BRPI0709962A2 - licopeno para o tratamento de disfunção metabólica - Google Patents

Abstract

LICOPENO PARA O TRATAMENTO DE DISFUNçãO METABóLICA Esta invenção refere-se ao tratamento de disfunção metabólica e distúrbios associados com a disfunção metabólica, utilizando compostos de licopeno. São apresentados métodos de tratamento e o uso de compostos de licopeno em tais métodos.

Description

"LICOPENO PARA O TRATAMENTO DE DISFUNÇÃO METABÓLICA"Esta invenção refere-se a métodos e materiais para o tratamento de disfunçãometabólica, incluindo a resistência à insulina, tolerância à glicose, hipertensão, síndrome doovário policístico, obesidade, esteatose, hepatite crônica e cirrose do fígado.

As anormalidades metabólicas, tais como a resistência à insulina, tolerância aglicose prejudicada, hipertensão, obesidade e síndrome metabólica, tornaram-se cada vezmais comuns no mundo desenvolvido e estima-se que somente na América mais de 50milhões de pessoas tem tal disfunção. As disfunções metabólicas são fatores de riscosignificativos para o desenvolvimento subseqüente de diabetes, doença cardiovascular,doença oclusiva periférica, cerebral e outras formas de aterosclerose.

Um desenvolvimento adicional de tratamentos efetivos para estas condições teria umimpacto significativo na doença da população mundial.

Os inventores atuais descobriram que o Iicopeno tem um efeito dramático nadisfunção metabólica in vitro, em modelos de animais e em testes clínicos em sereshumanos.

Um aspecto da invenção apresenta um método de tratamento de uma disfunçãometabólica que é composto de:

administração de um composto de Iicopeno em uma quantidade terapeuticamenteefetiva a um indivíduo necessitando do mesmo.

Os compostos de Iicopeno poderão incluir Iicopeno e derivados de Iicopeno quepossuem propriedades biológicas semelhantes ao licopeno. O Iicopeno é um carotenóideC40 insaturado de cadeia aberta da estrutura ! (Chemical Abstracts Service Registry Number502-65-8) que ocorre naturalmente em plantas, tais como tomates, goiaba, fruta madura darosa, melão e "grapefruit".

O licopeno para uso conforme descrito aqui poderá ser composto de um ou maisisômeros diferentes. Por exemplo, o licopeno poderá ser composto pelo menos de 10%,pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%,pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% de isômeros (Z),isômeros (todos E), ou isômeros eis, como os isômeros 5-cis ou 9-cis ou 13-cis que têm umabiodisponibilidade melhor em relação aos isômeros trans. Os isômeros trans poderão serisomerizados nas formas eis in vivo, ou durante a estocagem e processamento.

Os derivados de licopeno que possuem propriedades biológicas semelhantes aolicopeno poderão incluir, por exemplo, carotenóides, tais como ácido retinóico, ácido acilo-retinóico sintético; ou 1-H03', 4'-dideidrolicopeno, 3, 1 '-(HO)2-gama-caroteno, l,1'-(HO)2-3,4, 3', 4-tetradeidro licopeno, e 1,1'-(HO)2-3, 4-dideidrolicopeno.

Um composto de licopeno para uso conforme descrito aqui poderá ser natural, i.e.,obtido de uma fonte natural, por exemplo, extraído de uma planta como tomate ou melão.

Uma quantidade de métodos de extração, concentração e/ou purificação de compostos delicopeno de plantas são conhecidos na arte. Por exemplo, poderá ser utilizada a extraçãopor solvente utilizando etanol, DMSO, acetato de etila, hexano, acetona, soja ou outro óleovegetal, ou óleos não vegetais.

Os compostos de licopeno para o uso conforme descrito aqui poderão sersintéticos, i.e., produzido por meios artificiais, por exemplo, através de síntese química. Umaquantidade de métodos para a síntese química de licopeno e outros carotenóides éconhecida na arte. Por exemplo, poderá ser utilizada uma síntese química em três estágios,baseada no esquema de reação standard de olefinação Wittig para a síntese decarotenóides, na qual são produzidas uma solução orgânica de metanosulfonato fosfônio emdiclorometano (DCM) e uma solução orgânica de dialdeído Ci0 em tolueno, e as duassoluções orgânicas são gradualmente combinadas com solução de metóxido de sódio esofrem uma reação de condensação para formar licopeno bruto. O licopeno bruto poderáentão ser purificado utilizando-se técnicas de rotina, por exemplo, adicionando-se ácidoacético glacial e água desionizada na mistura, agitando-se vigorosamente, permitindo queas fases aquosa e orgânica se separarem, e extraindo a fase orgânica contendo DCM elicopeno bruto com água. O metanol é adicionado na fase orgânica e o DCM é removidoatravés de destilação sob pressão reduzida. A solução de licopeno metanólica bruta é entãoaquecida e resfriada em uma suspensão cristalina que é filtrada e lavada com metanol. Oscristais de licopeno poderão então ser recristalizados e secados sob nitrogênio aquecido. Olicopeno sintético é também disponível de fornecedores comerciais (por exemplo, BASFCorp, NJ USA).

O licopeno sintético poderá ser composto de uma proporção aumentada deisômeros eis em relação ao licopeno natural. Por exemplo, o licopeno sintético poderá conteraté 25% de isômeros 5-cis, 1% de 9-cis, 1% de 13-cis, e 3% de outros isômeros eis,enquanto que o licopeno produzido por tomates poderá ter 3- 5% de isômeros 5-cis, 0-1%de isômeros 9-cis, 1% de isômeros 13-cis e < 1% de outros isômeros eis. Como o licopenoeis tem uma biodisponibilidade aumentada em relação ao licopeno trans, o licopeno sintéticopoderá, portanto ser preferido para alguns fins.

Os derivados de licopeno, conforme descrito acima, poderão ser produzidos porsíntese química análoga à síntese descrita acima ou através de modificação química dolicopeno natural extraído de material de planta.

Os compostos de licopeno poderão ser administrados em qualquer forma ouformulação conveniente. As formulações adequadas poderão facilitar ou aumentar acapacidade de absorção do composto de Iicopeno e a sua biodisponibilidade dentro docorpo. Por exemplo, um composto de Iicopeno poderá ser administrado como umacomposição farmacêutica composta do composto de licopeno, juntamente com um ou maisveículos farmaceuticamente aceitáveis, auxiliares, excipientes, diluentes, cargas, soluçõestampão, estabilizantes, emulsificantes, conservantes, lubrificantes, ou outros materiais bemconhecidos por aqueles adestrados na arte e, opcionalmente, outros agentes terapêuticosou profiláticos. Por exemplo, em algumas realizações, um composto de licopeno poderá seradministrado como uma composição farmacêutica composta do composto de licopeno,juntamente com isoflavonas, por exemplo, isoflavonas de soja e/ou vitamina C.

Uma composição farmacêutica adequada poderá ser composta de um composto delicopeno como o único componente ativo e poderá ser formulada misturando-se o compostode licopeno juntamente com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis,excipientes, soluções tampão, auxiliares, estabilizantes, ou outros materiais, conformedescrito aqui.

O termo "farmaceuticamente aceitável" utilizado aqui pertence a compostos,materiais, composições, e/ou formas de dosagens que estão dentro do escopo da avaliaçãomédica consistente, adequados para uso em contato com os tecidos de um indivíduo (porexemplo, um ser humano), sem toxidez excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outroproblema ou complicação, proporcional a uma relação benefício/risco razoável. Cadaveículo, excipiente, etc., deve também ser "aceitável" no sentido de ser compatível com osoutros ingredientes da formulação.

Veículos, excipientes adequados, etc., podem ser encontrados nos textosfarmacêuticos standard, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition,Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990 e poderão incluir óleos, por exemplo, óleosvegetais, tais como óleo de tomate, óleos de soja, óleo de amendoim, ou óleos nãovegetais, glicerol, gelatina, sacarose, glicose, ascorbil palmitato, amido de milho e dióxido desilício. Emulsificantes adequados incluem polisorbato 80.

Estabilizantes adequados poderão incluir éster de sacarose, lecitina, antioxidantes,tais como dl-a-tocoferol e ascorbil palmitato, flavonóides, celulose, ceras, manitol, shelac,talco, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, e goma arábica ou de acácia.

Por exemplo, o licopeno poderá ser formulado em contas, tabletes ou outros corpossólidos, contendo cerca de 10% de licopeno, 1,5% e 5,0%, respectivamente, deantioxidantes dl-a-tocoferol e ascorbil palmitato, além das substâncias veículo, tais comoóleo vegetal, gelatina de peixe, sacarose e amido de milho.

As formulações adequadas de licopeno são disponíveis comercialmente e incluemLycoVit® 10 Percent1 LycoVit® 10 Cold Water Dispersion (CWD), e LycoVit® Dispersion 20Percent (todas BASF Corp, NJ1 USA), Lyc-O-Mato® R (LM), LycoBeads®, e Tomato-O-Red® (Dalidar Pharma, LycoRed Ltd UK).

