BRPI0708493A2

BRPI0708493A2 - compostos para inibição da produção de beta-amilóide

Info

Publication number: BRPI0708493A2
Application number: BRPI0708493-5A
Authority: BR
Inventors: Daniel Paris; Pancham Bakshi; Michael J Mullan
Original assignee: Roskamp Res Llc
Priority date: 2006-03-01
Filing date: 2007-02-28
Publication date: 2011-05-31
Also published as: CA2644240A1; WO2007103683A2; JP2009528380A; US20090017112A1; CN101400349A; EP1993548A2; AU2007223556A1; WO2007103683A3; KR20080098049A

Abstract

COMPOSTOS PARA INIBIçãO DA PRODUçãO DE BETA-AMILóIDE São fornecidos compostos úteis para o tratamento de doenças associadas com um acúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer, como doença de Alzheimer. Também são fornecidos métodos de tratamento ou de redução do risco de desenvolver produção de <225>-amilóide, depósito de <225>-amilóide, neurotoxicidade de <225>-amilóide (incluindo hiperfosforilação anormal de tau) e microgliose associados com acúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer por administração de quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos. Também são fornecidos métodos para diagnóstico de doenças associadas com acúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer em animais ou humanos por administração de quantidades eficazes diagnósticamente dos compostos.

Description

COMPOSTOS PARA INIBIÇÃO DA PRODUÇÃO DE BETA-AMILÓIDE

Este pedido reivindica o benefício de prioridade parapedido de patente provisório US 60/777.772, depositado em 1de março de 2006, que é aqui incorporado por referência emsua totalidade.

Campo da invenção

A presente invenção relaciona-se a compostos para otratamento de doenças associadas com acúmulo cerebral deamilóide de Alzheimer, como doença de Alzheimer, e métodosde uso dos compostos para o tratamento e diagnóstico dedoenças associadas com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer.

Descrição da técnica relacionada

Doença de Alzheimer (DA) é o distúrbioneurodegenerativo mais comum do envelhecimento, afetandoaproximadamente 1% da população com mais de 65 anos. Traçoscaracterísticos da doença incluem agregados neurofibrilarescompostos de proteína tau anormal, filamentos helicoidaispareados, perda neuronal, e alteração em múltiplos sistemasneurotransmissores. A hiperfosforilação de proteína tauassociada a microtúbulo é um marcador conhecido do estágiopré-agregado neuronal patogênico em cérebro com DA (Tan ecols., "Microglial Activation Resulting from CD40R/CD40LInteraction after Beta-Amyloid Stimulation," Science (1999)286:2352-55) .

Uma característica patológica significativa de DA éuma sobreabundância de placas senis difusas e compactas emassociação com áreas límbicas do cérebro. Embora essasplacas contenham múltiplas proteínas, seus núcleos sãocompostos primariamente de proteína δ-amilóide, umfragmento proteolítico de 39-43 aminoácidos que éproteoliticamente derivado de proteína precursora amilóide(APP) , uma glicoproteína de transmembrana. Adicionalmente,fragmentos C-terminais (CTF) de APP são conhecidos por seacumularem intraneuronalmente em DA.

δ-amilóide é derivado de APP, uma proteína detransmembrana única com um domínio terminal aminoextracelular de 590 a 680 aminoácidos e um ta.ilcitoplasmático de aproximadamente 55 aminoácidos. RNAmensageiro do gene APP no cromossomo 21 sofre splicingalternativo para gerar oito possíveis isoformas, três dasquais (as isoformas de aminoácido 695, 751 e 770)predominam no cérebro. APP sofre processamento proteolíticovia três atividades enzimáticas, denominadas α-, β e γ-secretase. Alfa-secretase cliva APP no aminoácido 17 dodomínio β-amilóide, assim liberando o fragmento amino-terminal grande solúvel α-APP para secreção. Pelo fato dea α-secretase clivar no domínio β-amilóide, essa clivagemremove a formação de β-amilóide. Alternativamente, APP podeser clivado por β-secretase para definir o terminal aminode β-amilóide e para gerar o fragmento aminoterminalsolúvel β-APP. Subseqüente clivagem do domínio intracelularcarboxi-terminal de APP por γ-secretase resulta na geraçãode múltiplos peptídeos, os dois mais comuns sendo um β-amilóide de 40 aminoácidos (Αβΐ-40) e β-amilóide de 42aminoácidos (Αβΐ-42). Αβΐ-40 compreende 90-95% do β-amilóide secretado e é a espécie predominante recuperada defluido cérebro-espinhal (Seubert e cols., Nature, 359:325-7, 1992) . Em contraste, menos de 10% do β-amilóidesecretado é Αβ1-42. A despeito da relativa paucity daprodução de ΑβΙ-42, Αβ1-42 é a espécie predominanteencontrada em placas e é depositada inicialmente, talvezdevido à sua capacidade de formar agregados de amilóideinsolúveis mais rapidamente que Αβ1-40 (Jarrett e cols.,Biochemistry, 32:4693-7, 1993). Acredita-se que o acúmuloanormal de β-amilóide no cérebro seja devido ao clearancediminuído de β-amilóide do cérebro para a periferia ouprodução excessiva de β-amilóide. Vários estudos sugeremque a produção excessiva de β-amilóide é devida àsuperexpressão de APP ou processamento alterado de APP, oumutação em suas secretases ou APP responsável por formaçãode β-amilóide.

Acredita-se, portanto, que peptídeos de β-amilóide têmum papel crítico na patobiologia de DA, uma vez que todasas mutações associadas com a forma familiar de DA resultamno processamento alterado desses peptídeos de APP. De fato,depósitos de fibrilas insolúveis, ou agregadas de β-amilóide no cérebro, são uma característica neuropatológicaproeminente de todas as formas de DA, sem levar emconsideração a predisposição genética do indivíduo. Tambémfoi sugerido que DA é devida às propriedades neurotóxicasde β-amilóide. A citotoxicidade de β-amilóide foiprimeiramente estabelecida em culturas de células primáriasde cérebros de roedores e também em culturas de célulashumanas. O trabalho de Mattson e cols. (J. Neurosci.,12:376-389, 1992) indica que β-amilóide, na presença doneurotransmissor excitatório glutamato, causa um aumentopatológico imediato no cálcio intracelular, o que acredita-se ser muito tóxico para uma célula através de suasatividades de segundo mensageiro amplamente aumentadas.Concomitante com a produção de β-amilóide e depósitode β-amilóide, existe forte ativação de vias inflamatóriasem cérebro de DA, incluindo produção de citocinas pró-inflamatórias e reagentes de fase aguda nos depósitos de β-amilóide e ao seu redor (McGeer e cols., J. LeukocyteBiol., 65:409-15, 1999). Acredita-se que a ativação dascélulas imunes inatas residentes no cérebro, a microglia,está intimamente envolvida nessa cascata inflamatória. Foidemonstrado que microglia reativa produz citocinas pró-inflamatórias, como proteínas inflamatórias e reagentes defase aguda, como alfa-l-anticquimiotripsina, fator β decrescimento transformante, apolipoproteína E e fatores decomplemento, todos tendo mostrado estar localizados emplacas β-amilóides e promovido a "condensação" ou maturaçãode placa β-amilóide (Nilsson e cols., J. Neurosci. 21:1444-5, 2001), e que em altos níveis promovem neurodegeneração.Estudos epidemiológicos mostraram que pacientes que usammedicamentos antiinflamatórios não esteróides (NSAIDS) têmum risco de 50% reduzido para DA (Rogers e cols.,Neurobiol. Aging 17:681-6, 1996), e a avaliação pós-mortede pacientes com DA que se submeteram a tratamento comNSAID demonstrou que a redução do risco está associada comnúmeros diminuídos de microglia ativada (Mackenzie e cols.,Neurology 50:986-90, 1998). Além disso, quando camundongosTg APPsw, um modelo de camundongos para doença deAlzheimer, recebem um NSAID (ibuprofeno) , esses animaismostram redução nos depósitos de β-amilóide, astrocitose, eneurites distróficas relacionadas com ativação diminuída damicroglia (Lim e cols., J. Neurosci. 20:5709-14, 2000).

No momento, tratamento para DA é limitado. No entanto,há vários medicamentos aprovados pelo FDA para melhorar ouestabilizar os sintomas de DA (Alzheimer's diseaseMedications Fact Sheet: (July 2 004) U.S. Department ofHealth and Human Services), incluindo Aricept® (donepezil),Exelon® (rivastigmine), Reminil® (galantamina) Cognex®(tacrine) e Namenda (memantine). Os efeitos com váriosmedicamentos atualmente em uso são pequenos (Tariot ecols. , JAMA (2004), 291: 317-24). 0 tratamento para DApermanece uma necessidade clinica não preenchida.

O pedido de Patente U.S. No. 2005009885 (13 de janeirode 2005) (Mullan e cols.) revela um método para redução dodepósito de beta-amilóide com o uso de nilvadipina, bemcomo métodos de diagnóstico de doenças amiloidogênicascerebrais com o uso de nilvadipina. Nimodipina foi estudadapara o tratamento de demência. Fritze e cols., J. NeuralTransm. (1995) 46: 439-453; e Forette e cols. Lancet (1998)352: 1347-1351.

O aumento da capacidade da entrada de cálcio (CCE)através da identificação de agonista de canais de cálciooperados por compartimento de membrana plasmática quemedeiam CCE foi sugerido como um tratamento para DA (Tanzie cols. Neuron (2000) 27: 561-572). Publicação de Pedido dePatente U.S. No. 20020015941 (7 de fevereiro de 2002)revela um método para o tratamento de uma doençaneurodegenerativa como DA que envolve a administração de umagente que é capaz de potenciar CCE.

Continua a ser uma necessidade a identificação decompostos que possam tratar a progressão inexorável dadegeneração cerebral que é um marca da DA, em que otratamento controla a produção de β-amilóide e o depósitoconcomitante de β-amilóide, neurotoxicidade de β-amilóide(incluindo hiperfosforilação anormal de tau) , inflamaçãoativada por microglia, e APP alterado ou superexpressão deAPP que é observada em pacientes com DA.

Sumário

São fornecidos compostos que são úteis nos métodospara o tratamento de doenças associadas com o acúmulo deamilóide de Alzheimer.

Em uma modalidade, é fornecido um composto de fórmulaI ou um sal, éster ou pró-fármaco deste:

<formula>formula see original document page 7</formula>

Fórmula I

ou um composto de fórmula II ou um sal, éster ou pró-fármaco deste:

<formula>formula see original document page 7</formula>

Fórmula II

em que:

η é 3, 4 ou 5;

R é alquil opcionalmente substituído, por exemplo,metil, etil, isopropil, butil, isobutil; alquenilopcionalmente substituído; alquinil opcionalmentesubstituído; cicloalquil opcionalmente substituído;heteroalquil opcionalmente substituído; aril opcionalmentesubstituído; heteroaril opcionalmente substituído; ou acilopcionalmente substituído; e

Am é o resíduo de uma amina, como uma alqui laminaopcionalmente substituída.

Em uma modalidade, os compostos aqui fornecidosincluem os seguintes:

<formula>formula see original document page 8</formula><formula>formula see original document page 9</formula>

Também são fornecidos métodos de tratamento de umadoença associada com acúmulo cerebral de β-amilóide emanimais ou humanos que sofrem de uma doença, como DA, poradministração de uma quantidade terapeuticamente eficaz depelo menos um composto aqui revelado, como um composto defórmula I, II, III ou IV como aqui revelado.

O método pode incluir em uma modalidade um ou mais daredução da produção de β-amilóide, deposição de β-amilóide,neurotoxicidade de β-amilóide (incluindo hiperfosforilaçãoanormal de tau) e microgliose. Pelo fato de a maioria dasdoenças que têm acúmulo de amilóide de Alzheimer, como DA,ser demências cerebrais crônicas, progressivas,intratáveis, é contemplado que a duração do tratamento compelo menos um dos agentes ativos pode durar opcionalmentepor toda a vida do animal ou humano.

Em uma outra modalidade, é fornecido um método para otratamento de uma doença associada com acúmulo cerebral deamilóide de Alzheimer, que compreende a administração aoanimal ou humano de uma quantidade terapeuticamente eficazde pelo menos um composto aqui revelado, ou um sal, ésterou pró-fármaco deste. Preferivelmente, o agente ativo seopõe aos efeitos fisiopatológicos do acúmulo cerebral deamilóide de Alzheimer, e pode, por exemplo, reduzir aprodução de β-amilóide, deposição de β-amilóide,neurotoxicidade de β-amilóide e/ou microgliose em animais ehumanos afetados com a doença.

Em uma outra modalidade, é fornecido um métododiagnóstico para uma doença associada com acúmulo cerebralde amilóide de Alzheimer em um animal ou humano, quecompreende: uma primeira medição de plasma, urina, soro,sangue total ou liquido cefalorraquidiano (CSF)concentração de β-amilóide na circulação periférica doanimal ou humano; administração de uma quantidadediagnosticamente eficaz em forma de dosagem unitária depelo menos um composto ativo aqui revelado, ou sal, pró-fármaco ou derivado deste, ao animal ou humano; tomando umasegunda medição da concentração plasmática, do soro, sanguetotal, urina ou CSF de β-amilóide na circulação periféricado animal ou humano; e cálculo da diferença entre aprimeira medição e a segunda medição, em que uma mudança naconcentração plasmática, do soro, sangue total, urina ouCSF de β-amilóide na segunda medição comparada à primeiramedição, como um aumento ou diminuição na concentração,indica um possível diagnóstico de uma doença associada comacúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer no animal ouhumano.

