BRPI0709688A2 - composições farmacêutica orais estáveis contendo agonistas do receptor do hormÈnio da tireóide - Google Patents

Abstract

<B>COMPOSIçõES FARMACêUTICA ORAIS ESTáVEIS CONTENDO AGONISTAS DO RECEPTOR DO HORMÈNIO DA TIREóIDE.<D> A presente invenção refere-se a composições nas quais determinados compostos de ligação ao receptor de hormónio da tiróide são formulados junto com um revestimento entérico, um antioxidante ou um revestimento entérico e um antioxidante. Tal formulação age para prevenir a formação de produtos de reação indesejáveis in vivo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕESFARMACÊUTICAS ORAIS ESTÁVEIS CONTENDO AGONISTAS DO RE-CEPTOR DO HORMÔNIO DA TIREÓIDE".

A presente invenção refere-se à composições farmacêuticas. Em particular, embora não exclusivamente, refere-se à estratégias de formula-ção para estabilização dos ingredientes farmacologicamente ativos de com-posições farmacêuticas.

Para muitos agentes farmacologicamente ativos, a via de admi-nistração oral é preferida. Contudo, de forma que tais agentes atinjam a cor- rente sangüínea do paciente, eles devem usualmente ser expostas aos con-teúdos de pelo menos a parte superior do trato gastrointestinal, (isto é, es-tômago e intestino delgado). Determinados agentes são sensíveis ao ambi-ente ácido do estômago. Tal sensibilidade usualmente resulta em hidrólisedo agente ácido-mediada. É conhecido proporcionar composições contendo tais agentes hidroliticamente sensíveis com um revestimento entérico. Talrevestimento geralmente compreende um polímero ácido o qual é substanci-almente não-carregado e insolúvel em um pH inferior, (isto é, no estômago),mas ionizado e mais solúvel em valores de pH maiores (isto é, quando depassagem no intestino delgado).

O composto 1A tendo a estrutura a seguir:

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CompostoIA

é descrito no WO 01/60784 (nome UPAC: ácido 3-[[3,5-Dibromo-4-[4-hidróxi-3-(1-metiletil)-fenóxi]-fenil]-amino]-3-oxopropanóico). O composto 1A e umasérie de compostos relacionados são descritos como agonistas de recepto- res do hormônio da tiróide, em particular do receptor TRp. Tais compostosseriam úteis no tratamento ou prevenção de uma doença associada à dis-função metabólica ou a qual é dependente da expressão de um gene regu-lado por triiodotironina (T3). Tais doenças incluem, por exemplo, obesidade,hipercolesterolemia, aterosclerose, arritmias cardíacas, depressão, osteopo-rose, hipotiroidismo, bócio, câncer da tiróide, bem como glaucoma e insufici-ência cardíaca congestiva.

Ao conduzir o trabalho de desenvolvimento de formulações como composto 1A, os presentes inventores descobriram, inesperadamente, queuma transformação indesejável estava ocorrendo no composto. Um produtode reação contendo um grupo nitro (-NO2) na posição ο/το ao grupo niaroxiiano anel fenólico, (isto é, o anel à esquerda conforme apresentado acima) foiproduzido. Na investigação, descobriu-se que esse produto de reação tinhapropriedades alteradas comparado com o composto 1A não-transformadoincluindo, surpreendentemente, o potencial para genotoxicidade. Quando deexame adicional, descobriu-se que o produto de reação era capaz de serproduzido in vivo após administração oral. Os presentes inventores, portan-to, procuraram investigar o processo que leva à produção do produto de rea-ção nitratado com vistas à inibição de sua formação após administração oral.

Sabe-se (por exemplo, de Oldrieve e outroes, Chem. Res. Toxi-col. 1998, 11, 1574) que determinados compostos flavonóides são capazesde inibir a nitração de tirosina ou a formação de produtos de deaminação debase de bases de DNA, a qual ocorre sob condições ácidas na presença denitrito. Foi mostrado que a nitração de ácido hidroxifenilacético e proteínasna presença de nitrito e peróxido de hidrogênio na saliva humana in vitro écapaz de inibição através de uma espécie redutora (Takahama e outroes,Arch. Orai Biol. 2003, 48, 679). Essas divulgações não permitem que aque-les habilitados, contudo, venham a prever se tais reações de nitração podemocorrer em outros compostos, tais como agonistas do receptor de hormônioda tiróide estruturalmente distintos exemplificados pelo composto 1A. Alémdisso, elas não proporcionam nenhuma indicação de que tais reações po-dem ser de signifiçância in vivo e nenhuma sugere como prever as proprie-dades potenciais (por exemplo, genotoxicidade) de tal produto de reaçõesnitratado.

A técnica anterior não descreve ou sugere que compostos deligação ao receptor de hormônio da tiróide, tal como o composto 1A acima,podem ser convertidos aos produtos de reação potencialmente tóxicosquando de administração oral, nem como tal conversão pode ocorrer, nemcomo tal problema pode ser dirigido.

Portanto, é um objetivo da presente invenção proporcionar compo-sições farmacêuticas nas quais o problema de nitração acima de determi-nados compostos de ligação ao receptor de hormônio da tiróide apósadministração oral é atenuado.

Conseqüentemente, um primeiro aspecto da presente invençãoproporciona uma composição farmacêutica adequada para administraçãooral, compreendendo:

(i) um composto da Fórmula I:

Fórmula I

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em que:

Z é H ou um grupo alternativo capaz de ser substituído por NO2via uma reação de nitração baseada em nitrito;

Ri é selecionado de hidrogênio, halogênio, trifluorometila ou al-quila de 1 a 6 carbonos ou cicloalquila de 3 a 7 carbonos;

X é oxigênio (-0-), enxofre (-S-), carbonila (-C0-), metileno(-CH2-) ou -NH-;

R2 e R3 são os mesmos ou diferentes e são hidrogênio, halogê-nio, alquila de 1 a 4 carbonos ou cicloalquila de 3 a 6 carbonos, pelo menosum de R2 e R3 sendo outro que não hidrogênio;

R4 é hidrogênio ou alquila inferior;

A é oxigênio (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5- ou -NR5CO-;

R5 é H ou alquila inferior;

R6 é ácido carboxílico (-CO2H) ou um éster do mesmo ou umpró-fármaco do mesmo;

Y é -(CH2)n, onde η é O, 1, 2, 3, 4 ou 5 e em que um ou mais dosgrupos CH2 podem ser opcionalmente substituídos por halogênio ou Y é-C=C-, o qual pode ser eis ou trans; e

R7 é hidrogênio ou um grupo alcanoíla ou aroíla ou outro grupocapaz de bioconversão para gerar a estrutura de fenol livre (em que R7 = H);

incluindo todos os estereoisômeros do mesmo ou um sal ou és-ter farmaceuticamente aceitável do mesmo;

(ii) peio menos um excipieníe farmaceuticamente aceitávei; e

(iii) um revestimento entérico.

Os compostos da Fórmula I são particularmente úteis como a-gonistas do receptor de hormônio da tiróide. Em particular, muitos de taiscompostos mostram atividade intensificada no receptor TRp (ao invés do TRa).

A composição desse primeiro aspecto da invenção é baseada nadescoberta surpreendente dos inventores, como um resultado das investiga-ções mencionadas acima, de que o produto de reação nitro do composto 1Aé formado quando de administração oral via uma reação de nitração basea-da em nitrito. A reação de nitração baseada em nitreto requer um pH mode-radamente inferior (cerca de 2) de forma a ser processada. Através de for-necimento da composição com um revestimento entérico, (isto é, um o qualpermanece intacto no estômago ácido e dissolve apenas quando de passa-gem da composição no intestino delgado, onde o pH é mais próximo de neu-tro), a reação de nitração é significantemente inibida. A presença do reves-timento entérico previne a exposição do composto farmacologicamente ativoda Fórmula I ao meio ácido do estômago, desse modo, impedindo que o re-agente nitrito seja formado na proximidade do referido composto ativo. Aconseqüência do revestimento entérico é, portanto, de que a reação de ni-tração quando de administração oral de um composto da Fórmula I é atenu-ada. Deverá ser enfatizado que a motivação dos presentes inventores paracompreender e tentar atenuar a reação de nitração foi a produção inespera-da de um produto de reação nitratado do composto 1A durante o trabalho dedesenvolvimento de formulação. Tal reação de nitração também ocorre emoutros compostos da Fórmula (I) incluindo, por exemplo, o composto GC-1mostrado abaixo. A menos que esse produto de reação nitratado seja detec-tado, não haverá razão para determinar sua genotoxicidade potencial. Semconhecimento da toxicidade potencial (ou outras características indesejá-veis) em tal produto de reação, naturalmente, não haverá incentivo em tentarprevenir sua formação.

