BRPI0708101A2 - anticorpos contra il-22 humana e usos para eles - Google Patents

Abstract

ANTICORPOS CONTRA A IL-22 HUMANA E USOS PARA ELES. A presente invenção refere-se a anticorpos humanos e fragmentos dos mesmos de ligação a antígenos que especificamente se ligam à interleucina-22 (IL-22) humana. Os anticorpos podem atuar como antagonistas da atividade da IL-22, com isso modulando as respostas imunes, em geral, e aquelas mediadas pela IL-22, em particular. As composições e os métodos descritos podem ser usados, por exemplo, no diagnóstico, no tratamento ou na prevenção de distúrbios inflamatórios, doenças auto-imunes, alergias, choque séptico, distúrbios infecciosos, rejeição ao transplante, câncer, e outros distúrbios do sistema imune.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICOR-POS CONTRA A IL-22 HUMANA E USOS PARA ELES".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção refere-se aos anticorpos, por exemplo,anticorpos humanos, e aos seus fragmentos de ligação a antígenos queligam a interleucina-22 (IL-22), em particular, a IL-22 humana, e ao seu usona regulação das atividades associadas com a IL-22. Os anticorposdescritos neste documento são úteis no diagnóstico, na prevenção, e/ou notratamento de distúrbios associados com a IL-22, por exemplo, os distúrbiosauto-imunes, incluindo a artrite.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os antígenos iniciam as respostas imunes e ativam as duasmaiores populações de linfócitos: as células T e as células B. Apósencontrarem o antígeno, as células T proliferam-se e diferenciam-se emcélulas efetoras, enquanto que as células B proliferam-se e diferenciam-seem células plasmáticas que secretam anticorpos. As células efetorassecretam e/ou respondem às citocinas, que são pequenas proteínas (<cerca de 30 kDa) secretadas por linfócitos e outros tipos de células.

A interleucina-22 (IL-22) é uma citocina da classe Il que mostrahomologia de seqüência com a IL-10. A sua expressão é supra-regulada nascélulas T pela IL-9 ou por ConA (Dumoutier L. et al. (2000) Proc Natl AcadSci USA 97(18):10144-9). Os estudos adicionais têm mostrado que aexpressão do mRNA da IL-22 é induzida in vivo em resposta à administraçãode LPS, e que a IL-22 modula os parâmetros indicativos de uma resposta defase aguda (Dumoutier L. et al. (2000); Pittman D. et al. (2001) Genes andImmunity 2:172). Além disso, a IL-22 aumenta a expressão de peptídeosantimicrobianos associados com a defesa do hospedeiro, incluindo a β-defensina, S100A7, S100A8, e S100A. Wolk et al., Immunity, 21:241-54(2004); Boniface et al., J. Immunol. 174:3695-3702 (2005); Liang et al., J.Exp. Med., 203(10):2271-79 (2006). Consideradas juntas, estas observaçõesindicam que a IL-22 desempenha uma função na inflamação (Kotenko S.V.(2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40).

A IL-22 é acreditada ligar-se a um complexo de receptorconsistindo em IL-22R e IL-10R2, dois membros da família de receptor decitocina do tipo Il (CRF2) (Xie M.H. et al. (2000) J Biol Chem 275(40):31335-9; Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32). Ambas ascadeias do receptor de IL-22 são expressas constitutivamente em diversosórgãos. As linhagens de células epiteliais derivadas destes órgãos sãoresponsivas a IL-22 in vitro (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth FactorReviews 13(3):223-40). A IL-22 induz a ativação das vias de JAK/STAT3 eERK, bem como de intermediários de outras vias de MAPK (Dumoutier L. etal. (2000) supra; Xie M.H. et al. (2000) supra; Dumoutier L. et al. (2000) JImmunol 164(4):1814-9; Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32; Lejeune1 D. et al. (2002) J Biol Chem 277(37):33676-82).

Os membros da CRF2 são receptores para o IFNa/β, o IFNy, ofator de coagulação Vila, a IL-10 e as proteínas relacionadas a IL-10 IL-19,IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, bem como as citocinas similares ao IFNrecentemente identificadas, IL-28 e IL-29 (Kotenko S.V. (2002) Cytokine &Growth Factor Reviews 13(3):223-40; Kotenko, S.V. et al. (2000) Oncogene19(21):2557-65; Sheppard1 P. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):63-8;Kotenko, S.V. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):69-77). Além destesreceptores de membrana, a família CRF2 também inclui uma proteínasolúvel, a proteína de ligação a IL-22 (IL-22BP), a qual é específica para aIL-22 e bloqueia a sua atividade (Dumoutier, L. et al. (2001) J Immunol166(12):7090-5; Kotenko, S.V. et al. (2001) J Immunol 166(12):7096-103; Xu,W. et al. (2001) Proe Natl Aead Sei USA 98(17):9511-6; Gruenberg, B.H. etal. (2001) Genes & Immunity 2(6):329-34; Wei C-C et al. (2003) Genes &Immunity 4:204-211). Embora o complexo de receptor de IL-22 seja únicopara a IL-22, cada cadeia (isto é, IL-22R e IL-10R2) é dividida com outrosmembros da CRF2 para definir receptores funcionais para outras citocinas,incluindo a IL-20, a IL-24 (IL-22R/IL-20R2), a IL-28, a IL-29 (IFN-DR1/IL-10R2) e a IL-10 (IL-10R1/IL-10R2) (Dumoutier, L. et al. (2001) J. Immunol.167(7):3545-9; Wang, M. et al. (2002) J Biol Chem 277(9):7341-7; Parrish-Novak1 J. et al. (2002) J Biol Chem 277(49):47517-23; Kotenko, S.V. et al.(1997) EMBO J. 16(19):5894-903; Spencer1 S.D. et al. (1998) J Exp Med187(4):571-8).

Ambas as cadeias do receptor composto da CRF2 sãonecessárias para a transdução de sinal. Uma cadeia do receptor compostotem sido historicamente definida como uma cadeia de ligação ao Iigante (porexemplo, IFNyRI) com base em sua alta afinidade pela citocina. A outracadeia (por exemplo, IFNyR2) tem sido caracterizada como uma cadeiaauxiliadora ou acessório, e mostra afinidade mínima pela citocina sozinha(Kotenko, S.V. et al. (2000) Oncogene 19(21 ):2557-65). Para a IL-22, o IL-22R é a subunidade de receptor de alta afinidade, com o IL-10R2subseqüentemente se ligando ao complexo de IL-22/IL-22R (Li, J. et al.(2004) Int. Immunopharmacol. 4(5):673-708; Logsdon, N. J. et al. (2002) J.Interferon Cytokine Res 22(11 ):1099-1112).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

O presente pedido de patente proporciona, pelo menos em parte,agentes de ligação a IL-22, tais como anticorpos e seus fragmentos deligação a antígenos, que se ligam à interleucina-22 ("IL-22"), em particular, aIL-22 humana, com alta afinidade e especificidade. Os anticorpos e os seusfragmentos de ligação a antígenos da presente invenção são tambémreferidos neste documento como "anticorpos anti-IL-22" e "seus fragmentos",respectivamente. Em uma modalidade, o anticorpo ou o seu fragmento reduz,inibe, ou antagoniza a atividade da IL-22. Tais anticorpos podem ser usadospara regular as respostas imunes ou os distúrbios associados com a IL-22por antagonismo da atividade da IL-22. Em outras modalidades, o anticorpoanti-IL-22 pode ser usado diagnosticamente, ou como um anticorpo dealvejamento para distribuir uma substância terapêutica ou um agentecitotóxico para uma célula que expressa a IL-22. Assim, os anticorpos anti-IL-22 da invenção são úteis no diagnóstico, no tratamento, e/ou naprevenção de distúrbios associados com a IL-22, por exemplo, distúrbiosauto-imunes, por exemplo, artrite (incluindo artrite reumatóide, artritereumatóide juvenil, osteoartrite, artrite psoriática, artrite associada com lúpusou espondilite anquilosante), esclerodermia, lúpus eritematoso sistêmico,HIV, síndrome de Sjogren1 vasculite, esclerose múltipla, tireoidite auto-imune,dermatite (incluindo dermatite atópica e dermatite eczematosa), miasteniagrave, doença inflamatória do intestino (IBD), doença de Crohn, colite,diabete melito (tipo I); condições inflamatórias da, por exemplo, pele (porexemplo, psoríase), sistema cardiovascular (por exemplo, aterosclerose),sistema nervoso (por exemplo, doença de Alzheimer), fígado (por exemplo,hepatite), rim (por exemplo, nefrite) e pâncreas (por exemplo, pancreatite);distúrbios cardiovasculares, por exemplo, distúrbios metabólicos decolesterol, lesão por radical livre de oxigênio, isquemia; distúrbiosassociados com cicatrização da ferida; distúrbios respiratórios, por exemplo,asma e COPD (por exemplo, fibrose cística); condições inflamatórias agudas(por exemplo, endotoxemia, sepse e septicemia, síndrome do choque tóxicoe doença infecciosa); rejeição ao transplante e alergia. Em uma modalidade,o distúrbio associado com a IL-22 é um distúrbio artrítico, por exemplo, umdistúrbio escolhido a partir de uma ou mais de artrite reumatóide, artritereumatóide juvenil, osteoartrite, artrite psoriática, ou espondiliteanquilosante; um distúrbio respiratório (por exemplo, asma, doençapulmonar obstrutiva crônica (COPD); ou uma condição inflamatória da, porexemplo, pele (por exemplo, psoríase), sistema cardiovascular (por exemplo,aterosclerose), sistema nervoso (por exemplo, doença de Alzheimer), fígado(por exemplo, hepatite), rim (por exemplo, nefrite), pâncreas (por exemplo,pancreatite), e órgãos gastrointestinais, por exemplo, colite, doença deCrohn e IBD.

Desse modo, em um aspecto, a invenção caracteriza-se por umanticorpo isolado que se liga a IL-22, em particular, a IL-22 humana. Emcertas modalidades, o anticorpo anti-IL-22 pode ter pelo menos uma dasseguintes características: (1) ele é um anticorpo monoclonal ou deespecificidade única; (2) ele é um anticorpo humano; (3) ele é um anticorpogerado in vitro; (4) ele é um anticorpo gerado in vivo (por exemplo, sistemade camundongo transgênico); (5) ele se liga a IL-22 com uma constante deassociação de pelo menos 1012 M"1; (6) ele se liga a IL-22 com umaconstante de associação de pelo menos 1011 M"1; (7) ele se liga a IL-22 comuma constante de associação de pelo menos 1010 M"1; (8) ele se liga a IL-22com uma constante de associação de pelo menos 109 M'1; (9) ele se liga aIL-22 com uma constante de associação de pelo menos 108 M"1; (10) ele seliga a IL-22 com uma constante de dissociação de 500 nM ou menos; (11)ele se liga a IL-22 com uma constante de dissociação de 10 nM ou menos;(12) ele se liga a IL-22 com uma constante de dissociação de 150 pM oumenos; (13) ele se liga a IL-22 com uma constante de dissociação de 60 pMou menos; (14) ele inibe a ligação da IL-22 ao IL-22R ou um complexo dereceptor de IL-22R e IL-10R2 com uma IC50 de 10 nM ou menos; (15) elebloqueia a proliferação mediada pela IL-22 das células BaF3 engenheiradascompreendendo um receptor de IL-22 com uma IC50 de 1 nM ou menos emuma modalidade, com uma IC50 de 150 pM ou menos em uma outramodalidade, com uma IC50 de 100 pM ou menos em uma outra modalidade,e com uma IC50 de 10 pM ou menos em uma outra modalidade; e (16) elebloqueia a secreção de GROa mediada pela IL-22 a partir das células HT29com uma IC50 de 1 nM ou menos em uma modalidade, com uma IC5o de 150pM ou menos em uma outra modalidade, e com uma IC5o de 10 pM oumenos em uma outra modalidade. A proliferação das células BaF3 mediadapela IL-22 e a secreção de GROa mediada pela IL-22 a partir das célulasHT20 podem ser medidas conforme descrito nos exemplos.

As modalidades ilustrativas não-limitativas dos anticorpos dainvenção são referidas neste documento como "GIL01," "GIL16," "GIL45,""GIL60," "GIL68," "GIL92," "097D09," "062A09," "062G05," "087B03,""367D04," "368D04," Ί66Β06," "166G05," "375G06," "376B10," "354A08,""355B06," "355E04," e "356A11". Estes anticorpos podem ser germinativosou não germinativos. Em uma outra modalidade, o anticorpo é escolhido apartir de 356A11, 354A08, 087B03, e 368D04. Os anticorpos da invençãopodem se ligar especificamente ao mesmo epitopo de IL-22 ou a um epitoposimilar (por exemplo, um epitopo de sobreposição) ao qual GIL01, GIL16,GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04,368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou356Α11 se liga. Em outras modalidades, os anticorpos se ligamespecificamente a um fragmento de uma IL-22, por exemplo, um fragmento- de pelo menos 10, 20, 50, 75, 100, 150, ou 200 aminoácidos contíguos àseqüência de aminoácidos descrita em SEQ ID NO:1, ou uma seqüência queé pelo menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais idêntica a esta.

Em outras modalidades, o anticorpo inibe competitivamente a ligação depelo menos um de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09,062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06,376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11 ao seu epitopo-alvo.

Em uma modalidade, o anticorpo da presente invenção inclui umdomínio VH, domínio VL) ou sua combinação, do fragmento Fv de GIL01,GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03,367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06,355E04, ou 356A11. Por exemplo, o anticorpo inclui um domínio Vh e/ou umVl tendo a seqüência de aminoácidos como descrita nas Tabelas 1 e 7 (SEQID NO:5, 23, 41, 59, 77, 95, 113, 131, 149, 167, 185, 203, 221, 239, 257, 275,293, 311, 329, 347, 365, 383, 401, 419, 437, 455, 473, 491, 509, 527, 545,563, 581, 599, ou 617 para Vh e SEQ ID NO:6, 24, 42, 60, 78, 96, 114, 132,150, 168, 186, 204, 222, 240, 258, 276, 294, 312, 330, 348, 366, 384, 402,420, 438, 456, 474, 492, 510, 528, 546, 564, 582, 600, ou 618 para VL), ouuma seqüência substancialmente idêntica à ela (por exemplo, umaseqüência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oumais idêntica à ela, ou que difere em não mais do que 1, 2, 5, 10 ou 15resíduos de aminoácidos da SEQ ID NO:5, 6, 23, 24, 41, 42, 59, 60, 77, 78,95, 96, 113, 114, 131, 132, 149, 150, 167, 168, 185, 186, 203, 204, 221, 222,239, 240, 257, 258, 275, 276, 293, 294, 311, 312, 329, 330, 347, 348, 365,366, 383, 384, 401, 402, 419, 420, 437, 438, 455, 456, 473, 474, 491, 492,509, 510, 527, 528, 545, 546, 563, 564, 581, 582, 599, 600, 617, ou 618).

Em uma outra modalidade, o anticorpo da presente invençãoinclui um domínio VH, domínio VL, ou sua combinação, do fragmento Fv deum anticorpo escolhido a partir de 356A11, 354A08, 087B03, e 368D04.Nesta modalidade, o anticorpo, ou o seu fragmento de ligação a antígeno,compreende:

um domínio Vh compreendendo a seqüência de aminoácidosespecificada em SEQ ID NO:167 ou 491 e/ou um domínio VLcompreendendo a seqüência de aminoácidos especificada em SEQ IDNO:168 ou 492 (087B03);

um domínio Vh compreendendo a seqüência de aminoácidosespecificada em SEQ ID NO:293 ou 545 e/ou um domínio VL tendo aseqüência de aminoácidos especificada em SEQ ID NO:294 ou 546(354A08);

um domínio Vh compreendendo a seqüência de aminoácidosespecificada em SEQ ID N0:203 ou 617 e/ou um domínio VLcompreendendo a seqüência de aminoácidos especificada em SEQ IDN0:204 ou 618 (368D04); ou

um domínio Vh compreendendo a seqüência de aminoácidosespecificada em SEQ ID NO:347 ou 599 e/ou um domínio VLcompreendendo a seqüência de aminoácidos especificada em SEQ IDNO:348 ou 600 (356A11).

Em uma outra modalidade, o anticorpo inclui um domínio Vhe/ou VL codificado por um ácido nucléico tendo uma seqüência denucleotídeos como descrita nas Tabelas 1 e 7 (SEQ ID NO:14, 32, 50, 68, 86,104, 122, 140, 158, 176, 194, 212, 230, 248, 266, 284, 302, 320, 338, 356,374, 392, 410, 428, 446, 464, 482, 500, 518, 536, 554, 572, 590, 608, ou 626para Vh e SEQ ID NO:15, 33, 51, 69, 87, 105, 123, 141, 159, 177, 195, 213,231, 249, 267, 285, 303, 321, 339, 357, 375, 393, 411, 429, 447, 465, 483,501, 519, 537, 555, 573, 591, 609, ou 627 para VL), ou uma seqüênciasubstancialmente idêntica à ela (por exemplo, uma seqüência pelo menoscerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais idêntica à ela, ouque difere em não mais do que 1, 2, 3, 6, 15, 30 ou 45 nucleotídeos da SEQID NO: 14, 15, 32, 33, 50, 51, 68, 69, 86, 87, 104, 105, 122, 123, 140, 141,158, 159, 176, 177, 194, 195, 212, 213, 230, 231, 248, 249, 266, 267, 284,285, 302, 303, 320, 321, 338, 339, 356, 357, 374, 375, 392, 393, 410, 411,428, 429, 446, 447, 464, 465, 482, 483, 500, 501, 518, 519, 536, 537, 554,555, 572, 573, 590, 591, 608, 609, 626, ou 627).

Em outras modalidades, o anticorpo inclui um domínio Fv tendouma seqüência de aminoácidos como descrita nas Tabelas 1 e 7 (SEQ IDNO:7, 25, 43, 61, 79, 97, 115, 133, 151, 169, 187, 205, 223, 241, 259, 277,295, 313, 331, 349, 367, 385, 403, 421, 439, 457, 475, 493, 511, 529, 547,565, 583, 601, ou 619), ou uma seqüência substancialmente idêntica à ela(por exemplo, uma seqüência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%,97%, 98%, 99% ou mais idêntica à ela, ou que difere em não mais do que 1,2, 5, 10, 15, 20, 30 ou 35 resíduos de aminoácidos da SEQ ID NO:7, 25, 43,61, 79, 97, 115, 133, 151, 169, 187, 205, 223, 241, 259, 277, 295, 313, 331,349, 367, 385, 403, 421, 439, 457, 475, 493, 511, 529, 547, 565, 583, 601,ou 619). Em uma outra modalidade, o anticorpo da presente invenção incluium domínio Fv de um anticorpo escolhido a partir de 356A11 (SEQ IDNO:349 ou 601), 354A08 (SEQ ID NO:295 ou 547), 087B03 (SEQ ID NO:169ou 493), e 368D04 (SEQ ID N0:205 ou 619). Em uma outra modalidade, oanticorpo inclui um domínio Fv codificado por um ácido nucléico tendo umaseqüência de nucleotídeos como descrita nas Tabelas 1 e 7 (SEQ ID NO:16,34, 52, 70, 88, 106, 124, 142, 160, 178, 196, 214, 232, 250, 268, 286, 304,322, 340, 358, 376, 394, 412, 430, 448, 466, 484, 502, 520, 538, 556, 574,592, 610, ou 628), ou uma seqüência substancialmente idêntica à ela (porexemplo, uma seqüência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%,98%, 99% ou mais idêntica à ela, ou que difere em não mais do que 1, 2, 3,6, 15, 30, 45, 60, 90 ou 105 nucleotídeos da SEQ ID NO: 16, 34, 52, 70, 88,106, 124, 142, 160, 178, 196, 214, 232, 250, 268, 286, 304, 322, 340, 358,376, 394, 412, 430, 448, 466, 484, 502, 520, 538, 556, 574, 592, 610, OU628). Ainda em outras modalidades, o anticorpo compreende pelo menosuma região determinante de complementaridade (CDR) destes domínios Vhe VL. Por exemplo, o anticorpo pode incluir uma, duas, ou três CDR1S dodomínio Vh tendo uma seqüência de aminoácidos como descrita, ou incluída,nas seqüências nas Tabelas 1 e 7 (SEQ ID NO:5, 7, 8, 9, 10, 23, 25, 26, 27,28, 41, 43, 44, 45, 46, 59, 61, 62, 63, 64, 77, 79, 80, 81, 82, 95, 97, 98, 99,100, 113, 115, 116, 117, 118, 131, 133, 134, 135, 136, 149, 151, 152, 153,154, 167, 169, 170, 171, 172, 185, 187, 188, 189, 190, 203, 205, 206, 207,208, 221, 223, 224, 225, 226, 239, 241, 242, 243, 244, 257, 259, 260, 261,262, 275, 277, 278, 279, 280, 293, 295, 296, 297, 298, 311, 313, 314, 315,316, 329, 331, 332, 333, 334, 347, 349, 350, 351, 352, 365, 367, 368, 369,370, 383, 385, 386, 387, 388, 401, 403, 404, 405, 406, 419, 421, 422, 423,424, 437, 439, 440, 441, 442, 455, 457, 458, 459, 460, 473, 475, 476, 477,478, 491, 493, 494, 495, 496, 509, 511, 512, 513, 514, 527, 529, 530, 531,532, 545, 547, 548, 549, 550, 563, 565, 566, 567, 568, 581, 583, 584, 585,586, 599, 601, 602, 603, 604, 617, 619, 620, 621, ou 622), ou umaseqüência substancialmente homóloga à ela (por exemplo, uma seqüênciapelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou maisidêntica à ela). Em uma outra modalidade, o anticorpo da presente invençãoinclui uma, duas, ou três CDR1S do domínio Vh de um anticorpo escolhido apartir de 356A11, 354A08, 087B03, e 368D04. Nesta modalidade, oanticorpo, ou o seu fragmento de ligação a antígeno, compreende umaregião variável da cadeia pesada compreendendo:

a) SEQ ID N0:170 ou 494; b) SEQ ID NO: 171 ou 495; e/ou c)SEQ ID NO: 172 ou 496 (087B03);

a) SEQ ID NO:296 ou 548; b) SEQ ID NO:297 ou 549; e/ou c)SEQ ID NO:298 ou 550 (354A08);

a) SEQ ID N0:206 ou 620; b) SEQ ID N0:207 ou 621; e/ou c)SEQ ID N0:208 ou 622 (368D04); ou

a) SEQ ID N0:350 ou 602; b) SEQ ID NO:351 ou 603; e/ou c)SEQ ID NO:352 ou 604 (356A11).

Em uma outra modalidade, o anticorpo pode incluir uma, duas,ou três CDR's do domínio Vl tendo uma seqüência de aminoácidos comodescrita, ou incluída, nas seqüências nas Tabelas 1 e 7 (SEQ ID NO:6, 7, 11,12, 13, 24, 25, 29, 30, 31, 42, 43, 47, 48, 49, 60, 61, 65, 66, 67, 78, 79, 83,84, 85, 96, 97, 101, 102, 103, 114, 115, 119, 120, 121, 132, 133, 137, 138,139, 150, 151, 155, 156, 157, 168, 169, 173, 174, 175, 186, 187, 191, 192,193, 204, 205, 209, 210, 211, 222, 223, 227, 228, 229, 240, 241, 245, 246,247, 258, 259, 263, 264, 265, 276, 277, 281, 282, 283, 294, 295, 299, 300,301, 312, 313, 317, 318, 319, 330, 331, 335, 336, 337, 348, 349, 353, 354,355, 366, 367, 371, 372, 373, 384, 385, 389, 390, 391, 402, 403, 407, 408,409, 420, 421, 425, 426, 427, 438, 439, 443, 444, 445, 456, 457, 461, 462,463, 474, 475, 479, 480, 481, 492, 493, 497, 498, 499, 510, 511, 515, 516,517, 528, 529, 533, 534, 535, 546, 547, 551, 552, 553, 564, 565, 569, 570,571, 582, 583, 587, 588, 589, 600, 601, 605, 606, 607, 618, 619, 623, 624,ου 625), ou uma seqüência substancialmente homóloga à ela (por exemplo,uma seqüência pelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%ou mais idêntica à ela). Em uma outra modalidade, o anticorpo da presenteinvenção inclui uma, duas, ou três CDFTs do domínio Vl de um anticorpoescolhido a partir de 356A11, 354A08, 087B03, e 368D04. Nesta modalidade,o anticorpo, ou o seu fragmento de ligação a antígeno, compreende umaregião variável da cadeia leve compreendendo:

a) SEQ ID NO:173 ou 497; b) SEQ ID NO: 174 ou 498; e/ou c)SEQ ID NO:175 ou 499 (087B03);

a) SEQ ID NO:299 ou 551; b) SEQ ID N0:300 ou 552; e/ou c)SEQ ID N0:301 ou 553 (354A08);

a) SEQ ID N0:209 ou 623; b) SEQ ID N0:210 ou 624; e/ou c)SEQ ID NO:211 ou 625 (368D04); ou

a) SEQ ID NO:353 ou 605; b) SEQ ID NO:354 ou 606; e/ou c)SEQ ID NO:355 ou 607 (356A11).

Ainda em uma modalidade adicional, o anticorpo compreendeum fragmento H3 do domínio Vh de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68,GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06,166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11, porexemplo, um fragmento H3 tendo a seqüência de aminoácidos comodescrita nas Tabelas 1 e 7 (SEQ ID N0:10, 28, 46, 64, 82, 100, 118, 136,154, 172, 190, 208, 226, 244, 262, 280, 298, 316, 334, 352, 370, 388, 406,424, 442, 460, 478, 496, 514, 532, 550, 568, 586, 604, ou 622), ou umaseqüência substancialmente homóloga à ela (por exemplo, uma seqüênciapelo menos cerca de 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou maisidêntica à ela).O anticorpo da invenção pode ser de tamanho natural (porexemplo, incluir pelo menos uma cadeia pesada completa e pelo menos umacadeia leve completa) ou pode incluir somente um fragmento de ligação aantígeno (por exemplo, um Fab, F(ab')2, Fv, um fragmento Fv de cadeiaindividual, um fragmento Fd, ou um fragmento dAb). O anticorpo pode incluiruma região constante, ou uma parte dela, escolhida a partir de quaisquerdos: genes das regiões constantes capa, lâmbda, alfa, gama, delta, épsilon emi. Por exemplo, podem ser usadas regiões constantes da cadeia pesadados diversos isótipos, incluindo: IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, eIgE. A região constante da cadeia leve pode ser escolhida a partir de capaou lâmbda. O anticorpo pode ser uma IgG, ou ele pode também ser IgG1n ouIgG1a.

