BRPI0709507A2

BRPI0709507A2 - amidas de lysobactin

Info

Publication number: BRPI0709507A2
Application number: BRPI0709507-4A
Authority: BR
Inventors: Nussbaum Franz Von; Hartmut Beck; Nina Brunner; Rainer Endermann; Jacques Ragot; Joachim Telser; Joachim Schuhmacher; Sonja Anlauf; Yolanda Cancho-Grande; Susanne Greschat; Guido Schiffer; Johannes Koebberling; Hans-Christian Militzer
Original assignee: Aicuris Gmbh & Co Kg
Priority date: 2006-04-13
Filing date: 2007-04-13
Publication date: 2011-07-19
Also published as: WO2007118691A1; CN101466729A; CA2648164A1; EP2007794A1; US8076285B2; RU2008144660A; UA95630C2; JP2009533371A; EP2007794B1; DE102006018080A1; US20090203582A1; ATE524488T1; KR20080110902A; RU2441021C2; ZA200809686B; MX2008013191A; IL194353A0; AU2007237431A1

Abstract

<B>AMIDAS DE LYSOBACTIN.<D> A invenção se refere a amidas de Lysobactin e métodos para sua preparação, bem como seu uso para a fabricação de medicamentos para o tratamento e/ou profilaxia de doenças, especialmente doenças infecciosas causadas por bactérias.

Description

Amidas de Lysobactin

A invenção se refere a amidas de Lysobactin e métodospara sua preparação, bem como seu uso para a fabricação de medicamentos para otratamento e/ou profilaxia de doenças, especialmente doenças infecciosas causadas porbactérias.

A parede celular bacteriana é sintetizada por meio de umasérie de enzimas (biossíntese da parede celular) e é essencial para a sobrevivência ereprodução de microorganismos. A estrutura desta macromolécula, bem como asproteínas envolvidas na síntese da mesma, são altamente preservadas dentro dasbactérias. Devido à sua natureza essencial e uniformidade, a biossíntese da paredecelular é um ponto de ataque ideal para novos antibióticos (D.W. Green1 The bacterial cellwall as a source of antibacterial targets, Expert Opin. Ther. Targets, 2002, 6, 1-19).

Vancomicina e penicilinas são inibidores da biossíntese daparede celular de bactérias e representam exemplos de sucesso da potência antibióticadesse princípio ativo. Elas vêm sendo empregadas clinicamente há várias décadas parao tratamento de infecções bacterianas, especialmente causadas por patógenos Gram-positivos. Devido à crescente ocorrência de micróbios resistentes, por exemplo,estafilococos resistentes à meticilina, pneumococos resistentes à penicilina e enterococosresistentes à vancomicina (F. Baquero, Gram-positive resistance: challenge for thedevelopment of new antibiotics, J. Antimicrob. Chemother., 1997, 39, Suplemento A: 1-6;A.P. Johnson, D.M. Livermore, G.S. Tillotson, Antimicrobial susceptibility of Gram-positivebactéria: what's current, what's anticipated?, J. Hosp. Infect., 2001, (49), Suplemento A:3-11) e recentemente também pela primeira vez, estafilococos resistentes à vancomicina(B. Goldrick1 First reported case of VRSA in the United States, Am. J. Nurs., 2002, 102,17) essas substâncias estão cada vez mais perdendo sua eficácia terapêutica.

A presente invenção descreve uma nova classe deinibidores de biossíntese da parede celular sem resistência cruzada com classesconhecidas de antibióticos.

O produto natural Lysobactin e alguns derivados sãodescritos como possuidores de atividade antibacteriana na patente norte-americana US4.754.018. O isolamento e a atividade antibacteriana de Lysobactin também são descritosem EP-A-196 042 e JP 01132600. W004/099239 descreve derivados de Lysobaetin quepossuem atividade antibacteriana.

O efeito antibacteriano do Lysobaetin e katanosin A é, alémdisso, descrito em 0'Sullivan, J. et ai., J. Antibiot. 1988, 41, 1740-1744, Bonner, D. P. etai, J. Antibiot. 1988, 41, 1745-1751, Shoji, J. et ai, J. Antibiot. 1988, 41, 713-718 andTymiak, Α. Α. et ai, J. Org. Chem. 1989, 54, 1149-1157.

A estabilidade de um ingrediente ativo é um parâmetroimportante para sua adequação como medicamento. A estabilidade é importante, entreoutras coisas, na armazenagem e administração de medicamentos. Muitos produtosnaturais mostram uma estabilidade que é insuficiente para medicamentos.

O depsipeptídeo de Lysobactin que possui atividadeantibacteriana é hidrolisado em um meio aquoso de neutro a básico (pH > 7) dentro dedias. O resultado disso é "Lysobactin aberto", o qual é aberto na Iactona e não possuiatividade antibacteriana. Portanto, é desejável ter análogos de Lysobactin ativos commaior estabilidade de anel.

Um objetivo da presente invenção é fornecer compostosalternativos ao Lysobactin que possuem efeito antibacteriano comparável ou melhorado,melhor tolerabilidade, por exemplo, menor nefrotoxicidade e melhor estabilidade em meioaquoso de neutro a básico para o tratamento de doenças causadas por bactérias emseres humanos e animais.

Foi verificado de modo surpreendente, no contexto destainvenção, que amidas de Lysobactin (amidas nonapeptídeos cíclicos) possuem um efeitoantibacteriano análogo ao Lysobactin e são estáveis à hidrólise em meio aquoso deneutro a básico. As amidas de Lysobactin são análogos de aza Lysobactin anteriormentenão descritos, nas quais a funcionalidade central da Iactona é substituída pelafuncionalidade do lactama.

A invenção se refere a compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 3</formula>

na qualR1 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo,trímetilsililometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,

na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R2 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo,trímetilsililometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,

na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R3 representa hidrogênio, C1-C4-Blcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetilo, fenil,benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado ou 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometilo, trifluorometoxi,C1-C4alcil, CrC4-alcoxi, C1-C4alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4alcoxicarbonila,aminocarbonila, CrC4-alcilaminocarbonila e 5- ou 6- heterociclila desmembrada que é de20 ligação via nitrogênio,

R4 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,

na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,e

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometoxi,C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4alcilaminocarbonila,

R5 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcil, C1-C4-Sleoxi, C1-C4-Blcilamino, hidroxicarbonila, CrC4-alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4-Blcilaminocarbonila,representa C1-C6-Blcil,

na qual o aleil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidin-2-ilamino, [amino-(imino)metil]amino, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo,

R7 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetils, fenil, benzila, 5- ou 6-heterosrilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado ou trimetilsililmetilo,na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,e

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcil, C1-Cralcoxi, C1-C4-Blcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-Blcoxicarbonila,aminocarbonila e CrC^alcilaminocarbonila,

R8 representa C1-C6-Blcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,

na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,lAõ.e-tetraidropirimidina^-ilamino e [amino (imino)metilamino,e

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcill C1-C4-Blcoxil C1-C4-Bleilaminol hidroxicarbonils, C1-C4-Slcoxicsrbonilalsminocarbonila e C1-C4-BlciIaminocarboniIa,

R9 representa hidrogênio, CrC6-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil,benzila, 5- ou 6- heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcill C1-C4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-Cralcilaminocarbonila,

R10 representa hidrogênio, C1-C6-Slcill C3-C7-cicloalcil, C3-C7-Cicloalcilmetila, fenil,benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,trimetilsililmetilo, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1 -hidróxi-2-oxoetilo,(aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-(Ci-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(CrC4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,

na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,e

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,

R11 representa C1-C6-Blcil, C3-C7-Cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- or6-heteroarilo desmembrado, 5- or 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetila,2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-{C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1 -hidróxi-2-oxoetilo,

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-alcill C1-C4-Blcoxil C1-C4-aleilamino, hidroxiearbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminoearbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,e os sais destes, os solvatos destes e os solvatos dos sais deste,

<formula>formula see original document page 7</formula>

na qual

R1 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, trimetilsil-ilometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,

na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R2 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo,trimetilsililometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,

na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,eR12 representa hidrogênio ou metilo,

e os sais destes, os solvatos destes e o solvatos dos sais destes.

Os compostos da invenção são os compostos da fórmula (I)e os sais, solvatos, solvatos dos sais e pó-drogas dos mesmos, os compostos que sãoabrangidos pela fórmula (I) e são das fórmulas mencionadas abaixo e os sais, solvatos,solvatos dos sais e pró-drogas destes, bem como os compostos que são abrangidos pelafórmula (I) e são mencionados abaixo como modos de realização exemplificativos e ossais, solvatos, solvatos dos sais e pró-drogas destes, à medida que os compostos quesão abrangidos pela fórmula (I) e são mencionados abaixo já não sejam sais, solvatos,solvatos dos sais e pró-drogas.

Os compostos da invenção podem, dependendo da suaestrutura, existir em formas estereoisoméricas (enantiômeros, diastereômeros). A invençãose refere, portanto, aos enantiômeros ou diastereômeros e respectivas misturas destes. Osconstituintes estereosiomericamente uniformes podem ser isolados dessas misturas deenantiômeros e/ou diastereômeros de maneira conhecida.

Quando os compostos da invenção podem existir em formastautoméricas, a presente invenção abrange todas as formas tautoméricas.

Os sais preferidos para a finalidade da presente invenção sãosais fisiologicamente aceitáveis dos compostos da invenção. Contudo, também estãoincluídos os sais que não são eles próprios adequados para aplicações farmacêuticas, masque podem ser utilizados, por exemplo, para isolar a purificar os compostos da invenção ousais misturados. Um sal misturado significa, no contexto da presente invenção, um sal deadição que compreende dois ou mais ácidos ou bases, tais como, por exemplo, um sal detrifluoroacetato-mesilato.

Os sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos dainvenção incluem sais de adição de ácido de ácidos minerais, ácidos carboxílicos eácidos sulfônicos, por exemplo, sais de ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácidosulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácidotoluenossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido naftalenodissulfônico, ácido acético,ácido trifluoroacético, ácido propiônico, ácido lático, ácido tartárico, ácido málico, ácidocítrico, ácido fumárico, ácido maléico e ácido benzóico.

Os sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos dainvenção também incluem sais de bases convencionais tais como, a título de exemplo e depreferência, sais metálicos de alcali (por exemplo, sais de sódio e potássio), sais de metalalcalino terroso (por exemplo, sais de cálcio e magnésio) e sais de amônio derivados daamônia ou aminas orgânicas possuindo 1 a 16 átomos C, tais como, a título de exemplo ede preferência, etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina,dietanolamina, trietanolamina, dicicloexilamina, dimetilaminoetanol, procaína,dibenziloamina, /V-metilmorfolína, arginina, lisina, etilenodiamina e A/-metilpiperidina.

Solvatos para a finalidade da invenção se referem àquelasformas dos compostos da invenção que constituem um complexo no estado sólido oulíquido através da coordenação com moléculas do solvente. Hidratos são uma formaespecial de solvatos nas quais a coordenação ocorre com água.

Para a finalidade da presente invenção, os substitutospossuem o seguinte significado, a menos que especificado de outro modo:Alcil por si e "ale" e "ale" em alcóxi, alcilamina, alcoxicarbonila e alcilaminocarbonilarepresenta um radical de alcil linear ou ramificado possuindo geralmente 1 a 6, depreferência 1 a 4, especialmente de preferência 1 a 3 átomos de carbono, a título deexemplo e de preferência metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ferí-butilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, n-pentilo e n-hexil.

Alcóxi a título de exemplo e de preferência representa metoxi, etoxi, n-propóxi,isopropoxi, ferí-butoxi, n-pentoxi e n-hexoxi.

Alcoxicarbonila a título de exemplo e de preferência representa metoxicarbonila,etoxicarbonila, n-propoxicarbonila, isopropoxicarbonila, ferf-butoxicarbonila, n-pentoxicarbonila e n-hexoxicarbonila.

Alcilamino representa um radical de alcilamino que possui um ou dois substitutos de alcil(escolhidos independentemente um do outro), a título de exemplo e de preferência,metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, terf-butilamino, n-pentilamino, n-hexilamino, N,N-dimetilamino, N.N-dietilamino, N-etil-N-metilamino, N-metil-N-n-propilamino, N-isopropil-N-n-propilamino, N-íert-butil-ZV-metilamino, N-etil-N-n-pentilaminoe N-n-hexil-N-metilamino. C1-C3-AIciIamino representa, por exemplo, um radical demonoalcilamino que possui 1 a 3 átomos de carbono ou radical de dialcilamino quepossui 1 a 3 átomos de carbono cada por substituto de alcil.

Alcilaminocarbonila representa um radical de alcilaminocarbonila que possui um ou doissubstitutos de alcil (escolhidos independentemente um do outro), a título de exemplo e depreferência, metilaminocarbonila, etilaminocarbonila, n-propilaminocarbonila,isopropilaminocarbonila, tert-butilaminocarbonila, n-pentilaminocarbonila, n-hexilaminocarbonila, N,N-dimetilaminocarbonila, N,N-dietilaminocarbonila, N-etil-N-metilaminocarbonila,N-metil-N-n-propilaminocarbonila, N-isopropil-W-n-propilaminocarbonila, N-tert-butil-N-metilaminocarbonila, N-etil-N-n-pentilaminocarbonila eN-n-hexil-N-metilaminocarbonila. C1-C3-Alcilaminocarbonila representa, por exemplo, umradical de monoalcilaminocarbonila que possui 1 a 3 átomos de carbono ou um radical dedialcilaminocarbonila que possui 1 a 3 átomos de carbono cada por substituto de alcil.Cicloalcil representa um grupo cicloalcil que geralmente possui 3 a 7 átomos de carbono,a título de exemplo e de preferência, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, cicloexil e cicloeptil.Heterociclil representa um radical monocíclico, heterocíclico que possui 5 ou 6 átomos deanel e até 3 heteroátomos e/ou grupos hetero da série N, O, S, SO1 SO2, no qual umátomo de nitrogênio pode formar um N-óxido. Os radicais de heterociclil podem sersaturados ou parcialmente insaturados e a título de exemplo e de preferência,representam pirrolidina-2-il, pirrolidina-3-il, pirrolinil, tetraidrofuranil, tetraidrotienil, piranil,piperidina-1-il, piperidina-2-il, piperidina-3-il, piperidina-4-il, tiopiranil, morfolina-1-il, morfolina-2-il, morfolina-3-il.

Heteroarilo representa um radical aromático monocíclico que possui 5 ou 6 átomos deanel da série S, O e N, a título de exemplo e de preferência, tienil, furil, pirrolil, tiazolil,oxazolil, imidazolil, piridil, pirimidil e piridazinil.

Halogênio representa flúor, cloro, bromo e iodo, preferivelmente flúor e cloro.

É dada preferência a compostos da fórmula (I) na qualR1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,

na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, trifluorometil e metilo,

R2 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,

R3 representa Ci-C4-alcil, fenil, benzila, 2-piridil, 3-piridil ou 4-piridil,

pelo fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro a partir do grupo que consistede halogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, Ci-C4-alcil, Ci-C4-alcoxi e C1-C4- alcilamino,

R4 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-Cicloalcilmetila, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual alcil pode ser substituído por um hidróxi substituto,e na qual cicloalcilmetila, benzila e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometoxi, CrC4-alcil, C1-C4-Blcoxil C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-Blcoxicarbonila, aminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,

R5 representa C1-C6-Blcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarílmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,

na qual cicloalcilmetila, fenil, benzilo e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, CrC4-alcoxi e C1-C4-alcilamino,

representa CrC6-alcil,

na qual o alcil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidin-2-ilamino, [amino-

(imino)metil]amino, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo,

R7 representa C1-C6-Blcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,

na qual cicloalcilmetila, fenil, benzilo e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, C1-C4-Blcoxi e C1-C4-alcilamino,

R8 representa C1-C6-Blcil, C3-C7-cicloalcilmetila, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual alcil pode ser substituído por um hidróxi substituto,e

na qual cicloalcilmetila, benzila e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometoxi, CrC4-alcil, CrC4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-Blcoxicarbonila, aminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,R9 representa hidrogênio, C1-C6-alcíl, C3-C7-cicloalcil, fenil, trimetilsililmetilo ou2-amino-2-oxoetilo,

na qual o metilo pode ser substituído por um substituto selecionado do grupo que consistede hidróxi, amino e mercapto,e

na qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, CrC4-alcil, CrC^alcoxi e CrC^alcilamino,R10 representa hidrogênio, CrC6-alcil, C3-C7-cicloalcil, fenil, trimetilsililmetilo, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidroxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,

na qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, CrC4-alcil, CrC4-alcoxi e CrC4-alcilamino,R11 representa metilo ou etilo,

na qual metilo e etilo podem ser substituídos por um substitute selecionado a partir dogrupo que consiste de hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,

e os sais destes, os solvatos destes e os solvatos dos sais destes,exceto compostos da fórmula Ia), na qual

R1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,

na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluorometil e metilo,

na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluorometil e metilo,e

R12 representa hidrogênio ou metilo,e os sais destes, os solvatos destes e o solvatos dos sais destes.

Também é dada preferência aos compostos da fórmula (I), na qual

R1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridílmetila,

R2 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,

R3 representa C1-C4-Blcill 3-piridilo ou fenil,

na qual 3-piridilo ou fenil podem ser substituídos por um substituto selecionado a partir dogrupo que consiste de halogênio, ciano, metila, metoxi, dimetilamino e dietilamino,

R4 representa-CH(OH)-C1-C5-alcil ou-CH(OH)fenil,

na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi e C1-C4-dialcilaminol

R5 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcilmetila, benzilo ou trimetilsililmetilo,

R6 representa C2-C4-alcil linear,

na qual o alcil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino(imino)metil]amino,R7 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-Cicloalcilmetila, benzilo ou trimetilsililmetilo,R8 representa C1-Oralcil, -CH2-OH, -CH(OH)-C1-C5-alcil ou -CH(OH)fenil,na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi e C1-C4-dialcilamino,

R9 representa hidrogênio, C1-C4-alcil, hidroximetil ou 2-amino-2-oxoetilo,

R10 representa hidrogênio, C1-C4-alcil, 2-amino-2-oxoetilo ou 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo,

na qual C1-C4-alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupoque consiste de amino e hidróxi, com exceção que R10 não seja 4-aminobut-l-il,R11 representa metilo,

na qual o metilo é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de hidróxi e amino,

e os sais destes, os solvatos destes e os solvatos dos sais deste,exceto compostos da fórmula (Ia), na qual

R1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,

R2 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,e

R12 representa hidrogênio ou metilo,

e os sais destes, os solvatos destes e o solvatos dos sais destes.Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na qual

R1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilou benzila,

na qual o benzilo pode ser substituído por 1 ou 2 substitutos selecionadosindependentemente um do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio,trifluorometilo e metilo,

ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na qualR1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il ou trimetilsililmetilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na qualR2 representa 2,2-dimetilprop-1-il ou 3-piridilmetila,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na qualR3 representa fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo ou 4-piridilo,

pelo fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro a partir do grupo que consistede halogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, C1-C4-Blcoxi e C1-C4-alcilamino,

ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na

qual

R3 representa fenil,

na qual o fenil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, ciano, metila, metoxi, dimetilamino e dietilamino,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.Também é dada preferência aos compostos da fórmula (I), na qualR8 representa -CH(OH)-C1-C5-alcil ou -CH(OH)fenil,

na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometila, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi e C1-C4-dialcilamino, eou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) naqual

R10 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- or6-heteroarilo desmembrado, 5- or 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetila,2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,

na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Blcill C1-C4-Blcoxi, C1-C4-Blcilaminol hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminocarbonila e C^C^alcilaminocarbonila,

ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) na qual

R10 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, fenil, trimetilsililmetila, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil) (hidroxi)-

metila, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,e

na qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4alcill C1-C4-alcoxi e C1-C4-alcilamino,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

Também é dada preferência a compostos da fórmula (I) naqual

R10 representa metilo, etilo, 2-amino-2-oxoetilo ou 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual a metila e a etila podem ser substituídas por um substituto de hidróxi,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

A invenção se refere ainda a um método para preparar oscompostos das fórmulas (I), no qual

[A] compostos da fórmula<formula>formula see original document page 16</formula>

na qual

R31 R41 R51 R61 R71 R81 R91 R10 e R11 possuem o significado indicado acima,

na qual

R1 e R2 possuem o significado indicado acima,Y1 representa terf-butoxicarbonila ou benziloxicarbonila, eX1 representa halogênio, de preferência, bromo, cloro ou flúor, ou hidróxi,e subseqüentemente por um ácido e/ou por hidrogenólise,ou

[B] compostos da fórmula<formula>formula see original document page 17</formula>

na qual

R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 possuem o significado indicado acima,são reagidos primeiro com compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 17</formula>

na qual

R1, R2 e R3 possuem o significado indicado acima, eY1 representa ferí-butoxicarbonila ou benziloxicarbonila,e subseqüentemente em uma síntese de 4 estágios

a) com um reagente de flúor, tal como fluoreto de tetrabutilamônio,

b) com um ácido,

c) com um reagente desidradante, quando apropriado na presença de uma base e

d) por hidrogenólise.

Método [A]:

Se X1 for halogênio, a reação no primeiro estágiogeralmente ocorre em solventes inertes, quando apropriado na presença de uma base,de preferência em uma faixa de temperatura de -30°C até 50°C sob pressão atmosférica.

Exemplos de solventes inertes são tetraidrofuran, cloreto demetileno, piridina, dioxano, dimetilacetamida, N-metilpirrolidina ou dimetilformamida, compreferência pela piridina ou dimetilformamida.

Exemplos de bases são trietilamina, diisopropiletilamina ouN-metilmorfolina, com preferência pela diisopropiletilamina.

Se X1 for hidróxi, a reação no primeiro estágio geralmenteocorre em solventes inertes, na presença de um reagente desidradante, quandoapropriado na presença de uma base, de preferência em uma faixa de temperatura de-30°C até 50°C sob pressão atmosférica.

Exemplos de solventes inertes são haloidrocarbonos, taiscomo diclorometano ou triclorometano, hidrocarbonetos tais como benzeno, nitrometano,dioxano, dimetilformamida ou acetonitrilo. Do mesmo modo, é possível empregarmisturas desses solventes. Diclorometano ou dimetilformamida é especialmentepreferido.

Exemplos de reagentes desidradantes adequados aqui sãocarbodiimidas, tais como, por exemplo, N,N'-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N1N'-diciclohexilcarbodiimida, N-(3-dimetilaminoisopropil)-N- hidrocloreto de etilcarbodiimida(EDC)1 N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetil polistireno (PS-carbodiimida) oucompostos de carbonila, tais como carboniladiimidazol ou compotos de 1,2-oxazolium,tais como 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolium 3-sulfato ou 2-tert-butil-5-metilisoxazoliumperclorato, ou compostos de acilamino, tais como 2-etoxi-1-etoxicarbonila-1,2-diidroquinolina, ou anidro propanofosfônico, ou cloroformato isobutílico, ou bis(2-oxo-3-oxazolidinil)cloreto de fosforila ou benzotriazoliloxitri(dimetilamino) hexafluorofosfato defosfônio, ou 0-(benzotriazol-1-n)-N,N,N',N-hexafluorofosfato de tetrametilurônio (HBTU),2-(2-oxo-1-(2H)-piridilo)-1,1,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato (TPTU), 0-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato (TCTU) ou 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-A/,N,N',N'-hexafluorofosfato de tetrametilurônio (HATU), ou1-hidroxibenzo-triazol (HOBt), ou benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfônio hexa-fluorofosfato (BOP), ou benzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfônio hexafluorofosfato(PyBOP), ou N-hidróxisuccinimida, ou misturas destes com bases.

Exemplos de bases são carbonatos metálicos de álcali, taiscomo, por exemplo, carbonato de sódio ou potássio, ou bicarbonato, ou bases orgânicas,tais como trialcilaminas, por exemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina ou diisopropiletilamina.

A condensação é realizada, de preferência, com HATU oucom EDC na presença de HOBt.

A reação com um ácido no segundo estágio do métodoocorre, de preferência, em uma faixa de temperatura de O°C até 40°C sob pressãoatmosférica.

Ácidos adequados para tanto são cloreto de hidrogênio emdioxano, bromo de hidrogênio em ácido acético ou ácido trifluoroacético em cloreto demetileno.

A hidrogenólise no segundo estágio do método geralmenteocorre em um solvente na presença de hidrogênio e paládio em carbono ativado, depreferência em uma faixa de temperatura de O0C até 40°C sob pressão atmosférica.

Exemplos de solventes são álcoois, tais como metanol,etanol, n-propanol ou isopropanol, em uma mistura com água e ácido acético ou ácidoclorídrico aquoso, com preferência por uma mistura de etanol, água e ácido acético ouuma mistura de isopropanol e ácido clorídrico aquoso.

Método [B]:

A reação dos compostos da fórmula (IV) com compostos dafórmula (V) gerealmente ocorre em solventes inertes na presença de um reagentedesidradante, quando apropriado na presença de uma base, de preferência em uma faixade temperatura de -30°C até 50°C sob pressão atmosférica.

Exemplos de solventes inertes são halo-hidrocarbonetos,tais como diclorometano ou triclorometano, hidrocarboneto, tais como benzeno,nitrometano, dioxano, dimetilformamida ou acetonitrilo. Do mesmo modo, é possívelempregar misturas dos solventes. Diclorometano ou dimetilformamida é especialmentepreferido.

Exemplos de reagentes desidradantes adequados aqui sãocarbodiimidas tais como, por exemplo, N,N-dietil-, N,N-dipropil-, N,N-diisopropil-, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, N-(3-dimetilaminoisopropil)-N- hidrocloreto de etilcarbodiimida(EDC), N-ciclohexilcarbodiimida-N-propiloximetil polistireno (PS-carbodiimida) oucompostos da carbonila, tais como carboniladiimidazol ou compostos de 1,2-oxazolium,tais como 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolium 3-sulfato ou 2-terf-butil-5-metilisoxazoliumperclorato, ou compostos de acilamino tais como 2-etoxi-1-etoxicarbonila-1,2-diidroquinolina, ou anidrido propanofosfônico, ou cloroformato isobutílico, ou bis(2-oxo-3-oxazolidinil)cloreto fosforílico ou benzotriazoliloxitri(dimetilamino)fosfôniohexafluorofosfato, ou 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N,N-hexafluorofosfato de tetrametilurônio(HBTU), 2-(2-oxo-1-(2H)-piridilo)-1,1,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato (TPTU), 0-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato (TCTU) ou 0-( 7-azabenzotriazol-1-il)-N,N, N,N-hexafluorofosfato de tetrametilurônio (HATU), ou1-hidroxibenzotriazol (HOBt), ou benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfônio hexa-fluorofosfato (BOP)1 ou benzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfônio hexafluorofosfato(PyBOP)1 ou N-hidróxisuccinimida, ou misturas destes com bases.

A condensação é realizada, de preferência, com HATU oucom uma mistura de EDC e HOBt.

A reação com fluoreto de tetrabutilamônio no primeiroestágio (a) do outro método, geralmente ocorre em solventes inertes, de preferência emuma faixa de temperatura de 0°C até 40°C sob pressão atmosférica.

Exemplos de solventes inertes são halo-hidrocarbonetos taiscomo diclorometano ou triclorometano, ou éteres, tais como tetraidrofuran ou dioxano.Tetraidrofuran é especialmente preferido.

A reação com um ácido no segundo estágio (b) do métodoocorre, de preferência, em uma faixa de temperatura de 0°C até 40°C sob pressãoatmosférica.

A reação no terceiro estágio (c) do método ocorre emanalogia à reação de compostos da fórmula (IV) com compostos da fórmula (V).

A hidrogenólise no quarto estágio (d) do método ocorregeralmente em um solvente na presença de hidrogênio e paládio em carbono ativado, depreferência em uma faixa de temperatura de 0°C até 40°C sob pressão atmosférica.

Os compostos da fórmula (II) são conhecidos ou podem serpreparados reagindo compostos da fórmula<formula>formula see original document page 21</formula>

na qual

R41 R5, R61 R71 R81 R91 R10 e R11 possuem o significado indicado acima,primeiro com compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 21</formula>

R3 tem o significado indicado acima e

R13 representa cianometila, p-nitrofenil, o-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, 2,4,5-triclorofenil,pentaclorofenil, pentafluorofenil (Pfp)1 N-hidróxiftalimidil, N-hidroxisucinimidil (O-Su), 1-hidroxipiperidinil ou 5-cloro-8-hidroxiquinolinil,

e subseqüentemente em uma síntese de 3 estágios

a) com um ácido,

b) com um reagente desidradante, quando apropriado na presença de uma base e

c) por hidrogenólise.

A reação dos compostos da fórmula (VI) com compostos dafórmula (VII) geralmente ocorre em solventes inertes, quando apropriado, na presença deuma base, de preferência em uma faixa de temperatura de -30°C até 50°C sob pressãoatmosférica.

A reação com um ácido no primeiro estágio (a) do métodoocorre, de preferência em uma faixa de temperatura de OcC até 40°C sob pressãoatmosférica.

A reação no segundo estágio (b) do método ocorre emanalogia à reação de compostos da fórmula (IV) com compostos da fórmula (V).

A hidrogenólise no terceiro estágio (c) do métodogeralmente ocorre em um solvente na presença de hidrogênio e paládio em carbonoativado, de preferência, em uma faixa de temperatura de 0°C até 40°C sob pressãoatmosférica.

Exemplos de solventes são álcoois, tais como metanol, etanol, n-propanol ou isopropanol, em uma mistura com água e ácido acético ou ácidoclorídrico aquoso, com preferência por uma mistura de etanol, água e ácido acético ouuma mistura de isopropanol e ácido clorídrico aquoso.

Os compostos das fórmulas (III), (V) e (VII) são conhecidosou podem ser sintetizados por método conhecido, ou pelos métodos descritos abaixo, apartir dos materiais iniciais correspondentes.

Os compostos das fórmulas (IV) e (VI) são conhecidos oupodem ser sintetizados em solução usando grupos de proteção apropriados ou na fasesólida por métodos de síntese de peptídeos conhecidos, ou pelos métodos descritosabaixo, a partir dos materiais iniciais correspondentes.

A preparação dos compostos da invenção pode ser ilustradapelos seguintes esquemas de síntese.Esquema de síntese 1:

<formula>formula see original document page 23</formula>Esquema de síntese 2:

<formula>formula see original document page 24</formula>Esquema de síntese 3:

<formula>formula see original document page 25</formula>

Os compostos da invenção demonstram uma sérieimportante de efeitos farmacológicos que não poderiam ter sido previstos. Demonstramum efeito antibacteriano.

Portanto, são adequados para uso como medicamentospara o tratamento e/ou profilaxia de doenças em seres humanos e animais.

Os compostos da invenção são distinguidos por umanefrotoxicidade menor se comparados ao Lysobactin.

Os compostos da invenção são distinguidos por uma maiorestabilidade em meio aquoso de neutro a básico. Esta propriedade melhora aarmazenagem dos compostos da invenção e a administração como medicamentos.

Os nonadepsipeptídeos descritos agem como inibidores dabiosíntese da parede celular bacteriana.Os preparados da invenção são particularmente eficientescontra bactérias e microorganismos bacteróides. Portanto, são especialmente adequadospara a profilaxia e quimioterapia de infecções locais e sistêmicas causadas por essespatógenos na medicina humana e veterinária.

Em princípio, os preparados da invenção podem serutilizados contra todas as bactérias e microorganismos bacteróides que possuem umaparede celular bacteriana (mureína sáculo) e os sistemas de enzima relevantes, porexemplo, contra os seguintes patógenos e misturas dos seguintes patógenos:

Cocos gram-negativos (Neisseria gonorrhoeae) bem comobastonentes gram-negativos, tais como enterobacteriaceae, por exemplo, Escherichiaeoii, Haemophiius influenzae, Pseudomonas, Klebsiella, Citrobacter (C. freundii, C.divernis), Salmonella e Shigella; além disso, Enterobacter (E. aerogenes, E.agglomerans), Hafnia, Serratia (S. mareescens), Providencia, Yersinia, bem como osgêneros Acinetobacter1 Branhamella e Clamídia. A variedade antibacteriana inclui, alémdisso, bactérias estritamente anaeróbicas, tais como, por exemplo, Bacteróides fragiiis,representantes dos gêneros Peptococo, Peptostreptococo, bem como o gêneroClostridium; além disso, micobactéria, por exemplo, M. tubercuiosis. Os compostos dainvenção demonstram um efeito especialmente pronunciado sobre cocos gram-positivos,por exemplo, estafilococos (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. carnosus),enterococos (E. faecaiis, E. faecium) e estreptococos (S. agaiactiae, S. pneumoniae, S.pyogenes).

A lista de patógenos acima é dada simplesmente a título deexemplo e não deve de modo algum ser interpretada como restritiva. Exemplos quepodem ser mencionados de doenças que podem ser causadas pelos patógenosmencionados ou infecções misturadas e podem ser evitadas, melhoradas ou curadaspelos preparados da invenção são:

Doenças infecciosas em seres humanos tais como, porexemplo, infecções do trato urinário com ou sem complicações, infecções cutâneas esuperficiais sem complicações, infecções cutâneas e do tecido mole com complicações,pneumonia hospitalar e comunitária, pneumonias nosocomiais, exacerbações agudas einfecções bacterianas secundárias de bronquite crônica, otite média aguda, sinusiteaguda, faringite por estreptococo, meningite bacteriana, uretrite/cervicite gonococal enão-gonococal sem complicações, prostatite aguda, endocardite, infecções intra-abdominais com e sem complicações, infecções ginecológicas, doença inflamatóriapélvica, vaginose bacteriana, osteomielite aguda e crônica, artrite bacteriana aguda,terapia empírica para pacientes neutropênicos febris, além disso, bacteremias, infecçõesMRSA1 diarréia infecciosa aguda, infecções por Helicobacter pilori, infecções pós-operatórias, infecções odontogênicas, infecções oftalmológicas, infecções pós-operatórias (incluindo abscesso periproctal, infecções de feridas, infecções biliares,mastite e apendicite aguda), fibrose cística e bronquioectasia.

Além dos seres humanos, também podem ser tratadasinfecções bacterianas em outras espécies. Exemplos que podem ser mencionados são:Porcos: diarréia, enterotoxemia, sepse, desinteria, salmonelose, síndrome metrite-mastite-agalactia, mastite;

Ruminantes (gado, ovelhas, cabras): diarréia, sepse, broncopneumonia, salmonelose,pasteurelose, infecções genitais;

Cavalos: broncopneumonias, dores nas juntas, infecções puerperais e pós-puerperais,salmonelose;

Cães e gatos: broncopneumonia, diarréia, dermatite, otite, infecções do trato urinário,prostatite;

Aves (galinhas, perus, codornas, pombos, pássaros ornamentais e outros): infecções porE. co//, distúrbios crônicos das vias aéreas, salmonelose, pasteurelose, psitacose.

Do mesmo modo, é possível tratar doenças causadas porbactérias no cultivo e controle de peixes de produção e ornamentais, em cujo caso oespetro antibacteriano é ampliado além dos patógenos mencionados iacima até outrospatógenos, tais como, por exemplo, Pasteurella, Brucella, Campilobacter, Listeria,Erysipelothris, corynebacteria, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsia, Yersinia.

A presente invenção se refere ainda ao uso dos compostosda invenção para o tratamento e/ou profilaxia de doenças, em particular de doençasinfecciosas causadas por bactérias.

A presente invenção se refere ainda ao uso dos compostosda invenção para o tratamento e/ou profilaxia de doenças, especialmente das doençasacima mencionadas.

A presente invenção se refere ainda ao uso dos compostosda invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia dedoenças, especialmente das doenças acima mencionadas.

De preferência, os compostos da invenção são usados para afabricação de medicamentos adequados para a profilaxia e/ou tratamento de doençascausadas por bactérias.

A presente invenção se refere ainda a um método para otratamento e/ou profilaxia de doenças, especialmente das doenças acima mencionadas,usando uma quantidade eficiente para ação antibacteriana dos compostos da invenção.A presente invenção se refere ainda a medicamentos quecompreendem pelo menos um composto da invenção e pelo menos um ou mais outrosingredientes ativos, em especial para o tratamento e/ou profilaxia das doenças acimamencionadas. Os ingredientes ativos preferidos para combinação são compostos quepossuem uma atividade antibacteriana e uma variedade diferente de efeitos, emparticular, uma variedade suplementar de efeitos e/ou que sejam sinérgicos aoscomponentes da invenção.

Os compostos da invenção podem agir sistemicamente e/oulocalmente. Para essa finalidade, podem ser administrados de maneira adequada, talcomo, por exemplo, via oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, retal,epidérmica, transepidérmica, conjuntiva ou ótica, ou como implante ou stent.

Para essas vias de administração, os compostos dainvenção podem ser administrados em formas de administração adequadas.

As formas de administração adequadas para administraçãooral que funcionam de acordo com a técnica anterior e aplicam os compostos dainvenção rapidamente e/ou de modo modificado e que contêm os compostos da invençãoem forma cristalina e/ou amortizada e/ou dissolvida, tais como, por exemplo, comprimidos(comprimidos não revestidos ou revestidos, por exemplo, que possuem revestimentosentéricos ou revestimentos que dissolvem posteriormente ou são insolúveis e controlam aliberação do composto da invenção), comprimidos ou películas/wafers que desintegramrapidamente na cavidade oral, películas/liofilizatos, cápsulas (por exemplo, cápsulas degelatina dura ou mole), comprimidos revestidos com açúcar, grânulos, pílulas, pós,emulsões, suspensões, aerossóis ou soluções.

A administração parenteral pode ocorrer evitando-se umafase de absorção (por exemplo, intravenosa, intra-arterial, intracardíaca, intraespinhal ouintralombar) ou com inclusão de uma absorção (por exemplo, intramuscular, subcutânea,intracutânea, percutânea ou intraperitoneal). Formas de administração adequadas paraadministração parenteral são, entre outras, preparados para injeção e infusão na formade soluções, suspensões, emulsões, Iiofilizatos ou pós estéreis.

São adequadas para as outras vias de administração, porexemplo, formas farmacêuticas para inalação (entre outros, inaladores, nebulizadores),gotas nasais, soluções, sprays; comprimidos, películas/wafers ou cápsulas, paraadministração lingual, sublingual ou bucal, supositórios, preparados para os ouvidos ouolhos, cápsulas vaginais, suspensões aquosas (loções, misturas para agitar), suspensõeslipofílicas, pomadas, cremes, sistemas terapêuticos transdérmicos (tais como, porexemplo, emplastros), leite, pastas, espumas, pós, implantes ou stents.Os compostos da invenção podem ser convertidos nasformas de administração mencionadas. Isso pode ocorrer de uma maneira conhecida porsi, misturando com excipientes inertes, atóxicos, farmaceuticamente adequados. Essesexcipientes incluem, entre outros, transportadores (por exemplo, celulose microcristalina,lactose, manitol), solventes (por exemplo, polietileno glicóis líquidos), emulsificantes edispersantes ou agentes umedecedores (por exemplo, dodecil sulfato de sódio, oleato depolioxisorbitan), aglutinantes (por exemplo, polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos enaturais (por exemplo, albumina), estabilizantes (por exemplo, antioxidantes, tais como,por exemplo, ácido ascórbico), cores (por exemplo, pigmentos inorgânicos, tais como, porexemplo, óxidos de ferro) e corretores de sabor e/ou odor.

A presente invenção se refere ainda a medicamentos quecompreendem pelo menos um composto da invenção, geralmente junto com um ou maisexcipientes inertes, atóxicos, farmaceuticamente aceitáveis e ao uso dos mesmos paraos fins acima mencionados.

Tem sido geralmente comprovado que é vantajosoadministrar por via intravenosa quantidades de cerca de 0,001 a 100 mg/kg, depreferência cerca de 0,1 a 10 mg/kg, de peso corporal para atingir resultados eficientes eem administração oral, a dosagem é de cerca de 0,01 a 50 mg/kg, de preferência 0,5 a10 mg/kg, de peso corporal.

Não obstante, pode ser necessário, quando apropriado,desviar das quantidades estabelecidas, em especial em função do peso corporal, via deadministração, resposta individual ao ingrediente ativo, natureza da preparação e tempoou intervalo durante o qual ocorre a administração. Assim, em alguns casos, pode sersuficiente fazer isso com menos do que a quantidade acima mencionada, enquanto emoutros casos, o limite superior estabelecido precisa ser excedido. No caso daadministração de quantidades maiores, pode ser recomendável dividi-las em umapluralidade de doses individuais ao longo do dia.

Os dados percentuais nos seguintes testes e exemplos sãopercentuais por peso, a menos que indicado de modo contrário; partes são partes porpeso. Em cada caso, as proporções de solvente, proporções de diluição e dados deconcentração para líquido/soluções líquidas baseiam-se no volume

Os desenhos anexos ilustram diagramas dê estabilidadepara exemplos de compostos selecionados e Lysobactin como exemplo comparativo.Estes mostram:

Fig. 1: Uma representação gráfica da mudança de concentração de Lysobactin e de umproduto de degradação de Lysobactin ao longo do tempo, em uma solução aquosa,levemente alcalina.

Fig. 2 Uma representação gráfica da mudança de concentração do composto deexemplo 19 ao longo do tempo, em uma solução aquosa, levemente alcalina.Fig. 3 Uma representação gráfica da mudança de concentração do composto deexemplo 23 ao longo do tempo, em uma solução aquosa, levemente alcalina.

Fig. 4 de exemplo 25 ao longo do tempo, em uma solução aquosa, levemente alcalina.Fig. 5 de exemplo 40 ao longo do tempo, em uma solução aquosa, levemente alcalina.

A. Exemplos

Abreviaturas

abs. absoluto

aq. aquoso

BHI infusão cardíaca cerebral

Boc terí-butoxicarbonila

conc. concentrado

DCC dicicloexilcarbodiimida

DCI ionização química direta (em MS)

DCM diclorometano

DIEA N,N-diisopropiletilamina

DMAP 4-N, N-dimetilaminopiridina

DMSO dimetil sulfóxido

DMF N,N-dimetilformamida

EA acetato etílico

EDC 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (também EDCI)

EDCxHCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)hidrocloreto de carbodiimida

EDTA ácido etilenodiaminatetraacético

El ionização de impacto de elétrons (em MS)

eq. equivalente(s)

ESI ionização por eletropulverização (em MS)

Ex. exemplo

h horas(s)

HATU 0-(7-azabenzotriazol-1 -IL)-N, N, N', N'-hexafluorofosfatotetrametilurônio

HOBt 1-hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografia de líquido de alta pressão, alto desempenho

LC-MS espectroscopia conjugada cromatografia de líquido-massa

LDA diisopropilamida de lítioLHMDS hexametildisilazida de lítio

LLA(3-cicloexil) D-Leu-Leu-(3-cicloexil)Ala

LLF D-Leu-Leu-Phe

MALDI Desorção/ionização a laser assistida por matriz

MIC concentração inibitória mínima

Min minuto/minutos

MRSA Staphilococcus aureus resistente a meticilina

MS espectroscopia de massa

MTBE éter metil te/ΐ-butílico

NCCLS Comitê Nacional de Normas para Laboratórios Clínicos

neg. negativo

NMM N-metilmorfolina

NMR espectroscopia por ressonância magnética nuclear

org. orgânico

p.a. pró análise

Pd paládio

Pd-C paládio em carbono

pos. positivo

PTFE politetrafluoroetileno

quant. quantitativo

RP-HPLC Fase inversa HPLC

RT temperatura ambiente

Rf fator de retenção (em cromatografia de camada fina)

Rt tempo de retenção (em HPLC)

sat. saturado

TBAF fluoreto de tetrabutilamônio

TBTU 0-(benzotriazol-1 -il )-N, Ν, N', N-tetrametilurônio tetrafluoroborato

TCTU 0-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurôniotetrafluoroborato

TFA ácido trifluoroacético

TFE 2,2,2-trifluoroetanol

THF tetraidrofuran

TMG N,N,N,AMetrametiIguanidina

TMSE 2-(trimetilsilil)etila

TOF tempo de vôo

UV ultravioletaVRSA Stapilococcus aureus resistente a vancomicina

XPHOS dicicloexil(2',4',6'-triisopropilbifenil-2-il)fosfina

Z, Cbz benziloxicarbonila

Referências

Com referência à nomenclatura de peptídeos eciclodepsipeptídeos, compare:

1. A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds (Recommendations1993), 1993, Blackwell Scientific publications.

2. Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides. Recommendations1983. IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, UK. BiochemicalJournal 1984, 219, 345-373, and cited literature.

Material e MétodosMétodos Analíticos

Método 1: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1100; UV DAD; coluna: PhenomenexSynergi 2 μ Hydro-RP Mereury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 I de água + 0,5 ml de ácidofórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%; gradiente:0,0 min 90%A -» 2,5 min 30%A -> 3,0 min 5%A -> 4,5 min 5%A; taxa de fluxo: 0,0 min1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; forno: 50°C; detecção de UV: 210 nm.Método 2: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1050; UV DAD; coluna: PhenomenexSynergi 2 μ Max-RP Mercury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 I de água + 0,05% TFA,eluente B: 1 I de acetonitrilo; gradiente: 0.0 min 90%A 2.5 min 30%A 3.0 min 5%A4,5 min 5%A; taxa de fluxo: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; forno:50°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 3: Tipo de instrumento HPLC: HP 1050/Série 1100; UV DAD Série 1100; coluna:Kromasil C18, 60 χ 2,1 mm, 3,5 μηι; eluente A: água/0,5% de ácido perclórico, eluente B:acetonitrilo; gradiente: 0-0.5 min 2%B, 0.5-4.5 min 2-90%B, 4.5-6.5 min 90%B, 6,5-6,7 min 90-2%B, 6,7-7,5 min 2%B; taxa de fluxo: 0,75 ml/min, forno: 30°C, detecção deUV 210 nm.

Método 4: Instrumento: HP 1100 com detecção DAD; coluna: Kromasil 100 RP-18,60 mm χ 2.1 mm, 3.5 μιτι; eluente A: 5 ml de ácido perclórico (70%)/l de água, eluente B:acetonitrilo; gradiente: 0 min 2%B, 0,5 min 2%B, 4,5 min 90%B, 9 min 90%B, 9,2 min.2%B, 10 min 2%B; taxa de fluxo: 0,75 ml/min; temp. da coluna: 30°C; detecção: UV 210nm.

Método 5: Instrumento: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A),autosampler (G1313A), desgaseificador de solvente (G1379A) e termostato de coluna(G1316A); coluna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 χ 150 χ 5 mm; temperatura dacoluna: 30°C; eluente A: 0,05% de ácido perclórico a 70% em água; eluente B:acetonitrilo; taxa de fluxo: 2,00 ml/min; gradiente: 0-1 min 10% B, ramp, 4-5 min 90% B,rampa, 5,5 min 10% B.

Método 6: Instrumento: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A),autosampler (G1313A), desgaseificador de solvente (G1379A) e termostato de coluna(G1316A); coluna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6 χ 150 χ 5 mm; temperatura dacoluna: 30°C; eluente A: 0,01% TFA em água; eluente B: 0,01% TFA em acetonitrilo; taxade fluxo: 2,00 ml/min; gradiente: 0-1 min 10% B, ramp, 4-5 min 90% B, rampa, 5,5 min10% B.

Método 7: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A), autosampler(G1313A), desgaseificador (G1379A) e termostato de coluna (G1316A); coluna: Synergi 4Hydro-RP 80A, 4.6 χ 150 χ 5 mm; temperatura do forno: 30°C; eluente A: água + 0,05%de ácido perclórico a 70%; eluente B: acetonitrilo; taxa de fluxo: 2,00 ml/min; gradiente:0-1 min 10% B, ramp, 4-5 min 90% B1 rampa, 5,5 min 10% B.

Método 8: Instrumento: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A),autosampler (G1313A), desgaseificador de solvente (G1379A) e termostato de coluna(G1316A); coluna: Agilent Eclipse XDB-C8 4,6 χ 150 χ 5 mm; temperatura da coluna:40°C; eluente A: 0,05% de ácido perclórico a 70% em água; eluente B: metanol; taxa defluxo: 2.00 ml/min; isocrático: 0-7 min 55% B.

Método 9: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1050; UV DAD; coluna: Zorbax 300 mSB-C18 3.5 μ, 4,6 mm χ 150 mm; eluente A: 1 I de água +0.1% TFA, eluente B: 400 ml deacetonitrilo/600 ml de água + 0,1% TFA; gradiente: 0,0 min 100%A, 1,3 min 10%B,18,0 min 80%B, 20,0 min 80%B, 21,0 min 100%B, 25,0 min 100%B, 26,0 min 0%B,30,0 min 0%B. Taxa de fluxo: 1 ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 10: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1050; UV DAD; coluna: Zorbax 300mSB-C18 3.5 μ, 4,6 mm χ 150 mm; eluente A: 1 I de água +0.1% TFA, eluente B:acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 100%A, 15,0 min 100%B, 17,0 min 100%B, 18.0 min100%A. Taxa de fluxo: 1 ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 11: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1050; UV DAD; coluna: Zorbax 300mSB-C18 3,5 μ, 4,6 mm χ 150 mm; eluente A: 1 I de água +0,1% TFA, eluente B: 400 mlde acetonitrilo/600 ml de água + 0,1% TFA; gradiente: 0,0 min 100%A, 2,0 min 10%B,50,0 min 80%B, 52,0 min 100%B, 55.0 min 100%A, 60.0 min 100%A. Taxa de fluxo:1 ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 12: Tipo de instrumento HPLC: HP 1050 Series; coluna SymmetryPrep™C18,Waters, 50 χ 2,1 mm, 3,5 μηη; eluente A: água/0,1% TFA, eluente B: acetonitrilo;gradiente: 0-3 min 0%B, 3,01-9 min 100%B, 9,01-11 min 100%B, 11,01-12 min 0-100%A; forno: 40°C; taxa de fluxo: 0,4 ml/min; detecção de UV: 210 nm.Método 13: Tipo de instrumento HPLC: HP Série 1100; UV DAD; coluna: ChromolithSpeed ROD RP18; eluente A: 1 I de água + 0,05% TFA1 eluente B: 1 I de acetonitrilo;gradiente: 0,0-0.5 min 95%A, 0,51-3,0 min 5-95%B, 3,01-3,80 min 95%A; taxa de fluxo: 5ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 14: coluna (coluna de aço, dimensões 250 χ 4,6 mm); fase estacionária (sílicachiral /composto de poliamida KBD 5326, com base no seletor póli(/\/-metacriolil-L-leucinadiciclopropilmetilamida); eluente: acetato etílico, isocrático; taxa de fluxo: 1 ml/min;temperatura: 25°C; detecção de UV: 220 nm; amostra: injeção de 10 μΙ. Método 15: fase estacionária (Chiralcel OD); eluente: i-hexano/i-PrOH : 9/1, isocrático;taxa de fluxo: 2 ml/min; temperatura: 25°C; detecção de UV: 254 nm.Método 16: Tipo de instrumento HPLC: Série HP 1100; coluna: Chiralpack AD-H 250 mmχ 4,6 mm; eluente A: isoexano, eluente B: etanol + 0,2%TFA + 1% H20; isocrático; taxade fluxo: 1 ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 230 nm.Método 17: Daicel Chiralpak AD-H 5 pm 250 mm χ 4,6 mm, hexano/2-propanol/metanol85/6/9, taxa de fluxo: 2,0 ml/min, detecção de UV a 254 nm.

Método 18: Tipo de instrumento MS: Micromass ZQ; tipo de instrumento HPLC: WatersAlliance 2795/HP 1100; coluna: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm χ 4mm; eluente A: 1 I de água + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo+0,5 ml de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0.0 min 90%A 2.5 min 30%A 3.0 min5%A 4,5 min 5%A; taxa de fluxo: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min;forno: 50°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 19: Tipo de instrumento MS: Micromass ZQ; tipo de instrumento HPLC: WatersAlliance 2795/HP 1100; coluna: Phenomenex Gemini 3 μ C-18 100 A, 30 mm χ 3 mm;eluente A: 1 I de água + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5ml de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0.0 min 90%A 2.5 min 30%A 3.0 min 5%A4,5 min 5%A; taxa de fluxo: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; forno:50°C; detecção de UV: 210 nm.

Método 20: Detecção de UV: 210 nm. Tipo de instrumento MS: Micromass ZQ; tipo de instrumento HPLC: Waters Allianee 2795; coluna: Phehomenex Synergi 2μ Hydro-RPMercury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 I de água + 0,5 ml 50% de ácido fórmico, eluente B:1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0.0 min 90%A -> 2.5 min30%A 3.0 min 5%A 4,5 min 5%A; taxa de fluxo: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0min/4.5 min 2 ml/min; forno: 50°C; detecção de UV: 210 nm.Método 21: Instrumento: Micromass Quattro LCZ com HPLC Agilent Série 1100; coluna:Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 I de água + 0,5ml de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%;gradiente: 0.0 min 90%A 2.5 min 30%A 3.0 min 5%A 4,5 min 5%A; taxa de fluxo:0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; forno: 50°C; detecção de UV: 208-400nm.

Método 22: Instrumento: Micromass Platform LCZ com HPLC Agilent Série 1100; coluna:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 I de água + 0,5 ml de ácidofórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%; gradiente:0.0 min 100%A 0.2 min 100%A 2.9 min 30%A 3.1 min 10%A ->5.5 min 10%A;forno: 50°C; taxa de fluxo: 0.8 ml/min; detecção de UV: 210 nm.

Método 23: Tipo de instrumento MS: Micromass LCT (ESI pos./neg.); tipo de instrumentoHPLC: HP Série 1100; UV DAD Série 1100; coluna SymmetryPrep™Ci8, Waters, 50 χ2,1 mm, 3,5 μηη; eluente A: água/0,1% de ácido fórmico, eluente B: acetonitrilo/0,1% deácido fórmico; gradiente: 0-1 min 0%B, 1-6 min 0-90%B, 6-8 min 90-100%B, 8-10 min100%B, 10-10.1 min 100-0%B, 10.1-12 min 0%B, então regeneração da colunacromatográfica. Forno: 40°C, taxa de fluxo: 0,5 ml/min (brevemente até 1 ml/min a 10,1min), Detecção de UV; 210 nm.

Método 24: espectros TOF-HR-MS-ESI+ são registrados com um instrumento MicromassLCT (voltagem capitalar: 3,2 KV, voltagem de cone: 42 V, temperatura da fonte: 120°C,temperatura de dessolvação: 280°C). É usada uma bomba de seringa (HarvardApparatus) para a aplicação da amostra para essa finalidade. Leucina-encefalina (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) é usada como padrão.

Método 25: As investigações MALDI-MS/MS são realizadas em um Analisador 4700Proteomics (Applied Biosystems, Framingham, MA, EUA) o qual é equipado de óptica poríon TOF/TOF e laser de 200 Hz Nd:YAG (355 nm). Os íons quasi-moleculares sãoacelerados na fonte de íons com 8 kV, selecionados com um defletor elétrico (MS1) ecolididos com átomos de argônio em uma célula de colisão que se encontra dispostaentre MS1 e MS2. Os íons de fragmento resultantes são acelerados novamente comkV s caracterizados com o segundo tempo do analisador de massa de vôo (MS2).

Cromatografia preparatória

Método 26: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:NucleodurC18Gravidade, Macherey-Nagel, 5 μηη; 250 χ 21 mm; eluente A: água/O,05%-0,1% TFA, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min 5%B, 8-40 min 5-60%B, 40-60 min60%B, 60-75 min 60-100%B, 75-80 min 100%B, então regeneração da colunacromatográfica; taxa de fluxo: 7-15 ml/min; Detector de UV 210 nm.