Em algumas realizações, um composto de Iicopeno poderá ser formulado como umagente de solubilização. Os agentes solubilizantes incluem compostos hidrofílicos que sãosolúveis em solução aquosa e poderão também ser insolúveis em solventes orgânicos. Osagentes solubilizantes hidrofílicos adequados incluem proteínas solúveis, especialmentelacto-proteínas, como caseína, beta-lacto- globulina, alfa-lactalbumina, e albumina de soro.Convenientemente, a proteína de soro de leite poderá ser utilizada como agentesolubilizante. Proteína de soro de leite é uma coleção de proteínas globulares isoladas dosoro de leite, que é um subproduto da fabricação de queijo de leite de vaca. A proteína desoro de leite é uma mistura de beta-lactoglobulina (~ 65%), alfa-lactalbumina 25%), ealbumina de soro (~ 8%), que são solúveis nas suas formas nativas, independentemente dopH. As formulações de Iicopeno com proteína de soro de leite (denominadas de"lactolicopeno") são conhecidas na arte (ver, por exemplo, Richelle et al J. Nutr. 132: 404 -408, 2002 e EP-B-1289383 (PCT/EP01/06145)) e são disponíveis comercialmente(INNEOV, LOreaI (UK) Ltd, London). Um processo para a preparação de uma formulaçãode Iicopeno com proteína de soro de leite poderá ser composto da mistura da proteína desoro de leite com Iicopeno em condições suficientes para formar uma mistura. Por exemplo,a proteína de soro de leite poderá ser dissolvida em água, e o Iicopeno poderá ser dissolvidoem um solvente, como acetona, etanol ou isopropanol, as duas soluções sendo combinadase o solvente sendo evaporado para formar uma composição de Iacto- licopeno.

Alternativamente, a composição poderá ser formada pela mistura do licopeno comum solvente para formar uma primeira mistura, a mistura da primeira mistura com a proteínade soro de leite na forma de um pó ou uma solução aquosa para formar uma segundamistura e a evaporação do solvente da segunda mistura para produzir uma composiçãocomo uma dispersão. Os solventes adequados incluem acetona, etanol e isopropanol.Convenientemente, uma relação solvente:água da ordem de 60:40 em volume poderá serutilizada quando a fase aquosa é misturada com o solvente. Uma composição poderá sercomposta de até 50% do composto licopeno e até 90% de proteína de soro de leite.

A dispersão opcionalmente poderá ser submetida a tratamento de aquecimentopara produzir um gel ou ser secada por aspersão ou por liofilização para produzir um pó.

A composição poderá então ser formulada com veículos, excipientes, estabilizantese emulsificantes, conforme descrito acima. Por exemplo, uma formulação adequada delacto-licopeno poderá ser composta de 2% (peso/peso) de licopeno, 20% (peso/peso) deproteína de soro de leite, 50,5% (peso/peso) e de celulose microcristalina, 5% (peso/peso)de dióxido de silício, 3% (peso/peso) de polisorbato 80 e 1,5% (peso/peso) de Iecitina desoja.Uma formulação de Iacto-Iicopeno para uso conforme descrito aqui poderá serobtida ou ser obtenível conforme descrito acima.

As disfunções metabólicas que poderiam ser tratadas com licopeno, conformedescrito aqui, poderão incluir obesidade, resistência a insulina, tolerância reduzida a glicose,síndrome do ovário policístico (PCOS), hipertensão, distúrbios do fígado, como esteatose,hepatite crônica, fibrose e cirrose do fígado, e síndrome metabólica.

Em algumas realizações, um indivíduo tratado de acordo com os métodos atuaisnão é diabético (i.e. não está sofrendo do tipo 1 ou do tipo 2 de diabetes) e/ou não estásofrendo de uma condição ateroesclerótica, como CHD1 derrame ou doença vascularperiférica.

A obesidade é uma condição caracterizada por excesso de gordura no corpo. Porexemplo, um indivíduo obeso poderá ter um índice de massa do corpo (BMI: massa/altura2)maior do que 30. A obesidade é um fator de risco para uma quantidade de condiçõesmédicas, incluindo diabetes e distúrbios cardiovasculares, tais como aterosclerose, doençasisquêmicas do coração (coronárias), isquemia do miocárdio (angina) e derrame. Aobesidade poderá incluir obesidade abdominal, que é comumente definida como acircunferência de cintura maior do que 94 cm para os homens europeus e mais de 80 cmpara as mulheres européias, mais de 90 cm para homens asiáticos do sul e mais de 80 cmpara as mulheres asiáticas do sul, e mais de 85 cm para homens japoneses e mais de 90cm para mulheres japonesas. Os métodos descritos aqui poderão ser úteis no controle depeso e no tratamento de obesidade.

A resistência à insulina é a inabilidade das células, tecidos ou de todo o corpo paramostrar uma resposta fisiológica a uma determinada quantidade de insulina. Comoresultado, são requeridas quantidades maiores de insulina para se obter o efeito fisiológicoda insulina comparado com controles. A resistência à insulina está presente em 25% dapopulação não diabética, com uma quantidade estimada de conversão de um estadoresistente à insulina para diabetes do tipo 2 de 2 -12% por ano.

A tolerância reduzida à glicose ocorre quando uma concentração de glicose maiordo que 7,8 mmols persiste no plasma depois de 120 minutos do teste oral de tolerância àglicose. A tolerância reduzida à glicose é associada com a resistência à insulina e àhiperglicemia.

Síndrome do ovário policístico (PCOS) é um distúrbio endócrino que afeta 5 - 10%das mulheres, nas quais os cistos no ovário interferem com o ciclo normal ovariano deprodução de hormônios. A PCOS, com freqüência, é associada com a resistência à insulina,hiperinsulinaemia compensatória, síndrome metabólica, obesidade, e hiperandrogenaemia.

A hipertensão é caracterizada por uma pressão do sangue consistentementeelevada que excede a 140 por 90 mm de Hg (> 140 de pressão sistólica; > 90 de pressãodiastólica).

Distúrbios do fígado incluem esteatose, hepatite crônica, fibrose e cirrose do fígado.A esteatose do fígado é caracterizada por uma acumulação anormal de lipídios no fígadoque pode ser causada pela oxidação reduzida de ácidos graxos e/ou a síntese e liberaçãoreduzida de lipoproteínas. A esteatose posteriormente poderá se transformar em fibrose ecirrose do fígado. A fibrose do fígado é caracterizada pelo crescimento do tecido fibroso nofígado. A fibrose pode levar à cirrose, na qual o fígado tem uma função reduzida e se tornapermanentemente marcado, fibroso, e graxo.

A hepatite crônica é uma inflamação do fígado que poderá ser causada porinfecção bacteriana ou de vírus, infestação parasítica, álcool, drogas, toxinas, ou transfusãode sangue incompatível.

A síndrome metabólica é uma condição que é caracterizada pela obesidade e umou mais dos: resistência à insulina, pressão elevada do sangue, níveis elevados detriglicerídeos no sangue e/ou baixos níveis de colesterol HDL no sangue. Por exemplo, oIDF (International Diabetes Federation) define a síndrome metabólica como: obesidadeabdominal mais qualquer dois dos seguintes: níveis elevados de triglicerídeos (acima de 1,7mmols/l); colesterol HDL reduzido (abaixo ou em 0,9 mmols/l em homens e abaixo ou em1,1 mmols/l em mulheres); e pressão elevada do sangue (acima de 130/85) e resistênciaaumentada à glicose do plasma (acima de 5,6 mmols/l).

As disfunções metabólicas, tais como a síndrome metabólica, poderão também serassociadas com uma quantidade de condições, incluindo a hipercolesterolemia, o baixocolesterol HDL (por exemplo, < 0,9 mmols/l, homens; < IiO mmols/l, mulheres),hipergliceridemia (por exemplo, velocidade de excressão urinária de albumina >20 //gminuto"1; relação albumina:creatinina >30 mg minuto"1).

Os métodos descritos aqui poderão ser úteis no tratamento de uma condição que éassociada com a disfunção metabólica. Por exemplo, um método para o tratamento de umacondição que é associada com a disfunção metabólica poderá ser composto de:a administração de um composto de Iicopeno a um indivíduo necessitando domesmo.

Uma condição associada com a disfunção metabólica poderá incluirhipercolesterolemia, baixo colesterol HDL , hipergliceridemia, e microalbuminuria.

Os métodos da invenção poderão também ter aplicações profiláticas. Por exemplo,um método para a prevenção ou retardo do início da disfunção metabólica poderá sercomposto da administração de um composto Iicopeno a um indivíduo necessitando domesmo.

Um indivíduo adequado para ser submetido a um método de prevenção ou retardodo início de uma disfunção metabólica conforme descrito aqui poderá estar sobre o risco ouser suscetível à disfunção metabólica, por exemplo, o indivíduo poderá ter um ou mais dosfatores de risco associados com o início da disfunção metabólica.

Um método descrito aqui poderá ser composto da administração do composto deIicopeno em combinação com uma estatina (i.e. um inibidor de reductase de 3-hidroxi-3-metiIgIutariIa coenzima A (HMG CoA)).

Estatinas adequadas incluem pravastatina (PRAVACHOL®), Iovastatina(MEVACOR®), sinvastatina (ZOCOR®), cerivastatina (LIPOBAY®), fluvastatina (LESCOL®),atorvastatina (LIPITOR®), mevastatina e rosuvastatina (Crestor®). Outras estatinasadequadas são conhecidas na arte e poderão ser rapidamente identificadas utilizando-se osensaios de reductase HMG-CoA que são bem conhecidos na arte. Exemplos de tais ensaiossão apresentados na patente americana de número 4.231.938.

Outro aspecto da invenção apresenta o uso de um composto de Iicopeno nafabricação de um medicamento para uso no tratamento de uma disfunção metabólica ouuma condição associada com a disfunção metabólica conforme descrito acima, ou aprevenção ou o retardo do início de uma disfunção metabólica ou de uma condiçãoassociada com disfunção metabólica.

