BRPI0708009A2 - transferases de fosfopanteteìnila das bactérias - Google Patents

Abstract

TRANSFERASES DE FOSFOPANTETEINILA DAS BACTéRIAS. A invenção refere-se em geral a transferases de fosfopanteteini- la que são necessárias para a ativação de um complexo de sintase de pau-cetídeo para sintetizar ácidos graxas poli-insaturadas de cadiea longa (LO-PUFAs) tais como ácido docosaexaenóico e ácido eícosapentaenóico. Em particular, a invenção refere-se a transferases de fosfopanteteinila bacteriana, a contructos de DNA para sua expressão em células hospedeiras, e a sementes, óleo e farinha grossa quando as células hospedeiras compreendem uma planta. Também provido é um método para a produção de um óleo de planta contendo ácido docosaexaenóíco e/ou ácido eicosapentaenóico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "TRANSFERASES DE FOSFOPANTETEÍNILA DAS BACTÉRIAS".

Antecedentes da Invenção

Esse pedido reivindica a prioridade do pedido de patente provi-sório dos Estados Unidos 60/763,644, depositado em 31 de janeiro de 2006,e pedido de patente dos Estados Unidos n- 11/668.354, depositado em 29de janeiro <Je 2007, cujas descrições são incorporadas aqui por -referênciaem sua totalidade.

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a transferases de fosfopanteteíni-la que estão envolvidas na ativação de sintase de policetídeo para sintetizarácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa (tais como ácido docosaexa-nóico e ácido eicosapentaenóico).

Descrição da Técnica Relacionada

Os produtos primário de biossíntese de ácido graxo na maioriados organismos são compostos de 16 e 18 carbonos. A razão relativa decomprimentos de cadeia e grau de insaturação desses ácidos graxos podemamplamente variar entre as espécies. Mamíferos, por exemplo, produzemácidos graxos principalmente saturados e monoinsaturados, enquando amaioria das plantas superiores, produzem ácido graxos com uma, duas, outrês ligações duplas, as últimas duas compreendendo ácidos graxos poliin-saturados (PUFA's). PUFAs de cadeia muito longa tais ácido docosaehae-nóico (DHA, 22:6) e ácido eicopentaenóico (EPA, 20:5) foram relatados apartir de várias espécies de bactérias marinhas, incluindo Moritella (Vibrio)marinha e Shewanella sp. (a patente U.S. ne 6.140.486) e a partir de algasmarinhas tais como Schizochytrium sp. e Thraustochytrium sp. (a publicaçãode patente U.S. 20040235127).

Duas famílias principais de PUFAs são os ácido graxos omêga-3(também representados como ácido graxos "n-3"), exemplificadas por ácidodocosaexaenóico e os ácido graxos omêga-6 (também representados comoácido graxos "n-6"), exemplifcados por ácido araquidônico (ARA, 20:4). PU-FAs são componentes importantes da membrana do plasma da célula e detecido adiposo, onde eles podem ser encontados em fosfolipídios e triglicerí-deos, respectivamente. PUFAs são necessários para desenvolvimento ade-quado em mamífero, particularmente no desenvolvimento do cérebro infantil,e para a formação e reparo de tecido.

Vários distúrbios respondem ao tratamento com PUFAs. Suple-mentação com PUFAs demonstrou reduzir a taxa de restenose depois daangioplastia. Os benefícios saudáveis de certos ácidos graxos omêga-3 dedieta para a doença cardiovascular e artrite reumatóide também foram bemdocumentados (Simopoulos, 1997; James e outros, 2000). Além disso, PU-FAs foram sugeridos para o uso em tratamentos para asma e psoríase. Evi-dência indica que PUFAs podem ser envolvidos em metabolismo de cálcio,sugerindo que PUFAs podem ser úteis no tratamento ou na prevenção deosteoporose e de pedras do trato urinário ou rim.

A maioria da evidência para benefícios saudáveis aplica às gor-duras de omêga-3 de cadeia longa, EPA e DHA, que estão em peixe e óleode peixe. Com essa base de evidência, autoridades e nutricionistas saudá-veis no Canadá (Scientific Review Committee, 1990, Nutrition Recommenda-tions, Minister of National Health and Welfare, Canadé, Ottowa), Europe (deDeckerer e outros, 1998), o Reino Unido (The British Nutrition Foundation,1992, Unsaturated fatty-acids - nutritional and physiological significance: Thereport of the British Nutrition Foundation1S Task Force, Chapman and Hall,London), e nos Estados Unidos (Simopoulos e outros, 1999) foram reco-mendados consumo de dieta aumentado recomendado desses PUFAs.

PUFAs de cadeia longa principal de importância incluem DHA eEPA, que são principalmente encontrados em diferentes tipos de óleo depeixe, e ARA, encontrado em fungos filamentosos tal como Mortierella. ParaDHA, numerosas fontes existem para produção comercial incluindo uma va-riedade de organismos marinhos, óleos obtidos a partir de peixe marinho deágua fria, frações de gema de ovo. No entanto, há várias desvantagens as-sociadas a produção comercial de PUFAs a partir de fontes naturais. Fontesnaturais de PUFAs, tais como animais e fungos, tendêm ter composiçõesoleosas altamente heterogêneas. Os óleos obtidos a partir dessas fontes,portanto, podem exigir purificação extensiva para separar um ou mais PU-FAs desejados ou para produzir um óleo que é enriquecido em um ou maisPUFAs.

Fontes naturais de PUFAs também são submetidos a flutuaçõesincontroláveis na disponibilidade. Estoques de peixe podem sofrer variaçãonatural ou podem ser esgotados por sobrepesca. Além disso, ainda com evi-dência devastadora de seus benefícios terapêuticos, recomendações de die-ta em relação a ácidos graxos omêga-3 não são consideradas. Óleos depeixe têm gostos e odores desagradáveis, que podem ser impossíveis deeconomicamente separar do produto desejado, e podem tornar tais produtosinaceitáveis como suplementos alimentícios. Óleos de animal, e particular-mente óleos de peixe, podem acumular poluentes ambientais. Alimentos po-dem ser enriquecidos com óleos de peixe, mas novamente, tal enriqueci-mento é problemático por causa de custo e declínio de estoques de peixemundialmente. Esse problema é também um impedimento para consumo eingestão de peixe inteiro. Apesar disso, se as mensagens saudáveis paraaumentar ingestão de peixe foram abraçadas pelas comunidades, provavel-mente seria um problema na satisfação de demanda para peixe. Além domais, há problemas com sustentabilidade dessa indústria, que pesadamentecontam com estoques de peixe selvagem para alimento de aquacultura (Na-ylor e outros, 2000).

Outras limitações naturais favorecem uma nova abordagem paraa produção de ácidos graxos omêga-3. Tempo e doença podem causar flu-tuação nos campos de peixe. Fermentação em grande escala de organismostal como Mortierella é oneroso. Tecidos de animal naturais contêm baixasquantidades de ARA e são difíceis de processar. Microorganismos tais comoPorphyridium e Mortierella são difíceis de cultivar em uma escala comercial.

Numerosos microorganismos marinhos produzem PUFAs decadeia muito longa tais como DHA e EPA por um mecanismo de sintase depolicetídeo (PKS). PKSs são complexos de enzima constituídos por polipep-tídeos multifuncionais que catalisam a síntese de moléculas complexas apartir de substratos simples em uma forma interativa. PKSs são bem-conhecidas na técnica e exemplos numerosos de tais seqüências podem serencontrados na literatura. Em Moritella marina, uma PKS sintetiza DHA apartir de malonil-CoA and acetil-CoA. Para ativar essa PKS1 uma transfera-ses de fosfopanteteínila é exigida.

Transferases de fosfopanteteínila (Ppts) catalisam a ativaçãopós-traducionais de proteínas de veículo, sintase de ácido graxo, sintase depolicetídeo, e sintetases de polipeptídeo não ribossomal pela ligação cova-Iente da porção de 4'-fosfopanteteína de coenzima A a um resíduo de serinaconservada, uma reação exigida para a biossíntese de produtos naturaisincluindo ácidos graxos, policetídeos e peptídeos não ribossomais. Ppts fo-ram classificadas de acordo com sua especificidade de proteína de veículo.

Em organismos contendo trajetórias que exigem fosfopanteteína múltipla, foisugerido que cada trajetória tenha sua própria Ppt. Enquanto o M. marinaPKS foi clonado (na patente U.S. nQ 6.140.486 (Facciotti e outros)), a Pptnão foi encontrada. Allen e Bartlett (2002) afirmaram que eles eram incapa-zes de clonar um gene de Ppt para formar Moritella.

Numerosas abordagens foram tentadas para a produção deDHA e EPA em plantas (WO 05103253A1 (Singh e outros), WO04071467A2 (Kinney e outros)). Essas abordagens tinham em comum o usode desaturases/elongases em uma forma por etapas. Essa abordagem tema desvantagem de uso de 6-8 genes e leva ao acúmulo de intermediários,um resultado potencialmente indesejável. Usando-se uma abordagem dePKS/Ppt, numerosos transgenes exigidos seriam menores (4-5) e o acúmulode intermediários não é esperado.

Portanto, seria vantajoso se obter material genético envolvidoem biossíntese de PUFA de cadeia longa e para expressar o material isola-do em um sistema de planta, em particular, um sistema de planta de colheitade terreno com base em terra, que pode ser manipulado para prover a pro-dução de quantidades comerciais de um ou mais PUFA's. Há também umanecessidade de aumentar ingestão de ácido graxo omêga-3 em seres hu-manos e animais. Assim há uma necessidade de prover uma ampla faixa desuplmentos alimentícios e alimentos enriquecidos com omêga-3 de modoque indivíduos podem escolher alimento, ingredientes alimentícios, comida eingredientes de comida que se ajustam seus hábitos de dieta usuais. Parti-cularmente vantajosos seria óleos de semente com DHA ou EPA aumenta-dos.

Atualmente há apenas um ácido graxo omêga-3, ALA, disponívelem óleos vegetais. No entanto, há conversão pobre de ingestão de ALA nosácidos graxos omêga-3 de cadeia mais longa tais como EPA e DHA. Foidemonstrado na publicação co-pendente nQ 20040039058 para "TreatmentAnd Prevention Of Inflammatory Disorders," que elevação de ingestão deALA intake da média da comumindidade de 1 g/dia a 14 g/dia por uso deóleo de linhaça apenas modestamente aumentou níveis de EPA de fosfolipí-dio no plasma. Um aumento de 14 vezes na ingestão de ALA resultou emum aumento 2 vezes no EPA de fosfolipídio no plasma (Manzioris e outros,1994). Assim, para aquela finalidade, há uma necessidade de produção co-mercialmente viável e eficiente de PUFAs usando-se um complexo de sínte-se de policetídeo e a Ppts que ativam o complexo, genes que codificação aPpt, e métodos recombinantes de produção delas. Uma necessidade tam-bém existe para óleos contendo proporções relativas mais altas de DHA ouEPA, e composições alimentícias e suplementos contendo eles. Uma neces-sidade também existe para métodos confiável e econômico de produção dePUFA's específicos. Óleos derivados de colheitas de semente oleosa talcomo canola, soja, girassol ou linhaça, que expressem um complexo de PKSbacteriano são enriquecidos em um EPA, DHA ou PUFA de cadeia longa.Tais óleos podem ser utilizados para produzir alimentos e suplementos ali-mentares enriquecidos em ácido graxos omêga-3 e o consumo de tais ali-mentos eficazmente aumenta níveis de EPA e DHA no tecido. Alimentos egenêros alimentícios, tais como leite, margarina e salsicha, todos produzidosou preparados com óleos enriquecidos como omêga-3, resultarão em bene-fício terapêuticos. Assim, existe uma forte necessidade para novos ácidosnucléicos de transferases de fosfopanteteínila capazes de ativar PKS para ouso em plantas de colheita transgências com óleos enriquecidos em PUFAs,bem como os óleos aperfeiçoados produzidos desse modo.Sumário da Invenção

Em um aspecto, a invenção provê ácidos nucléicos isolados quecodificam um polipeptídeo com atividade de transferase de fosfopanteteínila.Esses podem ser usados para transformar células ou pedaços da composi-ção de ácido graxo de uma planta ou o óleo produzido por uma planta. Umaconcretização da invenção é uma seqüência de polinucleotídeos selecionadado grupo que consiste em (a) um polinucleotídeo que hibridiza para dar SEQID NO:6 ou SEQ ID N0:8, ou um seu complemento, sob condições de 5XSSC, 50% de formamida e 42°C; (b) um polinucleotídeo que codifica a se-qüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7; e (c) um poli-nucleotídeo que codifica um polipeptídeo com pelo menos 75% de identida-de de seqüência com um seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 5 ouSEQ ID NO:7. Em certas outras concretizações da invenção, os polinucleotí-deos codificam um polipeptídeo tendo pelo menos 80%, 85% ou 90% de i-dentidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO:5ou SEQ ID NO: 7, incluindo pelo menos cerca de 82%, 87%, 89%, 92%,95%, 98% e 99% de identidade com essas seqüências. Aqueles de habilida-de na técnica reconhecerão que, uma vez que essas seqüências estão rela-cionadas, um dado polipeptídeo pode simultaneamente partilhar 90% oumais de homologia para mais do que uma dessas seqüência de polipeptí-deoss. Em uma outra concretização, o polipeptídeo codificado tem atividadede transferase de fosfopanteteínila.

Em ainda um outro aspecto, a invenção provê um contructo deDNA compreendendo a promotor heterólogo operavelmente ligado a umamolécula de DNA que codifica um polipeptídeo tendo atividade de transfera-ses de fosfopanteteínila, em que a molécula de DNA é selecionada do grupoque consiste em: (a) um polinucleotídeo que codifica a seqüência de polipep-tídeos de SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7; (b) um polinucleotídeo que hibri-diza para dar SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 8, ou um seu complemento, sobcondições de 5X SSC, 50% de formamida e 42°C; e (c) um polinucleotídeoque codifica um polipeptídeocom pelo menos 75% de identidade de seqüên-cia com uma seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO:7. Em outras concretizações, o promotor é funcional em uma célula procarió-tica ou eucariótica. Em certas concretizações, a célula eucariótica em que opromotor é funcional é uma célula de planta functional. Em uma outra con-cretização, o promotor é um promotor de aumento de semente.

Em ainda um outro aspecto, a invenção provê uma célula hos-pedeira transformado com um contructo de DNA compreendendo um promo-tor heterólogo operavelmente ligado a uma molécula de DNA que codificaum polipeptídeo tendo atividade de transferase de fosfopanteteínila providapela invenção. Em uma outra concretização, a célula hospedeira ulterior-mente compreende um promotor heterólogo operavelmente ligado a umamolécula de DNA que codifica um polipeptídeo de sintase de policetídeocompreendendo um sítio de ligação de fosfopanteteína. Em uma outra con-cretização, a molécula de DNA que codifica um polipeptídeo de sintase depolicetídeo compreendendo um sítio de ligação de fosfopanteteína é de Mo-riteila marina. Em ainda uma outra concretização, a molécula de DNA codifi-ca um polipeptídeo de sintase de policetídeo com pelo menos 70% de iden-tidade de seqüência com a SEQ ID NO: 19, ou qualquer sintase de policetí-deo conhecida como descrito aqui mais abaixo. A célula hospedeira podeser uma célula de planta, fúgnica ou bacteriana.

Em ainda um outro aspecto, a invenção provê uma planta e suaprogênie constituída das células hospedeiras transformadas com um con-tructo de DNA compreendendo um promotor heterólogo operavelmente liga-do a uma molécula de DNA que codifica polipeptídeo tendo uma atividade detransferase de fosfopanteteínila provida aqui. Tal planta pode ser definidacomo a comparação alterada de metabolismo de ácido graxo em relação aumam planta do mesmo genótipo que carece do contructo de DNA. Em umaconcretização, a planta é selecionada do grupo que consiste em canola,Brassica campestris, colza de semente oleosa, semente de colza, soja,crambe, mostarda, grão de rícino, amemdoim, gergelim, rama de algodão,linhaça, açafrão, óleo de palma, linho, girassol, milho, arroz, cevada, milhomiúdo, centeio, trigo, aveia, alfalfa e sorgo. A invenção também provê se-mente, óleo e farinha grossa produzidos a partir da planta, que é definidocomo compreendendo um polipeptídeo ou uma molécula de DNA detectávelprovido pela invenção. Adicionalmente, a invenção provê composições ali-mentícias humanas e ração animal.

Em ainda um outro aspecto, a invenção provê um método deprodução de um óleo de planta contendo ácido docosahexaenóico e/ou ei-cosapentaenóico compreendendo as etapas de (a) crescimento de umaplanta compreendendo a célula hospedeira da invenção ulteriormente com-preendendo uma sintase de policetídeo; (b) produção de semente; (c) e pro-cessamento da semente para se obter um óleo.

Breve Descrição das Figuras

Os seguintes desenhos fazem parte do presente relatório e es-tão incluídos para ulteriormente demonstrar certos aspectos da presente in-venção. A invenção pode ser melhor entendida por referência a um ou maisdesses desenhos com a descrição detalhada de concretizações específicasapresentadas aqui.

Figura 1 mostra um mapa de vetor pMON68081.Figura 2 mostra um mapa de vetor pMON68080.Figura 3 mostra um mapa de vetor pMON94547.Figura 4 mostra um mapa de vetor pMON94544.Figura 5 mostra um mapa de vetor pMON94534.Figura 6 mostra um mapa de vetor pMON68084.Figura 7 mostra um mapa de vetor pMON68085.Figura 8 mostra um mapa de vetor pMON97063.Figura 9 mostra um mapa de vetor pMON94563.Figura 10 mostra um mapa de vetor pMON97066.Figura 11 mostra um mapa de vetor pMON96401.Figura 12 mostra um mapa de vetor pMON78528.

Descrição Detalhada da Invenção

A invenção supera as limitações da técnica anterior por provermétodos e composições para criação de plantas com teor de DHA e/ou deEPA aperfeiçoado. A modificação de teor de ácido graxo de um organismotal como uma planta apresenta muitas vantagens, incluindo benefício de sa-úde e nutrição aperfeiçoados. Modificação de teor de ácido graxo pode serusado para alcançar níveis benéficos de DHA e/ou de EPA em plantas, par-tes de planta e produtos de planta, incluindo óleos de semente de plantabem como bactérias e fungos. Por exemplo, quando DHA é produzido notecido de semente de uma planta, o óleo pode ser isolado das sementes,tipicamente resultando em um óleo contendo DHA, que pode por sua vez serusado para prover características benéficas em gêneros alimentícios e ou-tros produtos.

Vários aspectos da invenção incluem métodos e composiçõespara a modificação de teor de PUFA de uma célula, por exemplo, modifica-ção do tero de PUFA de célula(s) de planta. Composições relacionadas coma invenção incluem novas seqüências de polinucleotídeos isoladas, contruc-tos de DNA e plantas e/ou partes de planta transformados por polinucleotí-deos da invenção. Células hospedeiras podem ser manipulads para expres-sar um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de transferase de fosfo-panteteínila que catalisa a panteteinilação de um sítio de ligação de fofopan-teteína de um outro polipeptídeo.

As seguinte definições são providas como um auxiliar para oentendimento dessa invenção. As frases "seqüência de DNA", "seqüência deácidos nucléicos", "molécula de ácido nucléico" e "segmento de ácido nu-cléico" referem-se a estrutura física compreendendo uma disposição ordeirade nucleotídeos. A seqüência de nucleotídeo, seqüência ou segmento deDNA podem estar contidos dentro de uma molécula de nucleotídeo maior,vetor, ou semelhantes. Além disso, a disposição ordeira de ácidos nucléicosnessas seqüências pode ser mostrada na forma de uma listagem de se-qüência, tabela, meio eletrônico ou semelhantes.

As frases "seqüência de codificação", "região de codificação","seqüência estrutural" e "seqüência de ácidos nucléicos estrutural" referem-se a totalidade ou um segmento de uma seqüência de DNA, seqüência deácidos nucléicos, molécula de ácido nucléico em que os nucleotídeos sãodispostos em uma série de tripletos que cada um forma um códon. Cadacódon codifica um aminoácido específico. Assim, a seqüência de codifica-ção, região de codificação, seqüência estrutural e seqüência de ácidos nu-cléicos estruturais codificam uma série de aminoácidos formando uma se-qüência de peptídeos, polipeptídeos ou proteínas. A seqüência de codifica-ção, região de codificação, seqüência estrutural e seqüência de ácidos nu-cléicos estrutural podem estar contidas dentro de uma molécula de ácidonucléico maior, vetor ou semelhantes. Além disso, a disposição de nucleotí-deos nessas seqüências podem ser mostradas na forma de uma listagem deseqüência, figura, tabela, meio eletrônico, ou semelhantes.

O termo "cDNA" refere-se a um DNA de filamento duplo que écomplementar a e derivado de mRNA.

"Expressão" refere-se ao processo pelo qual uma informaçãocodificada por gene é convertida em estruturas presentes e operando nacélula. Genes expressos incluem aqueles que são transcritos em RNA e en-tão traduzidos em proteína e aqueles que são transcritos em RNA mas nãotraduzidos na proteína (por exemplo, RNA de transferência e RNA ribosso-mal).

Como usado aqui, "gene" refere-se a um fragmento de ácidonucléico que expressa uma proteína específica, incluindo seqüências regu-ladoras que precedem (seqüência de não codificação 5') e seguindo a se-qüência de codificação (seqüências de não codificação 3'). "Gene nativo"refere-se a um gene como encontrado na natureza com suas próprias se-qüências reguladoras. "Gene quimérico" refere-se a qualquer gene que nãoé um gene nativo, compreendendo seqüências reguladoras e de codificaçãoque não são entradadas juntas na natureza. Correspondentemente, um genequimérico pode compreender seqüências reguladoras e seqüências de codi-ficação que são derivadas de diferentes fontes, ou seqüências reguladoras eseqüências de codificação derivadas da mesma fonte, mas dispostas de ummodo diferente do que aquela encontrada na natureza. "Gene endógeno"refere-se a um gene nativo em sua localização natural no genoma de umorganismo. Um gene "exógeno" ou "transgene" refere-se a um gene que foiintroduzido para dentro do genoma por um procedimento de transformação.Um transgene inclui DNA genômico introduzido por um procedimento detransformação (por exemplo, um DNA genômico ligado a seu promotor ativo).

Heterólogo" refere-se ao relacionamento entre duas ou mais se-qüências de proteínas ou de ácidos nucléicos que são derivadas de diferen-tes fontes. Por exemplo, um promotor é heterólogo com relação a uma se-qüência de codificação se tal combinação não for normalmente encontradana natureza. Além disso, uma seqüência de ácidos nucléicos particular podeser "heteróloga" com relação a uma célula ou um organismo em que ela éinserida se ela não naturalmente ocorrer naquela célula ou organismo particular.

"Homologia de seqüência" refere-se ao nível de similaridade en-tre duas ou mais seqüências aminoácidos ou de ácidos nucléicos em termosde percentagem de identidade posicionai. O termo homologia é também u-sado para referir-se ao conceito de propriedades funcionais similares entreácidos nucléicos ou proteínas.

"Hibridização" refere-se à capacidade de um primeiro filamentode ácido nucléico unir com um segundo filamento por meio de emparelha-mento de base de ligação de hidrogênio quando os fios de ácido nucléicotêm complementaridade de seqüência suficiente. Como usado aqui, umamolécula de ácido nucléico é dita ser o "complemento" de uma outra molécu-la de ácido nucléico se elas exibirem complementaridade completa. Comousado aqui, moléculas são ditas exibirem "complementaridade completa"quando cada nucleotídeo de uma das moléculas é complementar a um nu-cleotídeo da outra. Assim 2 fios de ácido nucléico são ditos terem comple-mentaridade suficiente quando eles hibridizam para dar um do outro comestabilidade suficiente para permiti-los permanecerem anelados entre si sobcondições apropriadas.

Como usado aqui, o termo "homologia" refere-se ao nível de si-milaridade ou por cento de identidade entre seqüências de polinucleotídeosem termos de por cento de indentidade posicinal de nucleotídeo, isto é, simi-laridade ou identidade de seqüência. Como usado aqui, o termo homologiarefere-se também ao conceito de propriedades funcionais similares entrediferentes moléculas de polinucleotídeos. Moléculas de polinucleotídeos sãohomólogas quando sob certas condições elas especificamente hibridizampara formar uma molécula dúplex. Sob essas condições, chamadas de con-dições rigorosas, uma molécula de polinucleotídeo pode ser usada comouma sonda ou iniciador para identificar outras moléculas de polinucleotídeoque partilham homologia. A frase "condições rigorosas" é funcionalmentedefinida com relação à hibridização de uma sonda de ácido nucléico paradar um ácido nucléico-alvo (isto é, para dar uma seqüência de ácidos nucléi-cos particular de interesse) pelo procedimento de hibridização específico,por exemplo, discutido em Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edi-tion Volumes 1, 2, and 3. J. F. Sambrook, D. W. Russell, and N. Irwin, ColdSpring Harbor Laboratory Press, 2000 (Sambrook e outros). Corresponden-temente seqüências de nucleotídeos providas pela invenção podem ser usa-das para sua capacidade de seletivamente formar moléculas dúplex comestiramentos complementares dos fragmentos de molécula de polinucleotí-deo. Dependendo da aplicação prevista desejaria-se empregar várias condi-ções de hibridização para alcancar graus variáveis de seletividade da sondaem relação a seqüência alvo. Para aplicações que exigem alta seletividade,tipicamente serão desejadas empregar condições rigorosas relatamente al-tas para formar os híbridos, por exemplo, serão selecionadas condições debaixa salinidade e/ou de alta temperatura, tais como providos por NaCI acerca de 0,03 M a cerca de 0,15 M a temperatura de cerca de 50°C a cercade 70°C. Uma condição altamente rigorosa, por exemplo, é para lavar o filtrode hibridização pelo menos duas vezes com tampão de lavagem altamenterigoroso (0,2 χ SSC, 0,1% de SDS, 65°C). Adicionalmente, formamida podeser usada para aumentar a severidade. Condições altamente rigorosas, por-tatno, também incluem 5X SSC, 50% de formamida e 42°C. Detecção demoléculas de polinucleotídeos via hibridização é bem-conhecida por aquelesde habilidade na técnica, e os ensinamentos das patentes U.S. nos.4.965.188 e 5.176.995 são exemplares dos métodos de análises de hibridização.

A frase "isolada" significa ter sido removida a partir do mabientenatural, independentemente de sua disposição final. Por exemplo, uma se-qüência de ácidos nucléicos "isolada" de arroz, tal como por clonagem deuma célula de arroz, permanece "isolada" quando ela é inserida para dentrodo genoma de uma célula de milho.

A frase "operavelmente ligada" refere-se à disposição espacialde duas ou mais regiões de ácido nucléico ou seqüências de ácidos nucléi-cos de modo que elas exercem seus efeitos apropriados com relação entresi. Por exemplo, uma região de promotor pode ser posicionada em relação auma seqüência de ácidos nucléicos de modo que a transcrição da seqüênciade ácido nucléico seja dirigida pela região de promotor. A região de promotore a seqüência de ácidos nucléicos são "operavelmente ligadas".

O termo "transferase de fosfopanteteínila ou PPT" refere-se auma enzima que catalisa a ativação pós-traducional de proteínas de veículo,por exemplo, um polipeptídeo de uma sintase de policetídeo, pela ligaçãocovalente da porção de 4'-fosfopanteteína de coenzima A a um resíduo deserina conservado.

O termo "sintase de policetídeo" refere-se a um complexo deenzima constituído de polipeptídeos multifuncionais que catalisam a sintasede moléculas complexas a partir de substratos simples em uma forma intera-tiva. Em Moritella marina, um complexo de PKS sintetiza DHA a partir demalonil-CoA e acetil-CoA). Por exemplo, in M. marina, o PKS contém 4 poli-peptídeos codificado pelos quadros de leitura aberta Orf5, Orf6, Orf7 e Orf8(Metz e outros, 2001), que são descritos como Orf6, Orf7, Orf8, e Orf9 napatente U.S. ns 6.140.486, respectivamente. Para ativar esse complexo, umatransferase de fosfopanteteínila é exigida para pantetenilar o polipeptídeocodificado por Orf5. O complexo de PKS de Shewanella sp. SCRC2738 sin-tetiza EPA (Metz e outros, 2001).

"A montante" e "a jusante" são termos posicionais usados comreferência à localização de uma seqüência de nucleotídeos e a direção datranscrição ou tradução de seqüências de codificação, que normalmenteprossegue na direção de 5'a 3'.

Os termos "promotor" ou "região de promotor" referem-se a umaseqüência de ácidos nucléicos, usualmente encontrada a montante (51) emrelação a uma seqüência de codificação, capaz de dirigir transcrição de umaseqüência de ácidos nucléicos em uma molécula de RNA. O promotor ouregião de promotor tipicamente provê um sítio de reconhecimento para poli-merase de RNA e os outros fatores necessários para a indicação adequadada transcrição. Como contemplado aqui, um promotor ou uma região depromotor inclui variações de promotores derivados por inserção ou deleçãode regiões reguladoras, submissão do promotor a mutagênese de sítio-dirigida ou aleatória, e semelhantes. A atividade ou poder de um promotorpode ser medido em termos das quantidades de RNA que ele produz, ou aquantidade de acúmulo de proteína em uma célula ou tecido, em relação aum promotor secundário que é similarmente medido.

A frase "seqüências de não codificação 3"' refere-se a seqüên-cias de nucleotídeos localizadas a jusante de uma seqüência de codificaçãoe incluem seqüências de reconhecimento de poliadenilação e outras se-qüências que codificam sinais reguladores capazes de afetar expressão degene ou processamento de mRNA. Esses são comumente chamados deregiões 3'-não traduzidas ou 3'-UTRs. O sinal de poliadenilação é usualmen-te caracterizado por afetar a adição de tratos de ácido poliadenílico à extre-midade 3' do precursor de mRNA. O uso de diferentes seqüências de nãocodificação 3' é exemplificado por Ingelbrecht e outros (1989).

"Seqüência líder de tradução" ou "região 5'-não traduzida" ou "51-UTR" a totalidade refere-se a uma seqüência de nucleotídeos localizada en-tre a seqüência de promotor de um gene e a seqüência de codificação. A 5'-UTR está presente na mRNA totalmente processado a montante da seqüên-cia de partida de tradução. A 5'-UTR pode afetar o processamento do trans-crito primáriio para dar mRNA, estabilidade de mRNA ou eficácia de tradu-ção. Exemplos de seqüências de líder de tradução foram descritos (Turnerand Foster, 1995).

"Transcrito de RNA" refere-se ao produto resultante de transcri-ção catalisada por polimerase de RNA de uma seqüência de DNA. Quando otranscrito de RNA é uma cópia complementar perfeita da seqüência de DNA,é chamado do transcrito primário. Uma seqüência de RNA derivada de pro-cessamento pós-traducional do transcrito primário é chamado de RNA. "RNAmensageiro" (mRNA) refere-se ao RNA que está sem íntrons e que pode sertraduzido em polipeptídeo pela célula.

"Construto de DNA" refere-se aos elementos genéticos heterólo-gos operavelmente ligados entre si formando uma molécula de DNA recom-binante e pode compreender elementos que provêem expressão de umamolécula de polinucleotídeo de DNA em uma célula hospedeira que provê-em a manutenção do contructo. Um pacote de expressão de planta compre-ende uma ligação operável de elementos genéticos que quando transferidosem uma célula de planta provê expressão de um produto de gene desejável.

"Vetor recombinante" refere-se a qualquer agente por em queum ácido nucléico de interesse é ampliado, é expresso ou é armazenado, talcomo um plasmídio, cosmídio, vírus, seqüência de replicação autônoma,fago, ou seqüência de nucleotídeos de DNA ou de RNA de filamento únicolinear, de filamento único circular, de filamento duplo linear ou de filamentoduplo circular. O vetor recombinante pode ser sintetizado ou derivado dequalquer fonte e é capaz de integração genômica ou replicação autônoma.

"Seqüência reguladora" refere-se a uma seqüência de nucleotí-deos localizada a montante (51), dentro, ou a jusante (3') com relação a umaseqüência de codificação ou um íntron, cuja presença ou ausência afeta atranscrição e expressão da seqüência de codificação.

"Substancialmente homologa" refere-se a duas seqüências quesão pelo menos 90% idêntica na seqüência, como medida pelo algoritmoCLUSTAL W em, por exemplo, DNAStar (Madison, Wl).

"Substancialmente purificada" refere-se a uma molécula separa-da de substancialmente todas as outras moléculas normalmente associadasa ela em seu estado nativo. Mais de preferência, uma molécula substancial-mente preferida é a espécie predominante presente em uma preparação.Uma molécula substancialmente purificada pode ser maior do que cerca de60% livre de preferência cerca 75% livre, mais preferivelmente, cerca de90% livre, e mais de preferência cerca de 95% livre das outras moléculas(exclusive de solvente) presentes na mistura natural. Pretende-se que a fra-se "substancialmente purificada" não inclua moléculas presentes em seuestado nativo. De preferência, as moléculas de ácido nucléico e polipeptí-deos dessa invenção são substancialmente purificadas.

O termo "transformação" refere-se à introdução de ácido nucléi-co para dentro de um hospedeiro receptor. O termo "hospedeiro" refere-se acélulas bacterianas, fungos, animais ou células de animais, plantas e semen-tes, ou quaisquer tecidos ou partes de planta incluindo células de planta,protplastos, calos, raízes, tubérculos, sementes, troncos, folhas, mudas, em-briões e pólen.

Como usado aqui, uma "planta transgênica" é uma planta tendoestavelmente introduzida para dentro de seu genoma, por exemplo, os ge-nomas nucleares ou de plastídio, um ácido nucléico exógeno.

O termo "isogênico" como um termo comparativo entre plantasou linhas de planta tendo ou carecendo de um transgene significa plantas oulinhas tendo as bases genéticas iguais ou similares, com a exceção dotransgene em questão. Por exemplo, linhas irmãs assim chamadas que re-presentam seleções fenotipicamente similares ou iguais a partir da mesmapopulação de F2 de origem são consideradas serem "isogênicas". Quando aprogênie de uma planta de transformante estável são cruzadas e retro-cruzadas com as plantas da linha de origem não transformadas para 3 a 6gerações (ou mais) usando-se a origem não transformada como a origemrecorrrente enquanto selecionando-se para o tipo (genótipo por análise demarcador molecular, fenótipo por observação de campo ou ambos) e para otransgene, a linha transgênica resultante é considerada ser altamente "iso-gênica" a sua linha de origem não transformada.

Os termos "sementes", "sementes" ("kernel") e "grão" são en-tendidos como sendo equivalentes no significado. O termo semente é fre-qüentemente usado na descrição de uma semente de uma planta de milhoou arroz. Em todas as plantas a semente é o óvulo maduro que consiste emum revestimento de semente, embrião, aleurona e um endoesperma.Ácidos nucléicos que codificam transferase de fosfopanteteínilaA invenção provê, em uma concretização, novos ácidos nucléi-cos que codificam transferases de fosfopanteteínila Moritella marina. Emcertas concretizações, os ácidos nucléicos compreendem SEQ ID NOS: 2, 4,6 ou 8. A invenção também provê métodos de uso de tais ácidos nucléicos,incluindo SEQ ID NOS: 2, 4, 6 e 8. Em uma concretização, essas moléculasde ácido nucléico são usadas no contexto dessa invenção para alterar acomposição oleosa de uma semente de uma planta.

Tal ácido nucléico pode ser ampliado usando-se cDNA, mRNAou DNA genômico como um modelo e iniciadores de oligonucleotídeo apro-priados de acordo com técnicas de ampliação de PCR® padrão. Alternativa-mente, eles podem ser sintetizados usando-se técnicas sintéticas padrão, talcomo um sintetizador de DNA automatizado. Polinucleotídeos que codificamtransferases de fosfopanteteínila desejadas podem ser identificados de umavariedade de modos. Como um exemplo, uma fonte da transferase de fosfo-panteteínila, por exemplo, uma biblioteca oriunda de Moritella, é triada comsondas enzimaticamente ou quimicamente sintetizadas detectáveis, que po-dem ser produzidas a partir do DNA, RNA ou nucleotídeos de ocorrêncianatual, ou suas misturas. Sondas podem ser enzimaticamente sintetizadas apartir de polinucleotídeos de transferases de fosfopanteteínila conhecidaspara métodos de hibridização normal ou rigorosamente reduzida. Sondas deoligonucleotídeos também podem ser usados para triar e podem ser basea-dos em seqüências de transferases de fosfopanteteínila conhecidas, incluin-do seqüências conservadas entre transferases de fosfopanteteínila conheci-das ou nas seqüências de peptídeos obtidas a partir da proteína purificadadesejada. Sondas de oligonucleotídeos com base em seqüências de amino-ácidos podem ser degenerados para incluir a degeneração de código genéti-co, ou podem ser desfavoráveis em favor dos códons preferidos do organis-mo da fonte. Oligonucleotídeos também pode ser usados como iniciadorespara PCR® a partir de mRNA de transcrito reverso de uma fonte conhecidaou suspeita; o produto de PCR® pode ser o cDNA de comprimento total oupode ser usado para gerar uma sonda para se obter o cDNA de comprimen-to total desejado. Alternativamente, uma proteína desejada pode ser total-mente seqüenciada e síntese total de uma DNA que codifica aquele polipep-tídeo realizado.