Método 27: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:NucIeodurCl8 Gravidade, Macherey-Nagel, 5 μηη; 250 χ 21 mm; eluente A: água/0,05%-0,1% TFA, eluente Β: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min 5%B, 8-40 min 5-60%B, 40-60 min60%B1 60-75 min 60-100%B, 75-80 min 100%B, então regeneração da colunacromatográfica; taxa de fluxo: 7-15 ml/min; Detector de UV 210 nm.Método 28: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:Nucleodur Ci8 Gravity, Macherey-Nagel1 5 μm; 250 χ 40 mm; eluente A: água/0,05-0,1%TFA, eluente B: acetonitrilo/ 0,05-0,1% TFA; gradiente: O-IOmin 10%B, 10-24 min 10-30%B, 24-28 min 30-50%B, 28-35 min 50%B, 35-45 min 50-60%B, 45-53 min 60-70%B, 53-60 min 60-90%B, 60-70 min 100%B, então regeneração da colunacromatográfica; taxa de fluxo: 15-45 ml/min; Detector de UV 210 nm.Método 29: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:NucleodurC18Gravidade, Macherey-Nagel, 5 μm; 250 χ 21 mm; eluente A: água/0,2% deácido acético, eluente B: acetonitrilo/0,2% de ácido acético; gradiente: 0-10 min 10%B,10-24 min 10-30%B, 24-28 min 30-50%B, 28-35 min 50%B, 35^*5 min 50-60%B, 45-53 min 60-70%B, 53-60 min 60-90%B, 60-70 min 100%B, então regeneração da colunacromatográfica; taxa de fluxo: 7-15 ml/min; Detector de UV 210 nm.

Método 30: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:Nucleodur Ci8 Gravity, Macherey-Nagel, 5 μηι; 250 χ 40 mm; eluente A: água/0,2% deácido acético, eluente B: acetonitrilo/0,2% de ácido acético; gradiente: O-IOmin 10%B,10-24 min 10-30%B, 24-28 min 30-50%B, 28-35 min 50%B, 35^5 min 50-60%B, 45-53 min 60-70%B, 53-60 min 60-90%B, 60-70 min 100%B, então regeneração da colunacromatográfica; taxa de fluxo: 15-45 ml/min; Detector de UV 210 nm.Método 31: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:KromasiI-IOOA C18, 5 pm; 250 χ 30 mm; eluente A: água/0.25% de ácido acético,eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min 5%B, 3-30 min 5-100%B, 30-38 min 100%B,então regeneração da coluna cromatográfica; taxa de fluxo: 25 ml/min; Detector de UV 210 nm.

Método 32: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:Kromasil-100A Ci8, 5 μηι; 250 χ 30 mm; eluente A: água/0,05-0.5% TFA, eluente B:acetonitrilo; gradiente: 0-5 min 5%B, 5.01-10 min 10%B, 10.01-20 min 40%B, 20.01-27 min 50%B, 27.01-40 min 60%B, 40.01-45 min 90%B, 45.01-60 min 100%B; taxa defluxo: 15-60 ml/min; Detector de UV 210 nm.

Método 33: Gilson Abimed HPLC; Detector de UV 210 nm; coluna: Kromasil RP-18 5 μιη,100 A, 250 χ 20 mm; eluente A: água + 0,05% TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA:taxa de fluxo: 10 ml/min; 0-3 min 10% B, rampa, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B.Método 34: Gilson Abimed HPLC; Detector de UV 210 nm; coluna: Gromsil ODS-4HE10 μm, 250 χ 40 mm; eluente A: água + 0,05% TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA:taxa de fluxo: 20 ml/min; 0-3 min 10% B1 rampa, 30-35 min 90% B1 35-40 min 90% B.Método 35: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:Waters Symmetry-Prep™ C18, 7 μιτι, 300 χ 19 mm; eluente A: água/0,2% de ácido acéticoglacial, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min 5%B, 8-25 min 5-100%B, 25,01-40 min100%B, então regeneração da coluna cromatográfica; taxa de fluxo: 15 ml/min; Detectorde UV 210 nm.

Método 36: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binárias; coluna:Waters Symmetry-Prep™ C18, 7 μιτι, 300 χ 19 mm; eluente A: água/0,1% TFA, eluente B:acetonitrilo; gradiente: 0-5 min 5%B, 5,01-32 min 5-100%B, 32,01-35 min 100%B, entãoregeneração da coluna cromatográfica; taxa de fluxo: 15 ml/min; Detector de UV 210 nm.Método 37: coluna: Kromasil-100 Ci8, 5 μιη; 250 χ 20 mm; eluente: 25% water + 0,2 TFA/75% acetonitrilo; isocrático; 0-8,5 min; taxa de fluxo: 25 ml/min; Detector de UV 220 nm;temperatura 30°C.

Método 38: coluna (coluna de aço, dimensões 250 χ 30 mm); fase estacionária (sílicachiral /composto de poliamida KBD 5326, com base no seletor poli(/\/-metacriolil-L-leucinadiciclopropilmetilamida); eluente acetato etílico, isocrático; taxa de fluxo: 25 ml/min;temperatura: 24°C; Detecção de UV: 225 nm; amostra: injeção repetitiva de 2000 μΙ.Método 39: coluna (coluna de aço, dimensões 430 χ 75 mm); fase estacionária (sílicachiral /poliamida com base no seletor poli(/V-metacriloil-D-leucina diciclopropilmetilamida);eluente isoexano (80%) / THF (20%), isocrático; taxa de fluxo: 200 ml/min; temperatura:24°C; Detecção de UV: 254 nm; amostra: injeção repetitiva de 10000 μΙ.Método 40: coluna (coluna de aço, dimensões 250 χ 20 mm); fase estacionária (DaicelChiralpak AD-H, 5 pm); eluente: isoexano (70%)/ 2-propanol + 0,2% de ácido acético +1% de água (30%), isocrático; taxa de fluxo: 15 ml/min; temperatura: 29°C; Detecção deUV: 220 nm; amostra: injeção repetitiva de 750 μΙ.

Método 41: Gilson Abimed HPLC; coluna: Daicel Chiralpak AD-H 5 μιτι; 250 χ 20 mm;eluente A: isoexano, eluente B: 0.2% de ácido acético/ 1% de água/ 2-propanol;isocrático; taxa de fluxo: 15 ml/min; detector de UV 212 nm

Método 42: coluna (coluna de aço, dimensões 500 χ 40 mm); fase estacionária (DaicelChiralpak AD 20 μιτι), isoexano/ isopropanol/ metanol 95/2/3, taxa de fluxo: 100 ml/min,Detecção de UV: 230 nm.

Método 43: Instrumento: Gilson Abimed HPLC; Detector de UV 210 nm; sistema debombas binárias; coluna: SymmetryPrep™C18, Waters, 7 μιτι; 300 mm χ 19 mm; taxa defluxo: 25 ml/min; eluente A: água/0.2% TFA, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-10 min15-65%B, então regeneração da coluna cromatográfica.

Método 44: Gilson Abimed HPLC; Detector de UV 210 nm; coluna: Waters Symmetry-Prep™ C-18, 7 pm, 300 χ 19 mm; eluente A: água + 0,05% TFA1 eluente B: acetonitrilo +0,05% TFA: taxa de fluxo: 10 ml/min; 0-3 min 10% B1 rampa, 30-38 min 90% B, 38-45 min10% B.

Método 45: A cromatografia com gel é realizada sem pressão no Sephadex LH-20(Pharmacia). São retiradas frações de acordo com a atividade de UV (Detector de UVpara 254 nm, Knauer) (ISCO Foxi 200 coletor de frações). Dimensões da coluna:32 χ 7 cm (escala 1000-100 μmol); 30 χ 4 cm (escala 100-10 μmol); 25 χ 2 cm (escala10-1 μmol). O metanol é utilizado como eluente.

Método 46: Gilson Abimed HPLC; Detector de UV 210 nm; coluna: Biotage Flash40 RP-18 ou módulo compatível Varian Metaflash C18 40M, 35 μm, 150 χ 40 mm; eluente A:água + 0,05% TFA1 eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA: taxa de fluxo: 40 ml/min; 0-3 min10% B, rampa, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B.

Método 47: Separação preparatória da segmentação de quimiotripsina de fragmentos 1-3e 4-11 de diidroLysobactin por cromatografia de fase inveresa. Coluna: Fonte 15-RPC(GE-HeaIthCare), diâmetro 5 cm, comprimento 12 cm, volume 235 ml. Eluente A: 0,1% deácido acético em água. Eluente B: 0,1% de ácido acético em metanol. Taxa de fluxo:30 ml/min. Detecção de UV: 215 nm, 280 nm. Carga: cerca de 6-7 mg de proteínatotal/ml resina. Carga de amostra: A coluna é equilibrada com eluente A, é colocada asolução de mistura de segmentação filtrada a 0,2 pmea coluna lavada com eluente A.Eluição: 0—45% em cerca de 18 volumes de coluna, lavagem subseqüente com cerca de1,3 volumes de coluna de 100%B. Fracíonamento: são coletadas frações de 50 ml desdeo inicio da eluição. CIP: A coluna é lavada com 2 volumes de coluna de uma solução dehidróxico de sódio 1 N a uma taxa de fluxo reduzida (5 ml/min).Métodos Específicos para analisar aminoácidos e peptídeos

Método 48: As análises de aminoácidos são realizadas usando um analisador deaminoácido LC 3000 da Eppendorf/Biotronik. É utilizado um programa de separaçãopadrão ligeiramente modificado Eppendorf/Biotronik. Os programas de separação e afunção do analisador estão descritos em detalhes no manual do instrumento (Handbuchdes Aminosàurenanalysators LC 3000, Wissenschaftliche Geràte GmbH Biotronik,Maintal, 1996).

Método 49: A eletroforese capilar permite que os peptídeos e as proteínas sejamseparadas com base na sua carga no campo elétrico. A qualidade da separaçãodepende, desse modo, do tampão, do pH, da temperatura e dos aditivos utilizados. Oscapilares empregados são chamados colunas de sílica fundida com um diâmetro internode 50-100 μm. Este método é um critério muito bom para avaliar a pureza de umpeptídeo e para monitorar a formação de produtos de segmentação enzimática. Ospeptídeos de diidroLysobactin e octaidroLysobactin eluem em cerca de 21 min, fragmento4-11 em cerca de 18 min, 1-3 (LLF) em cerca de 24 min, 1-3 (LLA(3-cicloexil)) em cercade 22 min, as formas deamidated como um pico duplo em cerca de 30 min (1-11) e24 min (4-11) a partir da coluna capilar. É visto claramente o grande aumento dosprodutos deamidated depois de 24 h no tampão. Cerca de 4 ng dos produtos desegmentação enzimática ou dos compostos iniciais diidroLysobactin e octaidroLysobactinou da mistura são investigados por eletroforese capilar em uma coluna de vidro(comprimento 72 cm, diâmetro interno 50 μητι). Condições: corrente 90 μΑ, temperaturada coluna 25°C, 100 mM de tampão de fosfato com pH 3,0, detecção de UV 210 nm,carga sob pressão em 3 segundos.

Método 50: 3 nmol de fragmentos dissolvidos em 60% de acetonitrilo/0,1% de TFA sãocarregados em uma lâmina de seqüenciador pré-incubada com Polybren®. As proteínassão sequenciadas usando o ciclo normal do seqüenciador. Os aminoácidos PTH sãoidentificados por meio de HPLC online com a ajuda de um PTH padrão de 40 pmol. Osaminoácidos não proteinogênicos são identificados por sua posição relativa aosaminoácidos padrão. A pureza dos peptídeos é estimada via aminoácido do 1o. ciclo dePTH. Os vários peptídeos são sequenciados em 4 a 12 estágios.Outros Métodos analíticos e preparatórios

Método 51: Instrumento: Micromass Quattro LCZ com HPLC Agilent Série 1100; coluna:Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm χ 3 mm. Eluente A: 1 I de água + 0,5 ml deácido fórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%;gradiente: 0.0 min 90%A 2 min 65%A 4.5 min 5%A 6 min 5%A; taxa de fluxo: 2ml/min; forno: 40°C; detecção de UV: 208-400 nm.

Método 52: Tipo de instrumento MS: Micromass ZQ; tipo de instrumento HPLC: WatersAlliance 2795; coluna: Phenomenex Synergi 2,5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm χ 4mm; eluente A: 1 I de água + 0,5 ml de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 I de acetonitrilo+ 0,5 ml de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 90%A 0,1 min 90%A -» 3,0 min5%A 4,0 min 5%A 4,01 min 90%A; taxa de fluxo: 2 ml/min; forno: 50°C; detecção deUV: 210 nm.

Método 53: Instrumento: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A),autosampler (G1313A), desgaseificador de solvente (G1379A) e termostato de coluna(G1316A); coluna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6 χ 150 χ 5 mm; temperatura dacoluna: 30°C; eluente A: 0,01% TFA em água; eluente B: 0,01% TFA em acetonitrilo; taxade fluxo: 2,00 ml/min; gradiente: O-Imin 10% B, rampa, 10-14 min 90%,recondicionamento.

Método 54: Instrumento: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A),autosampler (G1313A), desgaseificador de solvente (G1379A) e termostato de coluna(G1316A); coluna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6 χ 150 χ 5 mm; temperatura dacoluna: 30°C; eluente A: 0,01% TFA em água; eluente B: 0,01% TFA em acetonitrilo; taxade fluxo: 1.40 ml/min; gradiente: 0 min 10% B, rampa, 2,5-5 min 90%, recondicionamento.

Método 55: Coluna (coluna de aço, dimensões 250 χ 20 mm); fase estacionária (DaicelChiralpak AD-H, 5 pm); eluente: isoexano (90%)/ etanol + 0,2% AcOH + 1% H20 (10%),isocrático; taxa de fluxo: 15 ml/min; temperatura: 30°C; Detecção de UV: 220 nm;amostra: injeção repetitiva de 500 μΙ.

Método 56: Coluna (coluna de aço, dimensões 250 χ 4.6 mm); fase estacionária (DaicelChiralpak AD-H, 5 pm); eluente: isoexano (90%)/ etanol + 0,2% AcOH + 1% H20 (10%),isocrático; taxa de fluxo: 1,0 ml/min; temperatura: 30°C; Detecção de UV: 220 nm;amostra: injeção de 10 μΙ.

Método 57: Coluna: coluna: Kromasil 100 C18, 60 χ 2,1mm 3,5 μιη, forno de coluna 30°C,taxa de fluxo: 0,75 ml/min, detector: 210 nm, tempo de ativação: 15 min; eluente A: águacom 5 ml de HCIO4 / litro de água), eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1 min 2%B,rampa, 9-13 min, 98% B, recondicionamento.

Método 58: (Chiral HPLC preparatório, Chiralpak AD-H 40-60); coluna (coluna de aço,dimensões 250 χ 20 mm); fase estacionária (Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm); eluente:isoexano (40%)/ etanol + 0,2% AcOH + 1% H20 (60%), isocrático; taxa de fluxo: 15ml/min; temperatura: 30°C; Detecção de UV: 220 nm; amostra: injeção repetitiva de 500 μΙ.

Método 59: (Chiral analytical HPLC1 Chiralpak AD-H 40-60); coluna (coluna de aço,dimensões 250 χ 4,6 mm); fase estacionária (Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm); eluente:isoexano (40%)/ etanol + 0,2% AcOH + 1% H20 (60%), isocrático; taxa de fluxo: 1,0ml/min; temperatura: 30°C; Detecção de UV: 220 nm; amostra: injeção de 10 μΙ.

Procedimentos gerais

Procedimento 1 (retirada de grupos de proteção Boc com TFA): O composto protegidopor Boc é colocado em suspensão com diclorometano (1/5-1/10 da solução de reação) esubseqüentemente, é acrescentado sob uma atmosfera de proteção com gás argônio,30% TFA em diclorometano (aprox. 1 ml/10 mg de material de início na escala 100-1 milimolar, aprox. 1 ml/1 mg na escala 100-1 micromolar) e a mistura é agitada a RT atéque o cromatograma HPLC mostre conversão completa (por exemplo, método 1). Osolvente é então destiliado a vácuo, durante o que a temperatura de banho não deveexceder 30°C. O produto bruto é colocado em suspensão com tolueno, concentradonovamente em um evapoador giratório e secado sob alto vácuo. Esse procedimento érepetido várias vezes (duas a cinco vezes). Se a pureza do produto for insuficiente, este épurificado, quando apropriado, por cromatografia, por exemplo, por HPLC preparatório oupor cromatografia de gel.

Procedimento 2 (retirada do grupo de proteção Boc com 30% de TFA em diclorometano):

O material de início é retirado em 30% de TFA (solução em diclorometano) e misturadoem temperatura ambiente durante 30 min. O solvente é então destilado a vácuo, duranteo que a temperatura do banho não deve exceder 30°C. O produto é então secado atéchegar a um peso constante a vácuo de bomba de óleo.

Procedimento 3 (retirada do grupo de proteção Boc com 4 N ácido clorídrico em dioxano):

O composto protegido N-(tert-butoxicarbonila)(1 mmol) é fornecido em dioxano (2-3 ml)sob atmosfera de proteção com gás argônio. Em RT ou durante esfriamento em gelo edurante a mistura vigorosa, 4 N ácido clorídrico em dioxano (30 ml) é acrescentado porgotejamento. A agitação continua até que HPLC analítico (Método 1) indique conversãocompleta (cerca de 30 min até 2 h). A mistura de reação é evaporada a vácuo em RT. Oproduto bruto é retirado em um pouco de diclorometano e novamente liberado dosolvente a vácuo. Esse procedimento é repetido várias vezes com tolueno (duas vezes) ecom diclorometano (duas vezes). Finalmente, o produto bruto é Iiofilizado ouimediatamente reagido ainda depois de secar sob alto vácuo. Se a pureza do produto forinsuficiente, este é purificado, quando apropriado, por cromatografia, por exemplo, porHPLC preparatório ou por cromatografia de gel.

Procedimento 4 (segmentação hidrogenolítica de éster 1): O éster benzílico peptídico édissolvido em metanol ou dioxano (cerca de 3Ί0"4 - 2-10"3 mol/l), subseqüentemente éacrescentado 0,1% de TFA aquoso ou 0,1N de ácido clorídrico (6-10 eq.) e em umaatmosfera com proteção de gás argônio, são acrescentados 10% de paládio-carbono (10mol%). Hidrogenação é realizada em RT sob pressão atmosférica até que o HPLCanalático (por exemplo, método 1) indique conversão completa. A mistura de reação éfiltrada (por exemplo, através de diatomito, Celite®), concentrada a vácuo e secada a altovácuo. Se a pureza do produto for insuficiente, este é purificado, quando apropriado, porcromatografia, por exemplo, por HPLC preparatório ou por cromatografia de gel.Procedimento 5 (segmentação hidrogenolítica de éster 2): O éster benzílico peptídico édissolvido em metanol (cerca de 3· 10"4 - 2-10"3 mol/l) e sob atmosfera de proteção comgás argônio, são acrescentados 10% de paládio-carbono (2-10 mol%). Hidrogenação érealizada em RT sob pressão atmosférica até que o HPLC analítico (por exemplo, método1) indique conversão completa. A mistura de reação é filtrada (por exemplo, através dediatomito, Celite®), concentrada a vácuo e secada a alto vácuo. Se a pureza do produtofor insuficiente, este é purificado, quando apropriado, por cromatografia, por exemplo, porHPLC preparatório ou por cromatografia de gel.Procedimento 6 (segmentação de éster hidrolítico. hidrólise): O éster caboxílico (3 mmol)é fornecido sob uma atmosfera de proteção com gás argônio em THF/água/DMF200/100/2,5 (20 ml). A O0C1 durante o controle rígido da temperatura, hidróxido de lítio empó (3,6 mmol, 1,2 eq.) é acrescentado em partes à solução agitada vigorosamente. Casose observe que a conversão não está completa depois de 2 h por HPLC analítico (método13), é acrescentado hidróxido de lítio sólido novamente (3,3 mmol, 1(1 eq.). Esseprocedimento é repetido até que a conversão esteja completa, depois do que a misturada reação é ajustada para pH 3-4 a 0°C usando 0,1 N de ácido clorídrico aquoso,concentrado a vácuo e subseqüentemente secado por congelamento. O produto brutopode então ser cromatografado com gel (por exemplo, método 45) e/ou purificado demodo fino pelo HPLC preparatório (por exemplo, método 31).

Procedimento 7 (acoplamento de peptídeo em uma resina): O aminoácido protegido porFmoc ligado à resina de clorotritil é misturado com uma solução de 20% de piperidina emDMF e agitado durante 30 min. A solução é então filtrada por sucção através de umaporcelana calcinada, solução de piperidina é acrescentada novamente e a agitaçãocontinua por mais 30 min. A solução é filtrada por sucção e a resina lavada com DMF,metanol, THF e diclorometano.

O polímero desprotegido é colocado em suspensão em DMF(1 ml de solvente por 100 mg de resina) e o aminoácido protegido por Fmoc (1,3-2,0 eq.),DIEA (2,0-3,0 eq.) e TBTU (1,5-2,0 eq.) dissolvido em DMF são acrescentados. A resinaé agitada a RT durante a noite. Para o desenvolvimento, o polímero é recolhido porfiltragem com sucção em uma porcelana calcinada e subseqüentemente lavado comDMF, THF e diclorometano.

Depois, a retirada de uma amostra em ácidoacético/trifluoroetanol/diclorometano 1:1:3, o peptídeo obtido pode ser confirmado poranálise.

Procedimento 8 (síntese automatizada de fase sólida em um robô Chemspeed):Instrumento:

Chemspeed ASW 2000, equipado com reatores de 75 ml e filtragem direta com sucção

no resíduo do solvente. Mistura por vórtice.

Reagentes:

São empregados aminoácidos com um grupo de proteçãoN-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila] (grupo Fmoc) na posição N2.

Além disso, o grupo de proteção Fmoc na posição N2 éusado um outro grupo de proteção na cadeia lateral dos seguintes aminoácidos: argininae D-arginina carregam cada qual um grupo sulfonil [(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il) (grupo PMC) na função da guanidina; serina e treonina são protegidas pelacadeia lateral como 03-terí-butilserina e -treonina, respectivamente. Os grupos de aminonas cadeias laterais da lisina, ornitina, 2,4-ácido diaminobutírico e 2,3-ácidodiaminobutírico são protegidos com grupos de benziloxicarbonila (grupos Cbz).

Procedimento:

1,7 g de 2-clorotritil cloreto-resina (lris Biotech, CAS No.42074-68-0) (pré-carregado com um α-aminoácido protegido por Fmoc, 0,85 mmol/g)foram fornecidos secos em cada reator, 17 ml de DMF são acrescentados e a misturaagitada durante 30 min. O DMF é retirado por filtragem com sucção.

A fim de sintetizar os octapeptídeos descritos, sãorealizados 7 ciclos de desproteção-acoplamento, cada qual consistindo das seguintesetapas:

1.) Eliminação de Fmoc

12,75 ml de DMF e 4,25 ml de piperidina são acrescentados.

A mistura é agitada durante 30 min.

A mistura de DMF/piperidina é removida por filtragem com sucção.12,75 ml de DMF e 4,25 ml de piperidina são acrescentados.

A mistura é agitada durante 10 min.

A mistura de DMF/piperidina é removida por filtragem com sucção.

2.) Etapa de lavagem (repetida 5 vezes)

São acrescentados 17 ml de DMF.

A mistura é agitada durante 30 min.

O DMF é removido por filtragem com sucção.

3.) Acoplamento de aminoácido

São acrescentados 10,2 ml do aminoácido Fmoc correspondente (1,5equivalentes) dissolvidos em DMF.

São acrescentados 6,8 ml de TBTU (2 equivalentes) dissolvidos em DMF.

É acrescentada diisopropiletilamina (3 equivalentes).

A mistura de reação é agitada durante 2 h e então removida por filtragem comsucção.

4.) Etapa de lavagem (repetida 3 vezes)

São acrescentados 17 ml de DMF.

A mistura é agitada durante 30 min.

O DMF é removido por filtragem com sucção.

Após a última etapa de reação, as resinas do produto queforam coletadas por filtragem com sucção, são transferidas para um filtro com 10 ml dediclorometano, coletadas por filtragem e lavadas duas vezes com 5 ml de diclorometanoa cada vez.

Procedimento 9 (remoção com desproteção completa): A resina com o peptídeo émisturada em um recipiente de reação com uma base de porcelana calcinada com 50%de TFA em DCM (20 ml da solução para mistura do tamanho descrito noprocedimento 8), triisopropilsilano (100 μΙ) e água (100 μl) são acrescentados e a misturaagitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução escura é então removida porfiltragem com sucção, a resina é lavada com 4 partes de DCM1 agitada durante 2 min acada vez e novamente coletada por filtragem com sucção. Os filtrados são misturados e osolvente destilado. O resíduo é agitado com MTBE1 recolhido por filtragem com sucção eretirado em metanol. Finalmente, o metanol é destilado a vácuo.

Procedimento 10 (acoplamento com éster ativo cabeça de ponte): O octapeptídeo e oéster ativo (composto 17A ou composto 277A (1,1 equivalentes) são dissolvidos em DMF(20-40 μl/μmol de octapeptídeo) a 0°C e DIEA (4-5 eq.) é acrescentado. A mistura dereação é agitada ainda em temperatura ambiente entre 90 minutos e 2 horas. A mistura éretirada em acetonitrilo e purificada por cromatografia. As frações contendo o produto sãomisturadas e liofilizadas.

Procedimento 11 (ciclização): O composto inicial é dissolvido em DMF (cerca de50 20-40 μl/μmol ) e a solução é resfriada até 0°C. São adicionados 4-Metilmorfolina (6equivalentes) e HATU (3 equivalentes) e a mistura é agitada a 0°C durante 2 h. Odesenvolvimento ocorre diretamente por carregamento da mistura de reação completa eseparação de acordo com o método 45 ou um dos métodos HPLC mencionados. Asfrações contendo o produto são misturadas e liofilizadas ou concentradas em umevaporador giratório.

Procedimento 12 (retirada do grupo Fmoc usando piperidina): O peptídeo é misturado a0°C com uma mistura de THF e piperidina (4+1, aprox. 20 μl/μmol ). A mistura é agitadasubseqüentemente nesta temperatura durante 1 h. A mistura de reação é purificadadiretamente, de acordo com o método 45 e as frações contendo o produto sãocombinadas e concentradas.

Procedimento 13 (acoplamento de peptídeo usando HATU na fase líquida): Um peptídeocíclico com uma extremidade N desprotegida (por exemplo, composto exemplar 407, 408,409, etc.) e um dipeptídeo (por exemplo, composto 8A, 10A, etc.) (1,5 equivalentes) sãodissolvidos em DMF (cerca de 30-80 μl/μmol de ciclopeptídeo) e a solução é resfriada até0°C. 4-Metilmorfolina (4 equivalentes) e HATU (1,6 equivalentes) são adicionados e amistura agitada em temperatura ambiente durante 2 h. A reação é então paralisada com3 ml de metanol e purificada por cromatografia de acordo com o método 45. As fraçõescontendo o produto são combinadas e concentradas.

Compostos de início

Exemplo 1A

D-Leucil-L-leucil-L-fenilatanil-[(3R)-leucil]-L-leucil-D-arginil—L-isoleucil-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-asparaginil]-serina trifluoroacetato (diidroLysobactirí)e

Exemplo 2A

D-Leucil-L-leucil-[3-cicloexil-L-alanil]-[(3R)-leucil]-L-leucil-D-arginil—L-iso-leucil-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-asparaginil]-serina trifluoroacetato (octa-idroLysobactirí)

<formula>formula see original document page 45</formula>

A preparação do bistrifluoracetato de Lysobactirí porfermentação e seu isolamento é descrita em WO 2004/099239. O bistrifluoroacetato deLysobactirí (20 g, 13,29 mmol) é dissolvido em duas partes de isopropanol/água 9:2(110 ml cada). Em atmosfera de proteção com gás argônio, é adicionado o paládio emcarbono (10%; 5 g em cada caso). A mistura de reação é (depois da desgaseificação)agitada sob pressão de hidrogênio de 80-70 bar e a 40°C em uma autoclave pressurizadadurante 12 h. É adicionado novamente paládio em carbono (10%; 5 g) à reação. Amistura de reação é (depois da desgaseificação) agitada novamente sob pressão dehidrogênio de 80-70 bar e a 40°C em uma autoclave pressurizada durante 12 h. Amistura de reação é (depois da desgaseificação) agitada uma vez mais sob pressão dehidrogênio de 80-70 bar e a 40°C em uma autoclave pressurizada durante 12 h. Agora, oLysobactirí não é mais detectável por HPLC analítico (método 10). A mistura de reação éfiltrada através de diatomito, concentrada a vácuo e secada a alto vácuo. 20,10 g (99%de teoria) de produto (60% de diidroLysobactin, 40% de octaidroLysobactin) são obtidos.

Exemplo 3A

[(3R)-Leucil]-L-leucil-D-arginil—L-isoleucil-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-asparaginil]-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 46</formula>

Segmentação da quimiotripsina preparatória da concentração do substrato damistura diidrolociaidroLysobactin S mg/ml

São adicionados 20 g de diidro- (cerca de 40%) eoctaidroLysobactin (cerca de 60%) são dissolvidos em 400 ml de metanol e então3400 ml de tampão de segmentação (0,1 M de bicarbonato de amônio/0,5 M uréia compH 8). Antes de adicionar a enzima, a solução é aquecida até 37°C em um forno desecagem. 800 mg de quimiotripsina (100 ml de solução de quimiotripsina/água/glicoletileno 1:1, 4 mg/ml; 1:25; previamente aquecidos até 37°C) são adicionados e a reaçãoé realizada a 37°C. 200 μΙ alíquotas são retiradas após 0,5, 1 h, e a segmentaçãoenzimática é paralisada com 200 μΙ dé acetonitrilo a 30% /0,1% de TFA. As amostras sãoanalisadas por HPLC, em paralelo à segmentação enzimática, dentro de 15 min (tempode retenção de fragmento 4-11 cerca de 3,6 min, fragmento 1-3 (LLF) cerca de 9,6 min,fragmento 1-3 (LLA(3-cicloexil)) cerca de 11,3 min) (solvente A 0,1% TFA, solvente B20 60% acetonitrilo/0,1% TFA, gradiente Omin 30% B1 10min 80% B, 11 min 100% B1min 30% B1 15 min 30% B; taxa de fluxo: 0,7 ml/min, temperatura: 40°C, Detecção deUV 210 nm). A reação enzimática é paralisada após 60 min com 150 ml de acetonitrilo ecerca de 30 ml de TFA. O pH da solução deve estar entre 1 e 2. A solução pode serarmazenada a -20°C até a separação preparatória.

A atividade do lote de quimiotripsina usado (70U/mg) étestada por uma segmentação de controle com a proteína interleucina-4 muteína duplaArg(121) Asp(121) / Tyr(124) Asp(124) (Bayer Healthcare AG, D-Wuppertal).

Purificação preparatória: Partes de 500 ml de uma solução da mistura de segmentaçãodescrita acima são primeiramente filtradas através de uma camada de Celite a vácuo eentão por um funil de filtro de pressão (450 μιη com pré-filtro). O filtrado é carregado emum cartucho Varian Metaflash C-18 40M. A eluição é então realizada com o seguinteprograma: solvente A: 0,05% de TFA em água, solvente B: 0,05% de TFA em acetonitrilo.Taxa de fluxo: 50 ml/min; 0-3 min 5% B; rampa; 30 min 90% B, 33 min. 90% B. Asfrações contendo o produto são misturadas e liofilizadas. 11,8 g (87% de teoria) docomposto do título são obtidos a partir das frações contendo o produto.

Exemplo 4A

Metil (Z)-2-[(tert-butoxicarbonil)amino]-4,4-dimetilpent-2-enoato

<formula>formula see original document page 47</formula>

Pivalaldeído (303,2 g, 3,41 mol, 10 eq.) e metil {[(tert-butoxi)carbonila]amino}-(dimetoxifosforila)acetato (101,5 g, 0,341 mol, 1,0 eq.) sãodissolvidos em THF (800 ml) e resfriado até -70°C. A -70°C, TMG (78,7 g, 0,683 mmol,6,95 ml, 2,0 eq.) é adicionado lentamente por gotejamento e a mistura é então agitada a-70°C durante 4 h e subseqüentemente em RT durante 4 dias. A mistura de reação éconcentrada e então extraída por agitação com acetato etílico (duas vezes 500 ml) eágua e as fases orgânicas combinadas são lavadas com solução de cloreto de sódio sat.(100ml) e secadas em sulfato de sódio. Após a concentração, o produto bruto écromatografado (1,5 kg de gel de sílica, eluente: cicloexano/acetato etílico 5:1). 67 g(76% de teoria) do composto do título são obtidos.

Alternativamente, o produto bruto depois dodesenvolvimento aquoso pode ser purificado por cristalização a partir decicloexano/acetato etílico.

Rf (gel de sílica, cicloexano/acetato etílico 4:1) = 0,5

LC-MS (Método 18): Rt= 2.5 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 158 (100) [M - C4H8 - CO2+ H]+, 280 (5) [M + Na]+.

1H NMR (400 MHz1 Cf6-DMSO): δ 1,08 (s, 9H, C(CH3)3), 1,38 (s, 9H, OC(CH3)3), 3,61 (s,3H, CO2CH3), 6,40 (s, 1H, H), 8,14 (s, 1H, NH).

13C NMR (126 MHz, de-DMSO): δ 28.46 (3C), 29.53 (3C), 33.28, 52.22, 78.89, 125.62,147.05, 154.67, 166.25.HR-TOF-MS (Método 24): C13H23NO4 [M+H]+ encontrou 258,1696, calc. 258.1700.

Exemplo 5A

N2-(terf-Butoxicarbonila)-3-te/í-butil-D-alanina éster metílico

Metil (2Z)-2-[(íeAí-butoxiycarbonil)amino]-4,4-dimetilpent-2-enoato (exemplo 4A, 60 g,233,2 mmol) é dissolvido em etanol p.a./dioxano 3:1 (1000 ml). É atravessada umaatmosfera de proteção com gás argônio com uma agulha (~10 min). A solução é colocadaem um banho ultrassônico (cerca de 5 min) e (+)—1,2-bis[(2R,5R)-dietilfosfolano]benzeno(ciclooctadieno)ródio(i) triflato (600 mg, 1% por peso) éadicionado. A mistura é hidrogenada sob pressão de 3,5 bar de hidrogênio e em RTdurante 3 dias. A mistura de reação é filtrada através de diatomito e o eluato éconcentrado. O produto bruto é cromatografado (gel de sílica, eluente: cicloexano/acetatoetilico 4:1). 60 g (99% de teoria) do composto do título são obtidos.N20Na = +5° (c = 0.33 in CHCI3).

DCI-MS (NH3): m/z (%) = 221 (100), 260 (40) [M+H]+, 277 (100) [M + NH4J+.1H NMR (400 MHz1 CDCI3): δ 0.93 (s, 9H, C(CH3)3), 1.40 (m, 10H, OC(CH3)3), 1.68 ("d",J = 14.5 Hz, 2H, H^), 3.68 (s, 3H, OCH3), 4.30 (t, J =7.9 Hz, 1H, H0), 4.81 (d, br, J =7.7 Hz, 1H, NH).

13C NMR (126 MHz, CDCI3): δ 28.30 (3C, CH2C(CH3)3), 29.52 (3C, OC(CH3)3), 30.61(CH2C(CH3)3), 46.27 (C^H2), 51.19 (Ha)1 52.17 (OCH3), 79.79 (OC(CH3)3), 155.11(NHCO2), 174.39 (CO2CH3).

HR-TOF-MS (Método 24): C26HsiN2O8 calc. 519,3640, encontrados 519,3634 [M+Hf.

Exemplo 6A

N2-(ferí-Butoxicarbonila)-3-ferf-butil-D-alanina<formula>formula see original document page 49</formula>

N-terf-Butoxicarbonila-3-terf-butil-D-alanina éster metílico

(exemplo 5A, 60 g, 231 mmol) é dissolvido em THF p.a. (463 ml). Em RT1 uma soluçãode monoidrato de hidróxido de lítio (19,4 g, 462,7 mmol) em água (463 ml) é adicionadalentamente por gotejamento. Quando o cromatograma de HPLC (método 1) mostraconversão completa (cerca de 20 h), a mistura de reação é cuidadosamente ajustadapara pH 3—4 usando 1 N de ácido clorídrico aq. durante o resfriamento em gelo. Éadicionado cloreto de sódio sólido (150 g) à mistura de reação, a qual é então extraídaduas vezes com acetato etílico (500 ml). As fases orgânicas combinadas são lavadascom uma solução de cloreto de sódio sat. e então secadas com sulfato de sódio efiltradas. O filtrado é concentrado em um evaporador giratório e secado a alto vácuo. 55,4g (98% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC/UV-Vis (Método 3): Rt = 4,2 min.

DCI-MS (NH3): m/z (%) = 263 (100) [M + NH4]+, 280 (5) [M + N2H7J+.1H NMR (400 MHz1 CDCI3): δ = 0,96 (s, 9H, C(CH3)3), 1,42 (m, 10H, OC(CH3)3, H^, 1,79(„d", J = 14.4 Hz, 2H, H^), 4.31 (t, J = 8.0 Hz1 1 Η, H"), 4.82 (d, J = 8.4 Hz1 1 Η, NH).13C NMR (126 MHz, CDCI3): δ = 28.32 (3C), 29.54 (3C), 30.74, 45.92, 51.24, 80.19,155.41, 178.93.

HR-TOF-MS (Method 24): C24H47N2O8 cale. 491.3327, found 491.3328 [2M+H]+.Exemplo 7 A

[N2-(tert-Butoxicarbonila)-(3-tert-butil-D-alanil)]-(3-terf-butil-L-alanina) éster metílico

<formula>formula see original document page 49</formula>

HOBt (3 eq., 39,4 g, 292 mmol), NMM (3 eq„ 32.1 ml,291,8 mmol), N-ferf-butoxi-carbonila-3-terf-butil-D-alanina (exemplo 6A, 1,0 eq.,97,3 mmol), EDC (2eq., 37,3 g, 194,6 mmol) e novamente NMM (2 eq., 21,4 ml,194,5 mmol) são sucessivamaente adicionados a uma solução de 3-tert-butil-L-alaninaéster metílico hidrocloreto (1,1 eq., 21 g, 107 mmol) em diclorometano p.a. (1.4 1) a -20°C. A mistura de reação aquece lentamente até RT (cerca de 12 h) pelo que éobservada conversão completa do componente amina por HPLC. A mistura de reação éentão lavada com uma solução de bicarbonato de sódio sat. aq. (300 ml), 5% de ácidocítrico aq. (500 ml), uma solução de bicarbonato de sódio sat. aq. (500 ml) e uma soluçãode cloreto de sódio sat. A mistura de reação é secada em sulfato de sódio e filtrada. Amistura de reação é evaporada para secagem a vácuo e então secada a alto vácuo. 36 g(96% de teoria) do composto do título são obtidos, o qual reage sem maior purificação.W20Na = +24° (c = 0.10 in CH2CI2).

DCI-MS (NH3): m/z (%) = 387 (40) [M+H]+, 404 (100) [M + NH4]+.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,6 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 287 (100) [M - C5O2H8 + H]+,387 (60) [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO): δ 0,95 (s, br, 18H, tBu), 1,35 (dd, 1H), 1,45 (s, 9H, OtBu),1,50 (dd, 1H), 1,65 (dd, 1H), 1,95 (dd, br, 1H), 3,70 (s, 3H, OCH3), 4,15 („t", br, 1H), 4,55(„t", br, 1H), 4,80 (d, 1H), 6,65 (d, br, 1H).

13C NMR (126 MHz, Cf6-DMSO): δ 28,39 (3C, C(CH3)3), 29,49 (3C, C(CH3)3), 29,67 (3C,C(CH3)3), 30,40 (C(CH3)3), 30,44 (C(CH3)3), 44,25, 45,12, 49,56, 52,06, 52,21, 78,17,154,93, 173,00, 173,35.

HR-TOF-MS (Method 24): C20H39N2O5 [M+H]+ found 387.2860, calc. 387.2859.

Exemplo 8A

[N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-3-teAt-butil-L-alanina

<formula>formula see original document page 50</formula>

O composto do exemplo 7A (36 g, 93,1 mmol) é dissolvidoem THF p.a. (279 ml). Por volta de 10°C, uma solução de monoidrato de hidróxido de lítio(7,82 g, 186,3 mmol, 2 eq.) em água (187 ml) é lentamente adicionada por gotejamento.

Quando o cromatograma de HPLC (método 1) mostra conversão completa (cerca de20 h), a mistura de reação é liberada de THF sob 200 mbar e então extraída com MTBE(200 ml). A fase org. é diluída com acetato etílico (500 ml), então misturada com água esubseqüentemente ajustada cuidadosamente para um pH 3-4 usando 1 N ácido clorídricoaq. As fases org. combinadas são lavadas com salmoura sat., secadas em sulfato desódio, filtradas, evaporadas a vácuo e secadas a alto vácuo. 97,4 g (97% de teoria) docomposto do título são obtidos.

LC-MS (Método 18): R, = 2,26 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 373 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO): δ 0,83 (s, br, 18H, tBu), 1,31 (s, 9H, OtBu), 1,40 (m, 2H,CH2), 1,48 (dd,J = 14,1, 9,4 Hz, 1H, R-CH), 1,59 (dd, J= 14,1, 2,7 Hz1 1H, y3-CH'), 3,98(m, 1H, a-CH), 4.12 (m, 1H, a-CH), 6.73 (d, J= 9,1 Hz, 1H, NH), 7,72 (d, J= 7,9 Hz1 1H,NH), 12.42 (s, br, 1H, CO2H).

13C NMR (126 MHz, Ci6-DMSO): δ 28,49 (3C), 29,66 (3C), 29,78 (3C), 30,52, 30,58, 44,63Gtf-CH2), 45,24 OS-CH2), 49,67 (a-CH), 52,40 (a-CH), 78,29, 155,05, 172,97, 174,61.HR-TOF-MS (Método 24): C19H37N2O5 calc. 373.2702, encontrados 373.2717 [M+H]+.

Exemplo 9A

(3-tert-Butil-D-alanil)-3-tert-butil-L-hidrocloreto de alanina

<formula>formula see original document page 51</formula>

O composto do exemplo 8A (4,5 g, 12,1 mmol) é pré-dissolvido em dioxano (3 ml). Em RT1 é adicionada uma solução 4 N de ácido clorídricoem dioxano (30,2 mmol, 120mmol, 10 eq.) por gotejamento. A mistura de reação éagitada durante 30 min, evaporada a vácuo e secada a alto vácuo. O composto do título éobtido como um sólido incolor (3,5 g, 99% de teoria).

LC-MS (Método 18): R, = 1,52 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 273.6 (100) [M+H]+; ESlneg:m/z = 271,5 (100) [M-H]".

1H NMR (500 MHz, Cf6-DMSO): δ 0,85 (s, 9H, tBu), 0,86 (s, 9H, tBu), 1,49 (dd, J= 14,3,1,6 Hz, 1H, R-CH), 1,50 (d, J= 13,8 Hz, 1H, β-CH), 1.64 (dd, J= 14,3, 4,0 Hz, 1H, β-CH),1.71 (dd, J= 14,3, 6,9 Hz1 1H, β-CH), 3.77 („t", J= 6,5 Hz, 1H, a-CH), 4,14 (m, 1H, a-CH),8,27 (s, br, 3H), 8,94 (d, J = 8.2 Hz, 1H, NH), 12,58 (s, br, 1H, CO2H).13C NMR (126 MHz, Cf6-DMSO): δ 28,41 (3C), 29,50 (3C), 30,08, 30,38, 44,46, 44,80,50,03, 50,30, 169,10, 173,98.

HR-TOF-MS (Método 24): C14H29N2O3 calc. 273,2173, encontrados 273,2167 [M+H]+.Exemplo 10A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-3-tert-butil-L-alanina

<formula>formula see original document page 52</formula>

O dipeptídeo (exemplo 9A, 3,73 g, 12,1 mmol) é dissolvidoem THF (170 ml) em atmosfera de proteção com gás argônio. A adição de água (170 ml),benziloxicarboniloxisuccinimida éster (4,52 g, 18,1 mmol, 1,5 eq.) e NMM (4,28 g,4,23 mmol, 3,5 eq.) a 0°C é seguida de agitação vigorosa em RT até que todo o materialde início tenha reagido (várias horas, monitoramento por HPLC, método 1). A mistura ésubmetida á têmpera com ácido acético glacial. O THF é removido a vácuo. A fase aq.restante é coberta com uma camada de acetato etílico, acidificada até pH < 3 usando 4 Nácido clorídrico e então extraída várias vezes com acetato etílico. As fases org. sãolavadas com uma solução de cloreto de sódio sat., secadas em sulfato de sódio, filtradase concentradas. A espuma resultante é agitada com acetonitrilo, pelo que se forma umsólido incolor o qual é coletado por filtragem e então lavado com um pouco deacetonitrilo. Esse processo pode ser repetido novamente várias vezes com o filtradodepois de ter sido concentado. Os sólidos combinados são secados a alto vácuo, peloque é obtido o composto do título como um sólido. O mother liquor restante éconcentrado e purificado pelo HPLC preparatório (método 26). O composto do título(sólidos combinados e produto de purificação da separação em HPLC) é obtido como umsólido incolor (3,49 g, 71% de teoria).

HPLC/UV-Vis (Método 1): Rt = 2,6 min.

LC-MS (Método 21): R, = 2,46 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 363 (60), 407 (100) [M+H]+.ESIneg: m/z = 297 (100), 405,5 (40) [M - H]"

1H NMR (500 MHz, Cf6-DMSO): δ 0,81 (s, 9H, tBu), 0.83 (s, 9H, tBu), 1,40-1,44 (m, 2H,/J-CH2), 1,49 (dd, J = 14,3, 9,7 Hz, 1H, β-CH), 1,58 (dd, J = 13,5, 1,4 Hz, 1H, /?-CH), 4,07(m, 1H, a-CH), 4,13 (m, 1H, a-CH), 4,94 (d, J= 12,3 Hz, 1H, CHHPh), 4,99 (d, J =12.5 Hz, 1H, CHHPh), 7,25-7,32 (m, 5H, ArH), 7,92 (d, J = 8,5 Hz, 1H, NH).13C NMR (126 MHz, Cl6-DMSO): δ 29,49 (3C), 29,75 (3C), 30,41, 30,46, 44,52, 45,11,49,55, 52,73, 65,49, 127,70 (2C), 127,91, 128,48 (2C), 137,31, 155,59, 172,52, 174,50.HR-TOF-MS (Método 24): C22H34N2O5 calc. 407,2541, encontrados 407,2531 [M+H]+.

Exemplo 11A

Metil-(2R*,3R*-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(tert-but-oxicarbonil)amino]fenilalaninato

<formula>formula see original document page 53</formula>

uma solução 1 N de hexametilo de lítiodisilazida (157,5 mmol, 157,5 ml, 2,2 eq.) em THFno solvente de reação THF (300 ml). A -78°C, é adicionada lentamente uma solução demetila (rac)-3-[(te/í-butoxicarbonil)amino]-3-fenilpropanoato (Α. V. Rao Rama, A. K. Singh,Ch. V. N. S. Varaprasad, Tetrahedron Lett., 1991, 32, 4393-4396) (20 g, 71,2 mmol) porgotejamento. A mistura é agitada a -25°C durante 10 min e então resfriada novamenteaté -78°C. Azadicarboxilato dibenzílico (34,2 g, 114,6 mmol, 1,6 eq.) é adicionado emuma porção da mistura de reação. A mistura é agitada a -60 até -45°C durante 3 h. A fimde parar a reação, a mistura é novamente resfriada até -78°C e é adicionado ácidoacético (20,5 ml, 358 mmol, 5 eq.) e a mistura é então aquecida até 0°C e finalmente atéRT. A mistura de reação é evaporada a vácuo e retirada em acetato etílico (1000 ml). Asuspensão é lavada duas vezes com solução de bicarbonato de sódio sat. aq., uma vezcom água, duas vezes com 5% de ácido cítrico aq. e uma vez com uma solução decloreto de sódio sat. aq. Todas as fases aq. são reextraídas separadamente com acetatoetílico. Todas as fases org. são evaporadas a vácuo e novamente retiradas emdiclorometano (2000 ml), filtradas, secadas em sulfato de sódio, filtradas novamente,evaporadas a vácuo e secadas a alto vácuo. 7,2 g (18% de teoria) do composto do títulosão obtidos como sólido. O filtrado da fase de diclorometano (vide supra) é concentrado eentão novamente recristalizado a partir do metanol, pelo que são obtidos 13,2 g (26% deteoria) do composto do título.LC-MS (Método 23): Rt = 6,8 min;

MS (ESlpos.): m/z (%) = 578 (40) [M+H]+, 1156 (100) [2M+H]+.MS (ESlneg.): m/z (%) = 576 (100) [M - H]".

Exemplo 12A

Metil (2S*,3R*)-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]fenilalaninato

<formula>formula see original document page 54</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, TMG(50 ml, 399 mmol) é adicionado a uma solução de metil-(2R*,3R*)-N2-[(benzilaoxi)carbonila]-N2-[(benzilaoxi)carbonilaamino]-3-[(terí-butoxiicarbonila)amino]fenilalaninato (exemplo 11 A, 20,5 g, 35,5 mmol) em DMFseco p.a. (750 ml) a 0°C. A mistura de reação é deixada descongelar e então a mistura éagitada até que o cromatograma por HPLC (método 1) indique conversão completa(cerca de 60% do produto)(cerca de 12 h), a fim de então paralisar a reação adicionandoácido acético (pH 4-6). A mistura de reação é evaporada a vácuo em RT e recolhida emacetato etílico. A fase org. é lavada duas vezes com água, duas vezes com 5% de ácidocítrico, uma vez com água, duas vezes com uma solução de bicarbonato de sódio sat.aq., uma vez com uma solução de cloreto de sódio sat. aq., secada em sulfato de sódio,filtrada, evaporada a vácuo e secada a alto vácuo. O produto bruto é purificado por HPLCpreparatório (método 30) ou cromotografia de média pressão (gel de sílica,cicloexano/acetato etílico 3:1). 7,7 g (37% de teoria) do composto do título e 5 g docomposto de início (25% de teoria) são obtidos.

HPLC/UV-Vis (Método 1): Rt = 3,0 min.

LC-MS (Método 10): R, = 3,0 min;

MS (ESlpos.): m/z (%) = 478 (100) [M -Boc + H]+, 578 (30) [M+H]+.

LC-MS (Método 23): R, = 7,0 min;MS (ESlpos.): m/z (%) = 578 (40) [M+H]+, 1156 (100) [2M+H]+.MS (ESlneg.): m/z (%) = 576 (100) [M - H]".Exemplo 13A

Metil-(2S*,3R*)-3-[(te/t-butoxicarbonil)amino]fenilalaninato

<formula>formula see original document page 55</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, níquel de Raney(61 mg, cerca de 10mol%) é adicionado a uma solução de metila (2S*,3R*)-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(íerf-butoxicarbonila)-amino]fenilalaninato (exemplo 12A, 705 mg, 1,22 mmol) em metanol/diclorometano 1:1(42 ml). A mistura de reação é hidrogenada em uma autoclave pressurizada sob pressãode hidrogênio de 80 bar e em RT (40 h). O cromatograma por HPLC mostra conversãocompleta. A mistura de reação é filtrada sob uma atmosfera de proteção com gás argônioatravés de uma porcelana de vidro calcinado e a porcelana é lavada várias vezes commetanol/água/0,2% de ácido acético. O filtrado é evaporado a vácuo e secado a altovácuo. É obtido um sólido (cerca de 3 g) que é então suspenso em acetato etílico em umbanho ultrassônico. A suspensão é misturada com uma solução de EDTA (400 mg) emuma solução de 7% de bicarbonato de sódio aq. (400 ml). A fase aq. é extraída comacetato etílico (100 ml, três vezes). As fases org. combinadas são então lavadas uma vezcom uma solução de bicarbonato de sódio sat. aq. e duas vezes com uma solução decloreto de sódio sat. aq. Todas as fases aq. são reextraídas separadamente com acetatoetílico. As fases org. combinadas são então secadas em sulfato de sódio, filtradas esecadas a alto vácuo. O produto obtido é um sólido (1,26 g, quantitativo) que é reagidoainda sem purificação fina.HPLC/UV-Vis (Método 2): Rt = 1,7 min.LC-MS (Método 23): R, = 4,1 min;MS (ESlpos.): m/z (%) = 239 (100), 295 (80) [M+H]+.Exemplo 14A

Metila (2S*,3R*)-W2-[(benziloxi)carbonila]-3-[(terf-butoxicarbonil) amino]fenilalaninato<formula>formula see original document page 56</formula>

Em uma atmosfera protegida com gás argônio, é adicionadoNMM (260 mg, 2,6 mmol, 2,1 eq.) a uma solução de metila (2S*,3R*)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]fenilalaninato (exemplo 13A, 360 mg, 1,2 mmol) eN-benziloxicarbonilaoxisuccinimida éster (610 mg, 2,44 mmol, 2 eq.) em THF (25 ml) a0°C. A mistura de reação aquece lentamente até (12 h), com o que é observadaconversão completa por HPLC (método 2). É adicionado ácido acético (0,7 ml) e amistura é concentrada subseqüentemente a vácuo e purificada por HPLC preparatório(método 31). 396 mg (76% de teoria) do composto do título são obtidos.

HPLC/UV-Vis (Método 2): Rt = 2,7 min.

LC-MS (Método 23): R, = 6,4 min;

MS (ESlpos.): m/z (%) = 329 (100) [M - C4H8 - CO2 + H]+, 429 (80) [M+H]\ 858 (60)[2M+H]+.

Exemplo 15A

(2S*,3R*)-/V2-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(ferí-butoxicarbonil)amino]fenilalanina

<formula>formula see original document page 56</formula>Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éfornecida uma solução de metila (2S*,3R*)-N-[(benziloxi)-carbonila]-3-[(tert-butoxicarbonil)amino] fenilalaninato (exemplo 15A, 755 mg, 1,76 mmol) em THF/água 2:1(30 ml). A 0°C, durante a agitação vigorosa, é adicionada lentamente por gotejamento, uma solução aq. desgaseificada de 1% de monoidrato de hidróxido de lítio (86,5 mg,3,6 mmol, 2 eq.). A mistura é agitada em RT até que o cromatograma por HPLC(método 1) indique conversão completa (cerca de 1 h). Ácido acético (0,5 ml) éadicionado subseqüentemente e a mistura de reação é concentrada a vácuo e cobertacom uma camada de acetato etílico (100 ml). A fase aq. é então acidificada usando 5% de ácido cítrico (pH 2-3) e então extraída três vezes com ácido etílico (50 ml). As fasesorg. combinadas são lavadas duas vezes com uma solução sat. aq. de cloreto de sódio(20 ml), secadas em sulfato de sódio, filtradas, concentradas a vácuo e secadas a altovácuo. São obtidos 750 mg (quantitativo) de produto bruto do composto do título, sendopurificados de modo fino pelo HPLC preparatório (método 31).

HPLC/UV-Vis (Método 1): R, = 2,4 min.

LC-MS (Método 23): R, = 6,1 min;

MS (ESlpos.): m/z (%) = 359 (100), 415 (60) [M+H]+, 829 (60) [2M+H]+.

MS (ESlneg.): m/z (%) = 413 (100) [M - H]".

