmodium ova-le; e Plasmodium malaria. P. falciparum, um parasita protozoário e agentecausador da forma mais letal de malária, pode levar à malária cerebral fatalse não for tratado. Ele é responsável por mais de 1 milhão de mortes de se-res humanos por ano.
Em hospedeiros vertebrados, o parasita passa por duas fasesprincipais de desenvolvimento, as fases hepatocítica e eritrocítica, mas é afase eritrocítica do seu ciclo de vida que causa patologia grave. Durante afase eritrocítica, o parasita atravessa uma série complexa, porém bem sin-cronizada de estágios, sugerindo a existência de vias de sinalização bastan-te regulada.
O cálcio serve como um mensageiro intracelular para controlar asincronização e o desenvolvimento na fase de vida eritrocítica. Os genomasdo Plasmodium spp. revelam muitas identidades de seqüência com motivosprotéicos fixadores/sensores de cálcio que incluem Pf39, calmodulina, e pro-teínas cinases dependentes de cálcio (CDPKs). Foi mostrado que CDPKs dePlasmodium, CDPK3 e 4 de Plasmodium, estão envolvidas na infecção pormosquito. Foi demonstrado que a CDPK4 é essencial para a reproduçãosexual no intestino médio do mosquito traduzindo o sinal de cálcio em umaresposta celular e regulando a evolução do ciclo celular no gametócito mas-culino. A CDPK3 regula a motilidade de deslizamento do oocineto e a pene-tração da camada que cobre o epitélio do intestino médio. A CDPK1 de P.falciparum (PfCDPKI) é expressa durante a esquizogonia tardia do estágiosangüíneo e no estágio esporozoíto infeccioso e é secretada para o vacúoloparasitóforo por um mecanismo dependente de acilação. Ela pode ser miris-toilada e é encontrada em abundância em frações de membrana resistentesa detergente isoladas de parasitas na fase de esquizogonia. Análise de iden-tificação do padrão baseado em ontologia revela que a PfCDPKI é agrupadacom genes associados ao egresso de parasitas ou à invasão de eritrócitos.
A inibição direta de PfCDPKI pode interromper a evolução do ciclo de vidaeritrocítico do parasita na fase de esquizogonia tardia.
Portanto, a atividade de cinase é distribuída em todos os está-gios de maturação do parasita P. falciparum e os inibidores de cinase dapresente invenção podem ser usados para tratar doenças associadas aoPlasmodium. Em particular, os inibidores de cinase da presente invençãopodem ser o caminho para o tratamento da malária por inibição da cinasePfCDPKI. Os ensaios in vitro, infra, podem ser usados para avaliar a ativi-dade dos compostos da invenção contra uma variedade de cepas de parasi-tas maláricos.
De acordo com o acima exposto, a presente invenção forneceainda um método para prevenir ou tratar qualquer uma das doenças ou dis-túrbios descritos acima em um indivíduo com necessidade de tal tratamento,método este que compreende administrar ao referido indivíduo uma quanti-dade terapeuticamente eficaz (vide "Administration and PharmaceuticalCompositions", infra) de um composto de fórmula I ou de um sal farmaceuti-camente aceitável do mesmo. Para qualquer dos usos acima, a dosagemrequerida vai variar dependendo do modo de administração, da condiçãoparticular a ser tratada e do efeito desejado.
Administração e composições farmacêuticas
Em geral, os compostos da invenção vão ser administrados emquantidades terapeuticamente eficazes por qualquer um dos modos usuais eaceitáveis conhecidos na técnica, seja isoladamente ou em combinação comou mais agentes terapêuticos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz po-de variar amplamente dependendo da severidade da doença, da idade e dasaúde relativa do indivíduo, da potência do composto usado e de outros fato-res. Em geral, foi indicado que resultados satisfatórios são obtidos sistemi-camente a dosagens diárias de cerca de 0,03 a 2,5 mg/kg em peso corporal.
Uma dosagem diária indicada em mamíferos superiores, por exemplo sereshumanos, está na faixa de cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg, convenien-temente administrados, por exemplo em doses fracionadas até quatro vezesao dia ou na forma retardada. Formas de dosagem unitária adequadas paraadministração oral compreendem de cerca de 1 a 50 mg do componenteativo.
Os compostos da invenção podem ser administrados como çom-posições farmacêuticas por qualquer via convencional, em particular por viaentérica, por exemplo, por via oral, por exemplo, na forma de comprimidosou cápsulas, ou por via parenteral, por exemplo, na forma de soluções oususpensões injetáveis, por via tópica, por exemplo, na forma de loções, géis,pomadas ou cremes, ou em uma forma nasal ou na forma de supositório.
Composições farmacêuticas compreendendo um composto da presente in-venção na forma livre ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitávelem associação com pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamenteaceitável podem ser produzidas de maneira convencional por métodos demisturação, granulação ou revestimento. Por exemplo, as composições oraispodem ser comprimidos ou cápsulas gelatinosas compreendendo o compo-nente ativo junto com a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose,manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, por exemplo, sílica,talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou de cálcio e/ou polietileno gli-col; para comprimidos também c) aglutinantes, por exemplo, silicato demagnésio e alumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose,carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona; se desejado d) desinte-grantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, oumisturas efervescentes; e/ou e) absorventes, corantes, flavorizantes e ado-çantes. As composições injetáveis podem ser soluções ou suspensões iso-tônicas aquosas, e os supositórios podem ser preparados a partir de emul-sões ou suspensões graxas. As composições podem ser esterilizadas e/ouconter adjuvantes, tais como agentes conservantes, estabilizantes, umectan-tes ou emulsificantes, promotores de solução, sais para regular a pressãoosmótica e/ou tampões. Além disso, elas também podem conter outras subs-tâncias terapeuticamente valiosas. Formulações adequadas para aplicaçõestransdérmicas incluem uma quantidade eficaz de um composto da presenteinvenção com um veículo. Um veículo pode incluir solventes farmacêutica-mente aceitáveis absorvíveis para auxiliar a passagem através da pele dohospedeiro. Por exemplo, os dispositivos transdérmicos estão na forma deuma bandagem compreendendo um membro de forro, um reservatório con-tendo o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreiracontroladora da taxa de liberação para distribuir o composto para a pele dohospedeiro a uma taxa controlada e predeterminada durante um período detempo prolongado, e um meio para prender o dispositivo à pele. Formula-ções transdérmicas matriciais também podem ser usadas. Formulações a-dequadas para aplicação tópica, por exemplo, à pele e aos olhos, são depreferência soluções aquosas, pomadas, cremes ou géis bastante conheci-dos na técnica. Estas formulações podem conter solubilizantes, estabilizan-tes, agentes aumentadores da tonicidade, tampões e conservantes.
Os compostos da invenção podem ser administrados em quanti-dades terapeuticamente eficazes em combinação com um ou mais agentesterapêuticos (combinações farmacêuticas). Por exemplo, podem ocorrer efei-tos sinergísticos com outras substâncias imunomoduladoras ou antiinflama-tórias, por exemplo quando usados em combinação com ciclosporina, rapa-micina, ou ascomicina, ou análogos imunossupressores dos mesmos, porexemplo ciclosporina A (CsA), ciclosporina G, FK-506, rapamicina, ou com-postos equiparáveis, corticosteróides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexa-to, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato mofe-tila, 15-deoxispergualina, anticorpos imunossupressores, especialmente an-ticorpos monoclonais para receptores de leucócitos, por exemplo MHC, CD2,CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58 ou seus ligandos, ou simila-res compostos imunomoduladores, tais como CTLA41g. Onde os compostosda invenção são administrados em conjunto com outras terapias, as dosa-gens dos compostos co-administrados naturalmente vão variar dependendodo tipo de co-fármaco empregado, do fármaco específico empregado, dacondição sendo tratada e assim por diante.
A invenção também fornece combinações farmacêuticas, porexemplo um kit, compreendendo a) um primeiro agente que é um compostoda invenção descrito neste relatório, na forma livre ou na forma de um salfarmaceuticamente aceitável, e b) pelo menos um co-agente. O kit podecompreender instruções para sua administração.
Os termos "co-administração" ou "administração combinada" ousimilares utilizados nesta invenção abrangem a administração dos agentesterapêuticos selecionados a um único paciente, e incluem regimes de trata-mento nos quais os agentes não são necessariamente administrados pelamesma via de administração ou ao mesmo tempo.
O termo "combinação farmacêutica" conforme usado neste rela-tório significa um produto que resulta da misturação ou combinação de maisde um componente ativo e inclui combinações fixas e não fixas dos compo-nentes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os componentes ati-vos, por exemplo um composto de fórmula I e um co-agente, são ambosadministrados a um paciente simultaneamente na forma de uma entidade oudosagem única. O termo "combinação não fixa" significa que os componen-tes ativos, por exemplo um composto de fórmula I e um co-agente, são am-bos administrados a um paciente como entidades separadas seja simultâ-nea, concorrente ou seqüencialmente sem limites de tempo específicos, on-de tal administração oferece níveis terapeuticamente eficazes dos 2 compos-tos no corpo do paciente. Esta última definição também se aplica à terapiaativos.
Processos para fazer os compostos da invenção
A presente invenção também inclui processos para a preparaçãodos compostos da invenção. Nas reações descritas, pode ser necessárioproteger grupos funcionais reativos, por exemplo grupos hidróxi, amino, imi-no, tio ou carbóxi, onde estes são desejados no produto final, para evitar suaparticipação indesejada nas reações. Grupos protetores convencionais po-dem ser usados de acordo com a prática tradicional, por exemplo, vide T.W.Greene & P. G. M. Wuts em "Protective Groups in Organic Chemistry", JohnWiley & Sons, 1991.