Em uma modalidade adicional, é fornecido um métodopara o tratamento de dano cerebral traumático, quecompreende a administração ao animal ou humano de umaquantidade terapeuticamente eficaz em forma de dosagemunitária de pelo menos um composto aqui revelado, ou sal,éster ou pró-fármaco deste. Em uma modalidade, aadministração do agente ativo inicia imediatamente após odano. Em uma modalidade, o composto reduz o risco deprodução de β-amilóide, deposição de β-amilóide,neurotoxicidade de β-amilóide e/ou microgliose.

O composto opcionalmente é um que reduza opcionalmentea produção de β-amilóide em pelo menos cerca de 5%, 10%,15%, 20%, 25%, 30% ou 50%, em células que superexpressamAPP ou um fragmento deste, como medido, por exemplo, em ummeio de cultura que compreende as células.

Em uma modalidade, o composto reduz opcionalmente aProdução de Β-amilóide, por exemplo, produção de Αβι.40 eΑβ1-42 total, em pelo menos cerca de 20% ou mais em célulasque superexpressam APP ou um fragmento deste.

Opcionalmente, as células são células ovarianas dehamster chinês que superexpressam APP751, ou sãoselecionadas de células precursoras neuronais humanas(HNPC); cultura primária de astrócitos humanos; células deneuroblastoma; cultura primária endotelial microvascular decérebro humano; ou células endoteliais de cordão umbilicalhumano (HUVEC).

Em uma modalidade, o composto é administrado em umaquantidade de cerca de 0,02 a 1.000 mg por dose unitária;ou cerca de 0,5 a 500 mg por dose unitária. Opcionalmente,são fornecidas formulações farmacêuticas que compreendem oscompostos que contêm, por exemplo, 7-3.000 mg, ou, porexemplo, 10-1.000 mg, ou 100-500 mg de composto ativo.

A quantidade terapeuticamente eficaz de composto que éadministrado, por exemplo, em forma de dosagem unitária aanimais ou humanos que possuem uma doença amiloidogênicacerebral ou que sofrem de um dano cerebral traumático, bemcomo administrado para o objetivo de determinação do riscode desenvolvimento e/ou a um diagnóstico de uma doençaamiloidogênica cerebral em um animal ou humano, podevariar, por exemplo, de cerca de 0,05 mg a 20 mg por dia,cerca de 2 mg a 15 mg por dia, cerca de 4 mg a 12 mg pordia, ou cerca de 8 mg por dia. A dosagem diária em umamodalidade pode ser administrada em uma dose unitária únicaou dividida em duas, três ou quatro doses unitárias pordia.

A doença associada com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer é, por exemplo, doença de Alzheimer, angiopatiaamilóide cerebral, hemorragia cerebral hereditária comamiloidose tipo Holandesa, outras formas de doença deAlzheimer familiar e angiopatia amilóide cerebral deAlzheimer familiar. Doenças amiloidogênicas cerebrais quepodem ser tratadas ou diagnosticadas incluem encefalopatiaespongiforme transmissível, scrapie, dano cerebraltraumático, angiopatia amilóide cerebral, e síndrome deGerstmann-Straussler-Scheinker.

Breve descrição dos desenhos

Figura 1 é um gráfico em barra que mostra o efeito decompostos 1-38, 1-50C e 1-36 sobre a produção de Αβ1-40 porcélulas de ovário de hamster chinês 7W WT APP 751 (7W WTAPP 751 CH0).

Figura 2 é um gráfico em barra que mostra o efeito decompostos em diferentes concentrações sobre a produçãode Αβ1-40 por células CHO 7W WT APP751.

Figura 3 é um gráfico que mostra o efeito de várioscompostos sobre a produção de Αβΐ-4 0 por células CHO 7W WTAPP7 51 em várias concentrações.

Figura 4 é um gráfico em barra que mostra o efeito devários compostos sobre a produção de Αβΐ-4 0 por células CHO7W WT APP7 51 em várias concentrações.Figura 5 é um gráfico em barra que mostra o efeito devários compostos sobre a produção de Αβ1-4 0 por células CHO7W WT APP7 51 em várias concentrações.

Figura 6 é um gráfico em barra que mostra os níveis debeta-amilóide plasmático (Αβ) (% de controle) apóstratamento com compostos 1-52C e 1-76D em um experimento invivo.

Figura 7 é um gráfico em barra que mostra níveiscerebrais de beta-amilóide (Αβ) hidrossolúvel apóstratamento com compostos 1-52C e 1-76D em um experimento invivo.

Descrição detalhada

São fornecidos compostos que podem diminuir a produçãode β-amilóide em células de mamífero e podem ser usados nodiagnóstico e tratamento de doenças associadas com oacúmulo de β-amilóide em indivíduos. São fornecidoscompostos e composições farmacêuticas que compreendem oscompostos que podem ser usados em uma modalidade paratratar a progressão inexorável da degeneração cerebral queé uma característica distintiva de certas doençasassociadas com acúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer,como doença de Alzheimer (DA), em animais e humanos.

Definições

Como aqui usado, o termo "amilóide de Alzheimer" édefinido como um fragmento de aminoácido de β-amilóide queé, por exemplo, proteoliticamente derivado de proteínaprecursora amilóide (APP). Um fragmento de aminoácido de β-amilóide pode incluir, por exemplo, cerca de 5 a 43 ou 5 a47 aminoácidos consecutivos da seqüência de β-amilóide.Como aqui usado, os termos "β-amilóide", "proteína β-amilóide" e "Αβ" são usados de forma intercambiável comamilóide de Alzheimer que se acumula no cérebro em umanimal ou humano.

Como aqui usado a frase uma célula que "superexpressaAPP ou fragmento desta" refere-se a uma célula quesuperexpressa uma proteína precursora amilóide, oufragmento desta, que, em uma modalidade preferida, incluiuma seqüência de β-amilóide e sítios de clivagem de β e γsecretase. A célula que superexpressa APP ou um fragmentodesta expressa preferivelmente uma APP ou fragmento destaque produz β-amilóide em uma célula em que ela é expressa.

Como aqui usado, o termo "doença amiloidogênica"inclui uma doença associada com acúmulo cerebral deamilóide de Alzheimer.

O termo "alquil", como aqui usado, a menos queespecificado de outra forma, inclui um hidrocarbonetosaturado linear, ramificado, ou cíclico, primário,secundário ou terciário, de C1-22, e especificamente incluimetil, etil, propil, isopropil, ciclopropil, butil,isobutil, secbutil, t- butil, pentil, ciclopentil,isopentil, neopentil, hexil, isohexil, ciclohexil,ciclohexilmetil, heptil, cicloheptil, octil, ciclo-octil,dodecil, tridecil, pentadecil, icosil, hemicosil e decosil.Quando o grupo alquil é referenciado como sendoopcionalmente substituído, então o grupo é opcionalmentesubstituído com, por exemplo, halogênio (flúor, cloro,bromo ou iodo), hidroxi, amino, alquilamino, arilamino,alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato,heterociclo, fenil, aril, ácido fosfônico, fosfato oufosfonato, não protegidos, ou protegidos como necessário,como conhecido por aqueles habilitados na técnica, porexemplo, como ensinado em Greene, e cols., ProtectiveGroups in Organic Synthesis, John Wiley e Sons, segundaedição, 1991, aqui incorporado por referência.

O termo "alquil inferior", como aqui usado, e a menosque especificado de outra forma, inclui um grupo Ci a C4alquil saturado linear, ramificado, ou, se adequado, umgrupo alquil cíclico (por exemplo, ciclopropil).

O termo "aralquil" como aqui usado a menos queespecificado de outra forma inclui um grupo aril ligado àmolécula através de um grupo alquil.

O termo "alcaril" como aqui usado a menos queespecificado de outra forma inclui um grupo alquil ligado àmolécula através de um grupo aril.

O termo "aril éter", como nesta especificação, a menosque especificado de outra forma, inclui um grupo arilligado à molécula através de um grupo éter.

O termo "alquil éter", como nesta especificação, amenos que especificado de outra forma, inclui um grupoalquil ligado à molécula através de um grupo éter.

O termo "aril tioéter", como nesta especificação, amenos que especificado de outra forma, inclui um grupo arilligado à molécula através de um enxofre.

O termo "alquil tioéter", como nesta especificação, amenos que especificado de outra forma, inclui um grupoalquil ligado à molécula através de um enxofre.

O termo "amino" inclui um grupo "-N(R')2", e incluiaminas primárias, e aminas secundárias e terciárias, que éopcionalmente substituído, por exemplo, com grupos alquil,aril, heterociclo e/ou sulfonil. Portanto, (R')2 podeincluir, mas não é limitado a, dois hidrogênios, umhidrogênio e um alquil, um hidrogênio e um aril, umhidrogênio e um alquenil, dois alquil, dois aril, doisalquenil, um alquil e um alquenil, um alquil e um aril, ouum aril e um alquenil.

Quando uma faixa de átomos de carbono é referida, elainclui independentemente e separadamente todo membro dafaixa. Como um exemplo não limitante, o termo "Cx -cioalquil" é considerado como incluindo, independentemente,cada membro do grupo, de modo que, por exemplo, Ci-Ci0alquil inclua linear, ramificado e quando adequadofuncionalidades de Cif C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9 e Ci0alquil cíclico.

0 termo "amido" inclui uma porção representada pelaestrutura "-C (O) N (R' ) 2", em que R' pode incluirindependentemente H, alquil, alquenil, e aril que éopcionalmente substituído.

0 termo "protegido" como aqui usado e a menos quedefinido de outro modo inclui um grupo que é adicionado aum átomo como um átomo de oxigênio, nitrogênio ou fósforopara evitar sua reação adicional ou para outros objetivos.Uma ampla variedade de grupos de proteção de oxigênio enitrogênio é conhecida por aqueles de habilidade na técnicade síntese orgânica.

0 termo "aril", como aqui usado, e a menos queespecificado de outra forma, inclui um anel de carbonoestável monocíclico, bicíclico ou tricíclico com até 8membros em cada anel, e pelo menos um anel sendo aromático.

Exemplos incluem, mas não são limitados a, benzil, fenil,bifenil ou naftil. Quando referenciado como sendoopcionalmente substituído, o grupo aril pode sersubstituído com uma ou mais porções que incluem halogênio(flúor, cloro, bromo ou iodo), hidroxi, amino, alquilamino,arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfônico,sulfato, ácido fosfônico, fosfato ou fosfonato, nãoprotegido ou protegido como necessário, como conhecido poraqueles habilitados na técnica, por exemplo, como ensinadoem Greene, e cols., Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley e Sons, segunda edição, 1991.

O termo "halo", como aqui usado, inclui cloro, bromo,iodo e flúor.

O termo "alquenil" inclui um hidrocarboneto linearramificado ou cíclico de C2-22 com pelo menos uma ligaçãodupla. Exemplos incluem, mas não são limitados a, vinil,alil e metil-vinil. Quando indicado como sendoopcionalmente substituído, o grupo alquenil pode seropcionalmente substituído da mesma maneira como acimadescrito para os grupos alquil.

O termo "alquinil" inclui um hidrocarboneto C2-22

O linear ou ramificado com pelo menos uma ligação tripla.Quando indicado como sendo opcionalmente substituído, ogrupo alquinil pode ser opcionalmente substituído da mesmamaneira como acima descrito para os grupos alquil.

O termo "alcoxi" inclui uma porção da estrutura -O-alquil.

O termo "heterociclo" ou "heterocíclico" inclui umanel heterocíclico bicíclico de 8 a 11 membros ou de 5 a 7membros monocíclico saturado, insaturado ou aromáticoestável que consiste em átomos de carbono e de um a trêsheteroátomos que incluem, sem limitação, 0, S, N e P; e emque os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem seropcionalmente oxidados, e/ou os átomos de nitrogênioquaternizados e que incluem qualquer grupo bicíclico em quequalquer um dos anéis heterocíclicos acima definidos éfundido a um anel benzênico. O anel heterocíclico pode seranexado em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono queresulte na criação de uma estrutura estável. Exemplos naolimitantes ou grupos heterocíclicos incluem pirrolil,pirimidil, piridinil, imidazolil, piridil, furanil,pirazole, oxazolil, oxirano, isooxazolil, indolil,isoindolil, tiazolil, isotiazolil, quinolil, tetrazolil,bonzofuranil, tiofeno, piperazina, e pirrolidina.

O termo "acil" inclui um grupo de Fórmula R'C(O), emque R' é um H, ou um alquil ou aril linear, ramificado oucíclico, substituído ou não substituído.

O termo "hospedeiro", como aqui usado, a menos queespecificado de outra forma, inclui mamíferos (por exemplo,gatos, cães, cavalos, camundongos etc.), humanos, ou outrosorganismos em necessidade de tratamento, todos podendo sertratados ou diagnosticados com o uso dos métodos aquidescritos.

O termo "tratamento" como aqui usado inclui qualquermaneira em que um ou mais dos sintomas de uma doença oudistúrbio são melhorados ou alterados de forma benéfica.

