BRPI0708483A2 - formulações farmacêuticas de latrunculina - Google Patents

Abstract

FORMULAçõES FARMACêUTICAS DE LATRUNCULINA A presente invenção se refere a uma formulação farmacêutica aquosa compreendendo pelo menos uma latrunculina e a formulação não contém uma quantidade substancial de sulfáxido de dimetila. Em uma modalidade, a presente invenção esta voltada a uma formulação farmacêutica aquosa compreendendo pelo menos uma latrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, um tensoativo não jónico em uma quantidade de 0,01- 2% em peso/volume, e um agente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsmlkG, a um pH entre 4 a 8, onde a latrunculina, o tensoativo, e o agente de tonicidade são compatíveis na formulação, e a formulação não contém uma quantidade substancial de sulfáxido de dimetila. A formulação é estável durante pelo menos seis meses em temperatura refrigerada. A presente invenção também fornece um método de reduzir pressão intra-ocular, um método de tratar glaucoma, um método de inibir cura de ferida após trabeculetomia, e um método de inibir angiogênese.

Description

"FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS DE LATRUNCULINA"

CAMPO TÉCNICO

Esta invenção se refere às formulações farmacêuticas, particularmente formulaçãooftálmica, de compostos ativos citoesquelético macrocíclicos, tal como compostos de Iatrun-culina e seus análogos relacionados. Esta invenção também se refere aos métodos parausar tais formulações farmacêuticas na prevenção ou tratamento de doenças ou distúrbiosque são afetados por modificação da integridade do citoesqueleto de actina, por exemplo,tratamento de distúrbios nos quais a pressão intra-ocular é elevada, tal como glaucoma pri-mário de ângulo aberto e neuroproteção ocular nos humanos e outros mamíferos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Glaucoma é uma doença oftálmica que leva ao prejuízo visual irreversível. É aquarta causa mais comum de cegueira e a segunda causa mais comum de perda visual nosEstados Unidos, e a causa mais comum de perda visual irreversível entre Africanos-Americanos. Em geral, a doença é caracterizada por uma neuropatia progressiva causadopelo menos em parte por efeitos danosos que são o resultado de pressão intra-ocular au-mentada no nervo ótico. Glaucoma de ângulo aberto constitui aproximadamente 90% detodo glaucoma primário e é caracterizado por resistência anormalmente elevada à drena- ·gem de fluido (humor aquoso) do olho. A resistência normal é exigida manter uma pressãointra-ocular suficiente para manter a forma do olho para integridade óptica. Esta resistênciaé fornecida pelo tecido trabecular, um tecido complexo que consiste em células endoteliaisespecializadas, feixes de tecido conjuntivo e matriz extracelular. A resistência do tecido tra-becular normalmente é tal que a pressão intra-ocular seja -16 mm de Hg1 uma pressão naqual o humor aquoso induza o olho na mesma taxa na qual ele é produzido (2,5 /yL/minuto).

As pressões extremamente altas (por exemplo, 70 mm de Hg.) podem causar cegueira den-tro de somente alguns dias. Veja P. L. Kaufman e T. W. Mittag, "Medicai Therapy Of Glau-coma", Ch. 9, Sec. Il (pp. 9.7-9.30), em P. L. Kaufman e T. W. Mittag (eds.): Glaucoma (Vol.7 de S. M. Podos e M. Yanoff (eds): Textbook of Ophthalmology Series). London, Mosby-Year Book Europe Ltd. (1994); A. C. Guyton, Textbook of Medicai Physiology (W. B. Saun-ders Co., Sexta Ed.), pp. 386-89 (1981).

Atualmente, o tratamento de glaucoma e controle de pressão intra-ocular elevadasão abordados usando uma variedade de agentes terapêuticos por um amplo espectro declasses químicas.

As classes de droga mais freqüentemente empregadas para reduzir a pressão intra-ocular dependem da supressão de formação de humor aquoso (por exemplo, beta-bloqueadores, agonistas adrenérgicos de a2, inibidores de anidrase carbônicos) ou realcedo fluxo uveoscleral (análogos de prostaglandina). Não há nenhuma droga anti-glaucomaatual em uso comum que aja diretamente sobre o tecido trabecular. Pilocarpina reduz aresistência de fluxo através do tecido trabecular secundariamente, baseado na deformaçãodo tecido conseqüente a contração do músculo ciliar induzida por droga, porém seu uso estálimitado pela necessidade de administração diária 3-4 vezes e efeitos colaterais locais, es-pecialmente miose. Epinefrina age aparentemente diretamente nas células de tecido paraaumentar a facilidade por uma série de reações mediada por receptor adrenérgico /?2, po-rém raramente é clinicamente usada por causa do local mediado pelo receptor e efeitos co-laterais sistêmicos, uma freqüência alta de alergia local, e eficácia somente modesta e vari-abilidade inter-paciente na sensibilidade.

Trabeculectomia é a forma mais comum de cirurgia de filtração de glaucoma e con-tinua como a terapia de primeira linha para redução cirúrgica de pressão intra-ocular farma-cologicamente descontrolada em glaucoma primário de ângulo aberto. Este procedimentoestabelece uma fístula Iimbal pela qual o humor aquoso drena dentro do espaço subconjun-tival estabelecendo uma vesícula de filtração para abaixar pressão intra-ocular. O sucessodo procedimento é altamente dependente da modulação farmacológica de cura de ferida.

Um avanço principal na administração cirúrgica de glaucoma foi o uso de antimeta-bólitos para prevenir cicatrização depois de cirurgia de filtração de glaucoma. A cicatrizaçãopós-operatória da vesícula de filtração é o fator mais crucial na determinação do resultadode curto e longo prazo de cirurgia de filtração de glaucoma moderna. A mitomicina de anti-metabólitos C (MMC) e 5-fluorouracil (5-FU) são os agentes mais amplamente usados parasuprimir a cicatrização e a falha da vesícula de filtração. Em um grande estudo retrospecti-vo, a trabeculectomia convencionalmente realizada mostrou uma taxa de falha de até 30%dentro de 3 meses depois da cirurgia. Para abaixar a incidência desta complicação prejudi-cial, foram investigados vários métodos para evitar a cicatrização de ocorrência natural davesícula de filtração, lidando principalmente com a aplicação intra-operatória ou pós-operatória de drogas antimétabólicas -- quer dizer, 5-fluorouracil (5-FU) ou mitomicina C(MMC), os dois agentes citotóxicos mais amplamente usados.

Apesar do seu efeito a longo prazo positivo em filtração prolongada, a aplicação dedrogas citotóxicas a um olho cirurgicamente aberto aumenta a incidência de complicaçõesseveras tal como aumentos concomitantes em complicações de ameaça à visão. MMC e 5-FU exibem uma incidência elevada de complicações pós-aplicação severas; os seus efeitoscolaterais afetam principalmente o epitélio córneo e os seus usos clínicos estão limitados ador severa e incômodo ao paciente. Nenhum método suficiente foi estabelecido para alcan-çar resultados cirúrgicos a longo prazo pós-operatórios adequados somente com mínimo ounenhum efeito colateral para o paciente.