Outro aspecto da invenção apresenta um composto de Iicopeno para uso notratamento de uma disfunção metabólica ou uma condição associada com disfunçãometabólica e um composto Iicopeno para uso na prevenção ou retardo do início de umadisfunção metabólica ou uma condição associada com disfunção metabólica.

Uma composição ou medicamento composto de um composto de Iicopeno poderáainda ser composta de uma estatina (i.e, um inibidor de reductase de 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG Co A)).

Exemplos de estatinas adequadas são descritos acima. Outras estatinas úteis nosmétodos da invenção atual ficarão aparentes para a pessoa adestrada na arte.

Outro aspecto da invenção é um kit composto de um composto de Iicopeno e umaestatina para uso em combinação, para tratar a disfunção metabólica.

Um kit poderá ainda incluir um ou mais artigos e/ou reagentes para a execução dométodo ou da invenção, tais como meios para a administração do composto Iicopenosozinho ou em composição com outros compostos, com uma seringa (tais componentesgeralmente sendo estéreis).

O kit poderá ainda incluir instruções para a execução de todo ou de parte dométodo da invenção, por exemplo, o regime de dosagem para o composto Iicopeno e/ou aestatina.

Ainda outro aspecto da invenção é o uso de uma combinação de um compostoIicopeno e de uma estatina na fabricação de um medicamento para o tratamento dedisfunção metabólica ou uma condição associada com disfunção metabólica, conformedescrito acima, ou a prevenção ou o retardo do início de uma disfunção metabólica ou deuma condição associada com a disfunção metabólica.

As formulações de compostos de Iicopeno para uso nos métodos atuais poderãoser apresentadas convenientemente na forma de dosagem unitária e poderão serpreparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na arte de farmácia. Tais métodosincluem a etapa de colocar em associação o composto ativo com o veículo que constitui umou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas colocando-seuniformemente e intimamente em associação o composto ativo com veículos líquidos ouveículos sólidos finamente divididos ou ambos, e então, se necessário, formatando oproduto.

As formulações poderão estar na forma de líquidos, soluções, suspensões,dispersões, emulsões, elixires, xaropes, tabletes, losangos, grânulos, pós, cápsulas, contas,pílulas, ampolas, supositórios, pessários, ungüentos, gels, pastas, cremes, aspersões,nebulizações, espumas, loções, óleos, pílulas, electuários ou aerossóis.

As formulações adequadas para administração oral (por exemplo, através deingestão) poderão ser apresentadas como unidades distintas, tais como cápsulas, pastilhasou tabletes, cada uma delas contendo uma quantidade predeterminada do composto ativo;como um pó ou granulo; como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou nãoaquoso; ou como uma emulsão óleo-em-água líquida, ou como uma emulsão água-em-óleolíquida; como uma pílula grande; como um electuário; ou como uma pasta. As composiçõesfarmacêuticas líquidas geralmente incluem um veículo líquido como água, petróleo, óleos deorigem animal ou vegetal, óleo mineral ou óleo sintético= Solução salina fisiológica, dextroseou outra solução de sacarídeos ou glicóis, tais como etileno glicol, propileno glicol oupolietileno glicol, poderão ser incluídas.

Um tablete poderá ser feito através de meios convencionais, por exemplo, porcompressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Ostabletes comprimidos poderão ser preparados através de compressão do composto ativo emuma forma de livre escoamento como um pó ou granulo em uma máquina adequada,opcionalmente misturado com um ou mais aglutinantes (por exemplo, povidona, gelatinas,acacia, sorbitol, tragacanto, e hidroxipropil metil celulose); cargas ou diluentes (por exemplo,lactose, celulose microcristalina, hidrofosfato de cálcio); e lubrificantes (por exemplo,estearato de magnésio, talco, silica); desintegrantes (por exemplo, amido glicolato de sódio,povidona reticulada, carboximetil celulose de sódio reticulado); agentes ativos na superfícieou de dispersão de, ou de umidificação (por exemplo, Iaurilsulfato de sódio); e conservantes(por exemplo, metil p-hidroxibenzoato, propil p-hidroxibenzoatos, ácido sórbico). Tabletesmoldados poderão ser feitos por moldagem de uma mistura do composto em pó umidificadocom um diluente líquido inerte em uma máquina adequada. Os tabletes, opcionalmente,poderão ser revestidos ou marcados e poderão ser formulados para produzirem umaliberação lenta ou controlada do composto ativo no mesmo utilizando, por exemplo,hidroxipropil metil celulose em proporções variadas para produzir o perfil de liberaçãodesejado. Os tabletes, opcionalmente, poderão ser produzidos com um revestimentoentérico, para produzir a liberação em partes do intestino ao invés do estômago.

Para injeção intravenosa, cutânea ou subcutânea, ou injeção no local do problema,o ingrediente ativo estará na forma de uma solução aquosa parenteralmente aceitável que éisenta de pirogeno e tem um pH, isotonicidade e estabilidade adequados. Aqueles comconhecimento relevante na arte são bem capazes de prepararem soluções adequadasutilizando, por exemplo, veículos isotônicos, tais como injeção de cloreto de sódio, injeçãode Ringer1 injeção de Ringer lactada. Poderão ser incluídos conservantes, estabilizantes,soluções tampão, antioxidantes e/ou outros aditivos, conforme seja requerido.

Exemplos de técnicas e protocolos mencionados acima podem ser encontrados emRemington1S Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed), 1980.

A administração, de preferência, é em uma "quantidade terapeuticamente efetiva",esta sendo suficiente para mostrar benefício para o indivíduo. Será visto que dosagensapropriadas dos compostos ativos, e composições constituídas dos compostos ativos,podem variar de paciente para paciente. A determinação da dosagem ótima geralmenteenvolverá o equilíbrio entre o nível de benefício terapêutico e quaisquer riscos ou efeitoscolaterais prejudiciais dos tratamentos da invenção atual. O nível de dosagem escolhidodependerá de uma variedade de fatores, incluindo, mas não limitados a, atividade docomposto específico, rota de administração, tempo de administração, velocidade deexcreção do produto, duração do tratamento, outros fármacos, compostos, e/ou materiaisusados em combinação, e a idade, sexo, peso, condição, saúde geral, e história médicaanterior do paciente. A quantidade de composto e a rota de administração no final ficarão acargo do médico, apesar de geralmente a dosagem alcançar concentrações locais no sítiode ação que conseguem o efeito desejado sem causar efeitos colaterais substanciais ouprejudiciais.

A administração in vivo pode ser efetuada em uma dose, continuamente ouintermitentemente (por exemplo, em doses divididas em intervalos apropriados) e durantetodo o curso do tratamento. Métodos de determinação do meio mais efetivo de dosagem deadministração são bem conhecidos por aqueles adestrados na arte e variarão com aformulação usada para a terapia, a finalidade da terapia, a célula alvo que está sendotratada, e o indivíduo que está sendo tratado. Podem ser executadas administrações únicasou múltiplas com o nível de dose padrão sendo escolhido pelo médico encarregado dotratamento.

Em geral, uma dose adequada de Iicopeno está na faixa de cerca de 100 ug acerca de 250 mg/kg de peso do corpo do indivíduo por dia. Onde o composto ativo é um sal,um éster, prodroga, ou semelhante, a quantidade administrada é calculada com base nocomposto principal e assim sendo, o peso real a ser utilizado é aumentadoproporcionalmente.

Uma composição constituída de um composto de Iicopeno como Iicopeno poderáser administrada sozinha ou em combinação com outros tratamentos, simultaneamente ouem seqüência, dependendo da condição a ser tratada.

Um composto Iicopeno poderá ser contido em um produto alimentício. Por exemplo,ele poderá ser contido em pão, cereal, biscoitos, manteiga, pastas (por exemplo, margarina),queijo, iogurte ou bebidas. Outros produtos alimentícios adequados ficarão aparentes parauma pessoa adestrada na arte.

O composto Iicopeno poderá ser misturado com os ingredientes do produtoalimentício antes de ser cozinhado (por exemplo, cozido) e/ou adicionado no produtoalimentício depois de ser cozinhado. Os dados aqui mostram que os compostos Iicopenopodem ser incorporados em produtos alimentícios sem perda de qualidade do alimento epermanecem ativos depois de serem cozinhados em produtos alimentícios.

De preferência, um composto Iicopeno heterólogo é contido em um produtoalimentício. Por exemplo, um composto Iicopeno sintético, conforme descrito acima, ou umcomposto Iicopeno natural que não está presente naturalmente no produto alimentício. Porexemplo, um composto Iicopeno de uma fruta ou vegetal poderá ser incorporado no pão ouno cereal.

Assim sendo, ainda um outro aspecto da invenção é um produto alimentícioconstituído de um composto de Iicopeno para o tratamento de disfunção metabólica, onde ocomposto Iicopeno não está presente naturalmente no produto alimentício.

O produto alimentício poderá ser suplementado com, ou fortificado pelo compostolicopeno. Em algumas realizações preferidas, o produto alimentício é suplementado com umcomposto licopeno que é formulado com proteína de soro de leite, conforme descrito acima("lactolicopeno").

É também apresentado um método de produção de um produto alimentício para otratamento ou para retardar ou prevenir o início de uma disfunção metabólica, o referidométodo sendo composto de:

(i) produção de um ingrediente do produto alimentício,

(ii) mistura de um composto licopeno com o referido ingrediente

(iii) formulação do referido ingrediente e do referido composto licopeno em umproduto alimentício.