O anticorpo anti-IL-22 descrito neste documento pode serderivado para, ou ligado a, uma outra molécula funcional (tal como um outropeptídeo ou proteína (por exemplo, um fragmento Fab)). Por exemplo, umanticorpo da invenção pode ser ligado funcionalmente (por exemplo, poracoplamento químico, fusão genética, associação não-covalente ou de outromodo) a pelo menos uma outra entidade molecular, tal como um outroanticorpo (por exemplo, um anticorpo biespecífico ou um multiespecífico),toxina, radioisótopo, agente citotóxico ou citostático, entre outros.

Em um outro aspecto, a invenção caracteriza-se por umacomposição farmacêutica contendo pelo menos um anticorpo anti-IL-22 e umveículo farmaceuticamente aceitável. A composição farmacêutica podeadicionalmente incluir uma combinação de pelo menos um anticorpo anti-IL-22 e pelo menos um agente terapêutico (por exemplo, inibidores de citocinase fatores do crescimento, imunossupressores, agentes antiinflamatórios,inibidores metabólicos, inibidores de enzimas, agentes citotóxicos, agentescitostáticos, ou suas combinações, conforme descritos em mais detalheneste documento). As combinações do anticorpo anti-IL-22 e um agenteterapêutico estão também dentro do escopo da invenção. As composições eas combinações da invenção podem ser usadas para regular as condiçõesinflamatórias associadas com a IL-22, por exemplo, por modulação dasinalização da IL-22 através de seus receptores localizados sobre as célulasepiteliais de uma variedade de tecidos, incluindo, porém não-limitadosàqueles do pâncreas, pele, pulmão, intestino grosso, fígado, rim, glândulasalivar, e endotélios vasculares, além das células imunes potencialmenteativadas e localizadas nos tecidos.

Em um outro aspecto, a invenção caracteriza-se por um métodode tratar um paciente com um distúrbio associado com a IL-22. O métodoinclui administrar ao paciente um anticorpo anti-IL-22 em uma quantidadesuficiente para inibir pelo menos uma atividade de IL-22 das células imunes,com isso tratando o distúrbio associado com a IL-22.

O anticorpo anti-IL-22 pode ser administrado ao paciente,sozinho ou em combinação, com outros agentes terapêuticos, conformedescritos neste documento. O paciente pode ser um mamífero, por exemplo,um ser humano. Por exemplo, o método pode ser usado para tratar umpaciente com um distúrbio associado com a IL-22, tal como os distúrbiosauto-imunes, por exemplo, artrite (incluindo artrite reumatóide, artritereumatóide juvenil, osteoartrite, artrite psoriática, artrite associada com lúpusou espondilite anquilosante), esclerodermia, lúpus eritematoso sistêmico,HIV, síndrome de Sjogren, vasculite, esclerose múltipla, tireoidite auto-imune,dermatite (incluindo dermatite atópica e dermatite eczematosa), miasteniagrave, doença inflamatória do intestino (IBD), doença de Crohn, colite,diabete melito (tipo I); as condições inflamatórias da, por exemplo, pele (porexemplo, psoríase), sistema cardiovascular (por exemplo, aterosclerose),sistema nervoso (por exemplo, doença de Alzheimer), fígado (por exemplo,hepatite), rim (por exemplo, nefrite) e pâncreas (por exemplo, pancreatite);os distúrbios cardiovasculares, por exemplo, distúrbios metabólicos decolesterol, lesão por radical livre de oxigênio, isquemia; os distúrbiosassociados com cicatrização da ferida; os distúrbios respiratórios, porexemplo, asma e COPD (por exemplo, fibrose cística); as condiçõesinflamatórias agudas (por exemplo, endotoxemia, sepse e septicemia,síndrome do choque tóxico e doença infecciosa); a rejeição ao transplante ea alergia. Em uma modalidade, o distúrbio associado com a IL-22 é umdistúrbio artrítico, por exemplo, um distúrbio escolhido a partir de uma oumais de artrite reumatóide, artrite reumatóide juvenil, osteoartrite, artritepsoriática, ou espondilite anquilosante; um distúrbio respiratório (porexemplo, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD); ou umacondição inflamatória da, por exemplo, pele (por exemplo, psoríase), sistemacardiovascular (por exemplo, aterosclerose), sistema nervoso (por exemplo,doença de Alzheimer), fígado (por exemplo, hepatite), rim (por exemplo,nefrite), pâncreas (por exemplo, pancreatite), e órgãos gastrointestinais, porexemplo, colite, doença de Crohn e IBD.

Em um outro aspecto, a invenção caracteriza-se por um métodode diminuir, inibir ou reduzir uma resposta de fase aguda em um paciente. Ométodo inclui administrar ao paciente um agente de ligação a IL-22, porexemplo, um antagonista de IL-22 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-22 ouo seu fragmento, conforme descrito neste documento), em uma quantidadesuficiente para diminuir, inibir ou reduzir a resposta de fase aguda nopaciente. Em uma modalidade, o paciente é um mamífero, por exemplo, umser humano sofrendo de um distúrbio associado com a IL-22, incluindo, porexemplo, os distúrbios respiratórios, os distúrbios inflamatórios e osdistúrbios auto-imunes. Em uma modalidade, o agente de ligação a IL-22 éadministrado localmente, por exemplo, de modo tópico, subcutâneo, ououtras administrações que não estejam na circulação geral.

Em um outro aspecto, um agente de ligação a IL-22 pode serusado para alterar o tipo de resposta imune e/ou aumentar a eficácia de umaformulação de vacina usada para imunizar um paciente. Por exemplo, umanticorpo anti-IL-22 da presente invenção pode ser administrado antes,durante e/ou depois de uma imunização para aumentar a eficácia da vacina.

Em uma modalidade, a formulação de vacina contém um ou maisantagonistas de IL-22 e um antígeno, isto é, um imunógeno, incluindo, porexemplo, os antígenos virais, bacterianos, ou de tumor. Em uma outramodalidade, o antagonista de IL-22 e o imunógeno são administradosseparadamente, por exemplo, dentro de uma hora, três horas, um dia oudois dias um do outro.Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método paradetectar a presença de IL-22 em uma amostra in vitro. As amostras podemincluir amostras biológicas, tais como soro, plasma, tecido e biopsia. Ométodo exposto pode ser usado para diagnosticar um distúrbio, tal como umdistúrbio associado com a IL-22, conforme descrito neste documento. Ométodo inclui: (1) contatar a amostra ou uma amostra de controle com umanticorpo anti-IL-22, e (2) detectar a formação de um complexo entre oanticorpo anti-IL-22 e a amostra ou a amostra de controle, onde umaalteração estatisticamente significativa na formação do complexo na amostra,em relação a uma amostra de controle, é indicativa da presença da IL-22 naamostra.

Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método paradetectar a presença de IL-22 in vivo (por exemplo, imageamento in vivo emum paciente). O método pode ser usado para diagnosticar um distúrbio, porexemplo, um distúrbio associado com a IL-22, conforme descrito nestedocumento. O método inclui: (1) administrar um anticorpo anti-IL-22 a umpaciente ou um paciente de controle, sob condições que permitam a ligaçãodo anticorpo a IL-22, e (2) detectar a formação de um complexo entre oanticorpo e a IL-22, onde uma alteração estatisticamente significativa naformação do complexo no paciente, em relação a um controle, por exemplo,um paciente de controle, é indicativa da presença da IL-22.

O anticorpo pode ser direta ou indiretamente marcado com umasubstância detectável, para facilitar a detecção do anticorpo ligado ou nãoligado. As substâncias detectáveis adequadas incluem diversas enzimas,grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais Iuminescentes emateriais radioativos.

Em um outro aspecto, a invenção proporciona um método paradistribuir ou alvejar um agente, por exemplo, um agente terapêutico ou umcitotóxico, para uma célula que expressa a IL-22 in vivo. O método incluiadministrar um anticorpo anti-IL-22 a um paciente, sob condições quepermitam a ligação do anticorpo a IL-22. O anticorpo pode ser acoplado auma segunda porção terapêutica, tal como uma toxina.A descrição proporciona seqüências de ácidos nucléicos a partirdos domínios Vh e Vl de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92,097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05,375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, e 356A11. Também seproporcionam seqüências de ácidos nucléicos que compreendem pelomenos uma CDR a partir de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92,097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05,375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, e 356A11. A descrição tambémproporciona vetores e células hospedeiras compreendendo tais ácidosnucléicos.

A descrição adicionalmente proporciona métodos de produzirnovos domínios Vh e Vl e anticorpos funcionais compreendendo todos os,ou uma parte de, tais domínios derivados dos domínios Vh ou Vl de GIL01,GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03,367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06,355E04, ou 356A11.

Os aspectos adicionais da descrição serão descritos em parte nadescrição, e em parte serão óbvios a partir da descrição, ou podem seraprendidos por prática da invenção. A invenção é descrita e particularmentemostrada nas reivindicações, e a descrição não deve ser interpretada comolimitando o escopo das reivindicações. A descrição detalhada a seguir incluias representações ilustrativas das diversas modalidades da invenção, quenão são restritivas da invenção como reivindicada. As figuras queacompanham constituem uma parte deste relatório descritivo e, juntamentecom a descrição, servem somente para ilustrar as modalidades e não-limitara invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1. Potência dos clones de scFv anti-IL-22 de origem noensaio do complexo de receptor de IL-22: ensaio de competição comDELFIA do complexo de receptor de IL-22 que se liga à bio.lL-22.

Figura 2. Perfil dos clones de scFv líderes no ensaio docomplexo de receptor de IL-22: ensaio de competição com DELFIA docomplexo de receptor de IL-22 que se liga à bio.lL-22. (A) derivado de GIL 1.(B) derivado de GIL 16. (C) derivado de GIL 16, GIL 60, e GIL 68. (D)derivado de GIL 60. (E) derivado de GIL 68. (F) derivado de GIL 68. (G)derivado de GIL 92 .

Figura 3. Potência da IgG nos ensaios baseados em célulasGROa. GIL-IgGs otimizadas no ensaio de GROa com hulL-22. (A) IgGgerminativa. (B) IgG não germinativa.

Figura 4. Reatividade cruzada entre espécies dos anticorpospara IL-22 por ELISA. As GIL-IgGs otimizadas se ligam especificamente aIL-22. (A) IgG germinativa. (B) IgG não germinativa.

Figura 5. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos da IL-22humana. A seqüência de nucleotídeos da IL-22 humana é a SEQ ID NO:2 einclui uma extremidade de poli (A). A seqüência de nucleotídeos descritainclui um quadro de leitura aberto e a seqüência de aminoácidos da proteínaIL-22 de tamanho natural correspondendo à seqüência de nucleotídeosprecedente é descrita na SEQ ID NO:1. A seqüência de aminoácidos da IL-22 madura corresponde aproximadamente aos aminoácidos 34-179 de SEQID NO:1.

Figura 6. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos da IL-22 decamundongo.

Figura 7. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos de GIL01,GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03,367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06,355E04, e 356A11 não germinativos, incluindo os domínios Vh e VL) e asCDRs (H1, H2, H3, L1, 12, e L3).

Figura 8. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos de GIL01,GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05,354A08, 355B06, 355E04, 356A11, e 368D04 germinativos, incluindo osdomínios Vh e VL, e as CDRs (H1, H2, H3, L1, L2, e L3).

Figura 9. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos de scFv'spara GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05,087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08,355Β06, 355Ε04, e 356Α11 não germinativos, com as CDRs sublinhadas(H1, H2, H3, L1, L2, e L3).

Figura 10. Seqüências de aminoácidos e nucleotídeos de scFv'spara GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06,166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, e 368D04 germinativos, com asCDRs sublinhadas (H1, H2, H3, L1, L2, e L3).

DESCRIÇÃO DETALHADA

I. Definições

Para que a presente invenção possa ser mais prontamenteentendida, certos termos são primeiramente definidos. As definiçõesadicionais são descritas por toda a descrição detalhada.

O termo "anticorpo" refere-se a uma imunoglobulina ou seufragmento, e inclui qualquer polipeptídeo compreendendo um fragmento deligação a antígeno ou um domínio de ligação a antígeno. O termo inclui,porém não está limitado aos, anticorpos policlonais, monoclonais,monoespecíficos, poliespecíficos, não-específicos, humanizados, humanos,de cadeia individual, quiméricos, sintéticos, recombinantes, híbridos,mutados, enxertados, e gerados in vitro. A são ser que precedido pelapalavra "intacto", o termo "anticorpo" inclui os fragmentos de anticorpos, taiscomo Fab, F(ab')2, Fv, scFv, Fd, dAb, e outros fragmentos de anticorpos queconservem a função de ligação ao antígeno. Tipicamente, tais fragmentoscompreenderiam um domínio de ligação a antígeno.

Os termos "domínio de ligação a antígeno" e "fragmento deligação a antígeno" referem-se a uma parte de uma molécula de anticorpoque compreende aminoácidos responsáveis pela ligação específica entre oanticorpo e o antígeno. A parte do antígeno que é especificamentereconhecida e ligada pelo anticorpo é referida como o "epitopo". Um domíniode ligação a antígeno pode compreender uma região variável da cadeia levedo anticorpo (Vl) e uma região variável da cadeia pesada do anticorpo (VH);entretanto, ele não tem de compreender ambas. Os fragmentos Fd, porexemplo, têm duas regiões Vh e freqüentemente conservam alguma funçãode ligação a antígeno do domínio de ligação a antígeno intacto. Os exemplosdos fragmentos de ligação a antígenos de um anticorpo incluem (1) umfragmento Fab1 um fragmento monovalente tendo os domínios VL, VH) Cl eCH1; (2) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente tendo doisfragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de dobradiça;(3) um fragmento Fd tendo os dois domínios Vh e CH1; (4) um fragmento Fvtendo os domínios Vl e Vh de um braço individual de um anticorpo; (5) umfragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), o qual tem umdomínio VH; (6) uma região determinante de complementaridade (CDR)isolada, e (7) um Fv de cadeia individual (scFv). Embora os dois domínios dofragmento Fv, Vl e VH, sejam codificados por genes separados, eles podemser unidos, usando métodos recombinantes, por um Iigante sintético que oscapacite a serem feitos como uma cadeia protéica individual na qual asregiões Vl e Vh emparelham-se para formar moléculas monovalentes(conhecidas como Fv de cadeia individual (scFv); ver, por exemplo, Bird et al.(1988) Science 242:423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sei.USA 85:5879-5883). Estes fragmentos de anticorpos são obtidos usandopráticas convencionais, conhecidas para aqueles com habilidade na técnica,e os fragmentos são avaliados quanto à função no mesmo modo como sãoos anticorpos intactos.

O termo "quantidade efetiva" refere-se a uma dosagem ouquantidade que seja suficiente para regular a atividade da IL-22, paramelhorar os sintomas clínicos ou atingir um resultado biológico desejado, porexemplo, atividade diminuída das células T e/ou células B, supressão daauto-imunidade, supressão da rejeição ao transplante, etc.

O termo "anticorpo humano" inclui os anticorpos tendo regiõesvariáveis e constantes correspondendo substancialmente às seqüências deimunoglobulinas de linhagens germinativas humanas, conhecidas na técnica,incluindo, por exemplo, aquelas descritas por Kabat et al. (Ver Kabat, et al.(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, U.S.Department of Health and Human Services, Publicação NIH N2 91-3242). Osanticorpos humanos da invenção podem incluir os resíduos de aminoácidosnão codificados pelas seqüências de imunoglobulinas de linhagensgerminativas humanas (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênesealeatória ou sítio-específica in vitro ou por mutação somática in vivo), porexemplo, nas CDRs1 e em particular, CDR3. O anticorpo humano pode terpelo menos uma, duas, três, quatro, cinco, ou mais posições substituídas porum resíduo de aminoácido que não seja codificado pela seqüência deimunoglobulina de linhagem germinativa humana.

A expressão "inibir" ou "antagonizar" a atividade da IL-22 e seuscognatos refere-se a uma redução, inibição, ou de outro modo diminuição depelo menos uma atividade da IL-22 devido à ligação de um anticorpo anti-IL-22, onde a redução é relativa à atividade da IL-22 na ausência do mesmoanticorpo. A atividade pode ser medida usando qualquer prática conhecidana técnica, incluindo, por exemplo, como descrito nos Exemplos 7 e 9. Ainibição ou o antagonismo não necessariamente indica uma eliminação totalda atividade biológica do polipeptídeo de IL-22. Uma redução na atividadepode ser cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, oumais.

O termo "lnterleucina-22" ou "IL-22" refere-se a uma citocina daclasse Il (que pode ser de mamífero) capaz de ligar-se ao IL-22R e/ou umcomplexo de receptor de IL-22R e IL-10R2, e tem pelo menos uma dasseguintes características: (1) uma seqüência de aminoácidos de umpolipeptídeo de IL-22 de mamífero de ocorrência natural (tamanho natural ouforma madura) ou um seu fragmento, por exemplo, uma seqüência deaminoácidos mostrada como SEQ ID NO:1 (humana) ou SEQ ID NO:3(murino) ou um seu fragmento; (2) uma seqüência de aminoácidossubstancialmente idêntica a, por exemplo, pelo menos 85%, 90%, 95%, 96%,97%, 98%, 99% idêntica a, uma seqüência de aminoácidos mostrada comoSEQ ID NO:1 ou seus aminoácidos 34-179 (humana) ou SEQ ID NO:3(murino) ou um seu fragmento; (3) uma seqüência de aminoácidos que écodificada por uma seqüência de nucleotídeos de IL-22 de mamífero deocorrência natural ou um seu fragmento (por exemplo, a SEQ ID NO:2 ou osnucleotídeos 71 a 610 (humana) ou a SEQ ID NO:4 (murino) ou um seufragmento); (4) uma seqüência de aminoácidos codificada por umaseqüência de nucleotídeos que é substancialmente idêntica a, por exemplo,pelo menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idêntica a, umaseqüência de nucleotídeos mostrada como SEQ ID NO:2 ou seusnucleotídeos 71 a 610 (humana) ou SEQ ID NO:4 (murino) ou um seufragmento; (5) uma seqüência de aminoácidos codificada por uma seqüênciade nucleotídeos degenerada para uma seqüência de nucleotídeos de IL-22de ocorrência natural ou um seu fragmento, por exemplo, a SEQ ID NO:2(humana) ou a SEQ ID NO: 4 (murino) ou um seu fragmento; ou (6) umaseqüência de nucleotídeos que hibridiza para uma das seqüências denucleotídeos precedentes sob condições severas, por exemplo, condiçõesaltamente severas. A IL-22 pode ligar-se ao IL-22R e/ou um complexo dereceptor de IL-22R e IL-10R2 de origem mamífera, por exemplo, humana oude camundongo.

A seqüência de nucleotídeos e a seqüência de aminoácidospredita da IL-22 humana são mostradas em SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:1,respectivamente. A seqüência de aminoácidos da IL-22 humana maduracorresponde aos aminoácidos 34-179 de SEQ ID NO:1. A análise da IL-22humana recombinante revela muitos domínios estruturais. (Nagem et al.(2002) Structure, 10:1051-62; Pedido de Patente U.S. N2 US 2002/0187512 A1).

O termo "atividade da IL-22" refere-se a pelo menos umprocesso celular iniciado ou interrompido como um resultado da ligação daIL-22 a um complexo de receptor consistindo em IL-22R e IL-10R2 na célula.

As atividades da IL-22 incluem pelo menos uma de, porém não estãolimitadas à: (1) ligação do IL-22R ou um complexo de receptor de IL-22R eIL-10R2 (por exemplo, o IL-22R humano com ou sem o IL-10R2 humano);(2) associação com as moléculas de transdução de sinal (por exemplo, JAK-1); (3) estímulo da fosforilação das proteínas STAT (por exemplo, STAT5,STAT3, ou sua combinação); (4) ativação das proteínas STAT; e (5)modulação (por exemplo, aumento ou diminuição) da proliferação,diferenciação, função da célula efetora, atividade citolítica, secreção dacitocina, sobrevivência, ou suas combinações, de células epiteliais,fibroblastos, ou células imunes. As células epiteliais incluem, porém nãoestão limitadas às, células da pele, intestino, fígado, e rim, bem como àscélulas endoteliais. Os fibroblastos incluem, porém não estão limitados aos,fibroblastos sinoviais. As células imunes podem incluir as células T CD8+ eCD4+, as células NK, as células B, os macrófagos, e os megacariócitos. Aatividade da IL-22 pode ser determinada in vitro, por exemplo, usando oensaio de inibição do receptor de IL-22, conforme descrito nos Exemplos 2 e6, o ensaio de secreção de GROa no Exemplo 9, ou o ensaio de proliferaçãode BAF3 do Exemplo 7. A atividade da IL-22 pode também ser determinadain vivo, por exemplo, classificando a progressão de uma resposta imune oudistúrbio, conforme descrito no Exemplo 13.

Conforme usado neste documento, o "anticorpo gerado in vitro"refere-se a um anticorpo onde toda ou parte da região variável (por exemplo,pelo menos uma CDR) é gerada em uma seleção de células não-imunes(por exemplo, uma exposição em fago in vitro, fragmento de proteína ouqualquer outro método no qual as seqüências candidatas possam sertestadas quanto à sua capacidade de ligar-se a um antígeno). Este termoexclui as seqüências geradas por rearranjo genômico em uma célula imune.

O termo "isolada" refere-se a uma molécula que estásubstancialmente livre de seu ambiente natural. Por exemplo, uma proteínaisolada está substancialmente livre de material celular ou outras proteínas dafonte de células ou tecidos a partir da qual ela foi derivada. O termo tambémse refere às preparações onde a proteína isolada está suficientemente purapara as composições farmacêuticas; ou pelo menos 70-80% (p/p) pura; oupelo menos 80-90% (p/p) pura; ou pelo menos 90-95% pura; ou pelo menos95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% (p/p) pura.

A expressão "por cento idêntica" ou "porcentagem deidentidade" refere-se à similaridade entre pelo menos duas seqüênciasdiferentes. Esta porcentagem de identidade pode ser determinada poralgoritmos de alinhamento padrões, por exemplo, a Ferramenta deAlinhamento Local Básica (BLAST), descrita por Altshul et al. ((1990) J. Mol.Biol., 215: 403-410); o algoritmo de Needleman et al. ((1970) J. Mol. Biol.,48: 444-453); ou o algoritmo de Meyers et al. ((1988) Comput. Appl. Biosci.,4: 11-17). Um grupo de parâmetros pode ser a matriz de pontuação ("score")Blosum 62 com uma penalidade por lacuna ("gap") de 12, uma penalidadepor extensão da lacuna de 4, e uma penalidade por lacuna de deslocamentode 5. A porcentagem de identidade entre duas seqüências de aminoácidosou nucleotídeos pode também ser determinada usando o algoritmo de E.Meyers e W. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17), que foi incorporado noprograma ALIGN (versão 2.0), usando uma tabela de resíduo de pesoPAM120, uma penalidade por lacuna do comprimento de 12 e umapenalidade por lacuna de 4. A porcentagem de identidade é normalmentecalculada por comparação das seqüências de comprimento similar.

O termo "repertório" refere-se a pelo menos uma seqüência denucleotídeos derivada integral ou parcialmente de pelo menos umaseqüência codificando pelo menos uma imunoglobulina. A(s) seqüência(s)pode(m) ser gerada(s) por rearranjo in vivo dos segmentos V, D, e J decadeias pesadas, e dos segmentos V e J de cadeias leves. Alternativamente,a(s) seqüência(s) pode(m) ser gerada(s) a partir de uma célula em respostaa qual ocorre o rearranjo, por exemplo, estimulação in vitro. Alternativamente,parte ou toda a(s) seqüência(s) pode ser obtida por remoção de DNA,síntese de nucleotídeo, mutagênese, e outros métodos, ver, por exemplo, aPatente U.S. 5.565.332. Um repertório pode incluir somente uma seqüênciaou pode incluir uma pluralidade de seqüências, incluindo umas em umacoleção geneticamente diversa.

Os termos "ligação específica" ou "liga-se especificamente"refere-se a duas moléculas formando um complexo que é relativamenteestável sob condições fisiológicas. A ligação específica é caracterizada poruma alta afinidade e uma capacidade baixa a moderada, conformedistinguida da ligação não-específica, que normalmente tem uma baixaafinidade com uma capacidade moderada a alta. Tipicamente, a ligação éconsiderada específica quando a constante de associação Ka for maior doque 106 M"1. Se necessário, a ligação não-específica pode ser reduzida, semafetar substancialmente a ligação específica, variando-se as condições deligação. As condições de ligação apropriadas, tais como a concentração deanticorpos, a concentração iônica da solução, a temperatura, o tempopermitido para a ligação, a concentração de agente de bloqueio (porexemplo, soro albumina, caseína do leite), etc., podem ser otimizadas porum profissional versado, usando técnicas de rotina. As condições ilustrativassão descritas no Exemplo 3, porém outras condições conhecidas para apessoa versada na técnica incidem no escopo desta invenção.

Conforme usado aqui, o termo "severas" descreve as condiçõespara a hibridização e a lavagem. As condições severas são conhecidas paraaqueles versados na técnica e podem ser encontradas em Current ProtocolsIn Molecular Blology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Osmétodos aquosos e não aquosos são descritos nesta referência e um ououtro pode ser usado. Um exemplo de condições de hibridização severas é ahibridização em 6X cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) em torno de 45°C,seguida por pelo menos uma lavagem em 0.2X SSC, 0.1 % SDS at 50°C. Umsegundo exemplo de condições de hibridização severas é a hibridização em6X SSC em torno de 45°C, seguida por pelo menos uma lavagem em 0,2XSSC, 0,1% de SDS a 55°C. Um outro exemplo de condições de hibridizaçãoseveras é a hibridização em 6X SSC em torno de 45°C, seguida por pelomenos uma lavagem em 0,2X SSC, 0,1% de SDS a 60°C. Um exemploadicional de condições de hibridização severas é a hibridização em 6X SSCem torno de 45°C, seguida por pelo menos uma lavagem em 0,2X SSC,0,1% de SDS a 65°C. As altas condições severas incluem a hibridização emfosfato de sódio a 0,5M, 7% de SDS a 65°C, seguida por pelo menos umalavagem a 0,2X SSC, 1 % de SDS a 65°C.

A expressão "substancialmente como especificada","substancialmente idêntica" ou "substancialmente homóloga" significa que aseqüência de aminoácidos ou nucleotídeos relevante (por exemplo, CDR(s),domínio Vh ou Vl) será idêntica ou terá diferenças não substanciais (atravésdas substituições de aminoácidos conservadas), em comparação com asseqüências que são especificadas. As diferenças não substanciais incluempequenas modificações de aminoácidos, tais como 1 ou 2 substituições emuma seqüência de 5 aminoácidos de uma região especificada. No caso dosanticorpos, o segundo anticorpo tem a mesma especificidade e tem pelomenos 50% da afinidade do primeiro anticorpo.

