BRPI0709956A2 - manejo da pecuária para eficiência reprodutiva - Google Patents

Abstract

MANEJO DA PECUáRIA PARA EFICIéNCIA REPRODUTIVA A presente invenção diz respeito a métodos para controlar os ciclos reprodutivos eo desmame na pecuária, particularmente ao uso de peptídeos derivados da caseína para a indução do estro e redução de intervalos do anestro, possibilitando o desmame precoce sem afetar negativamente o bem-estar dos animais. A presente invenção diz respeito ainda à sincronização do estro em um gado e a programas de manejo da pecuária.

Description

A presente invenção diz respeito a métodos para controlar os ciclos reprodutivos edesmame na pecuária, particularmente ao uso de peptídeos derivados da caseína paraindução e sincronização do estro levando a um aumento na taxa de gestação e para aredução de intervalos do anestro, possibilitando o desmame precoce sem afetarnegativamente o bem-estar dos animais.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A produtividade de um gado, particularmente pecuária produtora de carne, dependeamplamente da eficiência reprodutiva do rebanho, e é medida em termos da taxa degestação, razão da entrada produtividade-energia, dinâmicas de escore da condiçãocorpórea antes e depois do parto, e o valor do peso das progênies. Os requisitosfundamentais para qualquer regime de ciclo do estro eficaz são um estro prognosticável eelevado e respostas na ovulação. O parâmetro mais importante para avaliar individualmentea eficiência reprodutiva é o intervalo entre partos consecutivos. Em termos econômicos, porexemplo em vacas, o período entre parto a parto não deve exceder ao período ideal de umano, isto é, um parto por vaca ao ano. O fator determinante principal deste intervalo é ointervalo parturição-concepção. O anestro do pós-parto prolongado é uma limitação principalpara eficiência reprodutiva alta. O intervalo pós-parto (PPI) é definido como o intervalo entrea parturição e o estro seguinte. Foi mostrado que a porcentagem de gestação cailinearmente quando o intervalo parturição-estro aumenta de 60 para 120 dias. Além disso, opeso dos animais parturientes e de sua progênie diminui significantemente quando ointervalo pós-parto aumenta.

Em rebanhos parturientes durante o ano inteiro, entre 11 % e 38 % de vacas sãorelatadas como em anestro a 50 ou 60 dias depois do parto. Em rebanhos leiteirossazonalmente parturientes, entre 13 e 48 % de vacas são diagnosticadas como anestroanovulatório no início do período de procriação. Ovulação e estro depois do parto sãoatrasados quando os efeitos de reação positivos de estradiol na liberação do hormônioIuteinizante (LH) a partir da glândula pituitária, e concentrações circulantes de hormôniosmetabólicos tais como insulina e fator de crescimento semelhante à insulina I, são reduzidospor uma variedade de fatores ambientais. Os principais fatores são entrada de energialimitada, reservas corpóreas mais baixas, particionamento aumentado de energia para aprodução de leite, amamentação, e doenças em torno do período do parto (doençasperi parturientes).

O intervalo do parto à primeira ovulação pós-parto é caracterizado por um períodode aumento da liberação pulsátil de LH, associado com o crescimento e desenvolvimento defolículos ovarianos. Para que esses folículos amadureçam e ovulem, suporte gonadotrópicodeve ser suficiente para estimular a produção aumentada de estradiol, que pode induzir umfluxo pré-ovulatório de LH e hormônio estimulante folicular (FSH). A presença do bezerroestá associada com um atraso no início da primeira ovulação pós-parto em vacas de corte, ea amamentação tem uma influência supressora no início do estro através de umaconcentração baixa de LH causada por uma secreção pulsátil e freqüência baixa de LH.Este efeito supressor é independente de vias neurosensoriais dentro da teta ou úbere, e aunião materno-prole é considerada como o componente essencial do PPI prolongadoinduzido pela amamentação na pecuária. A remoção do efeito da amamentação resulta emum rápido aumento na freqüência do pulso de LH que é suficiente para estimular a primeiraovulação, uma resposta não dependente do nível de nutrição pós-parto. Outros fatores queforam identificados como influenciando a duração do PPI são nutrição antes e depois doparto, e época e doenças periparturientes. A ocorrência de doenças clínicas tais comomastite, metrite, vaginite, manqueira severa e cetose durante o primeiro mês depois do partoforam todas relatadas serem fatores de risco significantes para um PPI prolongado. Emresumo, um PPI prolongado é observado quando o aumento na liberação do LH e/ou sinaismetabólicos são atrasados pela amamentação, no evento de baixa entrada de energia e/oubaixas reservas corpóreas, quando existe um particionamento aumentado de energia para aprodução de leite, ou quando o bem-estar dos animais é negativamente afetado devido a umestresse aumentado a partir da doença, pressão da glândula mamária/úbere devido aodesmame, ou altas temperaturas ambientais.

O reinicio antecipado dos ciclos do estro a seguir do parto é importante para aeficiência reprodutiva alta tanto em rebanhos parturientes durante todo o ano quanto deforma sazonal. Para sistemas de produção com base no pasto, a época do parto éusualmente ajustada para otimizar o uso da máxima taxa de crescimento no pasto naprimavera e no início do verão. Para manter uma distribuição de parto ideal durante aestação, uma alta taxa de concepção durante a parte inicial do período de procriação é umimportante pré-requisito. Para manter um intervalo de parturição de no máximo 365 dias,vacas precisam conceber em média por cerca de oito dias depois do parto. Atrasos no inícioda ovulação e expressão do estro são associados com taxas de concepção e gestaçãoreduzidas e intervalos aumentados do parto à concepção.

As opções de tratamento para vacas com um PPI prolongado incluem estratégiashormonais e de manejo. Tratamentos hormonais que incluem um período de, por exemplo,suplementação de progesterona resultam na maioria de estro de exibição de animaistratados com uma fase Iuteal subseqüente de duração normal e taxas de gestaçãomelhoradas comparadas com controles não tratados. Intervenções hormonais tendem a terresultados mais prognosticáveis comparadas com mudanças de manejo, tais comomanipular a condição corpórea ou entrada dietética depois do parto, e usualmente têmalgum efeito de sincronização no estro, assim facilitando o uso de inseminação artificial. Porexemplo, a Patente U.S. N2 6.939.558 divulga dispositivos intravaginais contendoprogesterona que podem ser usados como um indutor do estro em um organismo, tais comobovino, suíno, eqüino, e semelhantes.

Entretanto, respostas a qualquer tratamento hormonal são variáveis e dependem doestágio da onda folicular e das complexidades de mecanismos de controle quedesempenham um papel na regulação da progressão seqüencial de folículos. O uso dehormônios para sincronização do estro pode resultar em fertilidade reduzida assim como emefeitos secundários, não alcançando assim o objetivo de aumento da eficiência reprodutiva.

O bem-estar do animal na fazenda é de interesse público crescente em sociedadesmodernas nas últimas décadas (Broom DM 1992 In: Phillips et ai, Edts. Farm Animais andthe Environment CAB Wallingford UK páginas 245-253). O desenvolvimento recente naspráticas de alojamento e manejo de animais na fazenda sob sistemas de produçãointensivos reflete o aumento em interesses morais do bem-estar do animal (Fregonesi JA etal. 2001 Livestock Production Sei. 68:205-216; Fregonesi et al. 2002 Livestock ProductionSei. 78:245-257). A melhora do bem-estar do animal é definida como a prevenção dosofrimento e aumento da presença de sensações positivas, tipicamente denominadasconforto ou prazer (Broom, supra). Medições do funcionamento biológico prejudicado,particularmente aquele relacionado à diminuição da saúde e respostas do estressefisiológico aumentadas, são usadas para avaliar o estado de bem-estar dos animais nafazenda.

Nas indústrias de corte e de laticínios, animais Iactantes em rebanhos passam porciclos controlados de ordenha e gestação, como tal regime contribui para um aumentosignificante no parto e na produção de leite. No manejo atual de rebanhos leiteiros, porexemplo vacas e cabras, existe uma superposição significante entre lactação e gestação,em que um "período seco" é imposto entre 50 a 70 dias antes da parturição por interrupçãoda ordenha. Este regime é fixado de acordo com a necessidade em induzir a involução, umprocesso necessário para período de lactação saudável subseqüente, e o requisisto paraalta produção de leite ao longo do ano. De acordo com o princípio do manejo em controlar aeficiência da reprodução, bezerros na indústria de corte são desmamados perto de três acinco meses de idade. As vantagens do desmame precoce incluem indução da involução eaumento na produtividade, controle da alimentação do bezerro, e quantidade reduzida equalidade da ração requerida para alimentação da vaca. Entretanto, o desmame precoceimpõe um grande estresse nas vacas assim como nos bezerros, resultando em umadiminuição geral na condição corpórea, aumento da pressão do úbere, vazamento de leite eagonia, todos levando à susceptibilidade a doenças e efeitos negativos no próximo ciclo deprocriação da vaca e a substanciais perdas de peso do bezerro. Assim, a prática atual dedesmame precoce controlado em animais Iactantes na criação moderna dificultaconsideravelmente o estado de bem-estar e desempenho reprodutivo dos animais.

Peptídeos da Caseína

A caseína (CN) é a proteína predominante no leite do mamífero humano e nãohumano. Ela foi previamente definida como composta de três frações, a, β e γ, de acordocom sua mobilidade eletroforética. Hoje, a caseína é definida de acordo com as seqüênciasde aminoácido de cada um dos subgrupos aS 1, aS2, β e κ (Engel et al. 1984. J. Dairy Sei.67:1607-1608).

A hidrólise enzimática da caseína libera peptídeos que podem contribuir para asaúde e desenvolvimento apropriado da prole e que servem como reguladores locais dafunção da glândula mamária (Silanikove et al. 2000 Life Sei. 67:2201-2212; Shamay et al.2002 Life Sei. 70:2707-2719). A Patente U.S. Ne 6.391.849 divulga proteose peptonasderivadas da caseína que agem como quelantes de cálcio, e seu uso no controle demudanças fisiológicas em uma glândula mamária, incluindo interrupção transitória epermanente da produção de leite, e prevenção, tratamento e reversão de infecções.Proteose peptonas (PPs), também conhecidas como fosfopeptídeos da caseína (CPP), sãoum grupo de peptídeos resistentes à ebulição constituindo cerca de um terço de proteínasdo soro do leite, que são principalmente os produtos da atividade de plasmina em ß-caseínae as1- e as2-caseína (Andrews 1983 J. Dairy Res. 50:45-55).

Fosfopeptídeos da caseína foram mostrados possuir a propriedade única de seremcapazes de ligar macroelementos tais como Ca, Mg, e Fe, juntamente com elementos traçotais como Zn, Ba, Cr, Ni, Co e Se, que podem ser solubilizados no intestino delgado eportanto disponíveis para absorção. Como tal, CPPs são usados como aditivos em bebidase na alimentação de crianças, e em medicamentos dentais (ver, por exemplo, PatenteEuropéia N° EP 0090406; Patente U.S. N°s 5.130.123; 5.227.154).