Exemplo 16A

<formula>formula see original document page 57</formula>

A mistura de enantiômeros de (2S*,3R*)-N- (3R)-N2-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(terf-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalanina[(benziloxi)carbonila]-3-[(tert-butoxi-carbonil)amino]fenilalanina (exemplo 15A, 750 mg,1,8 mmol) é separada por HPLC preparatório (método 38). 334 mg (98% ee, 45% deteoria) de (2S,3R)-N-[(benziloxi)carbonila]-3-[(íerí-butoxicarbonil)amino]fenilalanina(composto de título) e 275 mg (98% ee, 37% de teoria) (2R,3S)-N-[(benziloxi)-carbonila]-3-[(teAf-butoxicarbonila)amino]fenilalanina (além deenantiômero) são obtidos.Determinação de enantiômero pelo método 14.N20Na = +22° (c = 0,50 em clorofórmio) (composto do título).[cx]20Na = -20° (c = 0,49 em clorofórmio) (além de enantiômero).Exemplo 17A

Pentafluorofenil (3f?)-/V2-[(benziloxi)carbonila]-3-[(íert-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalaninato

<formula>formula see original document page 58</formula>

O composto de exemplo 16A (2,0 g, 4,83 mmol) é fornecidoem diclorometano (30 ml) e pentafluorofenol (4,4 g, 24,13 mmol, 5 eq.) e EDC (1,4 g,7,24 mmol, 1,5 eq.) são adicionados a 0°C. A reação é lentamente levada até RT eagitada nessa temperatura durante a noite. Para o desenvolvimento, o solvente écompletamente removido em um evaporador giratório a uma temperatura máxima debanho de 30°C e depois de purificação fina do resíduo por HPLC preparatório(método 28), são isolados 2,3 g (83,3% de teoria) de produto.HPLC (Método 1) Rt = 3,44 min.

LC-MS (Método 18): R,= 3,23 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 581 (13) [M+H]+, 525 (100)[M - C4H8 + H]+.

1H NMR (500 MHz, Ci6-DMSO): δ = 1,36 (s, 9H, 3 CH3), 4,97 (d, J = 7,1 Hz, 2H, PhCH2O),5,15 (dd, J = 9,7, 4,8 Hz1 1H), 5.49 (dd, J = 10,2, 4,6 Hz1 1H), 7,18 (d, J= 10,4 Hz, 1H,ArH), 7,25-7,42 (m, 8H, ArH), 7,68 (d, J= 10,4 Hz, 1H, NH), 7,90 (d, J= 9,8 Hz1 1H, NH).13C NMR (126 MHz, Cl6-DMSO): δ =27,97, 54,33, 58,72, 65,75, 78,65, 124,10, 126,48,127,37 127,46, 127,82, 128,23 (2C), 136,40/138,36 (C-F), 136,54, 138,49/140,27 (C-F)1139,34/141,40 (C-F), 154,72, 156,04, 167,10.HR-TOF-MS (Método 24): C28H26N2O6 [M+H]+ encontrados 581,1719, calc. 581,1706.Exemplo 18A

2,5-Dioxopirrolidina-1-il (3R)-N2-[(benziloxi)carbonila]-3-[(tert-butoxicarbonila)-amino]-L-fenilalaninato

<formula>formula see original document page 59</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, (3R)-N-[(benzilooxi)carbonila]-3-[(te/1-butoxicarbonila)amino]-L-fenilalanina (exemplo 16A,100,0 mg, 241.28 μmol) é previsto em cloreto de metileno (10 ml), a solução é resfriadaaté 0°C, N-hidróxisuccinimida (33,3 mg, 289,53 pmol, 1,2 eq.) e EDC (55,5 mg,289,53 μmol, 1,2 eq.) são adicionados e a mistura é agitada a 0°C durante a noite. Para odesenvolvimento, o solvente é completamente removido em um evaporador giratório auma temperatura de banho de 30°C e depois de purificação fina pelo HPLC preparatório(método 32), são isolados 96,0 mg (77,8% de teoria) de produto.

HPLC (Método 1) Rt = 2,53 min.

LC-MS (Método 18): Rt =2,58 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 529 (28) [M + NH4]+, 412(100).

Exemplo 19A

Metil [N2-[(benziloxi)carbonila]-3-tert-butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalaninato]<formula>formula see original document page 60</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, é previstoN-dipeptídeo protegido por benziloxicarbonila (exemplo 10A1 58,4 mg, 0,14 mmol) emcloreto de metileno (5 ml), a solução é subseqüentemente resfriada até -10°C e HOBt(77,7 mg, 0,57 mmol, 4 eq.), NMM (47 μΙ, 43,7 mg, 0,43 mmol, 3 eq.) e EDC (55,1 mg,0,29 mmol, 2 eq.) são adicionados sucessivamente e finalmente o composto do exemplo13A (94,0 mg, 0,14 mmol, 1 eq.) e NMM 32 μΙ, 29,1 mg, 0,29 mmol, 2 eq.) sãoadicionados. A reação é aquecida lentamente até RT e agitada durante a noite. Para odesenvolvimento, o precipitado é filtrado, o filtrado é concentrado em um evaporadorgiratório a uma temperatura de banho de 30°C e depois de purificação fina do resíduo porHPLC preparatório (método 31), são obtidos 77,9 mg (79,4% de teoria) de produto.HPLC (Método 1) R, = 3,12 min.

LC-MS (Método 23): Rt = 7,05 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 683 (100) [M+H]+, 1366 (75)[2M + 2H]2+.

1H NMR (300 MHz, CDCI3): δ = 0,89 (d, J = 4,6, 9H, CH2C(CH3)3), 0,96 (d, J = 2,9, 9H,CH2C(CH3)3), 1,23-1,49 (m, 11H: incluindo 1.39 (s, 9H, OC(CH3)3), 1,85 (m, 2H,CH2C(CH3)3), 3,59/3.68 (2s, 3H, OCH3), 4,04 (m, 1H, aCH), 4,41 (m, 1H, aCH), 4.88-5.42(m, 6H), 5.99 (m, 1H, NH), 6.22 (m, 1H, NH), 7.13-7.42 (m, 10H, ArH).HR-TOF-MS (Método 24): C37H55N4O8 calc. 683.4015, encontrados 683,4033 [M+H]+.

Exemplo 20A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-fe/t-butil-D-alanil]-[3-fe/t-butil-L-alanil]-[(3R)-3-{(fe/t-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanina]<formula>formula see original document page 61</formula>

O éster (exemplo 19A, 1,0 g, 1,46 mmol) é fornecido emuma mistura de THF (100 ml) e água (50 ml) e é adicionada uma solução de 0,5% dehidróxido de lítio (12 ml, 59,6 mg, 2,49 mmol, 1,7 eq.) a 0°C, por gotejamento. A soluçãoé agitada a OcC durante 4 h até que a conversão esteja completa. Para odesenvolvimento, a reação é misturada com fosfato de diidrogênio de potássio (996,4 mg,7,32 mmol), o solvente é completamente removido em um evaporador giratório a umatemperatura de banho de 30°C e o resíduo é purificado por HPLC preparatório(método 28). São obtidos 737,0 mg (75,3% de teoria) de produto.

HPLC (Método 1) Rt = 2,86 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 2,89 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 669 (20) [M+H]+, 569 (100)[M - C4H8 -CO2 + H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C36H53N4O8 [M+H]+ encontrou 669,3881, çalc. 669.3858.

Exemplo 21A

2,5-Dioxopirrolidina-1-il [A/2-(benziloxicarbonila)-3-fert-butil-D-alanil]-[3-íerí-butil-L-alanil]-[(3R)-3-{(terf-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalaninato]<formula>formula see original document page 62</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, ocomposto do exemplo 20A (30,0 mg, 44,85 μιτιοΙ) é dissolvido em diclorometano (6 ml), asolução é resfriada até 0°C, são adicionados N-hidroxisuccinimida (6,2 mg, 53,83 pmmol,1,2 eq.), EDC (10,3 mg, 53,83 μηηοΙ, 1,2 eq.) e peneiras moleculares 4A e a mistura éagitada a 0°C durante a noite. O solvente é removido em um evaporador giratório a umatemperatura máxima de 30°C, o resíduo é recolhido em acetato etílico e lavadosucessivamaente duas vezes com uma solução de 5% de ácido cítrico e duas vezes comuma solução de cloreto de sódio sat., a fase org. é secada em sulfato de sódio e filtrada,o solvente é concentrado em um evaporador giratório a uma temperatura de banho de30°C e são isolados 34,0 mg (98,7% de teoria) de produto do resíduo, depois dapurificação fina em um cartucho RP (eluente: acetato etílico).HPLC (Método 1) R, = 2,99 min.

LC-MS (Método 20): R, = 2.88 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 766 (57) [M+H]+, 666 (100)[M+H - C4H8 - C02]+.Exemplo 22A

N2-(tert-Butoxicarbonila)-L-alotreonina

<formula>formula see original document page 62</formula>L-alo-Treonina (3,15 g, 26,44 mmol) é dissolvida em água-dioxano (1+2, 75 ml), di-terf-butil dicarbonato (6,35 g, 29,09 mmol, 1,1 equivalentes) etrietilamina (4,79 ml, 34,38 mmol, 1,3 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitadaem temperatura ambiente durante a noite. O solvente é então removido a vácuo. Oresíduo é recolhido em acetato etílico e extraído com 1 M de ácido cítrico. A fase aquosaé extraída várias vezes mais com acetato etílico até que não possa mais ser detectadoproduto na mesma (HPLC, método 5). Os extratos orgânicos combinados são entãosecados em sulfato de sódio, concentrados e secados a vácuo em bomba de óleo até umpeso constante. O produto é ainda reagido sem purificação. Rendimento: 6,5 g deproduto bruto.

HPLC (Método 5): R, = 3,23 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,51 min, MS (ESlneg): m/z (%) = 217,8 (100) [M-H]".1H NMR (400 MHz1 C16-DMSO) δ (ppm) = 1,08 (d, J = 5,4 Hz1 3H), 1,38 (s, 9H), 3,72-3.84(m, 2H), 6,77 (d, J = 7,4 Hz1 1H).

Exemplo 23A

Benzila N2-(terf-butoxicarbonila)-L-alotreoninato

<formula>formula see original document page 63</formula>

O método foi realizado em analogia ã seguinte literatura: S.B. Cohen, R. Halcomb1 J. Am. Chem. Soc 2004, 124, 2534-25M 43. W. Jiang, J. Wanner1R. J. Lee, P.-Y. Bounaud, D. L. Boger, J. Am. Chem. Soc 2003, 125, 1877-1887.

O composto do exemplo 22A (6,8 g de produto bruto, 26,44mmol) é recolhido em metanol (177 ml), carbonato de césio (5,56 g, 17,06 mmol, 0,63equivalentes) é adicionado e a mistura é agitada até a completa dissolução. O solvente éentão removido por distilação, são adicionados DMF (42 ml) e então brometo benzílico(4,06 ml, 34,12 mmol, 1,26 equivalentes). A mistura é agitada durante 16 h e o DMFentão removido substancialmente a vácuo. O resíduo é recolhido em água e extraído com3 partes de diclorometano. As fases org. combinadas são secadas em sulfato de sódio,filtradas e concetradas a vácuo. O produto bruto é purificado em Biotage RP18-Flash(água-acetonitrilo gradiente: 0-5 min. 10% de acetonitrilo, 3-30 min. 10 - 90% acetonitrilo,30-35 min. 90% acetonitrilo; fluxo: 20ml/min.). Rendimento: 5,00 g (16,16 mmol, 52% deteoria).HPLC (Método 5): Rt = 4.36 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,39 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 332,6 (25) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, de-DMSO) δ (ppm) = 1,09 (d, J = 6,4, 3H), 1,37 (s, 9H), 3,82 (m, 1H),3,95 (dd, J = 6,4, J = 8.1 Hz), 4,98 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 5,09 (d,J = 12,7 Hz, 1H), 5,16 (d, J= 12,7 Hz1 1H), 7,10 (d, J = 8,1 Hzl 1H), 7,31-7,37 (m, 5H).

Exemplo 24A

Benzila L-alotreoninato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 64</formula>

530 mg do composto do exemplo 23A são reagidos com 8,0ml da solução TFA de acordo com o procedimento 2. O produto bruto (589 mg, quant.) éainda reagido sem mais purificação.

HPLC (Método 5): Rt = 3,18 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,24 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 210,0 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 1,15 (d, J = 6,6 Hz1 3H), 4,09-4.10 (m, 2H), 5,26(s, 2H), 7,36-7,44 (m, 5H), 8,34 (br. S, 2H).

Exemplo 25A

Benzila [N2-(tert-butoxicarbonila)-L-isoleucil]-L-alotreoninato

<formula>formula see original document page 64</formula>

O composto do exemplo 24A (2,30 g 7,12 mmol) e N-(tert-butoxicarbonila)-L-isoleucina (2,14 g, 9,25 mmol, 1,3 equivalentes) são dissolvidos emDMF (21,0 ml). 4-Metilmorfolina (1,3 ml, 12,02 mmol, 1,7 equivalentes) e HATU (3,52 g,9,25 mmol, 1,3 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitada em temperaturaambiente durante 16 h. A mistura completa é então purificada por cromatografia, primeirode acordo com o método 45 e, subseqüentemente, de acordo com o método 46.

Rendimento: 1,75 g (4,14 mmol, 58% de teoria) como um sólido amorfo de cor begeclaro.

HPLC (Método 5): Rt = 4,59 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,56 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 423,8 (70) [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 0,74-0,78 (m, 6H), 1,01-1,07 (m, 2H), 1,10 (d, J= 6,3 Hz1 3Η), 1,37 (s, 9Η), 1,64-1,66 (m, 1 Η), 3,86-3,94 (m, 1Η), 4,28 (dd, J = 7,3, J = 7,3Hz1 1 Η), 5,05 (d, J = 5,6 Hz), 5,09 (d, J = 12,7 Hz, 1Η), 5,13 (d, J= 12,7 Hz 1H), 6,70 (d,J= 9,0 Hz1 1 Η), 7,31-7,36 (m, 5H), 8,11 (d, J= 8,1 Hz).

HR-TOF-MS (Method 24): C22H35N2O6 calc. 423,2490, encontrados 423,2489 [M+H]+.Exemplo 26A

Benzila L-isoleucil-L-alotreoninato trifIuoroacetato

<formula>formula see original document page 65</formula>

O composto do exemplo 25A (224 mg, 0,53 mmol) é tratadocom 8,0 ml da solução TFA de acordo com o procedimento 2. São obtidos 253 mg deproduto bruto do exemplo 26A (cerca de 91% puro, 0,53 mmol, quant.) e reagidos semmaior purificação.HPLC (Método 5): R, = 3,51 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1..58 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 323,6 (100) [M+H]\1H NMR (400 MHz1 Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,77-0,86 (m, 6H), 1,02 (m, 1H), 1,15 (d, J = 6,4Hz1 3H), 1,45 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 5,11 (d, J= 12,5 Hz1 1H),5,16 (d, J= 12,5 Hz, 1H), 7,37-7,39 (m, 5H), 7,47 (m, 1H), 8,07-8,08 (m, 3H), 8,69 (d, J =7,3 Hz1 1H).Exemplo 27A

Benzila [N2-(íerf-butoxicarbonila)-D-arginil]-L-isoleucil-L-alotreoninato

<formula>formula see original document page 65</formula>

O composto do exemplo 26A (253 mg 91% puro, 0,53 mmol)e /V2-(ferí-butoxicarbonila)-D-arginina (145 mg, 0,53 mmol, 1 equivalente) são dissolvidosem DMF (3,0 ml). 4-Metilmorfolina (76 μΙ, 0,70 mmol, 1,3 equivalentes) e HATU (221 mg,0,58 mmol, 1,1 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitada em temperaturaambiente durante 16 h. A mistura completa é então colocada na coluna HPLC epurificada por cromatografia (método 34). Rendimento: 364 mg (0.53 mmol, 99% deteoria).

HPLC (Método 5): Rt = 3,91 min.LC-MS (Método 18): R, = 2,04 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 579,9 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,72-1,16 (m, 8H), 1,37 (s, 9H), 1,46 (m, 2H),1,60 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 3,06 (m, 2H), 3,93-4,01 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,33 (m, 1H),5,07-5,14 (m, 2H), 6,96 (d, J = 7,8, 1H), 7,35 (m, 5H), 7,45 (m, 1H), 7,66 (d, J = 8,8), 8,33(m, 1H).

Exemplo 28A Benzila D-arginii-L-isoleucil-L-alotreoninato bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 66</formula>

O composto do exemplo 27A (237 mg, 0,34 mmol) é tratadocom 2,0 ml da solução TFA de acordo com o procedimento 2. São obtidos 255 mg deproduto bruto do exemplo 28A (94% puro, 0,34 mmol, quant.) e são reagidos sem maispurificação.

HPLC (Método 5): Rt = 3,42 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,42 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 479,3 (50) [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,73-0,81 (m, 5H), 1,11-1,19 (m, 5H), 1,33-1,49(m, 3H), 1,74 (m, 3H), 3,10 (m, 2H), 3,88-3,95 (m, 2H), 4,25 (dd, J = 6,8, J= 7,1 Hz, 1H),4,46 (dd, J = 7,3, J = 8,8 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 12,5 Hz), 7,36(m, 5H), 7,61 (m, 1H), 8,10 (m,2H), 8,51 (d, J =7,6 Hz, 1H), 8,57 (d, J = 9,0 Hz, 1H).

Exemplo 29A

Benzila [A/2-(terf-butoxicarbonila)-L-leucil]-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninatotrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 66</formula>

O composto do exemplo 28A (240 mg, 0,34 mmol) e N-{tert-butoxicarbonila)-L-leucina (79 mg, 0,34 mmol, 1 equivalente) são dissolvidos emdiclorometano-DMF (5+1, 6 ml). Diisopropiletilamina (296 μΙ, 1,70 mmol, 5 equivalentes) eHATU (194 mg, 0,51 mmol, 1,5 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitada emtemperatura ambiente durante 24 h. A mistura completa é então colocada em uma colunade cromatografia em gel e purificada por cromatografia (método 45, o eluente é metanol).Rendimento: 146 mg (0,18 mmol, 53% de teoria).HPLC (Método 5): R, = 4,15 min.

LC-MS (Método 18): R, = 1.92 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 692.8 (100), [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 0,72-1.23 (m, 22H), 1,37 (s, 9H), 1,38-1,71 (m,3H), 3,08 (m, 2H), 3,91-4,00 (m, 2H), 4,26 (m, 1H), 4,33-4,42 (m, 2H), 5,07-5,15 (m, 2H),6,92 (d, J = 7,8 Hz1 1H), 7,35 (m, 5H), 7,47 (m, 1H), 7,88 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,93 (d, J =9,0 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 7,3 Hz1 1H).

Exemplo 30A

Benzila L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 67</formula>

O composto do exemplo 29A (220 mg, 0,27 mmol) é tratadocom 2,0 ml da solução TFA de acordo com o procedimento 2. São obtidos 223 mg deproduto bruto do exemplo 28A (0,27 mmol, quant.) e são reagidos sem mais purificação.HPLC (Método 4): Rt = 3.80.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,54 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 592,4 (2) [M+H]+.1H NMR (400 MHz1 de-DMSO) δ (ppm) = 0,73-1,11 (m, 13H), 1,22-1,74 (m, 12H), 3,11 (m,4H), 3,60 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 7,8, J = 8,6 Hz,1H), 4,64 (dd, J = 7,8, J = 13,7 Hz1 1H), 5,09 (d, J = 12,7 Hz1 1H), 5,13 (d, J = 12,7 Hz,1H), 7,35 (m, 5H), 7,58 (m, 1H), 8,07 (m, 2H), 8,25 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 7,6 Hz,1H), 8,77 (d, J= 8,3 Hz1 1H).

Exemplo 31A

Benzila [(3R)-/V2-(te/t-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato trifluoroacetato<formula>formula see original document page 68</formula>

O composto do exemplo 30A (223 mg, 0,27 mmol) e N-(tert-butoxicarbonila)-(3R)-3-hidróxi-L-leucina (89 mg, 0,33 mmol, 1,22 equivalentes) sãodissolvidos em DMF (6 ml), e a solução é resfriada até -20°C. 4-Metilmorfolina (150 μl,1,36 mmol, 5 equivalentes) e HATU (165 mg, 0,44 mmol, 1,6 equivalentes) sãoadicionados e a mistura é agitada em temperatura ambiente durante 16 h. A misturacompleta é então colocada em uma coluna de cromatografia em gel e purificada porcromatografia (método 45, o eluente é metanol). Rendimento: 188 mg (0.20 mmol, 74% de teoria).

HPLC (Método 5): Rt = 4,24 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1;99 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 821 ;9 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0;71-0;90 (m, 15H), 1;00 (m, 1H), 1;10 (d, J= 6;4Hz, 3H), 1;24-1;26 (m, 3H), 1;38 (s, 9H), 1;42-1;71 (m, 6H), 3;06-3;17 (m, 3H), 3,45 (m,1H), 3,61 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,35 (m, 2H), 4,54 (d, J = 7,8Hz, 1H), 5,07-5,15 (m, 2H), 5,45 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,35 (m, 5H), 7,46 (m, 1H), 7.,85 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,89 (d, J =8,8 Hz, 1H), 7,97 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 7,6 Hz , 1H).

Exemplo 32A

[(3R)-N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonintrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 68</formula>

O composto do exemplo 31A (100 mg, 0,11 mmol) édissolvido em ácido acético glacial (4,3 ml), são adicionados 10% de paládio em carbonoativado (22 mg) e a mistura é hidrogenada sob pressão atmosférica em temperaturaambiente durante 2 h. O catalisador é removido por filtragem e o filtrado é liofilizado. Oproduto bruto é purificado por cromatografia (método 33). 58 mg (60 pmol, 55% de teoria)do composto do título são obtidos.

HPLC (Método 5): Rt = 3.75 min.

LC-MS (Método 1 Método 19): R, = 1.80 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 731.8 (100) [M+H]+.

Exemplo 33A

O4-Metil [N2-(ferí-butoxicarbonila)glicil]-(3S)-3-hidróxi-L-aspartato

<formula>formula see original document page 69</formula>

(3S)-3-Ácido hidroxiaspártico é preparado pelo método deG. Cardillo, L. Gentilucci, A. Tolomelli, C. Tomasini, Synlett 1999, 1727-1730, e convertidoem analogia a P. G. Mattingly, M. J. Miller, J. Org. Chem. 1983, 48, 3556-3559, usandoradiação de microondas em um reator fechado em (2S,3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-ácido clorídrico oxobutírico. (2S,3S)-2-Amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-ácido clorídricooxobutírico (447 mg, 2,24 mmol) é dissolvido em DMF (9 ml). A solução é resfriada até0°C, Boc-glicina-A/-hidroxisuccinimida éster (763 mg, 2,91 mmol, 1,3 equivalentes),DMAP (14 mg, 0,11 mmol, 0,05 equivalentes) e finalmente DIPEA (1170 μΙ, 6,72 mmol, 3equivalentes) são adicionados. A mistura é deixada aquecer lentamente até atemperatura ambiente e é então agitada durante 2 h. A mistura é acidificada com ácidoacético glacial, misturada com acetonitrilo e cromatografada em Sephadex LH 20(método 45). Frações contendo o produto são combinadas, concentradas e novamentecromatografadas (método 46). O produto obtido (761 mg, quant.) é reagido ainda semmais purificação. Para fins analíticos, é obtida uma amostra pura por HPLC (método 44).

HPLC (Método 5): R, = 3,15 min

LC-MS (Método 1): Rt = 1,17 min, MS (ESlpos) = 321,2 [M+H]+.

N20Na = + 39° (c = 0,55, MeOH).

1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 1,40 (s, 9 H), 3,49 - 3,60 (m, 2 H), 3,61 (s, 3 H),4,29 (m, 1 H), 4,73 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 7,01 (m, 1 H), 7.49 (d, J = 6,99 Hz1 1 H).13C-NMR (d6-acetone, 126 MHz, DEPT) δ (ppm) = 28,5 (CH3), 42,2 (CH2)1 51,8 (CH3)153,7 (CH), 56,0 (CH), 79,2 (quat), 169,6 (quat), 169,7 (quat), 172,8 (quat), 173,8 (quat).HR-TOF-MS (Método 24): C12H22N2O8 [M+H]+ calc.: 321,1298, encontrados: 321,1299.

Exemplo 34A

Benzila [N2-(íerf-butoxicarbonila)glicil]-[(3S)-3-hidroxi-04-metil-L-aspartil]-03-(terí-butil)-L-serinato<formula>formula see original document page 70</formula>

O composto do exemplo 33A (390 mg, 1,22 mmol) e benzil0-(terf-butil)-L-serinato (445,14 mg, 1,22 mmol, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF (9ml). A solução é resfriada até 0°C e então são adicionados 2,44 ml (2 equivalentes) deuma solução de 1 M de 4-metilmorfolina em DMF, seguida de HATU (925 mg, 2,44 mmol,2 equivalentes). A mistura é agitada a 0°C por cerca de 15 minutos, sendo acrescentadosmais 2,44 ml (2 equivalentes) da solução de 4-metilmorfolina e a mistura é agitada emtemperatura ambiente durante 2 h. Então é adicionada água e a mistura é extraída com 2partes de acetato etílico. Os extratos orgânicos combinados são lavados com 1 M deácido cítrico, bicarbonato de sódio conc. e salmoura conc. A fase orgânica é entãosecada em sulfato de sódio, o solvente é destilado e o resíduo é cromatografado (método46). Rendimento: 413 mg (61% de teoria) como sólido.HPLC: R, = 4,46 min.

LC-MS: Rt = 2,37 min. MS (ESlpos): 554,4 [M+H]W20Na = -1,7 (c = 0,57, CH3CN).

1H NMR (400 MHz1 d6-DMSO) δ (ppm) = 1,09 (s, 9 H), 1,45 (s, 9 H), 3,17 (br s, 1 H), 3,50- 3,56 (dd, J = 2,85 Hz, J = 8,8 Hz1 1 H), 3,59 (s, 3 H), 3,61 - 3,67 (m, 3 H), 4,66 (s, 1 H),4,70 - 4,72 (m, 1 H), 4,97 (dd, J = 2,7 Hz, J = 8,65 Hz, 1 H), 5,14 (d, J = 12,3 Hz, 1 H),5,19 (br s, 1 H), 5,.23 (d, J =12,3 Hz, 1 H), 7,11 (d, J =7,45 Hz, 1 H), 7,19 (d, J = 8,5 Hz,1 H), 7,46 (m, 5 H).

13C-NMR-DEPT (126 MHz1 d6-DMSO) δ (ppm) = 28,5 (CH3)1 29,6 (CH3), 45,5 (CH2), 54,4(CH3), 54,5 (CH), 55,9 (CH), 62.8 (CH2), 68,6 (CH2), 71,7 (CH), 75,0 (quat), 81,8 (quat),129,6 (CH), 129,7 (CH), 129,9 (CH), 136,7 (quat), 157,3 (quat), 169,9 (quat), 171,2 (quat),173,4 (quat).

HR-TOF-MS: C26H40N3O10 [M+H]+ calc.: 554.2714, encontrados: 554.2707.Exemplo 35A

Benzila [N2-(ferí-butoxicarbonila)glicil]-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-03-(tert-butil)-L-serinato<formula>formula see original document page 71</formula>

O composto 34Α (430 mg, 0,78 mmol) é dissolvido emacetonitrilo (30 ml) e resfriado até 0°C. Amônia conc. (15 ml) é adicionada e a mistura éagitada por cerca de 15 min. Tão logo a reação esteja completa (detecção por HPLC1método 5), é adicionado ácido acético para acidificar e a mistura é diluída com água. Amistura é extraída com 2 porções de acetato etílico. Os extratos orgânicos combinadossão lavados com salmoura conc., secados em sulfato de sódio, concentrados epurificados por HPLC. Rendimento: 158 mg (38% de teoria) como sólido.

H20Na = - 16° (c = 0,53, MeOH).

HPLC: R, = 4,18 min. LC-MS: Rt = 2,14 min, MS (ESIpos) m/z= 539,4 [M+H]+.

HR-TOF-MS: C25H39N4O9 [M+H]+ calcd: 539,2717, encontrados: 539,2709.

1H NMR (300 MHz, d6DMSO) δ (ppm) = 1,05 (s, 9 H), 1,38 (s, 9 H), 3,50 - 3,56 (m, 2 H),3,61 - 3,67 (m, 2 H), 4,33 (s, 1 H), 4,48 (m, 1 H), 4,71 (m, 1 H, 5.10 (d, J = 12,7 Hz, 1 H),5,19 (d,J= 12,7 Hz1 1 H), 7,07 (m, 1 H), 7,17 (br s, 1 H), 7,33 - 7,46 (m, 6 H), 7,65 (d, J =8,8 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 7,7 Hz, 1 H).

13C-NMR-DEPT (126 MHz, d6-acetone) δ (ppm) = 27,54 (CH3), 28,58 (CH3)1 44,73 (CH2)154,06 (CH), 55,67 (CH), 62,61 (CH2)1 67,08 (CH2)1 71,64 (CH), 73.,90 (qual), 79,70 (quat),128,75 (CH), 128,82 (CH), 129,25 (quat), 137,20 (quat), 157,04 (quat), 170,56, 170,62(quat), 170,72 (quat), 174,13 (quat).

Exemplo 36A

Benzila glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-03-(tert-butil)-L-serina trifluoroacetatoreagidos em 2 ml da solução do reagente de acordo com o procedimento 2. O produto é NH.

<formula>formula see original document page 71</formula>

55 mg (100 μmol) de composto do exemplo 35A sãoreagido sem mais purificação. Rendimento: 50 mg (quant.).

HPLC (Método 3): Rt = 3.05 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2.22 min; MS (ESIpos) m/z (%) = 383.0 (100) [M+H]+.

Exemplo 37A

{(3R)-N2-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(terf-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalanil}-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 72</formula>

O produto de degradação do exemplo 3A (2,8 g, 2,53 mmol)e o composto do exemplo 17A (1,5 g, 2,53 mmol, 1 eq.) são fornecidos em DMF (70 ml).A solução é resfriada até 0°C, é adicionado DIEA (2,64 ml, 2,0 g, 15,14 mmol, 6 eq.) e amistura de reação é lentamente aquecida até RT e agitada nessa temperatura durante3 h. O solvente é parcialmente removido em um evaporador giratório, durante o que atemperatura da remessa não deve exceder 30°C. Depois de purificação fina por HPLCpreparatório (método 28), são isolados 2,2 g (61,4% de teoria) do produto.

HPLC (Método 9) R, = 17,03 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,79 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1301 (28) [M+H]+, 601 (100)[M - C4H8 - CO2 + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1300 (100) [M - H]".

Exemplo 38A

{(3R)-N2-[(Benziloxi)carbonila]-3-amino-L-fenilalanil}-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina trifluoroacetato<formula>formula see original document page 73</formula>

O grupo de proteção Boc é removido do composto doexemplo 37A (2,2 g, 1,55 mmol) de acordo com o procedimento 1. Depois dacromatografia (método 28), é obtido 1,8 g (87,1% de teoria) do produto.HPLC (Método 9) R, = 12,37 min.

LC-MS (Método 20): R,= 1,17 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1201 (8) [M+H]+, 601 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1199 (100) [M - H]".Exemplo 39A

{(3R)-N2-[(Benziloxi)carbonila]-3-amino-L-fenilalanil}-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil·arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N3,1-Iactamatrifluoroacetato<formula>formula see original document page 74</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, ocomposto do exemplo 38A (1,3 g, 0,89 mmol) é fornecido em DMF (700 ml), a solução éresfriada até 0°C e então são subseqüentemente adicionados HATU (1,0 g, 2,68 mmol,3 eq.) e NMM (0,8 ml, 0,7 g, 7,14 mmol, 8 eq.). Depois de agitar em uma corrente suavede argônio a O0C durante 3 h, a conversão está completa. Para o desenvolvimento, areação é misturada com metanol (30 ml), o solvente é removido em um evaporadorgiratório em temperatura de banho de 30°C, o resíduo é suspenso em metanol (30 ml)em um banho ultrassônico e o precipitado que se separou é removido por filtragem. Ofiltrado é concentrado em um evaporador giratório a uma temperatura de banho máximade 30°C, e depois de purificação fina por HPLC preparatório (método 28), são obtidos905,6 mg (78,3% de teoria) do composto alvo.

HPLC (Método 9) Rt = 15,09 min.

LC-MS (Método 18): R,= 1,75 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1183 (100) [M+H]+.

Exemplo 40A

Pentafluorofenil {N2-[(benziloxi)carbonila]-3-tert-butil-D-alanil}-{3-tert-butil-L-alanil}-[(3R)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalaninato]<formula>formula see original document page 75</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, o ácido(exemplo 20A, 170,0 mg, 0,25 mmol) é fornecido em cloreto de metileno (5 ml) e resfriadoaté O0C e são subseqüentemente adicionados difenilfosfinato de pentafluorofenil(146,5 mg, 0,38 mmol, 1,5 eq.) e NMM (140 μΙ, 128,5 mg, 1,27 mmol, 5 eq.)· A reação élentamente aquecida até RT e agitada nessa temperature durante a noite. Para odesenvolvimento, o solvente é removido em um evaporador giratório a uma temperaturade banho de 30°C, o resíduo é purificado por HPLC preparatório (método 32), as fraçõesdo produto concentrado são novamente misturadas com tolueno e diclorometano, ossolventes são subseqüentemente removidos completamente de novo em um evaporadorgiratório a uma temperatura de banho de 30°C, o resíduo é Iiofilizado durante 2 h e oproduto é armazenado a -25°C. São obtidos 130,8 mg (61,6% de teoria) de produto.

HPLC (Método 1) R, = 3.30 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3.42 min; MS (ESlpos): m/z(%) = 835 (100) [M+H]+, 735 (54)[M - C4H8 - CO2 + H]+, MS (ESlneg.): m/z (%) = 833 (60) [M - H]-, 183 (100).

Exemplo 41A

Clorotritil-resina-bound 03-(tert-butil)-N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina

<formula>formula see original document page 75</formula>Cloreto clorotritílico-resín (4,0 g, 5,96 mmol) é fornecido emdiclorometano (40 ml) e 0-(/ert-butil)-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina (8,0 g,20,86 mmol, 3,5 eq.) e DIEA (10,3 ml, 7,7 g, 59,60 mol, 10 eq.) são adicionadossubseqüentemente. Depois de agitar em RT durante 20 h, o polímero é recolhido por filtragem com sucção em uma porcelana calcinada e subseqüentemente lavado trêsvezes sucessivamente com diclorometano/metanol/DlEA 17/2/1, três vezes comdiclorometano, duas vezes com DMF e três vezes com diclorometano.

A remoção de uma amostra com ácidoacético/trifluoroetanol/diclorometano 1:1:3 permite suprir o aminoácido protegido porfmoccorrespondente.

HPLC (Método 13) Rt = 1,95 min.

LC-MS (Método 20): Rt =2,38 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 384 (35) [M+H]+, 767 (10)[2M+H]+, 105 (100); MS (ESlpos): m/z (%) = 382 (25) [M-H]", 765 (10) [2M - H]", 160(100).

Exemplo 42A

Resina clorotritílica-de ligação {N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-A/4-tritil-L-asparaginil}-[03-(terí-butil)-L-serina]

<formula>formula see original document page </formula>

O grupo de proteção Fmoc é retirado do polímero(exemplo 41A, 2,0 g, 2,98 mmol), conforme descrito no procedimento 7. O aminoácidodesprotegido ligado à resina é reagido subseqüentemente com A/2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-N-tritil-L-asparagina (3,6 g, 5,96 mmol, 2 eq.), DIEA (1,5 ml, 1,2 g,8,94 mmol, 3 eq.) e TBTU (1,9 g, 5,96 mmol) durante a noite para dar o dipeptídeoprotegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia ao procedimento 7. O dipeptídeo protegido por cadeia lateral correspondente é confirmado após remoçãoda amostra.

HPLC (Método 13) Rt = 2,43 min.LC-MS (Método 18): Rt = 3,10 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 740 (5) [M+H]+, 243 (100);MS (ESlpos): m/z (%) = 738 (40) [M - H]", 516 (85) [M -Fmoc- H]', 542 (100).HR-TOF-MS (Método 24): C45H46N3O7 [M+H]+ encontrou 740,3342, calc. 740,3331.

Exemplo 43A

Resina clorotritílica-de ligação {N2-[(9/-/-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]glicil}-(AT,-tritil-L-asparaginil)-[03-(terf-butil)-L-serina]

<formula>formula see original document page 77</formula>

O grupo de proteção Fmoc é retirado do polímero(exemplo 42A, 2,0 g, 2,98 mmol), conforme descrito no procedimento 7. O dipeptídeodesprotegido ligado à resina é reagido subseqüentemente com A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]glicina (1,8 g, 5,96 mmol, 2 eq.), DIEA (1,5 ml, 1,2 g, 8,94 mmol, 3 eq.)e TBTU (1,9 g, 5,96 mmol, 2 eq.) durante a noite para dar tripeptídeo protegido por Fmoc.O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia ao procedimento 7. O tripeptídeoprotegido por cadeia lateral correspondente é confirmado após remoção da amostra.HPLC (Método 13) Rt = 2,33 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 2,99 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 797 (5) [M+H]\ 243 (100);MS (ESlpos): m/z (%) = 795 (40) [M - H]", 573 (100) [M - Fmoc - H]'.HR-TOF-MS (Método 24): C47H49N4O8 [M+H]+ encontrados 797,3556, calc. 797,3545.

Exemplo 44A

Resina clorotritílica-de ligação {03-(íe/t-butil)-A/2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-alotreonilJ-glicil-N4-tritil-L-asparaginil)-O3-Cíerf-butiL-L-serina]

<formula>formula see original document page 77</formula><formula>formula see original document page 78</formula>

O grupo de proteção Fmoc é retirado do polímero(exemplo 43A, 1000,0 mg, 1,49 mmol), conforme descrito no procedimento 7. Otripeptídeo desprotegido ligado à resina é reagido subseqüentemente com O-(terf-butil)-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]alotreonina (1184,5 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA(772 μΙ, 577,7 mg, 3 eq.) and TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite para daro tetrapeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogiaao procedimento 7. O tetrapeptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após remoção da amostra.

HPLC (Método 13) R, = 2,48 min.

LC-MS (Método 20): R1 = 3,02 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 954 (100) [M+H]+; MS(ESlpos): m/z (%) = 752 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H64N5O10 [M+H]+ encontrados 954,4663, calc. 954,4648.

Exemplo 45A

Resina clorotritílica-de ligação {N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]}-L-isoleucil-[03-(tert-butil]-L-alotreonil-glicil-ÍA^-tritil-L-asparaginilJ-fO^íteAí-butiO-L-serina]

<formula>formula see original document page 78</formula>O grupo de proteção Fmoc é retirado do polímero(exemplo 44A, 1000,0mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Otetrapeptídeo desprotegido ligado à resina é reagido subseqüentemente com N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina (1053,2 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA (772 μL577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) and TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar o pentapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O pentapeptídeo protegido por cadeia lateralcorrespondente é confirmado após remoção da amostra.

HPLC (Método 13) R( = 2,57 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 3,23 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1067 (13) [M+H]+, 243 (100).

HR-TOF-MS (Método 24): C61H75N6O11 [M+H]+ encontrados 1067,5488, calc. 1067,5489.

Exemplo 46A

N5-[(Benziloxi)carbonila]-{N5[{[(benziloxi)carbonila]amino}(imino)metil]-N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-D-ornitina}

<formula>formula see original document page 79</formula>

N5-[(Benziloxi)carbonila]-N5-[{[(benziloxi)carbonila]amino}(imino)metil]-N2-(tert-butoxicarbonila)-D-ornitina (4,90 g,9,03 mmol) [M. Jetten et al., Tetrahedron Lett. 1991, 32, 6025-6028] é agitado em 4 M deácido clorídrico em dioxano (150 ml) e diclorometano (150 ml) em RT durante a noite. Osolvente é evaporado completamente e o resíduo é secado a vácuo. A aminadesprotegida é subseqüentemente fornecida em diclorometano (180 ml), DIEA (4,5 ml,3,5 g, 27,09 mmol, 3 eq.) e clorotrimetilsilano (2,3 ml, 2,0 g, 18,061 mmol, 2 eq.), sãoadicionados e a mistura é agitada sob refluxo durante a noite. A solução é resfriada (0°C)1DIEA (3,0 ml, 2,3 g, 18,06 mmol, 2 eq.) e (9-fluorenilmetil) cloroformato (2,3 g, 9,03 mmol,1 eq.) são adicionados e a mistura é aquecida até RT e agitada nessa temperaturadurante a noite. Para o desenvolvimento, a reação é diluída com diclorometano e lavadacom uma solução de 10% de ácido cítrico aq., a fase orgânica é secada em sulfato desódio, o solvente é removido em um evaporador giratório e o resíduo é secado a vácuo.Depois de purificação fina (método 37) do produto bruto, 2,0 g (32,4% de teoria) docomposto do título são isolados.

LC-MS (Método 21): Rt = 2,99 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 665 (100) [M+H]+;MS (ESlneg): m/z (%) = 663 (30) [M - H]", 333 (100).Exemplo 47A

Resina clorotritílica-de ligação [^-(benziloxicarbonilaJ-A^-íífbenziloxicarbonilaJamino}-{imino}metil)-N2-({9H-fluoren-9-ilmetoxi}carb^alotreonill-glicil-í/N^-tritil-L-asparaginiO^O^Ífe/t-butiO-L-serina]

<formula>formula see original document page 80</formula>

O grupo de proteção por Fmoc é retirado do polímero(exemplo 45A, 1000,0 mg, 1,49 mmol) descrito no procedimento 7. O pentapeptídeodesprotegido ligado à resina é reagido subseqüentemente com o aminoácido protegidopor Fmoc (exemplo 46A, 1980,9 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA (772 μl, 577,7 mg,4,47 mmol, 3 eq.) e TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite para darhexapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogiaao procedimento 7. O hexapeptídeo de liga de polímero é imediatamente processadomais sem confirmação analítica.Exemplo 48A

Resina clorotritílica-de ligação {N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucil}-[A/5-(benziloxicarbonila)-N5-({[benziloxicarbonila]amino}{imino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-[03-(tert-butil]-L-alotreonil]-glicil-(N3-tritil-L-asparaginil)-[O3-(tert-butil)-L-serina]<formula>formula see original document page 81</formula>

O grupo de proteção por Fmoc é removido do polímero(exemplo 47A, 1000,0mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Ohexapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com N-[(9H- fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucina (1053,2 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA (779 μΙ,577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) and TBTU (956,7 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar heptapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O heptapeptídeo protegido por cadeia lateralcorrespondente é confirmado depois da retirada de uma amostra. LC-MS (Método 18): Rt = 3,51 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1605 (100) [M+H]+.

Exemplo 49A

{N2-[tert-Butoxicarbonila]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]}-L-leucilH-(benziloxicarbonil)-N5-({[benziloxicarbonila]amino}{imino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-[03-(íerf-butil)-L-alotreonil]-glicil-N3-tritil-L-asparaginiO-tO^ííert-butiO-L-serina]

O grupo de proteção por Fmoc é retirado do polímero(exemplo 48A, 1000,0 mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Oheptapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com (3R)-3-hidróxi-A/-(terf-butoxicarbonila)-L-leucina (552,7 mg, 2,24 mmol, 1,5 eq.), DIEA (597 μΙ, 442,9 mg, 3,43 mmol, 2,3 eq.) e TBTU (717,6 mg, 2,24 mmol, 1,5eq.) durante a noitepara dar octapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7.

O octapeptídeo é retirado completamente do polímero emuma solução de ácido acético, trifluoroetanol e diclorometano (1:1:3). Para odesenvolvimento, a resina é removida por filtragem emu ma porcelana calcinada, ofiltrado é concentrado a vácuo e finalmente purificado por cromatografia (método 32). 56mg (16% de teoria) do composto do título são obtidos.

LC-MS (Método 18): Rt = 3,48 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1613 (15) [M+H]+, 806 (60)[M + 2H]2+, 243 (100); MS (ESlneg): m/z (%) = 1611 (100) [M+H]+.

Exemplo 50A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-{N5-[benziloxicarbonila]-N5-[{[benziloxicarbonila]-amino}(imino)metil]-D-ornitil}-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina

<formula>formula see original document page 82</formula>

O peptídeo (exemplo 49A, 22,0 mg, 13,65 μιτιοΙ) é fornecidoem TFA (5,25 ml) e água (0,25 ml), p-cresol (10,0 mg, 92,48 μιτιοΙ) é subseqüentementeadicionado e a solução é agitada em RT durante 1 h. Para o desenvolvimento, o solventeé removido em um evaporador giratório em temperatura de banho de 30°C. Depois depurificação fina do resíduo por HPLC preparatório (método 26), são obtidos 4,4 mg(27,9% de teoria) de produto.

HPLC (Método 1) R, = 2,07 min

LC-MS (Método 18): Rt = 2,12 min; MS (ESlpos): m/z(%) = 1158 (5) [M+H]+, 579 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1156 (100) [M - H]".

Exemplo 51A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íerí-butil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alanil]-{(3R)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-{N5-[benziloxicarbonilal-A^-KIbenziloxicarbonilalaminoJCiminoJmetill-D-ornitil)-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina

<formula>formula see original document page 83</formula>

A amina (exemplo 50A, 4,0 mg, 3,46 μηποΙ) e o ácido ativado(exemplo 40A, 3,2 mg, 3,82 ymol, 1,1 eq.) são fornecidos em DMF (500 μΙ), a solução éresfriada até 0°C, DIEA (4 μΙ, 2,7 mg, 20,74 mmol, 6 eq.) é subseqüentemente adicionadoe a reação é aquecida até RT e agitada durante a noite. Para o desenvolvimento, osolvente é removido em um evaporador giratório em temperatura de banho de 30°C, oresíduo é pré-purificado por cromatografia com gel (método 45, eluente: metanol) edepois de purificação fina por HPLC preparatório (método 26), são obtidos 3,0 mg (24,0%de teoria) de produto.HPLC (Método 10) Rt = 11,37 min

LC-MS (Método 18): R, = 3,37 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 904 (100) [M + 2H]2+.Exemplo 52A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íe/t-butil-D-alanil]-[3-terí-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-{N5-[benziloxicarbonila]-N5-[{[benziloxicarbonila]amino}(imino)metil]-D-ornitil}-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato<formula>formula see original document page 84</formula>

O grupo de proteção Boc é removido do composto doexemplo 51A (2,5 mg, 1,38 μιτιοΙ) de acordo com o procedimento geral 1. Depois depurificação fina por HPLC preparatório (método 26), são obtidos 2,2 mg (87,3% de teoria) de produto.

HPLC (Método 9) Rt = 24,14 min

LC-MS (Método 18): Rt =2,63 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 854 (100) [M + 2H]2+; MS(ESlneg.): m/z (%) = 1706 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C84H123N16O22 [M+H]+ encontrados 1707,8989, calc. 1707,8993.

Exemplo 53A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-te/f-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-{N5-[benziloxicarbonila]-N5-[{[benziloxicarbonila]amino}(imino)metil]-D-ornitil}-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L- asparaginil-L-serina trifluoroacetato C1 11-W33-Iactama<formula>formula see original document page 85</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, a aminadesprotegida (exemplo 52A, 2,0 mg, 1,10 μmol) é fornecida em DMF (1 ml), a solução éresfriada até 0°C, HATU (1,3 mg, 3,29 pmol, 3 eq.) e NMM (0,7 μL 0,7 mg, 6,58 μmol6 eq.) são adicionados e a reação é lentamente levada à RT e agitada nessa temperaturadurante a noite. Para o desenvolvimento, a solução é purificada por HPLG preparatório(método 26). 1,9 mg (90,1% de teoria) do composto alvo é obtido.

HPLC (Método 10) Rt = 10,70 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 3,25 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1691 (53) [M+H]+, 846 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1688 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C84H12IN16O2I [M+H]+ encontrados 1689,8929, calc. 1689,8887.

Exemplo 54A

{(3R)-N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-{03-(tert-butil)-L-alotreonil)-glicil-N-tritil-L-asparaginil}-[O3-(tert-butil)-L-serina]<formula>formula see original document page 86</formula>

O composto protegido por ester benzílico (exemplo 49A,62,0 mg, 38,46 μιηοΙ) é convertido no produto por hidrogenólise em metanol (20 ml) em1 h.

Depois de cromatografia por HPLC preparatório (método 26), o composto alvo (34,3 mg,61,2% de teoria) é obtido.HPLC (Método 1) Rt = 2,51 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,36 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1343 (38) [M+H]+, 243 (100);MS (ESlneg.): m/z (%) = 1341 (100) [M - H]".

Exemplo 55A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 86</formula>

O composto do exemplo 54A (32,0 mg, 21,95 pmol) éagitado em uma solução de TFA (7,3 ml), água (250 μl) e triisopropilsilano (323 μΙ) em RTdurante 2 h. Para o desenvolvimento, o solvente é removido em um evaporador giratórioem uma temperatura de banho de 30°C e o resíduo é concentrado a vácuo uma vez comtolueno e uma vez com cloreto de metileno a uma temperatura de banho de 30°C. Depoisda secagem a alto vácuo, o produto bruto é dissolvido em 0,1% aq. TFA e extraído comMTBE e a fase aq. separada é concentrada a vácuo e subseqüentemente purificada demodo fino por HPLC preparatório (método 27). 22,5 mg (91,8% de teoria) do composto dotítulo são obtidos.

HPLC (Método 9) Rt = 8,38 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,30 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 889 (12) [M+H]+, 445 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 887 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C37H69N12O13 [M+H]+ encontrados 889,5102, calc. 889,5102.

Exemplo 56A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-teAt-butil-L-alanil]-{(3R)-3-[(terí-butoxicarbonil)amino]-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L^alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 87</formula>

Os compostos dos exemplos 55A (19,0 mg, 17,00 μmol) e40A (15,6 mg, 18,70 μmol) são fornecidos em DMF (1 ml), N.N-diisopropilamina (18 μΙ,13,2 mg, 102,00 mmol, 6 eq.) é adicionada a 0°C e a mistura é agitada nessatemperature durante 2 h. A reação é aquecida até RT e então agitada durante a noite.

Para o desenvolvimento, a solução é concentrada a vácuo e finalmente purificada demodo fino por HPLC preparatório (método 26). 24,4 mg (86,7% de teoria) do compostoalvo é obtido.

HPLC (Método 9) R, = 23,17 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,37 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 720 (100) [M-C4H8-CO2 + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1438 (100) [M - C4H8 - CO2 - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C73H119N16O20 [M+H]+ encontrados 1539,8772, calc.1539,8782.

Exemplo 57A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenilalanil}-{(3f?)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 88</formula>

O composto do exemplo 56A (23,0 mg, 13,91 μιηοΙ) éconvertido em amina desprotegida de acordo com o procedimento 1. Depois depurificação fina (método 26), são obtidos 19,9 mg (85,8% de teoria) do composto dotítulo.

HPLC (Método 9) R, = 17,05 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,98 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1441 (3) [M+H]+, 720 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1438 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C68H111N16O18 [M+H]+ encontrados 1439,8271, calc.

1439,8257.

Exemplo 58A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-terf-butil-D-alanil]-[3-terí-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-Lasparaginil-L-serina C111-N3 3-Iactama trifluoroacetato<formula>formula see original document page 89</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, a amina

desprotegida (exemplo 57A, 19,0 mg, 11,39 pmol) é fornecida em DMF (10 ml), a soluçãoé resfriada até 0°C, HATU (13,0 mg, 34,18 μηηοΙ, 3 eq.) e NMM (8 μl, 6,9 mg, 68,35 μmol)são adicionados e a reação deixada repousar a 4°C durante 3 dias. Para odesenvolvimento, é adicionado metanol à mistura a O°C, e a mistura é concentrada avácuo a uma temperatura de banho máxima de 30°C e finalmente purificada de modo finopor HPLC preparatório (método 26). 14,0 mg (80,0% de teoria) do composto do título sãoobtidos.

HPLC (Método 9) Rt = 22,44 min.LC-MS (Método 18): Rt = 2,30 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1422 (12) [M+H]+, 711 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1420 (28) [M - H]~, 710 (100) [Μ - 2H]2".HR-TOF-MS (Method 24): C68H109N16O17 [M+H]+ found 1421.8165, calc. 1421.8152.Exemplo 59A(3R)-3-[(terf-Butiloxicarbonil)amino]-L-fenilalanina

<formula>formula see original document page 89</formula>

De acordo com o procedimento 5, o composto do exemplo16Α (1000,0 mg, 2,41 mmol) é convertido com 10% de paládio/carbono (100 mg,93,98 μmol, 4 mol%) em metanol (100 ml) no composto do título em 1 h. Depois daremoção do catalisador por filtragem através de diatomito e concentração, são obtidos624,0 mg (92,3%) de produto bruto.

HPLC (Método 9) Rt = 10,27 min.

LC-MS (Método 18): R,= 1,52 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 281 (82) [M+H]+, 561 (10)[2M+H]\ 225 (100); MS (ESlneg.): m/z (%) = 279 (70) [M-H]', 559 (5) [2M - H]", 205(100).

1H NMR (500 MHz, Ci6-DMSO): δ = 1,34 (s, 9H, OC(CH3)3), 3,51 (d, J = 4,8 Hz, 1H, Hfl),4,88 (dd, J =8,6 Hz, 4,8Hz, 1H, H, 7,21-7.35 (m, 7H, ArH1 NH2), 8,04 (d, J =8,6 Hz,NH).

13C NMR (126 MHz, Cf6-DMSO): δ = 28,04 (3C), 53,81, 56,27, 78,06, 127,24, 127,42 (2C),128,07 (2C), 138,99, 154,12, 167,93.

HR-TOF-MS (Método 24): C14H21N2O4 [M+H]+ encontrados 281,1506, calc. 281,1496.

Exemplo 60A

Metil [N2-(benziloxicarbonila)-D-leucil]-L-leucinato

<formula>formula see original document page 90</formula>

N2-(BenziloxicarboniIa)-D-Ieucina (BACHEM Cat No zl3351.)(6,37 g, 24 mmol)) e metil L-Ieucinato (3.49 g, 24 mmol, 1 eq.) são dissolvidos em DMF(75 ml) a 0°C, e NMM (5,28 ml, 48 mmol, 2 eq.) e HATU (13,69 g, 36 mmol, 1,5 eq.) sãoentão adicionados. A mistura é agitada em temperatura ambiente durante três horas. Sãoadicionados MTBE e uma solução de bicarbonato de sódio saturada e a extração érealizada. A fase aquosa é extraída de novo com uma segunda parte de MTBE, e asfases orgânicas combinadas são então lavadas com 1 M de ácido cítrico, bem comonovamente com uma solução de bicarbonato de sódio saturada, secada em sulfato desódio e concentrada a vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia em duas partes(Biotage 40M, cicloexano/acetato etílico 3+1). Rendimento: 7,85 g (80% de teoria).HPLC (Método 5): R, = 4,82 min.

LCMS (Método 18): Rt = 2,65 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 393 (100) [M+H]+.

W20Na = -5.2 ° (c = 0,52, MeOH).

1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 0,77-0,92 (m, 12H), 1,31-1,66 (m, 6H), 3,60 (s,3Η), 4,10 (m, 1Η), 4,28 (m, 1Η), 5,02 (s, 2Η), 7,25-7,38 (m, 6Η), 8,23 (d, 1H).13C-NMR (126 MHz, C16-DMSO) δ (ppm) = 21,1 (CH3), 21,5 (CH3)1 22,8 (CH3), 22,9 (CH3),24,2 (CH), 41,0 (CH2), 50,0 (CH), 51,8 (CH3, OCH3), 52,9 (CH), 65,3 (CH2, OCH2Ph),127,6 (CH, ar-C), 127,7 (CH, ar-C), 128,3 (CH, ar-C), 137,1 ((C quat, ar-C), 155,8 (Cquat, NCOC(CH3)3), 172,4 (C quat, C=O), 172,9 (C quat, C=O).

Exemplo 61A

[N2-(Benziloxicarbonila)-D-leucil]-L-leucina

<formula>formula see original document page 91</formula>

O composto 60A (7,70 g, 19,62 mmol) é recolhido em 20ml de THF/água (3+1), resfriado até 0°C e é adicionado monoidrato de hidróxido de lítio(1,65 g, 39,24 mmol, 2 eq.). A mistura é agitada a 0°C até que de acordo com omonitoramento HPLC, a reação tenha chegado ao término (cerca de 45 min). A maiorparte do THF é destilada a vácuo, o pH é então ajustado para cerca de 4, acrescentandoácido cítrico e a mistura é extraída com 2 partes de acetato etílico. As fases org.combinadas são secadas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O produto éobtido como uma substância amorfa com um rendimento de 6,87 g (89% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 4,45 min.