As seqüências substancialmente idênticas ou homólogas (porexemplo, pelo menos cerca de 85% de identidade das seqüências) àsseqüências descritas neste documento são também parte deste pedido. Emalguma modalidade, a identidade das seqüências pode ser cerca de 85%,90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou maior. Alternativamente, a identidadeou a homologia substancial existe quando os segmentos de ácidos nucléicoshibridizarão sob condições de hibridização seletivas (por exemplo, condiçõesde hibridização altamente severas), com o complemento da fita. Os ácidosnucléicos podem estar presentes nas células inteiras, em um Iisado decélulas, ou em uma forma parcialmente purificada ou substancialmente pura.

O termo "agente terapêutico" é uma substância que trata ouauxilia no tratamento de um distúrbio médico. Os agentes terapêuticospodem incluir, porém não estão limitados às, substâncias que modulam ascélulas imunes ou as respostas imunes em um modo que complementa aatividade da IL-22 dos anticorpos anti-IL-22. Os exemplos e os usos não-limitativos dos agentes terapêuticos são descritos neste documento.

Conforme usada neste documento, uma "quantidadeterapeuticamente efetiva" de um anticorpo anti-IL-22 refere-se a umaquantidade de um anticorpo que é efetiva, com a administração de dosesindividuais ou múltiplas a um paciente (tal como um paciente humano), emtratar, prevenir, curar, retardar, reduzir a gravidade de, e/ou melhorar pelomenos um sintoma de, um distúrbio ou distúrbio recorrente, ou prolongar asobrevivência do paciente além daquela esperada na ausência de taltratamento.

O termo "tratamento" refere-se a uma medida terapêutica oupreventiva. O tratamento pode ser administrado a um paciente tendo umdistúrbio médico ou que, em última análise, possa adquirir o distúrbio, paraprevenir, curar, retardar, reduzir a gravidade de, e/ou melhorar um ou maissintomas de, um distúrbio ou distúrbio recorrente, ou para prolongar asobrevivência de um paciente além daquela esperada na ausência de taltratamento.

II. Anticorpos Anti-IL-22

A descrição proporciona novos anticorpos anti-IL-22 quecompreendem novos fragmentos de ligação a antígenos.

Diversos métodos conhecidos para aqueles versados na técnicaestão disponíveis para obter anticorpos ou seus fragmentos de ligação aantígenos. Por exemplo, os anticorpos podem ser produzidos usando osmétodos de DNA recombinante (Patente U.S. 4.816.567). Os anticorposmonoclonais podem também ser produzidos por geração de hibridomas (ver,por exemplo, Kohler e Milstein (1975) Nature, 256: 495-499) de acordo commétodos conhecidos. Os hibridomas formados neste modo são entãoexaminados usando métodos padrões, tais como o ensaio imunológico porligação com enzima (ELISA) e a análise por ressonância plasmônica desuperfície (BIACORE®), para identificar um ou mais hibridomas queproduzem um anticorpo que se liga especificamente com um antígenoespecificado. Qualquer forma do antígeno especificado pode ser usadacomo o imunógeno, por exemplo, o antígeno recombinante, as formas deocorrência natural, quaisquer variantes ou fragmentos delas, bem como oseu peptídeo antigênico.

Um método ilustrativo de preparar anticorpos inclui examinar asbibliotecas de expressão de proteínas, por exemplo, as bibliotecas deexposição em fagos ou ribossomos. A exposição em fagos é descrita, porexemplo, em Ladner et al„ Patente U.S. N2 5.223.409; Smith (1985) Science228:1315-1317; Clackson e col al. (1991) Nature, 352: 624-628; Marks et al.(1991) J. Moi Biol., 222: 581-597WO 92/18619; WO 91/17271; WO92/20791; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; e WO90/02809.

Além do uso de bibliotecas de exposição, o antígenoespecificado pode ser usado para imunizar um animal não-humano, porexemplo, um rodente, por exemplo, um camundongo, hamster, ou rato. Emuma modalidade, o animal não-humano inclui pelo menos uma parte de umgene de imunoglobulina humana. Por exemplo, é possível engenheirar aslinhagens de camundongos deficientes na produção de anticorpos decamundongos com grandes fragmentos dos locais de Ig humana. Usando atecnologia de hibridoma, os anticorpos monoclonais específicos paraantígenos, derivados dos genes com a especificidade desejada, podem serproduzidos e selecionados. Ver, por exemplo, XENOMOUSE®, Green et al.(1994) Nature Genetics 7:13-21, US 2003-0070185, WO 96/34096,publicado em 31 de out. de 1996, e Pedido PCT N2 PCT/US96/05928,depositado em 29 de abril de 1996.

Em uma outra modalidade, um anticorpo monoclonal é obtido apartir do animal não-humano, e então o modificado, por exemplo,humanizado, desimunizado, quimérico, pode ser produzido usando aspráticas de DNA recombinante conhecidas na técnica. Uma variedade deabordagens para preparar os anticorpos quiméricos foi descrita. Ver, porexemplo, Morrison et al., Proc. Nati Acad. Sei. U.S.A. 81:6851, 1985;Takeda et al., Nature 314:452, 1985, Cabilly et al., Patente U.S. N24.816.567; Boss et al., Patente U.S. N2 4.816.397; Tanaguchi et al.,Publicação de Patente Européia EP171496; Publicação de Patente Européia0173494, Patente do Reino-Unido GB 2177096B. Os anticorposhumanizados podem também ser produzidos, por exemplo, usandocamundongos transgênicos que expressam os genes de cadeias pesadas eleves humanos, porém são incapazes de expressar os genes de cadeiaspesadas e leves da imunoglobulina de camundongo endógeno. Winterdescreve um método de enxerto de CDR ilustrativo que pode ser usado parapreparar os anticorpos humanizados descritos neste documento (PatenteU.S. N2 5.225.539). Todas as CDRs de um anticorpo humano particularpodem ser substituídas com pelo menos uma parte de uma CDR não-humana, ou somente algumas das CDRs podem ser substituídas com asCDRs não-humanas. É somente necessário substituir o número de CDRsrequeridas para a ligação do anticorpo humanizado a um antígenopredeterminado.

Os anticorpos humanizados ou os seus fragmentos podem sergerados por substituição das seqüências do domínio variável de Fv que nãoestão diretamente envolvidas na ligação ao antígeno por seqüênciasequivalentes a partir dos domínios variáveis de Fv humanos. Os métodosilustrativos para gerar anticorpos humanizados ou seus fragmentos sãoproporcionados por Morrison (1985) Science 229:1202-1207; por Oi et al.(1986) BioTechniques 4:214; e por US 5.585.089; US 5.693.761; US5.693.762; US 5.859.205; e US 6.407.213. Estes métodos incluem isolar,manipular, e expressar as seqüências de ácidos nucléicos que codificamtodos os, ou uma parte dos, domínios variáveis de Fv da imunoglobulina apartir de pelo menos uma de uma cadeia pesada ou leve. Tais ácidosnucléicos podem ser obtidos a partir de um hibridoma que produz umanticorpo contra um alvo predeterminado, conforme descrito acima, bemcomo a partir de outras fontes. O DNA recombinante que codifica a moléculade anticorpo humanizado pode então ser clonado em um vetor de expressãoapropriado.

Em certas modalidades, um anticorpo humanizado é otimizadopela introdução de substituições conservativas, substituições das seqüênciasde consenso, substituições das linhagens germinativas e/ou mutaçõesretrógradas. Tais moléculas de imunoglobulina alteradas podem serpreparadas por quaisquer de diversas práticas conhecidas na técnica, (porexemplo, Teng et al., Proc. NatL- Acad. Sei. U.S.A., 80: 7308-7312, 1983;Kozbor et al., Immunology Today, 4: 7279, 1983; Olsson et al., Meth.Enzymol., 92: 3-16, 1982), e podem ser preparadas de acordo com osensinamentos da Publicação de PCT W092/06193 ou EP 0239400.

Um anticorpo ou seu fragmento pode também ser modificado porremoção específica dos epitopos das células T humanos ou "desimunização"pelos métodos descritos em WO 98/52976 e WO 00/34317. Resumidamente,os domínios variáveis de cadeias pesadas e leves de um anticorpo podemser analisados quanto aos peptídeos que se ligam ao MHC de Classe II;estes peptídeos representam epitopos das células T potenciais (comodefinidos em WO 98/52976 e WO 00/34317). Para a detecção dos epitoposdas células T potenciais, uma abordagem de modelagem de computadorchamada "filamento de peptídeo" pode ser aplicada, e, além disso, umbanco de dados de peptídeos que se ligam ao MHC de classe Il humanospode ser-pesquisado quanto aos motivos presentes nas seqüências de Vh eVL, como descrito em WO 98/52976 e WO 00/34317. Estes motivos se ligama quaisquer dos 18 alótipos DR do MHC de classe Il principal, e assimconstituem epitopos das células T potenciais. Os epitopos das células Tpotenciais detectados podem ser eliminados substituindo pequenos númerosde resíduos de aminoácidos nos domínios variáveis, ou preferivelmente, porsubstituições de aminoácidos individuais. Tipicamente, são feitas assubstituições conservativas. Freqüentemente, porém não exclusivamente,pode ser usado um aminoácido comum para uma posição nas seqüênciasdo anticorpo da linhagem germinativa humana. As seqüências da linhagemgerminativa humana, por exemplo, são descritas em Tomlinson, et al. (1992)J. Moi Biol. 227:776-798; Cook, G. P. et al. (1995) Immunol. TodayVol. 16(5): 237-242; Chothia, D. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817; e Tomlinsonet al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638. O diretório V BASE proporciona umdiretório amplo das seqüências das regiões variáveis da imunoglobulinahumana (compilado por Tomlinson, I.A. et al. MRC Centre for ProteinEngineering, Cambridge, UK). Estas seqüências podem ser usadas comouma fonte de seqüência humana, por exemplo, para as regiões de estruturae as CDRs. As regiões de estrutura humanas de consenso podem tambémser usadas, por exemplo, conforme descrito na Patente U.S. N2 6.300.064.

Em certas modalidades, um anticorpo pode conter uma regiãoconstante ou Fc da imunoglobulina alterada. Por exemplo, um anticorpoproduzido de acordo com os ensinamentos aqui contidos pode se ligar maisfortemente ou com mais especificidade às moléculas efetoras, tais como ocomplemento e/ou os receptores de Fc, que podem controlar diversasfunções imunes do anticorpo, tais como a atividade das células efetoras, alise, a atividade mediada por complemento, a depuração do anticorpo, e ameia-vida do anticorpo. Os receptores de Fc típicos que se ligam a umaregião Fc de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo de IgG) incluem,porém não estão limitados aos, receptores das subclasses FcyRI, FcyRII, eFcyRIII e FcRn, incluindo as variantes alélicas e as formas alternativamenteremovidas destes receptores. Os receptores de Fc são revistos em Ravetche Kinet1 Annu. Rev. Immunol 9:457-92, 1991; Capei et al., Immunomethods4:25-34,1994; e de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41, 1995).

Quanto às técnicas de produção de anticorpos adicionais, verAntibodies: A Laboratory Manual, eds. Harlow et al., Cold Spring HarborLaboratory, 1988. A presente invenção não está necessariamente limitada aqualquer fonte, método de produção ou outras características especiaisparticulares de um anticorpo.

Os anticorpos, também conhecidos como imunoglobulinas, sãotipicamente proteínas glicosiladas tetraméricas compostas de duas cadeiasleves (L) de aproximadamente 25 kDa cada e duas cadeias pesadas (H) deaproximadamente 50 kDa cada. Dois tipos de cadeia leve, chamadoslambda e capa, podem ser encontrados nos anticorpos. Dependendo daseqüência de aminoácidos do domínio constante das cadeias pesadas, asimunoglobulinas podem ser designadas para cinco classes principais, A, D,E, G, e M, e diversas destas podem ser adicionalmente divididas emsubclasses (isótipos), por exemplo, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1l e IgA2. Cadacadeia leve inclui um domínio variável (V) N-terminal (VL) e um domínioconstante (C) (CL). Cada cadeia pesada inclui um domínio V N-terminal (VH)1três ou quatro domínios C (CHs)1 e uma região de dobradiça. O domínio CHmais proximal ao VH é designado como CH1. Os domínios VH e VLconsistem em quatro regiões de seqüências relativamente conservadas,chamadas regiões de estrutura (FR1, FR2, FR3, e FR4), que formam umaestrutura para três regiões das seqüências hipervariáveis (regiõesdeterminantes de complementaridade, CDRs). As CDRs contêm a maiorparte dos resíduos responsáveis pelas interações específicas do anticorpocom o antígeno. As CDRs são referidas como CDR1, CDR2, e CDR3. Dessemodo, os constituintes da CDR sobre a cadeia pesada são referidos comoH1, H2, e H3, enquanto os constituintes da CDR sobre a cadeia leve sãoreferidos como L1, L2, e L3.

A CDR3 é tipicamente a maior fonte de diversidade moleculardentro do sítio de ligação do anticorpo. A H3, por exemplo, pode ser tãocurta quanto dois resíduos de aminoácidos ou maior do que 26 aminoácidos.As estruturas das subunidades e as configurações tridimensionais dasdiferentes classes de imunoglobulinas são bastante conhecidas na técnica.

Quanto a uma revisão da estrutura do anticorpo, ver Antibodies: ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds. Harlow e col al.,1988. Alguém de habilidade na técnica reconhecerá que cada estrutura dasubunidade, por exemplo, uma estrutura de CH, VH1 CL, VL, CDR, FR,compreende fragmentos ativos, por exemplo, a parte da subunidade VH, VL,ou CDR que se liga ao antígeno, isto é, o fragmento de ligação ao antígeno,ou, por exemplo, a parte da subunidade CH que se liga a, e/ou ativa, porexemplo, um receptor de Fc e/ou complemento. As CDRs tipicamente sereferem às CDRs de Kabat, como descritas em Sequences of Proteins ofImmunological lnterest, US Department of Health and Human Services(1991), eds. Kabat et al. Um outro padrão para caracterizar o sítio de ligaçãoao antígeno é referir-se aos laços hipervariáveis, como descritos por Chothia.Ver, por exemplo, Chothia, D. et al. (1992; J. Mol. Bioi 227:799-817; eTomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638. Ainda um outro padrão é adefinição de AbM usada pelo software de modelagem de anticorpo AbM daOxford Molecular. Ver, de um modo geral, por exemplo, Protein Sequenceand Structure Analysis of Antibody Variable Domains. Em: AntibodyEngineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. e Kontermann, R., Springer-Verlag,Heidelberg). As modalidades descritas com relação às CDRs de Kabatpodem alternativamente ser implementadas usando relações descritassimilares com respeito aos laços hipervariáveis de Chothia ou aos laçosdefinidos por AbM.

O fragmento Fab ("Fragment antigen-binding" (Fragmento deligação a antígeno)) consiste nos domínios Vh-ChI e Vl-Cl covalentementeligados por uma ponte de dissulfeto entre as regiões constantes. Ofragmento Fv é menor e consiste nos domínios Vh e Vl ligados de modo nãocovalente. Para superar a tendência dos domínios ligados de modo nãocovalente de se dissociarem, um fragmento Fv de cadeia individual (scFv)pode ser construído. O scFv contém um polipeptídeo flexível que liga (1) aextremidade de C de Vh à extremidade de N de VL> ou (2) a extremidade deC de Vl à extremidade de N de -VH. Um peptídeo de 15 meros (GIy4Ser)3pode ser usado como um ligante, porém outros Iigantes são conhecidos natécnica.

A seqüência dos genes do anticorpo após o conjunto e amutação somática é altamente variada, e estes genes variados sãoestimados codificar 1010 moléculas de anticorpos diferentes (ImmunoglobulinGenes, 2â ed„ eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995).

Um "biespecífico" ou "anticorpo bifuncional" é um anticorpohíbrido artificial tendo dois pares diferentes de cadeias pesadas/leves e doissítios de ligação diferentes. Os anticorpos biespecíficos podem serproduzidos por uma variedade de métodos, incluindo a fusão de hibridomasou a ligação de fragmentos Fab'. Ver, por exemplo, Songsivilai e Lachmann,Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148,1547-1553 (1992). Em uma modalidade, o anticorpo biespecíficocompreende um primeiro polipeptídeo do domínio de ligação, tal como umfragmento Fab', ligado via uma região constante da imunoglobulina a umsegundo polipeptídeo do domínio de ligação.

As Small Modular ImmunoPharmaceuticaIs (SMIP®)proporcionam um exemplo de uma molécula variante compreendendo umpolipeptídeo do domínio de ligação. As SMIPs e os seus usos e aplicaçõessão descritos, por exemplo, nos Pedidos de Patentes Publicados U.S. N-2003/0118592, 2003/0133939, 2004/0058445, 2005/0136049, 2005/0175614,2005/0180970, 2005/0186216, 2005/0202012, 2005/0202023, 2005/0202028,2005/0202534, e 2005/0238646, e seus membros relacionados das famíliasde patentes, todos os quais são, pelo presente, incorporados por referência,neste documento, em suas totalidades.

Uma SMIP® tipicamente se refere a uma proteína de fusão dedomínio de ligação-imunoglobulina que inclui um polipeptídeo do domínio deligação que está fundido, ou de outro modo conectado, a um polipeptídeo daregião de dobradiça ou de atuação na dobradiça da imunoglobulina, que, porsua vez, está fundido, ou de outro modo conectado, a uma regiãocompreendendo uma ou mais regiões constantes nativas ou engenheiradasa partir de uma cadeia pesada da imunoglobulina, diferentes da CH1, porexemplo, as regiões CH2 e CH3 da IgG e IgA, ou as regiões CH3 e CH4 daIgF (ver, por exemplo, U.S. 2005/0136049 por Ledbetter, J. et al. que éincorporado por referência, quanto a uma descrição mais completa). Aproteína de fusão de domínio de ligação-imunoglobulina podeadicionalmente incluir uma região que inclui um polipeptídeo da regiãoconstante da cadeia pesada CH2 da imunoglobulina nativa ou engenheirada(ou CH3 no caso de uma construção derivada no todo ou em parte da IgE)que está fundido, ou de outro modo conectado, ao polipeptídeo da região dedobradiça e um polipeptídeo da região constante da cadeia pesada CH3 daimunoglobulina nativa ou engenheirada (ou CH4 no caso de uma construçãoderivada no todo ou em parte da IgE) que está fundido, ou de outro modoconectado, ao polipeptídeo da região constante CH2 (ou CH3 no caso deuma construção derivada no todo ou em parte da IgE). Tipicamente, taisproteínas de fusão de domínio de ligação-imunoglobulina são capazes depelo menos uma atividade imunológica selecionada a partir do grupo queconsiste em citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo,fixação de complemento, e/ou ligação a um alvo, por exemplo, um antígeno-alvo, tal como a IL-22 humana.

As proteínas terapêuticas, isto é, uma proteína ou peptídeo quetem um efeito biológico sobre uma região no corpo sobre a qual ele atua ousobre uma região do corpo sobre a qual ele remotamente atua viaintermediários, são também úteis para praticar a invenção. Uma proteínaterapêutica pode incluir miméticos peptídicos. Os miméticos são moléculascontendo peptídeos que copiam os elementos da estrutura secundária daproteína. Ver, por exemplo, Johnson et al., "Peptide Turn Mimetics" emBIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto et al., Eds., Chapman e Hall1Nova York (1993), incorporado neste documento por referência. Ajustificativa básica atrás do uso dos miméticos peptídicos é que a cadeiaprincipal peptídica das proteínas existe principalmente para orientar ascadeias laterais de aminoácidos em uma forma tal de modo a facilitar asinterações moleculares, tais como aquelas do anticorpo e o antígeno. Ummimético peptídico é esperado permitir interações moleculares similares àmolécula natural. Estes princípios podem ser usados para engenheirar assegundas moléculas de geração tendo muitas das propriedades naturais dospeptídeos de alvejamento descritos neste documento, porém comcaracterísticas alteradas e potencialmente melhoradas.

As outras modalidades das proteínas terapêuticas incluem asproteínas de fusão. Estas moléculas geralmente têm todo ou uma partesubstancial de um peptídeo de alvejamento, por exemplo, a IL-22 ou umanticorpo anti IL-22, ligado, na extremidade de N ou de C, a todo ou umaparte de um segundo polipeptídeo ou proteína. Por exemplo, as fusõespodem empregar seqüências líderes a partir de outras espécies, parapermitir a expressão recombinante de uma proteína em um hospedeiroheterólogo. Uma outra fusão útil inclui a adição de um domínioimunologicamente ativo, tal como um epitopo do anticorpo, para facilitar apurificação da proteína de fusão. A inclusão de um sítio de clivagem na, oupróximo à, junção de fusão facilitará a remoção do polipeptídeo estranhoapós a purificação. As outras fusões úteis incluem a ligação de domíniosfuncionais, tais como os sítios ativos de enzimas, os domínios deglicosilação, os sinais de alvejamento celular ou as regiões detransmembrana. Os exemplos de proteínas ou peptídeos que podem serincorporados em uma proteína de fusão incluem as proteínas citostáticas, asproteínas que destroem as células, os agentes pró-apoptose, os agentesantiangiogênicos, os hormônios, as citocinas, os fatores do crescimento, osfármacos de peptídeos, os anticorpos, os fragmentos Fab de anticorpos, osantígenos, as proteínas receptoras, as enzimas, as lectinas, as proteínas doMHC, as proteínas de adesão de células e as proteínas de ligação. Osmétodos de gerar proteínas de fusão são bastante conhecidos para aquelesversados na técnica. Tais proteínas podem ser produzidas, por exemplo,através de ligação química usando reagentes de reticulação bifuncionais, porsíntese de novo da proteína de fusão completa, ou por união de umaseqüência de DNA codificando o peptídeo de alvejamento a uma seqüênciade DNA codificando o segundo peptídeo ou proteína, seguida por expressãoda proteína de fusão intacta.

Em uma modalidade, o peptídeo de alvejamento, por exemplo, aIL-22 ou um anticorpo anti IL-22, é fundido com uma região constante dacadeia pesada da imunoglobulina, tal como um fragmento Fc, que contémdois domínios da região constante e uma região de dobradiça, porém nãotem a região variável (Ver, as Pats. U.S. Nss 6.018.026 e 5.750.375,incorporadas neste documento por referência). A região de Fc pode ser umaregião de Fc de ocorrência natural, ou pode ser alterada para melhorarcertas qualidades, tais como as qualidades terapêuticas, o tempo decirculação, a agregação reduzida, etc. Os peptídeos e as proteínas fundidosa uma região de Fc tipicamente exibem uma meia-vida maior in vivo do queo correspondente não-fundido. Também, uma fusão a uma região de Fcpermite a dimerização/multimerização do polipeptídeo de fusão.

As moléculas de VHH (ou nanocorpos), como conhecidas para oprofissional versado, são domínios variáveis das cadeias pesadas, derivadosde imunoglobulinas naturalmente desprovidas de cadeias leves, tais comoaqueles derivados de Camelidae, conforme descrito em W09404678,incorporado neste documento por referência. Tal molécula de VHH pode serderivada de anticorpos produzidos na espécie Camelidae, por exemplo, emcamelo, lhama, dromedário, alpaca e guanaco, e é algumas vezes chamadaum domínio variável de camelídeo ou camelizado. Ver, por exemplo,Muyldermans., J. Biotechnology (2001) 74(4):277-302, incorporado nestedocumento por referência. Outras espécies além da Camelidae podemproduzir anticorpos de cadeias pesadas naturalmente desprovidos de cadeialeve. As moléculas de VHH são aproximadamente 10 vezes menores do queas moléculas de IgG. Elas são polipeptídeos individuais e muito estáveis,resistindo a condições extremas de pH e temperatura. Além disso, elas sãoresistentes à ação das proteases, o que não é o caso para os anticorposconvencionais. Ademais, a expressão in vitro das VHHs produz VHHsfuncionais adequadamente duplicadas, de alto rendimento. Além do mais, osanticorpos gerados nos Camelídeos reconhecerão epitopos diferentesdaqueles reconhecidos pelos anticorpos gerados in vitro através do uso debibliotecas de anticorpos ou via imunização de mamíferos que não osCamelídeos (ver o WO 9749805, que é incorporado neste documento porreferência).

Um aspecto da presente invenção compreende anticorpos efragmentos de ligação a antígenos que ligam a IL-22. A descriçãoproporciona novas CDRs derivadas de bibliotecas de genes deimunoglobulinas humanas. A estrutura para carregar uma CDR é geralmenteuma cadeia pesada ou leve do anticorpo ou sua parte, onde a CDR estálocalizada em uma região CDR de ocorrência natural. As estruturas e aslocalizações dos domínios variáveis podem ser determinadas conformedescrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological lnterest, N291-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991).

As seqüências de DNA e de aminoácidos (AA) das modalidadesilustrativas dos anticorpos anti-IL-22 desta invenção, incluindo os seusfragmentos scFv, os domínios Vh e VL, e as CDRs, são descritas nas Figuras7-10 e enumeradas nas Tabelas 1 e 7. Vinte modalidades específicas dosanticorpos não germinativos são identificadas como GIL01, GIL16, GIL45,GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04,166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, e 356A11. Asposições das CDRs nos domínios Vh e Vl dos anticorpos não germinativossão listadas na Tabela 2. Quinze modalidades específicas dos anticorposgerminativos são identificadas como GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68,GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04,356A11, e 368D04.<table>table see original document page 37</column></row><table><table>table see original document page 38</column></row><table><table>table see original document page 39</column></row><table><table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table>Os anticorpos anti-IL-22 desta invenção podem opcionalmentecompreender regiões constantes do anticorpo ou partes delas. Por exemplo,um domínio Vl pode estar unido em sua extremidade C-terminal a umdomínio constante da cadeia leve, como Ck ou CX. Similarmente, umdomínio Vh ou sua parte pode estar unido a toda ou parte de uma cadeiapesada como a IgA1 a IgD1 a IgE, a IgG, e a IgM, e qualquer subclasse deisótipos. As regiões constantes são conhecidas na técnica (ver/por exemplo,Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological lnterest, Ns 91-3242,National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991)). Portanto, osanticorpos dentro do-escopo desta invenção incluem os domínios Vh e VL,ou uma parte deles, combinados com as regiões constantes conhecidas natécnica.

