BRPI0708657A2 - utilização de pelo menos um composto - Google Patents

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BRPI0708657A2
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dry
radical
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BRPI0708657-1A
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Rebecca Pruss
Bruno Buisson
Thierry Bordet
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Trophos
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Abstract

UTILIZAçãO DE PELO MENOS UM COMPOSTO. A presente invenção se refere à utilização de derivados do 3,5-seco-4-nor-colestano para a obtenção de um medicamento citoprotetor, a exceção de um medicamento neuroprotetor, notadamente um medicamento cardioprotetor ou hepatoprotetor.

Description

"USO, Ε, COMPOSIÇÃO"
A presente invenção se refere à utilização de derivados do 3,5-seco-4-nor-colestano para a obtenção de um medicamento citoprotetor, comexceção de um medicamento neuroprotetor.
Os processos degenerativos celulares são caracterizados pelodesfuncionamento de células que provocam freqüentemente atividadescelulares indesejáveis e a morte celular.
As células desenvolveram mecanismos de adaptação, emresposta ao estresse, que alongam sua duração de vida ou retardam ouimpedem a morte celular (mecanismos citoprotetores).
Contudo, estes mecanismos citoprotetores são às vezesinsuficientes, inadequados, ou induzidos muito tarde para serem eficazes e ascélulas morrem. Pode-se então ser interessante dispor de novosmedicamentos, citoprotetores, que favoreceriam a citoproteção. Isto é um dosobjetivos da presente invenção.
O termo "citoprotetor" faz referência à capacidade de agentes,naturais ou não, de proteger uma célula contra a morte celular,particularmente a morte celular patológica, e/ou contra os desfuncionamentoscelulares que conduzem à morte celular. Estes desfuncionamentos celularespodem ser, por exemplo, de origem mitocondrial, como uma redução dacapacidade de gerar do ATP, uma incapacidade para captar e/ou reter o cálcio,ou a geração de radicais livres.
Dentre os mecanismos principais de morte celular, distingue-se essencialmente a necrose, a apoptose é a necrose.
A necrose é uma morte celular dita "acidental" que ocorredurante um dano tecidular. E a membrana plasmática da célula que é a maistocada, provocando uma modificação da homeostasia da célula. As célulasvão se preenchendo de água ao ponto disso provocar a Iise de sua membranaplásmica. Esta Iise celular conduz à liberação no meio ambiente do conteúdocitoplásmico. A necrose é a origem do processo inflamatório.
A necrose pode tocar um conjunto de células ou um tecidoenquanto que as outras partes de vizinhança permanecem vivas. Atransformação que resulta disso é uma mortificação de células ou tecidos.
Em outros termos, a necrose se define por modificaçõesmorfológicas que ocorrem quando uma célula chega ao fim da vida apósacontecimentos tais como um grande traumatismo como uma parada ou umadiminuição da circulação sangüínea no nível de um órgão, a hipertermia(elevação importante da temperatura), uma intoxicação por um produtoquímico, um choque físico, etc...
Uma das necroses mais conhecidas é aquela do miocárdiodurante o infarto (parada súbita de circulação sangüínea no nível do músculocardíaco) em função de uma obliteração (obstrução) de uma artéria coronária.
A apoptose faz parte integrante da fisiologia normal de umorganismo. É uma forma fisiológica de morte celular altamente regulada e énecessária para a sobrevivência dos organismos multicelulares. A apoptose éum processo que desempenha um papel primordial durante a embriogênese.
As células em apoptose ou apoptóticas irão se isolar das outrascélulas. A apoptose implica habitualmente células individuais em um tecido enão provoca a inflamação. Um dos pontos morfológicos característicos daapoptose é a importante condensação, ao mesmo tempo, do núcleo e docitoplasma o que induz uma diminuição significativa do volume celular. Onúcleo se fragmenta em seguida, cada fragmento é cercado de um duploinvólucro. Corpos apoptóticos (elementos citoplásmicos e nucleares) são emseguida liberados e serão absorvidos por fagocitose pelas células vizinhas.
A apoptose pode ser induzida de diferentes maneiras. Porexemplo, uma radiação, a presença de um composto químico ou de umhormônio são estímulos susceptíveis de induzir uma cascata deacontecimentos apoptóticos na célula. Sinais intracelulares assim como umamitose incompleta ou um dano ao DNA podem também induzir a apoptose.
A apoptose intervém também após a ação de um genotóxicoou durante uma doença. Certas patologias são caracterizadas por um apoptoseanormal, provocando a perda de certas populações celulares, como porexemplo, a hepatotoxicidade, as retinopatias, a cardiotoxicidade.
Distingue-se então a apoptose fisiológica e a apoptosepatológica. A invenção se dirige essencialmente à apoptose patológica.
Existem outros mecanismos de morte celular, como porexemplo, a necrose que apresenta características da necrose e da apoptose.
Uma célula que morre por necrose apresenta características similares àquelasde uma célula que morre por necrose, mas as etapas bioquímicas destemecanismo se assimilam mais àquelas da apoptose. Este mecanismo de mortecelular intervém, por exemplo, na isquemia.
É, assim também, um dos objetivos da presente invençãodispor de novos medicamentos que poderiam permitir prevenir e/ou tratar anecrose e/ou a apoptose patológica e/ou a necrose (medicamentosantinecróticos e/ou antiapoptóticos e/ou antinecroptóticos).
Os processos degenerativos celulares podem resultar, dentreoutros, de situações patológicas reagrupadas sob o termo de doenças ou deafecções degenerativas, traumatismos, ou exposição à diversos fatores.
Estes traumatismos e fatores podem incluir, por exemplo, aexposição às radiações (UV, gama), a hipoxia ou a privação de oxigênio, aprivação de nutrimentos, a privação de fatores de crescimento, venenos,toxinas celulares, dejetos, toxinas ambientais, radicais livres, oxigêniosreativos ou ainda certos acontecimentos e/ou procedimentos médicos como,por exemplo, traumatismos cirúrgicos que incluem os transplantes de células,de tecidos e de órgãos. Pode-se citar igualmente agentes químicos oubiológicos utilizados como agentes terapêuticos no contexto de tratamentosmédicos como, por exemplo, agentes citoestáticos ou agentesantiinflamatórios.
A invenção não tem por objetivo tratar as causas extracelularesde patologias ou de processos degenerativos que podem conduzir à mortecelular, mas sim as conseqüências no nível celular dos referidos processospatológicos ou das referidas patologias e particularmente de proteger a célulacontra as referidas conseqüências.
Dentre as situações patológicas caracterizadas por um processodegenerativo mais importantes, outras que não as afecções neurológicas ouneurodegenerativas às quais a presente invenção não se dirige, se encontram:
as doenças os dos ossos, de articulações, do tecido conjuntivoe da cartilagem, tais como a osteoporose, a osteomielite, as artrites das quais,por exemplo, a osteoartrite, a artrite reumatóide e a artrite psoriática, anecrose vascular, a fibrodisplasia ossificante progressiva, o raquitismo, asíndrome de Cushing;
as doenças musculares tais como a distrofia muscular, como,por exemplo, a distrofia muscular de Duchenne, as distrofias miotônicas, asmiopatias e as miastenias;
as doenças da pele, tais como as dermatites, o eczema, apsoríase, o envelhecimento, ou ainda as alterações da cicatrização;
as doenças cardiovasculares tais como a isquemia cardíacae/ou vascular, o infarto do miocárdio, a cardiopatia isquêmica, a insuficiênciacardíaca crônica ou aguda, a disritmia cardíaca, a fibrilação auricular, afibrilação ventricular, a taquicardia paroxística, a insuficiência cardíaca, aanoxia, a hipoxia, os efeitos secundários devidos a terapêuticas com agentesanticancerígenos; as doenças circulatórias tais como a aterosclerose, aescleroses arteriais, é as doenças vasculares periféricas, os acidentesvasculares cerebrais, os aneurismas;
as doenças hematológicas e vasculares tais como: a anemia, aamiloidose vascular, as hemorragias, a drepanocitose, a síndrome dafragmentação dos glóbulos vermelhos, a neutropenia, a leucopenia, a aplasiamedular, a pancitopenia, a trombocitopenia, a hemofilia;
as doenças do pulmão que incluem a pneumonia, a asma; asdoenças crônicas obstrutivas dos pulmões como, por exemplo, as bronquitescrônicas e o enfisema;
as doenças do trato gastrintestinal, tais como as úlceras;as doenças do fígado como, por exemplo, as hepatitesparticularmente as hepatites de origem viral ou que têm por agente causaioutros agentes infecciosos, as hepatites auto-imunes, as hepatites fulminantes,certos distúrbios metabólicos hereditários, a doença de Wilson, as cirroses, aesteatose hepática não alcoólica, as doenças do fígado devidas às toxinas ouaos medicamentos;
as doenças do pâncreas como, por exemplo, as pancreatitesagudas ou crônicas;
as doenças metabólicas tais como os diabetes melitus einsípido, as tiroiditas;
as doenças dos rins tais como, por exemplo, os distúrbiosrenais agudos ou glomerulonefrite;
as infecções virais é bacterianas tal como a septicemia;
as intoxicações severas por agentes químicos, toxinas oumedicamentos;
as afecções degenerativas associadas à Síndrome daImunodefíciência Adquirida (AIDS);
os distúrbios associados ao envelhecimento, tal como asíndrome do envelhecimento acelerado;
as doenças inflamatórias, tais como a doença de Crohn,poliartrite reumatóide;
as doenças auto-imunes tais como o lupus eritematoso;os distúrbios dentais tais como aqueles que conduzem àdegradação dos tecidos como, por exemplo, as periodontites;
as doenças ou distúrbios oftálmicos que incluem asretinopatias diabéticas, o glaucoma, as degenerações maculares, adegeneração retiniana, a retinite pigmentária, os furos ou rupturas retinianas,o descolamente retiniano, a isquemia retiniana, as retinopatias agudasassociados ao traumatismo, as degenerações inflamatórias, as complicaçõespós-cirúrgicos, as retinopatias medicamentosas, a catarata;
os distúrbios das vias auditivas, tais como a otosclerose e asurdez induzida pelos antibióticos;
as doenças associadas às mitocôndrias (patologiasmitocondriais), tais como a ataxia de Friedrich, a distrofia muscular congênitacom anomalia mitocondrial estrutural, certas miopatias (síndrome de MELAS,síndrome de MERFF, síndrome de Pearson), a síndrome de MIDD (diabetesmitocondriais e surdez), a síndrome Wolfram, a distonia.