Foi previamente mostrado que um peptídeo derivado da atividade de plasmina emß-caseína (ß-CN) infra-regula a secreção de leite em vacas e cabras (Patente U.S. N°6.391.849). A atividade deste peptídeo foi correlacionada com sua capacidade em bloquearcanais de potássio nas membranas apicais do epitélio mamário (Silanikove et al., supra).Também foi mostrado que a injeção de caseína hidrolisada (CNH) no úbere de uma cabraou uma vaca imita o fenômeno natural de involução, induzindo uma resposta inflamatórialocal e perda da integridade da junção estreita (TJ), seguido por secreção mamária comsecagem rápida (Shamay et al., supra; Shamay et al 2003 J. Dairy Sei. 86:1250-1258). Oprocesso induzido por CNH foi mais rápido e sincronizado do que aquele induzido nasecagem natural. Estes resultados indicam que isto é possível para reduzirsignificantemente o tempo requerido para a involução. O inventor da presente invenção e oscolaboradores também mostraram que isto é possível para encurtar ou omitir o período secosem afetar a produção de leite na lactação subseqüente (Publicação do Pedido de PatenteInternacional N2 W02006/117784).

Permanece uma necessidade não satisfeita quanto a métodos e composições paramelhorar a eficiência reprodutiva de um rebanho sem afetar negativamente o bem-estar dosanimais.

Sumário da invenção

A presente invenção diz respeito a métodos e composições para melhorar aeficiência reprodutiva ou produtividade de um gado e para induzir o desmame precoce semafetar negativamente o bem-estar dos animais. Particularmente, a presente invenção divulgamétodos e composições para indução e sincronização do estro de ovulação em um rebanho,levando à redução de intervalos do anestro, aumento da taxa de concepção e assim a umaumento na taxa de reprodução. A presente invenção fornece ainda métodos para a induçãoprecoce e desmame livre de estresse, levando à produtividade aumentada de um rebanho.

A presente invenção é baseada em parte na descoberta inesperada a qualaplicando-se peptídeos derivados da caseína (proteose peptonas) a um animal de criaçãolactante resulta na indução do estro no animal.

Assim, de acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um método paraindução do estro em um animal de criação Iactante compreendendo administrar ao animaluma quantidade eficaz de pelo menos um peptídeo derivado da caseína.

De acordo com certas formas de realização, o estro ocorre de cerca de 2 dias acerca de 120 dias depois da administração do peptídeo, preferivelmente de cerca de 2 diasa cerca de 50 dias depois da administração do peptídeo. De acordo com outras formas derealização, o método compreende ainda inseminar o animal lactante. De acordo com umaforma de realização correntemente preferida, a taxa de concepção é pelo menos 70 %,preferivelmente cerca de 75 %, mais preferivelmente cerca de 80 % ou mais.

De acordo com certas formas de realização, o método de indução do estrocompreende administrar pelo menos um peptídeo derivado da caseína da invenção de cercade 70 dias antes da parturição a cerca de 150 dias depois da parturição. De acordo comoutras formas de realização, o peptídeo é administrado imediatamente depois da parturiçãoa cerca de 150 dias depois da parturição, preferivelmente imediatamente depois daparturição a 90 dias depois da parturição, mais preferivelmente imediatamente depois daparturição a 60 dias depois da parturição, o mais preferivelmente imediatamente depois daparturição a 30 dias depois da parturição.

O método da presente invenção é eficaz na indução do estro em qualquer animallactante. De acordo com certas formas de realização correntemente preferidas, o método dapresente invenção é dirigido à indução do estro em animais de criação desenvolvidos para ocorte ou produção de leite incluindo vacas, cabras, ovelha, suíno, camelos e búfalos.A indução do estro de acordo com o método da presente invenção pode seraplicada a um animal de criação individual assim como a uma pluralidade de animaisLactantes em um rebanho, como para sincronizar o estro de todos os animais recebendo otratamento. A sincronização do estro em um rebanho é altamente desejável, comoincluindo programa de inseminação, parto, desmame, alimentação etc., e assimaumentando a eficiência do manejo.

Assim, de acordo com certas formas de realização, pelo menos um peptídeoderivado da caseína é aplicado a uma pluralidade de animais de criação Iactantes em umrebanho, desse modo sincronizando o estro dos animais Iactantes no rebanho. De acordocom certas formas de realização, o rebanho é de gado de corte. De acordo com outrasformas de realização, o rebanho é de gado leiteiro. Ainda de acordo com outras formas derealização, o rebanho é de suíno.

De acordo com outras formas de realização, a sincronização do estro no rebanhopermite a inseminação sincronizada. De acordo com certas formas de realização, o métodode sincronização do estro em um rebanho compreende ainda inseminar os animais. Deacordo com uma forma de realização, a taxa de concepção depois da inseminação é pelomenos 70 %, preferivelmente 75 %, mais preferivelmente 80 %. Ainda de acordo com outrasformas de realização, a sincronização do estro no rebanho resulta na parturiçãosincronizada no rebanho.

Ainda de acordo com um outro aspecto, a presente invenção fornece um métodopara induzir uma taxa de concepção de pelo menos 70 % em um rebanho, compreendendoadministrar a uma pluralidade de animais Iactantes em um rebanho uma quantidade eficazde pelo menos um peptídeo derivado da caseína. De acordo com certas formas derealização, a taxa de concepção é pelo menos 75 %, preferivelmente 80 % ou mais.

O peptídeo derivado da caseína pode ser obtido por hidrólise da caseína, ou elepode ser um peptídeo sintético. Qualquer combinação de peptídeos derivados da caseína,naturais ou sintéticos, pode ser usada de acordo com o ensinamento da presente invenção.

De acordo com certas formas de realização, o peptídeo é fosfopeptídeo derivado dacaseína. De acordo com uma forma de realização, o fosfopeptídeo derivado da caseínacompreende uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:1, eanálogos, derivados ou fragmentos desta. De acordo com outras formas de realização, ofosfopeptídeo é selecionado do grupo que consiste de um fosfopeptídeo derivado da β-caseína, um fosfopeptídeo derivado da aS1-caseína e um fosfopeptídeo derivado da aS2-caseína. De acordo com certas formas de realização correntemente preferidas, ofosfopeptídeo derivado da /?-caseína compreende uma seqüência de aminoácido comoapresentado na SEQ ID NO:2 e análogos, derivados ou fragmentos desta. De acordo comformas de realização preferidas correntemente adicionais, o fosfopeptídeo derivado da oS1-caseína compreende uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:3 eanálogos, derivados ou fragmentos desta. Ainda de acordo com outras formas de realizaçãocorrentemente preferidas, o fosfopeptídeo derivado da aS2-caseína é selecionado de umpeptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ IDNO:4 e um peptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado naSEQ ID NO:5 e análogos, derivados ou fragmentos desta.

Sem desejar estar ligada por qualquer teoria particular ou mecanismo de ação, asincronização do estro por peptídeos derivados da caseína pode ser atribuída a umamudança no sistema hormonal endógeno para secreção de hormônios que induzem o estro.

Os ensinamentos da presente invenção são vantajosos sobre os métodoshormonais previamente conhecidos para a sincronização do estro, fornecendo métodos defácil aplicação que não têm efeitos adversos. Além disso, os métodos da presente invençãocontribuem para a saúde geral do animal, melhorando a condição corpórea assim comoreduzindo os fatores de estresse, fornecendo assim conforto e bem-estar aumentado dosanimais.

Os peptídeos da invenção podem ser administrados por qualquer método adequadocomo é conhecido na técnica. De acordo com certas formas de realização, o método deadministração é selecionado do grupo que consiste de administração sistêmica eadministração direta em uma glândula mamária. De acordo com certa forma de realizaçãocorrentemente preferida, o método compreende administração em um canal da teta daglândula mamária do animal lactante. Pelo menos um peptídeo pode ser administrado auma ou mais glândulas mamárias, incluindo administração simultânea a todas as glândulasmamárias do animal. A administração à teta pode ser realizada por injeção intracanal, por aplicação do emplastro compreendendo o peptídeo da invenção, imergindo-se a teta emuma composição compreendendo pelo menos um peptídeo e semelhantes.

A administração única assim como administrações múltiplas é considerada. Apresente invenção divulga agora que uma administração única de pelo menos um peptídeoderivado da caseína é suficiente para induzir a sincronização do estro. De acordo comoutras formas de realização, o peptídeo é administrado entre uma a cinco vezes emintervalos de cerca de 6 horas a cerca de 24 horas.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção fornece um método parainduzir o desmame livre de estresse de um filhote amamentando compreendendoadministrar a um animal lactante pelo menos um dia antes do desmame uma quantidadeeficaz de pelo menos um peptídeo derivado da caseína.

O método de desmame da presente invenção permite deixar o filhote amamentandocom sua mãe e assim reduzir significantemente o estresse imposto pelo desmame tanto namãe quanto no filhote amamentando. Isto é uma experiência comum para bezerros jovens,depois de serem removidos a uma área de confinamento, chamarem por suas mães econstantemente andarem em torno da área de confinamento em um estado semi-assustadoe estressado. Durante este período de tempo estressante, bezerros freqüentementeexperienciam nenhum ganho no peso devido a sua infamiliaridade com o ambiente e suarelutância para ingerir ração convencional. As mães sofrem dor devido à interrupção abruptada amamentação, pronunciada por um aumento na locomoção e redução nos períodos queficam deitadas. As condições estressantes e a redução na quantidade de ração consumidapelo animais, freqüentemente resulta em tal adoecimento dos animais, e em uma reduçãono escore da condição corpórea global. O alívio do estresse deixando-se os bezerros comsua mãe resulta em nenhuma perda de peso dos bezerros e ainda no ganho de peso.

O desmame de acordo com o ensinamento da presente invenção pode ser induzidoem qualquer estágio da amamentação, sem afetar negativamente o bem-estar da mãe. Semdesejar estar ligado a qualquer modelo ou mecanismo específico de ação, este fenômenopode ser atribuído ao efeito de peptídeos derivados da caseína no equilíbrio hormonal doanimal Iactante para o estro, divulgado na presente invenção pela primeira vez.

De acordo com certas formas de realização, o desmame precoce é iniciado a partirde cerca de 2 semanas a cerca de 15 semanas depois da parturição, preferivelmente apartir de cerca de 4 semanas a cerca de 8 semanas depois da parturição.

De acordo com outras formas de realização, pelo menos um peptídeo derivado dacaseína é administrado entre cerca de 1 dia a cerca de 10 dias antes do desmameprogramado, preferivelmente a cerca de 3 dias antes do desmame.