Certas modalidades compreendem um domínio VH, um domínioVL, ou uma combinação deles, do fragmento Fv de GIL01, GIL16, GIL45,GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04,166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11.Uma outra modalidade compreende um domínio VH, um domínio VL, ou umacombinação deles, do fragmento Fv a partir de um anticorpo escolhido de356A11, 354A08, 087B03, e 368D04. As modalidades adicionaiscompreendem uma, duas, três, quatro, cinco ou seis regiões determinantesde complementaridade (CDRs) a partir dos domínios Vh e VL. Os anticorposcujas seqüências das CDRs estão incluídas na SEQ ID NO:5-13, 23-31, 41-49, 59-67, 77-85, 95-103, 113-121, 131-139, 149-157, 167-175, 185-193,203-211, 221-229, 239-247, 257-265, 275-283, 293-301, 311-319, 329-337,347-355, 365-373, 383-391, 401-409, 419-427, 437-445, 455-463, 473-481,491-499, 509-517, 527-535, 545-553, 563-571, 581-589, 599-607, ou 617-625 estão incluídos no escopo desta invenção. Por exemplo, em umamodalidade, um anticorpo compreende um fragmento de H3 do domínio Vhde GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05,087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08,355B06, 355E04, ou 356A11 germinativo ou não germinativo, ou a partir deum anticorpo escolhido de 356A11, 354A08, 087B03, e 368D04.Em certas modalidades, os domínios Vh e/ou Vl podem sergerminativos, isto é, as regiões de estrutura (FR) destes domínios sãomutadas usando técnicas convencionais de biologia molecular para seremiguais àquelas produzidas pelas células de linhagens germinativas. Emoutras modalidades, as seqüências das FR permanecem divergidas dasseqüências das linhagens germinativas de consenso. Em uma modalidadedesta invenção, os anticorpos germinativos são mostrados na Tabela 7.

Em uma modalidade, a invenção proporciona seqüências deaminoácidos e ácidos nucléicos para o GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68,GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06,166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11germinativo. As seqüências de aminoácidos e nucleotídeos para o domínioVh do GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06,166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, e 368D04 germinativo sãorepresentadas na Tabela 7 e na Figura 8. As seqüências de aminoácidos enucleotídeos para o domínio Vl do GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68,GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04,356A11, e 368D04 germinativos são também representadas na Tabela 7 ena Figura 8.

Em uma modalidade, a mutagênese é usada para preparar umanticorpo mais similar a uma ou mais seqüências das linhagens germinativas.Isto pode ser desejável quando as mutações forem introduzidas na região deestrutura de um anticorpo através de mutagênese somática ou através daPCR tendente a erro. As seqüências das linhagens germinativas para osdomínios Vh e Vl podem ser identificadas efetuando-se os alinhamentos deseqüências de aminoácidos e de ácidos nucléicos contra o banco de dadosVBASE (MRC Center for Protein Engineering, UK). O VBASE é um diretórioamplo de todas as seqüências das regiões variáveis das linhagensgerminativas humanas compiladas a partir de mais do que mil seqüênciaspublicadas, incluindo aquelas nas autorizações de publicações atuais dasbibliotecas de dados de Genbank e EMBL. Em algumas modalidades, asregiões FR dos scFvs são mutadas em conformidade com ascorrespondências mais próximas no banco de dados VBASE e as partes daCDR são mantidas intactas.

Em certas modalidades, os anticorpos desta invençãoespecificamente reagem com um epitopo que é igual ao epitopo reconhecidopor GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05,087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08,355B06, 355E04, ou 356A11, de modo tal que eles inibem competitivamentea ligação de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09,062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10,354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11 IL-22 humana. Tais anticorpos podemser determinados em ensaios de ligação competitiva. Em uma modalidade, oanticorpo, ou seu fragmento de ligação a antígeno, se liga a um epitopo deIL-22 que é reconhecido por 368D04, de modo tal que o anticorpocompetitivamente inibe a ligação de 368D04 a IL-22 humana. Em uma outramodalidade, o anticorpo, ou o seu fragmento de ligação a antígeno, se liga aum epitopo de IL-22 que é reconhecido por 356A11, de modo tal que oanticorpo inibe competitivamente a ligação de 356A11 a IL-22 humana. Emuma outra modalidade, o anticorpo, ou o seu fragmento de ligação aantígeno, se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por 354A08, demodo tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de 354A08 a IL-22 humana. Em uma outra modalidade, o anticorpo, ou o seu fragmento deligação a antígeno, se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por087B03, de modo tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de087B03 a IL-22 humana. Em uma modalidade, a constante de associação(Ka) destes anticorpos para a IL-22 humana é pelo menos 106 M'1. Em umaoutra modalidade, a constante de associação destes anticorpos para a IL-22humana é pelo menos 109 M"1. Em outras modalidades, a constante deassociação destes anticorpos para a IL-22 humana é pelo menos 1010 M*1,pelo menos 1011 M"1, ou pelo menos 1012 M"1. A afinidade de ligação podeser determinada usando práticas conhecidas na técnica, tais como ELISA,tecnologia de biossensor, tal como uma análise da interação bioespecífica,ou outras técnicas, incluindo aquelas descritas neste pedido.Contempla-se que os anticorpos desta invenção podem ligaroutras proteínas, tais como, por exemplo, as proteínas recombinantescompreendendo toda ou uma parte da IL-22.

Alguém de habilidade comum na técnica reconhecerá que osanticorpos descritos podem ser usados para detectar, medir, e/ou inibir asproteínas que diferem algo da IL-22. Por exemplo, estas proteínas podemser homólogas de IL-22. Os anticorpos anti-IL-22 são esperados ligaremproteínas que compreendem uma seqüência que é pelo menos cerca de60%, 70%, 80%, 90%, 95%, ou mais idêntica a qualquer seqüência de pelomenos 100, 80, 60, 40, ou 20 aminoácidos contíguos na seqüência descritaem SEQ ID NO:1.

Além das análises da homologia da seqüência, o mapeamentodo epitopo (ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols, ed. Morris,Humana Press, 1996), e as análises das estruturas secundárias e terciáriaspodem ser realizados para identificar estruturas 3D específicas supostaspelos anticorpos presentemente descritos e seus complexos com osantígenos. Tais métodos incluem, porém não estão limitados à, cristalografiade raios X (Engstom (1974) Biochem. Exp. Biol., 11:7-13) e modelagem porcomputador de representações virtuais dos presentes anticorpos (Flettericket al. (1986) Computer Graphics and Molecular Modeling, em CurrentCommunications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory, ColdSpring Harbor, NY).

A descrição proporciona um método para obter anticorpos anti-IL-22 que compreende criar anticorpos com a(s) seqüência(s) alteradas deVh e/ou Vl da Tabela 1. Tais anticorpos podem ser derivados por umprofissional versado usando práticas conhecidas na técnica. Por exemplo, assubstituições, as remoções, ou as adições de aminoácidos podem serintroduzidas nas regiões FR e/ou CDR. As alterações da FR sãonormalmente projetadas para melhorar a estabilidade e a imunogenicidadedo anticorpo, enquanto que as alterações da CDR são tipicamenteprojetadas para aumentar a afinidade do anticorpo por seu antígeno. Asalterações que aumentam a afinidade podem ser testadas alterando-se aseqüência da CDR e medindo-se a afinidade do anticorpo por seu alvo (verAntibody Engineering, 2- ed., Oxford University Press, ed. Borrebaeck, 1995).

Os anticorpos cujas seqüências da CDR diferemsubstancialmente daquelas incluídas nas, ou incluídas dentro das,seqüências em SEQ ID NO: 5-13, 23-31, 41-49, 59-67, 77-85, 95-103, 113-121, 131-139, 149-157, 167-175, 185-193, 203-211, 221-229, 239-247, 257-265, 275-283, 293-301, 311-319, 329-337, 347-355, 365-373, 383-391, 401-409, 419-427, 437-445, 455-463, 473-481, 491-499, 509-517, 527-535, 545-553, 563-571, 581-589, 599-607, ou 617-625, estão incluídos no escopodesta invenção. Tipicamente, isto envolve a substituição de um aminoácidopor um aminoácido tendo características de carga, hidrofóbicas, ouestereoquímicas similares. As substituições mais drásticas nas regiões FR,em contraste com as regiões CDR, podem também ser feitas, desde queelas não afetem adversamente (por exemplo, reduzam a afinidade em maisdo que 50% em comparação com o anticorpo não substituído) aspropriedades de ligação do anticorpo. As substituições podem também serfeitas para tornar germinativo o anticorpo ou estabilizar o sítio de ligação aantígeno.

As modificações conservativas produzirão moléculas tendocaracterísticas funcionais e químicas similares àquelas da molécula a partirda qual tais modificações são feitas. Em contraste, as modificaçõessubstanciais nas características funcionais e/ou químicas das moléculaspodem ser efetuadas selecionando-se as substituições na seqüência deaminoácidos que diferem significativamente em seu efeito sobre manter (1) aestrutura da cadeia principal molecular na área da substituição, por exemplo,como uma conformação de folha ou helicoidal, (2) a carga ou ahidrofobicidade da molécula no sítio-alvo, ou (3) o tamanho da molécula.

Por exemplo, uma "substituição de aminoácido conservativa"pode envolver uma substituição de um resíduo de aminoácido nativo por umresíduo não nativo, de modo tal que haja pouco ou nenhum efeito sobre apolaridade ou a carga do resíduo de aminoácido naquela posição. (Ver, porexemplo, MacLennan et al., 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67;Sasaki et al., 1998, Adv. Biophys. 35:1-24).

As substituições de aminoácidos desejadas (quer sejamconservativas, quer sejam não conservativas) podem ser determinadas poraqueles versados na técnica na hora que tais substituições forem desejadas.

Por exemplo, as substituições de aminoácidos podem ser usadas paraidentificar resíduos importantes da seqüência da molécula, ou para aumentarou diminuir a afinidade das moléculas descritas neste documento. Assubstituições de aminoácidos ilustrativas incluem, porém não estão limitadasàquelas descritas na Tabela 3.

Tabela 3: Substituições de Aminoácidos

<table>table see original document page 47</column></row><table>

Em certas modalidades, as substituições de aminoácidosconservativas também incluem os resíduos de aminoácidos que nãoocorrem naturalmente, os quais são tipicamente incorporados por síntesequímica de peptídeos, em vez de por síntese em sistemas biológicos.

Em uma modalidade, o método para preparar um domínio Vhvariante compreende adicionar, remover, ou substituir pelo menos umaminoácido nos domínios Vh descritos, ou combinar os domínios Vhdescritos com pelo menos um domínio VL, e testar o domínio Vh variantequanto à ligação a IL-22 ou modulação da atividade da IL-22.

Um método análogo para preparar um domínio Vl variantecompreende adicionar, remover, ou substituir pelo menos um aminoácidonos domínios Vl descritos, ou combinar os domínios Vl descritos com pelomenos um domínio VH, e testar o domínio Vl variante quanto à ligação a IL-22 ou modulação da atividade da IL-22.

Um aspecto adicional da descrição proporciona um método parapreparar anticorpos ou fragmentos de ligação a antígenos queespecificamente ligam a IL-22. O método compreende:

(a) proporcionar um repertório de partida de ácidos nucléicoscodificando um domínio Vh que não tem pelo menos uma CDR ou contémpelo menos uma CDR a ser substituída;

(b) inserir na, ou substituir a, região CDR do repertório de partidacom pelo menos um ácido nucléico doador codificando uma seqüência deaminoácidos conforme substancialmente descrita neste documento parauma CDR de VHl produzindo um repertório de produtos;

(c) expressar os ácidos nucléicos do repertório de produtos;

(d) selecionar um fragmento de ligação a antígeno específicoque se liga a IL-22; e

(e) recuperar o fragmento de ligação a antígeno específico ou oácido nucléico que o codifica.

Em um método análogo, pelo menos uma CDR de Vl dainvenção é combinada com um repertório de ácidos nucléicos codificandoum domínio Vl que não tem pelo menos uma CDR ou contém pelo menosuma CDR a ser substituída. A pelo menos uma CDR de Vh ou Vl pode seruma CDR1, uma CDR2, uma CDR3, ou uma combinação delas, incluindo ascombinações de CDRs de Vh e VL, tais como aquelas descritas nas Tabelas1 ou 7, incluindo aquelas especificadas em SEQ ID N0:8, 9, 10, 11, 12, 13,26, 27, 28, 29, 30, 31, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 80, 81,82, 83, 84, 85,98, 99, 100, 101, 102, 103, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 134,135, 136, 137, 138, 139, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 170, 171, 172, 173,174, 175, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 224,225, 226, 227, 228, 229, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 260, 261, 262, 263,264, 265, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 314,315, 316, 317, 318, 319, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 350, 351, 352, 353,354, 355, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 404,405, 406, 407, 408, 409, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 440, 441, 442, 443,444, 445, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 494,495, 496, 497, 498, 499, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 530, 531, 532, 533,534, 535, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 584,585, 586, 587, 588, 589, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 620, 621, 622, 623,624, ou 625.

Em uma modalidade, o domínio variável inclui uma CDR3 a sersubstituída ou não tem uma região de codificação de CDR3 e o pelo menosum ácido nucléico doador codifica um aminoácido substancialmente comoespecificado em SEQ ID N0:10, 13, 28, 31, 46, 49, 64, 67, 82, 85, 100, 103,118, 121, 136, 139, 154, 157, 172, 175, 190, 193, 208, 211, 226, 229, 244,247, 262, 265, 280, 283, 298, 301, 316, 319, 334, 337, 352, 355, 370, 373,388, 391, 406, 409, 424, 427, 442, 445, 460, 463, 478, 481, 496, 499, 514,517, 532, 535, 550, 553, 568, 571, 586, 589, 604, 607, 622, ou 625.

Em uma outra modalidade, o domínio variável inclui uma CDR1a ser substituída ou não tem uma região de codificação de CDR1 e o pelomenos um ácido nucléico doador codifica uma seqüência de aminoácidossubstancialmente como especificada em SEQ ID NO:8, 11, 26, 29, 44, 47,62, 65, 80, 83, 98, 101, 116, 119, 134, 137, 152, 155, 170, 173, 188, 191,206, 209, 224, 227, 242, 245, 260, 263, 278, 281, 296, 299, 314, 317, 332,335, 350, 353, 368, 371, 386, 389, 404, 407, 422, 425, 440, 443, 458, 461,476, 479, 494, 497, 512, 515, 530, 533, 548, 551, 566, 569, 584, 587, 602,605, 620, ou 623.

Em uma outra modalidade, o domínio variável inclui uma CDR2a ser substituída ou não tem uma região de codificação de CDR2 e o pelomenos um ácido nucléico doador codifica uma seqüência de aminoácidossubstancialmente como especificada em SEQ ID NO:9, 12, 27, 30, 45, 48,63, 66, 81, 84, 99, 102, 117, 120, 135, 138, 153, 156, 171, 174, 189, 192,207, 210, 225, 228, 243, 246, 261, 264, 279, 282, 297, 300, 315, 318, 333,336, 351, 354, 369, 372, 387, 390, 405, 408, 423, 426, 441, 444, 459, 462,477, 480, 495, 498, 513, 516, 531, 534, 549, 552, 567, 570, 585, 588, 603,606, 621, ou 624.

Em uma outra modalidade, o domínio variável inclui uma CDR3a ser substituída ou não tem uma região de codificação de CDR3 eadicionalmente compreende uma CDR1 a ser substituída ou não tem umaregião de codificação de CDR1, onde o pelo menos um ácido nucléicodoador codifica uma seqüência de aminoácidos substancialmente comoespecificada nas Tabelas 1 ou 7.

Em uma outra modalidade, o domínio variável inclui uma CDR3a ser substituída ou não tem uma região de codificação de CDR3 eadicionalmente compreende uma CDR2 a ser substituída ou não tem umaregião de codificação de CDR2, onde o pelo menos um ácido nucléicodoador codifica uma seqüência de aminoácidos substancialmente comoespecificada nas Tabelas 1 ou 7.

Em uma outra modalidade, o domínio variável inclui uma CDR3a ser substituída ou não tem uma região de codificação de CDR3 eadicionalmente compreende uma CDR1 e uma CDR2 a serem substituídasou não tem uma região de codificação de CDR1 e uma de CDR2, onde opelo menos um ácido nucléico doador codifica uma seqüência deaminoácidos substancialmente como especificada nas Tabelas 1 ou 7.

Usando a metodologia do DNA recombinante, uma seqüência deCDR descrita pode ser introduzida em um repertório de domínios Vh ou Vlnão tendo a CDR respectiva (Marks et al. (BioTechnoIogy (1992) 10:779-783). Por exemplo, um iniciador adjacente à extremidade de 5' dodomínio variável e um iniciador à terceira FR podem ser usados para gerarum repertório de seqüências de domínios variáveis não tendo a CDR3. Esterepertório pode ser combinado com uma CDR3 de um anticorpo descrito.

Usando técnicas análogas, partes de uma seqüência de CDR descritapodem ser combinadas com partes das seqüências de CDR a partir deoutros anticorpos, para proporcionar um repertório de fragmentos de ligaçãoa antígenos que ligam a IL-22. Cada repertório pode ser expresso em umsistema de hospedeiro, tal como uma exposição em fago (descrita em WO92/01047 e sua Patente U.S. N- 5.969.108 correspondente), de modo quepossam ser selecionados fragmentos de ligação a antígenos adequados quese ligam a IL-22.

Uma alternativa adicional usa a mutagênese aleatória dasseqüências de Vh ou Vl descritas para gerar domínios Vh ou Vl variantesainda capazes de ligar a IL-22. Uma técnica usando a PCR tendente a erro édescrita por Gram et al. (Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. (1992) 89: 3576-3580).

Um outro método utiliza a mutagênese direta das seqüências deVh ou Vl descritas. Tais técnicas são descritas por Barbas et al. (Proc. Nat.Acad. Sei. U.S.A. (1994) 91: 3809-3813) e Schier et al. (J. Mol. Biol. (1996)263: 551-567).

Uma parte de um domínio variável compreenderá pelo menosuma região CDR substancialmente conforme especificada neste documentoe, opcionalmente, regiões de estrutura intermediárias a partir dos domíniosVh ou Vl como especificados neste documento. A parte pode incluir ametade C-terminal da FR1 e/ou a metade N-terminal da FR4. Os resíduosadicionais na extremidade N-terminal ou C-terminal do domínio variávelpodem não ser os mesmos resíduos encontrados nos anticorpos deocorrência natural. Por exemplo, a construção de anticorpos por técnicas deDNA recombinante freqüentemente introduz resíduos N- ou C-terminais deseu uso de ligantes. Alguns Iigantes podem ser usados para unir osdomínios variáveis a outros domínios variáveis (por exemplo, diacorpos),domínios constantes, ou marcas proteináceas.

Embora as modalidades ilustradas nos Exemplos compreendamum par "correspondente" dos domínios Vh e VL, um profissional versadoreconhecerá que as modalidades alternativas podem compreenderfragmentos de ligação a antígenos contendo somente uma única CDR apartir do domínio Vl ou VH. Qualquer um dos domínios de ligação aantígenos específicos de cadeias individuais pode ser usado para examinarquanto aos domínios complementares capazes de formarem um fragmentode ligação a antígeno específico de dois domínios, capaz de, por exemplo,ligar-se a IL-22. O exame pode ser efetuado por métodos de exame deexposição em fago, usando a assim chamada abordagem combinatóriadupla hierárquica, descrita em WO 92/01047. Nesta abordagem, umacolônia individual contendo um clone de cadeia H ou L é usada para infectaruma biblioteca completa de clones codificando a outra cadeia (L ou H), e odomínio de ligação a antígeno específico de duas cadeias resultante éselecionado de acordo com as técnicas de exposição em fago, conformedescritas.

Em algumas modalidades alternativas, os anticorpos anti-IL-22podem ser ligados a uma proteína (por exemplo, a albumina) por reticulaçãoquímica ou métodos recombinantes. Os anticorpos descritos podem tambémser ligados a uma variedade de polímeros não proteináceos (por exemplo,polietileno glicol, polipropileno glicol, ou polioxialquilenos) nas maneirasdescritas nas Patentes U.S. Nes 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417;4.791.192; ou 4.179.337. Os anticorpos podem ser modificadosquimicamente por conjugação covalente a um polímero, por exemplo, paraaumentar a sua meia-vida na circulação sangüínea. Os polímeros e osmétodos de ligação ilustrativos são mostrados nas Pats. U.S. N- 4.766.106;4.179.337; 4.495.285; e 4.609.546.

Os anticorpos descritos podem ser modificados para alterar asua glicosilação; ou seja, pelo menos uma porção de carboidrato pode serremovida ou adicionada ao anticorpo. A remoção ou a adição de sítios deglicosilação pode ser efetuada alterando-se a seqüência de aminoácidospara remover ou criar sítios de glicosilação de consenso, os quais sãobastante conhecidos na técnica. Um outro meio de adicionar porções decarboidratos é o acoplamento químico ou enzimático de glicosídeos aosresíduos de aminoácidos do anticorpo (ver WO 87/05330 e Aplin et al.(1981) CRC Crit. Rev. Biochem., 22: 259-306). A remoção das porções decarboidratos pode também ser efetuada química ou enzimaticamente (verHakimuddin et al. (1987) Arch. Biochem. Biophys., 259: 52; Edge et al.(1981) Anal. Biochem., 118: 131; Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol.,138: 350).

Os métodos para alterar uma região constante do anticorpo sãoconhecidos na técnica. Os anticorpos com função alterada (por exemplo,afinidade alterada por um Iigante efetor, tal como o FcR sobre uma célula ouo componente C1 do complemento) podem ser produzidos por substituiçãode pelo menos um resíduo de aminoácido na porção constante do anticorpopor um resíduo diferente (ver, por exemplo, EP 388.151 A1, US 5.624.821 eUS 5.648.260). Poderiam ser descritos tipos similares de alterações, asquais, se aplicadas a um anticorpo de murino ou de outra espécie,reduziriam ou eliminariam funções similares.

Por exemplo, é possível alterar a afinidade de uma região Fc deum anticorpo (por exemplo, uma IgG, tal como uma IgG humana) pelo FcR(por exemplo, Fc gama R1) ou C1q. A afinidade pode ser alterada porsubstituição de pelo menos um resíduo especificado por pelo menos umresíduo tendo uma funcionalidade apropriada sobre a sua cadeia lateral, oupor introdução de um grupo funcional carregado, tal como o glutamato ou oaspartato, ou talvez um resíduo apoiar aromático, tal como a fenilalanina, atirosina, o triptofano ou a alanina (ver, por exemplo, a US 5.624.821).

Por exemplo, a substituição do resíduo 297 (asparagina) pelaalanina na região constante da IgG inibe significativamente o recrutamentodas células efetoras, embora somente reduzindo levemente (cerca de trêsvezes mais fraca) a afinidade pelo C1q (ver, por exemplo, a US 5.624.821).A numeração dos resíduos na cadeia pesada é aquela do índice EU (verKabat et al., 1991, supra). Esta alteração destrói o sítio de glicosilação eacredita-se que a presença de carboidrato seja requerida para a ligação aoreceptor de Fc. Qualquer outra substituição neste sítio que destrua o sítio deglicosilação é acreditada causar uma diminuição similar na atividade lítica.Outras substituições de aminoácidos, por exemplo, alterando-se qualquerum dos resíduos 318 (GIu)1 320 (Lys) e 322 (Lys), para Ala, são tambémsabidas eliminarem a ligação de C1q à região Fc dos anticorpos IgG (ver,por exemplo, a US 5.624.821).

Podem ser produzidos anticorpos modificados, os quais têmuma interação reduzida com um receptor de Fe. Por exemplo, tem sidomostrado que na IgG3 humana, a qual se liga ao receptor Fc gama R1humano, a alteração de Leu 235 para Glu destrói a sua interação com oreceptor. As mutações sobre sítios adjacentes ou próximos na região deligação de dobradiça de um anticorpo (por exemplo, a substituição dosresíduos 234, 236 ou 237 por Ala) podem também ser usadas para afetar aafinidade do anticorpo pelo receptor Fc gama R1. A numeração dos resíduosna cadeia pesada é baseada no índice EU (ver Kabat et al., 1991 supra).

Os métodos adicionais para alterar a atividade lítica de umanticorpo, por exemplo, alterando-se pelo menos um aminoácido na regiãoN-terminal do domínio CH2, são descritos em WO 94/29351 por Morgan et al.e na US 5.624.821.

Os anticorpos desta invenção podem ser marcados com umamarca detectável ou funcional. Estas marcas incluem as radiomarcas (p.ex,131I ou "Tc), as marcas enzimáticas (por exemplo, a peroxidase da raiz forteou a fosfatase alcalina), e outras porções químicas (por exemplo, biotina).

A invenção pode também ser caracterizada por um anticorpoisolado que se liga a IL-22, em particular, a IL-22 humana. Em certasmodalidades, o anticorpo anti-IL-22 pode ter pelo menos uma das seguintescaracterísticas: (1) ele é um anticorpo monoclonal ou de especificidadeúnica; (2) ele é um anticorpo humano; (3) ele é um anticorpo gerado in vitro;(4) ele é um anticorpo gerado in vivo (por exemplo, sistema de camundongotransgênico); (5) ele se liga a IL-22 com uma constante de associação depelo menos 1012 M'1; (6) ele se liga a IL-22 com uma constante deassociação de pelo menos 1011 M"1; (7) ele se liga a IL-22 com umaconstante de associação de pelo menos 1010 M"1; (8) ele se liga a IL-22 comuma constante de associação de pelo menos 109 M"1; (9) ele se liga a IL-22com uma constante de associação de pelo menos 108 M"1; (10) ele se liga aIL-22 com uma constante de dissociação de 500 nM ou menos; (11) ele seliga a IL-22 com uma constante de dissociação de 10 nM ou menos; (12) elese liga a IL-22 com uma constante de dissociação de 150 pM ou menos; (13)ele se liga a IL-22 com uma constante de dissociação de 60 pM ou menos;(14) ele inibe a ligação da IL-22 ao IL-22R ou um complexo de receptor deIL-22R e IL-10R2 com uma IC50 de 10 nM ou menos; (15) ele bloqueia aproliferação mediada pela IL-22 das células BaF3 engenheiradascompreendendo um receptor de IL-22 com uma IC5o de 1 nM ou menos emuma modalidade, com uma IC5o de 150 pM ou menos em uma outramodalidade, com uma IC50 de 100 pM ou menos em uma outra modalidade,e com uma IC50 de 10 pM ou menos em uma outra modalidade; e (16) elebloqueia a secreção de GROa mediada pela IL-22 a partir de HT29 com umaIC50 de 1 nM ou menos em uma modalidade, com uma IC5o de 150 pM oumenos em uma outra modalidade, e com uma IC5o de 10 pM ou menos emuma outra modalidade.

Alguém versado na técnica apreciará que as modificaçõesdescritas acima não são todas exaustivas, e que muitas outras modificaçõessão óbvias para um profissional versado levando-se em consideração osensinamentos da presente descrição.

III. Ácidos Nucléicos. Sistemas de Clonagem e Expressão

A descrição proporciona ácidos nucléicos isolados codificandoos anticorpos descritos. Os ácidos nucléicos podem compreender o DNA ouo RNA, e eles podem ser sintéticos (completa ou parcialmente) ourecombinantes (completa ou parcialmente). A referência a uma seqüência denucleotídeos como especificada neste documento inclui uma molécula deDNA com a seqüência especificada, e inclui uma molécula de RNA com aseqüência especificada na qual U substitui T.