A invenção se interessa igualmente à proteção das células, ostecidos e/ou os órgãos transplantados, que sejam antes, durante (retirada,transporte e/ou re-implante) ou após o transplante.
Procura-se sempre compostos farmacologicamente ativos paralutar contra os processos degenerativos evocados acima.
A presente invenção responde a este pedido de compostoscitoprotetores. Com efeito, a requerente descobriu que os derivados do 3,5 -seco-4-norcolestano e notadamente o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol e um de seus ésteres são dotados de notáveis propriedades citoprotetoras.
E por isso que a presente invenção tem por objeto a utilizaçãode pelo menos um composto que responde à fórmula I
<formula>formula see original document page 7</formula>na qual
- X e Y tomados juntos representam uma função ceto (= O),um grupamento oxima (= NOH) ou um grupamento metilaxima (= NHOMe)ou X representa uma hidroxila e Y um átomo de hidrogênio,
- B representa um radical hidroxila e C e D, idênticos oudiferentes, representam um átomo de hidrogênio, ou um radical alquila, linearou ramificado, compreendendo de 1 a 4 átomos de carbono,
ou de B e C tomados juntos representam uma função ceto e Dum radical metila, hidroxila, ou metilamina,
ou B e C representam um átomo de hidrogênio e D um radicalmetilamina,
ou B e C tomados juntos representam um grupamento oxima eD um radical metila,
e R representa um radical alquila, linear ou ramificado,compreendendo de 1 a 10 átomos de carbono,
ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis, ou um de seus ésteres ou um dos sais de adição com os ácidosfarmaceuticamente aceitáveis dos referidos ésteres,
para a preparação de um medicamento citoprotetor, à exceçãode um medicamento neuroprotetor.
De acordo com a invenção, os sais de adição com os ácidosfarmaceuticamente aceitáveis podem ser, por exemplo, sais formados com osácidos clorídricos, bromidríco, nítricos, sulfuricos, fosfóricos, acéticos,fórmico, propiônico, benzóicos, maleicos, fumárico, succínico, tártarico,cítricos, oxálico, glioxílico, aspárticos, alcano sulfônicos tais como os ácidosmetano ou etano sulfônicos, arilsulfônicos, tais como os ácidos benzeno ouparatolueno sulfônicos, ou carboxílicos.
De acordo com a invenção o grupamento oxima representa osisômeros sin é antipuros ou em mistura associados na orientação da ligaçãoN-O em relação à dupla ligação C=N.
De acordo com uma forma particular da invenção, o radical Rde compostos de fórmula I utilizáveis é de preferência o radical do colestanode fórmula II
De acordo com outras formas particulares da invenção, oscompostos de fórmula I para os quais XeY tomados juntos representam umafunção ceto ou representam um grupamento oxima, são preferencialmenteutilizados.
De acordo ainda com outras formas particulares da invenção,os compostos de fórmula I para os quais B representa um radical hidroxila e Ce D, idênticos ou diferentes, representam um átomo de hidrogênio ou umradical alquila, linear ou ramificado, compreendendo de 1 a 4 átomos decarbono, ou ainda para os quais BeC tomados juntos representam umafunção ceto e D representa um radical metila, são, preferencialmenteutilizados.
Muito preferencialmente, utiliza-se de acordo com a invençãopelo menos um composto de fórmula I escolhido dentre
o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol,
o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-metil álcool, ou
o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-dimetil álcool,
ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis, ou um de seus ésteres ou um dos sais de adição com os ácidosfarmaceuticamente aceitáveis dos referidos ésteres.
As interessantes propriedades citoprotetoras de compostos defórmula I justificam sua utilização para a preparação de um medicamentocitoprotetor, particularmente destinado ao tratamento ou à prevenção danecrose e/ou da apoptose e/ou da necrose (medicamentos antinecróticos e/ouantiapoptóticos e/ou antinecroptóticos) ou ainda afecções como
as doenças dos ossos, das articulações, do tecido conjuntivoe/ou da cartilagem,
as doenças musculares;
as doenças da pele;
as doenças cardiovasculares;
as doenças circulatórias;
as doenças hematológicas e vasculares;
as doenças do pulmão;
as doenças do trato gastrintestinal;
as doenças do fígado;
as doenças do pâncreas;
as doenças metabólicas;
as doenças dos rins;
as infecções virais e bacterianas;
as intoxicações severas;
as afecções degenerativas associadas à síndrome deimunodeficiência adquirida (AIDS);
os distúrbios associados ao envelhecimento;
as doenças inflamatórias;
as doenças auto-imunes;
os distúrbios dentais;
as doenças ou distúrbios oftálmicos;
as doenças das vias auditivas;
as doenças associadas às mitocôndrias (patologiasmitocondriais).
A invenção se interessa igualmente à proteção das células, dostecidos ou dos órgãos transplantados, que seja antes, durante (retirada,transporte e/ou re-implante) ou após o transplante.Vantajosamente, os compostos de fórmula I podem serutilizados na preparação de um medicamento destinado à proteção das célulascardíacas (medicamento cardioprotetor), à proteção de células hepáticas(medicamento hepatoprotetor) ou de um medicamento destinado aotratamento ou a prevenção das doenças associadas às mitocôndrias.
De acordo com a invenção o composto de fórmula I estávantajosamente presente no medicamento citoprotetor com dosesfisiologicamente eficazes; os referidos medicamentos contêm notadamenteuma dose citoprotetora eficaz de pelo menos um dos compostos de fórmula I.
A título de medicamentos, os compostos que respondem àfórmula I, seus ésteres, seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis bem como os sais de adições com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis dos referidos ésteres podem ser formulados para a via digestiva ouparenteral.
Os medicamentos de acordo com a invenção podemcompreender, além disso, pelo menos outro ingrediente terapeuticamenteativo, seja ativo sobre a mesma patologia ou sobre uma patologia diferente,para uma utilização simultânea, separada ou estendida no tempo, notadamentedurante um tratamento em um sujeito atingido de uma das patologiaspreviamente citadas.
De acordo com a invenção, o composto de fórmula I pode serutilizado no medicamento, em mistura com um ou vários excipientes ouveículos inertes, ou seja, farmaceuticamente inativos e não tóxicos. Pode-secitar, por exemplo, soluções salinas, fisiológicas, isotônicas, tamponadas, etc.,compatíveis com um uso farmacêutico e conhecidas pelo especialista. Ascomposições podem conter um ou vários agentes ou veículos escolhidosdentre dispersantes, solubilizantes, estabilizantes, conservadores, etc. Agentesou veículos utilizáveis nas formulações (líquidos e/ou injetáveis e/ou sólidos)são notadamente a metilcelulose, a hidroximatilcelulose, acarboximetilcelulose, as ciclodextrinas, o polisorbato 80, o manitol, agelatina, a lactose, óleos vegetais ou animais, a acácia, etc. As composiçõespodem ser formuladas sob forma de suspensão injetável, géis, óleos,comprimidos, supositórios, pós, gélulas, cápsulas, etc., eventualmente atravésde formas galênicas ou dispositivos que asseguram uma liberação prolongadae/ou retardada. Para este tipo de formulação, utiliza-se vantajosamente umagente tal como a celulose, carbonatos ou amidos.
A administração pode ser realizada por qualquer métodoconhecido pelo especialista, de preferência por via oral ou por injeção,tipicamente por via intraperitonal, intracerebral, intratecal, intravenosa,intraarterial ou intramuscular. A administração por via oral é preferida.Tratando-se de um tratamento a longo prazo, a via de administração preferidaserá sublingual, oral ou transcutânea.