Vários outros aspectos e realizações da invenção atual ficarão aparentes paraaqueles adestrados na arte em vista da apresentação atual. Todos os documentosmencionados nesta especificação são incorporados aqui como referência na suaintegridade.

Certos aspectos e realizações da invenção serão agora ilustrados para fins deexemplo, com referências às figuras descritas abaixo.

A figura 1 mostra o efeito de Iicopeno na quantidade de SREBP-1 e -2 namembrana e frações nucleares das células HepG2.

A figura 2 mostra a análise "imunoblot" de SRBP-1, -2 e LDL-R na membrana dofígado e em extratos nucleares de ratos Zucher gordos (ZFR) e magros (LZR) depois dotratamento com licopeno.

A tabela 1 mostra as alterações de mRNA nas células HepG2 incubadas comlicopeno 10 μΜ na presença e na ausência de esteróis.

A tabela 2 mostra as alterações de mRNA em hepatócitos primários de ratosincubados com licopeno 10 μΜ na ausência e na presença de insulina a 100 nM.

A tabela 3 mostra os parâmetros fisiológicos de ratos Zucker gordos (ZFR) emagros (ZLR) tratados com dieta de licopeno a 0,2% (M±m de 4 medições em 4 ratos).

A tabela 4 mostra as alterações de mRNA nos fígados de ratos Zucker gordos(ZFR) e Zucker magros (ZLR) tratados com dieta de 0,2% de licopeno.

A tabela 5 mostra o efeito do lactolicopeno, LL1 sobre o nível de lipídios no soro emvoluntários humanos.

A tabela 6 mostra o efeito do LL no nível médio de lipídios no soro em voluntárioshumanos após dois meses de tratamento com LL.

A tabela 7 mostra o efeito do Lvc-O-Mato®, LM, no nível de lipídios do soro emvoluntários humanos.

A tabela 8 mostra o efeito de LM no nível médio de lipídios do soro em voluntárioshumanos após dois meses de tratamento com LM.

A tabela 9 mostra o efeito do LL sobre a concentração de glicose no soro depacientes diabéticos.

A tabela 10 mostra o efeito de LM sobre a concentração de glicose no soro depacientes diabéticos.

A tabela 11 mostra o efeito do lactolicopeno, LL, sobre o nível de insulina no soroem voluntários humanos.

A tabela 12 mostra o efeito de LL e de LM sobre a massa do corpo em voluntárioshumanos.

A tabela 13 mostra o efeito do Lipitor-Liprimar ( Atorvastatina) sobre o nível delipídios do soro em voluntários humanos.

A tabela 14 mostra a atividade antioxidante in vitro de matrizes alimentícias cozidasdiferentes (pães de forma e broas) que são constituídos de lactolicopeno (LL).A tabela 15 mostra o efeito do Iactolicopeno em parâmetros de metabolismo delipídios em soro humano do sangue.

A tabela 16 mostra o efeito do lactolieopeno sobre o nível de glicose em plasmahumano.

Experiências

Materiais

Foram utilizada técnicas standard e de biologia molecular. Foi extraído o RNA totalde células culturadas e de fígado de rato utilizando-se o reagente de isolamento RNA-STAT-60 (Tel-Test1 Inc1 USA). O sistema de reagente SYBR Green qPCR (Invitrogen, USA) foiusado para a análise quantitativa de RNA. Os níveis de insulina no plasma foram medidosutilizando-se um kit ELISA (Linco Research, USA), plasma-glicose colorimetricamente.

A não ser que seja mencionado de outra forma, o Iicopeno era a proteína de sorode leite associada com a formulação de lactolieopeno (LL) que foi usada em uma formacomercial (INNEOV, LOreaI (UK) Ltd1 London), que adicionalmente contém como aditivosisoflavonas de soja e vitamina C, ou em uma forma isolada (INDENA) produzida pelamistura de 20 g de extrato de tomate (contendo 10% de lactolieopeno) com 20 g de proteínade soro de leite, 50,5 g de celulose microcristalina, 5 g de dióxido de silício, 3 g depolisorbato 80 e 1,5 g de Iecitina de soja para produzir 100 g de formulação delactolicopeno.

As formulações de lactolicopeno foram preparadas conforme descrito naEP1289383.

Outros reagente gerais foram obtidos da Sigma (USA).

Cultura de Célula

Monocamadas de uma linha de células humanas de hepatoma-HepG2, foramcolocadas em um prato com uma densidade de 1 milhão de células/100 mm e culturadas a6% e a 37 0 C em DMEM suplementado com 10% de FCS com penicilina (100 unidades/ml)e Streptomieina (100//g/ml). 48h mais tarde, as células foram lavadas duas vezes com PBSe trocadas para DMEM1 contendo 5% de soro deficiente em lipoproteína, 50 μΜ mevalonatoe 50 //M compactina (na forma de lactona) na ausência ou na presença de esteróis (1 //g/mlde 25-hidroxicolesterol e 10 //g/ml de colesterol). Metade dos pratos também recebeulactolicopeno INNEOV dissolvido em tetraidrofuran até uma concentração final de 10 //M.Outra metade recebeu somente uma cota do solvente. As células foram coletadas paraanálise imunoblot e a extração RNA 18h mais tarde.

Os hepatócitos primários foram isolados do fígado de ratos Spraque-Dawley quenão estavam em jejum através do método de digestão com colagênese. Sob anestesia dehalotano, cada fígado foi perfundido in situ através da veia portal e posteriormente com meiode perfusão do fígado e meio de digestão do fígado (Gibco/BRL, USA). Os fígados foramextirpados, os hepatócitos foram dissociados e colocados em pratos de 100 mm revestidoscom colágeno I (Becton Dickinson Labware1 USA) com uma densidade de 6 milhões decélulas/prato em DMEM contendo 5% de soro fetal de bezerro com penicilina (100unidades/ml) e Streptomicina (100 //g/ml). Depois de 3h da adição as células foram trocadaspara DMEM isento de soro, suplementado com 100 nM de dexametasona, 1 nM de insulina,100 nm de triiodtironina, 100 unidades/ml de penicilina, e 100 //g/ml de Streptomicina. Ascélulas viáveis foram contadas pelo teste de exclusão azul tripano. Os hepatocitos com pelomenos 85% de células viáveis foram utilizados para estudos. Depois de uma incubaçãodurante a noite, foi feita a adição de uma solução de Iactolicopeno (INNEOV) em tetra-hidrofuran até uma concentração final de 10 //M na presença ou ausência de insulina 100nM. Os pratos de controle receberam somente tetraidrofuran. O isolamento do RNA foi feito18h depois da suplementação de hepatócitos com Iicopeno e/ou insulina.

Animais e Tratamentos

Os ratos Zucker gordos (fa/fa) e a sua ninhada foram usados nas experiências coma idade de 8 - 9 semanas. Os ratos foram aprisionados em gaiolas de colônia, mantidos emum ciclo de 12h de luz/12h no escuro e alimentados com uma dieta regular de comida.Depois de 10 dias de adaptação ao meio da colônia, os ratos foram trocados para uma dietanormal de comida suplementada com 0,2% de Iactolicopeno (INNEOV). Os animais foramalimentados ad Iibitum com 24h de acesso aos alimentos. A monitoração durante o dia nãomostrou diferenças substanciais na ingestão de alimentos entre os grupos de ratostratados/não tratados com licopeno. Depois de 8 dias do tratamento com a dieta, os ratosforam mortos sob anestesia de halotano. Foram coletadas amostras de sangue e os pesosdo corpo/fígado foram registrados.

Análise RNA

O RNA total das células culturadas e do fígado dos ratos foi extraído e 2 //g de RNAde cada amostra foram usadas para sintetizar o cDNA e foram executadas reações TR-PCRem triplicata. As substancias de partida para cada gene individual foram escolhidasutilizando-se o banco de dados públicos Genebank. Os valores reais CT para cada amostrade RNA incubados com soluções específicas foram referidos aos valores CT dos genes demanutenção -GAPDH ou 36B4 (controles internos), cujos valores absolutos de CT sãomostrados para cada experiência. Os valores CT normalizados para cada gene, observadosnas células HepG2 na ausência de esteróis foram avaliados como sendo 1,00. As alteraçõesdos níveis mRNA em outros grupos foram referidos como 1,00 e representam váriasalterações em relação ao valor de controle (1,00). Teste Imunoblot

Para a análise imunoblot foram preparados extratos nucleares e frações demembrana a partir de células culturadas e fígados de rato. As células foram rompidas emsolução tampão hipotônica (10mm Hepes-KOH em um pH de 7,4) passando as célulasatravés de uma agulha com calibre de 22,5. Os extratos nucleares e as frações demembrana do fígado dos ratos foram isolados conforme descrito em outro local.

Testes Clínicos

O objetivo do teste era estudar se o próprio lactolicopeno, independentemente dasua formulação especifica, pode afetar os parâmetros metabólicos em seres humanos. Paraeste teste, foram recrutados 14 voluntários clinicamente saudáveis. 12 dos mesmos tinhamuma ou outra forma de dislipidemia, 3 dos mesmos além disso tinham um teor elevado deglicose em jejum, um tinha somente teor elevado de glicose em jejum e um não tinha10 nenhum destes distúrbios metabólicos. Foi administrado LL a 7 voluntários em dose de 300mg, ou 6 mg de Iicopeno HPLC, a outros 7 a dose foi de 800 mg de LL1 ou 14 mg deIicopeno HPLC. O produto foi administrado durante 2 meses, uma vez por dia oralmentecom a comida. Foi testado e comparado o sangue dos voluntários antes do teste e no final.