As Patentes U.S. Nos 6.586.425; 6.110.912; e 5.798.380 descrevem um métodopara o tratamento de glaucoma que usa compostos que afetam a integridade de filamentode actina do olho para realçar o fluxo de humor aquoso. Estas patentes também especifi-camente descrevem inibidores de cinase e latrunculin-A, latrunculin-B, swinholide-A, e jas-paquinolídeo que causam uma perturbação do citoesqueleto de actina no tecido trabecularou a modulação de suas interações com a membrana subjacente. A perturbação do citoes-queleto e as adesões associadas reduzem a resistência do tecido trabecular ao fluxo defluido e desse modo reduz a pressão intra-ocular.

Latrunculinas são solúveis em sulfóxido de dimetila (DMSO)1 porém elas têm umasolubilidade aquosa muito baixa, devido em grande parte à natureza lipofílica das Iatrunculi-nas que são compostos macrocíclicos grandes. DMSO não é permissível em uma formula-ção oftálmica para uso humano. Latrunculina-B é tipicamente dissolvido em DMSO comouma solução acionária, e armazenada a -20°C para estabilidade a longo prazo (Okka, e ou-tros, Trans. Am. Ophthalmol. Soe. 102: 251-259 (2004)). As formulações de Iatrunculina lí-quidas conhecidas não são formulações farmacêuticas aceitáveis por causa de um ou maisdos seguintes problemas: efeitos colaterais não desejados tal como toxicidade devido aoveículo ou adjuvante, baixa solubilidade da Iatrunculina sem o uso de DMSO, e estabilidadepobre devido à degradação de Iatrunculin com o passar do tempo.

Há uma necessidade por uma formulação farmacêutica que possa ser usado paratratar glaucoma, modular cura de ferida depois de trabeculectomia, e tratar outras doençasou distúrbios que são afetados pela integridade do citoesqueleto de actina.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção é voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que com-preende pelo menos uma Iatrunculina e a formulação não contém uma quantidade significa-tiva de sulfóxido de dimetila. A presente invenção fornece uma formulação farmacêuticaaquosa que compreende pelo menos uma Iatrunculina e um ou mais agentes que realçam asolubilidade de Iatrunculinas em um meio aquoso. A formulação não contém uma quantida-de significativa de qualquer agente inaceitável para uso farmacêutico, particularmente, of-tálmico. A formulação fornece Iatrunculinas com uma atividade suficiente para uso terapêuti-co e é estável durante pelo menos seis meses em temperatura refrigerada.

A presente invenção está voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que com-preende pelo menos uma Iatrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume,um tensoativo não iônico em uma quantidade de 0,01-2% em peso/volume, e agente de to-nicidade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG, a um pH entre 4 a 8, em quea latrunculina, o tensoativo, e o agente de tonicidade são compatíveis na formulação, e aformulação não contém uma quantidade significativa de sulfóxido de dimetila.

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica aquosa compreende pelo menosuma latrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, 1-100 mM de tampãoadequado para manter o pH entre 4-6, 0,01-2% em peso/volume de tensoativo não iônico, eagente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG. Um tampãopreferido é tampão de citrato. Os agentes de tonicidade preferidos são manitol e dextrose.

Em outra modalidade, a formulação farmacêutica aquosa compreende pelo menosuma Iatrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, 5-10% de etanol e umagente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG. A formulaçãoopcionalmente compreende 1-100 mM de tampão para manter o pH entre 4-8.

Em ainda outra modalidade, a formulação farmacêutica aquosa compreende pelomenos uma Iatrunculina em uma quantidade de 0.001-2% em peso/volume, 1-10% de poli-propileno glicol, 0,02-0,25% de polaxâmero, 0,1-1% de polissorbato, e um agente de tonici-dade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG, em que o pH da formulaçãoseja 4-8.

Em ainda outra modalidade, a formulação farmacêutica aquosa compreende 0,001-2% de latrunculina, uma ciclodextrina, 0,01-0,5% de preservativo, e agente de tonicidadepara manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG, em que o pH da formulação seja 4-8.

A presente invenção fornece um método para reduzir pressão intra-ocular, um mé-todo para tratar glaucoma, um método para inibir cura de ferida depois de trabeculectomia, eum método para inibir angiogênese. O método compreende a etapa de administrar a umindivíduo em necessidade do tratamento a formulação farmacêutica aquosa da presenteinvenção, em uma quantidade efetiva para alterar o citoesqueleto de actina, por exemplo,inibindo a polimerização de actina.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 mostra a pressão intra-ocular (IOP,% de linha base) vs. tempo pós-tratamento, de coelhos cingidos Holandeses tratados com 0,02% de latrunculina B em 5%de formulação de etanol, e com veículo.

Figura 2 mostra a pressão intra-ocular (IOP,% de linha base) vs. tempo pós-tratamento, de coelhos cingidos Holandese tratados com 0,02% de latrunculina B dentrosolução salina tamponada por fosfato (pH ~7) contendo propileno glicol, poloxâmero 407 epolissorbato 80, e com veículo.

Figura 3 mostra pressão intra-ocular (IOP,% de linha base) vs. tempo pós-tratamento, de coelhos cingidos Holandeses tratados com 0,02% de latrunculina B dentrosolução tamponada de citrato (pH -5,5) contendo 4,5% em peso/volume de manitol, 1% empeso/volume de polissorbato 80, 0,05% em peso/volume de edetato de dissódio, e 0,01%em peso/volume de cloreto de benzalcônio, e com veículo.

Figure 4 mostra pressão intra-ocular (IOP,% de linha base) vs. tempo pós-tratamento, de coelhos cingidos Holandeses tratados com 0,02% de latrunculina B de des-metila em 5% de formulação de etanol, e com veículo.

Figura 5 mostra pressão intra-ocular (IOP,% de linha base) vs. tempo pós-tratamento, de coelhos cingidos Holandeses tratados com 0,1% de latrunculina B de cis-des-metila em solução tamponada por citrato (pH -5,5) contendo 4,5% em peso/volume de ma-nitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80, 0,05% em peso/volume de edetato de dissó-dio, e 0,01% em peso/volume de cloreto de benzalcônio, e com veículo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A menos que de outro modo especificado, o % da quantidade neste pedido se refe-re ao % (peso/volume). Os inventores descobriram uma formulação de Iatrunculina aquosaque não requer o uso de DMSO. Os inventores descobriram uma formulação de Iatrunculinaaquosa de não DMSO que é estável durante um período significante de tempo a temperatu-ra ambiente e temperatura refrigerada. Os inventores descobriram uma formulação de Ia-trunculina aquosa que é útil para o tratamento de certas condições inibindo a polimerizaçãode filamentos de actina, tal como glaucoma. Os inventores descobriram uma formulação deIatrunculina aquosa que é bem tolerada para uso ocular.