Para as injeções, os compostos são condicionados geralmentesob forma de suspensões líquidas, que podem ser injetadas através de seringasou perfusões, por exemplo. Entende-se que a vazão e/ou a dose injetada, ougeralmente a dose a administrar, podem ser adaptados pelo especialista emfunção do paciente, da patologia, do modo de administração, etc. Entende-seque administrações repetidas podem ser realizadas, eventualmente emcombinação com outros ingredientes ativos e/ou qualquer veículo aceitável noplano farmacêutico (tampões, soluções salinas, isotônica, na presença deagentes estabilizadores, etc.).
A invenção é utilizável nos mamíferos, notadamente no serhumano.
Em geral a dose diária do composto será a dose mínima paraobter o efeito terapêutico desejado. As doses dos compostos acima descritos epor exemplo, do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol em geral serãocompreendidas entre 0,001 a 100 mg por quilo por dia para o homem.
Se necessário, a dose diária pode ser administrada duas, três,quatro, cinco, seis ou mais, tomados por dia ou por sub-doses múltiplasadministradas por intervalos apropriados durante o dia.
A quantidade escolhida dependerá de múltiplos fatores, emparticular da via de administração, da duração de administração, do momentoda administração, da velocidade de eliminação do composto, do ou dosdiferentes produtos utilizados em combinação com o composto, da idade, dopeso e da condição física do paciente, assim como seu histórico médico, e detodas as informações conhecidas em medicina.
A prescrição do médico que trata poderá começar com dosesinferiores as geralmente utilizadas, e depois estas doses serãoprogressivamente aumentadas a fim de melhor dominar o surgimento deeventuais efeitos secundários.
As composições de acordo com a invenção, notadamente ascomposições farmacêuticas ou medicamentos, podem compreender pelomenos um composto de fórmula I tais como descritos previamente, ou um deseus sais de adição com os ácidos farmaceuticamente aceitáveis, ou um deseus ésteres ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis dos referidos ésteres,
As composições farmacêuticas de acordo com a invençãopodem compreender, além disso, pelo menos outro ingredienteterapeuticamente ativo, para uma utilização simultânea, separada ou estendidano tempo, notadamente durante um tratamento no sujeito atingido de uma daspatologias previamente citadas.
As composições farmacêuticas de acordo com a invençãopodem vantajosamente compreender um ou vários excipientes ou veículosinertes, ou seja farmaceuticamente inativos e não tóxicos.
Os compostos de fórmula I utilizados de acordo com ainvenção podem ser sintetizados fazendo reagir um composto de fórmula III<formula>formula see original document page 14</formula>
na qual R tem as significações precedentemente indicadas que se submete
- seja
à ação da metilamina e depois de hidroxilamina para obter umcomposto de fórmula I na qual R tem as significações precedentementeindicadas, XeY representam juntos um grupamento oxima, B representajuntamente com C uma função ceto e D um grupamento metila amina
- seja
a uma metilação para obter um composto de fórmula IV
<formula>formula see original document page 14</formula>
na qual R tem as significações precedentemente indicadas, que se submete àação de um agente de proteção da função cetona em posição 5 para obter umcomposto de fórmula V
<formula>formula see original document page 14</formula>
na qual R tem as significações precedentemente indicadas, que
- ou ainda
faz-se reagir com o metil lítio e depois se submete à ação deum agente de desproteção da função cetona em posição 5 e depois se fazreagir com a hidroxilamina para obter um composto de fórmula I na qual Rtem as significação precedentemente indicadas, XeY representam juntos umgrupamento oxima, B representa um grupamento hidroxila e C e Drepresentam radicais alquilas lineares ou ramificados de 1 a 4 átomos decarbono,
- ou ainda
saponifica-se, e depois faz reagir com um composto defórmula H3C-NH-OCH3, e depois faz reagir com o metil lítio, para obter umcomposto de fórmula VI
<formula>formula see original document page 15</formula>
que se submete a uma redução da função cetona e depois a submete à ação deum agente de desproteção da função cetona em posição 5 e depois faz reagircom a hidroxilamina para obter um composto de fórmula I na qual R tem assignificações precedentemente indicadas, XeY representam juntos umgrupamento oxima, B representa um grupamento hidroxila, e C representa umradical alquila linear ou ramificado de 1 a 4 átomos de carbono eventualmentesubstituído e D representa um átomo de hidrogênio,
- ou ainda
se reduz para obter um composto de fórmula VII
<formula>formula see original document page 15</formula>
na qual R tem as significações precedentemente indicadas, B representa umgrupamento hidroxila, e C e D representam um átomo de hidrogênio, que
- sejasubmete-se à ação de um agente de oxidação para obter um
na qual R tem as significações precedentemente indicadas, na qual se preparaa base de Schiff e depois reduz, e depois se submete à ação de um agente dedesproteção da função cetona em posição 5, e depois faz reagir com alydroxilamina para obter um composto de fórmula I na qual R tem assignificações precedentemente indicadas, XeY representam juntos umgrupamento oxima, B representa um grupamento metilamina, e C e Drepresentam um átomo de hidrogênio.
- seja
submete-se à ação de um agente de desproteção da funçãocetona em posição 5 e depois faz reagir uma amina escolhida dentre ahidroxilamina, a metil-hidroxiamina e a carboximetil-hidroxilamina paraobter um composto de fórmula I na qual R tem as significaçõesprecedentemente indicadas, XeY representam juntos respectivamente umgrupamento oxima, metiloxima, e carboximetiloxima, B representa umgrupamento hidroxilado, e C e D representam um átomo de hidrogênio,
Em condições preferenciais de emprego do processo acimadescrito,
- a reação do composto de fórmula III com a metilamina érealizada na presença de um agente de acoplamento que ativa a função ácidacomo o BOP (Benzotriazol-i-il-oxi-tris-(dimetilamino)-fosfôniohexafluorofosfato) ou o TBTU (2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato) vantajosamente na presença de uma basecomo a N metilmorfolina, notadamente em um solvente adaptado comodiclorometano ou a dimetilformamida. De preferência realiza-o na presençade EDCI (l-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida) associado à 4-dimetilaminopiridina no diclorometano, a mistura estando submetida a umaagitação à temperatura ambiente durante 24 h. O produto é em seguidacolocado em solução, de preferência, na piridina, e depois se acrescenta de 5 a7 e notadamente 6 equivalentes de cloridrato de hidroxilamina.
- a metilação do composto de fórmula III é realizada porreação com o metanol na presença de cloreto tionila, de preferência emsolubilizante o ácido de fórmula II em um volume adaptado de uma misturade 70% de metanol e 30% de diclorometano. Resfria-se a O0C e se acrescentagota a gota 3 equivalentes de cloreto de tionila. Agita-se então 2 horas àtemperatura ambiente. Sobre este composto, a proteção da função cetona éefetuada de preferência em solubilizante o produto em um excesso, porexemplo, 10 equivalentes de trimetilartoformato e um volume suficiente deetileno glicol, e depois adição de ácido p-toluenossulfônico anidro.
- a reação do composto de fórmula V com o metil lítio depreferência é efetuada no THF anidro e depois após resfriamento cerca de -45°C, adição gota a gota de um excesso de metil lítio. A desproteção dodioxolano que bloqueia a função cetona em posição 5, é realizada na acetonana presença de ácido sulfurico. De preferência efetua-o no dioxano, napresença de uma mistura água /ácido acético 1/1. A oxima da cetona évantajosamente realizada como acima.
- a saponificação do composto de fórmula V é realizada com asoda de preferência em dioxano. Acrescenta-se notadamente cerca de 2equivalentes de uma solução aquosa de soda. Este produto é colocado emreação com um composto de fórmula H3C-NH-OCH3, por exemplo, napresença de um agente de acoplamento que ativa a função ácida como o BOPou o TBTU na presença de uma base como a N-metilmorfolina em umsolvente adaptado como o diclorometano ou a dimetilformamida. Depreferência realiza-o na presença de EDCI associado ao hidroxibenzotriazolcom o trietilamina acrescentada gota a gota no solvente. Este produto écolocado em reação com o metil lítio sob atmosfera de argônio de acordo como protocolo descrito acima, e depois a função cetona em 3 é reduzida peloboroidreto de sódio. O produto obtido é, em seguida, submetido à desproteçãoda função cetona em posição 5 e colocado em reação com hidroxilamina deacordo com o mesmo protocolo descrito acima.
- a redução do composto de fórmula V para obter o compostode fórmula VII é realizada de preferência pelo hidreto de alumínio lítionotadamente colocando-o em suspensão no tetraidrofurano. Hidrolisa-se comprecaução por adição de uma solução de sulfato de sódio.
- a oxidação do composto de fórmula VII é realizada comajuda do clorocromato de piridínio. Sobre este produto obtém-se a base deSchiff que é reduzida instantaneamente notadamente em solubilizante sobargônio, de preferência, no etanol na presença de trietilamina, de cloridrato demetilamina e de tetraisopropóxido de titânio, e depois adição de boroidreto desódio. A desproteção da função cetona em posição 5 assim como a reaçãocom hidroxilamina são efetuadas nas condições precedentemente descritas.