Compostos de fórmula I, onde R5 é -NHC(O)Rn, podem serpreparados pelo procedimento mostrado no esquema reacional I a seguir:Esquema reacional I
<formula>formula see original document page 28</formula>
onde X, Y, R1, R2, R3, R4 e Rn são como definidos para a fórmula I no Su-mário da Invenção. Um composto de fórmula I pode ser preparado por rea-ção de um composto de fórmula 2 com um composto de fórmula 3 na pre-sença de uma base adequada (por exemplo, DlEA, ou outras) e um agentereativo (por exemplo, HATU, ou similares). A reação ocorre em uma faixa detemperatura de cerca de 5 a cerca de 50°C e pode levar até cerca de 10 ho-ras para terminar. Uma reação semelhante é empregada, usando materiaisde partida apropriados, para os compostos da invenção onde R5 é-C(O)NHRi1.
Um exemplo detalhado da síntese de um composto de fórmula Ipode ser encontrada na seção Exemplos, infra.
Processos adicionais para fazer os compostos da invenção
Um composto da invenção pode ser preparado como um sal deadição de ácido farmaceuticamente aceitável por reação da forma de baselivre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamenteaceitável. Alternativamente, um sal de adição de base farmaceuticamenteaceitável de um composto da invenção pode ser preparado por reação daforma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica far-maceuticamente aceitável. Alternativamente, as formas de sal dos compos-tos da invenção podem ser preparadas usando sais dos materiais de partidaou intermediários.
As formas de ácido livre ou de base livre dos compostos da in-venção podem ser preparadas a partir do sal de adição de base ou do sal deadição de ácido correspondente, respectivamente. Por exemplo um compos-to da invenção na forma de üm sal de adição de ácido pode ser convertidona base livre correspondente por tratamento com uma base adequada (porexemplo, solução de hidróxido de amônio, hidróxido de sódio, e similares).Um composto da invenção na forma de um sal de adição de base pode serconvertido no ácido livre correspondente por tratamento com um ácido ade-quado (por exemplo, ácido clorídrico etc.).
Compostos da invenção em forma não oxidada podem ser pre-parados a partir de N-óxidos de compostos da invenção por tratamento comum agente redutor (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenil fosfina,borohidreto de lítio, borohidreto de sódio, tricloreto de fósforo, tribrometo, ousimilares) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo acetonitri-la, etanol, dioxano aquoso, ou similares) a uma temperatura de O a 80°C.
Derivados do tipo pró-fármaco dos compostos da invenção po-dem ser preparados por métodos conhecidos pelos versados na técnica (porexemplo, para maiores detalhes vide Saulnier et al., (1994), Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985). Por exemplo, pró-fármacosapropriados podem ser preparados por reação de um composto não deriva-tizado da invenção com um agente carbamilante adequado (por exemplo,cloridrato de 1,1-aciloxialquilcarbano, carbonato de para-nitrofenila, ou similares).
Derivados protegidos dos compostos da invenção podem ser fei-tos por meios conhecidos pelos versados na técnica. Uma descrição deta-lhada de técnicas aplicáveis à criação de grupos protetores e sua remoçãopode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Che-mistry", 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999.
Os compostos da presente invenção podem ser conveniente-mente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como sol-vatos (por exemplo, hidratos). Hidratos dos compostos da presente invençãopodem ser convenientemente preparados por recristalização a partir de umamistura de solventes aquosos/orgânicos, usando solventes orgânicos taiscomo dioxina, tetrahidrofurano ou metanol.
Os compostos da invenção podem ser preparados como seusestereoisômeros individuais por reação de uma mistura racêmica do com-posto com um agente de resolução oticamente ativo para formar um par decompostos diastereoisoméricos, separação dos diastereômeros e recupera-ção dos enantiômeros oticamente puros. Embora a resolução de enantiôme-ros possa ser realizada usando derivados diastereoméricos covalentes doscompostos da invenção, complexos dissociáveis são preferidos (por exem-plo, sais diastereoméricos cristalinos). Diastereômeros possuem proprieda-des físicas distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, so-lubilidades, reatividade etc.) e podem ser facilmente separados tirando-seproveito dessas diferenças. Os diastereômeros podem ser separados porcromatografia, ou de preferência, por técnicas de separação/resolução ba-seadas nas diferenças em solubilidade. O enantiômero oticamente puro éentão recuperado, junto com o agente de resolução, por qualquer meio práti-co que não possa resultar em racemização. Uma descrição mais detalhadadas técnicas aplicáveis à resolução de estereoisômeros dos compostos desua mistura racêmica podem ser encontradas em Jean Jacques, Andre Col-let, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wi-Iey & Sons, Inc., 1981.
Em suma, os compostos de fórmula I podem ser feitos por umprocesso, que envolve:
(a) aqueles do esquema reacional I; e
(b) opcionalmente converter um composto da invenção em umsal farmaceuticamente aceitável;
(c) opcionalmente converter uma forma de sal de um compostoda invenção em uma forma não sal;
(d) opcionalmente converter uma forma não oxidada de umcomposto da invenção em um N-óxido farmaceuticamente aceitável;
(e) opcionalmente converter uma forma de N-óxido de um com-posto da invenção em sua forma não oxidada;
(f) opcionalmente resolver um isômero individual de um compos-to da invenção a partir da mistura de isômeros;
(g) opcionalmente converter um composto não derivatizado dainvenção em um derivado do tipo pró-fármaco farmaceuticamente aceitável;e
(h) opcionalmente converter um derivado do tipo pró-fármaco deum composto da invenção em sua forma não derivatizada.
Onde a produção dos materiais de partida não está particular-mente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser preparados demaneira análoga aos métodos conhecidos na literatura ou descritos nos E-xemplos a seguir.
O especialista na técnica vai perceber que as transformações a-cima são apenas representativas dos métodos para a preparação dos com-postos da presente invenção, e que outros métodos bastante conhecidospodem ser igualmente usados.
Exemplos
A presente invenção é ainda exemplificada, porém não limitada,pelos exemplos a seguir que ilustram a preparação de compostos de fórmulaI de acordo com a invenção.
Exemplo 1
4-Cloro-6-(2-cloro-piridin-3-il)-pirimidina
Ácido 2-Cloropiridina-3-borônico 5,Og (31,8 mmols) é misturadocom 9,55g de 4,6-cloropirimidina (63,7 mmols), 1,84g de Pd(PPh3)4 (5%,1,59 mmol), e 8,79g de K2CO3 (63,7 mmols). MeCN desgaseificado em umaproporção 1 para 1 e água como solvente 60 ml é adicionado e em seguidaaquecido a 80°C por 2 horas no balão tampado. Depois de esfriamento dareação, separar a camada orgânica, e usar 200 ml de acetato de etila parafazer a extração 3 vezes. Combinar as camadas orgânicas e usar soluçãosaturada de NaCI para lavar uma vez. A camada orgânica é secada comNa2SO4 e evaporada a vácuo. O produto bruto é purificado por cromatografiainstantânea em 3% de MeOH em DCM. O produto final é 3,90 g de um sóli-do branco.
f6-(2-Cloro-piridin-3-in-pirimidin-4-il1-ciclopropil-amina<formula>formula see original document page 32</formula>
4-Cloro-6-(2-cloro-piridin-3-il)-pirimidina (1,3 g, 5,75 mmols) eciclopropilamina (1,65g, 28,7 mmols) são misturadas em etanol 25 ml e a-quecidas a 1100C por 30 minutos em um tubo vedado. Análise por LC-MSconfirmou que a reação era límpida e estava terminada. Em seguida a mistu-ra é concentrada e o produto bruto é passado por uma coluna de sílica-gelpara remover o excesso de ciclopropilamina eluindo com 15% de MeOH emDCM. O produto final é um sólido amarelo-pálido, 1,40g. MS m/z 247,1 (M + 1).
Ciclopropil-{6-r2-(2-metil-5-nitro-fenilamino)-piridin-3-il1-pirimidin-4-il)-amina
<formula>formula see original document page 32</formula>
Uma mistura de [6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il]-ciclopropil-amina (1000 mg, 4,06 mmols), 2-Metil-5-nitro-fenilamina (1240 mg, 8,12mmols), acetato de paládio (450 mg, 2,03 mmols), Xantophos (1,76g, 3,04mmols) e t-butóxido de potássio (909 mg, 8,12 mmols) são misturados em20 ml de 1, 4-dioxano anidro em uma atmosfera de nitrogênio e aquecidos a10O0C por 24 horas. Análise por TLC acompanhou a reação até o materialde partida [6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il]-ciclopropil-amina ser total-mente consumido e o produto desejado, formado. O produto bruto é purifica-do em uma coluna de sílica-gel com 5% de MeOH em DCM. É obtido umsólido amarelo, 1,03g. MS m/z 363,2 (M + 1).
N3-í3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-il1-4-metil-benzeno-1.3-diamina
<formula>formula see original document page 32</formula>Ciciopropil-{6-[2-(2-metil-5-nitro-fenilamino)-piridin-3-il]-pirimidin-4-il}-amina (230 mg, 0,6 mmol) e cloreto de estanho desidratado (1,44 g, 6mmols) são misturados em 10 ml de etanol e a mistura é agitada a 50°C poruma noite. Em seguida a mistura é primeiro passada através de celite, purifi-cada em uma coluna de sílica-gel usando 10% de MeOH em DCM para darum produto amarelo-claro 170 mg. MS m/z 333,2 (M + 1).