Uma vez que cDNA ou genômico desejado foi isolado, ele podeser seqüenciado por métodos conhecidos, é reconhecido na técnica que taismétodos são submetidos a erros, tal que seqüenciação múltipla da mesmaregião é rotineira e é ainda esperado levar a taxas mensuráveis de erros naseqüencia deduzida resultante, particularmente em regiões tendo domíniosrepetidos, estrutura secundária extensiva ou composições de base incomum,tais como regiões com alto teor de base de GC. Quando discrepâncias sur-gem, seqüenciação pode ser feita e pode empregar métodos especiais. Mé-todos especiais podem incluir alteração de condições de seqüenciação poruso de: diferentes temperatura; diferentes enzimas; proteínas que alteram acapacidade de oligonucleotídeos de formar estruturas de ordem superiores;nucleotídeos alterados tal como ITP ou dGTP metilado, composições de geldiferentes, por exemplo, adição de formamida; diferentes iniciadores ou ini-ciadores localizados a diferente distâncias da região do problema; ou dife-rentes modelos tais como DNAs de filamento único. Seqüenciação de mRNApode também ser empregada.

Se desejadas, as seqüências de ácidos nucléicos que codificamtransferases de fosfopanteteínila podem ser modificadas sem mudar a se-qüência de aminoácidos da proteína expressa de modo que as seqüênciassão mais receptivas a expressão em hospedeiros de planta. Uma seqüênciade codificação pode ser um DNA artificial. Um DNA artificial, como usadoaqui significa uma molécula de polinucleotídeo de nda que não é de ocor-rência natural. Moléculas de DNA artificiais podem ser projetadas por umavariedade de métodos, tais como, métodos conhecidos na técnica que são àbase de substituição do(s) códon(s) de um primeiro polinucleotídeo para cri-ar um equivalente, ou ainda um polinucleotídeo artificial de segunda gera-ção, aperfeiçoado, onde esse novo polinucleotídeo artificial é útil para ex-pressão aumentada nas plantas transgênicas. O aspecto do projeto freqüen-temente emprega seqüências de codificação isoladas de uma planta, tipo deplanta, família ou genes. Outros aspectos de projeto incluem redução da o-corrência de sinais de poliadenilação, sítios de união de íntron, ou poderesde GC e AT longos da seqüência (patente U.S. ne 5.500.365). Seqüênciasde codificação de comprimento total ou seus fragmentos podem ser produzi-dos de DNA artifical usando-se métodos conhecidos por aqueles versadosna técnica. Modificações das seqüências de nucleotídeos ou elementos re-guladores descritos aqui que mantêm as funções contempladas aqui estãodentro do escopo dessa invenção. Tais modificações incluem inserções,substituições e deleções, e especificamente substituições que refletem adegeneração do código genético.

Os inventores têm seqüências de DNA isoladas de Moritella ma-rina que produzem polipeptídeos com atividade de transferase de fosfopan-teteínila. As seqüências de codificação da transferases de fosfopanteteínilapodem ser expressas em plantas transgênicas, microorganismos ou animaispara efetuar ativação de uma sintase de policetídeo. Outros polinucleotídeosque são substancialmente idênticos aos polinucleotídeos de transferase defosfopanteteínila providos aqui, ou que codificam polipeptídeos que sãosubstancialmente idênticos aos polipeptídeos de transferase de fosfopante-teínila, também podem ser usados. "Substancialmente idêntica" refere-se auma seqüência de aminoácidos ou seqüência de ácidos nucléicos que exibeem ordem de preferência crescente 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98 ou 99%identidade com a seqüência de polipeptídeos de transferase na SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 7 ou seqüências que codificam esses polipeptídeos. Compa-rações de polipeptídeo ou polinucleotídeo podem ser realizados usando-seprograma de análise de seqüência, por exemplo, pacote de programa Se-quence Analysis da GCG Wisconsin Package (Accelrys, San Diego, CA) eMEGAIign (DNAStar, Inc., 1228 S. Park St., Madison, Wis. 53715). Tal pro-grama satisfaz seqüências similares por apontamento de grau de similarida-de ou identidade.

Construtos de DNA

A invenção provê contructos de DNA compreendendo um pro-motor heterólogo operavelmente ligado a um ácido nucléico descrito aqui. Aseleção de promotores, por exemplo, promotores que podem ser descritoscomo fortemente expressos, fracamente expressos, induzivelmente expres-sos, expresso por tecido aumentado (isto é, especialmente ou de preferênciaexpresso em um tecido), expresso por órgão aumentado (isto é, especial-mente ou de preferência expresso em um órgão) e expresso desenvolven-temente aumentado (isto é, especificamente ou de preferência expresso du-rante um estágio(s) particular de desenvolvimento), está dentro da habilida-de na técnica. Similarmente, a combinação de uma molécula de ácido nu-cléico como descrito acima com um promotor está também dentro da habili-dade na técnica (ver, por exemplo, Sambrook e outros, 1989).

Promotores para o uso com a invenção incluem, mas não sãolimitados a, promotores que funcionam em bactérias, bacteriófagos, fungosou células de planta. Promotores úteis para expressão bacteriana são ospromotores IacZ1 Sp6, T7, T5 ou glgC de E. coli. Promotores úteis para fun-gos incluem Saccharomyces cerevisiae GaM (West, e outros (1984)), Sac-charomyces pombe nmtl (Maundrell, K. (1990)), Neurospora crassa ccg-1(Freitag M and Selker EU (2005)) e Pichia methanolica AUG1 (Invitrogen).Promotores úteis para células de planta incluem o promotor de Z27 de gamazeína (vide, por exemplo, Lopes e outros (1995), promotor de oleosina de L3(a patente U.S. n9 6.433.252), promotor de PER1 de cevada (Stacey e ou-tros, 1996), promotor de 35S de CaMV (Odell e outros 1985), o CaMV 19S(Lawton e outros, 1987), nos (Ebert e outros, 1987), Adh (Walker e outros,1987), sintase de sacarose (Yang e outros, 1990), actina (Wang e outros,1992), cab (Sullivan e outros, 1989), promotor de PEPCase (Hudspeth e ou-tros, 1989), ou aqueles associados ao complexo de gene R (Chandler e ou-tros, 1989). O promotor de vírus de mosaico Figwort (FMV) (Richins e ou-tros, 1987), promotores de arcelina, E8 de tomate, patatina, ubiquitina, sinta-se de manopina (mas) e tubulina são outros exemplos de promotores úteis.

Há uma ampla variedade de seqüências de promotor de plantaque podem ser usados para dirigir expressão específica de tecido de polinu-cleotídeos que codificam transferases de fosfopanteteínila em plantas trans-gênicas. Exemplos de tais promotores incluem as regiões reguladoras 5' detais genes de napin (Kridl e outros, 1991), faseolin (Bustos, e outros, 1989),inibidor de tripsina de soja (Riggs, e outros, 1989), ACP (Baerson e outros,1993), stearoil-ACP desaturase (Slocombe e outros, 1994), subunidade a' desoja de β-conglicinina (P-Gm7S alpha', vide, por exemplo, Chen e outros,1986), Vicia faba USP (P-Vf.Usp, vide, por exemplo, SEQ ID NO: 1, 2, e 3,Pedido de Patente U.S. 10/429,516), the promotor de globulina (vide, porexemplo, Belanger and Kriz, (1991), subunidade alfa de soja de β-conglicinina (7S alpha) (Pedido de Patente U.S. 10/235.618, incorporado porreferência) e promotor de Zea mays L3 oleosina (P-Zm.L3, vide por exemplo,Hong e outros, 1997).

Promotore expressos em milho incluem promotores de genesque codificam zeínas, que são um grupo de proteínas de armazenagem emendoesperma de milho. Clones genômicos para genes de zeína foram isola-dos Pedersen e outros, 1982; Russell e outros, 1997) e os promotores oriun-dos desses clones, incluindo os genes de kD, 16 kD, 19 kD, 22 kD e 27 kD,podem ser usados. Outros promotores de expressão de semente aumentadoconhecidos como funcionando no milho e em outras plantas incluem os pro-motores para os seguintes genes: Waxy (sintase de amido ligado a grânulo),Brittle and Shrunken 2 (pirogosforilase de glicose de ADP), Shrunken 1 (sin-tase de sacarose), enzimas I e Il de ramificação, sintase de amido, enzimasde desramificação, oleosinas, glutelinas, e BetM (camada de transferênciade endoesperma basal). Outros promotores úteis na prática da invenção quesão conhecidos por aquele de habilidade na técnica são também contempla-dos pela invenção.

Além do mais, duplicações e aumentadores de transcrição deaumentados podem ser usados para aumentar para aumentar expressão deum promotor particular. Exemplos de tais aumentadores incluem, mas nãosão limitados ao íntron 1 de Adh, mas não são limitados ao íntron 1 de Adh(Callis e outros, 1987), um íntron de actina de arroz (McEIroy e outros, 1991;U.S. Patent No. 5,641,876), sucrose synthase intron (Vasil e outros, 1989),um íntron de HSP70 de milho (também chamado de Zm.DnaK) (a patenteU.S. ne 5.424.412, Brown e outros) um elemento TMV omega (Gallie e ou-tros, 1999), o aumentado de 35S de CaMV 35S (as patentes U.S. nos5.359.142 & 5.196.525, McPherson e outros) ou um aumentador de sintasede octopina (a patente U.S. ne 5.290.924, Last e outros). Uma vez que a se-qüência de DNA entre sítio de iniciação de transcrição e o início da seqüên-cia de codificação, isto é, a seqüência líder não traduzida, pode influenciarexpressão de gene, pode-se também desejar empregar uma seqüência líderparticular. Qualquer seqüência líder disponível por aquele de habilidade natécnica pode ser empregada. Seqüências líder preferidas dirigem ótimos ní-veis de expressão do gene ligado, por exemplo, por aumento ou manuten-ção de estabailidade de mRNA e/ou por prevenção de iniciação inadequadade tradução (Joshi, 1987). A escolha de tais seqüências está na discriçãopor aqueles de habilidade na técnica.

Contrutos de DNA da invenção podem incluir uma seqüênciapróxima a extremidade 3' do pacote que age como um sinal para terminartranscrição a partir de um ácido nucléico heterólogo e que dirige poliadenila-ção do mRNA resultante. Esses são comumente chamados de regiões nãotraduzidas 3'ou 3'UTRs. Alguns elementos 3' que pode agir como sinais determinação de transcrição incluem aqueles a partir do gene de sintase denopalina (nos) de Agrobacterium tumefaciens (Bevan e outros, 1983), umaregião não traduzida 3' de napina (Kridl e outros, 1991), uma região não tra-duzida 3' de globulina (Belanger and Kriz1 1991), região não traduzida 3' dogene de Adr12 de soja (auxin regulado para baixo) (Wang e outros, Publica-ção de PCT WO 200250295) ou um de gene de zeína, tal como Z27 (Lopese outros, 1995). Outros elementos reguladores 3' conhecidos na técnicatambém podem ser usados nos vetores da invenção.

A molécula de ácido nucléico como descrito aqui pode ser clo-nado em qualquer vetor adequado e pode ser usada para transformar outransfectar qualquer hospedeiro adequado. A seleção de vetores e métodospara construi-los são comumente conhecidos pela técnica e são descritosem referências técnicas gerais (vide, em geral "Recombinant DNA PartD"(1987). O vetor de preferência compreenderá seqüências reguladoras, taiscomo transcrição e iniciação de tradução e códons de terminação, que sãoespecíficos para o tipo de hospedeiro (por exemplo, bactéria, fungo ou plan-ta) em que o vetor deve ser introduzido, quando apropriado e levar em contaa consideração se o vetor é DNA ou RNA.

Vetores que são circulares ou lineares podem ser preparadospara conter uma seqüência de ácido nucléico inteira como como descritaacima ou uma sua porção ligada a um sistema de replicação funcional emuma célula hospedeira procariótica ou eucariótica. Sistemas de replicaçãopodem ser derivados de CoIEI, 2 ιτιμ de plasmídio, λ fago, fago de filamentof1, espécie de Agrobacterium (por exemplo, A. tumefacins e A. rhizogenes),e semelhantes.

Além do sistema de replicação e a seqüência de ácidos nucléi-cos inserida, o vetor pode incluir um ou mais genes marcadores que permi-tem a seleção de hospedeiros transformados ou trasfectados. Genes marca-dores incluem resistência a biocida, tais como resistência a antibióticos, me-tais pesados, herbicidas, etc., complementação em um hospedeiro auxotrófi-co para prover prototrofia e semelhantes.

A invenção provê células hospedeiras compreendendo uma mo-lécula de ácido nucléico descrita aqui, opcionalmente na forma de um vetor.Hospedeiros adequados incluem células fúngicas, bacterianas, e de planta,incluindo Escherichia coli, Bacillus subtilis, Agrobacterium tumefaciens, Sac-charomyces cerevisiae e Neurospora crassa. Hospedeiros de E. coli incluemTB-1, TG-2, DH5a, XL-BIue MRF' (Stratagene, Austin, TX), SA2821, Y1090e TG02. Células de planta incluem, mas não são limitadas a, soja, Brassicacampestris, canola, colza de semente olheosa, crambe, mostarda, sementede rícino, amendoim, gergelim, rama de algodão, linhaça, alçafrão, óleo depalma, linho, grirassol, alfalfa, milho, trigo, cevada, aveia, centeio, milho mi-údo, sorgo e arroz.

Expressão em uma célula hospedeira pode ser realizada emuma forma transitória ou estável. Expressão transitória pode ocorrer de con-tructos induzidos que contêm sinais de expressão funcionais na célula hos-pedeira, mas que contructos não replicam e protamente se integram na célu-la hospedeira, ou onde a célula hospedeira não está se proliferando. Ex-pressão transitória também pode ser realizada por indução da atividade depromotor regulável operavelmente ligado ao gene de interesse, embora taissistemas induzíveis freqüentemente exibam um baixo nível basal de expres-são. Expressão adequada pode ser alcançada por introdução de um contruc-to que pode integrar no genoma hospedeiro ou que autonomamente se re-plica na célula hospedeira. Tal expressão do gene de interesse pode ser se-Iecinado para através do uso de um marcador selecionável localizado na outransfectado com o contructo de expressão, seguido para células que ex-pressão o marcador. Quando expressão estável resulta da integração, inte-gração de contructos pode ocorrer aleatoriamente dentro do geonma hospe-deiro ou pode ser direcionada através do uso de regiões contendo contruc-tos de homologia com o genoma hospedeiro suficiente para direcionar re-combinação com o local de hospedeiro. Onde contructos são direcionadospara um local endógeno, todas ou algumas das regiões reguladoras tradu-cionais e transcritivas podem ser providas pelo local endógeno.

Expressão em uma célula hospedeira pode envolver técnicas defermentação conhecidas por aquele versado na técnica. A célula hospedeirafermentada pode ser uma procariote, Escherichia coli, ou uma eucariote, talcomo a levedura Saccharomyces cerevisiae, ou Neurospora crassa, um fun-go filamentaso. Exemplos de produção de PUFA por fermentação incluem (apatente U.S. 6.319.698) e Thraustrochytriales (a patente U.S. 6.451.567).

É contemplado que mais do que um gene pode ser introduzido epropagado em uma célula hospedeira através do uso de vetores de expres-são integrados ou epissomais. Onde dois ou mais genes são expressos apartir de vetores de replicação separados, se é desejável que cada vetortenha um meio diferente de replicação. Cada contructo introduzido, se inte-grado ou não, teria um modo diferente de seleção e careceria de homologiapara os outros contructos para manter expressão estável e e prevenir rea-grupamento de elementos entre contructos. Escolhas judiciosas de regiõesreguladoras, meio de seleção e método de propagação do contructo introdu-zido podem ser experimentalmente determinadas de modo que que todos ospolinucleotídeos introduzidos são expressos no níveis necessários para pro-ver a síntese dos produtos desejados.Polipeptídeos

A invenção provê transferases de fosfopanteteínila codificadaspor moléculas de ácido nucléico descritas aqui. Sintase de plicetídeo sãocomplexos de enzimas constituídas de polipeptídeos multifuncionais quecatalisam a síntese de moléculas complexas a partir de substratos simplesem uma forma interativa. Em Moritella marina, um complexo de PKS sinteti-sa DHA a partir de malonil-CoA e acetil-CoA. Para ativar esse complexo,uma transferase de fosfopanteteínila é necessária. O polipeptídeo de prefe-rência compreende uma extremidade de amino e uma extremidade de car-boxila. O polipeptídeo pode compreender D-aminoácido, L-aminoácidos ouuma mistura de D- e L-aminoácidos.

Alterações da seqüência de aminoácidos nativa para produzirpolipeptídeos variantes podem ser preparadas por uma variedade de meiosconhecidos por aqueles normalmente versados na técnica. Por exemplo,substituições de aminoácidos podem ser convenientemente introduzidas pa-ra dentro dos polipeptídeos por mudança da seqüência da molécula de ácidonucléico na hora da síntese. Mutações específicas de sítio podem tambémser introduzidas por ligação em um vetor de expressão de um oligonucleotí-deo sintetizado compreendendo a seqüência modificada. Alternativamente,procedimentos de mutagênese específicos de sítio, dirigidos por oligonucleo-tídeo podem ser usados, tais como descritos em in Walder e outros (1986);Bauer e outros (1985); e as patentes U.S. nos. 4.518.584 e 4.737.462.

Está dentro da habilidade do técnico comum selecionar aminoá-cidos de ocorrência natural e sintéticos que efetuam substituições conserva-doras e neutras para quaisquer aminoácidos de ocorrência natural. O técnicanormalmente versado desejavelmente considerará o contexto em que qual-quer substituição de aminoácido é feita, além da consideração da hidrofobi-cidade ou polaridade da cadeia lateral, o tamanho geral da cadeia lateral e ovalor de pK de cadeias laterais com caráter ácido ou básico sob condiçõesfisiológicas. Por exemplo, lisina, arginina, e histidina são freqüentementeadequadas entre si, e mais freqüentemente arginina e histidina. Como étambém conhecido na técnica, isso é porque todos os três aminoácidos têmcadeias laterais básicas, enquanto que o valor de pK para as cadeias late-rais de Iisina e arginina são muito mais próximas entre si (cerca de 10 e 12)do que histidina (cerca de 6). Similarmente, glicina, alanina, valina, leucina,ácido isoleucina são freqüentemente adequadamente substituídos entre si,com a condição de que a glicina não seja usada freqüentemente como subs-tituta dos outros membros do grupo. Isso é, porque cada um desses amino-ácidos é relativamente hidrofóbico quando incorporado em um polipeptídeo,mas glicinas carecem de um alfa-carbono que permite os ângulos phi e pside rotação (em volta do alfa-carbono) tanto liberada conformacional que re-síduos de glicinila podem disparar mudanças em conformação ou em estru-tura secundárias que não freqüentemente ocorrem quando os outros amino-ácido são substituídos entre si. Outros grupos de aminoácidos freqüente-mente adequadamente são usados como substitutos entre si incluem, masnão são limitados ao grupo que consiste em ácidos glutâmico ou aspártico; ogrupo que consiste em fenilalanina, tirosina e triptofano; e o grupo que con-siste em serina, treonina e, opcionalmente, tirosina. Adicionalmente, o técni-ca normalmente versado pode prontamente agrupar aminoácidos sintéticoscom aminoácidos de ocorrência natural.

Se desejado, os polipeptídeos podem ser modificados, por e-xemplo, por glicosilação, amidação, carboxilação ou fosforilação ou pela cri-ação de um sais de adição de ácido, amidas, ésteres, em particular ésteresC-terminais, e derivados de N-acila dos polipeptídeos da invenção. Os poli-peptídeos podem também ser modificados para criar derivados de proteínapor formação de complexos covalentes ou não covalentes com outras por-ções de acordo com os métodos conhecidos na técnica. Complexos covalen-temente ligados podem ser preparados por ligação das porções químicas agrupos funcionais nas cadeias laterais de aminoácidos compreendendo ospolipeptídeos, ou no terminal-C ou -N. Desejavelmente, tais modificações econjugações não adversamente afetam a atividade dos polipeptídeos (e su-as variantes). Enquanto tais modificações e conjugações podem ter maior oumenor atividade, a atividade desejavelmente não é negada e é característicado polipeptídeo inalterado.Os polipeptídeos (e fragmentos, variantes e proteínas de fusão)podem ser preparados por qualquer uma de numerosas técnicas. O polipep-tídeo pode ser isolado ou substancialmente purificado de uma fonte de ocor-rência natural ou de uma fonte recombinante. Por exemplo, no caso de pro-teínas recombinantes, um fragmento de DNA que codifica uma proteína de-sejada pode ser subclonado em um vetor apropriado usand-se técnicas ge-néticas moleculares bem-conhecidas (vide, por exemplo, Maniatis e outros,1989) e outras referências citadas aqui sob "EXEMPLOS"). O fragmento po-de ser transcrito e a proteína subseqüentemente traduzida in vitro. Kits co-mercialmente disponíveis também podem ser empregados (por exemplo, taiscomo fabricados por Clontech, Mountain View, CA; Amersham Life Sciences,Inc., Arlington Heights, IL; Invitrogen, Carlsbad, CA e semelhantes). A rea-ção de cadeia de polimerase opcionalmente pode ser empregada na mani-pulação de ácidos nucléicos.

Polipeptídeos podem ser sintetizados usando-se sintetizador depeptídeo automatizado de acordo com os métodos conhecidos na técnica.Alternativamente, o polipeptídeo (e fragmentos, variantes e proteínas de fu-são) pode ser sintetizado usando-se técnicas de sintetização de peptídeopadrão bem-conhecidas por aqueles de habilidade normal na técnica (vide,por exemplo, Merrifield, 1963; Barany e outros, 1987; e a patente U.S.5.424.398). Se desejado, isso pode ser feito usando-se um sintetizador depeptídeo automatizado. Remoção do grupos de bloqueamento de aminoáci-do de t-butiloxicarbonila (t-BOC) ou 9-fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc) e se-paração da proteína da resina pode ser realizada por, por exemplo, trata-mento com ácido a temperatura reduzida. A mistura contendo polipeptídeoentão pode ser extraída, por exemplo, com éter de dietila, para removercompostos orgânicos de não peptídicos, e a proteína sintetizada pode serextraída a partir do pó de resina (por exemplo, com cerca de 25% p/v de áci-do acético). Após a síntese do polipeptídeo, outra purificação (por exemplo,usando-se HPLC) opcionalmente pode ser feita a fim de eliminar quaisquerproteínas, polipeptídeos, peptídeos ou aminoácidos livres incompletos. Aná-lise de aminoácido e/ou de HPLC podem ser realizadas no polipeptídeo sin-tetizado para validar sua identidade. Para outras aplicações de acordo com ainvenção, pode ser de preferência para produzir o polipeptídeo como partede uma proteína de fusão maior, ou por conjugação química, ou através demeio genético conhecido na técnica. A esse respeito, essa invenção tambémprovê uma proteína de fusão compreendendo o polipeptídeo (ou seu frag-mento) ou sua variante e um ou mais outros polipeptídeos/proteína(s) tendoquaisquer propriedades ou funções efetoras desejadas.

Ensaios para a produção e identificação de proteínas específicassão com basem nas variações de propriedades físico-químicas, estruturais,funcionais ou outras propriedades das proteínas. Propriedades uicamentefísico-químicas ou estruturais permite que as proteína sejam separadas eidentificadas por procedimentos eletroforéticos, tal como focalização isoelé-trica ou eletroforese de gel de densaturação ou nativa, ou por técnicas cro-matográficas tal como cromatografia de troca de íons ou de exclusão por gel.

As únicas estruturas de proteínas individuais oferecem oportunidades para ouso de anticorpos específicos para detectar sua preseça em formatos talcomo um ensaio de ELISA. Combinações de abordaens podem ser usadaspara alcançar especificidade ainda maior tal como westem blotting em queanticorpos são usados para localizar produtos de gene individuais que foramseparados pelas técnicas de eletroforese. Técnicas adicionais podem tam-bém ser usadas para confirmar absolutamente a identidade do produto deinteresse tal como avaliação por seqüenciação de aminoácido após purifica-ção. Embora esses estão entre os mais comuns, outros procedimentos po-dem também ser usados.

Procedimentos de ensaio podem identificar a expressão de pro-teínas por sua funcionalidade, particularmente onde a proteína expressa emuma enzima capaz de catalisar reações químicas que envolvem produtos esubstratos específicos. Por exemplo, em extratos de planta essas reaçõespodem ser medidas por provisão e quantificação da perda de substratos oua geração de produtos das reações por procedimentos físicos e/ou químicos.

Em muitos casos, a expressão de um produto de gene é deter-minada por avaliação dos resultados fenotípicos de sua expressão. Tais ava-liações podem ser simples como observações visuais, ou podem envolverensaios. Tais ensaios podem tomar muitas formas, tais como análise de mu-danças na composição química, morfologia, ou propriedades fisiológicas daplanta. Propriedades de composição química, morfológicas ou fisiológicas daplanta. Composição química pode ser alterada por expressão de genes quecodificam enzimas ou proteínas de armazenagem que mudam composiçãode aminoácido e essas mudanças podem ser detectadas por análise de a-minoácido, ou por enzimas que mudam quantidade de amido, que pode seranalisada por espectrometria de refletância de infravermelho ou por enzimasque mudam composição oleosa, que pode ser detectada por cromatografiagasosa. Mudanças morfológicas podem incluir estatura maior ou talos maisgrossos.

As moléculas de ácido nucléico, contructos de DNA e polipeptí-deos dessa invenção podem ser usados em métodos agrícolas e várias en-saios de triagem. Por exemplo, uma molécula de ácido nucléico pode serusada para expressar transferase de fosfopanteteínila via um vetor em umacélula hospedeira, para detectar transcritos de mRNA que codifica transfera-se de fosfopanteteínila em uma amostra biológica, para detectar uma altera-ção genética em um gene que codifica transferase de fosfopanteteínila viaSouthern blot, para suprimir transferase de fosfopanteteínilam ou regularpara cima transferase de fosfopanteteínila. Os polipeptídeos podem ser usa-dos para compensar deficiências em transferase de fosfopanteteínila ou paraa presença de um transferase de fosfopanteteínila mutada tendo atividadereduzida ou nenhuma atividade em uma planta, ou para tratar níveis exces-sivos de substratos, se diretos ou indiretos, para transferase de fosfopantete-ínila em uma planta. Alternativamente, os polipeptídeos podem ser usadospara triar agentes quanto a capacidade de modular sua atividade. Os anti-corpos podem ser usados para detectar e isolar os polipeptídeos respectivosbem como diminuir a disponibilidade de tais polipeptídeos in vivo.

Transformação de Planta

Em uma concretização preferida da invenção, uma planta trans-gência que expressa a proteína ou proteínas desejadas é produzida. Váriosmétodos para a introdução de uma seqüência de polinucleotídeos desejadoque codifica a proteína desejada em células de planta são conhecidos natécnica, incluindo: (1) métodos físicos tais como microinjeção, eletroporaçãoe fornecimento mediado por micropartículas (tecnologia de pistola de geneou biolística); (2) fornecimento mediado por vírus; e (3) transformação medi-ada por Agrobacterium.

Os métodos mais comumente usados para a transformação decélulas de planta são processo de transferência de DNA mediado por Agro-bacterium e o processo mediado por bombardeamento de partículas ou bio-lística. Tipicamente, transformação nuclear é desejado mas one é desejávelespecificamente transformar plastídios, tais como cloroplastos ou amiloplas-tos, plastídios de planta podem ser transformadas utilizando-se um forneci-mento mediado por micropartículas dos polinucleotídeos desejados.

Transformação mediada por Agrobacterium é alcançada atravésdo uso de uma bactéria de solo geneticamente modificado que pertence aogênero Agrobacterium. Numerosas cepas de tipo selvagem e desempara-Ihadas de Agrobacterium tumefaciens e Agrobacterium rhizogenes que abri-gam plasmídios de Ti ou de Ri podem ser usadas para a transferência degene em plantas. Transferência de gene é feita via a transferência de umDNA específico conhecido como "T-DNA" que pode ser em geral engenhei-rado para portar qualquer pedaço desejado de DNA em muitas espécies deplanta, como anteriormente elaborado, por exemplo, na patente U.S.6.265.638 por Bidney e outros, cuja revelação é aqui incorporada aqui porreferência.

Transformação genética mediada por Agrobacterium de plantasenvolve várias etapas. A primeira etapa, em que as células de planta e A-grobacterium virulenta são primeiramente colocadas em contato entre si, éem geral chamada "inoculação". Inoculação é de preferência realizada poralgum método de lesão para alguma das células de planta, que libera consti-tuintes celulares de planta, tais como álcool coumarílico, sinapinato (que éreduzida a acetossirigona), álcool sinapílico, e álcool coniferílico, que ativamfatores de virulência na Agrobacterium. Após a inoculação células/tecidos deplanta e Agrobacterium são permitidos que se desenvolvam juntos por umperíodo de várias horas até vários dias ou mais sob condições adequadaspara o crescimento de transferência de T-DNA. Essa etapa é chamda "co-cultura". Após a co-cultura e fornecimento de T-DNA as células de plantasão tratadas com agentes bacteriocidas ou bacterioestáticos para matar aAgrobacterium que resta em contato com o explante e/ou no recpiente con-tendo o explante. Se isso é feito na ausência de quaisquer agentes seletivospara promover crescimento preferencial de células de planta transgênciasversus não transgências, então isso é tipicamente chamado da etapa de "a-traso". Se feito na presença de uma pressão seletiva que favorece célulasde planta transgênicas, então é chamado de uma etapa de "seleção". Quan-do um "atraso" é usado, ele é tipicamente seguido por uma ou mais sériesde "seleção".'

Com relação a bombardeamento de micropartículas (a patenteU.S. 5.550.318 (Adams e outros); a patente U.S. 5.538.880 (Lundquist e ou-tros), a patente U.S. 5.610.042 (Chang e outros); e PCT WO 95/06128 (A-dams e outros); cada um das quais é especificamente incorporada aqui porreferência em sua totalidade), partículas microscópicas são revestidas comácidos nucléicos e são fornecidas em células por uma força de impulsiona-mento. Partículas exemplares incluem aquelas constituídas de tungstênio,platina e de preferência ouro.

Uma concretização ilustrativa de um método para o fornecimentode DNA em células planta pela aceleração é o sistema de fornecimento departículas biolísticas (BioRad, Hercules, CA), que pode ser usado para im-pulsionar partículas revestidas com DNA ou células através de uma peneira,tal como aço inoxidável ou peneira Nytex, sobre uma superfície de filtragemrecoberta com células de planta monocot cultivadas em suspensão.

Técnicas de bombardeamento de partículas são amplamenteaplicáveis, e podem ser usadas para transformar virtualmente quaisquer es-pécies de planta. Exemplos de espécies de planta que foram transformadospelo bombardeamento de micropartículas incluem espécie monocot tais co-mo milho (Publicação Internacional n9 WO 95/06128 (Adams e outros)), ce-vada, trigo (a patente U.S. 5.563.055 (Townsend e outros) incorporadas aquipor referência em sua totalidade), arroz, aveia, centeio, cana-de-açúcar, esorgo; bem como numerosas dicots incluindo tabaco, soja (a patente U.S.5.322.783 (Tomes e outros), incorporada aqui por referência em sua totali-dade), girassol, amendoim, algodão, tomate e legume em geral (a patenteU.S. 5.563.055 (Townsend e outros) incorporada aqui por referência em suatotalidade).

Para selecionar ou classificar quanto a células de planta trans-formadas apesar de metodologia de transformação, o DNA introduzido paradentro da célula contém um gene que funciona em um tecido de planta re-generável para produzir um composto que confere no tecido de planta resis-tência a um composto de outra maneira tóxico. Genes de interesse para ouso como marcador selecionável, triável, ou classificável incluiria mas sãoIimitantes a β-glucuronidase (GUS), proteína fluorescente verde (GFP), Iuci-ferase (LUX), genes de tolerância a antibiótico ou herbicida. Exemplos degenes de resistência a antibiótico incluem as penicilinas, canamicina (e ne-omicina, G418, bleomicin)a; metotrexato (e trimetoprim); cloranfenicol; ca-namicina e tetraciclina. Moléculas de polinucleotídeo que codificam proteínasenvolvidas em tolerância a herbicida são conhecidas na técnica, e incluem,mas não são limitadas a uma molécula de polinucleotídeo que codifica sinta-se de 5-enolpiruvilshicimato-3-fosfato (EPSPS) descrito na patente U.S.5.627.061 (Barry, e outros), na patente U.S. 5.633.435 (Barry, e outros), e napatente U.S. 6.040.497 (Spencer, e outros) e aroA descrito na patente U.S.5.094.945 (Cornai) para a tolerância a glifosato; uma molécula de polinucleo-tídeo que codifica bromoxinil nitrilase (Bxn) descrito na patente U.S.4.810.648 (Duerrschnabel, e outros) para a tolerância a Bromoxinila; umamolécula de polinucleotídeo que codifica fitoeno desaturase (CcrtI) descritoem Misawa e outros, (1993); Misawa e outros, (1994) para a tolerância anorflurazon; uma molécula de polinucleotídeo que codifica de sintase de áci-do acetoidróxi (AHAS, aka ALS) descrito in Sathasiivan e outros (1990) paratolerância a herbicidas de sulfoniluréia; tanto o gene de pat descrito em Wo-hlleben, e outros, (1988) quanto gene de bar descrito em DeBIock, e outros(1987), cada um dos quais provê tolerância a glifosinato e bialafos.

A regeneração, desenvolvimento de cultivo de plantas a partir devários explantes transformados são bem documentados na técnica. Essaregeneração e processo de crescimento tipicamente incluem as etapas deseleção de células transformadas e cultivo daquelas células individualizadasatravés dos estágios usuais de desenvolvimento embriônico através do es-tágio de plantinha enraizada. Sementes e embriões transgênicos são simi-larmente regenerados. Os brotos enraizados transgênicos resultantes sãoaqui em seguida plantados em um meio de crescimento de planta apropiadotal como solo. Células que sobrevivem a exposição ao agente seletivo, oucélulas que foram classificadas positivas em um ensaio de triagem, podemser cultivadas em meio que suporta regeneração de plantas. Plantinhas emdesenvolvimento são transferidas para mistura de crescimento de plantamenos solo, e são endurecidas, antes da transferência para uma estufa oucâmara de crescimento para a maturação.

Essa invenção pode ser usada com qualquer tecido ou célulatransformável. Por transformável como usado aqui quer se dizer uma célulaou um tecido que é capaz de outra propagação para dar origem a uma plan-ta. Aqueles de habilidade na técnica reconhecem que numerosas células outecidos de planta sejam transformáveis em que depois da inserção de DNAexógeno e condições de cultura apropriadas, os tecidos ou células de plantapodem transformar em uma planta diferenciada. Tecido adequado para es-sas finalidades pode incluir mas não é limitado a embriões imaturos, tecidoscutellar, culturas de célula de suspensão, inflorescência imatura, meristemade broto, explantes nodais, tecido de calo, tecido hipocotila, cotiledons, raí-zes e folhas. Os Tomes e outros patente '783, citada acima, descreve ummétodo de tratamento com uma citocinina seguido por incubação por umperíodo suficiente para permitir células indiferenciadas em tecido de nó decotiledonário para diferenciar em células meristemáticas e para permitir queas células entrem nas fases entre G1 e as fases de divisão de desenvolvi-mento, que é afirmado para aperfeiçoar suscetibilidade para a transformação.Qualquer meio de cultura de planta adequado pode ser usado.Meios adequados incluem mas não são limitados a meio à base de MS (Mu-rashige and Skoog, 1962) ou meio à base de N6 (Chu e outros, 1975) su-plementado com reguladores de crescimento de planta adicionais incluindomas não limitado a auxinas, citocininas, ABA, e giberelinas. Aqueles de habi-lidade na técnica são familiares com uma variedade de meio de cultura detecido, que quando suplementado apropriadamente, suportam desenvolvi-mento e crescimento de planta e são adequados para a transformação e aregeneração de planta. Esses meios de cultura de tecido podem ou ser ad-quiridos como uma preparação comercial ou preparados ou modificados ha-bituais. Aqueles de habilidade na técnica estão cientes que meios e supl-mentos de meio tais como nutrientes ou reguladores de crescimento para ouso na transformação e regeneração e outras condições de cultura tais co-mo intensidade de luz durante a incubação, pH, e temperaturas de incuba-ção que podem ser otimizadas para a variedade particular de interesse.