Os exemplos que seguem ilustram o presente pedido semcontudo limitá-lo.
Exemplos
Os tempos de retenção abaixo são expressos em minutos ecentésimos de minuto.
O método de cromatografia líquida utilizado para o conjuntodos produtos é o seguinte:
Coluna: Macherey-Nagel - Nucleosil® 300-6 C4 - 150x4,6mm Gradiente: água (+0.05% ácido trifluoroacético)/acetonitrila (+0,05%ácido trifluoroacético)
t - 0 min: 60% acetonitrila, 40% H2Ot = 6 min: 100% acetonitrila, 0% H2Ot = 11 min: 100% acetonitrila, 0% H2Ot - 13 min: 60% acetonitrila, 40% H2Ot = 15 min: 60% acetonitrila, 40% H2O.
As condições de ionização para o espectrômetro de massa são:
Temperatura da fonte: 25O0CTensão de cone: 50 VCapilar de voltagem: 3 kVRf lens: 0.3 V
Exemplo 1: síntese da 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3- metilamida
Etapa A: Inicialmente, em um balão introduz-se 250 mg de3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, ácido oxima-3-óico, 38 mg de cloridrato demetilamina, 250 mg de EDCI, 100 mg de DMAP e 2,5 ml diclorometano. Asolução é agitada 24 horas à temperatura ambiente e depois o meio reacional édiluído por adição de diclorometano e lavado com uma solução debicarbonato de sódio a 10%. A fase orgânica é secada sobre sulfato demagnésio e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido épurificado por flash cromatografia (CH2Cl2/MeOH 95/5). Recupera-se 176mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-metilamida com um rendimento de 68%.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 4 min 42 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] + = 418;[2M+H] +=835
Etapa B: Em seguida, em um balão, introduz-se 50 mg de 3,5-seco-4-nor- colestano-5-ona-3-metilamida, 50 mg de cloridrato dehidroxilamina em 1 ml de piridina. Agita-se 16 horas à temperatura ambientee depois o meio reacional é concentrado sob pressão reduzida. O resíduoobtido é retomado em uma mistura CH2Cl2 / H2O; a fase orgânica é separada,lavada com água, secada sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sobpressão reduzida. Recupera-se 40,6 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona,oxima-3-metilamida com um rendimento de 78%.
Análise
RMN-I H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 3 min 70 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 433;[2M+H] +=865
Exemplo 2: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-dimetil álcool
Etapa A: Em um balão, solubiliza-se 10,5 g de ácido 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-oíco em 378 ml de metanol e 146 ml dediclorometano. Resfna-se a O0C e acrescenta-se gota a gota 5,7 ml de cloretode tionila. Agita-se então 2 horas à temperatura ambiente. O meio reacional éconcentrado sob pressão reduzida, co-evaporado ao tolueno e depois aodiclorometano. Obtém-se 10,3 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-metiléster com rendimento de 94%. O produto é utilizado tal qual sem purificação.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 4 min 69 centésimosPicos detectado em espectrometria de massa: {M+H} + = 419;
[2M+H] + = 785
Etapa B: Em um balão, coloca-se em solução 9,62 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-metil éster em 25 ml trimetilartoformato e 53ml de etileno glicol. Acrescenta-se então 400 mg (2,3 mmol) de ácido p-toluenossulfônico anidro e depois se agita 1 noite à temperatura ambiente.
Acrescenta-se o acetato de etila ao meio reacional; realiza-se uma lavagempor uma solução a 10% de hidrogenocarbonato de sódio. A fase orgânica éseparada, secada sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressãoreduzida. Obtém-se 9,95 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metil éster com rendimento de 93%. O produto é utilizado tal qual sempurificação.
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 5 min 76 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: {M+H} + = 463
Etapa C: Em um balão, solubiliza-se 300 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5 (etileno dióxi)-3-metila éster em 5 ml de THF anidro. Omeio é resfriado à -45°C e depois se acrescenta gota a gota 1,36 ml de umasolução de metil lítio 1,6M no éter. Após 30 minutos de agitação à -45°C.
Acrescenta-se algumas gotas de metanol ao meio reacional e o leva àtemperatura ambiente. Retoma-se em 20 ml de éter dietílico e o lava com umasolução saturada de bicarbonato de sódio, e depois com uma solução saturadade cloreto de sódio. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio, edepois concentrada sob pressão reduzida. Obtém-se 295 mg 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5 (etileno dióxi)-3-dimetil álcool (PM=462) com um rendimentode 98%.
Tempo de retenção: 5 min 56 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M-(CH2C)H-CH2OH + H2O) +H]+] = 401
Etapa D: Em um balão, acrescenta-se 6 ml de uma misturaágua /ácido acético 1/1 e 295 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5 (etilenodióxi)-3-dimetil álcool; aquece ao refluxo durante 1 h 30. Após resfriamento,o meio reacional é diluído com o acetato de etila, lavado com uma solução desaturado de cloreto de sódio, e depois com uma solução saturada debicarbonato de sódio. Por fim, a fase orgânica é secada sobre sulfato demagnésio e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto obtido épurificado por flash cromatografia (éter de petróleo / acetato de etila 8/2).
Obtém 180 mg 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-dimetil álcool com umrendimento de 68%.RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 5 min 08 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] +=419;[M- H20+H] +=401; [2M+H] +=837
Exemplo 3: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3- dimetilálcool
Em um balão, introduz 1 g do composto do exemplo 2, 1 g decloridrato de hidroxilamina em 53 ml de piridina e alguns ml dediclorometano para solubilizar a cetona. Agita-se 16 horas à temperaturaambiente e depois o meio reacional é concentrado sob pressão reduzida. Oresíduo obtido é incluído em uma mistura CH2Cl2ZH2O; a fase orgânica éseparada, lavada à água, secada sobre sulfato de sódio anidro e concentradasob pressão reduzida. Recupera-se 814 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona,oxima-3-dimetil álcool com um rendimento de 78%.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 5 min 09 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 434;[2M+H] +=867
Exemplo 4: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3-metilaálcool
Etapa A: Em um balão, coloca-se 2 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metila éster em 26 ml de dioxano. Acrescenta-se 8,6 ml de uma solução de soda IN. O meio reacional é aquecido ao refluxodurante 1 h 30 e o dioxano é evaporado sob pressão reduzida. Acidifica-se asolução obtida por adição de uma solução de ácido clorídrico IN até o pH=l eextrai-se 2 vezes ao tolueno. As fases orgânicas são reunidas, secadas sobresulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida. Recupera-se1,92 g de ácido 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-oíco com umrendimento de 99% que é utilizado sem tratamento suplementar na etapaseguinte.
Etapa Β: Em um balão, coloca 1,9 g de ácido 3,5-seco-4-nor-colestano- 5,5 (etileno dióxi)-3-oíco em 30 ml diclorometano. Acrescenta-se aesta solução 1,06 g de EDCI, 743 mg de HOBT, 537 mg de cloridrato deΝ,Ο- dimetil-hidroxilamina e depois 1.37 ml de trietilamina gota a gota.
Agita-se à temperatura ambiente durante 16 horas. Acrescenta-se uma misturaCH2CI2/H2O ao meio reacional e extrai-se 3 vezes ao diclorometano. As fasesorgânicas são reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio anidro econcentradas sob pressão reduzida. O resíduo obtido é purificado por flashcromatografia (CH2CVacetato de etila 8/2). Recupera-se 1,46 g 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-(N,N-metóxi-metil)amida com umrendimento de 70%.
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 5 min 31 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 492
Etapa C: Em um balão sob argônio, introduz-se 1, 4 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-(N, N-metóxi-metil)amida em 20ml de tetraidrofurano anidro e resfna-se à O0C. Acrescenta-se então gota agota 3,38 ml de uma solução de metil lítio 1.6M no éter. O meio reacional éagitado 3 h 40 a O0C e depois se acrescenta gota a gota uma solução de 0.72ml de ácido clorídrico concentrado em 7.28 ml de água. O tetraidrofurano éevaporado sob pressão reduzida; a solução aquosa obtida é basificada poradição de soda 1 N até o pH=10. Extrai-se ao éter dietílico; as fases orgânicassão reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio anidro, e concentradas sobpressão reduzida. O resíduo obtido é purificado por flash cromatografia (éterde petróleo/ acetato de etila 9/1). Recupera-se 930 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metila cetona com um rendimento de 73%.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 5 min 65 centésimosPico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 403
Etapa D: Em um balão, coloca-se 119 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano- 5,5(etileno dióxi)-3-metilcetona da etapa C em 1, 5 ml de metanol.Resfria-se a 0°C e acrescenta-se 10 mg de boroidreto de sódio. O meioreacional é agitado a 0°C durante Ih e depois concentrado sob pressãoreduzida. O resíduo é incluído na água e extraído ao diclorometano. A faseorgânica é secada sobre sulfato de magnésio e concentrada sob pressãoreduzida. Recupera-se 94 mg 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metilálcool com um rendimento de 78%, este produto é utilizado tal qual.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 5 min 22 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 387
Etapa E: Opera como na etapa D do exemplo 2 paradesproteger a cetona em 5.