A administração de uma dose única assim como de doses repetidas de pelo menosum peptídeo derivado da caseína em uma glândula mamária pode ser aplicada.Tipicamente, para obter um desmame livre de estresse, a administração é repetida pelomenos uma vez, preferivelmente entre 1 a 10 vezes, mais preferivelmente 1 a 3 vezes, emum intervalo selecionado do grupo que consiste de cerca de 6 horas, cerca de 8 horas,cerca de 12 horas, cerca de 16 horas, cerca de 20 horas e cerca de 24 horas durante 1 a 10dias, preferivelmente 1 a 3 dias, mais preferivelmente 1 dia. De acordo com certas formasde realização correntemente preferidas, o peptídeo é administrado apenas uma vez. Depoisda administração do peptídeo o filhote pode ser separado de sua mãe durante curtosperíodos de tempo, para facilitar o processo de desmame. Sem desejar estar ligado a ummecanismo específico de ação ou teoria, o processo de desmame é realçado devido a umamudança na composição do leite induzida pelo peptídeo derivado da caseína, que resultaem uma vontade de amamentação reduzida do filhote. De acordo com certas formas derealização, o filhote é separado de sua mãe durante um período de cerca de 5 h a cerca de3 dias, preferivelmente de cerca de 5 h a cerca de 2 dias, mais preferivelmente de cerca de5 h a cerca de 24 h.

Ainda de acordo com um outro aspecto, os métodos para sincronização do estro edesmame precoce da presente invenção podem ser usados com um novo método paraaumentar um gado, e mais particularmente a criação de gado, em que existe um aumentona produtividade do rebanho resultante de um aumento na taxa reprodutiva, isto é o númerode bezerros por ano, e na quantidade e/ou qualidade da carne produzida, sem afetarnegativamente, ou ainda melhorar, o bem-estar dos animais. O manejo da pecuária deacordo com o ensinamento da presente invenção também pode resultar em uma reduçãoglobal nos custos envolvidos no processo de aumento do rebanho por redução na prática deadministrar suplementos hormonais para obter a sincronização do estro e reduzindo-se ocusto da ração especial requerida depois da parturição para manter a condição corpórea dogado equilibrada depois da parturição e procriação. Isto é, este aspecto da presenteinvenção combina o uso da sincronização do estro e desmame precoce como divulgadoaqui dentro do contexto de um novo programa de manejo da pecuária. Este novo manejo dapecuária também permite determinar um programa de parturição sazonal, assim comoplanejamento do campo pecuária-agricultura, especificamente em áreas áridas e semi-áridas.

Outros objetivos, características e vantagens da presente invenção tornar-se-ãoclaros a partir da descrição seguinte.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Antes da explicação de pelo menos uma forma de realização da invenção emdetalhe, deve ser entendido que a invenção não é limitada em sua aplicação aos detalhesapresentados na descrição seguinte ou exemplificada pelos Exemplos. A invenção é capazde outras formas de realização ou de ser praticada ou realizada de várias maneiras.Também, deve ser entendido que a fraseologia e terminologia utilizadas aqui são para opropósito de descrição e não devem ser consideradas como limitantes.

Definições

Como usado aqui, o termo "caseína" refere-se à proteína predominante emmamíferos não humanos e leite humano, compreendendo os subgrupos aS1, aS2, /? e κ.

Como usado aqui, o termo aS1, aS2 e /?-caseína refere-se à proteína aS1, aS2 e β-caseína de um mamífero, incluindo, mas não limitada a, mamíferos da pecuária (porexemplo, vaca, ovelha, cabra, suíno, égua, camelo, veado e búfalo), seres humanos emamíferos marinhos.

O termo "peptídeo" é usado por todo o relatório descritivo para designar uma sérielinear de resíduos de aminoácido conectados uns aos outros por ligações peptídicas. Opeptídeo de acordo com os princípios da presente invenção é diferente da proteína intacta.

Como usado aqui, o termo "fosfopeptídeo" designa um peptídeo fosforilado naforma de um peptídeo conjugado em que a porção não peptídica é um resíduo de ácidofosfórico. Em particular a expressão "fosfopeptídeo da caseína" ou "CPP" ou "proteose-peptona" designa um fosfopeptídeo contendo um fragmento da caseína.

Os peptídeos usados nos métodos desta invenção preferivelmente têm um pesomolecular médio de cerca de 1.000 a cerca de 10.000 Daltons1 preferivelmente de cerca de1.000 a cerca de 5.000 Daltons. A invenção particularmente considera peptídeos tendo entre10 a 50 resíduos de aminoácido no total. A presente invenção também considera proteínasem que a seqüência principal do núcleo, por exemplo, a seqüência de aminoácidoapresentada na SEQ ID NO:1, é artificialmente implantada dentro de uma seqüência de umpolipeptídeo, tais como peptídeos fabricados por tecnologia do DNA recombinante ou porsíntese química. Os peptídeos podem ser obtidos por hidrólise da caseína para produziruma mistura de peptídeos. De acordo com o ensinamento da presente invenção, umamistura dos peptídeos pode ser usada, ou a mistura pode ser ainda purificada por qualquermétodo de purificação de proteína conhecido na técnica para obter os peptídeos isolados.Alternativa ou adicionalmente, os peptídeos da presente invenção podem ser clivados poragentes químicos tais como, por exemplo, CNBr ou outros agentes de clivagem conhecidosna técnica, para produzir uma mistura de peptídeos, que podem ser ainda purificados paraobter peptídeos isolados.

Os peptídeos usados nos métodos da presente invenção também podem sersintetizados usando métodos bem conhecidos na técnica incluindo síntese química etecnologia do DNA recombinante. A síntese pode ser realizada em solução ou por síntesede peptídeo de fase sólida como descrito por Merrifield (ver J. Am. Chem. Soc., 85:2149,1964).

No geral, métodos de síntese de peptídeo compreendem a adição seqüencial deum ou mais aminoácidos ou aminoácidos adequadamente protegidos ou derivatizados auma cadeia de peptídio crescente. Normalmente, o grupo amino ou o carboxila do primeiroaminoácido é protegido por um grupo de proteção adequado. O aminoácido protegido ouderivatizado depois pode ser ligado a um suporte sólido inerte ou utilizado em soluçãoadicionando-se o próximo aminoácido na seqüência tendo o grupo complementaradequadamente protegido (amino ou carboxila), sob condições adequadas para formar aligação amida. O grupo de proteção depois é removido de seu resíduo de aminoácidorecentemente adicionado e o próximo aminoácido (adequadamente protegido) depois éadicionado, e assim por diante; tradicionalmente este processo também é acompanhado poretapas de lavagem. Depois que todos os aminoácidos desejados foram ligados naseqüência própria, quaisquer grupos de proteção remanescentes (e qualquer suporte sólido)são removidos sucessiva ou concorrentemente, para produzir o peptídeo final. Através demodificação simples deste procedimento geral, é possível adicionar mais do que umaminoácido de uma vez à cadeia crescente, por exemplo, ligando-se (sob condições quenão racemizam centros quirais) um tripeptídeo protegido com um dipeptídeo propriamenteprotegido para formar, depois da desproteção, um pentapeptídeo, e assim por diante.

Como usado aqui o termo "estro" refere-se ao estado periódico de excitação sexualna fêmea da maioria dos mamíferos, excluindo-se os seres humanos, que imediatamenteprecede a ovulação e durante o qual a fêmea é mais receptiva ao acasalamento. O ciclo doestro é regulado por interação hormonal conduzida pelo eixo hipotálamo-hipófise-ovário-útero.

O ciclo do estro pode ser dividido em três fases: 1) Fase de regressão folicular ouluteal (pró-estro); 2) fase periovulatória (estro e metaestro); e 3) fase Iuteal (diestro). O dia 0do ciclo do estro é o dia do estro, isto é o dia em que o estro pode ser visivelmenteobservado. Entretanto, a partir do ponto-de-vista fisiológico, o ciclo do estro inicia com adestruição do corpo lúteo e finaliza com a destruição do corpo lúteo do próximo ciclo. O pró-estro, que tipicamente permanece durante um período de 3 dias, inicia com a regressão docorpo lúteo do ciclo anterior e finaliza com a manifestação do estro. Quando o corpo lúteo édestruído, existe uma queda nos níveis de progesterona e, mais tarde, uma perda de tecidoluteal; neste processo, a prostaglandina F2a (PGF2a) de uma origem uterina é o agenteluteolítico principal nos animais domésticos e na maioria de roedores. Como um resultadodo declínio nos níveis de progesterona, a reação negativa deste hormônio no nível dohipotálamo diminui também, e a freqüência pulsátil dos hormônios gonadotróficos (FSH eLH) começa a aumentar, estimulando o crescimento folicular com o desenvolvimento de umfolículo grande e o aumento nos níveis de estradiol. Quando estrógenos atingem um certonível, a receptividade ao macho torna-se estimulada e o ciclo do estro se inicia.

A fase do estro e metaestro inicia com a receptividade aos machos e envolve todasas mudanças considerando a ovulação e o princípio da formação do corpo lúteo. Durante oestro, duração de cerca de 16 a cerca de 24 h, uma vaca tipicamente mostraria inquietaçãoe ansiedade, mugindo freqüentemente, e perdas de apetite. No caso de vacas leiteiras, aprodução de leite torna-se afetada. As vacas mostram descarga de muco vaginal, a qual seuodor atrai e excita o touro (presença de feromônios), edema de vulva e um aumento dotônus miometrial do útero, facilmente detectado por palpação transretal.

Durante esta fase, as altas concentrações de estrógenos atingem a estimulaçãolimiar do centro cíclico hipotalâmico, estimulando os neurônios hipotalâmicos para produzir opico de hormônio Iiberador de gonadotropina (GnRH) e consequentemente, o pico de LH.No que diz respeito ao FSH, sua secreção diminui como um resultado da reação negativados estrógenos e da inibina, exceto para o momento quando o pico preovulatório de LHocorre onde um pico de FSH possa aparecer. Mais tarde, 4 a 12 horas depois da onda deLH1 concentração basal e o aumento da largura do pulso de FSH, e este processo érelacionado à primeira onda de crescimento folicular.

A partir de 12 a 24 horas depois do início do estro, o sistema nervoso da vacatorna-se imune ao estradiol e as manifestações psíquicas do estro ficam paralisadas.

O período imediatamente a seguir do fim do estro é chamado metaestro (6 dias).

Durante este período, a ovulação da vaca ocorre, diferente de outra espécie que ovuladurante o estro, dando origem à organização celular e o desenvolvimento do corpo lúteo. Aovulação ocorre 28 a 32 horas depois do início do estro e é liberada pelo pico pré-ovulatóriode LH. A ovulação é seguida por uma hemorragia profunda e o folículo é enchido comsangue e torna-se um corpo hemorrágico. Enquanto o corpo lúteo é formado (luteinização), uma série de mudançasmorfológicas e bioquímicas ocorrem, permitindo que células foliculares se transformem emcélulas lúteas. Estas mudanças finalizam no sétimo dia com a formação de um corpo lúteofuncional.

A fase do diestro é caracterizada pela predominância do corpo lúteo. A manutenção do corpo lúteo assim como a síntese da progesterona estão relacionadas ao hormônio LHprogesterotrófico e luteotrófico.