O termo "sal farmaceuticamente aceitável", como aquiusado, a menos que especificado de outra forma, inclui saisde composto ativos que são preparados com ácidosrelativamente não tóxicos. Quando os compostos contêmfuncionalidades relativamente básicas, sais de adição ácidapodem ser obtidos por contato da forma neutra de taiscompostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado,puro ou em um solvente inerte adequado. Exemplos de sais deadição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem aquelesderivados de ácidos inorgânicos como clorídrico,hidrobrômico, nítricô, carbônico, monohidrogenocarbônico,fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico,sulfúrico, monohidrogenossulfúrico, hidriódico, ou ácidosde fósforo e outros, bem como os sais derivados de ácidosorgânicos relativamente não tóxicos como acético,propiônico, isobutírico, maleico, malônico, oxálico,benzóico, succínico, subérico, fumárico, mandélico,itálico, benzenossulfônico, p-tolilsulfônico, cítrico,tartárico, metanossulfônico, e outros. Também são incluídossais de aminoácidos como arginato e outros, e sais deácidos orgânicos como ácidos glicurônico ou galactunôrico eoutros (veja, por exemplo, Berge, S. M., e cols.,"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science,1977, 66, 1-19). As formas neutras dos compostos podem serregeneradas por contato do sal com uma base ou ácido eisolação do composto parente maneira convencional. 0 salfarmaceuticamente aceitável em uma modalidade é um sal queé, dentro do escopo do julgamento médico seguro, adequadopara uso em contato com os tecidos de um hospedeiro semtoxicidade, irritação, resposta alérgica e outros, e éproporcional com uma proporção risco/benefício razoável eeficaz para seu uso pretendido.

0 termo "ésteres farmaceuticamente aceitáveis" comoaqui usado, a menos que especificado de outra forma, incluiaqueles ésteres de um ou mais compostos, que são, dentro doescopo do julgamento médico seguro, adequados para uso emcontato com os tecidos de um hospedeiro sem toxicidade,irritação, resposta alérgica e outros, e são proporcionaiscom uma proporção risco/benefício razoável e eficazes paraseu uso pretendido.

O termo "pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis"como aqui usado, a menos que especificado de outra forma,inclui aqueles pró-fármacos de um ou mais compostos dacomposição que são, dentro do escopo do julgamento médicoseguro, adequados para uso em contato com os tecidos de umhospedeiro sem toxicidade, irritação, resposta alérgica eoutros, e são proporcionais com uma proporçãorisco/benefício razoável e eficazes para seu usopretendido. Pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveistambém incluem formas zwiteriônicas, quando possível, de umou mais compostos da composição. 0 termo "pró-fármaco"inclui compostos que são rapidamente transformados in vivopara gerar o composto parente, por exemplo, por hidróliseno sangue.

O termo "enantiomericamente enriquecido", como aquiusado, refere-se a um composto que é uma mistura deenantiômeros em que um enantiômero está presente emexcesso, e preferivelmente presente na extensão de 95% oumais, e mais preferivelmente 98% ou mais, incluindo 100%.

O termo "opcionalmente substituído", como aqui usado,inclui substituído e não substituído. Quando um grupo éreferenciado como "opcionalmente substituído", o grupo podeser opcionalmente substituído com, por exemplo, halogênio,hidroxil, amino, alquiléster, ariléster, sililéster,alquilamino, arilamino, alquilamido, arilamido, alcoxi,ariloxi, nitro, ciano, alquenil, alquinil, heterociclos,ácido sulfônico, sulfato, ácido fosfônico, fosfato, ácidoborônico ou borato.

Compostos

Vários compostos são fornecidos como aqui revelado eabaixo, que em uma modalidade podem ser usados em métodosaqui descritos, incluindo o tratamento ou diagnóstico dedoenças associadas com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer.

ou um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitáveldeste:

Fórmula I

ou um composto de fórmula II ou um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste:

Exemplos de compostos incluem um composto de fórmula I

Fórmula II

em que:

η é 3, 4 ou 5;

R é alquil opcionalmente substituído, por exemplo,metil, etil, isopropil, butil, isobutil; alquenilopcionalmente substituído; alquinil opcionalmentesubstituído; cicloalquil opcionalmente substituído;heteroalquil opcionalmente substituído; aril opcionalmentesubstituído; heteroaril opcionalmente substituído; ou acil;ou qualquer um dos grupos listados abaixo para R na tabela 1; e

Am é o resíduo de uma amina, como uma alqui laminaopcionalmente substituída, e em que Am é opcionalmenteselecionado de um dos grupos listados para Am na tabela 2abaixo, ou é opcionalmente selecionado dos grupos listadosna tabela 3 abaixo.

Em uma outra modalidade, é fornecido um composto defórmula III:

<formula>formula see original document page 22</formula>

Em que:

η é 3, 4 ou 5; e

Am é um resíduo de uma amina, como uma alqui 1 aminaopcionalmente substituída, ou Am é opcionalmenteselecionado dos grupos listados abaixo na tabela 2 ou 3.

Em uma modalidade de um composto de fórmula I ou II, Ré selecionado dos grupos listados abaixo na tabela 1.

TABELA 1

<table>table see original document page 22</column></row><table><table>table see original document page 23</column></row><table><formula>formula see original document page 24</formula><formula>formula see original document page 25</formula>

Em uma modalidade de um composto de fórmula I, II ouIII, Am é selecionado dos grupos listado abaixo na tabela 2ou dos grupos listados abaixo na tabela 3:

TABELA 2

<table>table see original document page 25</column></row><table><table>table see original document page 26</column></row><table>TABELA

<table>table see original document page 27</column></row><table><table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table><table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table>

Em uma outra modalidade, o composto é um composto defórmula IV, ou um sal, éster ou pró-fármaco deste:

<formula>formula see original document page 32</formula>

em que η é, por exemplo, 1, 2 ou 3;

em que R é alquil opcionalmente substituído, alquenilopcionalmente substituído ou alquinil opcionalmentesubstituído, ou, em uma modalidade, um Ci-I0 alquil, porexemplo, metil, etil, propil, butil, sec-butil, isopropilou isobutil;

em que R1 é H, alquil não substituído ou alquilsubstituído, como Cl, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9,C10 alquil substituído ou não substituído, incluindo decadeia linear, ramificada ou cicloalquil, ou é o mesmo queR2;

em que R2 é alquil não substituído ou alquilsubstituído, como Cl, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9,

ClO alquil substituído ou não substituído, incluindo decadeia linear, ramificada ou cicloalquil, em que osubstituinte é, por exemplo, um grupo aromático substituídoou não substituído; e

em que opcionalmente R1 e R2 juntos formam umheterociclo opcionalmente substituído, como um heterociclosaturado ou insaturado de anel opcionalmente substituído de5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 , 13 ou 14 membros, incluindo umou mais heteroátomos como nitrogênio.

Em uma submodalidade, no composto de fórmula IV:η é 1, 2 ou 3;

R é metil, etil, propil ou isopropil;

R1 é independentemente H ou Cl-ClO alquil nãosubstituído, por exemplo, metil, ou é o mesmo que R ;

R2 é C1-6 alquil substituído ou não substituído, emque, se substituído, o substituinte é, por exemplo, umgrupo aromático substituído ou não substituído, como benzilopcionalmente substituído com um, dois ou três grupos haloou alcoxi, como grupos metoxi.

Em uma outra modalidade, compostos de exemplo incluemos compostos mostrados abaixo ou um sal destes como um salde oxalato:<formula>formula see original document page 34</formula><formula>formula see original document page 35</formula><formula>formula see original document page 36</formula><formula>formula see original document page 37</formula><formula>formula see original document page 38</formula><formula>formula see original document page 39</formula>

Os compostos estão opcionalmente na forma de um sal,como um sal de oxalato, ou outro sal aqui revelado, como umsal de césio, cloridrato ou sulfato. Os compostos estãoopcionalmente na forma de um sal, éster ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável.

Certos compostos aqui revelados podem existir emformas não solvatadas bem como formas solvatadas, incluindoformas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas sãoequivalentes a formas não solvatadas e devem ser englobadasdentro do escopo da presente invenção. Certos compostospodem existir em múltiplas formas cristalinas ou amorfas.Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para osusos contemplados pela presente e devem ser englobadasdentro do escopo da presente invenção.

Certos compostos aqui revelados possuem átomos decarbono assimétricos (centro óticos) ou ligações duplas; osracematos, diastereômeros, isômeros geométricos e isômerosindividuais são todos englobados no escopo da presenteinvenção.

Os compostos aqui revelados também podem conterproporções não naturais de isótopos atômicos em um ou maisdos átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, oscompostos podem ser radiomarcados com isótopos radioativos,como, por exemplo, trítio (3H) , iodo-125 (125I) ou carbono-14 (14C). Todas as variações isotópicas dos compostos dapresente invenção, radioativos ou não, devem ser englobadasdentro do escopo da presente invenção.

Em uma modalidade, opcionalmente, o composto reduz aprodução de β amilóide, por exemplo, em pelo menos cerca de5%, 10%, 15%, 20% ou mais, em células que superexpressamAPP ou um fragmento desta.

Deve-se compreender que os compostos aqui reveladospodem conter centros quirais. Tais centros quirais podemser de configuração (R) ou (S) , ou podem ser uma misturadestes. Portanto, os compostos aqui fornecidos podem serenantiomericamente puros, ou misturas estereoisoméricas oudiastereoméricas. É entendido que a revelação de umcomposto nesta especificação engloba qualquer formaracêmica, oticamente ativa, polimórfica, ouestereoisomérica, ou misturas destas, que possuempreferivelmente as propriedades úteis aqui descritas, sendobem conhecido na técnica como preparar formas oticamenteativas e como determinar atividade com o uso dos testespadrão aqui descritos, ou com o uso de outros testessimilares que são bem conhecidos na técnica. Exemplos demétodos que pode ser usados para obter isômeros óticos doscompostos incluem os seguintes:

i) separação física de cristais - uma técnica em quecristais macroscópicos dos enantiômeros individuais sãomanualmente separados. Essa técnica pode ser usada se oscristais dos enantiômeros separados existem, ou seja, omaterial é um conglomerado, e os cristais são visualmentedistintos;

ii) cristalização simultânea - uma técnica segundo aqual os enantiômeros individuais são separadamentecristalizados a partir de uma solução do racemato, possívelapenas se o último for um conglomerado no estado sólido;

iii) resoluções enzimáticas — uma técnica segundo aqual separação parcial ou completa de um racemato emvirtude de diferentes taxas de reação para os enantiômeroscom uma enzima

iv) síntese enzimática assimétrica, uma técnicasintética em que pelo menos uma etapa da síntese usa umareação enzimática para obter um precursor

enantiomericamente puro ou sintético enriquecido doenantiômero desejado;

v) síntese assimétrica química — uma técnica sintéticaem que o enantiômero desejado é sintetizado a partir de umprecursor aquiral sob condições que produzem assimetria (ouseja, quiralidade) no produto, que pode ser atingida com ouso de catalisadores quirais ou auxiliares quirais;

vi) separações de diastereômeros — uma técnica em queum composto racêmico reage com um reagenteenantiomericamente puro (o auxiliar quiral) que converte osenantiômeros individuais a diastereômeros. Osdiastereômeros resultantes são então separados porcromatografia ou cristalização em virtude de suasdiferenças estruturais mais distintas e o auxiliar quiraldepois removido para obter o enantiômero desejado;

vii) transformações assimétricas de primeira e segundaordem, uma técnica em que diastereômeros do racemato seequilibram para gerar uma preponderância em solução dodiastereômero do enantiômero desejado ou em quecristalização preferencial do diastereômero a partir doenantiômero desejado perturba o equilíbrio de modo queeventualmente em princípio todo o material é convertido aodiastereômero cristalino do enantiômero desejado. 0enantiômero desejado é então liberado do diastereômero;

viii) resoluções cinéticas — essa técnica refere-se àimplementação de resolução parcial ou completa de umracemato (ou de uma resolução adicional de um compostoparcialmente resolvido) em virtude de taxas de reaçãodesigual dos enantiômeros com um reagente quiral, nãoracêmico ou catalisador sob condições cinéticas;

ix) síntese enanti-específica a partir de precursoresnão racêmicos — uma técnica sintética segundo a qual oenantiômero desejado é obtido a partir de materiais deiniciação não quirais e em que a integridade estereoquímicanão é ou é apenas minimamente comprometida por toda asíntese;

x) cromatografia quiral líquida, uma técnica segundo aqual os enantiômeros de um racemato são separados em umafase móvel líquida em virtude de suas diferentes interaçõescom uma fase estacionária. A fase estacionária pode serfeita de material quiral ou a fase móvel pode conter ummaterial quiral adicional para provocar as diferentesinterações;

xi) cromatografia a gás quiral, uma técnica segundo aqual o racemato é volatilizado e os enantiômeros sãoseparados em virtude de suas diferentes interações na fasemóvel gasosa com uma coluna contendo uma fase adsorventequiral não racêmica fixa;

xii) extração com solventes quirais — uma técnicasegundo a qual os enantiômeros são separados em virtude dedissolução preferencial de um enantiômero em um solventequiral particular; e

xiii) transporte através de membranas quirais — umatécnica segundo a qual um racemato é colocado em contatocom uma barreira de membrana fina. A barreira tipicamentesepara dois fluidos miscíveis, um contendo o racemato, euma força de controle como concentração ou diferencial depressão causa transporte preferencial por toda a barreirada membrana. A separação ocorre como um resultado danatureza quiral não racêmica da membrana que permite queapenas um enantiômero do racemato passe através.

Opcionalmente o composto é enantiomericamenteenriquecido.

Métodos de Tratamento

São fornecidos métodos para o tratamento de um animalou humano que sofre de uma doença associada com acúmulocerebral de amilóide de Alzheimer, como doença de Alzheimer(DA) , que compreende a administração de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto aqui revelado, ou umsal, éster ou pró-fármaco deste que é opcionalmentefarmaceuticamente aceitável.