Etapa F: Em um balão se introduz 121 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-metil álcool, 1,5 ml de piridina e 121 mg de cloridrato dehidroxilamina. A solução é agitada dois dias à temperatura ambiente. O meioreacional é concentrado sob pressão reduzida, incluído na água e extraído aodiclorometano. A fase orgânica é em seguida lavada a água, e depois secadasobre sulfato de magnésio e concentrada sob pressão reduzida. O produtoassim obtido é purificado por flash cromatografia (éter de petróleo/ acetato deetila 9/1). Obtém-se 66 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3-metilálcool com um rendimento de 53%.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 4 min 91 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 420
Exemplo 5: Síntese de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3-metilamina
Etapa A: Em um balão, se coloca em suspensão 615 mg deLiAlH4 em 57 ml de THF. Resfria-se a O0C e acrescenta-se gota a gota umasolução de 3,0 g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metil éster,em 57 ml de tetraidrofurano. Agita-se então a 0°C durante 5 h. Hidrolisa-secom precaução por adição de uma solução de sulfato de sódio; a soluçãobranca obtida é agitada 30 minutos, e depois filtrada. O filtrado é concentradosob pressão reduzida e incluído na água, extraído com o acetato de etila. Afase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio e depois concentrado sobpressão reduzida. Obtém-se 2,55g de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etilenodióxi)-3-ol com um rendimento de 85%, este produto é utilizado tal qual.
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 4 min 82 centésimosPicos detectados em espectrometria de massa: [M-(CH2C)H-CH2OH + H2O) +H]+] = 373
Etapa B: Em um balão sob argônio, solubiliza-se 476 mg de3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-ol, em 7 ml de diclorometano edepois se acrescenta 189 mg de alumina neutra e 399 mg de clorocromato depiridínio; agita-se a temperatura ambiente durante 3 h 30. O meio reacional éfiltrado sobre Celite®; o filtrado é concentrado sob pressão reduzida. Oresíduo obtido é purificado por flash cromatografia (tolueno/ acetato de etila9/1 e depois 8/2). Obtém-se 328 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etilenodióxi)-3-al com um rendimento de 69%.
Tempo de retenção: 5 min 57 centésimos
Picos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 433
Etapa C: Em um balão sob argônio, solubiliza-se 323 mg de3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-al em 3 ml de etanol, e depoisacrescenta-se 209 μΐ de trietilamina, 100 mg de cloridrato de metilamina e444 μΐ de tetraisopropóxido de titânio. O meio reacional é agitado 6 h àtemperatura ambiente, e depois se acrescenta 42,5 mg de boroidreto de sódio.
Agita-se 16 horas à temperatura ambiente. O meio reacional é filtrado elavado com diclorometano. O filtrado é secado sobre sulfato de magnésio econcentrado sob pressão reduzida. O resíduo obtido é purificado por flashcromatografia (diclorometano/metanol 9/1 a 5/5). Obtém-se 84 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-oxima-3-metilamina com umrendimento de 25%.
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 93 centésimos
Picos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 448
Etapa D: Em um balão, introduz-se 50 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5,5(etileno dióxi)-3-metilamina e 976 μΐ de uma mistura água/ácidoacético 1/1. A mistura é levada ao refluxo durante 6 h. Após resfriamento, omeio reacional é diluído com o acetato de etila e lavado com uma soluçãosaturada de cloreto de sódio e depois com uma solução de bicarbonato desódio à 5%. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio e concentradasob pressão reduzida. O produto obtido é purificado por flash cromatografia(diclorometano/metanol 95/5); obtém-se 5 mg 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-metilamina com um rendimento de 11%.
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 68 centésimos
Picos detectados em espectrometria de massa: [M+H] += 404
Etapa E: Em um balão, introduz-se 5 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5- ona-3-metilamina, 5 mg de cloridrato hidroxilamina e 287 μΐ depiridina. A mistura é agitada 16 horas à temperatura ambiente. Retoma-se emseguida no diclorometano e lava-se à água. A fase orgânica é secada sobresulfato de magnésio e concentrada sob pressão reduzida. Obtém-se 5 mg de3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, oxima-3-metilamina com um rendimento de91%.
Tempo de retenção: 3 min 66 centésimos
Picos detectados em espectrometria de massa: [M+H] + = 419Exemplo 6: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, metiIoxima-3-ol
Em um balão, introduz-se 20 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona-3-ol, 20 mg de cloridrato de O-metil-hidroxilamina em 1 ml depiridina. Agita-se 36 h à temperatura ambiente e acrescenta-se 10 mg decloridrato de O-metil-hidroxilamina. Agita-se de novo 16 horas à temperaturaambiente e depois o meio reacional é concentrado sob pressão reduzida. Oresíduo obtido é incluído em uma mistura CH2Cl2ZH2O; a fase orgânica éseparada, lavada à água, secada sobre sulfato de magnésio anidro econcentrada sob pressão reduzida. Obtém-se 18 mg de um óleo amarelo que épurificado por flash cromatografia (éter de petróleo/ acetato de etila 9/1).Recupera-se 5,8 mg de 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona, metiloxima-3-ol comum rendimento de 27%.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 5 min 50 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 420Exemplo 7: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestano-5-ona carboximetiloxima-3-ol
Em um balão, introduz-se 52 mg de cetona, 25 mg de hemi-cloridrato de carboximetoxilamina em 0,5 ml de piridina. Agita-se 2 dias àtemperatura ambiente e depois o meio reacional é concentrado sob pressãoreduzida. O resíduo obtido é incluído em uma mistura CH2Cl2ZH2O; a faseorgânica é separada, lavada à água e depois por uma solução de ácidoclorídrico a 2%, secada sobre sulfato de sódio anidro é concentrada sobpressão reduzida. O resíduo obtido é purificado por flash cromatografia (éterde petróleo/ acetato de etila 8/2). Obtém-se 24 mg com um rendimento de39% da carboximetiloxima.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conformeTempo de retenção: 4 min 40 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 464;[2M+H]+=927
Exemplo 8
Preparou-se uma suspensão que responde à fórmula3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol 20 mg por ml
Excipiente: Emulsão oleosa
Exemplo 9
Preparou-se uma forma seca que responde à fórmula
Cloridrato de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-
3-N,N-dimetilglicina éster 250 mg
Excipiente: qsp uma gélula terminada à 750 mg
Exemplo 10: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-Ν,Ν-dimetilglicina éster: pró-droga do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol
Em um balão, coloca-se 509 mg de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona-3-ol, 182 mg de cloridrato de Ν,Ν-dimetilglicina, de 275 mg de EDCl e207 mg de DMAP em 10 a 15 ml diclorometano. Agita-se à temperaturaambiente durante 16 horas. Acrescenta-se ao meio reacional uma solução debicarbonato de sódio a 5% e extrai-se ao diclorometano. As fases orgânicassão reunidas, secadas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressãoreduzida. O resíduo obtido é purificado por flash cromatografia (tolueno/acetato de etila 8/2). Recupera-se 488 mg com um rendimento de 78%.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 77 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 476
O produto é em seguida comprometido na reação seguinte:
Em um balão, introduz-se 488 mg do produto obtido e 488 mgde cloridrato de hidroxilamina em 23 ml de piridina. Agita-se 16 horas àtemperatura ambiente e depois o meio reacional é incluído em uma misturaCH2CI2/H2O; a fase orgânica é separada, lavada à água, secada sobre sulfatode sódio anidro e concentrado sob pressão reduzida. Recupera-se 378 mg deoxima com um rendimento de 75%. O produto é em seguida salificado napresença de uma solução de éter acidificada por uma solução de HCI5 paraobter o produto sob a forma de cloridrato.
Análise
RMN-I H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 43 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 491
Exemplo 11: síntese do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona, oxima-3-(4-metil-l-piperazina)propanoato éster: Pró-droga do 3,5-seco-4-nor- colestan-5-ona, oxima-3-ol
Em um balão, coloca-se 264 mg de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona-3-ol, 121 mg de ácido 4-metil-l-piperazina propanóico sob a forma de salde lítio, 1425 mg de EDCI e 106 mg de DMAP em 2 a 3 ml diclorometano.Agita-se à temperatura ambiente durante 1 noite. Acrescenta-se a água aomeio reacional e extrai-se ao diclorometano. As fases orgânicas são reunidas,secadas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. Oresíduo obtido é purificado por flash cromatografia (tolueno/acetato de etila98/2). Recupera-se 54 mg do produto desejado com um rendimento de 15%.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 66 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 545
O produto é, sem seguida, comprometido na reação seguinte:
Em um balão, introduz-se 30 mg do produto obtido e 30 mg decloridrato de hidroxilamina em 1.2 ml de piridina. Agita-se 5 h 30 àtemperatura ambiente e depois o meio reacional é incluído em uma misturaCH2Cl2ZH2O; a fase orgânica é separada, lavada à água, secada sobre sulfatode sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. Recupera-se 19 mg deoxima com rendimento de 13%.