A aplicabilidade da presente invenção não está limitada à estabi-lização do composto IA. Antes, composições de acordo com esse primeiroaspecto da invenção deverão todas experimentar um grau de estabilizaçãoem virtude de atenuação da reação de nitração a qual é passível de ocorrerquando de administração oral. A nitração de qualquer composto da Fórmulapode levar a alterações nos perfis de compostos farmacológicos e/ou toxi-cológicos ou pode igualmente afetar sua farmacocinética. Os produtos dereação nitro de tais compostos podem ser potencialmente genotóxicos. Emdeterminados casos, reações adicionais em meios ácidos (por exemplo, Iibe-ração de anilina, a qual é, em si, potencialmente genotóxica), podem tam-bém ser prevenidas. Além disso, reações de nitração no anel secundário,(isto é, à direita, conforme representado acima) podem também ocorrer emum baixo pH por meio de substituição aromática eletrofílica. O revestimentoentérico também inibirá ou prevenirá a formação desses produtos de reaçãonitro. Em qualquer caso, a capacidade de controlar e/ou prevenir tais modifi-cações químicas de compostos da Fórmula I geralmente será uma ferramen-ta útil para o formulador.

As composições de acordo com o primeiro aspecto da invençãopermitem que os compostos de Fórmula I sejam liberados da composiçãoapenas uma vez que ela tenha passado do estômago para o intestino, pontono qual o revestimento entérico começa a dissolver e/ou se tornar permeá-vel. Uma vez que o pH no intestino não é baixo o bastante, contudo, paraque a nitração baseada em nitrito ocorra em qualquer extensão significativa,a nitração dos compostos da Fórmula I quando de administração oral é signi-ficativamente atenuada.

O termo "alcanoíla", conforme empregado aqui, sozinho ou co-mo parte de qualquer grupo, é alquila ligada a um grupo carbonila. O termo"aroíla", conforme empregado aqui, sozinho ou como parte de outro grupo, éarila ligada a um grupo carbonila. A menos que de outro modo indicado, otermo "alquila" ou "alk", conforme empregado aqui, sozinho ou como partede outro grupo, inclui hidrocarbonetos de cadeia reta e ramificada, contendo1 a 12 carbonos na cadeia normal, de preferência 1 a 4 carbonos (caso noqual o termo "alquila inferior" pode ser usado), tal como metila, etila, propila,isopropila, butila, t-butila ou isobutila, pentila, hexila, isohexila, heptila, 4,4-dimetilpentila, octila, 2,2,4-trimetilpentila, nonila, decila, undecila, dodecila. Otermo "arila", conforme empregado aqui, sozinho ou como parte de outrogrupo, se refere aos grupos aromáticos monocíclicos e bicíclicos contendo 6a 10 carbonos na porção do anel (tal como fenila ou naftila, incluindo 1-naftila e 2-naftila) e pode ser opcionalmente substituído por átomos de car-bono disponíveis por 1, 2 ou 3 grupos selecionados de hidrogênio, halo, al-quila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi, alquenila, trifluorometila, trifluorometóxi,alquinila, hidróxi, amino, nitro, ciano e/ou carboxila ou alquil éster dos mes-mos. A menos que de outro modo indicado, o termo "cicloalquila", conformeempregado aqui, sozinho ou como parte de outro grupo, inclui grupos hidro-carbonetos saturados cíclicos ou grupos hidrocarbonetos cíclicos parcial-mente insaturados (contendo 1 ou 2 ligações duplas), contendo um anel eum total de 3 a 7 carbonos, de preferência 3 a 6 carbonos, formando o anel,o qual inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, ci-clopentenila e ciclohexenila. O termo "halogênio" ou "halo", conforme usadoaqui, sozinho ou como parte de outro grupo, se refere a cloro, bromo, flúor eiodo, bem como CF3, com cloro ou bromo sendo preferidos.

O grupo alternativo capaz de ser substituído por NO2 via umareação de nitração baseada em nitrito pode, por exemplo, ser selecionadode halo (por exemplo, iodo, cloro, bromo ou flúor, com o primeiro preferido) epseudo-halogênios (por exemplo, SCN, OCN, NCS, NCO e N3).

O revestimento entérico é, de preferência, formado usandoqualquer polímero comercialmente disponível produzido para tal finalidade.Como exemplos de tais polímeros, aqueles baseados em acrilatos, meta-crilatos ou copolímeros dos mesmos (tal como a faixa de polímeros de reves-timento entérico registrados sob o nome Eudragit® da Degussa/Roehm),ftalato de acetato de polivinila, ftalato de acetato de celulose, succinato deacetato de hidroxipropilmetilcelulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose,succinato de acetato de hidroximetilcelulose e carboximetiletilcelulose podem sermencionados. Em uma modalidade particular, o revestimento entérico com-preende um copolímero de ácido metacrílico-acrilato de etila. Os monômerosconstituintes de tal polímero podem estar presentes na taxa de 1:1. Orevestimento entérico também, de preferência, conter um componenteglidante, tal como talco. Um plasticizante pode também ser vantajosamenteincluído. Um plasticizante adequado é citrato de trietila.

A composição entérica revestida é, de preferência, formulada demodo que 5% ou menos, mais preferivelmente substancialmente nada, docomposto da Fórmula I é liberado em pelo menos uma hora, mais prefe-rivelmente duas horas, ainda mais preferivelmente três horas, quando aliberação é medida em um aparelho de dissolução USP Il em 900 ml ou 500ml de fluido gástrico simulado ou HCI a 0,1 N a 37°C com uma taxa deagitação de 50 revoluções por minuto. Em modalidades preferidas, em pelomenos 80%, de preferência em pelo menos 90%, mais preferivelmente pelomenos 95% e, ainda mais preferivelmente, substancialmente todos os composto da Fórmula I são liberados, de preferência em 1 hora, mais prefe-rivelmente em 45 minutos, quando a medição é realizada em meio tam-ponado para um pH de 6,8 (por exemplo, fluido intestinal simulado com pHde 6,8).

Em algumas circunstâncias, pode ser preferível que um revesti-mento inerte seja proporcionado entre aquela porção da composição con-tendo o composto da Fórmula I e o revestimento entérico (iii). Os revesti-mentos entéricos são, tipicamente, compostos de polímeros ácidos e, con-seqüentemente, em virtude de sua natureza, têm o potencial para levar àalterações prejudiciais em determinados ingredientes ativos. Um revestímen-to inerte interposto (feito, por exemplo, a partir de um derivado de celulose,tal como hidroxipropil celulose ou hidroxipropilmetil celulose) tende a inibirtais interações. O revestimento inerte, naturalmente, deverá ser solúvel (oude outro modo dispersível) no meio intestinal de forma a permitir que o com-posto de Fórmula I seja liberado.