N43-f3-(6-CicloproDilamino-pirimidin-4-il)-Diridin-2-ilamino1-4-metil-fenil)-3-(4-metil-Diperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzamida
<formula>formula see original document page 33</formula>
Ácido 3-(4-Metil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzóico (21,6 mg,0,066 mmol) é dissolvido em DMF 500 ul e são adicionados DIEA (53uL, 0,3mmol), HATU (25 mg, 0,066 mmol). Depois de 1 minuto, N3-[3-(6-Ciclopro-pilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-il]-4-metil-benzeno-1,3-diamina (20 mg, 0,06mmol) é adicionada à mistura e a solução é agitada à temperatura ambientepor 5 minutos. O produto bruto é purificado em LC-MS e são obtidos 24 mgdo produto final desejado como um sólido amarelo. 1H RMN 400 MHz (d6-DMSO) δ 11,66 (s, TH), 10,28 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,28 (d, 2H,J=4,8Hz), 7,93 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,18 (d, 1H, J=8,6Hz),6,93 (m, 1H), 4,20-4,06 (m, 2H), 3,64-3,40 (m, 2H),), 3,26-3,06 (m, 4H), 2,89(s, 3H), 2,33 (s, 3H), 0,81 (s, 2H), 0,55 (s, 2H). MS m/z 603,3 (M + 1).
Exemplo 2
N3-í3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-in-4-metil-benzeno-1.3-diamina
<formula>formula see original document page 33</formula>CiclopropM-{6-[2-(2-metil-5-nitro-feniIamino)-piridin-3-il]-pirimidin-4-il}-amina (460 mg, 1,2 mmol) é suspendida em 20 ml de etanol e 10% deníquel de Raney (cerca de 50 mg) são adicionados. A reação é agitada emuma atmosfera de hidrogênio por 2 horas à temperatura ambiente. A misturareacional é passada através de celite e lavada com mais 40 ml de etanol.
Depois de evaporação do solvente, são obtidos 350 mg de um sólido amare-lo-claro. MS m/z 333,2 (M + 1).
N43-f3-(6-CicloproDilamino-pirimidin-4-in-Diridin-2-ilamino1-4-metil-fenil)-3-[4-(2-hidróxi-etil)-piperazin-1-il1-5-trifluormetil-benzamida
<formula>formula see original document page 34</formula>
Ácido 3-(4-Metil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzóico (21,6 mg,0,066 mmol) é dissolvido em DMF 500 uL e são adicionados DIEA (53uL, 0,3mmol), HATU (25 mg, 0,066 mmol). Depois de 1 minuto, ácido 3-[4-(2-Hidróxi-etil)-piperazin-1-il]-5-trifluormetil-benzóico (20 mg, 0,06 mmol) é adi-cionado à mistura e a solução é agitada à temperatura ambiente por 5 rnihu-tos. O produto bruto é purificado em LC-MS e são obtidos 23 mg do produtofinal desejado como um sólido amarelo. 1H RMN 400 MHz (d6-DMSO) δ11,66 (s, 1H), 10,28 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,28 (d, 1H, J=4,8Hz),7,93 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,18 (d, 1H, J=8,6Hz),6,93 (m, 1H), 4,48(s, 1H), 3,55(m, 1H), 3,35(m, 6H), 2,60 (m, 6H), 2,33 (s,3H), 0,81 (s, 2H), 0,53 (s, 2H).MS m/z 633,3 (M + 1).
Exemplo 3
[6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il1-(2-morfolin-4-il-etil)-amina
<formula>formula see original document page 34</formula>4-Cloro-6-(2-cloro-piridin-3-il)-pirimidina (450 mg, 2 mmols) e 4-(3-Aminoetil)morfolina (290 mg, 2 mmosl) são misturadas em etanol 10 ml eaquecidas a 80°C por 30 minutos. A mistura é concentrada e o produto brutoé purificado em uma coluna de sílica-gel eluindo com 15% de MeOH emDCM. O produto final é um sólido amarelo, 570 mg. MS m/z 320,1 (M + 1).
N-(4-Metil-343-r6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-ill-Diridin-2-ilamfenil)-3-trifluormetil-benzamida
<formula>formula see original document page 35</formula>
[6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il]-(2-morfolin-4-il-etil)-amina(64 mg, 0,2 mmol) é misturada com N-(3-Amino-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzamida (88 mg, 0,3 mmol), acetato de paládio (22,4 mg, 0,1 mmol), Xan-tophos (86,7 mg, 0,15 mmol) e t-butóxido de potássio (45 mg, 0,4 mmol). 4ml de 1,4-dioxano anidro são adicionados em uma atmosfera de nitrogênio ea mistura é aquecida até 100°C por 16 horas. Depois de resfriamento para atemperatura ambiente e evaporação do solvente, o produto bruto é dissolvi-do em 3 ml de DMSO e purificado por LC/MS. O produto final é um sólidoamarelo, 91 mg,1H RMN 400 MHz (d6-DMSO) δ 11,47 (s, 1H), 10,43 (s, 1H),9,89 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,28 (t, 2H, J=8,4Hz), 7,97 (d, 1H,J=8,4Hz), 7,78 (t, 1H, 8,4Hz), 7,41 (d, 1H, J=8,2Hz), 7,22 (d, 1H, J=8,2Hz),7,08 (s, 1H), 6,96 (m, 1H), 3,98-3,17 (m, 12H), 2,33 (s, 3H). MS m/z 578,2 (M +1).
Exemplo 4
r6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-in-(2.4-dimetóxi-benzih-amina
<formula>formula see original document page 35</formula>
4-Cloro-6-(2-cloro-piridin-3-il)-pirimidina (450 mg, 2 mmols) e2,4-Dimetóxi-benzilamina (340 mg, 2 mmols) são misturadas em etanol 10ml e aquecidas a 80°C for 30 minutos. A mistura é concentrada e o produtobruto é purificado em uma coluna de sílica-gel eluindo com 5% de MeOH emDCM. O produto final é um sólido pálido, 640 mg. MS m/z 357,2 (M + 1).
N-(34346-(2.4-Dimetóxi^enzilamino)-pirimidin-4-il1-piridin-2-ilamino)-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzamida
<formula>formula see original document page 36</formula>
[6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il]-(2,4-dimetóxi-benzil)-amina(72 mg, 0,2 mmol) é misturada com N-(3-Amino-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzamida (88 mg, 0,3 mmol), acetato de paládio (22,4 mg, 0,1 mmol), Xan-tophos (86,7 mg, 0,15 mmol) e t-butóxido de potássio (45 mg, 0,4 mmol). 4ml de 1,4-dioxano anidro é adicionado em uma atmosfera de nitrogênio e amistura é aquecida até 10O0C por 16 horas. Depois de resfriamento para atemperatura ambiente e evaporação do solvente, o produto bruto é purifica-do em uma coluna de sílica-gel por eluição com 5% de MeOH em DCM. Oproduto final é um sólido amarelo, 92 mg. MS m/z 615,3 (M + 1).
N-(3-r3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino1-4-metil-fenil)-3-trifíbenzamida
<formula>formula see original document page 36</formula>
N-(3-{3-[6-(2,4-Dimetóxi-benzilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-il-amino}-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzamÍda (92 mg) é adicionada a 1 mlde TFA e aquecida até 70°C por 1 hora. Depois de remoção do TFA extra, oproduto bruto é dissolvido em 2 ml de DMSO e purificado por LC/MS. O pro-duto final é um sólido amarelo, 63 mg. 1H RMN 400 MHz (d6-DMSO) δ 11,65(s, 1H), 10,43 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,26 (m, 4H), 7,99 (m, 2H), 7,78 (t, 1H, J= 8,0 Hz), 7,43 (d, 1H, J=8,0), 7,22 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,94 (m, 2H), 2,27 (s,3Η). MS m/z 465,2 (Μ +1).
Exemplo 5
Éster t-butílico do ácido (3-(3-r6-(2,4-Dimetóxi-benzilamino)-Dirimidin-4-il1-piridin-2-ilaminoM-metil-fenil)-carbâmico
<formula>formula see original document page 37</formula>
[6-(2-Cloro-piridin-3-il)-pirimidin-4-il]-(2,4-dimetóxi-benzil)-amina(360 mg, 1 mmol) é misturada com éster t-butílico do ácido (3-Amino-4-metil-fenil)-carbâmico (340 mg, 1,5 mmol), acetato de paládio (112 mg, 0,5 mmol),Xantophos (435 mg, 0,75 mmol) e t-butóxido de potássio (225 mg, 2 mmols).10 ml de 1,4-dioxano anidro é adicionado em uma atmosfera de nitrogênio ea mistura é aquecida até 100°C por 16 horas. Depois de resfriamento para atemperatura ambiente e evaporação do solvente, o produto bruto é purifica-do em uma coluna de sílica-gel por eluição com 10% de MeOH em DCM. Oproduto final é um sólido amarelo, 390 mg. MS m/z 543,2 (M + 1).
N3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-il]-4-metil-benzeno-1.3-diamina
<formula>formula see original document page 37</formula>
Éster t-butílico do ácido (3-{3-[6-(2,4-Dimetóxi-benzilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-4-metil-fenil)-carbâmico (390 mg) é adiciona-do a 5 ml de MeOH e 5 ml de HCI a 4N. A mistura é aquecida até 50°C por 2horas. Depois de resfriamento para a temperatura ambiente e evaporaçãodo solvente, o produto bruto é usado na reação da etapa seguinte sem puri-ficação posterior. MS m/z 293,2 (M + 1).