A administração do composto em uma modalidade resultaem um ou mais de redução da produção de β-amilóide,deposição de β-amilóide, neurotoxicidade de β-amilóide(incluindo hiperfosforilação anormal de tau) oumicrogliose, ou combinação destes. Opcionalmente, ocomposto é caracterizado por reduzir a produção de β-amilóide, por exemplo, em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%,20%, 25%, 30%, 50%, ou mais em células que superexpressamAPP ou um fragmento desta, como medido, por exemplo, em ummeio de cultura que compreende as células ou como medido demodo intracelular.

Como aqui usado, referência a composto que reduz aprodução de β-amilóide refere-se a um composto que reduz aprodução de β-amilóide em células que superexpressam APP ouum fragmento desta, e as células podem ser, por exemplo,células de ovário da hamster chinês (CHO) quesuperexpressam APP, por exemplo, células CHO 7W WT APP751;células 7W (wt APP751); células 7W6E; células 7Wsw; oucélulas 7WvF.

É observado que quando as modalidades aqui reveladasreferem-se a uma redução no β-amilóide em células quesuperexpressam APP, alternativamente, um aumento em aCTF(fragmento de APP aC-terminal, também conhecido como CTF-a) e/ou fragmento solúvel APPSa pode ser medido, porexemplo, em uma cultura de células ou de formaintracelular, quando eles são produzidos em quantidadesaumentadas de APP uma vez que o composto faz a produção deβ-amilóide diminuir.

É também observado que, quando as modalidades aquireveladas referem-se a uma redução no β-amilóide em célulasque superexpressam APP, alternativamente, uma diminuição emβ CTF (fragmento de APP β^terminal, também conhecido comoCTF-β) ou fragmento solúvel ΑΡΡΞβ pode ser medido, porexemplo, em uma cultura de células ou de formaintracelular, quando eles são produzidos em quantidadesdiminuídas de APP uma vez que o composto faz a produção deβ-amilóide diminuir.

Em uma modalidade adicional, é fornecido um métodopara o tratamento de animais ou humanos que sofrem de danocerebral traumático (TBI). Em uma modalidade, a produção deβ-amilóide, deposição de β-amilóide, neurotoxicidade de β-amilóide (incluindo hiperfosforilação anormal de tau) e/oumicrogliose é reduzida. O método inclui a administração aoanimal ou humano, por exemplo, imediatamente após TBI, deum a quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aquirevelado, ou um sal, éster ou pró-fármaco deste que éopcionalmente farmaceuticamente aceitável. O método podeincluir o tratamento contínuo com o composto por um períodode tempo prescrito. Foi mostrado que TBI aumenta asuscetibilidade ao desenvolvimento de DA, e assim,acredita-se, sem ser atado a teoria, que TBI acelera oacúmulo cerebral de β-amilóide e estresse oxidativo, quepode funcionar sinergicamente para promover o surgimento oucontrolar a progressão de DA. Portanto, o composto tambémpode diminuir a produção de β-amilóide como aqui revelado.Tratamento de animais ou humanos com o composto que sofremde TBI pode continuar, por exemplo, por cerca de uma hora,24 horas, uma semana, duas semanas, 1-6 meses, um ano, doisanos ou três anos.

Doenças amiloidogênicas que podem ser tratadas deacordo com os métodos da presente invenção podem incluir,sem limitação, doença de Alzheimer, angiopatia amilóidecerebral, hemorragia cerebral hereditária com amiloidosetipo Holandesa, ou outras formas de DA familiar eangiopatia amilóide cerebral de Alzheimer familiar.

Os métodos da presente invenção podem ser usados emmodelos de animais transgênicos para DA, como, semlimitação, modelos de camundongo PDAPP e TgAPPsw, que podemser úteis para o tratamento, prevenção e/ou inibição dascondições associadas com a produção de β-amilóide,deposição de β-amilóide, neurotoxicidade de β-amilóide(incluindo hiperfosforilação anormal de tau) e microglioseno sistema nervoso central de tais animais ou em humanos.Modelos de animais transgênicos para DA podem serconstruídos com o uso de métodos padrão conhecidos natécnica, como apresentado, por exemplo, sem limitação, nasPatentes United States Nos. 5.487.992; 5.464.764;5.387.742; 5.360.735; 5.347.075; 5.298.422; 5.288.846;5.221.778; 5.175.385; 5.175.384; 5.175.383; e 4.736.866.

Dosagens de exemplo de composto que pode seradministrado incluem 0,001-1,0 mg/kg de peso corporal. Umadose de exemplo do composto é cerca de 1 a 50 mg/kg de pesocorporal por dia, 1 a 20 mg/kg de peso corporal por dia, ou0,1 a cerca de 100 mg de quilograma de peso corporal doreceptor por dia. Doses menores podem ser preferíveis, porexemplo, doses de 0,5-100 mg, 0,5-50 mg, 0,5-10 mg, ou 0,5-5 mg de quilograma de peso corporal por dia, ou porexemplo, 0,01-0,5 mg de quilograma de peso corporal pordia. A faixa de dosagem eficaz pode ser calculada com basena atividade do composto e outros fatores conhecidos natécnica de farmacologia.

O composto é convenientemente administrado em qualquerforma de dosagem adequada, incluindo, mas não limitadas auma que contenha 1 a 3.000 mg, ou 10 a 1.000 mg deingrediente ativo por forma de dosagem unitária. Umadosagem oral de 50-1.000 mg é possível. Doses menores podemser preferíveis, por exemplo, de 10-100 ou 1-50 mg, ou 0,1-50 mg, ou 0,1-20 mg ou 0,01-10,0 mg. Alem disso, dosesmenores podem ser utilizadas no caso de administração poruma via não oral, como, por exemplo, por injeção ouinalação.

Em uma outra modalidade, a dosagem pode variar decerca de 0,05 mg a 20 mg por dia, entre cerca de 2 mg a 15mg por dia, cerca de 4 mg a 12 mg por dia, e/ou cerca de 8mg por dia.

Em uma outra modalidade, as dosagens podem variar, porexemplo, de cerca de um dia a doze meses, de cerca de umasemana a seis meses, ou de cerca de duas semanas a quatrosemanas.

Devido ao fato de a maioria das doenças que têmacúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer, como DA, seremdemências cerebrais crônicas, progressivas, intratáveis, écontemplado que a duração do tratamento com os compostosaqui revelados pode durar por toda a vida do animal ouhumano.

Métodos de ensaio in vitro

Métodos de ensaio in vitro disponíveis na técnicapodem ser usados para avaliar os compostos para atividadena inibição de β-amilóide e para utilidade no tratamento dedoenças associadas com superprodução e/ou acúmulo de β-amilóide. Em uma modalidade, um ensaio para determinar acapacidade dos compostos de diminuir a produção de β-amilóide é conduzido. Por exemplo, o composto de teste éexposto a células que superexpressam APP ou um fragmentodesta; a produção de β-amilóide nas células é medida; e umadiminuição na produção de β-amilóide, por exemplo, de pelomenos cerca de 2 0% mais nas células que superexpressam APPou um fragmento desta, é detectado como um indicador dautilidade terapêutica do composto para tratar animais ouhumanos que sofrem de uma doença associada com acúmulocerebral de amilóide de Alzheimer. O ensaio é conduzido como uso de células que superexpressam APP ou um fragmentodesta disponíveis na técnica como células de ovário dehamster chinês que superexpressam APP751. 0 β-amilóidemedido, é, por exemplo, Αβ1-40, Αβ1-42, ou Αβ1-40 + Αβ1-42total. Uma diminuição na produção de Αβ1-4 0 e/ou Αβ1-42, e,em particular, Αβ1-40 + Αβ1-42 total, de, por exemplo, pelomenos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 50%, ou mais,indica a eficácia terapêutica do composto para trataranimais ou humanos que sofrem de uma doença associada comacúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer. As concentraçõesde β-amilóide podem ser medidas, por exemplo, de formaintracelular ou, por exemplo, extracelular no meio de cultura.

Os compostos podem ser rastreados em uma faixa deconcentrações, por exemplo, cerca de 1 nM a 10 mM, cerca de500 nM a 50 μΜ, ou cerca de 5 μΜ a 3 0 μΜ.

Em uma modalidade, as células a serem testadas parauma redução na produção de β-amilóide em células sãoexpostas ao composto de teste. No método, a concentração deβ-amilóide (por exemplo, Αβ1-40 e/ou ΑβΙ-42) em célulasexpostas ao composto pode ser medida e comparada com umamedição de produção de β-amilóide em células não expostas,por exemplo, em uma passagem de controle em paralelo. Umadiminuição na produção de β-amilóide, isoladamente ou emcombinação, por exemplo, de cerca de 5%, 10%, 15%, 20%,25%, 30%, 50%, ou mais, nas células expostas comparadas àscélulas de controle indica a potencial eficácia terapêuticado composto para tratar animais ou humanos que sofrem deuma doença associada com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer. Opcionalmente, a concentração total de β-amilóide (Apl-40 + Apl-42) é medida. 0 β-amilóide é medido,por exemplo, no meio de cultura que compreende as células,ou de modo intracelular.

O método de medição de β-amilóide pode incluir o testede um arranjo de compostos, por exemplo, em uma placa de 24cavidades ou uma placa de 96 cavidades, bem como uma oumais amostras de controle. No ensaio, é freqüentementenecessário que o composto seja incubado com as células porcerca de 4-4 8 horas, ou, por exemplo, 18-36 horas, β-amilóide pode ser detectado com o uso de um ensaiosanduíche de ELISA com o uso de anticorposquantitativamente e enzimativamente rotulados,comercialmente disponíveis (com peroxidase de raiz forte)para Αβ1-40 e Αβ1-42 como descrito nos Exemplos. 0 ensaiode ELISA de anticorpo rotulado também pode requerer 24horas para estar completo.

Células que podem ser usadas em ensaios para a mediçãoda redução na produção de β-amilóide incluem células demamíferos ou não mamíferos que superexpressam APP ou umfragmento desta, incluindo, sem limitação, células deovário de hamster da China, por exemplo, células CHO 7W WTAPP751. Veja, por exemplo, Koo e Squazzo, J. Biol. Chem.,Vol. 269, exemplar 26, 17386-17389, Jul, 1994. Linhagens decélulas transfectadas com APP foram descritas na técnica eincluem 7W (wt APP75i) ; VWAc (APP com deleção de quase todaa cauda citoplasmática (resíduo 710-751) ; 7Wsw (APP751 coma dupla mutação "Swedish" KM651/652NL); e 7WvF (APP751 coma mutação V698F) . Veja, por exemplo Xia e cols., Proc.Natl. Acad. Sei. USA, Vol. 94, pp. 8208-8213, julho de1997; e Perez, R. & Koo, E. (1997) em Processing of the β-Amyloid precursor Protein: Effects of C-Terminal Mutationson Amyloid Production, eds. Iqbal, K., Winblad, B.,Nishimura, T., Takeda, M. & Wisniewski, Η. M. (J. Wiley &Sons, London) , pp. 407-416. A APP que é superexpressa podeincluir transcritos de APP, como, sem limitação, APP751.Métodos de Diagnóstico

Em uma modalidade adicional, é fornecido um métodopara o diagnóstico ou determinação do risco dedesenvolvimento de uma doença associada com acúmulocerebral de amilóide de Alzheimer, como DA, em um animal ouhumano, tomando uma primeira medida da concentração de β-amilóide a partir de um fluido corporal periférico comoplasma, soro, sangue total, urina ou líquidocefalorraquidiano (CSF) do animal ou humano.Subseqüentemente, o método inclui a administração ao animalou humano de uma quantidade eficaz para o diagnóstico de umcomposto como aqui revelado. Opcionalmente, o composto é umque diminui a produção de β-amilóide, por exemplo, em pelomenos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 50%, ou mais,como medido, por exemplo, no meio de cultura de células quesuperexpressam APP ou um fragmento desta, ou como medido demodo intracelular. Uma Segunda medição (ponto finalselecionado) da concentração de β-amilóide é tomada doplasma, soro, sangue total, urina ou CSF do animal ouhumano em um momento posterior, e a diferença entre aprimeira medição e a segunda medição é determinada. Umamudança na concentração de β-amilóide no plasma, soro,sangue total, urina ou CSF na segunda medição comparada àprimeira medição indica um risco de desenvolvimento ou umpossível diagnóstico de uma doença associada com acúmulocerebral de amilóide de Alzheimer no animal ou humano. Emuma modalidade, um aumento ou diminuição no β-amilóideperiférico indica a presença de um acúmulo de β-amilóidecerebral, e, portanto, o risco de doença ou a presença deuma doença.

Acredita-se que, sem estar atado por qualquer teoria,os compostos possam causar um mudança na concentração de β-amilóide no plasma, urina, soro, sangue total ou CSF.

A duração do tempo de administração do composto após aprimeira medição de fluido corporal periférico, até asegunda medição de fluido corporal periférico (ponto finalselecionado), é, por exemplo, qualquer período de tempoadequado, por exemplo, cerca de 1-12 horas, cerca de 1-7dias, cerca de 1-4 semanas; cerca de 2-6 meses, ou mais. Aduração do tempo pode ser ajustada como necessáriodependendo, por exemplo, da progressão da doença, e dopaciente. Uma dosagem periódica adequada (por exemplo,diária) do composto é administrada, por exemplo, por viaoral ou intravenosa, e os níveis de β-amilóide no indivíduopodem ser monitorados periodicamente até o ponto final. Emuma modalidade preferida, o composto é administradodiariamente por cerca de 3 dias a 4 semanas a partir doinício da administração até as medições final. A mudança naconcentração indicativa do risco ou presença de uma doençaassociada com acúmulo de β-amilóide é, por exemplo, cercade 10-20% ou mais entre a primeira medição e a medição deponto final.