Análise
RMN-1H (CDCl3): conforme
Tempo de retenção: 3 min 62 centésimos
Pico detectado em espectrometria de massa: [M+H] += 560
O produto é, sem seguida, salificado na presença de umasolução de éter acidificada por uma solução aquosa de ácido clorídrico, paraobter o produto sob a forma de di-cloridrato.
Exemplo 12: Efeito antiapoptótico do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-onaoxima-3-ol: Contratibilidade e apoptose das cardiomiocitas ventricularesde coelho
As propriedades antiapoptóticas do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol (Azasteroidal alkaloids. Synthesis of A-nor-B-homo-5-azacolestano. Rodewald, W. J.; Wicha, J. Univ. Warsaw, Bulletin dePAcadémie Polonaise des Sciences, Série des Sciences Chimiques (1963), 11(8), 437-441) foram analisada sobre cardiomiocitas, por um teste dedesfuncionamento contráctil induzido pela doxorubicina.
Materiais e Métodos
Composto a testar
Uma solução de carga de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-onaoxima-3-ol a concentração de 10 mM em 100% de DMSO foi utilizada.
A concentração final em DMSO foi a mesma para todos ospontos experimentais, independentemente das concentrações em moléculasutilizadas.
O 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol foi testado asconcentrações de 0,1 e 0,3 μΜ, diluído em uma solução de Tirodo(composição em mmol/L: NaCl 135, KCl 5,4, NaH2PO4 0,33, CaCl2 1,2,
MgCl2 1,0, Hepes 10; pH ajustado a 7,4 com NaOH).
Obtenção de células isoladas de cardiomiocitas ventriculares de coelho
Células ventriculares isoladas são obtidas a partir de coraçõesde coelhos machos da Nova Zelândia como descrito em A. d'AnglemontTassigny et al., Fund Clin Pharmacol, 18: 531-38, 2004. Em resumo, oscoelhos (2,0 - 2,5 Kg) são anestesiados com uma solução de pentobarbital (50mg/kg) e depois recebem heparina (200 lU/kg). Os corações são excisados eimediatamente perfundidos, durante 10 a 15 minutos graças a um aparelho deLangendorff sem recirculação com uma solução isotônica de tirodo (semcálcio) oxigenada (95%, 2-5% CO2) (em mm: NaCl 135, KCI 5,4, Na2PO40,33, MgCl2 1,0, HEPES 10, pH ajustado a 7,4 com NaOH 1 N 37°C, de 280-300 mOsmol/kgH20). Em seguida, todos os corações são perfundidos durante3 minutos em modo "recirculação" com a mesma solução de Tirodo semcálcio (vazão coronária, 10-15 ml/min) adicionada de 1 mg/ml de colagenasetipo II e 0,28 mg/ml de protease tipo XIV. Finalmente, todos os corações sãoperfundidos em modo sem recirculação com a mesma solução de Tirodocompletada com 0,3 mm CaCl2 durante 10 min O ventrículo esquerdo éretirado e recortado em pequenos pedaços, a dissociação celular é realizadapor agitação mecânica suave. O cálcio extracelular é acrescentado porincremento todos os 15 minutos, para chegar a uma concentração fisiológicade 1,0 mm. Os miócitos isolados são mantidos em um meio sem soro quecontém (em mm) NaCl 110, KCI 5,4, Na2PO4 0,33, NaHCO3 25, Glicose 5,MgCl2 0,8, CaCl2 1, pH ajustado a 7,4 até 1 h 30 antes da experimentação.Todas as células são em forma de bastão têm uma estriação cruzada clara enão apresentam vesícula em sua superfície ao microscópio ótico.
Marcação à anexina V
A marcação a anexina V do fosfatidilserina foi utilizada comométodo quantitativo de medida da apoptose utilizando-se o conjuntoMiniMacs cell isolation (Miltenyi Biotec, Bergisch, Gladbach, Alemanha).Em resumo, as células que expõem a fosfatidilserina são marcadasmagneticamente com microesferas de anexina V, e depois passadas em umacoluna colocada em um campo magnético. As células marcadas (queapresentam a fosfatidilserina marcadas magneticamente) são retidas na colunaenquanto que as não marcadas (células necróticas e não- apoptóticos) não sãoretidas. A coluna é retirada do campo magnético, as células que expõem afosfatidilserina retidas magneticamente são eluídas como fração positiva econtadas com uma célula de Mallassez. A porcentagem de células apoptóticasé, então, trazida ao número inicial de células.
Medida da atividade de caspase-3
A atividade de caspase-3 é utilizada como método quantitativode medida da apoptose. Em resumo, as células são lisadas e o sobrenadante éutilizado para a medida de atividade de caspase-3 utilizando-se o conjuntoAK-005 (Biomol Research Laboratories, Plymouth Meeting, PA, USA). Osubstrato fluorogênio para medir a atividade de caspase-3 (DEVD) é marcadocom o flurcromo 7-amino-4-metil de cumarino (AMC) que produz umafluorescência amarelo-verde detectável à luz UV à 360/460 nm durante 210min O AMC é liberado do substrato por segmentação pelo caspase-3, aexpressão da enzima é expressa em fmol/min.
Medida da contratibilidade
Os miócitos são transferidos em uma câmara à 37°Cperfundido de maneira continua e posicionado sobre a platina de ummicroscópio invertido. A câmara perfiindida com o tampão fisiológicocontendo (em mm): NaCl 140; KCI 5.4; CaCl2 1; MgCl2 0,8; HEPES 10 eglicose 5,6 (pH = 7,4; 290 mOsmol/kgH2C>).
A contração dos miócitos é induzida uma vez por segundo (1Hz) com eletrodos de campo de platina colocados na câmara e ligados a umestimulador. As imagens são apreendidas continuamente com um objetivo χ20 e transmitidas para uma câmara CCD à razão de 240 amostras/s. Asimagens da câmara CCD são projetadas sobre uma tela de vídeo.
Os miócitos foram selecionados para o estudo de acordo com oseguinte critério: uma aparência na forma de bastão com estriações bemaparentes e nada de vacúolo intracelular, nada de contração espontâneaquando se estimula o mesmo com 1 mm Ca , e com um comprimento derepouso e uma amplitude de contração constantes. O comprimento dossarcômeros foi medido graças a um programa de análise de imagem vídeo eos dados foram apreendidos em um ritmo de 240 amostras/s. As imagenscâmara foram convertidas em medidas de comprimento de sarcômero. Aporcentagem de contração é calculada a partir destes dados sobre ocomprimento do sarcômero.
Análise dos dados
Todos os dados foram expressos em media ± desvio-padrão.
As comparações dos dados entre os diferentes grupos foram realizadas porANOVA acompanhado de um teste de Student com uma diferençasignificativa com ρ < 0.05.
> Protocolo experimental
A apoptose é induzida nas cardiomiocitas isoladas porexposição durante 3 a 8 h a 1 μΜ de doxorubicina acrescentada em umasolução isotônica contendo (em mm) NaCl 110, KCl 5,4, Na2PO4 0,33,NaHCO3 25, Glicose 5, MgCl2 0,8, CaCl2 1, pH ajustado a 7,4. A marcação àanexina V foi realizada 3 h após o início da exposição à doxorubicina poiseste fenômeno aparece muito cedo na cascata apoptótica. As medidas deatividade de caspase-3 são realizadas 8 h após a exposição à doxorubicinapois este fenômeno acontece muito tarde no fenômeno de apoptose. Acontratibilidade das cardiomiocitas foi medida todas as horas durante as 8 hde exposição à doxorubicina. Após todos os tratamentos, as células foramcomparadas com as cardiomiocitas controles não expostas à doxorubicina.As cardiomiocitas foram pré-tratados com o composto 3,5-seco-4-nor- colestan-5-ona oxima-3-ol durante 15 min antes da exposição àdoxorubicina. Duas concentrações deste composto foram testadas durante esteestudo: 0,1 e 0,3 μΜ.
> Resultados
O comprimento médio dos sarcômeros das células utilizadasneste estudo não era significativamente diferente entre os grupos,o Efeito da doxorubicina sobre a contratibilidade dos miócitos e aapoptose
A exposição à doxorubicina resultou em uma diminuição aolongo do tempo do resumo do sarcômero. O encurtamento do pico sobdoxorubicina foi semelhante ao controle durante as três primeiras horas edepois se tornou significativamente diminuído após 4 h de exposição (-53,20± 7,70% contra -19,49 ± 2,06% em relação à linha básica da doxorubicina edo controle respectivamente, ρ < 0.05, η = 5).
O tratamento com 1 μΜ de doxorubicina induziu a apoptosecom um aumento significativo em marcação à anexina V e em atividade decaspase-3.
o Efeito do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona-oxima-3-ol sobre odesfuncionamento no nível da contratibilidade induzida pela doxorubicina esobre a apoptose.