N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metiimidazol-1-ih-5-trifluormetil-benzamida<formula>formula see original document page 38</formula>
O produto bruto N3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-il]-4-metil-benzeno-1,3-diamina (36 mg, 0,1 mmol) é dissolvido em DMF 500 uL e sãoadicionados DIEA (87uL, 0,5 mmol), HATU (38 mg, 0,1 mmol). Em seguidaácido 3-(4-Metil-imidazol-1-il)-5-trifluormetil-benzóico (27 mg, 0,1 mmol) éadicionado à mistura e a solução é agitada à temperatura ambiente por 5minutos. O produto bruto é purificado em LC-MS e 45 mg de produto finalsão obtidos como um sólido amarelo. 1H RMN 400 MHz (d6-DMSO) δ 11,67(s, 1H), 10,44 (s, 1H), 8,63 (d, 1H, J=2,1Hz), 8,57 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,41(d, 1H, J=2,1 Hz), 8,28 (m, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,07 (d, 1H,J=8,0Hz), 7,72 (s, 1H), 7,21 (d, 1H, J=8,0Hz), 7,14 (s, 2H), 6,93 (t, 2H,J=5,5Hz), 2,35 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). MS m/z 545,2 (M + 1).
Exemplo 6
<formula>formula see original document page 38</formula>Uma mistura de 4,6-dicloro-pirimidina 1 (20,93 g, 140 mmols),tiometóxido de sódio (10,34 g, 147 mmols) em THF (100 ml) é agitada àtemperatura ambiente. Depois de uma noite, a mistura reacional é concen-trada. O resíduo é distribuído entre acetato de etila e salmoura. A camadaorgânica é separada e lavada com salmoura, secada em Na2SO4. O produtobruto é purificado por recristalização a partir de hexanos (60 ml) para dar 4-cloro-6-metilsulfanil-pirimidina (15,01 g). O licor-mãe é concentrado e o resí-duo é purificado por cromatografia instantânea sobre sílica-gel eluindo comacetato de etila em hexanos de 0% a 10% para dar 4,51 g de 4-cloro-6-metilsulfanil-pirimidina contendo uma pequena quantidade do subproduto4,6-bis metiltio-pirimidina, que pôde ser facilmente removido na etapa se-guinte.
<formula>formula see original document page 39</formula>
À suspensão de NaH (1,98 g, 50 mmols, 60% em óleo) em DM-SO (20 ml) é adicionado malonato de dimetila (5,67 ml, 50 mmols) a 23°C(resfriado em água gelada se necessário). Depois de cessado o desprendi-mento de hidrogênio, 4-cloro-6-metilsulfanil-pirimidina (3,22 g, 20 mmols) éadicionada. A reação é ainda aquecida a 80°C por 5 horas. A mistura rea-cional é então resfriada para a temperatura ambiente, e resfriada brusca-mente com NH4CI saturado (50 ml). Os orgânicos são extraídos com acetatode etila (3 χ 60 ml). As camadas orgânicas combinadas são lavadas comsalmoura (2x) e secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas. 50 ml de he-xanos são adicionados ao resíduo e aquecidos a 60°C por meia hora e emseguida resfriados para a temperatura ambiente. O sólido é filtrado e lavadocom hexanos para dar éster dimetílico do ácido 2-(6-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-malônico (4,99 g). (se necessário, os hexanos de lavagem podem serconcentrados e purificados por cromatografia instantânea sobre sílica-geleluindo com acetato de etila em hexanos de 0% a 40% para dar produto adi-cional).<formula>formula see original document page 40</formula>
Uma mistura de éster dimetílico do ácido 2-(6-metilsulfanil-pirimi-din-4-il)-malônico (3,35 g, 13 mmols) e metóxido de sódio (0,300 ml de solu-ção a 25% p/v, 1,30mmol, 0,1 eq.) em MeOH (100 ml) é aquecida a 60PC por3 horas. A mistura reacional é resfriada para a temperatura ambiente e neu-tralizada com solução de HCI a 1N (1,30 ml) e concentrada e o resíduo éextraído com acetato de etila. A camada orgânica é lavada com salmoura esecada em Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto é purificado porcromatografia instantânea sobre sílica-gel eluindo com acetato de etila emhexanos de 0% a 50% para dar éster metílico do ácido (6-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-acético (2,10 g) como um óleo amarelo. 1H RMN 400 MHz(CDCI3) δ 8,86 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,70 (s, 2H), 2,55 (s, 3H).
<formula>formula see original document page 40</formula>
Uma mistura de éster metílico do ácido (6-metilsulfanil-pirimidin-4-il)-acético (4,83 g, 24 mmols) e Ν,Ν-dimetilformamida dimetil acetal (35 ml,263 mmols) é aquecida a 110°C. Depois de uma noite, a mistura reacional éresfriada para a temperatura ambiente e concentrada, o resíduo é usadopara a reação seguinte sem purificação posterior.
<formula>formula see original document page 40</formula>
Uma mistura de 5 bruto (1,36 g) e acetato de formamidina (2,79g, 26,8 mmols, 5,0 eq.) em 2-metoxietanol (20 ml) é aquecida a 1100C emum tubo vedado por 24 horas. A mistura reacional é resfriada para a tempe-ratura ambiente e concentrada e o sólido e filtrado e lavado com água, e se-cado para dar e-metilsulfanil-K.õ^bipirimidinil^-ol (0,88 g) como um sólidomarrom. 1H RMN 400 MHz (cf-DMSO) δ 8,98 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,48 (s,1H), 8,39 (s, 1H), 2,57 (s,3H).
<formula>formula see original document page 41</formula>
POCI3 (1,51 ml, 16,2 mmols, 3,0 eq,) é adicionado lentamente auma suspensão de 6-metilsulfanil-[4,5']bipirimidinil-4'-ol (1,20 g, 5,44 mmols)e trietil amina (0,76 ml, 5,44 mmols, 1,0 eq.) em acetonitrila (30 ml). A mistu-ra reacional é aquecida a 85°C por 2 horas. Em seguida a mistura reacionalé resfriada para a temperatura ambiente e despejada em água gelada e ex-traída com acetato de etila. A camada orgânica é lavada com salmoura esecada em Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto é purificado porcromatografia instantânea sobre sílica-gel eluindo com acetato de etila emhexanos de 0% a 40% para dar 4'-cloro-6-metilsulfanil-[4,5,]bipirimidinila(0,937 g) como um sólido branco. 1H RMN 400 MHz (cf-DMSO) δ 9,19 (s,1H), 9,12 (d, 1H, J= 1,2 Hz), 9,07 (s, 1H), 7,91 (d, 1H, J= 1,6 Hz), 2,62 (s,3H).
<formula>formula see original document page 41</formula>
Uma mistura do composto 4'-cloro-6-metilsulfanil-[4,5'] bipirimidi-nila (140 mg, 0,587 mmol), N-(3-amino-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzami-da (189 mg, 0,643 mmol), DIPEA (0,216 ml, 1,24 mmol) em 2-butanol (5 ml)é aquecida a 110°C por 24 horas. Em seguida a mistura reacional é resfriadapara a temperatura ambiente. O sólido é filtrado e lavado com água, isopro-panol, e secado para dar N-[4-metil-3-(6-metilsulfanil-[4,5,]bipirimidinil-4,-il-amino)-fenil]-3-trifluormetil-benzamida (260 mg) como um sólido amarelo. 1HRMN 400 MHz (cf-DMSO) δ 11,75 (s, 1 Η), 10,50 (s, 1Η), 9,22 (s, 1 Η), 9,11(s, 1 Η), 8,68 (s, 1 Η), 8,42 (d, 1Η, J =2,4 Hz), 8,31 (s, 1 Η), 8,28 (d, 1Η, J =8,4 Hz), 8,21 (d, 1Η, J = 2,4 Hz), 7,97 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,79 (t, 1H, J = 7,6Hz), 7,57 (dd, 1H, J = 2,0, 8,4 Hz), 7,28 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 2,65 (s, 1H), 2,33(s, 3H). MS m/z 497,00 (M + 1).
<formula>formula see original document page 42</formula>
A suspensão de N-[4-metil-3-(6-metilsulfanil-[4,S1Ibipirimidinil-4'-ilamino)-fenil]-3-trifluormetil-benzamida (300 mg, 0,60 mmol) em 20 ml deCH2CI2 é tratada com ácido 3-cloroperoxibenzóico (77% max., 267 mg, 1,2mmol, 2,0 eq) a 0°C. A mistura reacional é deixada esquentar até a tempera-tura ambiente e mantida com agitação por 3 horas. Depois de completada aoxidação, a mistura reacional é resfriada bruscamente com solução saturadade tiossulfato de sódio 10 ml e vigorosamente agitada por 30 minutos, e emseguida tratada com 50 ml de diclorometano. A mistura reacional é distribuí-da entre diclorometano e a camada aquosa. A camada orgânica é lavadacom solução saturada de NaHCO3, água, e salmoura seqüencialmente, e emseguida secada em Na2SO4, concentrada para dar N-[3-(6-Metanossulfinil-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida (280 mg)como um sólido amarelo. MS m/z 513,1 (M + 1).
Uma mistura de (N-[3-(6-Metanossulfinil-[4,5']bipirimidinil-4'-il-amino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida (30 mg, 0,058 mmol) e ciclo-propilamina (100uL) em 2-propanol é aquecida a 60°C por uma noite. A mis-tura reacional é resfriada para a temperatura ambiente, concentrada e purifi-cada por Prep-HPLC para dar N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida como sal de TFA (19 mg). 1HRMN 400 MHz (Cf6-DMSO) δ 10,52 (s, 1H), 8,76 (bs, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,33(s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,27 (d, 1H, J= 8,2 Hz), 8,20 (bs, 1H), 7,97 (d, 1H, J =7,5 Hz), 7,79 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 7,55 (dd, 1H, J = 8,2, 2,0 Hz), 7,30 (d, 1H, J= 8,9 Hz), 2,30 (s, 3H), 0,84 (s, 2H), 0,55 (s, 2H). MS m/z 506,2 (M + 1).