Depois que um contructo de DNA é estavelmente incorporadoem plantas transgênicas e e é confirmado ser operável, ele pode ser introdu-zido em outras plantas da mesma ou de uma outra espécie sexualmentecompatível por cruzamento sexual. Qualquer numerosas técnicas de repro-dução padrão podem ser usadas, dependendo da espécie a ser cruzada.Portanto, a invenção atual não apenas inclui uma planta diretamente trans-formada ou regenerada a partir de células que foram transformadas de acor-do com a invenção atual, mas também a progênie de tais plantas. Como u-sado aqui o termo "progênie" significa a prole de qualquer geração de umaplanta de origem preparada de acordo com a presente invenção, em que aprogênie compreende um contructo de DNA selecionado preparado de acor-do com a invenção. "Cruzamento" de uma planta para prover uma linha deplanta tendo um ou mais trangenes ou alelos adicionados em relação a umalinha de planta de partida, como descrito aqui, é definido como as técnicasque resultam em uma seqüência particular sendo introduzida para dentro deuma linha de planta por cruzamento de uma linha de partida com linha deplanta doadora que compreende um transgene ou um alelo da invenção.Para alcançar isso poderia, por exemplo, realizar as seguintes etapas: (a)sementes de planta da primeira (linha de partida) e da segunda (linha deplanta de doador que compreende um alelo ou transgene desejado) plantasde origem; (b) desenvoler as sementes da primeira e segunda plantas deorigem em plantas que portam flores; (c) polinizar um forma a partir da pri-meira planta de origem com pólen oriundo da segunda planta de origem; e(d) semente coletadas produzidas na planta de origem que portam as floresfertilizadas.

Retro-cruzamento é aqui definido como o processo incluindo asetapas de: (a) cruzamento de uma planta em um primeiro genótipo contendoum gene desejado, elemento ou seqüência de DNA para dar uma planta deum segundo genótipo que carece do dito gene desejado, seqüência ou el-mento DNA; (b) seleção de uma ou mais planta de progênie contendo o ge-ne desejado; seqüência o elemento de DNA; (c) cruzamento da planta deprogênie para dar o segundo genótipo; e (d) etapas de repetição (b) e (c)para a finalidade de trasnferência de uma seqüência de DNA desejada deuma planta de um primeiro genótico para uma planta de segundo genótipo.

Introgressão de um elemento de DNA para dentro de um genóti-po de planta é definida como o resulado do processo de conversão por retro-cruzamento. Um genótipo de planta em que uma seqüência de DNA foi in-trogressada pode ser chamada de um genótipo convertido por retro-cruzamento, linhagem, congênto ou híbrido. Similarmente um genótipo deplanta que carece da seqüência de DNA desejada pode ser chamado de umgenótipo não convertido, linhagem, congênito ou híbrido.Sementes, farinha grossa, óleo e produtos compreendendo sementes, fari-nha grossa e óleo

Essa invenção também provê um recipiente de acima de cercade 1000, mais de preferência cerca de 20.000, e ainda mais de preferênciacerca de 40.000 de sementes onde acima de cerca de 10%, mais de prefe-rência cerca de 25%, mais de preferência cerca de 50%, e ainda mais depreferência cerca de 75% ou mais de preferência cerca de 90% das semen-tes são sementes derivados de uma planta dessa invenção.Essa invenção também provê um recipiente de acima de cercade 10 kg, mais de preferência cerca de 25 kg, e ainda mais de preferênciacerca de 50 kg de sementes onde acima de cerca de 10%, mais de prefe-rência cerca de 25%, com mais preferência cerca de 50%, e ainda mais depreferência cerca de 75% ou mais de preferência cerca de 90% das semen-tes são sementes derivadas de uma planta dessa invenção.

Qualquer uma das plantas ou suas partes dessa invenção podeser coletadas e, opcionalmente processadas para produzir uma preparaçãooleosa, farinha grossa ou alimentícia. Uma parte de planta particularmentepreferida para essa finalidade é grão colhido, mas outras partes de plantapodem ser colhidas e são usadas para forragem ou silagem. Métodos paraproduzir preparações alimentícias, farinha grossa e oleosas são conhecidasna técnica. Vide, por exemplo, as patentes U.S. 4.957.748; 5.100.679;5.219.596; 5.936.069; 6.005.076; 6.146.669; e 6.156.227. O grão ou farinhagrossa dessa invenção podem ser combinados com outros grãos ou farinhasgrossas.

Métodos

A presente invenção provê um método para a provisão de plan-tas transgênicas com um teor aumentado de DHA ou EPA. Esse métodoinclui, por exemplo, introdução do DNA que codifica transferase de fosfopan-teteínila bem como um complexo de PKS para dentro das células de planta eplantas de regeneração com teor de DHA ou de EPA aumentado a partir dascélulas transgênicas.

Mais especificamente, a invenção provê um método de produçãode um óleo de planta contendo DHA ou EPA compreendendo as etapas de(a) desenvolvimento de uma planta compreendendo a célula hospedeiratransformada com um contructo de DNA compreendendo um promotor hete-rólogo operavelmente ligado a uma molécula de DNA que codifica um poli-peptídeo tendo atividade de transferase de fosfopanteteínila, em que a mo-lécula de DNA é selecionada do grupo que consiste em: um polinucleotídeoque hibridiza para dar SEQ. ID NO: 6 ou SEQ. ID NO: 8, ou um seu com-plemento, sob condições de 5X SSC, 50% de formamida e 42°C; um polinu-cleotídeo que codifica a seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 5 ouSEQ ID NO: 7; um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo com pelomenos 75% de identidade de seqüência com uma seqüência de polipeptí-deos de SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7; um polinucleotídeo que codifica opolipeptídeo de SEQ ID NO: 1; e um polinucleotídeo que codifica o polipeptí-deo da SEQ ID NO: 3 em que a célula hospedeira ulteriormente compreendesintase de policetídeo; (b) produção de semente; e (c) processamento dasemente para se obter um óleo.

A presente invenção ulteriormente provê um método de provisãode plantas transgênicas que podem conter níveis elevados de DHA ou deEPA, em que os ditos elevados são maiores do que os níveis encontradosem plantas não transformadas.

Para a suplementação de dieta, os PUFAs purificados, plantasou partes de planta transformadas, ou seus derivados, podem ser incorpora-dos em óleos, gorduras ou margarinas de cozinhar formulados de modo queno uso normal o receptor recebesse a quantidade desejada. Os PUFAs po-dem também ser incorporados em suplementos nutricionais, outros produtosalimentícios ou fórmulas infantis, e podem encontrar uso como agentes anti-inflamatórios ou de diminuição de colesterol.

Como usado aqui, "composição comestível" é definida comocomposições que podem ser ingeridas por um mamífero tais como gênerosalimentícios, substâncias nutricinais e composições farmacêuticas. Comousado aqui "gêneros alimentícios" referem-se a substâncias que podem serusadas ou preparadas para o uso como alimento para um mamífero e inclu-em substâncias que podem ser usadas na preparação de alimento {tais co-mo óleos de fritura) ou aditivos alimentícios. Por exemplo, gêneros alimentí-cios incluem animais usados para o consumo humano ou qualquer produto apartir do mesmo, tais como, por exemplo, ovos. Gêneros alimentícios inclu-em mas não são limitados a bebidas (por exemplo, refrigerantes, bebidascarbonatadas, bebidas prontas para misturar), alimentos introduzidos (porexemplo, frutas e vegetais), molho, condimentos, molhos de salada, sucosde fruta, xaropes, sobremesas (por exemplo, pudim, gelatina, glaces, e re-cheios, produtos de padaria, sobremesas congeladas, tais como sorvetes esorvetes cuja base é água), produtos congelados moles (por exemplo, cre-mes congelados moles, sorvetes congelados moles e iogurtes, coberturascongeladas moles tais como coberturas batidas de laticínios ou de não Iati-cínios), óleos e produtos emulsificados (por exemplo, gordura, margarina,maionese, manteiga, óleo de cozinhar, e molhos de salada) e alimentos deumidade intermediária (por exemplo, arroz e ração de cachorro).

Além do mais, composições comestíveis descritas aqui podemtambém ser ingeridas como um aditivo ou suplemento contido em alimentose bebidas. Essas formulações juntamente com uma substância nutricionaltais como várias vitaminas e minerais e incorporadas em composições subs-tancialmente líquidas tais como bebidas de nutriente, leites de soja e sopas;composições substancialmente sólidas; e gelatinas ou usadas na forma deum pó para ser incorporado em vários alimentos. O teor do ingrediente emtal alimento funcional ou saudável pode ser similar à dose contida em umagente farmacêutico típico.

Os PUFAs purificados, plantas ou partes de planta transforma-das podem também ser incorporados em ração animal, particularmente ani-mais de criação. Desse modo, os próprios animais podem se beneficiar deuma dieta rica em PUFA, enquanto consumidores humanos de produtos ali-mentícios produzidos a partir de tais animais de criação podem também sebeneficiar.

Para o uso farmacêutico (humano ou veterinário), as composi-ções podem em geral ser administradas por qualquer rota pela qual elas po-dem ser absorvidas com sucesso, por exemplo, parenteral (isto é, subcuta-neamente, intramuscularmente ou intravenosamente), retalmente, vaginal-mente, topicamente, por exemplo, como loção ou pomada de pele. Os PU-FAs, partes de planta ou plantas transformadas da presente invenção podemser administrados sozinhos ou em combinação com um excipiente ou veícu-lo farmaceuticamente aceitável. Onde disponível, cápsulas de gelatina são aforma preferida da administração oral. Suplementação de dieta como indica-da acima pode também prover uma rota de administração oral. Os ácidosinsaturados da presente invenção podem ser administrados em formas con-jugadas, ou como sais, ésteres, amidas ou pró-fármacos dos ácidos graxos.Qualquer sal farmaceuticamente aceitável está incluído pela presente inven-ção; especialmente preferido são sais de sódio, de potássio ou de lítio. Tam-bém incluídos são os sais de N-alquilpoliidroxamina, tal como N-metil gluca-mina, encontrados na publicação de PCT WO 96/33155. Os ésteres preferi-dos são os ésteres de etila. Como sais de sólido, os PUFAs também podemser administrados em forma de comprimido. Para a administração intraveno-sa, os PUFAs ou seus derivados podem ser incorporados em formulaçõescomerciais tais como intralipídios.

Exemplos

Os seguintes exemplos estão incluídos para ilustrar as concreti-zações da invenção. Seria apreciado por aqueles de habilidade na técnicaque as técnicas reveladas nos exemplos que se seguem representam técni-cas reveladas pelo inventor para funcionar bem na prática da invenção. Noentanto, aqueles de habilidade na técnica, à luz da presente revelação, a-preciariam que muitas mudanças podem ser feitas nas concretizações espe-cíficas que são reveladas e ainda obtêm um resultado semelhante ou similarsem se afastar do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especifica-mente, estará evidente que certos agentes que são tanto quimicamentequanto fisiologicamente relacionados podem ser usados como substitutosdos agentes descritos aqui embora os mesmos resultados ou resultados si-milares não fossem alcançados. Todos os tais substituintes e modificaçõesaparentes por aqueles versados na técnica são julgados estarem dentro doespírito, escopo e conceito da invenção como definidos pelas reivindicaçõesanexos.

Exemplo 1

Clonagem de Seqüências de transferase de fosfopanteteínila

Três transferases de fosfopanteteínila bacterianas foram clona-das. A seqüência de aminoácidos da transferase de fosfopanteteínila (Ppt)oriunda de Shewanella SCRC-2738 (SEQ ID NO: 17) foi usada para buscade base de dados públicos para novos ppts que funcionam na biossíntese deEPA ou de DHA. Essa busca forneceu ppts putativos da Shewanella onei-densis MR-1 (SEQ ID NO: 1) (So-ppt) e Colwellia psychrerythraea (SEQ IDNO: 3) (Cp-ppt). As seqüências de ácidos nucléicos de ppts oriundas deShewanella oneidensis MR-1 (SEQ ID NO: 2) e Colwellia psychrerythraea(SEQ ID N0:4) foram clonadas usando-se o sistema Expand High FidelityPCR (Roche, Applied Science, Indianapolis, IN) com os seguintes pares ini-ciadores:

Shew new 5': tcgagctcgcatatgaagattgagcttttttttatacc (SEQ ID NO: 9)Shew 3': tcttaattaattagtcagccaaactagccgc (SEQ ID NO: 10)Colwe new 5': tcgagctcgcatatgacttctttttctcaatctg (SEQ ID NO: 11)Colwe 3": tcttaattaattagatttcctgataaccaagtag (SEQ ID NO: 12).

Os genes foram ampliados para 25 ciclos com a temperatura defusão ajustada a 55°C e 52°C para os ppts de Shewanella e Colwellia, res-pectivamente. Os produtos de PCR foram digeridos com Ndel e Pacl e foramligados em Novagen pACYC-Duet-1 digeridos por Ndel e Pacl (EMD Biosci-ences, Darmstadt, Alemanha) resultando na formação de pMON68081 (figu-ra. 1) e pMON68080 (figura. 2) respectivamente.

Para clonar a transferase de fosfopanteteínila de Moritella mari-na (Mm-ppt), as seqüências de nucleotídeos do ppt de Shewanella SCRC-2738 (SEQ ID N0:18), o ppt de C. psychrerythraea, e o ppt de S. oneidensisMR-1 foram alinhados para identificar a região mais conservada dessas se-qüências. Uma região de seqüência de nucleotídeos conservada no So-ppt(bps 425 -635 de SEQ ID NO: 2) e Cp-ppt (bps 389 - 596 de SEQ ID NO: 4)foi identificada por esse alinhamento e seqüência nessa região was chosento generate sondas usando-se DNA genômico a partir de C. psychrerythraeae S. oneidensis MR-1 como DNAs de modelo e os iniciadores abaixo:Shewanella F1 taggtgtcgatattgagcggg {SEQ ID NO: 13)Shewanella R1 tcaaaggcaaaggattttaac (SEQ ID NO: 14)Colwellia F1 tcggttgtgatgttgaaaatac (SEQ ID NO: 15)Colwellia R1 ttaaaactaaaatcagcgagt (SEQ ID NO: 16).

Sondas marcadas com digoxigenina foram geradas usando-se okit de PCR DIG Probe Synthesis (Roche) de acordo com o protocolo dosfabricantes para 30 ciclos de 30 s cada a 94°C, 55 °C, e 65°C seguido poruma incubação de 7 min a 65°C e incubação subseqüente a 4°C. As sondasmarcadas com digoxigenina foram usadas em uma hibridização de Southernpara sondar seqüências homólogas em DNA genômico total de M. marinacom S. oneidensis MR-1 e C. psychrerythraea como controles positivos. Ahibridização foi realizada a 30°C usando-se DIG Easy Hyb (Roche) de acor-do com o protocolo do fabricante. O filtro foi lavado duas vezes usando-se0,5 χ SSC, 0,1% de SDS a temperatura ambiente. Sondas marcadas comDig foram visualizadas usando-se a Anti-Digoxigenin-AP, fragmentos de Fabe lavagem Dig e conjunto de tampão de bloqueamento (Roche) de acordocom o protocolo dos fabricantes.

Os sinais mais fortes oriundos do DNA de M. marina DNA foramobtidos usando-se a sonda de Colwellia. Em alguns casos esses sinais coin-cidiam com sinais fracos obtidos a partir de DNA de M. marina usando-se asonda de Shewanella.

Com base na experiência de hibridização Southern, digestos deBglll e Pstl de DNA de M. marina foram escolhidos para clonar os fragmen-tos de hibridização. DNA genômico total foi digerido com BgIII ou Pstl, foifracionado pelo tamanho em um gel de agarose e o fragmento de tamanhoapropriado foi extirpado. Os fragmentos de DNA foram purificados usando-se o kit Qiagen Gel Extraction (Qiagen, Valencia, CA). Alíquotas de DNAfracionado foram realizadas em um gel de agorose e foram manchadas so-bre uma membrana de náilon (Roche, Mannheim, Alemanha) usando-se umTurboblotter (Schleicher & Schuell, Keene, NH), de acordo com o protocolodos fabricantes. O fragmento alvo foi identificado por uma hibridização Sou-thern usando-se a sonda de Colwellia.

A fração 5 de Bglll e a fração 4 de Pstl foram escolhidas paragerar um biblioteca parcial em pSP72 (Promega, Madison, Wl). Essas biblio-tecas foram transformadas em DH5a de Escherichia coli e combinações declones foram divididos em alíquotas nas cavidades de uma placa de 96 cavi-dades para o crescimento no período da noite. Alíquotas de cultura foramgiradas por rotação, o sobrenadante foi descartado, e os péletes de célulaforam ressuspensas em 10 μΙ de solução de SDS a 10%. Os péletes de cé-lula foram aquecidos por 1 min a 100°C e foram manchadas sobre membra-nas de náilon (Roche). DNA foi desnaturado por incubação de 5 min emNaOH a 0,5 M, contendo NaCI a 1,5 M1 foi neutralizado por incubação de 5min em Tris/HCI a 0,5 M, pH 7,6 contendo NaCI a 1,5 M, foi lavado por 5 minem 2 χ SSC, e foi fixado por incubação com UV por 1 min em um StratageneUV-StrataIinker 2400 (Stratagene, La Jolla, CA) de acordo com o protocolodos fabricantes. O blot foi sondado com a sonda de ppt de Colwellia. Sinaispositivos foram rastreados para a cavidade de origem e uma alíquota oriun-da daquelas cavidades foi laminada a fim de se obter colônias simples. A-quelas colônias simples foram inoculadas em 250 μΙ de LB contendo 100mg/l de carbampicilina. Células foram desenvolvidas e o procedimento dehibridização descrito acima foi repetido para identificar cavidades contendoclones positivos simples. Clones positivos foram desenvolvidas e DNA deplasmídio foi isolado e foi digerido com Bglll, Pvull, Pstl, ou Sall. Esses di-gestos foram usados em uma hibridização Southern para confirmar clonespositivos. Nesse ponto todos os clonres restantes demonstraram ser positivos.

Três dos clones finais (dois clones de Bglll e um clone de Pstl)foram escolhidos para análise de seqüência de DNA. Análise de bioinformá-tica da seqüência completa revelou que o clone de Pstl continha apenas umMm-ppt parcial, enquanto os clones de Bglll continham um quadro de leituraaberto completo. A seqüência de DNA completa de todos os três clones fo-ram montados em um contig. Um clone de Bglll foi escolhido para outrasexperiências de clonagem (pMON96400). A seqüência de aminoácidos puta-tiva do Mm-ppt é mostrada na SEQ ID NO: 5 se o códon de partida é TTG(chamado de Mm-ppt longo). Um códon de partida alternativo usando-se Meté encontrado em aminoácido 43 de SEQ ID NO: 5 (fornecendo um polipeptí-deo chamado de Mm-ppt curto SEQ ID NO: 7). A seqüência de ácidos nu-cléicos de Mm-ppt longa é SEQ ID NO: 6. A seqüência de ácidos nucléicosde Mm-ppt curta é mostrada na SEQ ID NO: 8. Uma comparação do relacio-namento de aminoácido das Ppts da invenção é mostrada na Tabela 1.Tabela 1: Seqüência de aminoácidos identidade de transferases de fosfo-panteteínila

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Exemplo 2

Expressão de Seqüências de transferase de fosfopanteteínila em Escheri-chia coli

Para demonstrar funcionalidade das ppts descrita no Exemplo 1,os genes de sintase de policetídeo de Moritella marina (PKS) foram clonadosnos vetores de Novagen pDUET (EMD, Biosciences, Darmstadt, Alemanha),um conjunto de 4 vetores de expressão de E. coli compatíveis. Esse PKSconsiste em 4 polipeptídeos codificados pelos ácidos nucléicos orf5 (SEQ IDNO: 20), orf6 (SEQ ID NO: 22), orf7 (SEQ ID NO: 24) e orf8 (SEQ ID NO:26), que são descritos como orf6, orf7, orf8, e orf9 na patente U.S. n-6.140.486, respectivamente. Os vetores de expressão pMON94547 (Orf5 eOrf6) (figura 3), pMON94544 (Orf7) (figura 4) e pMON94534 (Qrf8) (figura 5)foram construídos usando-se 3 dos vetores de pDUET. O quarto vetor depDUET foi usado para a expressão de ppt.

Para se obter um PKS enzimaticamenete ativo, o produto deexpressão de Orf5 exige pantetenilação, que é catalisado pela Ppt. Cadauma das ppts bacterianas foi clonada em pACYC-DUET-1. A construção depMON68081 e pMON68080 é descrita no Exemplo 1. Similarmente as duasdiferentes ppts de M. marina putativas, Mm-ppt curta ou Mm-ppt longa, fo-ram clonadas na mesma base de vetor como a Colwellia e as ppts de She-wanella ppts para fornecer pMON68084 (figura 6) e pMON68085 (figura 7),respectivamente. O iniciador de Mm-ppt longo PCR® (SEQ ID NO: 27) mu-dou a partida de TTG putativa em um ATG. Cada ppt é então expressa jun-tamente com genes de PKS de M. marina em E. coli, é incubada por 24 h, eas células de E. coli Iiofilizadas são metiladas diretamente com ácido sulfúri-co/metanol, e os ésteres de metila de ácido gaxo são analisados quanto aoteor de EPA e DHA por cromatografia gasosa. Os resultados são mostradosabaixo na Tabela 2.

Tabela 2

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Co-expressão do PKS de Moritella marina completa com qual-quer uma das transferases de fosfopanteteínila testadas em E. coli resultouno acúmulo de DHA1 enquanto expressão do PKS de M. marina sem co-expressão de uma Ppt não resultou em acúmulo de DHA. Coexpressão daCp-ppt com um PKS incompleto (perdendo Orf8) também não resultou emacúmulo de DHA. Esses resultados demonstram que todas as PPTs testa-das pantotenilavam o PKS de M. marina resultando na formação de umcomplexo de múltiplas enzimas ativas.

Foi demonstrado que Orf7 (Orf8 na patente U.S. 6.140.486) con-trola o comprimento de cadeia no produto final de PKSs de produção dePUFA. O PKS de Shewanella putrefaciens produz EPA. Nas experiênciasem E. coli contendo o grupo de PKS de S. putrefaciens, um mutante de de-leção de orf7 produziu DHA quando complementado com orf7 de Moritellamarina. A Ppt usada para ativar o PKS não muda o produto, portanto, asPpts dessa invenção são usadas para produzir EPA quando combinadascom um PKS produtor de EPA e DHA quando combinado com um PKS pro-dutor de DHA.

Exemplo 3

Expressão de Seqüências de transferase de fosfopanteteínila em PlantasPara demonstrar a capacidade do PKS de M. marina, incluindo appt de M. marina, para sintetizar DHA em plantas, vários pacotes de expres-são de planta foram gerados. Os genes para orf5-8 foram modificados paraa expressão em plantas dicotiledôneas. É conhecido que seqüências de co-dificação de proteína endógena não podem expressar bem em plantas (apatente U.S. 5.880.275, aqui incorporada por referência). Portanto, usando-se as seqüências de polipeptídeos de PKS nativas para Orfs5-8 (SEQ IDNOS: 19, 21, 23, e 25), seqüências de polinucleotídeos de codificação deproteína artificial foram projetadas e foram construídas por 1) uso de uma"codon usage bias" similar àquele de proteínas de soja altamente expressas,e por 2) remoção de elementos de desestabilização de RNA anteriormentecaracterizados e conhecidos como afetando estabilidade de mRNA na planta(a patente U.S. 5.880.275) e por introdução de uma seqüência de Kozak an-tes do códon de partida de ATG (Joshi e outros, 1997). As seqüências depolinucleotídeos modificadas resultantes codificam polipeptídeos idênticosna seqüência para dar os polipeptídeos nativos.

O vetor binário pMON97063 (figura 8) contém os pacotes de ex-pressão para orf5 (modificado por códon, SEQ ID NO: 28) (sob o controle dopromotor de FMV.35S-enh com o líder de L-Ph.DnaK) e Mm-ppt curta (SEQID NO: 8) (sob o controle do promotor de CaMV35S-enh e o líder de L-CaMV35S). Esse vetor porta o gene de Bar como marcador selecionável. Ovetor binário pMON94563 (figura 9) foi gerado por clonagem dos pacotes deexpressão para orf6 (modificado por códon, SEQ ID NO: 29) (sob o controledo promotor de CaMV35S-enh com o líder de L-CaMV35S) orf7 (modificadopor códon, SEQ ID NO: 30) (sob o controle do promotor de FMV35S-enhcom o líder de L-Ph.DnaK), e orf8 (modificado por códon, SEQ ID NO: 31)(sob o controle do promotor CaMV35S-enh com o líder de L-CaMV35S).pMON94563 porta o marcador de CP4 que provê resistência a glifosato. Ovetor binário pMON97066 (figura 10) contém o mesmo pacote de expressãoque pMON94563, mas com o pacote de orf7 precedente do pacote de orf6ao invés do seguinte dele. Todos os contructos eram seqüência varificadapor seqüenciação de DNA.Os pares de vetor binário pMON97063 e pMON94563 oupMON97063 e pMON97066 são contransformados em Arabidopsis thalianausando-se transformação mediada por Agrobacterium. Plantas são regene-radas e material de folha das plantas de R1 Arabidopsis e semente de R2dessas plantas é analisada quanto à composição e teor de ácido graxo.

Para gerar um vetor binário de múltiplos genes simples que co-lheita todos os 4 genes de PKS e a ppt o vetor binário de baixo número decópias pMON83934 foi digerido com Hindlll e Notl e foi ligado com um polili-gador que consiste em oligômeros MCS-3 (SEQ ID NO: 32) e MCS-4 deDNA (SEQ ID NO: 33). O vetor resultante foi designado pMON68091. Ospacotes de expressão para orf6, orf7, orf8 e o marcador selecionável de CP4foram extirpados por digesto de Hindlll/BsiWI de pMON94563 e ligado nopMON68091 digerido por Hindlll/BsiWI. O vetor binário resultante é digeridocom Ascl e BsiWI e é ligado com pacotes de expressão contendo orf5 e Mm- ppt de pMON97063 extirpado por digesto de BsiWI/Ascl. O vetor binário re-sultante, pMON96401 (figura 11), é transformado por meio de transformaçãomediada por Agrobacterium em Arabidopsis thaliana e soja. Plantas são re-generadas e material de semente e folha oriundos dessas plantas são anali-sados quanto à composição e teor de ácido graxo.

Eventos 48 R1 contendo pMON96401 foram gerados em Arabi-dopsis. Semente R2 maduro oriundo desse estudo foi analisado por croma-tografia gasosa. 9 dos 48 eventos analisados produziram DHA (Tabela 3).

Tabela 3: DHA content of pMON964Q1-contendo seed

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Caracterização molecular de 4 eventos contendo DHA de R2Arabidopsis transformado com semente de pMON96401 são representadosna Tabela 4. Os dados demonstram que eventos que produziam DHA erampositivos para a presença dos 5 transgenes como determinado por ensaio deponto final TaqMan ® (Applied Biosystems, Foster City, CA)

Tabela 4: Presença de gene de pMQN96401 de Arabidopsis

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Na geração R3 de semente de Arabidopsis pMON96401, o fenó-tipo persistia com uma faixa de 0,025-0,1% de DHA por cromatografia gaso-sa. O pico de cromatografia gasosa foi confirmado como DHA por cromato-grafia gasosa/tempo de espectrometria de massa de vôo com óleo de peixecomo um padrão.

Para a expressão específica de semente do PKS de Moritellamarina, os genes modificados por códon ou nativos são clonados como pa-cotes de expressão de gene simples usando-se promotores específicos desemente tais como p7Sa, p7Sa', Arcelin-5, USP88, pNapin, pFAE ou pOleo-sin. Subseqüente esses pacotes de expressão são montados para combinartodos os cinco genes em um vetor binário simples usando-se um vetor biná-rio de baixo número de cópias tal como pMON83934 como vetor de base.

Os vetores de cinco genes resultantes (cada um deles colhendo todos osquatro genes de PKS mais o pacote de expressão de ppt) podem conter ospacotes de expressão em ordem ou orientação variável em relação entre si.Esses vetores são transformados em soja e a semente de soja resultantesão analisadas quanto à composição e teor de ácido graxo.Um exemplo de um vetor de múltiplos gene para a expressãoespecífica de semente do PKS de M. marina e ppt de M. marina segue. Pa-cotes de expressão para a expressão específica de semente do PKS au-mentado por códon de dicot e genes de ppt são montados como descritos naTabela 5. Os pacotes de expressão são montados na orientação de cabeçapara o cauda resultando na formação de pMON78528 (figura 12). Esse vetorbinário é transformado em soja e Arabidopsis usando-se transformação me-diada por Agrobacterium e a semente resultante são analisadas quanto àcomposição e teor de ácido graxo.

Tabela 5: Pacotes de expressão específicos de semente para PKS de M.marina.

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Para demonstrar a capacidade do PKS de M. marina, juntamen-te com a ppt de M. marina, para sintetizar DHA em milho, vários pacotes deexpressão de planta são gerados. Os genes para orfs 5-8 e uma ppt sãomodificados para a expressão em planta monocotiledônea. É conhecido queseqüências de codificação de proteína não endógenas não podem expressarbem em plantas (a patente U.S. 5.880.275, aqui incorporada por referência).Portanto, usando-se as seqüências de polipeptídeos de Ppt e de Orf nativasanteriormente descritas, seqüências de polinucleotídeos de codificação deproteína artificial são projetadas e são construídas por 1) uso de uma "codonusage bias" similar àquele de proteínas de milho altamente expressas, e por2) remoção de elementos de desestabilização de RNA anteriormente carac-terizados e conhecidos por afetar a estabilidade de mRNA em planta (a pa-tente U.S. 5.880.275). As seqüências de polinucleotídeos modificadas resul-tantes codificam polipeptídeos idênticos na seqüência aos polipeptídeos na-tivos. Explantes transformados são obtidos atavés de transformação media-da por Agrobacterium tumefaciens para vetores contendo as seqüências depolinucleotídeos modificadas. Plantas são regeneradas a partir de tecidotransformado. As plantas desenvolvidas em estufa são então analisadasquanto a gene de níveis de expressão de interesse bem como composiçãooleosa, incluindo DHA ou EPA.

Exemplo 4

Clonagem de seqüências de sintase de policetídeo

Oito genes de sintase de policetídeo candidatos foram clonadasoriundos de 2 espécies. As seqüências de aminoácidos deduzidas de genesde PKS de M. marina (SEQ ID NOS: 19, 21, 23 e 25) foram usados parabuscar base de dados disponíveis para novos genes de sintase de policetí-deo in Shewanella oneidensis (ATCC # 700550) e Colwellia psychrerythreae(ATCC # BAA-681). S. oneidensis acumula EPA enquanto C. psychrerythre-ae acumila DHA. Com base nisso, acreditava-se que a produção de PUFAproduction nessas bactérias resultassem de um mecanismo de PKS. A bus-ca forneceu um conjunto de 4 genes de PKS candidatos a partir de cadabactéria. Usando-se técnicas de clonagem por PCR, esses genes foram clo-nadas em TOPO vetores de clonagem, a seqüência verificada e subclonadaem vetores de de expressão de Duet (vide Tabela 6). Expressão do orf5 deS. oneidensis juntamente com os orf6, orf7, orf8, e ppt de M. marina em E.coli demonstrou resultar na formação de até 0.2% de DHA como determina-do por cromatografia gasosa, confirmando a função prevista do orf5 de S.oneidensis. Similarmente, a função de cada gene listado na Tabela 6 é con-firmada por expressão com os genes de PKS de M. marina em E. coli ou porexpressão do gene de PKS completo oriundo de Shewanella ou Colwellia ouuma combinação das duas espécies em E. coli. Alternativamente a função édemonstrada em plantas.Tabela 6: Vetores de expressão de E. coli para genes de PKS de Shewanel-la e de Colwellia.

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Referências

As referências listadas abaixo são incorporadas aqui por refe-rência na medida que elas suplementam, explicam, provêem uma base para,ou ensinam metodologia, técnicas e/ou composições empregadas aqui.a patente U.S. 4.518.584, a patente U.S. 4.737.462, a patente U.S.4.810.648, a patente U.S. 4.957.748, a patente U.S. 4.965.188, a patenteU.S. 5.094.945, a patente U.S. 5.100.679, a patente U.S. 5.176.995, a paten-te U.S. 5.196.525, a patente U.S. 5.219.596, a patente U.S. 5.290.924, apatente U.S. 5.322.783, a patente U.S. 5.359.142, a patente U.S. 5.424.398,a patente U.S. 5.424.412, a patente U.S. 5.500.365, a patente U.S.5.538.880, a patente U.S. 5.550.318, a patente U.S. 5.563.055, a patenteU.S. 5.610.042, a patente U.S. 5.627.061, a patente U.S. 5.633.435, a paten-te U.S. 5.641.876, a patente U.S. 5.880.275, a patente U.S. 5.936.069, apatente U.S. 6.005.076, a patente U.S. 6.040.497, a patente U.S. 6.140.486,a patente U.S. 6.140.486, a patente U.S. 6.140.486, a patente U.S.6.140.486, a patente U.S. 6.146.669, a patente U.S. 6.156.227, a patenteU.S. 6.265.638, a patente U.S. 6.319.698, a patente U.S. 6.433.252, a paten-te U.S. 6.451.567. o Pedido U.S. 10/235.618. o Pedido U.S. 10/429.516, aPublicação U.S.. 2004 0039058, a Publicação U.S.. 2004 0235127Allen and Bartlett, Microbiology, 148(Pt 6): 1903-1913 , 2002.

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Yang e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 87:9568-9572,1990.

LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> APPLICANT: Valentin, HenryPeng, JiexinScreen, Steven

<120> TÍTULO DA INVENÇÃO: TRANSFERASES DE FOSFOPANTETEÍNILA ORIUNDAS DAS BACTÉRIAS

<130> ARQUIVO DE REFERÊNCIA: MONS:097US

<140> NUMERO DO RECORRENTE PEDIDO: US/11 / 668 , 354

<141> DATA DO CORRENTE ARQUIVO: 2007-01-29

<150> NÚMERO ANTERIOR DE PEDIDO: 60/763644

<151> NÚMERO ANTERIOR DO PEDIDO: 2006-01-31

<160> NÚMERO DAS SEQÜÊNCIAS SEQ ID NOS: 44

<170> SOFTWARE: PatentIn version 3.3

<210> SEQ ID NO 1

<211> COMPRIMENTO: 318

<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis

<400> SEQÜÊNCIA: 1

Met Lys Ile Glu Leu Phe Phe Ile Pro Leu Ala Glu Met Asp Ala Glu1 5 10 15

Met Val Ser Arg Cys Met Ala Leu Leu Ser Glu Asp Glu Arg Ala Lys20 25 30

Val Ala Arg Tyr Leu Ala Pro Lys Ala Gln Met Asn Gly Leu Leu Val35 40 45

Arg Ala Ala Leu Arg Cys Val Leu Ser Gln Gly Leu Gln Ser Pro Asn50 55 60

Glu Ser Ser Leu Asn Ala Phe Ser Ser Asn Thr Gly Ser Leu Pro Ile 65 70 75 80

Ala Pro Gln Asp Trp Cys Phe Glu Tyr Gly Ala Lys Gly Lys Pro Ser85 90 95Leu Cys His Glu Gln Phe Leu Lys Thr Gly Ile Glu Phe Asn Leu Ser

100 105 110

His Ser Gly Asp Trp Leu Leu Ile Ala Leu Ala Gln Gly Arg Ala His

115 120 125

Thr Lys Phe Ile Asp Gln Ser Ala Lys Thr Arg Leu Gly Leu Gly Val

130 135 140

Asp Ile Glu Arg Ala Arg Ala Ser Thr Asn Ile Tyr Pro Ile Leu Asn145 150 155 160

His Tyr Phe Ser Ala Arg Glu Thr Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Gly

165 170 175

Glu Thr Ala His Arg Gln Arg Phe Phe Asp Leu Trp Ala Leu Lys Glu

180 185 190

Ser Tyr Ile Lys Ala Thr Gly Leu Gly Leu Ala Gln Ser Leu Lys Ser

195 200 205

Phe Ala Phe Glu Leu Met Pro Asp Ala Leu Val Glu Val His Pro Asn

210 215 220

Gln Val Ala Leu Arg His Glu Trp Val Glu Leu Lys Arg Arg Glu Pro225 230 235 240

Phe Ala Leu Pro Ser Gln Leu Lys Leu Tyr Cys Glu Ile Lys Pro Thr

245 250 255

Ala Ala Phe Leu Pro Asp Ser Ala His Pro Pro Pro Glu Asn Leu His

260 265 270

Val Gln Ser Tyr Phe Gly Arg Leu Asp Glu Glu Tyr Arg Phe Gly Leu

275 280 285

Ser Leu Ile His Pro Asn Ala Leu Ser Asn Val Gln Ile Ser Met Thr

290 295 300

Leu Ala Ser Ile Lys Ser Leu Leu Ala Ala Ser Leu Ala Asp305 310 315

210> SEQ ID NO 2211> COMPRIMENTO: 957212> TIPO: DNA

213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis<400> SEQÜÊNCIA: 2

atgaagattg agcttttttt tataccatta gccgagatgg atgctgaaat ggtgagccgt 60

tgtatggcgc tgttgagtga ggacgagcgt gcaaaagtgg cgcgttacct tgcgcccaag 120

gcgcaaatga atggcttatt ggtgcgagcg gcgctgcgct gtgtcttatc tcaagggctg 180

caatctccaa atgaatcttc acttaacgca ttttcatcta acacaggctc actacccatt 240

gctccccaag attggtgttt tgagtatggg gcaaagggca aacccagtct ctgccatgag 300

cagtttctga agacgggtat tgagtttaac ttaagccaca gtggcgactg gttattgata 360

gccttggcgc aagggcgggc tcatacaaaa ttcatcgatc aaagtgcaaa aactcgctta 420

ggtttaggtg tcgatattga gcgggcccgg gcaagcacaa atatttaccc cattctgaat 480

cattattttt ctgcgcgaga aaccgaggcg ctactggcat tgccgggcga aaccgcccac 540

cgccaacgat tttttgacct gtgggcgctt aaagagtcct acatcaaggc aacaggttta 600

ggcttagcgc agtcgttaaa atcctttgcc tttgagttga tgcctgatgc acttgtcgag 660

gtccatccca atcaagtagc gcttcgccat gaatgggttg aacttaaaag gcgagaaccc 720

tttgcgttac caagccagct taaattgtat tgcgagatta agcctacggc ggcgtttctg 780

cccgattctg cgcatccgcc gccagaaaac ttgcacgtgc aaagctactt tggtcggctt 840

gatgaggaat atcgctttgg cttgagtctc attcatccta acgcgctatc gaatgtgcag 900

atttcgatga cgcttgccag catcaaatcg ttgttagcgg ctagtttggc tgactaa 957

<210> SEQ ID NO 3<211> COMPRIMENTO: 282

Arg His Asp Ala Leu Ile Thr Arg Ala Phe Ile Arg Asp Leu Leu Ser

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea<400> SEQÜÊNCIA: 3

Met Thr Ser Phe Ser Gln Ser Glu Leu Ser Thr Arg Thr Lys Glu Lys

15 10 15

Leu Asp Leu Ala Ala Asn Glu Ile His Ile Trp Val Thr Lys Pro Glu

20 25 30

Glu Leu Leu Gly Asn Asp Glu Leu Leu Ala Thr Tyr Ser Thr Leu Leu

35 40 45

Thr Ser Thr Glu Thr Ala Lys Gln Gln Arg Tyr Lys Phe Ala Lys AspTyr Tyr Ala Asp Val Ala Pro Gln Asp Trp Gln Phe Glu Lys Gly Asn

85 90 95

Lys Asp Lys Pro Glu Val Ile Asn Cys Pro Leu Pro Leu Arg Phe Asn

100 105 110

Ile Ser His Thr Lys Asn Leu Ile Ile Cys Ala Val Thr Leu Glu Asp

115 120 125

Asp Ile Gly Cys Asp Val Glu Asn Thr Gly Arg Asn Asn Asn Val Leu

130 135 140

Ala Ile Ala Glu Arg Tyr Phe Ser Ser Lys Glu Ile Asp Glu Leu Phe145 150 155 160

Ala Leu Pro Glu Ala Gln Gln Arg Asn Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Thr

165 170 175

Leu Lys Glu Ser Tyr Ile Lys Ala Trp Gly Leu Gly Leu Ala Ile Pro

180 185 190

Leu Ala Asp Phe Ser Phe Lys Ile Asn Asp Thr Glu His Asn His Asn

195 200 205

Gly Leu Phe Thr Ile Lys Gln Asp Ile Asn Leu Ser Phe Ala Glu His

210 215 220

Arg Val Asp Glu Pro Gln Ile Trp Arg Ser Trp Leu Val Tyr Pro Thr225 230 235 240

Ala Ala Ile Asp Glu Lys Gln Glu His Arg Ile Ala Val Ser Leu Arg

245 250 255

Ala Thr Ser Asp Asn Gln Lys Thr Asp Tyr Gln Leu Arg Phe Phe Asn

260 265 270

Thr Leu Pro Leu Leu Gly Tyr Gln Glu Ile275 280

<210> SEQ ID NO 4<211> COMPRIMENTO: 849<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea<400> SEQÜÊNCIA: 4

atgacttctt tttctcaatc tgaactctcc actcgaacaa aagaaaagct cgaccttgctgccaatgaaa ttcatatatg ggtaaccaaa ccggaagagt tactcggcaa tgatgagtta 120

ttagcaacct actcaacatt attaacgagt acagaaacag ccaaacagca acgatataag 180

tttgctaaag atagacacga tgccttgatt actcgcgctt tcatacgcga tttattatct 240

tattatgctg atgtagcacc gcaagattgg cagtttgaaa aaggtaataa agataaacct 300

gaagttatta attgcccact gccgctgcgc tttaacatca gccatacaaa aaatcttata 360

atttgcgcgg taacgcttga ggatgatatc ggttgtgatg ttgaaaatac cggccgcaac 420

aataatgtat tagcgattgc tgaacgttat ttttcttcta aagaaataga tgaacttttt 480

gcgctgccag aagcacaaca acgcaatcgg ttttttgatt attggacatt aaaagagtct 540

tatattaaag cttggggttt aggtttagcg ataccactcg ctgattttag ttttaaaatt 600

aacgataccg aacataatca taacggttta tttactatca agcaggacat taacctaagc 660

tttgctgagc atagagtaga tgaaccacaa atttggcgta gctggttagt ttacccaacg 720

gctgccatag atgaaaaaca agaacaccgc atcgctgtat cgttaagagc aaccagcgac 780

aatcaaaaaa ctgactacca attacgtttc tttaataccc tgcccctact tggttatcag 840

gaaatctaa 849

<210> SEQ ID NO 5

<211> COMPRIMENTO: 329<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 5

Asp Arg His Asn Ala Leu Ile Thr Arg Ala Phe Val Arg Asp Leu Leu

Val Asn Tyr Leu Gly Gly Asn Leu Ser Tyr Tyr Gln Ala Cys Asn Gly

20 25 30

Lys Arg Ile Ile Leu Val Ser Ile Leu Ile Met Tyr Ser Gly Val Lys

35 40 45

Asp Lys Leu Thr Leu Thr Thr Asn Glu Ile His Leu Trp Ser Val Thr

50 55 60

Pro Gln Thr Ile Gln Gln Pro Glu Leu Leu Gln Ala Tyr Ser Gln Leu100 105 110

Ser His Tyr Ala Asp Val Leu Pro Ala Asp Trp Gln Phe Val Lys Gly

115 120 125

Glu Lys Asp Lys Pro Glu Ile Ala Asn Pro Pro Leu Pro Leu Arg Phe130 135 140

Asn Ile Ser His Thr Asp Asn Leu Ile Ile Cys Ala Val Met Leu Asn145 150 155 160

Asp Asp Ile Gly Cys Asp Val Glu Asn Thr Leu Arg Ser Ser Asn Val165 170 175

Leu Ser Ile Ala Lys His Ser Phe Ser Asp Ser Glu Phe Asn Asp Leu

180 185 190

Leu Thr Gln Pro Thr Ala Gln Gln Thr Ser Arg Phe Phe Asp Tyr Trp

195 200 205

Thr Leu Lys Glu Ser Tyr Ile Lys Ala Trp Gly Leu Gly Leu Ser Ile

210 215 220

Pro Leu Lys Asp Phe Ser Phe Thr Leu Pro Glu Gly Phe Gln Gln Gln225 230 235 240

Tyr Gln Gln Glu Asp Gln Gln Glu Asn Gln His Cys Ile Asp Thr Ile245 250 255

Lys Leu Ser Phe Ala Pro His Arg Ile Asp Asn Pro Asn Ile Trp Arg

260 265 270

His Trp Leu Phe Tyr Pro Asn Asn Thr His Arg Val Ala Leu Ala Val

275 280 285

Arg Ala Arg Ser Asn Asn Gln Gln Thr Glu Tyr Lys Met Arg Phe Phe290 295 300

Asn Ser Thr Pro Leu Ile Asn Ile Thr Glu Thr Leu Ile Phe Lys Pro305 310 315 320

Glu Thr Asn Phe Lys Pro Asp Ala Lys325

<210> SEQ ID NO 6

<211> COMPRIMENTO: 990<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Moritella marina

<400> SEQÜÊNCIA: 6

ttggtacagc ttaaaaccta tgacgaaaca agattacgca gtgatggggt taattacctt 60

ggtggtaacc ttagctatta tcaagcgtgt aatggcaagc gaattattct ggtatccatt 120

ctaattatgt acagcggcgt aaaagataag ctcaccctca ctacaaatga aatccattta 180

tggtcggtta ctccgcaaac tatccaacag cctgaattat tacaggctta tagccaactg 240

ttatcacctg cagaaacaat aaaacaacaa cgctttcgat ttgaaaaaga tcgtcacaat 300

gctctcatca ctcgtgcttt cgtccgtgat ttattatctc actatgcaga tgttttaccg 360

gctgattggc agtttgtgaa gggggaaaag gataaaccag agatagcgaa tcccccactc 420

ccactgcgct ttaatattag tcataccgat aacttaatca tttgtgccgt catgctcaat 480

gatgatatcg gttgtgatgt cgaaaataca ctgcgtagca gtaatgtctt gagtattgct 540

aaacattcat tctcagatag tgaattcaat gatttactta ctcaacccac tgcacaacaa 600

accagtcgtt tttttgatta ctggacgtta aaagaatctt atatcaaagc atggggcttg 660

ggtttatcga tcccgttgaa agatttcagc ttcacgctac ccgaaggctt tcaacagcag 720

tatcaacaag aagatcagca agaaaaccag cattgtattg ataccattaa attaagcttt 780

gcacctcacc gtattgataa tcccaacatt tggcgtcatt ggctgttcta tccaaataat 840

acccacagag ttgcactggc tgtgcgcgcg cgaagtaata atcagcagac tgaatataaa 900

atgcgatttt ttaattcgac accactgatt aatatcactg aaacacttat ttttaaacct 960

gagactaatt ttaaacctga cgctaaatag 990

<210> SEQ ID NO 7

<211> COMPRIMENTO: 287

<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Moritella marina

<400> SEQÜÊNCIA: 7

His Leu Trp Ser Val Thr Pro Gln Thr Ile Gln Gln Pro Glu Leu Leu

20 25 30

Gln Ala Tyr Ser Gln Leu Leu Ser Pro Ala Glu Thr Ile Lys Gln Gln

35 40 45

Arg Phe Arg Phe Glu Lys Asp Arg His Asn Ala Leu Ile Thr Arg AlaPhe Val Arg Asp Leu Leu Ser His Tyr Ala Asp Val Leu Pro Ala Asp65 70 75 80

Trp Gln Phe Val Lys Gly Glu Lys Asp Lys Pro Glu Ile Ala Asn Pro

85 90 95

Pro Leu Pro Leu Arg Phe Asn Ile Ser His Thr Asp Asn Leu Ile Ile

100 105 110

Cys Ala Val Met Leu Asn Asp Asp Ile Gly Cys Asp Val Glu Asn Thr

115 120 125

Leu Arg Ser Ser Asn Val Leu Ser Ile Ala Lys His Ser Phe Ser Asp

130 135 140

Ser Glu Phe Asn Asp Leu Leu Thr Gln Pro Thr Ala Gln Gln Thr Ser145 150 155 160

Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Thr Leu Lys Glu Ser Tyr Ile Lys Ala Trp

165 170 175

Gly Leu Gly Leu Ser Ile Pro Leu Lys Asp Phe Ser Phe Thr Leu Pro

180 185 190

Glu Gly Phe Gln Gln Gln Tyr Gln Gln Glu Asp Gln Gln Glu Asn Gln

195 200 205

His Cys Ile Asp Thr Ile Lys Leu Ser Phe Ala Pro His Arg Ile Asp

210 215 220

Asn Pro Asn Ile Trp Arg His Trp Leu Phe Tyr Pro Asn Asn Thr His225 230 235 240

Arg Val Ala Leu Ala Val Arg Ala Arg Ser Asn Asn Gln Gln Thr Glu

245 250 255

Tyr Lys Met Arg Phe Phe Asn Ser Thr Pro Leu Ile Asn Ile Thr Glu

260 265 270

Thr Leu Ile Phe Lys Pro Glu Thr Asn Phe Lys Pro Asp Ala Lys275 280 285

210> SEQ ID NO 8211> COMPRIMENTO: 864<212> TIPO: DNA213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜENCIA: 8

atgtacagcg gcgtaaaaga taagctcacc ctcactacaa atgaaatcca tttatggtcg 60gttactccgc aaactatcca acagcctgaa ttattacagg cttatagcca actgttatca 120cctgcagaaa caataaaaca acaacgcttt cgatttgaaa aagatcgtca caatgctctc 180atcactcgtg ctttcgtccg tgatttatta tctcactatg cagatgtttt accggctgat 240tggcagtttg tgaaggggga aaaggataaa ccagagatag cgaatccccc actcccactg 300cgctttaata ttagtcatac cgataactta atcatttgtg ccgtcatgct caatgatgat 360atcggttgtg atgtcgaaaa tacactgcgt agcagtaatg tcttgagtat tgctaaacat 420tcattctcag atagtgaatt caatgattta cttactcaac ccactgcaca acaaaccagt 480cgtttttttg attactggac gttaaaagaa tcttatatca aagcatgggg cttgggttta 540tcgatcccgt tgaaagattt cagcttcacg ctacccgaag gctttcaaca gcagtatcaa 600caagaagatc agcaagaaaa ccagcattgt attgatacca ttaaattaag ctttgcacct 660caccgtattg ataatcccaa catttggcgt cattggctgt tctatccaaa taatacccac 720agagttgcac tggctgtgcg cgcgcgaagt aataatcagc agactgaata taaaatgcga 780ttttttaatt cgacaccact gattaatatc actgaaacac ttatttttaa acctgagact 840aattttaaac ctgacgctaa atag 864

<210> SEQ ID NO 9<211> COMPRIMENTO: 38<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 9

tcgagctcgc atatgaagat tgagcttttt tttatacc 38

<210> SEQ ID NO 10

<211> COMPRIMENTO: 31<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 10

tcttaattaa ttagtcagcc aaactagccg c 31<210> SEQ ID NO 11<211> COMPRIMENTO: 34<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 11

tcgagctcgc atatgacttc tttttctcaa tctg<210> SEQ ID NO 12<211> COMPRIMENTO: 34<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 12

tcttaattaa ttagatttcc tgataaccaa gtag<210> SEQ ID NO 13<211> COMPRIMENTO: 21<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 13

taggtgtcga tattgagcgg g<210> SEQ ID NO 14<211> COMPRIMENTO: 21<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 14

tcaaaggcaa aggattttaa c<210> SEQ ID NO 15

<211> COMPRIMENTO: 22

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Artificial

<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer

<400> SEQÜÊNCIA: 15tcggttgtga tgttgaaaat ac 22

<210> SEQ ID NO 16

<211> COMPRIMENTO: 21

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Artificial

<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer

<400> SEQÜÊNCIA: 16ttaaaactaa aatcagcgag t 21

<210> SEQ ID NO 17

<211> COMPRIMENTO: 329

<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Shewanella sp. SCRC-2738

<400> SEQÜÊNCIA: 17

Met Leu Thr Ser Arg Leu Ile Ser Leu Tyr Phe Cys Pro Leu Thr Ile1 5 10 15

Gln Glu Cys Asp Asn Gln Thr Thr Glu Leu Val Lys Ser Trp Leu Pro

25 20 25 30

Glu Asp Glu Leu Ile Lys Val Asn Arg Tyr Ile Lys Gln Glu Ala Lys

35 40 45

Thr Gln Gly Leu Met Val Arg Gly Tyr Leu Arg Ala Leu Leu Ser Gln50 55 60

His Ser Glu Ile Arg Pro Asn Glu Trp Arg Phe Glu Tyr Gly Asp Lys

65 70 75 80

Gly Lys Pro Arg Leu Ser Asp Ala Gln Phe Ala Gln Thr Gly Val His85 90 95

Phe Asn Val Ser His Ser Gly Asp Trp Leu Leu Val Gly Ile Cys Thr

100 105 110

Ala Asp Asn Lys Gly Ala Ser Gln Ala Ser Lys Glu Glu Thr Asp Ser

115 120 125

Ala Ser Ile Glu Phe Gly Val Asp Ile Glu Arg Cys Arg Asn Ser Thr

130 135 140

Asn Ile His Ser Ile Leu Ser His Tyr Phe Ser Glu Ser Glu Lys Arg

145 150 155 160

Ala Leu Leu Ala Leu Pro Glu Ala Leu Gln Arg Asp Arg Phe Phe Asp

165 170 175

Leu Trp Ala Leu Lys Glu Ser Tyr Ile Lys Ala Lys Gly Leu Gly Leu

180 185 190

Ala Leu Ser Leu Lys Ser Phe Ala Phe Asp Phe Ser Ala Leu Ser Glu

195 200 205

Thr Phe Leu Gly Val Asn Ala Pro Lys Ser Leu Ser His Cys Val Asp

210 215 220

Ile Ser Asp Ala Ile Ala Asp His Lys Val Glu His Gln Leu Asn Gln

225 230 235 240

Arg Gln Val Leu Leu Lys Gln Asp Ile Gly Leu Ala Leu Leu Glu Ser

245 250 255

Ser Ser Asn Lys Pro Asn Ala Glu Pro Gln Lys Ser Gly Leu Gly Leu

260 265 270

Ile Glu Ala Lys Glu Gln Gln Met Asn Ala Ala Asp Asn Trp His Cys

275 280 285

Leu Leu Gly His Leu Asp Asp Ser Tyr Arg Phe Ala Leu Ser Ile Gly

290 295 300

Gln Cys Gln Gln Ile Ser Ile Ala Ala Glu Glu Val Asn Phe Lys Ala

305 310 315 320

Val Val Arg Ala Ser Ala Lys Thr Ser

325

<210> SEQ ID NO 18<211> COMPRIMENTO: 990<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Shewanella sp. SCRC-2738<400> SEQÜÊNCIA: 18

ttgctaactt ctcgattgat ttccttatac ttctgtccgt taacaataca agagtgcgat 60

aaccagacta cagagttggt taagtcatgg ctgcctgaag atgagttaat taaggttaat 120

cgctacatta aacaagaagc taaaactcaa ggtttaatgg taagaggcta tttgcgcgct 180

ttattgtcac aacatagtga aatacgcccc aatgaatggc gctttgaata tggcgacaaa 240

ggtaagccta gattgagtga tgcgcaattt gctcaaaccg gggtccactt taatgtgagt 300

catagtggag attggctatt agtaggcatt tgcactgctg ataataaagg cgccagtcag 3 60

gcaagcaagg aggaaactga ctctgctagt attgagtttg gcgtcgacat tgagcgttgc 420

cgtaacagca ccaatatcca ctctattctt agtcattatt tctctgaatc agaaaagcga 480

gccttgttag cgttaccaga ggccttgcag cgagaccgct tttttgattt gtgggcgctc 540

aaggagtctt acattaaagc gaaaggactt gggctggcat tatcgctaaa atcttttgcg 600

tttgacttct ctgcactgag cgaaactttt cttggagtta atgcacctaa aagcttgagc 660

cattgtgttg atatttccga tgctattgcg gatcacaagg ttgagcatca acttaatcag 720

cgacaggttt tgttaaaaca agatattggt cttgctttac tagagtcgag ttctaataag 780

cctaacgctg agccacaaaa gtctggttta ggtttgattg aggctaaaga acagcaaatg 840

aacgctgctg ataattggca ttgtttactg ggccatcttg atgatagtta tcgttttgca 900

ctgagtattg gtcagtgtca gcaaataagt attgcagcag aagaagtgaa ttttaaagct 960

gttgttcgag cttcagctaa gactagctag 990<210> SEQ ID NO 19<211> COMPRIMENTO: 2652<212> TIPO: PRT

<400> SEQÜÊNCIA: 19

Met Ala Lys Lys Asn Thr Thr Ser Ile Lys His Ala Lys Asp Val Leu1 5 10 15

Ser Ser Asp Asp Gln Gln Leu Asn Ser Arg Leu Gln Glu Cys Pro Ile

20 25 30

Ala Ile Ile Gly Met Ala Ser Val Phe Ala Asp Ala Lys Asn Leu AspGln Phe Trp Asp Asn Ile Val Asp Ser Val Asp Ala Ile Ile Asp Val

50 55 60

Pro Ser Asp Arg Trp Asn Ile Asp Asp His Tyr Ser Ala Asp Lys Lys65 70 75 80

Ala Ala Asp Lys Thr Tyr Cys Lys Arg Gly Gly Phe Ile Pro Glu Leu

85 90 95

Asp Phe Asp Pro Met Glu Phe Gly Leu Pro Pro Asn Ile Leu Glu Leu

100 105 110

Thr Asp Ile Ala Gln Leu Leu Ser Leu Ile Val Ala Arg Asp Val Leu

115 120 125

Ser Asp Ala Gly Ile Gly Ser Asp Tyr Asp His Asp Lys Ile Gly Ile

130 135 140

Thr Leu Gly Val Gly Gly Gly Gln Lys Gln Ile Ser Pro Leu Thr Ser145 150 155 160

Arg Leu Gln Gly Pro Val Leu Glu Lys Val Leu Lys Ala Ser Gly Ile

165 170 175

Asp Glu Asp Asp Arg Ala Met Ile Ile Asp Lys Phe Lys Lys Ala Tyr

180 185 190

Ile Gly Trp Glu Glu Asn Ser Phe Pro Gly Met Leu Gly Asn Val Ile

195 200 205

Ala Gly Arg Ile Ala Asn Arg Phe Asp Phe Gly Gly Thr Asn Cys Val

210 215 220

Val Asp Ala Ala Cys Ala Gly Ser Leu Ala Ala Val Lys Met Ala Ile225 230 235 240

Ser Asp Leu Leu Glu Tyr Arg Ser Glu Val Met Ile Ser Gly Gly Val

245 250 255

Cys Cys Asp Asn Ser Pro Phe Met Tyr Met Ser Phe Ser Lys Thr Pro

260 265 270

Ala Phe Thr Thr Asn Asp Asp Ile Arg Pro Phe Asp Asp Asp Ser Lys

275 280 285

Gly Met Leu Val Gly Glu Gly Ile Gly Met Met Ala Phe Lys Arg Leu290 295 300Glu Asp Ala Glu Arg Asp Gly Asp Lys Ile Tyr Ser Val Leu Lys Gly305 310 315 320

Ile Gly Thr Ser Ser Asp Gly Arg Phe Lys Ser Ile Tyr Ala Pro Arg

325 330 335

Pro Asp Gly Gln Ala Lys Ala Leu Lys Arg Ala Tyr Glu Asp Ala Gly

340 345 350

Phe Ala Pro Glu Thr Cys Gly Leu Ile Glu Gly His Gly Thr Gly Thr

355 360 365

Lys Ala Gly Asp Ala Ala Glu Phe Ala Gly Leu Thr Lys His Phe Gly

370 375 380

Ala Ala Ser Asp Glu Lys Gln Tyr Ile Ala Leu Gly Ser Val Lys Ser385 390 395 400

Gln Ile Gly His Thr Lys Ser Ala Ala Gly Ser Ala Gly Met Ile Lys

405 410 415

Ala Ala Leu Ala Leu His His Lys Ile Leu Pro Ala Thr Ile His Ile

420 425 430

Asp Lys Pro Ser Glu Ala Leu Asp Ile Lys Asn Ser Pro Leu Tyr Leu

435 440 445

Asn Ser Glu Thr Arg Pro Trp Met Pro Arg Glu Asp Gly Ile Pro Arg

450 455 460

Arg Ala Gly Ile Ser Ser Phe Gly Phe Gly Gly Thr Asn Phe His Ile465 470 475 480

Ile Leu Glu Glu Tyr Arg Pro Gly His Asp Ser Ala Tyr Arg Leu Asn

485 490 495

Ser Val Ser Gln Thr Val Leu Ile Ser Ala Asn Asp Gln Gln Gly Ile

500 505 510

Val Ala Glu Leu Asn Asn Trp Arg Thr Lys Leu Ala Val Asp Ala Asp

515 520 525

His Gln Gly Phe Val Phe Asn Glu Leu Val Thr Thr Trp Pro Leu Lys

530 535 540

Thr Pro Ser Val Asn Gln Ala Arg Leu Gly Phe Val Ala Arg Asn Ala545 550 555 560Asn Glu Ala Ile Ala Met Ile Asp Thr Ala Leu Lys Gln Phe Asn Ala565 570 575

Asn Ala Asp Lys Met Thr Trp Ser Val Pro Thr Gly Val Tyr Tyr Arg580 585 590

Gln Ala Gly Ile Asp Ala Thr Gly Lys Val Val Ala Leu Phe Ser Gly595 600 605

Gln Gly Ser Gln Tyr Val Asn Met Gly Arg Glu Leu Thr Cys Asn Phe610 615 620

Pro Ser Met Met His Ser Ala Ala Ala Met Asp Lys Glu Phe Ser Ala625 630 635 640

Ala Gly Leu Gly Gln Leu Ser Ala Val Thr Phe Pro Ile Pro Val Tyr645 650 655

Thr Asp Ala Glu Arg Lys Leu Gln Glu Glu Gln Leu Arg Leu Thr Gln660 665 670

His Ala Gln Pro Ala Ile Gly Ser Leu Ser Val Gly Leu Phe Lys Thr675 680 685

Phe Lys Gln Ala Gly Phe Lys Ala Asp Phe Ala Ala Gly His Ser Phe690 695 700

Gly Glu Leu Thr Ala Leu Trp Ala Ala Asp Val Leu Ser Glu Ser Asp705 710 715 720

Tyr Met Met Leu Ala Arg Ser Arg Gly Gln Ala Met Ala Ala Pro Glu725 730 735

Gln Gln Asp Phe Asp Ala Gly Lys Met Ala Ala Val Val Gly Asp Pro740 745 750

Lys Gln Val Ala Val Ile Ile Asp Thr Leu Asp Asp Val Ser Ile Ala755 760 765

Asn Phe Asn Ser Asn Asn Gln Val Val Ile Ala Gly Thr Thr Glu Gln770 775 780

Val Ala Val Ala Val Thr Thr Leu Gly Asn Ala Gly Phe Lys Val Val785 790 795 800

Pro Leu Pro Val Ser Ala Ala Phe His Thr Pro Leu Val Arg His Ala805 810 815Gln Lys Pro Phe Ala Lys Ala Val Asp Ser Ala Lys Phe Lys Ala Pro

820 825 830

Ser Ile Pro Val Phe Ala Asn Gly Thr Gly Leu Val His Ser Ser Lys

835 840 845

Pro Asn Asp Ile Lys Lys Asn Leu Lys Asn His Met Leu Glu Ser Val

850 855 860

His Phe Asn Gln Glu Ile Asp Asn Ile Tyr Ala Asp Gly Gly Arg Val865 870 875 880

Phe Ile Glu Phe Gly Pro Lys Asn Val Leu Thr Lys Leu Val Glu Asn

885 890 895

Ile Leu Thr Glu Lys Ser Asp Val Thr Ala Ile Ala Val Asn Ala Asn

900 905 910

Pro Lys Gln Pro Ala Asp Val Gln Met Arg Gln Ala Ala Leu Gln Met

915 920 925

Ala Val Leu Gly Val Ala Leu Asp Asn Ile Asp Pro Tyr Asp Ala Val

930 935 940

Lys Arg Pro Leu Val Ala Pro Lys Ala Ser Pro Met Leu Met Lys Leu945 950 955 960

Ser Ala Ala Ser Tyr Val Ser Pro Lys Thr Lys Lys Ala Phe Ala Asp

965 970 975

Ala Leu Thr Asp Gly Trp Thr Val Lys Gln Ala Lys Ala Val Pro Ala

980 985 990

Val Val Ser Gln Pro Gln Val Ile Glu Lys Ile Val Glu Val Glu Lys

995 1000 1005

Ile Val Glu Arg Ile Val Glu Val Glu Arg Ile Val Glu Val Glu

1010 1015 1020

Lys Ile Val Tyr Val Asn Ala Asp Gly Ser Leu Ile Ser Gln Asn

1025 1030 1035

Asn Gln Asp Val Asn Ser Ala Val Val Ser Asn Val Thr Asn Ser

1040 1045 1050

Ser Val Thr His Ser Ser Asp Ala Asp Leu Val Ala Ser Ile Glu1055 1060 1065Arg Ser Val Gly Gln Phe Val Ala His Gln Gln Gln Leu Leu Asn

1070 1075 1080

Val His Glu Gln Phe Met Gln Gly Pro Gln Asp Tyr Ala Lys Thr

1085 1090 1095

Val Gln Asn Val Leu Ala Ala Gln Thr Ser Asn Glu Leu Pro Glu

1100 1105 1110

Ser Leu Asp Arg Thr Leu Ser Met Tyr Asn Glu Phe Gln Ser Glu

1115 1120 1125

Thr Leu Arg Val His Glu Thr Tyr Leu Asn Asn Gln Thr Ser Asn

1130 1135 1140

Met Asn Thr Met Leu Thr Gly Ala Glu Ala Asp Val Leu Ala Thr

1145 1150 1155

Pro Ile Thr Gln Val Val Asn Thr Ala Val Ala Thr Ser His Lys

1160 1165 1170

Val Val Ala Pro Val Ile Ala Asn Thr Val Thr Asn Val Val Ser

1175 1180 1185

Ser Val Ser Asn Asn Ala Ala Val Ala Val Gln Thr Val Ala Leu

1190 1195 1200

Ala Pro Thr Gln Glu Ile Ala Pro Thr Val Ala Thr Thr Pro Ala

1205 1210 1215

Pro Ala Leu Val Ala Ile Val Ala Glu Pro Val Ile Val Ala His

1220 1225 1230

Val Ala Thr Glu Val Ala Pro Ile Thr Pro Ser Val Thr Pro Val

1235 1240 1245

Val Ala Thr Gln Ala Ala Ile Asp Val Ala Thr Ile Asn Lys Val

1250 1255 1260

Met Leu Glu Val Val Ala Asp Lys Thr Gly Tyr Pro Thr Asp Met

1265 1270 1275

Leu Glu Leu Ser Met Asp Met Glu Ala Asp Leu Gly Ile Asp Ser

1280 1285 1290

Ile Lys Arg Val Glu Ile Leu Gly Ala Val Gln Glu Leu Ile Pro1295 1300 1305Asp Leu Pro Glu Leu Asn Pro Glu Asp Leu Ala Glu Leu Arg Thr

1310 1315 1320

Leu Gly Glu Ile Val Asp TYr Met Asn Ser Lys Ala Gln Ala Val

1325 1330 1335

Ala Pro Thr Thr Val Pro Val Thr Ser Ala Pro Val Ser Pro Ala

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Ser Ala Gly Ile Asp Leu Ala His Ile Gln Asn Val Met Leu Glu

1355 1360 1365

Val Val Ala Asp Lys Thr Gly Tyr Pro Thr Asp Met Leu Glu Leu

1370 1375 1380

Ser Met Asp Met Glu Ala Asp Leu Gly Ile Asp Ser Ile Lys Arg

1385 1390 1395

Val Glu Ile Leu Gly Ala Val Gln Glu Ile Ile Thr Asp Leu Pro

1400 1405 1410

Glu Leu Asn Pro Glu Asp Leu Ala Glu Leu Arg Thr Leu Gly Glu

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Ile Val Ser Tyr Met Gln Ser Lys Ala Pro Val Ala Glu Ser Ala

1430 1435 1440

Pro Val Ala Thr Ala Pro Val Ala Thr Ser Ser Ala Pro Ser Ile

1445 1450 1455

Asp Leu Asn His Ile Gln Thr Val Met Met Asp Val Val Ala Asp

1460 1465 1470

Lys Thr Gly Tyr Pro Thr Asp Met Leu Glu Leu Gly Met Asp Met

1475 1480 1485

Glu Ala Asp Leu Gly Ile Asp Ser Ile Lys Arg Val Glu Ile Leu

1490 1495 1500

Gly Ala Val Gln Glu Ile Ile Thr Asp Leu Pro Glu Leu Asn Pro

1505 1510 1515

Glu Asp Leu Ala Glu Leu Arg Thr Leu Gly Glu Ile Val Ser Tyr

1520 1525 1530

Met Gln Ser Lys Ala Pro Val Ala Glu Ser Ala Pro Val Ala Thr1535 1540 1545Ala Ser Val Ala Thr Ser Ser Ala Pro Ser Ile Asp Leu Asn His

1550 1555 1560

Ile Gln Thr Val Met Met Glu Val Val Ala Asp Lys Thr Gly Tyr

1565 1570 1575

Pro Val Asp Met Leu Glu Leu Ala Met Asp Met Glu Ala Asp Leu

1580 1585 1590

Gly Ile Asp Ser Ile Lys Arg Val Glu Ile Leu Gly Ala Val Gln

1595 1600 1605

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Glu Leu Arg Thr Leu Gly Glu Ile Val Ser Tyr Met Gln Ser Lys

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Ala Pro Thr Ser Val Thr Ser Ser Ala Pro Ser Ile Asp Leu Asp

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1760 1765 1770

Thr Ala Ala Ala Glu His Lys Ala Glu Phe Lys Pro Ala Pro Ser1775 1780 1785Ala Thr Val Ala Ile Ser Arg Leu Ser Ser Ile Ser Lys Ile Ser

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Gln Ser Gly Leu Asn Gly Leu Val Lys Thr Leu Ser His Glu Trp

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1970 1975 1980

Ala Glu Gln Val Ala Ser Leu Val Ser Asp Glu Leu Leu Asp Ala

1985 1990 1995Asn Thr Val Leu Thr Glu Val Gly Tyr Gln Gln Ala Gly Lys Gly

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Ala Ala Leu Lys Lys Ala Ala Met Gln Ser Leu Ile Thr Ala Gly

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Gln Ala Asn Arg Glu Ile Ala Gln Thr Leu Ser Ala Ile Thr Ala

2120 2125 2130

Ala Gly Gly Gln Ala Glu Tyr Val Ser Ala Asp Val Thr Asn Ala

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Ala Ser Val Gln Met Ala Val Ala Pro Ala Ile Ala Lys Phe Gly

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Ala Ile Thr Gly Ile Ile His Gly Ala Gly Val Leu Ala Asp Gln

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Phe Ile Glu Gln Lys Thr Leu Ser Asp Phe Glu Ser Val Tyr Ser

2180 2185 2190

Thr Lys Ile Asp Gly Leu Leu Ser Leu Leu Ser Val Thr Glu Ala

2195 2200 2205

Ser Asn Ile Lys Gln Leu Val Leu Phe Ser Ser Ala Ala Gly Phe

2210 2215 2220

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Leu Asn Lys Thr Ala Tyr Arg Phe Lys Ser Leu His Pro Gln Ala

2240 2245 2250

Gln Val Leu Ser Phe Asn Trp Gly Pro Trp Asp Gly Gly Met Val2255 2260 2265Thr Pro Glu Leu Lys Arg Met Phe Asp Gln Arg Gly Val Tyr Ile

2270 2275 2280

Ile Pro Leu Asp Ala Gly Ala Gln Leu Leu Leu Asn Glu Leu Ala

2285 2290 2295

Ala Asn Asp Asn Arg Cys Pro Gln Ile Leu Val Gly Asn Asp Leu

2300 2305 2310

Ser Lys Asp Ala Ser Ser Asp Gln Lys Ser Asp Glu Lys Ser Thr

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Ala Val Lys Lys Pro Gln Val Ser Arg Leu Ser Asp Ala Leu Val

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Tyr Ser Asn Arg Asp Cys Ala Leu Lys Tyr Val Gly Phe Glu Asp

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Asp Gly Lys Pro Val Phe His Tyr Ala Ala Thr Ile Leu Leu Ala

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Thr Gln Pro Leu Asn Ala Val Lys Val Glu Leu Pro Thr Leu Thr