Dosagens de exemplo do composto que podem seradministradas incluem 0,001-1,0 mg/kg de peso corporal, porexemplo, diariamente. Uma dose de exemplo de composto écerca de 1 a 50 mg/kg de peso corporal por dia, 1 a 20mg/kg de peso corporal por dia, ou 0,1 a cerca de 100 mg dequilograma de peso corporal do receptor por dia. Dosesmenores podem ser preferíveis, por exemplo, doses de 0,5-100 mg, 0,5-50 mg, 0,5-10 mg, ou 0,5-5 mg de quilograma depeso corporal por dia, ou, por exemplo, 0,01-0,5 mg dequilograma de peso corporal por dia. A faixa de dosagemeficaz pode ser calculada com base na atividade do compostoe outros fatores conhecidos na técnica de farmacologia.

O composto é convenientemente administrado em qualquerforma de dosagem adequada, incluindo, sem limitação, umaque contém 1 a 3.000 mg, ou 10 a 1.000 mg de ingredienteativo por forma de dosagem unitária. Uma dosagem oral de50-1.000 mg é possível. Doses menores podem serpreferíveis, por exemplo, de 10-100 ou 1-50 mg, ou 0,1-50mg, ou 0,1-20 mg ou 0,01-10,0 mg. Além disso, doses menorespodem ser utilizadas no caso de administração por uma vianão oral, como, por exemplo, por injeção ou inalação.Síntese de Compostos

Os compostos aqui revelados podem ser feitos com o usode técnicas sintéticas disponíveis na técnica.

Um esquema sintético geral é mostrado abaixo:

<formula>formula see original document page 53</formula><formula>formula see original document page 54</formula>

Sódio p-Tosilado benzenossulfato. Ao benzenossulfatode sódio dissolvido em IM NaOH, é adicionado cloreto detosila (2 eq.) e a reação é aquecida em um banho de vaporpor 2,5 horas. A reação então é acidifiçada com 3N ácidoclorídrico e então adicionada a gelo, filtrada e bem lavadacom água, então éter frio para gerar o produto desejadocomo um sólido branco.

<formula>formula see original document page 54</formula>

Cloreto de p-Tosilado benzenossulfonila. A sódio p-Tosilado benzenossulfato em pó, é adicionado pentacloretode fósforo (por exemplo, 2 eq.) em pequenas porções. 0produto resultante é aquecido em um banho de óleo a IlO0Cpor 10 horas. A mistura é então lavada com água e deixadapara secar.

<formula>formula see original document page 54</formula>P-Tosilado benzenossulfinato de sódio. A uma soluçãode sulfito de sódio (3 eq) em IM hidróxido de sódio, éadicionado Cloreto de p-Tosilado benzenossulfonila e areação é deixada em agitação, por exemplo, por 3 h. Areação é então filtrada e o composto seco ao ar, porexemplo, de um dia para o outro.

<formula>formula see original document page 55</formula>

4- (Tosiloxi)fenil 2-picolil sulfona. A uma solução dep-Tosilado benzenossulfinato de sódio em n-butanol, éadicionado picolil cloreto (1,5 eq) e acetato de sódio (2eq) e a reação refluída de um dia para o outro. A reação éentão deixada para resfriar e é despejada em água e amistura agitada por, por exemplo, quinze minutos durante osquais ela é filtrada e lavada com água e deixada para secarao ar.

<formula>formula see original document page 55</formula>

2-Isopropil-l-[ [4-(tosiloxi)fenil]sulfonil]indolizina.

A uma solução de 4-(Tosiloxi)fenil 2-picolil sulfona em umsolvente orgânico, são adicionados l-bromo-3-metil-2-butanona (2 eq) e K2CO3 (2 eq). A mistura é refluída, porexemplo, por 24 h. O meio de reação é então trazido devolta à temperatura ambiente, evaporado sob vácuo pararemover o excesso de cetona e extraído, por exemplo, comacetato de etila: salmoura (1:1). A camada orgânica é secasobre sulfato de sódio e evaporada sob vácuo restando umsólido que é purificado, por exemplo, por cromatografia emcoluna.

<formula>formula see original document page 56</formula>

2-Isopropil-1-( [4-hidroxifenil)sulfonil]indolizina. 2-Isopropil-I- [ [4-(tosiloxi)fenil]sulfonil] indolizina éadicionada a uma mistura de etanol/água contendo NaOH (2M)e a mistura refluída por 24 h. Após resfriamento, a soluçãoé também diluída com mais água e então extraída com éter. Acamada aquosa é acidificada e extraída com acetato deetila, seca sobre sulfato de sódio e concentrada até secarsob vácuo.

<formula>formula see original document page 56</formula>

2-Isopropil-l-[[4- [ (3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonillindolizina. A uma solução de 2-isopropil-l-([4 -hidroxifenil)sulfonil]indolizina em metil etil cetona, sãoadicionados K2CO3 (1,5 eq) e 1,3-dibromopropano (5 eq) ; amistura é colocada em refluxo, por exemplo, por 24 h.Depois da reação, a solução é evaporada até secar eextraída. A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio econcentrada sob vácuo e o resíduo é purificado, porexemplo, por cromatografia. As frações homogêneas sãoreunidas e evaporadas até secar.

<formula>formula see original document page 57</formula>

2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil] sulfonil]indolizina, N-metil-N-(3,4-dimethoxifenetil)amina (2,5 eq) ou derivado desta e trietilamina (1,5 eq)são refluídas em tolueno por 24 h. 0 solvente é entãoeliminado sob vácuo e o resíduo é retido em H2O. 0 meio éextraído com um solvente como CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 eevaporado até secar. 0 óleo obtido é purificado viacromatografia flash.

<formula>formula see original document page 57</formula>

Sais de oxalato dos compostos. Os compostos sãoopcionalmente isolados como um sal como um sal de oxalato.A uma solução da base dissolvida em acetona, é adicionadauma quantidade estoiquiométrica de ácido oxálico e osoxalatos correspondentes são recristalizados a partir deacetona ou mistura de isopropanol/hexano.

<formula>formula see original document page 58</formula>

Com o uso dos procedimentos acima, por exemplo, com oreagente adequado para substituir a amina (Am), oscompostos aqui revelados podem ser preparados.

Em uma outra modalidade, a transformação de composto(3) ao composto (5) pode ser implementada em uma reação deuma etapa como mostrado abaixo, que pode ser conduzida emum solvente aquoso:<formula>formula see original document page 58</formula>

Em uma outra modalidade, os reagentes são modificadose a reação pode ser conduzida como mostrado abaixo:

<formula>formula see original document page 58</formula>

Portanto, em uma modalidade, é fornecido um método quecompreende a reação de um heterociclo que compreende umgrupo 2-clorometil (como 2-(clorometil)quinolina) com umcloreto de sulfonila, como um cloreto de benzeno sulfonila(como p-tosilado cloreto de benzenossulfonila) para formaruma ligação de sulfona entre o grupo metil no heterociclo eo cloreto de sulfonila. A reação é conduzida em solventeaquoso na presença de bicarbonato de sódio e sulfito desódio.

Em uma modalidade, a reação é representada por:

<formula>formula see original document page 59</formula>

em que R3 é por exemplo, um heterociclo que éopcionalmente substituído, e R4 é, por exemplo, alquilopcionalmente substituído, alquenil, alquinil, aril,heterociclo, ou heteroaril.

Formulações farmacêuticas e métodos de administração

Os compostos aqui revelados podem ser administrados emuma quantidade eficaz para o tratamento de uma doençaassociada com acúmulo cerebral de β-amilóide, como doençade Alzheimer, angiopatia amilóide cerebral, hemorragiacerebral hereditária com amiloidose tipo Holandesa, outrasformas de doença de Alzheimer familiar e angiopatiaamilóide cerebral de Alzheimer familiar. Tais compostos sãotambém aqui referidos como "agentes ativos". Quantidades dedosagem e formulações farmacêuticas podem ser selecionadascom o uso de métodos conhecidos na técnica. O composto podeser administrado por qualquer via conhecida na técnicaincluindo administração parenteral, oral ou intraperitoneal.

Os compostos aqui revelados que são administrados aanimais ou humanos são dosados de acordo com prática médicapadrão e conhecimento geral daqueles habilitados natécnica. Em particular, quantidades terapeuticamenteeficazes dos compostos ou mais, podem ser administradas naforma de dosagem unitária a animais ou humanos que sofremde uma doença associada com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer ou que sofrem de um dano cerebral traumático, bemcomo administradas diagnosticamente para o objetivo dedeterminação do risco de desenvolvimento e/ou diagnósticode uma doença associada com acúmulo cerebral de amilóide deAlzheimer.

A administração parenteral inclui as seguintes vias:intravenosa; intramuscular; intersticial; intra-arterial ;subcutânea; intra-ocular; intracraniana; intraventricular;intrasinovial; transepitelial, incluindo transdérmica,pulmonar via inalação, oftálmica, sublingual e bucal;tópica, incluindo oftálmica, dérmica, ocular, retal, ouinalação nasal via insuflação ou nebulização. A inalaçãonasal é conduzida, por exemplo, com o uso de aerossóis,atomizadores ou nebulizadores.

Exemplos de quantidades adequadas de dosagem são, porexemplo, cerca de 0,02 mg a 1000 mg por dose unitária,cerca de 0,5 mg a 500 mg por dose unitária, ou cerca de 20mg a 100 mg por dose unitária. A dosage diária pode seradministrada em uma dose unitária única ou dividida emduas, três, ou quatro doses unitárias por dia. A duração dotratamento do agente ativo é, por exemplo, na ordem dehoras, semanas, meses, anos ou por toda a vida. Otratamento pode er uma duração, por exemplo, de 1-7 dias,1-4 semanas, 1-6 meses, 6-12 meses, ou mais.

O composto pode ser administrado ao SNC, por viaparenteral ou intraperitoneal. Soluções do composto, porexemplo, como uma base livre ou um sal farmaceuticamenteaceitável podem ser preparadas em água misturada com umtensoativo adequado, como hidroxipropilcelulose. Dispersõestambém podem ser preparadas em glicerol, polietilenoglicóis líquidos, e misturas desses, e em óleos. Sobcondições comuns de estocagem e uso, essas preparaçõespodem conter um conservante e/ou antioxidantes para evitaro crescimento de microorganismos ou degeneração química.

Os compostos que são administrados por via oral podemser inclusos em cápsulas de gelatina duras ou macias, oucompressos em comprimidos. Os compostos também podem serincorporados com um excipiente e usados na forma decomprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, pastilhas,cápsulas, tabletes, losangos, elixires, suspensões,xaropes, wafers, e outros. Além disso, os compostos podemestar na forma de um pó ou grânulo, uma solução oususpensão em um líquido aquoso ou líquido não aquoso, ou emuma emulsão óleo-em-água ou água-em-óleo.

Os comprimidos, pastilhas, pílulas, cápsulas e outrostambém podem conter, por exemplo, um ligante, como gomatragacanto, acácia, amido de milho; excipientes de gelação,como fosfato dicálcico; um agente desintegrante, como amidode milho, amido de batata, ácido algínico e outros; umlubrificante, como estearato de magnésio; um agenteadoçante, como sacarose, lactose ou sacarina; ou um agenteflavorizante. Quando a forma de dosagem unitária é umacápsula, ela podem conter, além dos materiais acimadescritos, um veículo líquido. Vários outros materiaispodem estar presentes as como revestimentos ou paramodificar a forma física da dosagem unitária. Por exemplo,comprimidos, pílulas, ou cápsulas podem ser revestidos comgoma-Iaca, açúcar ou ambos. Um xarope ou elixir pode conterum composto como aqui revelado, sacarose como um agenteadoçante, metil e propilparabeno como conservantes, umcorante e flavorizante. Adicionalmente, um composto podeser incorporado em preparações e formulações de libderacaosustentada.

A invenção será entendida em maiores detalhes em vistados exemplos não limitantes a seguir.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Ensaio para medcao de Αβ1-40 e/ou Αβ1-42

Células de ovário de hamster chinês (CHO),estavelmente transfectadas com APP751 humanas (células CHO7W WT APP751) são usadas. Veja7 por exemplo, Koo e Squazzo,J. Biol. Chem., Vol. 269, exemplar 26, 17386-17389, Jul,1994. As células sao mantidas em meio DMEM suplementado com10% soro bovino fetal e IX mistura depenicilina/estreptomicina/fungizona/glutamina (Cambrex, MD)geneticina como agente de seleção em frascos de cultura decélulas de 75 cm2.

As células CHO 7W WT APP751 que superexpressam APP751são plaqueadas em placas de cultura de 24 cavidades em 1 mLde meio de cultura. Cada composto é adicionado a célulasconfluentes a uma concentração final de, por exemplo, 3 0μΜ, 10 μΜ ou 3 μΜ. Depois de 24 horas de tratamento, o meiode cultura é coletado e dissolvido 10 vezes e 2 vezes paramedição do nivel de Αβ1-40 e/ou Αβ1-42, respectivamente. 0controle é 1% DMSO. Αβ1-40 e Αβΐ-42 sao determinados com ouso de ELISAs comercialmente disponíveis (Biosource, CA) ,seguindo as recomendações do fabricante.

Os resultados do efeito sobre Αβ1-40 com compostos 1-38, 1-50C e 1-36 a 10 μΜ e 30 μΜ são mostrados na Figura 1.Os resultados do efeito sobre Αβ1-40 com os compostos:1-50E; 1-52A; 1-42B; 1- 50D; 1-42A; 1-52B; 1-40; 1-50A; 1-5OB; e 1-52C a 10 μΜ e 30 μΜ são mostrados na Figura 2.