Exemplo 7
<formula>formula see original document page 43</formula>
Uma mistura do composto 4'-cloro-6-metilsulfanil-[4,5'] bipirimidi-nila (353 mg, 1,479 mmol), éster t-butílico do ácido (3-amino-4-metil-fenil)-carbâmico (361 mg, 1,624 mmol), DIPEA (0,615 ml, 1,24 mmol) em 2-buta-nol (7 ml) é aquecida a 1100C por 24 horas. Em seguida a mistura reacionalé resfriada para a temperatura ambiente. O sólido é filtrado e lavado comágua, isopropanol, e secado para dar éster t-butílico do ácido [4-metil-3-(6-metilsuifanil-[4,5']bipirimidinil-4,-ilamino)-fenil]-carbâmico (587 mg). MS m/z425,17 (M + 1).
<formula>formula see original document page 44</formula>
A suspensão de éster t-butílico do ácido [4-metil-3-(6-metilsulfa-nil-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-fenin-carbâmico (560 mg, 1,32 mmol) em 40ml de CH2CI2 é tratada com ácido 3-cloroperoxibenzóico (77% max, 533 mg,2,38 mmols, 1,8'eq) a 0°C. A mistura reacional é deixada esquentar até atemperatura ambiente e mantida com agitação por 3 horas. Depois de com-pletada a oxidação, a mistura reacional é resfriada bruscamente com solu-ção saturada de tiossuIfato de sódio 15 ml e vigorosamente agitada por 30minutos, e em seguida tratada com 100 ml de diclorometano. A mistura rea-cional é distribuída entre diclorometano e a camada aquosa. A camada or-gânica é lavada com solução saturada de NaHCO3, água, e salmoura se-qüencialmente, e em seguida secada com Na2SO4, e condensada para daréster t-butílico do ácido [3-(6-Metanossulfinil-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-carbâmico (485 mg) como um sólido amarelo. MS m/z 441,2 (M + 1).
<formula>formula see original document page 44</formula>
Uma mistura de éster t-butílico do ácido [3-(6-Metanossulfinil-[415,]bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-carbâmico (450 mg, 1,0 mmol), dii-sopropiletilamina (365 uL, 2,0 mmols, 2,0 eq), e 2-Morfolin-4-il-etilamina (268μL, 2,0 mmols, 2,0 eq.) em 2-propanol é aquecida até 80°C por uma noite.Formou-se um precipitado amarelo. A mistura reacional é resfriada para atemperatura ambiente. O sólido é filtrado e lavado com solução saturada deNaHCO3, água e uma pequena quantidade de etanol, e secado para dar és-ter t-butílico do ácido {4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4)5,]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-carbâmico (335 mg) como um sólido amarelo-claro. MS m/z507,3 (M + 1).
<formula>formula see original document page 45</formula>
Uma mistura de éster t-butílico do ácido {4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-carbâmico (275 mg, 0,54mmol), solução aquosa de HCI a 2M (5 ml) em dioxano (15 ml) é aquecidaaté 80 0C por 3 horas. Em seguida a mistura reacional é resfriada para atemperatura ambiente, concentrada e tratada com diclorometano (50 ml). Acamada orgânica é então lavada com solução saturada de NaHCO3, água, esalmoura, secada com Na2SO4, e concentrada. O produto bruto é purificadopor recristalização a partir de uma mistura de acetato de etila e hexanos (v/v= 5 ml/25 ml) para dar N4,-(5-Amino-2-metil-fenil)-N6-(2-morfolin-4-il-etil)-[4,5,]bipirimidinil-6,4'-diamina (170 mg) como um pó amarelo. MS m/z 407,2(M + 1).
<formula>formula see original document page 45</formula>
Uma mistura de N4'-(5-Amino-2-metil-fenil)-N6-(2-morfolin-4-il-etil)-[4,5']bipirimidinil-6,4'-diamina (25 mg, 0,061 mmol), ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (14 mg, 0,076 mmol, 1,25 eq), HATU (26 mg,0,068 mmol, 1,1 eq), e diisopropiletil amina (35uL, 0,20 mmol, 3,3 eq) emDMF (1,5 ml) é mantida em agitação por 1,5 hora. A mistura reacional é con-centrada e purificada por Prep-HPLC para dar {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico (22 mg) como sal de TFA. 1H RMN 400 MHz (cf-DMSO) δ 12,16(fcs. 1H), 10,18(s, 1H), 8,74-8,69 (m, 2H), 8,30 (s, 1H), 8,03{bs, 1H), 7,48(dd, J =8,2, 2,0Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,20 (bs, 1H),6,96(s, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,90-3,10(m, 12H), 2,29(s, 3H), 1,27 (s, 9H). MSm/z 571,32 (M + 1).
Repetindo os procedimentos descritos nos exemplos acima,usando os materiais de partida apropriados, são obtidos os seguintes com-postos de fórmula I, identificados na Tabela 1.
Tabela 1
<table>table see original document page 46</column></row><table><table>table see original document page 47</column></row><table><table>table see original document page 48</column></row><table><table>table see original document page 49</column></row><table><table>table see original document page 50</column></row><table><table>table see original document page 51</column></row><table><table>table see original document page 52</column></row><table><table>table see original document page 53</column></row><table><table>table see original document page 54</column></row><table><table>table see original document page 55</column></row><table><table>table see original document page 56</column></row><table><table>table see original document page 57</column></row><table><table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table><table>table see original document page 60</column></row><table><table>table see original document page 61</column></row><table><table>table see original document page 62</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 64</column></row><table>
Ensaios
Os compostos da presente invenção são analisados para medirsua capacidade de inibir seletivamente a proliferação celular de células 32Dexpressando BCR-AbI (32D-p210) em comparação com células 32D paren-tais. Os compostos que inibem seletivamente a proliferação dessas célulasBCR-AbI transformadas são testados quanto à atividade antiproliferativa emcélulas Ba/F3 expressando o tipo selvagem ou as formas mutantes de B-cr-abl. Além disso, os compostos são analisados para medir sua capacidadede inibir as cinases Bmx1 b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR1 CSK, FGFR3, JAK2,Lck1 Mett PKCa, SAPK2a, Tie2, TrkB e P70S6K.
Inibicão da proliferação celular dependente de BCR-AbI (método de alto ren-dimento)
A linhagem celular murina usada é a linhagem de células proge-nitoras hemopoiéticas 32D transformada com BCR-AbI cDNA (32D-p210).Estas células são mantidas em RPMI/10% de soro de bezerro fetal (RP-MI/FCS) suplementado com penicilina 50 mg/ml, estreptomicina 50 mg/ml eL-glutamina 200 mM. Células 32D não transformadas são mantidas de ma-neira similar com a adição de 15% de meio condicionado com WEHI comouma fonte de IL3.
50 μΙ de uma suspensão de células 32D ou 32D-p210 são pla-queados em microplacas de 384 cavidades Greiner (pretas) a uma densida-de de 5000 células por cavidade. 50 nl de composto do teste (em solução deestoque em DMSO a 1 mM) são adicionados a cada cavidade (STI571 é in-cluido como controle positivo). As células são incubadas por 72 horas a1 37°C, 5% de CO2- 10 μΙ de uma solução de azul de Alamar a 60% (Tek di-agnostics) são adicionados a cada cavidade e as células são incubadas pormais 24 horas. A intensidade de fluorescência (excitação a 530 nm, emissãoa 580 nm) é quantificada usando o sistema Acquest® (Molecular Devices).Inibicão da proliferação celular dependente de BCR-AbI
Células 32D-p210 são plaqueadas em placas TC de 96 cavida-des a uma densidade de 15.000 células por cavidade. 50 μΙ de diluições su-cessivas 1 para 2 do composto do teste (Cmax é 40 μΜ) são adicionados acada cavidade (STI571 é incluído como controle positivo). Depois de incubaras células por 48 horas a 37°C, 5% de CO2, 15 ml de MTT (Promega) sãoadicionados a cada cavidade e as células são incubadas por mais 5 horas. Adensidade ótica a 570 nm é quantificada por espectrofotometria e os valoresde IC50, a concentração de composto necessária para 50% de inibição, sãodeterminados a partir de uma curva de dose resposta.
Efeito sobre a distribuição do ciclo celular
Células 32D e 32D-p210 são plaqueadas em placas TC de 6cavidades a uma densidade de 2,5x106 células por cavidade em 5 ml demeio e composto do teste a 1 ou 10 μΜ são adicionados (STI571 é incluídocomo controle). As células são então incubadas por 24 ou 48 horas a 37 °C,5% de CO2. 2 ml da suspensão de células são lavados com PBS1 fixados em70% EtOH de por 1 hora e tratados com PBS/EDTA/RNase A por 30 rninu-tos. Iodeto de propídio (Cf= 10 pg/ml) é adicionado e a intensidade de fluo-rescência é quantificada por citometria de fluxo no sistema FACScalibur®(BD Biosciences). Os compostos do teste da presente invenção demonstramum efeito apoptótico sobre as células 32D-p210, mas não induzem a apop-tose nas células 32D parentais.
Efeito sobre a autofosforilacão de células BCR-AbI
A autofosforilação de BCR-AbI é quantificada com Elisa de cap-tura usando um anticorpo de captura específico para c-abl e um anticorpoantifosfotirosina. Células 32D-p210 são plaqueadas em placas TC de 96 ca-vidades a uma densidade de 2x105 células por cavidade em 50 μl de meio.50 μl de diluições sucessivas um para dois de compostos do teste (Cmax é 10μΜ) são adicionados a cada cavidade (STI571 é incluído como controle posi-tivo). As células são incubadas por 90 minutos a 37°C, 5% de CO2. As célu-las são então tratadas por 1 hora em gelo com 150 μΙ de tampão de Iise (50mM de Tris-HCI,»pH 7,4, NaCI a 150 mM, 5 mM de EDTA, 1 mM de EGTA e1% de NP-40) contendo inibidores de protease e fosfatase. 50 μl de Iisadocelular são adicionados a optiplacas de 96 cavidades previamente revestidascom anticorpo específico anti-abl e bloqueadas. As placas são incubadas por4 horas a 4°C. Depois de lavagem com o tampão TBS-Tween 20, 50 μl doanticorpo antifosfotirosina conjugado com fosfatase alcalina são adicionadose a placa é ainda incubada por uma noite a 4°C. Depois de lavagem com otampão TBS-Tween 20, 90 μΙ de um substrato Iuminescente são adicionadose a luminescência é quantificada usando o sistema Acquest® (Molecular De-vices). Os compostos do teste da invenção que inibem a proliferação dascélulas expressando BCR-Abl, inibem a autofosforilação das células BCR-Abl de maneira dependente da dose.