O termo 'revestimento entérico1, conforme usado aqui, se destinaa incluir revestimentos aplicados a uma forma de composição/dosagem (porexemplo, um comprimido) uma vez que a forma de dosagem está de outromodo essencialmente completa e aqueles aplicados em estágios intermediá-rios de fabricação da forma de dosagem. Assim, estão incluídas composi-ções nas quais o composto da Fórmula I é formulado com excipientes emgrânulos os quais são, então, revestidos entericamente antes de processa-mento adicional, tal como compressão nos comprimidos ou enchimento emcápsulas, por exemplo cápsulas de gelatina. Igualmente, uma abordagem talcomo aquela descrita no WO 00/22909, embora menos preferida, pode seradequada para o preparo de composições de acordo com o primeiro aspectoda invenção para determinados compostos de Fórmula I. Nessa abordagem,complexos entre ingredientes farmacologicamente ativos e ácidos carboxíli-cos relativamente hidrofóbicos (por exemplo, C9 a C3o ácidos carboxílicosalifáticos) são preparados através de co-precipitação a partir da solução a-través de ajuste do pH.

Em determinados compostos de Fórmula I, X é oxigênio ou -CH2-.Alternativamente ou além disso, A pode ser -NH-, -O-, -CH2- ou -CONR5-. Emalguns compostos preferidos da Fórmula I, R1 é isopropila, iodo ou H. Alémdisso, ou alternativamente, pode ser preferido que R2 e R3 sejam, cada umindependentemente, halogênio ou alquila. Em tal caso, R2 e R3 são, de pre-ferência, cada um independentemente, Cl, Br, I ou metila. Em determinadasmodalidades preferidas, R2 = R3. R2 = R3 = Br ou Cl são especialmente pre-feridos.

Nos compostos da Fórmula I, R4 é, de preferência, H ou metila,com H particularmente preferido.

Em determinados compostos da Fórmula I, Y é -(CH2)n- e η é 1ou 2. Alternativamente ou além disso, A pode ser -NR5CO-, com R5 sendo H.Em compostos particularmente preferidos da Fórmula I, Y é -(CH2)n- comn=1, A é NHCO ou CONH e R6 é COOH ou uma forma de sal, éster ou pró-fármaco de COOH correspondente.

O composto (i) pode, em modalidades selecionadas da presenteinvenção, ter uma Fórmula selecionada do seguinte:

<formula>formula see original document page 10</formula>

ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

Conforme será entendido por aqueles habilitados na técnica, areação de nitração descrita acima levaria à introdução de um grupo nitro naposição mais inferior do anel benzeno à esquerda, conforme representadonas estruturas acima, ou orto ao OH. Conseqüentemente, embora em muitoscasos o grupo substituído seja H, grupos alternativos capazes de ser substi-tuídos por meio de uma reação de nitração baseada em nitrito são tambémconsiderados, por exemplo, um grupo iodo orto ao grupo fenol hidroxila. Osinventores mostraram que essa é uma reação fácil, embora mais lenta doque a substituição de hidrogênio.

Quando um composto de Fórmula I está presente na forma deum éster, um alquil éster do mesmo é preferido. Quando um composto daFórmula I está presente na forma de um sal farmaceuticamente aceitável,tais sais podem incluir, quando o composto tem pelo menos um centro bási-co, sais de adição de ácido, por exemplo, com ácidos inorgânicos fortes, taiscomo ácidos minerais, por exemplo, ácido sulfúrico, ácido fosfórico ou umácido hidroálico, com ácidos orgânicos carboxílicos fortes, tais como ácidosalcano carboxílicos, 1 a 4 átomos de carbono dos quais são não-substituídosou substituídos, por exemplo, por halogênio, por exemplo ácido acético, taiscomo diácidos carboxílicos saturados ou insaturados, por exemplo, ácidosoxálico, malônico, succínico, maléico, fumárico, ftálico ou tereftálico, tais co-mo ácidos hidróxi carboxílicos, por exemplo ácidos ascórbico, glicólico, lácti-co, málico, tartárico ou cítrico, tais como aminoácidos, (por exemplo ácidoaspártico ou glutâmico ou Iisina ou arginina) ou ácido benzóico ou com áci-dos orgânicos sulfônicos, tais como ácidos (C1-C4) alquil ou aril-sulfônicos osquais são não-substituídos ou substituídos, por exemplo, por halogênio, porexemplo ácido metano-sulfônico ou ácido p-tolueno-sulfônico.

Sais de adição de ácido correspondentes podem também serformados tendo, se desejado, um centro básico adicionalmente presente.

Quando o composto de Fórmula I tem pelo menos um grupoácido (por exemplo, COOH), ele pode também formar sais com bases. Saisadequados com bases são, por exemplo,sais de metal, tais como sais demetal alcalino ou metal alcalino-terroso, por exemplo, sais de sódio, potássioou magnésio ou sais com amônia ou uma amina orgânica, tal comomorfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, uma mono, di ou trialquil aminainferior, por exemplo, etil, terc-butil, dietil, diisopropil, trietil, tributil ou dimetil-propilamina ou uma mono, di ou triidróxi alquil amina inferior, por exemplomono, di ou trietanolamina. Sais internos correspondentes podem, alémdisso, ser formados.

Sais dos compostos de Fórmula I preferidos os quais incluemum grupo básico incluem monocloridrato, hidrogeno-sulfato, metano-sulfonato, fosfato ou nitrato. Sais preferidos dos compostos de Fórmula I osquais incluem um grupo ácido incluem sais de sódio, potássio e magnésio eaminas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos (i) podem, naturalmente, ser solvatados se dese-jado, por exemplo, hidratos podem ser usados na presente invenção.

Em determinadas modalidades do primeiro aspecto da invenção,as composições também incluem um antioxidante. Tais modalidades sãobaseadas na descoberta inesperada dos inventores, como um resultado dasinvestigações mencionadas acima, de que o produto de reação nitro docomposto 1A é formado quando de administração oral via uma reaçãobaseada em nitrito a qual é mediada por radical livre. Também foi determi-nado pelos inventores que o composto GC-1 de não-biaril éster, tambémdescrito acima, se torna nitratado prontamente sob condições fisiologica-mente relevantes. A incorporação do antioxidante na composição doprimeiro aspecto da invenção inibe a formação dos radicais livres e/ouremove radicais livres os quais são formados, com a conseqüência de quequalquer reação de nitração a qual ocorre apesar do revestimento entérico éatenuada.

O antioxidante é, de preferência, solúvel em água. Tais antioxi-dantes incluem ácido ascórbico, ácido fumárico, ácido málico, ácidopropiônico ou um sal de qualquer um dos ácidos referidos, monotioglicerol, metabissulfito de potássio, bissulfito de sódio, sulfito de sódio e metabissul-fito de sódio. Um antioxidante preferido é ácido ascórbico ou sal de sódio, oqual descobriu-se ter efeitos inibitórios particularmente significativos nareação de nitração.

Alternativamente, o antioxidante pode ser insolúvel em água. Talantioxidante pode ser selecionado de α-tocoferol, palmitato de ascorbila,hidroxianisol butilada, hidroxitolueno butilado, oleato de etila e gaiato depropila.

Embora não essencial, pode ser preferível que o composto (i) eo antioxidante (ii) sejam substancialmente misturados homogeneamente.Isso ajuda a garantir que, quando de qualquer contato do composto (i) comnitrito (e/ou ácido nitroso e/ou quaisquer espécies de radical livre contendonitrogênio e oxigênio), é mais provável que o antioxidante esteja na proximi-dade a tal contato e, assim, seja capaz de atenuar melhor qualquer reaçãode nitração a qual possa ocorrer.

De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, éproporcionada uma composição farmacêutica adequada para administraçãooral, compreendendo:

(i) um composto da Fórmula I ou um sal ou éster farmaceutica-mente aceitável do mesmo, conforme descrito acima;

(ii) pelo menos um antioxidante e

(iii) pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.Em modalidades preferidas do segundo aspecto da invenção, acomposição é uma composição sólida. As características preferidas da Fór-mula I conforme descrito com referência ao primeiro aspecto da invençãotambém se aplicam com relação ao segundo aspecto (e àqueles outros as-pectos descritos abaixo, conforme apropriado).

A composição do segundo aspecto da invenção também inclui,de preferência, um revestimento entérico. O revestimento entérico pode serconforme descrito acima com relação ao primeiro aspecto da invenção.