Também se proporcionam ácidos nucléicos que compreendemuma seqüência de codificação para uma, duas, ou três CDR's, um domínioVh um domínio VL, ou suas combinações, como descrito neste documento,ou uma seqüência substancialmente idêntica a ele (por exemplo, umaseqüência pelo menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou maioridêntica a ele, ou que seja capaz de hibridizar sob condições severas com asseqüências descritas).

Em uma modalidade, os ácidos nucléicos têm seqüências denucleotídeos codificando as regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeialeve de um anticorpo anti-IL-22 tendo pelo menos uma CDR escolhida apartir das seqüências de aminoácidos de SEQ ID NO: 8-13, 26-31, 44-49,62-67, 80-85, 98-103, 116-121, 134-139, 152-157, 170-175, 188-193, 206-211, 224-229, 242-247, 260-265, 278-283, 296-301, 314-319, 332-337, 350-355, 368-373, 386-391, 404-409, 422-427, 440-445, 458-463, 476-481, 494-499, 512-517, 530-535, 548-553, 566-571, 584-589, 602-607, ou 620-625;ou seqüência codificando uma CDR que difere por um ou dois aminoácidosdas seqüências descritas neste documento.

O ácido nucléico pode codificar somente a região variável dacadeia leve ou da cadeia pesada, ou pode também codificar uma regiãoconstante da cadeia leve ou pesada do anticorpo, operativamente ligada àregião variável correspondente. Em uma modalidade, a região variável dacadeia leve é ligada a uma região constante escolhida a partir de uma regiãoconstante capa ou lambda. A região constante da cadeia leve pode tambémser um tipo capa ou lambda humano. Em uma outra modalidade, a regiãovariável da cadeia pesada está ligada a uma região constante da cadeiapesada de um isótipo de anticorpo escolhido a partir de IgG (por exemplo,IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA1, IgA2, IgD, e IgE. A região constante dacadeia pesada pode ser um isótipo de IgG (por exemplo, uma IgGi).

As composições de ácidos nucléicos da presente invenção,embora freqüentemente na seqüência nativa (de cDNA ou DNA genômico ousuas misturas), exceto por sítios de restrição modificados e similares, podemser mutadas de acordo com técnicas padrões, para proporcionar seqüênciasde genes. Para as seqüências de codificação, estas mutações podem afetara seqüência de aminoácidos, se desejado. Em particular, as seqüências denucleotídeos substancialmente idênticas a ou derivadas de seqüências de V,D, J, constantes, trocas e outras tais seqüências descritas neste documentosão contempladas (onde "derivada" indica que uma seqüência é idêntica oumodificada a partir de uma outra seqüência).

Em uma modalidade, o ácido nucléico difere (por exemplo, diferepor substituição, inserção, ou remoção) daquele das seqüênciasproporcionadas (por exemplo, como se segue: por pelo menos um, porémmenos do que 10, 20, 30, ou 40 nucleotídeos; pelo menos um, porém menosdo que 1%, 5%, 10% ou 20% dos nucleotídeos no ácido nucléico exposto).Se necessário para esta análise, as seqüências devem ser alinhadas para ahomologia máxima. As seqüências em "laço" a partir de remoções ouinserções, ou combinações inadequadas, são consideradas diferenças. Adiferença pode ser em (um) nucleotídeo(s) codificando (um) resíduo(s) nãoessencial(is), ou a diferença pode ser (uma) substituição(ões)conservativa(s).

A descrição também proporciona constructos de ácidosnucléicos na forma de plasmídios, vetores, cassetes de transcrição ouexpressão, que compreendem pelo menos um ácido nucléico como descritoneste documento.

A descrição adicionalmente proporciona uma célula hospedeiraque compreende pelo menos um constructo de ácido nucléico descrita nestedocumento.

Os métodos de preparar a(s) proteína(s) codificada(s) a partirdo(s) ácido(s) nucléico(s) compreendendo a seqüência descrita nestedocumento são também proporcionados. O método compreende cultivar ascélulas hospedeiras sob condições apropriadas, de modo que elasexpressem a proteína a partir do ácido nucléico. Seguindo a expressão e aprodução, o domínio Vh ou Vl, ou o membro de ligação específico, pode serisolado e/ou purificado usando qualquer técnica adequada, então usadoconforme apropriado. O método pode também incluir as etapas de fundir umácido nucléico codificando um scFv com ácidos nucléicos codificando umaporção de Fc de um anticorpo e expressar o ácido nucléico fundido em umacélula. O método pode também incluir uma etapa de mutação retrógrada.Os fragmentos de ligação a antígenos, os domínios Vh e/ou VL, eas moléculas de ácidos nucléicos de codificação e os vetores podem serisolados e/ou purificados a partir de seu ambiente natural, na formasubstancialmente pura ou homogênea, ou, no caso do ácido nucléico,isentos ou substancialmente isentos de ácido nucléico ou genes de origemdiferente da seqüência que codifica um polipeptídeo com a função requerida.

Os sistemas para clonar e expressar os polipeptídeos em umavariedade de células hospedeiras são conhecidos na técnica. As célulasadequadas para produzir os anticorpos são descritas, por exemplo, emFernandez et al. (1999) Gene Expression Systems, Academic Press, eds.Em resumo, as células hospedeiras adequadas incluem as células demamíferos, as células de insetos, as células de plantas, as células deleveduras, ou as células procarióticas, por exemplo, E. coli. As células demamíferos disponíveis na técnica para a expressão heteróloga dospolipeptídeos incluem as linhagens celulares linfocíticas (por exemplo, NOS),as células HEK293, as células do ovário de hamster chinês (CHO), ascélulas COS, as células HeLa, as células do rim de hamster recém-nascido,as células de oócitos, e as células de um animal transgênico, por exemplo, acélula epitelial mamária. Em uma modalidade, os anticorpos GIL01, GIL16,GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04,368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, e356A11 são expressos nas células HEK293 ou CHO. Em uma outramodalidade, uma seleção de anticorpos escolhidos a partir de 365A11,354A08, 087B03, e 368D04 é expressa nas células HEK293 ou CHO. Emoutras modalidades, os ácidos nucléicos codificando os anticorpos dainvenção são colocados sob o controle de um promotor específico paratecido (por exemplo, um promotor específico mamário) e os anticorpos sãoproduzidos em animais transgênicos. Por exemplo, os anticorpos sãosecretados no leite do animal transgênico, tal como uma vaca, porco, cavalo,ovelha, cabra ou rodente transgênico.

Os vetores adequados podem ser escolhidos ou construídospara conter seqüências reguladoras apropriadas, incluindo as seqüênciaspromotoras, as seqüências terminadoras, as seqüências de poliadenilação,as seqüências reforçadoras, os genes marcadores, e outras seqüências. Osvetores podem também conter um plasmídio ou cadeia principal viral.Quanto a detalhes, ver Sambrook et al., Molecular Cloning: A LaboratoryManual, 2â ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989). Muitas técnicasestabelecidas, usadas com os vetores, incluindo a manipulação, apreparação, a mutagênese, o seqüenciamento, e a transfecção de DNA, sãodescritas em Current Protocols in Molecular Biology, Segunda Edição,Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons (1992).

Um aspecto adicional da descrição proporciona um método deintroduzir o ácido nucléico em uma célula hospedeira. Para as célulaseucarióticas, as técnicas adequadas de transfecção podem incluir o fosfatode cálcio, DEAE-Dextrana, eletroporação, transfecção mediada porlipossomo, e transdução usando retrovírus ou outros vírus, por exemplo,vacínia ou baculovírus. Para as células bacterianas, as técnicas adequadaspodem incluir a transformação com cloreto de cálcio, a eletroporação, e atransfecção usando bacteriófago. A introdução de DNA pode ser seguida porum método de seleção (por exemplo, resistência ao fármaco) paraselecionar as células que contêm o ácido nucléico.

IV. Usos dos Anticorpos Anti-IL-22

Os anticorpos anti-IL-22 que atuam como antagonistas para a IL-22 podem ser usados para regular pelo menos uma resposta imune mediadapela IL-22, tal como atuando sobre as células epiteliais no tecido sólido oumodulando indiretamente a jusante as respostas imunes, tal comobloqueando a expansão dos subgrupos de células T, incluindo, por exemplo,as células T TH17. Em uma modalidade, os anticorpos da invenção sãousados em um método para regular uma resposta imune, o métodocompreendendo contatar a IL-22 com um anticorpo da invenção, com issoregulando a resposta imune. Em uma modalidade, a resposta imunecompreende a proliferação da célula, a atividade citolítica, a secreção decitocina, ou a secreção de quimiocina.

Desse modo, os anticorpos da invenção podem ser usados paradireta ou indiretamente inibir a atividade (por exemplo, a proliferação, adiferenciação, e/ou a sobrevivência) de uma célula imune ou hematopoética(por exemplo, uma célula de linhagem mielóide, linfóide, ou eritróide, ou assuas células precursoras), e, assim, podem ser usados para tratar umavariedade de distúrbios imunes e distúrbios hiperproliferativos. Os exemplosnão-limitativos de distúrbios imunes que podem ser tratados incluem, porémnão estão limitados aos distúrbios auto-imunes, por exemplo, artrite(incluindo a artrite reumatóide, a artrite reumatóide juvenil, a osteoartrite, aartrite psoriática, a artrite associada com lúpus ou a espondilite anquilosante),esclerodermia, lúpus eritematoso sistêmico, HIV, síndrome de Sjogren,vasculite, esclerose múltipla, tireoidite auto-imune, dermatite (incluindo adermatite atópica e a dermatite eczematosa), miastenia grave, doençainflamatória do intestino (IBD), doença de Crohn, colite, diabete melito (tipoI); condições inflamatórias da, por exemplo, pele (por exemplo, psoríase),sistema cardiovascular (por exemplo, aterosclerose), sistema nervoso (porexemplo, doença de Alzheimer), fígado (por exemplo, hepatite), rim (porexemplo, nefrite) e pâncreas (por exemplo, pancreatite); distúrbioscardiovasculares, por exemplo, distúrbios metabólicos de colesterol, lesãopor radical livre de oxigênio, isquemia; distúrbios associados comcicatrização da ferida; distúrbios respiratórios, por exemplo, asma e COPD(por exemplo, fibrose cística); condições inflamatórias agudas (por exemplo,endotoxemia, sepse e septicemia, síndrome do choque tóxico e doençainfecciosa); rejeição ao transplante e alergia. Em uma modalidade, odistúrbio associado com a IL-22 é um distúrbio artrítico, por exemplo, umdistúrbio escolhido a partir de uma ou mais de artrite reumatóide, artritereumatóide juvenil, osteoartrite, artrite psoriática, ou espondiliteanquilosante; um distúrbio respiratório (por exemplo, asma, doençapulmonar obstrutiva crônica (COPD); ou uma condição inflamatória da, porexemplo, pele (por exemplo, psoríase), sistema cardiovascular (por exemplo,ate roscle rose), sistema nervoso (por exemplo, doença de Alzheimer), fígado(por exemplo, hepatite), rim (por exemplo, nefrite), pâncreas (por exemplo,pancreatite), e órgãos gastrointestinais, por exemplo, colite, doença deCrohn e IBD; doenças inflamatórias agudas, por exemplo, endotoxemia,sepse e septicemia, síndrome do choque tóxico e doença infecciosa;insuficiência múltipla dos órgãos; doença respiratória (ARD); amiloidose;nefropatias, tais como glomeruloesclerose, neuropatia membranosa,arteriosclerose renal, glomerulonefrite, doenças fibroproliferativas do rim,bem como outras disfunções do rim e tumores renais. Por causa dos efeitosda IL-22 sobre os epitélios, os anticorpos anti-IL-22 podem ser usados paratratar os cânceres epiteliais, por exemplo, o carcinoma, o melanoma e outros.Quanto a uma descrição de um fundamento para a inibição da IL-22 nestese em outros estados de doenças, ver o WO 03/083062 (páginas 58-75).

A esclerose múltipla é uma doença do sistema nervoso centralque é caracterizada por inflamação e perda das bainhas de mielina - omaterial graxo que isola os nervos e é necessário para a função adequadado nervo. A inflamação que resulta de uma resposta imune que édependente da IL-22 pode ser tratada com os anticorpos e as composiçõesdesta invenção. No modelo de camundongo de encefalite auto-imuneexperimental (EAE) para a esclerose múltipla (Tuohy et al. (J. Immunol.(1988) 141: 1126-1130), Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401), eTraugott (Cell Immunol. (1989) 119: 114-129), o tratamento doscamundongos com injeções de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92,097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05,375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11 antes (econtinuamente) da indução da EAE pode retardar profundamente o início dadoença. Este pode servir como um modelo para confirmar o uso do anticorpoda invenção. Os anticorpos desta invenção podem ser similarmente usadospara tratar a esclerose múltipla em seres humanos.

A artrite é uma doença caracterizada por inflamação nasarticulações. A Artrite Reumatóide (RA) é a forma mais freqüente de artrite,envolvendo a inflamação do tecido conjuntivo e da membrana sinovial, umamembrana que reveste a articulação. A membrana sinovial inflamadafreqüentemente infiltra-se na articulação e danifica a cartilagem daarticulação e o osso. A proteína IL-22 e IL-22R e/ou o transcrito está associ-ado com ambas as doenças humanas. Nas biopsias sinoviais de RA1 a pro-teína IL-22 é detectada nos fibroblastos sinoviais Vimentina+ e em algunsmacrófagos CD68+, enquanto que o IL-22R é detectado nos fibroblastos si-noviais. O tratamento dos fibroblastos sinoviais com a IL-22 induz a produ-ção da proteína quimioatraente de monócito 1, a MCP-1, bem como a ativi-dade geral metabólica (lkeuchi, H., et al. (2005) Arthritis fíheum. 52:1037-46).Os inibidores da IL-22 melhoram os sintomas de artrite reumatóide (WO2005/000897 A2; Patente U.S. N2 6.939.545). A secreção aumentada dascitocinas e das quimiocinas inflamatórias, e mais importantemente, a doençaaumentada resultante das respostas imunes que são dependentes da IL-22,podem ser tratadas com os anticorpos desta invenção. Similarmente, osanticorpos e as composições desta invenção podem ser usados para tratar aRA ou outras doenças artríticas em seres humanos.

A rejeição ao transplante é o fenômeno imunológico onde ostecidos de um doador são especificamente "atacados" pelas células imunesdo hospedeiro. As células "de ataque" de princípio são as células T, cujosreceptores das células T reconhecem as moléculas do MHC do doador como"estranhas". Este reconhecimento ativa as células T, que proliferam esecretam uma variedade de citocinas e proteínas citolíticas que, no fim,destroem o transplante. Os modelos de MLR e transplante foram descritospor Current Protocols in Immunology, Segunda Edição, Coligan et al. eds.,John Wiley & Sons, 1994; Kasaian et al. (Immunity (2002) 16: 559-569);Fulmer et al. (Am. J. Anat. (1963) 113: 273-285), e Lenschow et al. (Science(1992) 257: 789-792). Os anticorpos e as composições desta invençãopodem ser usados para reduzir a MLR e tratar a rejeição ao transplante edoenças relacionadas (por exemplo, a doença do enxerto versushospedeiro) em seres humanos que são dependentes da IL-22.

Os anticorpos desta invenção podem também ser usados paratratar os distúrbios hiperproliferativos associados com a atividade anormaldas células sensíveis a IL-22 e das células sensíveis aos IL-22R/IL-10R2,administrando os anticorpos em uma quantidade suficiente para inibir oureduzir a hiperproliferação das células sensíveis a IL-22 e/ou IL-22R e/ou IL-10R2 em um paciente e deixando que os anticorpos tratem ou impeçam adoença. A expressão de IL-22 e IL-22R é constitutiva sobre as célulasepiteliais em diversos tecidos, incluindo, porém não-limitados ao pâncreas,pulmão, pele, intestino, fígado, rim (Kotenko, S.V. et al. (2001) J. Bioi Chem.276:2725-32; Xie, M.H. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:31335-9; Wolk, K. etal. (2004) Immunity 21:241 -54). Além disso, o complexo de receptor de IL-22é também expresso sobre a superfície de fibroblastos a partir da articulaçãodoente e do intestino normal (Ikeuchi, H. et al. (2005) Arthritis Rheum.52:1037-46; Andoh, A. et al. (2005) Gastroenterology 129:969-84). Osderivados neoplásticos destes tipos de células podem ser hipersensíveis aIL-22, modulando a capacidade destas células de sobreviver no organismo.Portanto, os anticorpos para IL-22 podem ser usados para inibir aprogressão de tais neoplasmas, por exemplo, os carcinomas de célulasescamosas, os carcinomas de células basais, os papilomas e os carcinomasde células transicionais, os adenomas, o adenocarcinoma, a Iinite plástica, oinsulinoma, o glucagonoma, o gastrinoma, o vipoma, o colangiocarcinoma, ocarcinoma hepatocelular, o carcinoma adenóide cístico, o tumor carcinóidedo apêndice, o prolactinoma, o oncocitoma, o adenoma de células de hurthle,o carcinoma de células renais, o tumor de Grawitz, os adenomas endócrinosmúltiplos, o adenoma endometróide, os neoplasmas dos apêndices anexos eda pele, os neoplasmas mucoepidermóides, os neoplasmas císticos,mucinosos e serosos, o cistadenoma, o pseudomixoma do peritônio, osneoplasmas ductais, Iobulares e medulares, os neoplasmas de célulasacinares, os neoplasmas epiteliais complexos, o tumor de Warthin, o timoma,os neoplasmas gonadais especializados, o tumor do cordão sexual-estromal,o tecoma, o tumor das células granulosas, o arrenoblastoma, o tumor decélulas de sertoli-leydig, o paraganglioma, o feocromocitoma, o tumor doglomo, o nevo melanocítico, o melanoma maligno, o melanoma, o melanomanodular, o nevo displásico, o Ientigo maligno, o melanoma superficialdisseminante, ou o melanoma Ientiginoso das extremidades. Embora oreceptor de IL-22 não seja detectado sobre as células imunes nunca antestratadas ou ativadas ex vivo, a desregulação do receptor poderia tornar taiscélulas neoplásticas derivadas sensíveis a IL-22 e, assim, a inibição por umanticorpo para IL-22.

Em um outro aspecto, a invenção caracteriza-se por um métodode diminuir, inibir ou reduzir uma resposta de fase aguda em um paciente. Ométodo inclui administrar ao paciente um anticorpo anti-IL-22 ou seufragmento, conforme descrito neste documento, em uma quantidadesuficiente para diminuir, inibir ou reduzir a resposta de fase aguda nopaciente. Em uma modalidade, o paciente é um mamífero, por exemplo, umser humano sofrendo de um distúrbio associado com a IL-22, conformedescrito neste documento, incluindo, por exemplo, os distúrbios respiratórios,os distúrbios inflamatórios e os distúrbios auto-imunes. Em uma modalidade,o agente que liga a IL-22 é administrado localmente, por exemplo,topicamente, subcutaneamente, ou outras administrações que não sejam nacirculação geral.

a IL-22 é acreditada exercer os seus efeitos inflamatórioslocalmente, por exemplo, atuando (por exemplo, diretamente atuando) comoum modulador ou um regulador da inflação do tecido, em oposição aosefeitos sistêmicos diretos. Desse modo, a inibição da atividade da IL-22usando, por exemplo, um anticorpo anti-IL-22 da presente invenção podeproporcionar um agente antiinflamatório mais efetivo, específico para otecido (por exemplo, menos tóxico), do que as modalidades antiinflamatóriassistêmicas. Além disso, a inibição da IL-22 local usando, por exemplo, umanticorpo anti-IL-22 ou seu fragmento, descrito neste documento, podeproporcionar um candidato útil para a combinação com as modalidadesantiinflamatórias sistêmicas.

V. Terapia de Combinação

Em uma modalidade, uma composição farmacêuticacompreendendo pelo menos um anticorpo anti-IL-22 e pelo menos umagente terapêutico é administrada na terapia de combinação. A terapia é útilpara tratar condições ou distúrbios patológicos, tais como os distúrbiosimunes e inflamatórios. O termo "em combinação", neste contexto, significaque a composição de anticorpo e o agente terapêutico são dadossubstancialmente ao mesmo tempo, simultânea ou seqüencialmente. Emuma modalidade, se dado seqüencialmente, no início da administração dosegundo composto, o primeiro dos dois compostos é ainda detectável emconcentrações efetivas no local do tratamento. Em uma outra modalidade,se dado seqüencialmente, no início da administração do segundo composto,o primeiro dos dois compostos não é detectável em concentrações efetivasno local do tratamento.

Por exemplo, a terapia de combinação pode incluir pelo menosum anticorpo anti-IL-22 co-formulado com, e/ou co-administrado com, pelomenos um agente terapêutico adicional. Os agentes adicionais podem incluirpelo menos um inibidor da citocina, inibidor do fator do crescimento,imunossupressor, agente antiinflamatório, inibidor metabólico, inibidor deenzima, agente citotóxico, e agente citostático, conforme descrito em maisdetalhe abaixo. Em uma modalidade, o agente adicional é um tratamentopadrão para artrite, incluindo, porém não-limitado aos agentesantiinflamatórios não esteroidais (NSAIDs); corticosteróides, incluindoprednisolona, prednisona, cortisona, e triancinolona; e fármacos anti-reumáticos modificadores de doença (DMARDs), tais como metotrexato,hidroxicloroquina (PIaqueniI) e sulfasalazina, Ieflunomida (Arava), inibidoresdo fator de necrose tumoral, incluindo etanercept (Enbrel), infliximab(Remicade) (com ou sem metotrexato), e adalimumab (Humira), anticorpoanti-CD20 (por exemplo, Rituxano), receptor de interleucina-1 solúvel, talcomo anaquinra (Kineret), ouro, minociclina (Minocina), penicilamina, eagentes citotóxicos, incluindo azatioprina, ciclofosfamida, e ciclosporina. Taisterapias de combinação podem utilizar vantajosamente dosagens menoresdos agentes terapêuticos administrados, assim evitando possíveistoxicidades ou complicações associadas com as diversas monoterapias.Ademais, os agentes terapêuticos adicionais descritos neste documentoatuam sobre as vias, além da, ou que diferem da, via de IL-22/IL-22R/IL-10R2 e, assim, são esperados aumentarem e/ou causar a sinergia com osefeitos dos anticorpos anti-IL-22.

Os agentes terapêuticos usados em combinação com osanticorpos anti-IL-22 podem ser aqueles agentes que interferem emdiferentes estágios na resposta inflamatória auto-imune e subseqüente. Emuma modalidade, pelo menos um anticorpo anti-IL-22 descrito nestedocumento pode ser co-formulado com, e/ou co-administrado com, pelomenos um antagonista de citocina e/ou do fator do crescimento. Osantagonistas podem incluir os receptores solúveis, os inibidores depeptídeos, as pequenas moléculas, as fusões de ligantes, os anticorpos e osseus fragmentos de ligação (que ligam as citocinas ou os fatores docrescimento ou os seus receptores ou outras moléculas da superfíciecelular), e as "citocinas antiinflamatórias" e seus agonistas.

Os exemplos não-limitativos dos agentes que podem ser usadosem combinação com os anticorpos anti-IL-22 descritos neste documentoincluem, porém não estão limitados aos antagonistas de pelo menos umainterleucina (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12 (ou uma de suassubunidades p35 ou p40), IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A-F (incluindo os seusheterodímeros, por exemplo, o heterodímero de IL-17A/IL-17F), IL-18, IL-19,IL-20, IL-21, e IL-23 (ou uma de suas subunidades p19 ou p40)); citocina(por exemplo, TNFD, LT, EMAP-II1 e GM-CSF); e fator do crescimento (porexemplo, FGF e PDGF). Os agentes podem também incluir, porém não-limitados aos, antagonistas de pelo menos um receptor para umainterleucina, citocina, e fator do crescimento. Os anticorpos anti-IL-22 podemtambém ser combinados com os inibidores (por exemplo, os anticorpos ouos seus fragmentos) para as moléculas da superfície celular, tais como CD2,CD3, CD4, CD8, CD20 (por exemplo Rituxano), CD25, CD28, CD30, CD40,CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, ou seus ligantes (porexemplo, CD154 (gp39, CD40L)), ou LFA-1/ICAM-1 e VLA-4/VCAM-1(Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med Res Rev 22(2): 146-67)). Em certasmodalidades, os antagonistas que podem ser usados em combinação comos anticorpos anti-IL-22 descritos neste documento podem incluir osantagonistas de IL-I, IL-12 (ou uma de suas subunidades p35 ou p40),TNFD, IL-15, IL-17A-F (incluindo os seus heterodímeros, por exemplo, oheterodímero de IL-17A/IL-17F), IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, e IL-23 (ou umade suas subunidades p19 ou p40), e os seus receptores.

Os exemplos destes agentes incluem os antagonistas de IL-12(tais como os anticorpos que ligam a IL-12 (ver, por exemplo, o WO00/56772) ou uma de suas subunidades p35 ou p40); os inibidores doreceptor de IL-12 (tais como os anticorpos para o receptor de IL-12); e oreceptor de IL-12 solúvel e os seus fragmentos. Os exemplos deantagonistas de IL-15 incluem os anticorpos contra a IL-15 ou o seu receptor,os fragmentos solúveis do receptor de IL-15, e as proteínas de ligação a IL-15. Os exemplos de antagonistas de IL-18 incluem os anticorpos para IL-12,os fragmentos solúveis do receptor de IL-18, e as proteínas de ligação a IL-18 (IL-18BP, Mallet et al. (2001) Circ. Res. 28). Os exemplos deantagonistas de IL-1 incluem os inibidores da Enzima Conversora deInterleucina-1 (ICE) (tais como o Vx740), os antagonistas de IL-1 (porexemplo, IL-1 RA (ANIKINRA, AMGEN)), slL-1 Rll (Immunex), e os anticorposanti-receptor de IL-1.

Em uma modalidade, a terapia de combinação inclui pelo menosum anticorpo anti-IL-22 co-formulado com, e/ou co-administrado com umantagonista, tal como um anticorpo ou seu fragmento de ligação a antígenoou um receptor solúvel, de pelo menos um de IL-17A, IL-17F, heterodímerode IL-17A/IL-17F, ou IL-23 (ou uma de suas subunidades p19 ou p40).