Efeito sobre a proliferação de células expressando formas mutantes de B-cr-abl
Os compostos da invenção são testados quanto ao seu efeitoantiproliferativo sobre células Ba/F3 expressando o tipo selvagem ou as for-mas mutantes de BCR-AbI (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T) que con-ferem resistência ou sensibilidade diminuída a STI571. O efeito antiprolifera-tivo desses compostos sobre as células mutantes expressando BCR-AbI esobre as células não transformadas foi testado a 10, 3,3, 1,1 e 0,37 μΜ co-mo descrito acima (em meio sem IL3). Os valores de IC5o dos compostossem toxicidade sobre as células não transformadas foram determinados apartir das curvas de dose resposta obtidas da maneira descrita acima.FGFR3 (Ensaio enzimático)
O ensaio de atividade de cinase com FGFR3 purificado (Upsta-te) é realizado em um volume final de 10 μΙ contendo 0,25 Mg/ml de enzimaem tampão de cinase (30 mM de Tris-HCI pH 7,5, 15 mM de MgCI2, 4,5 mMde MnCI2, 15 μΜ de Na3VO4 e 50 μg/ml de BSA), e substratos (5 pg/ml debiotina-poli-EY(Glu, Tyr) (CIS-US, Inc.) e 3 μΜ de ATP). São feitas duas so-luções: a primeira solução de 5 μΙ contém a enzima FGFR3 em tampão decinase foi primeiro dispensado em ProxiPlate® de formato 384 (Perkin-Elmer) seguida da adição de 50 nl de compostos dissolvidos em DMSO, eem seguida 5 μΙ da segunda solução contém o substrato (poli-EY) e ATP emtampão de cinase foi adicionada a cada cavidade. As reações são incubadasà temperatura ambiente por uma hora, interrompidas pela adição de 10 μΙ demistura de detecção de HTRF, que contém 30 mM de Tris-HCI pH 7,5, 0,5 Mde KF, 50 mM de ETDA, 0,2 mg/ml de BSA, 15 μg/ml de estreptavidina-XL665 (CIS-US, Inc.) e 150 ng/ml de anticorpo antifosfotirosina conjugadocom criptato (CIS-US, Inc.). Depois de uma hora de incubação à temperaturaambiente para permitir a interação estreptavidina-biotina, os sinais florescen-tes resolvidos no tempo são lidos no Analyst GT (Molecular Devices Corp.).Os valores de IC50 são calculadas por análise por regressão linear da per-centagem de inibição de cada composto em 12 concentrações (diluição 1:3de 50 μΜ a 0,28 nM). Neste ensaio, os compostos da invenção têm um IC5ona faixa de 10 nM a 2 μΜ.
FGFR3 (Ensaio celular)
Os compostos da invenção são testados quanto a sua capacida-de de inibir a proliferação de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, queé dependente da atividade de cinase celular de FGFR3. Ba/F3-TEL-FGFR3são cultivadas até 800.000 células/ml em suspensão, com RPMI 1640 su-plementado com 10% de soro bovino fetal como o meio de cultura. As célu-las são dispensadas em uma placa de formato de 384 cavidades a umadensidade de 5000 células/cavidade em 50 μΙ de meio de cultura. Os com-postos da invenção são dissolvidos e diluídos em dimetil sulfóxido (DMSO).
Diluições sucessivas 1:3 de doze pontos são feitas em DMSO para criargradiente de concentrações variando tipicamente de 10 mM a 0,05 μΜ. Ascélulas são acrescidas de 50 nl de compostos diluídos e incubadas por 48horas em uma incubadora de cultura de células. Azul de Alamar® (TREKDiagnostic Systems), que pode ser usado para monitorar a atmosfera redu-tora criada pelas células em proliferação, é adicionado às células a umaconcentração final de 10%. Depois de mais quatro horas de incubação emuma incubadora de cultura de células a 37°C, os sinais de fluorescência doazul de Alamar® reduzido (excitação a 530 nm, emissão a 580 nm) sãoquantificados no Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Os valores de IC5osão calculados por análise por regressão linear da percentagem de inibiçãode cada composto em 12 concentrações.
b-Raf - ensaio enzimático
Os compostos da invenção são testados quanto a sua capacida-de de inibir a atividade de b-Raf. O ensaio é realizado em placas MaxiSorpde 384 cavidades (NUNC) com paredes pretas e fundo transparente. Osubstrato, IKBa é diluído em DPBS (1:750) e 15 μΙ são adicionados a cadacavidade. As placas são incubadas a 4°C por uma noite e lavadas 3 vezescom TBST (25 mM de Tris, pH 8,0, de NaCI a 150 mM e 0,05% de Tween-20) usando a lavadora de placas EMBLA. As placas são bloqueadas comSuperblock (15 μΙ/cavidade) por 3 horas à temperatura ambiente, lavadas 3vezes com TBST e secadas por tapotagem. Tampão de ensaio contendo 20μΜ de ATP (10 μΙ) é adicionado a cada cavidade seguido de 100 nl ou 500 nlde composto. B-Raf é diluído no tampão de ensaio (1 μΙ em 25 μΙ) e 10 μΙ deb-Raf diluído é adicionado a cada cavidade (0,4 mg/cavidade). As placas sãoincubadas à temperatura ambiente por 2,5 horas. A reação de cinase é inter-rompida pela lavagem das placas 6 vezes com TBST. O anticorpo Phosph-IKBa (Ser32/36) é diluído em Superblock (1:10.000) e 15 μΙ são adicionadosa cada cavidade. As placas são incubadas a 4°C por uma noite e lavadas 6vezes com TBST. IgG anticamundongo de cabra conjugada com AP é diluí-da em Superblock (1:1.500) e 15 μΙ são adicionados a cada cavidade. Asplacas são incubadas à temperatura ambiente por 1 hora e lavadas 6 vezescom TBST. 15 μΙ de substrato Attophos AP fluorescente (Promega) são adi-cionados a cada cavidade e as placas são incubadas à temperatura ambien-te por 15 minutos. As placas são lidas no Acquest ou Analyst GT usandoum programa de intensidade de fluorescência (excitação 455 nm, emissão580 nm).
b-Raf - ensaio celular
Os compostos da invenção são testados em células A375 quan-1 to a sua capacidade de inibir a fosforilação de MEK. A linhagem celular(ATCC) é derivado de um paciente humano com melanoma e tem uma mu-tação V599E no gene B-Raf. Os níveis de MEK fosforilado são elevados de-vido à mutação de B-Raf. Células A375 subconfluentes a confluentes sãoincubadas com compostos por 2 horas a 37°C em meio livre de soro. As cé-lulas são então lavadas uma vez com PBS frio e Iisadas com o tampão deIise contendo 1 % de Triton X100. Depois de centrifugação, os sobrenadan-tes são submetidos à SDS-PAGE, e em seguida transferidos para membra-nas de nitrocelulose. As membranas são então submetidas à análise damancha ocidental com anticorpo antifosfo-MEK (ser217/221) (Cell Signaling).A quantidade de MEK fosforilado é monitorada pela densidade das bandasde fosfo-MEK nas membranas de nitrocelulose.Ensaio de cintilacão com PfCDPKI recombinante
Este ensaio de proximidade de cintilação mede a capacidade doPfCDPKI de catalisar a transferência do grupo gama-fosfatase do gama-(33)P-ATP para o peptídio substrato de caseína biotinilada. Os peptídios fosforila-dos são então capturados em glóbulos de cintilação revestidas com estrepta-vidina e a atividade é quantificada em um contador de cintilação de placa demicrotitulação. Os compostos da invenção são avaliados quanto à capacidadede alterar a atividade de PfCDPKI neste ensaio de proximidade de cintilação.
Uma proteína de fusão PfCDPKI é analisada em 20 mM de Tris-HCI, pH7,5, MgCI2 10 mM, EGTA 1 mM, CaCI2 1,1 mM, 1 μΜ de ATP e 0,1ng/μΙ de caseína biotinilada. O ensaio é realizado em placas de 384 cavida-des. Enzima e tampão sem cálcio são misturados e dividos em alíquotas (5μΙ) em placas dê 384 cavidades usando um dispensador de líquido de mi-croplaca. Os compostos da invenção (50 nl de 3 mM) são adicionados. ATPe [γ-33Ρ] ATP (0,1 μCi/reação) são misturados com tampão contendo 1,5 χde cálcio e adicionados à reação. O ensaio prossegue por 1 hora à tempera-tura ambiente e é interrompido usando 10 μΙ de uma solução contendo gló-bulos de PVT SPA marcados com estreptavidina (50 μg/reação) (GE Health-care), 50 mM de ATP, 5 mM de EDTA e 0,1% de TritonX-100. Os glóbulosde SPA são centrifugados (3 minutos a 2000 rpm) transformando-se em umpélete em cada cavidade. A radioatividade incorporada é medida usando umcontador de cintilação e o IC50 é calculado para cada composto.
Este ensaio de proliferação de parasita mede o aumento no teor deDNA de parasita usando um corante de intercalação de DNA, SYBR Green®.