Outros hormônios que participam na síntese da progesterona são FSH eprostaglandina 2 (PG2). O hormônio FSH aparentemente iria aderir aos receptoreslocalizados no corpo lúteo e causaria um aumento na secreção de progesterona. Com relação à PG2, além de estimular células lúteas a produzir progesterona, ela pode aumentaro fluxo sangüíneo no nível ovariano, tendo um efeito positivo na síntese e secreção deprogesterona.

Se o óvulo não for fertilizado, o corpo lúteo permanece funcional até 15 a 20 dias,depois que regressão inicia de modo a preparar para um novo ciclo do estro. Como usado aqui o termo "anestro" refere-se a um intervalo de atividade sexualentre dois períodos de estro em mamíferos fêmeas que procriam de forma periódica.

O termo "intervalo pós-parto (PPI)", como usado aqui refere-se ao tempo entre aparturição ao início do estro (o pró-estro).

Os termos "parto à primeira ovulação pós-parto", e "intervalo parturição-concepção" são usados aqui permutavelmente, e referem-se ao tempo entre a parturição à última fasedo estro (metaestro).

O termo "puerpério" como usado aqui refere-se ao período correto depois daparturição, isto é a duração do período aproximado de seis semanas da parturição aoretorno do tamanho uterino normal. O termo "amamentação" como usado aqui refere-se ao comportamento daalimentação de mamíferos muito jovens, e é o desenho do leite na boca do mamífero jovema partir do bico de uma glândula mamária. De acordo com as práticas atuais usadas, aamamentação pode ser à vontade, ou restrita a tempos específicos durante o dia ou restritadurante todo o dia.

Como usado aqui os termos "período seco" ou "período de vaca seca" referem-se àfase antes da parturição em que a ordenha é cessada. De acordo com práticascorrentemente usadas, a aplicação de um período seco é necessária para completar oprocesso de involução, depois que a capacidade de secreção de leite é restaurada para aparturição.

Os termos "desmame" e "remoção do bezerro" são usados aqui permutavelmente,referindo a separação de um filhote amamentando de sua mãe, enquanto a mãe é lactante.

Como usado aqui, o termo "desmame precoce" refere-se ao desmame antes de umprocesso natural de interrupção do leite e a involução ocorre. Especificamente, o termo"desmame precoce" refere-se ao desmame de cerca de 2 semanas a cerca de 15 semanasdepois da parturição. O desmame de cerca de 2 semanas a menos do que cerca de 8semanas depois da parturição também é referido como "desmame super precoce". Comousado aqui, o termo "planejamento do campo pecuária-agricultura" refere-se ao manejo daterra na agricultura compreendendo modificar o uso da terra entre safras de cultivo agrícolae usando a terra como um pasto.

Como usado aqui, o termo "escore da condição corpórea" refere-se a um númeroque representa as reservas corpóreas de um animal de criação, particularmente uma vaca,em um certo ponto no tempo. Um escore da condição corpórea é determinado porobservação visual da área posterior da vaca - primeiramente a região delimitada pelosossos da coxa (tuber coxae), os ossos do quadril (tuber ischii) e da cabeça ao rabo. Aquantidade de "cobertura" sobre o vertebrado do dorso também é usada no fornecimento deum escore. Vacas são usualmente classificadas em uma escala de 1 a 5. Vacasextremamente magras determinaram um escore de 1 e vacas extremamente gordasdeterminaram um escore de 5.

Como usado aqui, o termo "pecuária" refere-se a animais, tais como gado de corte,gado leiteiro, ovelha, cabras, cavalos, suíno, búfalos e camelos em criação para alimento oupara a produção de alimento para o uso doméstico ou para produção de larga escala e oupara rendimento, particularmente em uma fazenda.

Como usado aqui, os termos "bem-estar dos animais" ou "bem-estar na criaçãoanimal" ou "conforto dos animais" referem-se à prevenção do sofrimento e aumento dapresença de sensações positivas, usualmente chamadas conforto ou prazer, resultantes de,inter alia, um aumento no tempo de descanso, nos períodos que elas ficam deitadas, e noperíodo de ruminação, e uma diminuição na necessidade metabólica, pressão do úbere,vazamento da teta, incidência de mastite e outras doenças e efeito de manqueira devido aalta produção de leite.Os métodos da presente invenção podem ser aplicados a qualquer animal decriação mamífero do qual a fêmea está passando pelo ciclo do estro. Como um exemplo, esem a pretensão de ser limitante, a presente invenção refere-se a rebanhos de gado. Deacordo com certas formas de realização correntemente preferidas, a presente invençãorefere-se a rebanhos de gado de corte.

O manejo de um rebanho de gado pode ser voltado à produção de carne e/ouprodução de leite. O ciclo produtivo de uma vaca de procriação pode ser dividido em quatroperíodos: período de vaca seca; período preparatório para a parturição; parturição; elactação. Cada um destes períodos tem necessidades nutricionais específicas ecaracterísticas hormonais. A gestação dos animais envolve um custo substancial, visto queas necessidades do último mês de gestação são mais altas do que aquelas aplicáveis a umanimal não-gestante. A sincronização do tempo de parturição dentro de um rebanho éaltamente benéfica. Se o parto é tomado como Dia 0 do ano corrido, os Dias 0 maissincrônicos de um rebanho, mais fácil seria aplicar um regime de manejo benéfico. Ofornecimento de forragem pode ser ajustado às necessidades nutricionais do rebanho, ecomo um resultado, o estado fisiológico do gado seria melhorado e ao mesmo tempoproblemas econômicos seriam tratados. A sincronização da parturição é diretamentedependente da sincronização do estro.

Além disso, tentativas para controlar PPI, estro e a progressão seqüencial defolículos e respostas da ovulação manipulando-se a nutrição e por tratamento hormonal aseguir do parto no gado leiteiro mostraram-se equívocas. A involução acelerada no gadoleiteiro a seguir da administração de peptídeos derivados da caseína, que leva a uma menorobstrução do úbere e risco de infecção intramamária durante e imediatamente depois doperíodo seco resulta em um melhor conforto e condições corpóreas do animal durante oparto e pós-parto. Sem ter sido ligada a um modo específico de ação foisurpreendentemente descoberto que a administração de peptídeos derivados da caseínacontrola o PPI no gado leiteiro, na mairoia das vezes reduzindo-se o PPI que é seguido porum rápido início da ovulação e expressão do estro.

Assim, de acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um método para aindução do estro em um animal Iactante compreendendo administrar ao animal umaquantidade eficaz de pelo menos um peptídeo derivado da caseína.

De acordo com certas formas de realização, pelo menos um peptídeo derivado dacaseína é aplicado a uma pluralidade de animais de criação Iactantes em um rebanho,desse modo sincronizando o estro da pluralidade de animais lactantes.

Como usado aqui a expressão "peptídeos derivados da caseína" ou "peptídeoderivado da caseína" refere-se a peptídeos que são produtos de clivagem de caseína(referidos aqui como peptídeos derivados da caseína natural), peptídeos sintéticos,quimicamente sintetizados para corresponder a seqüências de aminoácido das unidades dacaseína (referidas aqui como peptídeos sintéticos derivados da caseína), e peptídeossimilares (homólogos) à caseína, por exemplo, peptídeos caracterizados por uma ou maissubstituições, inserções ou eliminações de aminoácido, tais como, mas não limitadas a,substituições permissíveis, contanto que pelo menos 70 %, preferivelmente pelo menos 80%, mais preferivelmente pelo menos 90 % de similaridade seja mantida, e homólogosfuncionais desta. Os termos "homólogos" e "homólogos funcionais" como usados aquisignificam peptídeos com quaisquer inserções, eliminações e substituições que não afetama atividade biológica do peptídeo como descrito aqui.

Qualquer combinação de peptídeos derivados da caseína pode ser usada deacordo com o ensinamento da presente invenção. A expressão "combinação" é definidacomo qualquer um dos peptídeos derivados da caseína, naturais ou sintéticos acima-mencionados, combinados em uma mistura com um ou mais peptídeos não idênticos,adicionais. Como usado aqui, o termo "mistura" é definido como uma combinação nãocovalente de peptídeos existindo em proporções variáveis entre si.

De acordo com certas formas de realização, o peptídeo derivado da caseína é umfosfopeptídeo compreendendo a Ser(p)-Ser(p)-Ser(p)-Glu Glu principal ativa (SEQ ID NO:1),e análogos, derivados ou fragmentos desta. Deve ser entendido que qualquer peptídeocompreendendo esta cadeia principal - se derivado da caseína, de uma proteína excetocaseína, sinteticamente sintetizado ou produzido por tecnologia recombinante - que retémas atividades biológicas dos peptídeos como são descritas aqui, também é abrangido dentrodo escopo da presente invenção. Os fosfopeptídeos da presente invenção sãoexemplificados por peptídeos tendo uma seqüência de aminoácido como apresentado emqualquer uma das SEQ ID N— 2 a 5, como listado abaixo:

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O termo "análogo" inclui qualquer peptídeo compreendendo seqüência modificadapor substituições, adições, eliminações de aminoácido, ou modificações químicas dospeptídeos da invenção e que retém a atividade biológica do peptídeo. Por "substituições deaminoácido", é significado que resíduos de aminoácido funcionalmente equivalentes sãosubstituídos no lugar de resíduos dentro da seqüência resultando em uma mudançatranqüila. Por exemplo, um ou mais resíduos de aminoácido dentro da seqüência podem sersubstituídos por um outro aminoácido de uma polaridade similar, que age como umequivalente funcional, resultando em uma alteração tranqüila. Substitutos para umaminoácido dentro da seqüência podem ser selecionados a partir de outros membros daclasse a que o aminoácido pertence. Por exemplo, os aminoácidos não polares (hidrófobos)incluem alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano e metionina. Osaminoácidos polares neutros incluem glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina,e glutamina. Os aminoácidos positivamente carregados (básicos) incluem arginina, Iisina ehistidina. Os aminoácidos negativamente carregados (ácidos) incluem ácido aspártico eácido glutâmico. Tais substituições são conhecidas como substituições conservativas.

Adicionalmente, uma substituição não conservativa pode ser feita em um aminoácido quenão contribui para a atividade biológica do peptídeo. Será avaliado que a presente invençãoabrange peptídeo análogos, em que pelo menos um aminoácido é substituído por um outroaminoácido para produzir um análogo ativo de um peptídeo da invenção tendo estabilidadeaumentada ou meia vida mais longa como comparado ao peptídeo listado aqui.

Embora os resíduos de aminoácido das seqüências de peptídeo apresentadas naSEQ ID NO:1 a 5 estejam todos na forma isomérica "L", resíduos na forma isomérica "D"podem substituir qualquer resíduo de L-aminoácido contanto que o análogo do peptídeoretenha sua atividade. Métodos de produzir um análogo do peptídeo de D-aminoácido retro-inverso onde o peptídeo é feito com os mesmos aminoácidos como divulgado, mas pelomenos um ou mais aminoácidos, incluindo todos os aminoácidos são D-aminoácidos, sãobem conhecidos na técnica. Quando todos os aminoácidos no análogo do peptídeo são D-aminoácidos, e os N- e C-terminais do análogo do peptídeo são invertidos, o resultado é umanálogo tendo os mesmos grupos estruturais estando nas mesmas posições como na formaL-aminoácido do peptídeo. Entretanto, o análogo do peptídeo é mais estável paradegradação proteolítica e é portanto útil em muitas das aplicações relatadas aqui.