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Glu Ser Val Asp Ser Asn Asn Lys Val Thr Asp Glu Ala Gln Ala2495 2500 2505Leu Tyr Ser Asn Gly Thr Leu Phe His Gly Glu Ser Leu Gln -Gly

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Ile Lys Gln Ile Leu Ser Cys Âsp Asp Lys Gly Leu Leu Leu Ala2525 2530 2535

Cys Gln Ile Thr Asp Val Ala Thr Ala Lys Gln Gly Ser Phe Pro

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Leu Ala Asp Asn Asn Ile Phe Ala Asn Asp Leu Val Tyr Gln Ala

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Glu Val Phe Tyr Leu Gln Leu Asn Val Val Glu His Asp Leu Leu2600 2605 2610

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<210> SEQ ID NO 20<211> COMPRIMENTO: 7959<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 20

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cgcgctatga tcatcgacaa atttaaaaaa gcctacatcg gctgggaaga gaactcattc 600

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ctgagcatgg acatggaagc tgacttaggt atcgactcaa tcaaacgtgt tgagatatta 3900

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ctacgcacgc ttggtgagat tgtcgattac atgaattcaa aagcccaggc tgtagctcct 4020

acaacagtac ctgtaacaag tgcacctgtt tcgcctgcat ctgctggtat tgatttagcc 4080

cacatccaaa acgtaatgtt agaagtggtt gcagacaaaa ccggttaccc aacagacatg 4140

ctagaactga gcatggatat ggaagctgac ttaggtattg attcaatcaa gcgtgtggaa 4200

atcttaggtg cagtacagga gatcataact gatttacctg agctaaaccc tgaagatctt 4260gctgaattac gcaccctagg tgaaatcgtt agttacatgc aaagcaaagc gccagtcgct 4320

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gcggaattta aaccggcgcc gagcgcaacc gttgctatct ctcgtctaag ctctatcagt 5400

aaaataagcc aagattgtaa aggtgctaac gccttaatcg tagctgatgg cactgataat 5460

gctgtgttac ttgcagacca cctattgcaa actggctgga atgtaactgc attgcaacca 5520

acttgggtag ctgtaacaac gacgaaagca tttaataagt cagtgaacct ggtgacttta 5580

aatggcgttg atgaaactga aatcaacaac attattactg ctaacgcaca attggatgca 5640

gttatctatc tgcacgcaag tagcgaaatt aatgctatcg aatacccaca agcatctaag 5700

caaggcctga tgttagcctt cttattagcg aaattgagta aagtaactca agccgctaaa 5760

gtgcgtggcg cctttatgat tgttactcag cagggtggtt cattaggttt tgatgatatc 5820

gattctgcta caagtcatga tgtgaaaaca gacctagtac aaagcggctt aaacggttta 5880

gttaagacac tgtctcacga gtgggataac gtattctgtc gtgcggttga tattgcttcg 5940

tcattaacgg ctgaacaagt tgcaagcctt gttagtgatg aactacttga tgctaacact 6000

gtattaacag aagtgggtta tcaacaagct ggtaaaggcc ttgaacgtat cacgttaact 6060

ggtgtggcta ctgacagcta tgcattaaca gctggcaata acatcgatgc taactcggta 6120

tttttagtga gtggtggcgc aaaaggtgta actgcacatt gtgttgctcg tatagctaaa 6180gaatatcagt ctaagttcat cttattggga cgttcaacgt tctcaagtga cgaaccgagc 6240

tgggcaagtg gtattactga tgaagcggcg ttaaagaaag cagcgatgca gtctttgatt 6300

acagcaggtg ataaaccaac acccgttaag atcgtacagc taatcaaacc aatccaagct 6360

aatcgtgaaa ttgcgcaaac cttgtctgca attaccgctg ctggtggcca agctgaatat 6420

gtttctgcag atgtaactaa tgcagcaagc gtacaaatgg cagtcgctcc agctatcgct 6480

aagttcggtg caatcactgg catcattcat ggcgcgggtg tgttagctga ccaattcatt 6540

gagcaaaaaa cactgagtga ttttgagtct gtttacagca ctaaaattga cggtttgtta 6600

tcgctactat cagtcactga agcaagcaac atcaagcaat tggtattgtt ctcgtcagcg 6660

gctggtttct acggtaaccc cggccagtct gattactcga ttgccaatga gatcttaaat 6720

aaaaccgcat accgctttaa atcattgcac ccacaagctc aagtattgag ctttaactgg 6780

ggtccttggg acggtggcat ggtaacgcct gagcttaaac gtatgtttga ccaacgtggt 6840

gtttacatta ttccacttga tgcaggtgca cagttattgc tgaatgaact agccgctaat 6900

gataaccgtt gtccacaaat cctcgtgggt aatgacttat ctaaagatgc tagctctgat 6960

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gctttagtaa ctaaaagtat caaagcgact aacagtagct ctttatcaaa caagactagt 7080

gctttatcag acagtagtgc ttttcaggtt aacgaaaacc actttttagc tgaccacatg 7140

atcaaaggca atcaggtatt accaacggta tgcgcgattg cttggatgag tgatgcagca 7200

aaagcgactt atagtaaccg agactgtgca ttgaagtatg tcggtttcga agactataaa 7260

ttgtttaaag gtgtggtttt tgatggcaat gaggcggcgg attaccaaat ccaattgtcg 7320

cctgtgacaa gggcgtcaga acaggattct gaagtccgta ttgccgcaaa gatctttagc 7380

ctgaaaagtg acggtaaacc tgtgtttcat tatgcagcga caatattgtt agcaactcag 7440

ccacttaatg ctgtgaaggt agaacttccg acattgacag aaagtgttga tagcaacaat 7500

aaagtaactg atgaagcaca agcgttatac agcaatggca ccttgttcca cggtgaaagt 7560

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ttttatctgc aacttaatgt tgttgagcat gatctattgg gttcacgcgg cagtaaagcc 7860

cgttgtgata ttcaattgat tgctgctgat atgcaattac ttgccgaagt gaaatcagcg 7920

caagtcagtg tcagtgacat tttgaacgat atgtcatga 7959

<210> SEQ ID NO 21

<211> COMPRIMENTO: 883<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 21

Met Thr Glu Leu Ala Val Ile Gly Met Asp Ala Lys Phe Ser Gly Gln

1 5 10 15

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Gly Asn Val Ser Arg Val Ser Thr Glu Ser Asn Val Ile Ser Asn Gly35 40 45

Glu Glu Gln Val Ile Thr Ala Met Thr Val Leu Asn Ser Val Ser Leu

50 55 60

Leu Ala Gln Thr Asn Gln Leu Asn Ile Ala Asp Ile Ala Val Leu Leu65 70 75 80

Ile Ala Asp Val Lys Ser Ala Asp Asp Gln Leu Val Val Gln Ile Ala85 90 95

Ser Ala Ile Glu Lys Gln Cys Ala Ser Cys Val Val Ile Ala Asp Leu

100 105 110

Gly Gln Ala Leu Asn Gln Val Ala Asp Leu Val Asn Asn Gln Asp Cys115 120 125

Pro Val Ala Val Ile Gly Met Asn Asn Ser Val Asn Leu Ser Arg His

130 135 140

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Val Gly Leu Leu Glu Val Ser Ala Val Ala Asp Ser Ala Ile Ala Leu225 230 235 240

Ser Glu Ser Gln Gly Leu Met Ser Ala Tyr His His Thr Gln Thr Leu

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His Thr Ala Leu Ser Ser Ala Arg Ser Val Thr Gly Glu Gly Gly Cys

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275 280 285

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290 295 300

Met Ser Arg Trp Arg Asn Ser Pro Phe Tyr Met Pro Val Asp Ala Arg305 310 315 320

Pro Trp Phe Pro His Ala Asp Gly Ser Ala His Ile Ala Ala Tyr Ser

325 330 335

Cys Val Thr Ala Asp Ser Tyr Cys His Ile Leu Leu Gln Glu Asn Val

340 345 350

Leu Gln Glu Leu Val Leu Lys Glu Thr Val Leu Gln Asp Asn Asp Leu

355 360 365

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370 375 380

Leu Arg Thr Asn Gly Tyr Phe Ala Ser Ser Glu Leu Ala Leu Ile Ile385 390 395 400

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420 425 430

Ile Ala Ala Asp Cys Tyr Ala Arg Asn Asp Thr Asn Lys Ala Tyr Ser

435 440 445

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450 455 460

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Gln Ala Ala Asn Ser Thr Gln Asn Gly Val Thr Phe Met Tyr Pro Gly

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515 520 525

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530 535 540

Ser Leu Lys Asp Thr Leu Leu Asn Pro Arg Ser Ile Ser Arg His Ser545 550 555 560

Phe Lys Glu Leu Lys Gln Leu Asp Leu Asp Leu Arg Gly Asn Leu Ala

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Asn Ile Ala Glu Ala Gly Val Gly Phe Ala Cys Val Phe Thr Lys Val

580 585 590

Phe Glu Glu Val Phe Ala Val Lys Ala Asp Phe Ala Thr Gly Tyr Ser

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Ala Thr Ile Glu Gln Val Glu Ile Ala Ser Ala Asp Glu Asp Arg Val

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725 730 735

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835 840 845

Arg Ala Ile Ala Lys Leu Ile Ser His Gly Val Asn Leu Asn Leu Asp

850 855 860

Ser Leu Phe Asn Gly Ser Ile Leu Val Lys Ala Gly His Ile Ala Asn865 870 875 880

Thr Asn Lys<210> SEQ ID NO 22<211> COMPRIMENTO: 2652<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 22

atgacggaat tagctgttat tggtatggat gctaaattta gcggacaaga caatattgac 60cgtgtggaac gcgctttcta tgaaggtgct tatgtaggta atgttagccg cgttagtacc 120

gaatctaatg ttattagcaa tggcgaagaa caagttatta ctgccatgac agttcttaac 180tctgtcagtc tactagcgca aacgaatcag ttaaatatag ctgatatcgc ggtgttgctg 240attgctgatg taaaaagtgc tgatgatcag cttgtagtcc aaattgcatc agcaattgaa 300aaacagtgtg cgagttgtgt tgttattgct gatttaggcc aagcattaaa tcaagtagct 360gatttagtta ataaccaaga ctgtcctgtg gctgtaattg gcatgaataa ctcggttaat 420ttatctcgtc atgatcttga atctgtaact gcaacaatca gctttgatga aaccttcaat 480ggttataaca atgtagctgg gttcgcgagt ttacttatcg cttcaactgc gtttgccaat 540gctaagcaat gttatatata cgccaacatt aagggcttcg ctcaatcggg cgtaaatgct 600

caatttaacg ttggaaacat tagcgatact gcaaagaccg cattgcagca agctagcata 660

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gttgagctat accatatgga tgttactcca cgtattaata ccaagatgta ttcaagctca 2280

tgttatttac cgattccaca acgcagcaaa gcgatttccc acagtattgc taaatgtttg 2340

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ttcattgaaa tgggtccagg tcgttcgtta tgtagctggg tagataagat cttagttaat 2460ggcgatggcg ataataaaaa gcaaagccaa catgtatctg ttcctgtgaa tgccaaaggc 2520accagtgatg aacttactta tattcgtgcg attgctaagt taattagtca tggcgtgaat 2580ttgaatttag atagcttgtt taacgggtca atcctggtta aagcaggcca tatagcaaac 2640acgaacaaat ag 2652

<210> SEQ ID NO 23

<211> COMPRIMENTO: 2011<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 23

Met Glu Asn Ile Ala Val Val Gly Ile Ala Asn Leu Phe Pro Gly Ser

1 5 10 15

Gln Ala Pro Asp Gln Phe Trp Gln Gln Leu Leu Glu Gln Gln Asp Cys

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Leu Lys Ala Val Leu His Pro Asp Phe Gln Leu Thr His Tyr Thr Ala

145 150 155 160

Pro Lys Lys Thr His Ala Asp Asn Ala Leu Val Ala Gly Tyr Pro Ala

165 170 175

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Asp Ala Ala Cys Ala Ser Ser Cys Tyr Ser Val Lys Leu Ala Cys Asp

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210 215 220

Ala Ala Asp Pro Met Phe Val Asn Met Gly Phe Ser Ile Phe Gln Ala225 230 235 240

Tyr Pro Ala Asn Asn Val His Ala Pro Phe Asp Gln Asn Ser Gln Gly

245 250 255

Leu Phe Ala Gly Glu Gly Ala Gly Met Met Val Leu Lys Arg Gln Ser

260 265 270

Asp Ala Val Arg Asp Gly Asp His Ile Tyr Ala Ile Ile Lys Gly Gly

275 280 285

Ala Leu Ser Asn Asp Gly Lys Gly Glu Phe Val Leu Ser Pro Asn Thr

290 295 300

Lys Gly Gln Val Leu Val Tyr Glu Arg Ala Tyr Ala Asp Ala Asp Val305 310 315 320

Asp Pro Ser Thr Val Asp Tyr Ile Glu Cys His Ala Thr Gly Thr Pro

325 330 335

Lys Gly Asp Asn Val Glu Leu Arg Ser Met Glu Thr Phe Phe Ser Arg

340 345 350

Val Asn Asn Lys Pro Leu Leu Gly Ser Val Lys Ser Asn Leu Gly His

355 360 365

Leu Leu Thr Ala Ala Gly Met Pro Gly Met Thr Lys Ala Met Leu Ala

370 375 380

Leu Gly Lys Gly Leu Ile Pro Ala Thr Ile Asn Leu Lys Gln Pro Leu385 390 395 400

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420 425 430

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500 505 510

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530 535 540

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565 570 575

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580 585 590

Gly Arg Val Asn Leu Thr Thr Gln Ile Glu Asp Ser Leu Leu Gln Gln

595 600 605

Gly Ile Asn Leu Thr Val Glu Gln Arg Glu Glu Leu Thr Asn Ile Ala

610 615 620

Lys Asp Gly Val Ala Ser Ala Ala Gln Leu Asn Gln Tyr Thr Ser Phe625 630 635 640

Ile Gly Asn Ile Met Ala Ser Arg Ile Ser Ala Leu Trp Asp Phe Ser

645 650 655

Gly Pro Ala Ile Thr Val Ser Ala Glu Glu Asn Ser Val Tyr Arg Cys

660 665 670

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675 680 685

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740 745 750

Ser Ser Gln Val Thr Ala Asp Gln Val Tyr Ala Arg Ile Asp Ala Val

755 760 765

Ser Phe Ala Pro Gly Ser Asn Ala Lys Ala Ile Thr Ile Ala Ala Asp

770 775 780

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Glu Ala His Ala Ser Gly Phe Ser Ala Glu Asn Asn Ala Glu Lys Thr

805 810 815

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820 825 830

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Ala Gly Phe Phe Thr Asp Glu Glu Leu Ser Asp Gly Lys Gly Val

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Ile His Asn Asp Lys Asp Lys Ala Glu Phe Ser Asn Ala Val Lys

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Phe Ser Ser Glu Lys Phe Leu Met Ile Glu Arg Ile Thr Lys Ile

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Asp Phe Lys Asn Leu Ser Val Met Ile Ser Glu Gln Asp Glu His

1535 1540 1545

Ser Asp Tyr Pro Val Thr Leu Pro Ser Asn Val Ala Leu Lys Ala

1550 1555 1560

Ile Thr Ala Pro Val Ala Ser Val Ala Pro Ala Ser Ser Pro Ala

1565 1570 1575

Asn Ser Ala Asp Leu Asp Glu Arg Gly Val Glu Pro Phe Lys Phe

1580 1585 1590

Pro Glu Arg Pro Leu Met Arg Val Glu Ser Asp Leu Ser Ala Pro

1595 1600 1605

Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Ile Lys His Phe Glu Ala Pro Ala

1610 1615 1620

Val Ala Gly His His Arg Val Pro Asn Gln Ala Pro Phe Thr Pro

1625 1630 1635

Trp His Met Phe Glu Phe Ala Thr Gly Asn Ile Ser Asn Cys Phe

1640 1645 1650

Gly Pro Asp Phe Asp Val Tyr Glu Gly Arg Ile Pro Pro Arg Thr

1655 1660 1665

Pro Cys Gly Asp Leu Gln Val Val Thr Gln Val Val Glu Val Gln1670 1675 1680

Gly Glu Arg Leu Asp Leu Lys Asn Pro Ser Ser Cys Val Ala Glu

1685 1690 1695

Tyr Tyr Val Pro Glu Asp Ala Trp Tyr Phe Thr Lys Asn Ser His

1700 1705 1710

Glu Asn Trp Met Pro Tyr Ser Leu Ile Met Glu Ile Ala Leu Gln

1715 1720 1725

Pro Asn Gly Phe Ile Ser Gly Tyr Met Gly Thr Thr Leu Lys Tyr

1730 1735 1740

Pro Glu Lys Asp Leu Phe Phe Arg Asn Leu Asp Gly Ser Gly Thr

1745 1750 1755

Leu Leu Lys Gln Ile Asp Leu Arg Gly Lys Thr Ile Val Asn Lys

1760 1765 1770

Ser Val Leu Val Ser Thr Ala Ile Ala Gly Gly Ala Ile Ile Gln

1775 1780 1785

Ser Phe Thr Phe Asp Met Ser Val Asp Gly Glu Leu Phe Tyr Thr

1790 1795 1800

Gly Lys Ala Val Phe Gly Tyr Phe Ser Gly Glu Ser Leu Thr Asn

1805 1810 1815

Gln Leu Gly Ile Asp Asn Gly Lys Thr Thr Asn Ala Trp Phe Val

1820 1825 1830

Asp Asn Asn Thr Pro Ala Ala Asn Ile Asp Val Phe Asp Leu Thr

1835 1840 1845

Asn Gln Ser Leu Ala Leu Tyr Lys Ala Pro Val Asp Lys Pro His

1850 1855 1860

Tyr Lys Leu Ala Gly Gly Gln Met Asn Phe Ile Asp Thr Val Ser

1865 1870 1875

Val Val Glu Gly Gly Gly Lys Ala Gly Val Ala Tyr Val Tyr Gly

1880 1885 1890

Glu Arg Thr Ile Asp Ala Asp Asp Trp Phe Phe Arg Tyr His Phe

1895 1900 1905

His Gln Asp Pro Val Met Pro Gly Ser Leu Gly Val Glu Ala IleIle Glu Leu Met Gln Thr Tyr Ala Leu Lys Asn Asp Leu Gly Gly

Lys Phe Ala Asn Pro Arg Phe Ile Ala Pro Met Thr Gln Val Asp

Trp Lys Tyr Arg Gly Gln Ile Thr Pro Leu Asn Lys Gln Met Ser

Leu Asp Val His Ile Thr Glu Ile Val Asn Asp Ala Gly Glu Val

Tyr Glu Val Lys Asn Ile Val Leu Ser Ile Val Glu Ala

<210> SEQ ID NO 24<211> COMPRIMENTO: 6036<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 24

atggaaaata ttgcagtagt aggtattgct aatttgttcc cgggctcaca agcaccggat 60

caattttggc agcaattgct tgaacaacaa gattgccgca gtaaggcgac cgctgttcaa 120

atgggcgttg atcctgctaa atataccgcc aacaaaggtg acacagataa attttactgt 180

gtgcacggcg gttacatcag tgatttcaat tttgatgctt caggttatca actcgataat 240

gattatttag ccggtttaga tgaccttaat caatgggggc tttatgttac gaaacaagcc 300

cttaccgatg cgggttattg gggcagtact gcactagaaa actgtggtgt gattttaggt 360

aatttgtcat tcccaactaa atcatctaat cagctgttta tgcctttgta tcatcaagtt 420

gttgataatg ccttaaaggc ggtattacat cctgattttc aattaacgca ttacacggca 480

ccgaaaaaaa cacatgctga caatgcatta gtagcaggtt atccagctgc attgatcgcg 540

caagcggcgg gtcttggtgg ttcacatttt gcactggatg cggcttgtgc ttcatcttgt 600

tatagcgtta agttagcgtg tgattacctg catacgggta aagccaacat gatgcttgct 660

ggtgcggtat ctgcagcaga tcctatgttc gtaaatatgg gtttctcgat attccaagct 720

tacccagcta acaatgtaca tgccccgttt gaccaaaatt cacaaggtct atttgccggt 780

gaaggcgcgg gcatgatggt attgaaacgt caaagtgatg cagtacgtga tggtgatcat 840atttacgcca ttattaaagg cggcgcatta tcgaatgacg gtaaaggcga gtttgtatta 900

agcccgaaca ccaagggcca agtattagta tatgaacgtg cttatgccga tgcagatgtt 960

gacccgagta cagttgacta tattgaatgt catgcaacgg gcacacctaa gggtgacaat 1020

gttgaattgc gttcgatgga aacctttttc agtcgcgtaa ataacaaacc attactgggc 1080

tcggttaaat ctaaccttgg tcatttgtta actgccgctg gtatgcctgg catgaccaaa 1140

gctatgttag cgctaggtaa aggtcttatt cctgcaacga ttaacttaaa gcaaccactg 1200

caatctaaaa acggttactt tactggcgag caaatgccaa cgacgactgt gtcttggcca 1260

acaactccgg gtgccaaggc agataaaccg cgtaccgcag gtgtgagcgt atttggtttt 1320

ggtggcagca acgcccattt ggtattacaa cagccaacgc aaacactcga gactaatttt 1380

agtgttgcta aaccacgtga gcctttggct attattggta tggacagcca ttttggtagt 1440

gccagtaatt tagcgcagtt caaaacctta ttaaataata atcaaaatac cttccgtgaa 1500

ttaccagaac aacgctggaa aggcatggaa agtaacgcta acgtcatgca gtcgttacaa 1560

ttacgcaaag cgcctaaagg cagttacgtt gaacagctag atattgattt cttgcgtttt 1620

aaagtaccgc ctaatgaaaa agattgcttg atcccgcaac agttaatgat gatgcaagtg 1680

gcagacaatg ctgcgaaaga cggaggtcta gttgaaggtc gtaatgttgc ggtattagta 1740

gcgatgggca tggaactgga attacatcag tatcgtggtc gcgttaatct aaccacccaa 1800

attgaagaca gcttattaca gcaaggtatt aacctgactg ttgagcaacg tgaagaactg 1860

accaatattg ctaaagacgg tgttgcctcg gctgcacagc taaatcagta tacgagtttc 1920

attggtaata ttatggcgtc acgtatttcg gcgttatggg atttttctgg tcctgctatt 1980

20 accgtatcgg ctgaagaaaa ctctgtttat cgttgtgttg aattagctga aaatctattt 2040

caaaccagtg atgttgaagc cgttattatt gctgctgttg atttgtctgg ttcaattgaa 2100

aacattactt tacgtcagca ctacggtcca gttaatgaaa agggatctgt aagtgaatgt 2160

ggtccggtta atgaaagcag ttcagtaacc aacaatattc ttgatcagca acaatggctg 2220

gtgggtgaag gcgcagcggc tattgtcgtt aaaccgtcat cgcaagtcac tgctgaccaa 2280

25 gtttatgcgc gtattgatgc ggtgagtttt gcccctggta gcaatgcgaa agcaattacg 2340

attgcagcgg ataaagcatt.aacacttgct ggtatcagtg ctgctgatgt agctagtgtt 2400

gaagcacatg caagtggttt tagtgccgaa aataatgctg aaaaaaccgc gttaccgact 2460

ttatacccaa gcgcaagtat cagttcggtg aaagccaata ttggtcatac gtttaatgcc 2520

tcgggtatgg cgagtattat taaaacggcg ctgctgttag atcagaatac gagtcaagat 2580

30 cagaaaagca aacatattgc tattaacggt ctaggtcgtg ataacagctg cgcgcatctt 2640

atcttatcga gttcagcgca agcgcatcaa gttgcaccag cgcctgtatc tggtatggcc 2700

aagcaacgcc cacagttagt taaaaccatc aaactcggtg gtcagttaat tagcaacgcg 2760attgttaaca gtgcgagttc atctttacac gctattaaag cgcagtttgc cggtaagcac 2820

ttaaacaaag ttaaccagcc agtgatgatg gataacctga agccccaagg tattagcgct 2880

catgcaacca atgagtatgt ggtgactgga gctgctaaca ctcaagcttc taacattcaa 2940

gcatctcatg ttcaagcgtc aagtcatgca caagagatag caccaaacca agttcaaaat 3000

atgcaagcta cagcagccgc tgtaagttca cccctttctc aacatcaaca cacagcgcag 3060

cccgtagcgg caccgagcgt tgttggagtg actgtgaaac ataaagcaag taaccaaatt 3120

catcagcaag cgtctacgca taaagcattt ttagaaagtc gtttagctgc acagaaaaac 3180

ctatcgcaac ttgttgaatt gcaaaccaag ctgtcaatcc aaactggtag tgacaataca 3240

tctaacaata ctgcgtcaac aagcaataca gtgctaacaa atcctgtatc agcaacgcca 3300

ttaacacttg tgtctaatgc gcctgtagta gcgacaaacc taaccagtac agaagcaaaa 3360

gcgcaagcag ctgctacaca agctggtttt cagataaaag gacctgttgg ttacaactat 3420

ccaccgctgc agttaattga acgttataat aaaccagaaa acgtgattta cgatcaagct 3480

gatttggttg aattcgctga aggtgatatt ggtaaggtat ttggtgctga atacaatatt 3 540

attgatggct attcgcgtcg tgtacgtctg ccaacctcag attacttgtt agtaacacgt 3600

gttactgaac ttgatgccaa ggtgcatgaa tacaagaaat catacatgtg tactgaatat 3660

gatgtgcctg ttgatgcacc gttcttaatt gatggtcaga tcccttggtc tgttgccgtc 3720

gaatcaggcc agtgtgattt gatgttgatt tcatatatcg gtattgattt ccaagcgaaa 3780

ggcgaacgtg tttaccgttt acttgattgt gaattaactt tccttgaaga gatggctttt 3840

ggtggcgata ctttacgtta cgagatccac attgattcgt atgcacgtaa cggcgagcaa 3900

ttattattct tcttccatta cgattgttac gtaggggata agaaggtact tatcatgcgt 3960

aatggttgtg ctggtttctt tactgacgaa gaactttctg atggtaaagg cgttattcat 4020

aacgacaaag acaaagctga gtttagcaat gctgttaaat catcattcac gccgttatta 4080

caacataacc gtggtcaata cgattataac gacatgatga agttggttaa tggtgatgtt 4140

gccagttgtt ttggtccgca atatgatcaa ggtggccgta atccatcatt gaaattctcg 4200

tctgagaagt tcttgatgat tgaacgtatt accaagatag acccaaccgg tggtcattgg 4260

ggactaggcc tgttagaagg tcagaaagat ttagaccctg agcattggta tttcccttgt 4320

cactttaaag gtgatcaagt aatggctggt tcgttgatgt cggaaggttg tggccaaatg 4380

gcgatgttct tcatgctgtc tcttggtatg cataccaatg tgaacaacgc tcgtttccaa 4440

ccactaccag gtgaatcaca aacggtacgt tgtcgtgggc aagtactgcc acagcgcaat 4500

accttaactt accgtatgga agttactgcg atgggtatgc atccacagcc attcatgaaa 4560

gctaatattg atattttgct tgacggtaaa gtggttgttg atttcaaaaa cttgagcgtg 4620

atgatcagcg aacaagatga gcattcagat taccctgtaa cactgccgag taatgtggcg 4680cttaaagcga ttactgcacc tgttgcgtca gtagcaccag catcttcacc cgctaacagc 4740

gcggatctag acgaacgtgg tgttgaaccg tttaagtttc ctgaacgtcc gttaatgcgt 4800

gttgagtcag acttgtctgc accgaaaagc aaaggtgtga caccgattaa gcattttgaa 4860

gcgcctgctg ttgctggtca tcatagagtg cctaaccaag caccgtttac accttggcat 4920

atgtttgagt ttgcgacggg taatatttct aactgtttcg gtcctgattt tgatgtttat 4980

gaaggtcgta ttccacctcg tacaccttgt ggcgatttac aagttgttac tcaggttgta 5040

gaagtgcagg gcgaacgtct tgatcttaaa aatccatcaa gctgtgtagc tgaatactat 5100

gtaccggaag acgcttggta ctttactaaa aacagccatg aaaactggat gccttattca 5160

ttaatcatgg aaattgcatt gcaaccaaat ggctttattt ctggttacat gggcacgacg 5220

cttaaatacc ctgaaaaaga tctgttcttc cgtaaccttg atggtagcgg cacgttatta 5280

aagcagattg atttacgcgg caagaccatt gtgaataaat cagtcttggt tagtacggct 5340

attgctggtg gcgcgattat tcaaagtttc acgtttgata tgtctgtaga tggcgagcta 5400

ttttatactg gtaaagctgt atttggttac tttagtggtg aatcactgac taaccaactg 5460

ggcattgata acggtaaaac gactaatgcg tggtttgttg ataacaatac ccccgcagcg 5520

aatattgatg tgtttgattt aactaatcag tcattggctc tgtataaagc gcctgtggat 5580

aaaccgcatt ataaattggc tggtggtcag atgaacttta tcgatacagt gtcagtggtt 5640

gaaggcggtg gtaaagcggg cgtggcttat gtttatggcg aacgtacgat tgatgctgat 5700

gattggttct tccgttatca cttccaccaa gatccggtga tgccaggttc attaggtgtt 5760

gaagctatta ttgagttgat gcagacctat gcgcttaaaa atgatttggg tggcaagttt 5820

gctaacccac gtttcattgc gccgatgacg caagttgatt ggaaataccg tgggcaaatt 5880

acgccgctga ataaacagat gtcactggac gtgcatatca ctgagatcgt gaatgacgct 5940

ggtgaagtgc gaatcgttgg tgatgcgaat ctgtctaaag atggtctgcg tatttatgaa 6000

gttaaaaaca tcgttttaag tattgttgaa gcgtaa 6036

<210> SEQ ID NO 25<211> COMPRIMENTO: 538<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 25

Met Ser Ser Leu Gly Phe Asn Asn Asn Asn Ala Ile Asn Trp Ala Trp

1 5 10 15

Lys Val Asp Pro Ala Ser Val His Thr Gln Asp Ala Glu Ile Lys Ala20 25 30Ala Leu Met Asp Leu Thr Lys Pro Leu Tyr Val Ala Asn Asn Ser Gly

35 40 45

Val Thr Gly Ile Ala Asn His Thr Ser Val Ala Gly Ala Ile Ser Asn

50 55 60

Asn Ile Asp Val Asp Val Leu Ala Phe Ala Gln Lys Leu Asn Pro Glu65 70 75 80

Asp Leu Gly Asp Asp Ala Tyr Lys Lys Gln His Gly Val Lys Tyr Ala

85 90 95

Tyr His Gly Gly Ala Met Ala Asn Gly Ile Ala Ser Val Glu Leu Val

100 105 110

Val Ala Leu Gly Lys Ala Gly Leu Leu Cys Ser Phe Gly Ala Ala Gly

115 120 125

Leu Val Pro Asp Ala Val Glu Asp Ala Ile Arg Arg Ile Gln Ala Glu

130 135 140

Leu Pro Asn Gly Pro Tyr Ala Val Asn Leu Ile His Ala Pro Ala Glu145 150 155 160

Glu Ala Leu Glu Arg Gly Ala Val Glu Arg Phe Leu Lys Leu Gly Val

165 170 175

Lys Thr Val Glu Ala Ser Ala Tyr Leu Gly Leu Thr Glu His Ile Val

180 185 190

Trp Tyr Arg Ala Ala Gly Leu Thr Lys Asn Ala Asp Gly Ser Val Asn

195 200 205

Ile Gly Asn Lys Val Ile Ala Lys Val Ser Arg Thr Glu Val Gly Arg

210 215 220

Arg Phe Met Glu Pro Ala Pro Gln Lys Leu Leu Asp Lys Leu Leu Glu225 230 235 240

Gln Asn Lys Ile Thr Pro Glu Gln Ala Ala Leu Ala Leu Leu Val Pro

245 250 255

Met Ala Asp Asp Ile Thr Gly Glu Ala Asp Ser Gly Gly His Thr Asp

260 265 270

Asn Arg Pro Phe Leu Thr Leu Leu Pro Thr Ile Ile Gly Leu Arg Asp275 280 285Glu Val Gln Ala Lys Tyr Asn Phe Ser Pro Ala Leu Arg Val Gly Ala

290 295 300

Gly Gly Gly Ile Gly Thr Pro Glu Ala Ala Leu Ala Ala Phe Asn Met305 310 315 320

Gly Ala Ala Tyr Ile Val Leu Gly Ser Val Asn Gln Ala Cys Val Glu

325 330 335

Ala Gly Ala Ser Glu Tyr Thr Arg Lys Leu Leu Ser Thr Val Glu Met

340 345 350

Ala Asp Val Thr Met Ala Pro Ala Ala Asp Met Phe Glu Met Gly Val

355 360 365

Lys Leu Gln Val Leu Lys Arg Gly Ser Met Phe Ala Met Arg Ala Lys

370 375 380

Lys Leu Tyr Asp Leu Tyr Val Ala Tyr Asp Ser Ile Glu Asp Ile Pro385 390 395 400

Ala Ala Glu Arg Glu Lys Ile Glu Lys Gln Ile Phe Arg Ala Asn Leu

405 410 415

Asp Glu Ile Trp Asp Gly Thr Ile Ala Phe Phe Thr Glu Arg Asp Pro

420 425 430

Glu Met Leu Ala Arg Ala Thr Ser Ser Pro Lys Arg Lys Met Ala Leu

435 440 445

Ile Phe Arg Trp Tyr Leu Gly Leu Ser Ser Arg Trp Ser Asn Thr Gly

450 455 460

Glu Lys Gly Arg Glu Met Asp Tyr Gln Ile Trp Ala Gly Pro Ser Leu465 470 475 480

Gly Ala Phe Asn Ser Trp Val Lys Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Tyr Thr