LCMS (Método 18): R, = 2,39 min, MS (ESlpos.) m/z (%) = 379 (100) [M+H]+, 757 (40)[2M+H]+.

[a]20Na = +4,7 ° (c = 0,50, MeOH).

1H NMR (300 MHz1Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,77-0,92 (m, 12H), 1,34-1,68 (m, 6H), 4,04-4.26(m, 2H), 5,02 (s, 2H), 7,25-7.38 (m, 6H), 8,12 (d, 1H), 12,50 (br. s, 1H).HR-TOF-MS (Método 24): C20H3iN2O5 [M+H]+ calc. 379,2228, encontrados 379,2216.

Exemplo 62A

Pentafluorofenil N-[benziloxicarbonila]-D-leucil-L-leucinato

<formula>formula see original document page 91</formula>De acordo com o método de preparação (exemplo 17A), ocomposto do exemplo 61A (1000,0 mg, 2,64 mmol), pentafluorofenol (2431,7 mg,13,21 mmol, 5 eq.) e EDC (759,8 mg, 3,96 mmol, 1,5 eq.) são convertidos no compostodo título. Após purificação fina (método 28), é obtido 1,3 g (93,0% de teoria) de produtoque é armazenado a -25°C até outro uso.

HPLC (Método 1) R, = 3,08 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3,26 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 545 (100) [M+H]+, 1089 (43)[2M+H]+.

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO): δ =0,78-0,99 (m, 12H, 2[CH(CH3)2]), 1,30-1,88 (m, 6H),4,16 (m, 1H, Htt), 4,38-4,55 (2m, 1H, Ha), 4,95-5,11 (m, 2H, PhCH2), 7,21-7,38 (m, 5H,ArH), 7,41 (d, J = 7,4 Hz1 1H, NH), 8,69 (d, J = 7,0 Hz, 1H, NH).

Exemplo 63A

<formula>formula see original document page 92</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, o{N2-(Benziloxicarbonila)-D-leucil}-L-leucil-[(3f?)-3-[(ferí-butoxicarbonila)amino]-L-fenilalanina]aminoácido (exemplo 59A, 493,0 mg, 1,76 mmol e o dipeptídeo ativado por ácidocarboxílico (exemplo 62A, 1197,0 mg, 1,76 mmol) são fornecidos em DMF (50 ml) e DIEA(2,4 ml, 1818,4 mg, 14,07 mmol, 8 eq.) é subseqüentemente adicionado à solução a 0°C.Depois da adição da base, a reação é lentamente levada a RT e agitada até que aconversão esteja completa (3 h). Para o desenvolvimento, é adicionado à reação fosfatode diidrogênio de potássio (2,4 g, 17,59 mmol, 10 eq.) e a mistura é agitada durante10 min, o sólido é filtrado e o filtrado é concentrado a vácuo em temperatura de banho de30°C. São isolados 750,0 mg (66,6% de teoria) do composto do título após a purificaçãofina (método 28).HPLC (Método 1) Rt = 2,72 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,86 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 641 (100) [M+H]+, 541 (76)[M - C4H8 - CO2 + H]+, 1281 (42) [2M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 639 (100) [M - H]',1280 (92) [2M-H]-.

Exemplo 64A

Pentafluorofenil N-[(benziloxi)carbonila]-D-leucil-L-leucil-[(3R)-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-L-fenilalaninato]

<formula>formula see original document page 93</formula>

O composto do título é preparado de acordo com o exemplode método (exemplo 17A) a partir do tripeptídeo (exemplo 63A, 200 mg, 0,31 mmol) epentafluorofenol (287,3 mg, 1,56 mmol, 5 eq.) em diclorometano (10 ml) usando EDC(89,8 mg, 0,49 mmol, 1,5 eq.). A conversão completa é obtida por agitação da reação a0°C durante 2 h e deixando repousar em um refrigerador a 4°C durante a noite. Depoisda purificação fina (método 32), são obtidos 211,0 mg (83,8% de teoria) de produto.HPLC (Método 1) R, = 3,23 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 3,22 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 807 (30) [M+H]+, 707 (100)[M - C4H8 - CO2 + H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 805 (10) [M - H]', 183 (100).

Exemplo 65AResina clorotritílica de ligação {03-[fe/t-butil]-A/2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-treonil-glicil-(N3-tritil-L-asparaginil)-[O3-(tert-butil)-L-serina]

<formula>formula see original document page 94</formula>

O grupo de proteção de Fmoc é removido do polímero(exemplo 43A, IOOO1Omg1 1,49mmol) conforme descrito no procedimento 7. Otripeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com O-(íert-butil)-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-treonina [Echner, Hartmut; Voelter1 Wolfgang;Liebigs Ann. Chem.; GE; 1988; 1095-1098] (1184,5 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA (779 μl,577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) e TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar o tetrapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O peptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após a retirada de uma amostra.

LC-MS (Método 20): R, = 3,07 min; MS (ESipos): m/z {%) = 955 (80) [M+H]+, 243 (100);MS (ESlneg): m/z (%) = 953 (100) [M - H]".HR-TOF-MS (Método 24): C55H64N5Oi0 [M+H]+ encontrados 954,4636, calc. 954,4648.Exemplo 66A

Resina clorotritílica de ligação {/\/2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucil}-{[03-(íerf-butiOl-L-treonilJ-glicil-ÍA^-tritil-L-asparaginiO-ÍO^Ífert-butiO-L-serina]

<formula>formula see original document page 94</formula>O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 65A, IOOO1Omg1 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Otetrapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina (1053,2 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) (H. Echner et al.,Liebigs Ann. Chem. 1988, 1095-1098), DIEA (779 μΙ, 577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) e TBTU(956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite para dar pentapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia ao procedimento 7. O peptídeoprotegido por cadeia lateral correspondente é confirmado após a retirada de umaamostra.

HPLC (Método 13) Rt = 2,61 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 3,26 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1068 (15) [M+H]+, 243 (100);MS (ESlneg): m/z (%) = 1066 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C61H75N6O11 [M+H]+ encontrados 1067,5503, calc. 1067,5489.

Exemplo 67A

Resina clorotritílica de ligação {N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-[N5-(imino-{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]}-L-isoleucil-[03-(fert-butil)-L-treonil]-glicil-(N3-tritil-L-asparaginil-[O3-(tert-butil)-L-serina]

<formula>formula see original document page 95</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 66A, 1000.0 mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Opentapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com N2-[(9Η-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-di'idro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-L-ornitina (1283,9 mg, 1,94 mmol, 1,3 eq.), DIEA (779 μΙ,577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) e TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar o hexapeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O peptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após a retirada de uma amostra.

LC-MS (Método 20): Rt = 3,24 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1490 (85) [M+H]+, 282 (100);MS (ESlpos): m/z (%) = 1488 (100) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C81H105N10O15S [M+H]+ encontrados 1489,7456, calc.1489,7477.

Exemplo 68A

Resina clorotritílica de ligação {N2-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucil}-[N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]-L-iso-leucil-[O"3 tert-L-treonill-glicil-(N3-tritil-L-asparaginil]O3 tertbutil)-serina]

<formula>formula see original document page 96</formula>

O grupo de proteção por Fmoc é removido do polímero(exemplo 67A, 1000,0mg, 1,49 rnmoi) conforme descrito no procedimento 7, Ohexapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucina (1053,2 mg, 2,98 mmol, 2eq.), DIEA (779 µL,577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) and TBTU (956,6 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar heptapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O peptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após a retirada de uma amostra.

LC-MS (Método 18): R, = 3,54 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1602 (100) [M+H]+; MS(ESlpos): m/z (%) = 1600 (100) [M - H]'.

Exemplo 69A

[(3R-W2-(/eAÍ-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-[Ns-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-[03-(terf-butil)-L-treoniglicil-N"3tritil-L-asparaginil)O"3-tert-butiO-L-serina]<formula>formula see original document page 97</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 68A, IOOO1Omg1 1,49mmol) conforme descrito no procedimento 7. Oheptapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com (3R)-3-hidróxi-N-(íerf-butoxicarbonila)-L-leucina (552,7 mg, 2,24 mmol, 1,5 eq.), DIEA (597 μΙ,442,9 mg, 3,43 mmol, 2,3 eq.) e TBTU (717,6 mg, 2,24 mmol, 1,5 eq.) durante a noitepara dar o octapeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7.

O octapeptídeo ligado à resina é completamente removido do polímero em uma solução de ácido acético, trifluoroetanol e diclorometano (1:1:3).Para o desenvolvimento, a resina é filtrada através de uma porcelana calcinada e ofiltrado é concentrado a vácuo e finalmente purificado por cromatografia (método 28).418.0 mg (17.4% de teoria) do composto do título são obtidos.

HPLC (Método 13) Rt = 2,85 min.

HPLC (Método 1) Rt = 3,32 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3,39 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 1610 (40) [M+H]\ 806 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1608 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C83H125N12O18S [M+H]+ encontrados 1609,8971, calc.1609,8951.

Exemplo 70A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-treonil-glicil-L-asparaginil-L-serinabistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 98</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, ocomposto do exemplo 69A (200,0 mg, 0,12 mmol) é agitado em uma solução de TFA(25,3 ml), água (667 μΙ) e triisopropilsilano (667 μΙ) em RT durante 1 h. Para odesenvolvimento, o solvente é removido em um evaporador giratório a uma temperaturade banho de 30°C e o resíduo é concentrado a vácuo uma vez com tolueno e uma vezcom cloreto de metileno a uma temperatura de banho de 30°C. O resíduo é dissolvido em0,1% aq. TFA e extraído uma vez com MTBE e a fase aq. separada é concentrada avácuo e subseqüentemente purificada de modo fino por HPLC preparatório (método 26).138,0 mg (99,5% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC (Método 9) Rt = 8,60 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,43 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 889 (15) [M+H]+, 445 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 887 (100) [M - H]-.Exemplo 71A

[N2-(B8nzi!cxic3rboni!a)-D-leuein-L-leucil-[(3R)-N3-(tert-butoxicarbonila)-3-amino-L-fenil-alanil]-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-treonil-glycil-L-asparaginiserina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 98</formula>O composto do título é preparado a partir do octapeptídeo(exemplo 70A, 70,0 mg, 62,66 pmol), o tripeptídeo ativado por ácido carboxílico(exemplo 64A, 60,7 mg, 75,19 μηιοΙ, 1,2 eq.) usando A/,A/-diisopropilamina (65 μΙ,48,6 mg, 375,96 μητιοΙ, 6 eq.) conforme indicado no método de preparação do compostodo exemplo 56A. A reação é levada a uma conversão quase completa em RT durante anoite. Após cromatografia (método 26), foram obtidos 73,9 mg (72,5% de teoria) deproduto.

HPLC (Método 9) R, = 22,16 min.

LC-MS (Método 20): R, = 2.07 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1512 (25) [M+H]+, 706 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1510 (18) [M -H]", 700(100).

HR-TOF-MS (Método 24): CnH115N16O20 [M+H]+ encontrados 1511,8474, calc.1511,8469.

Exemplo 72A

[N2-(Benziloxicarbonila)-D-leucil]-L-leucil-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-treonil-glicil-L-asparaginil-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 99</formula>

O composto do exemplo 71A (70,0 mg, 43,06 μιτιοΙ) éconvertido em amina desprotegida de acordo com o procedimento 1. Depois depurificação fina (método 26), são obtidos 45,0 mg (63,7% de teoria) do composto dotítulo.

HPLC (Método 9) R, = 16,77 min.

LC-MS (Método 18): R, = 1,85 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1412 (10) [M+H]+, 706 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1410 (90) [M - H]", 650 (100).

HR-TOF-MS (Método 24): C66H107N16O18 [M+H]+ encontrados 1411,7958, calc.1411,7944.

Exemplo 73A

[N2-(Benziloxicarbonila)-D-leucil]-L-leucil-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hileucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-treonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C111-N33- Iactamatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 100</formula>

O composto do título é preparado de acordo com o métodode preparação (exemplo 58A) a partir do composto do exemplo 73Â (42,0 mg,25,61 μιποΙ), HATU (29,2 mg, 76,83 μηηοΙ, 3 eq.) and NMM (17 μΙ, 15,5 mg, 153,66 μmol).A conversão completa é realizada por agitação em RT em 3 h. São isolados 34,1 mg(88,3% de teoria) de produto após purificação fina (método 26).

HPLC (Método 9) Rt = 20,29 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,06 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1393 (32) [M+H]+, 797 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1391 (100) [M - H]", 695 (32) [Μ - 2H]2".HR-TOF-MS (Método 24): C66H105N16O17 [M+H]+ encontrados 1393,7848, calc.1393,7839.

Exemplo 74A

N5-[Benziloxicarbonila]-N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-D-ornitinaN5-[(BenziloxOcarbonilaJ-D-ornitina (3,8 g, 14,27 mmol)[Ulhaq, Saraj et al.; Bioorg. Med. Chem.; EN; 7; 9; 1999; 1787 - 1796] é fornecido emdiclorometano (190 ml), DIEA (2,4 ml, 1,8 g, 17,27 mmol, 1 eq.) e clorotrimetilsilano(3,6 ml, 3,1 g, 28,53 mmol, 2 eq.) são adicionados e a mistura é agitada sob refluxodurante a noite. A reação é resfriada (O0C) e são adicionados DIEA (4,7 ml, 3,7 g,28,54 mmol, 2 eq.) novamente e (9-fluorenilmetil) cloroformato (3,7 g, 14,27 mmol, 1 eq.)e a mistura é aquecida até RT e agitada nessa temperatura durante a noite. Para odesenvolvimento, a reação é diluída com diclorometano e lavada com uma solução de10% de ácido cítrico aq., a fase orgânica é secada em sulfato de sódio, o solvente éremovido em um evaporador giratório e a mistura é secada a vácuo. 6.5 g (93.2% deteoria) do composto do título são obtidos.

LC-MS (Método 18): R, = 2.57 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 489 (100) [M+H]+, 977 (100)[2M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 487 (80) [M - H]", 975 (100) [2M - H]-.

Exemplo 75A

Resina clorotritiiica de ligação {N5-(benziíüxicarbonila)-N2-ÍÍS^fÍucrep.-g-iÍmetoxi)-carbonila]-D-ornitil}-L-isoleucil-[03-(íerf-butil)-L-alotreonU]-glicil-(/V4-tritil-L-asparagini[03-(terí-butil)-l_-serina]

<formula>formula see original document page 101</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 45A, 1000,0 mg, 1,49 mmol), conforme descrito no procedimento 7. Opentapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com oaminoácido protegido por Fmoc (exemplo 74A, 1455,9 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA(779 μl, 577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) e TBTU (956,8 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noitepara dar o hexapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O peptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após a retirada de uma amostra.

HPLC (Método 13) R, = 2,73 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3,27 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1316 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 1314 (100) [M+H]+.

Exemplo 76A

Resina clorotritílica de ligação {N2-[(9H-fluoren-g-ilmetoxiJcarbonilaJ-L-leucilH/V5-[(benziloxi)carbonila]-D-ornitil}-L-isoleucil-[03-(tert-butil)-L-alotreonil-(N4-tritil-L-asparaginil)-[03-(tert-butil)-L-serina]

<formula>formula see original document page 102</formula>

O grupo de proteção por Fmoc é removido do polímero(exemplo 75A, 1000,0 mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Ohexapeptídeo desprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucina (1053,2 mg, 2,98 mmol, 2 eq.), DIEA (779 μl,577,7 mg, 4,47 mmol, 3 eq.) and TBTU (956.8 mg, 2,98 mmol, 2 eq.) durante a noite paradar heptapeptídeo protegido por F-moc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7. O peptídeo protegido por cadeia lateral correspondente éconfirmado após a retirada de uma amostra.HPLC (Método 13) Rt = 2,84 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3,36 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1429 (95) [M+H]+, 1430 (100);MS (ESlpos): m/z (%) = 1427 (80) [M - H]", 1428 (100).

HR-TOF-MS (Método 24): CeiH75N6O11 [M+H]+ encontrados 1067,5488, calc. 1067,5489.

Exemplo 77 A

[(3R)-N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-[N5-(benziloxicarbonila)-D-ornitil]-L-isoleucil-[03-(ferí-butil)-L-alotreonil

<formula>formula see original document page 103</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 76A, 1000.0 mg, 1,49 mmol) conforme descrito no procedimento 7. Oheptapeptídeo desprotegido ligado à resina é então reagido com (3F?)-3-hidróxi-/V-(te/f-butoxicarbonila)-L-leucina [Oliyai, Reza, Siahaan, Teruna J., Stella1 Valentino J.; Pharm.Res.; EN; 12; 3; 1995; 323 - 328] (552,7 mg, 2,24 mmol, 1,5 eq.), DIEA (597 μΙ,442,9 mg, 3,43 mmol, 2,3 eq.) e TBTU (717,6 mg, 2,24 mmol, 1,5 eq.) durante a noitepara dar o octapeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre emanalogia ao procedimento 7.

O octapeptídeo ligado à resina é completamente removidodo polímero em uma solução de ácido acético, trifluoroetanol e diclorometano (1:1:3).Para o desenvolvimento, a resina é filtrada através de uma porceiana calcinada e ofiltrado é concentrado a vácuo e finalmente purificado por cromatografia (método 28).604.0 mg (28.3% de teoria) do composto do título são obtidos.

HPLC (Método 13) R, = 2.68 min.

HPLC (Método 1) R, = 3.15 min.

LC-MS (Método 18): Rt =3.26 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 1437 (100) [M+H]+; MS(ESlneg.): m/z (%) = 1435 (100) [M - H]".

Exemplo 78A

[(3R)-S-Hidróxi-L-leucill-L-leucil-[N5-(benziloxicarbonilaJ-D-ornitilJ-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato<formula>formula see original document page 104</formula>

O composto do título é preparado a partir do composto doexemplo 77A (200.0 mg, 0,14 mmol), conforme descrito no método do exemplo(exemplo 70A). Após conversão completa em RT (1 h), a solução é concentrada a vácuoem uma temperatura de banho de 30°C, concentrada uma vez com tolueno e uma vezcom cloreto de metileno a vácuo em uma temperatura de banho de 30°C, e finlmentepurificada de modo fino por RP-HPLC preparatório (método 26). São obtidos 121,0 mg(79,3% de teoria) de produto.

HPLC (Método 9) Rt = 13,26 min.

LC-MS (Método 22): R, = 3,04 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 981 (100) [M+H]+, 491 (10)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 979 (100) [M - H]".

Exenfipic 7SA

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-{(3R)-N3-(terf-butoxicarbonilaJ-S-amino-L-fenilalanilHíSRJ-S-hidróxi-L-leucil)-L-leucil-N5-benziloxicarbonila-D-ornitil]-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina<formula>formula see original document page 105</formula>

O composto do título é preparado a partir do octapeptídeo(exemplo 78A, 59,6 mg, 54,44 pmol), tripeptídeo ativado por ácido carboxílico(exemplo 40A, 50,0 mg, 59,89 µmol, 1,1 eq.) e usando ?/,N-diisopropilamina (57 µL,42,2 mg, 326,7 µmol, 6 eq.) conforme descrito no método do exemplo 56A). A reação élevada a conversão completa em RT durante a noite. Depois da purificação fina(método 26), são obtidos 52,9 mg (59,5% de teoria) de produto.HPLC (Método 10) Rt= 10,32 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 3.07 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1633 (40) [M+H]+, 817 (90)[M + 2H]2+, 767 (100); MS (ESlneg.): m/z (%) = 1631 (65) [M - H]", 761 (100).

HR-TOF-MS (Método 24): C80H123Ni4O22 [M+H]+ encontrados 1631,8898, calc.1631,8931.

Exemplo 80A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íerf-butil-D-alanil]-[3-fert-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenilalanil}-{(3R)-3-hidróxi-L-leucil}-L-leucil-[Ns-(benziloxicarbonila)-D-ornitil]-L-iL-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato<formula>formula see original document page 106</formula>

O composto do exemplo 79A (50,0 mg, 30,64 μmol) éconvertido em amina desprotegida de acordo com o procedimento 1. Depois depurificação fina (método 26), são obtidos 27,5 mg (54,5% de teoria) do composto dotítulo.

HPLC (Método 9) Rt = 21,85 min.

LC-MS (Método 20): Ri= 2,18 min; MS (ESlpos): m/z(%) = 1533 (20) [M+Hf, 766 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1531 (58) [M - H]", 764.(12) [Μ - 2H]2', 710 (100).HR-TOF-MS (Método 24): C75H114N14O20 [M+H]+ encontrados 1531,8385, calc. 1531,8407.

Exemplo 81A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-te/t-butil-D-alanil]-[3-fe/t-butil-L-alanil]-{(3R)-3-amino-L-fenil-alanilJ-tíSRJ-S-hídróxi-L-leucill-L-leucil-N5-(benziloxicarbonila)-D-ornitill-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C111-N33-Iactama<formula>formula see original document page 107</formula>

O composto do título é preparado de acordo com o métodode preparação (exemplo 58A) a partir do composto do exemplo 80A (25,0 mg,15,19 ymol), HATU (17,3 mg, 45,57 pmol, 3 eq.) and NMM (iu μι, 9.2 mg, 31,14 μΰιΰί). Aconversão completa é atingida após 3 dias a 4°C. São isolados 21,0 mg (91,3% de teoria)do produto após purificação fina (método 26).

HPLC (Método 9) R, = 26,28 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,98 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1514 (20) [M+H]+, 758 (100)[M + 2H]2+.

HR-TOF-MS (Método 24): C75H113N14O19 [M+H]+ encontrados 1513,8298, calc.1513,8301.

Exemplo 82A

Metil (2R*,3R*)-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilaamino]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-0-metiltirosinato<formula>formula see original document page 108</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éfornecida uma solução de 1 M LHMDS (213,3 mmol, 213,3 ml, 2,2 eq.) em THF nosolvente de reação THF (1,35 1). A -78°C, uma solução de metil (rac)-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-3-(4-metoxifenil)propanoato (D. M. Kalvin, R. W. Woodard, J. Org.Chem., 50, 13, 1985, 2259-2263) (30 g, 96.9 mmol) é adicionada lentamente porgotejamento. A mistura é agitada a -25°C durante 10 min e então resfriada novamenteaté -78°C. É adicionado azadicarboxilato dibenzílico (46,3 g, 155,2 mmol, 1,6 eq.) emuma parte da mistura de reação. A mistura é agitada a -60 até —45°C durante 2 h. A fimde paralisar a reação, a mistura é resfriada novamente até -78°C e é adicionado ácidoacético (29,1 ml, 484,9 mmol, 5 eq.) e a mistura é então aquecida até 0°C e finalmenteRT, A mistura de reação é evaporada a vácuo θ retirada em acetato etíüco (1000 ml). Asuspensão é lavada duas vezes com uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio, duasvezes com água, duas vezes com 5% de ácido cítrico aq. e uma vez com uma soluçãosat. aq. de cloreto de sódio. Todas as fases aq. são reextraídas separadamente comacetato etílico. Todas as fases org. são evaporadas a vácuo e novamente recolhidas emdiclorometano (2000 ml), filtradas, secadas em sulfato de magnésio, novamente filtradase evaporadas a vácuo. O resíduo é agitado com cicloexano, recolhido por filtragem esecado a alto vácuo. 25,7 g (44% de teoria) do composto do título são obtidos comosólido.

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,97 min.

HPLC/UV-Vis (Método 3): Rt = 5,00 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,87 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 508 (100), 608 (20) [M+H]+;MS (ESIneg.): m/z (%) = 532 (50), 606 (100) [M - H]".

Exemplo 83A

Metil (2S*,3R*)-N2-[benziloxicarbonila]-N2-[(benziloxicarbonila)amino]-3-[(tert-butoxi-carbonila)amino]-0-metiltirosinato<formula>formula see original document page 109</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éadicionado TMG (5,78 ml, 46,1 mmol, 11,2eq.) a uma solução de exemplo 82A (2,5 g,4,1 mmol) em DMF seco p.a. (87 ml) a 0°C. A mistura de reação é deixada descongelar eagitada até que o cromatograma HPLC (método 5) indique conversão completa (cerca de70% de produto) (cerca de 24 h), a fim de então paralisar a reação adicionando ácidoacético (pH 4-6). A mistura de reação é evaporada a vácuo em RT e recolhida em acetatoetílico. A fase orgânica é lavada duas vezes com água, duas vezes com 5% de ácidocitrico, uma vez com uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio, uma vez com soluçãosat. aq. de cloreto de sódio, secada em sulfato de magnésio, filtrada, evaporada a vácuoe secada a alto vácuo. O produto bruto é purificado por cromatografia rápida (gel de

silica, tolueno/acetato etilico 20:1) 1.89 g (73% de teoria) do composto do titulo saoobtidos.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 5,11 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,37 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 3.07 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 508 (100), 608 (20) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 532 (100), 606 (30) [M - H]".

IR vmax (NaCI, cm-1) : 3281, 2974, 1755, 1740, 1686, 1508, 1457, 1416, 1323, 1288, 1267,1208,1168,1137,1043,1027.

1H NMR (300 MHz, Cf6-DMSO): δ = 1,29 (s, 9H, íBu), 3,29 (s, 3H, OCH3), 3,72 (s, 3H,COOCH3), 4,80-5.20(m, 6H), 6,84 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,20-7,40 (m, 12H, ArH), 7,50-7,65(m, 1 Η, NH).

HR-TOF-MS (Método 24): C32H38N3O9 [M+H]+ calc. 608,2603, encontrados 608,2588.Exemplo 84A

Metil (+)-(2/^,3S)-N2-[benziloxicarbonila]-N2-[(benziloxicarbonila)amino]-3-[(fert-butoxi-carbonila)amino]-0-metiltirosinato<formula>formula see original document page 110</formula>

A mistura de enantiômeros do exemplo 83A (10,6 g,17,44 mmol) é separada por HPLC preparatório (método 39). São obtidos 4,18 g(99,5% ee, 79% de teoria) do composto do título e 5,2 g (99,5% ee, 98% de teoria) do (-)enantiômero (exemplo 85A).

Determinação de enantiômeros pelo método 15.

HPLC/UV-Vís (Método 15): Rt = 3,86 min.

M20Na = +54° (c = 0,24 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 5,11 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,23 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 3,07 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 508 (100), 608 (20) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 532 (100), 606 (30) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C32H38N3O9 [M+H]+ calc. 608,2603, encontrados 608,2592.

Exemplo 85A

Metil (-)-(2S,3R)-N2-[benziloxicarbonila]-N2-[(benziloxicarbonila)amino]-3-[(íert-butoxi-carbonila)amino]-0-metiltirosinatoA preparação ocorre em analogia ao exemplo 84A.

Determinação de enantiômeros pelo método 15.

HPLC/UV-Vis (Método 15): R, = 7,20 min.

[cx]20Na = -34° (c = 0,27 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 5,11 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,21 min.

LC-MS (Método 23): R, = 2,87 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 508 (100), 608 (90) [M+H]+;

MS (ESlneg.): m/z (%) = 532 (60), 606 (100) [Μ - Η]~.

HR-TOF-MS (Método 24): C32H38N3O9 [M+H]+ calc. 608,2603, encontrados 608,2594.

Exemplo 86A

Metil (2S*,3/R*)-3-[(tert-butoxicarbonil)amíno]-0-metiltirosinato

<formula>formula see original document page 111</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éadicionado níquel de Raney (cerca de 1 g) a uma solução dada no exemplo 83A (2,81 g,4,62 mmol) em metanol/diclorometano 1:1 (100 ml). A mistura de reação é hidrogenadaem uma autoclave pressurizada sob pressão de hidrogênio de 80 bar e em RT (12 h). Ocromatograma HPLC (método 8) mostra conversão completa. A mistura de reação éfiltrada em atmosfera protegora com gás argônio através de uma porcelana de vidrocalcinado/camada de diatomito e a porcelana de vidro calcinado é lavada várias vezescom metanol. O filtrado é evaporado a vácuo e secado a alto vácuo. O produto obtido éum sólido (1,50 g, quant.) o qual é ainda reagido sem purificação fina.HPLC/UV-Vis (Método 8): Rt = 3,66 min.

Exemplo 87A

Metil (+)-(2R,3S)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-0-metiltirosinato

<formula>formula see original document page 111</formula>Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éadicionado níquel de Raney (cerca de 0,8 g) a uma solução dada no exemplo 84A (4,00g, 6,58 mmol) em metanol/diclorometano 1:1 (100 ml). A mistura de reação éhidrogenada em uma autoclave pressurizada sob pressão de hidrogênio de 80 bar e emRT (72 h). A mistura de reação é filtrada em atmosfera protegora com gás argônioatravés de uma porcelana de vidro calcinado/camada de diatomito e a porcelana de vidrocalcinado é lavada várias vezes com metanol. O filtrado é evaporado a vácuo e recolhidoem acetato etílico. É adicionada uma solução de EDTA (2 g) em uma solução aq. com50% de bicarbonato de sódio (700 ml) à solução. A fase aquosa é extraída 5x com acetato etílico (100 ml). As fases orgânicas combinadas são então lavadas duas vezescom uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio e duas vezes com uma solução sat.aq. de cloreto de sódio. Todas as fases aq. são reextraídas separadamente com acetatoetílico. As fases org. combinadas são então secadas em sulfato de magnésio, filtradas esecadas a alto vácuo. O produto obtido é um sólido (1,04 g, 49% de teoria, 96% ee).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 7,8 min.

[a]20Na = +7.7° (c = 0.34 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,69 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,87 min.

LC-MS (Método 20): R, = 1,17 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 208 (90), 269 (100), 325 (40) [M+H]+.

IRvmax (NaCI, cm"1): 2933, 1737, 1709, 1611, 1511, 1365, 1243, 1164, 1030.

Exemplo 88A

<formula>formula see original document page 112</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éMetil (-)-(2S,3R)-3-[(íeAt-butoxicarbonil)amino]-0-metiltirosinatoadicionado níquel de Raney (cerca de 0,7 g) a uma solução dada no exemplo 85A (5,20g, 8,56 mmol) em metanol/diclorometano 1:1 (140 ml). A mistura de reação éhidrogenada em uma autoclave pressurizada sob pressão de hidrogênio de 80 bar e emRT (72 h). A mistura de reação é filtrada em atmosfera protegora com gás argônio através de uma porcelana de vidro calcinado/camada de diatomito e a porcelana de vidrocalcinado é lavada várias vezes com metanol. O filtrado é evaporado a vácuo e recolhidoem acetato etílico. A mistura é pré-purificada por cromatografia com gel de sílica(cicloexano/acetato etílico 3:1 -> 1:3) e separada por HPLC preparatório (método 31). Éobtido o composto do título (324 mg, 91% ee, 8% de teoria).

HPLC/UV-Vis (Método 16): Rt = 9,3 min.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,69 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,84 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,17 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 208 (90), 269 (100), 325 (40)[M+H]+.

1H NMR (500 MHz, Cf6-DMSO): δ = 1,37 (s, 9H, C(CH3)3), 3,53 (s, 3H, OCH3), 3,74 (s, 3H,OCH3), 4,26 (m, 1H, β-CH), 5,00 (t, J = 9,0 Hz1 1H, β-CH), 6,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H, ArH),7.23 (d, J= 8,0 Hz, 2H, ArH), 7,52 (d, J = 10,0 Hz, 1H, NH), 8,45 (br. s, 2H, NH2).

Exemplo 89A

Metil (2S*,3/?*)-/V2-[benziloxicarbonila]-3-[(íerf-butoxicarbonil)amino]-0-metiltirosinato

<formula>formula see original document page 113</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, sãoadicionados NaHCO3 (0,58 g, 6,94 mmol, 1,5 eq.) e tetra-N- iodeto de butilamônio(0,17 g, 0,47 mmol, 0,1 eq.) a uma solução de exemplo 86A (1,5 g, 4,62 mmol) eN-benziloxicarbonilaoxisuccinimida éster (1268 mg, 5,09 mmol, 1,1 eq.) emdiclorometano/água (1:2, 150 ml) a 0°C. A mistura de reação é aquecida (12 h), pelo queé observada conversão completa por HPLC (método 1). Uma solução de ácido cítrico(5%) é adicionada à solução. A fase aq. é extraída três vezes com diclorometano(100 ml). As fases orgânicas combinadas são então lavadas duas vezes com umasolução sat. aq. de bicarbonato de sódio e duas vezes com uma solução sat. aq. decloreto de sódio. As fases org. combinadas são então secadas em sulfato de magnésio,filtradas e secadas a alto vácuo. O produto obtido é o composto do título como um sólido(2,1 g, 99% de teoria).HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,73 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 4,68 min.

IRvmax (NaCI, cm"1) : 3356, 1737, 1680, 1514, 1242, 1161, 1026, 1004.1H NMR (500 MHz, cfe-DMSO): δ = 1,36 (s, 9H, C(CH3)3), 3,61 (s, 3H, OCH3), 3,73 (s, 3H,OCH3), 4,51 (dd, J = 9,5, 4,0 Hz, 1H, α-Η/β-Η), 4,94 (m, 2H, PhCH2O), 5,20 (dd, J = 10,0,4.0 Hz, 1 Η, «-H//7-H), 6,87 (d, J = 8,5 Hz, 2H, ArH), 7,15-7,22 (m, 4H, ArH), 7,29-7,37 (m,3H, ArH), 7,50 (d,J= 10,0 Hz1 1H, NH), 7,57 (d, J= 10,0 Hz1 1H, NH).13C NMR (126 MHz1 Cf6-DMSO): δ = 27,9, 51,9, 53,8, 54,9, 58,9, 65,4, 78,3, 113.,5, 126,8,127,3, 127,5, 127.,7, 128,2, 130,9, 136,6, 154,6, 155,9, 158,2, 170,6.

HR-TOF-MS (Método 24): C25H30N2O7 [M+H]+ encontrados 459,2140, calc. 459,2126.

Exemplo 90A

Metil (+)-(2R3S)-N2-[benziloxicarbonila]-3-[(ferí-butoxicarbonil)amino]-0-metiltirosinatométodo de prepração, por exemplo 89A (tempo de reação: 12 h). O produto bruto épurificado por HPLC preparatório (método 32). É obtido 1,4 g (61% de teoria, 96% ee) docomposto do título.

HPLC/UV-Vis (Método 16): Rt = 7,3 min.W20Na = +4.0° (c = 0,17 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,73 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 4,81 min.

IRvmax (NaCI, cm-1) : 3346, 1741, 1707, 1680, 1517, 1270, 1248, 1160, 1028, 1007.LC-MS (Método 23): Rt = 2,63 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 298 (100), 459 (30) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 383 (100), 457 (10) [M - H]"25 HR-TOF-MS (Método 24): C25H30N2O7 [M+H]+ encontrados 459,2128, calc. 459,2126.Exemplo 91A

O exemplo 87A (1,0 g, 3,08 mmol) é reagido em analogia aoMetil (-)-(2S,3R)-/V2-[benziloxicarbonila]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-0-metiltirosinato

<formula>formula see original document page 115</formula>

O exemplo 88A (0,32 g, 0,98 mmol) é reagido em analogiaao método de prepração, por exemplo 89A (tempo de reação: 12 h). O produto obtido é oproduto do título como um sólido (0,38 g, 85% de teoria).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 6,3 min.HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,73 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,81 min.

LC-MS (Método 23): R, = 2,60 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 298 (100), 459 (70) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 383 (100), 457 (10) [Μ - H]-.

Exemplo 92A

(2S*,3R*)-A/2-[Benziloxicarbonila]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-0-metiltírosÍna

<formula>formula see original document page 115</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éfornecida uma solução de exemplo 89A (759 mg, 1,69 mmol) em THF/água 2:1 (12 ml). A0°C, durante agitação vigorosa, uma solução aq. de monoidrato de hidróxido de lítio(81 mg, 3,39 mmol, 2,05 eq.) é adicionada lentamente por gotejamento. A mistura éagitada em RT até que o cromatograma por HPLC (método 5) indique conversãocompleta (cerca de 3 h). É adicionado subseqüentemente fosfato de hidrogênio depotássio (225 mg) e a mistura de reação é concentrada a vácuo e coberta com uma camada de acetato etílico (100 ml). A fase aq. é então acidificada com 5% de ácido cítrico(pH 2-3) e então extraída três vezes com acetato etílico (50 ml). As fases org.combinadas são lavadas duas vezes com uma solução sat. aq. de cloreto de sódio(20 ml), secadas em sulfato de sódio, filtradas, concentradas a vácuo e secadas a altovácuo. O compossto do título é obtido (735 mg quant.).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,45 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 2.33 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 389 (100), 445 (90) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 335 (60), 443 (100) [M - H]".

1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO): δ = 1,35 (s, 9H, C(CH3)3), 3.72 (s, 3H, OMe), 4,35-4,40 (m,1H, a-H), 4,94 (s, 2H, PhCH2O), 5,19 (dd, J = 10,0, 4.0 Hz, 1H, /?-H), 6,86 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,17-7,34 (m, 7H, ArH), 7,44-7,48 (m, 2H, 2 NH), 12,9 (s, br, 1H, CO2H).

Exemplo 93A

(+)-(3S)-N2-[Benziloxicarbonila]-3-[(ferf-butoxicarbonila)amino]-0-metil-D-tirosina

Método A: A mistura de enantiômeros do exemplo 92A (735 mg, 2,83 mmol) é separada por HPLC preparatório (método 40). São obtidos 319 mg (99,5% ee, 43% de teoria) docomposto do título e 307 mg (99,5% ee, 42% de teoria) do outro enantiômero (exemplo94A).

Determinação de enantiômeros pelo método 16.HPLC/UV-Vis (Método 16): Rt = 10,9 min. [cx]20Na = +8° (c = 0,04 in MeOH).HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,45 min.LC-MS (Método 21): Rt = 2,33 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 389 (100), 445 (90) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 335 (60), 443 (100) [M - H]~.

IR vmax (NaCI, cm"1) : 3358, 2978, 1705, 1683, 1615, 1515, 1245, 1167, 1027.

HR-TOF-MS (Método 24): C23H29N2O7 [M+H]+ encontrados 445,1976, calc. 445,1970.Método Β: O exemplo 93A (1,30 g, 2,83 mmol) é reagido em analogia ao método deprepração, por exemplo 92A (tempo de reação: 2 h). Como produto é obtido o compostodo título como produto sólido (0,61 g, 48% de teoria, 95% ee).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 10,9 min.

N20Na = +15° (c = 0,23 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,41 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,54 min.

HR-TOF-MS (Método 24): C23H28N2O7Na [M + Na]+ encontrados 467,1788, calc.467,1794.

Exemplo 94A

(-)-(3R)-N2-[Benziloxicarbonila]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-0-metil-L-tirosina

<formula>formula see original document page 117</formula>

Método A: Método de preparação conforme o exemplo 93A (método A)

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 13,3 min.

M20N3 = -10° (c = 0,12 em MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,45 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 2,33 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 389 (100), 445 (90) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 335 (60), 443 (100) [M - H]-.

HR-TOF-MS (Método 24): C23H29N2O7 [M+H]+ encontrados 445,1976, calc. 445,1970.

Método Β: O exemplo 90A (0.38 g, 0.84 mmol) é reagido em analogia ao método deprepração, por exemplo 92A (tempo de reação: 2 h). Como produto, é obtido o compostodo título como um sólido (0,132 g, 35% de teoria, 94% ee).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 13,3 min.[a]20Na = -5°(c = 0,1 iriMeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,41 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 4,49 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,38 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 389 (100), 445 (100) [M+H]+;

MS (ESlneg.): m/z (%) = 335 (60), 443 (100) [M - H]".

13C NMR (126 MHz, C16-DMSO): δ = 28,0, 53,9, 54,9, 58,8, 65,2, 78,2, 113,4, 127,2, 127,3,127,6, 128,1, 128,2, 131,7, 136,8, 154,7, 156,0, 158,1, 171,4.

HR-TOF-MS (Método 24): C23H29N2O7 [M+H]+ encontrados 445,1966, calc. 445,1970.

Exemplo 95A

2-lsopropil-5-metilcicloexil (1 S,2R,5R)-[(3S)-N2-[benziloxicarbonila]-3-[(terí-butoxicarbonila)amíno]]-0-metil-D-tirosinato

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éfornecida uma solução do exemplo 93A (34 mg, 76 μmol, 1 eq.) e (1S,2R,5S)-(+)-mentol(12 mg, 76 μmol, 1 eq.) em diclorometano. A 0°C, é adicionado DMAP (17,3 mg, 84 μιηοΙ,1,1 eq.) e uma solução de DCC (17,3 mg, 84 μmol, 1,1 eq.) em diclorometano (0,5 ml) éadicionada lentamente por gotejamento. A mistura é agitada em RT até que ocromatograma por HPLC (método 5) indique conversão completa (cerca de 2 h). Amistura de reação é filtrada subseqüentemente através de diatomito e concentrada avácuo e é adicionado acetato etílico/éter de petróleo 3:1. Precipita-se um sólido brancoque é removido por filtragem. O filtrado é concentrado e pré-purificado por cromatografiacom gel de sílica (éterde petróleo/acetato etílico 3:1). A purificação é por HPLCpreparatório (método 43). O composto do título (17 mg, 38% de teoria) é obtido.

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 5,74 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,72 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 3,46 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 483 (100), 527 (80), 583 (40)[M+H]+.1H NMR (500 MHz1 Ci6-DMSO): δ = 0,71 (d, 3Η, J =7 Hz, CH3), 0,81 (d, 3H, J =7 Hz1 CH3),0,81-0,84 (m, 3H), 0,87 (d, 3H, J =7 Hz, CH3), 1,00-1,06 (m, 1H), 1,22-1,28 (m, 1H), 1,35(s, 9H, C(CH3)3), 1,61-1,70 (m, 3H), 1,89-1,92 (m, 1H), 3,72 (s, 3H, OMe), 4,49 (dd, 1H,J = 4,5, 9,5 Hz1 β-Η), 4,59 (dt, J = 4,0, 11,0 Hz, 1H, O-CH), 4,91 (d, J= 12,0 Hz, 1H,PhCH2O), 4,97 (d, J = 12,0 Hz, 1H, PhCH2O), 5,17 (dd, J = 4,5, 9,5 Hz1 1H, β-Η), 6,86 (d,2H, J= 9,0 Hz, ArH), 7,16-7,24 (m, 4H, ArH), 7,28-7,34 (m, 3H, ArH), 7,46 (d, 1H, J =8,0 Hz, NH), 7,55 (d, 1H, J = 8,0 Hz, NH).Exemplo 96A

2-(TrimetiIsilil)etil (+)-(3S)-/V2-[benziloxicarbonila]-3-[(íerf-butoxicarbonila)amino]-0-metil-D-tirosinato

<formula>formula see original document page 119</formula>

Uma mistura de exemplo 93A (261 mg, 0,59 mmol), 2-(trimetilsilil)etanol (694 mg, 5,87 mmol, 10 eq.) e peneiras moleculares 4 A (cerca de20 mg) em diclorometano seco p.a. (10 ml) é agitada em uma atmosfera de proteção comgás argônio em RT durante 10 min. Subseqüentemente, são adicionados a -30°C, DCC(244 mg, 1,17 mmol, 2 eq.) e DMAP (71 mg, 0,59 mmol, 1 eq.). A mistura de reação édeixada descongelar (cerca de 12 h) e é agitada em RT até que o cromatograma HPLC(método 5) indique conversão completa (12 h). A mistura de reação é evaporada a vácuoem RT e purificada por cromatografia com gel de sílica (éter de petróleo/acetato etílico3:1). É obtido 244 mg (76% de teoria, 99% ee) do composto do título.HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 8,2 min.W20Na = +10o (c = 0,1 in MeOH).HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 5,34 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,42 min.IR Vmax (NaCI1 cm"1): 3361, 2931, 2118, 1735, 1706, 1681, 1515, 1247, 1165, 1019.LC-MS (Método 21): Rt = 3,16 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 166 (100), 545 (15) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C28H4IN2O7Si [M+H]+ encontrados 545,2678, calc. 545,2678.

Exemplo 97A

2-(Trimetilsilil)etil (-)-(3R)-N2-[benziloxicarbonila]-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-0-metil-L-tirosinato

<formula>formula see original document page 120</formula>

O exemplo 94A (130 mg, 0,29 mmol) é reagido em analogiaao método de prepração, por exemplo 96A (tempo de reação: 12 h). Como produto, éobtido o composto do título como um sólido (149 mg, 94% de teoria, >99,5% ee).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R, = 7,2 min.

M20Na = -9° (c = 0,1 in MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 5,34 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 5,32 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 3,24 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 545 (100) [M+H]+.

Exemplo 98A

2-(Trimetilsilil)etil (+)-(3S)-3-amino-N2-[benziloxicarbonil]-0-metil-D-tirosinatotrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 120</formula>

O exemplo 96A (222 mg, 0,41 mmol, 1 eq.) é suspenso emdiclorometano (3 ml) e subseqüentemente, em uma atmosfera de proteção com gásargônio, é adicionado trifluoroácido acético (9 ml) e a mistura é agitada em RT durante15 min até que o cromatograma HPLC demonstre conversão completa (método 5). Osolvente é então destilado a vácuo, durante o que a temperatura do banho não deveexceder 30°C. O produto bruto é purificado por HPLC preparatório (método 43). Sãoobtidos 179 mg (79% de teoria, >99,5% ee) do composto do título.

HPLC/UV-Vis (Método 16): Rt = 8,66 min.

N20Na = +20° (c = 0,22 em MeOH).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,33 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,55 min.

IR vmax (NaCI, cm"1): 2956, 1672, 1613, 1518, 1251, 1181, 1138, 1029.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,18 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 225 (100), 549 (100) [M+H]+.1H NMR (500 MHz, ck-DMSO): δ = -0,07 (s, 9H, Si(CH3)3), 0,43-0,52 (m, 2H, CH2Si), 3,75(s, 3H, OMe), 3,74-3,78 (m, 1H, CH2CH2Si), 3,82-3,88 (m, 1H, CH2CH2Si), 4,38-4,42 (m,1H, β-Η), 4,58 (tapp, J = approx.9,0 Hz, 1H, a-H), 5,08 (s, 2H, PhCH2O), 6,98 (d, 2H, J =8,5 Hz, ArH), 7,34-7,40 (m, 8H, ArH), 8,07 (d, 1H, J = 8,0 Hz1 NH), 8,49 (s, br, 2H, 2 NH).13C NMR (125 MHz, Ci6-DMSO): δ = -1,8 (3C, (Si(CH3)3)), 16,3 (CH2Si), 54,5 (C^)1 55,1(Ca)l 57,7 (OMe), 62,9 (CH2CH2Si)1 66,0 (PhCH2O), 113,9 (2C), 125,3, 127,8 (2C), 127,9,128,3 (2C), 129,4 (2C), 136,4, 155,8 (CO2Bn)1 159,9, 168,9 (CO2TMSE).HR-TOF-MS (Método 24): C23H33N2O5Si [M+H]+ encontrados 445,2168, calc. 445,2154. Exemplo 99A

2-(Trimétilsilil)etil (-)-(3.9)=3=3minc-AA[benzi!oxicarbonil]-0-metil-L-tirosinatotrifluoroacetato

O exemplo 96A (120 mg, 0,22 mmol) é reagido em analogiaao método de prepração, por exemplo 98A (tempo de reação: 50 min). Como produto, éobtido o composto do título como um sólido (71 mg, 56% de teoria, >99,5% ee).

HPLC/UV-Vis (Método 16): R1 = 7,49 min.

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,33 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,50 min.IRvmax (NaCI, cm-1): 2956, 1672, 1613, 1518, 1251, 1181, 1138, 1029.HR-TOF-MS (Método 24): C23H33N2O5Si [M+H]+ encontrados 445,2151, calc. 445,2154.

Exemplo 100A

[(3R)-A/2-(terí-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-Wglicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 122</formula>

Método A: Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, são adicionados di-íerf-butildicarbonato (369 mg, 1,69 mmol, 2,5 eq.) e A/-metilmorfolina (68 mg, 680 μητιοΙ, 1 eq.)a uma solução do produto de degradação a partir do exemplo 3A (690 mg, 680 Mmol) emágua-dioxano 1:2 (30 ml). A mistura de reação é agitada até que o cromatograma HPLC(método 1) demonstre conversão completa (cerca de 48 h). É adicionado fosfato dediidrogênio de potássio (5 eq.) à mistura de reação e a mistura é concentrada a vácuo epurificada por HPLC preparatório (método 43 ou método 30 seguido de uma metatese desal do produto da cromatografia adicionando TFA (2000 μmol, como uma solução de0,05% em acetonitrilo-água 1:1)). 531 mg (70% de teoria) do composto do título sãoobtidos.

Método Β: O trifluoroacetato precursor de Edman3,0 (100 mg, 0,1 mmol, 1 eq.) éprimeiramente cromatografado por gel (método 45, MeOH, 0,2% TFA). É adicionado di-terf-butil dícarbonato (43 mg, 0,2 mmol, 2 eq.) a uma solução deste material em água(1 ml) e dioxano (2 ml) em RT e é adicionado NMM (21,6 μL 0,2 mmol, 2 eq.) porgotejamento. A mistura de reação é agitada em RT até que (cerca de 12 h) omonitoramento analítico HPLC (método 8) indique conversão suficiente (>99%). Éadicionado fosfato de diidrogênio de potássio (67 mg, 0,49 mmol, 5 eq.), a mistura dereação é concentrada em um evaporador giratório e então purificada de modo fino porHPLC preparatório (método 26). 83 mg (76% de teoria) do composto do título sãoobtidos.

[a]20Na = -18,0° (c = 0,19 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 2): Rt = 1,7 min.

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,57 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,79 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1,70 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 453 (100), 1005 (80) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1003 (100) [M - H]".

LC-MS (Método 23): Rt= 4,6 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 453,5 (60) [M-C4H8-CO2 + 2H]2+, 1006 (100) [M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1004 (100) [M - H]".IR vmax (NaCI, cm-1): 3288, 2966, 2359, 2341, 1645, 1520, 1368, 1160, 1137, 1054.1H NMR (500 MHz1 ds-piridina) δ = 9,72 (br. s, 1H, NH-GIu6), 9,31 (br d, J = aprox. 7,0 Hz,1H1 NH-Arg3), 9,23 (d, J = 6,0 Hz, 1H, NH-Leu2), 9,19 (br. s, 1H, εΝΗ-Arg3), 9,00 (d, J =9,0 Hz, 1H, ΝΗ-βΟΗ-Asn7), 8,88 (d, J= 7,0 Hz, 1H, NH-Thr5), 8,78 (d, J= 7,0 Hz1 1H, NH-Ile4), 8,64 (d, J= 7,5 Hz, 1H, NH-Ser8), 8,40 (br. s, 1H, NH2-POH-Asn7), 8,34 (br. s, 1H,NH2-POH-Asn7), 5,96 (d, J= 8,0 Hz, 1H, cxCH-pOH-Asn7), 5,51 (s, 1H, pCH-pOH-Asn7),5,11-5,09 (m, 1H, aCH-Ser8), 5,04 (t, J= 7.,5 Hz, 1H, aCH-Thr5), 4,95-4,91 (m, 3H, aCH-Arg3 e aCH-pOH-Leu1 and aCH-Leu2), 4,82 (t, J= 7,0 Hz, 1H, aCH-lle4), 4,71-4,66 (m,1H, pCH-Thr5), 4,44 (dd, J = 4,5 e 10,5 Hz, 1H, pCH-Ser8), 4,31-4,26 (m, 3H, PCH-Ser8 epCH-pOH-Leu1 e aCH-Gly6), 4,20 (dd, J=6,0e 16,5 Hz, 1H, aCH-Gly6), 3,43 (br d, J =aprox. 6,0 Hz, 2H, ÔCH-Arg3), 2,39-2,36 (m, 2H, pCH-Arg3 e pCH-lle4), 2,27-2,20 (m, 1H,PCH-Arg3), 2,10-2,05 (m, 2H, yCH-pOH-Leu1 and yCH-Arg3), 1,93-1,79 (m, 4H, pCH-Leu2,yCH-Leu2, yCH-Arg3 e yCH-lle4), 1,55 (d, J= 6,0 Hz, 3H, yCH3-Thr5), 1,45 (s, 9H, O-fBu),aprox. 1,47 (oculto, 1H, yCH-lle4), 1,17-1,15 (m, 4H, 5CH3-pOH-Leu1 e yCH-lle4), 1,05 (d,J= 6,0 Hz1 3H, 5CH3-pOH-Leu1), 1,05 (t, J= 7,0 Hz, 3H, 5CH3-lle4), 0,80 (d, J= 6,0 Hz,3H, ÔCH3-Leu2), 0,78 (d, J = 6,0 Hz, 3H, SCH3-Leu2).

13C NMR (125 MHz, ds-piridina) δ = 175,58 (yCO-pOH-Asn7), 174,23 (CO-pOH-Leu1),173,97 (CO-Arg3), 173,89 (CO-Ser8 ou CO-Leu2), 173,69 (CO-Thr5)1 173,55 (CO-Ser8 ouCO-Leu2), 172,48 (CO-IIe4)1 170,90 (CO-pOH-Asn7), 170,50 (CO-GIy6)1 158,67 ^C-Arg3),157,06 (CO-Boc), 79,13 (C-Boc), 77,09 (pCH-pOH-Leu1), 72,29 (pCH-pOH-Asn7), 68,32(PCH-Thr5), 63,24 (pCH-Ser8), 59,79 (aCH-lle4), 59,60 (aCH-Thr5), 58,35 (aCH-pOH-Leu1), 57,11 (aCH-pOH-Asn7), 56,94 (aCH-Ser8), 54,06 (aCH-Arg3), 53,60 (aCH-Leu2),44,32 ((XCH2-GIy6), 41,75 (ÔCH2-Arg3), 40,41 (PCH2-Leu2)1 36,70 (pCH-lle4), 31,56 (yCH-βΟΗ-Leu1), 29,47 (PCH2-Arg3)1 28,48 (Me3-Boc)1 26,11 (yCH-Arg3), 25,74 (yCH2-lle4),24,93 (yCH-Leu2), 22,94 (ÔCH3-Leu2), 21,71 (SCH3-Leu2)1 21,20 (yCH-Thr5), 19,48 (ÔCH3-POH-Leu1), 19,43 (ôCHrpOH-Leu1), 16,02 (yCH-lle4), 11,20 (SCH3-IIe4).HR-TOF-MS (Método 24): C42H77N12Oi6 [M+H]+ encontrados 1005,5560, calc. 1005,5576.

Exemplo 101A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2.1-butoxicarbonila[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alothreonM-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3S)-3-amino-O-metil-D-tirosina (2-(trimetilsilil)etil) éster trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 124</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, éadicionado primeiramente HATU (2,5 eq., 71 mg, 186 pmol) a uma solução de exemplo98A (1,2 eq., 50 mg, 89 Mmol), do ácido octapeptídeo (exemplo 100A, 1,0 eq., 83 mg,Mmol) e A/-metilmorfolina (3,5 eq., 29 μmol) em dimetilformamida seca (0,5 ml) a 0°C.A mistura de reação é agitada a 0°C (cerca de 3 h). A mistura de reação então demonstraconversão completa do componente amina (monitoramento HPLC, método 5). Éadicionado fosfato de diidrogênio de potássio sólido (101 mg, 746 Mmol, 10 eq.) à misturade reação e a mistura é filtrada e então evaporada a alto vácuo e purificada porcromatografia (método 43). São obtidos 96,5 mg (84% de teoria) de produto.N20Na = -6° (c = 0,04 em metanol).HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,47 min.HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,88 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2.26 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 652 (100), 1432 (50) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1430 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C65H107N14O20Si [M+H]+ encontrados 1431,7570, calc.1431,7550.