A presente invenção, além disso, proporciona, em um terceiroaspecto, um método de estabilização de uma composição farmacêutica adequada para administração oral, a composição farmacêutica compreen-dendo:

(i) um composto de Fórmula I ou um sal ou éster farmaceutica-mente aceitável do mesmo conforme descrito acima; e

(ii) pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável;

o método compreendendo fornecimento da composição com umrevestimento entérico.

Em um outro aspecto, a invenção proporciona, em uma compo-sição farmacêutica adequada para administração oral contendo um com-posto da Fórmula I ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável domesmo conforme definido acima, o uso de um revestimento entérico ou umantioxidante ou um revestimento entérico e um antioxidante para redução ouprevenção de nitração do referido composto.

A presente invenção também proporciona uma composição deacordo com a invenção, para uso em terapia.

A presente invenção também proporciona o uso de uma com-posição de acordo com a invenção no preparo de um medicamento paraprevenção, inibição ou tratamento de uma doença associada à disfunção dometabolismo ou a qual é dependente da expressão de um gene regulado portriiodotironina (T3). A doença pode ser selecionada de obesidade, hiper-colesterolemia, dislipidemia, aterosclerose, arritmias cardíacas, depressão,osteoporose, hipotiroidismo, bócio, câncer da tiróide, bem como glaucoma einsuficiência cardíaca congestiva.Similarmente, a presente invenção também proporciona um mé-todo de prevenção, inibição ou tratamento de uma doença associada à dis-função do metabolismo ou a qual é dependente da expressão de um generegulado por triiodotironina (T3), o método envolvendo a administração deuma composição de acordo com a invenção a um indivíduo que precisa detal prevenção, inibição ou tratamento.

No uso e método descrito imediatamente acima, o medicamentoou composição pode ser administrado em um intervalo de dosagem de 30minutos a um mês. Mais preferivelmente, o intervalo de dosagem é de um asete dias, ainda mais preferivelmente um a três dias. Uma faixa de dose típi-ca para um ser humano adulto para compostos (i) seria cerca de 1 μg a cer-ca de 2000 μg por dia. Para muitos compostos (i), a dose diária seria menosque 300 μg. De preferência, a dose do composto (i) é de cerca de 1 μg acerca de 200 μg por dia, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 100 μgpor dia. Por exemplo, os compostos (i) podem ser administrados em umadose, duas doses, três doses ou quatro doses por dia. De preferência, aquantidade do composto (i) por unidade de dose de composição é de 1 a200 μg, mais preferivelmente 1 a 100 μg, mais preferivelmente 1,5, 10, 20,25 ou 50μg. Por exemplo, a quantidade do composto (i) por unidade de dosepode ser de 10 a 100, por exemplo de 20 a 80, tipicamente de 25 a 50, pg.

A composição de acordo com o primeiro ou segundo aspectosda invenção pode também compreender um outro ingrediente farmacologi-camente ativo selecionado de agentes hipolipidêmicos, agentes antidiabéti-cos, antidepressivos, inibidores de reabsorção óssea, supressores de apetitee/ou agentes antiobesidade.

Os outros agentes farmacologicamente ativos tendem a ter efei-tos aditivos ou sinergísticos com os compostos (i) de modo a enriquecer osefeitos metabólicos dos mesmos.

Nas composições contendo um antioxidante, conforme descritoacima, a quantidade de antioxidante pode variar sobre uma faixa muito am-pla. De preferência pelo menos 0,0001 mmol de antioxidante está presente,por exemplo, 0,0005 mmols, mais preferivelmente pelo menos 0,01 mmol. Aquantidade de antioxidante pode, por exemplo, ser de 0,0001 a 15 mmols,por exemplo, 0,0005 a 10 mmols, tipicamente 0,01 a 4 mmols por dose dacomposição.

Conforme será descrito em maiores detalhes abaixo, um serhumano engole em média cerca de 0,1 mmol de nitrito salivar por hora. Apresença das quantidades de antioxidante acima na composição proporcio-naria um efeito de estabilização útil para o composto (i), mesmo se a com-posição da invenção estiver residente no estômago durante um período rela-tivamente prolongado.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona ummedicamento combinado adequado para a administração oral, compreen-dendo:

(1) uma primeira composição farmacêutica compreendendo umcomposto da Fórmula I ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável domesmo, conforme descrito acima; e

(2) uma segunda composição farmacêutica compreendendo pelomenos um antioxidante, em que cada uma das primeira e segunda composi-ções farmacêuticas contém pelo menos um excipiente farmaceuticamenteaceitável e em que as primeira e segunda composições farmacêuticas po-dem ser administradas simultânea, seqüencial ou separadamente.

O medicamento combinado da presente invenção tira vantagemdo fato que, de forma que estabilização do composto (i) seja obtida, o antio-xidante deverá meramente estar presente quando o primeiro entra em conta-to com um ácido e uma fonte de nitrito. Dado que as duas composições domedicamento combinado são fornecidas em uma proximidade temporal talque há uma sobreposição entre seus períodos de residência no estômago, ocomposto (i) teria pelo menos um grau de estabilização contra a reação denitração. As composições ou pelo menos a primeira composição, são, depreferência composições sólidas.

A invenção será agora descrita em maiores detalhes à guisa deexemplo somente e com referência aos desenhos anexos, dos quais:

a figura 1 a qual mostra uma série de traços padrão por HPLCdo composto 1A na presença de várias concentrações do produto de reação5'-nitro; e

a figura 2 ilustra um processo para a fabricação dos comprimi-dos entéricos revestidos contendo o composto 1A.

Conforme mencionado acima, durante o desenvolvimento docomposto 1A, foi determinado que a formação do produto de reação 5'-nitroocorre através de uma via abiótica (isto é, não-enzimática). As propriedadestoxicológicas do produto de reação nitro foram determinadas como sendoalteradas em uma extensão relevante quando comparado com o compostoprecursor. Portanto, foi importante determinar como a reação de nitraçãoestava ocorrendo e projetar abordagens para controlar ou prevenir a mesmain vivo.

Exemplo 1 - Genotoxicidade de um produto de reação do Composto 1A

1.1 Introdução

Durante o desenvolvimento de uma formulação de cápsula de 25 μgdo composto 1A, uma impureza previamente não-detectada foi observada emdiversos lotes; a impureza oscilava de 0,8 a 1,2 % do composto precursor.Essa impureza foi identificada como um análogo de nitro, aqui depoisreferido como produto de reação 1B.

Um potencial teórico para a formação in vivo dessa impureza/produto de reação foi, portanto, identificado. Conseqüentemente, esseproduto de reação putativo foi testado com relação à atividade genotóxicaem uma bateria de estudos-padrão na International Conference on Harmoni-sation (ICH).

Esse exemplo resume os estudos de genotoxicidade conduzidoscom o produto de reação 1B e se refere às descobertas de exposiçõesclínicas para essa impureza/produto de reação.

1.2 Genotoxicidade

1.2.1 Produto de reação 1B

1.2.1.1 Ensaio Ames Exploratório

O Produto de reação 1B foi testado em culturas duplicadas napresença e ausência de ativação metabólica S-9. Os artigos de controlepositivo foram testados em culturas duplicadas e preparados em DMSO1com a exceção de azido de sódio, a qual foi dissolvida em água. Os contro-les negativos (veículos) foram testados em réplicas de cinco culturas.

O Produto de reação 1B exibiu citotoxicidade para cada uma dascepas de S. typhimurium e E. coli testadas. Citotoxicidade oscilando demínima a acentuada era evidente baseado em reduções no número médiorelevante e/ou reduções na densidade média de base bacteriana. Quandocomparado aos controles negativos, os valores relevantes de histidina+foram avaliados em culturas tratadas com o produto de reação 1B da cepaTA100 na presença e ausência de ativação S-9, respectivamente. Conformeesperado, aumentos significativos nos números relevantes de histidina+ etriptofano* foram observados nas culturas tratadas com os compostos decontrole positivo.

Em resumo, o produto de reação 1B mostrou uma respostapositiva nesse estudo.