Esta invenção está voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que compreen-de um composto macrocíclico, especificamente Iatrunculinas e análogos de latrunculina.

Esta invenção fornece uma formulação que contém um ou mais agentes que realçam a so-Iubilidade de compostos de latrunculina em um meio aquoso. A formulação não contémuma quantidade significativa de agentes inaceitáveis para usos farmacêuticos, particular-mente, oftálmicos. A invenção fornece uma formulação aquosa estável de latrunculinas; aformulação é adequada para uso terapêutico e permanece estável sob condições de arma-zenamento de uso normais durante um período prolongado de tempo.

As formulações farmacêuticas aquosas da presente invenção excluem o uso de ad-juvantes solubilizantes impróprios tal como metanol e dimetilsulfóxido que podem causarresultados toxicológicos e dano de tecido quando usados em humanos ou mamíferos duran-te um a longo prazo. Estas formulações farmacêuticas contêm latrunculinas em uma solu-ção aquosa a uma concentração suficiente, e mostram um efeito farmacológico na reduçãode pressão intra-ocular em mamíferos. Para administração tópica, uma a duas gotas destasformulações são liberadas à superfície do olho uma a quatro vezes por dia de acordo com adiscrição rotineira de um clínico qualificado. Estas formulações farmacêuticas aquosas sãonão irritantes e toleráveis aos olhos, e são adequadas para instilação múltipla.

As latrunculinas são macrolidas ativas citoesqueléticas. Latrunculinas são agentesde rompimento de actina específicos e potentes que seqüestram G-actina monomérica, le-vando à separação de filamentos de actina. As latrunculinas naturais são isoladas de es-ponjas marinhas tal como Latrunculia magnífica, Negombata magnífica, e Spongid mycofiji-ensis, e de nudibranches, por exemplo, Chromodoris lochi. Os análogos de Latrunculinapodem ser preparados através de métodos sintéticos (A.B. Smith Ill e outros, J. Am. Chem.Soe. 1992, 114, 2995-3007; J.D. White e M. Kawasaki, J Org. Chem. 1992, 57, 5292-5300;A. Fürstner e outros, Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 42, 5358- 5380).As Iatrunculinas1 como usado neste pedido, se referem às Iatrunculinas naturais eanálogos de latruneulina. As Iatruneulinas preferidas desta invenção são Iatruneulina B1 Ia-trunculinas A, latruneulina B de des-metila, ou um sal farmaceuticamente aceitável, tautôme-ro, solvato, ou hidrato destes.

Latruneulina B

Copiar o composto da página 6.

Latruneulina A

Copiar o composto da página 7.

Latruneulina B de des-metil B

Copiar o composto da página 7.

Os análogos de Latruneulina, como usado nesta aplicação,se referem aos compos-tos sintéticos cujas estruturas são semelhantes àquelas de Iatruneulinas naturais, comodescrito em D. Blasberger, e outros, Liebigs Ann. Chem. 1171-1188 (1989); Fürstner, e ou-tros, PNAS, 102: 8103-8108 (2005); e Publicação Patente U.S. US2006-0217427; os teoresdos quais estão aqui incorporados por referências.

A presente invenção está voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que com-preende pelo menos uma latruneulina e a formulação não contém uma quantidade significa-tiva de sulfóxido de dimetila. Como usado aqui, "uma quantidade significativa" se refere amais do que 0,1%, preferivelmente 0,01%, e mais preferivelmente 0,001%. A formulaçãofarmacêutica aquosa da presente invenção não contém mais do que 0,1%, preferivelmente0,01%, e mais preferivelmente 0,001% em v/v de DMSO. Em uma modalidade preferida, aformulação farmacêutica aquosa da presente invenção não contém nenhum sulfóxido dedimetila.

A presente invenção está voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que com-preende pelo menos uma latruneulina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, eagente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG, em que o pH daformulação é 4-9, e a formulação não contém uma quantidade significativa de sulfóxido dedimetila. Quando a formulação farmacêutica é oftalmicamente usada, o pH da formulação épreferivelmente 4-8, e a tonicidade é preferivelmente 220-380 mOsm/kG.

A presente invenção está voltada a uma formulação farmacêutica aquosa que com-preende pelo menos uma latruneulina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, 1-100 mM de um tampão adequado para manter o pH entre 4-8, preferivelmente manter pHentre 4-6, 0,01-2% em peso/volume de um tensoativo não iônico, e agente de tonicidadepara manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG. Esta formulação farmacêutica nãocontém uma quantidade significativa de DMSO e preferivelmente contém não mais do que5% (v/v) de etanol, e mais preferivelmente não mais do que 2%, 1%, de etanol.

É importante que os componentes da presente formulação sejam compatíveis entresi. Compatível, como usado aqui, se refere à compatibilidade física e compatibilidade dequímica. Compatibilidade física significa que os componentes não formam precipitados ouco-acervados, e não causa separação de fase, sedimentação, ou descoloração. Compatibi-lidade química significa que os componentes não causam degradação das Iatrunculinas ouinativam a atividade biológica das latrunculinas.

Os tensoativos (agentes tensoativos) adequados para a presente invenção podemser não iônicos ou iônicos. Porém, os tensoativos iônicos são menos preferidos. O uso emlongo prazo de agentes catiônicos, especialmente tensoativos catiônicos, é conhecido bempor causar dano epitelial córneo. Os tensoativos aniônicos são freqüentemente não compa-tíveis com outros componentes da presente formulação. Os tensoativos preferidos para apresente invenção são não iônicos. Os tensoativos não iônicos adequados incluem, porémnão estão limitados a polissorbato 80, polissorbato 60, polissorbato 20, tiloxapol, estearatosde polioxila, monoestearato de glicerila, óleo de rícino de polioxila, triglicerídeo caprílico depolietileno glicol, e poloxâmeros. Os tensoativos não iônicos preferidos são polissorbatos epoloxâmeros. Estes tensoativos são condensados de óxido alcalino não iônicos de umcomposto orgânico que contém grupos hidroxila. Os tensoativos não iônicos realçam a so-Iubilidade de latrunculinas. Os tensoativos não iônicos freqüentemente protegem as molé-culas de Iatrunculina de degradação química mantendo as moléculas de Iatrunculina em umambiente micelar, que melhora a estabilidade física e química. A concentração do tensoati-vo (s) na formulação é cerca de 0,01-2%, preferivelmente 0,05-1,5%, e mais preferivelmente0,1 -1% (peso/volume). A concentração do tensoativo apropriada é determinada pela solubi-Iidade da Iatrunculina na presença do tensoativo, por neutralização dos efeitos bactericidasnos preservativos acompanhantes, e/ou pelas concentrações que podem causar irritação aum humano. As formulações farmacêuticas feitas na presença de um tensoativo não iônicopodem ser ajustadas a um pH alvo de 4-8 sem comprometer a solubilidade das latrunculinas.