A cepa 3D7 P. Falciparum é cultivada em meio de cultura com-pleto até a parasitemia atingir 3% a 8% com células eritrocíticas humanasO+. 20 μΙ de meio de rastreamento são dispensados em placas de ensaio de384 cavidades. Uma placa contendo células eritrocíticas e parasitas é incluí-da para calcular a linha basal e uma outra placa de células eritrocíticas éincluída para calcular o valor de fundo ("background"). 50 nl de compostosda invenção (em DMSO), incluindo controles antimaláricos (cloroquina e ar-timesinina), são então transferidos para as placas de ensaio. 50 nl de DMSOsão transferidos para as placas de controle da linha basal e do valor de fun-do. Em seguida 30 μΙ de uma suspensão de uma suspensão de células eri-trocíticas infectadas com 3D7 P. falciparum em meio de rastreamento sãodispensados nas placas de ensaio e na placa de controle da linha basal demodo que o hematócrito final é 2,5% com uma parasitemia final de 0,3%.Células eritrocíticas não infectadas são dispensadas na placa de controle dovalor de fundo de modo que o hematócrito final é 2,5%. As placas são colo-cadas em uma incubadora a 37°C por 72 horas em uma atmosfera com bai-xo teor de oxigênio contendo uma mistura gasosa de 93% de N2, 4% deCO2, e 3% de O2. 10 μΙ de uma solução 10X de SYBR Green I® em meioRPMI são dispensados nas placas. As placas são vedadas e colocadas emum congelador a -80°C por uma noite para a Iise das células sangüíneasvermelhas. As placas são descongeladas, e para coloração ótima, deixadasà temperatura ambiente por uma noite. A intensidade de fluorescência é me-dida (excitação 497 nm, emissão 520 nm) usando o sistema ACQUEST®(Molecular Devices). A percentagem de inibição, EC5o, é calculada para ca-da composto.
Os compostos da invenção inibem a atividade de PfCDPKI comuma potência inferior a 10 mM, de preferência inferior a 1 mM, mais preferi-velmente inferior a 500 nM, 250 nM, 100 nM e 50 nM no ensaio enzimático1 e/ou no ensaio de proliferação de parasita. Além disso, os compostos dainvenção podem retardar significativamente o aumento na parasitemia e pro-longar a sobrevivência em camundongos infectados com o parasita de roe-dores, P. yoelii. Análises morfológicas e transcricionais demonstraram queos parasitas inibidos com um composto da invenção apresentam paralisaçãodo ciclo celular na fase de esquizogonia tardia e são, portanto, úteis no tra-tamento da malária.
Upstate KinaseProfiler® - Ensaio de ligação de filtro radioenzimático
Os compostos da invenção são avaliados quanto a sua capaci-dade de inibir membros individuais da lista das cinases. Os compostos sãotestados em duplicatas a uma concentração final de 10 μΜ seguindo esteprotocolo geral. Observe que a composição de tampão de cinase e os subs-tratos variam para as diferentes cinases incluídas na lista do "Upstate Kina-seProfiler®". Tampão de cinase (2,5 μΙ, 10x - contendo MnCI2 quando neces-sário), cinase ativa (0,001-0,01 Unidades; 2,5 μΙ), peptídio específico ou pep-tídio Poli(Glu4-Tyr) (5-500 μΜ ou 0,01 mg/ml) em tampão de cinase e tam-pão de cinase (50 μΜ; 5 μΙ) são misturados em um eppendorf em gelo. Umamistura de Mg/ATP (10 μΙ; 67,5 (ou 33,75) mM de MgCI2, 450 (ou 225) μΜde ATP e 1 μΟϊ/μΙ de [γ-32Ρ]-ΑΤΡ (3000Ci/mmol)) é incubada a cerca de30°C por cerca de 10 minutos. A mistura reacional é colocada (20 μΙ) em umquadrado de papel de 2cm χ 2cm P81 (fosfocelulose, para substratos peptí-dicos carregados positivamente) ou Whatman No. 1 (para o substrato peptí-dico Poli (Glu4-Tyr)). Os quadrados do ensaio são lavados 4 vezes, por 5minutos cada, com 0,75% de ácido fosfórico e lavados uma vez com acetonapor 5 minutos. Os quadrados do ensaio são transferidos para um frasco decintilação, 5 ml de coquetel de cintilação são adicionados e a incorporaçãode 32P (cpm) ao substrato peptídico é quantificada com um contador de cinti-lação Beckman. A percentagem de inibição é calculada para cada reação.
Os compostos de fórmula I, na forma livre ou na forma de salfarmaceuticamente aceitável, apresentam propriedades farmacológicas vali-osas, por exemplo, como indicado pelos testes in vitro descritos neste pedi-do. Por exemplo, os compostos de fórmula I apresentam de preferência umIC50 na faixa de 1 χ 10"10 a 1 χ 10"5 Μ, de preferência inferior a 50 nM paraBcr-Abl do tipo selvagem e mutante. Os compostos de fórmula I, a uma con-centração de 10 mM, apresentam de preferência uma percentagem de inibi-ção maior que 50%, de preferência maior que cerca de 70%, contra uma oumais cinases selecionadas de Abl1 Bcr-Abl, Bmx, b-RAF, c-RAF, c-SRC,KDR1 CSK, FGFR3, JAK2, Lck, Met, PKCoc, SAPK2cc, Tie2, TrkB e P70S6K.Fica entendido que os exemplos e as modalidades descritos neste relatóriosão apenas ilustrativos e que várias modificações ou alterações à luz dosmesmos serão sugeridas aos versados na técnica e estão incluídas no espí-rito e alcance deste pedido e no escopo das reivindicações anexas. Todasas publicações, patentes, e pedidos de patente citados neste relatório estãoaqui incorporados a título de referência.

Claims (9)

1. Composto de fórmula I:<formula>formula see original document page 73</formula>em que:R1 é selecionado de -NR6R7 e -NR6C(O)R8; em que R6 é sele-cionado de hidrogênio e C0-6alquila; R7 é selecionado de hidrogênio, C1-6 al-quila, -NR9R10, C6-10aril-C0-4alquila, C1-10heteroaril-C0-4alquila, C3-12 cicloal-quil-C1-4alquila e C3-8heterocicloalquil-C0-4alquila; em que qualquer arila, he-teroarila, cicloalquila ou heterocicloalquila de R7 pode ser opcionalmentesubstituída por 1 a 3 radicais independentemente selecionados de C1-6alqui-la, C1-6alcóxi, -QNR9Ri0 e C3-8heterocicloalquil-Co-4alquila; em que Q é sele-cionado de uma ligação e C1-4alquileno; R8 é selecionado de hidrogênio eC1-6alquila; R9 e R10 são independentemente selecionados de hidrogênio eC1-6alquila;R2 é selecionado de hidrogênio e C1-6alquila;R3 é selecionado de hidrogênio e C1-6alquila;R4 é selecionado de hidrogênio, halo, C1-6alquila, C1-6alcóxi, C1-6alquila substituída por halogênio e C1-6alcóxi substituído por halogênio;R5 é selecionado de -C(O)NHRn e -NHC(O)Rn; em que R11 éselecionado de C6-10arila e C1-10heteroarila; em que qualquer arila ou hetero-arila de R11 é opcionalmente substituída por 1 a 3 radicais independente-mente selecionados de halo, C1-6alquila, C1-6alcóxi, C1-6alquila substituídapor halogênio, C1-6alcóxi substituído por halogênio, di-C1-4alquil-amino-C1-6alcóxi, di-C1-4alquil-amino-C1-6alquilC1-4alquiOamino, C1-10heteroaril-C0-4 al-quila, C3-8heterocicloalquil-C0-4alquila e C3-8heterocicloalquil-óxi; em quequalquer substituinte heteroarila ou heterocicloalquila de R11 é ainda opcio-nalmente substituída por 1 a 2 radicais independentemente selecionado de1-6alquila e hidróxi-C1-6alquila;X e Y são independentemente selecionados de N e CH; e ossais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos e isômeros do mesmo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que: X é CH eY é selecionado de CH e N; R2 é hidrogênio e R3 é hidrogênio.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que: Ri é se-lecionado de -NHR7 e -NHC(O)R8; em que R7 é selecionado de: hidrogênio;amino; metila; etila; isopropila; ciclopropila; morfolino-etila; benzila opcional-mente substituída por radicais 1-3 metóxi; piridinila substituída por um gruposelecionado de morfolino-metila, dimetil-amino-etila e dimetil-amino-metila;metil-piperazinil-etila; piperazinil-etila; metil-piperazinil-propila; pirrolidinil-etila; pirrolidinil-metila opcionalmente substituída por etila; piperidinil-metila;piperidinila opcionalmente substituída por metila; e metil-piperazinila; e R8 émetila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que: R4 é me-tila; e R5 é selecionado de -C(O)NHRn e -NHC(O)Rn; em que R11 é sele-cionado de fenila, 2-oxopirrolidin-l-ila, 1,3,4-tiadiazolila, piridinila, pirazolila,tienila, isoxazolila e tiazolila; em que o referido fenila, pirazolila, tienila, 2-oxopirrolidin-1-ila, 1,3,4-tiàdiazolila, piridinila, isoxazolila ou tiazolila é opcio-nalmente substituída por 1 a 3 radicais independentemente selecionados dehalo, trifluormetila, metil-piperazinila, etil-piperazinila, 2-oxoazetidin-1-ila,morfolino, morfolino-metila, hidróxi-etil-piperazinila, dimetilamino-etil-(metil)amino, dimetilamino-propil-(metil)amino, metil-imidazolila, metila, isopropila,t-butila, metóxi, metil-piperidinil-óxi, metil-piperazinil-metila, etil-piperazinil-metila, etila e ciclopropila.