1.2.1.2 Estudo Ames de Mutação Invertida em Salmonella e Escherichia coli

O produto de reação 1B foi avaliado em um estudo de mutage-nicidade microbiana para determinar o potencial de induzir à desvio de redeou mutações de substituição em pares de base em cepas de Salmonellatyphimurium (histidina") e Escherichia coli {triptofano").

O Produto de reação 1B foi testado com cada cepa em umensaio de faixa de achado e subseqüentemente em um ensaio de mutaçãocompleta. O Produto de reação 1B foi avaliado, com e sem atividademetabólica S-9, até as concentrações máximas de 3000 e 1000 pg/lâmina,nos ensaios de faixa de achado e mutação completa, respectivamente.Citotoxicidade foi observada em cada uma das cepas bacterianas testadas.Na presença e ausência de ativação S-9, no ensaio de faixa de achado emutação completa, os números médios de revertentes histidina+ estavamsignificativamente elevados (aproximadamente 2- a 3-vezes) nas culturastratadas com produto de reação 1B da cepa de teste TA100.

O aumento induzido por produto de reação 1B de revertentes nacepa TA100 acima do valor de controle indica uma resposta positiva.1.2.1.3 Sumário dos testes Ames realizados

Em suma, a impureza nitro aromática/produto de reação docomposto 1 A, produto de reação 1B, foi testada em um ensaio exploratóriode Ames e descobriu-se que induz a um aumento concentração-dependente em revertentes acima do valor de controle. O aumento foi de 2,5-3-vezesacima dos controles, isto é, qualificado como uma resposta positiva. Esseresultado foi confirmado em um ensaio de Ames completo.

1.2.1.4 Estudo Citogenético em linfócitos primários em ser humano

Um estudo citogenético in vitro foi realizado para investigar o potencial do produto de reação 1B de induzir à aberrações cromossômicasem linfócitos cultivados em seres humanos. Baseado em resultados decitotoxidade na faixa de achados, concentrações de 5 a 30 pg/ml foramselecionadas para avaliação na exposição de 24 horas sem ativação daenzima metabólica e concentrações de 2,5 a 20 pg/ml para a exposição de 5 horas com ativação metabólica em fígado de rato induzida por Aroclor 1254(fração S9).

Na exposição de 5 horas ao produto de reação 1B na presençade ativação metabólica S-9, um aumento estatisticamente significativo nafreqüência de aberrações cromossômicas ocorreu. Na maior concentração, 20 pg/ml, a freqüência de aberrações cromossômicas foi de 10,5 % compa-rado com 2,5 % para o controle do veículo e a redução no índice mitótico foide aproximadamente 51 %.

Na exposição de 24 horas ao produto de reação 1B na ausênciade ativação metabólica S-9, um aumento estatisticamente significativo nafreqüência de aberrações cromossômicas ocorreu. Na maior concentraçãoavaliada, 40 pg/ml, a freqüência de aberrações cromossômicas foi de 7,5 %comparado com 2,5 % para o controle do veículo, com uma redução noíndice mitótico de aproximadamente 48 %.

Conforme esperado, os controles positivos em cada experimentoinduziram a aumentos estatisticamente significativos nas freqüências demetáfases danificadas. Assim, a validade desse ensaio foi demonstrada.

Em resumo, o produto de reação 1B era clastogênico para linfó-citos em divisão em seres humanos quando testado em concentraçõesmáximas recomendadas pelas diretrizes internacionais para estudos citoge-néticos in vitro.

1.2.1.5 Estudo Oral com micronúcleos em camundongos

O produto de reação 1B foi avaliado no ensaio com micronúcleona medula óssea do camundongo para determinar o potencial genotóxico invivo. Aos grupos de camundongos foram fornecidas trés doses orais diáriasconsecutivas de 1000, 1500 ou 2000 mg/kg de produto de reação 1B (isto é,até o nível máximo de dose requerido pelas diretrizes regulatórias internaci-onais em ICH e OECD). Amostras de medula óssea do fêmur foram cole-tadas de todos os animais aproximadamente 24 horas após a última dosepara avaliação de eritrócitos policromáticos micronucleados (MN-PCE).

Nenhum animal morreu durante o estudo e nenhum sinal clínicorelacionado ao fármaco foi observado. Nenhuma toxicidade na medulaóssea foi observada conforme medido através de reduções significativas emeritrócitos policromáticos (PCE). As freqüências de MN-PCE estavamestatisticamente aumentadas a 1000 e 1500 mg/kg.

Em conclusão, respostas positivas não dose-dependentes foramencontradas em camundongos.

1.3 Exposição Clínica ao Produto de reação 1B

Após administração de doses orais únicas do composto 1A avoluntários humanos, o produto de reação 1B pôde ser detectado no plasma.Similarmente, em um experimento no qual indivíduos receberam dosesdiárias do composto 1A durante quatro semanas, o produto de reação 1Bpôde ser detectado em diversos indivíduos.

Em resumo, após dosagem do composto 1A a seres humanos, oproduto de reação nitro 1B potencialmente mutagênico pôde ser detectadono plasma. Esse é o caso mesmo se a dosagem é realizada durante umperíodo relativamente curto (por exemplo, 14 dias, conforme acima).Genotoxinas potenciais são, tipicamente, não-dose-dependente em seusefeitos mutagênicos e, conseqüentemente, a presença mesmo de baixosníveis do produto de reação 1B são de relevância clínica. Além disso, oscompostos da Fórmula I deveriam ser, tipicamente, fornecidos durante umlongo período de tempo e, conseqüentemente, a prevenção dos produtos dereação nitro que estão sendo formados é de importância essencial se osefeitos genotóxicos potenciais resultantes de acúmulo dos produtos dereação têm de ser evitados.1.4 Sumário e Conclusão

Descobriu-se que a impureza/produto de reação do composto1A, produto de reação 1B, induz à aberrações cromossômicas em linfócitosperiféricos de seres humanos in vitro e micronúcleos não dose-dependentesem um estudo de micronúcleo in vivo em camundongos.

Além disso, o produto de reação 1B foi detectado no plasma deseres humanos após dosagem a curto prazo do composto 1A. Conseqüen-temente, é claro que a prevenção de formação do produto de reação nitroseria de benefício significativo, em virtude do fato de que genotoxinaspotenciais podem exercer efeitos genotóxicos em concentrações muitobaixas e em virtude do fato de os compostos da Fórmula I, tal como ocomposto 1A, serem geralmente fornecidos cronicamente.

Exemplo 2 - Nitrato e Nitrito - Fontes e Mecanismos de nitração2.1 Introdução

Uma possível fonte de nitração é a via de nitrito não-clássica.

Essa via foi primeiro reportada por Uemura e outroes (1978, J. Chem. Soe.Perkin Trans. I, 9, 1076). A via de nitrito pode se processada em um pH mo-deradamente baixo (cerca de 2) e é tolerante à água, em contraste à via denitrato. A via de nitrito leva à produção de espécies de radical livre capazesde reação com compostos contendo benzeno hidroxilado, (Beake e outroes(1992) J. Chem. Soe. Perkin Trans. 2,10, 1653).

Os presentes inventores consideraram que essa via provavel-mente era a principal via para nitração de compostos da Fórmula I oralmenteadministrados no estômago e intestino.

A ingestão média diária de nitrato e nitrito a partir de outras fon-tes que não aditivos alimentícios foi estimada.(T. Hambridge, WHO FoodAdditives Series: 50, Nitrate and Nitrite).Na medida em que fontes endógenas de nitrito são considera-das, sabe-se que o nitrato é produzido a partir do nitrato na saliva através daação de reductase oral de nitrato (Benjamin (2000) Ann. Zootech. 49, 207).Isso resulta em uma concentração de cerca de 200 μΜ de nitrito na saliva. Oser humano engole em média cerca de 500 ml de saliva por hora. Issoresulta na ingestão de cerca de 2,4 mmols (110 mg) de nitrito por dia. Issosoma cerca de 1,6 mg/kg/dia de nitrito (para um adulto médio pesando 70 kg).