485 490 495

Arg Arg Gly Ala Val Asp Val Ala Leu His Met Leu Lys Gly Ala Ala

500 505 510

Tyr Leu Gln Arg Val Asn Gln Leu Lys Leu Gln Gly Val Ser Leu Ser

515 520 525

Thr Glu Leu Ala Ser Tyr Arg Thr Ser Asp530 535<210> SEQ ID NO 26<211> COMPRIMENTO: 1617<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 26

atgtcgagtt taggttttaa caataacaac gcaattaact gggcttggaa agtagatcca 60

gcgtcagttc atacacaaga tgcagaaatt aaagcagctt taatggatct aactaaacct 120

ctctatgtgg cgaataattc aggcgtaact ggtatagcta atcatacgtc agtagcaggt 180

gcgatcagca ataacatcga tgttgatgta ttggcgtttg cgcaaaagtt aaacccagaa 240

gatctgggtg atgatgctta caagaaacag cacggcgtta aatatgctta tcatggcggt 300

gcgatggcaa atggtattgc ctcggttgaa ttggttgttg cgttaggtaa agcagggctg 360

ttatgttcat ttggtgctgc aggtctagtg cctgatgcgg ttgaagatgc aattcgtcgt 420

attcaagctg aattaccaaa tggcccttat gcggttaact tgatccatgc accagcagaa 480

gaagcattag agcgtggcgc ggttgaacgt ttcctaaaac ttggcgtcaa gacggtagag 540

gcttcagctt accttggttt aactgaacac attgtttggt atcgtgctgc tggtctaact 600

aaaaacgcag atggcagtgt taatatcggt aacaaggtta tcgctaaagt atcgcgtacc 660

gaagttggtc gccgctttat ggaacctgca ccgcaaaaat tactggataa gttattagaa 720

caaaataaga tcacccctga acaagctgct ttagcgttgc ttgtacctat ggctgatgat 780

attactgggg aagcggattc tggtggtcat acagataacc gtccgttttt aacattatta 840

ccgacgatta ttggtctgcg tgatgaagtg caagcgaagt ataacttctc tcctgcatta 900

cgtgttggtg ctggtggtgg tatcggaacg cctgaagcag cactcgctgc atttaacatg 960

ggcgcggctt atatcgttct gggttctgtg aatcaggcgt gtgttgaagc gggtgcatct 1020

gaatatactc gtaaactgtt atcgacagtt gaaatggctg atgtgactat ggcacctgct 1080

gcagatatgt ttgaaatggg tgtgaagctg caagtattaa aacgcggttc tatgttcgcg 1140

atgcgtgcga agaaactgta tgacttgtat gtggcttatg actcgattga agatatccca 1200

gctgctgaac gtgagaagat tgaaaaacaa atcttccgtg caaacctaga cgagatttgg 1260

gatggcacta tcgctttctt tactgaacgc gatccagaaa tgctagcccg tgcaacgagt 1320

agtcctaáac gtaaaatggc acttatcttc cgttggtatc ttggcctttc ttcacgctgg 1380

tcaaacacag gcgagaaggg acgtgaaatg gattatcaga tttgggcagg cccaagttta 1440

ggtgcattca acagctgggt gaaaggttct taccttgaag actatacccg ccgtggcgct 1500

gtagatgttg ctttgcatat gcttaaaggt gctgcgtatt tacaacgtgt aaaccagttg 1560

aaattgcaag gtgttagctt aagtacagaa ttggcaagtt atcgtacgag tgattaa 1617<210> SEQ ID NO 27<211> COMPRIMENTO: 35<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 27

ttcgagctcg catatggtac agcttaaaac ctatg 35

<210> SEQ ID NO 28<211> COMPRIMENTO: 7959<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 28

atggctaaga agaacactac tagtattaag cacgctaagg atgtcctttc aagtgatgac 60

caacaactca acagcagatt gcaagagtgc cctattgcta ttatcggtat ggctagtgtg 120ttcgctgatg ctaagaacct agatcaattc tgggataaca ttgttgattc agtggatgct 180attatcgacg ttccttcaga taggtggaat atcgacgatc actactctgc cgacaagaag 240gccgctgata agacatactg caaacgtggt ggattcattc cagaattgga tttcgaccca 300atggaatttg gacttccacc taacattctg gagcttactg atattgctca actactgtcc 360ctcattgttg ctagggatgt tctctccgat gccggaatag gttctgatta cgatcacgac 420aagattggaa ttacccttgg agttggcggt ggtcagaagc aaatttcacc cttgacttct 480aggctgcaag gaccggtgct tgagaaggtg ttgaaggcat ctggaattga tgaggatgat 540agagcaatga taatcgacaa attcaagaag gcttacatag ggtgggagga gaatagtttc 600cctgggatgc taggaaacgt gattgccggt agaattgcca ataggttcga tttcggcgga 660actaactgcg tcgttgatgc tgcgtgcgct ggtagtcttg ctgctgttaa gatggcaatt 720tcagatttgc tggagtatcg ttcagaagta atgatctccg gtggagtttg ttgcgataat 780agtcccttca tgtacatgag tttctcgaag actcccgcat· tcacaactaa cgacgatatt 840aggccattcg atgatgacag caaaggaatg ctcgtgggag aagggattgg aatgatggct 900ttcaaacgac tggaggatgc tgaaagggat ggtgataaga tatactccgt gctgaaagga 960attggtacta gctcagatgg cagattcaag tctatatatg cacctaggcc agatggccaa 1020

gctaaggctc ttaagagggc atacgaagac gccggattcg ctcctgagac ctgcgggtta 1080atagagggcc acggaactgg cacgaaggct ggagacgctg ctgaatttgc tggcctaaca 1140aagcactttg gcgcagcgtc cgatgagaag cagtacatcg cactcgggtc agtcaagtcc 1200

caaattggcc atacaaagtc tgccgctggg tcagctggaa tgattaaggc tgcactcgcg 1260

cttcatcaca agatcctccc ggcgaccata cacattgata agccttctga ggcgctcgat 1320

attaagaaca gtcccttata cctgaatagt gaaactagac cgtggatgcc aagggaagac 1380

gggattccga gacgtgctgg gattagctct ttcggatttg gcgggacaaa ctttcacata 1440

atcctcgaag agtaccgtcc tgggcatgat tctgcctacc gtcttaatag tgtttctcag 1500

actgttctta tttctgctaa cgatcagcaa ggaattgttg ccgagcttaa caattggaga 1560

actaaactcg ctgttgatgc tgaccaccaa ggattcgtat tcaacgaact tgttaccaca 1620

tggcctctga agactccttc agtcaatcag gcccgcttag gtttcgttgc tagaaacgcc 1680

aacgaggcga ttgctatgat agacactgcg cttaagcagt ttaacgctaa cgctgataag 1740

atgacctgga gtgtgccaac aggagtctac tatcgtcagg ccggaattga cgcaactggg 1800

aaggtggttg ctctgttcag tggtcaaggg tcacagtatg tcaacatggg tcgtgaactg 1860

acctgtaact tcccatctat gatgcactca gcagccgcaa tggataagga gtttagtgct 1920

gccggactgg gtcaactttc tgctgtcacg tttcctatcc cagtatatac cgacgctgag 1980

agaaagctac aagaagagca gctcagactc acccaacatg cacaacctgc cattggatct 2040

ctgtctgtcg gtttgtttaa gacctttaaa caggctggtt tcaaagccga tttcgccgct 2100

ggtcattcct ttggcgagct taccgcccta tgggctgctg atgttctttc tgagtctgat 2160

tacatgatgt tggctagatc cagaggtcaa gcaatggcag cacctgagca acaggacttt 2220

gatgccggga agatggctgc ggtggttgga gacccaaagc aagtggcggt tattatcgac 2280

acattggacg atgtttccat tgcaaacttt aacagtaaca atcaagtagt aatcgctggc 2340

actaccgaac aagtggcagt tgctgtcacc actttgggaa acgctgggtt taaagttgtc 2400

cctctgccag tttcagccgc attccacact ccactggtcc gccacgcaca gaaaccattc 2460

gccaaagctg tcgattctgc taagtttaag gctcctagta tccctgtgtt tgctaacggt 2520

actggtttgg tgcacagtag caagccaaat gacatcaaga agaacctgaa gaaccacatg 2580

ctagagtccg ttcactttaa ccaggagatt gataacatct acgctgatgg agggagggtg 2640

ttcattgaat ttggcccgaa gaatgtcctt acaaagctgg tggagaatat cctcactgag 2700

aaatctgacg tgaccgccat tgctgtgaac gctaacccaa agcaaccagc cgatgtgcaa 2760

atgagacagg cagctctgca aatggctgtg ttgggtgtgg ctcttgataa catcgaccct 2820

tacgatgccg tgaaacggcc cttggttgct ccaaaggcaa gccctatgtt gatgaagctg 2880

agtgccgctt cttatgtcag ccctaagact aagaaggcgt tcgccgatgc tctgaccgat 2940

gggtggactg ttaagcaagc taaagctgtt cctgctgttg taagccaacc acaagtcatt 3000

gagaagatag ttgaggtcga gaagatcgtg gagcgtatcg tggaagttga acggattgtc 3060gaagtcgaga agattgtcta cgtgaacgca gatggtagtc taattagtca gaataaccag 3120

gatgttaata gtgccgttgt gagtaatgtt acaaatagtt cagttacaca tagttcggat 3180

gctgacttgg tagcatctat cgagaggtca gtgggccagt ttgttgcaca ccagcaacag 3240

ctcttaaatg tccatgagca gtttatgcaa ggacctcagg actacgctaa gaccgttcag 3300

aatgtactcg cagctcaaac aagtaacgag ttgccagagt cgcttgatag aactctgtct 3360

atgtacaatg aatttcaaag cgaaactctt agggtgcatg agacatactt gaataaccag 3420

acatcgaata tgaacactat gcttacggga gcagaagctg atgtgctcgc aacgccaatc 3480

acacaagtcg tgaacactgc tgttgctacc agtcataagg tcgtggcccc agttatcgca 3540

aacactgtga ctaacgttgt cagttcagtg agtaataacg ccgctgttgc ggtgcaaacc 3 600

gttgcacttg ctcctactca agagatagcg ccaaccgtgg ccacaactcc ggctcctgca 3660

ttggttgcca tagttgctga acccgtgatt gttgcccatg ttgcaaccga agtggctcct 3720

attacaccca gcgtcacacc tgtcgttgca acccaggctg ctattgatgt ggctactatt 3780

aacaaggtca tgcttgaggt tgtggccgat aagactggct atcctactga catgcttgag 3 840

ttatctatgg acatggaggc tgatctcggt attgatagca taaaaagagt ggaaattctc 3900

ggtgctgtac aagaactcat ccctgatctg cctgagctta atccagaaga ccttgctgag 3960

ttgagaaccc taggtgagat cgtggactac atgaactcca aagcacaagc cgttgcacca 4020

accacagttc ccgtgacttc ggcacccgtg agcccagcgt ctgccggaat cgacctcgcg 4080

cacatccaga acgtgatgct agaggttgtg gctgataaga cagggtatcc gacagatatg 4140

ctggaattgt ctatggatat ggaagctgat ttgggaatcg acagtattaa gcgagtggag 4200

atattgggag cagttcagga gattatcacg gatctccctg agttgaatcc agaagacctt 4260

gctgagttga ggacgttggg agaaatcgtt agctatatgc aatctaaggc accagttgct 4320

gaatcagcac ccgttgccac tgcacccgtt gccacctcat ccgcaccatc tattgatttg 4380

aatcacattc aaactgtcat gatggatgtt gtggccgaca agacaggata ccctactgac 4440

atgcttgagc ttggaatgga tatggaagca gaccttggaa tagactccat aaaacgagtt 4500

gagatattgg gagctgtcca ggaaatcatt actgaccttc ccgagttgaa cccagaggat 4560

ctcgccgaac tcagaaccct tggcgaaata gtttcttata tgcaatcgaa ggctcctgtc 4620

gctgagtccg caccagttgc aacagcgtcc gtggcaacct catccgcgcc ctcgatcgat 4680

ctcaatcaca tacaaactgt gatgatggag gtggttgctg ataagaccgg ttatcccgtg 4740

gacatgcttg agttggcaat ggatatggag gccgacctcg gaatcgactc tattaagagg 4800

gtggaaattc ttggcgcagt tcaggaaatt ataacagact tacccgaact caacccagag 4860

gacttggccg agttgcggac tcttggtgag atcgtttcct acatgcaatc taaggcacca 4920

gtcgccgaag ctccagcagt cccagttgcc gtagagtcgg ctccaacctc tgttaccagc 4980tctgctccta gtatcgactt agaccacatt cagaatgtta tgatggatgt tgttgctgat 5040

aagaccggtt accctgccaa tatgctggaa ttggctatgg atatggaggc agacttgggg 5100

atcgactcta taaaaagagt ggagatactc ggtgctgtgc aagaaattat aactgacctt 5160

ccagaactca accctgagga ccttgccgaa ttacgcaccc tcgaagagat cgtcacttac 5220

atgcaatcca aagcaagtgg agttactgtt aatgtcgtag catctccaga gaacaatgcc 5280

gtgtcagatg ctttcatgca atctaatgtc gccaccatca ctgccgccgc agaacacaag 5340

gccgagttca aacctgcgcc tagtgccact gttgccatct cacgactatc tagcataagc 5400

aagattagcc aagattgcaa aggtgctaac gctctgattg tggcagacgg tactgacaac 5460

gctgtactcc ttgctgacca cttactgcaa acaggctgga atgttacggc ccttcaaccc 5520

acatgggtcg ctgtaactac cactaaagcc tttaacaaat ctgtaaacct tgttaccctc 5580

aatggtgtgg atgagactga aattaataac attataactg caaacgcaca actcgacgct 5640

gtcatatact tacatgcttc ctctgagatt aacgccatcg aatatccgca agcctctaaa 5700

cagggtctta tgcttgcatt ccttctcgcc aaattatcca aagtaactca ggcagctaaa 5760

gtgagaggtg ccttcatgat cgtgactcag caaggtggta gcttgggctt cgatgatatt 5820

gactcggcca cgtcgcatga tgttaagaca gatttggttc agtctggcct caatggactc 5880

gtcaagactc taagccatga atgggataac gtattctgtc gcgcagttga cattgcctct 5940

tcgctaactg ccgagcaagt ggcttcactt gtttccgacg agcttcttga tgccaacaca 6000

gtcttgaccg aagtgggata ccaacaggct gggaaaggat tggagaggat tacactcaca 6060

ggcgtagcaa ctgattcata cgcacttact gctgggaaca atatagatgc caatagcgta 6120

tttctagtgt ctggaggtgc taaaggagtg acagctcact gcgtagcccg aatcgcaaag 6180

gagtatcagt caaagtttat ccttctcggt agatcaacct tcagctcaga tgagccctct 6240

tgggccagcg ggattacgga tgaggccgca ttgaagaaag ccgcgatgca atctttgata 6300

accgctggag acaagcccac acctgttaag attgttcagc ttatcaagcc cattcaggcc 6360

aatagggaaa ttgcccaaac cctgagcgca attactgctg ctggaggtca ggctgagtat 6420

gtgagcgcag acgttaccaa tgctgcgtcc gtgcaaatgg cagtggctcc agctatcgcc 6480

aaattcggtg caatcacggg tattatacac ggtgcgggtg ttcttgccga tcagtttatt 6540

gagcagaaga cactgtctga ctttgagtcc gtttattcca ccaagattga tggtttactt 6600

tccttgctgt cagtgactga ggcatctaat atcaaacaac tcgttttgtt tagctccgca 6660

gcgggcttct acgggaaccc tgggcagagc gattactcaa tagcaaatga gatccttaat 6720

aagacggcct atcgctttaa atccttacat ccacaggctc aagttctcag cttcaactgg 6780

ggtccttggg atggaggcat ggtcactccc gaattgaaac gcatgtttga ccagcgtggc 6840

gtttatatta tcccattgga tgctggcgct caattgctct tgaatgagtt agctgcaaat 6900gataataggt gt-ccacagat ccttgttggc aacgacctct caaaggacgc cagttctgac 6960

cagaagtcag acgagaaatc taccgctgtt aagaagcctc aagtgagccg cttgtcagac 7020

gcattagtga ccaaatctat caaagcaaca aatagctcct cattgtccaa caagacctca 7080

gctctctccg atagctctgc tttccaagtc aatgagaatc acttcttggc agatcacatg 7140

attaagggga atcaagttct accaaccgtc tgcgctatcg cctggatgtc cgacgccgct 7200

aaagctacct attccaatag ggactgtgct ctgaaatatg ttggtttcga agactataag 7260

ttgtttaagg gtgttgtgtt tgatggaaat gaagcagcag attatcagat ccagctttca 7320

ccggttaccc gcgcctcaga acaggattcc gaagttcgca tcgctgcaaa gatttttagt 7380

cttaaatctg acggaaagcc tgtctttcat tatgcggcta ccatccttct tgcaacacag 7440

cccttgaatg ccgttaaagt agaattgcca acacttaccg aaagcgttga ttcaaacaat 7500

aaggtcaccg atgaagctca agctctttat tcaaacggaa cactatttca tggcgaatca 7560

ctacaaggga tcaaacagat tctatcctgt gatgacaaag gtctcttact tgcctgtcag 7620

ataacagacg ttgccacagc caaacagggc tcctttccct tagctgataa taacatcttt 7680

gcgaatgatt tggtgtacca ggccatgctc gtctgggtga ggaaacagtt tgggctgggc 7740

tcacttcctt cagtcaccac agcttggacc gtatatcggg aagtagttgt cgatgaagtc 7800

ttctatttgc agttgaacgt tgtggaacat gatttgttag ggtcacgtgg ttcaaaggct 7860

cgttgtgaca ttcagttgat tgctgcggac atgcaactct tggcagaagt taaatctgca 7920

caagtttccg tgtccgacat cctcaatgac atgagttga 7959

<210> SEQ ID NO 29

<211> COMPRIMENTO: 2652

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina

<400> SEQÜÊNCIA: 29

atgacagagt tggcagtgat tggtatggat gctaaattca gtggtcaaga taacattgat 60

agagttgaga gagctttcta cgagggtgct tacgttggaa acgtgagtag agtgagtacc 120

gagtctaacg tgatttctaa cggtgaggag caagtaatca ctgctatgac cgttctaaat 180

agtgttagtc tcctagctca gaccaatcag ttgaacatcg cagacatcgc agtccttctc 240

atagctgacg tcaagtccgc cgatgaccaa cttgtggtcc agatcgctag tgcaattgag 300

aaacagtgtg ctagttgtgt tgttatcgcg gaccttggtc aagccctcaa tcaagttgcc 360

gaccttgtga acaatcagga ttgcccagta gctgttattg gtatgaacaa tagtgttaat 420

ttgtccaggc acgacctgga gtcagttact gctactattt cattcgacga aactttcaac 480

ggatacaata acgtcgccgg gttcgctagt ttgcttattg cctccaccgc ctttgccaac 540gcaaagcaat gctacatcta tgctaacatt aagggattcg cacaatcggg agtgaacgca 600

cagtttaacg tggggaacat tagtgatact gcaaagactg cactgcaaca ggcgtcaatt 660

accgctgaac aagtgggctt gctcgaagtc tctgccgtgg cggatagtgc tattgccctc 720

tcagagagcc aagggcttat gagtgcttac catcacaccc agactctcca cactgcacta 780

tcatctgcac gcagcgtgac aggagaaggt gggtgcttca gccaagtagc tgggctcttg 840

aagtgcgtta tcggcttgca tcagcgttac attcctgcca ttaaggattg gcaacagcct 900

agcgataatc agatgagcag atggcgaaat agccctttct acatgccagt tgacgctagg 960

ccctggttcc cgcacgcaga tggtagcgcc cacatcgctg cctattcatg tgtgactgcc 1020

gactcctact gccacatcct tcttcaagag aatgtgttgc aagagttggt gcttaaggag 1080

acagttctgc aagacaatga tttgaccgag agcaagttac aaactttgga acagaacaat 1140

cctgttgccg atttgagaac aaatggatac tttgcttcct ctgagttggc tctcattatc 1200

gttcagggca acgatgaagc acaacttagg tgcgagttag aaacaatcac cggccaattg 1260

tctacaactg gcattagcac aatttctatc aaacagatcg ccgcagactg ttatgcacgg 1320

aatgatacca acaaagcata tagtgcagtc ttgattgctg aaacagcaga ggaactttct 1380

aaggagatta ccttagcgtt tgcgggtatt gcatctgtct ttaacgagga cgctaaagaa 1440

tggaagacac caaagggaag ctatttcact gctcagccag cgaacaagca agctgcaaac 1500

tcaacacaga atggtgtcac gttcatgtac cctggaatcg gtgccactta cgttggcctg 1560

ggtcgtgatc tctttcatct gtttccgcag atatatcaac ccgtagctgc ccttgctgat 1620

gacataggtg aatctctcaa ggatacccta cttaatccac gctctatctc gcgtcattca 1680

ttcaaggaac ttaaacagct tgacctcgat ctacgcggca atctggccaa catcgctgag 1740

gctggagtgg gatttgcatg tgtgttcact aaagtgtttg aggaagtatt tgcggttaaa 1800

gccgacttcg ctactggata ctctatggga gaggtttcca tgtacgctgc actgggatgt 1860

tggcagcaac ccggcttaat gtcagctaga ctggctcaat ccaatacgtt taatcaccaa 1920

ttgtgtggtg agcttcgcac cttaaggcag cactggggta tggatgatgt tgccaatggc 1980

accttcgaac aaatctggga aacatacacc attaaggcta ctattgaaca agttgaaata 2040

gcttctgccg atgaggacag ggtttattgc acgatcatta acacaccaga ctcgctctta 2100

cttgctggtt atcctgaggc gtgccagagg gtcattaaga atcttggagt gcgtgctatg 2160

gccttgaaca tggctaacgc cattcattct gctcctgctt atgccgaata cgaccacatg 2220

gttgaactat atcacatgga tgtgacacca cgtattaaca cgaagatgta ctcttcatcc 2280

tgctatctcc ctatccctca gagatccaag gctatctccc attctattgc aaagtgcttg 2340

tgtgatgtcg ttgatttccc tcggcttgtt aataccctgc atgataaggg agcacgagtg 2400

tttattgaaa tgggacccgg aaggtcgctg tgttcttggg ttgataagat actcgttaat 2460ggtgatggtg ataacaagaa acagtcacag catgtctccg tccctgtgaa cgcaaagggt 2520

acatcagacg aactgaccta cataagagcc atagcaaagc tcataagtca tggtgtaaat 2580

ttgaaccttg attctctctt caatggatct attcttgtca aagccgggca tatcgcaaat 2640

accaacaaat ga 2652<210> SEQ ID NO 30<211> COMPRIMENTO: 6036<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella raarina<400> SEQÜÊNCIA: 30

atggagaaca ttgctgttgt gggaattgct aacttgttcc ctggtagtca agctcctgac 60

cagttctggc aacagttgtt ggagcaacaa gattgccgta gtaaggctac tgctgttcaa 120

atgggtgtgg atcctgctaa gtacactgct aacaaaggtg atactgataa gttctactgc 180

gttcacggag gttacattag tgactttaac ttcgatgcaa gtggttacca gttggataac 240

gattacctcg ctggtcttga tgatcttaat cagtggggat tgtacgttac aaagcaagct 300

cttaccgacg cgggttactg gggtagtacg gcattagaga actgtggtgt catacttggc 360

aatctctcat tcccaactaa atcctcaaac cagctattca tgcccttgta ccaccaagta 420

gttgacaatg ctctcaaggc tgttctccat ccagactttc agcttaccca ttacaccgcg 480

cctaàgaaga ctcacgccga taacgctttg gtggctggat accctgctgc cttgattgca 540

caggccgctg gtctcggagg ttctcacttt gcccttgatg ctgcatgtgc tagtagctgc 600

tattctgtaa agttggcctg tgattacttg catactggga aagctaacat gatgcttgct 660

ggagctgttt cagccgcaga ccctatgttt gtgaatatgg gtttctccat ctttcaagcc 720

tatccagcta acaatgttca tgctcccttc gaccagaact ctcaaggtct gtttgccgga 780

gaaggagctg gcatgatggt tcttaaacgc cagagcgatg ctgtcagaga tggcgatcac 840

atctacgcta ttatcaaggg aggcgcactg tcaaacgatg gaaagggtga gtttgtcttg 900

agtcctaaca caaagggtca agtccttgtc tacgaaagag cgtatgctga tgctgatgtc 960

gatccctcta ctgttgacta cattgaatgt cacgccacag ggacacctaa gggagataac 1020

gttgagttac gttctatgga gaccttcttt agccgtgtta ataacaagcc acttctagga 1080

agcgttaaat ctaacctcgg acatctcttg acagccgccg gtatgcctgg catgaccaaa 1140

gcaatgttgg cgttagggaa gggcctaatc ccagccacta Ctaaccttaa gcagccactt 1200

cagtcaaaga acggttactt tactggagag caaatgccaa ctactactgt ctcttggccg 1260

accacaccgg gtgcaaaggc tgacaagcca aggacggcgg gagtcagtgt gtttggcttc 1320

ggtggatcaa acgctcactt ggtcttgcaa cagccgactc agactctgga aacaaatttc 1380agcgtggcca aacccaggga gcctttggct attattggca tggactccca ctttggatct 1440

gcatctaacc tggcgcagtt taagacgctc cttaataaca atcagaatac tttcagagag 1500

cttcccgagc agaggtggaa gggaatggaa agcaatgcta acgtgatgca atccttacaa 1560

ttgaggaagg ctccaaaggg tagttatgtt gaacagttgg acatcgactt cttgaggttc 1620

aaggtgcctc caaatgagaa ggactgtctg atccctcaac agttgatgat gatgcaagtt 1680

gccgacaatg ccgccaaaga cggagggctc gtcgagggca gaaacgtggc tgtacttgtc 1740

gcaatgggca tggaattgga acttcatcag taccgtggac gcgtaaacct tacaactcag 1800

atagaggata gtcttctaca acaggggatc aatttgactg tggagcagag agaagagttg 1860

accaacatcg ctaaggatgg agttgcctca gccgctcaac tcaaccagta cacctctttc 1920

ataggcaaca ttatggctag tcgcattagt gccctctggg atttcagtgg ccctgccatt 1980

accgtctccg ctgaggagaa ctccgtttat cgttgcgtcg agcttgctga gaatctcttt 2040

caaacaagcg atgttgaggc agttatcata gcagccgtgg accttagtgg ctccatcgag 2100

aacattaccc tccgacagca ctacgggcct gtgaacgaga agggatctgt ttcagagtgt 2160

ggacctgtta atgaatcgtc ttcagttacc aataacattc tcgatcaaca gcaatggctt 2220

gttggagagg gagccgcagc tatcgtcgtg aagcctagtt cacaagtgac agcagaacaa 2280

gtgtacgcga gaatcgacgc agtgagtttc gctcccggta gcaacgctaa ggcaataact 2340

atcgccgcag ataaggcttt gaccttagcc gggatctcag cagcagatgt cgccagcgtc 2400

gaggcacatg ctagtggttt cagtgccgag aacaatgctg agaagacagc tctcccgacc 2460

ctttaccctt cggctagtat ttcctcagtt aaagccaaca tagggcacac cttcaacgcc 2520

tcagggatgg ctagtatcat taagaccgct cttctccttg accagaatac ttctcaggac 2580

cagaaatcca agcacatcgc tatcaacgga cttggtaggg ataatagctg tgcccacctc 2640

atactttctt cgtctgctca agcacaccaa gtggctcctg ctccagtgag cgggatggcc 2700

aaacaaagac cacagctagt gaagactatt aagctgggag gtcaactaat ctccaatgcc 2760

atcgttaatt ccgccagctc cagtctgcac gctattaagg cccagttcgc tgggaaacat 2820

ctgaataagg tgaaccagcc tgttatgatg gacaacctga aacctcaagg gatctctgca 2880

catgcaacta acgagtatgt ggtcactgga gctgctaaca ctcaagctag taacatacaa 2940

gcctcacacg tccaggctag ttctcacgca caggagattg caccaaatca agtgcagaac 3000

atgcaagcta ccgctgctgc agtaagctcg ccattgtcac agcaccaaca cacagctcaa 3060

cctgtggccg caccatcagt tgtcggtgtg actgtcaagc acaaggcaag caatcagatt 3120

catcaacagg catcaaccca caaggcattc ctggaatcac gtcttgcggc ccagaagaat 3180

ctgtctcagt tggttgagtt acaaactaag ttgtccattc aaaccggctc tgataatacg 3240

tccaataaca ctgcttctac ctctaacacc gttcttacta atcctgtttc ggccactccc 3300ttgaccttgg tttctaacgc tcctgttgtg gcgaccaacc ttactagcac cgaagctaag 3360

gcacaggccg cagccacaca agcgggtttc cagatcaaag gccctgtcgg gtacaactat 3420

ccacctctgc aattgattga aagatacaat aagcccgaga atgtgatata cgatcaagcg 3480

gatttggtgg agttcgcgga aggtgacatt gggaaggtct ttggtgctga gtacaacatt 3540

attgatggat actctcgcag agttagactg ccaacctctg attatctgct tgttaccagg 3600

gttaccgagt tggatgcaaa ggtgcatgag tacaagaaat cttatatgtg taccgaatac 3660

gacgtacccg tggacgcacc attcttgata gacggacaga tcccttggtc agtagccgtg 3720

gaatctggtc aatgcgatct tatgttaatc tcctacattg gaatcgactt tcaagccaag 3780

ggtgaacgcg tttatcgtct tctcgattgc gagctaacct ttctcgaaga gatggcattc 3840

ggcggtgata cacttagata cgagatccac attgatagct atgcaaggaa tggcgaacag 3900

ttgttattct tctttcatta cgattgttat gtgggcgaca agaaggtgtt gattatgagg 3960

aacgggtgcg ctggtttctt tactgatgag gaactctctg acgggaaagg cgttatccat 4020

aatgacaaag ataaggctga gtttagcaac gctgtgaaat ctagctttac acccttgctt 4080

cagcataaca gaggacagta cgattacaat gacatgatga agttagttaa tggcgatgtt 4140

gcaagttgct ttgggccgca gtatgaccaa ggagggcgca atcctagctt gaagttcagc 4200

tctgagaaat tccttatgat agaaagaatc accaagattg atccaacggg aggccattgg 4260

ggtctgggtc ttctggaggg acagaaagac ctcgatccgg aacattggta tttcccttgt 4320

cactttaaag gagaccaagt catggctggg tccttgatga gcgaaggctg cggtcagatg 4380

gcaatgttct tcatgctctc tctcggtatg cacaccaatg tgaacaatgc tagatttcaa 4440

ccactgcccg gcgaatccca aacagtccgg tgccgtggtc aagtgctccc tcagcgaaat 4500

actctgacgt atcgtatgga ggttactgca atggggatgc accctcaacc attcatgaag 4560

gcaaacatag acatcctctt ggatggcaaa gtggtagtag atttcaagaa tctttcagtt 4620

atgatttcag aacaagatga acactctgat tatccggtca ctctcccatc taatgtggca 4680

ttgaaagcca tcaccgcgcc agttgcctcc gtggcaccag cctcaagtcc ggccaatagc 4740

gcggatcttg atgagagagg agtggaaccc tttaaattcc cagagcgccc tctgatgagg 4800

gttgaatcag acctatctgc tcccaaatcc aagggcgtta ctcccatcaa gcacttcgag 4860

gctcctgccg ttgccgggca tcatagggtt ccaaaccagg cacccttcac tccttggcat 4920

atgtttgagt tcgctactgg gaacattagt aattgctttg gtccagattt cgacgtttat 4980

gaaggtcgca tacctccacg aacaccatgc ggcgacttac aagttgtgac tcaagtggtt 5040

gaagttcagg gagaaaggct tgatcttaag aatccatcct catgtgttgc tgaatactat 5100

gtacccgagg atgcttggta tttcacaaag aatagtcacg agaattggat gccctattcg 5160

ctaattatgg aaatagcact gcaacccaat ggctttattt ctggttacat gggcactact 5220ctcaaatacc ctgagaagga tctattcttt aggaatcttg atggctccgg aactttactt 5280

aaacagatcg acctcagagg gaagacaata gttaataagt ctgtactcgt ttctaccgca 5340

atcgctggtg gagctattat ccaatccttt acattcgaca tgagtgttga tggagaattg 5400

ttctacaccg ggaaagcagt gtttggctat ttctccggag aatctttgac taaccagcta 5460

gggattgaca atggcaagac gacaaacgct tggttcgtcg ataataacac acccgcagct 5520

aacattgacg tgtttgacct cacaaatcag tccctagcac tctacaaagc gccagttgat 5580

aagccacatt acaaattggc tggagggcag atgaacttta ttgatacggt ttctgttgtt 5640

gaaggaggcg gaaaggccgg tgttgcatac gtgtacggtg aaaggacaat tgatgctgac 5700

gattggttct ttcggtatca ctttcatcag gaccctgtca tgcccggatc gctgggtgtg 5760

gaagcaatta tcgagcttat gcaaacctat gctctgaaga acgatctcgg aggcaaattt 5820

gcaaatccac ggtttattgc accaatgacc caagttgatt ggaaataccg aggtcagatt 5880

acacccttga acaaacagat gtcactcgat gttcacatta ctgaaatagt caatgatgcg 5940

ggtgaagtca ggattgtggg agacgcaaat ctctcaaagg acggacttag gatctatgaa 6000

gtaaagaaca tcgtgctctc catagttgag gcatga 603 6<210> SEQ ID NO 31

<211> COMPRIMENTO: 1617<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina<400> SEQÜÊNCIA: 31

atgagttctt tgggtttcaa caacaacaac gctattaact gggcttggaa ggttgatcct 60

gctagtgttc acactcaaga tgctgagatt aaggcagctt tgatggattt gactaagcct 120

ttgtacgttg ctaacaactc tggagtgact gggatcgcca atcataccag cgttgcggga 180

gccatctcaa ataacataga cgtggatgtt cttgctttcg cccagaaact gaatcctgag 240

gaccttggtg atgatgctta caagaaacaa catggcgtta aatacgccta tcatggaggc 300

gcaatggcaa acggtattgc aagtgttgaa ctggtcgtgg ccttaggaaa ggcgggtttg 360

ctttgttctt tcggagcggc cggactcgtg cctgatgccg tcgaagacgc gatcagacgt 420

atccaagctg agcttccaaa tgggccatac gcagtaaacc ttattcacgc accagccgag 480

gaagctcttg agagaggcgc tgtcgagagg tttcttaagt tgggtgtcaa gaccgtagag 540

gctagtgcct acctcggtct caccgaacac attgtttggt atcgagccgc tggactcacc 600

aagaacgccg acggtagtgt taacattggc aataaggtca ttgctaaagt ttcgaggacg 660

gaagttggga ggcgcttcat ggaaccagct ccacagaagt tgctcgataa gttgcttgag 720

cagaataaga tcacacccga acaagccgca ttggctctct tagtgcctat ggcagatgac 780attactggtg aggctgattc aggaggccat actgataatc gccctttcct cacacttctt 840ccaacaatca tagggctccg cgacgaagtt caagctaagt acaactttag ccctgcccta 900agagtgggtg ctggaggtgg aatagggacg ccagaagcag ccctggccgc attcaacatg 960ggagctgcct acattgtgct cggcagcgtg aatcaggctt gcgtcgaggc tggagcctct 1020gagtacacaa gaaagctgtt gtccaccgta gaaatggctg atgtcacaat ggctcccgct 1080

gccgatatgt ttgagatggg agttaaatta caagtgctta aacgcgggtc tatgtttgct 1140atgagggcta agaaactata tgacttgtac gttgcatacg atagcatcga agacataccg 1200gcagcggaga gggagaagat agagaaacag attttcaggg caaacctgga tgagatttgg 1260gatggcacta tcgctttctt tactgagcgt gatcccgaaa tgttggcacg tgccacctcg 1320tctccgaagc gtaagatggc gcttatcttt agatggtatc taggtctctc atccagatgg 1380

tctaataccg gagagaaggg acgggaaatg gactatcaga tttgggccgg gccttcattg 1440ggagcattca atagctgggt taaagggtca tacttagaag actacactag acgaggcgca 1500gtggacgtgg cacttcacat gctgaaaggt gctgcttatt tgcaacgggt taatcagttg 1560aaactgcaag gcgtgtcact ttccacagaa ctcgcatcct atcgtacctc cgactga 1617

<210> SEQ ID NO 32

<211> COMPRIMENTO: 48<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 32

agctgcggcc gcatttaaat ggcgcgcccg tacgggccgg ccaagctt 48

<210> SEQ ID NO 33<211> COMPRIMENTO: 48<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Artificial<220> FEATURE:

<223> OTHER INFORMATION: Primer<400> SEQÜÊNCIA: 33

ggccaagctt ggccggcccg tacgggcgcg ccatttaaat gcggccgc 48

<210> SEQ ID NO 34<211> COMPRIMENTO: 864<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Moritella marina