Nem todos os tensoativos não iônicos são adequados para a formulação de Iatrun-culina, devido à sua não compatibilidade com latrunculinas ou outros componentes na for-mulação, ou devido à sua inadequação ao uso humano. Por exemplo, os tensoativos nãoiônicos tal como monoestearato de sorbitan, trioleato de sorbitan, monooleato de sorbitan,cocoato de glicerila de polietileno glicol, e outras classes de tensoativos não são compatí-veis com a formulação de Iatrunculina porque estes tensoativos não formam uma soluçãoclara e formam co-acervados e/ou precipitados quando misturados com outros componentesda formulação. Além disso, tensoativo não iônico TRITON® (éter de fenila de octila de polio-xietileno) não é adequado para uso humano.

A concentração de latrunculina(s) na formulação aquosa é em geral 0,001-2%, pre-ferivelmente 0,005-0,2%, mais preferivelmente 0,005-0,1%, e mais preferivelmente 0,005-0,02% (peso/volume).

Os tampãos adequados para manter o pH entre 4-8 incluem fosfato, tampão de ci-trato, tampão de acetato, tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combinações destes.

O tampão de fosfato ou tampão de citrato é preferido. Para estabilidade em longo prazo, aformulação é preferida ter um pH de 4-6. Os tampões adequados para manter o pH entre 4-6 incluem tampão de citrato, tampão de acetato, tampão de citrato/fosfato, tampão de male-ato, tampão de tartarato, ou combinações destes. A concentração adequada do tampão é1-100 mM, preferivelmente 5-50 mM, mais preferivelmente 5-25 mM, e preferivelmente 10-20 mM.

O agente de tonicidade está presente em uma quantidade para alcançar uma toni-cidade entre 200-400, preferivelmente 220-380, e mais preferivelmente 250-340 mOsm/kG.

O agente de tonicidade pode ser não iônico ou iônico. Um agente de tonicidade não iônicoé preferido porque é freqüentemente mais compatível com tensoativos do que o agente detonicidade iônico. Os agentes de tonicidade não iônicos incluem dióis, tal como glicerol,manitol, eritritol; e açúcares tal como dextrose. Outros agentes de tonicidade não iônicos talcomo glicerol, polietileno glicol, propileno glicol, que também funciona como cosolventes,também podem ser usados. O agente de tonicidade não iônico está em geral em uma quan-tidade de 2-20%, preferivelmente 3-10%, mais preferivelmente 3,5-5% (peso/volume). Osagentes não iônicos preferidos são manitol e dextrose, em uma quantidade de 2-6%.

O agente de tonicidade também pode ser os agentes iônicos tal como cloreto desódio, cloreto de potássio, ou solução de sal equilibrada. Os agentes de tonicidade iônicospodem estar presentes em uma quantidade de 0,5-0,9%, preferivelmente 0,6-0,9% (pe-so/volume).

O tensoativo, o agente de tonicidade, o co-solvente, e qualquer outro ingrediente in-traduzido na formulação tem que ter uma solubilidade boa em água, tem que ter compatibili-dade com outros componentes, e tem que ter efeitos moderados na viscosidade final daformulação. A formulação precisa ter uma viscosidade final apropriada tal que a formulaçãopossa ser liberada como uma gota tópica que usa uma garrafa de conta-gotas oftálmica típi-ca e que seja esterelizável no filtro. A formulação é preferivelmente uma solução clara semqualquer precipitado.

A formulação farmacêutica da presente invenção opcionalmente compreende umagente de quelação. Um agente de quelação é uma substância que pode formar várias li-gações coordenadas a um íon de metal. Os agentes de quelação oferecem uma faixa am-pla de sequestrantes para controlar íons de metal em sistemas aquosos. Formando-se oscomplexos estáveis solúveis em água com íons de metal multivalentes, os agentes de que-lação previnem a interação indesajada bloqueando-se a reatividade normal de íons de me-tal. O ácido etilenodinitrilotetraacético (EDTA), ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA),e N,N-bis(carboximetil)glicina (NTA) são exemplos de agentes de quelação para as presen-tes invenções. EDTA (tetraacetato de etilenodiamina) é um agente de quelação preferido.

Os regulamentos de saúde em vários países requerem que preparações oftálmicasde multi-dose incluam um preservativo. Muitos preservativos bem conhecidos que foramusados em algumas outras preparações oftálmicas na presente invenção não podem serusados, porque esses preservativos não são considerados seguros para repetidamente usoocular, ou eles interagem com o tensoativo empregado para formar um complexo, que reduza atividade bactericida do preservativo. Em uma modalidade, cloreto de benzalcônio é em-pregado como um preservativo seguro; preferivelmente, cloreto de benzalcônio é emprega-do com EDTA. Outros preservativos adequados incluíram álcool de benzila, parabenos demetila, parabenos de propila, timerosal, clorobutanol, e cloreto de benzetônio. Tipicamente,tais preservativos são usados a um nível de 0,001-1%, preferivelmente, 0,01-0,25%, e prefe-rivelmente 0,05-0,2% (peso/volume).

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica compreende 0,5-0,9% de modifi-cador de tonicidade iônico tal como cloreto de sódio; a formulação contém os agentes detamponamento adicionais (tal como fosfato de sódio e/ou citrato de sódio e ácido cítrico) a 1-100 mM, um tensoativo não iônico em uma faixa de 0,01-2%, agente de quelação em umafaixa de 0,005 - 0,5% em peso/volume, e ajustadores de pH. Uma tal composição aquosatem uma tonicidade de 250-350 mOsm/kG e é formulada a pH 4-6.

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica compreende 4-5% de agente detonicidade não iônico tal como manitol; a formulação contém os agentes de tamponamento(tal como fosfato de sódio e/ou citrato de sódio e ácido cítrico) em uma gama de 5-50 mM,um tensoativo em uma faixa de 0,01-2%, agente de quelação em uma faixa de 0,005-0,5%em peso/volume, e ajustadores de pH. Uma tal composição aquosa tem uma tonicidade de250-350 mOsm/kG e é formulada a pH 4 - 6. A formulação opcionalmente contém um pre-servativo em uma faixa de 0,001-0,1% peso/volume.

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica compreende 0,001-2% em pe-so/volume de um latrunculina, 0,1-2% de polissorbato 80, e um agente de tonicidade paramanter uma tonicidade entre 200 - 400 mOsm/kG. A formulação opcionalmente compreen-de 1-100 mM de tampão para manter o pH entre 4-6. O tampão adequado inclui fosfato,tampão de citrato, tampão de acetato, tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combina-ções destes. O tampão de fosfato ou citrato é preferido.