Os exemplos de antagonistas de TNF incluem os anticorpospara TNF (por exemplo, o THFa humano), tais como D2E7 (anticorpo anti-TNFD humano, U.S. 6.258.562, Humira®, BASF); CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (anticorpos anti-TNFD humanizados, Celltech/Pharmacia); cA2(anticorpo anti-TNFD quimérico, Remicade®, Centocor); e fragmentos doanticorpo anti-TNF (por exemplo, CPD870). Os outros exemplos incluem osfragmentos e os derivados do receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55 oup75 humano), tais como p55 kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptor deTNF-IgG de 55 kD, Lenercept®) e 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusão dereceptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®, Immunex, ver, por exemplo, Arthritis& Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A).Os exemplos adicionais incluem os antagonistas de enzimas (por exemplo,os inibidores da enzima conversora de TNFa (TACE)1 tais como o derivadode ácido alfa-sulfonil hidroxâmico (WO 01/55112), ou o inibidor de N-hidroxiformamida (GW 3333, -005, ou -022)) e a TNF-bp/s-TNFR (proteínade ligação ao TNF solúvel, ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996)Vol. 39, N2 9 (suplemento), S284; e Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.(1995) Vol. 268, págs. 37-42). Os antagonistas de TNF podem serfragmentos e derivados do receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55 oup75 humano), tais como 75 kdTNFR-lgG; e inibidores da enzima conversorade TNFa (TACE).

Em outras modalidades, os anticorpos anti-IL-22 descritos nestedocumento podem ser administrados em combinação com pelo menos umdos seguintes: os antagonistas de IL-13, tais como os receptores de IL-13solúveis e/ou os anticorpos anti-IL-13; e os antagonistas de IL-2, tais comoas proteínas de fusão de IL-2 (por exemplo, DAB 486-IL-2 e/ou DAB 389-IL-2, Seragen, ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223) eos anticorpos anti-IL-2R (por exemplo, anti-Tac (anticorpo humanizado,Protein Design Labs, ver Câncer Res. Mar de 1990 1 ;50(5):1495-502)). Umaoutra combinação inclui os anticorpos anti-IL-22 em combinação cominibidores anti-CD4 não redutores, tais como IDEC-CE9.1/SB 210396(anticorpo anti-CD4, IDEC/SmithKline). Ainda outras combinações incluemos anticorpos anti-IL-22 com antagonistas (tais como anticorpos, receptoressolúveis, ou Iigantes antagonísticos) de moléculas co-estimuladoras, taiscomo CD80 (B7.1) e CD86 (B7.2); ICOSL, ICOS, CD28, e CTLA4 (porexemplo., CTLA4-lg); Iigantes de glicoproteína de P-selectina (PSGL); ecitocinas antiinflamatórias e seus agonistas (por exemplo, anticorpos). Ascitocinas antiinflamatórias podem incluir a IL-4 (DNAX/Schering); a IL-10(SCH 52000, IL-10 recombinante, DNAX/Schering); a IL-13; e o TGF.

Em outras modalidades, pelo menos um anticorpo anti-IL-22pode ser co-formulado com, e/ou co-administrado com, pelo menos umfármaco antiinflamatório, imunossupressor, inibidor metabólico, e inibidorenzimático. Os exemplos não-limitativos dos fármacos ou dos inibidores quepodem ser usados em combinação com os antagonistas de IL-22 descritosneste documento incluem, porém não estão limitados a pelo menos um de:fármaco antiinflamatório não esteroidal (NSAID) (tal como ibuprofeno,Tenidap (ver, por exemplo., Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N2 9(suplemento), S280)), Naproxeno (ver, por exemplo, Neuro Report (1996)Vol. 7, págs. 1209-1213), Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, elndometacina); Sulfasalazina (ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39, Ns 9 (suplemento), S281); corticosteróide (tal comoprednisolona); fármaco antiinflamatório supressor de citocina (CSAID); e uminibidor da biossíntese de nucleotídeos (tal como um inibidor da biossínteseda purina (por exemplo, antagonista de folato, tal como metotrexato) e uminibidor da biossíntese da pirimidina (por exemplo, um inibidor dadiidroorotato desidrogenase (DHODH), tal como a Ieflunomida (ver, porexemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N2 9 (suplemento), S131;Inflammation Research (1996) Vol. 45, págs. 103-107)). Os agentesterapêuticos para uso em combinação com os antagonistas de IL-22/IL-22Rou IL-22/IL-10R2 podem incluir os NSAIDs, os CSAIDs, os inibidores daDHODH (tais como a leflunomida), e os antagonistas de folato (tais como ometotrexato).

Os exemplos de inibidores adicionais incluem pelo menos umde: corticosteróide (oral, inalado e injeção local); imunossupressor (tal comociclosporina e tacrolimus (FK-506)); um inibidor de mTOR (tal como sirolimus(rapamicina) ou um derivado de rapamicina (por exemplo, derivado de ésterde rapamicina, tal como CCI-779 (Elit. L. (2002) Current Opinion Investig.Drugs 3(8): 1249-53; Huang, S. et al. (2002) Current Opinion Investig. Drugs3(2):295-304))); um agente que interfere com a sinalização de citocinas pró-inflamatórias, tal como TNFa e IL-1 (por exemplo, IRAK, NIK, IKK, p38 ouum inibidor da MAP cinase); um inibidor da C0X2 (por exemplo., celecoxib eas suas variantes (MK-966), ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996)Vol. 39, N2 9 (suplemento), S81); um inibidor de fosfodiesterase (tal comoR973401, ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N2 9(suplemento), S282)); um inibidor da fosfolipase (por exemplo, um inibidor dafosfolipase citosólica 2 (cPLA2), tal como os análogos de trifIuormetil cetona(U.S. 6.350.892)); um inibidor do fator de crescimento de células endoteliaisvasculares (VEGF); um inibidor do receptor do VEGF; e um inibidor daangiogênese. Os agentes terapêuticos para uso em combinação com osanticorpos anti-IL-22 podem incluir os imunossupressores (tais como aciclosporina e o tacrolimus (FK-506)); e os inibidores de mTOR (tais como osirolimus (rapamicina) ou os derivados de rapamicina (por exemplo, osderivados de éster de rapamicina, tais como CCI-779)); os inibidores daC0X2 (tais como o celecoxib e as suas variantes); e os inibidores dafosfolipase (tais como os inibidores da fosfolipase citosólica 2 (cPLA2) (porexemplo, os análogos de trifluormetil cetona)).

Os exemplos de agentes terapêuticos que podem ser co-administrados e/ou co-formulados com pelo menos um anticorpo anti-IL-22incluem, porém não estão limitados a pelo menos um de: antagonistas deTNF (tais como os anticorpos anti-TNF); fragmentos solúveis de receptoresde TNF (por exemplo, p55 e p75 humano) e seus derivados (tais como p55kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptor de TNF-IgG de 55 kD,Lenercept®) e 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptor de TNF-IgG de75 kD, Enbrel®)); antagonistas de enzimas de TNF (tais como os inibidoresda TACE); antagonistas de IL-12 (ou uma de suas subunidades p35 ou p40),IL-15, IL-17A-F (incluindo os seus heterodímeros, por exemplo, oheterodímero de IL-17A/IL-17F), IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, e IL-23 (ouuma de suas subunidades p19 ou p40); agentes redutores de células T ecélulas B (tais como os anticorpos anti-CD4 ou anti-CD22); inibidores dasmoléculas pequenas (tais como o metotrexato e a leflunomida); sirolimus(rapamicina) e seus análogos (tais como CCI-779); inibidores de Cox-2 ecPLA2; inibidores de p38, TPL-2, Mk-2 e NFDB; RAGE e RAGE solúvel;inibidores de P-selectina e PSGL-1 (tais como os anticorpos para, e osinibidores das moléculas pequenas); e antagonistas de receptor deestrogênio beta (ERB), e antagonistas de ERB-NFkb. Os agentesterapêuticos que podem ser co-administrados e/ou co-formulados com pelomenos um anticorpo anti-IL-22 podem incluir pelo menos um de: umfragmento solúvel de um receptor de TNF (por exemplo, p55 ou p75humano), tal como 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®); metotrexato; leflunomida; e sirolimus (rapamicina) eseus análogos (tais como CCI-779).

Os anticorpos anti-IL-22 descritos neste documento podem serusados em combinação com outros agentes terapêuticos para tratardistúrbios imunes específicos, conforme discutido em mais detalhe abaixo.

Os exemplos não-limitativos de agentes para tratar os distúrbiosartríticos (por exemplo, artrite reumatóide, artrite inflamatória, artritereumatóide, artrite reumatóide juvenil, osteoartrite e artrite psoriática), comos quais um anticorpo anti-IL-22 pode ser combinado, incluem pelo menosum dos seguintes: antagonistas de TNF (tais como os anticorpos anti-TNF);fragmentos solúveis de receptores de TNF (por exemplo, p55 e p75 humano)e seus derivados (tais como p55 kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptorde TNF-IgG de 55 kD, Lenercept®) e 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusão dereceptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®)); antagonistas de enzimas de TNF(tais como os inibidores da TACE); antagonistas de IL-12 (ou uma de suassubunidades p35 ou p40), IL-15, IL-17A-F (incluindo os seus heterodímeros,por exemplo, o heterodímero de IL-17A/IL-17F), IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, e IL-23 (ou uma de suas subunidades p19 ou p40) e IL-24; agentesredutores de células T e células B (tais como os anticorpos anti-CD4, anti-CD20, ou anti-CD22); inibidores das moléculas pequenas (tais como ometotrexato e a leflunomida); sirolimus (rapamicina) e seus análogos (taiscomo CCI-779); inibidores de Cox-2 e cPLA2; NASAIDs; inibidores de p38,TPL-2, Mk-2 e NFDB; RAGE ou RAGE solúvel; inibidores de P-selectina ouPSGL-1 (tais como os inibidores das, e os anticorpos para as, moléculaspequenas); e antagonistas de receptor de estrogênio beta (ERB), eantagonistas de ERB-NFkb. Os agentes terapêuticos que podem ser co-administrados e/ou co-formulados com pelo menos um de antagonista de IL-22/IL-22R/IL-10R2 podem incluir pelo menos um de: um fragmento solúvelde um receptor de TNF (por exemplo, p55 ou p75 humano), tal como 75kdTNFR-lgG (proteína de fusão de receptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®);metotrexato; leflunomida; e sirolimus (rapamicina) ou um seu análogo (porexemplo, CCI-779).

Os exemplos não-limitativos de agentes para tratar a esclerosemúltipla, com os quais o anticorpo anti-IL-22 pode ser combinado, incluem ointerferon-β, por exemplo, IFNp-Ia e IFNp-Ib), copaxona, corticosteróides,inibidores da IL-1, inibidores do TNF, anticorpos para o Iigante de CD40,anticorpos para CD80, e antagonistas de IL-12, incluindo os anticorpos queligam a IL-12 (ou uma de suas subunidades p35 ou p40).

Os exemplos não-limitativos de agentes para tratar a doençainflamatória do intestino ou a doença de Crohn, com os quais um anticorpoanti-IL-22 pode ser combinado, incluem a budenosida; o fator docrescimento epidérmico; os corticosteróides; a ciclosporina; a sulfasalazina;os aminossalicilatos; a 6-mercaptopurina; a azatioprina; o metronidazol; osinibidores da lipoxigenase; a mesalamina; a olsalazina; a balsalazida; osantioxidantes; os inibidores do tromboxano; os antagonistas do receptor deIL-I; os anticorpos monoclonais anti-IL-1; os anticorpos monoclonais anti-IL-6; os fatores do crescimento; os inibidores da elastase; os compostos depiridinil-imidazol; os antagonistas de TNF, conforme descritos aqui; a IL-4, aIL-10, a IL-13, e/ou o TGFp ou os seus agonistas (por exemplo, osanticorpos agonistas); a IL-11; os pró-medicamentos conjugados àglicuronída ou ao dextrano de prednisolona, dexametasona ou budesonida;os oligodesoxinucleotídeos de fosforotioato sem sentido de ICAM-1 (ISIS2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); o receptor do complemento solúvel 1(TP10; T Cell Sciences, Inc.); a mesalazina de liberação lenta; ometotrexato; os antagonistas do Fator Ativador de Plaquetas (PAF); aciprofloxacina; e a lignocaína.

Em outras modalidades, um anticorpo anti-IL-22 pode ser usadoem combinação com pelo menos um anticorpo dirigido em outros alvosenvolvidos na regulação das respostas imunes, por exemplo, rejeição aotransplante ou doença do enxerto versus hospedeiro. Os exemplos não-limitativos de agentes para tratar as respostas imunes, com os quais umantagonista de IL-22/IL-22R/IL10R2 da invenção pode ser combinado,incluem os seguintes: anticorpos contra as moléculas da superfície celular,incluindo, porém não-limitados ao CD25 (receptor de IL-2 □), CD11a (LFA-1),CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), ousuas combinações. Em uma outra modalidade, um anticorpo anti-IL-22 éusado em combinação com pelo menos um agente imunossupressor geral,tal como a ciclosporina A ou o FK506.

Um outro aspecto da presente invenção, assim, refere-se aoskits para realizar a administração combinada dos anticorpos anti-IL-22 comos outros agentes terapêuticos. Em uma modalidade, o kit compreende pelomenos um anticorpo anti-IL-22 formulado em um veículo farmacêutico, epelo menos um agente terapêutico, formulado conforme apropriado em umaou mais preparações farmacêuticas separadas.

VI. Usos Diagnósticos

Os anticorpos podem também ser usados para detectar apresença de IL-22 nas amostras biológicas. Por correlação da presença oudo nível destas proteínas com uma condição médica, alguém versado natécnica pode diagnosticar a condição médica associada. Por exemplo, a IL-22 induz alterações associadas com aquelas causadas pelas citocinasinflamatórias (tais como a IL-I e o TNFa), e os inibidores da IL-22 melhoramos sintomas de artrite reumatóide (WO 2005/000897 A2). As condiçõesmédicas ilustrativas que podem ser diagnosticadas pelos anticorpos destainvenção incluem a esclerose múltipla, a artrite reumatóide, a psoríase, adoença inflamatória do intestino, a pancreatite, e a rejeição ao transplante.

Os métodos de detecção à base de anticorpos são bastanteconhecidos na técnica, e incluem o ELISA, os radioimunoensaios, osimunoblots, as transferências Western, a citometria de fluxo, aimunofluorescência, a imunoprecipitação, e outras técnicas relacionadas. Osanticorpos podem ser proporcionados em um kit diagnóstico, que incorporapelo menos um destes procedimentos para detectar a IL-22. O kit podeconter outros componentes, embalagem, instruções, ou outro material paraauxiliar a detecção da proteína e o uso do kit.

Os anticorpos podem ser modificados com marcadoresdetectáveis, incluindo os grupos de Iigantes (por exemplo, a biotina), osfluórforos e os cromóforos, os radioisótopos, os reagentes de elétronsdensos, ou as enzimas. As enzimas são detectadas por sua atividade. Porexemplo, a peroxidase da raiz forte é detectada por sua capacidade deconverter a tetrametilbenzidina (TMB) em um pigmento azul, quantificávelcom um espectrofotômetro. Os outros pares de ligação adequados incluem abiotina e a avidina, a IgG e a proteína A, e outros pares de receptor-liganteconhecidos na técnica.

Os anticorpos podem também ser funcionalmente ligados (porexemplo, por acoplamento químico, fusão genética, associação não-covalente ou de outro modo) a pelo menos uma outra entidade molecular, talcomo um outro anticorpo (por exemplo, um anticorpo biespecífico ou ummultiespecífico), toxinas, radioisótopos, agentes citotóxicos ou citostáticos,entre outros. As outras permutações e possibilidades são aparentes paraaqueles versados comum na técnica, e elas são consideradas equivalentesdento do escopo desta invenção.

VII. Composições Farmacêuticas e Métodos de Administração

Certas modalidades da invenção incluem as composiçõescompreendendo os anticorpos descritos. As composições podem seradequadas para uso farmacêutico e administração aos pacientes. Ascomposições compreendem um anticorpo da presente invenção e umexcipiente farmacêutico. Conforme usado neste documento, o "excipientefarmacêutico" inclui os solventes, os meios de dispersão, os revestimentos,os agentes antibacterianos e antifúngicos, os agentes isotônicos eretardadores da absorção, etc., que são compatíveis com a administraçãofarmacêutica. O uso destes agentes para substâncias farmaceuticamenteativas é bastante conhecido na técnica. As composições podem tambémconter outros compostos ativos que proporcionem funções terapêuticassuplementares, adicionais, ou aumentadas. As composições farmacêuticaspodem também ser incluídas em um recipiente, pacote, ou dosador,juntamente com instruções para a administração.

Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para sercompatível com a sua via de administração pretendida. Os métodos paraefetuar a administração são conhecidos para aqueles versados na técnica.As composições farmacêuticas podem ser administradas de modo tópico ouoral, ou ser capazes de transmissão através das membranas mucosas. Osexemplos de administração de uma composição farmacêutica incluem aingestão oral ou a inalação. A administração pode também ser intravenosa,intraperitoneal, intramuscular, intracavidade, subcutânea, cutânea, outransdérmica.

As soluções ou as suspensões usadas para a aplicaçãointradérmica ou subcutânea tipicamente incluem pelo menos um dosseguintes componentes: um diluente estéril, tal como a água, a soluçãosalina, os óleos fixos, o polietileno glicol, a glicerina, o propileno glicol, ououtro solvente sintético; os agentes antibacterianos, tais como o álcoolbenzílico ou os metil parabenos; os antioxidantes, tais como o ácidoascórbico ou o bissulfito de sódio; os agentes quelantes, tais como o ácidoetilenodiaminotetracético (EDTA); os tampões, tais como o acetato, o citrato,ou o fosfato; e os agentes de tonicidade, tais como o cloreto de sódio ou adextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases. Tais preparaçõespodem ser encerradas em ampolas, seringas descartáveis, ou frascospequenos de múltiplas doses.

As soluções ou as suspensões usadas para a administraçãointravenosa incluem um veículo, tal como a solução salina fisiológica, a águabacteriostática, o Cromophor EL® (BASF, Parsippany, NJ), o etanol, ou opoliol. Em todos os casos, a composição deve ser estéril e fluida para a fácilcapacidade de aplicação por seringa. A fluidez adequada podefreqüentemente ser obtida usando Iecitina ou tensoativos. A composiçãodeve também ser estável sob as condições de manufatura e armazenagem.A prevenção de microorganismos pode ser obtida com agentesantibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol,ácido ascórbico, timerosal, etc. Em muitos casos, os agentes isotônicos(açúcar), os poliálcoois (manitol e sorbitol), ou o cloreto de sódio pode serincluído na composição. A absorção prolongada da composição pode serefetuada por adição de um agente que retarde a absorção, por exemplo, omonoestearato de alumínio e a gelatina.

As composições orais incluem um diluente inerte ou veículocomestível. A composição pode ser encerrada em gelatina ou prensada emcomprimidos. Para o propósito de administração oral, os anticorpos podemser incorporados com excipientes e colocados em comprimidos, trociscos,ou cápsulas. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis oumateriais adjuvantes podem ser incluídos na composição. Os comprimidos,os trociscos, e as cápsulas podem conter (1) um aglutinante, tal como acelulose microcristalina, a goma do tragacanto ou a gelatina; (2) umexcipiente, tal como o amido ou a lactose, (3) um agente desintegrante, talcomo o ácido algínico, o Primogel, ou o amido de milho; (4) um lubrificante,tal como o estearato de magnésio; (5) um agente de deslizamento, tal comoo dióxido de silício coloidal; ou (6) um agente adoçante ou um agentearomatizante.

a composição pode também ser administrada por uma rotatransmucosa ou transdérmica. Por exemplo, os anticorpos quecompreendem uma porção de Fc podem ser capazes de cruzar asmembranas mucosas no intestino, boca, ou pulmões (via receptores de Fc).A administração transmucosa pode ser efetuada através do uso de pastilhas,sprays nasais, inalantes, ou supositórios. A administração transdérmica podetambém ser efetuada através do uso de uma composição contendoungüentos, pomadas, géis, ou cremes conhecidos na técnica. Para aadministração transmucosa ou transdérmica, utilizam-se penetrantesapropriados para a barreira a ser permeada. Para a administração porinalação, os anticorpos são distribuídos em um spray de aerossol a partir deum recipiente ou dosador pressurizado, o qual contém um propulsor (porexemplo, líquido ou gás) ou um nebulizador.

Em certas modalidades, os anticorpos desta invenção sãopreparados com veículos para proteger os anticorpos contra a eliminaçãorápida do corpo. Os polímeros biodegradáveis (por exemplo, etileno acetatode vinila, polianidridos, poli(ácido glicólico), colágeno, poliortoésteres,poli(ácido láctico)) são freqüentemente usados. Os métodos para apreparação de tais formulações são conhecidos para aqueles versados natécnica. As suspensões lipossômicas podem ser usadas como veículosfarmaceuticamente aceitáveis também. Os Iipossomos podem serpreparados de acordo com métodos estabelecidos, conhecidos na técnica(Patente U.S. N2 4.522.811).

Os anticorpos ou as composições de anticorpos da invenção sãoadministradas em quantidades terapeuticamente efetivas, conforme descrito.As quantidades terapeuticamente efetivas podem variar com a idade, acondição, o sexo, e a gravidade da condição médica do paciente. Adosagem apropriada pode ser determinada por um médico, com base emindicações clínicas. Os anticorpos ou as composições podem ser dadascomo uma dose de bolo para maximizar os níveis circulantes de anticorpospara a maior duração de tempo. A infusão contínua pode também ser usadaapós a dose de bolo.

Conforme usado neste documento, o termo "paciente" épretendido incluir os animais humanos e não-humanos. Os pacientes podemincluir um paciente humano tendo um distúrbio caracterizado por células queexpressam a IL-22, por exemplo, uma célula de câncer ou uma célula imune.O termo "animais não-humanos" da invenção inclui todos os vertebrados,tais como os primatas não-humanos, as ovelhas, os cães, as vacas, asgalinhas, os anfíbios, os répteis, etc.

Os exemplos de faixas de dosagens que podem seradministradas a um paciente podem ser escolhidos a partir de: 1 pg/kg a 20mg/kg, 1 pg/kg a 10 mg/kg, 1 pg/kg a 1 mg/kg, 10 pg/kg a 1 mg/kg, 10 pg/kga 100 pg/kg, 100 pg/kg a 1 mg/kg, 250 pg/kg a 2 mg/kg, 250 pg/kg a 1 mg/kg,500 pg/kg a 2 mg/kg, 500 pg/kg a 1 mg/kg, 1 mg/kg a 2 mg/kg, 1 mg/kg a 5mg/kg, 5 mg/kg a 10 mg/kg, 10 mg/kg a 20 mg/kg, 15 mg/kg a 20 mg/kg , 10mg/kg a 25 mg/kg, 15 mg/kg a 25 mg/kg, 20 mg/kg a 25 mg/kg, e 20 mg/kg a30 mg/kg (ou maior). Estas dosagens podem ser administradas em um mododiário, semanal, bissemanal, mensal, ou menos freqüentemente, porexemplo, bianual, dependendo da dosagem, do método de administração,do distúrbio ou do(s) sintoma(s) a ser(em) tratado(s), e das característicasindividuais do paciente. As dosagens podem também ser administradas viainfusão contínua (tal como através de uma bomba). A dose administradapode também depender da rota de administração. Por exemplo, aadministração subcutânea pode requerer uma dosagem maior do que aadministração intravenosa.

Em certas circunstâncias, pode ser vantajoso formular ascomposições na forma de unidade de dosagem, para a facilidade deadministração e a uniformidade da dosagem. A forma de unidade dedosagem, conforme usada aqui, refere-se às unidades fisicamente distintas,adequadas para o paciente. Cada unidade de dosagem contém umaquantidade predeterminada de anticorpo, calculada para produzir um efeitoterapêutico em associação com o veículo. A unidade de dosagem dependedas caracterizadas dos anticorpos e do efeito terapêutico particular a seratingido.

a toxicidade e a eficácia terapêutica da composição podem serdeterminadas por procedimentos farmacêuticos padrões em culturas decélulas ou animais experimentais, por exemplo, determinando a LD50 (a doseletal para 50% da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente efetiva em50% da população). A razão de doses entre os efeitos tóxico e terapêutico éo índice terapêutico e ela pode ser expressa como a razão LD50ZED50. Osanticorpos que exibem grandes índices terapêuticos podem ser menostóxicos e/ou mais terapeuticamente efetivos.

Os dados obtidos a partir dos ensaios de culturas de células eestudos com animais podem ser usados para formular uma faixa dedosagens nos seres humanos. A dosagem destes compostos pode situar-sedentro da faixa de concentrações de anticorpos circulantes no sangue, queinclui uma ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variardentro desta faixa, dependendo da forma da composição de dosagemempregada e da rota de administração. Para qualquer anticorpo usado napresente invenção, a dose terapeuticamente efetiva pode ser estimadainicialmente usando ensaios de culturas de células. Uma dose pode serformulada em modelos de animais para atingir uma faixa de concentraçõescirculantes plasmáticas que inclui a IC50 (isto é, a concentração de anticorpoque atinge uma inibição semimáxima dos sintomas). Os efeitos de qualquerdosagem particular podem ser monitorados por um bioensaio adequado. Osexemplos de bioensaios adequados incluem os ensaios de replicação de5 DNA, os ensaios à base de transcrição, os ensaios de ligação ao IL-22/IL-22R, os ensaios de ligação ao IL-22/IL-10R2, IL-22/IL-22R/IL-10R2, e outrosensaios imunológicos.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Seleção dos scFv's Anti-IL-22

Seleção de GIL01 e GIL68 de Origem

O GIL01 e o GIL68 foram isolados de bibliotecas de scFv porseleção solúvel sobre a IL-22. As seleções solúveis foram realizadas usandoa IL-22 biotinilada com uma proteína marcada com His/FLAG N-terminal(bio.IL-22 H/F). A bio.IL-22 H/F foi inicialmente usada em uma concentraçãode 100 nM. Uma biblioteca de fagomídio com scFv, que é uma versãoexpandida da biblioteca de 1,38x1010 descrita (Vaughan et al., 1996), foiusada para selecionar os anticorpos específicos para a IL-22. O fago comscFv purificado (1012 unidades de transdução (tu)) foi bloqueado por 30minutos em 100 μl de 3% de MPBS (3% de pó de leite em PBS), então abio.IL-22 H/F foi adicionada e incubada na temperatura ambiente por 1 hora.O fago/antígeno foi adicionado a 50 μΙ de glóbulos magnéticos deEstreptavidina Dynal M280, os quais tinham sido bloqueados por 1 hora a37eC em 1 ml de 3% de MPBS, então incubados por uns 15 minutosadicionais, na temperatura ambiente. Os glóbulos foram capturados usandouma grade magnética e lavados 4x em 1 ml de 3% de MPBS/ 0,1% (v/v) deTween 20, seguido por três lavagens em PBS. Após a última lavagem, osglóbulos foram suspensos novamente em 100 μl de PBS e usados parainfectar 5 ml de células de E. coli TG-1 que se desenvolvemexponencialmente. As células e o fago sobre os glóbulos foram incubadospor 1 hora a 37°C (30 minutos estacionários, 30 minutos agitando a 250 rpm),então espalhados sobre placas 2TYAG. As placas foram incubadas a 30°Cdurante a noite e as colônias visualizadas no dia seguinte. As colônias foramraspadas das placas para 10 ml de caldo 2TY e o glicerol a 15% adicionadopara a armazenagem a -709C.