Resultados

Exemplo 1

A linha de células humanas de hepatoma HepG2 foi usada para revelar o efeito dolactolicopeno no controle transcripcional do metabolismo de lipídios nas células culturadas.Conforme pode ser visto da tabela 1, em todos os grupos do nível da experiência commRNA o gene de manutenção básico permaneceu quase inalterado e variou de 17,54 para17,73. Isto confirma a ausência de toxidez do fármaco, a degradação de RNA e o estadosaudável das monocamadas das células.

Conforme pode ser visto da tabela 1, a adição de 10 μΜ de lactolicopeno nãoafetou significativamente o nível de SREBP-1 mRNA na presença ou ausência de esteróis.A redução de SREBP-2 mRNA em resposta aos esteróis era a mesma em ambos os grupos,independentemente da presença de lactolicopeno.

Os esteróis são conhecidos como bloqueando a transcrição de SREBP-2 nascélulas culturadas, provocando um declínio subseqüente na biosíntese de colesterol emRNAs para as enzimas de colesterol. A tabela 1 mostra que a adição de esteróis nascélulas HepG2 reduz eficientemente os mRNAs para o SREBP-2 e enzimas maiores debiosíntese de colesterol - FPPS, HMG-CoA Red e HMG-CoA Syn. No entanto, existe umdeclínio óbvio no nível de mRNA SREBP-2 mesmo na ausência de esteróis (redução de42%) e nas células HepG2 incubadas com μΜ de lactolicopeno sozinho. O nível reduzido deSREBP-2 na presença de Iacto- Iicopeno não afeta a maior parte dos mRNAs de colesterol elipogênicos. No entanto, a maior parte dos genes lipogênicos (FAS, ACC, HMG-CoA Syn eHMG-CoA Red) mostraram uma sensibilidade ligeiramente mais elevada na presença delactolicopeno. O lactolicopeno sozinho reduz o mRNA para SCAP, sem a potenciação doefeito de esterol sobre o SCAP mRNA.O único gene a juzante de SREBP-1 afetado pelo Iacto- Iicopeno era o INSIG-1 cujomRNA caiu quase 2/3 do nível basal. Os dados do imunoblasto (figura 1) confirmam eexplicam os resultados de mRNA. Na ausência de esteróis, não existe nenhuma forma deprecursor detectável de SREBP-1 e -2 nas frações de membrana das células HepG2. Noentanto, quando a clivagem de SREBP-1 para na presença de esteróis, a quantidade deproteína SREBP-1 na presença de Iactolicopeno obviamente é maior, o que reflete ~ asupraregulação de 1,4 SREBP-1 mRNA. Os resultados do imunoblasto também confirmam odeclínio no nível de SREBP-2 mRNA visto nas células HepG2 incubadas com Iacto Iicopeno- a quantidade do precursor de SREBP-2 e as formas maduras obviamente menores nascélulas HepG-2 incubadas com lactolicopeno.

Em um conjunto separado de estudos, conduzidos utilizando-se o mesmoprotocolo, nós confirmamos e reproduzimos o efeito inibidor de lactolicopeno sobre mRNAsSCAPe INSIG-1.

O lactolicopeno reduz mRNAs em relação ao fator maior de transcrição decolesterol SREBP-2 e dos genes-1 induzido por insulina (INSIG-1), conferindo umasensibilidade a esterol ligeiramente mais elevada para os genes lipogênicos na linha decélulas de hepatoma humano HepG2. Considerados em conjunto, os nossos resultadosapresentam uma indicação de que o lactolicopeno afeta alguns mecanismostranscripicionais de lipogênese e possivelmente a resposta especifica de insulina para ofígado em hepatocitos humanos.

Exemplo 2

Devido ao efeito observado do Iicopeno em alguns genes regulados por insulinanas células HepG2 (SREBP-1 e INSIG-1), o sistema hepatocito primário de ratos e oprotocolo de tratamento com insulina foram escolhidos para investigar ainda mais aspropriedades fisiológicas do Iacto- licopeno. Conforme pode ser visto da tabela 2, otratamento de hepatocitos primários de rato com 10 μΜ de Iacto- licopeno não afetou muitoos valores CT absolutos para um gene maior de manutenção - 36 B4. Isto confirma aausência de efeitos tóxicos, a viabilidade aceitável de hepatocitos primários e uma boaqualidade do RNA extraído das células.

É evidente, com base nos resultados, que a insulina supra- regula o mRNA para umfator transcricional maior lipogênico específico para o fígado -SREBP-1 c, cujo valor CTcorrigido foi elevado acima dos nível basal até 56,5 vezes. O próprio lactolicopeno aumentouo nível basal de SREBP-Ic quatro vezes. Ao mesmo tempo, a indução de SREBP-1 cominsulina foi reduzida pela adição de Iacto- licopeno, quase que o dobro (somente 27,5vezes).

Da mesma forma que o estudo sobre HepG-2, descobriu-se que a presença delactolicopeno reduzia o mRNA para um fator transcricional de colesterol maior -SREBP-2,especialmente na presença de insulina. A resposta cega de SREBP-Ic à insulina, assimcomo o nível reduzido de SREBP-2 à insulina na presença de lactolicopeno, parece serfuncionalmente insignificante e tem conseqüências metabólicas nos hepatocitos primários.Especialmente, a presença de lactolicopeno aboliu completamente a resposta à insulina dosmRNAs lipogênicos principais - FAS, SCD-1, ACL e INSIG-1, conhecidos como sendo genesalvo para os SREBPs.

Estes níveis de mRNA foram corrigidos para valores próximos do controle durante otratamento com Iacto- licopeno.

Outra característica importante da ação do lactolicopeno é a atividade de regulaçãoem relação às enzimas gluconeogênicas mais importantes - PEPCK e G-6-Pase, cujosníveis de mRNA foram reduzidos de forma correspondente a 66,0% e 70% somente com oIacto- licopeno. A insulina reduziu o PEPCK mRNA quase que em 90% e mostrou a mesmapotência na presença de Iacto- licopeno. De forma diferente, a resposta de G-6-Pase àinsulina não foi tão dramática. Principalmente, a incubação com lactolicopeno conferiu umasensibilidade à insulina maior ao G-6-Pase. Aquele mRNA foi somente ligeiramente reduzidocom a insulina sozinha (até 90% do nível de controle), mas foi mais reduzidosignificativamente na presença de ambos - lactolicopeno e insulina (até 62% do nível decontrole).

O lacto licopeno aumentou a sensibilidade à insulina de outros genes alvo deinsulina, que não são relacionados com a gluconeogênese. Existe um efeito negativo maisprofundo da insulina sobre os mRNAs INSIG-2, IRS-2 e IGFBP-1 quando os hepatocitosprimários foram expostos à insulina na presença de lactolicopeno.

O lacto licopeno reduz portanto a resposta lipogênica transcricional e SREBP-2mRNA na presença de insulina, e produz uma sensibilidade maior à insulina para enzimasgluconeogênicas em hepatocitos primários de rato.

Exemplo 3

Para investigar ainda mais o mecanismo do efeito do Iacto- licopeno nometabolismo hepático, nós efetuamos um estudo utilizando ratos gordos Zucker (ZFR),conhecidos como mostrando a maior parte das características importantes da síndromemetabólica. Os machos jovens ZFR (com idade de nove semanas) com controle adequado(Zucker da mesma ninhada magros) foram usados na experiência resumida na tabela 3.

A tabela 3 mostra que mesmo com a idade de nove semanas, os ZFR tinham pesosdo corpo e do fígado significativamente elevados, triglicerídeos e colesterol no plasmaaumentados. No entanto, a concentração de glicose no plasma permaneceu no nível decontrole, apesar dos níveis de insulina substancialmente induzidos. Embora o lactolicopeno(Inneov) não tenha reduzido o peso do corpo nos ratos magros, o tratamento de oito diascom dieta de lactolicopeno levou a uma redução notável nos pesos do corpo e do fígado nosZFR. Também foi vista e alguma redução no peso do fígado nos animais de controle (ZLR)tratados com lactolicopeno. As alterações mais drásticas aconteceram nos níveis detriglicerídeos e colesterol no plasma - ambos caíram respectivamente em 83,1% e 64,3%com o tratamento com lactolicopeno. Há também uma redução estatisticamente significativano nível de insulina no plasma dos ZFR mantidos com a dieta de lactolicopeno.

Conforme pode ser visto da tabela 4, os ZFR tiveram uma quantidade aumentadade transcritos de SREBP-Ic assim como mRNAs elevados para as enzimas lipogênicasmais importantes - FAS1 SCD1, ACL. O tratamento com Iacto- Iicopeno reduziu a indução demRNAs lipogênicas, apesar do efeito ser parcial, refletindo a hiperinsulinemia restante nosZFR com a dieta de lactolicopeno. Os resultados do imunoblasto, apresentados na figura 2,mostraram que os ZFR tinham níveis significativamente mais elevados de proteína SREBP-1 nos extratos nucleares do fígado, e que a quantidade não foi alterada com o tratamentocom Iacto- licopeno.