O termo "derivado" refere-se a um peptídeo tendo uma seqüência de aminoácidoque compreende a seqüência de aminoácido do peptídeo da invenção, em que um ou maisdos resíduos de aminoácido é submetido a derivatizações químicas por uma reação decadeias laterais ou grupos funcionais, onde tais derivatizações não exterminam a atividadedo derivado do peptídeo. A derivatização química de resíduos de aminoácido inclui, mas nãoé limitada a, glicosilação, oxidação, redução, miristilação, sulfatização, acilação, acetilação,ADP-ribosilação, amidação, ciclização, formação de ligação dissulfeto, hidroxilação,iodação, e metilação.Os derivados do peptídeo de acordo com os princípios da presente invençãotambém incluem modificações de ligação, incluindo, mas não limitadas a, CH2-NH1 CH2-S1CH2-S=O, O=C-NH, CH2-O, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH, e CF=CH e modificações da cadeiaprincipal. Ligações peptídicas (-CO-NH-) dentro do peptídeo podem ser substituídas, porexemplo, por ligações N-metiladas (-N(CH3)-CO-); ligações éster (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N);ligações cetometileno (-CO-CH2-); ligações σ-aza (-NH-N(R)-CO-), em que R é qualquergrupo alquila, por exemplo, metila; ligações carba (-CH2-NH-); ligações hidroxietileno (-CH(OH)-CH2-); ligações tioamida (-C=S-NH-); ligações duplas olefínicas (-CH=CH-); ederivados do peptídeo (-N(R)-CH2-CO-), em que R é a cadeia lateral "normal", naturalmenteapresentada no átomo de carbono. Estas modificações podem ocorrem em qualquer umadas ligações ao longo da cadeia do peptídeo e ainda em várias ao mesmo tempo (2 e 3).

A presente invenção também abrange aqueles peptídeos em que grupos aminolivres foram derivatizados para formar sais de amina, incluindo mas não limitados acloridretos, grupos p-tolueno sulfonila, grupos carbobenzóxi, grupos t-butiloxicarbonila,grupos cloroacetila ou grupos formila. Grupos carboxila livres podem ser derivatizados paraformar, por exemplo, sais, ésteres metílicos e etílicos ou outros tipos de ésteres ouhidrazidas. Grupos hidroxila livres podem ser derivatizados para formar, por exemplo,derivados de o-acila ou o-alquila. O nitrogênio de imidazol da histidina pode ser derivatizadopara formar N-im-benzilistidina.

Também incluídos como derivativos químicos são aqueles peptídeos, que contêmum ou mais derivativos de aminoácido que ocorrem naturalmente dos vinte resíduos deaminoácido padrão. Por exemplo: 4-hidroxiprolina pode ser substituído no lugar de prolina;5-hidroxolisina pode ser substituído no lugar de lisina; 3-metilistidina pode ser substituído nolugar de histidina; homoserina pode ser substituído no lugar de serina; e ornitina pode sersubstituído no lugar de lisina. Os peptídeos também podem conter aminoácidos nãonaturais. Exemplos não Iimitantes de aminoácidos não naturais são norleucina, ornitina,citrulina, ácido diaminobutírico, homoserina, homocisteína, isopropil Lys, 3-(2'-naftil)-Ala,nicotinil Lys, ácido amino isobutírico, e 3-(3'-piridil-Ala). Os peptídeos também podem contercadeias laterais de não proteína. Além do supracitado, os peptídeos da presente invençãotambém podem incluir um ou mais monômeros ou oligômeros de não aminoácido (porexemplo, ácidos graxos, carboidratos complexo, e semelhantes). Também abrangido équalquer peptídeo tendo uma ou mais adições de resíduos de aminoácido em relação àsseqüências dos peptídeos listados aqui acima, contanto que a atividade necessária epreferivelmente o peso molecular sejam mantidos. Os resíduos de aminoácido podem seradicionados ao amino-terminal e/ou carbóxi-terminal e/ou ao longo da seqüência dopeptídeo.

Um derivativo do peptídeo de acordo com a presente invenção também pode serum peptídeo cíclico. A ciclização pode ser obtida, por exemplo, através da formação deligação amida, por exemplo, incorporando-se Glu, Asp1 Lys, Orn1 ácido di-amino butírico(Dab), ácido di-aminopropiônico (Dap) em varias posições na cadeia (ligações -CO-NH ou -NH-CO). Cadeia principal à ciclização da cadeia principal também pode ser obtida atravésda incorporação de aminoácidos modificados das fórmulas H-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-COOH ou H-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-NH2, em que η = 1 a 4, e ainda em que R é qualquercadeia lateral natural ou não natural de um aminoácido. Cadeia principal à cadeia lateral ecadeia lateral às ciclizações da cadeia lateral também são consideradas.

A ciclização por intermédio da formação de ligações S-S através da incorporaçãode dois resíduos Cys também é possível. Cadeia lateral adicional à ciclização da cadeialateral pode ser obtida por intermédio da formação de uma ligação de interação da fórmula -(-CH2-)n-S-CH2-C-, em que η = 1 ou 2, que é possível, por exemplo, através da incorporaçãode Cys ou homoCys e reação de seu grupo SH livre com, por exemplo, Lys, Orn, Dab ouDap bromoacetilado.

O termo "fragmento" como usado aqui refere-se a um peptídeo tendo uma ou maiseliminações de resíduos de aminoácido em relação às seqüências dos peptídeos listadosaqui, contanto que a atividade necessária seja mantida. Os resíduos de aminoácido podemser suprimidos do amino-terminal e/ou carbóxi-terminal e/ou ao longo da seqüência dopeptídeo.

Fragmentos do peptídeo podem ser produzidos por síntese química, tecnologia doDNA recombinante, ou submetendo-se os peptídeos listados aqui a pelo menos um agentede clivagem. Um agente de clivagem pode ser um agente de clivagem químico, porexemplo, brometo de cianogênio, ou uma enzima, por exemplo, uma exoproteinase ouendoproteinase. Endoproteinases que podem ser usadas para clivar os peptídeos dainvenção incluem tripsina, quimiotripsina, papaína, protease V8 ou qualquer outra enzimaconhecida na técnica para produzir fragmentos proteolíticos.

Como descrito aqui acima, os peptídeos da presente invenção podem ser obtidospor hidrólise da caseína, ou os peptídeos podem ser sinteticamente obtidos.

A hidrólise da caseína pode ser realizada por qualquer método como é conhecido auma pessoa habilitada na técnica. As enzimas usadas na hidrólise da caseína incluemenzimas derivadas de animais, por exemplo, pancreatina, tripsina, quimotripsina, neutrase,alcalase, pepsina, carboxipeptidase, catepsinas, e semelhantes; enzimas derivadas deplantas, por exemplo, papaína, bromelaína, e semelhantes; e enzimas derivadas demicroorganismos, por exemplo, lactobacilo, levedura, fungos, Bacillus subtilis, Actinomyces,Aspergilus, Micrococcus caseolyticus e semelhantes. Tipicamente, a hidrólise da caseína érealizada por digestão com tripsina. A caseína não digerida depois é separada da soluçãocontendo peptídeo, que ainda é purificada a partir de outras impurezas por um métodoadequado como é conhecido na técnica.

O programa de manejo reprodutivo planejado tem muitas vantagens e benefícios,como é conhecido àqueles habilitados na técnica, e geralmente pode ser descrito paraincluir o seguinte: ele permite o planejamento da época e datas do parto - vacas que sãoinseminadas em época precoce, isto é, no início do cio têm produção de bezerro com tempode vida mais alto do que aquelas que dão a cria mais tarde; permite o planejamento docampo da agricultura-pecuária para o uso apropriado do campo e melhora o pastorotacional, garantindo uma distribuição eficiente de forragem para satisfazer asnecessidades de alimentação fisiológicas dos indivíduos do rebanho, em que vacaschegando ao parto com boas condições corpóreas (escore da condição corpórea de 2,75 a3,50) exibem melhor indução do estro e tornam-se prenhas em um período de procriaçãolimitado; permite o projeto de parto e inseminações que otimizam o trabalho de pessoal e ataxa de concepção; diminui o número de touros por rebanho, permitindo o investimento emtouros com genética e qualidade superior; melhora o trabalho com os bezerros,possibilitando sua distribuição em grupos homogêneos; realça a sustentabilidade do sistemado estro, evitando assim a dependência em períodos naturais; facilita a complacência com oprograma de vacinação e melhora sua eficiência.

A aplicação do método de indução do estro de acordo com a presente invençãopermite que o estro ocorra imediatamente no final do período puerperal, e assim encurtandoo intervalo pós-parto (PPI). A redução do PPI é altamente desejada. Foi mostrado que aporcentagem de gestação cai linearmente quando o intervalo parturição-estro aumenta de60 a 120 dias. Além disso, este relacionamento parturição-primeiro estro mostra que osquilogramas do bezerro diminuem consideravelmente quando tal intervalo é prolongado.Como um resultado da indução e sincronização do estro, mais vacas dão criaantecipadamente no ano seguinte e em anos subseqüentes de sincronização de acordo coma eficiência do manejo.

Naturalmente, decisões e procedimentos do manejo têm alguma influência nointervalo parturição-concepção, mas a última é principalmente determinada pelos seguintesfatores: o reestabelecimento dos ciclos ovarianos depois do parto; a ocorrência do estro notempo apropriado do ciclo; a taxa de gestação depois do serviço. A taxa de gestaçãoaumenta quase linearmente quando a fertilidade do estro aumenta. O declínio depende dointervalo parturição-estro, e ele aumenta quando este intervalo encurta.