Exemplo 102A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2^^íerf-butoxicarbonilaKa^-S-hidróxi-L-leucill-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3R)-3-amiO-metil-L-tirosina (2-(trimetilsilil)etil) éster trifluoroacetato<formula>formula see original document page 125</formula>

O exemplo 99A (65 mg, 0.116 mmol) é reagido em analogiaao método de prepração, por exemplo 101A (tempo de reação: 150 min). Gomo produto,é obtido o composto do título como um sólido (111 mg, 74% de teoria).

N20Na = -17° (c = 0,09 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,47 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,87 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2.16 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 652 (100), 1432 (60) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1430 (100) [M - H]".HR-TOF-MS (Método 24): C65H107N14O20Si [M+H]+ encontrados 1431,7509, calc.1431,7550.

Exemplo 103A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2,-terí-butoarginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3S)-3-amimetil-D-tirosina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page </formula>

O exemplo 101A (96 mg, 62 Mmol) é fornecido em THF seco(4 ml) em uma atmosfera de proteção com gás argônio. Durante agitação vigorosa emRT, é adicionada uma solução de 1 N TBAF-THF (310 μl, 5 eq.) por gotejamento. Sãoadicionadas outras partes de TBAF (cada 5 eq.) a intervalos regulares de 30 min. Depoisde cerca de 45 eq., o cromatograma HPLC (método 5) demonstra conversão completa. Amistura de reação é então neutralizada com fosfato de diidrogênio de potássio (253 mg,cerca de 30 eq.). A mistura de reação é filtrada, evaporada a vácuo e purificada porHPLC preparatório (método 43). 83 mg (93% de teoria) do composto do título sãoobtidos.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rf = 3,93 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,27 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,00 min; MS (ESlpos.): m/z (%) =616 (100), 1332 (20) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1330 (100) [M - H]~.

HR-TOF-MS (Método 24): C60H95N14O20 [M+H]+ encontrados 1331,6844, calc. 1331,6842.

Exemplo 104A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2,-ferf-butoxicarbonila[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leuciarginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3^)-3-amino-0-metil-L-tirosina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 126</formula>

O exemplo 102A (105 mg, 0,068 mmol) é reagido emanalogia ao método de preparação para o exemplo 103A (total de 45 eq. de TBAF).Como produto, é obtido o composto do título como um sólido (90 mg, 99% de teoria).M20Na = -9o (c = 0,135 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,93 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 4,15 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,80 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 616 (100), 1332 (40) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 664 (60), 1330 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C60H95N14O20 [M+H]+ encontrados 1331,6840, calc. 1331,6842.

Exemplo 105A

(Benziloxicarbonila)-A^-ítíSRJ-S-hidróxi-L-leucill-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3S)-3-amino-0-metil-D-tirosinatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 126</formula><formula>formula see original document page 127</formula>

De acordo com ο método 1, ο exemplo 103Α (10 mg,7 μmol) é reagido em uma atmosfera de proteção com gás argônio. São obtidos 9,3 mg(99,9% de teoria) do composto do título após secagem por congelamento.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,47 min.

LC-MS (Método 18): R,= 1,50 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 616 (100), 1232 (5) [M+H]+;

MS (ESlneg.): m/z (%) = 1230 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H87N14O18 [M+H]+ encontrados 1231,6300, calc. 1231,6318.

Exemplo 106A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2-tert-butoxicarbonila[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3R)-3-amino-0-metil-L-tirosina

<formula>formula see original document page 127</formula>

De acordo com o procedimento 1, o exemplo 104A (240 mg166 μmol) é reagido em uma atmosfera de proteção com gás argônio, sendo que apóssecagem por congelamento, são obtidos 116 mg (57% de teoria) do composto do título.N20Na = -24° (c = 0,07 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,47 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,83 min.LC-MS (Método 18): Rt= 1,51 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 616 (100), 1232 (5) [M+H]+;MS (ESIneg.): m/z (%) = 1230 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H87N14O18 [M+H]+ encontrados 1231,6361, calc. 1231,6318.

Exemplo 107A

N2.1,-(Benziloxicarbonila)-[(3S)-3-amino-0-metil-D-tirosil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leuciD-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N31-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 128</formula>

HATU (1,5 mg, 8 μπιοΙ, 5 eq.) é adicionado primeiramente auma solução de exemplo 105A (1,9 mg, 2 μιτιοΙ, 1 eq.) e NMM (1,7 μΙ_, 15 μπιοΙ, 10 eq.)em DMF seco (200 μΙ) a 0°C em uma atmosfera de proteção com gás argônio. A misturade reação é agitada a 0°C (cerca de 90 min). A mistura de reação então demonstraconversão completa do componente amina (monitoramento HPLC, método 5). Éadicionado fosfato de diidrogênio de potássio sólido (20 eq., 4,2 mg, 31 μιηοΙ) e a misturade reação é filtrada e então evaporada a vácuo e purificada por cromatografia(método 45). São obtidos 1,8 mg (96% de teoria) de produto.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,65 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): R, = 3,91 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1,67 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 1214 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C55H85N14O17 [M+H]+ encontrados 1213,6232, calc. 1213,6312.

Exemplo 108A

N2,-(Benziloxicarbonila)-[(3R)-3-amino-0-metil-L-tyrosil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N3,1-lactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 129</formula>

O exemplo 106Α (120 mg, 0,097 mmol) é reagido emanalogia ao método de preparação para o exemplo 107A (tempo de reação 1 h). Ocomposto do título é obtido como um sólido (39 mg, 33% de teoria).

W20Na = -58° (c = 0,07 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,71 min.

HPLC/ÜV-vis (Método 4): Rt = 3,96 min.

LC-MS (Método 18): R,= 1,74 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 1214 (100) [M+H]+; MS(ESlneg.): m/z (%) = 1212 (100) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H85N14O17 [M+H]+ encontrados 1213,6227, calc. 1213,6312.

Exemplo 109A

[(3S)-3-Amino-0-metil-D-tyrosil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-iso-leucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N31-Iactama bistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 0</formula>

O exemplo 107A (65 mg, 49 μmol) é dissolvido em metanol(5 ml) e em uma atmosfera de proteção com gás argônio, são adicionados 10 porcentode paládio-carbono (10 mg) assim como 1 N de ácido clorídrico aquoso (250 μl). Ahidrogenação é realizada em RT e sob pressão atmosférica até que (cerca de 90 min) oHPLC analítico (método 5) indique conversão completa. A mistura de reação é filtrada(através de diatomito, Celite® ou em um filtro de seringa, Biotage, PIFE), concentrada avácuo e purificada por cromatografia (método 43). 40.6 mg (63% de teoria) do compostodo título são obtidos.

[a]20Na = -21 ° (c = 0,06 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,28 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,55 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1,20 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 540 (100), 1079 (20) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1077 (100) [M - H]"

HR-TOF-MS (Método 24): C47H78N14O15 [M+H]+ encontrados 1079,5835, calc. 1079,5844.

Exemplo 11OA

[(3R)-3-Amino-0-metil-L-tirosil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-iso-leucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N3, '-Iactamabistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 131</formula>

O exemplo 108A (12 mg, 9 μmol) é reagido em analogia aométodo de preparação para o exemplo 109A (tempo de reação 90 min). Como produto, éobtido o composto do título como um sólido (10,3 mg, 87% de teoria).

[a]20Na = -52° (c = 0,03 em metanol).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,18 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,25 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 540 (100), 1079 (5) [M+H]+;MS (ESlneg.): m/z (%) = 1077 (100) [M - H]".

Exemplo 111A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íe/t-butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3S)-3-amino-0-metil-D-tirosil)]-[(3/R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N3 3-Iactama trifluoroacetato<formula>formula see original document page 132</formula>

HATU (2,2 mg, 6 pmol, 2,5 eq.) é primeiramente adicionadoa uma solução de exemplo 109A (3,0 mg, 2 pmol, 1,0 eq.), o ácido de dipeptídeo(exemplo 10A, 2,3 mg, 6 μιποΙ, 2,5 eq.) e NMM (11 pmol, 5 eq.) em DMF seco (1 ml) a -30°C em uma atmosfera de proteção com gás argônio. A mistura de reação é agitada eaquecida lentamente (cerca de 1 h) até 0°C. São adicionados NMM (6 μιτιοΙ, 2,5 eq. decada vez) e HATU (6 μηποΙ, 2,5 eq. de cada vez) à mistura de reação a intervalosregulares (30 min) até que o monitoramento HPLC (método 5) indique a conversãocompleta do componente amina. No total, são necessários cerca de 20 eq. de NMM eHATU para isso. É adicionado fosfato de diidrogênio de potássio sólido (9,4 mg, 69 μηηοΙ,30 eq.) e a mistura de reação é filtrada e então evaporada a alto vácuo e purificada porcromatografia (método 43). São obtidos 2 mg (55% de teoria) de produto.

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 4,2 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 4,49 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,07 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 734 (100) [M + 2H]2+, 1468(20) [M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 678 (100), 732 (5) [Μ - 2H]2", 1466 (10) [M - H]".HR-TOF-MS (Método 24): C69H111N16O19 [M+H]+ encontrados 1467,8228, calc.1467,8206.

Exemplo 112A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íeAí-butil-D-alanil]-[3-terí-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-0-metil-L-tirosil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N3,3-Iactama trifluoroacetato<formula>formula see original document page 133</formula>

Preparação em analogia ao exemplo 111A a partir docomposto do exemplo 109A (30 mg, 23 μmol) e o composto do exemplo 10A (23,3 mg,57 μmol, 2,5 eq.). O produto bruto é purificado por cromatografia (método 43), pelo queapós secagem por congelamento, são obtidos 25 mg (69% de teoria) de produto comoum sólido.

[a]20Na = -62° (c = 0,06 em metanol).HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 4,4 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,31 min.

MS (ESlpos.): m/z (%) = 734 (100) [M + 2H]2+, 1468 (20) [M+H]+;

MS (ESlneg.): m/z (%) = 678 (70), 733 (100) [Μ - 2H]2" 1466 (10) [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C69H111N16O19 [M+H]+ encontrados 1467,.8206, calc.1467,8206.

Exemplo 113A

3-Amino-3-(4-bromofenil) ácido propiônico

<formula>formula see original document page 133</formula>

4-Bromobenzaldeído (50,0 g, 270 mmol), ácido malônico(28,1 g, 270 mmol) e acetato de amônio (27,7 g, 359 mmol, 1,3 eq.) são dissolvidos emetanol (400 ml). A mistura é aquecida em refluxo durante 16 h. O sólido resultante érecolhido em um funil de filtro de vidro, coletado por filtragem com sucção e lavado cometanol. O resíduo é então recristalizado a partir do metanol (80 ml). É subseqüentementetriturado com acetato etílico e coletado por filtragem com sucção. São obtidos 41,0 g(0,16 mmol, 62% de teoria) do composto do título como um sólido cristalino incolor.HPLC (Método 5): R, = 3,13 min.

LC-MS (Método 20): R, = 0,97 min, MS (ESlneg.): m/z (%) = 242,0 (100) and 244,0 (80)[M - H]-.

1H NMR (300 MHz, Cf6-DMSO) δ = 2,36-2,38 (m, 2H, 2-H), 4,25 ("t", J = 6,8, 7,6 Hz1 2H, 3-H), 6,56 (d,J = 16,1 Hz, 1H, N-H), 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 1H, M-H), 7,52-7,71 (m, 4H, arom. H).

13C-NMR (126 MHz1 DCOOD) δ = 36,5 (CH2, C-2), 51,9 (CH, C-3), 123,7 (C quat), 129,2(CH), 132,4 (CH), 133,5 (C quat), 174,0 (C quat, C-1).

HR-TOF-MS (Método 24): C9H11NO2Br [M+H]+ calc. 243,9968, encontrados 243,9980.

Exemplo 114A

Metil 3-amino-3-(4-bromofenil) hidrocloreto de propionato

<formula>formula see original document page 134</formula>

41,0 g (157 mmol) do composto 113A são colocados emsuspensão em metanol (1000 ml) em uma atmosfera de proteção com gás argônio. Sãoadicionados 102 ml (410 mmol, 2,6 eq.) dè 4 M ácido clorídrico em 1,4-dioxano. Omaterial de início dissolve espontaneamente com a adição de ácido clorídrico e a misturaé agitada em RT durante a noite. A mistura é então concentrada até secagem a vácuo. Éobtido o produto (51,8 g, pureza de cerca de 69%, rendimento de 77% de teoria) comoum sólido e empregado sem mais purificação na próxima etapa.

HPLC (Método 5): Rt = 3,35 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,24 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 240,9 (20) e 242,8 (20) [M -NH2 + H]+.

1H NMR (300 MHz, CZ6-DMSO) δ = 2,99 (dd, J2j3 = 8,7 Hz, J2l2 = 16,4 Hz1 1H, 2-HA), 3,16(dd, J2,3 = 4,0 Hz, J2,2 = 16,4 Hz, 1H, 2-HB), 3,56 (s, 3H, OCH3), 4,62 (br. s, 1H, 3-H), 7,49(d, J = 8,5 Hz, 2H, 2'-H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 2H, 2'-H), 8,64 (br. s, 2 H, NH2).13C-NMR (126 MHz, CDCI3) δ = 43,8 (CH2, C-2), 51,8 (CH3, OCH3), 52,1 (CH, C-3), 121,2(C quat, C-4'), 128,0 (CH, C-arom.), 131,7 (CH, C-arom.), 143,6 (C quat, C-1'), 172,2 (Cquat, C-1).

HR-TOF-MS (Método 24): C10H13NO2Br [M+H]+ calc. 258,0125, encontrados 258,0119.

Exemplo 115A

Metil N-butoxicarbonila-3-amino-3-(4-bromofenil)propionato

<formula>formula see original document page 135</formula>

O composto 114A (51,8 g, 121 mmol, 69% de pureza) édissolvido em 1,4-dioxano/água (2:1, 540 ml). São adicionados dicarbonato di-ferf-butílico(29,1 g, 133 mmol, 1,1 eq.) e trietilamina (38,8 ml, 28,22 g, 2,3 eq.) e a mistura é agitada em RT durante 150 min. O dioxano é destilado a vácuo e são adicionados 150 ml deacetato etílico e 200 ml de uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio. Parte doproduto 115A precipita espontaneamente e é isolada por filtragem. As fases do filtradosão separadas e a fase orgânica é lavada com 0,5 M de ácido cítrico, secada em sulfatode sódio e concentrada. Uma outra fração 115A é obtida a partir do resíduo por trituração com metanol. Rendimento Total: 32,9 g (92 mmol, 76% de teoria) do composto do títulocomo sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 4,80 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2.37 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 358,0 (15) e 360,0 (15)[M+H]+.

1H NMR (300 MHz, CZ6-DMSO) δ = 1,34 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,62-2,79 (m, 2H, 2-H), 3,55(s, 3H, OCH3), 4,87 (dd, J1 = 7,9 Hz, J2 = 15,1 Hz, 1H, 3-H), 7,26 (d, J2_3· = 8,3 Hz, 2H, 2'-

H), 7,51 (d, J2., 3· = 8,3 Hz, 2H, 3'-H).13C-NMR (126 MHz, CDCI3) δ = 28,3 (CH3, COC(CH3)3), 40,4 (CH2, C-2), 50,6 (CH, C-3),51,9 (CH3, OCH3), 79,9 (C quat, COC(CH3)3), 121,4 (C quat, C-4'), 127,9 (CH, C-arom.),25 131,7 (CH, C-arom.), 140,3 (C quat, C-1'), 155,0 (C quat, COC(CH3)3, 171,2 (C quat, C-I).

d HR-TOF-MS (Método 24): C15H21NO4Br [M+H]+ calc. 358,0649, encontrados 358.0659.

Exemplo 116A

Metil (S)-N-butoxicarbonila-3-amino-3-(4-bromofenil)propionato<formula>formula see original document page 136</formula>

O composto racêmico 115A é separado no composto dotítulo (96% ee) e no outro enantiômero (>99% ee) por HPLC quiral (método 42). 750 mgde 115A são carregados por rodada. O (S) enantiômero (exemplo 116A) e o (R)enantiômero são isolados quantitativamente em 50% de teoria em cada caso.Determinação de enantiômeros pelo método 17.HPLC/UV-VIS (Method 17): Rt = 4,31 min. (composto do título)N20Na = -38,6 (c = 1,0, MeOH). (composto do título)HPLC/UV-VIS (Method 17): Rt = 3,82 min. (mais um enantiômero)[oc]20Na = + 36,8 (c = 1,0, MeOH). (mais um enantiômero)

Exemplo 117A

Metil (S)-N-butoxicarbonila-3-amino-3-(4-dimetilaminofenil)propionato

<formula>formula see original document page 136</formula>

Ao realizar essa reação, deve-se tomar cuidado para queoxigênio e a umidade sejam exluídos estritamente e os reagentes mantidos em umaatmosfera de proteção seca com gás argônico, porque, caso contrário, ocorre somenteuma conversão inadequada. Considerando que o tamanho de microonda limita otamanho da remessa, quantidades maiores são divididas em partes de cerca de 7 mmoldo exemplo 116A e processadas seqüencialmente.

Exemplo 116A

(2,5 g, 6,98 mmol), dimetilamina (1 M em THF, 16 ml,32 mmol, 4,6 eq.), XPHOS (0,4 g, 0,84 mmol, 0,12 eq.), carbonato de césio (3,2 g,9,75 mmol, 1,4 eq.) e bis(dibenziloideneacetona)paládio(0) (0,20 g, 0,35 mmol, 0,05 eq.)são misturados em uma atmosfera de proteção com gás argônio em um recipiente dereação por microonda de 20 ml vedado por dobra. A mistura é aquecida em um reator demicroodas (reator de microondas para laboratório Emrys Optimizer Single-Mode) a 170°Cdurante 1 h. Após o resfriamento, a extração é realizada com água e acetato etílico e afase orgânica é secada em sulfato de sódio. O solvente é removido, o resíduo dissolvidoem metanol, a solução filtrada e o filtrado é concentrado. 117A é obtido com umrendimento de 2,0 g (6,19 mmol, 89% de teoria) e com pureza suficiente para mais outrareação.

Para fins analíticos, uma amostra do exemplo 117A épurificada de modo fino por HPLC preparatório (método 33).

HPLC (Método 5): Rt = 3,60 min.

LC-MS (Método 20): R, = 1,84 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 323,3 (100) [M+H]+.[a]20Na = -31,0(c= 1,0, MeOH).

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ = 1,35 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,63 (dd, J2,3 = 6,6 Hz, Jgem =15,5 Hz, 1H, 2-Ha), 2,72 (dd, J2,,3 = 8,8 Hz1 Jgem = 15,5 Hz, 1H, 2-HB), 2,93 (s, 6H,N(CH3)2), 3,54 (s, 3H, OCH3), 4,84 (m, 1H, 3-H), 6,88 (br. s, 2H, 2'-H), 7.20 (d, J2,,y = 8.3Hz, 2H, 3'-H), 7.36 (d, J= 8.8 Hz1 1H, N-H).

13C-NMR (126 MHz, CDCI3) δ =28,3 (CH3, COC(CH3)3), 40,3 (CH2, C-2), 44,9 (CH3,N(CH3)2), 50,3 (CH, C-3), 52,0 (CH3, OCH3), 80,1 (COC(CH3)3), 119,1 (CH1 C-3'), 128,0(CH, C-2'), 140,3 (C quat, C-1'), 144,1 (C quat, C-4'), 155,1 (C quat, COC(CH3)3), 171,2(C quat, C-1).

HR-TOF-MS (Método 24): Ci7H27N2O4 [M+H]+ calc. 322,1893, encontrados 322,1890.

Exemplo 118A

Metil (3R)-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(tert-butoxicarbonila)amino]-3-(4-dimetilaminofenil)-D-alaninato misturado com metil (SR)-Nz-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(terf-butoxicarbonil)amino]-3-(4-dimetilaminofenil)-L-alaninato

<formula>formula see original document page 137</formula>

É adicionada uma solução de 1 M de LHMDS em THF(21,3 ml, 21,29 mmol, 2,2 eq.) a 70 ml de abs. THF em uma atmosfera de proteção comgás argônio e resfriado até -78°C. É adicionada uma solução do composto 117A (3,1 g,9,68 mmol) em THF (35 ml) e a solução é aquecida até -25°C, em cuja temperatura éentão agitada por mais 10 min. A mistura é então resfriada novamente até -78°C, éadicionado azadicarboxilato dibenzílico (3,2 g, 10,65 mmol, 1,1 eq.) tudo de uma vez e amistura é agitada durante 3 h. No final, a reação é paralisada com ácido acético (2,8 ml,48,39 mmol, 5 eq.) a -78°C e agitada durante mais 15 min. nessa temperatura. Apósaquecimento até RT1 é adicionada uma solução aquosa conc. de bicarbonato de sódio ea extração é realizada com várias partes de acetato etílico. Os extratos orgânicoscombinados são lavados com uma solução aq. sat. de cloreto de sódio, secados emsulfato de sódio e concentrados. O resíduo amorfo marrom alaranjado é coberto comuma camada de éter dietílico e deixado respousar por algumas horas. Parte do produtodo exemplo 118A se separa na forma de cristais durante esse período. O produtoremanescente do exemplo 118A pode ser isolado do filtrado por cromatografia rápida(Biotage 40M gel de sílica, cicloexano/acetato etílico 3:1) e cristalização renovada napresença de éter dietílico, o produto sendo misturado com diasterômero do exemplo119A. Rendimento total de todos os estereoisômeros e misturas: 1.5 g (2,48 mmol, 18%de teoria).

Para fins analíticos, uma amostra de diasterômero puro doexemplo 118A é purificada de modo fino por HPLC preparatório (método 33).HPLC (Método 5): R, = 4,52 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,87 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 621,5 (50) [M+H]+.[a]20Na = -22,8 (c= 1,0, MeOH).

1H NMR (400 MHz1 Ci6-DMSO) δ = 1,30 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,86 (s, 6H, N(CH3)2), 3,30 (s,3H, OCH3), 4,74-5,11 (m, 6H), 6,62 (d, J= 8,8 Hz1 2H), 7,. 15-7,51 (m, 12H, arom. H).

Exemplo 119A

Metil (3R)-N2-[(benziloxi)carbonila]-N2-[(benziloxi)carbonilamino]-3-[(fert-butoxicarbonila)amino]-3-(4-dimetilaminofenil)-L-alaninato<formula>formula see original document page 139</formula>

O composto do exemplo 118A (1,6g, 1,90 mmol) édissolvido em diclorometano (60 ml). A O0C1 TMG (2,6 ml, 20,93 mmol, 11 eq.) éadicionado e a reação é agitada em RT durante a noite. Para paralisar a reação, amistura é primeiro resfriada até 0°C e então é adicionado ácido acético (1,3 ml,22,83 mmol, 12 eq.). A mistura é diluída com água e extraída com 3 partes dediclorometano e os extratos orgânicos combinados são concentrados. O resíduo étriturado com uma mistura de acetato etílico/éter dietílico. O composto do exemplo 119Acristaliza e o composto do exemplo 118A permanece predominantemente comosobrenadante. Este último é concentrado e submetido novamente a isomerização com2 ml de TMG e diclorometano (40 ml). Uma segunda parte do composto do título doexemplo 119A é obtida desse modo. O sobrenadante da cristalização é cromatografado(método 33) e reisomerizado e é obtida uma terceira parte do exemplo 119A. RendimentoTotal: 1,1 g (1,72 mmol, 90% de teoria) do exemplo 119A na forma de cristais.HPLC (Método 5): R, = 4,76 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 3,12 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 621,5 (90) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 619,5 (60) [M - H]".[a]20Na = -118° (c= 1,0, CHCI3).

1H NMR (400 MHz, de-DMSO) δ = 1,30 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,86 (s, 6H, N(CH3)2), 3,30 (s,3H, OCH3), 4,75-5,23 (m, 4H), 6,62 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,15-7,61 (m, 12H), 8,29 (br. s,1H, N-H), 8,72 (br. s, 1H1 N-H).

13C-NMR (126 MHz,) δ = 27,94 and 28,07 (CH3, C(CH3)3), 51,31 (CH3)1 51,62 (CH3)1 51,98(CH, C-7), 61,81 (CH, C-6), 66,18 and 66,32 and 66,50 (CH2, OCH2Ph), 67,49 and 67,65(CH2, OCH2Ph), 78,68 and 78,90 (C quat, C-11), 111,74 (CH, C-3'), 123,54 (CH), 124,06(CH), 126,76 (CH), 127,18 (CH), 127,30 (CH), 127,55 (CH), 127,76 (CH), 127,83 (CH),

127.98 (CH), 128,24 (CH), 128,30 (CH), 128,79 (CH), 135,59 (C quat), 135,77 (C quat),135.99 (C quat), 136,11 (C quat), 149,74 (C quat), 154,21 (C quat), 154,68 (C quat),154,92 (C quat), 155,03 (C quat), 155,14 (C quat), 156,09 (C quat), 156,24 (C quat),166,97 (C quat, C=O).

HR-TOF-MS (Método 24): C33H4iN4O8 [M+H]+ calc. 621,2919, encontrados 621,2922.Exemplo 120A

Metil (3R)-3-[(fert-butoxicarbonil)amino]-4-(dimetilaminofenil)-L-alaninato

<formula>formula see original document page 140</formula>

O composto do exemplo 119A (938 mg, 1,51 mmol) édissolvido em diclorometano-metanol 1:1 (30 ml). É adicionado níquel de Raney (cerca de200 mg) em uma atmosfera de proteção com gás argônio e a mistura é hidrogenada sob80 bar durante 4 d. Quando não é mais detectável nenhum material de início por HPLC(método 5), o catalisador é removido por filtragem. O filtrado é concentrado. É obtido0,6 g de produto bruto (pureza de cerca de 70%) e empregado sem mais uma purificaçãona próxima etapa. Para fins analíticos, uma amostra do composto puro do exemplo 120Aé purificado de modo fino por HPLC preparatório (método 27).HPLC (Método 5): R, = 3,25 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,34 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 338,2 (30) [M+H]+.W20Na = -11,5° (c= 1.0, MeOH).

1H NMR (500 MHz, CZ6-DMSO) δ = 1,37 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,90 (s, 6H, N(CH3)2), 3,54 (s,3H, OCH3), 4,24 (d, J = 5,4 Hz, 1H, β -Η), 4,96 (dd, J = 8,4 Hz1 J = 8,0 Hz, 1H, α-Η), 6,73(d, ϋ2·3· = 8,0 Hz, 2H, 3'-H), 7,13 (d, J2,3 = 8,0 Hz, 2H, 2'-H), 7,46 (d, J = 9,6 Hz, 1H, NH),8,470 (br. s, 2H, NH2).

13C-NMR (126 MHz, cfe-DMSO) δ = 28,07 (CH3, COC(CH3)3), 40,19 (CH3, N(CH3)2), 52,68(CH3, OCH3), 54,11 (CH, C-β), 56,79 (CH, C- β), 78,87 (C quat, COC(CH3)3), 112,53 (CH,C-3'), 127,65 (CH, C-2'), 149,87 (C quat), 154,61 (C quat, COC(CH3)3), 167,96 (C quat,CO2CH3).

HR-TOF-MS (Método 24): C17H28N3O4 [M+H]+ calc. 338,2075, encontrados 338,2064.

Exemplo 121A

Metil (3R)-/V2-(benziloxi)carbonila)-3-[(íe/t-butoxicarbonil)amino]-4-(dimetil-aminofenil)-L-alaninato<formula>formula see original document page 141</formula>

550 mg (1,14 mmol, 70% de pureza) do composto doexemplo 120A são dissolvidos em dioxano/água 8:2,8. São adicionados bicarbonato desódio (479 mg, 5,71 mmol, 5 eq.) e clorformato benzílico (212 μΙ, 1,48 mmol, 1,3 eq.) e amistura é agitada em RT durante 2,5 h. A mistura é então extraída com água e acetatoetílico e a fase orgânica é secada em sulfato de sódio e concentrada. O composto dotítulo do exemplo 121A pode ser obtido como cristais a partir do resíduo por trituraçãocom éter dietílico. Rendimento: 490 mg (1,04 mmol, 91% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 4,14 min.LC-MS (Método 20): Rt = 2,52 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 472,3 (100) [M+H]+.[a]20Na = -13,4° (c = 1,0, MeOH).

1H NMR (400 MHz, de-DMSO) δ = 1,36 (s, 9H, COC(CH3)3), 2,86 (s, 6H, N(CH3)2), 3,30 (s,3H, OCH3), 4.45 (dd, ϋα,ββ = 4,2 Hz, J = 9,3 Hz, 1H, β -Η), 4.94 (d, Jgem = 12.5 Hz1 1H,OCH2Ph), 4,99 (d, Jgem = 12,5 Hz, 1H, OCH2Ph), 5,15 (dd, Jaifls = 4,2 Hz1 J = 10,3 Hz1 1H,cc-H), 6,65 (d, J2i3-= 8,8 Hz, 2H, 3'-H), 7,10 (d, J2i3 = 8,8 Hz, 2H, 2'-H), 7,23-7,37 (m, 5H),7,54 (d, J= 9,3 Hz, 1H, NH).

13C-NMR- (126 MHz, d6-DMSO) δ =28,0 (CH3, COC(CH3)3), 41,1 (CH3, N(CH3)2), 52,0(CH3, OCH3), 53,8 (CH, C- β), 59,0 (CH, C-a), 65,4 (CH2, OCH2Ph), 78,3 (C quat,COC(CH3)3), 113,7 (CH), 126,9 (C quat), 127,3 (CH), 127,5 (CH), 127,8 (CH), 128,2 (Cquat), 128,3 (CH), 136,6 (C quat), 154,6 (C quat, NCO2), 156,0 (NCO2)1 170,7 (CO2CH3).HR-TOF-MS: C25H34N3O6 [M+H]+ calc. 472.2443, encontrados 472.2460.Exemplo 122A

(3R)-A/2-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(íerf-butoxicarbonil)amino]-4-(dimetilaminofenil)-L-alanina<formula>formula see original document page 142</formula>

O composto 121A (444 mg, 0,94 mmol) e dissolvido em umamistura de 5 ml de THF e 830 μΙ de água. A 0°C, são adicionados 99 mg (2,35 mmol,2,5 eq.) de monoidrato de hidróxido de lítio. A reação é realizada a 0°C durante cerca de5 2 h até que não seja mais detectável nenhum material de início 121A (HPLC, método 5).A reação é então paralisada com ácido acético (620 μΙ, 2,83 mmol, 3 eq.). A mistura édiluída em água e extraída com acetato etílico. A fase orgânica é secada em sulfato desódio e o solvente é destilado. Rendimento: 430 mg (quant.).

HPLC (Método 5): R, = 3,80 min.

LC-MS (Método 20): R, = 2,.21 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 458,2 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 456,3 (100) [M - H]-.

N20Na = -16,5 (c= 1,0, MeOH).

1H NMR (500 MHz, Cf6-DMSO) δ = 4,39 (dd, Jap = 3,5 Hz, J = 9,6 Hz1 1H, β-Η), 4,92 (d,Jgem = 12,8 Hz, 1 Η, OCH2Ph), 4,97 (d, Jgem = 12,8 Hz, 1H, OCH2Ph), 5,19 (dd, Ja,β= 3,5Hz1 J = 10,0 Hz, 1H, α-Η), 6,86 (br. s, 2H), 7,17 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 7,0 Hz,2H), 7,23-7,29 (m, 2H), 7,41 (d, J = 10,1 Hz, 1H, NH), 7,48 (d, J = 1 Hz, 1H, NH), 13,0 (br.s, 1H, COOH).

13C-NMR (126 MHz, Cf6-DMSO) δ =28,0 (CH3, COC(CH3)3), 41,2 (CH3, N(CH3)2), 53,9(CH, C- β), 58,8 (CH, C-a), 65,3 (CH2, OCH2Ph), 78,1 (C quat, COC(CH3)3), 113,7 (CH),126,7 (C quat), 127,1 (CH), 127,3 (CH), 127,6 (CH), 128,1 (C quat), 128,2 (CH), 136,9 (Cquat), 154,7 (C quat, NCO2), 156,1 (NCO2), 171,4 (CO2H).

HR-TOF-MS (Método 24): C24H32N3O6 [M+H]+ calc. 458,2286, encontrados 458,2277.

Exemplo 123A

Pentafluorofenil (3R)-N-[(benziloxi)carbonila]-3-[(íerf-butoxicarbonila)amino]-4-(dimetilaminofenil)-L-alaninatoO composto 122A (408 mg, 0,89 mmol) é dissolvido em THFseco (11 ml) a 0°C em uma atmosfera de proteção com gás argônio. São adicionadospentafluorofenil difenilfosfinato (514 mg, 1,34 mmol, 1,5 eq.) e NMM (360 mg, 3,57 mmol,4 eq.) e a mistura de reação é agitada em RT durante 16 h. O solvente é então removidoe o resíduo é purificado por cromatografia (método 33: gradiente modificado: 0-10 min10% B, rampa, 30 min 65% B, 36-38 min 10% B). Além do 123A (250 mg, 0,40 mmol,45% de teoria), foi isolado o material de início não reagido (exemplo 122A, 41 mg,9 μmol, 10% de teoria).

HPLC (Método 5): R, = 3,66 min.

LC-MS (Método 20): R, = 3,23 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 624,4 (100) [M+H]\[a]20Na = -19,8 °(c = 0,5, CH2CI2).

1H NMR (400 MHz, C16-DMSO) δ = 1,36 (s, 9H, COC(CH3)3, 2,90 (s, 6H, N(CH3)2), 4,96-5,04 (m, 3H, β-Η and OCH2Ph), 5,39 (dd, Ja,β = 4,4 Hz, J = 10,2 Hz1 1H, α-Η), 6,75 (br. s,2H), 7,21-7,33 (m, 7H), 7,57 (d, J= 10,3 Hz, 1H, NH), 7,89 (d, J = 9,3 Hz, 1H, NH).

13C-NMR (126 MHz, CZ6-DMSO) δ =28,2 (CH3, COC(CH3)3), 43,8. (CH3, N(CH3)2), 55,6(CH, C- β), 59,1 (CH, C-a), 67,5 (CH2, OCH2Ph), 80,9 (C quat, COC(CH3)3), 117,8 (CH),124,4 (C quat, m),128,1 (CH), 128,4 (CH), 128,6 (CH), 128,7 (CH), 132,9 (C quat, m),136,8 (C quat, m), 138,9 (C quat, m), 139,9 (C quat, m), 141,9 (C quat, m), 155,7 (C quat,NCO2), 156,2 (NCO2)1 166,2 (CO2H).

Exemplo 124A

{(3R)-N-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(ferí-butoxicarbonil)amino]-4-(dimetilaminofenil)-L-alanil}-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina bistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 144</formula>

O composto 123A (237 mg, 0,38 mmol) e composto Edman3,0(composto do exemplo 3, 465 mg, 0,46 mmol, 1,2 eq.) são dissolvidos em DMF (40 ml) a0°C e DIEA (0,40 ml, 2,28 mmol, 6 eq.) é adicionado. A mistura de reação é agitada aindadurante a noite, em cujo período é aquecida lentamente até RT. O DMF é então removidoem um evaporador giratório e o resíduo é purificado por cromatografia (método 44).

Rendimento: 550 mg (92% de teoria).

HPLC (Método 5): Rt = 3,62 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,01 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 673,3 (100) [M + 2H]2+, MS(ESIneg) m/z (%) = 1343 [M - H]".

HR-TOF-MS (Método 24): CeiH98N15O19 [M+H]+ calc. 1344,7158, encontrados 1344,7155.

Exemplo 125A

{(3R)-3-Amino-N-[(benziloxi)carbonila]-4-(dimetilaminofenil)-L-alanil}-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil]-L-serinabistrifluoroacetato tristrifluoroacetato<formula>formula see original document page 145</formula>

São dissolvidos 550 mg (0,35 mmol) do composto doexemplo 124A em diclorometano (2 ml) e então são adicionados 14 ml de 30% TFA emdiclorometano. A mistura é agitada em RT durante 15 min e então concentrada e secadaa vácuo em bomba de óleo. O produto bruto (644 mg, cerca de 70% puro, 0,28 mmol,80% de teoria) é reagido ainda sem purificação.HPLC (Método 7): Rt = 3,46 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,56 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 622,9 (100), [M + 2H]2+, MS(ESlneg.): m/z (%) = 1242,6 [M - H]".

Exemplo 126A

N2 ,-(Benziloxicarbonila)-[(3f?)-3-amino-4-(dimetilamino)-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidro-xi-L-asparaginil]-L-serinaC7 9-AZ3 i-Iactama bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 145</formula>O produto bruto do exemplo 125A (644 mg, 0,28 mmol) édissolvido em DMF (30 ml) e resfriado até 0°C. É adicionado HATU (349 mg, 0,92 mmol,3 eq.), seguido de NMM (200 μΙ, 1,84 mmol, 6 eq.). Após 5 min, o banho de gelo éremovido e a mistura é agitada em RT durante 3 h. A reação é paralisada adicionandometanol e a mistura é inicialmente pré-purificada por cromatografia com gel (método 45,eluente: metanol). As frações contendo produto são combinadas e purificadas fino porHPLC preparatório (método 33). Rendimento: 211 mg (52% de teoria).

HPLC (Método 5): R, = 3,64 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,70 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 614 (100) [M + 2H]2+, 1226,8(20) [M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1224,9 (100) [M - H]'.

HR-TOF-MS (Método 24): C56H88N15O16 [M+H]+ calc. 1226,6528, encontrados 1226,6534.

Exemplo 127A

[(3R)-3-Amino-4-(dimetilaminofenil)-L-alanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C1-9mN3, '-Iactamatrisidrocloreto

<formula>formula see original document page 146</formula>

O composto do exemplo 126A (209 mg, 0,14 mmol) édissolvido em metanol (50 ml) e são adicionados 1 M de ácido clorídrico aq. (860 μΙ,6 eq.) assim como 10% de paládio-carbono. A hidrogenação é realizada em pressãoambiente e em RT durante 90 min. A mistura é, então, filtrada para remover o catalisadore concentrada. O resíduo é recolhido em água e liofilizado. 170 mg (98% de teoria) docomposto do título são obtidos.

HPLC (Método 7): Rt = 3,19 min.LC-MS (Método 20): Rt = 1,26 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 547,1 (100) [M + 2H]2+,1092,8 (5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C48H82N15Oi4 [M+H]+ calc. 1092,6161, encontrados 1092,6133.

Exemplo 128A

N"2.1-(terf-ButoxicarbonilaJ-tS-te/f-butil-D-alanill-IS-tert-butil-L-alanill-tíSRJ-S-amino^-(dimetilaminofenil)-L-alanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N3 3-lactama bisidrocloreto

<formula>formula see original document page 147</formula>

O composto do exemplo 127A (85 mg, 71 µ?t???) e odipeptídeo (exemplo 9A, 40 mg, 106 µp???, 1,5 eq.) são dissolvidos em DMF (4 ml) eresfriados até 0°C. São então adicionados NMM (31 µl, 281 µmol, 4 eq.) e HATU (43 mg,113 µmol, 1,6 eq.) e o banho de gelo é então removido . A mistura é lentamente aquecidaaté a temperatura ambiente. Após 1 h, a reação é paralisada adicionando methanol e acromatografia é realizada usando metanol como fase móvel (método 45). O eluato éverificado por HPLC (método 7) e as frações contendo o produto são combinadas econcentradas. São obtidos 105 mg do composto do título cerca de 66% puro (65% deteoria). Esse material é empregado no próximo estágio sem mais uma purificação.HPLC (Método 7): Rt = 4,47 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,24 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 724,3 (100) [M + 2H]2+,1448,3 (5) [M+H]+.

Exemplo 129A

(2S)-N-(ferf-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)alaninaeExemplo 130A

(2R)-A/-(íe/t-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)alanina

O composto alvo é preparado de acordo com M. Merget1 K.Günther, M. Bernd1 E. Günther, R. Tacke, J. Organomet. Chem. 2001 628, 183-194. Aseparação dos enantiômeros é obtida por HPLC preparatório (método 41) em uma fasequiral e os isômeros são designados por comparação HPLC com uma amostra autênticade N-(terí-butoxicarbonila)-L-3-trimetilsililalanina (2R isômero, Mercachem AMR 39.260).Exemplo 129A

N-(tert- Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-D-alanina

<formula>formula see original document page 148</formula>

HPLC Quiral (Método 41): Rt = 4,16 min, e.e> 99%.[a]d20 = + 1,1 (c = 0,83, metanol)Exemplo 130A

N-(íerf-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-L-alanina

<formula>formula see original document page 148</formula>

HPLC Quiral (Método41): Rt = 9,27 min, e.e> 99%[a]d20 = - 1.6 (c = 0,66, metanol)Exemplo 131A

Metil [A/2-(íe/t-butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-D-alanil]-2-ferf-butil-L-alaninato

<formula>formula see original document page 148</formula>Metil 2-terf-butil-L-alaninato trifluoroacetato (215 mg,0.82 mmol) [S.D. Bull1 S.G. Davies1 A. C. Garner1 M. D. O1Shea1 J. Chem. Soe. PerkinTrans.1, 2001, 3281-3287] e exemplo 129A (225 mg, 0,82 mmol, 1 eq.) são dissolvidosem DMF (5 ml) a 0°C. Então são adicionados NMM (360 μΙ, 3,29 mmol, 4 eq.) e HATU(470 mg, 1,24 mmol, 1,5 eq.) e a mistura é agitada em RT durante 2 h. A extração érealizada duas vezes com MTBE e uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio e asfases orgânicas combinadas são lavadas com 1 M de ácido cítrico e novamente com umasolução sat. aq. de bicarbonato de sódio, secadas em sulfato de sódio e concentradas.Após a purificação por cromatografia (método 33), são obtidos 290 mg (0,72 mmol, 88%de teoria) do composto do título.

HPLC (Método 7): Rt = 5,37 min.

LC-MS (Método 18): R, = 3,02 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 403,5 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ =0,01 (s, 9H, Si(CH3)3), 0,89 (m, 11H), 1,37 (s, 9H,COC(CH3)3), 1,55 (dd, J = 8,8 Hz, 14,2 Hz, 1H), 1,63 (dd, J = 3,4 Hz, 14,2 Hz, 1H), 3,62(s, 3H, OCH3), 4,04 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 6,70 (d, J = 9,0 Hz, 1H, NH), 7,96 (d, J = 8,1Hz1 1H, NH).

Exemplo 132A

[N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-D-alanil]-2-fe/t-butil-L-alanina

<formula>formula see original document page 149</formula>

O exemplo 131A (274 mg, 0,68 mmol) é recolhido emTHF/água (3:1, 21 ml) e resfriado até 0°C. É adicionado monoidrato de hidróxido de lítio(57 mg, 1,36 mmol, 2 eq.) e a mistura é agitada a 0°C durante 1 h. A maior parte do THFé removida a vácuo, o pH é ajustado para 4 adicionando 1 M de ácido cítrico e a misturaé extraída duas vezes com acetato etílico. As fases orgânicas combinadas são secadasem sulfato de sódio e concentradas. Após purificação por cromatografia (método 33 comgradiente modificado: 0 - 2 min 30% B, rampa, 30 - 35 min - 90% B) 237 mg (0,61 mmol,90% de teoria) do composto do título são obtidos como um sólido incolor.

HPLC (Método 7): Rt = 4,93 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,76 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 389,4 (100) [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, cfe-DMSO) δ =0,00 (s, 9H, Si(CH3)3), 0,88 (m, 11H), 1,36 (s, 9H,COC(CH3)3), 1,51 (dd, J = 9,3 Hz1 14,2 Hz1 1Η), 1,64 (dd, J = 3,0 Hz1 14,2 Hz, 1 Η), 4,02(m, 1Η), 4,20 (m, 1Η), 6,71 (d, J = 9,3 Hz, 1Η, NH), 7,80 (d, J= 8,1, 1H, NH), 12,49 (br s,1H, COOH).Exemplo 133A

N2.1,-(tert-Butoxicarbonila)-[3-trimetilsilil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alan(dimetilaminofenil)-L-alanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-ialotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N33-Iactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 150</formula>

O composto do exemplo 127A (102 mg, 85 pmol) e odipeptídeo (exemplo 132A, 50 mg, 127μηιοΙ, 1,5 eq.) são dissolvidos em DMF (4 ml) eresfriados até 0°C. NMM (37 μΙ, 340 μηηοΙ, 4 eq.) e HATU (65 mg, 170 μίτιοί, 2,0 eq.) sãoentão adicionados e o banho de gelo é removido. A mistura é lentamente aquecida até atemperatura ambiente. Após 1 h, a reação é paralisada adicionando metanol e acromatografia é realizada em Sephadex LH20 usando metanol como fase móvel(método 45). O eluato é verificado por HPLC (método 7) e as frações contendo o produtosão combinadas e concentradas. 126 mg (82 μηιοΙ, 96% de teoria) do composto do títulosão obtidos.

HPLC (Método 7): R, = 4,55 min.Exemplo 134A

Benzilo A/2-(terí-butoxicarbonila)-D-fenilalanil-L-fenilalaninato<formula>formula see original document page 151</formula>

HOBt (2,0 g, 15,08 mmol, 4 eq.), NMM (1,2 ml, 1,1 g,11,31 mmol, 3 eq.), N-(tert-butoxicarbonila)-D-fenilalanina (1,0g, 3,77 mmol, 1 eq.)[Anderson, McGregor; J. Am. Chem. Soc.; 79; 1957; 6180,6181], EDC (1,4 g, 7,54 mmol,2 eq.) e novamente são adicionado NMM (0,8 ml, 0,8 g, 7,54 mmol, 2 eq.)sucessivamente a uma solução de hidrocloreto L-fenilalaninato benzílico (1,1 g,4,15 mmol, 1,1 eq.) em diclorometano p.a. (365 ml) a -10°C. A mistura de reação élentamente aquecida até RT e é agitada nessa temperatura durante a noite. O solvente écompletamente removido e o resíduo é misturado com acetato etílico e a mistura ésubseqüentemente lavada com uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio, 5% deácido cítrico aq., uma solução sat. aq. de bicarbonato de sódio (500 ml) e uma soluçãosat. aq. de cloreto de sódio. A mistura é secada em sulfato de sódio e filtrada. A mistura éevaporada para secagem a vácuo e então secada a alto vácuo. É obtido 1,8 g (96% deteoria) do composto do título que é reagido sem mais purificação.

HPLC (Método 12): Rt = 9,16 min.

HPLC (Método 4): R, = 5,16 min.

1H NMR (400 MHz1 Ci6-DMSO): δ = 1,18/1,27 (2s, 9H, OtBu), 2,47-2,57 (m debaixo do H-DMSO-Signal, 1H, β-Η), 2,66 (dd, J = 13,8, 3,7 Hz, 1H, β-CH), 2,91 (dd,J = 13,8, 9,4 Hz,1H, β-CH), 3,09 (dd, J= 13,8, 3,1 Hz, 1H, β-CH), 4,19 (td, J= 9,3, 4,2 Hz, 1H, a-CH),4,57 (td, J= 8,8, 5,9 Hz1 1H, a-CH), 5,12(s, 2H, OCH2Ph), 6,76 (d, J= 9,2 Hz, 1H, NH),7,08-7,43 (m, 15H, Aril-H), 8,48 (d, J = 8,1 Hz, 1H, NH).

HR-TOF-MS (Method 24): C30H36N2O5 [M+H]+ encontrados 503,2566, calc. 503,2546.

Exemplo 135A

N2-(tert-Butoxicarbonila)-D-fenilalanil-L-fenilalanina

<formula>formula see original document page 151</formula>O composto do título é preparado a partir do composto do

exemplo 134A (563,0 mg, 1,12 mmol) de acordo com o procedimento 5. Após agitaçãoem uma atmosfera de hidrogênio sob pressão atmosférica e em RT durante 3 h, é obtidauma conversão completa de acordo com o monitoramento de reação (método 12). Sãoobtidos 452,2 mg (97,9% de teoria) de produto.

[a]20Na = +33,2° (c = 0,57 in CH2CI2).

HPLC (Método 12): Rt = 7,64 min.

HPLC (Método 4): R, = 4,45 min.

1H NMR (400 MHz, CZ6-DMSO): δ = 1,19/1,26 (2s, 9H, OtBu), 2,44-2,56 (m debaixo do H-DMSO-Signal, 1H, β-Η), 2,69 (dd, J = 14,0, 3,8 Hz1 1H, β-CH), 2.86 (dd, J = 14,0, 9,5 Hz,1H, β-CH), 3,08 (dd, J = 14,0, 4,6 Hz, 1H, β-CH), 4,18 (td, J = 9,7, 3,57 Hz, 1H, a-CH),4,48 (td, J= 9,3, 4,5 Hz, 1H, a-CH), 6,71 (d, J= 8,7 Hz, 1H, NH), 7,08-7,32 (m, 10H,Arila-H), 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H, NH), 12,77 (s br., 1H, COOH).

HR-TOF-MS (Método 24): C23H30N2O5 [M+H]+ encontrados 413,2082, calc. 413,2076.

Exemplo 136A

2-(Trimetilsilil)etil N2-[(benziloxi)carbonila]-3-[(ferf-butoxicarbonila)amino]-L-alaninato

<formula>formula see original document page 152</formula>

N-[(Benziloxi)carbonila]-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-L-alanina (1000,0 mg, 2,96 mmol) [Rane, F.Dinanath et al.; Tetrahedron Lett.; EN; 34; 20;1993; 3201-3204] é dissolvido em diclorometano (20 ml) e são sucessivamenteadicionados trimetilsililetanol (4,2 ml, 3,5 g, 29,55 mmol, 10 eq.), DCC (1,22 g, 5,91 mmol,2 eq.) e DMAP (361,1 mg, 2,96 mmol, 1 eq.) à solução a -20°C. A reação é aquecida emRT e agitada nessa temperatura durante a noite e levada à conversão completa. Para odesenvolvimento, a mistura é concentrada e o resíduo é recolhido em éter dietilico e subseqüentemente extraído duas vezes com água e uma vez com uma solução sat. aq.de cloreto de sódio. A fase etérica é secada em sulfato de sódio, o dessecante éremovido por filtragem através de gel de silica e a maior parte do solvente é removida dofiltrado em um evaporador giratório. Se um precipitado se separar durante aconcentração, poderá ser removido novamente, quando apropriado, através de gel desílica. O resíduo obtido é então purificado de modo fino por cromatografia (método 31) eé obtido 1,1 g (86,4% de teoria) do composto do título.

HPLC (Método 12): R, = 9,31 min.

LC-MS (Método 18): R, = 2,97 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 439 (100) [M+H]+.

Exemplo 137A

2-(Trimetilsilil)etil 3-amino-N2-(benziloxicarbonila)-L-alaninato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 153</formula>

O composto do título é preparado a partir do composto doexemplo 136A (100,0 mg, 0,23 mmol) conforme descrito no procedimento 1. São isolados41 mg (39,7% de teoria) do produto a partir do produto bruto depois da purificação fina(método 35).

HPLC (Método 12): Rt = 6,33 min.LC-MS (Método 23): Rt = 4,83 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 339 (15) [M+H]+, 311 (100).

Exemplo 138A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N2.1-terf-butoxicarbonila[(3R)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil·L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3R)-3-amino-L-alanina 2-(trimetilsilil)etil ester trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 153</formula>O octapeptídeo (exemplo 10OA1 9,0 mg, 8,04 µmol) e ocomposto do exemplo 137A (17,0 mg, 39,95 µmol, 5 equivalentes) são fornecidos emDMF (900µL) em uma atmosfera de proteção com gás argônio a 0°C.Subseqüentemente, a base (9µL, 0,8 mg, 8,04µmol, 1 eq.) de uma solução de grandequantidade do reagente NMM (0,91 mmol/ml in DMF), HATU (6,1 mg, 16,08µmol, 2 eq.)e novamente a solução de NMM (9 µL, 0,8 mg, 8,04 µmol, 1 eq.) são adicionadossucessivamente à mistura. Após agitar durante 15 min, finalmente a solução do reagenteNMM (22 µL, 2 mg, 20,10 µmol, 2,5 eq.) é adicionada e a mistura lentamente aquecida atéRT e agitada nessa temperatura durante a noite. A solução é pré-purificada por HPLCpreparatório (método 36) e purificada de modo fino por cromatografia com gel(método 45, eluente: metanol com 0,25% de ácido acético glacial). 8,0 mg (69,1% deteoria) do composto do título são obtidos.

HPLC (Método 12): R, = 7,21 min.

LC-MS (Método 23): Rt = 5,30 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1325 (75) [M+H]+; MS(ESlneg.): m/z (%) = 1323 (100) [M - H]-.

Exemplo 139A

N2-(Benziloxicarbonila)-N3-{N"2.1-terf-butoxicarb^

arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3f?)-3-amino-L-alanina trifIuoroacetato

<formula>formula see original document page 154</formula>

O composto do exemplo 138A (7,5 mg, 5,21 µmol) éfornecido em 900 µL de THF e 4 partes de uma solução de 1 M de TBAF em THF (26 µL,6,8 mg, 26,05 µLt???, 5eq.) são adicionadas e após 15 eq. de base, também sãoadicionadas peneiras moleculares (4 A). A reação é agitada em RT durante 1 h e éestabelecida conversão completa por monitoramento HPLC (método 12). Para odesenvolvimento, a mistura é neutralizada com ácido acético glacial e subseqüentementeconcentrada a vácuo e cromatografada por HPLC preparatório (método 29). 6,2 mg(88,9% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC (Método 12): R, = 6,24 min.

LC-MS (Método 23): Rt = 4.88 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1224 (80) [M+H]+, 242 (100);MS (ESlneg.): m/z (%) = 1223 (100) [M - H]".Exemplo 140A

(BenZiloXicarbonila)-N3-N2 1-íerf-butoxicarbonilaííSRJ-S-hidróxi-L-leucill-L-leucil-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3R)-3-amialanina pentafluorofenil éster trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 155</formula>

Em uma atmosfera de proteção com gás argônio, ocomposto do exemplo 139A (3,1 mg, 2,31 μιτιοΙ) é fornecido em diclorometano (1 ml) e éadicionado pentafluorofenol (4,3 mg, 23,14 μητιοΙ, 10 eq.). A reação é resfriada até -20°Ce finalmente é adicionado EDC (1,0 mg, 5,32 μητιοΙ, 2,3 eq.) e a mistura é aquecida atéRT e agitada nessa temperatura durante a noite. Para o desenvolvimento, o solvente écompletamente removido e o resíduo secado por congelamento. O composto do título éreagido ainda como produto bruto e é suposto um rendimento quantitativo.HPLC (Método 12): R, = 7,18 min.

LC-MS (Método 23): Rt = 5,56 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1392 (80) [M+H]+.

Exemplo 141A

N2(Benziloxicarbonila)-N3-3R)-3-hidróxi-L-leucilJ-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-seril}-(3R)-3-amino-L-alaninapentafluorofenil éster bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 156</formula>

O composto do título é preparado a partir do composto doexemplo 140A (3,0 mg, 1,99 pmol) de acordo com o procedimento 3. Após a adição deácido clorídrico a 0°C, é estabelecida conversão completa por monitoramento HPLC(método 12) após 30 min. O composto do título é obtido como produto bruto, supondo umrendimento quantitativo.

LC-MS (Método 23): R, = 4,47 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1292 (3) [M+H]+ 646 (100)[M + 2H]2+, MS (ESlneg.): m/z (%) = 1290 (40) [M - H]", 1106 (100).