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, selecionado de:N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-[4-(2-hid -il]-5-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-piri-midin-4-il]-piridin-2-ilamino}fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilam1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzametilamino)-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido; 5-t-Butil-2-metil--2H-pirazol-3-carboxílico; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)^iridin-2-ilamino]-4-metHpiperidin-4-ilóxi)-5-trifluormetil-benzamida; {3-[3-(6-ciclopropilamino-pirimidin--4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-amida do ácido 1-t-Butil-5-metil-1 H-pira-zol-3-carboxílico; {3-[3-(6-ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-tiofeno-2-carboxílico; 3-[3-(6-Ciclopropil-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-N-(3-trifluormetilda; 3-[3-(6-Ciclopropjlamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metimetil-imidazol-1 -il)-5-trifluormetil-fenil]-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilami-no^irimidin-4-il)^iridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Ciclopropilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metietil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-benzamida; 4-Cloro-N-{3-[3-(6-ciclopro-pilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-trmda; N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridinno}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; 4-Cloro-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-ben 3-(4-Metil-imidazol-1-il)-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilaminil]-piridin-2-ilamino}-fenil)-5-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(2-mor-folin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-pÍridin-2-ilamino}-fe -metil-piperidin--4-ilóxi)-5-trifluormetil-benzamida; 4-(4-Etil-piperazin-i-il)-N-(4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etiÍamino)^irimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenbenzamida; (4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-amida do ácido 1-t-Butil-5-metiM H-pirazol-3-carboxnico; (4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridiamida do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; 4-Metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-N-(3-tnbenzamida; N-(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-4-metil-3-{3-[6-(2-morfolin-4-il-etil-amino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-benzamida; 3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-N-(3-trifluormetil-fenil)-benzamida; 3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-Mamino]-N-(4-cIoro-3-trifluormetil-fenil)-4-metil-benmida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilam^til-imidazol-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piri-din-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-etil-piperazin-1 -il)-5-trifluormetil-benzamida;N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-4razin-1-ilmetil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piri-din-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(1 -metil-piperidin-4-ilóxi)-5-trifluormetil-benza-mida; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino^ doácido 1 -t-Butil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilaminoJ-4-metil-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; {3-[3-(6-amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamda do ácido 5-t-Butil-tiofeno-2-carboxílico; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3^iperazin-1-il-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-(4-mzin-1 -il)-5-trifluormetil-benzamida; N-{3-[3-(6-Amino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-4-metil-fenil}-3-[4-(2-hidróxi-etil)-piperazin-1 -il]-5-trifluormetil-behza-mida; 3-[3-(6-Acetilamino-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilamino]-N-[4-(4-etil-pizin-1-ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-4-metil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(5-morfolin-4-ilmetil-piridin-2-ilamino)-pirimidin-4-il]-piridinfluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{3-[6-(4-morfolin-4-ilmetil-piridin-2-ilami-no)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(3-{3-[6-(5-Dimetilaminometil-piridin-2-ilamino)^fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(3-{3-[6-(4-Dimetilaminometil-piridin-2-il-amino)-pirimidin-4-il]-piridin-2-ilamino}-4-metil-fenil)-3-trifluormetil-benzaN-[3-(6-Ciclopropilamino-E4,5,]bipirimidinil-4,-ilamino)-4-metil-feni^metil-benzamida; N-(4-Metil-3-{6-[2-(4-metil-piperazin-1-iO-etilaminol-^.B^bi-pirimidinil-4,-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{6-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-propilamino]-[4,5']bipi^^^metil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4)5']bipirimidinil--4'-ilamino]-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Amino-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino)-4-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropilamino-[4,5,]bipirimidinil-4,-ilamino)-4-metil-fenil]-3-(4-metiI-piperazin-1 -il)-5-trifluor-metil-benzamida; N-p-íe-Ciclopropilamino-^.S^bipirimidinil-^-ilaminoJ-^me-til-fenil]-3-(4-etil-piperazin-1-il)-5-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Ciclopropil-amino-[4,5,]bipirimidinil-4,-ilamino)-4-metil-fenil]-3-[4-(2-hi-1-il]-5-trifluormetil-benzamida; N-tS-íe-Ciclopropilamino-K.õ^bipirimidinil^'--ilamino)-4-metil-fenil]-4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-benzamida;-4-Metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimidinil-4'-ilamifluormetil-fenil)-benzamÍda; 4-Metil-3-{6-[2-(4-metil-piperazin-1 -il)-etilamino]--S^bipirimidinil^^ilaminoJ-N-ÍS-trifluormetil-feniO-benzamida; 4-Metil-3-[6-(2-piperazin-1-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-ilamino]-^-benzamida; N-tS-íe-Hidrazino-K.S^bipirimidinil^^ilaminoí^-metil-fenin-S-trifluormetil-benzamida; N-tS-íe-lsopropilamino-K.õ^bipirimidinil^-ilaminoH-metil-fenil]-3-trifluormetil-benzamida; N-^-Metil-S-íe-metilamino-K.õ1] bipiri-midinil-^-ilaminoJ-fenill-S-trifluormetil-benzamida; N-[3-(6-Etilamino-[4,5'] bi-pirimidinil-^-ilaminoJ^-metil-fenill-S-trifluormetil-benzamida; {4-metil-3-[6-(2--morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimidinil-4,-ilamino]-fenil}-am do ácido 3-t-Butil-isoxazol-5-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,] bipi-rimidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-t-Butil-isoxazol-3-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimidinil-4'-ilamindo ácido 5-t-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4--il-etilaminoJ-K.õ^bipirimidinil-^-ilaminol-fenilJ-amida do ácido 5-t-Butil-tiofe-no-2-carboxílico; N-(4-t-Butil-tiazol-2-il)-4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilami-noJ-^.S^bipirimidiniW-ilaminol-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(2-pirrolidin-1-il-etilaminoJ-K.S^bipirimidinil^^ilaminol-fenilJ-S-trifluormetil-benzamida; N-(3-{6-[(1 -Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-amino]-[4J5,]bipirimidinil-4,-ilam-3-trifluormetil-benzamida; N-(4-Metil-3-{6-[(piperidin-4-ilmetil)-amino]-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino}-fenil)-3-trifluormetil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(piperi-din-4-ilamino)-[4,5]bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-3-trifl N-{4-Metil-3-[6-(1-metil-piperidin-4-ilamino)-[4,5']bipirimidinil-4,-itrifluormetil-benzamida; N-{4-Metil-3-[6-(4-metil-piperazin-1-ilamino)-[4,5']bi--pirimidinil-4,-ilamino]-fenil}-3-trifluormetil-benzamida; {4-metil-3-[6-(2-morfolin--4-il-etilamino)-[4,5']bipirimidinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-Ciclopropil-isoxazol-3-carboxílico; {4-metil-3-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-[4,5,]bipirimi-dinil-4'-ilamino]-fenil}-amida do ácido 5-Ciclopropil-2H-pirazol-3-carboxílico;-3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-m-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-cloropiridin-4-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin--4-ilamino)-N-(4-(trifluormetil)tiazol-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(3-(6-(metilami-no)pirimidin-4-il)piridin-2-ilamino)-N-(2-(3-(dimetilamino)propóximetil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(3-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)piridin-2-il-amino)-N-(2-(N-(2-(dimetilamino)etil)-N-metilamino)-5-(trifluormetil)fenmetilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-- (trifluormetil)-2-(morfolinometil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-t-butil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-4-metilbenza-mida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirM-2-(2-oxopirrolidin-1-il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-(N-(2-(dimetilamino)etil)-N-metilamm-metil)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(6-etilpiridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin--4-íl)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-t^util-4-metiltiazol-2-il)-4-metilbenzam 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimid^benzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(6-^^- fluormetil)piridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pi-rimidin-4-ilamino)-N-(4-(trifluormetil)piridin-2-il)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-4-metil-N-(piridida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pir^(2-oxoazetidin-1-il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4--il)pirimidin-4-ilamino)-4-metil-N-(piridin-2-il)benzamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(1 -etil-1 H-pirazol-4-il)-4-metilbenzamida;-3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirim^morfolinofenil)-4-metilbenzamida; N-(2-(3-(dmetil)fenil)-3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pir-zamida; 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimtil)-2-(2-oxoazetidin-1 -il)fenil)-4-metilbenzamida; 3-(5-(6-(metilamino) pirimi-din-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(5-(trifluormetil)-2-(4-metilpiperazimetilamino)propóxi)-5-(trifluor-midin-4-iramino)-4-metilben-din-4-ilamino)-N-(5-(trifluorme-metilbenzamida; e 3-(5-(6-(metilamino)pirimidin-4-il)pirimidin-4-ilamino)-N-(2-(N-(3-(dimetilamino)propil)-N-metilammida.
6. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto como definido na reivindicação 1em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
7. Método para tratamento de uma doença em um animal, emque a inibição da atividade de cinase pode inibir ou melhorar a patologiae/ou a sintomatologia da doença, método este que compreende administrarao animal uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto comodefinido na reivindicação 1.
8. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a cinaseé selecionada de Abl1 Bcr-Abl, Bmx1 b-RAF, c-RAF, c-SRC, KDR1 CSK1FGFR3, JAK2, Lck, Met1 PKCa1 SAPK2oc, Tie2, TrkB e P70S6K.
9. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, naprodução de um medicamento para tratamento de uma doença em um ani-mal, em que a atividade de cinase de Abl1 Bcr-Abl1 Bmx1 b-RAF, c-RAF,c-SRC, KDR1 CSK1 FGFR3, JAK2, Lck1 Met1 PKCa1 SAPK2a, Tie2, TrkB eP70S6K contribui para a patologia e/ou a sintomatologia da doença.
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