Sem desejar estar ligada a qualquer teoria ou modo de ação, a indução do estroobtida administrando-se pelo menos um peptídeo derivado da caseína de acordo com osmétodos da presente invenção pode ser atribuída a uma mudança no tipo e época dasecreção hormonal. Durante o período pós-parto, fêmeas Iactantes sofrem uma mudançaimportante em seu equilíbrio de energia antes do início dos ciclos ovarianos normais. Esteequilíbrio de energia negativo é amplamente causado pela perda de energia resultante dalactação, maior do que a energia que pode ser recuperada com ração. Este equilíbrionegativo é associado com os perfis do plasma hormonais determinando uma atividade maisbaixa nas dinâmicas foliculares e resultando na carência do estro e da ovulação. As vacascom um escore da condição corpórea abaixo de 2,5 têm freqüência do pulso de LHreduzida, atividade ovariana reduzida e demora no retorno do estro pós-parturição. Oreestabelecimento da secreção pulsátil de LH depois do parto produz o reinicio dasdinâmicas foliculares normais. O início precoce dos ciclos do estro torna-se um fatordeterminante de uma concepção precoce. O momento da primeira ovulação determina elimita o número de ciclos do estro que são prováveis ocorrerem antes da primeirainseminação, e quanto mais alto o número do estro antes do período pós-parto de 60 dias,mais alta a chance de concepção na primeira inseminação (por exemplo, 2,60 e 1,75tentativas de inseminação por concepção para vacas de 0 e 4 estro respectivamente antesdo período pós-parto de 60 dias). O objetivo dos criadores deve ser fertilizar a vaca naprimeira ou segunda inseminação; de outro modo, o número de dias da vaca expostaaumentaria e o período parto-concepção seria mais longo, levando a uma diminuição dataxa de fertilidade com as perdas de produção resultantes. Os peptídeos derivados dacaseína fornecem um meio para induzir o estro desejado e controlam o intervalo pós-parto emelhoram o equilíbrio de energia negativo descrito acima.

A produtividade de um rebanho depende não apenas do número de filhotes mastambém do peso ganho até o abatimento. Um parâmetro que determina um peso dosbezerros é o intervalo pós-parto (PPI) como descrito aqui acima; um outro parâmetrosignificante é o estresse imposto nos bezerros durante o desmame. Naturalmente, odesmame ocorre em um gado a cerca de seis a sete meses do parto. A prática do manejomoderno de um rebanho de corte emprega o desmame em quatro a oito semanas. Odesmame precoce tem algumas vantagens, incluindo o seguinte:

-Auxilia no controle do ciclo reprodutivo.

-Bezerros podem crescer ao seu potencial genético indiferente da produção de leiteda mãe.

-Pode ser a chave para utilização de ração mais eficiente durante tempos de secaou outros períodos de escassez de ração.

-Reduz o custo da forragem assim como 15 a 20 % menos de energia é necessáriapara alimentar bezerros precocemente desmamados e suas mães, como comparado àsvacas amamentando seus bezerros, e bezerros precocemente desmamados possuemmelhor conversão de ração.

-Ajusta-se com a queda de parto onde a alimentação no inverno intenso de outromodo seria requerida.-O desmame precoce permite que mais vacas sejam continuadas em umfornecimento de ração limitado.

Entretanto, o desmame precoce impõe um alto estresse nos bezerros e em suasmães, resultando em produtividade e rendimento reduzidos. De modo a evitar perdas depeso substanciais, a nutrição do bezerro de alta qualidade e cara deve ser usada; o estressediminui o escore da condição corpórea da mãe e negativamente afeta o próximo ciclo deprocriação. Além disso, o ganho antecipado na ordenha intensa devido ao desmameprecoce pode ser perdido devido à produção de leite reduzida pela mãe estressada, e poruma diminuição geral na condição corpórea da mãe e do filhote.

A presente invenção agora divulga um método para indução livre do estresse, odesmame precoce de um filhote em amamentação compreendendo administrar umaquantidade eficaz a um animal Iactante de pelo menos um peptídeo derivado da caseína.

As vantagens do método da presente invenção são que elas permitem adeterminação do tempo desejado para o desmame, de poucos dias a vários meses depoisdo parto e que os filhotes têm a opção de permanecer perto de suas mães, tal que oprocesso do desmame é livre de estresse tanto para os filhotes quanto para as mães, enenhuma diminuição no peso corpóreo e condições gerais são observadas.

Além disso, a presente invenção agora divulga que a administração de peptídeosderivados da caseína a uma glândula mamária de um animal lactante, particularmente umavaca, reduz a pressão do úbere, que é um outro fator que é conhecido causar um altoestresse, carência de conforto, susceptibilidade às doenças e bem-estar reduzido à mãe.

O processo de interrupção abrupta da ordenha e involução mamária posteriorcausa agonia ao animal lactante e leva a uma mudança em seu comportamento. O último émostrado pelo aumento da locomoção e diminuição do período que o animal fica deitado. Ainvolução rápida depois do tratamento com peptídeo derivado da caseína, que diminui asíntese do leite em cerca de 6 horas a 4 dias, previne este desconforto. Este é mostrado porum aumento no comportamento de descanso e tempo ruminativo. Sem desejar estar ligadoa qualquer modelo ou mecanismo específico de ação, este fenômeno pode ser atribuído aoefeito de peptídeos derivados da caseína na pressão do úbere, que é amplamente reduzidadepois da aplicação do peptídeos da invenção.

Assim, os métodos da presente invenção fornecem uma utilidade aumentada,devido a um aumento no peso da progênie, e evitando-se a superalimentação.

Os peptídeos derivados da caseína podem ser administrados de acordo com osmétodos da presente invenção em qualquer composição e formulação farmacêuticaadequadas como é conhecido a uma pessoa habilitada na técnica.

Como usado aqui uma "composição farmacêutica" refere-se a uma preparação deum peptídeo derivado da caseína como descrito aqui, com outros componentes químicostais como carregadores e excipientes fisiologicamente adequados. O propósito de umacomposição farmacêutica é facilitar a administração de um composto a um organismo. Otermo "ingrediente ativo" como usado aqui refere-se a um composto responsável pelo efeitobiológico. Os termos "carregador fisiologicamente aceitável" e "carregadorfarmaceuticamente aceitável" que podem ser permutavelmente usados referem-se a umcarregador ou um diluente que não causa irritação significante a um organismo e não anulaa atividade biológica e propriedades do peptídeo administrado. O termo "excipiente" refere-se a uma substância inerte adicionada a uma composição farmacêutica para facilitar ainda aadministração de um composto. Exemplos, sem limitação, de excipientes incluem váriosaçúcares e tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleo vegetais e polietilenoglicóis.

As técnicas para formulação e administração de medicamentos podem serencontradas em "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa.,última edição, que é incorporado aqui por referência.

As composições farmacêuticas para o uso de acordo com os métodos da presenteinvenção podem ser formuladas de maneira convencional usando um ou mais carregadoresfisiologicamente aceitáveis compreendendo excipientes e auxiliares, que facilitam oprocessamento do ingrediente ativo em preparações que, podem ser farmaceuticamenteusadas. A formulação apropriada é dependente da via de administração escolhida.

Para injeção, os peptídeos da invenção podem ser formulados em soluçõesaquosas, preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis tais como solução deHank, solução de Ringer, ou tampão de solução salina fisiológico.

As preparações de peptídeos a serem usadas com os métodos da presenteinvenção podem ser formuladas para administração parenteral (intramamária), por exemplo,por injeção em bolus ou infusão contínua. As formulações para injeção podem serapresentadas em forma dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes demultidosagem, com opcionalmente, um preservante adicionado. As composições podem sersuspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conteragentes formulantes tais como agentes de suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes.

As composições farmacêuticas adequadas para o uso com os métodos da presenteinvenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos em umaquantidade eficaz para obter o propósito intencionado. Mais especificamente, umaquantidade eficaz significa uma quantidade eficaz para induzir a sincronização do estro e odesmame precoce.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Indução e sincronização do estro em gado de cortePropósitoO propósito primário do presente estudo é induzir e sincronizar o retorno ao estroem vacas de corte depois do parto, por administração intracanal de peptídeos derivados dacaseína em cada quarto da teta. O propósito secundário é atingir fertilização com êxito emnão mais do que 60 dias depois da administração do peptídeo, e eficientemente atingir aumento corpóreo e escore de desempenho nas vacas.

O resultado bem-sucedido do tratamento é considerado como a indução do estágiodo estro até 20 dias a seguir da administração do peptídeo de pelo menos 80 % de vacas, ea concepção de pelo menos 70 % das vacas tratadas até o terceiro pulso.

Projeto do Estudo

A experiência clínica é designada ser um estudo caso-controle de dois regimes(ramos). O "Ramo 30" refere-se a bezerros desmamados 30 dias da data do pós-parto. O"Ramo 60" refere-se ao desmame dos bezerros 60 dias pós-parto.

"Casos" e "Controles" são vacas de corte registradas pelo menos 14 dias antes dadata do parto esperada. O desmame é programado para ambos os grupos de acordo com o Ramo planejado (30 ou 60 dias pós-parto). Casos recebem administração intramamária depeptídeos derivados da caseína, enquanto que controles não recebem qualqueradministração intramamária. Tanto vacas do caso quanto do controle vivem no mesmorebanho, são da mesma idade (± 180 dias) sendo depois do parto (mesma data do parto ±60 dias) e são ordenhadas durante o mesmo período (± 90 dias) pelo menos 14 dias em paralelo. Para cada regime, o total de 30 vacas são registradas, 15 casos e 15 controles.

O tratamento de peptídeos derivados da caseína é administrado 1 a 2 vezes ao diadurante um dia.

Os critérios inclusão para a participação da vaca neste estudo são: vacas emestágio gestacional tardio, 2 semanas antes do dia do parto esperado; vacas que têm quatro quartos funcionais; vacas prenhas - primeira ou mais gestações; vacas com ou sem infecçãointramamária confirmada que receberam ou não a terapia anterior; vacas sem nenhumalesão na teta externa significante; na terapia sistêmica dentro das 8 semanas anteriores;nenhuma alimentação com aditivos antibióticos dentro das 8 semanas anteriores; ausênciade co-doenças consideradas influenciar potencialmente o resultado do tratamento no parecer do pesquisador.

Os critérios de exclusão para participação de vaca neste estudo são: imunoterapiaanterior dentro de 8 semanas do ingresso do estudo; terapias com antibiótico, hormônio,anti-inflamatório e anabólico anteriores, sistêmicos ou por alimentação dentro de 8 semanasantes do ingresso do estudo; terapias alternativas concorrentes; vacas com tuberculose ativa ou outra doença infecciosa no parecer do pesquisador; uso concorrente de esteróidesanabólicos, sistêmicos ou por alimentação; uso concorrente de hormônios, sistêmicos ou poralimentação.A duração total da experiência clínica é em torno de 120 dias (17 semanas),incluindo vinte e duas (22) visitas ao sítio (rebanho), como segue:

Primeiro Período: os procedimentos de visita valor de referência/triagem envolvempelo menos 6 visitas a partir de 15 dias antes do parto até 30 dias a seguir do parto paratodas as vacas participantes no estudo. A visita ao local de estudo ocorre em 15 e 7 diasantes do parto, no dia do parto e 3 visitas antes do tratamento.

Segundo Período: a amostragem, o início do Ramo 30, a inseminação e oacompanhamento do Ramo 30 envolvem pelo menos 7 visitas - do dia 30 depois do partoaté o dia 52: uma visita no dia 30 para amostragem e desmame, 3 visitas em diasconsecutivos depois do desmame (dias 31, 33, 34), e 3 visitas (dias 38, 45 - dia dainseminação, e 52) até o início do Ramo 60.

Terceiro Período: o início do Ramo 60 e o acompanhamento do Ramo 30 envolvempelo menos 4 visitas - do dia 60 depois do parto até o dia 64 (uma visita no dia 60 paraamostragem e desmame do Ramo 60, 3 visitas em dias consecutivos depois do desmame(dias 61, 63, 64)).