Exemplo 142A

N2,-(Benziloxicarbonila)-[(3R)-3-amino-L-alanil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil·L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N31-lactamahidrocloreto

<formula>formula see original document page 156</formula>Em uma atmosfera de proteção com gás argôniò, ocomposto do exemplo 141A (3,0 mg, 2,20 μιτιοΙ) é fornecido em clorofórmio (20 ml). Atrietilamina (22 μΙ, 15,8 mg, 131,94 μιηοΙ) é dissolvida em clorofórmio (25 ml) eadicionada por gotejamento à solução no decorrer de 1 h. Após a adição estar completa,a reação é agitada em RT durante a noite. Para o desenvolvimento, a mistura éneutralizada com TFA, subseqüentemente concentrada a vácuo e pré-purificada porcromatografia com gel (método 45, eluente: metanol com 0,25% de ácido acético glacial).É isolado 0,4 mg (15,9% de teoria) do produto após purificação fina por HPLCpreparatório (fase de separação: Xterra 10 mm, eluente: 0,1% de TFA, gradiente deacetonitrilo-água).HPLC (Método 12): R, = 5,96 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1,72 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1108 (48) [M+H]+, 132 (100);MS (ESlneg.): m/z (%) = 1106 (100) [M - H]'.Exemplo 143A

[(3R)-3-Amino-L-alanil)]-[(3/^)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina Ci 9-AZ3 i-Iactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 157</formula>

O composto do título (0,4 mg, 0,35 μηιοΙ) é preparado apartir do composto do exemplo 142A conforme descrito no procedimento 4. A conversãocompleta é obtida após hidrogenação sob pressão atmosférica e em RT durante 6 h. Éobtido 0,3 mg (81,9% de teoria) do composto do título como produto bruto que é aindareagido.

Exemplo 144 A

N2.1-(tert-Butoxicarbonila)-[D-fenilalanilHL-fenilalanil]-[(3R)-3-amino-L-alanil)]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil3-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C1,"-AZ33-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 158</formula>

A amina desprotegida (exemplo 143A, 0,3 mg, 0,29 μιηοΙ) eo dipeptídeo (1,2 mg, 2,86 μιτιοΙ, 10 eq.) são fornecidos em uma atmosfera de proteçãocom gás argônio in DMF (100 μΙ) e a solução é resfriada a O0C. A base (16 μΙ, 147 μg,1,43 μmol, 5 eq.) a partir da solução reagente NMM (90,9 μηΓΐοΙ/ml em DMF), HATU(1,1 mg, 2,95 μιηοΙ, 10,3 eq.) e ainda solução reagente NMM (16 μΙ, 147 μg, 1,43 μιτιοΙ,eq.) são adicionados e a reação é agitada durante 15 min. Finalmente, é adicionadanovamente a base (40 μΙ, 367 μg, 3,62 μιτιοΙ, 12,5 eq.) à mistura, a qual é levada à RTdurante a agitação. A agitação continua nessa temperatura durante a noite. Para odesenvolvimento, a mistura é concentrada a vácuo e purificada de modo fino porcromatografia com gel (método 45, eluente: metanol). 0.3 mg (70.6% de teoria) docomposto do título são obtidos.

HPLC (Método 12) R, = 7,80 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 2,17 min; MS (ESlpos): m/z(%) = 1368 (5) [M+H]+, 634 (100);MS (ESlneg.): m/z (%) = 1367 (30) [M - H]", 683 (100) [Μ - 2H]2".

Exemplo 145A

Ligação por polímero [/V2-fluorenilmetoxicarbonila-L-isoleucil]-03-(íerf-butil)-L-serina<formula>formula see original document page 159</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 41A, 500 mg, 0,75 mmol) conforme descrito no procedimento 7. O aminoácidodesprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com A/2-[(9/-/-fluoren-9-ilmethoxi)carbonil]-L-isoleucina (1,05 g, 2,98 mmol, 4 eq.), DIEA (0,78 ml, 577 mg,4,47 mmol, 6 eq.) e TBTU (957 mg, 2,98 mmol, 4 equivalentes) durante a noite para dar odipeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia aoprocedimento 7. O dipeptídeo protegido por cadeia lateral correspondente é confirmadoapós remoção da amostra.LC-MS (Método 21): Rt = 2.68 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 497.5 (60) [M+H]+, 441.4(100); MS (ESlneg): m/z (%) = 495.5 (5) [M - H]", 273.4 (100).Exemplo 146A

Liga de polímero [(A/2-(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila)-A/5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-03-(íerf-butil)-L-serin

<formula>formula see original document page 159</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 145A, 500 mg, 0,75 mmol) conforme descrito no procedimento 7. O aminoácidodesprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com (/V2-(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil)-A/s-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}methil)-D-ornitina (740 mg, 1,12 mmol, 1,5 eq.), DIEA (0,39 ml, 289 mg,2,24 mmol, 3 eq.) e TBTU (318 mg, 0,99 mmol, 2 equivalentes) durante a noite para dar otripeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia aoprocedimento 7. O dipeptídeo protegido por cadeia lateral correspondente é confirmadoapós remoção da amostra.

LC-MS (Método 21): R, = 2,89 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 919,5 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 917,7 (100) [M - H]'.

Exemplo 147 A

Liga de polímero [(N2-(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila)-L-leucil]-[N5-(imino-{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-03-(tert-butil)-L-serina

<formula>formula see original document page 160</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 146A, 500 mg, 0,75 mmol) conforme descrito no procedimento 7. O aminoácidodesprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com A/2-[(9H-fluoren-9-ilmeth-oxi)carbonil]-L-leucina (1,05 g, 2,98 mmol, 4 eq.), DIEA (0,78 ml, 577 mg, 4,47 mmol,6 eq.) e TBTU (956 mg, 2,98 mmol, 4 equivalentes) durante a noite para dar otetrapeptídeo protegido por Fmoc. O desenvolvimento do polímero ocorre em analogia aoprocedimento 7. O dipeptídeo protegido por cadeia lateral correspondente é confirmadoapós remoção da amostra.

LC-MS (Método 21): Rt = 3,27 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1033,3 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 1032,2 (100) [M - H]-.

Exemplo 148A[(3R)-A/2-(íerf-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-[A/5-(imino{[(2,2,5,7,8-

pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]}-L-isoleucil-O3-(tert-butil)-L-serina

<formula>formula see original document page 161</formula>

O grupo de proteção Fmoc é removido do polímero(exemplo 147A, 500 mg, 0,75 mmol) conforme descrito no procedimento 7. O aminoácidodesprotegido ligado à resina é subseqüentemente reagido com (3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucina (276 mg, 1,12 mmol, 1,5 eq.), DIEA (0,26 ml, 193 mg,1,49 mmol, 2 eq.) e TBTU (359 mg, 1,12 mmol, 1,5 equivalentes) durante a noite para daro pentapeptídeo protegido por Boc. É então lavado com DMF, THF e finalmente comdiclorometano e removido da resina com uma mistura de ácido acético glacial,trifluoroetanol e diclorometano (1+1+3). O produto de reação bruto é purificado porcromatografia. O composto do título é isolado com um rendimento de 145 mg (19% deteoria).LC-MS (Método 21): Rt = 3,17 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1040,0 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 1038,0 (100) [M - H]".Exemplo 149A

Benzil L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 161</formula>

500 mg (1,69 mmol) de benzila A/-terí-butoxicarbonila-L-serinato são reagidos de acordo com o procedimento 2 em 5,50 ml da soluçãoreagente. O produto é reagido sem mais purificação. Rendimento: 505 mg (1.63 mmol,96% de teoria).

HPLC (Método 3): R, = 3.10 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 1.94 min; MS (ESIpos) m/z (%) = 196.0 (100) [M+H]+.

Exemplo 150A

<formula>formula see original document page 162</formula>

O composto do exemplo 149A (500 mg, 1,62 mmol) e N-tert-Benzil [N2-(terí-butoxicarbonila)-L-seril]-L-serinatobutoxicarbonila-L-serina (332 mg, 1,62 mmol, 1 equivalente) são dissolvidos emdiclorometano (8,2 ml) e resfriados até 0°C. HATU (922 mg, 2,43 mmol, 1,5 equivalentes)é adicionado e então, no decorrer de 15 minutos, é adicionada por gotejamento umasolução de N,N-diisopropiletilamina (1,41 ml, 8,08 mmol, 5 equivalentes) emdiclorometano (5 ml). A mistura é então agitada em temperatura ambiente durante 72 h elavada subseqüentemente com bicarbonato de sódio e a fase orgânica é secada econcentrada. O produto bruto é purificado por cromatografia (método 34). As fraçõescontendo o produto são misturadas e liofilizadas. Rendimento: 308 mg (0,81 mmol, 50%de teoria) como um sólido incolor.HPLC (Método 4): Rt = 3,81 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1.98 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 283,5(100) [M-Boc + H]+;383,6 (30) [M+H]Exemplo 151A

Benzil[N2-(tert-butoxicarbonila)-3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 162/formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 150A, o composto do título é obtido com rendimento de 780 mg (69% de teoria)a partir do composto do exemplo 149A (780 mg, 2,52 mmol) e N2-tert-butoxicarbonila-3-(3-piridil)-L-alanina (707 mg, 2,52 mmol).HPLC (Método 5): Rt = 3,61 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,82 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 444,2 (100), [M+H]+.

Exemplo 152A

Benzil[N2-(íerí-butoxicarbonila)-L-fenilalanil]-L-serinato<formula>formula see original document page 163</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 150A, o composto do título é obtido com rendimento de 275 mg (55% de teoria)a partir do composto do exemplo 149A (350 mg, 1,13 mmol) e N2-terf-butoxicarbonila-L-fenilalanina (300 mg, 1,13 mmol).

HPLC (Método 6): R, = 4,50 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,23 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 443,2 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 441 (50) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C24H3IN2O6 calc. 443,2177, encontrados 443,2180 [M+H]+.

Exemplo 153A

Benzil[N2-(terf-butoxicarbonila)-L-treonil]-03-fe/t-butil-L-serinato

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 150A, o composto do título é obtido com rendimento de 196 mg (49% de teoria)a partir de benzilO3-(terf-butil)-L-serinat0 (320 mg, 0,88 mmol) e N2-tert-butoxicarbonilatreonina (192 mg, 0,88 mmol).

HPLC (Método 5): R, = 4,73 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,56 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 453,0 (100) [M+H]+.

Exemplo 154A

Benzil[N2-(terí-butoxicarbonila)-L-alotreonil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 163</formula>

BenzilL-serinato (314 mg, 1,02 mmol) e NMM (335 µl, 3,05mmol, 3 equivalentes) são fornecidos em DMF a 0°C. Então, é adicionado (N2-tert-butoxicarbonil)alotreonina (223 mg, 1,02 mmol, 1 equivalente), seguido de TCTU (506mg, 1,42 mmol, 1,4 equivalentes). A mistura é agitada durante a noite e entãodesenvolvida por cromatografia, de acordo com o método 45. O composto do título éobtido com um rendimento de 298 mg (73% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 3,89 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,91 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 397,0 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C19H29N2O7 calc. 397,1970, encontrados 397,1971 [M+H]+.Exemplo 155A

Benzil[W2-(terí-butoxicarbonila)-L-alanil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 164</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 150A, o composto do título é obtido com rendimento de 277 mg (78% de teoria)a partir de benzilL-serinato (300 mg, 0,97 mmol) e /V2-terf-butoxicarbonilalanina (220 mg,1,16 mmol).

HPLC (Método 5): Rt = 4,05 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,81 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 367,2 (50) [M+H]+.Exemplo 156A

Benzil[/\/2-(ferf-butoxicarbonila)-L-asparaginil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 164</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 150A, o composto do título é obtido com rendimento de 313 mg (39% de teoria)a partir de benzilo L-serinato (610 mg, 1,97 mmol) and A/2-te/t-butoxicarbonilasparagina(458 mg, 1,97 mmol, 1 equivalente).HPLC (Método 5): Rt = 3,70 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,78 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 410,1 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C19H27N3O7 calc. 410,1922, encontrados 410,1914 [M+H]+.Exemplo 157A

BenzilL-seril-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 164</formula>

O composto do exemplo 150A (290 mg, 0,76 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 451 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,16 min; MS (ESIpos) m/z (%) = 283,0 (100) [M+H]+.

Exemplo 158A

Benzil[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 165</formula>

O composto do exemplo 151A (460 mg, 0,99 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 565 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.

HPLC (Método 5): Rt = 3,03 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,23 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 344,2 (30) [M+H]+.

Exemplo 159A

BenzilL-fenilalanil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 165</formula>

O composto do exemplo 152A (275 mg, 0,62 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 285 mg (93% de teoria) decomposto bruto do título e são reagidos ainda sem mais purificação.

HPLC (Método 6): Rt = 3,33 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,14 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 343,3 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 341,3 (100) [M-H]".

Exemplo 160A

BenzilL-treonil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 165</formula>

O composto do exemplo 153A (195 mg, 0,43 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 235 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.HPLC (Método 5): Rt = 3,20 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 297 (100) [M+H]+.Exemplo 161A

BenzilL-alotreonil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 166</formula>

O composto do exemplo 154A (286 mg, 0,72 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 326 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.HPLC (Método 5): Rt = 3,16 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,38 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 297 (15) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C14H21N2O5 calc. 297,1445, encontrados 297,1436 [M+H]+.Exemplo 162A

BenzilL-alanil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 166</formula>

O composto do exemplo 155A (277 mg, 0,76 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 285 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.HPLC (Método 5): R, = 3,20 min.LC-MS (Método 22): R1 = 2,35 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 267 (100) [M+H]+.Exemplo 163A

BenzilL-asparaginil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 166</formula>

O composto do exemplo 156A (313 mg, 0,76 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2. São obtidos 428 mg (quant.) do composto dotítulo bruto e reagidos ainda sem mais purificação.HPLC (Método 6): Rt = 2,96 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,07 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 310 (100) [M+H]+.

Exemplo 164A

Benzil [N2-(terNbutoxicarbonila)glicil]-L-seril-L-serinato

O composto do exemplo 157A (360 mg, 0,85 mmol) e N-tert-butoxicarbonilaglicina (149 mg, 0,85 mmol, 1 equivalente) são dissolvidos emdiclorometano (4,4 ml) e resfriados até 0°C. É adicionado HATU (485 mg, 1,28 mmol, 1,5equivalentes) e então, no decorrer de 15 min, é adicionada por gotejamento uma solução de N,N-diisopropiletilamina (0,74 ml, 4,26 mmol, 5 equivalentes) em diclorometano (3 ml).A mistura é então agitada em temp. ambiente durante 24 h e subseqüentemente lavadacom bicarbonato de sódio e a fase orgânica é secada (sulfato de sódio) e concentrada. Oproduto bruto é purificado por cromatografia (método 34). As frações contendo o produtosão misturadas e liofilizadas. Rendimento: 220 mg (0,50 mmol, 59% de teoria) como umsólido incolor.

HPLC (Método 3) Rt = 3,70 min.

LC-MS (Método 1): Rt = 1,93 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 440,7 (100).

Exemplo 165A

Benzil[N2-(tert-butoxicarbonila)glicil]-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinato

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 164A com DMF (1,8 ml) em vez de diclorometano como solvente, o compostodo título é obtido com rendimento de 405 mg (85% de teoria) a partir do composto doexemplo 158A (565 mg, 0,95 mmol) e /V-terí-butoxicarbonilaglicina (166 mg, 0,95 mmol, 1equivalente).

HPLC (Método 5): Rt = 3,52 min.

LC-MS (Método 20): Rt= 1,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 501,4 (100) [M+H]+.

Exemplo 166 A

Benzil[N2-(íerí-butoxicarbonila)glicil]-L-fenilalanil-L-serinato<formula>formula see original document page 168</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 164A com DMF (2,0 ml) em vez de diclorometano como solvente, o compostodo título é obtido com rendimento de 237 mg (82% de teoria) a partir do composto doexemplo 159A (285 mg, 0,58 mmol) e /V-ferf-butoxicarbonilaglicina (122 mg, 0,70 mmol, 1equivalente).

HPLC (Método 6): R, = 4,28 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,29 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 500,2 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C26H34N3O7 calc. 500,2392, encontrados 500,2399 [M+H]+.Exemplo 167A

Benzil[/V2-ferf-butoxicarbonila-glicil]-L-treonil-L-serinato

<formula>formula see original document page 168</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 164A com DMF (1,8 ml) em vez de diclorometano como solvente, o compostodo título é obtido com rendimento de 84 mg (34% de teoria) a partir do composto doexemplo 160A (173 mg, 0,49 mmol) e A/2-terí-butoxicarbonilaglicina (103 mg, 0,59 mmol,1,2 equivalente).HPLC (Método 5): R, = 4,45 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,38 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 510,2 (100) [M+H]+.Exemplo 168 A

Benzil[A/2-íerf-butoxicarbonila-glicil]-L-alotreonil- L-serinato

<formula>formula see original document page 168</formula>

O composto do exemplo 161A (295 mg, 0,72 mmol) e N2-terf-butoxicarbonilaglicina (126 mg, 0,72 mmol, 1,0 equivalente) são fornecidos em DMF a0°C. TCTU (329 mg, 0,87 mmol, 1,2 equivalentes) e NMM (238 μΙ, 2,16 mmol, 3equivalentes) são então adicionados. A mistura é agitada em temperatura ambientedurante a noite e então desenvolvida por cromatografia de acordo com o método 45.Frações contendo o produto são combinadas e purificadas por cromotografia de acordocom um método modificado 32 (gradiente: 0-5 min 10%B, 5,01-35 min rampa 85%B,35,01-40 min 85%B). O composto do título é obtido com rendimento de 170 mg (52% deteoria).

HPLC (Método 5): R, = 3,73 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,82 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 454,1 (80) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C2IH32N3O8 calc. 454,2184, encontrados 454,2177 [M+H]+.

Exemplo 169A

Benzil[N2-terf-butoxicarbonila-glicil]-L-alanil-L-serinato

exemplo 164A com DMF (1,8 ml) em vez de diclorometano como solvente, o compostodo título é obtido com rendimento de 172 mg (43% de teoria) a partir do composto doexemplo 162A (285 mg, 0,75 mmol) e N2-te/f-butoxicarbonilglicina (157 mg, 0,90 mmol,1,2 equivalentes).

HPLC (Método 5): Rt = 3,83 min.

LC-MS (Método 21): R, = 1,85 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 424,4 (100) [M+H]+.

Exemplo 170A

Benzilo [N2-(terf-butoxicarbonila)-glicil]-L-asparaginil-L-serinato

<formula>formula see original document page 169</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 164A com DMF (2,0 ml) em vez de diclorometano como solvente, o compostodo título é obtido com rendimento de 208 mg (56% de teoria) a partir do composto doexemplo 163A (428 mg, 0,80 mmol) e N2-tert-butoxicarbonilglicina (167 mg, 0,96 mmol,1,2 equivalentes).

HPLC (Método 6): Rt = 3,60 min.LC-MS (Método 21): Rt = 1,75 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 467,0 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C2IH3IN4O8 calc. 467,2137, encontrados 467,2142 [M+H]+.

Exemplo 171A

Benzila glicílica-L-seril-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 170</formula>

O composto do exemplo 164A (88 mg, 0,20 mmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 1,5 ml da solução reagente. O produto bruto éreagido ainda sem mais purificação. Rendimento: 118 mg (quant.)

HPLC (Método 3): Rt = 3,08 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,56 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 340,0 (100) [M+H]+.

Exemplo 172A

Benzil[glicil]-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinato bistrifluoroacetatode acordo com o procedimento 2 em 1,5 ml da solução reagente. O produto bruto éreagido ainda sem mais purificação. Rendimento: 81 mg (quant.)

HPLC (Método 5): Rt = 3,05 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,36 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 401,0 (40) [M+H]+.

Exemplo 173A

Benzila glicílica-L-fenilalanila-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 170</formula>

O composto do exemplo 166A (63 mg, 0,13 mmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 1,0 ml da solução reagente. O produto bruto éreagido ainda sem mais purificação. Rendimento: 65 mg (96% de teoria).

HPLC (Método 6): Rt = 3,35 min.LC-MS (Método 22): Rt = 1,26 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 400,1 (90) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 398,1 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C21H26N3O5 calc. 400,1867, encontrados 400,1869 [M+H]+.

Exemplo 174A

Benzila glicílica-L-treonil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 171</formula>

O composto do exemplo 167A (82 mg, 0,16 mmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 1,5 ml da solução reagente. O produto bruto épurificado por cromatografia (método 44). Rendimento: 43 mg (76% de teoria). HPLC (Método 5): R, = 3,16 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,35 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 354 (50) [M+H]+!

Exemplo 175A

Benzila glicílica-L-alotreonil- L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 171</formula>

O composto do exemplo 168A (169 mg, 0,37 mmol) éreagido de acordo com o procedimento 2 em 1,5 ml da solução reagente. O produto bruto(194 mg, cerca de quant.) é reagido ainda sem mais purificação.

HPLC (Método 5): Rt = 3,16 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 0,78 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 354,3 (100) [M+H]+.20 HR-TOF-MS (Method 24): C16H24N4O6 calc. 354,1660, encontrados 354,1648 [M+H]+.

Exemplo 176A

Benzila glicílica-L-alanil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 171</formula>

O composto do exemplo 169A (172 mg, 0,32 mmol) é reagido de acordo com o procedimento 2 em 3,0 ml da solução reagente. O produto brutoé reagido ainda sem purificação. Rendimento: 175 mg (99% de teoria).

HPLC (Método 5): Rt = 3,20 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,41 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 324 (40) [M+H]+.Exemplo 177A

Benzila glicílica-L-asparaginil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 172</formula>

O composto do exemplo 170A (60 mg, 0,13 mmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 1,0 ml da solução reagente. O produto bruto éreagido ainda sem purificação. Rendimento: 62 mg (quant.).HPLC (Método 6): R, = 2,89 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,14 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 367 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C16H23N4O6 cale. 367,1613, encontrados 367,1609 [M+H]+.Exemplo 178A

Benzil[(3f?)-A/2-(ferf-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 172</formula>

Os compostos do exemplo 32A (75 mg, 38 pmol) e 171A (26mg, 45 pmol, 1,2 equivalentes) são dissolvidos em DMF (950 μΙ) e a solução é resfriadaaté -20 °C. São adicionados 4-Metilmorfolina (29 μl, 263 μmol, 7 equivalentes) e HATU(23 mg, 60 μmol, 1,6 equivalentes) e a mistura é agitada em temperatura ambientedurante 16 h. A mistura completa é então colocada na coluna HPLC e purificada porcromatografia de acordo com o método 33. Frações contendo o produto são combinadase liofilizadas. 15 mg (34% de teoria) do composto do título são obtidos como um sólidoincolor.

HPLC (Método 5): Rt = 3,89 min.LC-MS (Método 19): Rt = 1,81 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1053 (90) [M+H]+.

Exemplo 179A

Benzil[(3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucialotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 173</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 178A, o composto do título é obtido com rendimento de 34 mg (33% de teoria) apartir do composto do exemplo 32A (80 mg, 83 ymol) e o composto do exemplo 172A (79mg, 125 μmol, 1,5 equivalentes).

HPLC (Método 5): Rt = 3,75 min.

LC-MS (Método 18): Rt = 1,52 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 557,6 (100) [M+2H]2+; 1113,8(10) [M+H]+.

Exemplo 180A

Benzilo [(3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 173</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 178A, o composto do título é obtido com rendimento de 39 mg (33% de teoria) apartir do composto do exemplo 32A (82 mg, 97 pmol) e o composto do exemplo 173A (65mg, 126 pmol, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 6): Rt = 3,96 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,87 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 506,8 (90) [M+2H]2+; 1112,5(100) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1110,5 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C54H86N11O14 calc. 1112,6351, encontrados 1112,6343 [M+H]+.

Exemplo 181A

Benzil[(3R)-N2-(íert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-Lalotreonil-glicil-L-treonil-L-serinato trif Iuoroacetato

<formula>formula see original document page 174</formula>

O composto do título é obtido com rendimento de 21 mg(20% de teoria) de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 178A,a partir do composto do exemplo 32A (67 mg, 80 μmol) e o composto do exemplo 174A(31 mg, 88 μmol, 1,1 equivalentes).

HPLC (Método 5): R, = 3,89 min.

LC-MS (Método 19): Rt= 1,71 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1066,7 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C49H84N11O15 calc. 1066,6143, encontrados 1066,6130 [M+H]+.

Exemplo 182A

Benzil[(3R)-N2-(terf-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-tealotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serinato trifluoroacetato<formula>formula see original document page 175</formula>

0 composto do exemplo 32A (57 mg, 59 μηηοΙ) e o compostodo exemplo 175A (48 mg, 71 μηιοΙ, 1,2 equivalentes) são reagidos de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 178A. O desenvolvimento ocorre noSephadex LH20 (método 45) seguido de cromatografia de acordo com um métodomodificado 44 (gradiente: 0-5 min 5% B, ramp, 30-35 min 75% B, 35,01-40 min 75% Β). Ocomposto do título é obtido com rendimento de 65 mg (93% de teoria).

HPLC (Método 6): R, = 3,70 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,70 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 483,9 (100) [M-Boc+2H]2+,1066,6 (70) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C49H84N11O15 calc. 1066,6143, encontrados 1066,6134 [M+H]+.

Exemplo 183A

Benzil[(3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 175</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 178A e após uma purificação adicional por cromatografia (Kromasil RP-18 5 μιη,100 A, 250 χ 20 mm; eluente A: água + 0,05% TFA1 eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA:taxa de fluxo: 10 ml/min; 60% A, 40% B isocrático), o composto do título é obtido comrendimento de 48 mg (50% de teoria) a partir do composto do exemplo 32A (80 mg, 84μmol) e o composto do exemplo 176A (60 mg, 109 μηιοΙ, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 5): Rt = 3,99 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,70 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1036,6 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C48H8IN11Oi4 calc. 1036,6038, encontrados 1036,6027 [M+H]+.

Exemplo 184A

Benzil[(3/?)-N2-(íerf-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-[N5-(imino-{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]}-L-isoleucil-[03-(feAt-butil)-L-seril]-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 176</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 178A e após uma purificação adicional por cromatografia (Kromasil RP-18 5 μηι,100 A, 250 χ 20 mm; eluente A: água + 0,05% TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA:taxa de fluxo: 10 ml/min; 60% A, 40% B isocrático), o composto do título é obtido comrendimento de 62 mg (49% de teoria) a partir do composto do exemplo 148A (87 mg, 84μmol) e o composto do exemplo 36A (50 mg, 101 μmol, 1,2 equivalentes).HPLC (Método 5): Rt = 4,40 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,97 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1403,7 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C66H107N12O19S calc. 1403,7491, encontrados 1403,7517[M+H]+.

Exemplo 185ABenzil[(3R)-A/2-(fe/t-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 177</formula>

De acordo com o método de preparação para o compostodo exemplo 178A, o composto do título é obtido com rendimento de 48 mg (31% deteoria) a partir do composto do exemplo 32A (100 mg, 118 μmol) e o composto doexemplo 177A (62 mg, 130 μmol, 1,1 equivalentes).HPLC (Método 6): R, = 3.66 min.

LC-MS (Método 22): R, = 1,66 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 490,3 (100) [M-Boc +2H]2+, 1079,6 (80) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C49H83N12O15 calc. 1079,6096, encontrados 1079,6090 [M+H]+.

Exemplo 186A

<formula>formula see original document page 177</formula>

[(3R)-/V2-(íeAt-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicíl-L-seril-L-serina trifluoroacetato

O composto do exemplo 178A (21 mg, 18 μmol) éhidrogenado em 750 μΙ de ácido acético na presença de 5 mg de 10% paládio-carbonoem temperatura ambiente sob pressão atmosférica durante 2 h. A mistura é filtrada pararemover o catalisador e secada até um peso constante a vácuo de bomba de óleo. Ocomposto do título é obtido com rendimento quantitativo (20 mg) e é reagido ainda sempurificação.

HPLC (Método 5): R, = 3,56 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,72 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 963,0 (90) [M+H]\HR-TOF-MS (Method 24): C4IH76N11O15 calc. 962,5517, encontrados 962,5537 [M+H]\

Exemplo 187A

[(3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 178</formula>

O composto do exemplo 179A (55 mg, 45 μαιοΙ) éhidrogenado de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 186A.Após concentração do produto bruto, este é submetido diretamente a uma remoção Bocde acordo com o procedimento 2 e concentrado novamente. São obtidos 41 mg (88% deteoria) do composto do título e reagidos ainda sem mais purificação.

HPLC (Método 5): R, = 3,56 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,19 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 462 (40) [M+H]+; (ESlneg):m/z (%) = [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C41H71N12O12 calc. 923,5309, encontrados 923,5321 [M+H]+.

Exemplo 188A

[(3R)-N2-(ferí-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-L-fenilalanil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 178</formula>O composto do exemplo 180A (39 mg, 32 μητιοΙ) éhidrogenado de acordo com o método de preparação para preparar o composto doexemplo 186A. São obtidos 36 mg (quant.) do composto do título e reagidos ainda semmais purificação.

HPLC (Método 6): R, = 3,55 min.

LC-MS (Método 18): R, = 1.75 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 462 (100) [M-Boc+2 H]2+,1022,1 (10) [M+H]+; (ESlneg): m/z (%) = 1020,8 [M-H]'.

HR-TOF-MS (Method 24): C47H80N11O14 calc. 1022,5881, encontrados 1022,5876 [M+H]\

Exemplo 189A

[(3R)-A/2-(íerf-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-L-treonil-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 179</formula>

O composto do exemplo 181A (21 mg, 18 μιηοΙ) éhidrogenado de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 186A. 18mg (98% de teoria) do composto do título são obtidos como um sólido incolor.HPLC (Método 5): Rt = 3,58 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,58 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 976,6 (80) [M+H]+.

Exemplo 190A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-seribistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 179</formula>

O composto do exemplo 197A (44 mg, 37 μιτιοΙ) é dissolvidoem metanol (5,0 ml), sendo adicionados 10% de Pd/C (20 mg) e a mistura hidrogenadaem temperatura ambiente sob pressão atmosférica durante 2 h. A mistura é filtrada pararemover o catalisador e o filtrado é concentrado. São obtidos 42 mg (quant.) do compostobruto do título e são reagidos ainda sem purificação.HPLC (Método 5): R, = 3,00 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 439 (100) [M+2H]2+; MS(ESlneg): m/z (%) = 875 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C37H69N11Oi3 calc. 876,5150, encontrados 876,5146 [M+H]+.Exemplo 191A

[(3R)-/V2-(terí-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-L-alanil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 180</formula>

O composto do exemplo 183A (47 mg, 41 μιηοΙ) éhidrogenado de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 186A. 43mg (99% de teoria) do composto do título são obtidos como sólido.HPLC (Método 5): R, = 3,62 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,58 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 946,5 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C41H76N11O14 calc. 946,5568, encontrados 946,5569 [M+H]+.Exemplo 192A

[(3R)-N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leuc3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-omitil]}-L-isoleucil-[03-(teAt-butil)-L-seril]-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina<formula>formula see original document page 181</formula>

0 composto do exemplo 184Α (62 mg, 41 μmol) éhidrogenado de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 186A. 56mg (96% de teoria) do composto do título são obtidos como sólido. HPLC (Método 5): R, = 4,57 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 3,06 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1313,7 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C59H1OiN12O19S calc. 1313,7022, encontrados 1313,7020[M+H]+.

Exemplo 193A

[(3R)-A/2-(terNButoxicarbonila)-3-hidróxi-L-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 181</formula>

O composto do exemplo 185A (48 mg, 40 μιτιοΙ) éhidrogenado de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 186A. 42mg (99% de teoria) do composto do título são obtidos como um sólido incolor.HPLC (Método 5): R, = 3,40 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,57 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 445,3 (100) [M+2H]2+, 9989,6(70) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C42H77N12O15 calc. 989,5626, encontrados 989,5619 [M+H]+.

Exemplo 194A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 182</formula>

O composto do exemplo 186A (20 mg, 18 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2. São obtidos 20 mg (99% de teoria) do composto dotítulo como um sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 2,96 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,25 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 432 (100) [M+2H]2+, 862,6 (1)[M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C36H68N11O13 calc. 862,4993, encontrados 862,5027 [M+H]+.

Exemplo 195A

[(3R) 3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 182</formula>

O composto do exemplo 188A (36 mg, 32 μmol) é reagidode açodo com o procedimento 2. São obtidos 36 mg (99% de teoria) do composto dotítulo como sólido.

HPLC (Método 6): Rt = 2,98 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,11 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 461,8 (100) [M+2H]*+. 922,5(10) [M+H]+; MS (ESlpos): m/z (%) = 920,5 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C42H72N11O12 calc. 922,5357, encontrados 922,5357 [M+H]+.Exemplo 196A

[(3-R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-i^bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 183</formula>

O composto do exemplo 189A (18 mg, 17 μmol) é reagidode acordo com o procedimento 2. São obtidos 18 mg (94% de teoria) do composto dotítulo como um sólido.HPLC (Método 5): R, = 2,99 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,47 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 439 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Method 24): C37H70N11O13 calc. 876,5150, encontrados 876,5161 [M+H]+.Exemplo 197A

Benzilo [(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 183</formula>

O composto do exemplo 182A (57 mg, 48 μmol) é reagidode acordo com o procedimento 2. Após purificação por cromatografia de acordo com ummétodo modificado 44 (gradiente: 0-5 min 5% B1 rampa, 30-35 min 60% B1 35,01-40 min60% B) 45 mg (78% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC (Método 5): Rt = 3,40 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,12 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 483,9 (100) [M+2H]2+, 966,6(10) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C44H75N11O13 calc. 966,5619, encontrados 966,5643 [M+H]+.

Exemplo 198A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 184</formula>

O composto do exemplo 191A (43 mg, 38 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 2 ml da solução reagente. 45 mg do composto brutodo título são obtidos como sólido.

HPLC (Método 5): R, = 2,99 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 424 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Method 24): C36H67N11O12 calc. 846,5044, encontrados 846,5029 [M+H]+.

Exemplo 199A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-seril-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 184</formula>

O composto do exemplo 192A (56 mg, 39 μmol), 11 μΙ deágua e 11 μΙ de triisopropilsilano são recolhidos em 4,0 ml of TFA. Após 2 h, a mistura éconcentrada e purificada por cromatografia (método 45). São obtidos 40 mg do compostodo título (90% de teoria) como sólido.

HPLC (Método 5): R, = 2,96 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,30 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 446 (100) [M+2H]2+.

Exemplo 200A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleubis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 185</formula>

O composto do exemplo 193A (42 mg, 38 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 em 2 ml da solução reagente. 42 mg (99% de teoria) docomposto bruto do título são obtidos como sólido.

HPLC (Método 5): R, = 2,77 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,16 min, MS (ESlpos): m/z (%) - 446 (100) [M+2H]2+, 890 (20)[M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 888 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C37H69N12O13 calc. 889,5102, encontrados 889,5095 [M+H]+.

Exemplo 201A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(tert-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 185</formula>O composto do exemplo 194A (19 mg, 17 pmol) e ocomposto do exemplo 17A (12 mg, 19 μmol, 1,1 equivalentes) são dissolvidos em DMF(530 μl) a O°C, sendo adicionado DIEA (15 μΙ, 87 μmol, 5 eq.)· A mistura de reação éagitada ainda durante a noite, em cujo período é aquecida lentamente até RT. A misturaé recolhida em acetonitrilo e purificada por cromatografia (método 44). Rendimento: 14mg, (10 μmol 59% de teoria) do composto do título como sólido.HPLC (Método 5): R, = 3,94 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,93 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1259,1 (50) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C58H92N13Oi8 cale. 1258,6678, encontrados 1258,6675 [M+H]\Exemplo 202A

[(3ft)-/V2-(Benziloxicarbonila)-3-{(tert-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidrovi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serinatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 186</formula>

O composto do exemplo 187A (41 mg, 36 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (23 mg, 39 μmol, 1,1 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201 A. 37 mg (73% de teoria) docomposto do título são obtidos.HPLC (Método 5): R, = 3,87 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,72 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 660,5 (100) [M+2H]2+, 1319,7(5) [M+H]+; (ESlneg): m/z (%) = 1317,5 (100) [M-H]'.

HR-TOF-MS (Method 24): C63H95N14O17 calc. 1319,6995, encontrados 1319,6978 [M+H]+.Exemplo 203A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(terf-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxileucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina bis-trifluoroacetato<formula>formula see original document page 187</formula>

O composto do exemplo 195A (36 mg, 31 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (22 mg, 39 μmol, 1,2 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201A. 34 mg (70% de teoria) docomposto do título são obtidos.

HPLC (Método 6): Rt = 3,93 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,01 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 610,1 (100) [M-Boc+2H]2+,1318,8 (20) [M+H]+; (ESlneg): m/z (%) = 1316,7 (100) [M-H]'.

HR-TOF-MS (Method 24): C64H96N13O17 calc. 1318,7042, encontrados 1318,7036 [M+H]+.

Exemplo 204A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(tert-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-treonil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 187</formula>

O composto do exemplo 196A (18 mg, 17 μηιοΙ) é reagidocom o composto do exemplo 17A (12 mg, 21 μιτιοΙ, 1,1 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201 A. Após purificação de acordo com ométodo 45, 17 mg (76% de teoria) do composto do título são isolados.HPLC (Método 5): Rt = 3,96 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,97 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1272,8 (40) [M+H]+HR-TOF-MS (Method 24): C59H94N13O18 calc. 1272,6835, encontrados 1272,6853 [M+H]+.

Exemplo 205A[(3f?)-/V2-(Benziloxicarbonila)-3-{(teAt-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3/?)-3-hidleucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil- L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 188</formula>

O composto do exemplo 190A (44 mg, 40 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (25 mg, 44 μmol, 1,1 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201A. Após purificação de acordo com ométodo 45, 50 mg (90% de teoria) do composto do título são isolados.HPLC (Método 5): Rt = 3,80 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,98 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1272,7 (20) [M+H]+HR-TOF-MS (Method 24): C59H94N13Oi8 cale. 1272,6835, encontrados 1272,6846 [M+H]+.Exemplo 206A

[(3f?)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(íerf-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 188</formula>

O composto do exemplo 198A (45 mg, 42 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (32 mg, 54 μmοl, 1,3 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201 A. Após purificação de acordo com ométodo 45, 38 mg (67% de teoria) do composto do título são isolados.HPLC (Método 5): Rt = 3,99 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,12 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 571,9 (90) [M-Boc+2Η]2+; 1242,7(100) [Μ+Η]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C58H92N13O17 cale. 1242,6729, encontrados 1242,6691 [Μ+Η]+.

Exemplo 207Α

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(te^butoxicatò^leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-seril-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serintrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 189</formula>

O composto do exemplo 199A (39 mg, 35 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (24 mg, 42 μηηοΙ, 1.2 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201 A. Após purificação de acordo com ométodo 45, 42 mg (80% de teoria) do composto do título são isolados.HPLC (Método 5): Rt = 3,93 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,93 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 594,4 (100) [M-Boc+2H]2+; 1287,7 (30) [M+H]+.

Exemplo 208A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-{(íe/t-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxileucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 189</formula>

O composto do exemplo 200A (42 mg, 38 μmol) é reagidocom o composto do exemplo 17A (26 mg, 45 μητιοΙ, 1,2 equivalentes), de acordo com ométodo de preparação do composto do exemplo 201A. Após purificação de acordo com ométodo 45, 46 mg (81% de teoria) do composto do título são isolados.

HPLC (Método 5): Rt = 3,78 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,91 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1285,7 (40) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C59H93N14O18 calc. 1285,6787, found 1285,6777 [M+H]+.

Exemplo 209A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 190</formula>

O composto do exemplo 201A (14 mg, 10 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 0,5 ml da solução reagente. Sem mais purificação,são obtidos 13 mg (9,3 μιηοΙ, 95% de teoria) do composto do título como sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 3,44 min.

LC-MS (Método 20): R, = 1,19 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 580 (100) [M+2H]2+, 1158,6(5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C53H84N13O16 calc. 1158,6154, encontrados 1158,6183 [M+H]+.

Exemplo 21OA

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino}-L-fenilalanil]-[(3f?)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-ísoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 190</formula>

O composto do exemplo 202A (37 mg, 26 μηποΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 0,5 ml da solução reagente. Sem mais purificação,são obtidos 46 mg do composto do título bruto.

HPLC (Método 5): R, = 3,39 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,67 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 610 (20) [M+2H]2+; (ESlnegm/z (%) = 1218 (100) [M-H]'.

HR-TOF-MS (Method 24): C58H87Ni4Oi5 cale. 1219,6470, encontrados 1219,6472 [M+H]+.Exemplo 211A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 191</formula>

O composto do exemplo 203A (34 mg, 22 pmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente. Sem mais purificação,são obtidos 34 mg (quant.) do composto bruto do título.

HPLC (Método 5): R, = 3,34 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,37 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 610,1 (100) [M+2H]2+ 1218,8(5) [M+H]+; (ESlneg m/z (%) = 1216,8 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C59H88N13O15 cale. 1218,6518, encontrados 1218,6539 [M+H]+.

Exemplo 212A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-treonil-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 191</formula>O composto do exemplo 204A (17 mg, 12 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 1,0 ml da solução reagente. Sem mais purificação,são obtidos 17 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 5): Rt = 3,48 min.

LC-MS (Método 21): R, = 1,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 587,2 (100) [M+2H]2+, 1172,7(5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C54H86N13O16 cale. 1172,6310, encontrados 1172,6328 [M+H]+.Exemplo 213A

[(3f?)-A/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 192</formula>

O composto do exemplo 205A (50 mg, 36 μmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 4.8 ml da solução reagente. Sem mais purificação,são obtidos 56 mg (quant.) do composto bruto do título e reagidos ainda sem purificação.HPLC (Método 6): Rt = 3,22 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 586,9 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Method 24): C54H86N13O16 calc. 1172,6310, encontrados 1172,6323 [M+H]+.Exemplo 214A

[(3R)-A/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 192</formula>

O composto do exemplo 206A (49 mg, 36 μιτιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 1,0 ml da solução reagente durante 1 h. Sem maispurificação, são obtidos 49 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 5): R, = 3,46 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 572,0 (100) [M+2H]2+, 1142,6(5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C53H84N13O15 calc. 1142,6205, encontrados 1142,6221 [M+Hf.

Exemplo 215A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-seril-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 193</formula>

O composto do exemplo 207A (42 mg, 28 μmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 1,0 ml da solução reagente durante 1 h. Sem maispurificação, são obtidos 43 mg (quant.) do composto bruto do título.

HPLC (Método 5): Rt = 3,43 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,34 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 594,5 (100) [M+2H]2+, 1187,6(5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C53H83N14O17 calc. 1187,6056, encontrados 1187,6074 [M+H]+.

Exemplo 216A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 193</formula>

O composto do exemplo 208A (46 mg, 30 pmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 1,0 ml da solução reagente durante 30 min. Semmais purificação, são obtidos 46 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 5): Rt = 3,21 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,31 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 593,5 (100) [M+2H]2+, 1185,5(5) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C54H85N14O16 calc. 1185,6263, encontrados 1185,6241 [M+H]+.

Exemplo 217A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina C19-N3,1-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 194</formula>

O composto do exemplo 209A (13 mg, 9,3 pmol) édissolvido em DMF (480 μl), e a solução é resfriada até 0°C. São adicionados A-Metilmorfolina (6 pL, 56 μιηοΙ, 6 equivalentes) e HATU (11 mg, 28 μιτιοΙ, 3 equivalentes) ea mistura é agitada a 0°C durante 2 h. A mistura completa é então colocada em umacoluna de HPLC e purificada por cromatografia de acordo com o método 44. Fraçõescontendo produto são combinadas e liofilizadas. São obtidos 5 mg (4,0 pmol, 43% deteoria) do composto do título como sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 3,70 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 570,9 (80) [M+2H]2+, 1140,6(90) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C53H82N13O15 calc. 1140,6048, encontrados 1140,6066 [M+H]+.

Exemplo 218A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina C19-N31-Iactamatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 194</formula><formula>formula see original document page 195</formula>

De acordo com ο método de preparação do composto doexemplo 217A o composto do título é obtido com rendimento de 17 mg (51% de teoria) apartir do composto do exemplo 21OA (37 mg, 26 μmol).

HPLC (Método 5): R1 = 3,60 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,45 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 601,5 (100) [M+2H]2+, 1201,6(20) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C58H85N14O14 calc. 1204,6365, encontrados 1201,6338 [M+H]+.

Exemplo 219A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil]-L-serina C1g-N3,1-Iactamatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 195</formula>De acordo com o método de preparação do composto do

exemplo 217A o composto do título é obtido com rendimento de 28 mg (96% de teoria) apartir do composto do exemplo 211A (34 mg, 22 μmol).HPLC (Método 6): R, = 3,78 min.LC-MS (Método 20): Rt = 1,75 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 601,0 (50) [M+2H]2+, 1200,8(100) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1198,8 (100) [M-H]'.Exemplo 220A

[(3R)-/V2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-treonil-L-serina C19-N31-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 196</formula>

De acordo com o método de preparação para o compostodo exemplo 217A, o composto do título é obtido com rendimento de 10 mg (65% deteoria), a partir do composto do exemplo 212A (17 mg, 12 μmol).HPLC (Método 5): R, = 3,75 min.LC-MS (Método 19): Rt = 1,59 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1154,7 (100) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C54H84N13Oi5 cale. 1154,6205, encontrados 1154,6194 [M+H]+.Exemplo 221A

[(3f?)-/V2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serinato C19-N3,'-Iactama trifluoroacetato<formula>formula see original document page 197</formula>

O composto do exemplo 213A (50 mg, 36 μmol) é submetido

a ciclização de acordo com o método de preparação do composto do exemplo 217A.método 45 é então usado para cromatografia. O composto do título é obtido com rendimento bruto de 52 mg (75% puro, 86% de teoria) e não é mais purificado.HPLC (Método 6): Rt = 3,55 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,60 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1154,7 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C54H84N13O15 cale. 1154,6205, encontrados 1154,6171 [M+H]+.

Exemplo 222A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serina C19-N3, 1-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 197</formula>

De acordo com o método de preparação para o compostodo exemplo 217A, no qual a purificação ocorre de acordo com o método 45, o compostodo título é obtido com rendimento de 34 mg (77% de teoria) a partir do composto doexemplo 214A (49 mg, 36 μmol).

HPLC (Método 5): Rt = 3,78 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,61 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1124,6 (100) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C53H82N13Oi4 cale. 1154,6099, encontrados 1124,6073 [M+H]+.

Exemplo 223A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina Ci9-A/3,Iactamatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 198</formula>

De acordo com o método de preparação para o compostodo exemplo 217A, no qual a purificação ocorre de acordo com o método 45, o compostodo título é obtido com rendimento de 28 mg (73% de teoria) a partir do composto doexemplo 215A (42 mg, 27 μmol).

HPLC (Método 5): Rt = 3,68 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,57 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1169,6 (100) [M+H]+HR-TOF-MS (Method 24): C53HeiN14O16 calc. 1169,5950, encontrados 1169,5939 [M+H]+.

Exemplo 224A

[(3R)-N2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C19-N31-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 198</formula><formula>formula see original document page 199</formula>

De acordo com ο método de preparação para o compostodo exemplo 217A, no qual a purificação ocorre de acordo com o método 45, o compostodo título é obtido com rendimento de 29 mg (75% de teoria) a partir do composto doexemplo 216A (45 mg, 30 pmol).HPLC (Método 5): R, = 3,52 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,56 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1167,5 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Method 24): C54H83N14O15 calc. 1167,6157, encontrados 1167,6152 [M+H]+.Exemplo 225A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina C19-N3,fIactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 199</formula>

O composto do exemplo 217A é dissolvido em metanol (750µL) na presença de 1 M de ácido clorídrico (24 µL, 6 equivalentes) e hidrogenado napresença de 3 mg de 10% de paládio-carbon sob pressão atmosférica em temperaturaambiente durante 1,5 h. A solução é filtrada para remover o catalisador e concentrada. Ocomposto do título é obtido com rendimento de 4,3 mg (quant.) como sólido.HPLC (Método 5): R, = 3,21 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 0,90 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 503,9 (100) [M+2H]2+, 1006,6(3) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C45H76N13O13 calc. 1006,5681, encontrados 1006,5670 [M+H]+.Exemplo 226A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina C1^N3,1-Iactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 200</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 17 mg (quant.) a partirdo composto do exemplo 218A (17 mg, 13 µ????).HPLC (Método 5): Rt = 3,17 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,34 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 534 (20) [M+2H]2+; (ESlneg):m/z (%) = 1065 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C50H79N14O12 calc. 1067,5997, encontrados 1067,6006 [M+H]+.

Exemplo 227A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina C19-N31-lactama bis-hidrocloreto<formula>formula see original document page 201</formula>

De acordo com ο método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 24 mg (99% de teoria) apartir do composto do exemplo 219A (28 mg, 21 μmol).

HPLC (Método 5): R, = 3,17 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 1,15 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 534 (100) [M+2H]2+; (ESlneg):m/z (%) = 1064,8 (50) [M-H]-.

HR-TOF-MS (Method 24): CsiH80N13O12 calc. 1066,6044, encontrados 1066,6013 [M+H]+.

Exemplo 228A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-treonil-L-serina C19-N3,1-Iactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 201</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do titulo é obtido com rendimento de 8,5 mg (99% de teoria) apartir do composto do exemplo 220A (10 mg, 8 μιτιοΙ).

HPLC (Método 5): Rt = 3,25 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 511 (100) [M+2H]2+.

HR-TOF-MS (Method 24): C46H78N13Oi3 calc. 1020,5837, encontrados 1020,5831 [M+H]+.

Exemplo 229A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-L-alotreonil-L-serinato C19-N3,1-lactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 202</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 40 mg (86% de teoria) apartir do composto do exemplo 221A (52 mg, 41 μmol).

HPLC (Método 6): Rt = 2,93 min.

Exemplo 230A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonglicil-L-alanil-L-serina C19-N31-lactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 202</formula><formula>formula see original document page 203</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 29 mg (99% de teoria) apartir do composto do exemplo 222A (34 mg, 27 pmol).HPLC (Método 5): Rt = 3,24 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,48 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 496 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Method 24): C45H76N13Oi2 cale. 990,5731, encontrados 990,5726 [M+H]+.

Exemplo 231A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreon^^glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N3,1-Iactama bis-hídrocloreto

<formula>formula see original document page 203</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 21 mg (95% de teoria) apartir do composto do exemplo 223A (28 mg, 20 μmol).HPLC (Método 5): Rt = 3,16 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,43 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 519 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Method 24): C45H75NuO14 calc. 1035,5582, encontrados 1035,5585 [M+Hf.

Exemplo 232A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-L-asparaginil-L-serina Ct9-N3,1-Iactama bis-hidrocloreto

<formula>formula see original document page 204</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 225A, o composto do título é obtido com rendimento de 24 mg (96% de teoria) apartir do composto do exemplo 224A (29 mg, 23 μmol).HPLC (Método 5): Rt = 2,90 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 517 (100) [M+2H]2+, 1033 (5)[M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C46H76N14O13 calc. 1033,5790, encontrados 1033,5773 [M+H]+.

Exemplo 233A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-íe/t-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seserina C111-N3 3-Iactama hidrocloreto<formula>formula see original document page 205</formula>

O composto do exemplo 225A (4,3 mg, 4 μmol) e ocomposto do exemplo 10A (2,5 mg, 6 μmοl, 1,5 equivalentes) são dissolvidos em DMF(300 μl) e a solução é resfriada até O0C. 4-Metilmorfolina (20 μΙ, 16 μmol, 4 equivalentes)e HATU (2,4 mg, 6 μmol, 1,6 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitada emtemperatura ambiente durante 2 h. A reação é então paralisada com 3 ml de metanol epurificada por cromatografia de acordo com o método 45. Frações contendo produto sãocombinadas e concentradas. São obtidos 4 mg (2,8 μηποΙ, 70% de teoria) do composto dotitulo como sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 4,45 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,08 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 698,6 (100) [M+2H]2+, 1395,4(30) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Method 24): C67H109N15O17 calc. 1394,8043, encontrados 1394,8070[M+H]+.

Exemplo 234A

[N2-(Benziloxicarbonila)-3-íerí-butil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alanil]-[(3f?)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina C1,11- -N3,3-lactama hidrocloreto<formula>formula see original document page 206</formula>

De acordo com o método de preparação para preparar ocomposto de exemplo 233A, o composto do título é obtido com rendimento de 12 mg(54% de teoria) a partir do composto de exemplo 226A (17 mg, 13 μπιοΙ).HPLC (Método 5): R, = 4,25 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 3,61 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 729 (100) [M+2H]2+; (ESlneg):m/z (%) = 1454 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C72HinN16O16 calc. 1455,8359, encontrados 1455,8347[M+H]+.

Exemplo 235A

[N2-(ferf-Butoxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-tert-bútil-L-alaníl]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3/?)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alothreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina C111-N3,3-Iactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 206</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A, o composto do título é obtido com rendimento de 19 mg (62% de teoria) apartir do composto do exemplo 227A (24 mg, 21 mmol) e do dipeptídeo do exemplo 8A(10 mg, 27 mmol, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 6): Rt = 4,57 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 2,291 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 661,2 (100) [M-Boc +2H]2\1421,0 (30) [M+H]+; (ESlneg): m/z (%) = 1419,1 (20) [M-H]".

HR-TOF-MS (Method 24): C70H113N15O16 calc. 1420,8563, encontrados 1420,8558[M+H]+.

Exemplo 236A

[N2-(íert.-Butoxicarbonila)-3-teAt-butil-D-alanil]-[3-te/t-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilala-nil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[L-treonil]C1·11-N3 3-Iactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 207</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 10 mg (91% de teoria) apartir do composto do exemplo 228A (8,5 mg, 8 μιτιοΙ) e do dipeptídeo do exemplo 8A(4 mg, 10 μιτιοΙ, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 5): Rt = 4,65 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,09 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1374,8 (30) [M+H]+HR-TOF-MS (Method 24): C65H112N15O17 calc. 1374,8356, encontrados 1374,8376[M+H]\Exemplo 237A

[N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-ferí-butil-D-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serinato C1,11-N33-Iactamahidrocloreto

<formula>formula see original document page 208</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 47 mg (purity 77%, 69%de teoria) a partir do composto do exemplo 229A (40 mg, 35 μmol) e do dipeptídeo doexemplo 8A (17 mg, 46 μmol, 1,5 equivalentes).

HPLC (Método 6): Rt = 4,31 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,08 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1374,8 (50) [M+H]+HR-TOF-MS (Method 24): C65H112N15O17 calc. 1374,8356, encontrados 1374,8362[M+H]+.

Exemplo 238A

[N2-(tert.-Butoxicarbonila)-3-terf-butil-D-alanil]-[3-íerf-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanIL-Lserina C111-N33-Iactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 208</formula>De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 37 mg (98% de teoria) apartir do composto do exemplo 230A (29 mg, 27 pmol) e do dipeptídeo do exemplo 8A(13 mg, 35 pmol, 1,3 equivalentes).

HPLC (Método 5): Rt = 4,60 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,10 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 623,0 (100) [M - Boc +2H]2+;1344,9(90) [M+H]+

HR-TOF-MS (Method 24): C64H109N15O16 calc. 1344,8250, encontrados 1344,8241[M+H]\

Exemplo 239A

N2-(ferí.-Butoxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanilH(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-ahidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N3,3-lactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 209</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 24 mg (89% de teoria) apartir do composto do exemplo 231A (21 mg, 19 μητιοΙ) e do dipeptídeo do exemplo 8A (9mg, 25 pmol, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 5): R, = 4,42 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,03 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 645,5 (100) [M - Boc +2H]2+;1389,9 (40) [M+H]+

HR-TOF-MS (Method 24): C64H108N16O18 calc. 1389,8101, encontrados 1389,8105[M+H]+.

Exemplo 240A[N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-tert-butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-gliciasparaginil-L-serina C7 9-AZ3i-lactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 210</formula>

De acordo com o método de preparação do composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 30 mg (97% de teoria) apartir do composto do exemplo 232A (24 mg, 22 μηιοΙ) e do dipeptídeo do exemplo 8A(11 mg, 28 μιτιοΙ, 1,3 equivalentes).

HPLC (Método 5): Rt = 4,26 min.

LC-MS (Método 21): Rt = 2,19 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 644,7 (100) [M - Boc +2H]2+.

HR-TOF-MS (Method 24): C65H111N16O17 calc. 1387,8308, encontrados 1387,8304 [M+H]+.