Os resultados do efeito sobre Αβ1-40 com os compostos:1-76A; 1-52C; 1-50C e 1-76D a 0,3, 1,0, 3,0, 10 e 30 μΜ sãomostrados na Figura 3.

Os resultados do efeito sobre Αβ1-42 com os compostos:1-36; 1-38; 1-50C; 1-50E; 1-52A; 1-42B; 1-52B; 1-40; 1-50A;1-50B; e 1-52C a 10 μΜ e 30 μΜ são mostrados na Figura 4.

Os resultados do efeito sobre AI31-4 0 com oscompostos: 1-9 OA; e 1-76C at 311M, 10 μΜ e 30 μΜ sãomostrados na Figura 5.

Exemplo 2: Síntese

Técnicas gerais: todas as reações que requerem condiçõesanidras são conduzidas m aparelho de vidro seco em fornosob uma atmosfera de nitrogênio. Separações cromatográficaspreparatórias são realizadas em Combiflash Companion, IscoInc.; as reações são seguidas por análise de TLC com o usode placas de sílica com indicador fluorescente (254 nm) evisualizadas com UV, ácido fosfomolíbdico ou 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído. Todos os reagentes comercialmentedisponíveis são adquiridos de Aldrich e Acros e sãotipicamente usados como fornecidos.

Os pontos de fusão são registrados com o uso de tuboscapilares abertos em um aparelho de ponto de fusãoBarnstead e não são corrigidos. Espectros de 1H e 13C RMNsao registrados em modo transformado Fourier na força decampo especificada em um espectrômetro Varian AS500. osespectros são obtidos em soluções de CDCl3 em tubos de 5 mmde diâmetro, e a troca química em ppm é citada em relaçãoaos sinais residuais de clorofórmio (δκ 7,25 ppm, ou ôc 77,0ppm). Multiplicidades no espectro de 1H RMN são descritascomo: s = singleto, d = dupleto, t = tripleto, q= quarteto,m = multipleto, br = amplo; as constantes de ligação sãorelatadas em Hz. Espectros de massa de de baixa resolução(MS) são medidos em um espectrômetro Micromass Q-Tof API-USutilizando uma fonte de eletrospray Advion BioscienceNanomate. As proporções de massa/carga de ion (m/z) sãorelatadas como valores em unidades de massa atômica.

Um esquema sintético geral é mostrado abaixo:

<formula>formula see original document page 64</formula>Sódio p-Tosilado benzenossulfato. Ao sódio benzenossulfatodissolvido em IM NaOH é adicionado cloreto de tosila (2eq.) e a reação é aquecida em um banho de vapor por 2,5horas. A reação é então acidifiçada com 3N ácido clorídricoe então adicionada a gelo, filtrada e lavada bem com água,então éter frio para gerar o produto desejado como umsólido branco.

<formula>formula see original document page 65</formula>

p-Tosilado cloreto de benzenossulfonila. A sódio p-tosiladobenzenesulfato em pó foi adicionado pentacloreto de fósforofinamente dividido (2 eq. ) em pequenas porções. A primeiraporcao reagiu de uma vez e a mistura de solidos começou aliqüefazer para assegurar agitação durante o restante dareação. Quando a adição foi completa, o xarope finoresultante é aquecido em um banho de óleo a IlO0C por 10horas, restando uma mistura quase transparente e cincolor.A mistura é então adicionada a gelo picado e os grãos sãoquebrados, filtrados, lavados bem com água e deixados parasecar.

<formula>formula see original document page 65</formula>

P-Tosilado benzenossulfinato de sódio. A uma soluçãode sulfito de sódio (3 eq) em IM hidróxido de sódio éadicionado p-tosilado cloreto de benzenossulfonila e areação é deixada em agitação por 3 h. A reação é entãofiltrada e o composto foi seco ao ar de um dia para ooutro.

4-(Tosiloxi)fenil 2-picolil sulfona. A uma solução dep-Tosilado benzenossulfinato de sódio em n-butanol foiadicionado picolil cloreto (1,5 eq) e acetato de sódio (2eq) e a reação refluída de um dia para o outro. A reação éentão deixada para resfriar e despejada em água e a misturaagitada por quinze minutos durante os quais ela foifiltrada e lavada com água e deixada para secar ao ar.

2-Isopropil-I-[ [4-(tosiloxi)fenil]sulfonil]indolizina.

A uma solução de 4-Tosiloxi)fenil 2-picolil sulfona emmetiletil cetona ou THF é adicionada l-bromo-3-metil- 2-butanona (2 eq) e K2CO3 (2 eq). A mistura é refluída por 24h. O meio de reação é então trazido de volta à temperaturaambiente, cuidadosamente evaporado sob vácuo para remover oexcesso de cetona e extraída com acetato de etila:salmoura(1:1). A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio eevaporada sob vácuo restando um sólido amarelo que épurificado por cromatografia em coluna com o uso de umaeluição em etapas de 3:7 acetato de etila: hexano então 1:1acetato de etila: hexano.

<formula>formula see original document page 67</formula>

2-Isopropil-1-( [4-hidroxifenil)sulfonil]indolizina. 2-Isopropil-1-[[4-(tosiloxi)fenil]sulfonil]indolizina éadicionada a uma mistura de etanol/água contendo NaOH (2M)e a mistura foi refluída por 24 h. Após resfriamento, asolução é também diluída com mais água e então extraída cométer. A camada aquosa foi acidifiçada e extraída comacetato de etila, seca sobre sulfato de sódio e concentradaaté secar sob vácuo.

<formula>formula see original document page 67</formula>

2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina. A uma solução de 2-isopropil-l-([4 -hidroxifenil)sulfonil]indolizina em metil etil cetonaé adicionado K2CO3 (1,5 eq) e 1,3-dibromopropano (5 eq) ; amistura é trazida a refluxo por 24 h. Depois da reação, asolução é evaporada até secar e extraída com salmoura/cloreto de metileno. A camada orgânica é seca sobre sulfatode sódio e concentrada sob vácuo e o resíduo é purificadopor cromatografia em uma coluna de sílica com cloreto demetileno como o eluente. As frações homogêneas são reunidase evaporadas até secar.

<formula>formula see original document page 68</formula>

Compostos. 2-Isopropil-I - [ [4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil] sulfonil]indolizina, N-metil-N-(3,4-dimetoxifenetil)amina (2,5 eq) ou derivado dessa, e trietilamina (1,5 eq)são refluídos em tolueno por 24 h. 0 solvente então éeliminado sob vácuo e o resíduo é retido em H2O. 0 meio éextraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. 0 óleo obtido é purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

Sais de oxalato. Os compostos são isolados como o salde oxalato. A uma solução da base dissolvida em acetona éadicionada uma quantidade estoiquiométrica de ácido oxálicoe os oxalatos correspondentes são recristalizados deacetona ou mistura de isopropanol/ hexano.

<formula>formula see original document page 69</formula>

Alternativamente, a transformação de composto (3) aocomposto (5) é implementada em uma reação de uma etapa comomostrado abaixo, que pode ser conduzida em um solventeaquoso:

<formula>formula see original document page 69</formula>

A uma solução de NaHCO (4,9 g, 58,38 mmol, 5 equiv.) eNa2SO3 (2,94 g, 23,35 mmol, 2 equiv.) em H2O (20 mL) élentamente adicionado o p-tosilado cloreto debenzenossulfonila (em porção) e a reação é agitada em rt(temperatura ambiente) por 2 horas. Então o compostohetrocíclico que contém 2-(clorometil), por exemplo, 2-(clorometil)quinolina (4,04 g, 11,7 mmol, 1 equiv.) éadicionado muito lentamente em porções e a reação é agitada10 minutos em rt e então aquecida até IOO0C por 5 horas. Areação é resfriada até rt e extraída com DCM várias vezes,o produto bruto com 99 +% é usado para a próxima etapa sempurificação adicional.

Com o uso dos procedimentos acima com o reagenteadequado para substituir a amina (Am) os seguintescompostos foram obtidos como sais de oxalato e quimicamenteidentificados como abaixo mostrado:

{3-[4-(2-Isopropil-indolizina-l-sulfonil)-fenoxi] -propil}-(3,4,5-trimetoxifenil)-amina (1-50A).

2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8), 3,4,5-Trimetoxianilina (2,5 eq) , etrietilamina (1,5 eq) foram refluídas em tolueno por 24 h.O solvente foi então eliminado sob vácuo e o resíduo foiretido em H2O. O meio foi extraído com CH2Cl2, seco sobreNa2SO4 e evaporado até secar. O óleo obtido foi purificadovia cromatografia flash usando CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H RMN (500 MHz, acetona-d6) δ 1,24 (d, J = 6,9 Hz,6H), 2,82-2,87 (m, 8H), 3,31 (t, J 6,5 Hz, 2H), 4,20 (t, J6,1 Hz, 2H), 5,95-6,01 (m, 2H), 6,86 (dt, J = 1,0, 6,8 Hz,1H) , 7,05-7,09 (m, 2H) , 7,17 (dd, J = 6,9, 9,2 Hz, 1H) ,7,52 (s, 1H) , 7,84-7,87 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 9,2 Hz, 1H) ,8,33 (d, J = 6,9 Hz, 1H) , 13C RMN (125MHz, acetona-d6) ppm25,8, 26,7, 42,2, 57,1, 61,6, 67,9, 92,3, 94,2, 110,2,114,0, 114,4, 116,5, 119,6, 124,6, 128,5, 129,7, 131,7,135,9, 139,3,139,4, 147,6, 156,0, 163,9.

(3, 5-Dimetoxi-fenil)-{3- [4-(2-isopropil-indolizina-l-sulfonil)-fenoxi]-propil}-amina (1-50B). 2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina(8) , 3,5-dimetoxianilina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foramrefluídas em tolueno por 24 h. 0 solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. 0 meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. 0 óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 1,23 (d, J = 6,8 Hz, 6H) ,3,32 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 3,55-3,64 (m, 1H) , 3,74-3,77 (m,6Η) , 4,09 (t, J = 5,9 Hz, 2Η) , 5,81 (d, J = 2,1 Hz, 1Η) ,5,85-5,90 (m, 1Η) , 6,72 (dt, J = 1,1, 6,8 Hz, 1H) , 6,89-6,92 (m, 2H) , 7,04-7,08 (m, 1H) , 7,14 (s, 1H) , 7,83- 7,86(m, 2H) , 7,91-7,94 (m, 1H) , 8,26 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 13CRMN (125MHz, CDCl3) ppm 24,5, 24,9, 28,8, 40,9, 55,1, 55,2,66,1, 89,8, 91,0, 91,7, 93,4, 107,8, 111,4, 112,6, 114,4,118,3, 122,5, 125,6, 128,0, 134,4, 137,2, 138,1, 149,9,161,6, 161,7.

[2-(3,4-Dimetoxi-fenil)-etil]-{3-[4-(2-isopropil-indolizina- 1- sulfonil) -fenoxi]-propil}-amina (1-50C) . 2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina(8), 2-(3,4-Dimetoxifenil)-etilamina (2,5 eq,e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas em tolueno por 24h. O solvente foi então eliminado sob vácuo e o resíduo foiretido em H2O. O meio foi extraído com CH2Cl2, seco sobreNa2SO4 e evaporado até secar. O óleo obtido foi purificadovia cromatografia flash com o uso de CH2Cl2/ MeOH como oeluente.

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1,22 (d, J - 6,9 Hz, 6H) ,1,91-1,97 (m, 3H), 2,76 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,80 (t, J =6,9 Hz, 2H) , 2,88 (t, J = 7,0 Hz, 2H) , 3,55-3,61 (m, 1H) ,3,84 (s, 3H) , 3,86 (s, 3H) , 4,02 (t, J = 6,1 Hz, 2H) , 6,68-678 (m, 5H), 6,84-6,87 (m, 2H), 7,02-7,06 (m, 1H), 7,13 (s,1H) , 7,80-7,83 (m, 2H) , 7,91 (d, J = 6,8 Hz, 1H) , 8,24 (d,J = 9,2 Hz, 1H) , 13C RMN (125MHz, CDCl3) ppm 24,4, 24,8,29,3, 35,6, 46,5, 51,2, 55,8, 66,5, 107,8, 111,2, 111,3,111,9, 112,5, 114,3, 118,2, 120,5, 122,4, 125,6, 127,9,132,3, 134,3, 137,0, 138,0, 147,4, 148,9, 161,7.

Ciclohexil-{3-[4-(2-isopropil-indolizina-1-sulfonil)-fenoxi]-propil}-amina (1-52A). 2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8) , ciclohexilamina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas emtolueno por 24 h. O solvente foi então eliminado sob vácuoe o resíduo foi retido em H2O. O meio foi extraído comCH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado até secar. O óleoobtido foi purificado via cromatografia flash com o uso deCH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 1,22 (d, J = 6,8 Hz, 6H) ,1,61-1,71 (m, 3H) , 1,81-1,86 (m, 2H) , 2,24-2,29 (m, 2H) ,2,46-2,52 (m, 1H) , 3,03-3,10 (m, 1H) , 3,15-3,23 (m, 1H) ,3,53-3,60 (m, 1H) , 4,09 (t, J = 5,8 Hz, 2H) , 6,72 (t, J =6,8 Hz, 1H), 6,86-6,90 (m, 2H), 7,04-7,09 (m, 1H), 7,13 (s,1H), 7,81-7,84 (m, 2H), 7,93 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,24 (d,J = 9,2 Hz, 1H) , 9,02 (brs, 1H) , 13C RMN (125MHz, CDCl3) ppm24,5, 24,7, 24,9, 25,7, 29,1, 42,1, 57,9, 65,4, 107,6,111,4, 112,7, 114,4, 118,3, 122,6, 125,7, 128,0, 134,4,137,6, 138,1, 161,1.