Quarto Período: o final do acompanhamento do Ramo 30 e a inseminação do Ramo60 envolvem pelo menos 2 visitas (dias 68 e 75 - dia da inseminação). No dia 75 a partir dodia do parto, o acompanhamento para casos e controles do Ramo 30 finaliza. Vacasregistradas no Ramo 60 são inseminadas.

Quinto Período: o final do acompanhamento do Ramo 60 e o final da experiênciaclínica envolvem 3 visitas (dias 82, 91 e 105).

Durante o estudo exames clínicos são realizados em casos e controles, incluindoexame do úbere, sistemas clínicos específicos, estado do peso e da gestação. O leite éexperimentado para testar a porcentagem de gordura, porcentagem de proteína,porcentagem de lactose, contagem de células somáticas, e para exame bacteriológico. Osangue é experimentado para testar principalmente estrogênio, progesterona, LH, FSH eprostaglandina.

As medidas de segurança incluem sinais vitais, exame físico, doenças incidentes,avaliações de evento adverso e testes bacteriológicos.

No final do estudo, os pontos finais seguintes são medidos: secreção mamária; taxade concepção por pulso; taxa de fertilidade; fertilidade por tempo depois do parto e/oudesmame; peso da vaca depois do desmame; presença de doenças infecciosas.

A eficácia da interrupção de secreção de leite a seguir da administração depeptídeos derivados da caseína é medida como segue: êxito alto: interrupção dentro de 1 a4 dias; êxito de 5 a 8 dias; êxito baixo de 9 a 15 dias; sem êxito de 16 ou mais dias para ainterrupção de secreção de leite.

A duração do PPI é medida a partir do dia da administração de peptídeos derivadosda caseína até os dias da ovulação. Êxito alto é considerado como PPI menor do que 12 a20 dias; êxito de 21 a 24 dias; êxito baixo de 25 a 29 dias; sem êxito de 30 ou mais dias deduração do PPI.

Uma taxa de concepção com êxito é medida como segue: êxito alto de 80 % oumais; êxito de 70 % a 79 %; êxito baixo de 50 % a 69 %; sem êxito de 49 % ou menos.

A experiência clínica é interrompida em qualquer uma das condições seguintes:conclusão do estudo; falha de triagem; recusa pelo dono do rebanho; Vaca sofrendoeventos adversos intoleráveis; Bezerro sofrendo eventos adversos intoleráveis; violação doscritérios inclusão/exclusão; qualquer fator ou condição que na opinião do pesquisadornecessitaria da retirada do estudo.

Exemplo 2: Desmame dos bezerros

A interrupção abrupta da amamentação é associada com a pressão do úbereaumentada, que resulta em vazamento de leite e agonia ao animal ordenhando. Assim, odesmame do bezerro é associado com estresse para as mães e os filhotes, tal estresselevando à perda de peso e susceptibilidade a doenças.

Propósito

O propósito primário deste estudo de desmame precoce sem separar o bezerro davaca é determinar a extensão a qual um contato pós-desmame não-amamentação contínuoentre vacas de corte e seus bezerros reduz os efeitos negativos do término do aleitamentoda vaca e comportamento e crescimento do bezerro.

Os propósitos secundários são medir agonias comportamentais de vacas ebezerros depois do desmame através da locomoção e período que permanecem deitados epor mudanças em seus pesos, até 15 dias pós-desmame.

Projeto do Estudo

A experiência é designada ser um estudo caso-controle de dois regimes (Ramos).

O "Ramo 30" refere-se ao desmame de bezerros 30 dias pós-parto. O "Ramo 60" refere-seao desmame de bezerros 60 dias pós-parto.

"Casos" e "Controles" são vacas prenhas de corte registradas pelo menos 14 diasantes da data do parto esperada, e manejadas para o desmame precoce (em 30 ou 60 diaspós-parto). Casos são experimentados para receber administração intramamária depeptídeos derivados da caseína. Controles não recebem qualquer administraçãointramamária.

Critérios de inclusão e exclusão para vacas assim como condições de estudo sãocomo descritos no Exemplo 1 aqui acima. O tratamento de peptídeos derivados da caseínaé administrado 1 a 2 vezes ao dia durante um dia.

Os critérios de inclusão para participação do bezerro neste estudo são: bezerronascido em um estágio gestacional tardio - pelo menos em 230 dias; bezerro capaz de selocomover imediatamente; bezerro sem nenhuma lesão externa significante; peso dobezerro de pelo menos 50 Kg; bezerro sendo tratado com medicações anti-parasitas evacinas anti-respiratórias; ausência de co-doenças consideradas influenciar potencialmenteo resultado do tratamento no parecer do pesquisador.

Os critérios de exclusão para participação do bezerro neste estudo são: castraçãodurante o estudo; terapias alternativas concorrentes no bezerro; bezerro com tuberculoseativa ou outra doença infecciosa no parecer do pesquisador.

A duração total da experiência clínica é em torno de 120 dias (17 semanas),incluindo vinte (20) visitas ao sítio (rebanho), como segue:

Os procedimentos de visita valor de referência/triagem envolvem pelo menos 4visitas do parto até 30 dias depois do parto para todos os participantes no estudo. Umavisita ao local do estudo é feita no dia do parto e 3 visitas são feitas antes do tratamento. Asvisitas de acompanhamento são como descritas no Exemplo 1 aqui acima até o final doquinto período.

No dia 15 do pós-parto, vacas são aleatoriamente distribuídas dentro de paridade eidade a uma das 2 datas do desmame, em 30 ou 60 dias depois do parto, e para receberem(casos) ou não (controles) uma administração intramamária de peptídeos derivados dacaseína. Vacas e bezerros são pesados, e o escore da condição corpórea é avaliadoimediatamente depois do parto e antes do desmame. O escore da condição corpórea éavaliado em uma escala de 0 a 5, em que 0 é emaciação severa e 5 é obeso.

No dia do desmame pós-parto (30 e 60), pares vaca-bezerro são movidos para umlocal com terreno seco amplo. Casos pares vaca-bezerro são alocados em terreno seco,não mais do que 8 pares por terreno seco. Controle pares vaca-bezerro são movidos paraum terreno seco distante separado.

As vacas são alimentadas com uma dieta de energia fornecendo-se 90 a 100 MJ deenergia metabolizável por vaca por dia (isto é, próximo a 100 % da recomendação para umavaca de corte de 460 kg produzindo cerca de 7 a 8 Kg de leite e sem nenhuma mudança nopeso vivo). As dietas compreendem 60 % de silagem de capim e 40 % de concentrados(cevada, soja, mineral, e vitaminas; 16 % de proteína bruta). Antes da época do desmame edo tratamento, vacas são alojadas e alimentadas em grupos de não mais do que 8 vacas deacordo com data do parto. A seguir do primeiro dia pós-desmame, bezerros são alimentadoscom proteína, vitaminas e minerais para atingir as exigências padrão, e alimentados emquantidades quase constantes dentro do estágio de crescimento. Durante o primeiro diapós-desmame bezerros recebem apenas água.

Comportamento em casos e controles é medido por um sistema de telemetriamontado na pata. Este sistema permite a monitoração e gravação de registros acumulativosde etapas de locomoção, tempos de descanso e períodos dormindo. O sensor temcapacidades de armazenamento e transmissão de dados, e inclui uma fonte de energiaintegrada suficiente para pelo menos 1 mês de operação. Os dados coletados sãotransferidos a partir do sensor uma vez a cada semana durante o período deacompanhamento.

As medidas de segurança incluem sinais vitais, exame físico, doenças incidentes, eavaliações de eventos adversos.

No final do estudo, os pontos finais seguintes são medidos:

A eficácia da interrupção de secreção do leite a seguir da administração depeptídeos derivados da caseína é medida como segue: interrupção dentro de 1 a 4 dias;êxito de 5 a 8 dias; êxito baixo de 9 a 15 dias; sem êxito de 16 ou mais dias para interrupçãode secreção do leite.

A avaliação do escore da condição corpórea em vacas a partir do desmame a 30dias pós-desmame é feita como segue: êxito alto - nenhuma mudança ou aumento no peso;escore mais baixo de 0 a 0,5 pontos - êxito; escore mais baixo de 0,5 a 1 ponto, êxito baixo;escore mais baixo de 1,0 ou mais pontos, sem êxito.

A condição do peso nas vacas a partir do desmame a 30 dias pós-desmame éavaliada como segue: êxito alto - nenhuma mudança ou aumento; peso mais baixo até 5 %,êxito; peso mais baixo entre 5 % a 10 %, êxito baixo; peso mais baixo de 10 % ou mais, semêxito.

A condição do peso em bezerros a partir do desmame a 30 dias pós-desmame éavaliada como segue: êxito alto - aumento de 10 por cento ou mais; aumento de 5 a 9 porcento, êxito; nenhuma mudança até aumento de 4 por cento, êxito baixo; e peso mais baixo,sem êxito.

O comportamento nas vacas e bezerros é avaliado pelas etapas de locomoção apartir dos valores padrão como segue: êxito alto - diminuição em 10 por cento ou mais; êxito- diminuição em 5 a 9 por cento; êxito baixo - nenhuma mudança ou aumento/diminuição até4 por cento; sem êxito - aumento em 5 por cento ou mais.

O comportamento nas vacas e bezerros é avaliado pelo tempo de descanso a partirdos valores padrão como segue: êxito alto - aumento em 10 % ou mais; êxito - aumento em5 % a 9 %; êxito baixo - nenhuma mudança ou aumento/diminuição até 4 %; sem êxito -diminuição em 5 % ou mais.

A experiência clínica é interrompida em qualquer uma das condições seguintes:

A conclusão do estudo; falha de triagem; recusa pelo dono do rebanho; Vacasofrendo evento adverso intolerável; Bezerro sofrendo evento adverso intolerável; violaçãodos critérios de inclusão/exclusão; qualquer fator ou condição que na opinião dopesquisador necessitaria da retirada do estudo.

Exemplo 3: Indução e sincronização do estro em vacas leiteirasPropósito

O propósito primário do presente estudo é induzir e sincronizar o retorno ao estroem vacas leiteiras depois do parto, por administração intracanal de peptídeos derivados dacaseína em cada quarto da teta antes do período de seca. O propósito secundário é atingir afertilização com êxito em não mais do que 105 dias depois da data da administração.

O resultado com êxito do tratamento é considerado como a indução do estágio doestro até 20 dias a seguir da administração de pelo menos 80 % de vacas, e concepção depelo menos 70 % das vacas tratadas até o terceiro pulso.

Projeto do Estudo

A experiência clínica é designada ser um estudo caso-controle.

"Casos" e "Controles" são vacas leiteiras registradas pelo menos 14 dias antes dadata seca esperada. Casos são experimentados para receber administração intramamáriade peptídeos derivados da caseína ou caseína hidrolisada (CNH), e controles sãoexperimentados para não receber qualquer administração intramamária.