<400> SEQÜÊNCIA: 34

atgtacagcg gcgttaagga caagctcacc ctcaccacaa acgagatcca cctctggagc 60

gtgacacctc agaccatcca gcagcccgag ctgctccagg cctactccca gctcctgtct 120

ccagccgaga ccatcaagca gcagaggttc cgcttcgaga aggaccgcca caacgccctc 180

atcacccgcg ccttcgtgcg cgacctcctg tcccactacg ccgacgtcct cccagccgac 240

tggcagttcg tcaagggaga gaaggacaag cctgagatcg ccaaccctcc actccctctg 300

aggttcaaca tctcccacac cgacaacctg attatttgcg ctgtcatgct gaacgacgac 360

atcgggtgcg atgtcgagaa cacactgagg tcctctaacg ttctttccat cgctaagcac 420

tctttctcag attcagagtt caacgatctt cttacacagc ctacagctca gcagacttca 480

agattcttcg attactggac tcttaaggaa agctatatca aggcatgggg attgggtttg 540

tcaataccat tgaaagattt cagtttcacc cttcccgaag gtttccaaca gcagtatcaa 600

caagaggatc aacaagagaa tcaacattgc atagatacta taaagttgtc ctttgctcct 660

catagaattg ataatccaaa tatttggcgt cattggttgt tttatccaaa caatactcat 720

cgtgtggcac tcgctgttag agcaaggtcc aacaatcaac aaaccgaata taaaatgcgc 780

ttctttaata gtactcctct catcaatata accgaaaccc ttatcttcaa gcccgaaaca 840

aattttaaac ccgatgctaa atga 864

<210> SEQ ID NO 35

<211> COMPRIMENTO: 748

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Brassica napus

<400> SEQÜÊNCIA: 35

ctgatacaca cttaagcatc atgtggaaag ccaaagacaa ttggagcgag actcagggtc 60

gtcataatac caatcaaaga cgtaaaacca gacgcaacct ctttggttga atgtaatgaa 120

agggatgtgt cttggtatgt atgtacgaat aacaaaagag aagatggaat tagtagtaga 180

aatatttggg agctttttaa gcccttcaag tgtgcttttt atcttattga tatcatccat 240

ttgcgttgtt taatgcgtct ctagatatgt tcctatatct ttctcagtgt ctgataagtg 300

aaatgtgaga aaaccatacc aaaccaaaat attcaaatct tatttttaat aatgttgaat 360

cactcggagt tgccaccttc tgtgccaatt gtgctgaatc tatcacacta gaaaaaaaca 420

tttcttcaag gtaatgactt gtggactatg ttctgaattc tcattaagtt tttattttct 480

gaagtttaag tttttacctt ctgttttgaa atatatcgtt cataagatgt cacgccagga 540catgagctac acatcgcaca tagcatgcag atcaggacga tttgtcactc acttcaaaca 600

cctaagagct tctctctcac agcgcacaca catatgcatg caatatttac acgtgatcgc 660

catgcaaatc tccattctca cctataaatt agagcctcgg cttcactctt tactcaaacc 720

aaaactcatc actacagaac atacacaa 748<210> SEQ ID NO 36

<211> COMPRIMENTO: 313<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Brassica napus<400> SEQÜÊNCIA: 36

gagtgtgtat accacggtga tatgagtgtg gttgttgatg tatgttaaca ctacatagtc 60

atggtgtgtg ttccataaat aatgtactaa tgtaataaga actactccgt agacggtaat 120

u aaaagagaag tttttttttt tactcttgct actttcctat aaagtgatga ttaacaacag 180

atacaccaaa aagaaaacaa ttaatctata ttcacaatga agcagtacta gtctattgaa 240

catgtcagat tttctttttc taaatgtcta attaagcctt caaggctagt gatgataaaa 300

gatcatccaa tgg 313<210> SEQ ID NO 37<211> COMPRIMENTO: 7596<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis<400> SEQÜÊNCIA: 37

atgagccata ccccttcaca gcctcaacct tcaaccgata aaaaagccga taaaaggcta 60

aataaacgct tgaaagatat gcccattgcc atcgttggta tggcgagtat ctttgcaaac 120

tcacgctatt taaataagtt ttgggattta atttgcgaca agattgatgc cattaccgac 180

gtgccagcca gccattgggc gattgatgac tattacgacg tggataaatc caaggccgat 240

aaaagttact gcaagcgcgg tggctttatg ccagaggtcg acttcaatcc tatggagttt 300

ggtctgccgc ccaatatttt ggaactcacc gacagctcac aattgctttc cctcgtcgta 3 60

gccaaagaag tgctgcagga tgccaatctg ccagacgatt acgaccgtga ccgcatcggt 420

atcacccttg ggattggcgg cgggcaaaag ctaagccata gcctcaacgc gcgcctgcaa 480

tatcctgtgc ttaaaaaagt atttaaaagc agtggcctga gcgatgaaga tagcgagctg 540

ctgatcaaaa aattccaaga ccaatatgtc cactgggaag aaaactcctt ccccggctcc 600

cttggcaacg tgattgccgg acgcatcgcc aaccgtttcg atttaggtgg aatgaactgc 660

gtcgtcgatg ccgcctgcgc aggatcgctt gccgccatgc gtatggcgct caccgaactg 720accgaaggtc gcagcgacat gatgatcacc ggcggtgtct gtaccgacaa ctcgccttac 780

atgtatatga gtttctcaaa gacacccgcc tttaccacca acgagcaaat ccaacccttc 840

gatatcgact ctaagggcat gatgattggc gaaggcatcg gcatggtcgc cttaaaacgc 900

ctcgacgatg ccgagcgcga tggcgaccgt atttatgcgg taatcaaagg cgtaggcgcc 960

tcatcggacg gtaaatttaa gagcatttat gcgccgcgcc ccgaaggcca agccaaggca 1020

ctagagcgcg cctatgatga cgcgggcttt gcgccgcaca ctgttggctt gattgaggcc 1080

cacggcacag gcacagccgc aggcgatgta gcggaattta ctggtttaag ctcagtgttt 1140

tctcaggata acgcgcagtt acagcatatc gccttaggct cagtcaaatc tcaggtgggc 1200

cacactaaat ccaccgcggg cacggcgggt gtgattaagg ccgcgctggc actgcaccat 1260

aaagtattgc cacccacgat taacgtcagc aagcccaatc ctaagcttga gattgatcgc 1320

tcgccctttt atctcaatac cgaggcgcgc ccttggatcc aacgcagtga tgatacgccg 1380

cgccgcgctg ggataagctc cttcggtttt ggtggcacaa acttccattt agtactcgaa 1440

gaataccgcc cagatcacac gcgcgatgac gcctatcgtc aacgcagcgt ggcacaaatc 1500

ctactgtttg cggctaacga taaaaccttg ctactgaacg agttaaaagc tgttttacaa 1560

caagcaagct cagctaaggc ggagctttct gaggcgcatt ttattcagtt tgctaaaccc 1620

tacgccctgc gagaaattac gccgcaatcg gcccgtcttg gctttatcgc caaagactat 1680

gcccagttac agactctgtt aacccaagcg atagcgcagc ttgaagccaa taacgctgag 1740

agctggcaat taccttctgg gatcagctac cgcgccaagg ccttagtcaa tgagcaaacc 1800

aagatcgccg cgctatttgc tggtcaaggc gcgcagtacc tgaatatggg actggagctt 1860

gccaataact tccccgagct tcgccgccat atccacgcca gcgataaagt gtttagtacc 1920

catggtaagc ctgcgctttc aagcgtgctc tatcctattc cagcctttga tgatgagtcg 1980

ataaaagcgc aggaaacggc attaaccaac actctgtatg cccaaagcgc catcggcgcg 2040

ctctcaatgg cgcagtacgc cctgtttact caggcaggtt tcgccccaga tatgctggct 2100

ggtcatagct tcggtgagct ttcggccctg tgcgccgcag gggttatctc aatggatgac 2160

tacatcaaac ttgcctttga gcgtggacag gcgatggcgc agtcatccca agataccgat 2220

gcgggtgtta tgtatgcagt gatccttaag caaaaacaag atattgaggt aatcaacggt 2280

tgccttgcgc agtttgaagg cgtcaaagtt gccaactaca actcacccac tcagctggtg 2340

attgcaggcg ctagtgccgc cacccaacag gcggctaagg ccattagcga gttaggcttt 2400

aaggcgattg ccctgcccgt ttctggcgcc tttcacacgc cattggttgc ccatgcacaa 2460

aagcccttta gtgcagccat cgataaggct cagttcaaca cgccaaagat tgccttatat 2520

gccaatggca caggccagct gcatcctatc gatgccaacg ccatcaaagc tgccttgaaa 2580

gatcatatgt tgcaatcggt gcactttagc gagcagctag aagccatgta tgccgcaggc 2640gcacgggtgt ttgtcgagtt cggcccaaaa aacattctgc aaaagttaac tgaaaatacc 2700

ctcgcggcgc agttaaacga gctgtgtatt atcagcatta accctaatcc caagggcgat 2760

agtgacagcc aactgcgcag cgccgcagtg caactggcgg tggcgggggt aaaactccgc 2820

gagattgatc cgtatcaagc agagttaatt gccccagcag caacatcggc catgaatata 2880

aaactcaatg ccaccaacta catcagccca gcgacccgca gcaaaatggt cgattcgctg 2940

caatcgggca aaattaccag ccaagtgcag tatgtggatc gcatcgttga aaaagtggtt 3000

gagaaagttg ttgaaaaacc agtgattgtc gaaaaaattc tagaaaaggt tgtcgaagtg 3060

gaaaagcccg tggcacaaaa tagcaataat attcaacagc aaacgcctgc acagccagcc 3120

agctttaccg ctggacagac gaatcaagat gccctgagcg ccttttttgc cgcccaaacc 3180

caggcagcgc aattacatca acaatttttg gccattccgc agcaatacgg cgatacagtc 3240

agcgcactga tggcagagca agccaaaatg gcaagccttg ggatcgctat tccagagagc 3300

ctacaacgct caatggaact gttccatcag caccaagcgc aaaccctaaa aagtcatagt 3360

gactttatgc aattgcaaac cagcagtagc caagcagtac tggcattatt aggtcaaatg 3420

ccagcgtctc aggttcaagc ccccattcaa gccgctgcac cagtggcagt agcagtgaca 3480

aaacctgtcg ttccagcaca ggcccccgtg gttcaagggt tggccgcaga gcctaaagtg 3540

actgctgtgc ctgtgagcga gcccacagtt cagcaacctc aagtagcact ggcacaagta 3600

gcacagacaa aagtaactca gccaccatta gcgcaaccac aagtacaaac tgtggccgca 3660

caaaccagtg cgcttcaagt aaagcctgcc ttgcagcaaa tcgagcacgc tatgctctca 3720

gtggtggcag acaagaccgg ctatccggtt gaaatgttag aacttagcat ggatatggaa 3780

gcggacttag ggatcgactc cattaagcgc gtagaaattc taggcacagt gcaggatgaa 3840

ttaccgaacc tgccagaact cagcccagaa gatttagccg agtgccgcac cctaggggaa 3900

attgtggcgc tatttagcca agcagctcct gtaacatctg cgaccactgt tagccatgct 3960

acacaaagtg ccgtagccgc aagcgcggcg gtttccaatg atgagattga gcgcactatg 4020

atggcggtcg tggccgacaa gactggctat cccgttgaaa tgctggaact cagcatggat 4080

atggaagccg accttggcat tgactccatt aagcgcgtgg aaattctagg cacagtgcag 4140

gacgaattac ccaacctgcc agaactgagc ccagaagatt tagccgagtg ccgtacccta 4200

ggggaaattg tggcgctatt tagccaagcc gtcccagtgg cagcacaaac ctttgcagcc 4260

atggcagcaa cgaatcctca ggttgtcgcc tctgccgtca cgccaattgc ggccgtatcc 4320

gatggcgaga ttgagcacac tatgatggcg gttgtggccg ataaaaccgg ttatcccgtt 4380

gaaatgctgg aactcagcat ggacatggaa gccgaccttg gaattgactc cattaaacgg 4440

gtggagattt taggcacggt gcaagataag ctgccaaatc tgccggaact cagcccagaa 4500

gatttagccg agtgccgaac cttaggggaa attgcggcgc tctttagcca agcggctcct 4560gtaacagctg cggccacagt tagccatgcg acacaaagtg caatagctgc aagggcggcg 4620

gtttctaatg atgaaattga gcgcactatg atggcggttg tggccgataa aaccggttat 4680

cccgttgaaa tgcttgagct aagcatggac atggaagccg accttggtat cgattccatt 4740

aagcgcgtgg aaattctagg cacagtacaa gaccaactgc caaacttgcc agaactcagc 4800

ccagaagatt tagccgagtg tcgtaccttg ggtgaaattg tcgccctcta tgctggttcg 4860

caatcatcaa gtgaggcgct acaacaaaac catgctgcga caattcaaga gactcaagag 4920

gctattgcaa aaaccgtcga ggaaaccatc gacctgccgc cccatagtga ggtgatgcta 4980

aaaaagttgc cagcggcggc tgagttagcg cgcatcatcg caactagcga tgttcaactg 5040

acggcaaaca gttacgtcgt tatcggcgac gatggccaca acgcgggggt gattgccgaa 5100

aagcttcacg cccaaggtgt taaggtcgcg gttgtacgct cacctaaaac ggttgtgacc 5160

agcgcatcgc cactcgatag ccatattgcc agcttcacgc tggaggctat tgatgatgaa 5220

agcatttgtg aggtcatcaa tcagattgaa gcgcttggcc aaatcgccgg ttttattcat 5280

ctgcagccac agcataaatc cgttgccgat aaaggtgctg gcttagtgct ggtagatgaa 5340

gccaaagctt cggtcgagca agccttcttg ttcgccaaat tcttacaacc gcttttaact 5400

gaacgtgact attgccgctt tgtcaccgtc agctgtatag acggtggctt tggctatatc 5460

ggcatggacg agtcggtagg tgccctcatc agccagagtg aactcaacca agcggcgctc 5520

tttggactca ctaaaacctt aaatcacgag tggccgggag tggtctgccg cgcgctggat 5580

atcgcgccaa acttggacgc taaaacggtc gccaatgcgg tggtgcagga atactacctt 5640

caagatgcgc cggtcgaagt cggtattgat agcaactttg atcgcgtgac attagttgca 5700

ggcaccgctg cacttcgcca tccacccgcc gtccttagca atgcagataa aatactggtc 5760

acgggcggtg ctaaaggtgt cacttttgaa tgcgccttaa gcttagcaaa acgctgtcag 5820

gcacattttt tcctcgctgg ccgtagcgcc caccaagtga tccctgcatg ggcagaggga 5880

aaaaagagca acgaactcaa agccgcagcc attgcgcacc tgcaaagcct tggtgataaa 5940

cccacaccaa aacaagtgga cgccttagta tggcccgtgc agagcagcct tgagatcagc 6000

catgctttag ccgcctttga tgccattggc gccagcgctg agtacttaag tgtggatgtc 6060

aacgaccctg cggccattgc cagcaccatt gcgcccatta acgcactatc gcctatcact 6120

gggattattc acggtgcggg agttctagcc gataaacata ttcaagacaa gaccttaaat 6180

gaatttgaac gtgtctatgg tactaaggtc accgggctta ataatctgct gtcaacgctg 6240

gatcttagcc aagtaaaact gattgcactg ttctcttcgg cggcgggttt ttacggcaat 6300

accggccaga gcgactacgc catgtctaac gacattctca ataaagccgc gctgcaactt 6360

gcgcagcaat taccacaagc caaggtgatg agcttcgact ggggtccttg ggatggcggc 6420

atggtcaatc cagcgctgaa aaaaatgttt attgaccgcg gggtttatgt cattccactc 6480aaagcgggtg ccgagttatt tgccagccaa ttattgagtg atacaggcgc acagctgttg 6540

gtcggaaccg atatgcaggg caataccgcc aatgccgttg aagttgcatc agcaaaaaag 6600

cctgaagcgg atctagccac agcgttagat ccgcagccta tggcccaaac ggtgccgcag 6660

agcattcgcg tcatgcgcag cctcgaccct aaacgcatga gctttattga ggatcattgc 6720

atcaatggtc atgcggtgtt gccaacggta tgcgccatcg attggatgcg tgaggccgcc 6780

aaggcccatt taggtacggc ggtgagtgtc agcgattatc gactgctcaa gggagtaatc 6840

ttcgatgagg cgctgcttgc acgcaatgcg cctattgagc tcgaattgat gctcacgccg 6900

cttgctgacg ctgcacaaca atcgactgag gcgttagccg cgctgataag ctttgaaggt 6960

cgcccgcagt atcaggcggt gttagtggcg cagacggatg atatgccaga cgcgcagcgt 7020

ttcgaggttg gcgagttgca ttctctgata caggagatgg cacagcaacc cgctatcgcg 7080

aaccgcgagt cgctctacag cgatggcacc ttgttccatg gcccgagact gcaaggcata 7140

agcgaagtgc tcacctttga tgaccaacat cttatggcca aagtagaact gccacaggtg 7200

gccttagacg actgcggcaa gtttgcgcca aagcttgagg ataagggtac acaacccttt 7260

gccgaagatc tgttattgca ggccatgctc gtgtgggctc gccttaaata tcaagcggca 7320

agcttaccca gcacgattgg cgagtttgtt tcctatgcgc ccttgagctt tggtgaaaag 73 80

gcagtattag tgctggatgt gcttaagcac tcgtcccgct cgcttgaggc gaatattgcc 7440

ctctaccatc aggatggccg tttaagctgc gagatgaaac gagcaaaagt cacgatcagt 7500

aagacgctta accaagcatt tttggctaat aaacctcaac aactggcgca agtgcaggca 7560

tcaatccaaa acatggccga ggtaagtgtt aagtga 7596<210> SEQ ID NO 38

<211> COMPRIMENTO: 2205<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis<400> SEQÜÊNCIA: 38

atggcttgtc gcattcagct caatgttgaa gataagctac tgattgatga gccatctgat 60

gagccatctg atgagtcaac cttagtcgcc ttactcagcg agcagctcgc ccatattgcg 120

caaaaacaac tcgttgaaat ccgctttgaa tatcaacagc aagttcgtag tctgtttctg 180

ctcgatggac tacttgccgc gcaattacac ctgcatgccg aggcttatat ttcagccttg 240

gcacagactc aagccgaagc gaatgaagca ctctgcgata tagaaatcga aaactgtaca 300

aatcgcgctt ttgccctcgc caaacgcgat tgtgctcagg cggttaattg ctactcggat 360

gcaggcaatc ttgccagtca gctaaagctt ttatatcaag ctattgaggc gttaagtcat 420

cgaacgctag caggtattac gccaatgctt gcccacctca atacagaaaa aacagagcga 480tgttattggt tctccaagcc ccatcaagca agggtgttaa gcctaaatct cttcgataaa 540

gcccctcaag ctcagacagc ccaaagcctt atcttgactc aaggtacagg gcttatcgct 600

caaccgttgc tcaatgccaa caggctgttt attcccatca gcggcaatga gtttgagtcg 660

ttaacgctta agttgttgca actgattgat tcattgacct tatcgttaaa ccaacctgat 720

acggattggc tcagcagcca aggcagtgat tggtttaagc gctatcaagc aaaggatgaa 780

ttagccttag tgctgatggc aggctccctt gaagagttaa tgcaagaagc caaagcgatg 840

cagactttta ttgaaaaggc acgactgact attgagtcca gcgcatccaa gcacagtgca 900

tccaagccta gtgcatcgac aagtttggta tttaaaaccc cagcgggcag ttattttgcg 960

gcctcgcccc ttggtgataa gggcttaacc ttcgtctatc ccggcgtagg cactgtttac 1020

ccgaatatgt tcagcgactt acatagctat ttccctgagc tttatcgcga gcttgaacgc 1080

gaaggggatt tagccgccat gttgcaggcc gagacgattt accaagacgc ggcttatgcg 1140

aaaaccgcag ttaatgtaag cgtaaaagac accgcagaaa tgagcttaag ccagctcgcc 1200

attagcggcg ttggtgcgag ttaccttttt agcaagttat tgactggcgt ctttactatc 1260

caaccacggc tcgcactggg ctattccatg ggtgaagcag ccatgtgggc aagtttagct 1320

atctggcaaa caccccacag cctgattgat gccacccaag gcagcgcaat tttcaaccac 1380

gaaatctccg gtaaacttca agccgttcgc cgcgactggc aattgaatga agatgctccg 1440

ctggcgtgga atagcttttt agtgcgcgca accagtaccg aaattaatcc actgctggct 1500

gattttccgc gggtttatct ggccatcgaa cagggcgata cctgtattct cgcgggctgc 1560

gaagcaagct gcttacagct ccttgcaagg ctgaataagc gtggcattgc cagcaataaa 1620

gtgacggcca tgcatactgc gccttcgcag tcacagcgca atgcaatcca agggttttat 1680

accttaggct taaaggccac agcctgcgag actcaggttc gttttattag cgcggcgcag 1740

catagccccg tcaatattga tagcatgagt attgccaaaa gcattgccga taccttttgc 1800

gcgccgctga attttaccgc gctgattaac accgcgtata accaaggtgc gcgcttattt 1860

gttgaggtgg gcgccgatcg tcaaaccagc acccttatcg ataaaatcag ccgccaactt 1920

gagttgggcg ccgatggtgt tcaagaaccg atattagcca tggcatgcaa tgccaagggc 1980

agcgatacga tcgtcagttt gctcaaatgc ttagctcaac ttatcagcca tagagtgcca 2040

ctctccctgg cggcacttat gcctcaatcg gcagctcaat cagcaacgca ctcagcaact 2100

atccatgcgg ataagactgc ggctaaaacg atagcgtcac actctgccaa cgcctgcgca 2160

ttaggccatt attcaaacgt attccaagaa ggagaacccc tttga 2205

<210> SEQ ID NO 39

<211> COMPRIMENTO: 5892<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis<400> SEQÜÊNCIA: 39

atgagttctc aaatgcatac tcacccgact ctgcaagaca gcgccgctgt gccaaacgac 60

cagcgccaaa cgttaaaggc gatgccaaag attgccattg tcggccttgc tgtccagtat 120

cccgatgccg acacaccgga gcagttttgg caaaatctgc tggataaaaa agattcccgc 180

agccaaatcg acgcggccaa actcaatgcc aatcctgctg attaccaagg gattcaaggc 240

caagccgacc gtttttactg cgacaagggc ggctatatcc gcaactttcg ttttgatcca 300

cagggttatc agttactgcc agccactttt gcagggctgg atgaaagctt tttatgggca 360

ttagattgca gtaaaaaggc cctactgaat gcgggcgtgg atttaacggc gccattactt 420

gagcgcacag ggattgtgat gggcacgctc tccttcccga cggctcgctc caatgaatta 480

tttttaccga tttaccatca agcggttgaa aaggcattaa aaaccaagct taatcaacca 540

caatttgcct tagcgccctt cgccaatgct tcaattgcgg gctcgcaact ggcagccaat 600

ggtgtcattg ctcatacggc gtctaagttg ttaagcgatg ccctcggcct tggcggcgca 660

cagctcagtc tcgacgccgc ctgcgccagc tcagtctatg ccctcaaatt ggcctgcgat 720

tatttaacca cgggcaaggc cgatatgatg ctcgcgggcg ctgtatcggg cgccgatccc 780

ttctttatca atatgggatt ctcgattttc cacgcctatc cagaccatgg gatttcggcg 840

cctttcgata gcaatagcaa aggcttattc gcgggcgaag gcgctggcgt attagtgctt 900

aagcgtttag aggatgccga gcgcgatggc gataatatct atgctgtggt cagtggcatt 960

ggtttatcga acgatggcaa aggccaattt gtcttaagcc ccaacagtaa gggccaagtg 1020

caagccttcg agcgcgccta tgccgccgct aacacgcacc cgagcaatat cgaagtgatt 1080

gaatgccatg ccaccggcac gccgctgggg gataaagttg agctcacttc gatggagcgt 1140

tttttcgagg ataaactcga cggcactaaa gcgccgctga taggttcggc caaatccaat 1200

cttgggcatt tgctcaccgc agccggcatg cctgggataa tgaagatgat ttttgccatg 1260

cgctcaggcc atctaccgcc aagtatcaat ttaacggcgc cgatttcatc acctaaaggg 1320

ttgtttagcg tcaataatct tcccacacag cgtcaggctt ggcccgataa agcgggcaac 1380

gatcgtcgcc atgcaggggt gtctgtattt ggttttggcg gctgtaacgc ccatctgttg 1440

ttggaatcct atcaaccgac agcgcacagc gccgagaagc aagccaacaa acctgtttat 1500

cagcagcaag cattaaccgt tataggcatg gcgtcgcatt ttgggccttt ggcctccatc 1560

aatgcgctgg ataaggcgct aatagcccaa acggatgcct ttatcccgct gccccctaaa 1620

cgatggaaag gcttagataa acaccccgat atcttgcagc aatttggcct aaatcgcgcg 1680

cccaaaggcg cctatatcga gcagtttgac ttcgactttt tgcgctttaa agtgccgccc 1740

aatgaggatg acaggcttat ctcccagcaa ttgttgctga tcaaagtcgc cgacgaagcg 1800attcgcgatg ccaagttaac cgcaggcagc aaggtcgcgg tgttagtggc gatggaaacc 1860

gagcttgagc tgcaccaatt ccgtggccgg gtgaatttgc acacccaact ggcggatagc 1920

ttaaagaaac aaggtgttca cctctccaat gatgaatacc tcgccctcga agccatcgcc 1980

atggacagcg tgctcgatgc cgccaagctc aatcaataca ccagctttat tggcaatatt 2040

atggcgtcgc gcatcgcctc gctgtgggac tttaacggcc cagcgtttac catttcagcc 2100

gccgagcaat cggttgcccg ttgtatcgat gtggcgcaaa acttactgtc caaagaggcc 2160

ctagatggcg tagtgattgc cgccgtggat ttaagcggca gtgttgaaca ggtcatattg 2220

aaaaacgctc aagtcgccgt tgatctcgat gccaacagcg caaatccaca gtggaaggtg 2280

ggtgaaggcg ccggcgctat cgtgcttaca aaccagcaag cgagcaacag tcaacaagcg 2340

ggttacggcc aaattcgtgg tcaagcattt ggcacaaacc atcagctgcc taagctgctt 2400

gattcgctga taaccgaaac ggctatcgcc aatccttcaa tgccaacggc catccatatg 2460

attgagcaat gtattgcccc agaagaacaa ctgccagcag agcatttatt agcgcagctt 2520

aatcttttgg ggacgtcatg caatcgagtc gccaataccc ttggacataa ctttgccgct 2580

gcaggtatgg ccagtcttct gagtgccctg ttaagcctaa agaacaggtc agcaaattcg 2640

gataaaaacg ccgaaaaaca ggcattagtg tctacccaaa gccaaggggt gagctcgctg 2700

ctgctgttaa gccaaacggc aacgcaggcg gcacaactag aactgcgcct tgcgcaggac 2760

ttaaccttaa gtgagcaaaa acatttaatc aaaccagtga cgctcggtgg tcgcgatatc 2820

tatcaacata ttgtagatac gccgctgcct gcacttgccg ccatccaagg caaaatgcgc 2880

cagttgcagc ctttagcctc acaggcgaca caaactaagc ccgcagtggg cgcagcactt 2940

gatatcacgg ctgaaaacgc cacaccatta gcagcagaga gcggtatgtc atctaacgca 3000

ccacttcaat ttgagacaac agcatcggcg caggatagcg cggcattgtt gcaaaaccag 3060

caactcgccc gcgaggcgca cttagccttt ttacagagcc gtgagcaagg gctcaaactg 3120

gcagatgcgt tgttaaaggc acaattatcc cagacgacac aaatgggtgc tgttgcagcc 3180

catgttgcca ccagcgcaaa tgtcgctgaa acgaaggcgc agcaagcggt gtcaatccca 3240

gaactcatgc ctaatcatgc gcctaatcat gcaagagtcc cgccctatac gccccccatt 3300

cctgccgcta agccctgcat ttggaactat caggatctgg tggaatacgc cgaaggcgac 3360

attgccaagg tctttggcgc cgattatgcc attatcgaca gctacgcacg gcgcgtgcgc 3420

ctgccgacct cggattatct gctggtctcg cgggtaacga agctcaacgc gcaaatgaac 3480

cgctatcaac cgagcagtat gaccacagaa tacgatattc ccgtggatgc gcccttcttg 3540

gtcgatggcc aaattccttg ggcagtggcg gtcgaatcgg gccagtgcga tttaatgctg 3600

atcagctact taggtatcga ttttgaaaac aagggcgagc"~gcgtctatcg tttgctcgac 3660

tgcaccctca ccttccttgg ggatctgccc cgcggcggtg ataccctgcg ctacgatatc 3720tccatcaacc actttgcccg caatggcgat accctgctat ttttcttctc ctacgaatgc 3780

tttgtgggcg ataagctgat cctcaagatg gacggcggct gcgcgggatt ctttaccgat 3840

aaagaactgg ccgatggcaa aggggtgatt cgcaccgagg tcgaaattaa ggtgcgcgag 3900

caagcacaaa ttgcactggc caatgaatat acccgaaacg gcaataagcc acgcttcacg 3960

ccgctactta actgcgcgca aactgccttt agctacggcc aaatccatcg tctactgagc 4020

gccgacattg gtggctgttt cggcggtgaa catgcggccc atcaagcaaa gtttggtctc 4080

cagccttcac tctgcttcgc ctcggaaaaa ttcctgatga tcgagcaagt cagtaagctc 4140

gaagtgcatg gcggcgcctg gggcttaggc ttgattgaag gtcacaagca attagccccc 4200

gaccattggt atttcccctg ccatttcaag ggcgaccaag tgatggcagg ctccctcatg 4260

gccgaaggtt gtggccagtt actgcaattt tttatgctgc atattggtat gcatgctaat 4320

acacaagcag gtggcgttac taacggccgt ttccaacccc ttgaaaacgc atcgcaaaaa 4380

gtgcgctgcc gcggtcaggt attgccacaa tctggcaccc tcacctatcg catggaagtc 4440

accgaaatcg gcatgagccc tcgcccctat gccaaggcga atattgatat tctgctcaat 4500

ggcaaagtgg tggtggattt ccaaaatctc ggggtgatga ttaaagaaga agcggattgc 4560

acccgctatt cgcaaagcca ttcttcacag ggtaatcata cgcaagcagc aaatatcgaa 4620

agtctcgcgg aacaagcgcc gctaatggcg caaatcccag atgttgcagc tccggtcaat 4680

aaaggcgttg tgccgcttaa gcatgtgagc gcgccgattg cgccagcagg ctctaagtac 4740

gccaaccgcg tgcccgacac cctgccgttt actccttatc atttatttga gtttgccacc 4800

ggcgatattg aaaactgctt cggccccgat tttagtattt accgtggctt aatcccgccg 4860

cgtacgccct gtggcgatct gcaactcact acccgagtgg tggctattga aggcaaacgt 4920

ggcgagctga aaaagccatc cacctgtatt gccgagtatg aagtgcccag caacgcgtgg 4980

tattaccgta aaaccagcca cccgagtgta atgccctact ctgtgctgat ggaaatatca 5040

ttgcagccaa atggctttat ctcgggttat atgggcacga ccttaggctt tccagggcag 5100

gagttattct tccgcaatct cgacggcagt ggcaagttac tgcgcgaagt ggatttacgc 5160

ggtaagacca tagtcaatga ttcgcgcctg ctgtctaccg tgattgctgg cagcaatatc 5220

attcaaaact ttagctttga gctgagctgc gatggcgagc ccttctaccg tggtaatgcg 5280

gttttcggtt actttaaggc cgatgcgctt aaaaaccagt tgggtatcga caatggtaaa 5340

attacccaag cgtggcacct tgagcgcggt atcaaagccg actgccaaat caatctgtta 5400

gataaaaatg gccgcagttt cgtggcgccg ctgggcaagc cacactaccg cctagcgggt 5460

gggcagctga actttatcga caaggccgaa attgtaaaaa ctggcggtaa gaaggggctc 5520

ggatacttat acgccgagcg caccattgac ccgagcgatt ggttcttcca gttccatttc 5580

catcaggacc ctgtaatgcc aggctccctc ggtgtcgagg cgattatcga attactgcaa 5640acctatgcca tagaccaaga cctaggcgca ggtttcaata atccgaaatt tggccaaatt 5700

ctgtcagaaa ttaaatggaa gtatcgcggt caaattaatc cattaaacaa acagatgtcg 5760

ctggatgtgc atatcaccag cattgaagat aaagacggta aacgcatcat caagggcgat 5820

gccaacctga gtaaggatgg cctgcgcatt tatgaggtga ccgatattgc catctgcatc 5880

gaagaggcat ag 5892<210> SEQ ID NO 40<211> COMPRIMENTO: 1644<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Shewanella oneidensis<400> SEQÜÊNCIA: 40

atgacgaata ccacactcga taataacgct ctcgataata acaagctcag tccttggccg 60

tggcaggttg atgaagccgc catcagtttc gatatcgaat cccttggcaa aaaactcaaa 120

gatctcaatc aagcctgtta cttaatcaac catgctgaga aaggcttagg catagcccaa 180

agcgccgaag tggtcggtct tgcagaaccc aataatggtt tgcatcctgt aagcgccttc 240

gcccccgccc ttggcaccca gagcttgggt gacagtaatt ttcgccgcgt gcatggggtg 300

aaatacgctt actacgcggg cgccatggcc aacggtatcg cctcggaaga gttagttatc 360

gccttaggtc aggcgggcat tttgtgctcc tttggcgcgg cagggttaat tccgtcgcgc 420

gtggaagccg cgattaaacg cattcaagcg gcattgccca atggtcccta cgcctttaac 480

ttgatccata gcccgagcga gcaagcgctg gagcgtggca gtgtcgaact cttccttaaa 540

catcaagtgc gtacggttga ggcctcggct ttcttgggct taacgccgca aatcgtctat 600

taccgcgccg caggcctgag tcgcgacgcc agcggcgaga ttgtgattgg caataaagtg 660

attgctaaaa tcagccgtac tgaggtggct accaagttta tggagcccgc ccccgttaag 720

atactgcaac aattagtgaa cgaagggctt atcagcgaag atcaaatgct gatggcgcaa 780

tctgtgccca tggccgatga cattaccgcc gaagcagact caggcggcca caccgacaat 840

cgccctctgg tcacgctatt gccaaccatt ttggcgctca aagataccat tcaagccaag 900

taccagtata aaacgccgat ccgagtgggc gcaggtgggg ggatcggcac ccccgatgcg 960

gcgctggcga ccttcaatat gggcgcggcc tatattgtca ccggctcaat caaccaagcc 1020

tgcgtggaag cgggtgccag cgaacatacc cgtaagttac tcgccaccac tgaaatggcc 1080

gatgtgacta tggcgcccgc cgccgatatg tttgaaatgg gcgttaagtt acaagtggtt 1140

aagcgcggca ccctattccc gatgcgcgcc aataagctct acgagattta cacccgctac 1200

gactcgatag aggcgattcc agcagaggaa aggcaaaagc tggaagagca agtatttcgc 1260

gcctcattag atgagatttg ggcaggtact gtggcgcact ttaatgagcg cgatcctaag 1320caaattgagc gcgcgctgga taaccctaaa cgcaaaatgg cactgatttt ccgctggtat 1380

ttaggtttat cgagccgctg gtcaaacact ggtgaagtcg gccgcgaaat ggattaccag 1440

atttgggcag gccccgccct cggcgccttt aatgcttggg ctaaaggcag ttatttagat 1500

gattaccgcg agcgcaatgc ggtcgacttg gcgaaacatt taatgcaagg cgccgcctac 1560

caagcacgga ttaacctgtt gttatcccaa ggggtaagta ttccagtcag cctgcaacgt 1620

tggaaacctc tgcaacgctg ctaa 1644<210> SEQ ID NO 41<211> COMPRIMENTO: 8316<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea<400> SEQÜÊNCIA: 41

atggctaaaa agcaaagcac atctaataac cctgtaacga atgaagcaga cgaaaaagcg 60

tttaattctc gtcttcaaga atgtcctatt gccattgttg gcatggcgtc tatctttgct 120

gatgcaaaga acttagaaaa ctactgggac aacatttttg aatcagtcga tgcaattaaa 180

gatgtaccca gtgatcgttg ggcaaaggat gattattact cgagcgatcc aaaagaggct 240

gataaaacct attgtaaacg tggtggtttc ttaccagaaa tagacttcga cccaatggaa 300

tttggtttgc caccaaacat tttagagtta actgatatcg ctcagttatt gtctttagta 3 60

gttgcacgtg aagtattaaa cgatgcaggt attggtgatg ggtctggtta cgatcgtgac 420

aaagttggta ttacgttagg tgtaggtggt ggacagaaac aaatttcgcc attaacgtct 480

cgcttgcaag gcccagtatt agagaaagta ttaaaagcgt caggtgttga agaagctgat 540

cgcgccatga tcattgaaaa gttcaaaaag gcctatatcg gttgggaaga aaactcattc 600

ccaggcatgt taggcaatgt tatttctggt cgtattgcta accgttttga ttttggtggt 660

actaactgtg ttgttgatgc ggcttgtgca ggttctttag cggcgattaa gctagctatc 720

tcagacttac ttgagcacag atctgaagta atgatctctg gtggtgtttg ttgtgacaat 780

tcaccattta tgtatatgtc attttcaaaa actcctgctt ttacaacagg tgaagacatc 840

cgcccatttg ataatgattc aaaaggtatg atgattggtg aaggcatcgg tatgatggct 900

ttcaagcgtt tggaagatgc tgaacgtgat ggtgataaag tttacgccgt acttaaaggt 960

attggtactt caagcgatgg tcgctttaag tcgatttacg caccacgccc agatggtcaa 1020

gctaaagcgt taaaacgtgc ttatgaagat gcagggtttg atccaaaaag ctgtggcatg 1080

attgaagcgc atggtacggg cacgaaagcg ggtgacgcag cagaatttgg cggcttagtt 1140

aaacacttct cacaagataa tgatcaaaaa caacatatcg ccttaggctc tgttaagtct 1200

caaattggtc acgctaaagc ggccgctggc gcagcaggta tgataaaagc ggtattagcg 1260cttcatcataattgaaaacaggtttaccacgtattagaagacactgttag