2.2. Estudo de Nitracão In vivo

Em experimentos conduzidos in vivo em ratos, descobriu-se que,quando de administração do composto 1A junto com uma solução de nitratoe nitrito (54 mg e 4 mg, respectivamente, por rato), cerca de 6% da doseadministrada do composto 1A foram nitratados.

2.3. Antioxidantes

Conforme apresentado acima, foi teorizado que o mecanismo denitração do composto 1A (e, conseqüentemente, outros compostos contendobenzeno hidroxilado, tais como aqueles da Fórmula I) era via o nitrito e, con-seqüentemente, mediado por radical livre. Conseqüentemente, foi conside-rado que a reação de nitração poderia ser inibida por seqüestrantes/antio-xidantes de radical livre.

Em geral, qualquer antioxidante pode ser usado de acordo coma presente invenção. Antioxidantes 'verdadeiros' são aqueles os quais blo-queiam a reação em cadeia mediada por radical através de reação com osradicais livres (através de doação de um único elétron à espécie de radical).Um exemplo de tal antioxidante verdadeiro é hidroxitolueno butilado (BHT).Outros exemplos de tais espécies incluem os antioxidantes fenólicos, taiscomo ácido ferúlico, rutina, Catequina, epicatequina, epigalocatequina, gala-to de apicatequina e gaiato de epigalocatequina. Muitas de tais espécies o-correm naturalmente, por exemplo, antioxidantes de flavonóides ou do tipotrans-estilbeno. Agentes de redução são espécies tendo um potencial redoxmenor do que o composto no qual eles são empregados para proteger e/oueles podem agir como "decoy" de nitração. Um exemplo de agente que atuadesse modo é ácido ascórbico. Além disso, determinados agentes são 'si-nergistas de antioxidante'. Esses agentes intensificam os efeitos de antioxi-dantes e podem também ser incluídos em composições da presente inven-ção; um exemplo é edetato de sódio.

Antioxidantes podem também ser agrupados de acordo com suascaracterísticas de solubilidade. Antioxidantes solúveis em água incluem ácidoascórbico (ou sal de sódio), ácido fumárico, ácido málico, monotioglicerol,metabissulfito de potássio (KO3S-SO2K), ácido propiônico (CH3CH2C02H),bissulfito de sódio (NaHS03) e sulfito de sódio (Na2S03). Antioxidantesinsolúveis em água incluem alfa-tocoferol, palmitato de ascorbila, hidroxi-anisol butilada (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), oleato de etila e gaiatode propila.

2.4. A reação de nitracão e inibicão

Sabe-se que a L-tirosina pode ser convertida a um produto dereação nitro no qual o grupo NO2 é orto substituído ao grupo hidroxila do a-nel. O procedimento experimental para determinação da extensão de nitra-ção de L-tirosina foi usado para determinação da nitração do composto 1A eda inibição do mesmo por antioxidantes selecionados. O procedimento expe-rimental para L-tirosina é conhecido (1998, Chem. Res. Toxicol., 11, 1578).

Em resumo, soluções do composto 1A (50 μΜ) foram expostas às soluçõesde NaNC>3 (2500 μΜ) e/ou NaNÜ2 (várias concentrações) em vários valoresde pH, a 37°C e na presença ou ausência de tampão de fosfato. A reação denitração leva à formação do produto de reação 5'-nitro do composto 1A. Es-se produto de reação pode ser detectado e quantificado usando HPLC, oproduto de reação tendo um tempo de retenção reduzido (sob as condiçõesusadas) comparado com o composto precursor. Inibidores antioxidantes fo-ram, então, adicionados às soluções de teste contendo NaNCV e 1A e ostestes de nitração repetidos.

A figura 1 mostra uma série de cromatogramas-padrão porHPLC de 1A (50 μΜ) na presença de 50 nM a 50 μΜ do produto de reação1 Β. A análise foi através de HPLC-MS/MS, com as condições a seguir:

Condições HPLC

Instrumento: Waters Alliance 2795 LCProteção de Coluna: Proteção de coluna Waters Sentry1 Symmetry Cie 3,5pm, 2,1 χ 10 mm.

Coluna: Waters Symmetry C18 3,5 pm, 2,1 χ 50 mm.Temperatura da Coluna: 45 °CVolume de Injeção: 5 μl

Temperatura do amostrador automático: 10 °CTaxa de fluxo: 0,2 ml/minFase móvel:

A = acetato de amônio a 10 mM (pH = 4,5 com ácido acético),B = AcetonitriIa

Gradiente:

<table>table see original document page 23</column></row><table>

Condições de Espectrometria de Massa:Instrumento: Micromass Quattro micro APIModo: ESI -

Experimento: MRM (monitoramento de reação múltipla)Transições MRM para o composto 1A: m/z 486,0 > 399,9 (tR= 3,47 min)Transições MRM para o produto de reação 1B: m/z 531,0 > 444,8 (tR = 3,91min)

Limite de Quantificação (LOQ):LOQ para o composto 1A em MRM é de 10 nM em acetonitrila a 50%: águaa 50%.

LOQ para o produto de reação 1B em MRM é de 1 nM em acetonitrila a50%: água a 50%.

Pode ser visto claramente que o produto de reação tem um tem-po de retenção reduzido sob as condições usadas, com o composto precur-sor 1A eluindo em cerca de 3,5 minutos e o produto de reação eluindo emcerca de 4 minutos.

Quando de incubação de 1A com várias concentrações deNaNO2 e/ou NaNO3, os resultados da Tabela 1 foram obtidos.

Tabela 1: Nitração do composto 1A na presença de nitrito e/ou nitrato e sobvárias condições de pH

<table>table see original document page 24</column></row><table>

Diversas conclusões podem ser tiradas com base nesses dados.

Primeiro, é claramente demonstrado que o nitrito sozinho, sob condiçõesapropriadas de acidez, é suficiente para causar nitração significativa docomposto 1A. Conforme mostrado pelo controle negativo (fileiras 1 a 4), ne-nhum resultado de nitração é observado quando o nitrito e nitrato estão au-sentes. Segundo, a presença do tampão de fosfato pode realmente levar auma inibição significativa da reação baseada em nitrito, a reação ocorrendoem uma extensão muito maior em solução de HCI com pH de 2 do que emum tampão com pH de 2. Terceiro, nitrato em um pH de 2 (HCI ou tampão)não é capaz de levar à nitração mensurável do composto 1A. Quarto, o nitra-to parece inibir a reação baseada em nitrito em uma extensão significativa(mais do que uma ordem de magnitude; vide valores em negrito).

Esses dados, assim, confirmam que a reação de nitração obser-vada com compostos contendo benzeno hidroxilado, tais como aqueles daFórmula I (por exemplo, composto 1A), quando administrados oralmente, émediada por nitrito ao invés de nitrato. Os dados também demonstram cla-ramente a importância de um ambiente ácido para a reação de nitração. Ascomposições entéricas revestidas da presente invenção reduzem ou previ-nem o acesso do meios ácidos aos ingredientes farmacologicamente ativoscontidos nos mesmos. Conseqüentemente, tal abordagem de formulação écapaz de reduzir significantemente da reação de nitração a qual, de outromodo, ocorreria.

Quando de adição de agentes de inibição antioxidantes selecio-nados do composto 1A na presença de nitrito, os resultados da Tabela 2foram obtidos. A quantidade de antioxidante usada foi geralmente cerca de10-20 vezes a quantidade do composto 1A.

Tabela 2: Inibição de nitração do composto 1A na presença de nitrito pormeio de agentes inibidores antioxidantes

<table>table see original document page 25</column></row><table><formula>formula see original document page 26</formula>

Os dados da Tabela 2 permitem que uma série de conclusõessignificativas sejam extraídas. É claro que, a menos que o nitrito seja acidi-ficado, nenhuma ou nitração não significativa do composto 1A ocorre,mesmo quando a concentração de nitrito é aumentada até oito vezes. Demodo mais importante, é observado que, sob condições de pH e concentraçãode nitrito as quais descobriu-se levarem a uma conversão quase que total docomposto de teste ao produto de reação nitro, a presença de BHT (insolúvelem água) ou ascorbato (solúvel em água) leva a uma inibição essencial-mente completa da nitração mediada por nitrito (vide os valores em negrito).