Tanto vacas caso quanto controle vivem no mesmo rebanho, são da mesma idade(± 180 dias) sendo depois do parto (mesma data do parto ± 60 dias) e são ordenhadasdurante o mesmo período (± 90 dias) durante pelo menos 14 dias em paralelo.

O tratamento de peptídeos derivados da caseína (ou CNH) é administrado 1 a 2vezes ao dia durante um dia. Os critérios de inclusão e exclusão para participação de vacaleiteira neste estudo são aqueles definidos no Exemplo 1 aqui acima.

A duração total da experiência clínica é em torno de 120 dias (17 semanas),incluindo treze (13) visitas ao sítio (rebanho) como segue:

Primeiro Período: os procedimentos visita valor de referência/triagem envolvempelo menos 2 visitas a partir de 15 dias antes da seca ao dia do tratamento para todos osparticipantes no estudo. Visitas ao local de estudo ocorrem a 15 e 7 dias antes dotratamento no início do período seco.

Segundo Período: dia da amostragem e do tratamento inclui registro cego de casose controles e tratamento intramamário.

Terceiro Período: durante o período de seca, pelo menos 4 visitas são tomadas apartir do dia 1 no dia de tratamento ao dia 60 ou dia do parto.

Quarto Período: parto e inseminação envolvem pelo menos 6 visitas até o final doacompanhamento. Durante o quarto período uma visita é no dia do parto, e pelo menos trêsvisitas durante as três semanas seguintes para as inseminações e acompanhamento.

Durante o estudo, exames clínicos são realizados em casos e controles incluindoexame do úbere, sistemas clínicos específicos, estado do peso e da gestação. O leite éexperimentado para testar a porcentagem de gordura, porcentagem de proteína,porcentagem de lactose, contagem de células somáticas, e exame bacteriológico. O sangueé experimentado para testar principalmente estrogênio, progesterona, LH1 FSH eprostaglandina.

As medidas de segurança incluem sinais vitais, exame físico, doenças incidentes,avaliações de evento adverso e testes bacteriológicos.

No final do estudo, os pontos finais seguintes são medidos: secreção mamária pré-parto, taxa de concepção por pulso; taxa de fertilidade; fertilidade depois do parto e/oudesmame; peso da vaca depois do parto e/ou desmame; doenças infecciosas na vaca.

A eficácia da interrupção de secreção do leite a seguir da administração depeptídeos derivados da caseína é medida como segue: êxito alto: interrupção dentro de 1 a4 dias; êxito de 5 a 8 dias; êxito baixo de 9 a 15 dias; sem êxito de 16 ou mais dias parainterrupção de secreção do leite.

A duração do PPI é medida a partir do dia do parto e/ou desmame até o dia daovulação. O resultado com êxito é avaliado como segue: êxito alto - menos do que 12 a 20dias; êxito - 21 a 24 dias; êxito baixo - 25 a 29 dias; sem êxito - 30 ou mais dias.

A taxa de inseminação é avaliada como segue: êxito alto - 80 por cento ou mais;êxito - 65 a 79 por cento; êxito baixo - 50 a 64 por cento; sem êxito - 49 por cento ou menos.

A experiência clínica é interrompida em qualquer uma das condições seguintes:conclusão do estudo; falha de triagem; recusa pelo dono do rebanho; a vaca sofrer eventosadversos intoleráveis; o bezerro sofrer eventos adversos intoleráveis; violação dos critériosde inclusão/exclusão; qualquer fator ou condição que na opinião do pesquisadornecessitaria da retirada do estudo.

A descrição antecedente das formas de realização específicas desse modomostrará completamente a natureza geral da invenção para que outros possam, aplicando-se o conhecimento corrente, prontamente modificar e/ou adaptar para várias aplicações detais formas de realização específicas sem experimentação indevida e sem divergir doconceito geral, e, portanto, tais adaptações e modificações devem e são intencionadas aserem compreendidas dentro do significado e faixa de equivalentes das formas derealização divulgadas. Deve ser entendido que a fraseologia ou terminologia utilizadas aquisão para o propósito de descrição e não de limitação. Os meios, materiais, e etapas pararealizar funções divulgadas variadas podem tomar uma variedade de formas alternativassem divergir da invenção.<110> MILEUTIS LTD.

<120> "MANEJO DA PECUÁRIA PARA EFICIÊNCIA REPRODUTIVA"

<130> MLTS/002 PCT

<150> 60/790,784

<151> 2006-04-11

<160> 5

<170> Patentln versão 3.3

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<2i3> Seqüência Artificial

<220>

<2 2 3> Peptídeo Sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(3)

<223> Modificado por ácido fosfórico

<400> 1

ser ser ser Glu Glu

1 5

<210> 2

<213> 25

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptídeo Sintético

<220>

<221> MISC.FEATURE

<222> (17)..(19)

<2 2 3> Modificado por ácido fosfórico

<400> 2

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1 5 10 15

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<220>

<223> Peptídeo Sintético<220>

<221> MISC_FEATURE

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<22Β> Modificado por ácido fosfórico

<400> 3

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<210> 4

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<210> 5

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<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptídeo Sintético

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(13)

<2 2 3> Modificado por ácido fosfórico

<400> 5

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Claims (49)

1. Método para indução do estro em um animal de criação lactante,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao animal uma quantidadeeficaz de pelo menos um peptídeo derivado da caseína.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que oestro ocorre de cerca de 2 dias a cerca de 120 dias depois da administração do peptídeo.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que oestro ocorre de cerca de 2 dias a cerca de 50 dias depois da administração do peptídeo.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado de cerca de 70 dias antes da parturição a cerca de150 dias depois da parturição.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado imediatamente depois da parturição a cerca de 90dias depois da parturição.

6. Método, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado imediatamente depois da parturição a cerca de 60dias depois da parturição.

7. Método, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado imediatamente depois da parturição a cerca de 30dias depois da parturição.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que oanimal de criação é selecionado do grupo que consiste de uma vaca, uma cabra, umaovelha, um suíno, um camelo e um búfalo.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo derivado da caseína é aplicado a uma pluralidade de animais decriação Iactantes em um rebanho, desse modo sincronizando o estro dos animais Iactantesno rebanho.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de queo rebanho é selecionado do grupo que consiste do rebanho de gado de corte, rebanho degado leiteiro, e rebanho de suíno.

11. Método, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de quecompreende ainda inseminar a pluralidade de animais de criação no rebanho.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de quea taxa de concepção depois da inseminação é pelo menos 70 %.

13. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de quea taxa de concepção depois da inseminação é pelo menos 75 %.

14. Método para induzir uma taxa de concepção de pelo menos 70 % em umrebanho, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a uma pluralidade deanimais de criação no rebanho uma quantidade eficaz de pelo menos um peptídeo derivadoda caseína.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de quea taxa de concepção é pelo menos 70 %.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo é um fosfopeptídeo.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo é derivado de um subgrupo da caseína selecionado do grupo que consistede aS1-caseína, αS2-caseína e B-caseína.

18. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo compreende uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ IDNO:1, um fragmento, um análogo ou um derivado desta.

19. Método, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da oS1-caseína compreende uma seqüência de aminoácido comoapresentado na SEQ ID NO:3, um fragmento, um análogo ou um derivado desta.

20. Método, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da aS2-caseína é selecionado do grupo que consiste de umpeptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ IDNO:4, um peptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado naSEQ ID NO:5 e análogos, derivados ou fragmentos desta.

21. Método, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da B-caseína compreende uma seqüência de aminoácido comoapresentado na SEQ ID NO:2, um análogo, um derivado ou um fragmento desta.

22. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo derivado da caseína é obtido por hidrólise da caseína.

23. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo derivado da caseína é um peptídeo sintético.

24. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo é administrado em pelo menos uma glândula mamária doanimal lactante.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado simultaneamente a todas as glândulas mamáriasdo animal lactante.

26. Método, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de quea administração é realizada por um método selecionado do grupo que consiste de injeçãointracanal, aplicação por intermédio de emplastro ligado ao úbere dos animais e aplicaçãopor intermédio da imersão do úbere dos animais.

27. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo é administrado pelo menos uma vez.

28. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 14, CARACTERIZADO pelo fatode que pelo menos um peptídeo é administrado entre uma a cinco vezes em intervalos decerca de 6 horas a cerca de 24 horas.

29. Método para induzir o desmame livre de estresse de um filhote emamamentação, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um animallactante pelo menos um dia antes do desmame uma quantidade eficaz de pelo menos umpeptídeo derivado da caseína.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de queo animal Iactante é selecionado do grupo que consiste de uma vaca, uma cabra, umaovelha, um suíno, um camelo e um búfalo.

31. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de queo desmame é iniciado de cerca de 2 semanas a cerca de 15 semanas depois da parturição.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato de queo desmame é iniciado de cerca de 4 semanas a cerca de 8 semanas depois da parturição.

33. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de queo filhote e o animal Iactante essencialmente não perdem peso depois do desmame.

34. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de queo escore da condição corpórea do animal Iactante e do filhote é essencialmente o mesmodepois do desmame como antes do desmame.

35. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é um fosfopeptídeo.

36. Método, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo é derivado de um subgrupo da caseína selecionado do grupo que consistede ctS1-caseína, aS2-caseína e /?-caseína.

37. Método, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo compreende uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ IDNO:1, um fragmento, um análogo ou um derivado desta.

38. Método, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da ctS1-caseína compreende uma seqüência de aminoácido comoapresentado na SEQ ID NO:3, um fragmento, um análogo ou um derivado desta.

39. Método, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da aS2-caseína é selecionado do grupo que consiste de umpeptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado na SEQ IDNO:4, um peptídeo compreendendo uma seqüência de aminoácido como apresentado naSEQ ID NO:5 e análogos, derivados ou fragmentos destas.

40. Método, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de queo fosfopeptídeo derivado da /?-caseína compreende uma seqüência de aminoácido comoapresentado na SEQ ID NO:2, um análogo, um derivado ou um fragmento desta.

41. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo derivado da caseína é obtido por hidrólise da caseína.

42. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo derivado da caseína é um peptídeo sintético.

43. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado em pelo menos uma glândula mamária do animallactante.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado simultaneamente a todas as glândulas mamáriasdo animal lactante.

45. Método, de acordo com a reivindicação 43, CARACTERIZADO pelo fato de quea administração é realizada por um método selecionado do grupo que consiste de injeçãointracanal, aplicação por intermédio de emplastro ligado ao úbere dos animais e aplicaçãopor intermédio de imersão do úbere dos animais.

46. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado entre cerca de 1 dia a cerca de 10 dias antes dodesmame.

47. Método, de acordo com a reivindicação 46, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado cerca de 3 dias antes do desmame.

48. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de quepelo menos um peptídeo é administrado entre uma a dez vezes em intervalos de cerca de 6horas a cerca de 24 horas.

49. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de queo conforto do animal lactante e do filhote não é negativamente afetado pelo desmameinduzido.