O tratamento com 1 μΜ de doxorubicina resultou em umaredução significativa do encurtamento do pico de cardiomiocitas ventricularesque é abolida na presença de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol (0,1 e0,3 μΜ). Com efeito, após 4 h de exposição, o encurtamento do pico sobdoxorubicina (-53,20 ± 7,70%) tornou-se significativamente diminuído com ocomposto a 0,1 μΜ (-18,9 ± 5,4%) e 0,3 μΜ (-8,1 ± 9,6%) em relação à linhade base.
Além disso, os aumentos de marcação à anexina V e deatividade de caspase-3, devidos à doxorubicina foram bloqueados pelo 3,5-seco-4-nor- colestan-5-ona oxima-3-ol a 0,1 e 0,3 μΜ.
A apoptose avaliada em % de troca em marcação à anexina V3 h após doxorubicina dá os seguintes resultados: controle: 100%;doxorubicina: 320%+48,7; doxorubicina + 3,5-seco-4-nor-colestan-5-onaoxima-3-ol 0,1 μΜ: 116,3%+15,1; doxorubicina + 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol 0,3 μΜ: 137,3%±19,3. Os resultados relativos às medidas deatividade de caspase-3 são os seguintes: controle: 19+9 fmol/min;doxorubicina: 120+15 fmol/min; doxorubicina + 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol 0.1 μΜ: 27+20 fmol/min; doxorubicina + 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol 0.3 μΜ: 15+7 fmol/min.
> Comentários e conclusões
O composto 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol mostraum efeito cardioprotetor sobre o desfuncionamento de contratibilidadeinduzida pela doxorubicina e sobre a apoptose sobre cardiomiocitas isoladasde coelho. A molécula, quando utilizada com doses apropriadas, podeefetivamente proteger contra a cardiotoxicidade induzida pela doxorubicinaque é conhecida como sendo o fator limitante no tratamento de doentes comcâncer com esta antraciclina. Assim, o composto 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol poderia ser utilizado para limitar a cardiotoxicidade dadoxorubicina nestes doentes.
Exemplo 13: Efeito dos compostos 3,5-seco-4-nor-coIestan-5-ona oxima-3-ol e 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-N,N-dimetilglicina éster emum modelo in vivo de infartos do miocárdio no rato
O objetivo desta experiência é estudar in vivo em um modelode oclusão reperfusão coronária no rato, as propriedades cardioprotetoras doscompostos 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol e 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-N,N-dimetilglicina éster.
Os compostos testados são administrados por via intravenosano rato, 5 minutos antes de reperfusão do miocárdio precedentementeisquêmico. A título de controles, os veículos dos compostos, respectivamentea beta-ciclodextrina (abaixo denominada mCD) e a água, são administradosnas mesmas condições que os compostos.
A fim de determinar o efeito dos compostos testados, mede-seo tamanho do infarto após um reperfusão de 24 horas.
Instrumentação cirúrgica dos animais
Ratos machos C57BL6 idade de 6 a 8 semanas sãoanestesiados por pentobarbital sódico (50 mg/kg i.p.) e colocados emrespiração após entubação com uma mistura de O2ICO1 (95%/5%) ao longode toda a experiência. O eletrocardiograma de superfície (ECG) é registrado evisualizado sobre um osciloscópio durante toda a duração da cirurgia. Emcondições de assepsia rigorosas, a veia jugular é cateterizada para aadministração intravenosa dos compostos. Uma toracotomia lateral esquerda éefetuada e após pericardiotomia, um braço essencial da artéria coronáriaesquerda é localizado na região látero-posterior do ventrículo esquerdo. Umfio de prolene número 8 é posicionado em torno desta artéria de maneira aformar um anel móvel para a realização de uma oclusão coronária temporária.
Protocolos experimentais
Todos os ratos foram objeto de uma oclusão coronáriatemporária de 30 minutos. A isquemia da região do miocárdio é confirmadapela presença de uma cianose da superfície do miocárdio e por um desvio dosegmento WS do eletrocardiograma.
Cada um dos compostos (grupo tratado, η = 10) ou seusolvente (grupo controle, η = 10) foi administrado em bolus por viaintravenosa 5 min antes do término dos 30 min de oclusão coronária.
O 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol, previamentedissolvido a uma concentração final de 0,46 mg/ml em uma solução de dCD a30% no tampão fosfato preparado por saturação seguido de umacentrifugação, e administrado à dose de 1 mg/kg.
O 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-N,N-dimetilglicinaéster, previamente dissolvido a uma concentração final de 1,56 mg/ml na águaestéril por agitação e sonicação é administrado à dose de 3,9 mg/kg.
O mesmo volume de veículo é administrado nos gruposcontroles correspondentes.
A reperfusão foi confirmada pelo aspecto do segmento QRSdo eletrocardiograma.
Após fechamento do tórax plano por plano e evacuação dopneumotórax por aspiração com ajuda de um dreno, os ratos são, em seguida,progressivamente despertos e privados de seu assistente respiratório até aretomada de um respiração espontânea normal. Se necessário, a buprenorfina(1 mg/kg) é administrada por via intraperitoneal para assegurar uma coberturaantálgica eficaz.
Vinte e quatro horas após o fim da oclusão coronária, os ratossão re-anestesiados pelo pentobarbital sódico (50 mg/kg i.p.) e a heparina éadministrada por via intravenosa (heparine Choay© lOOOUI/kg). Uma ligaçãoda artéria coronária é realizada no mesmo lugar que esta que foi objeto daprimeira oclusão 24 h anteriormente. Os ratos são, em seguida, eutanasiadospor uma dose letal de cloreto de potássio saturado e o seu coração érapidamente excisado e depois montado pela artéria aorta sobre um sistema deperfusão retrogrado de tipo Langendorf.
Uma solução de azul Evans a 5% é perfundida de maneiraretrograda a fim de que o miocárdio são seja colorido em azul; a zona tornadaisquêmica durante a oclusão coronária, ou "área de risco AR" permanecendonão colorido por defeito.
O ventrículo esquerdo é, em seguida, recortado em 5 fraçõesde espessuras iguais (1 mm) com ajuda de um destrinçador especialmenteconcebido para os corações de ratos (Les Isolants de Paris, Palaiseau) que são,em seguida, pesados.
Estas frações são incubadas em uma solução de cloreto detrifeniltetrazólio (TTC, Sigma, Poole, UK) com 1% pH 7,4 durante 20 min à37° C e depois fixados no formol a 4%. O TTC com a propriedade de colorirem vermelho no miocárdio não enfartado, e conseqüentemente indicar aszonas enfartadas em branco. Cada fração de coração é colocada sob estéreo-microscópio para uma tomada de fotografia numérica de alta definição.
A quantificação do infarto é da área de risco é efetuada porplanimetria (Scion Imagem, Scion, Frederick DM, USA) e trazida ao peso decada fração.
A área de risco (zona não-azul) é expressa em percentagem dopeso do ventrículo esquerdo. Os tamanhos de infartos são expressos emporcentagem do peso da área de risco.
Todos os valores de dimensão de infartos e da área de riscosão expressos em media ± SEM. Um ANOVA com um fator seguido de umteste t de Student não pareado com correção de Bonferonni é utilizado paracomparar as áreas de risco e os tamanhos de infartos entre os gruposexperimentais, o limiar de significação sendo fixado a ρ < 0, 05.
Resultados e conclusões
Os tamanhos de infartos de ratos tratados com os compostosdiferem significativamente desses dos ratos tratados pelo veículo.
Os resultados apresentados na tabela abaixo são expressos, porum lado, pela área de risco e, por outro lado, pelo tamanho do infarto.<table>table see original document page 39</column></row><table>
No modelo experimental utilizado, os dois compostos testadosreduzem o tamanho de infartos. Além disso, os resultados mostraram que oscompostos reduzem os tamanhos de infartos qualquer que seja a extensão dazona de risco.
Estes resultados mostram então que estes dois compostosapresentam in vivo efeitos cardioprotetores.
Exemplo 14: Efeito do composto 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-olem um modelo in vivo de hepatotoxicidade aguda.
Nesta experiência, testa-se a capacidade do composto 3,5-seco-4-nor- colestan-5-ona oxima-3-ol de proteger as hepatócitas.
As hepatócitas como numerosas outras células trazem oreceptor Fas/CD95 sobre a sua membrana citoplásmica. A estimulação destavia Fas induz a morte celular ativando a cascata de caspases.
Um modelo agudo de dano hepático pode ser induzido poruma única injeção do anticorpo anti-Fas Jo2 (Ogasawara et al, Nature, aoüt1993), produzindo danos hepáticos severos e assemelhando-se à hepatiteviral, auto-imune ou induzida por drogas.
A alanina-aminotransferase (ALT) também denominada o sorotransaminase glutâmico pirúvica (TGP) é uma enzima presente noshepatócitos. A sua atividade aumenta de maneira considerável no plasma apósIise hepática é e, então, um bom indicador para avaliar o dano hepático.