A presente invenção está também voltada a uma formulação farmacêutica aquosaque compreende pelo menos uma latrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em pe-so/volume, 5-25% de etanol (v/v) e agente de tonicidade para manter uma tonicidade entre200-400 mOsm/kG. Para aplicação oftálmica, a concentração de etanol é preferida ser 5-10%. A formulação opcionalmente de compreende 1-100 mM de tampão de para manter opH entre 4-8. O tampão adequado inclui fosfato, tampão de citrato, tampão de acetato,tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combinações destes. O tampão de fosfato outampão de citrato é preferido. A formulação não contém uma quantidade significativa deDMSO. Em uma modalidade, a formulação contém 0,005-0,02% de latrunculina, 5-10% deetanol, e 0,5-0,9% de cloreto de sódio.

A presente invenção está também voltada a uma formulação farmacêutica aquosaque compreende pelo menos uma latrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em pe-so/volume, 1-10% (v/v) de propyileno glicol, 0,02-0,25% (peso/volume) de polaxâmero, eagente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200 - 400 mOsm/kG. A formulaçãoopcionalmente compreende 1-100 mM de tampão para manter o pH entre 4-8, e/ou 0,1-1%de tensoativo tal como polissorbato 80. O tampão adequado inclui fosfato, tampão de citra-to, tampão de acetato, tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combinações destes. Otampão de fosfato ou tampão de citrato é preferido. A formulação não contém nenhum DMSO.

A presente invenção está também voltada a uma formulação farmacêutica aquosaque compreende pelo menos uma latrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em pe-so/volume, uma ciclodextrina em uma quantidade de 0,005-5%, preferivelmente 0,01-2% empeso/volume, preservativo tal como cloreto de benzalcônio em uma quantidade de 0,01-0,5% em peso/volume, e agente de tonicidade para manter uma tonicidade entre 200-400mOsm/kG. As ciclodextrinas que formam complexos com Iatrunculinas e aumentam a solu-bilidade aquosa de latrunculina são adequadas para a presente invenção. Por exemplo,0,01-2% de ciclodextrina de hidroxipropil-beta ou 0,01-1% de éster sulfobutilado de ciclodex-trina de hidroxipropil-beta são incluídos na formulação aquosa. A formulação opcionalmentecompreende 1-100 mM de tampão de para manter o pH entre 4-8. O tampão adequado in-clui fosfato, tampão de citrato, tampão de acetato, tampão de maleato, tampão de tartarato,ou combinação destes. O tampão de fosfato ou citrato é preferido. A formulação não con-tém uma quantidade substancial de DMSO. A formulação opcionalmente compreende umtensoativo tal TWEEN® (polissorbato)-20, TWEEN® (polissorbato)-40, TWEEN® (polissorba-to)-60, Span (monooleato de sorbitano)-20, Span (monooleato de sorbitano)-40, tiloxapol,pirrolidona de polivinila, e álcool de polivinila.

A presente invenção esta voltada também a uma emulsão incluindo microemulsãoou emulsão diluída, na qual são formuladas Iatrunculinas com adjuvantes para formar umuniforme, reproduzível, e formulação farmacêutica saudável que é fisicamente e quimica-mente estável. Os adjuvantes adequados incluem tensoativos, agentes emulsificantes, eóleos sintéticos e vegetais adequados que são farmaceuticamente aceitável. A emulsão éformulada em uma solução aquosa a um pH entre 4-8, preferivelmente 4-7, e mais preferi-velmente entre pH 4-6. A formulação opcionalmente compreende tampão de 1-100 mM pa-ra manter o pH entre 4-8. O tampão adequado inclui fosfato, tampão de citrato, tampão deacetato, tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combinação destes. O tampão de fos-fato ou citrato é preferido. A formulação não contém uma quantidade substancial de DMSO.A emulsão opcionalmente contém um preservativo adequado e um ou mais agentes de anti-oxidante. Tal uma emulsão pode ser preparada empregando técnicas de emulsificação roti-neiras incluindo, porém não limitado a homogeneização cisalhamento elevado, ultrasonica-ção, homogeneização de pressão elevada, agitação mecânica seguida por emulsificação depressão elevada, ou técnicas tal como interações de fluido-fluido ou microfluidificação.

Em uma modalidade, a formulação de emulsão compreende 0,001-2% latrunculina,1-10% de óleo de rícino ou 10-20% de óleo mineral, 1-5% de carbômeros ou 1-10% álcoolcetílico, 0,1-1% de polissorbato 80, 0,1-1% gliceril monoestearato ou 0,1-2% estearato depolioxil, e um agente de tonicidade tal como propileno glicol ou glicerina para manter umatonicidade entre 200-400 mOsm/kG; o pH da formulação é 4-7.

As formulações farmacêuticas da presente invenção são estáveis sob temperaturade armazenamento refrigerada durante pelo menos três meses, preferivelmente 6 meses, emais preferivelmente 12 meses. Estável, como empregado aqui, refere-se a pelo menos70%, preferivelmente 80%, mais preferivelmente 90% das moléculas de latrunculina perma-necem intacto sem degradação.

As formulações farmacêuticas da presente invenção são adequadas para armaze-namento a temperatura refrigerada ou em temperatura ambiente, porém não são estáveisquando submetido a um ciclos de congelamento-descongelamento, como exibido pela nãohomogeneidade das moléculas de latrunculina e alterações na eficácia preservativa da for-mulação.

As formulações farmacêuticas da presente invenção são feitas através de técnicaasséptica ou são esterilizados terminalmente. Os níveis de pureza de todos os materiaisempregados na preparação excedem 90%. As soluções da invenção são preparadas mistu-rando-se completamente a latrunculina, tampão, modificador de tonicidade, tensoativo, oagente de quelação; opcionalmente, polímeros não iônicos, agentes de complexação, agen-tes solubilizante, agente antioxidante e preservativos.

A formulação farmacêutica pode ser esterilizada filtrando-se a formulação atravésde um filtro de grau de esterilização, preferivelmente de um tamanho de poro nominal de0,22 mícron. A formulação farmacêutica pode também ser esterilizada por esterilizaçãoterminalmente empregando um ou mais técnicas de esterilização incluindo, porém não limi-tado a um processo térmico, ou um processo de esterilização de radiação, ou empregandoluz pulsada para produzir uma formulação estéril.

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica da presente invenção é adminis-trada localmente ao olho (por exemplo, topicamente, intracameralmente, ou por um implan-te) na forma de preparações oftálmicas. A formulação farmacêutica pode ser combinadacom realçadores de viscosidade oftalmologicamente aceitável, ou realçadores de penetra-ção para formar uma suspensão ou solução oftálmica. A formulação farmacêutica estápronta para uso, sem diluição adicional ou qualquer outra manipulação.