As culturas de estoque em glicerol da primeira rodada deseleção por "panning" foram superinfectadas com o fago auxiliador eresgatadas para dar as partículas de fago que expressam o anticorpo descFv para a segunda rodada de seleção. Uma segunda e uma terceirarodadas de seleção solúveis foram efetuadas conforme descrito acima,baixando a concentração da bio.lL-22 H/F para 50 nM.Isolamento de GIL16. GIL45. GILfiO e GIL92 de Origem

O GIL16, o GIL45, o GIL60 e o GIL92 foram isolados dasbibliotecas de scFv por uma combinação de "panning" sobre uma proteínade fusão de IL-22 e seleção solúvel sobre a bio.lL-22 H/F. As cavidades deuma placa de microtítulo foram revestidos com 10 μg/ml (PBS da Dulbecco1pH 7,4) de proteína de fusão de IL-22 humana e incubados durante a noite a4eC. As cavidades foram lavadas em PBS e bloqueados por 2 horas a 37QCem 3% de MPBS. O fago purificado (1012 tu) em 100 μΙ de 3% de MPBS foiadicionado às cavidades bloqueadas e incubada na temperatura ambientepor 1 hora. As cavidades foram lavadas 10 vezes com PBST (PBS contendo0,1% v/v de Tween20), então 10 vezes com PBS. As partículas de fagoligadas foram eluídas com 100 μΙ de solução de tripsina (0,5 μg/ml detripsina em 50 mM de Tris pH 8, 1 mM de CaCI2) por 30 minutos, a 379C. Ofago eluído foi usado para infectar 10 ml de E. coli TG1 que se desenvolveexponencialmente. As células infectadas foram desenvolvidas em caldo 2TYpor 1 hora a 37eC, conforme acima descrito, então riscadas sobre placas2TYAG e incubadas durante a noite, a 30QC. As colônias produtos foramraspadas das placas e resgatadas pelo fago conforme descrito acima. Umasegunda rodada de seleção solúvel foi efetuada, conforme descrito acima,usando a bio.lL-22 H/F a 100 nM.

Exemplo 2: O scFv Bloqueia a Ligação da IL-22 ao IL-22R

Os ensaios de inibição foram efetuados sobre os anticorpos deorigem GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, e GIL92, para identificar osanticorpos que bloqueiam ou alteram a ligação da IL-22 ao IL-22R e/ou aocomplexo de receptor de IL-22. Os extratos periplásmicos contendo scFvbrutos foram examinados quanto à capacidade de inibir a ligação da bio.IL-22 H/F a uma proteína receptora de IL-22 humana (hlL-22R). As colôniasproduzidas das seleções foram coletadas para placas de 96 cavidadescontendo 100 μΙ de 2TYAG. A produção de scFv foi induzida por adição de 1mM de IPTG às culturas que se desenvolvem exponencialmente eincubação durante a noite a 30QC. Os extratos periplásmicos forampreparados (Griffiths et al., 1993) em 50 mM de MOPS pH 7,4/ 0,5 mM deEDTA / 0,5 M de Sorbitol.

As placas de microtítulo foram revestidas com 1,25 μς/ιηΙ de umanticorpo para proteína receptora de IL-22 (em PBS) por 1,5 hora, natemperatura ambiente. As placas foram então lavadas três vezes em PBS, ebloqueadas por 1 hora na temperatura ambiente com PBS contendo 2% depó de leite (2% de MPBS). Após umas 3 lavagens adicionais, 50 μΙ de meiocondicionado de células a 25% contendo uma proteína receptora de IL-22foram adicionados a cada cavidade, e incubados durante a noite a 4SC. Nodia seguinte, 25 μΙ de amostra e 25 μΙ de bio.lL-22 H/F (54 ng/ml emPBS/0,05% de BSA/0,05% de Tween) foram adicionados às placas lavadas,e incubados por 1,5 hora na temperatura ambiente. Após 3 lavagens emPBST, a ligação da bio.IL-22 H/F foi detectada com Európio-Estreptavidina eo TRF detectado com o kit de reagente DELFIA® e a Leitora de Placas Victor2® (Perkin Elmer).

Os clones que mostraram inibição da ligação da IL-22 foramtestados novamente como scFv purificado. Tanto o ensaio de ligação a IL-22/IL-22R (descrito acima) quanto o ensaio do complexo de IL-22 / receptorde IL-22 (descrito abaixo) foram usados. As concentrações de scFv foramtituladas para estabelecer as potências dos clones, como medidas pelosvalores de IC50 do ensaio. Estes foram determinados usando o softwareGraphPad Prism e a adaptação da curva da equação logística de quatroparâmetros. Os resultados da amostra a partir do ensaio de complexo dereceptor de L-22 são mostrados na Figura 1.

Exemplo 3: Verificação da liaacão da IL-22 pelo ELISA em faqoPara estabelecer a especificidade dos scFv's pela IL-22, umELISA em fago foi efetuado usando a proteína de fusão de IL-22, a IL-22 H/Fe uma proteína não relacionada. As colônias individuais de E. coli contendoo fagomídio foram inoculadas nas placas de 96 cavidades contendo 100 μΙde meio 2TYAG por cavidade. O fago auxiliador M13K07 foi adicionado atéuma multiplicidade de infecção (moi) de 10 à cultura que se desenvolveexponencialmente e as placas incubadas 1 hora adicional a 37QC. As placasforam centrifugadas em uma centrífuga de topo de bancada a 2000 rpm por10 minutos. O sobrenadante foi removido e os precipitados de células foramsuspensos novamente em 100 μΙ de 2TYAK e incubados a 305C durante anoite, com agitação. No dia seguinte, as placas foram centrifugadas a 2000rpm por 10 minutos e 100 μΙ do sobrenadante contendo o fago a partir decada cavidade foram transferidos para uma placa de 96 cavidades nova. Asamostras de fagos foram bloqueadas em uma concentração final de 3% deMPBS por 1 hora na temperatura ambiente.

As placas de microtítulo foram revestidas com 1 ng/ml deproteína de fusão de IL-22, IL-22 H/F ou uma proteína não relacionada, eincubadas durante a noite a 4QC. Após o revestimento, as soluções foramremovidas das cavidades, e as placas bloqueadas por 1 hora na temperaturaambiente em 3% de MPBS. As placas foram enxaguadas com PBS, então50 μΙ de fago pré-bloqueado foram adicionados a cada cavidade. As placasforam incubadas na temperatura ambiente por 1 hora, então lavadas com 3trocas de PBST, seguidas por 3 trocas de PBS. 50 μΙ de uma diluição a1:5000 de conjugado de anti-M13-HRP (Pharmacia) foram adicionados acada cavidade, e as placas incubadas na temperatura ambiente por 1 hora.As placas foram lavadas 3 vezes com PBST, então 3 vezes com PBS.Cinqüenta μΙ do substrato de TMB foram adicionados a cada poço eincubados até o desenvolvimento de cor. A reação foi interrompida pelaadição de 25 μΙ de H2SO4 a 0,5 M, e a absorbância a 450 nm medida. Estesexperimentos confirmaram a ligação específica dos clones de scFv a IL-22.

Exemplo 4: Conversão de scFv em IqG

As regiões V das cadeias pesadas e leves dos clones de scFvforam amplificadas com iniciadores específicos para os clones. Os produtosda PCR foram digeridos com enzimas de restrição apropriadas esubclonados nos vetores contendo o domínio constante da cadeia pesadada lgG4 humana (para os domínios VH) ou nos vetores contendo osdomínios constantes da cadeia leve Iambda ou capa, conforme apropriado(domínios VL). As linhagens germinativas humanas mais próximas dossegmentos Vh e Vl foram determinadas e esta informação foi usada paraindicar se os domínios constantes das cadeias leves capa ou Iambda foramusados (Tabela 4). A inserção correta dos domínios da região V nosplasmídios foi verificada por seqüenciamento do DNA de plasmídio a partirde colônias individuais de E. coli. Os plasmídios foram preparados a partirdas culturas de E. coli por técnicas padrões e as construções das cadeiaspesada e leve co-transfectadas para as células de EBNA HEK 293 usandotécnicas padrões. A IgG secretada foi purificada usando proteína Asepharose (Pharmacia) e o tampão trocado em PBS.

Tabela 4: Linhagens germinativas de Vh e Vi dos clones aue neutralizam aIL-22

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A potência da IgG purificada foi verificada no ensaio de inibiçãodo complexo de receptor de IL-22, conforme descrito abaixo. Asconcentrações de IgG foram tituladas para obter os valores da potência. Odado da potência da amostra é mostrado na Tabela 5.

Tabela 5: Potência do scFv para IL-22 e da lgG no ensaio de inibição docomplexo de receptor de IL-22 _

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Exemplo 5: Otimização do Anticorpo para 1L-22

As bibliotecas de exposição em ribossomos grandes foramcriadas e examinadas quanto aos scFv's que reconheciam especificamentea IL-22 humana recombinante, essencialmente como descrito em Hanes etal. (2000). Inicialmente os cinco clones de origem (GIL01, GIL16, GIL60,GIL68 e GIL92) foram convertidos no formato de exposição em ribossomo, eeste molde foi subseqüentemente usado para a criação da biblioteca. Nonível do DNA, um promotor T7 foi adicionado na extremidade de 5' para atranscrição eficiente no mRNA. No nível do mRNA, o constructo continha umsítio de ligação ao ribossomo procariótico (seqüência de Shine-Dalgamo) elaços dos ramos 5' e 3' para a estabilidade do mRNA. Na extremidade de 3'da cadeia individual, o códon de interrupção foi removido e uma parte de glllfoi adicionada para atuar como um espaçador, permitindo o dobramento doscFv distante do túnel ribossômico (Hanes et al., 2000).

As bibliotecas de exposição em ribossomos derivadas dosclones líderes foram criadas por mutagênese das regiões determinantes decomplementaridade (CDRs) das cadeias individuais, usando PCR com TaqDNA polimerase sem o mecanismo de correção de erros. As seleçõesbaseadas na afinidade foram efetuadas onde a biblioteca foi incubada com abio.lL-22H/F, seguidas por glóbulos paramagnéticos revestidos comestreptavidina (Dynal M280). Os complexos terciários (mRNA-ribossomo-scFv) foram recuperados por separação magnética, enquanto que oscomplexos não ligados foram removidos por lavagem. Os mRNAs quecodificam os scFvs ligados foram então resgatados por RT-PCR, conformedescrito (Hanes et al., 2000), e o processo de seleção repetido comconcentrações decrescentes (100 nM - 10 pM durante 5 rodadas) da bio.IL-22H/F.

A PCR tendente a erro foi introduzida para aumentar mais otamanho da biblioteca. A taxa de erro que foi empregada criou, em média,7,2 mutações por 1.000 bp após uma reação PCR padrão com base no-método de Cadwell e Joyce (1992). As reações PCR tendente a erro iniciaisocorreram entre a primeira e a segunda rodadas de seleção.

As bibliotecas de recombinação de VhAZl para cada clone deorigem foram preparadas a partir das produções da exposição em ribossomoda CDR de Vh e VL, após a segunda ou a quarta rodada de seleções. Aporção Vh da produção da seleção da CDR de Vh para uma linhagemparticular foi especificamente amplificada por PCR1 usando iniciadoresespecíficos para os clones. A porção Vl da produção da seleção da CDR deVl para a mesma linhagem foi amplificada separadamente. Estes doisprodutos da PCR foram recombinados via uma reação PCR de sobreposição.Isto criou uma biblioteca completa de produtos de scFv contendo todos oscomponentes requeridos para rodadas adicionais de seleção por exposiçãoem ribossomo.

Para alguns clones, as bibliotecas de exposição em fago foramtambém utilizadas. As bibliotecas de fagos foram criadas por mutagênese deCDRs de cadeias individuais usando as reações PCR com iniciadoresapropriados, e selecionadas conforme acima descrito. Estas produçõesforam também combinadas com as produções da seleção por exposição emribossomo, para criar bibliotecas de recombinação de VH/VL. As produçõesda seleção de Vh a partir da quarta rodada da exposição em ribossomo,juntamente com as produções da terceira rodada da exposição em fago,foram recombinadas com as produções de Vl da mesma linhagem. Isto foiobtido usando iniciadores específicos para os clones e a PCR desobreposição para produzir as bibliotecas de recombinação de VH/VL. Asseleções com a bio.lL-22 H/F solúvel continuaram no formato de exposiçãoem ribossomo, conforme acima descrito. As regiões de scFv das produçõesda seleção foram direcionalmente clonadas em pCANTAB6 para a produçãode scFv para o exame bioquímico da alta produtividade.

Exemplo 6: Identificação dos clones otimizados

Dois ensaios foram usados para o exame da alta produtividadedas produções da seleção. Os produtos derivados dos clones GIL01, GIL16e GIL68 foram examinados em um ensaio de fluorescência resolvida notempo homogênea (HTRF®, Cis Biointernationl), enquanto que as produçõesde GIL60 e GIL92 foram examinadas em um ensaio com DELFIA® (PerkinElmer).

Ensaio de competição do epitopo por HTRF®

Os sobrenadantes da cultura contendo scFv bruto dos clones daprodução de GIL01, GIL16 e GIL68 foram preparados conforme descritoacima e examinados quanto à inibição do GIL68 que se liga à bio.lL-22H/Fem um ensaio de HTRF.

A IgG GIL68 marcada com criptato (kit de marcação da Cis

Biointernational) foi diluída 400 vezes no tampão de ensaio (PBS/0.4M deKF/ 0,05% de BSA/0,05% de Tween), seguido pela adição de 7,5 nM deEstreptavidina XL665 (Xlent, Cis Biointernational). Esta solução foi misturadacom a amostra de scFv bruto (diluída 125x), e a bio.lL-22H/F em umaOptiplate de 384 cavidades, preta, Packard (Perkin Elmer). As placas foramincubadas por 1 hora na temperatura ambiente, então lidas usando umaLeitora de Placas Victor 2® (Perkin Elmer). A razão de emissão de 665nM/620 nM foi usada para calcular a porcentagem de ligação específica emcada cavidade.

Os clones das produções de GIL60 e GIL92 foram examinadosquanto à inibição da ligação da bio.IL-22H/F a um complexo de receptor deIL-22.

As placas de microtítulo foram revestidas com um anticorpo parao complexo de receptor de IL-22 (1 Mg/ml em PBS), e incubadas por 1,5 horana temperatura ambiente. As placas foram lavadas três vezes em PBST, ebloqueadas por 1 hora na temperatura ambiente com 2% de MPBS. Apósumas 3 lavagens adicionais, o meio condicionado de células diluído,contendo um complexo de receptor de IL-22, foi adicionado e incubadodurante a noite a 4QC. Os sobrenadantes de scFv bruto foram preparadosconforme descrito acima. No dia seguinte, 25 μl de amostra de scFv diluídae 25 μl de bio.lL-22 H/F (6 ng/ml) foram adicionados às placas lavadas, eincubados por 1,5 hora na temperatura ambiente. As placas foram lavadas 3vezes em PBST, então a ligação da bio.lL-22H/F ao complexo de receptorde IL-22 foi detectada com Európio-Estreptavidina e o kit de reagenteDELFI® (PerkinEImer). A Fluorescência Resolvida no Tempo foi medidausando uma Leitora de Placas Victor 2® (Perkin Elmer).

O scFv purificado dos clones positivos identificados a partir doexame foi testado no ensaio de competição do complexo de receptor de IL-22 com DELFIA®, conforme descrito acima. Uma titulação dasconcentrações de scFv foi usada para estabelecer a potência do clone,conforme medida pelos valores de IC50 no ensaio. Os resultados da amostrasão mostrados na Figura 2. Os quatorze clones otimizados foramdesignados 097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06,166G05, 375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, e 356A11.Exemplo 7: Classificação dos Clones Otimizados no Ensaio de Proliferaçãode BAF3-IL-22

Os ensaios de proliferação foram efetuados para avaliar acapacidade do anticorpo de bloquear a proliferação das células BaF3mediada pela IL-22. As células BaF3 que expressam hlL22R/hlL10R2 foramgeradas por co-transfecção das células BaF3 com NL22R-GFP e hlL10R2-YFP. As células BaF3 que expressando tanto hlL22R quanto hlL10R2(células receptoras BaF3-IL-22) foram classificadas e coletadas por FACS.

As células receptoras BaF3-ll-22 foram mantidas rotineiramenteem RPMI1640 com 10% de FBS e 1 ng/mL de IL-3 de murino.Imediatamente antes da configuração do ensaio, as células foram lavadas 4vezes em meio de ensaio (RPMI1640 com 10% de FBS1 100 U/ml dePenicilina e 100 ng/ml de Estreptomicina), suspensas novamente em meiode ensaio e incubadas a 37QC, 5% de CO2, por 6-8 horas. Para preparar asplacas de ensaio, 100 μΙ de células (1x105 ml em meio de ensaio) foramadicionados às 60 cavidades centrais de uma placa de cultura de tecido comfundo plano, de 96 cavidades (Costar). As amostras de teste de scFv ou IgGforam preparadas por diluição da amostra de estoque em meio de ensaio,seguida por filtração através de um filtro de 0,22 μΜ. As diluições em sériede 5 vezes das amostras foram preparadas em uma placa separada dediluição. As cavidades contendo as células foram tratados com 50 μΙ deamostra, seguidos por 50 μΙ de IL-22 humana, (40 ng/ml em meio de ensaio),e foram então incubados por 40 horas a 37gC em 5% de CO2. As cavidadesde controle incluíram o meio sozinho e as células sozinhas ou na presençade 10 ng/mL de IL-22 humana.

A proliferação das células foi detectada pela adição de 20 μΙ deAzul Alamar (Serotec) às cavidades, seguida por incubação por 5 horas ± 30min a 37QC em 5% de CO2- As placas foram misturadas por tapinhas suavespara assegurar o sinal uniforme por todas as cavidades antes da medição dafluorescência (excitação = 560 nM, emissão = 590 nM). Os valores de EC50e IC50 foram estimados usando a adaptação da curva logística de quatroparâmetros (Software Graphpad Prism 2) e foram usados para classificar osanticorpos. Os dados das potências das amostras para os scFvs otimizadose as IgGs são mostrados na Tabela 6.

Tabela 6. Valores de IC50 dos clones de scFv e IaG no ensaio deproliferação de BaF3-IL-22

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*Os clones derivados de GIL92 foram testados como IgGs germinativos.Exemplo 8: Seqüência de linha aerminativa ("Germlininq")

O dado de seqüência para os seis clones de origem foi usadopara identificar a seqüência da linhagem germinativa mais próxima para acadeia pesada e leve de cada clone. Foram feitas mutações apropriadasusando as técnicas padrões de mutagênese sítio-dirigida com os iniciadoresmutagênicos apropriados. A mutação das seqüências foi confirmada poranálise da seqüência. As seqüências para os clones germinativos e o seuscFv e os domínios Vh e Vl são mostradas na Tabela 7. O scFv purificado apartir dos clones de origem germinativos foi testado no ensaio decompetição do complexo de receptor de IL-22 que se liga a IL-22 biotinilada,conforme descrito anteriormente, para estabelecer a potência do clone comomedida pelos valores de IC5o no ensaio. Os resultados são resumidos naTabela 8.Tabela 74:Sequencias de Aminoacidos e nucleotideos dos Dominos VHeVL de das CDRs dos anticorpos Germinativos(GIL016,GIL45,GIL60,GIL68,GIL92,062A09,e 087B03)Tabela 7B:Tabela 74:Sequencias de Aminoacidos e nucleotideos dos Dominos VHeVL de das CDRs dos anticorpos Germinativos(166B06,166G05,354A08,355B06,356A11,e368D04)Tabela 8: Potências do scFv de clones de origem não-aerminativos e oermi-nativos no ensaio de comoetilacão de receptor de IL-22

<table>table see original document page 92</column></row><table>

Nove dos anticorpos otimizados eram germinativos, conformedescrito acima. Oito IgGs germinativas foram testadas no ensaio de prolife-ração de BaF3-IL-22, conforme descrito acima. Os valores de IC5o dos anti-corpos a partir de um experimento representativo são mostrados na Tabela 9.

As seqüências dos anticorpos foram então enviadas para GE-NEART North America (28 Kirk Bradden Rd. East1 Toronto, ON1 CanadáM8Y2E6), onde elas foram sintetizadas para a expressão otimizada em célu-las CHO usando o algoritmo de otimização registrado da GENEART.

Tabela 9: Potências da IaG de clones otimizados germinativos no ensaio deproliferação de BaF3-IL-22R

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*a amostra continha precipitado ND = não determinada

Exemplo 9: O anticorpo inibe a secrecão de GROa induzida por IL-22 a partirdas células HT29

Os ensaios de GROa foram efetuados para avaliar a capacidadedo anticorpo de bloquear a secreção de GROa induzida por IL-22 a partirdas células HT29. As células HT29 foram semeadas em placa de cultura detecido de fundo plano, com 96 cavidades (Corning Inc. Cat. n2 3595), emmeio DMEM (DMEM + 10% de FBS + 100 unidades/ml de penicilina e es-treptomicina + 2 mM de Glutamina) a 5 χ 104 / cavidade. 10 ng/ml de IL-22foram misturados com o anticorpo diluído em série em meio DMEM e incu-bados por 30 min a 37°C. 24 horas após a semeadura, o meio foi removidodas células HT29 e a IL-22 e o anticorpo pré-misturados foram adicionadosàs células na placa de 96 cavidades.

Após 48 horas de incubação a 37-C com 5% de CO2, o meio foicoletado e a GROa secretada foi testada usando o kit de Imunoensaio deGROa Humana (R&D Systems, Cat. DGROO), de acordo com as instruçõesdo fabricante. Os resultados são apresentados na Figura 3.Exemplo 10: O anticorpo se iaa à. e inibe a. IL-22 de espécies diferentes

A reatividade cruzada entre espécies dos anticorpos otimizadosgerminativos e não germinativos foi determinada como se segue: as placasde ELISA (Costar, CAt. n2 3590) foram revestidas durante a noite com 1μg/ml de IL-22 de rato, camundongo, ou humana, ou IL-26 humana, emtampão de PBS. As placas foram lavadas com tampão de PBST (0,05% deTween20 em PBS) 3 vezes, então bloqueadas com 1% de BSA (SigmaA8918) / PBST por 1 h na TA. Os anticorpos foram adicionados a 1 μg/ml,incubados 1 h a 25°C. As placas foram lavadas, então o anticorpo IgG anti-humano em cabra conjugado à HRP (Southern Biotech Association, Cat. n22040-05) foi adicionado. As placas foram incubadas por 1 hora a 25°C, entãolavadas com PBST, e desenvolvidas com TMB (KPL, Cat. n2 50-76-04). Areação foi interrompida com H2SO4 a 0,18 M. As placas foram lidas em DOde 450 nm. Os resultados são apresentados na Figura 4.

Estes anticorpos foram também avaliados tanto no ensaio dascélulas GROa quanto no ensaio de proliferação de BaF3-IL-22. Conformemostrado nas Tabelas 10(a) e 10(b), os anticorpos bloquearam a atividadede sinalização da IL-22 humana, de macaco, rato, e camundongo, via umreceptor de IL-22 humano. O 356A11 e o 3268D04 também demonstraramreatividade cruzada entre as espécies contra a IL-22 de murino, rato, e ma-caco, usando a análise de interação bioespecífica (BIA) em tempo real, con-forme discutido adicionalmente no Exemplo 11.

Tabela 10(a). Os anticorpos para IL-22 são altamente potentes para bloque-ar outras espécies de IL-22, conforme mostrado no sistema de ensaio à ba-se de células GROa. Os valores mostrados representam os valores de IC5oem pM.

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Tabela 10(b). Os anticorpos para IL-22 são altamente potentes para bloque-ar outras espécies de IL-22, conforme mostrado no sistema de ensaio à ba-se de células BaF3. Os valores mostrados representam os valores de IC5oem pM.

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Exemplo 11: Comparação da Cinética de Ligação Entre os Anticorpos Mo-noclonais Anti-IL-22 de Ratos e os Anticorpos Monoclonais Anti-IL-22 Humanos

A cinética de ligação dos anticorpos anti-IL-22 monoclonais, hu-manos (356A11 e 368D04), e os anticorpos anti-IL-22 monoclonais, de ratos(P3/3 (Ab-02) e P3/2 (Ab-04) de WO 2005/000897 e WO 02/068476) para aIL-22 humana foi avaliada por análise da interação bioespecífica (BIA) emtempo real, usando a tecnologia de ressonância plasmônica de superfície.

Para preparar a superfície biossensora para os anticorpos mo-noclonais de ratos, a Proteína A/G (Pierce n- 21186, Rockford, IL) foi imobili-zada sobre um chip de carboximetil dextrana de grau de pesquisa (CM5),usando acoplamento de amina. A superfície foi ativada com EDC/NHS. Aproteína A/G foi injetada em uma concentração de 50 μς/ml em tampão deacetato de sódio (pH 4,0). A imobilização foi feita usando as ferramentasassistentes com alvo de 3000 (RUs) para a proteína A/G. Os grupos ativa-dos restantes foram bloqueados com 1,0 M de etanolamina (pH 8,0). A pri-meira célula de fluxo foi usada como uma superfície de referência para corri-gir a maior parte do índice de refração, os efeitos da matriz, e a ligação nãoespecífica. A segunda, a terceira, e a quarta células de fluxo foram revesti-das com a molécula de captura. Os anticorpos monoclonais de ratos Ab-02 eAb-04, que se ligam à proteína A/G, foram capturados sobre a superfície daproteína A/G por injeção de 30 μΙ de uma solução a 1 μg/ml. A diferença lí-quida entre a linha de base e o ponto aproximadamente 90 segundos após otérmino da injeção de Ab-02 ou Ab-04 foi usada para representar a quanti-dade de Iigante ligado.

Para preparar a superfície biossensora para os anticorpos mo-noclonais humanos, o anticorpo monoclonal humano (356A11 ou 368D04)ou o anticorpo de controle PD-1 (n2 17) foi imobilizado sobre um chip de car-boximetil dextrana de grau de pesquisa (CM5), usando acoplamento de ami-na padrão. A superfície foi ativada com EDC/NHS. Os anticorpos de capturaforam injetados em uma concentração de 1 μg/ml em tampão de acetato desódio (pH 5,5). Os grupos ativados restantes foram bloqueados com 1,0 Mde etanolamina (pH 8,0). A primeira célula de fluxo foi usada como uma su-perfície de referência para corrigir a maior parte do índice de refração, osefeitos da matriz, e a ligação não específica. A segunda, a terceira, e a quar-ta células de fluxo foram revestidas com a molécula de captura.