O único mRNA que foi reduzido para o valor do controle era a sintase de ácidograxo. Os mRNAs hepáticos ACL e SCD-1 foram reduzidos tanto quanto duas vezes,quando comparados com o grupo de ZFR não tratado. Estas alterações de mRNAslipogênicos explicam a redução do nível de triglicerídeos no plasma em ZFR tratados comIacto- licopeno e confirmam os dados apresentados no exemplo 2.

O nível não alterado de SREBP-2 é consistente com os valores normais para asenzimas de colesterol (HMG-CoA-R e HMG-CoA-S) nos fígados dos ZFR não tratados e foiconfirmado pelos dados do imunoblasto (ver a figura 2). Assim sendo, a hipercolesterolemiaem ZFR jovens é mais atribuída à recuperação diminuída de LDL no fígado, do que àativação da biosíntese de colesterol em hepatocitos. Independentemente do fenótipo, otratamento com Iacto- licopeno reduziu o nível de mRNA para o ativador maior transcricionalda biosíntese de colesterol -SREBP-2 (aproximadamente duas vezes). Esta descobertasuporta os resultados dos estudos de HepG2 e hepatocito primário, apresentados com osexemplos 1 e 2. No entanto, a redução de SREBP-2 mRNA teve um efeito diferente sobreos transcritos HMG-CoA-R e HMG-CoA-S nos fígados de animais diabéticos e nãodiabéticos. Os ratos gordos mostraram uma redução significativa em ambos os níveis deHMG-CoA-R e HMG-CoA-S1 enquanto que a ninhada magra tinha aqueles níveis próximosdo controle.

Há também uma indução sensível da proteína LDR-R, confirmada pela análise deimunoblasto nos fígados dos ZFR tratados com lactolicopeno (figura 1). Esta observaçãoexplica o efeito da normalização notável da dieta de Iacto- licopeno sobre os níveis delipídios no plasma nos ZFR. A rotatividade do receptor de LDL é regulada pelo SREBP-2 nofígado do animal. Há uma supraregulação substancial da forma nuclear de SREBP-2 nosfígados dos ZFR tratados com lactolicopeno. Tal aumento poderá explicar o mecanismo daativação do receptor de LDL hepático com lactolicopeno.

A dieta de lactolicopeno não tinha nenhum efeito no Cyp7-alfa mRNA, a enzimaresponsável pela secreção de colesterol na bile. Os ratos gordos Zucker são conhecidoscomo sendo um modelo único de animal que apresenta uma taxa de secreção de colesterolna bile anormalmente baixa. Aquele problema se desenvolve como conseqüência da taxareduzida de transcrição CYP-7 alfa nos seus fígados. Na realidade, conforme pode ser vistoda tabela 4, o nível de CYP7alfa mRNA é reduzido nos ZFR e permanece próximo domesmo nível independentemente do tratamento executado.

Os ratos gordos Zucker foram escolhidos por causa do seu fenótipo extremo e de formação rápida, que se parece com a síndrome metabólica em seres humanos e resultaem hiperinsulinemia, ganho de peso, hiperlipidemia e esteatose. Todas estas característicasforam corrigidas até certo ponto pelo tratamento com lactolicopeno.

No entanto, conforme pode ser visto na tabela 3, os ZFR com nove semanaspermanecem normoglicêmicos, apesar da hiperinsulinemia. Isto fornece uma indicação deque os animais usados no estudo ainda não desenvolveram a gluconeogênese ativada, queé uma característica chave da diabetes do tipo 2, e uma característica aparente de outrafamília muito proximamente relacionada de ratos Zucker - ratos Zucker diabéticos (ZDR).Como resultado da sensibilidade à insulina prejudicada (mas ainda funcional), há umaredução significativa de mRNAs sensitivos à insulina (PEPCK, G-6-Pase, IGFBP-1, IRS-2) nos fígados dos ZFR não tratados. Portanto, tal nível preservado de resposta à insulina nosfígados dos ZFR não nos permitiu avaliar o efeito possível in vivo do lactolicopeno sobre osmecanismos de gluconeogênese e de hipersensibilidade hepática à insulina visto no estudode hepatocitos primários em ratos (exemplo 2).

Na linha de células de hepatoma humano HepG2 (ver o exemplo 1), o lactolicopenoeliminar a transcrição do gene mais importante, regulando a homeostase de colesterol -SREBP-2. Esta observação foi confirmada utilizando-se outro tipo de células - hepatocitosprimários de ratos (ver o exemplo 2). O efeito do lactolicopeno sobre o SREBP-2 foi tambémreproduzido nos ratos gordos Zucker1 cujos níveis de colesterol e de triglicerídeos no plasmacaíram até próximos dos valores de controle depois de oito dias de tratamento com dieta de0,2% de lactolicopeno. O efeito normalizante do lactolicopeno sobre o nível de lipídios noplasma é relacionado, em nossa opinião, não somente aos níveis reduzidos de SREBP-2 nofígado, mas também aos níveis aumentados de LDL-R hepático (mRNA e proteína)observados nos animais com a dieta de lactolicopeno. Assim sendo, os exemplos 1, 2 e 3revelam que o lactolicopeno afeta a homeostase de colesterol em níveis diferentes -transcrição de SREBP-2, regulação da expressão do receptor de LDL, influencia o nívelSCAP mRNA e a taxa total de síntese de colesterol.

Inesperadamente foi descoberto e reproduzido no estudo independente, que aincubação das células HepG2 com Iacto- Iicopeno leva à repressão do gene-1 induzível pelainsulina (INSIG-1). Nós assumimos que o lactolieopeno poderá regular a resposta à insulinaespecifica do fígado nas células culturadas no fígado. Foi também observado o efeitonegativo do lactolieopeno sobre INSIG-1 mRNA em hepatocitos primários de ratos,especialmente na presença de insulina. Para nossa surpresa, nós também observamos queo tratamento da dieta a curto prazo com Iactolicopeno reduz os pesos do corpo e do fígado,do nível de insulina no plasma nos ratos gordos Zucker e leva à normalização do perfil delipídios no plasma.

A formulação de lactolieopeno INNEOV tem portanto um efeito profundo sobre ascaracterísticas múltiplas da síndrome metabólica - redução do nível de insulina no plasma,lipídios do plasma, relação peso do fígado/corpo, transcrição normalizada de geneslipogênicos e proteína receptora de LDL aumentada nos fígados dos ratos gordos Zuckertratados com lactolieopeno.

Exemplo 4

A. Efeito dos produtos de lactolieopeno sobre lipídios do plasma, glicose e níveis deinsulina.

O efeito dos produtos de Iactolicopeno sobre os níveis de lipídios no plasma,glicose e insulina foi investigado em voluntários humanos e os resultados são mostradosnas tabelas 5-11.

16 voluntários (8 machos e 8 fêmeas) com idades de 45 - 62, foram escolhidos paraeste teste clínico piloto. Foram dados a 12 dos mesmos (6 machos e 6 fêmeas)lactolieopeno (INNEOV, L1OreaI (UK) Ltd, London), LL, e a 4 dos mesmos (2 machos e 2fêmeas) foi dado Lyc-O-Mato®, LM, (Vita Healthcare). Haviam 2 pacientes com diabetes noprimeiro grupo e 2 pacientes com diabetes no último. Para estes pacientes com diabetes,além do nível de lipídios, foi também monitorada a concentração de glicose. A concentraçãode insulina foi também monitorada em todos os 16 pacientes. Foi dada LL a 3 pacientes - 1drágeas duas vezes por dia com a comida; aos outros 9 pacientes - 1 drágeas três vezespor dia com comida. O LM foi dado em três cápsulas por dia com a comida.

Foram recolhidas amostras do soro do sangue dos pacientes antes do tratamento acada duas semanas depois que ele foi iniciado. O tratamento com ambos os produtos deIicopeno durou dois meses.

Os resultados da influência de LL e de LM sobre os parâmetros de lipídios no sorodestes voluntários são apresentados nas tabelas 5, 6, 7 e 8. Estes resultados mostram quea administração de duas ou três drágeas de LL (tabela 5 e 6) ou de 3 cápsulas de LM pordia (tabela 7 e 8) provocaram uma redução na concentração de colesterol total e detriglicerídeos. A administração de LL sozinho também provocou uma redução significativa (p< 0,05) na concentração de CH-LDL. Outros parâmetros de lipídios dos voluntários nãoforam significativamente afetados.

Foi interessante notar que quanto mais elevado era o nível elevado destes lipídiosantes do tratamento, observou-se ser mais profunda a redução da sua concentração nosoro. Por exemplo, para os pacientes N9, depois de somente duas semanas de tratamento por LL, o nível de colesterol total foi reduzido quase que em 36%, de 247 para 158 mg/dl_(tabela 5).

A comparação do efeito de administração de preparações diferentes de Iicopenomostrou que o LL tinha um efeito mais profundo do que o LM sobre o nível de colesteroltotal, colesterol LDL e triglicerídeos no soro. Alem disso, era também importante verificar-se que o uso de uma preparação delicopeno absorvível, i.e., biodisponível, de uma formulação LL ou LM resultou da redução daconcentração de glicose no soro em pacientes com um nível elevado do mesmo (tabelas 9 e10).

Foi interessante observar que a administração de LL ou de LM não afetou o nível fisiológico de glicose no soro de paciente não hiperglicêmico, mas foi capaz de reduzir omesmo em pacientes com hiperglicemia (números em negrito).

Pacientes com hiperglicemia eram aqueles com uma concentração de glicose nosoro maior do que 6 mmols/l.