1-{4-[3-(Azaciclododec-l-il)-propoxi]-benzil}-2-isopropil-indolizina (1-76A). 2-Isopropil-1-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8),dodecametilenoimina (2,5 eq), e trietilamina (1,5 eq) foramrefluídas em tolueno por 24 h. 0 solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. 0 meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. O óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 8,16 (d, 1H, J=9,2Hz), 7,82 (d,1H, J=6, 8Hz) , 7,74 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,03 (m, 1H) , 6,95(ddd, 1H, J=IiOHz, J=6,7Hz, J=9,lHz), 6,80 (d, 2H,J=8, 9Hz) , 6,61 (dt, 1H, J=I, 2Hz, J=6,8Hz), 3,97 (t, 2H,J=6Hz), 3,50 ( sept, 1H, J=6,9Hz), 2,38 (t, 2H, J=6,6Hz),2,24 (t, 4H, J=5,IHz), 1,78 ( quint, 2H, J=6,4Hz), 1,24 (m,22H), 1,12 (d, 6H, J=6,9Hz), 13-C RMN (125 MHz) 24,5, 24,8,25,1, 25,5, 25,8, 26,1, 26,4, 27,0, 51,1, 55,4, 66,6,

108.2, 111,3, 112,5, 114,5, 118,4, 122,8, 126,2, 128,0,134,4, 136,5, 137,8, 161,9.

terc-Butil-{3-[4-(2-isopropil-indolizin-l-ilmetil) -fenoxi]-propil}-amina (176D). 2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8) , terc-butilamina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas emtolueno por 24 h. 0 solvente foi então eliminado sob vácuoe o resíduo foi retido em H2O. 0 meio foi extraído comCH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado até secar. 0 óleoobtido foi purificado via cromatografia flash com o uso deCH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,13 (d, 6H, J=6,8Hz), 1,42 (s,9H) , 2,49 (quint, 2H, J=6,5Hz), 3,06 (m, 2H) , 3,48 ( sept.,1H, J=6,8Hz), 4,00 (t, 2H, J=5,8Hz), 6,64 (dt, 1H, J=I,0Hz,J=6, 8Hz) , 6,80 (d, 2H, J=8,9Hz), 6,98 (m, 1H) , 7,05 (s,1H), 7,74 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,84 (d, 1H, J=6,8Hz), 8,15 (d,1H, J=9,2Hz) , 8,88 (s, 1H) , 13-C RMN (125 MHz) 24,5, 24,9,26,0, 26,1, 39,5, 58,1, 65,5, 107,6, 1H,4, 112,7, 114,4,118.3, 122,6, 125,7, 128,0, 134,5, 137,6, 138,2, 161,2.

Dihexil-{3-[4-(2-isopropil-indolizin-l-ilmetil)-fenoxi]-propil}-amina (1-86A) . 2-Isopropil-1-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonillindolizina (8), di-n-hexilamina (2,5 eq), e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas emtolueno por 24 h. O solvente foi então eliminado sob vácuoe o resíduo foi retido em H2O. 0 meio foi extraído comCH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado até secar. 0 óleoobtido foi purificado via cromatografia flash com o uso deCH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 0,86 (t, 6H, J=6,8Hz), 1,22 (d,6H, J=6, 9Hz) , 1,28 (m, 12H) , 1,42 (m, 4H, J=5,6Hz), 1,92(m, 2H) , 2,42 (m, 4H) , 2,58 (m, 2H) , 3,59 ( sept, , 1H,J=6,8Hz), 4,03 (t, 2H, J=6,3Hz), 6,71 (dt, 1H, J=I, 1Hz,J=6, 8Hz) , 6,89 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,05 (ddd, 1H, J=0, 9Hz,J=6,7Hz, J=9, IHz) , 7,13 (s, 1H) , 7,83 (d, 2H, J=8,9Hz),7,91 (d, 1H, J=6,9Hz), 8,25 (d, 1H, J=9,lHz), 13-CRMN (125MHz) 14,3, 22,9, 24,8, 25,1, 27,4, 32,0, 50,6, 54,4, 66,8,108.2, 1H,6, 112,8, 114,6, 118,6, 122,7, 125,9, 128,2,134,6, 137,1, 138,4, 162,2.

2-Isopropil-I-{4-[3-(4-fenil-piperazin-l-il)-propoxi]-benzil}-indolizina (1-50E). 2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8), 4-fenilpiperidine (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foramrefluídas em tolueno por 24 h. 0 solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. 0 meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. 0 óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,23 (d, 6H, J=6,9Hz), 2,04 (d,3H, J=13,6Hz), 2,44 (bs, 4H), 2,75 (bs, 3H), 3,10 (bs, 2H),3,58 (m, 3H), 4,12 (t, 2H, J=5,7Hz), 6,73 (dt, 1H, J=I,1Hz,J=6, 8Hz) , 6,89 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,07 (m, 1H) , 7,14 (s,1H) , 7,30 (m, 6H) , 7,85 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,93 (d, 1H,J=6, 8Hz) , 8,25 (d, 1H, J=9,lHz), 13-C RMN (125 MHz) 24,8,25,2, 1H,7, 112,9, 114,6, 118,6, 122,9, 126,0, 127,1,128.3, 129,1, 134,7, 138,4.

(3, 4-Dimetoxi-fenil)-{3-[4-(2-isopropil-indolizin-l-ilmetil)-fenoxi]-propil}-amina (1-42A) . 2-Isopropil-1-[[4 -[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8), 3,4-Dimetoxianilina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foramrefluídas em tolueno por 24 h. O solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. O meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. O óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,23 (d, 6H, J=6,8Hz), 1,59 (bs,1H) , 2,10 (quint, 2H, J=6,3Hz), 3,30 (t, 2H, J=6,6Hz), 3,59(td, 1H, J=6, 8Hz, J=13, 7Hz) , 3,83 (s, 3H) , 3,86 (s, 3H) ,4,12 (t, 2H, J=5,9Hz), 6,17 (dd, 1H, J=2,5Hz, J=8,5Hz),6,26 (m, 3H), 6,34 (d, 1H, J=2,5Hz), 6,73 (td, 4H, J=5,9Hz,J=6, 8Hz) , 6,92 (d, 2H, J=8,8Hz), 7,06 (dd, 1H, J=6,8Hz,J-9,IHz), 7,13 (s, 1H), 7,85 (d, 2H, J=8,8Hz), 7,92 (d, 1H,J=6,8Hz) , 8,26 (d, 1H, J=9,2Hz), 13-C RMN (125 MHz) 24,5,24,9, 29,0, 41,8, 55,7, 56,6, 56,7, 66,2, 99,0, 100,7,103,6, 106,4, IH,4, 112,6, 113,1, 113,3, 114,4, 118,4,122,5, 125,6, 128,0, 134,4, 137,3, 138,2, 140,6, 141,7,142,2, 142,9, 150,1, 161,6.

[2-(3,4-Dimetoxi-fenil)-etil]-{3- [4-(2-isopropil-indolizin-l-ilmetil)-fenoxi]-propil}-metil-amina (1-38) .2-Isopropil-I-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil] sulfonil]indolizina (8), [2-(3,4-Dimetoxifenil)etil]-metil amina(2,5 eq), e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas emtolueno por 24 h. 0 solvente foi então eliminado sob vácuoe o resíduo foi retido em H20. 0 meio foi extraído comCH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado até secar. 0 óleoobtido foi purificado via cromatografia flash com o uso deCH2Cl2/ MeOH como o eluente.75/79

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,21 (d, 6H, J=6,9Hz), 1,96(quint, 2H, J=6,7Hz), 2,33 (s, 3H), 2,61 (m, 5H), 2,73 (dd,3H, J=5, 9Hz, J=9, 6Hz) , 3,58 (sept, 1H, J=6,8Hz), 3,83 (s,3H) , 3,85 (s, 3H) , 3,99 (t, 2H, J=6,3Hz), 6,72 (m, 4H) ,5 6,88 (d, 2H, J=8, 9Hz) , 7,04 (ddd, 1H, J=O, 9Hz, J=6,7Hz,J=9,IHz), 7,12 (s, 1H), 7,82 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,91 (d, 1H,J=6, 7Hz) , 8,24 (d, 1H, J=9,lHz), 13-C RMN (125 MHz) 24,5,24,8, 26,9, 33,2, 42,1, 53,8, 55,8, 55,9, 59,6, 66,3,111.2, IH,3, 112,0, 112,6, 114,4, 118,3, 120,5, 122,4,125,6, 127,9, 134,3, 136,9, 138,1, 147,3, 148,9, 161,8.

Dibutil-{3-[4-(2-isopropil-indolizin-l-ilmetil) -fenoxi]-propil}-amina (1-52C). 2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8) , di-n-butilamina (2,5 eq), e trietilamina (1,5 eq) foram refluídas emtolueno por 24 h. O solvente foi então eliminado sob vácuoe o resíduo foi retido em H2O. O meio foi extraído comCH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado até secar. 0 óleoobtido foi purificado via cromatografia flash com o uso deCH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 0,89 (t, 6H, J=7,4Hz), 1,21 (d,611, J=6, 8Hz) , 1,31 (sext., 4H, J=7,5Hz), 1,51 (m, 4H) ,2,03 (m, 2H) , 2,57 (bs, 4H) , 2,74 (bs, 2H) , 3,57 (sept.,1H, J=6,8Hz), 4,04 (t, 2H, J=6,lHz), 6,71 (dt, 1H, J=0,7Hz,J=6, 8Hz) , 6,88 (d, 2H, J=8,8Hz), 7,05 (dd, 1H, J=6,8Hz,J=9,IHz), 7,13 (s, 1H), 7,82 (d, 2H, J=8,8Hz), 7,92 (d, 1H,J=6, 9Hz) , 8,24 (d, 1H, J=9,2Hz), 13-C RMN (125 MHz) 13,9,20,5, 24,5, 24,8, 50,3, 53,5, 66,1, 107,8, 111,3, 112,6,114.3, 118,3, 122,4, 125,6, 127,9, 134,3, 137,0, 138,0,161,6.

4-(2-isopropil-indolizina-l-sulfonil)-fenil éster deácido tolueno-4-sulfônico (SrOTs) (6).

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,20 (d, 6H, J=6,9Hz), 2,47 (s,3H) , 3,51 (sept., 1H, J=6,8Hz), 6,77 (dt, 1H, J=I,2Hz,J=6,8Hz), 7,09 (m, 4H), 7,32 (d, 2H, J=8,0Hz), 7,68 (d, 2H,J=8, 3Hz) , 7,84 (d, 214, J=8,9Hz), 7,96 (d, 1H, J=6,8Hz),8,23 (d, 1H, J=9, 2Hz) , 13-C RMN (125 MHz) 21,7, 24,4, 24,9,IH,8, 113,0, 118,2, 122,8, 123,1, 125,9, 127,7, 128,5,129,9, 131,8, 134,9, 138,4, 143,8, 145,8, 151,9.

2-Isopropil-I-{4-[3-(4-fenil-piperazin-l-il)-propoxi] -benzenossulfonil}indolizina (1-50D). 2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8), 1-

fenilpiperazina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq) foramrefluídas em tolueno por 24 h. 0 solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. 0 meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. O óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,23 (d, 6H, J=6,9Hz), 1,98 (quint, 2H, J=6,6Hz), 2,07 (td, 2H, J=2,2Hz, J=4,4Hz), 2,53(t, 2H, J-I, OHz) , 2,57 (m, 4H) , 2,87 (bs, 1H) , 3,16 (m,4H), 3,62 (sept., 1H, J=6,9Hz), 4,15 (t, 2H, J=6,4Hz), 6,79(t, 11-1, J=7,3Hz), 6,84 (dt, 1H, J=I,1Hz, J=6,8Hz), 6,94(d, 2H, J=8, OHz) , 7,06 (d, 2H, J=8,9Hz), 7,16 (ddd, 1H,J=O,9Hz, J=6,8Hz, J=9,IHz), 7,22 (dd, 2H, J=7,4Hz,J=8,6Hz), 7,50 (s, 1H), 7,86 (d, 2H, J=8,9Hz), 8,22 (d, 1H,J=9, 2Hz) , 8,31 (d, 1H, J=6,9Hz), 13-C RMN (125 MHz) 25,8,26,6, 28,3, 50,7, 55,0, 56,3, 68,3, 110,2, 113,9, 114,4,116,4, 117,5, 119,6, 120,8, 124,5, 128,4, 129,7, 130,7,135,9, 139,3, 153,5, 164,0.{3-[4-(2-Isopropil-indolizina-1-sulfonil)-fenoxi]-propil}-(3,4,5-trimetoxibenzil)-amina (1-42Β) . 2-Isopropil-l-[[4-[(3-bromopropil)oxi]-fenil]sulfonil]indolizina (8), 3,4,5-Trimetoxibenzilamina (2,5 eq) , e trietilamina (1,5 eq)foram refluídas em tolueno por 24 h. O solvente foi entãoeliminado sob vácuo e o resíduo foi retido em H2O. O meiofoi extraído com CH2Cl2, seco sobre Na2SO4 e evaporado atésecar. O óleo obtido foi purificado via cromatografia flashcom o uso de CH2Cl2/ MeOH como o eluente.