O glaucoma é uma doença oftálmica que conduz o comprometimento visual irrever-sível. O glaucoma de ângulo aberto é caracterizado por resistência elevada de anormal-mente ao fluido (humor aquoso) drenagem do olho. As adesões entre células do tecido tra-becular são determinantes principal da resistência para fluir. As formulações farmacêuticasda presente invenção causam uma perturbação farmacológica, transitória, de adesões decélula, principalmente por rompimento da estrutura de citoesquelético associado ou a modu-lação das interações com a membrana. A perturbação destas adesões reduz a resistênciado tecido trabecular o fluxo de fluido e desse modo reduz a pressão intra-ocular em umamaneira útil terapeuticamente.

As formulações farmacêuticas da presente invenção são úteis para modulação decura de ferida após trabeculectomia. As formulações farmacêuticas em geral são menostóxicas a células de endotelial das córneas que os antimetabólitos tal como 5-fluorouracil oumitomicina C. As formulações farmacêuticas inibem contractilidade voltada actomisina,conduzindo a deterioração do sistema de microfilamento de actina e perturbação de seuancoradouro de membrana, que debilita as adesões de matriz extracelulares de célula. Es-tas propriedades inibem cura de ferida e desse modo reduz a falha de vesícula seguinte acirurgia. Angiogênese é caracterizado pelo desenvolvimento de vasculatura novo de recipi-entes pré-existindo e desempenham um papel central em processos fisiológicos tal comoembriogênese, função reprodutiva feminina e cura de ferida, bem como casos de fisiopato-lógica incluindo câncer, artrite reumática e retinopatia diabético. O desenvolvimento e me-tástase de tumores são extremamente dependentes em angiogênese. A angiogênese é umprocesso de multi-etapa envolvendo a célula de endotelial (EC) citoesqueleto em migração,proliferação, e estabilização de barreira. Acredita-se que os requerentes de interações entreo citoesqueleto e apoptose são envolvidos nas séries de reações intracelulares pelos quaisocorrem formações de tubo angiogênica. As formulações farmacêuticas da presente inven-ção são úteis em angiogênese inibidora e tumores tratados.

As drogas anti-mitótico notadamente interfere com resposta antidiurética, fortemen-te indica aquela integridade de citoesqueleto é essencial a esta função. Este papel do cito-esqueleto controlando o transporte de epitelial é uma etapa necessária na translocação docanal de água contendo partícula agregada e na sua liberação para a membrana apical. Oregulamento do citoesqueleto de actina é importante na modulação de transporte fluido. Areorganização dependente de osmolaridade do citoesqueleto e expressão de proteínas detensão específicas são componentes importantes dos sistemas regulador envolvidos na a-daptação de células de medular a tensão osmótica. As formulações farmacêuticas da pre-sente invenção são úteis direcionalmente e transporte de fluido modulado.

A presente invenção fornece um método de reduzir pressão intra-ocular, um méto-do de tratar glaucoma, um método de inibir a cura de ferida após trabeculectomia, um méto-do de inibir angiogênese, um método de tratar câncer, e um método de função de epitelialdirecionalmente e transporte fluido modulado. O método compreende a etapa de adminis-trar a um indivíduo com necessidade de tratamento a formulação farmacêutica da presenteinvenção, em uma quantidade efetiva para alterar o citoesqueleto de actina, tal como inibin-do-se polimerização de actina.

A formulação farmacêutica da presente invenção é útil como agentes para pressãointra-ocular elevada, e é desse modo útil no tratamento ou prevenção de condições oftálmi-cas associadas ou glaucoma.

A formulação farmacêutica da presente invenção é útil no tratamento ou prevençãode doenças de neurodegenerativo como uma conseqüência de pressão intra-ocular aumen-tada e danifica aos neurônios oculares.

As formulações farmacêuticas da presente invenção podem também ser emprega-das na área de cosméticas para reduzir rugas, na área de preservar plaquetas sangüíneas,e na área de vasoespasmo e espasmo muscular liso por meios de e rota de administraçãoconhecidas por aqueles versados na técnica.

A formulação farmacêutica descrita aqui pode ser administrada aos olhos de um to-picamente paciente por quaisquer meios adequados, porém são preferivelmente administra-dos na forma de gotas, spray ou gel. Consequentemente, a formulação farmacêutica podeser aplicada ao olho através de lipossomas. Além disso, a formulação farmacêutica podeser infundida na película de lágrima através de um sistema de cateter de bomba. Em outramodalidade, a formulação farmacêutica é contida dentro de dispositivo de liberação seletivaou contínua, por exemplo, as membranas tal como, porém não limitada a, esses emprega-dos no Ocusert™ Sistema (Alza Corp., Palo Alto, CA) ou Retisert (Bausch & Lomb, Roches-ter, NY). Como uma modalidade adicional, a formulação farmacêutica pode ser contida den-tro de, levado por, ou ligado a lentes de contato que são colocadas no olho. Outra modali-dade da presente invenção envolve a formulação farmacêutica contida dentro de uma es-ponja ou cotonete que pode ser aplicado à superfície ocular. Outra modalidade da presenteinvenção envolve a formulação farmacêutica contida dentro de um spray líquido que podeser aplicado à superfície ocular. Outra modalidade da presente invenção envolve uma inje-ção da formulação farmacêutica diretamente nos tecidos Iacrimais ou sobre a superfície doolho.

Em uma modalidade, a formulação farmacêutica é administrada sistemicamente aum indivíduo. O termo sistêmico como empregado aqui inclui injeção subcutânea, intrave-noso, injeção intravitreal, injeção intracameral, injeções de subconjunctival, administraçãotópica, e administração oral.

A liberação de intravitreal pode incluir injeções de intravitreal únicas ou múltiplas, ouatravés de um dispositivo de intravitreal de implantavel que liberta compostos de alvejamen-to citoesqueleto em uma capacidade contínua. A liberação de intravitreal pode também in-cluir liberação durante manipulações cirúrgicas como ou um suplemento para a solução deirrigação intra-ocular ou aplicar diretamente para o vítreo durante o procedimento cirúrgico.Uma aproximação similar pode ser levada para uma injeção de subconjunctival ou retrobul-bar.

A invenção é ilustrada adicionalmente pelos exemplos seguintes que não devemser interpretados como limitando a invenção no escopo para os procedimentos específicosdescritos neles. Sem elaboração adicional, acredita-se que aquele versado na técnica pode,empregando a descrição precedente, utiliza a presente invenção a sua extensão completa.As seguintes modalidades específicas preferidas consequentemente são para ser interpre-tados como meramente ilustrativo, e não limitado do resto da descrição em qualquer forma.