A comparação do efeito de administração de preparações diferentes de Iicopeno mostrou que o LL era capaz de reduzir os níveis de glicose no plasma em pacientes comhiper- glicemia em média em 28%, enquanto que o LM era capaz de reduzir este parâmetrosomente em 16%.

Foi observado efeito semelhante do LL com relação ao nível de insulina. Empacientes com um nível elevado de insulina, duas semanas de administração do LL resultaram na sua normalização (números em negrito). No entanto, esta preparação nãoafetou a concentração de insulina em pacientes com nível fisiológico normal de insulina(tabela 11).

B. Efeito de produtos de Iicopeno sobre a massa do corpo em seres humanos

O efeito dos produtos de Iicopeno sobre a massa do corpo foi estudado em um30 segundo teste clínico piloto envolvendo 18 voluntários, 10 machos e 8 fêmeas, com idadesde 45 - 62. Foi dado a 9 voluntários, 5 machos e 4 fêmeas, uma drágeas de Lacto-Lycopene® (INNEOV, L1OreaI (UK) Ltd, London), LL, três vezes por dia com comida. Aosoutros 9, cinco machos e quatro fêmeas, foi dada uma cápsula de Lyc-O-Mato®, LM, (VitaHealthcare) três vezes por dia com comida. O teste durou dois meses e o peso dos voluntários foi medido antes e após o teste.

Os resultados do teste são apresentados na tabela 12.

A administração de ambos o LL e o LM durante dois meses resultou em uma perdade massa do corpo em 5 e 3 voluntários em cada grupo de tratamento respectivo. Noentanto, a perda total de massa no grupo inteiro de LL foi 3 vezes maior do que no grupoLM, i.e., 15 kg para o primeiro e 5 kg para o ultimo. Em média, cada pessoa no grupo LLperdeu 1,7 kg e cada pessoa no grupo LM perdeu 0,6 kg. Foi interessante notar que osvoluntários com excesso de peso foram mais significativamente beneficiados deste efeito deLL. Quatro de cada cinco dos mesmos perdeu massa do corpo, entre 2 e 5 kg. No grupo LM,somente um de cada 5 pessoas com excesso de peso perdeu massa corporal.

O tratamento com licopeno, portanto, reduz as características clínicas básicas dasíndrome metabólica e (hipercolesterolemia, hipertrigliciridemia e hiperglicemia) empacientes.

Estes dados clínicos suportam os resultados experimentais que foram observadosnas experiências in vitro e nos animais, e indicam que as formas absorvíveis e bio-disponíveis de preparações de Iactolicopeno poderiam ser produtos terapêuticos efetivos,que poderiam ser usados no tratamento da síndrome metabólica, resistência à insulina(incluindo a síndrome de resistência severa à insulina), tolerância à glicose, síndrome doovário policístico (PCOS), hipertensão, esteatose, hepatite crônica, fibrose do fígado,cirrose, e também para o controle de peso no tratamento de obesidade.

C. Efeito das estatinas sobre os lipídios do soro

O efeito de Lipitor-Liprimar (Atorvastatina) sobre os níveis de lipídios no soro foiinvestigado em voluntários humanos e os resultados são mostrados na tabela 13.

Dez voluntários, 5 machos e 5 fêmeas, com 45 - 55 anos de idade, foramescolhidos para este teste clínico piloto. Foram administradas 40 mg de Lipitor-Liprimaroralmente, com comida, a cada paciente, diariamente durante dois meses.

Foram coletadas amostras de soro do sangue dos pacientes antes do tratamento eapós dois meses de tratamento.

Os resultados da influência do Lipitor-Liprimar sobre os níveis de lipídios no soronestes voluntários são apresentados na tabela 13. Os dados apresentados na tabelademonstram que o Lipitor-Liprimar, um inibidor da reductases de HMG CoA1 reduziu o CH-LDL mais do que o LL (35% para o primeiro e 13,3% para o último). No entanto, o Iacto-licopenò reduz ambos o colesterol total e os triglicerídeos até um nível menor do que aestatina: a redução de colesterol total (CH) para o Lipitor foi de 17% e para o LL foi de 27%.a redução de triglicerídeos (TG) para o Lipitor foi de 22% e para o LL foi de 34% (tabela 6 e13).

Assim como sendo menos efetivo na redução dos níveis de lipídios no soro, asestatinas são conhecidas como tendo alguns efeitos adversos em 0,5% a 2,0% dospacientes. Por exemplo, as estatinas poderão provocar níveis elevados de transaminases oudores musculares, moleza ou fraqueza. Estes sintomas poderão ser acompanhados, emalguns pacientes, por febre ou sintomas semelhantes à gripe, dores abdominais ou fadigainexplicável. Além disso, a doença do fígado e a miosite são contra-indicações para setomar estatinas e elas não devem ser prescritas durante a gravidez. Por outro lado, aadministração de preparações de Iactolicopeno a longo prazo não tem contra-indicações ouefeitos colaterais conhecidos.

Isto, juntamente com os dados apresentados acima, fornece uma indicação de queuma formulação de Iactolicopeno como LL pode ser usada como uma alternativa paraestatinas no tratamento de vários distúrbios, incluindo a síndrome metabólica, resistência àinsulina, tolerância à glicose prejudicada, hipertensão, síndrome do ovário policístico,obesidade, esteatose, hepatite crônica e cirrose do fígado.

Alem disso, uma formulação de lactolicopeno, como LL1 poderia ser útil emcombinação com estatina, permitindo que as doses terapêuticas do último sejam reduzidas.Isto resultaria em menos contra-indicações para as estatinas e minimizaria os seus efeitoscolaterais possíveis.

D. Formulações adicionais

O efeito de uma formulação isolada de lactolicopeno (INDENA) sobre os níveis delipídios no soro foi investigado em voluntários humanos e os resultados são mostrados nastabelas 15 e 16.

Estes resultados mostram que a formulação de lactolicopeno (INDENA) reduz osníveis de lipídios no soro, mas não tem nenhum efeito significativo nos níveis de glicose emplasma humano. No entanto, ele normalizou as concentrações de colesterol total e detriglicerídeos no soro de todos os indivíduos com os seus níveis elevados. Quanto maiselevado era o nível destes parâmetros antes do tratamento, foi observada uma reduçãomais significativa. Por exemplo, para indivíduos com colesterol total acima de 250 mg/dL, aredução era em média 94 mg/dL, ou mais de 35%.

Em indivíduos com uma concentração inicial abaixo de 250 mg/dL, mas aindaacima do nível normal de 200 mg/dL, a redução era em média 54 mg/dL, ou 25%. Umpadrão semelhante foi observado para os triglicerídeos. Foi observada uma redução deambos os parâmetros mesmo em indivíduos com níveis fisiologicamente normais desteslipídios -15% para colesterol total e 20% para triglicerídeos.

Efeitos menos profundos foram observados para as concentrações CH-HDL e CH-LDL. Em cinco indivíduos, com nível reduzido do primeiro, quatro deles após o tratamentotinham o nível normalizado deste lipídio. Somente dois de quatro indivíduos, com nívelinicialmente elevado de CH-LDL, tiveram este parâmetro normalizado.

Exemplo 5

Incorporação do Lactolicopeno em uma Matriz de AlimentoA receita para uma massa de pão era:Fermento - 3/4 colher de sopa, farinha branca concentrada - 400 g, açúcar - 1colher de sopa, manteiga - 15 g, leite em pó -1 colher de sopa, sal -1 colher de sopa, água280 ml, na qual foram dissolvidas drágeas de Iacto Iicopeno (LL) (INNEOV).

Quatro massas foram cozidas: uma (o controle) não continha LL1 a segundacontinha 5 drágeas de LL1 a terceira -10 drágeas de LL e a quarta - 20 drágeas de LL.

Teste

Cinco voluntários que testaram o pão dobrado sem identificação, não acharamnenhuma diferença na textura ou no sabor entre quatro destas massas. Além disso, foitestada a atividade antioxidante do pão.

Isto foi feito utilizando-se o kit ELISA AtheroAbzyme® (CTL, UK) seguindo-se oprotocolo estabelecido nas instruções do fabricante. O pão que continha Iactolicopeno tinhauma atividade antioxidante, enquanto que o pão de controle não o tinha (tabela 14).

Exemplo 6

Incorporação de Iicopeno em uma matriz de alimentos

A receita para uma batelada com quatro bolinhos era:farinha auto fermentada - 175 g, fermento - 1 colher de sopa, uma pinta de sal,açúcar refinado - 20 g, manteiga sem sal - 37 g, leite - 90 ml no qual foi dissolvido LL naforma de drágeas INNEOV. Quatro bateladas de bolinhos foram cozidos: uma (o controle)não continha LL, a segunda continha meia drágea de LL por bolinho, a terceira -1 drágea deLL por bolinho e a quarta - 2 drágeas de LL por bolinho.

Teste

Cinco voluntários que testaram estes bolinhos dobrados sem identificação nãoencontraram nenhuma diferença na textura ou no sabor entre os bolinhos de todas as quatrobateladas. Além disso, foi testada a atividade antioxidante dos bolinhos. Isto foi feitoutilizando-se o kit ELISA AtheroAbzyme® (CTL, UK), seguindo-se o protocolo estabelecidonas instruções do fabricante. Os bolinhos compostos de Iactolicopeno tinham atividadeantioxidante, enquanto que os bolinhos de controle não a tinham (tabela 14).