Para o Ab-02 e o Ab-04, as soluções de IL-22 humana em con-centrações de 300, 100, 50, 25, 12,5, 6,4, 3,2, 1,6 e 0 nM foram injetadas emtriplicata, em uma vazão de 30 μΙ por minuto, por 3 minutos, e a quantidadede material ligado, como uma função do tempo, foi registrada como sensor-gramas. A fase de dissociação foi monitorada em tampão de HBS/EP por 10minutos, na mesma vazão, seguido por uma injeção de 5 μΙ de 0,1% de TFAe uma injeção de 5 μΙ de glicina pH 1,5, para regenerar uma superfície decaptura inteiramente ativa.

Para o 356A11 e o 368D04, as soluções de IL-22 humana a 400,200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25 e 0 nM foram injetadas em triplicata, em umavazão de 100 μΙ por minuto (alto fluxo para evitar a ligação não específica),por 3 minutos, e a quantidade de material ligado, como uma função do tem-po, foi registrada como sensorgramas. A fase de dissociação foi monitoradaem tampão de HBS/EP por 60 minutos, na mesma vazão, seguido por duasinjeções de 5 μΙ de glicina pH 1,5, para regenerar uma superfície de capturainteiramente ativa.

Todos os experimentos cinéticos foram feitos a 22,5QC em tam-pão de HBS/EP. Os efeitos do branco e do tampão foram subtraídos paracada sensorgrama usando referência dupla. Nos experimentos de controle, aprimeira injeção continha tampão.

Os dados cinéticos foram analisados usando o software BIAeva-Iuation 3.0.2 aplicado a um modelo 1:1. As constantes das taxas de dissoci-ação (Kd) e associação (Ka) aparentes foram calculadas a partir das regiõesapropriadas dos sensorgramas usando uma análise global. As constantes deafinidade da interação entre o anticorpo e o analito foram calculadas a partirdas constantes das taxas cinéticas pelas seguintes fórmulas: K0 = Kd / Ka,onde K0 é a constante de dissociação, e Ka = Ka/Kd, onde Ka é a constantede associação. Os dados de ligação para Ab-02 e AB-04 estão resumidosnas Tabelas 11A e 1ΊΒ. Os dados de ligação para 356A11 e 368D04 estãoresumidos na Tabela 12.

Tabela 11A. Parâmetros cinéticos para a interação entre a IL-22 humana e

<table>table see original document page 96</column></row><table>Tabela 11 Β. Dados cinéticos dos anticorpos monoclonais de ratos para a ILhumana

<table>table see original document page 97</column></row><table>

Estes resultados mostram que os anticorpos anti-IL-22 monoclo-nais humanos desta invenção têm uma afinidade significativamente maiorpela IL-22 humana do que os anticorpos anti-IL-22 monoclonais de ratos Ab-02 e Ab-04, descritos em WO 2005/000897 e WO 02/068476 como tendo acapacidade de neutralizar a IL-22 humana. Especificamente, a constante dedissociação de 356A11 (K0= 5,40 χ 10"11 M ou 0,054 nM) para a IL-22 hu-mana é aproximadamente 1000 vezes e mais do que 40 vezes maior do queas constantes de dissociação de Ab-02 (KD = 5,22 χ 10"8M ou 52 nM) e Ab-04 (Kd= 2,38 χ 10"9M ou 2,38 nM), respectivamente. Similarmente, 368D04(KD = 1,32 χ 10"10 M ou 0,132 nM) tem uma afinidade aproximadamente 400vezes e 18 vezes mais forte pela IL-22 humana do que Ab-02 e Ab-04, res-pectivamente. Os perfis de ligação de 356A11 e 368D04 para a IL-22 demacaco, murino, e rato eram similares àqueles da IL-22 humana (dados nãomostrados).

As especificidades de ligação de 356A11 e 368D04 foram tam-bém avaliadas usando ΒΙΑ. Nenhum dos dois anticorpos mostrou reatividadecruzada com a IL-10 humana, a IL-19 humana, a IL-20 humana, a IL-24 hu-mana, a IL-28A humana, a IL-29 humana, o IFN-a2c humano, ou o IFN-ωhumano (dados não mostrados).

Exemplo 12: Modelo para o Tratamento de Artrite

A artrite é uma doença caracterizada por inflamação nas articu-lações. A Artrite Reumatóide (RA) é a forma mais freqüente de artrite, envol-vendo a inflamação do tecido conjuntivo e da membrana sinovial, uma mem-brana que reveste a articulação. A membrana sinovial inflamada freqüente-mente infiltra-se na articulação e danifica a cartilagem da articulação e o os-so. Tanto a proteína IL-22 e IL-22R quanto o transcrito estão associadoscom a doença humana. Nas biopsias sinoviais de RA1 a proteína IL-22 é de-tectada nos fibroblastos sinoviais Vimentina+ e em alguns macrófagos CD68+,enquanto que o IL-22R é detectado nos fibroblastos sinoviais. O tratamentodos fibroblastos sinoviais com a IL-22 induz a produção da proteína quimioa-traente de monócito 1, a MCP-1, bem como a atividade geral metabólica (I-keuchi, H., et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037-46).

A IL-22 é usada para estudar o seu efeito sobre as células damembrana sinovial, a membrana que cobre as articulações. Os sinoviócitossimilares aos fibroblastos humanos (HFLS) (Cell Applications (San Diego,CA)) são isolados dos tecidos sinoviais dos pacientes com artrite reumatóidesofrendo cirurgia da articulação. Os HFLS são cultivados com a IL-22 huma-na por 48 horas, e os sobrenadantes são removidos e testados quanto àsquimiocinas e citocinas por ELISA. A IL-22 aumentará a secreção de HFLSdas quimiocinas MCP-1, Eotaxina, e IP-10, e das citocinas TNFa, IL-6, e IL-8.Estas quimiocinas e citocinas são sabidas na técnica promoverem a inflama-ção através de diversas atividades, e as concentrações aumentadas nasarticulações causadas pela IL-22 exacerba a inflamação e a RA.

A IL-22 é usada para regular a progressão clínica da CIA (ArtriteInduzida por Colágeno). A CIA é o modelo padrão de camundongo e ratopara estudar a artrite reumatóide, ver, por exemplo, Holmdahl et al., (2002)Ageing Res. Rev., 1:135. No dia 0, os camundongos são injetados com 100μg de Colágeno Tipo Il em adjuvante de Freund completo, e no dia 21, oscamundongos são reforçados com 100 μg de Colágeno Tipo Il em adjuvantede Freund incompleto. No dia 21, os camundongos são também injetadosdiariamente com 1 μg de IL-22, e cada dia, os camundongos são examina-dos quanto à doença. Os sinais clínicos são pontuados como se segue: 0 =nenhum inchaço, 1 = 1 a 2 dedos inchados ou tornozelo inchado, 2 = maisdo que 2 dedos inchados ou inchaço da pata brando, 3 = inchaço da pataextenso, e 4 = ancilose da pata. Os camundongos injetados com PBS apósas injeções de colágeno desenvolvem progressivamente a doença. Os ca-mundongos que são injetados com a IL-22 após as injeções de colágenodesenvolvem progressivamente uma doença mais grave. Porque o tratamen-to com a IL-22 exacerba especificamente a CIA1 o tratamento com os anti-corpos anti-IL-22, por exemplo, com 087B03, 368D04, 354A08 ou 356A11germinativo, é esperado suprimir ou retardar a CIA. Assim, visto que estemodelo prediz a eficácia do tratamento para a RA, o tratamento com os anti-corpos anti-IL-22, incluindo 087B03, 368D04, 354A08 or 356A11 germinativoou não germinativo, é esperado suprimir ou retardar a RA em seres humanos.

Exemplo 13: Tratamento dos Pacientes

Os pacientes com um distúrbio auto-imune, distúrbio respiratório,condição inflamatória da pele, sistema cardiovascular, sistema nervoso, rins,fígado e pâncreas ou os pacientes com transplantes estão entre os tipos depacientes que podem ser tratados com os anticorpos da invenção. Os regi-mes de tratamento e os resultados esperados ilustrativos dos anticorpos deacordo com esta invenção, incluindo o 087B03, o 368D04, o 354A08, e o356A11, são proporcionados abaixo. As dosagens e as freqüências de ad-ministração diferentes daquelas na Tabela 13 podem também ser usadas. Oprofissional versado pode ajustar os regimes de tratamento, conforme ne-cessário, com base na via de administração ou outras variáveis conhecidas,tais como a idade, o peso, a condição, o sexo, a gravidade da condição mé-dica, etc. do paciente a ser tratado.Tabela 13: Regimes de Tratamento

<table>table see original document page 100</column></row><table>

O relatório descritivo é mais completamente entendido levando-se em consideração os ensinamentos das referências citadas no relatóriodescritivo. As modalidades dentro do relatório descritivo proporcionam umailustração das modalidades da invenção e não devem ser interpretadas paralimitar o escopo da invenção. O profissional versado prontamente reconheceque muitas outras modalidades são incluídas pela invenção. Todas as publi-cações e patentes citadas nesta descrição são incorporadas por referênciaem sua totalidade. Na medida em que o material incorporado por referênciacontradiz ou está inconsistente com este relatório descritivo, o relatório des-critivo substitui qualquer tal material. A citação de quaisquer referências aquicontidas não é uma admissão que tais referências são técnica anterior àpresente invenção.

A não ser que de outro modo indicado, todos os números ex-pressando quantidades de ingredientes, condições de reação, e assim pordiante no relatório descritivo, incluindo as reivindicações, são para serementendidos como sendo modificados em todas as situações pelo termo "cer-ca de". Assim, a não ser que de outro modo indicado ao contrário, os parâ-metros numéricos, são aproximações e podem variar dependendo das pro-priedades desejadas buscadas serem obtidas pela presente invenção. Aomenos, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equi-valentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve serinterpretado levando-se em consideração o número de dígitos significativose as abordagens comuns de arredondamento.

A não ser que de outro modo indicado, o termo "pelo menos"que precede uma série de elementos é para ser entendido referir-se a cadaelemento na série. Aqueles versados na técnica reconhecerão, ou serão ca-pazes de verificar usando não mais do que experimentação de rotina, muitosequivalentes às modalidades específicas da invenção descritas neste docu-mento. Tais equivalentes são pretendidos serem incluídos pelas reivindica-ções a seguir.

Claims (62)

1. Anticorpo isolado, ou seu fragmento de ligação a antígeno,que especificamente se liga a IL-22, em que o anticorpo do mesmo, ou ofragmento de ligação à antígeno do mesmo, compreende uma seqüência deaminoácidos que é pelo menos 95% idêntica à seqüência de aminoácidosmostrada em SEQ ID NO:5, 6, 7, 23, 24, 25, 41, 42, 43, 59, 60, 61, 77, 78,-79, 95, 96, 97, 113, 114, 115, 131, 132, 133, 149, 150, 151, 167, 168, 169,-185, 186, 187, 203, 204, 205, 221, 222, 223, 239, 240, 241, 257, 258, 259,-275, 276, 277, 293, 294, 295, 311, 312, 313, 329, 330, 331, 347, 348, 349,-365, 366, 367, 383, 384, 385, 401, 402, 403, 419, 420, 421, 437, 438, 439,-455, 456, 457, 473, 474, 475, 491, 492, 493, 509, 510, 511, 527, 528, 529,-545, 546, 547, 563, 564, 565, 581, 582, 583, 599, 600, 601, 617, 618, ou 619.

2. Anticorpo isolado, ou seu fragmento de ligação a antígeno domesmo, que especificamente se liga a IL-22, em que o anticorpo, ou o frag-mento de ligação à antígeno do mesmo, compreende uma seqüência de a-minoácidos codificada por uma seqüência de nucleotídeos que é pelo menos-95% idêntica à seqüência de nucleotídeos mostrada em SEQ ID NO: 14, 15,-16, 32, 33, 34, 50, 51, 52, 68, 69, 70, 86, 87, 88, 104, 105, 106, 122, 123,-124, 140, 141, 142, 158, 159, 160, 176, 177, 178, 194, 195, 196, 212, 213,-214, 230, 231, 232, 248, 249, 250, 266, 267, 268, 284, 285, 286, 302, 303,-304, 320, 321, 322, 338, 339, 340, 356, 357, 358, 374, 375, 376, 392, 393,-394, 410, 411, 412, 428, 429, 430, 446, 447, 448, 464, 465, 466, 482, 483,-484, 500, 501, 502, 518, 519, 520, 536, 537, 538, 554, 555, 556, 572, 573,574, 590, 591, 592, 608, 609, 610, 626, 627, ou 628.

3. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, compreendendo aseqüência de aminoácidos como especificada em SEQ ID NO:5, 6, 7, 23, 24,-25, 41, 42, 43, 59, 60, 61, 77, 78, 79, 95, 96, 97, 113, 114, 115, 131, 132,-133, 149, 150, 151, 167, 168, 169, 185, 186, 187, 203, 204, 205, 221, 222,-223, 239, 240, 241, 257, 258, 259, 275, 276, 277, 293, 294, 295, 311, 312,-313, 329, 330, 331, 347, 348, 349, 365, 366, 367, 383, 384, 385, 401, 402,-403, 419, 420, 421, 437, 438, 439, 455, 456, 457, 473, 474, 475, 491, 492,-493, 509, 510, 511, 527, 528, 529, 545, 546, 547, 563, 564, 565, 581, 582,-583, 599, 600, 601, 617, 618, ou 619.

4. Anticorpo isolado, ou fragmento de ligação a antígeno domesmo, que especificamente se liga a IL-22, em que o anticorpo, ou o frag-mento de ligação à antígeno do mesmo, compreende um domínio Vl tendouma região variável da cadeia leve e um domínio Vh tendo uma região variá-vel da cadeia pesada, em que a região variável da cadeia pesada compre-ende uma ou mais de SEQ ID NO:8, 9, 10, 26, 27, 28, 44, 45, 46, 62, 63, 64,-80, 81, 82, 98, 99, 100, 116, 117, 118, 134, 135, 136, 152, 153, 154, 170,-171, 172, 188, 189, 190, 206, 207, 208, 224, 225, 226, 242, 243, 244, 260,-261, 262, 278, 279, 280, 296, 297, 298, 314, 315, 316, 332, 333, 334, 350,-351, 352, 368, 369, 370, 386, 387, 388, 404, 405, 406, 422, 423, 424, 440,-441, 442, 458, 459, 460, 476, 477, 478, 494, 495, 496, 512, 513, 514, 530,-531, 532, 548, 549, 550, 566, 567, 568, 584, 585, 586, 602, 603, 604, 620,-621, ou 622.

5. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, em que a regiãovariável da cadeia leve compreende uma ou mais de SEQ ID NO:11, 12, 13,-29, 30, 31, 47, 48, 49, 65, 66, 67, 83, 84, 85, 101, 102, 103, 119, 120, 121,-137, 138, 139, 155, 156, 157, 173, 174, 175, 191, 192, 193, 209, 210, 211,-227, 228, 229, 245, 246, 247, 263, 264, 265, 281, 282, 283, 299, 300, 301,-317, 318, 319, 335, 336, 337, 353, 354, 355, 371, 372, 373, 389, 390, 391,-407, 408, 409, 425, 426, 427, 443, 444, 445, 461, 462, 463, 479, 480, 481,-497, 498, 499, 515, 516, 517, 533, 534, 535, 551, 552, 553, 569, 570, 571,-587, 588, 589, 605, 606, 607, 623, 624, e 625.

6. Anticorpo de acordo com a reivindicação 5, em que o domínioVh compreende a seqüência de aminoácidos de qualquer uma de SEQ IDNO:5, 23, 41, 59, 77, 95, 113, 131, 149, 167, 185, 203, 221, 239, 257, 275,-293, 311, 329, 347, 365, 383, 401, 419, 437, 455, 473, 491, 509, 527, 545,-563, 581, 599, ou 617 e o domínio Vl compreende a seqüência de aminoá-cidos de qualquer uma de SEQ ID NO:6, 24, 42, 60, 78, 96, 114, 132, 150,-168, 186, 204, 222, 240, 258, 276, 294, 312, 330, 348, 366, 384, 402, 420,-438, 456, 474, 492, 510, 528, 546, 564, 582, 600, ou 618.

7. Anticorpo de acordo com a reivindicação 6, em que:a) o domínio Vh compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO: 167 ou 491; eb) o domínio Vl compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO:168 ou 492.

8. Anticorpo de acordo com a reivindicação 6, em que:a) o domínio Vh compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO:293 ou 545; eb) o domínio Vl compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO:294 ou 546.

9. Anticorpo de acordo com a reivindicação 6, em que:a) o domínio Vh compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID N0:203 ou 617; eb) o domínio Vl compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID N0:204 ou 618.

10. Anticorpo de acordo com a reivindicação 6, em que:a) o domínio Vh compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO:347 ou 599; eb) o domínio Vl compreende a seqüência de aminoácidos espe-cificada em SEQ ID NO:348 ou 600.

11. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, em que a regiãovariável da cadeia pesada compreende:a) SEQ ID N0:170 ou 494,b) SEQ ID NO:171 ou 495; ec) SEQ ID NO:172 ou 496.

12. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, em que a regiãovariável da cadeia pesada compreende:a) SEQ ID NO:296 ou 548,b) SEQ ID NO:297 ou 549; ec) SEQ ID NO:298 ou 550.

13. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, em que a regiãovariável da cadeia pesada compreende:a) SEQ ID NQ:206 ou 620,b) SEQ ID N0:207 ou 621; ec) SEQ ID N0:208 ou 622.

14. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, em que a regiãovariável da cadeia pesada compreende:a) SEQ ID N0:350 ou 602,b) SEQ ID NO:351 ou 603; ec) SEQ ID NO:352 ou 604.

15. Anticorpo de acordo com a reivindicação 11, em que a regiãovariável da cadeia leve compreende:a) SEQ ID NO:173 ou 497,b) SEQ ID NO:174ou 498; ec) SEQ ID NO:175 ou 499.

16. Anticorpo de acordo com a reivindicação 12, em que a regiãovariável da cadeia leve compreende:a) SEQ ID NO:299 ou 551,b) SEQ ID N0:300 ou 552; ec) SEQ ID N0:301 ou 553.

17. Anticorpo de acordo com a reivindicação 13, em que a regiãovariável da cadeia leve compreende:a) SEQ ID N0:209 ou 623,b) SEQ ID N0:210 ou 624; ec) SEQ ID NO:211 ou 625.

18. Anticorpo de acordo com a reivindicação 14, em que a regiãovariável da cadeia leve compreende:a) SEQ ID NO:353 ou 605,b) SEQ ID NO:354 ou 606; ec) SEQ ID NO:355 ou 607.

19. Anticorpo isolado, ou fragmento de ligação a antígeno domesmo, que especificamente se liga a um epitopo de IL-22 que é reconheci-do por GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 097D09, 062A09,-062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05, 375G06, 376B10,-354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11, de modo tal que o anticorpo inibecompetitivamente a ligação de GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92,-097D09, 062A09, 062G05, 087B03, 367D04, 368D04, 166B06, 166G05,-375G06, 376B10, 354A08, 355B06, 355E04, ou 356A11 a IL-22 humana.

20. Anticorpo de acordo com a reivindicação 19, compreendendoum domínio VH, um domínio VL> ou um fragmento Fv como especificado emSEQ ID NO:5, 6, 7, 23, 24, 25, 41, 42, 43, 59, 60, 61, 77, 78, 79, 95, 96, 97,-113, 114, 115, 131, 132, 133, 149, 150, 151, 167, 168, 169, 185, 186, 187,-203, 204, 205, 221, 222, 223, 239, 240, 241, 257, 258, 259, 275, 276, 277,-293, 294, 295, 311, 312, 313, 329, 330, 331, 347, 348, 349, 365, 366, 367,-10 383, 384, 385, 401, 402, 403, 419, 420, 421, 437, 438, 439, 455, 456, 457,-473, 474, 475, 491, 492, 493, 509, 510, 511, 527, 528, 529, 545, 546, 547,-563, 564, 565, 581, 582, 583, 599, 600, 601, 617, 618, ou 619.

21. Anticorpo de acordo com a reivindicação 20, em que o domí-nio Vh compreende a SEQ ID NO:167 ou 491.

22. Anticorpo de acordo com a reivindicação 21, em que o domí-nio Vl compreende a SEQ ID NO:168 ou 492.

23. Anticorpo de acordo com a reivindicação 20, em que o domí-nio Vh compreende a SEQ ID NO:293 ou 545.

24. Anticorpo de acordo com a reivindicação 23, em que o domí-nio Vl compreende a SEQ ID NO:294 ou 546.

25. Anticorpo de acordo com a reivindicação 20, em que o domí-nio Vh compreende a SEQ ID N0:203 ou 617.

26. Anticorpo de acordo com a reivindicação 25, em que o domí-nio Vl compreende a SEQ ID N0:204 ou 618.

27. Anticorpo de acordo com a reivindicação 20, em que o domí-nio Vh compreende a SEQ ID NO:347 ou 599.

28. Anticorpo de acordo com a reivindicação 27, em que o domí-nio Vl compreende a SEQ ID NO:348 ou 600.

29. Anticorpo de acordo com a reivindicação 19, que especifica-mente se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por 087B03, de mo-do tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de 087B03 a IL-22humana.

30. Anticorpo de acordo com a reivindicação 19, que especifica-mente se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por 354A08, de mo-do tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de 354A08 a IL-22humana.

31. Anticorpo de acordo com a reivindicação 19, que especifica-mente se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por 368D04, de mo-do tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de 368D04 a IL-22humana.

32. Anticorpo de acordo com a reivindicação 19, que especifica-mente se liga a um epitopo de IL-22 que é reconhecido por 356A11, de mo-do tal que o anticorpo inibe competitivamente a ligação de 356A11 a IL-22humana.

33. Anticorpo de acordo com a reivindicação 22, em que o anti-corpo é o 087B03.

34. Anticorpo de acordo com a reivindicação 24, em que o anti-corpo é o 354A08.

35. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, em que o anti-corpo é o 368D04.

36. Anticorpo de acordo com a reivindicação 28, em que o anti-corpo é o 356A11.

37. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que aconstante de associação do anticorpo para a IL-22 humana é pelo menos-1010M-1.

38. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo bloqueia a proliferação mediada pela IL-22 das células BaF3 comuma IC50 de 150 pM ou menos e onde as células BaF3 compreendem umreceptor de IL-22 humana.

39. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo bloqueia a secreção de GROa mediada pela IL-22 a partir das cé-lulas HT29 com uma IC50 de 150 pM ou menos.

40. Anticorpo isolado, ou seu fragmento de ligação a antígeno,que especificamente se liga a IL-22, em que a constante de associação doanticorpo para a IL-22 humana é pelo menos 1010 M"1.

41. Anticorpo isolado, ou seu fragmento de ligação a antígeno,em que o anticorpo bloqueia a proliferação mediada pela IL-22 das célulasBaF3 com uma IC50 de 150 pM ou menos e onde as células BaF3 compre-endem um receptor de IL-22 humana.

42. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo se liga especificamente a uma seqüência de aminoácidos que épelo menos 95% idêntica a qualquer seqüência de pelo menos 100 aminoá-cidos contíguos na seqüência especificada em SEQ ID NO:1.

43. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo inibe a ligação da IL-22 ao IL-22R ou um complexo de receptorcompreendendo IL-22R e IL-10R2.

44. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo é humano.

45. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que oanticorpo é a IgGI ou a lgG4.

46. Composição farmacêutica compreendendo o anticorpo comodefinido na reivindicação 1 ou 2.

47. Ácido nucléico isolado codificando o anticorpo de acordocom a reivindicação 1 ou 2.

48. Vetor de expressão compreendendo o ácido nucléico de a-cordo com a reivindicação 47.

49. Célula hospedeira transformada com o vetor de acordo coma reivindicação 48.

50. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 49, em quea célula hospedeira é uma bactéria, célula de mamífero, célula de levedura,célula de planta, ou uma célula de inseto.

51. Método de produzir um anticorpo que se liga a IL-22, com-preendendo o cultivo da célula hospedeira da reivindicação 50 sob condi-ções que permitam a expressão do anticorpo, e o isolamento do anticorpo dacultura de células.

52. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 47, em que oácido nucléico codifica uma proteína compreendendo uma seqüência de a-minoácidos especificada em uma de SEQ ID NO:5-13, 23-31, 41-49, 59-67,-77-85, 95-103, 113-121, 131-139, 149-157, 167-175, 185-193, 203-211,221--229, 239-247, 257-265, 275-283, 293-301,311-319, 329-337, 347- 355, 365--373, 383-391, 401 -409, 419-427, 437-445, 455-463, 473-481, 491 -499, 509--517, 527-535, 545-553, 563-571, 581-589, 599-607, ou 617-625.

53. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 52, em que oácido nucléico compreende uma seqüência de nucleotídeos de uma de SEQID NO:14-22, 32-40, 50-58, 68-76, 86-94, 104-112, 122-130, 140-148, 158--166, 176-184, 194-202, 212-220, 230-238, 248-256, 266-274, 284-292, 302--310, 320-328, 338-346, 356-364, 374-382, 392-400, 410-418, 428-436, 446--454, 464-472, 482-490, 500-508, 518-526, 536-544, 554-562, 572-580, 590--598, 608-616, ou 626-634.

54. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 52, em que oácido nucléico codifica uma proteína compreendendo uma seqüência de a-minoácidos especificada em SEQ ID NO:167, 168, 169, 170, 171, 172, 173,-174, 175, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, ou 499.

55. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 52, em que oácido nucléico codifica uma proteína compreendendo uma seqüência de a-minoácidos especificada em SEQ ID NO:293, 294, 295, 296, 297, 298, 299,-300, 301, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, ou 553.

56. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 52, em que oácido nucléico codifica uma proteína compreendendo uma seqüência de a-minoácidos especificada em SEQ ID N0:203, 204, 205, 206, 207, 208, 209,-210,211,617,618, 619, 620, 621, 622, 623, 624, ou 625.

57. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 52, em que oácido nucléico codifica uma proteína compreendendo uma seqüência de a-minoácidos especificada em SEQ ID NO:347, 348, 349, 350, 351, 352, 353,354, 355, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, ou 607.

58. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 53, em que oácido nucléico compreende uma seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNO. 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 500, 501, 502, 503, 504,-505, 506, 507, ou 508.

59. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 53, em que oácido nucléico compreende uma seqüência de nucleotídeos de SEQ IDN0:302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 554, 555, 556, 557, 558,-559, 560, 561, ou 562.

60. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 53, em que oácido nucléico compreende uma seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNO:212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 626, 627, 628, 629, 630,-631, 632, 633, ou 634.

61. Ácido nucléico de acordo com a reivindicação 53, em que oácido nucléico compreende uma seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNO:356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 608, 609, 610, 611, 612,-613, 614, 615, ou 616.

62. Kit diagnóstico compreendendo o anticorpo de acordo com areivindicação 1 ou 2.