Exemplos

Exemplo 1. Preparação de formulação de Iatrunculina B1 0,02% em uma formulaçãode veículo de etanol 5%

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B foi adicionado 250 microlitros deetanol de graduação 200 que segue a solução foi misturado em temperatura ambiente. Pa-ra isto 750 microlitros foi adicionado de uma solução salina tamponada por fosfato cujo pHfoi aproximadamente 7; a solução foi misturada em temperatura ambiente durante cerca de5 minutos. A solução resultante foi clareada e foi 0,1% com respeito a Iatrunculina B. Estasolução foi empregada como é ou diluída a uma concentração de 0,02% empregando a for-mulação salina tamponada por fosfato.

Exemplo 2. Preparação de solução de Iatrunculina B em uma formulação de veículoaquoso

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B foi adicionado 100 microlitros depropileno glicol que segue a solução foi misturada em temperatura ambiente. A IatrunculinaB imediatamente entrou em solução. A solução foi resfriada a aproximadamente 5°C em umbanho de gelo. Para isto foi adicionado 450 microlitros de uma solução salina tamponadapor fosfato (pH ~7) contendo 0,25% em peso/volume poloxâmero 407 e misturado durante10 minutos ao mesmo tempo em que mantendo a temperatura às aproximadamente 5°C.

Para isto foi adicionado 450 microlitros de uma solução salina tamponada por fosfato (pH-7) contendo 1% em peso/volume de polissorbato 80 e misturado durante 10 minutos acondições de temperatura ambientes. A solução resultante foi clareada e foi 0,1% com res-peito a Iatrunculina B. Esta solução foi empregada como é ou diluída a uma concentraçãode 0,02% empregando a solução salina tamponada por fosfato (pH -7).

Exemplo 3. Preparação de formulação de Iatrunculina B em uma formulação de ve-ículo aquoso

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B foi adicionado 50 microlitros depropileno glicol e 40 microlitros de glicerina que segue a solução foi misturada em tempera-tura ambiente. A Iatrunculina B entrou em solução. A solução foi resfriada a aproximada-mente 5°C em um banho de gelo. A isto foi adicionado 910 microlitros de uma solução salinatamponada por fosfato (pH ~7) contendo 0,2% em peso/volume de poloxâmero 407 e 1%em peso/volume de polissorbato 80. Seguindo a adição, a solução foi misturada às 5°C du-rante cerca de 10 minutos e então permitiu a misturar em temperatura ambiente durante uns10 minutos adicionais. A solução resultante foi clareada e foi 0,1% com respeito a Iatruncu-Iina B. Esta solução foi empregada como é ou diluída a uma concentração de 0,02% oumenor empregando a solução salina tamponada por fosfato (pH ~7) contendo 0,2% em pe-so/volume de poloxâmero 407 e 1% em peso/volume de polissorbato 80.

Exemplo 4. Preparação de preparação preservada de Iatrunculina B em uma formu-lação de veículo aquoso

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B foi adicionado 1 mL de um aproxi-madamente 10 mM de solução de tampão de citrato contendo 4,5% em peso/volume demanitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80, 0,05% em peso/volume de edetato de dis-sódico, e 0,1% em peso/volume de cloreto de benzalcônio (pH -5.5) e misturado em tempe-ratura ambiente durante cerca de 15 minutos. A solução foi clareada e incolor. A soluçãofoi 0,1% com respeito a Iatrunculina B e teve um pH de aproximadamente 5,5. Esta soluçãofoi empregado como é ou diluída a 0,02% em peso/volume ou uma concentração menor (talcomo 0,005% em peso/volume) empregando a solução tamponada por citrato (pH -5,5) con-tendo 4,5% em peso/volume de manitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80, 0,05% empeso/volume de edetato de dissódico, e 0,01% em peso/volume de cloreto de benzalcônio.

As soluções contendo 0,02% (Solução A) e 0,005% (Solução B) Iatrunculina B fo-ram testadas a estabilidade. A degradação de Iatrunculina B foi medida por HPLC. Os re-sultados mostram que a solução A mantém 95%, e a solução B mantém 100% da quantida-de inicial de Iatrunculina B, após armazenamento às 2-8°C durante 6 meses.

Exemplo 5. Preparação de solução de Iatrunculina B de des-metil, 0,02% em umaformulação de veículo de etanol 5%

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B de des-metil foi adicionado 250 mi-crolitros de etanol de graduação 200 que segue a solução misturada em temperatura ambi-ente. Para isto foi adicionado 750 microlitros de uma solução salina tamponada por fosfatocujo pH foi aproximadamente 7; a solução foi misturada em temperatura ambiente durantecerca de 5 minutos. A solução resultante foi clareada e foi 0,1% com respeito a IatrunculinaΒ. Esta solução foi empregada como é ou diluída a uma concentração de 0,02% empre-gando a formulação salina tamponada por fosfato formulação.

Exemplo 6. Preparação de solução de Iatrunculina B de cis-des-metil em uma for-mulação de veículo aquoso

Para um frasco contendo 1 mg de Iatrunculina B de cis-des-metil foi adicionado 1mL de um aproximadamente 10 mM de solução de tampão de citrato contendo 4,5% empeso/volume de manitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80, 0,05% em peso/volume deedetato de dissódico, e 0,01% em peso/volume de cloreto de benzalcônio (pH -5,5) e mistu-rado em temperatura ambiente durante cerca de 15 minutos. A solução foi clareada e inco-lor. A solução foi 0,1% com respeito a Iatrunculina B e teve um pH de aproximadamente5,5. Esta solução foi empregada como é ou diluída a uma concentração de 0,02% ou menorempregando a solução tamponada por citrato (pH -5,5) contendo 4,5% em peso/volume demanitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80, 0,05% em peso/volume de edetato de dis-sódico, e 0,01% em peso/volume de cloreto de benzalcônio.

Exemplo 7. Efeitos de formulações de compostos de alvejamentos citoesqueléticoem pressão Intra-ocular In Vivo

Preparação Animal e Instrumentação: Para todas as experiências em vivo e avalia-ção de tolerabilidade das formulações e estudando os efeitos dos compostos nestas formu-lações em pressão intra-ocular, as experiências foram administradas em coelhos tipo Ho-landês. Os animais empregados nestas avaliações foram alojados individualmente em umacriação onde eles foram expostos a um ciclo normal, luz e escuro não reserva 12-hora e têmacesso livre para alimentar e água. A medida de pressão intra-ocular foi realizada empre-gando um que tonômetro TonoPen XL comercialmente disponível.