Materiais e MétodosAnimais
Ratos adultos CDl machos procedentes de "Elevage Janvier",(Lê Genest-Saint-Isle5 França) foram utilizados. Os animais foramidentificados individualmente e tiveram livre acesso à água e à ração.
As instalações foram mantidas a um ciclo controlado de luz(7:00 - 19:00), e a temperaturas de 20 ± 2 0C e umidade de 50 ± 20%.Preparação do anticorpo Jo2
Uma solução de carga de anticorpos monoclonais de hamsteranti-ratos CD95 (Fas), denominado Jo2, proveniente de Pharmingen (BDBiosciences, ref. 554254 batch 32699) é preparada à concentração de 1 mg/mlna água. As diluições utilizadas são realizadas no cloreto de sódio a 0,9% naágua.
Preparação do composto a testar
A quantidade desejada de 3,5-seco-4-nor-colestan-5-onaoxima-3-ol é pesada e triturada em um pó fino, e depois misturada com oCremophore EL (Sigma C5135) e o etanol absoluto (Cario Erba RPE 41571)(respectivamente 5% e 10% do volume final). Após dissolução completa, ocloreto de sódio a 0,9% na água é acrescentado extemporaneamente (85% dovolume final).
Dois tipos de experiências são conduzidas: a intoxicação porJo2 seguida de uma dosagem de ALT e a intoxicação letal por Jo2.- intoxicação por Jo2 e dosagem de ALT:
Protocolo
Um pré-tratamento pelo 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol é realizado às doses de 10 e 30 mg/kg por administração intraperitonal Ihantes da administração do anticorpo Jo2. O anticorpo Jo2 é administrado porinjeção intraperitonal à dose de 125 μg/kg em um volume de 5 ml/kg de pesocorporal.
Um controle é realizado sobre animais que recebem um pré-tratamento por administração intraperitonal Ih antes da administração doanticorpo de um volume idêntico de solução que foi utilizada para apreparação do composto a testar, sem composto.
Dosagem de ALT
Sangue dos ratos anestesiados é retirado 24 h apósadministração de Jo2. A dosagem de ALT é realizada utilizando um conjunto(Roche Diagnostics) com espectrofotômetro (Hitachi Modular), de acordocom o método padronizado pelo NFCC (Fédération Internationale de ChimieClinique).
Resultados e conclusões
A administração intraperitonal de Jo2 à 125 μg/kg não induzmortalidade nos ratos nas 24 h seguintes à injeção.
A atividade ALT é significativamente reduzida pelo composto3,5-seco-4-nor- colestan-5-ona oxima-3-ol à 10 e 30 mg/kg.
Tabela 1: Atividade ALT medida 24 h após administração de Jo2
<table>table see original document page 41</column></row><table>
**: p< 0.01, ANOVA seguido do teste comparativo de Dunnett efetuado emrelação ao grupo placebo
O 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol administrado à 10e 30 mg/kg, Ih antes do anticorpo Jo2, permitiu limitar a morte celularinduzida por uma dose sub-letal de anticorpos.
A atividade ALT, biomarcadora da citólise hepática noplasma, é significativamente mais baixa nos ratos tratados pelo 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol do que nos ratos controles não tratados.
- Intoxicação letal pelo anticorpo Jo2
Nesta experiência avalia-se o efeito do 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol sobre a sobrevivência dos animais apósadministração de uma dose letal do anticorpo Jo2.
Protocolo
O anticorpo Jo2 é administrado por injeção intraperitonal àdose de 200 ou 250 μg/kg em um volume de 5 ml/kg de peso corporal.
O 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol é testado a 10 e30 mg/kg, em pré-tratamento, Ih antes da administração de Jo2 ou em pós-tratamento, Ih após a administração de Jo2.
Um controle é realizado sobre animais que recebem um pré-tratamento por administração intraperitonal Ih antes ou Ih após aadministração do anticorpo de um volume idêntico de solução utilizada para apreparação do composto a testar, sem composto.Resultados e conclusões
Tabela 2: Sobrevivência dos animais em 24 h
<table>table see original document page 42</column></row><table>
Com doses administradas, o anticorpo Jo2 induz uma grandemortalidade em 24 h (70 a 100% dos animais) no grupo controle.
O pré-tratamento e/ou o pós-tratamento ao 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol às doses administradas induz um aumento dasobrevivência dos animais.
Assim, quando uma dose letal de anticorpos é utilizada (200ou 250 o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol, administrado a 10e 30 mg/kg, Ih antes ou após o anticorpo, aumenta a sobrevivência dos ratossobre 24 h.
Conclusões
O modelo de hepatotoxicidade aguda induzida no rato por umanticorpo anti-Fas (Jo2) permitiu destacar as propriedades hepatoprotetoras do3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol.
Estes efeitos notáveis permitem considerar para os compostosde fórmula I uma utilização na preparação de um medicamento citoprotetorem geral.

Claims (13)

1. Utilização de pelo menos um composto que responde afórmula I<formula>formula see original document page 44</formula>na qual-X e Y tomados juntos representam uma função ceto (= O ),um grupamento oxima (=NOH) ou um grupamento metiloxima (= NHOMe)ou X representa uma hidroxila e Y um átomo de hidrogênio;- B representa um radical hidroxila e C e D, idênticos oudiferentes, representam um átomo de hidrogênio, ou um radical alquila, linearou ramificado, compreendendo de 1 a 4 átomos de carbono;ou B e C tomados juntos representam uma função ceto e D umradical metila, hidroxila, ou metilamina;ou B e C representam um átomo de hidrogênio e D um radicalmetilamina;ou B e C tomados juntos representam um grupamento oxima eD um radical metila;e R representa um radical alquila, linear ou ramificado,compreendendo de 1 a 10 átomos de carbono;ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis, ou um de seus ésteres ou um de sais de adição com os ácidosfarmaceuticamente aceitáveis dos referidos ésteres,caracterizada pelo fato de ser para a obtenção de ummedicamento citoprotetor, com exceção de um medicamento neuroprotetor.
2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizadapelo fato de que na fórmula I, R representa o radical do colestano de fórmula II<formula>formula see original document page 45</formula>
3. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 ou 2, caracterizada pelo fato de que na fórmula I, X e Y tomados juntosrepresentam uma função ceto.
4. Utilização de um composto de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que na fórmula I, Brepresenta um radical hidroxila e C e D, idênticos ou diferentes, representamum átomo de hidrogênio ou, um radical alquila, linear ou ramificado,compreendendo de 1 a 4 átomos de carbono.
5. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 a 3, caracterizada pelo fato de que na formula I, B e C tomados juntosrepresentam uma função ceto e D representa um radical metila.
6. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 ou 2, caracterizadapelo fato de que na fórmula I, X e Y tomado juntosrepresentam um grupamento oxima.
7. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizadapelo fato de que o composto de fórmula I é escolhido entreo 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-ol,o 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-metil álcool, ouo 3,5-seco-4-nor-colestan-5-ona oxima-3-dimetil álcool,ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamente aceitáveis, ouum de seus ésteres ou um dos sais de adição com os ácidosfarmaceuticamente aceitáveis dos referidos ésteres.
8. Utilização de acordo com qualquer uma reivindicaçõesprecedentes, caracterizada pelo fato de que o medicamento se destina aotratamento ou prevenção da necrose e/ou da apoptose patológica e/ou danecrose (medicamentos antinecróticos e/ou antiapoptóticos e/ouantinecroptótico) ou ainda as afecções comoas doenças dos ossos, das articulações, do tecido conjuntivoe/ou da cartilagem,as doenças musculares;as doenças da pele;as doenças cardiovasculares;as doenças circulatórias; as doenças hematológicas e vasculares;as doenças do pulmão;as doenças do trato gastrintestinal;as doenças do fígado;as doenças do pâncreas;as doenças metabólicas;as doenças dos rins;as infecções virais e bacterianas;as intoxicações severas;as afecções degenerativas associadas à síndrome deimunodeficiência adquirida (AIDS);os distúrbios associados ao envelhecimento;as doenças inflamatórias;as doenças auto-imunes;os distúrbios dentais;as doenças ou distúrbios oftálmicos;as doenças das vias auditivas;as doenças associadas às mitocôndrias.
9. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, caracterizada pelo fato de que o medicamento é destinado àproteção de células cardíacas (medicamento cardioprotetor).
10. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 a 9 caracterizada pelo fato de que o medicamento é destinado à proteção decélulas hepáticas (medicamento hepatoprotetor).
11. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 a 9, caracterizada pelo fato de que o medicamento é destinado ao tratamentoou à prevenção de doenças associadas às mitocôndrias.
12. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 a 9, caracterizada pelo fato de que o medicamento é destinado à proteção decélulas, de um tecido ou de um órgão, antes, durante ou após um transplante.
13. Composição, notadamente composição farmaceuticamenteou medicamento, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos umcomposto de fórmula I tais como os descritos na reivindicação 1, ou um deseus sais de adição com os ácidos farmaceuticamente aceitáveis ou um deseus ésteres ou um de seus sais de adição com os ácidos farmaceuticamenteaceitáveis dos referidos ésteres.
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