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,13 (d, 6H, J=6,9Hz), 1,18 (s,1H) , 1,92 (m, 4H) , 2,75 (t, 2H, J=6,9Hz), 3,39 (s, 1H) ,3,49 (sept,, 1H, J=6,9Hz), 3,67 (s, 2H), 3,74 (s, 9H), 3,99(t, 2H, J=6, IHz) , 6,48 (s, 2H) , 6,62 (dt, 1H, J=I,1Hz,J=6, 8Hz) , 6,80 (d, 2H, J=8,9Hz), 6,96 (ddd, 1H, J=O, 9Hz,J=6, 7Hz, J=9, IHz) , 7,04 (s, 1H) , 7,74 (d, 2H, J=8,9Hz),7,83 (d, 1H, J=6,8Hz), 8,15 (d, 1H, J=9,2Hz), 13-C RMN (125MHz) 24,8, 29,2, 29,7, 54,1, 60,7, 66,5, 105,0, 111,4,112,6, 114,4, 118,3, 122,5, 125,7, 127,9, 134,3, 137,0,138,1, 153,2, 161,7.

4-(piridin-2-ilmetanossulfonil)-fenil éster de ácidoTolueno-4-sulfônico (5).

1H-NMR (500 MHz) ppm 2,48 (s, 3H), 4,55 (s, 2H), 7,10(d, 2H, J=8,7Hz), 7,26 (m, 1H), 7,35 (d, 2H, J=8,lHz), 7,46(d, 2H, J=7, 8Hz) , 7,61 (d, 2H, J=8,7Hz), 7,70 (d, 31-1,J=8, IHz) , 8,40 (d, 11-1, J=4,2Hz), 13-C RMN (125 MHz) 21,6,64,6, 122,9, 123,5, 125,8, 128,5, 130,0, 130,4, 131,8,136,8, 136,9, 140,0, 148,6, 149,7, 153,4.

1-[4-(3-Bromo-propoxi)-benzenesulfonil]-2-isopropil-indolizina (8)

1H-NMR (500 MHz) ppm 1,24 (d, 6H, J=6,8Hz), 2,32 (quint, 2H, J=6,lHz), 3,60 (m, 3H), 4,13 (t, 2H, J=5,8Hz),6.73 (dd, IH, J=3, 8Hz, J=9,8Hz), 6,92 (d, 2Η, J=8,9Hz),7,06 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,86 (d, 2H, J=8,8Hz), 7,93 (d,1H, J=6, 9Hz) , 8,26 (d, 1H, J=9,2Hz), 13-C RMN (125 MHz)24,8, 25,1, 29,8, 32,3, 65,8, 108,1, 1H,6, 112,9, 114,7,118,6, 122,7, 125,9, 128,3, 134,7, 137,6, 138,4, 161,7.

4-[4-(quinolin-2-ilmetanosulfonil)-fenoxi]-fenil ésterde ácido tolueno-4-sulfônico: A uma solução de NaHCO3 (4,9g, 58,38 mmol, 5 equiv.) e Na2SO3 (2,94 g, 23,35 mmol, 2equiv.) em H2O (20 mL) foi lentamente adicionado o cloretode sulfonila (em porção) e a reação foi agitada em rt por 2horas. Então o sal picolil clorídrico (4,04 g, 11,7 mmol, 1equiv.) foi adicionado muito lentamente em porções e areação foi agitada 10 minutos em rt e então aquecida até100°C por 5 horas. A reação foi resfriada até rt e extraídacom DCM várias vezes, o produto bruto foi usado para apróxima etapa sem purificação adicional. Sólido branco (49%de rendimento; 3,10 g; 5,68 mmol); Rf 0,5 (EtOAC/Hexanos2:1); 1H NMR RMN (CDCl3, 500 MHz) ppm 2,45 (3H, s, CH3),

4.74 (2H, s, CH2), 7,03 (2H, d, J = 8,8 Hz, CHAr) , 7,28(2H, d, J = 8,3 Hz, CHAr) , 7,60 (4H, d, J = 8,8 Hz, CHAr) ,7,65 (2H, d, J = 8,3 Hz, CHAr, 7,76 (1H, t, J = 8,3 Hz,CHAr) , 7,82 (1H, d, J = 8,3 Hz, CHAr, 7,85 (1H, d, J = 8,8Hz, CHAr) , 8,20 (1H, d, J = 8,3 Hz, CHAr) .Exemplo 3: estudo In Vivo

Um estudo agudo in vivo foi conduzida com camundongos.

Os camundongos (Tg PS 1/APPsw; de 4 meses de idade) foraminjetados por via intraperitoneal com lOmg/Kg do compostopor 4 dias ou o veículo apenas (100 microL de DMSO) . Umahora depois da última injeção, os camundongos foramsacrificados, seus cérebros e plasma coletados. Αβΐ-40 eΑβ 1-42 foram avaliados no plasma e Αβΐ-40 e Αβΐ-42hidrossolúveis cerebrais foram extraídos e quantificadospor ELISAs (Biosource, CA) . As concentrações da proteínaforam determinadas nas diferentes amostras com o uso dométodo BCA e os resultados foram calculados em pg de Αβ pormg de proteína. Os resultados foram finalmente expressoscomo uma % dos valores calculados em animais que recebem oveículo apenas (% de controle).

Os resultados com os compostos 1-52C e 1-76D sãomostrados na Figura 6 abaixo que mostra beta-amilóide (Αβ)plasmático (% de controle) com o uso de 10 mg/Kg decomposto. A Figura 7 mostra beta-amilóide hidrossolúvelcerebral (Αβ) (% de controle) com o uso de 10 mg/Kg doscompostos 1-52C e 1-76D. 0 controle foi veículo. Também sãomostrados os resultados com DAPT (1,3-Diazido-2-propiléster de ácido 4,4,4-trinitrobutírico), um conhecidoinibidor de beta-amilóide.

Claims

1. Método para o tratamento de uma doença associadacom acúmulo cerebral de amilóide de Alzheimer caracterizadopelo fato de compreender a administração a um animal ouhumano em necessidade deste de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I, II,III ou IV, ou um sal, éster, ou pró-fármaco deste, em que ocomposto reduz opcionalmente a produção de β-amilóide empelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% ou 50% emcélulas que superexpressam APP ou um fragmento desta, emque o composto de fórmula I é:<formula>formula see original document page 81</formula>em que o composto de fórmula II é:<formula>formula see original document page 81</formula>em que o composto de fórmula III é:<formula>formula see original document page 81</formula>e, em crue o composto de fórmula IV é:<formula>formula see original document page 81</formula>em que, para as Fórmulas I, II, e III,η é 3, 4 OU 5;R é opcionalmente alquil substituído, por exemplo,metil, etil, isopropil, butil, isobutil; alquenilopcionalmente substituído; alquinil opcionalmentesubstituído; cicloalquil opcionalmente substituído;heteroalquil opcionalmente substituído; aril opcionalmentesubstituído; heteroaril opcionalmente substituído; ou acil;ou qualquer um dos grupos listados para R na tabela 1;Am é um resíduo de uma amina, como uma alquil aminaopcionalmente substituída, ou Am é opcionalmenteselecionado dos grupos listados na tabela 2 ou 3;eem que, para Fórmula IV,η é 1, 2 ou 3;R é alquil opcionalmente substituído, alquenilopcionalmente substituído, ou alquinil opcionalmentesubstituído, ou, em uma modalidade, um Ci-I0 alquil, porexemplo, metil, etil, propil, butil, secbutil, isopropil,ou isobutil;R1 é H, alquil não substituído ou alquil substituído,como Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClO alquilsubstituído ou não substituído, incluindo de cadeia linear,ramificada, ou cicloalquil ou é o mesmo que R2;R2 é alquil não substituído ou alquil substituído,como Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClO alquilsubstituído ou não substituído, incluindo de cadeia linear,ramificada ou cicloalquil, em que o substituinte é, porexemplo, um grupo aromático substituído ou não substituído;e opcionalmente R1 e R2 juntos formam um heterocicloopcionalmente substituído, como um heterociclo de anelsaturado ou insaturado opcionalmente substituído de 5, 6,-7, 8, 9, 10, 11, 12 , 13 ou 14 membros, incluindo um oumais heteroátomos como nitrogênio.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que para a Fórmula I, II, ouIII, R é selecionado do grupo que consiste na tabela 1, eAm é selecionado do grupo que consiste na tabela 2 outabela 3; eem que, para Fórmula IV,η é 1, 2 ou 3;R é um Cl-IO alquil;R1 é um alquil Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ouClO substituído ou não substituído;R2 é um alquil Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClOsubstituído ou não substituído, em que o substituinte paraR2, se presente, é um grupo aromático substituído ou nãosubstituído.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que para a Fórmula I, II, ouIII, R é selecionado de H, metil, etil, isopropil, butil, eisobutil, e Am é uma alquil amina; eem que, para Fórmula IV, R é selecionado do grupo queconsiste em metil, etil, propil, butil, secbutil,isopropil, ou isobutil; R1 é um Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl,C8, C9, ou ClO alquil não substituído; e R2 é um Cl, C2,C3 , C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClO alquil não substituído.

4. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que ocomposto é selecionado do grupo que consiste em

5. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, ou 4, caracterizado pelo fato deque a quantidade terapeuticamente eficaz do composto éentre aproximadamente 0,02 a 1.000 mg por dose unitária; ouaproximadamente de 0,5 a 500 mg por dose unitária.

6. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado pelo fato deque a via de administração do composto ao animal ou humanoé parenteral, oral ou intraperitoneal.

7. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fatode que o composto é administrado por via oral em uma formade dosagem unitária selecionada do grupo que consiste emcápsulas de gelatina de revestimento duro ou macio,comprimidos, pastilhas, sachês, pílula, elixires,suspensões, xaropes, "wafers", pós, grânulos, soluções eemulsões.

8. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado pelofato de que compreende a administração a um ser humano emnecessidade da mesma.

9. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, caracterizado pelofato de que a doença é selecionada do grupo que consiste emdano cerebral traumático, doença de Alzheimer7 angiopatiaamilóide cerebral, hemorragia cerebral hereditária comamiloidose tipo Holandesa, ou outras formas de DA familiare angiopatia amilóide cerebral de Alzheimer familiar.

10. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9, caracterizadopelo fato de que a doença é doença de Alzheimer.éster, ou pró-fármaco deste, caracterizado pelo fato de queo composto de fórmula I é:

11. Composto de fórmula I, II, III ou IV, ou um sal,ester, ou pro-farmaco deste, caracterizado pelo fato de queo composto de formula I e: <formula>formula see original document page 85</formula> de que o composto de fórmula II é: <formula>formula see original document page 85</formula> de que o composto de fórmula III é: <formula>formula see original document page 85</formula> e de que o composto de fórmula IV é: <formula>formula see original document page 85</formula>em que, para Fórmulas I, II, e III,η é 3, 4 ou 5;R é alquil opcionalmente substituído, por exemplo,metil, etil, isopropil, butil, isobutil; alquenilopcionalmente substituído; alquinil opcionalmentesubstituído; cicloalquil opcionalmente substituído;heteroalquil opcionalmente substituído; aril opcionalmentesubstituído; heteroaril opcionalmente substituído; ou acil;ou qualquer um dos grupos listados para R na tabela 1;Am é um resíduo de uma amina, como uma alquil aminaopcionalmente substituída, ou Am é opcionalmenteselecionado dos grupos listados na tabela 2 ou 3; eem que, para Fórmula IV,η é 1,2 ou 3;R é alquil opcionalmente substituído, alquenilopcionalmente substituído ou alquinil opcionalmentesubstituído, ou, em uma modalidade, um Cl-IO alquil, porexemplo, metil, etil, propil, butil, secbutil, isopropil,ou isobutil;R1 é H, alquil não substituído ou alquil substituído,como C1, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, CS, ClO alquilsubstituído ou não substituído, incluindo de cadeia linear,ramificada ou cicloalquil, ou é o mesmo que R2;R2 é alquil não substituído ou alquil substituído,como Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClO alquilsubstituído ou não substituído, incluindo de cadeia linear,ramificada ou cicloalquil, em que o substituinte é, porexemplo, um grupo aromático substituído ou não substituído;e opcionalmente R1 e R2 juntos formam um heterocicloopcionalmente substituído, como um heterociclo de anelsaturado ou insaturado opcionalmente substituído de 5, 6,- 7, 8, 9, 10, 11, 12 , 13 ou 14 membros, incluindo um oumais heteroátomos como nitrogênio.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que para a Fórmula I, II, ouIII, R é selecionado do grupo que consiste na tabela 1, eAm é selecionado do grupo que consiste em tabela 2 outabela 3;eem que, para Fórmula IV,η é 1, 2 ou 3;R é um C1-10 alquil;R1 é um C1, C2, C3, C4, C5, CS, C7 , C8, C9, ou C10alquil substituído ou não substituído;R2 é um C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10 alquilsubstituído ou não substituído, em que o substituinte paraR2, se presente, é um grupo aromático substituído ou nãosubstituído.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que para a Fórmula I, II, ouIII, R é selecionado de H, metil, etil, isopropil, butil, eisobutil, e Am é uma alquil amina,· eem que, para Fórmula IV, R é selecionado do grupo queconsiste em metil, etil, propil, butil, secbutil,isopropil, ou isobutil; R1 é um Cl, C2, C3, C4, C5, C6, Cl,C8, C9, ou ClO alquil não substituído; e R2 é um Cl, C2,C3, C4, C5, C6, Cl, C8, C9, ClO alquil não substituído.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo queconsiste em<formula>formula see original document page 88</formula>

15. Composição farmacêutica caracterizada pelo fatode compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de umcomposto de qualquer uma das reivindicações 11, 12, 13 ou 14 ou um sal, éster, ou pró-fármaco deste, e um veiculofarmaceuticamente aceitável.