Protocolo Experimental·. Os coelhos são removidos da sua gaiola e contidos em umsaco de pano durante alguns minutos antes de medidas de IOP para minimizar tensão indu-zidos aumentos em IOP. As córneas dos olhos dos coelhos são anestesiadas com 0,25%de proparacaina HCI. Após esperar durante cerca de 2 minutos para permitir o anestésicopara fazer efeito, a pálpebra é mantida aberta o auxílio mão dominante e o Tono-Pen é to-cado à córnea central múltiplas vezes em sucessão para registrar leituras. Ou uma formula-ção farmacêutica contendo Iatrunculina B ou um veículo de controle é administrada paracada animal como um ou mais gotas nos olhos tópicos. Tipicamente, empregando uma pi-peta, 20 microlitros (2 gotas χ 10 microlitros cada) é administrado à córnea central em apro-ximadamente 30 segundos de intervalos. O cintilante é prevenido para maximizar penetra-ção; um volume igual da mesma solução composta de teste ou veículo é instilado em ambosos olhos. As medidas de IOP são feitas antes para instilação (-1 hora, 0 hora) e 1, 2-2,5, 3,4,5, e 6 horas pós-instilação. Os animais são devolvidos à gaiola após cada séries de me-didas. Além disso, as medidas de IOP, em exames oculares breve são realizadas antes dedosar e durante o curso da administração e ao término do estudo. As avaliações são focali-zadas para observar as condições dos olhos, sinais oculares especificamente tal como ver-melhidão, quemose, descarga conjuntival, e opacidades córneas.

Resultados

Figura 1 mostra os efeitos de redução de pressão intra-ocular em coelhos tipo Ho-landês tratados com 0,02% de Iatrunculina B em 5% de formulação de etanol e com veículo.

Figura 2 mostra os efeitos de redução de pressão intra-ocular em coelhos tipo Ho-landês tratados com 0,02% Iatrunculina B em solução salina tamponada por fosfato (pH -7)contendo propileno glicol, poloxâmero 407 e polissorbato 80 e com veículo (Exemplo 3).

Figura 3 mostra os efeitos de redução de pressão intra-ocular em coelhos tipo Ho-landês-cingidos tratados com 0,02% Iatrunculina B em solução tamponada por citrato (pH-5,5) contendo 4,5% em peso/volume de manitol, 1% em peso/volume de polissorbato 80,0,05% em peso/volume de edetato de dissódico, e 0,01% em peso/volume de cloreto debenzalcônio e com veículo (Exemplo 4).

Figura 4 mostra os efeitos de redução de pressão intra-ocular em coelhos tipo Ho-landês tratados com 0,02% de Iatrunculina B de des-metil em 5% de formulação de etanol ecom veículo. (Exemplo 5).

Figura 5 mostra os efeitos de redução de pressão intra-ocular em coelhos tipo Ho-landês tratados com 0,1% Iatrunculina B de cis-des-metil B em solução tamponada por citra-to (pH -5,5) contendo 4,5% em peso/volume de manitol, 1% em peso/volume de polissorba-to 80, 0,05% em peso/volume de edetato de dissódico, e 0,01% em peso/volume de cloreto debenzalcônio e com veículo. (Exemplo 6).

A invenção, e a maneira e processo de fazer e empregar, são descritos agora emtal totalidade, clarear, conciso e termos exatos como para permitir qualquer pessoa versadana técnica a qual pertence, para fazer e usar o mesmo. Será entendido que as modalidadespreferidas descritas anteriormente da presente invenção e que modificações podem ser fei-tas aqui sem afasta-se do escopo da presente invenção como apresentado nas reivindica-ções. Para pontos particularmente e reivindicação distintamente o material objeto conside-rado como invenção, as reivindicações seguintes concluir esta especificação.

Claims (18)

1. Formulação farmacêutica aquosa, CARACTERIZADA pelo fato de que compre-ende pelo menos uma Iatrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, umtensoativo não iônico em uma quantidade de 0,01-2% em peso/volume, e agente de tonici-dade para manter uma tonicidade entre 200-400 mOsm/kG, a um pH entre 4 a 8, onde alatrunculina, o tensoativo, e o agente de tonicidade são compatíveis na formulação, e a for-mulação não contém uma quantidade substancial de sulfóxido de dimetila.

2. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que a referida formulação não contém mais do que 0,001%volume/volume de sulfóxido de dimetila.

3. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que a referida formulação não contém nenhum sulfóxido dedimetila.

4. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que o referido tensoativo não iônico é selecionado do grupoconsistindo em: polissorbatos, tiloxapol, óleo de rícino de polioxil, poloxâmeros, triglicerídeode caprílico polietileno glicol, estearatos de polioxil, monoestearato de gliceril, e combinaçãodestes.

5. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que o referido tensoativo não iônico é um polissorbato, umpoloxâmero, ou uma combinação destes.

6. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-5, CARACTERIZADA pelo fato de que adicionalmente compreende 1-100 mM detampão adequado para manter o pH entre 4-6.

7. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 6,CARACTERIZADA pelo fato de que o tampão é tampão de citrato, tampão de acetato, tam-pão de citrato/fosfato, tampão de maleato, tampão de tartarato, ou combinação destes.

8. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-7, CARACTERIZADA pelo fato de que adicionalmente compreende um agente dequelação e/ou um preservativo.

9. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-8, CARACTERIZADA pelo fato de que o referido agente de tonicidade é um agentede tonicidade não iônico.

10. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 9,CARACTERIZADA pelo fato de que o referido agente de tonicidade não iônico é manitol oudextrose.

11. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-10, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida formulação é estável durante pelomenos 6 meses às 2-8°C.

12. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que o referido tensoativo é poloxâmero em uma quantidadede 0,02-0,25% em peso/volume, e a formulação também compreende 1-10% volume/volumede propileno glicol.

13. Formulação farmacêutica aquosa, CARACTERIZADA pelo fato de que compre-ende pelo menos uma Iatrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, 5--10%volume/volume de etanol, e um agente de tonicidade para manter uma tonicidade entre-200-400 mOsm/kG, onde o pH da formulação é 4-8, e a formulação não contém uma quan-tidade substancial de DMSO.

14. Formulação farmacêutica aquosa, CARACTERIZADA pelo fato de que compre-ende pelo menos uma Iatrunculina em uma quantidade de 0,001-2% em peso/volume, umciclodextrina, um preservativo, e um agente de tonicidade para manter uma tonicidade entre-200-400 mOsm/kG, onde o pH da formulação é 4-8, e a formulação não contém uma quan-tidade substancial de DMSO.

15. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-14, CARACTERIZADA pelo fato de que a referida Iatrunculina é Iatrunculina A, Ia-trunculina B, Iatrunculina B de des-metil, ou análogos de latrunculina.

16. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 15,CARACTERIZADA pelo fato de que a referida latrunculina é latrunculina A, latrunculina B,ou latrunculina de des-metil o B.

17. Formulação farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 15,CARACTERIZADA pelo fato de que a referida latrunculina está em uma quantidade de-0,005-0,02% (em peso/volume).

18. Método de reduzir pressão intra-ocular em um mamífero, CARACTERIZADOpelo fato de que compreende a etapa de administrar a um mamífero com necessidade detratamento a formulação farmacêutica aquosa de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1-17, em uma quantidade efetiva para alterar o citoesqueleto de actina.