Exemplo 241A

Benzilo N2-(tert-butoxicarbonila)-L-alaninato

<formula>formula see original document page 210</formula>

N2-(tert-Butoxicarbonila)-L-alanina (1,13 g, 5,83 mmol) édissolvido em DCM seco (6 ml), são adicionadas cerca de 3 A peneiras moleculares e amistura é então resfriada até 0°C. São adicionados álcool benzílico (1,81 ml, 17,48 mmol,3 equivalentes), EDCI (2,23 g, 11,65 mmol, 2 equivalentes)e DMAP (71 mg, 0,58 mmol,0,1 equivalente). A mistura é agitada por 150 min, durante o que deixa-se que a misturaaqueça lentamente até RT. A mistura é então concentrada até a secagem e o resíduo édesenvolvido por cromatografia (Biotage, cicloexano-acetato etílico 9:1). Fraçõescontendo o produto são combinadas e concentradas. O composto do título é obtido comrendimento de 1,03 g (63% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 4,70 min.

LC-MS (Método 21): R, = 2,44 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 280,3 (30) [M+H]+.Exemplo 242A

Benzilo L-alaninato trifIuoroacetato

<formula>formula see original document page 211</formula>

O composto do exemplo 241A (200 mg, 716 μMοL) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente durante 60 min. Semmais purificação, são obtidos 200 mg (95% de teoria) do composto bruto do título.LC-MS (Método 22): R, = 2,30 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 180 (100) [M+H]+.Exemplo 243A

Benzilo [/S/2-(íerf-butoxicarbonila)-glicil]-[(3S)-3-hidróxi-04-metil-L-aspartil]-L-alaninato

<formula>formula see original document page 211</formula>

O composto do exemplo 33A (441 mg, 895 μMοL) e ocomposto do exemplo 242A (315 mg, 1,07 mmol, 1,2 equivalentes) são dissolvidos emDMF (4,8 ml) e resfriados até -20°C. São então adicionados 4-Metilmorfolina (492 μΙ,4,48 mmol, 5 equivalentes) e HATU (510 mg, 1,34 mmol, 1,5 equivalentes) e a mistura élentamente aquecida até a temperatura ambiente e agitada por cerca de 16 h. A mistura éentão purificada por cromatografia em duas etapas (método 45, então método 34). Ocomposto do título é obtido com rendimento de 277 mg (64% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 4,06 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,13 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 482,1 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C22H32N3O9 cale. 482,2134, encontrados 482,2120 [M+H]+.Exemplo 244A

Benzilo [A/2-(terf-butoxicarbonila)-glicil]-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alaninato

<formula>formula see original document page 212</formula>

O composto do exemplo 243A (139 mg, 288 pmol) éfornecido em 5,1 ml de acetonitrilo e resfriado até 0°C; são adicionados 3,1 ml de umasolução conc. aquosa de amônia e a agitação continua a 0°C. Após 20 min, a reação éparalisada com ácido acético glacial (2,6 ml), diluída em água e extraída com acetatoetílico. O extrato orgânico é lavado com salmoura conc., secado em sulfato de sódio econcentrado. Rendimento: 122 mg (75% de teoria) do composto bruto do título que éainda sem purificação.

HPLC (Método 6): Rt = 3,78 min.

LC-MS (Método 20): R1 = 1,69 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 467,1 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 465,2 (100) [M-H]'.

HR-TOF-MS (Método 24): C2iH3IN4O8 calc. 467,2137, encontrados 467,2137 [M+H]+.

Exemplo 245A

Benzilo glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alaninato trifluoroacetato

O composto do exemplo 241A (122 mg, 217 pmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente durante 60 min. Semmais purificação, são obtidos 100 mg (96% de teoria) do composto bruto do título.HPLC (Método 6): Rt = 3,05 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,23 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 367 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C16H23N4O6 cale. 367,1613, encontrados 367,1622 [M+H]+.

Exemplo 246A

Benzilo [(3R)-N2-(tert-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alaninato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 213</formula>

O composto do exemplo 32A (133 mg, 139 μηιοΙ) e ocomposto do exemplo 245A (100 mg, 208 μητιοΙ, 1,5 equivalentes) são dissolvidos emDMF (950 μΙ) e a solução é resfriada até -20°C. São adicionados 4-Metilmorfolina (46 μΙ,416 μmol, 3 equivalentes) e HATU (84 mg, 222 μmol, 1,6 equivalentes) e a mistura éagitada em temperatura ambiente durante 16 h. A mistura completa é então purificadapor cromatografia de acordo com o método 45. Frações contendo o produto sãocombinadas e liofilizadas. 157 mg (95% de teoria) do composto do título são obtidoscomo sólido.

HPLC (Método 6): R, = 3,66 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,71 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1079,1 (80) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C49H83N12O15 cale. 1079,6096, encontrados 1079,6094 [M+H]+.

Exemplo 247A

[(3R)-V2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alanina trifluoroacetato<formula>formula see original document page 214</formula>

o composto do exemplo 246A (190 mg, 159 pmol) éhidrogenado de acordo com o método para preparar o composto do exemplo 186A. 172mg (98% de teoria) do composto do título são obtidos como sólido.HPLC (Método 6): R, = 3,39 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,55 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 445,3 (100) [M+2H]2+, 989,5(60) [Μ+ΗΓ; MS (ESlneg): m/z (%) = 987,5 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C42H77N12O15 calc. 989,5626, encontrados 989,5651 [M+H]+.Exemplo 248A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxiasparaginil]-L-alanina bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 214</formula>

O composto do exemplo 247A (172 mg, 156 pmol) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2.0 ml da solução reagente durante 30 min. Semmais purificação, são obtidos 174 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 6): Rt = 2,78 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,17 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 889 (80) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 887 (100), [M-H]'.

HR-TOF-MS (Método 24): C37H69N12O13 calc. 889,5102, encontrados 889,5096 [M+H]+.Exemplo 249A

[(3R)-/V2-(Benziloxicarbonila)-3-{(íerf-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginitrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 215</formula>

De acordo com o método para preparar o composto doexemplo 201 A, o composto do exemplo 248A (174 mg, 156 μιτιοΙ) é reagido com ocomposto do exemplo 17A (99 mg, 171 μιτιοΙ, 1,1 equivalentes). Após purificação porcromatografia (variante do método 36, em vez do gradiente e a separação é realizada deforma isocrática com o eluente A:eluente B = 3:2), 81 mg (34% de teoria) do composto dotítulo são isolados.

HPLC (Método 6): R, = 3,76 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,89 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 593,4 (100) [M-Boc+2H]*+,1285,7 (30) [M+H]+; (ESlneg): m/z (%) = 1283,5 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C59H93N14O18 cale. 1285,6787, encontrados 1285,6781 [M+H]+.

Exemplo 250A

[(3R)-/\/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alanina bis-trifluoroacetato

O composto do exemplo 249A (81 mg, 54 μιτιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente durante 60 min. Semmais purificação, são obtidos 81 mg (99% de teoria) do composto bruto do título.HPLC (Método 6): Rt = 3,20 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,29 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 593,7 (100) [M+2H]2+, 1185,6(5) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1183,7 (100), [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C54H85N14O16 calc. 1185,6263, encontrados 1185,6249 [M+H]+.Exemplo 251A

[(3R)-A/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alanine C19-N31-Iactamatrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 216</formula>

De acordo com o método para preparar o composto doexemplo 217A, em que a purificação ocorre de acordo com o método 45, o composto dotítulo é obtido com rendimento de 69 mg (93% de teoria) a partir do composto do exemplo250A (81 mg, 53 μιηοΙ).HPLC (Método 6): R, = 3,56 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,67 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1167,6 (100) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 1165,6 (100), [M-H]*.

HR-TOF-MS (Método 24): C54H83N14O15 calc. 1167,6157, encontrados 1167,6154 [M+H]+.Exemplo 252A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoniglicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alanina C1l9-N31-Iactama bishidrocloreto<formula>formula see original document page 217</formula>

De acordo com ο método para preparar o composto doexemplo 225A o composto do título é obtido com rendimento de 53 mg (97% de teoria) apartir do composto do exemplo 251A (69 mg, 49 μmol).

HPLC (Método 6): Rt = 2,98 min.

LC-MS (Método 20): R, = 0,96 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 517,5 (100) [M+2H]2+, 1033,7(10) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1031,7 (60) [M-H]", 1077,7 (100) [M+HCOOH-H]\HR-TOF-MS (Método 24): C46H77N14O13 calc. 1033,5790, encontrados 1033,5782 [M+H]+.

Exemplo 253A

[N2-(fert.-Butoxicarbonila)-3-íeAt-butil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alothreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-alanina C1,11-N33-Iactama hidrocloreto

<formula>formula see original document page 217</formula>De acordo com o método para preparar o composto doexemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 58 mg (85% de teoria) apartir do composto do exemplo 252A (53 mg, 48 pmol) e do dipeptídeo do exemplo 8A(23 mg, 62 μηηοΙ, 1,3 equivalentes).HPLC (Método 6): Rt = 4,35 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,08 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1387,9 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): C65H111N16Oi7 cale. 1387,8308, encontrados 1387,8314[M+H]+.

Exemplo 254A

Pentafluorofenil [(3f?)-A/2-(íerí-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreoninato trif Iuoroacetato

<formula>formula see original document page 218</formula>

O composto do exemplo 32A (60 mg, 71 pmol),pentafluorofenol (65 mg, 355 μηιοΙ, 5 equivalentes) e EDCI (20 mg, 107 μιτιοΙ, 1,5equivalentes) são dissolvidos em diclorometano (0,9 ml) a O0C sob argônio e agitados emtemperatura ambiente durante a noite. O solvente é removido e o resíduo écromatografado (método 34). O composto do título é isolado com um rendimento de 32mg (45% de teoria).HPLC (Método 6): R, = 4,12 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,93 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 897,4 (100) [M+H]\Exemplo 255A

Pentafluorofenil A/2-(terf-butoxicarbonila)-D-alanina

<formula>formula see original document page 218</formula>

O composto do título é isolado com rendimento de 471 mg(64% de teoria) em analogia à preparação do composto do exemplo 254A, a partir de N2-(terí-butoxicarbonila)-D-alanina (390 mg, 2,06 mmol).HPLC (Método 5): R, = 5,00 min.LC-MS (Método 21): R, = 2.74 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 356 (5) [M+H]+.

Exemplo 256A

[N2-(tert-Butoxicarbonila)-D-alanil]-(3S)-04-metil-3-hidróxi-L-ácido aspártico

<formula>formula see original document page 219</formula>

O composto do exemplo 255A (470 mg, 1,32 mmol) e(2S,3S)-2-amino-3-hidróxi-4-metoxi-4-hidrocloreto de ácido oxobutírico (veja exemplo 33Apara preparação, 407 mg, 2,04 mmol, 1,6 equivalentes) são dissolvidos em DMF (20 ml)a 0°C e DIPEA (1,78 ml, 10,20 mmol, 7,7 equivalentes) são adicionados. A mistura éagitada em temperatura ambiente durante cerca de 16 h e então cromatografadade acordo com o método 45 e purificada de modo fino pelo método 32. Rendimento:200 mg (29% de teoria).

HPLC (Método 5): R, = 3,26 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,48 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 335,2 (90) [M+H]+.

Exemplo 257A

Benzilo [N2-(feAt-butoxicarbonila)-D-alanil]-[(3S)-04-metil-3-hidróxi-L-aspartil]-L-serinato

<formula>formula see original document page 219</formula>

O composto do exemplo 256A (195 mg, 0,58 mmol) e ocomposto do exemplo 149A (190 mg, 0,61 mmol, 1,1 equivalentes) são dissolvidos emDMF (5,0 ml) e a solução é resfriada até 0°C. São adicionados 4-Metilmorfolina (203 μΙ,1,84 mmol, 3 equivalentes) e TCTU (326 mg, 0,92 mmol, 1,5 equivalentes) e a mistura éagitada em temperatura ambiente durante 2,5 h. A mistura completa é entãocromatografada (método 45) e purificada de modo fino pelo método 32. Frações contendoo produto são combinadas e liofilizadas. 146 mg (47% de teoria) do composto do títulosão obtidos como sólido.

HPLC (Método 5): Rt = 3,89 min.

LC-MS (Método 19): Rt= 1,94 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 511,1 (100) [M+H]+.N20Na = +15,9 (c = 0,5, MeOH).

Exemplo 258A[N2-(íert-Butoxicarbonila)-D-alanil]-[(3S)-04-metil-3-hidróxi-L-aspartil]-L-serina

<formula>formula see original document page 220</formula>

O composto do exemplo 257A (135 mg, 264 mmol) ishidrogenado na presença de 30 mg de 10% de paládio-carbono em metanol (8,0 ml) emtemperatura ambiente for 2 h. A mistura é filtrada para remover o catalisador econcentrada e o produto bruto é cromatografado (método 32). Rendimento: 117 mg(quant.).

HPLC (Método 5): Rt = 3,11 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,40 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 422,1 (100) [M+H]+.HR-TOF-MS (Método 24): Ci6H28N3O10 cale. 422,1770, encontrados 422,1776 [M+H]+.

Exemplo 259A

[N2-(terf-Butoxicarbonila)-D-alanil]-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina

<formula>formula see original document page 220</formula>

O composto do exemplo 258A (116 mg, 275 mmol) éfornecido em 5,0 ml de acetonitrilo e resfriado até 0°C; são adicionados 3,0 ml de umasolução conc. aquosa de amônia e a agitação continua a 0°C. Após 5 min, a reação éparalisada com ácido acético glacial (1,2 ml), concentrada e cromatog rafada (método 32).Rendimento: 64 mg (57% de teoria).HPLC (Método 6): Rt = 2,82 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,12 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 407,0 (90) [M+H]+; MS(ESlneg): m/z (%) = 405,0 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C15H27N4O9 calc. 407,1773, encontrados 407,1781 [M+H]+.

Exemplo 260A

[D-Alanil]-[(3S)-3-hidróxi-L-aspartil-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 220</formula>O composto do exemplo 259A (63 mg, 155 μmol) é reagido

de acordo com o procedimento 2 com 2.0 ml da solução reagente durante 30 min. Semmais purificação, são obtidos 67 mg (quant.) do composto bruto do título.

HPLC (Método 6): Rt = 0,72 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 0,52 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 307 (100) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): Ci0H19N4O7 calc. 307,1249, encontrados 307,1245 [M+H]+.

Exemplo 261A

[(3R)-N2-(tert-Butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leualanil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 221</formula>

O composto do exemplo 254A (32 mg, 32 μmol) e ocomposto do exemplo 260A, 13 mg, 32 μmol, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF(1,5 ml) a 0°C e DIPEA (28 μL 158 pmol, 5 equivalentes) são adicionados. A mistura éagitada em temperatura ambiente durante cerca de 16 h e então cromatografada deacordo com o método 45. Rendimento: 30 mg (84% de teoria).

HPLC (Método 6): Rt = 3,40 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,60 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 460,3 (100) [M-Boc+2H]2+,1019,6 (60) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C43H79N12Oi6 calc. 1019,5732, encontrados 1019,5716 [M+H]+

Exemplo 262A

[(3R)-3-Hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-D-asparaginil]-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 221</formula>O composto do exemplo 261A (59 mg, 52 μηιοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente durante 30 min. Sempurificação, são obtidos 64 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 6): R, = 2,91 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,20 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 461 (100) [M+2H]2+; MS(ESlneg): m/z (%) = 918 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C38H7IN12O14 calc. 919.5208, encontrados 919.5212 [M+H]+.Exemplo 263A

[(3R)-/V2-(Benzíloxicarbonila)-3-{(íert-butoxicarbonil)amino}-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-D-alanil-[(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil]-L-serina trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 222</formula>

De acordo com o método para preparar o composto doexemplo 201A, o composto do exemplo 262A (92 mg, 80 μιηοΙ) é reagido com ocomposto do exemplo 17A (51 mg, 88 μιτιοΙ, 1,1 equivalentes). Após purificação porcromatografia (método 44), são isolados 35 mg (31% de teoria) do composto do título.HPLC (Método 6): R, = 3,76 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,94 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 608,4 (100) [M-Boc+2H]2+,1315,6 (30) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1313,7 (100) [M-H]'.HR-TOF-MS (Método 24): C60H95N14O19 calc. 1315,6893, encontrados 1315,6873 [M+H]+.Exemplo 264A

[(3R)-A/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hídróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-D-alanil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina bis-trifluoroacetato<formula>formula see original document page 223</formula>

O composto do exemplo 262A (35 mg, 24 μιηοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 2 com 2,0 ml da solução reagente durante 30 min. Semmais purificação, são obtidos 37 mg (quant.) do composto bruto do título.HPLC (Método 6): R, = 3,20 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,36 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 608,3 (100) [M+2H]2+, 1215,7(5) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1213,7 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H87N14O17 cale. 1215,6369, encontrados 1215,6340 [M+H]+.

Exemplo 265A

[(3R)-A/2-(Benziloxicarbonila)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-D-alanil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C19-N31-lactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 223</formula>

De acordo com o método para preparar o composto doexemplo 217A, em que a purificação ocorre de acordo com o método 45, o composto dotítulo é obtido com rendimento de 46 mg (48% de teoria (aprox. 34% puro)) a partir docomposto do exemplo 264A (36 mg, 25 μιτιοΙ).HPLC (Método 6): Rt = 3,55 min.LC-MS (Método 19): Rt = 1,61 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 599,3 (100) [M+2H]2*; 1197,6(30) [M+Hf; MS (ESlneg): m/z (%) = 1195,6 (100), [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C55H85N14O16 cale. 1197,6263, encontrados 1197,6290 [M+H]+.Exemplo 266A

[(3R)-3-Amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotre^D-alanil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C1,9-N1-Iactama trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 224</formula>

O composto do exemplo 265A (46 mg, com pureza de cercade 34%, aprox. 12 μηιοΙ) é hidrogenado na presença de uma ponta de espátula de 10%de paládio em carbono em metanol sob pressão atmosférica em temperatura ambientedurante 1 h. A mistura é filtrada para remover o catalisador e concentrada. O produtobruto (42 g) é reagido ainda sem purificação.HPLC (Método 6): Rt = 2,98 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2.33 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 533 (100) [M+2H]2+, 1064 (10)[M+H]+; MS (ESlneg) m/z (%) = 1062 (100) [M]\

HR-TOF-MS (Método 24): C47H79N14O14 calc. 1063,5895, encontrados 1063,5869 [M+H]+.Exemplo 267A

[A/2-(íerf.-Butoxicarbonila)-3-ferf-butil-D-alanil]-[3-fert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-D-alanil-[hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C111-N33-Iactama trifluoroacetato<formula>formula see original document page 225</formula>

De acordo com ο método para preparar o composto doexempio 233A, o composto do título é obtido com rendimento bruto de 28 mg a partir docomposto do exemplo 266A (34 mg de produto bruto, aprox. 12 μιτιοΙ) e do dipeptídeo doexemplo 8A (13 mg, 35 μιτιοΙ, aprox. 2,4 equivalentes). O produto é empregado napróxima etapa da síntese sem mais purificação.

HPLC (Método 6): R, = 4,27 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,12 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 659,6 (100) [M-Boc+2H]2+1417,8 (50) [M+H]+.

Exemplo 268A

rac N-(terf-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)alanina

A síntese ocorre de acordo com Merget, K. Günther, M.Bernd, E. Günther, R. Tacke, J. Organomet. Chem. 2001 628, 183-194. Os enantiômerossão separados por HPLC preparatório em uma fase chiral:

Gilson Abimed HPLC1 Detector de UV 212 nm, coluna: Daicel Chiralpak AD-H 5 μιπ; 250χ 20 mm; taxa de fluxo: 15 ml/min; eluente A: isoexano, eluente B: 0,2% de ácidoacético/1% água/2-propanol; isocrático.

Exemplo 269A

(2S composto ou A/-(terí-butoxicarbonila)-D-3-trimetilsililalanina):

<formula>formula see original document page 225</formula>HPLC preparatório: Rt = 4,16 min

[α]d20 = +1,1 (c = 0,83, Metanol)

Exemplo 270A

(2R or A/-(terí-butoxicarbonila)-L-3-trimetilsililalanina):

<formula>formula see original document page 226</formula>

HPLC preparatório: Rt = 9,27 min

[a]D20 = -1,6 (c = 0,66, Metanol)

Exemplo 271A

Metil /V-(tert-bütoxicarbonila)-3-piridina-3-i!-L-alaninato

Análogo a B. Neises, W. Steglich, Org. Synth. 1985, 63, 183-187.

(2S)-A/-(tert-Butoxicarbonila)-3-(3-piridil)alanina (25,00 g,93,88 mmol) é dissolvido em 300 ml de diclorometano sob argônio. São adicionadosmetanol (11,4 ml, 9,02 g, 281 mmol, 3 equivalentes) e um grão de DMAP. A mistura éentão resfriada até O0C. EDC (19,80 g, 103 mmol, 1,1 equivalentes) é adicionado. Após5 min, o banho de gelo é removido e a mistura agitada em temperatura ambiente durante1 h. A mistura é então concentrada a vácuo e o resíduo é misturado com acetato etílico eextraído com bicarbonato de sódio conc. A fase aquosa é novamente extraída uma vezcom acetato etílico e as fases orgânicas combinadas são então lavadas com 0,5 M deácido cítrico e subseqüentemente uma vez mais com bicarbonato de sódio conc. A faseorgânica é secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. Sobra um óleoclaro que cristaliza na secagem a vácuo por bomba de óleo. Rendimento: 23,60 g (84,2mmol, 90 % de teoria).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,28 min.

1H NMR (400 MHz, Cl6-DMSO) δ 1,30 (s, 9 H), 2,86 (m, 1 H), 3,04 (m, 1 H), 3,63 (s, 3 H),4,22 (m, 1 Η), 7,28 - 7,39 (m, 2 Η), 7,69 (d, 1 Η), 8,43 (m, 2 Η).

LC-MS (Método 18): Rt 1,21 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 281 (100) [Μ + H]+.

Exemplo 272A

3-[(2S)-2-Amônio-3-metoxi-3-oxopropil]piridínio bis(trifluoroacetato)

<formula>formula see original document page 227</formula>

O composto 271A (11,8 g, 42,09 mmol) é dissolvido em 30%de TFA em diclorometano (160 ml) e agitado em temperatura ambiente por 30 min. Amistura é então concentada a vácuo. O resíduo é recolhido em pouca água e liofilizado.O resultado liofilizado é então misturado com tolueno e concentrado a vácuo. Finalmente,10 o produto é secado até o peso constante a vácuo com bomba de óleo. Rendimento:17,15 g (quant.).

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 0,88 min.

1H NMR (400 MHz1 d<rDMSO) δ 2,79 (dd, 1 H), 2,92 (dd, 1 H), 3,60 (s, 3 H), 3,63 (m, 1 H),7,30 (m, 1 H), 7,62 (d, 1 H), 8,41 (m, 2 H).

LC-MS (Método 18): Rt0.46 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 181 (100) [M + H]+.

Exemplo 273A

Metil N-(ferí-butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-D-alanil-3-piridina-3-il-L-alaninato(16,10 g, 39,4 mmol, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF (186 mL) a O0C. São entãoadicionados NMM (17,34 ml, 16,00 g, 4 equivalentes) e HATU (22,49 g, 59,16 mmol, 1,5equivalentes). A mistura é agitada em temperatura ambiente durante duas horas, tert-Butil metil éter é adicionado e a mistura é lavada com carbonato de sódio conc. A faseaquosa é novamente extarída uma vez com terf-butil metil éter e as fases orgânicascombinadas são então lavadas com 1 M de ácido cítrico aquoso e novamente comO composto 269A (10,31 g, 39,4 mmol) e o composto 272Acarbonato de sódio conc., secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas a vácuo. Érealizada a filtagem através de gel de sílica (cicloexano/acetato etílico 2+1). Rendimento:14.1 g (84 % de teoria).HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,91 min.1H NMR (400 MHz1 Ci6-DMSO) δ -0,09 (s, 9 H), 0,56 - 0,75 (m, 2 H), 1,47 (s, 9 H), 2,90(dd, 1 H), 3,09 (dd, 1 H), 3,62 (s, 3 H), 3,98 (m, 1 H), 4,49 (m, 1 H), 3,68 (d, 1 H), 7,26(dd, 1 H), 7,61 (m, 1 H), 8,20 (d, 1 H), 8,40 (m, 2 H).LC-MS (Método 18): R, 1,90 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 424 (50) [M + H]+.Exemplo 274A

N-(ferf-Butoxicarbonila)-3-(trimetilsilil)-D-alanil-3-piridina-3-il-L-alanina

<formula>formula see original document page 228</formula>

O composto 273A (7,4 g, 17,56 mmol) é recolhido emTHF/água (6+4), resfriado até O0C e é adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (1,47 g,35,13 mmol, 2 equivalentes). A mistura é agitada a 0°C. Após uma hora, outroequivalente (0,74 g) de monoidrato de hidróxido de lítio é adicionado e a agitaçãocontinua durante uma hora. A maioria do THF é removida a vácuo e o pH é entãoajustado para 4 adicionando ácido cítrico. Um sólido se precipita. A mistura é extraídacom três partes de acetato etílico, durante o que o sólido dissolve. As fases orgânicascombinadas são secadas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O produto bruto épurificado por cromatografia em Sephadex LH 20 (Método 45). Rendimento: 6,67 g (93%de teoria).

HPLC/UV-Vis (Método 5): Rt = 3,73 min.

1H NMR (300 MHz, Cf6-DMSO) δ -0,09 (s, 9 H), 0,56 - 0,75 (m, 2 H), 1,35 (s, 9 H), 2,90(dd, 1 H), 3,09 (dd, 1 H), 3,98 (m, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 6,70 (d, 1 H), 7,26 (dd, 1 H), 7,60(m, 1 H), 8,00 (d, 1 H), 8,37 (m, 2 H).

LC-MS (Método 18): Rt 1,71 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 410 (100) [M + H]+.Exemplo 275A

(3R)-3-[(terí-Butoxicarbonil)amino]-L-fenilalaninaO composto dado como exemplo 16A (3,00 g, 7,24 mmol) édissolvido em metanol (60 ml), são adicionados 10% de paládio em carbono ativado (50mg) e a mistura é agitada em uma atmosfera de hidrogênio em temperatura ambiente esob pressão atmosférica durante 6 h. A mistura é então filtrada para remover ocatalisador e concentrada. O produto bruto da reação (2,20 g, requant.) é empregado napróxima etapa sem purificação.HPLC (Método 6): Rt = 3,21 min.

LC-MS (Método 51): Rt = 1,55 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 281,3 (30) [M+H]+, MS(ESlneg): m/z (%) = 279,1 (100) [M-H] ".[a]20Na =-23,4 (c = 1,0, MeOH).

1H-NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 1,34 (s, 9H), 3,52 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,88 (dd, J= 4,6, J = 8,4 Hz1 1H), 7,29 (m, 5H), 8,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H).HR-TOF-MS: C14HsiN2O4 cale. 281,1496, encontrados 28,1503 [M+H]+.

Exemplo 276A

(Pf?)-p-[(íe/t-Butoxicarbonil)amino]-A/2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-phenilalanina

O composto do exemplo 275A (2,2 g de produto bruto, 7,24mmol) e (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilasuccinimida (2,90 g, 8,58 mmol, 1,2equivalentes), bem como o carbonato de sódio (1,18 g, 11,70 mmol, 1,5 equivalentes)são dissolvidos em 1,4-dioxano-água (7+3) e agitados em temperatura ambiente durantea noite. A reação é então paralisada adicionando 5% de ácido cítrico aquoso e extraídacom duas partes de acetato etílico. Os extratos orgânicos combinados são secados emsulfato de sódio e concentrados e o resíduo é triturado com água e acetonitrilo. O produtobruto cristalino é então purificado por cromatografia de acordo com o método 34.Rendimento: 2,58 g (66% de teoria) como um sólido incolor.

HPLC (Método 6): R, = 4,86 min.

LC-MS (Método 20): R, = 2,51 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 503,2 (70) [M+H]+, MS(ESlneg): m/z (%) = 501,3 (100) [M-H]".

1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 1,38 (s, 9H), 4,75 (dd, J = 3,9, J = 9,8 Hz1 1H),5,29 (dd, J = 3,9, J = 10,0 Hz 1H), 7,21-7,60 (m, 13H), 7,87 (d, J = 7,4 Hz, 1H).HR-TOF-MS: C29H3IN2O6 cale. 503,2177, encontrados 503,2158 [M+H]+.

Exemplo 277A

Pentafluorofenil (3R)-3-[(fert-butoxicarbonil)amino]-N2-[(9H-fluoren-9-ilmet-oxi)carbonil]-L-fenilalaninato

<formula>formula see original document page 230</formula>

O composto do exemplo 276A (2,58 g, 5,14 mmol) epentafluorofenol (4,72 g, 25,68 mmol, 5 equivalentes) são dissolvidos em diclorometano(350 ml) e resfriados até 0°C. É adicionado EDCI (1,48 g, 7,70 mmol, 1,5 equivalentes) ea mistura é agitada durante 6 h enquanto é lentamente aquecida até a temperaturaambiente. O solvente é então destilado e o resíduo é purificado em várias partes porcromatografia de acordo com o método 34. Rendimento: 2,80 g (81% de teoria) docomposto do título como um sólido incolor.

HPLC (Método 54) Rt = 5,09 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 3,34 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 6693,0 (20) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 1,39 (s, 9H), 4,11-4,26 (m, 3H), 5,16 (dd, J = 4,4,J = 9,5 Hz, 1H), 5,52 (dd, J = 4,4, J = 10,0 Hz1 1H), 7,27-7,57 (m, 9H), 7,56 (t, J= 6,6 Hz12H), 7,73 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 9,6 Hz1 1H).HR-TOF-MS: C35H30N2O6 calc. 669,2019, encontrados 669,1996 [M+H]+.

Exemplo 278A

Etil (3R)-3-[(íerf-butoxicarbonil)amino]-N2-(difenilmetileno)-L-leucinatode enolatos de cobre em sulfoniliminas: L. Bernardi, A. Gothelf1 R. G. Hazell1 K. A.Jorgensen1 J. Org. Chem. 2003, 68, 2583-2591. terí-Butil [(1E)-fenilmetileno]carbamatopode ser preparado de acordo com a literatura: A. Klepacz1 A. Zwierzak, TetrahedronLett. 2002 43\ 1079 - 1080.

Peneiras moleculares 3A recentemente ativadas,tetrakis(acetonitrilo)cobre(l) hexafluorofosfato (293 mg, 0,79 mmol, 0,035 equivalentes) e(R)-(+)-2-(2-(difenilfosfino)fenil)-4-isopropil-2-oxazolina (335 mg, 0,90 mmol, 0,04equivalentes) são fornecidas sob argônio e abs. THF (228 ml) é adicionado. A trietilamina(109 μΙ, 80 mg, 0,79 mmol, 0,035 equivalente) é então transferida por pipeta. A mistura éresfriada até -20°C e assim que essa temperatura é atingida, são adicionados Λ/-(difenil-metileno)glicinato etílico (6,00 g, 22,44 mmol) e terf-butil [(1E)-fenilmetileno]carbamato(6,92 g, 40,4 mmol, 1,8 equivalentes). A mistura é agitada por 16 h, durante o quepermite-se que a mistura atinja lentamente a temperatura ambiente. É, então, adicionadogel de sílica (cerca de 15 g) e o solvente é destilado a vácuo. O resíduo é carregado emuma coluna de vidro embalada com gel de sílida e eluída com cicloexano-acetato etílico9+1. O composto do título (Rf = 0,22, CyHex-EtOAc 9+1) contém o enantiômero com aconfiguração D-treo e uma quantidade menor (cerca de 36%) dos dois enantiômeros comconfigurações eritro, os quais são removidos em um estágio posterior. O produto é muitosensível a ácidos e investigações por HPLC (método 6) e LC-MS (método 19) sempremostram uma porporção de benzofenona eliminada sob condições de cromatografia.Rendimento: 2,66 g (27% de teoria).

LC-MS (Método 19): Rt = 3,23 min (21%, eritro), MS (ESlpos): m/z (%) = 439,4 (100)[M+H]+ e 3,23 min (48%, treo), MS (ESlpos): m/z (%) = 439,3 (100) [M+H]+.1H NMR (400 MHz, Ci6-DMSO) δ (ppm) = 0,62 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,83 (d, J = 6,6 Hz1 3H),1,13 (t,J= 7,1 Hz, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,61 (m, 1H), 3,74 (ddd, J1 = 2,7, J2 = J3 = 9,6 Hz,1H), 3,96 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,99-4,06 (m, 2H), 6,51 (d, J = 10,0 Hz1 1H), 7,07 (m, 2H),7,38-7,52 (m, 6Η), 7,67-7,77 (m, 2Η).

HR-TOF-MS: C26H35N2O4 calc. 439.2592, encontrados 439.2606 [M+H]+.

Exemplo 279A

Etil (3R)-3-[(terf-butoxicarbonil)amino]-L-leucinato trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 232</formula>

O composto do título de exemplo 278A (4,44 g, 10,12 mmol)é dissolvido em diclorometano (87 ml), são adicionados 857 μl of TFA (11,13 mmol, 1,1equivalentes) e água (273 μL 15,18 μmol, 1,5 equivalentes) e a mistura é agitada emtemperatura ambiente durante 1 h. Todos os constituintes voláteis da mistura de reaçãosão destilados a vácuo e o resíduo (5,97 g) é empregado no próximo estágio sempurificação.

HPLC (Método 6): Rt = 3,41 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,31 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 275,2 (50) [M+H]+.

Exemplo 280A

Etil (3R)-N2-(benziloxi)carbonila-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-L-leucinato

<formula>formula see original document page 232</formula>

O composto do exemplo 279A (5,97 g de produto bruto,aprox. 10,11 mmol) e benziloxicarbonilasuccinimida (3,02 g, 12,13 mmol, 1,2equivalentes) são dissolvidos em diclorometano-água (4+1) e a mistura é resfriada até0°C. Durante agitação vigorosa, são adicionados bicarbonato de sódio (2,55 g, 30,33mmol, 3 equivalentes) e iodeto de tetrabutilamônio (373 mg, 1,01 mmol, 0,1 equivalente)e a mistura é agitada vigorosamente em temperatura ambiente durante 16 h. A faseorgânica é separada, lavada com NaCI conc., secada em sulfato de sódio e concentrada.

O produto bruto é isolado em várias partes de acordo com o método 34, removendo abenzofenona e parte do eritro diastereômero. No total, é obtido 1,65 g (4,03 mmol, 40%de teoria) do composto do título.Rf = 0,076 (CyHex-EtOAc 9+1).

HPLC (Método 54): Rt = 4,33 min (eritro diastereômero) e 4,52 min (treo diastereômero).LC-MS (Método 19): R, = 2,71 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 409,3 (30) [M+H]+,eritro isômero e R, = 2,75 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 409,0 (70) [M+H]+ treo isômero).1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,71-0,86 (m, 6H), 1,16 (t, J = 7,1 Hz1 3H), 1,34(s, 9H), 1,59 (m, 1H), 3,70 (ddd, J = 3,4, J1 = J2 = 10,3 Hz, 1H), 3,99-4,08 (m, 2H), 4,32(dd, J = 3,4, J = 9,5 Hz, 1H), 5,03 (d,J = 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d,J = 12,4 Hz, 1H), 6,62 (d,J= 10,5 Hz, 1H), 7,31-7,40 (m, 5H), 7,44 (d, J = 9,3 Hz, 1H).HR-TOF-MS: C2IH33N2O6 calc. 409,2334, encontrados 409,2329 [M+H]+.Exemplo 281A

(3R)-3-[(íeAt-Butoxicarbonil)amino]-N2-(benziloxi)carbonila-L-leucina

<formula>formula see original document page 233</formula>

O composto do título de exemplo 280A (2,78 g, 6,82 mmol)é dissolvido em uma mistura de THF-água (1+1, 40 ml) a 0°C, é adicionado monoidratode hidróxido de lítio (629 mg, 15,0 mmol, 2,2 equivalentes) e a mistura é agitada a 0°Cdurante 3 h. O THF é então destilado e o resíduo aquoso é acidificado com 1 M de ácidocítrico e extraído com duas partes de acetato etílico. Os extratos orgânicos combinadossão secados em sulfato de sódio e concentrados. O resíduo bruto (2,42 g, 93% de teoria)é separado por cromatografia em uma fase chiral de acordo com o método 55. Nessecaso, os enantiômeros do treo diastereômero e os do eritro diastereômero menor sãoobtidos separadamente. O e.e. do isômero principal (composto do título) após acromatografia chiral é determinado de acordo com o método 56 e é 100%. O rendimentodo composto do título é de 780 mg (30% de teoria com base no composto de início280A).

HPLC (Método 6): Rt = 4,51 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,44 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 381,1 (30) [M+H]+, MS(ESlneg): m/z (%) = 379,2 (100) [M-H]".

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 0,82 (d, J = 9,3 Hz, 3H), 0,85 (d, J = 6,6 Hz1 3H),1,35 (s, 9H), 3,72 (ddd, J1 = 3,2, J2 = J3= 10,0 Hz1 1H), 4,26 (dd, J = 3,2, J = 9,6 Hz1 1H),5,03 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 7,31-7,40(m, 6H), 12,62 (br s, 1H).

HR-TOF-MS: Ci9H28N2O6Na calc. 403.1845, encontrados 403,1832 [M+Na]+.Chirale HPLC (Método 56): R, = 8,97 min.

Exemplo 282A

<formula>formula see original document page 234</formula>

O composto do exemplo 281A (100 mg, 263 mmol) ePentafluorfenil (3R)-3-[(tert-butoxicarbonil)amino]-A/2-(benziloxi)carbonilamino-L-leucinatopentafluorofenol (242 mg, 1,31 mmol, 5 equivalentes) são dissolvidos em diclorometano(20 ml) em temperatura ambiente, então é adicionado EDCI (76 mg, 394 Mmol, 1,5equivalentes) e a mistura é deixada repousar em um refrigerador por cerca de 12 h. Osolvente é subseqüentemente destilado a vácuo e o resíduo é purificado porcromatografia (método 32). O composto do título é obtido com rendimento de 132 mg(92% de teoria) como um sólido incolor.HPLC (Método 54): Rt = 4,89 min.

LC-MS (Método 19): R, = 3,19 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 547,2 (40) [M+H]+.

Exemplo 283A

Benzilo N2-(íerf-butoxicarbonila)-3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-ala-nil-L-serinato

<formula>formula see original document page 234</formula>

O composto do exemplo 149A (2,08 g, 6,73 mmol) e N-(tert-butoxicarbonila)-3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-alanina (22,73 g, 6,39 mmol,0,95 equivalentes) são dissolvidos em DMF (32 mL) e resfriados até O0C. Sãoadicionados HATU (3,84 g, 10,09 mmol, 1,5 equivalentes) e 4-metilmorfolina (2,22 mL,20,18 mmol, 3 equivalentes). A mistura é então agitada em temperatura ambiente por2,5 h. A mistura completa é subseqüentemente carregada em uma coluna SephadexLH20 e cromatografada de acordo com o método 45. Frações contendo o produto sãocombinadas e purificadas de acordo com o método 34. Rendimento: 2.41 g (59% deteoria) como um sólido incolor.

HPLC (Método 6): R, = 4,81 min.

LC-MS (Método 51): R, = 3,94 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 504,4 (100) [M-BOC+H+]+,604,4 (40) [M+H]+.

N20Na = +1,5 (c = 0,5, MeOH).

1H NMR (400 MHz, Cf6-DMSO) δ (ppm) = 1,36 (s, 9H), 3,18 (m, 1H), 3,66 (m, 1Ή), 3,75 (m,1H), 4,15-4,28 (m, 4H), 4,42 (m, 1H), 5,90 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 6,82 (d, J =8,04 Hz, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,31-7,43 (m, 10H), 7,67 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 7,6Hz, 1H), 8,14 (d, J= 7,6 Hz, 1H).

HR-TOF-MS: C33H38N3O8 cale. 604,2654, encontrados 604,2646 [M+H]+.

Exemplo 284A

Benzilo 3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-alanil-L-serinato trifluoro-acetate

<formula>formula see original document page 235</formula>

O composto do exemplo 283A (2,39 g, 3,96 mmol) é reagidode acordo com o procedimento 2. São obtidos 2,96 g (quant.) do composto bruto do títuloque são reagidos sem mais purificação.

HPLC (Método 6): R, = 3,84 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 3,14 min; MS (ESlpos) m/z (%) = 504,0 (100) [M+H]+.[cx]20Na =-0,5 (c = 1,0, MeOH).

HR-TOF-MS: C28H30N3O6 calc. 504,2130, encontrados 504,2140 [M+H]+.

Exemplo 285A

Benzilo [N-(terf-butoxicarbonila)glicil]-[3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-alanil]-L-serinatoO composto do exemplo 284A (2,90 g, -83% puro, 3,89mmol) e N-terf-butoxicarbonilaglicina (751 mg, 4,29 mmol, 1 equivalente) são dissolvidosem DMF (20 ml) e resfriados até 0°C. São adicionados HATU (2,22 g, 5,85 mmol, 1,5equivalentes) e 4-metilmorfolina (2,14 ml, 19,49 mmol, 5 equivalentes). A mistura dereação é agitada a 0°C por 2,5 h e a reação é então paralisada adicionando 5% de umasolução aquosa de ácido cítrico e extraída com 5 partes de MTBE. Os extratos orgânicoscombinados são secados (sulfato de sódio) e concentrados. O produto bruto é purificadopor cromatografia (método 34). As frações contendo o produto são misturadas eliofilizadas. Rendimento: 1,54 g (60% de teoria) como um sólido incolor.HPLC (Método 3) Rt = 4,64 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,65 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 661,2 (100) [M+H]+.[a]20Na = -8,7 (c = 0,5, MeOH).

HR-TOF-MS: C35H4IN4O9 calc. 661,2869, encontrados 661,2864 [M+H]+.

Exemplo 286A

Benzilo glicil]-[3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]amino}-L-alanil]-L-serinatotrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 236</formula>

O composto do título de exemplo 285A (88 mg, 0,20 mmol)é reagido de acordo com o procedimento 2. O produto bruto é reagido ainda sem maispurificação. Rendimento: 1,84 g (quant.)

HPLC (Método 3): Rt = 3,78 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,74 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 561,2 (100) [M+H]+.[cxpNa = 0.0 (c = 1,0, MeOH).

HR-TOF-MS: C30H33N4O7CaIc. 561,2344, encontrados 561,2343 [M+H]+.

Exemplo 287A

Benzilo [(3R)-N2-(teAt-butoxicarbonila)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-alanil]-L-serinatotrifluoroacetato<formula>formula see original document page.237 </formula>

Os compostos dos exemplos 32A (701 mg, 830 μιηοΙ) e

286A (700 mg, 830 μηηοΙ, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF (11,2 ml) e a solução éresfriada até 0°C. São adicionados 4-Metilmorfolina (274 μΙ, 2,49 mmol, 3 equivalentes) e HATU (473 mg, 1,25 mmol, 1,5 equivalentes) e a mistura é agitada a 0°C por 3 h. Amistura completa é então colocada em uma coluna Sephadex LH-20 e cromatografada deacordo com o método 45. Frações contendo o produto são combinadas, concentradas epurificadas de acordo com o método 34. Frações contendo o produto são combinadas eliofilizadas. 643 mg (56% de teoria) do composto do título são obtidos como um sólidoincolor.

HPLC (Método 6): Rt = 4,27 min.

LC-MS (Método 19): R, = 2,13 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 1273,9 (30) [M+H]+ , MS(ESIneg) m/z (%) = 1317,9 (100) [M+HCOO ]".

HR-TOF-MS: C63H93N12O16 calc. 1273,6826, encontrados 1273,6851 [M+H]+.

Exemplo 288A

Benzilo [(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-L-alanil]-L-serinato bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 237</formula>

O composto 287A (643 mg, 463 μητιοΙ) é reagido de acordocom o procedimento 2. O composto do título é obtido bruto com rendimento quantitativoaproximado (783 mg) e reagido ainda sem purificação.HPLC (Método 5): Rt = 3,61 min.

LC-MS (Método 51): R, = 2,53 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 588,1 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS: C58H85N12O14 calc. 1173,6306, encontrados 1173,6304 [M+H]+.Peptídeos de ligação por polímeroExemplo 289A

Ligação por polímero N-(tert)-butoxicarbonila)-0-tert-butil-L-treonil-L-leucil-N5-(imi-no{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil-L-isoleucil-O-tert-butil-L-alotreonil-glicil-O-terí-butil-L-seril-O-tert-butil-L-serina

<formula>formula see original document page 238</formula>

São fornecidos 34,00 g (50,66 mmol) de 2-resinaclorotritílica (lris Biotech, CAS No 42074-68-0, carregando 1,49 mmol/g) em 400 ml dediclorometano e são adicionados 67,989 g (177,31 mmol) de 0-terí.-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina e 65,476 g (506,60 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. São adicionados 5 ml demethanol e a mistura é agitada em RT por 30 min. O sólido é coletado por filtragem comsucção, lavado três vezes, cada vez com 400 ml de dimetilformamida, metanol ediclorometano e recolhido por filtragem com sucção. O sólido é tratadosubseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidina conforme segue: a resina émisturada com 400 ml de uma solução de 20% de piperidina em dimetilformamida,agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 400 ml dedimetilformamida e são adicionados 48,564 g (126,65 mmol) de 0-ferí.-butil-A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina, 40,665 g (126,65 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)-

metileno]-N-metilmetanaminio tetrafluoroborato (TBTU) e 24,553 g (189.975 mmol) deN-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. Osólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com 400 ml dedimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem com sucção. O sólidoé tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidina conforme segue: aresina é misturada com 400 ml de uma solução de 20% de piperidina emdimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 400 ml ofdimetilformamida e são adicionados 37,665 g (126,65 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-glicina, 40,665 g (126.65 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 24,553 g(189,975 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 400 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 400 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 400 ml dedimetilformamida, e são adicionados 50,340 g (126,65 mmol) de 0-terf.-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-alotreonina, 40,665 g (126,65 mmol) de N-[(1Η-benzotriazol-1 -iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato

(TBTU) e 24,553 g (189,975 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A misturaé agitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavadotrês vezes, cada vez com 400 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano ecoletado por filtragem com sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezessucessivas com piperidina conforme segue: a resina é misturada com 400 ml de umasolução de 20% de piperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletadapor filtragem com sucção.

32 g (47,68 mmol; presumido: 1,49 mmol/g carregamento)da resina obtida dessa maneira são fornecidos em 400 ml de dimetilformamida e sãoadicionados 42,128 g (119,20 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina,38,273 g (119,20 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 23,109 g (178,80 mmol) de N-etW-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido érecolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com 400 ml dedimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem com sucção.

Considerando que o acoplamento foi incompleto (de acordo com HPLC), foramadicionados novamente 400 ml de dimetilformamida, 25,277 g (71,52 mmol) odef N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina, 22,964 g (71,52 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 13,865 g(107,28 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA) e a mistura foi agitada durantea noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com400 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem comsucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 400 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agitada durante 30 min, coletada por filtragem com sucção esecada a vácuo.

14 g (20,86 mmol; presumido: 1,49 mmol/g carregamento)da resina obtida dessa maneira é fornecido em 200 ml de dimetilformamida e sãoadicionados 34,566 g (52,15 mmol) de -[(gH-fluoren-g-ilmetoxiJcarbonilal-N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitina,16,745 g (52,15 mmol) N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 13,48 g (104,30 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido érecolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com 200 ml dedimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem com sucção. O sólidoé tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidina conforme segue: aresina é misturada com 200 ml de uma solução de 20% de piperidina emdimetilformamida, agitada durante 30 min, coletada por filtragem com sucção e secada avácuo.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 200 ml dedimetilformamida e são adicionados 18,431 g (52,15 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-leucina, 16,745 g (52,15 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 13,480 g(104,30 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 200 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 200 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agitada durante 30 min, coletada por filtragem com sucção esecada a vácuo.

2.0 g (2.98 mmol; presumido: 1,49 mmol/g carregamento) da

resina obtidad dessa maneira é fornecido em 20 ml de dimetilformamida e sãoadicionados 2,462 g (8,94 mmol) de N-(tert-butoxicarbonila)-0-tert,-butil-L-threonine,2,870 g (8,94 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 2,311 g (17,88 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido érecolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com 20 ml dedimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem com sucção.

Exemplo 290A

N-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]glicil-L-serinacarregamento: 0,62 mmol/g) pré-carregado com 0-tert-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina é tratado duas vezes sucessivas com piperidina conformesegue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidina emdimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção. A resinaobtida dessa maneira é fornecida em 10 ml de dimetilformamida e são adicionados369 mg (1,24 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicina, 398 mg (1,24mmol) de N-[( 1 H-benzotriazol-1 -iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamíniotetrafluoroborato (TBTU) e 240 mg (1,86 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina(DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem comsucção, lavado três vezes, cada vez com 10 ml de dimetilformamida, metanol ediclorometano e coletado por filtragem com sucção. 20 ml de uma solução de 50% detrifluoroácido acético em diclorometano são adicionados e deixados agir durante 60 min,a resina é removida por filtragem em uma porcelana calcinada e a resina é lavada trêsvezes com 10 ml de diclorometano. O filtrado é concentrado e o composto alvo é obtidocomo produto bruto.

LC-MS (Método: LC-MS (Método 19): Rt = 2,10 min, MS (ESlpos): m/z {%) =): 385,0[M+H]+.

Exemplo 291A

1 g (0,62 mmol) de uma resina Wang (Merck Biosciences;Ligação por polímero [N-teAtbutoxicarbonila-(3f?)-3-hidróxi-L-leucil]-[3-tertbutil-L-alanil]-[N5-(imino{[(2,2,57,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}-metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-O"3-terbutil-L-seril]-O"3-trbutil-L-serina

<formula>formula see original document page 242</formula>

1 g (0,62 mmol) de uma resina Wang (Merck Biosciences;0,62 mmol/g) pré-carregado com 0-terf.-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina é tratado duas vezes sucessivas com piperidina conformesegue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidina emdimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção. A resinaobtida dessa maneira é fornecida em 10 ml de dimetilformamida e são adicionados 477mg (1,24 mmol) de composto do exemplo 290A, 398 mg (1,24 mmol) de N-[(1?-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato(TBTU) e 320 mg (2,48 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura éagitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado trêsvezes, cada vez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado porfiltragem com sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas compiperidina conforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% depiperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem comsucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 423 mg (1,24 mmol) of N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-D-alotreonina, 399 mg (1,24 mmol) de N-[(1 H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmethanaminium tetrafluoroborato (TBTU) e 320 mg(2,48 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 438 mg (1,24 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina, 399 mg (1,24 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-A/-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 240 mg(1,86 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 821 mg (1,24 mmol) de N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitina, 399 mg (1,24 mmol) de N-[(1 H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmethanaminium tetrafluoroborato (TBTU) e 240 mg(1,86 mmol) of N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

812 mg (0,503 mmol) da resina obtida dessa maneira sãofornecidos em 10 ml de dimetilformamida e são adicionados 370 mg (1,01 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)-carbonila]-4-metil-L-leucina, 323 mg (1,01 mmol) of N-[{ 1H-benzotriazol-1-iloxi)-(dimetilamino)metileno]-H-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU)e 195 mg (1,51 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DlEA). A mistura é agitadaem RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes,cada vez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado porfiltragem com sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas compiperidina conforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% depiperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem comsucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida, e são fornecidos 157 mg (0,633 mmol) de N-(tert-butoxicarbonila)-(3R)-3-hidróxi-L-leucina, 203 mg (0,633 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 196 mg(1,52 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

Exemplo 292A

Ligação por polímero [N-terfbutoxicarbonila-(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-[3-trimetilsilil-L-alanil]-[N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitil]-L-isoleucil-[0-tertbutil-L-alotreonil-serina

<formula>formula see original document page 244</formula>

1 g de resina Wang (Rapp Polymer; carregamento: Éintroduzido 1,28 mmol/g) em 10 ml de dimetilformamida. São adicionados 982 mg (2,56mmol) de 0-terf,-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmethoxi)carbonila]-L-serina, 910 mg (2,56 mmol)de N-{[(6-cloro-1H-benzotriazol-1-il)oxi](dimetilamino)metileno}-N-metilmetanamíniotetrafluoroborato (TCTU) e 496 mg (3,84 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina(DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem comsucção, lavado três vezes, cada vez com 10 ml de dimetilformamida, metanol ediclorometano e coletado por filtragem com sucção. O sólido é tratado subseqüentementeduas vezes sucessivas com piperidina conforme segue: a resina é misturada com 10 mlde uma solução de 20% de piperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min ecoletada por filtragem com sucção.

Outro acoplamento com 0-tert.-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-serina é realizado usando as mesmas proporções de quantidades esob as condições descritas (veja diretamente acima).

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 761 mg (2,56 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]glicina, 910 mg (2,56 mmol) de N-{[(6-cloro-1 H-benzotriazol-1-il)oxi](dimetilamino)metileno}-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TCTU) e 496 mg(3,84 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante 5 horas. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 1,017 g (2,56 mmol) de 0-tert-butil-N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-D-alotreonina, 910 mg (2,56 mmol) de N-{[(6-cloro-1 H-benzotriazol-1-il)oxi](dimetilamino)metileno}-N-metilmetanamíno tetrafluoroborato(TCTU) e 496 mg (3,84 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura éagitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado trêsvezes, cada vez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado porfiltragem com sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas compiperidina conforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% depiperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem comsucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 904 mg (2,56 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-L-isoleucina, 822 mg (2,56 mmol) de N-{[(1H-benzotriazol-1-il)oxi](dimetilamino)metileno}-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 496 mg(3,84 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml de dimetilformamida e são adicionados 1.697 g (2.56 mmol) de N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-N5-(imino{[(2,2,5,7,8-pentametil-3,4-diidro-2H-cromo-6-il)sulfonil]amino}metil)-D-ornitina, 822 mg (2.56 mmol) de N-[(1 H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmethanaminium tetrafluoroborato (TBTU) e 662 mg(5.12 mmol) of N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção. O sólido é tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidinaconforme segue: a resina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidinaem dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 982 mg (2,56 mmol) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonila]-3-(trimetilsilil)-L-alanina, 822 mg (2,56 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi(dimetilamino)-

metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 662 mg (5,12 mmol) de N-etil-N-ísopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RT durante a noite. O sólido érecolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cada vez com 10 ml dedimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragem com sucção. O sólidoé tratado subseqüentemente duas vezes sucessivas com piperidina conforme segue: aresina é misturada com 10 ml de uma solução de 20% de piperidina em dimetilformamida, agidata durante 30 min e coletada por filtragem com sucção.

A resina obtida dessa maneira é fornecida em 10 ml dedimetilformamida e são adicionados 261 mg (0,705 mmol) de treo N-(tert-butoxicarbonila)-(3R)-3-hidróxi-L-leucina, 339 mg (1,057 mmol) de N-[(1H-benzotriazol-1-iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio tetrafluoroborato (TBTU) e 273 mg (2,114 mmol) de N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (DIEA). A mistura é agitada em RTdurante a noite. O sólido é recolhido por filtragem com sucção, lavado três vezes, cadavez com 10 ml de dimetilformamida, metanol e diclorometano e coletado por filtragemcom sucção.