Tabela 1

<table>table see original document page 24</column></row><table><table>table see original document page 25</column></row><table>

Abreviaturas: GAPDH - gliceraldeído-3-fosfatase desidrogenase; SREBP-1 - proteína-1 deligação a elemento regulatório de esterol;

SREBP-2 - proteína-2 de ligação a elemento regulatório de esterol; PPPS - farnesil difosfatosintase; HMG-CoA -Sin - HMG-CoA sintase; HMG-CoA vermelho - HMG-CoA reductase;SCD-1-estearoil-CoA-desaturase-1; PAS - sintase de ácido graxo; ACC - acetil CoAcarboxilase; SCAP - proteína de ativação de clivagem de esterol; INSIG-1 - gene-de induçãode insulina-1; INSIG-2 - gene de indução de insulina-2.

Tabela 2

<table>table see original document page 25</column></row><table><table>table see original document page 26</column></row><table>

Abreviaturas: 36B4 - fosfoproteína ribosal acidulada; SREBP-1 - proteína de ligação aelemento regulatório de esterol-1 ; SREBP-2 - proteína de ligação a elemento regulatório deesterol-2 ; FAS - sintase de ácido graxo; SCD-1 - estearoil-CoA-desaturase-1 ; ACL - ATP-citratoliase, PEPCK - fosfoenolpiruvato, IGFBP-1 - proteína de ligação a fator decrescimento semelhante à insulina, G6-Pase - glicose-6-fosfatase; IRS-2 - substrato receptorde insulina 2; INSIG-1 - gene de indução de insulina-1; INSIG-2 - gene de indução deinsulina-2; Insulina-R- receptor de insulina.

Tabela 3

<table>table see original document page 26</column></row><table>

Tabela 4 <table>table see original document page 26</column></row><table><table>table see original document page 27</column></row><table>

Abreviaturas: 36B4 - fosfoproteína ribosal acidulada; SREBP-1 - proteína de ligação aelemento regulatório de esterol-1 ; SREBP-2 - proteína de ligação a elemento regulatório deesterol-2 ; FAS - sintase de ácido graxo; SCD-1 - estearoil-CoA-desaturase-1 ; ACL - ATP-citrato liase, PEPCK - fosfoenolpiruvato carboxiquinase, IGFBP-1 - proteína de ligação afator de crescimento semelhante à insulina, G6-Pase - glicose-6-fosfatase; IRS-1 - substratoreceptor de insulina 1; IRS-2 - substrato receptor de insulina 2; INSIG-1 - gene de induçãode insulina-1; INSIG-2 - gene de indução de insulina-2; LDL-R - receptor de Iipoproteina debaixa densidade; CYP-7a - 7a-hidroxilase; INSIG-1 - gene de indução de insulina 1; HMG-CoA-S - HMG-CoA Sintase; HMG-CoA-R HMG-CoA Redutase; INSIG-1 - gene de induçãode insulina; INSIG-1 - gene de indução de insulina-1;

Tabela 5

<table>table see original document page 27</column></row><table><table>table see original document page 28</column></row><table> Depois 2 semanas de tratamento <table>table see original document page 28</column></row><table>

Depois 1 mês de tratamento <table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table>

* número de drágeas "INNEOV" (20 mg de Iactolicopeno por uma drágea);** CH - colesterol total, TG - triglicerídeos<table>table see original document page 30</column></row><table>

* Estatisticamente significativo

Tabela 7

<table>table see original document page 30</column></row><table><table>table see original document page 31</column></row><table>

* número de cápsulas fornecidas diariamente (15 mg de Iicopeno por cápsula)

** CH - total de colesterol - TG - triglicerídios;

Tabela 8

<table>table see original document page 31</column></row><table>

* Estatisticamente significativo

Tabela 9

<table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table>

Tabela 10

<table>table see original document page 32</column></row><table> Tabela 11 <table>table see original document page 32</column></row><table>

Tabela 12

<table>table see original document page 32</column></row><table><table>table see original document page 33</column></row><table>

Tabela 13

<table>table see original document page 33</column></row><table><table>table see original document page 34</column></row><table>

* Lipitorfoi ingerido 40 mg por dia, oralmente.

Tabela 14

<table>table see original document page 34</column></row><table>

Tabela 15

<table>table see original document page 34</column></row><table><table>table see original document page 35</column></row><table>

Em negrito níveis hiper- ou hipo- anormais de parâmetros de lipídios* número de pacientesTabela 16

<table>table see original document page 36</column></row><table>

Claims (26)

1. Uso de um composto de licopeno, CARACTERIZADO pelo fato de se destinar àfabricação de um medicamento para uso no tratamento de disfunção metabólica ou de umacondição associada com disfunção metabólica.

2. Uso1 de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato dotratamento ser ainda composto da administração de uma estatina.

3. Uso de uma combinação de um composto de licopeno e de uma estatina,CARACTERIZADO por se destinar à fabricação de um medicamento para o tratamento dedisfunção metabólica ou de uma condição associada com disfunção metabólica.

4. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelofato do composto de licopeno ser licopeno.

5. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelofato da disfunção metabólica ser escolhida do grupo consistindo de obesidade, resistência àinsulina, tolerância reduzida à glicose, síndrome do ovário policístico, hipertensão,esteatose, hepatite crônica, fibrose do fígado, cirrose, e síndrome metabólica.

6. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelofato da condição associada com a disfunção metabólica ser escolhida do grupo consistindode pressão do sangue elevada, hipertrigliciridemia, e hipercolesterolemia, colesterol LDLelevado e/ou colesterol HDL baixo e microalbuminuria.

7. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelofato do composto de licopeno ser formulado com proteína de soro de leite.

8. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADO pelofato do composto de licopeno ser formulado com óleo.

9. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelofato do composto de licopeno ser formulado com uma ou mais isoflavonas.

10. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 9, CARACTERIZADO pelofato do composto de licopeno ser constituído de uma composição farmacêutica com umexcipiente farmaceuticamente aceitável.

11. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADOpelo fato do licopeno ser composto de um produto alimentício.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato doproduto alimentício ser um pão, um cereal, um biscoito, manteiga, uma pasta, queijo, iogurteou uma bebida.

13. Kit contendo um composto de licopeno e uma estatina, CARACTERIZADO porse destinar a ser utilizado combinado para o tratamento de disfunção metabólica ou de umacondição associada com a disfunção metabólica.

14. Kit, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato docomposto de Iicopeno ser licopeno.

15. Kit, de acordo com a reivindicação 13 ou com a reivindicação 14,CARACTERIZADO pelo fato da disfunção metabólica ser escolhida do grupo consistindo deobesidade, resistência à insulina, tolerância reduzida à glicose, síndrome do ováriopolicístico, hipertensão, esteatose, hepatite crônica, fibrose do fígado, cirrose, e síndromemetabólica.

16. Kit, de acordo com a reivindicação 13 ou com a reivindicação 14,CARACTERIZADO pelo fato da condição associada com a disfunção metabólica serescolhida do grupo consistindo de pressão elevada do sangue, hipertrigliciridemia, hipercolesterolemia, colesterol LDL elevado e/ou colesterol HDL baixo e micronalbuminuria.

17. Kit, de acordo com qualquer das reivindicações 13 a 16, CARACTERIZADOpelo fato do composto de licopeno ser formulado com uma proteína de soro de leite.

18. Kit, de acordo com qualquer das reivindicações 13 a 17, CARACTERIZADOpelo fato do composto de licopeno ser formulado com óleo.

19. Kit, de acordo com qualquer das reivindicações 13 a 17, CARACTERIZADOpelo fato do composto de licopeno ser formulado com isoflavonas.

20. Kit, de acordo com qualquer das reivindicações 13 a 19, CARACTERIZADOpelo fato do composto de licopeno ser constituído de uma composição farmacêutica com umexcipiente farmaceuticamente aceitável.

21. Produto alimentício, constituído de um composto de licopeno e, opcionalmente,uma estatina, CARACTERIZADO pelo fato de se destinar ao tratamento de uma disfunçãometabólica ou de uma condição associada com disfunção metabólica, onde o composto delicopeno não está naturalmente presente no produto alimentício.

22. Método de produção de um produto alimentício para o tratamento de umadisfunção metabólica ou de uma condição associada com disfunção metabólica,CARACTERIZADO pelo fato de ser composto de:(i) produção de um ingrediente de produto alimentício,(ii) mistura de um composto de licopeno com o referido ingrediente,(iii) formulação do referido ingrediente e do referido composto de licopeno em umproduto alimentício.

23. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 21 ou método de acordocom a reivindicação 22, CARACTERIZADOS pelo fato do produto alimentício ser um pão,um cereal, um biscoito, manteiga, uma pasta, queijo, iogurte ou uma bebida.

24. Produto alimentício ou método, de acordo com qualquer das reivindicações 21 a-23, CARACTERIZADOS pelo fato do composto de licopeno ser licopeno.

25. Produto alimentício ou método, de acordo com qualquer das reivindicações 21 a-24, CARACTERIZADOS pelo fato da disfunção metabólica ser escolhida do grupoconsistindo de:obesidade, resistência à insulina, tolerância reduzida à glicose, síndrome do ováriopolicístico, hipertensão, esteatose, hepatite crônica, fibrose do fígado, cirrose, e síndromemetabólica.

26. Produto alimentício ou método, de acordo com qualquer das reivindicações 21 a-24, CARACTERIZADOS pelo fato da condição associada com a disfunção metabólica serescolhida do grupo consistindo de pressão elevada do sangue, hipertriglicirídemia,hipercolesterolemia, colesterol LDL elevado e/ou colesterol HDL baixo e micronalbuminuria.