aataaattaaaacacgttaagatgaagcaagacattcctt

tcagtgagcg

ggccgcgagcgagtttacacaatgatgatg

gcaattggtagactttactgagtgatagtgggtgaggctggatattgctaaaccaagtag

ggcaaaggttggccacgctcgtacctgtttaagtcactgatacgctgatg

gttgaaaataaagaaatcgggagttaacagtcaccactagtttgatgatg

gtgcctgagcgtagaagttggcagatggaa

aagtgctacc agcaacacta catatcgaccgtccaatgta tttaaacagc gaaacacgtcgccgcgcagg tatcagttcg tttggttttgaatactcgcc aaaagcacaa ggccagtatcttacagcggc taacgaaaaa gcattagtgagtgtaaaagc agatgatcaa ccatacgcttcaacaccagc ggttgctcta gcccgctgtgtcaaaatgat tgaaggtgct ttgacgcaatgtgaagagtg gtcagtacca acgggtatttgaaaggttgt cgctctcttt tcaggtcaagttgcttgtaa cttcccaagc gtaatgcaagaagcaggttt aggtcaatta accccgacaacacgtaaagc acaagatgaa gctttacgttccttaagtgt tggtctatat aaagcgtttacgggacatag ctttggtgaa ttaaccgcgcactatatgat gttagcacgt agtcgtggtccgataggatt tgatgcgggc actatgattgatgatattaa agacatcaaa gatatctctattgttgcggg tgtaagcact caaatagcaaataaagttgt accattaccc gtttctgccgaaaaaccatt tagcgatgct attgataatgattcaaatgg cacagccaaa gcgcattcaaaaaatcatat tttagaatca gtacactttagcggacgagt atttgttgaa tttggccctatcttaaaaga taaagaagac gttgtagctaccgatatgca aatgcgtcaa gcggcagtgcaaattgaccc gtattcagcg gttaaacgtccgatgaagct aactggcgca tcttatgtgacactaaatga cggttggaca attaaacaagcacaagtggt tgaaaaaatt gttgagaagaagagaattgt ttacctgact gcagacgggactgttgctaa tggtcaagca gctaacagtg

aacctaatac ctcgttagac 1320

cttggatggc acgtgaagat 1380

gtggtactaa ctaccacatg 1440

gcttaaatgc agtgccacaa 1500

gttcattaac agattggaaa 1560

ttaacgcctt agttgttgaa 1620

gttttgttgc aaaaaatgct 1680

tccaagccaa atcaggtggt 1740

attaccgtaa gtctggcttg 1800

gctcacaata cgttaatatg 1860

ctgctgcaga tatggacagt 1920

cgtatccaat tcctgtattt 1980

taactcaaca cgcacaacct 2040

ctaatgctgg tttcaaagcc 2100

tttgggctgc aggcgtagta 2160

aagcaatggc agcacctaca 2220

ccgttgttgg aagtccaact 2280

ttgcaaacta caactctaat 2340

tcgctatcga tgagttaaaa 2400

cgttccatac gccacttgtg 2460

ctaaatttaa taagccgctt 2520

ataaagcggc tgatattaaa 2580

acgaagaaat tgacaacatt 2640

aaaatgtatt aaccaaactt 2700

tagcggttaa tgctaatcca 2760

aaatggcggt acttggttta 2820

cattatctgc acctaaaatg 2880

gtcctaaaac taaaaaggca 2940

caacgtcagt tcctgttgct 3000

tcgttgaagt agagcgcatt 3060

aagtcttcga tggtagtgtc 3120

ttgcagtaaa cgtaaacact 3180gcggatatag caaatagtat tgaacgtagcttattaaacg tacatgagca atatatgcaaacggtcctat ctaaccaaga agcaggcgagatgtatcatg acttccaatc agaaacattgactgataata tggcaacgat gttgtctgct

atagttaaaa catcaccaat cgcgactcaagcgcctgttg ttaaaccaac aatttcagtggtatctcctc cagtagtatc tgctccagtagccgttgcga tggcgccggt agctgaagttcttgaccttg aacgcattca aacagtgatg

ccaacagaaa tgttagaact tgaaatggataagcgagttg agattttagg ctcagtacaacctgaagact tagctgaatt acgtaccttagcacaagctg cggctcctag tgcgtcagcggatagctcag ttgtgccaag catcgattta

gttgctgaga agaccggtta cccaaccgaagacttaggta ttgattcaat aaaacgtgttaacgatttac cagagcttaa ccctgaagatgttaactaca tgcaatctaa agtatcagcgactgtaagca gcacgcctgc aatcgattta

gttgcagaaa aaactggcta cccaactgaagacttgggaa ttgactcaat caaacgtgttcctgatttac cagagcttaa cccagaagatgtaagttaca tgcaaagtaa agtatcagtaaatgcgacag ctaatgcaag tgctcctgca

atgacagtag tagcggagaa aactggctacatggaagctg atcttggtat cgactcaatcgaaactatcc ctgacttacc agagcttaacggcgaaatcg taagttacat gcaaagtaaaaatgctcaag ctgcgtcagc cattgtgcca

ttagattaca ttcaatccgt aatgatgacagaaatgcttg agttagccat ggatatggaa

gttagtcagt ttgttgatca ccaacaacag 3240

ggtccaaaag actatgcaaa aacgtttgat 3300

ttacctgaaa gcctagaccg tacgttaggt 3360

cgtgttcatg agcaatattt gaataaccaa 3420

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aatgacagtg caccagcact acatttagtc 4020

caacacatcc agaatgtgat gatggaagtg 4080

atgcttgagc ttgaaatgga catggaagct 4X40

gaaatcttag gttcagtaca agaaatcatt 4200

ttagctgaac tgcgcacctt aggtgaaatc 4260

gctcctgtag cgagtgcccc agttaatacg 4320

attcacatcc aaaatgtgat gatggaagtg 4380

atgcttgagc ttgaaatgga catggaagct 4440

gaaatactgg gtgctgttca ggaaactatc 4500

ttagctgagt tacgtacatt aggtgaaatc 4560

gcgcctgcag cagttgcagc aattgtgcca 4620

attgacttag attacattca gagcgttatg 4680

ccgactgaaa tgcttgaact tgaaatggac 4740

aaacgtgttg aaatacttgg tgctgttcag 4800

ccagaagatt tagctgagtt acgtacctta 4860

gtatctgtag cgccaatagc agttgttgat 4920

actaaggtaa gcagcgctcc tgcaatagat 4980

gtagtggcgg agaaaactgg ctacccaact 5040

gcagacttag gtattgactc aatcaaacgc 5100gttgaaattt taggtgctgt tcaggaaaccgatttagctg agttacgtac cttaggtgaacccgttgcag atgttactgc tgaaacaagtgacttagatt acatccaatc tgtaatgatgactgaaatgc ttgagcttgc catggatatg

cgtgttgaaa ttctcggtgc tgttcaggaagaagatttag ctgagttacg taccttaggttcgccaacgg atccgactga ccctaaaggagttcttgcaa atggtaggtc agtagaaaca

actgttgaac taacagcatt atcttcagtg

ggcaaacaat caggcgctaa cgcgttagttttaagtgctc aactgatcaa agcaggttgggtcagccatt cgaaaaaagc gtttgctacagataaaacac ttgatgaagc tcaagtaaaagcagttattt acttacaagc agcaaatactaaacaaggct taatgttagc cttcgtattaaatgcacgtg cttcttttgt tgtggtaactggtgatgctg atagtggtac gcaacaagttgcaggtttag cgggcttagt taaaaccatc

gttttctgtc gaattatcga tttatcaagtatcaatgatg agttacttga tattgacggcaacctgagta ataacattgg ctcacgtctagcactaacac caattgctaa agggtcaaacgtaagcggtg gcgcaaaggg ggttacagca

caagctaagt ttattttatt aggtcgttcacaaggcatta gtgatgaagt tgctttgaaaggcgaaaaac caacaccagt taaagtgactgaaattgcgc aaaccttagc ggcaattaaagccgacgtga cgaatagtgt aagtgttagc

ggtcaaggtt ccttacaagt tacgggcatctttattgagc aaaaaacgct tgaagaatttttattgtctt tattagcagc aaccaatgcc

atccctgact taccagagct taacccagaa 5160atcgtaagtt atatgcaatc taaggtaaca 5220

acgctagcga atgaaagcgc tccagcaatt 5280

acagtagtgg cagagaaaac tggctaccca 5340

gaagcagact taggtatcga ctcaatcaaa 5400

actattcctg acttaccaga gcttaatcca 5460

gaaatcgtaa gttacatgca aagtaaagta 5520

acaggtgtta aaaccactgt ccctgctgct 5580

gcggttaact ttcaaggcgc acctagtgca 5640

aacaaaattg ttcaagatgt tactggtgaa 5700

gttgatgatg gcagtggcgc agccgtggcg 5760

caagttacgg cattaaaacc taattgggtg 5820

gcagtaaatg ttgttgaaat tggtactcat 5880

gacatcattg agaaaacagc acaattagac 5940

gttgatgcta tcgaataccc agaagcggca 6000

gctaagttgt cgaatgtaaa gttagcgact 6060

cgccaaggtg gcgctttagg cttttctaat 6120

aaagccaatg tgaaagccga cttagtgcaa 6180

aaccatgaat ggaacgctgg cgaaggcagt 6240

aaattagcag cagataaagc agcaactatc 6300

agtattgttg aagtagcaca tgataccgat 6360

acgctatctg gtgtggttac cgatagttat 6420

acagcaatta acagtgactc ggtatttttg 6480

cattgcgtta tcgaaattgc caaacagtac 6540

tcctttgatg acaacgagcc aagctgggca 6600

aaagcagcga tgcaagcatt gattgcaagc 6660

cagtttgtac gtccggtatt agctaatcgt 6720

gcggcaggcg ggcaagcaca ttacgctgct 6780

gctgcggttc agcctttact aaaaacctta 6840

attcatggtg cgggtgtctt agcggacaag 6900

aacgcggtat acacaacgaa aatagatggt 6960

gaaaatatta aacacttagt gttattttca 7020tcagcggctg gtttttatgg taacccaggg caatctgatt actccatcgc taatgatatt 7080

ttaaataaaa cggcttaccg ttttaaagca ttaaatccaa gtgctcaagt actaagcttc 7140

aactggggac cttgggatgg tggcatggta acaccagagc ttaaacgtat gtttaacgac 7200

cgtggtgttt atattattcc acttgatgca ggcgctaaat tattggtaag tgaactcgct 7260

gcagatacta accgttgtgc acaaatcctt gttggtaatg atttgtcgaa ggatacagct 7320

aaggatgcat ctgtaaaaaa gccacaagtt agtcgcttaa ctagccgtgt taataaaaca 7380

cttttagcga ctaacaatac ctttttagct gaccacacca ttggtgatga caaagtatta 7440

ccaaccgtgt gcgccatagc atggatgagt gaagccgcaa tggttgctta cccagcattt 7500

cattatcaag gactagcaaa ctataagttg tttaaaggca tcatctttga tggcagtgaa 7560

gcaacagaat attcaatcga tatgattgct caagttgagg gtgaaagctt agtagtagac 7620

actaaaattt caagtactaa tgagcagggt aaaccagtat ttcattatgg cgctcagctg 7680

acattagtcg ctaaagcgga aagaaaagaa gcgccaacgg ttgaacttat attacctgaa 7740

gctttaccag aattacttcc ggaaacagta ctttcgagca ctgaagaagc aggcgcttta 7800

tatactaatg gtactttatt ccacggtgaa agcctgcaag gaattaaggc aatacttgcg 7860

tgtaatgagc aaggtctatt attgaaatgc caagtaccag cagtggcaag tcttaagcaa 7920

ggcgagttcc cgattagccc gttgaatagt gcaagcgaac actcgaacat ttttgccaat 7980

gatatcgctt atcaagccat gttagtttgg gctaaaaagc aattaggttt aggtagctta 8040

ccgtcaagta cgcaaagttg gacggtatac cgtgacgtca gtcttggtga aaacttctac 8100

cttaaattaa cggtagtgaa aagctcaggc aaaggaaagc aacgtggttc tttagtggct 8160

gacattgaaa tgattgatga aaacaatcga ttactcagtg agataaaatc tgccaaagtg 8220

acggctagtg ctaacttaaa tgacttattc ctacctaaaa aggcaccgaa aactacaccg 8280

aaagctaagc aaagtgaaag tgaggcaagt gcgtaa 8316<210> SEQ ID NO 42<211> COMPRIMENTO: 2703<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea<400> SEQÜÊNCIA: 42

atggttaaca atcattataa aacggccatt attggtttag atgctcagtt tgaaaatgaa 60

cagagcgttc aaaccgatat tgatcgggtt gaacgtgcgc tatacctcgg caaactttca 120

gggaatatct caggtaagag cctagatcaa gctgaaatat cagacaagga aaatacaaca 180

ctcaagctaa gctgttcagc aacggttgag cgtatggcac ttgctaatca agtcagtagc 240

gctgatatca aagttgttgt gctaatgcac gacagtgaaa atatagtcat tgatattgaa 300aatgttattg ttgttacttc gttagctagc gcactacaac aaatagatac gttgattgag 360

caaaatttct tggtagcctt gcttggtatt aatttactta gtttaagcga taagcaaaat 420

ggcagtgatg tttgccaaga gctggcgacc atctcatatg atcaaaactt tagcgcttat 480

caagcgtgtc gcggtattgc tgcattatta tttgcacctg caacgtttgc acaaactcat 540

cactgttatg tctattcgcg gataaaaggt tttgccacgg ggagcgatat aactagtgtt 600

actgctgcag cgttagataa agcgcaagtc aatgcaacag atattggttt gcttgaagtt 660

tctgcgttat caaataaaga tgcttcgctt gctgaaacaa aaggtttatt gagccattat 720

ttaatagatg gtgccaataa agcagtaatg agtgaagatg ccaatgaagc attaaatacg 780

gctatctctt gtgcacgtag tgttaccgga gaaggggctg gcttttctga agtgttaggt 840

ttgttacgta ccgttattgc actgcaacaa cgttatattc ctgccattac tgattggcaa 900

caaccacaag ccagtgaact tgaaaaatgg caaagctcaa gctgttactt tccaacagag 960

gctcgtccat ggtatccaca gcctaatggt aatgcccact ttggcgcgta cagttgttta 1020

accgtttcag acaataatca tgattattgt catattatcc tgcaagaaga gcaggttggt 1080

cttattgatg gtaaacatgc tgcaagcgat attcgcagta atggttttat tgcctgtagt 1140

gatttacagc tagtattaat tggcgcagag gatttaccta atttattaac tcagttaatt 1200

gatcttgaag atgagcttga agctactttt aaaggtaacc ttgaagagaa ggctgaacag 1260

agtagaacat cacttaaaga tattgcttta acgcgttttg aacagtctaa aggcaatagc 1320

agtcgttata cgattgcctt attgtctgaa tcgatagaag aactaagcaa agaaataaaa 1380

ctcgctaaag ccggtgttcc tgcagcattt tctgatgtta attctgataa gaataatcag 1440

caagaatggc gaacgccaaa aggcagctat tttagtgcta gccctgttaa taatagtgaa 1500

tcagcgacta ataatgtttc atttttatat ccgggcattg gtgcaacgta tgtcggttta 1560

ggacgtgatt tattccacct ttttcctgaa atacaccaag atgttgctaa cttagccgac 1620

gatattggcg caagtttaaa agataaatta ttaaatcccc ggtccataat tcgtcctgat 1680

tttaaagcat taaaacagct tgatttaaac ctccgtggta agttggctga tattgcagaa 1740

gcaggcgttg gttttgcgtg tgtattcact aaagtatttg aaaacgtctt taaggtaaag 1800

gcagactttg ctacaggtta cagcatgggt gaagtcagta tgtacgctgc attgggtgca 1860

tggcaacaac caggattgat gagcgcacgt ttagctaatt cagatacctt caatcaacgt 1920

ttatgtggtg acttgctaac tttacgtgag cattgggggc ttcctagttc gacaagtagt 1980

cctactaata gccctagcaa tgaccaagct gaaagtctag atgagttgat ttgggaaacc 2040

tacaccatta aagcaacgtt agatgaagtt atcgctgcca gtgaagatga agaacgtgtt 2100

tattgcacca tagttaatac gccagacagt ttattattag gtggttatcc agccgattgt 2160

ctacgcgtta ttaaaaaact tggtgtacgt gctatgccac ttaacatggc aaatgcaatt 2220cacagtgcac cagcaaaaat tgaatatgac gacatggttg aactttatac catggacgtt 2280

actgcgcgct taaaaactaa aatgtattca agctcttgtt acttacccgt accacaaatg 2340

agcaaagcga ttgctcacag tgttgctaag tgtttatgcg accgagtaga tttcccccgt 2400

ttaattaaca ccatgcacga taaaggtgcg cgggtattta ttgaaatggg accagggcgc 2460

tcgttgtgca gctgggtaga taaaatttta gattttgacg atagcagtaa aaatggcctc 2520

tctaataaag aacctaatca agttgctcat aaagcacgag tatcagtgcc agtgaatgca 2580

aagggcacaa gtgacgagtt aacgtatgtg agagccgttg caaaattggt tagtcacggg 2640

gtgaaactag atcttcaccg cttatttaat ggctcaatta ttgtgaaaaa gccacaagct 2700

taa 2703<210> SEQ ID NO 43

<211> COMPRIMENTO: 6051<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea<400> SEQÜÊNCIA: 43

atggaaaata ttgccgtagt aggtattgct aatttattcc caggatcttc tgcaccagaa 60

gaattttggc agcaattgct gaagaaacag gattgtcgca gtaaagcaac caaagaacaa 120

atgggtgttg accctgaaaa atacaccgga aaaaaaggcg acacagataa attttactgt 180

gtgcacggtg gttatattcg agatttcaat tttgatgcaa catcatttat tcagaacact 240

gctggtttaa ccgcaccgct gagtgaagag tacctaaatc aactagatga tctaaataag 300

tgggctttgt atgttaccca acaagcatta accgacgcag gttattgggg cagtgataag 360

cttgagcaat gtggcgttat tttaggaaac ttatcgtttc caaccaagtc gtctaatcac 420

ttatttatgc cgttgtatca ccaagttgtc gataacgcat taaaagccgg tatcgataaa 480

gattttcagt taagtcattt ttctgatact gatatttcga ccaataatat tcatgcagat 540

aatgcgctgg ttgcgggtta ccctgcggcg cttttagcga aagctgcggg tcttggtggt 600

acacactttg cgcttgacgc agcctgtgca tcaagctgtt attcggtaaa attggcttgc 660

gattacttgc atactggtaa agctgacatg atgctagcag gtgcggtatc aggctctgat 720

cctatgtttg ttaatatggg gttctcaatc tttcaagcct acccagctaa caatattcat 780

gccccgtttg ataaaaactc tcaaggctta tttgccggtg aaggtgcagg catgatggta 840

ttaaaacgcc atagtgatgc ggtacgtgac ggtgataaaa ttcatgcgat tatcaaaggt 900

ggtgctttat caaatgacgg taaaggtgaa tttgttctta gcccaaatac taaagggcaa 960

gtgcttgttt atgaacgtgc ctatgaagat gcagcggttg acccacgtga tgtagattac 1020

attgaatgtc atgctactgg cacaccaaaa ggcgataacg tagaacttgg ctctatggat 1080accttcttca gccgtttccc aagagaaaat ggcaataagc ctttgcttgg ctcagtcaaa 1140

tctaacttag gtcacttact taccgcggca ggtatgccgg gtatgactaa agcgatttgg 1200

gcacttaatg aagcaaaaat ccccgcaacc attaacttaa acgagccatt aagctctaaa 1260

aaaggttatt taggcggcgc acaaatgcca acagatacta tcgattggcc agttcctgct 1320

aacagtgcaa acaagccaag aaccgctggt gtcagtgtat ttggttttgg tggctctaat 1380

gctcatttag ttttacaaca acccacacag caacttgagc ctattacggt aaaagccaaa 1440

ccacgtgagc cgctcgccat tattggtatg gatgctcatt ttggtggtgc tgaagatctt 1500

gctagtttta aaacacttat cgaaactaat gataatactt tcagagaatt accgacgaat 1560

cgttggaaag gcattgataa cgatactgat gtgatgaatg ccttgcagct tagtaaagca 1620

cctcagggcg gctatgttga aaactttgat attgattttt tacgtttcaa agtgccacct 1680

aacgagcaag actgtttaat tccccagcaa ctgatgatga tgaaagttgc tgataatgca 1740

gcgaaagatg caggacttaa agaaggtagc aacgttgcgg tacttgtagc tatgggtatc 1800

gaactcgagc tgcatcaata ccgaggtcgc gttaacttaa gcacacaaat tgaagaaagt 1860

ttattacagc aaggcgttac gcttaactca gagcaacgtg aaacattaac caatatcgct 1920

aaaaatggcg ttgctcacgc ggcgcagctt aatcaatata cctcgtttat tggtaatatt 1980

atggcgtcac gtatttcagc attatgggat tttaccggtc ctgcgataac gctttctgcg 2040

gaagaaaact cagtttatcg ttgcgtagaa ttggctgaga acttattcca aacatcagac 2100

attgatgccg tgattatagc ctcggttgat ttagctggct cagtagaaaa tattacctta 2160

agacaacact tcggtccggt agaaaagggg caggtagaaa caggctcagt ctcaacaaat 2220

tctgcaacct cagcaaatgt ccttgaacaa aatacatggc gagtaggtga aggggcaggt 2280

gcgtttgtcg ttaaacccct gtctaaagtc atccaagttg cagagcaaag tatttacgcc 2340

accatagacg gtattagttt tgccaatggt aaagatgctg cggccatcac taaggccgca 2400

agcgcttcac tgaacattgc agggcttaac agcgcagata ttacgagtgt tgaagcacat 2460

gccagtggtt ttagtgctga aaatatagca gaagctcaag cactaccagc attgtatgca 2520

ggcaaagtga ttagcagtgt taaaagcaat attggtcata cgtttaatgc cagtggtgtt 2580

gccagtatta ttaaaacagc actcttgtta gatgataaag tgttgaatga agagcgctta 2640

acctctcatg tcgcgtctca tatagccgtg aatggcttag gtaaagatga aagctgtgcg 2700

caccttattt tgtcatcgag caagctagcc catcaagcag cgcctcctcc aacaggcaaa 2760

caacgtccta aactaattaa aaatattagt ttaggtggca aggccatttt tgcagacatc 2820

attgctaacg ttaaagcacc ggcaatgacg gcgattaagc aagcttttac taagcaacct 2880

ttacgtcagg ttaaacaggc ggttaatgtc atgaacatta aacctaagct aactgaagca 2940

aaagtagctg aagttaagtt atcccaagct gctcagccaa ctaatttatc tagtcaagct 3000cacacacgat caacggtcgt taccggagta aaagtgaaga aagttactaa tactgctatt 3060

gcaaataacc aaagcaagag gcaagtacct gcagatgtta aacatcaagc aagtaaagaa 3120

attttccaag aatcagctac acatcaagcc tttttaaata ctcgccaaat ggcaggtcag 3180

cagatttcga aattgattga aatgcaagct aatgtcagtg cagggttgcc gacttatgtt 3240

tcaacaacaa gcgcagctga gccggtaaat gaacgtcagc atgcacctga gctttcggtt 3300

gtttcttcaa atgtacaagc ggaaaaccag cagtgggcaa atgaatctgg ttttaaaatc 3360

aaaggcccag caggatacag ctacccacca ttacaacttg aagagcgctt taataaaccc 3420

gaagaaatta tttgggatac tgccgattta gttgaatttg ctgaaggtga tatcgcgaaa 3480

gtttttggtg atgagtttaa aatcatcgac agttattcac gtcgtgtacg tttaccgacc 3540

acagattatt tattagtttc acgtgttacc gagcttgaag ctacggtaaa Cgaatataaa 3600

aaatcataca tgtgcactga gtatgatatt cccgttgatg cgccgttcct tatcgatggt 3660

caaattcctt ggtcagtatc ggttgaatca ggacaatgtg atttattatt aatttcttat 3720

attggtattg attttcaagc caaaggcgaa cgtgtttatc gtttacttga ttgtgaatta 3780

accttcttag aagaaatggc ctttggtggt gaaacactgc gttatgaaat tcatatcgac 3840

tcatatgcac gaaacggcga gcaattatta ttcttctttc actacgattg ttatgttggt 3900

gataaaaaag tattaatcat gcgtaatggt tgtgctggtt tcttcactga tgaagaactt 3960

gctgatggca aaggcgttat cttaaatgat aaagataaag cagaattagc taatgccgtt 4020

aaaagtgatt ttgcaccatt aataactaat attgatgcag cgaaacaagc caaacagcat 4080

ttcgattacg ttgacatgat gaaattggtt gatggtgatg ttgcaggttg ttttggtgaa 4140

gaatataacc aacaaggtcg taatccgtca ttaaagttct cgtctaagaa attcttaatg 4200

atagagcgca ttactaagat tgatgcaaaa ggcggtcatt ggggcttagg cttactagaa 4260

ggtcaaaaag acttagaccc acagcattgg tatttcccat gtcactttaa aggtgaccaa 4320

gtgatggccg gctcattaat gagtgaaggt tgtggtcaaa tggcgatgtt cttaatgctt 4380

aaattaggca tgcacgctaa tgtaaataac gcacgctttc agcctatgcc aggtgagtcg 4440

caaaccgtac gttgtcgtgg ccaagtactt ccgcagcaca atacgttaac gtatcgcatg 4500

gaagtaaccg caatgggcat gactccttac ccattcttaa aagcgaatat cgaaattatt 4560

cttgatggta aagcggttgt tgattttaaa aacttatcag tgatgatcac tgaacaagat 4620

gataactcgc catatccggt aactttacct gacaatgttc agcttcaaca aagcaaggtg 4680

caaccagtaa caaatgccga agttaaaagt gcagacacca atcttgaact agatgaacgt 4740

ggtgtagcgc catttaaaca ccctgaacgt gctttaatga aagttgtgtc tgatttgatc 4800

gcgccaaaag agaagggcgt aacaccaatt caacattttg aagcgccaat ggtagctggt 4860

caaaaccgcg tacctaacca agcaccgttt acaccttggc atatgtttga atttgctacc 4920ggtaatatct ctaaatgttt tggtcctgat tttgacgtgt ataaaggtcg tattcctcca 4980

cgtacaccct gtggtgattt acaagtcgta acacaagttg tcgaagtgca aggtgagcgt 5040

ttagatctta aaaagacttc tagctgtatc gcagaatact atgtgccgag tgatgcatgg 5100

tatttcacta aaaacagcgt taataactgg atgccttatt cattaatcat ggaaattgcc 5160

ttacaaccga atggctttat ttcaggttac atgggcacca cacttaaata cccagaaaaa 5220

gatttattct tccgcaacct tgatggcagc ggtgacttaa tcaaacaggt agatttacgt 5280

gataaaacca ttgttaataa atcggtatta ttaagcacta ccatggctgg cggtatgata 5340

gtacaaagct tcacttttga gctgtatgtg aaaaatgaaa gtgctgctgc tcagtcatta 5400

gaaagtcatg acttgttcta caaaggtacg gccgtttttg gttactttgg tgcagatgcg 5460

ttaacgaacc aattaggtat tgataacggt aaagtaacgc acccttggtt tgttgataac 5520

aatactccta aatcagacat taaggtgatc gatcttagta attctaatct gcctttatac 5580

caagcgccat cgaacaaacc gcattacaaa ttagcgggtg gtcaaatgaa ctttattgat 5640

accgtttcaa tcgttgaagg cggcggtaaa gcgagtattg cttatgtaca cggcgaacga 5700

actattgatg caacagactg gttcttccgt tatcacttcc accaagatcc ggtaatgcct 5760

ggctcattgg gtgttgaagc ggttatcgaa ttaatgcaaa cctacgcatt agaaaatgat 5820

ttaggtaagc aatttactaa cccaagattt attgcaccgg caaccctagt taaatggaaa 5880

tatcgtggtc aaattacgcc attaaacaaa cagatgtctc ttgatgtgca tattacagac 5940

atcattaaag aagacggtga agtgagatta gtcggcgatg ctaacttatc gaaagatggc 6000

ttacgtatat acgaagtaaa agatattgtc ctgtcgcttg ttgaagcata a 6051

<210> SEQ ID NO 44

<211> COMPRIMENTO: 1599

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Colwellia psychrerythraea

<400> SEQÜÊNCIA: 44

atgtcaaatt taagttatag caatgccaat ccaattgatt gggcatggaa agttgatagc 60

agcgctgtta aagccaatga tgtagaaata aagtcagcgt taatggattt aacaaagccg 120

gtttatgtcg caaaatctgc taatagtttt ggtgtagtaa acgctactgc agctaccggt 180

gatacggatg ttgtcgcttt tgctcaaaag ctaactccgc aagatttagg tgatgatgct 240

tataaaaagc agcatggcgt taaatacgct tatcatggcg gcgctatggc taatggcatt 300

gcctcagttg agctcgttgt cgctttaggc aaagccggtt ttttatgttc attcggcgct 360

gctggattag taccagatgc tgttgaagat gcgattaaac gtatccaagc agaattacct 420

aatggtcctt atgcggtaaa tttaatacat gcaccagcgg aagaagcatt agagcgtggc 480gctgttgaac gctttttaaa gcttggcgtt aaaacagtag aagcttcagc ttatttaggg 540

ttaaccgaac atatcgtttg gtatcgttta gcgggtttat ctaaaaatag cgatggcagc 600

gtaaagatcg gcaataaagt tattgcaaag gtatcgcgaa ctgaagttgg tcgtcgcttt 660

atggagcctg cgccacaaaa actaattgat aagctactgg ctcaaggtaa agtcacccaa 720

gagcaagctg agctttcaaa gcttgtacct atggctgatg atataaccgc tgaagcagac 780

tctggtggcc ataccgataa tcgacctttc ttaaccttat tgccgacgat tatagcgctt 840

cgtgatgaag ttcaagcaca gtacaacttc tctccagcgc tacgtgttgg tgctggtggt 900

ggtattggta cccctgaagc tgcattagct gcctttaata tgggctcagc ttatattgtt 960

ttaggctcgg taaaccaagc atgtgttgaa gctggcgctt ctgaatacac tcgtaagtta 1020

ctggctcagg ttgaaatggc cgatgttact atggcaccag cggcagatat gtttgaaatg 1080

ggcgtgaagt tgcaagttgt taagcgtggt tcaatgttcg ctatgcgcgc gaagaaactt 1140

tacgagctgt acattaacta tgactcaatt gaagctattc cagccgacga acgtcttaag 1200

attgaaaagc agatatttcg ctctaatctt gatgatgttt gggcaggtac tgaagccttt 1260

ttcactgaac gtgatcctga aatgttggcg cgagcacaat ctagccctaa acgtaaaatg 1320

gcgctaattt tccgttggta tttaggatta agctctcgct ggtcaaatac cggcgagaaa 1380

ggccgtgaaa tggattatca aatttgggca ggcccaagtc ttggcgcatt taacagctgg 1440

gtaaaaggca cttacttaga agattatact cgccgtggcg ccgtagacgt tgctttgcat 1500

atgttaaaag gtgcagccta cttacaacga gttaatcagc taaaactaca aggtgttagc 1560

ttaagcactg aactggctgg ctatcgtagc gaagattag 1599

Claims (25)

1. Polinucleotídeo isolado compreendendo uma seqüência sele-cionada do grupo que consiste em:(a) um polinucleotídeo que hibridiza para dar SEQ ID NO: 6 ou SEQ IDNO: 8, ou um seu complemento, sob condições de 5X SSC1 50% deformamida e 42°C, em que o polinucleotídeo codifica polipeptídeo comatividade de transferase de fosfopanteteínila ;(b) um polinucleotídeo que codifica a seqüência de polipeptídeos de SEQID NO: 5 ou SEQ ID NO: 7; e(c) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo com atividade detransferase de fosfopanteteínila e tendo pelo menos 75% de identidadede seqüência a uma seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 5 ouSEQ ID NO: 7.

2. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 1, ulte-riormente definia como operavelmente ligado a um promotor heterólogo.

3. Contructo de DNA compreendendo um promotor heterólogooperavelmente ligado ao polinucleotídeo isolado como definido na reivindi-cação 1.

4. Contructo de DNA de acordo com a reivindicação 3, em que opromotor é funcional em uma célula procariótica.

5. Contructo de DNA de acordo com a reivindicação 3, em que opromotor é funcional em uma célula eucariótica.

6. Contructo de DNA de acordo com a reivindicação 5, em que opromotor é funcional em uma célula de planta.

7. Contructo de DNA de acordo com a reivindicação 6, em que opromotor é um promotor de semente aumentada.

8. Célula hospedeira transformada com uma molécula de DNAque codifica um polipeptídeo tendo atividade de transferase de fosfopantete-ínila operavelmente ligada a um promotor funcional na dita célula hospedei-ra, em que a molécula de DNA compreende uma seqüência selecionada dogrupo que consiste em:(a) a seqüência de polinucleotídeos isolada como definida na reivindicação- 1;(b) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos- 75% de identidade de seqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQID NO: 1;e(c) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos- 75% de identidade de seqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQID NO: 3.

9. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 8, em que acélula hospedeira ulteriormente compreende uma molécula de DNA que co-difica um polipeptídeo de sintase de policetídeo compreendendo um sítio deligação de fosfopanteteína, em que a molécula de DNA que codifica um poli-peptídeo de sintase de policetídeo está operavelmente ligada a um promotorheterólogo.

10. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 9, em queo polipeptídeo de sintase de policetídeo compreende um sítio de ligação defosfopanteteína da Moritella marina.

11. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 9, em quea célula hospedeira ulteriormente compreende uma molécula de DNA quecodifica um polipeptídeo de sintase de policetídeo tendo pelo menos 75% deidentidade de seqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 19.

12. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 8, em quea célula hospedeira é uma célula de planta.

13. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 8, em quea célula hospedeira é uma célula fúngica ou bacteriana.

14. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 8, definidacomo exibindo biossínte de ácido graxo alterada em relação a uma célula domesmo genótipo como a dita célula hospedeira mas carecendo da moléculade DNA.

15. Planta transgênica compreendendo uma molécula de DNAque codifica um polipeptídeo tendo atividade de transferase de fosfopantete-ínila operavelmente ligada a um promotor funcional na dita planta, em que amolécula de DNA compreende uma seqüência selecionada do grupo queconsiste em:(a) a seqüência de polinucleotídeos isolada como defnido na reivindicação 1;(b) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 75% de identidade de seqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQID NO: 1; e(c) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 75% de identidade de seqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQID NO: 3.

16. Planta de acordo com a reivindicação 15, em que a planta éselecionada do grupo que consiste em canola, Brassica campestris, colza desemente oleosa, semente de colza, soja, crambe, mostarda, grão de rícino,amemdoim, gergelim, rama de algodão, linhaça, açafrão, óleo de palma, Ii-nho, girassol, milho, arroz, cevada, milho miúdo, centeio, trigo, aveia, alfalfae sorgo.

17. Planta de acordo com a reivindicação 15, ulteriormente defi-nida como compreendendo uma molécula de DNA que codifica sintase depolicetídeo.

18. Semente da planta transgênica de acordo com a reivindica-ção 15, em que a dita semente compreende compreendendo uma moléculade DNA.

19. Método de produção de comida ou alimento, compreenden-do as etapas de:(a) obtenção da planta transgênica como definido na reivindicação 15 ouuma sua parte; e(b) produção da dita comida ou alimento a partir da mesma.

20. Método de acordo com a reivindicação 19, em que a comidaou alimento é óleo, silagem, farinha grossa, grão, amido, farinha de trigo, ouproteína.

21. Composição de comida ou alimento produzida pelo métodocomo definido na reivindicação 19, e compreendendo uma molécula de áci-do nucléico detectável compreendendo o polinucleotídeo isolado da reivindi-cação 1.

22. Composição de comida ou alimento produzida pelo métodode acordo com a reivindicação 21, em que a planta da reivindicação 15compreende uma molécula de DNA que codifica sintase de policetídeo e emque a composição de comida ou alimento compreende ácido docosaexae-nóico ou ácido eicosapentaenóico.

23. Composição de comida ou alimento de acordo com a reivin-dicação 21, em que a planta é de uma espécie que não produz ácido doco-saexaenóico ou ácido eicosapentaenóico quando a planta carece da ditamolécula de DNA molecule que codifica sintase de policetídeo e molécula deDNA que codifica um polipeptídeo tendo atividade de transferase de fosfo-panteteínila.

24. Método de produção de ácido docosaexaenóico ou ácidoeicosapentaenóico compreendendo as etapas de:(a) expressão nas sementes de uma planta que compreende uma molécu-la de DNA que codifica sintase de policetídeo um polinucleotídeo sele-cionada do grupo que consiste em: (i) uma seqüência de polinucleotí-deos isolada da reivindicação 1, <ii) um polinucleotídeo que codifica umpolipeptídeo tendo pelo menos 75% de identidade de seqüência à se-qüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 1, e (iii) um polinucleotídeoque codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 75% de identidade deseqüência à seqüência de polipeptídeos de SEQ ID NO: 3 para produ-zir ácido docosaexaenóico ou ácido eicosapentaenóico e; e(b) obtenção do ácido docosaexaenóico ou ácido eicosapentaenóico a par-tir da dita semente.

25. Composição de comida ou alimento produzida a partir deuma planta preparada de acordo com a reivindicação 24, compreendendoácido docosaexaenóico ou ácido eicosapentaenóico.