Os compostos 293A-458A representados nas seguintestabelas foram preparados de acordo com os procedimentos indicados a partir dosmateriais de início indicados.<table>table see original document page 247</column></row><table><table>table see original document page 248</column></row><table><table>table see original document page 249</column></row><table><table>table see original document page 250</column></row><table><table>table see original document page 251</column></row><table><table>table see original document page 252</column></row><table><table>table see original document page 253</column></row><table><table>table see original document page 254</column></row><table><table>table see original document page 255</column></row><table><table>table see original document page 256</column></row><table><table>table see original document page 257</column></row><table><table>table see original document page 258</column></row><table><table>table see original document page 259</column></row><table><table>table see original document page 260</column></row><table><table>table see original document page 261</column></row><table><table>table see original document page 262</column></row><table><table>table see original document page 263</column></row><table><table>table see original document page 264</column></row><table><table>table see original document page 265</column></row><table><table>table see original document page 266</column></row><table><table>table see original document page 267</column></row><table><table>table see original document page 268</column></row><table><table>table see original document page 269</column></row><table><table>table see original document page 270</column></row><table><table>table see original document page 271</column></row><table><table>table see original document page 272</column></row><table><table>table see original document page 273</column></row><table><table>table see original document page 274</column></row><table><table>table see original document page 275</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 277</column></row><table><table>table see original document page 278</column></row><table><table>table see original document page 279</column></row><table><table>table see original document page 280</column></row><table><table>table see original document page 281</column></row><table><table>table see original document page 282</column></row><table><table>table see original document page 283</column></row><table><table>table see original document page 284</column></row><table><table>table see original document page 285</column></row><table><table>table see original document page 286</column></row><table><table>table see original document page 287</column></row><table><table>table see original document page 288</column></row><table><table>table see original document page 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304</column></row><table><table>table see original document page 305</column></row><table><table>table see original document page 306</column></row><table><table>table see original document page 307</column></row><table><table>table see original document page 308</column></row><table><table>table see original document page 309</column></row><table><table>table see original document page 310</column></row><table><table>table see original document page 311</column></row><table><table>table see original document page 312</column></row><table><table>table see original document page 313</column></row><table><table>table see original document page 314</column></row><table><table>table see original document page 315</column></row><table><table>table see original document page 316</column></row><table><table>table see original document page 317</column></row><table><table>table see original document page 318</column></row><table><table>table see original document page 319</column></row><table><table>table see original document page 320</column></row><table><table>table see original document page 321</column></row><table><table>table see original document page 322</column></row><table><table>table see original document page 323</column></row><table><table>table see original document page 324</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 326</column></row><table><table>table see original document page 327</column></row><table><table>table see original document page 328</column></row><table><table>table see original document page 329</column></row><table><table>table see original document page 330</column></row><table><table>table see original document page 331</column></row><table><table>table see original document page 332</column></row><table><table>table see original document page 333</column></row><table><table>table see original document page 334</column></row><table><table>table see original document page 335</column></row><table><table>table see original document page 336</column></row><table><table>table see original document page 337</column></row><table><table>table see original document page 338</column></row><table><table>table see original document page 339</column></row><table><table>table see original document page 340</column></row><table><table>table see original document page 341</column></row><table><table>table see original document page 342</column></row><table><table>table see original document page 343</column></row><table><table>table see original document page 344</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 346</column></row><table><table>table see original document page 347</column></row><table><table>table see original document page 348</column></row><table>Exemplo 459A:

íerf-Butil [(fenilsulfonil)(piridina-3-il)metil]carbamato

<formula>formula see original document page 349</formula>

Piridina-3-carbaldeído (5,36 g, 50 mmol), ferí-butilcarbamato (11,7 g, 100 mmol, 2 equivalentes), fenilsulfinato de sódio (20,36 g, 124 mmol,2,48 equivalentes), ácido fórmico (1,89 ml, 2,30 g, 1 equivalentw), metanol (55 ml) e água(111 ml) são misturados e agitados vigorosamente em temperatura ambiente durante 3 d.O produto se precipita na forma de cristais incolores que são recolhidos por filtragem,lavados com água e um pouco de MTBE e secados a vácuo. Rendimento: 4.10 g (24%de teoria).

LC-MS (Método 51): Rt = 2,51 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 349,3 (100) [M+H]+.

Exemplo 460A:

terf-Butil [(piridina-3-il)metileno]carbamatosecado por calor a vácuo e coberto com uma camada de THF (70 mL). A mistura éaquecida para refluir por 16 h, então é deixada esfriar e filtrada através de uma camadade celite. O filtrado é concentrado e o resíduo oleoso (1,33 g de produto bruto, quant.) éreagido ainda sem purificação.

Exemplo 461 A:

Etil rac-íreo-3-[(fert-butoxicarbonil)amino]-A/2-(difenilmetileno)-3-piridina-3-il-alaninatoCarbonato de potássio (4,78 g, 34 mmol, 6 equivalentes) é

<formula>formula see original document page 349</formula>A reação ocorre com base em um método para a dição deenolatos de cobre em sulfoniliminas: L. Bernardi, A. Gothelf, R. G. Hazell, K. A.Jorgensen, J. Org. Chem. 2003, 68, 2583-2591. terf-Butil [(1E)-fenilmetileno]carbamatopode ser preparado de acordo com a literatura: A. Klepacz, A. Zwierzak, TetrahedronLett. 2002 43\ 1079-1080.

Peneiras moleculares 3 A recentemente ativadas,tetrakis(acetonitrilo)cobre(l) hexafluorofosfato (179 mg, 0,48 mmol, 0,1 equivalente) e (f?)-(+)-2-(2-(difenilfsfino)fenil)-4-fenil-2-oxazolina (329 mg, 0,53 mmol, 0,11 equivalentes) sãofornecidos sob argônio e abs. THF (41 ml) é adicionado. A trietilamina (67 μΙ, 49 mg, 0,48mmol, 0,1 equivalente) é então transferida por pipeta. A mistura é resfriada até -20°C etão logo seja atingida essa temperatura, são adicionados etil /V-(difenilmetileno)glicinate(1,29 g, 4,81 mmol) e o composto do exemplo 459A (1,19 g, 5,77 mmol, 1,2equivalentes). A mistura é agitada por 16 h, durante o que é deixada atingir lentamente atemperatura ambiente. Então é adicionado gel de silica (cerca de 15 g) e o solvente édestilado a vácuo. O resíduo é cromatografado com cicloexano-acetato etílico 9+1(Biotage 40M com ZIF-SIM 35). O composto do título é obtido com rendimento de 1,85 g(95% puro, 77% de teoria).

LC-MS (Método 51): Rt = 3,55 min MS (ESlpos): m/z (%) = 474,3 (100) [M+H]+.

Exemplo 462A:

Etil rac-íreo-3-[(te/t-butoxicarbonil)amino]-3-piridina-3-il-alaninato trifluoroacetato

O composto do título do exemplo 461A (350 mg, 0,74 mmol)é dissolvido em acetonitrilo (9,33 ml) e são adicionados 187 μΙ de TFA (2,42 mmol, 3,3equivalentes) e água (187 μΙ, 10,4 μιτιοΙ, 14 equivalentes) e a mistura é deixada repousara 4°C durante 16 h. Todos os constituintes voláteis da mistura de reação são destilados avácuo e o resíduo é purificado por cromatografia (método 34). Rendimento: 366 mg (92%de teoria).

HPLC (Método 6): Rt = 3,03 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,32 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 310,0 (80) [M+H]+.HR-TOF-MS: C15H24N3O4 calc. 310,1762, encontrados 310,1767 [M+H]+.Exemplo 463A:Etil rac-íreo-3-[tert-butoxicarbonil)amino]-N2-(benziloxi)carbonilamino-3-piridina-3-il-alaninato

<formula>formula see original document page 351</formula>

O componente do exemplo 462A (366 mg, 0,68 mmol) ebenziloxicarbonilasuccinimida (209 mg, 0,82 mmol, 1,2 equivalentes) são dissolvidos em5 ml de diclorometano-água (4+1) e a mistura é resfriada até 0°C. Durante a agitaçãovigorosa, são adicionados bicarbonato de sódio (86 mg, 1,03 mmol, 1,5 equivalentes) ebrometo de tetrabutilamônio (11 mg, 34 μmol, 0,05 equivalentes) e a mistura é agitadavigorosamente em temperatura ambiente durante 16 h. A fase orgânica é separada,lavada com NaCl conc., secada em sulfato de sódio e concentrada. O produto bruto écromatografado (método 34). Rendimento: 314 mg (84% puro, 0,60 mmol, 88% de teoria)do composto do título.

Rf = 0,076 (CyHex-EtOAc 9+1).

HPLC (Método 54): Rt = 4,33 min (eritro diastereômero) e 4,52 min (treodiastereômero).

LC-MS (Método 19): Rt = 2,71 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 409,3 (30) [M+H]+, ertroisômero e Rt = 2,75 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 409,0 (70) [M+H]+ treo isômero).1H NMR (400 MHz, C16-DMSO) δ (ppm) = 0,71-0,86 (m, 6H), 1,16 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,34(s, 9H), 1,59 (m, 1H), 3,70 (ddd, J = 3,4, J1 = J2 = 10,3 Hz, 1H), 3,99-4,08 (m, 2H), 4,32(dd, J= 3,4, J= 9,5 Hz, 1H), 5,03 (d, J= 12,4 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,4 Hz1 1H), 6,62 (d,J = 10,5 Hz, 1H), 7,31-7,40 (m, 5H), 7,44 (d, J= 9,3 Hz, 1H).

HR-TOF-MS: C21H33N2O6 calc. 409,2334, encontrados 409,2329 [M+H]+.

Exemplo 464A:

(3R)-3-[(íert-Butoxicarbonil)amino]-N2-(benziloxi)carbonilamino-3-piridina-3-il-L-alanina

<formula>formula see original document page 351</formula>O composto do título do exemplo 463A (314 mg, 0,56 mmol)é dissolvido em uma mistura de THF-água (2+1, 17 ml) a 0°C, é adicionado monoidratode hidróxido de lítio (25 mg, 0,59 mmol, 1,1 equivalentes) e a mistura é agitada a 0°Cdurante 3 h. O THF é então destilado e o resíduo aquoso é Iiofilizado e então purificadopor cromatografia (método 44). O produto é separado por cromatografia emu ma fasechiral, de acordo com o método 58. Os enantiômeros do treo diastereômero e os do eritrodiastereômero menor, são cada qual obtidos separadamente por esse meio. O e.e. doisômero principal (composto do título) depois da cromatografia chiral é determinado pelométodo 59 e é 100%. O rendimento do composto do título é de 113 mg (38% de teoriabaseado no composto de início 463A.HPLC (Método 6): Rt = 3,53 min.HPLC Quiral (Método 59): Rt = 4,71 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,85 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 416,2 (100) [M+H]+, MS(ESlneg): m/z (%) = 414.1.2 (100) [M-H] '.

HR-TOF-MS: C2IH26N3O6 calc. 416,1817, encontrados 416,1808 [M+H]+.Exemplo 465A:

Pentafluorofenil (3R)-3-[(terNbutoxicarbonil)amino]-/V2-(benziloxi)carbonilaamino-3-piridina-3-il-L-alaninato

<formula>formula see original document page 352</formula>

O composto do exemplo 464A (63 mg, 119 μιποΙ) epentafluorofenol (24 mg, 131 μιποΙ, 1,1 equivalentes) são dissolvidos em diclorometano(0,8 ml) em temperatura ambiente, EDCI (25 mg, 131 μηιοΙ, 1,1 equivalentes) é entãoadicionado e a mistura é deixada em repouso em um refrigerador por cerca de 12 h. Osolvente é subseqüentemente destilado a vácuo e o resíduo é purificado porcromatografia (método 44). O composto do título é obtido com rendimento de 47 mg (51%de teoria) como um sólido incolor.HPLC (Método 54): Rt = 4,49 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 2,74 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 582,2 (40) [M+H]+.HR-TOF-MS: C27H25N3O6F5 calc. 582,1659, encontrados 582,1647 [M+H]\

Os compostos 466A-470A relacionados na seguinte tabelaforam preparados pelos procedimentos indicados a partir dos materiais de inícioindicados.

<table>table see original document page 353</column></row><table><table>table see original document page 354</column></row><table><table>table see original document page 355</column></row><table><table>table see original document page 356</column></row><table>

Exemplos de modos de realização

Exemplo 1

[3-íert-Butil-D-alanil]-[3-íerf-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hleucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C111-N33-lactama bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 356</formula>

o grupo de proteção é removido do peptídeo protegido porbenziloxicarbonila (exemplo 53A, 1,5 mg, 0,89 pmol) em dioxano e em aq. 0,1% de TFA(1 ml, 10 equivalentes) por hidrogenólise de acordo com o procedimento 4 depois de 1 h.É obtido 1,3 mg (96,6% de teoria) de produto após purificação final por HPLCpreparatório (método 26).

Alternativamente, a amina (exemplo 1) é liberada a partir docomposto do exemplo 58A (13,0 mg, 8,47 pmol) depois da segmentação hidrogeneolíticado éster (procedimento 4) em metanol (5 ml) usando 0,1 N de ácido clorídrico (508 μΙ,1,9 mg, 50,79 μηηοΙ, 6 eq.)· Após a cromatografia (método 26), são isolados 12,0 mg(93,5% de teoria) do composto do título.HPLC (Método 9) Rt = 14,73 min.

LC-MS (Método 18): R,= 1,71 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1288 (3) [M+H]+, 644 (100)[M+ 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1286 (50) [M - H]", 642 (38) [Μ - 2H]2", 1332 (100).HR-TOF-MS (Método 24): C60H103N16O15 [M+H]+ encontrados 1287,7810, calc.1287,7784.

Exemplo 2

D-Leucil-L-leucil-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-treonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C1,"-/V33-Iactama bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 357</formula>

O composto do título é preparado a partir do peptídeoprotegido por benziloxicarbonila (exemplo 73A, 33,0 mg, 21,89 μιτιοΙ) depois dasegmentação hidrogeniolítica do éster (procedimento 4) em metanol (10 ml) e 0,1 N deácido clorídrico aq. (219 μΙ, 0,8 mg, 21,89 μιηοΙ, 1 eq.). A purificação fina ocorre porHPLC preparatório (método 26) e são isolados 18,1 mg (56,1% de teoria) de produto.HPLC (Método 9) Rt = 14,15 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,52 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1259 (5) [M+H]+, 630 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1257 (100) [M - H]", 628 (28) [Μ - 2H]2".HR-TOF-MS (Método 24): C58H100N16O15 [M+H]+ encontrados 1259,7454, calc.1259,7471.

Exemplo 3[3-tert-Butíl-D-alaníl]-[3-terc-butíí-L-alaníl]-[(3R)-3-amíno-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-ornitil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil-L-serina C1.11-N33-lactama bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 358</formula>

O composto do título é preparado a partir do peptídeoprotegido por benziloxicarbonila (exemplo 81 A, 20,0 mg, 13,21 μιηοΙ) depois dasegmentação hidrogeniolítica do éster (procedimento 4) em metanol (10 ml) e 0,1 N deácido clorídrico aq. (198 μΙ, 0.7 mg, 19,8 μmol, 1,5 eq.). A purificação fina ocorre porHPLC preparatório (método 26) e são isolados 17,9 mg (91,9% de teoria) de produto.HPLC (Método 9) R, = 15,51 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,57 min; MS (ESlpos): m/z (%) = 1245 (13) [M+H]+, 623 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1243 (100) [M - H]~.

HR-TOF-MS (Método 24): C59H102N14Oi5 [M+H]+ encontrados 1245,7560, calc.1245,7566.

Exemplo 4

[3-tert-Butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-0-metil-L-tirosil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinC111-N33^actama bistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 359</formula>

O composto do exemplo 112A (23 mg, 14,5 μηηοΙ) é reagidode acordo com o procedimento 5. Após purificação por cromatografia por meio de HPLCpreparatório (método 43), são obtidos 17 mg (75% de teoria) de produto por secagem porcongelamento.

HPLC/UV-Vis (Método 5): R, = 3,69 min.

HPLC/UV-Vis (Método 4): Rt = 3,95 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,71 min; MS (ESlpos.): m/z (%) = 667 (100) [M + 2H]2+, 1333(2) [M+H]+; MS (ESlneg.): m/z (%) = 1331 (100) [M - H]".

Exemplo 5

[3-tert-Butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-4-(dimetilaminophenil)-L-alanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil]-L-serina C1,11-N33-Iactama tristrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 359</formula>O composto do exemplo 128A (105 mg, 66% de pureza,41 pmol) é dissolvido em 30% de TFA em diclorometano (4 ml) e agitado a RT durante 20min. A mistura é então concentrada a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia(método 44 com gradiente modificado: 0-2 min 10% B1 rampa, 38 min 60% B). 49 mg (29pmol, 70% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC (Método 7): R, = 3,62 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,72 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 450,0 (100) [M + 3H]3\ 674,4(40) [M + 2H]2+.

HR-TOF-MS (Método 24): C62Hi08N17Oi6 [M+H]+ calc. 1346,8155, encontrados

1346,8130.

Exemplo 6

[3-Trimetilsilil-D-alanil]-[3-terf-butil-L-alanilH([(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleu^asparaginil]-L-serina C"1.11-N3,3-Iactama tristrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 360</formula>

O composto do exemplo 133A (126 mg, 82 pmol) édissolvido em 30% de TFA em diclorometano (4 ml) e agitado em RT durante 20 min. Amistura é então concentrada a vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia (método44 com gradiente modificado: 0-2 min 10% B, rampa, 38 min 60% B). 78 mg (46 μιτιοΙ,56% de teoria) do composto do título são obtidos.HPLC (Método 7): Rt = 3,69 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,66 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 682,3 (100) [M + 2H]2+,1364,1 (2) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C6IH108N17O16Si [M+H]+ calc. 1362,7924, encontrados1362,7949.

Exemplo 7

D-Fenilalanil-L-fenilalanil-[(3R)-3-amino-L-alanil]-[(3/R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leuciL-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serina C1.11-N33-Iactamabistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 361</formula>

O composto alvo é preparado a partir do composto doexemplo 144A (0,3 mg, 0,20 μιηοΙ) conforme descrito no procedimento 1. Apóspurificação fina por cromatografia com gel (método 45, eluente: metanol), é isolado0,1 mg (23,3% de teoria) do produto.

HPLC (Método 12): R, = 5,74 min.

LC-MS (Método 18): Rt= 1,57 min, MS (ESlpos.): m/z (%) = 1268 (2) [M+H]+, 634 (100)[M + 2H]2+; MS (ESlpos.): m/z (%) = 1266 (50) [M - H]", 632 (22) [Μ - 2H]2", 1312 (100)[Μ - H + HCO2H]-.

MALDI-MS (Método 25): C58H92N16O16 [M+H]+ calc. 1267,68, encontrados 1267.65.

Exemplo 8

[3-tert-Butil-D-alanil]-[3-tert-Butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3f?)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina Cil1i-ZV33-IactamabistrifluoroacetatoO composto do exemplo 233A (4 mg, 3 μιηοΙ) é dissolvidoem metanol (1 ml). 17 μΙ de 1 M de ácido clorídrico e 10% de paládio-carbono (2 mg) sãoadicionados e a mistura é hidrogenada sob pressão atmosférica em temperaturaambiente durante 2 h. A solução é filtrada para remover o catalisador e concentrada.Após purificação por cromatografia (método 44), são obtidos 2,2 mg (1.5 μιηοΙ 53% deteoria) do composto do título.HPLC (Método 5): R, = 4,45 min.

LC-MS (Método 20): Rt = 1,45 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 631,1 (100) [M+2H]2+, 1260,910 (3) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C59H102N15Oi5 calc. 1260,7675, encontrados 1260,7670

[M+H]+.

Exemplo 9

[3-feAf-Butil-D-alanil]-[3-íert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3f?)-3-hidróxi-L-15 leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[3-(3-piridil)-L-alanil]-L-serina C1,11-N3 3-Iactama tristrifluoroacetato<formula>formula see original document page 363</formula>

De acordo com ο método para preparar o composto do

exemplo 233A o composto do título é obtido com rendimento de 4 mg (32% de teoria) apartir do composto do exemplo 226A (12 mg, 13 pmol).HPLC (Método 5): Rt = 3,60 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,43 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 661,5 (100) [M+2H]2+, 1321,8(10) [M+H]\

HR-TOF-MS (Método 24): C64H105Ni6O14 cale. 1321,7991, encontrados 1321,7955[M+H]+.

Exemplo 10

[3-terf-Butil-D-alanil]-[3-ferí-butil-L-alan

leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-fenilalanil-L-serina C1l11-N33-IacXamabistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 363</formula>O composto do exemplo 235A é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 1 h e o produto é purificado deacordo com um método modificado 44 (gradiente: 0 min 25 % B, rampa, 35-38 min 35%Β). O composto do título é obtido com rendimento de 10 mg (50% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 3,41 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,57 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 661,1 (100) [M+2H]*\ 1320,8(5) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1318,6 (90) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): C65H106N15Oi4 calc. 1320,8039, encontrados 1320,8042[M+H]+.

Exemplo 11

[3-tert-Butil-D-alanil]-[3-tert-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[L-treonil]-L-serina C111-N33- Iactamabistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 364</formula>

O composto do exemplo 236A é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 30 min e o produto é purificadode acordo com o método 44. O composto do título é obtido com rendimento de 3 mg(27% de teoria).

HPLC (Método 5): Rt = 3,73 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,53 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 638,0 (100) [M+2H]2+.

HR-TOF-MS (Método 24): C60H103N15O15 calc. 1274,7831, encontrados 1274,7827 [M+H]+.

Exemplo 12

[3-tert-Butil-D-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alotreonil-L-serina C11.1-N33AacXamabistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 365</formula>

O composto do exemplo 237A (47 mg, 24 μπιοΙ) i é reagidode acordo com o procedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 30 min e oproduto é purificado de acordo com o método 44. O composto do título é obtido comrendimento de 21 mg (57% de teoria).HPLC (Método 6): Rt = 3,43 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,52 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 638,1 (100) [M+2H]2+; MS(ESlneg): m/z (%) = 1273,6 [M]".

HR-TOF-MS (Método 24): C60H103N15O15 calc. 1274,7831, encontrados 1274,7800[M+H]+.

Exemplo 13

[3-íerí-Butil-D-alanil]-[3-íerf-butil-L-alanil]-[(3/^)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-alanil-L-serina Clii-AZ33-Iactama bistrifluoroacetatoO composto do exemplo 238A é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 30 min e o produto é purificadode acordo com o método 44. É então realizada uma outra purificação fina: coluna: WatersSymmetry-Prep™ C-18, 7 μm, 300 mm χ 19 mm; eluenteA: água + 0,05% TFA1eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA: taxa de fluxo: 10 ml/min; A:B 65/35 isocrático. Ocomposto do título é obtido com rendimento de 8 mg (20% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 3,71 min.

LC-MS (Método 19): R, = 1,49 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 623,2 (100) [M+2H]2+.HR-TOF-MS (Método 24): C59H1OiN15Oi4 cale. 1244,7726, encontrados 1244,7748 [M+H]+.

Exemplo 14

[3-íerf-Butil-D-alanil]-[3-íerf-butil-L-alanil]-[(3f?)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-seril-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparaginil]-L-serinaC1.11 -N3-Iactama bistrifluoroacetato

<formula>formula see original document page 366</formula>

O composto do exemplo 239A é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 1 h e o produto é purificado deacordo com o método 44. Então é realizada uma outra purificação fina: coluna: WatersSymmetry-Prep™ C-18, 7 μm, 300 mm χ 19 mm; eluenteA: água + 0,05% TFA,eluente B: acetonitrilo + 0,05% TFA: taxa de fluxo: 10 ml/min; A:B 65/35 isocrático. Ocomposto do título é obtido com rendimento de 9 mg (6 pmol, 35% de teoria).

HPLC (Método 5): Rt = 3,63 min.

LC-MS (Método 19): Rt = 1,43 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 643,7 (100) [M+2H]2+, 1289,8(10) [M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C59H1OiN16O16 calc. 1289,7576, encontrados 1289,7578[M+H]+.Exemplo 15

[3-terí-Butil-D-alanilH3-terí-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-asparaginil_l_serina_C^1,11-N3,3-lactama-bis-trifluoroacetato

<formula>formula see original document page 367</formula>

O composto do exemplo 240A é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 1 ml da solução reagente por 1 h e o produto é purificadovárias vezes de acordo com o método 44. O composto do titulo é obtido com rendimentode 1,1 mg (6 μιηοΙ, 3,5% de teoria).HPLC (Método 5): Rt = 3,41 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,90 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 645 (100) [M+2H]2\ 1288 (10)[M+H]+.

HR-TOF-MS (Método 24): C60H103N16O15 cale. 1287,7784, encontrados 1287,7786[M+H]+.Exemplo 16

[3-fe/t-Butil-D-alanil]-[3-íe/t-butil-L-alanil]-[(3R)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3f?)-3-hidróxi-Lleucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil-glicil-[(3S)-3-hidróxi-L-asparagini^C1.11 -N3.33-Iactama bistrifluoroacetato<formula>formula see original document page 368</formula>

o composto do exemplo 253Α é reagido de acordo com oprocedimento geral 2 com 2 ml da solução reagente por 1 h e o produto é purificado deacordo com o método 44. O produto é purificado de modo fino de acordo com umavariante do método 34 (uso de eluente A:eluente B 3:2; isocrático em vez do gradiente).O composto do título é obtido com rendimento de 22 mg (36% de teoria).HPLC (Método 6): Rt = 3,43 min.

LC-MS (Método 22): Rt = 2,90 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 645 (100) [M+2H]2+, 1288 (60)[M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1286 (100) [M-H]". HR-TOF-MS (Método 24): C60H103N16O15 calc. 1287,7784, encontrados 1287,7800[M+H]+.

Exemplo 17

[3-terf-Butil-D-alanil]-[3-te/í-butil-L-alanil]-[(leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-alotreonil·D-alanil-[(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil]-L-

Serina C"1.11-N3.3-lactamabistrifluoroacetatoO composto do exemplo 267A (34 mg de produto bruto,about 6 pmol) é reagido de acordo com o procedimento geral 2 with 1 ml da soluçãoreagente por 30 min. O produto é obtido puro por cromatografia duas vezes, de acordocom o método 33. O composto do título é obtido com rendimento de 6 mg (65% deteoria).

HPLC (Método 6): Rt = 3,42 min.

LC-MS (Método 22): R, = 2,90 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 660 (100) [M+2H]2+, 1317,8(10) [M+H]+; MS (ESlneg): m/z (%) = 1315,8 (100) [M-H]".

HR-TOF-MS (Método 24): CeiH105N16O16 calc. 1317,7889, encontrados 1317,7892[M+H]+.

Os compostos 19-44 demonstrados na seguinte tabela foram preparados de acordo comos procedimentos indicados a partir dos materiais de início indicados.

<table>table see original document page 369</column></row><table><table>table see original document page 370</column></row><table><table>table see original document page 371</column></row><table><table>table see original document page 372</column></row><table><table>table see original document page 373</column></row><table><table>table see original document page 374</column></row><table><table>table see original document page 375</column></row><table><table>table see original document page 376</column></row><table><table>table see original document page 377</column></row><table><table>table see original document page 378</column></row><table>9

378/391

[3-ferf-Butil-D-alanil]-[3-ferf-butil-L-alanil]- [(3f?)-3-amino-L-fenilalanil]-[(3R)-3- hidróxi-L-leucil]-L-valil-D-arginil-L- isoleucil-L-alotreonil-glicil-L-seril-L-serina C1 ■ "-/V3 3-Iactama bistrifluoroacetato HPLC (Método 6): R, = 3,40 min; LC-MS (Método 19): R, = 1,51 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 624,0 (100) [M+2H]2+, 1246,8 (10) [M+H]+, MS (ESlneg): m/z (%)= 1244,8 (90) [M-H] ', 1291,7 (100) [M+HCOO]" ; HR-TOF-MS: C58H100Ni5O15 calc. 1246,7518, encontrados 1246,7494 [M+H]+. Rendimento: 20 mg (36% de teoria) a partir do composto do exemplo 447A (54 mg, 37 μηηοΙ) de acordo com o procedimento 2, purificação de acordo com uma variação do método 44 (rampa somente até 60% de acetonitrilo). 33 HO. OH c CH,HO-r-oV 3 V-CH HN. O ° f^H v 0 Ύ\Ρ HN^CH3 h T0X,hU O^Xch= H*C CH3 Q 0^>H H3C^CH3V H3Cv^ L * 2 TFA CH3 HN^NH NH2 [3-ferf-Butil-D-alanil]-[3-fe/t-butil-L-alanil]- [(3R)-3-amino-L-feni!a!anil]-[(3ft)-3- hidróxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L- isoleucil-L-alotreonil-D-seril-L-seril-L- serina Cui-ZV33-Iactama bistrifluoroacetato HPLC (Método 6): Rt = 3,44 min; LC-MS (Método 19): Rt = 1,54 min, MS (ESlpos): m/z (%) = 646,2 (100) [M+2H]2+, 1290,8 (10) [M+H]+, MS (ESlneg): m/z (%) = 1289,8 (60) [M-H]-, 1334,8 [M+HCOOT; HR- TOF-MS: C60H104N15O16 calc. 1290,7780, encontrados 1290,7766 [M+H]+. Rendimento: 21 mg (33% de teoria) a partir do composto do exemplo 448A (64 mg, 43 μιτιοΙ) de acordo com o procedimento 2, purificação de acordo com uma variação do método 44 (rampa somente até 50% de acetonitrilo).<table>table see original document page 380</column></row><table><table>table see original document page 381</column></row><table><table>table see original document page 382</column></row><table><table>table see original document page 383</column></row><table><table>table see original document page 384</column></row><table><table>table see original document page 385</column></row><table><table>table see original document page 386</column></row><table><table>table see original document page 387</column></row><table>

B. Avaliação da atividade fisiológica

O efeito in vitro dos compostos da invenção pode serdemonstrado nos seguintes ensaios:

Determinação da concentração inibitória mínima (MIC):

A MIC é determinada no teste de diluição líquida de acordo

com as diretrizes NCCLS. Durante a noite culturas de Stapylococcus aureus 133,Enterococcus faeealis 27159, E. faeeium 4147 e Streptococcus pneumoniae G9a sãoincubadas com as substâncias de teste descritas em uma série de diluição de 1:2. Adeterminação de MIC é realizada com uma contagem de células de 105 micróbios por mlem meio Isosensitest (Difco, Irvine/EUA), com a exceção de S. pneumoniae que étestado em caldo de cultura de BHI (Difco, Irvine/EUA) com 10% de soro bovino com umacontagem de células de 106 micróbios por ml. As culturas são incubadas a 37°C durante18-24 horas, S. pneumoniae na presença de 10% de CO2.

A MIC é definida como a concentração mais baixa de cada substância na qual não mais ocorre desenvolvimento bacteriano visível. Os valores deMIC são relatados em pg/ml.

Dados representativos da atividade in vitro para oscompostos da invenção estão ilustrados na Tabela A:

Tabela A

<table>table see original document page 387</column></row><table><table>table see original document page 388</column></row><table>

A adequação dos compostos da invenção para o tratamentode infecções bacterianas pode ser demonstrada no seguinte modelo animal:Infeccão sistêmica com Staphilococcus aureus 133:

Células de S. aureus 133 são desenvolvidas durante a noiteem caldo de cultura BHI (Oxoid, New York/ EUA). A cultura durante a noite é diluída1:100 em caldo de cultura BHI fresco e incubada durante 3 horas. As células que entãoestão na fase logarítmica de desenvolvimento são centrifugadas e lavadas duas vezescom solução salina fisiológica tamponada. Então, uma suspensão de células em soluçãosalina é ajustada fotometricamente para uma extinção de 50 unidades. Após uma fase dediluição (1:15), essa suspensão é misturada 1:1 com uma solução de 10% de mucine. Éadministrado intraperitonealmente 0,25 ml desta solução de infecção por 20 g decamundongo (equivalente a 1x106 micróbios/camundongo). A terapia ocorreintraperitonealmente ou intravenosamente 30 minutos após a infecção. CamundongosCFW1 fêmea são usados para o experimento de infecção. A sobrevivência dos animais éregistrada durante 6 dias.

As propriedades dos compostos da invenção em relação àtolerabilidade renal podem ser demonstradas no seguinte modelo animal:Modelo com camundongo para determinar efeitos nefrotóxicos:

Efeitos colaterais nefrotóxicos dos nonadepsipeptídeos sãoanalisados por exames histopatológicos dos rins em camundongos após administraçãomúltipla de uma dosagem em particular. Com essa finalidade, são tratados 5-6 animaisdiariamente, seja intravenosamente (i.v.) ou intraperitonealmente (i.p.), com substânciasque são dissolvidas em solução aquosa ou com a adição de Solutol. Os efeitosnefrotóxicos são determinados por avaliação microscópica óptica de hematoxilina eeosina (H&E) em cortes dos rins em parafina pigmentada. Opcionalmente, é realizadauma 'reação ácida periódica Schiff' (PAS) para visualizar melhor as glicoproteínas. Osefeitos nefrotóxicos são especificados semi-quantitativamente para cada animal comogravidades da basófilia tubular e degeneração/regeneração que ocorrem (gravidades: O =sem efeito; 1 = efeito mínimo; 2 = efeito leve; 3 = efeito moderado; 4 = lesões graves). Agravidade média da degeneração/regeneração tubular bem como a indicêndia (númerode animais afetados) são calculadas para cada grupo animal ou derivado. Alteraçõesrenais que forem além disso, tais como dilatação tubular, bem como necroses e oacúmulo de material necrótico, são igualmente relacionadas.Modelo com ratos para determinar efeitos nefrotóxicos:

Efeitos colaterais nefrotóxicos dos nonadepsipeptídeos sãoanalisados por exames histopatológicos dos rins em ratos após administração múltipla deuma dosagem em particular. Com essa finalidade, 5 animais são tratados diariamenteintravenosamente (i.v.) com substâncias que são dissolvidas em solução salina ousolução de Iactato de Ringer. Os efeitos nefrotóxicos são determinados por avaliaçãomicroscópica óptica de hematoxilina e eosina (H&E) em cortes dos rins em parafinapigmentada. Opcionalmente, é realizada uma 'reação ácida periódica Schiff (PAS) paravisualizar melhor as glicoproteínas. Os efeitos nefrotóxicos são especificados semi-quantitativamente para cada animal como gravidades da basófilia tubular edegeneração/regeneração que ocorrem (gravidades: O = sem efeito; 1 = efeito mínimo; 2= efeito leve; 3 = efeito moderado; 4 = lesões graves). A gravidade média dadegeneração/regeneração tubular bem como a indicêndia (número de animais afetados)são calculadas para cada grupo animal ou derivado. Alterações renais que forem alémdisso, tais como dilatação tubular, bem como necroses e o acúmulo de material necrótico,são igualmente relacionadas.

Princípio da determinação da fração livre via Transil:

O método aqui descrito para determinar a fração livre (fu) de

uma substância de teste é dividido em 2 partes:

a) Determinação do Transil ®/coeficiente de distribuição de tampão Transil (MAtampão) porincubação da substância de teste em um tampão Transil®(pH 7,4) dispersão esubseqüentemente determinando a concentração na dispersão e no sobrenadante dotampão.

b) Determinação do ®/coeficiente de distribuição no plasma Transil (MApiaSma) porincubação da substâcia de teste em um Transil®-dispersão no plasma esubseqüentemente determinando a concentração na dispersão e no plasma.

Resulta o quociente dos dois coeficientes de distribuição fu.

No caso de substâncias com alta ligação de proteínas, oplasma é geralmente diluído com tampão de fosfato isotônico (pH 7,4) esubseqüentemente colocado em suspensão com Transil®. A determinação de fu' (fraçãolivre em plasma diluído) nesta solução de proteína diluída, ocorre em analogia àdeterminação de fu. A fração livre em plasma não diluído é calculada a partir de fu' e dofator de diluição.

Com relação a esse método, compare também:Schuhmacher1 Joachim; Kohlsdorfer, Christian; Buehner, Klaus; Brandenburger, Tim;Kruk, Renate, "High-throughput determination of the free fraction of drugs strongly boundto plasma proteins." Journal of Pharmaceutical Sciences 2004, 93, 816-830.

Determinação da afinidade da membrana dde uma substância de teste apósdistribuição entre Transil® e tampão (MAtampao):

Todas as incubações são realizadas em recipientes de vidroadequados, por exemplo, frascos de vidro, tubos de ensaio ground-socket. O volume totalé geralmente de 0,5-5 ml e o volume de Transil® é de 10-100 μΙ. Caso se preveja que asafinidades da membrana sejam altas, a dispersão Transil® pode ser diluída em até 20vezes com tampão de fosfato até um pH de 7,4, por exemplo PBS da Dulbecco. Otampão de fosfato com pH 7,4 é fornecido nos recipientes para incubação e o Transil®,após mistura completa, é transferido por pipeta. A substância de teste é transferida porpipeta a uma concentração de, por exemplo, 200 ng/ml, η = 6. A proporção de solventeorgânico deve ser de <2%. As misturas são incubadas em temperatura ambiente durante30 min, por exemplo em um mini-agitador a um ângulo de cerca de 45°, por volta de400 rpm. A fim de determinar o valor de 100%, é removida pelo menos uma alíquotade100 μΙ, por exemplo, e a mistura restante é centrifugada a cerca de 1800g durantecerca de 10 min. São removidas pelo menos 2 alíquotas (por exemplo, 100 μΙ) dosobrenadante de cada amostra para a determinação da concentração.

Determinação de MAmaama não diluído ou diluído:

O volume total de incubação e volume adicionado deTransil® dependem da fração livre prevista. O volume total é geralmente de 0,5-1 ml e ovolume de Transil® é de 10-100 μΙ. Se as frações livres forem muito baixas, o plasma daespécie a ser investigada é diluído com solução de tampão isotônico, pH 7,4, porexemplo, 10-400 vezes e, então, é adicionado o Transil® . O procedimento subsequenteocorre conforme descrito acima para a determinação dos valores de MAtamPâo.

Princípio da determinação da fração livre via ultrafiltragem:

O plasma da espécie a ser investigada é filtrado por umamembrana semi-permeável. A concentração de substância no filtrado é medida e a fraçãolivre fu é calculada a partir dela. É usado o sistema de micro-divisória Centrifree daMillipore/Amicon. As membranas de ultrafiltragem possuem um corte de 30 000 Da. 1 mlde plasma é colocado com a substância em uma concentração de cerca de 1 pg/ml. Aproporção de solvente deve ser < 2%. Após incubação em temperatura ambiente durante30 minutos, o plasma é transferido por pipeta para o sistema de ultrafiltragem ecentrifugado a 1800 g por 10 minutos. É medida a concentração da substância noultrafiltrado (Cu; concentração da substância sem ligação) e no plasma antes dacentrifugação (C; concentração total da substância). A fração livre é calculada de acordocom a fórmula: fu (%) = Cu/C *100.

Determinação da estabilidade química em solução aquosa levemente alcalina:

É dissolvido 0,3 mg da substância de teste em uma misturade 0,25 ml de acetonitrilo, 0,25 ml de DMSO e 0,5 ml de tampão de pH 7,8 (consistindode 111 mg (1 mmol) de cloreto de cálcio, 7,91 g (100 mmol) de bicarbonato de amônio,100 ml de acetonitrilo ad 1000 ml) e deixada em repouso em temperatura ambiente. Éretirada uma alíquota de 5 μΙ da solução uma vez em uma hora e analisada por HPLC(método 57). A concentração do composto de teste no tempo 0 h, indicada pela absorçãode UV (IE), é ajustada igual a 100% e é observada diminuição ao longo do tempo. Aomesmo tempo, é observado o aumento do produto de degradação ring-opened.Este ensaio forneceu os resultados ilustrados nas figuras 1-5. É evidente, a partir dascurvas, que os compostos da invenção são distintamente mais estáveis em soluçãoalcalina aquosa do que o Lysobactin.

C. Exemplos de modos de realização de composições farmacênticas

Os compostos da invenção podem ser convertidos empreparações farmacêuticas das seguintes formas:Comprimido:Composição:

100 mg do composto do exemplo 1, 50 mg de Iactose (monidrato), 50 mg de amido demilho (nativo), 10 mg de polivinilpirrolidono (PVP 25) (BASF, Ludwigshafen, Alemanha) e2 mg de estearato de magnésio.

Peso do comprimido 212 mg. Diâmetro de 8 mm, raio de curvatura 12 mm.Produção:

A mistura de ingrediente ativo, Iactose e amido é granuladacom uma solução de 5% (m/m) de PVP em água. Os grânulos são secados e entãomisturados com o estearato de magnésio por 5 min. Essa mistura é comprimida usandouma prensa convencional para comprimidos (veja acima o formato do comprimido). Éutilizada uma força de compressão de 15 kN como orientação para a compressão.Suspensão que pode ser administrada oralmente:

Composição:

1000 mg do composto do exemplo 1, 1000 mg de etanol (96%), 400 mg de Rhodigel(xanthan gum, FMC1 Pensilvânia, USA) e 99 g de água.10 ml de suspensão oral são equivalentes a uma dose única de 100 mg do composto dainvenção.

Produção:

O Rhodigel é colocado em suspensão em etanol e oingrediente ativo é adicionado à suspensão. A água é adicionada durante agitação. Amistura é agitada por cerca de 6 h até que o inchaço do Rhodigel esteja completo.Solução que pode ser administrada intravenosamente:

Composição:

100-200 mg do composto do exemplo 1, 15 g de polietileno glicol 400 e 250 g de águapara injeção.

Produção:

O composto do exemplo 1 é dissolvido juntamente com opolietileno glicol 400 na água com agitação. A solução é esterilizada por filtragem(diâmetro dos poros 0,22 μητι) e distribuição em frascos de infusão esterilizadostermicamente sob condições assépticas. Estes últimos são fechados com rolhas deinfusão e tampas amassadas.

Claims

1. Composto da fórmula<formula>formula see original document page 393</formula>na qualR1 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo,trimetilsililometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R2 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo,trimetilsililometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R3 representa hidrogênio, C1-C4-Blcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetilo, fenil,benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado ou 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,na qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometilo, trifluorometoxi,C1-C4-alcil, C1-C4alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila,aminocarbonila, C1-C4-Blcilaminocarbonila e 5- ou 6- heterociclila desmembrada que é deligação via nitrogênio,R4 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloaleil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetílo ou 2-amino-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,-1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,ena qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi, C1-C4-Slcill C1-C4-Slcoxi, C1-C4-Slcilamino, hidroxicarbonila, CrC^alcoxicarbonila,aminocarbonila e C^C^alcilaminocarbonila,R5 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzils, 5- ou 6-heterosrilo desmembrsdo, 5- ou 6-heterosrilmetilo desmembrado, trimetilsililmetílo ou 2-amino-2-oxoetilo, na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,-1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,ena qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcil1 C1-C4-Slcoxi, C1-C^alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C^alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4-Blcilaminocarbonila,R6 representa C1-C6-Blcil, na qual o alcil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidin-2-ilamino, [amino-(imino)metil]amino, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo,R7 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-Cicloalcil, C3-C7-cicloslcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado ou trimetilsililmetilo, na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,-1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,ena qusl cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-alcil, C1-C4-Slcoxi, C1-C4-Sleilamino, hidroxiearbonila, C1-C4-Blcoxicarbonilalaminocarbonila e C1-C4-SlcilaminocarbonilalR8 representa C1-Ce-Slcill C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,-1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]smino,ena qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Slcill CrC4-alcoxi, C1-C4-Blcilaminol hidroxiearbonila, C1-C4-Slcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4-Slcilaminocarbonila,R9 representa hidrogênio, C1-C6-Slcil, C3-C7-cicloslcil, C3-C7-Cicloslcilmetils, fenil,benzila, 5- ou 6- heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,trimetilsililmetilo ou 2-amino-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionados independentementeum do outro a partir do grupo que consiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto,-1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino (imino)metil]amino,ens qusl cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Blcill C1-C4-Blcoxil C1-C4-Blcilaminol hidroxiearbonila, C1-C4-SlcoxicSrboniIa,aminoesrbonila e C1-C4-Blcilaminocarbonila,R10 representa hidrogênio, C-i-Ce-alcil, C3-C7-Cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil,benzila, 5- ou 6-heteroarilo desmembrado, 5- ou 6-heteroarilmetilo desmembrado,trimetilsililmetilo, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo,(aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidro-pirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]smino,ens qusl cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4alcoxicarbonilalaminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,R11 representa C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- or6-heteroarilo desmembrado, 5- or 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetila,2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1 -hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ena qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,C1-C4-Blcil, C1-C4-Blcoxi, C1-C4alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4alcoxicarbonila,aminocarbonila e C1-C4alcilaminocarbonila,ou um dos sais deste, os solvatos deste ou os solvatos dos sais deste,exceto um composto da fórmula<formula>formula see original document page 396</formula>na qualR1 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, trimetilsil-ilometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,R2 representa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, trimetilsil-ilometila, benzila, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3-tienilmetilo ou 1,3-tiazol-4-ilmetilo,na qual benzila, 2-piridilmetilo, 3- piridilmetilo, 2-tienilmetilo, 3- tienilmetilo e 1,3-tiazol-4-ilmetilo podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutos selecionados independentementeum do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, trifluorometilo, metilo e metóxi,eR12 representa hidrogênio ou metilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de queR10 representa Ci-Ce-alcil, C3-C7-cicloalcil, C3-C7-cicloalcilmetila, fenil, benzila, 5- or6-heteroarilo desmembrado, 5- or 6-heteroarilmetilo desmembrado, trimetilsililmetila,2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidróxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1 -hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ena qual cicloalcil, cicloalcilmetilo, fenil, benzila, heteroarilo e heteroarilmetilo podem sersubstituídos por 1 a 4 substitutos selecionados independentemente um do outro a partirdo grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometóxi,CrC4-alcil, C1-C4^lcoxi, CrC4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-Blcoxicarbonila,aminocarbonila e Ci-C4-alcilaminocarbonila,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de queR1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-l-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluoromeíil e metilo,R2 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluorometil e metilo,R3 representa C1-C4-alcil, fenil, benzila, 2-piridil, 3-piridil ou 4-piridil,pelo fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro a partir do grupo que consistede halogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Slcil, C1-C4-Slcoxi e C1-C4-alcilamino,R4 representa C1-C6-Sleill C3-C7-cicloalcilmetila, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual alcil pode ser substituído por um hidróxi substituto,ena qual cicloalcilmetila, benzila e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, C1-C4-Blcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4alcoxicarbonila, aminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,R5 representa C1-C6-Slcill C3-C7-Cicloalcilmetila1 fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ena qual cicloalcilmetila, fenil, benzilo e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, CrC4-alcoxi e C1-C4-alcilamino,R6 representa C1-C6-Blcil,na qual o alcil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidin-2-ilamino, [amino-(imino)metil]amino, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo,R7 representa C1-C6-Slcill C3-C7-Cicloalcilmetila1 fenil, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino, ena qual cicloalcilmetila, fenil, benzilo e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Blcil, C1-C4-Blcoxi e C1-C4-alcilamino,R8 representa C1-C4-alcil, C3-C7-cicloalcilmetila, benzila, 5- ou 6-heteroarilmetiladesmembrada ou trimetilsililmetila,na qual alcil pode ser substituído por um hidróxi substituto,ena qual cicloalcilmetila, benzila e heteroarilmetil podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro do grupo que consiste dehalogênio, ciano, hidróxi, amino, trifluorometil, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4-alcoxi, C1-C4-alcilamino, hidroxicarbonila, C1-C4-alcoxicarbonila, aminocarbonila e C1-C4-alcilaminocarbonila,R9 representa hidrogênio, C1-C6-alcil, C3-C7-cicloalcil, fenil, trimetilsililmetilo ou2-amino-2-oxoetilo,na qual o metilo pode ser substituído por um substituto selecionado do grupo que consistede hidróxi, amino e mercapto,ena qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4-Blcoxi e C1-C4-Blcilamino,R10 representa hidrogênio, C1-C6-Slcil, C3-C7-Cicloalcil, fenil, trimetilsililmetilo, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo, (aminosulfonil)(hidroxi)metilo, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetilo ou 2-(C1-C4-alcilamino)-1 -hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ena qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-Slcil, C1-C4-alcoxi e C1-C4alcilamino,R11 representa metilo ou etilo,na qual metilo e etilo podem ser substituídos por um substitute selecionado a partir dogrupo que consiste de hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ou um dos sais deste, os solvatos deste, ou os solvatos dos sais deste, excetocompostos da fórmula (Ia), na qualR1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridílmetil,na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluorometil e metilo,R2 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetila,benzila, 2-piridilmetil ou 3-piridilmetil,na qual benzila, 2-piridilmetil e 3-piridilmetil podem ser substituídos por 1 ou 2 substitutosselecionados independentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio,trifluorometil e metilo,eR12 representa hidrogênio ou metilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de queR1 representa 2-metilprop-1-il, 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilou benzila,na qual o benzilo pode ser substituído por 1 ou 2 substitutos selecionadosindependentemente um do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio,trifluorometiio e metilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

5. Composto de acordo com a reivindicação 3 ou 4,caracterizado pelo fato de queR3 representa fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo ou 4-piridilo,na qual fenil, benzila, 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo podem ser substituídos por 1 a 4substitutos selecionados independentemente um do outro a partir do grupo que consistede halogênio, ciano, trifluorometiio, trifluorometoxi, CrC4-alcil, CrC4-alcoxi e CrC4-alcilamino,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

6. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 3 a 5, caracterizado pelo fato de queR10 representa CrCe-alcil, C3-C7-cicloalcil, fenil, trimetilsililmetilo, 2-amino-2-oxoetilo, 2-amino-1 -hidróxi-2-oxoethil, (aminosulfonil)-(hidróxi)metila, 2-(C1-C4-alcilamino)-2-oxoetiloou 2-(Ci-C4-alcilamino)-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual o alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, hidróxi, amino, mercapto, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina-2-ilamino e[amino(imino)metil]amino,ena qual cicloalcil e fenil podem ser substituídos por 1 a 4 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano, hidróxi,amino, trifluorometilo, trifluorometoxi, Ci-C4-alcil, Ci-C4-alcoxi e Ci-C4-alcilamino,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

7. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de queR1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,R2 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,R3 representa C1-CVaIciI, 3-piridilo ou fenil,na qual 3-piridilo ou fenil podem ser substituídos por um substituto selecionado a partir dogrupo que consiste de halogênio, ciano, metila, metoxi, dimetilamino e dietilamino,R4 representa -CH(OH)-C1-C5-BlciI ou -CH(OH)fenil,na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometilo, trifluorometoxi, C1-C4-alcil, C1-C4alcoxi e C1-C4dialcilamino,R5 representa C1-C6-Slcil, C3-C7-cicloalcilmetila, benzilo ou trimetilsililmetilo,R6 representa C2-C4-alcil linear,na qual o alcil é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo que consistede amino, 1,4,5,6-tetraidropirimidina-2-ilamino e [amino(imino)metil]amino,R7 representa C1-C6^IciI, C3-C7-cicloalcilmetila, benzilo ou trimetilsililmetilo,R8 representa C1-C^alcil, -CH2-OH, -CHÍOHJ-CrCs-alcil ou -CH(OH)-fenil,na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometila, trifluorometoxi, CrC4-alcil, C1-C4-Blcoxi e C1-C4dialcilamino, eR9 representa hidrogênio, C1-C6-Blcil, hidroximetil ou 2-amino-2-oxoetilo,R10 representa hidrogênio, C1-C4-Blcil, 2-amino-2-oxoetilo ou 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual C1-C4-alcil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupoque consiste de amino e hidróxi, com exceção que R10 não seja 4-aminobut-1-il,R11 representa metilo,na qual o metilo é substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de hidróxi e amino,ou um dos sais deste, os solvatos deste ou os solvatos dos sais deste,exceto compostos da fórmula Ia), na qualR1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,R2 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il, trimetilsililmetilo ou 3-piridilmetila,eR12 representa hidrogênio ou metilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de queR1 representa 2,2-dimetilprop-1-il, 2,2-dimetilbut-1-il ou trimetilsililmetilo,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

9. Composto de acordo com a reivindicação 7 ou 8,caracterizado pelo fato de queR2 representa 2,2-dimetilprop-1-il ou 3-piridilmetila,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

10. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 7 a 9, caracterizado pelo fato de queR3 representa fenil,na qual o fenil pode ser substituído por um substituto selecionado a partir do grupo queconsiste de halogênio, ciano, metila, metoxi, dimetilamino e dietilamino,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

11. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 7 a 10, caracterizado pelo fato de queR8 representa -CH(OH)-C1-C5-alcil ou -CH(OH)fenil,na qual -CH(OH)fenil pode ser substituído por 1 a 3 substitutos selecionadosindependentemente um do outro, a partir do grupo que consiste de halogênio, ciano,trifluorometila, trifluorometoxi, C1-C4alcil, CrC4-alcoxi e C1-C4-dialcilamino, eou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

12. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 7 a 11, caracterizado pelo fato de queR10 representa metilo, etilo, 2-amino-2-oxoetilo ou 2-amino-1-hidróxi-2-oxoetilo,na qual a metila e a etila podem ser substituídas por um substituto de hidróxi,ou um dos sais destes, dos solvatos destes ou dos solvatos dos sais destes.

13. Método para preparar um composto da fórmula (I) deacordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que[A] um composto da fórmula<formula>formula see original document page 403</formula>na qualR31 R41 R51 R61 R71 R81 R91 R10 e R11 possuem o significado indicado na reivindicação 1,é reagido primeiro com um composto da fórmula<formula>formula see original document page 403</formula>na qualR1 e R2 possuem o significado indicado na reivindicação 1,Y1 representa tert-butoxicarbonila ou benziloxicarbonila, eX1 representa halogênio, de preferência, bromo, cloro ou flúor, ou hidróxi,e subseqüentemente por um ácido e/ou por hidrogenólise,or[B] um composto da fórmula<formula>formula see original document page 404</formula>na qualR41 R51 R61 R71 R81 R91 R10 e R11 possuem o significado indicado na reivindicação 1,é reagido primeiro com um composto da fórmula<formula>formula see original document page 404</formula>na qualR11 R2 e R3 possuem o significado indicado na reivindicação 1, eY1 representa ferf-butoxicarbonila ou benziloxicarbonila,e subseqüentemente em uma síntese de 4 estágiosa) com um reagente de flúor, tal como fluoreto de tetrabutilamônio,com um ácido,c) com um reagente deshidradante, quando apropriado, na presença de uma base,ed) por hidrogenólise.

14. Método de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de que o composto da fórmula (II) é preparado reagindo umcomposto da fórmula<formula>formula see original document page 405</formula>na qualR4, R51 R61 R7, R81 R91 R10 e R11 possuem o significado indicado na reivindicação 1,primeiro com um composto da fórmula<formula>formula see original document page 405</formula>na qualR3 possui o significado indicado na reivindicação 1 eR13 representa cianometila, p-nitrofenil, o-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, 2,4,5-triclorofenil,pentaclorofenil, pentafiuorofenil (Pfp)1 N-hidróxiftalimidii, N-nidroxisucinimidil (O-Su), 1-hidroxipiperidinil ou 5-cloro-8-hidroxiquinolinil,e subseqüentemente em uma síntese de 3 estágiosa) com um ácido,b) com um reagente deshidradante, quando apropriado, na presença de uma base,ec) por hidrogenólise.

15. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 1 a 12 caracterizado pelo fato de ser usado para o tratameanto e/ouprofilaxia de doenças.

16. Uso de um composto de acordo com qualquer umadas reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo fato de ser usado para a fabricação de(VII),um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de doenças.

17. Uso de um composto de acordo com qualquer umadas reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo fato de ser usado para a fabricação deum medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por bactérias.

18. Medicamento compreendendo um composto deacordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo fato de serusado em combinação com um excipiente inerte, atóxico, farmaceuticamente aceitável.

19. Medicamento de acordo com a reivindicação 18caracterizado pelo fato de ser usado para o tratamento e/ou profilaxia de infecçõescausadas por bactérias.

20. Método para controlar infecções causadas porbactérias em seres humanos e animais caracterizado pelo fato de ser por meio daadministração de uma quantidade eficiente em termos antibacterianos de pelo menos umcomposto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 12 de um medicamentode acordo com a reivindicação 18 ou de um medicamento obtido de acordo com areivindicação 16 ou 17.