Em geral, portanto, os dados reportados aqui ilustram clara-mente que o nitrito (NO2) e não o nitrato (NO3) é a provável fonte da nitraçãoin vivo observada em compostos contendo benzeno hidroxilado, tais comoaqueles da Fórmula I (por exemplo, composto 1A). Essa nitração mediadapor nitrito se processa via um mecanismo de radical livre e, algumas vezes,ocorre em uma extensão relevante em meio ácido. A incorporação de umantioxidante em uma composição contendo o composto contendo benzenohidroxilado inibe essa reação de nitração em um grau significativo. Alémdisso ou alternativamente, a proteção da composição por meio de um reves-timento entérico impedirá o nitrito acidificado de entrar em contato com ocomposto contendo benzeno hidroxilado e, assim, proporciona umaestratégia potente para a estabilização do composto contra a nitração.

Exemplo 3 - Uma formulação entérica revestida do Composto 1A

3.1 Medições do Tamanho de Partícula do Composto 1A antes e após trituração

Como o composto 1A não-triturado continha uma grande propor-ção de partículas maiores do que aproximadamente 100 pm, o que afetará oteor de uniformidade de um comprimido, o composto 1A foi triturado. UmRetsch MM 2000 foi usado para triturar 2 χ 2 g do composto 1A. Uma partí-cula esférica de 100 μιτι de diâmetro com uma densidade de 1,5 g/cm3 temuma massa de aproximadamente 1 pg.

A distribuição de tamanho da partícula foi medida com um Mal-vern MasterSizer 2000, isto é, com uma técnica de difração a laser. A amos-tra em pó é dispersa em Tween 20 e água.

Composto 1A Não triturado: Medições revelaram diâmetros mé-dios, d(0,5), de 101 e 103 pm. Os 90 % quartis, d(0,9), eram de 158 e 159 pm.

Composto 1A triturado: Após trituração, d(0,5) era de 20 pm ed(0,9) era de 85 pm. Essa era uma distribuição de tamanho de partícula a-ceitável.

3.2 Fórmula do Comprimido

O produto medicinal feito era um comprimido revestido por filmeentérico branco, circular (diâmetro de 7 mm), convexo, com duas resistên-cias, 50 e 300 μg do composto 1A (aqui após ΊΑ') por comprimido. A com-posição completa do produto medicinal é proporcionada na Tabela 3.1, abaixo.Tabela 3.1: Composição de comprimidos entéricos revestidos 1A

<table>table see original document page 28</column></row><table>

* Evapora durante o processo de fabricação** Quantidade de copolfmero seco entre parênteses

O peso-alvo do núcleo dos comprimidos era de 140 mg e o pe-so-alvo do filme era de 12 mg.Fórmula do lote

A fórmula do lote (vide a Tabela 3.2) para 50 pg/comprimido e300 pg/comprimido se refere a 6000 pcs (840 g) de núcleo dos comprimidosdurante a produção do comprimido e 5700 pcs (798 g) de núcleo doscomprimidos durante o revestimento.

Tabela 3.2: Fórmula do Banho dos Comprimidos Entéricos revestidos 1A

<table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table>

* Inclui um excesso de 6% em virtude de perdas durante a produção do nú-cleo dos comprimidos

** Evapora durante o processo de fabricação

*** Quantidade de copolímero seco entre parênteses

A quantidade de suspensão de revestimento (as quatro últimasfileiras da tabela) inclui uma média de 11 % em virtude de perdas durante oprocesso de revestimento.

3.3 Fabricação

Um fluxograma do processo de fabricação de comprimidos enté-ricos revestidos 1A é fornecido na figura 2. Núcleos dos comprimidos com 50Mg e 300 pg de1A foram feitos. Os núcleos dos comprimidos são uma mistu-ra de um "granulado de base" (contendo 1A), manitol, hipromelose e estea-rato de magnésio. Um "granulado de base" é feito através de suspensão de1A triturado em uma solução aquosa de hipromelose e pulverização da dis-persão em MCC. Um excesso de seis por cento de 1A é usado em virtudede perdas. Após evaporação da água, o produto seco é peneirado. A misturaem pó é prensada em comprimidos circulares, convexos com resistência aoesmagamento e tempo de desintegração adequados. O peso do comprimidoé de 140 mg e o diâmetro de 7 mm.

Os núcleos dos comprimidos são revestidos para obter resistên-cia gástrica. O polímero é uma dispersão aquosa de copolímero de ácidometacrílico-acrilato de etila (Eudragit L30 D-55). Talco é adicionado comoum glidante à dispersão polimérica e citrato de trietila funciona como plastici-zante.A função de cada um dos excipientes é proporcionada na tabela,abaixo.

Tabela 3.3: Função de excipientes

* Evapora durante o processo de fabricação

3.4 Análise de composição entérica revestida

Uma abordagem adequada para avaliar o conteúdo e impurezas,etc. dos comprimidos entéricos revestidos é como segue. O Composto 1A éextraído dos comprimidos através de agitação em solvente para amostra.

Após centrifugação, para remover partículas insolúveis, a quantidade de 1A,Substâncias Individuais Relacionadas e Substâncias Relacionadas Totais nosobrenadante podem ser determinadas usando as condições de instrumentodescritas na Tabela 3.4. A quantidade de 1A e substâncias relacionadas sãodeterminadas por meio de cromatografia de fase reversa e detecção de UV.

Tabela 3.4: Parâmetros do método de HPLC e soluções para comprimidos 1A

<table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table>

Um teste de dissolução pode ser realizado como segue. O testede dissolução é dividido em duas etapas: a primeira etapa testa a resistênciado revestimento entérico e a segunda etapa testa a taxa de dissolução. Aresistência do revestimento é testada em ácido clorídrico a 0,1 M durante 3h. A dissolução é testada em tampão de fosfato de sódio a 50 mM em um pHde 6,8 durante 1 h. Amostras extraídas são centrifugadas para remover aspartículas insolúveis antes de análise.

A quantidade de 1A liberado da composição pode ser determi-nada por meio de cromatografia de fase reversa e detecção de UV deacordo com a Tabela 3.5.Tabela 3.5: Parâmetros do Método HPLC e soluções para teste de dissolu-ção de comprimidos 1A

<table>table see original document page 32</column></row><table>

Descobriu-se que a liberação do composto 1A não era detectá-vel após o teste de dissolução em HCI a 0,1 M. Quando o teste de dissoluçãofoi repetido em meio com pH de 6,8, contudo, a dissolução dos comprimidose liberação do composto 1A foi virtualmente completa para cada comprimidotestado.

Conseqüentemente, quando usadas in vivo, tais composiçõesentéricas revestidas impedirão que os ingredientes ativos sejam expostos,após administração oral, a um meio contendo nitrito ácido no estômago e,assim, prevenirá ou reduzirá significativamente a produção de produtos dereação potencialmente genotóxicos de tais ingredientes ativos.

Exemplo 4: Nitração de compostos adicionais da Fórmula I

Testes foram realizados em compostos adicionas da Fórmula I aseguir para determinar sua pré-disposição à nitração:

Descobriu-se, em todos os casos, que exposição à soluções devárias concentrações de nitrato e nitrito, conforme no Exemplo 2.4 acimaresultou em nitração.

Exemplo 5: Teste Clínico

Dosagens clinicamente relevantes do composto 1A foram forne-cidas a seres humanos na forma de uma solução em uma dose única. Oproduto de reação nitratado foi detectado em uma série significativa dos indi-víduos. Quando o composto foi administrado na forma de comprimidos enté-ricos revestidos, uma redução dramática no produto nitratado foi observada.

Claims (34)

1. Composição farmacêutica adequada para administração oral,compreendendo:(i) um composto da Fórmula I:<formula>formula see original document page 34</formula>em que:Z é H ou um grupo alternativo capaz de ser substituído por NO2via uma reação de nitração baseada em nitrito;R1 é selecionado de hidrogênio, halogênio, trifluorometila ou al-quila de 1 a 6 carbonos ou cicloalquila de 3 a 7 carbonos;X é oxigênio (-0-), enxofre (-S-), carbonila (-CO-), metileno (-CH2-)ou -NH-;R2 e R3 são os mesmos ou diferentes e são hidrogênio, halogê-nio, alquila de 1 a 4 carbonos ou cicloalquila de 3 a 6 carbonos, pelo menosum de R2 e R3 sendo outro que não hidrogênio;R4 é hidrogênio ou alquila inferior;A é oxigênio (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5- ou -NR5CO-;R5 é H ou alquila inferior;R6 é ácido carboxílico (-CO2H) ou um éster do mesmo ou umpró-fármaco do mesmo;Y é -(CH2)n, onde η é O, 1, 2, 3, 4 ou 5 e em que um ou mais dosgrupos CH2 podem opcionalmente ser substituídos por halogênio ou Y é-C=C-, o qual pode ser eis ou trans; eR7 é hidrogênio ou um grupo alcanoíla ou aroíla ou outro grupocapaz de bioconversão para gerar a estrutura de fenol livre (em que R7 = H);ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo;(ii) pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável; e(iii) um revestimento entérico.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que X éoxigênio ou -CH2-.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou a reivindica-ção 2, em que A é -NH-, -O-, -CH2- ou -CONR5-.

4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, em que Ri é H1 iodo ou isopropila.

5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, em que R2 e R3 são, cada um independentemente, halogênioou alquila.

6. Composição de acordo com a reivindicação 5, em que R2 e R3são, cada um independentemente, Cl, Br, I ou metila.

7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, em que R4 é H ou metila.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, em que Y é -(CH2)n- e η é 1 ou 2.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes, em que A é -NR5CO- e R5 é H.

10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, em que Z é H.

11. Composição de acordo com a reivindicação 1, na qual ocomposto (i) é selecionado de:<formula>formula see original document page 35</formula>ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

12. Composição de acordo com a reivindicação 11, na qual ocomposto (i) é:<formula>formula see original document page 36</formula>ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

13. Composição de acordo com a reivindicação 11, na qual ocomposto (i) é:<formula>formula see original document page 36</formula>ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, em que um revestimento inerte é proporcionado entreaquela porção da composição contendo o composto (i) e o revestimento en-térico (iii).

15. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, em que o revestimento entérico compreende um polímerode acrilato, um polímero de metacrilato ou um copolímero de acrilato-metacrilato.

16. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, estando na forma de um comprimido entérico revestido econtendo os ingredientes a seguir: Manitol, celulose microcristalina, Hipro-melose, estearato de magnésio, água, Copolímero de ácido metacrílico-acrilato de etila (1:1), Talco e Citrato de trietila.

17. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, em que 5% ou menos do composto da Fórmula I são libe-rados em pelo menos um hora, quando a liberação é medida em um apare-lho USP Il em 500 ml de fluido gástrico simulado ou HCI a 0,1 N a 37°C comuma taxa de agitação de 50 revoluções por minuto.

18. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções precedentes, também contendo um antioxidante.

19. Composição de acordo com a reivindicação 18, em que oantioxidante é selecionado de ácido ascórbico, ácido fumárico, ácido málico,ácido propiônico ou um sal de qualquer um dos referidos ácidos, monotio-glicerol, metabissulfito de potássio, bissulfito de sódio, sulfito de sódio, meta-bissulfito de sódio, α-tocoferol, palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilada,hidroxitolueno butilato, oleato de etila e gaiato de propila.

20. Composição de acordo com a reivindicação 18 ou a reivindi-cação 19, em que o composto (i) e o antioxidante são substancialmente mis-turados homogeneamente.

21. Composição farmacêutica adequada para administraçãooral, compreendendo:(i) um composto da Fórmula I:<formula>formula see original document page 37</formula>R2 e R3 são os mesmos ou diferentes e são hidrogênio, halogê-nio, alquila de 1 a 4 carbonos ou cicloalquila de 3 a 6 carbonos, pelo menosum de R2 e R3 sendo outro que hidrogênio;R4 é hidrogênio ou alquila inferior;A é oxigênio (-0-), metileno (-CH2-), -CONR5-, -NR5- ou -NR5CO-;R5 é H ou alquila inferior;R6 é ácido carboxílico ou um éster do mesmo ou um pró-fármacodo mesmo;Y é -(CH2)n, onde η é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 e em que um ou mais dosgrupos CH2 podem opcionalmente ser substituídos por halogênio ou Y é-C=C-, o qual pode ser eis ou trans; eR7 é hidrogênio ou um grupo alcanoíla ou aroíla ou outro grupocapaz de bioconversão para gerar a estrutura de fenol livre (em que R7 = H);ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo;(ii) pelo menos um antioxidante; e(iii) pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

22. Composição de acordo com a reivindicação 21, na qual ocomposto (i) é conforme especificado em qualquer uma das reivindicações 2a 13.

23. Composição de acordo com a reivindicação 21 ou areivindicação 22, a qual é uma composição sólida.

24. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 21 a 23, em que o antioxidante é substancialmente misturadohomogeneamente com o composto (i).

25. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 21 a 24, em que o antioxidante é selecionado de ácido ascórbico, ácidofumárico, ácido málico, ácido propiônico ou um sal de qualquer um dosreferidos ácidos, monotioglicerol, metabissulfito de potássio, bissulfito desódio, sulfito de sódio, metabissulfito de sódio, α-tocoferol, palmitato deascorbila, hidroxianisol butilada, hidroxitolueno butilado, oleato de etila egaiato de propila.

26. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 18 a 25, em que o antioxidante está presente em uma quantidade de 0,0001 a 15 mmols por dose.

27. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 26, também compreendendo um ingrediente farmacologicamenteativo selecionado de agentes hipolipidêmicos, agentes antidiabéticos,antidepressivos, inibidores de reabsorção óssea, supressores de apetitee/ou agentes antiobesidade.

28. Método de estabilização de uma composição farmacêuticaadequada para administração oral, a composição farmacêutica compreen-dendo:(i) um composto da Fórmula I como definido em qualqueruma das reivindicações 1 a 13 ou um sal ou éster farmaceuticamenteaceitável do mesmo; e(ii) pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável;o método compreendendo a provisão de uma composição comum revestimento entérico.

29. Composição farmacêutica adequada para administração oralcontendo um composto da Fórmula I como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 13 ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável domesmo, usando um revestimento entérico para redução ou prevenção denitração do referido composto.

30. Composição farmacêutica adequada para administração oralcontendo um composto da Fórmula I como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 13 ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável domesmo, usando um antioxidante para redução ou prevenção de nitração doreferido composto.

31. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 27, para uso em terapia.

32. Uso de uma composição como definido em qualquer umadas reivindicações 1 a 27 no preparo de um medicamento para prevenção,inibição ou tratamento de uma doença associada à disfunção do metabolis-mo ou a qual é dependente da expressão de um gene regulado por triiodoti-ronina (T3).

33. Método de prevenção, inibição ou tratamento de uma doençaassociada à disfunção do metabolismo ou a qual é dependente da expres-são de um gene regulado por triiodotironina (T3), o método envolvendo aadministração de uma composição como definido em qualquer uma das rei-vindicações 1 a 26 a um indivíduo que precisa de tal prevenção, inibição outratamento.

34. Medicamento combinado adequado para administração oral,compreendendo:(1) uma primeira composição farmacêutica compreendendoum composto da Fórmula I como definido em qualquer uma das reivindica-ções 1 a 13 ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo; e(2) uma segunda composição farmacêutica compreendendopelo menos um antioxidante, em que cada uma das primeira e segundacomposições farmacêuticas contém pelo menos um excipiente farmaceuti-camente aceitável e em que as primeira e segunda composições farmacêuti-cas podem ser administradas simultânea, seqüencial ou separadamente.